[go: up one dir, main page]

JP7093794B2 - 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法 - Google Patents

免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP7093794B2
JP7093794B2 JP2019564885A JP2019564885A JP7093794B2 JP 7093794 B2 JP7093794 B2 JP 7093794B2 JP 2019564885 A JP2019564885 A JP 2019564885A JP 2019564885 A JP2019564885 A JP 2019564885A JP 7093794 B2 JP7093794 B2 JP 7093794B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
antibody cytokine
seq
cytokine grafted
grafted protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2019564885A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2020520667A (ja
Inventor
ディア－デ－デュラナ，ヤイザ
ディドネート，マイケル
フィリッピ，クリストフ
ミーウセン，シェリー
スプラッゴン，グレン
Original Assignee
ノバルティス アーゲー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ノバルティス アーゲー filed Critical ノバルティス アーゲー
Publication of JP2020520667A publication Critical patent/JP2020520667A/ja
Priority to JP2022098525A priority Critical patent/JP2022130504A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7093794B2 publication Critical patent/JP7093794B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C07K16/11—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/197—Treatment of whole grains not provided for in groups A23L7/117 - A23L7/196
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02B—PREPARING GRAIN FOR MILLING; REFINING GRANULAR FRUIT TO COMMERCIAL PRODUCTS BY WORKING THE SURFACE
    • B02B1/00—Preparing grain for milling or like processes
    • B02B1/04—Wet treatment, e.g. washing, wetting, softening
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02C—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING IN GENERAL; MILLING GRAIN
    • B02C23/00—Auxiliary methods or auxiliary devices or accessories specially adapted for crushing or disintegrating not provided for in preceding groups or not specially adapted to apparatus covered by a single preceding group
    • B02C23/18—Adding fluid, other than for crushing or disintegrating by fluid energy
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02C—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING IN GENERAL; MILLING GRAIN
    • B02C23/00—Auxiliary methods or auxiliary devices or accessories specially adapted for crushing or disintegrating not provided for in preceding groups or not specially adapted to apparatus covered by a single preceding group
    • B02C23/18—Adding fluid, other than for crushing or disintegrating by fluid energy
    • B02C23/40—Adding fluid, other than for crushing or disintegrating by fluid energy with more than one means for adding fluid to the material being crushed or disintegrated
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02C—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING IN GENERAL; MILLING GRAIN
    • B02C4/00—Crushing or disintegrating by roller mills
    • B02C4/02—Crushing or disintegrating by roller mills with two or more rollers
    • B02C4/06—Crushing or disintegrating by roller mills with two or more rollers specially adapted for milling grain
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02C—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING IN GENERAL; MILLING GRAIN
    • B02C4/00—Crushing or disintegrating by roller mills
    • B02C4/10—Crushing or disintegrating by roller mills with a roller co-operating with a stationary member
    • B02C4/12—Crushing or disintegrating by roller mills with a roller co-operating with a stationary member in the form of a plate
    • B02C4/16—Crushing or disintegrating by roller mills with a roller co-operating with a stationary member in the form of a plate specially adapted for milling grain
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02C—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING IN GENERAL; MILLING GRAIN
    • B02C9/00—Other milling methods or mills specially adapted for grain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5434—IL-12
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B02—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING; PREPARATORY TREATMENT OF GRAIN FOR MILLING
    • B02C—CRUSHING, PULVERISING, OR DISINTEGRATING IN GENERAL; MILLING GRAIN
    • B02C15/00—Disintegrating by milling members in the form of rollers or balls co-operating with rings or discs
    • B02C15/14—Edge runners, e.g. Chile mills
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年５月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／５１０５１４号の利益を主張するものであり、この仮特許出願の内容は、全体が参照により本明細書に援用される。
本開示は、インターロイキン－２（ＩＬ２）高親和性受容体に結合する抗体－サイトカイングラフト化タンパク質、並びに自己免疫障害及び免疫関連障害の治療方法に関する。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に援用される。２０１８年３月３０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＰＡＴ０５６４９１－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと称され、１１５，２５５バイトのサイズである。
ＩＬ２は１９８３年に初めてクローニングされた（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８３，３０２：３０５－３１０、Ｄｅｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９８３，１１（１３）：４３０７－４３２３、Ｍａｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９８３，１１５：１０４０－１０４７）。ＩＬ２タンパク質は、アミノ酸１～２０のシグナルペプチドを含めて１５３アミノ酸の長さがあり、４つの逆平行両親媒性αヘリックス構造に折り畳まれている（Ｓｍｉｔｈ Ｋ．Ａ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４０：１１６９－１１７６）。
ＩＬ２は、高親和性又は低親和性受容体を通じたシグナル伝達によってその生物学的効果を媒介する（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ２０１０，１０７（２６）１１９０６－１１９１１）。高親和性受容体は、ＩＬ２－Ｒα（ＣＤ２５）ＩＬ２－Ｒβ（ＣＤ１２２）及びＩＬ２－Ｒγ（ＣＤ１３２）からなる三量体である。低親和性受容体は、ＩＬ２－Ｒβ（ＣＤ１２２）及びＩＬ２－Ｒγ（ＣＤ１３２）鎖のみからなる二量体である。低親和性受容体はＩＬ２に結合するが、親和性は三量体である高親和性受容体の１０～１００分の１であり、ＩＬ２－Ｒα（ＣＤ２５）が親和性の増加に重要であるものの、シグナル伝達成分ではないことが示唆される（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．、前掲）。ＩＬ２受容体の発現もまた特徴的である。高親和性ＩＬ２受容体は、活性化Ｔ細胞及びＣＤ４＋／Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に発現する。対照的に、低親和性ＩＬ２受容体はＣＤ８＋ Ｔ記憶細胞、Ｔコンベンショナル細胞（Ｔｃｏｎ）及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ）に見られる。
組換えＩＬ２（ｒｈＩＬ２）は当初、１９９２年に臨床使用が承認された（Ｃｏｖｅｎｔｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍｇｔ Ｒｅｓ．２０１２ ４：２１５－２２１）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（アルデスロイキン）は、非グリコシル化型の、Ｎ末端アラニンを欠いた、且つアミノ酸１２５でシステインがセリンに置換（Ｃ１２５Ｓ）された修飾ＩＬ２である。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は当初、悪性黒色腫及び腎細胞癌に対する療法薬として適応されたが、結腸直腸癌、乳癌、肺癌及び中皮腫などの他の癌型に使用されるようになっている（Ｃｏｖｅｎｔｒｙ ｅｔ ａｌ．、前掲）。１９８６～２００６年の２５９人の腎細胞癌患者にわたる研究では、２３人の患者が完全奏効となり、３０人が部分奏効となったことが見出された（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ２００８ １１３（２）：２９３－３０１）。これは２０％の全客観的奏効率に相当し、腎細胞癌患者の７％で完全腫瘍退縮が得られた（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．、前掲）。
しかしながら、ＩＬ２による癌治療に有害作用がなかったわけではない。この２５９人の患者の研究では、毛細血管／血管漏出、血管拡張及び乏尿が認められた。また、カテーテル感染症及び一般感染症の両方の、好中球機能不全に起因するグレード３及びグレード４の感染症もあった（Ｋｌａｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．、前掲）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の文献は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）が、クローン病、強皮症、甲状腺炎、炎症性関節炎、真性糖尿病、眼筋・球麻痺型重症筋無力症、半月体形成性ＩｇＡ糸球体腎炎、胆嚢炎、脳血管炎、スティーブンス・ジョンソン症候群及び水疱性類天疱瘡などの自己免疫疾患及び免疫関連障害の増悪と関連付けられていることを指摘している。
Ｔｒｅｇ細胞が高親和性ＩＬ２受容体を構成的に発現し、生存及び機能に関してＩＬ２に依存したことが発見され、研究の焦点はＴｒｅｇ細胞を模擬する（ｓｉｍｕｌａｔｅ）方法としてのＩＬ２に置かれるようになっている（Ｄ’Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏ．２００５，６：１１５２－１１５９）。低用量ＩＬ２は、Ｉ型糖尿病患者に安全且つ有効な治療であることが示された（Ｈａｒｔｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１３，１：２９５－３０５）。Ｃ型肝炎ウイルスは脈管炎（Ｓａａｄｏｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１，３６５：２０６７－２０７７）及び慢性移植片対宿主病（Ｋｏｒｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１ ３６５：２０５５－２０６６）を誘発した。しかしながら、ＩＬ２は体内での半減期が極めて短く、複数回投与が必要である。これは、ＩＬ２低受容体に対する活性が低く、且つ薬物動態が改善された、高親和性受容体を介したＴｒｅｇの刺激に選択性のあるＩＬ２療法薬の必要性を示すものである。
本開示は、公知の臨床で使用されている分子に優る好ましい治療プロファイルを備えた、抗体のＣＤＲ配列にグラフト化されたＩＬ２分子を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。詳細には、提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞の活性を増加させることなくＴｒｅｇ活性を増加させる、又はそれを維持する。加えて、提供される組成物は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）などの組換えヒトＩＬ２製剤と比べて向上した半減期、安定性及び生産性（ｐｒｏｄｕｃｅａｂｉｌｉｔｙ）を付与する。こうした組成物の好ましい特性は、これまで臨床で使用されているもの又は文献に記載されているものに優る好ましい治療組成物をもたらす。例えば、本明細書に開示される一部の実施形態は、好ましくはＩＬ２低親和性受容体よりもＩＬ２高親和性受容体に結合し、それを通じたシグナル伝達を促進する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。本明細書に開示される一部の実施形態は、好ましくはＣＤ８＋ Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞よりもＴｒｅｇを活性化する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
本開示の実施形態は、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体－サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
重鎖ＣＤＲにグラフト化されたＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＩＬ２分子が、相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）又は相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される領域にグラフト化されている、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＨＣＤＲ１にグラフト化されたＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
軽鎖ＣＤＲにグラフト化されたＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＩＬ２分子が、相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される領域にグラフト化されている、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
低親和性ＩＬ２受容体に対するＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含むＩＬ２分子を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有する、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＩＬ２分子が配列番号４からなる、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＩＬ２分子が配列番号６からなる、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＩｇＧクラス抗体重鎖を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体ＣＤＲの結合特異性がグラフト化されたＩＬ２分子によって低下する、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体ＣＤＲの結合特異性がグラフト化されたＩＬ２分子の存在下で保持される、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体ＣＤＲの結合特異性がＩＬ２分子の結合特異性と異なる、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体可変ドメインの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
非ヒト抗原がウイルスである、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の抗体足場部分がヒト化又はヒトである、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
本開示の実施形態は、
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
本開示の実施形態は、
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
抗体が、低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
本開示の実施形態は、配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
本開示の実施形態は、配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
本開示の実施形態は、配列番号６９のＨＣＤＲ１、配列番号７０のＨＣＤＲ２、配列番号７１のＨＣＤＲ３、配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号８４のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
本開示の実施形態は、配列番号９５のＨＣＤＲ１、配列番号９６のＨＣＤＲ２、配列番号９７のＨＣＤＲ３、配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列番号１１０のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供し、ここで抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したとき高いＴｒｅｇ細胞活性化を有する。
本開示の実施形態は、
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸を提供する。
本開示の実施形態は、タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シグナルをコードする本明細書に開示される核酸を含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞を提供する。
哺乳類細胞株である組換え宿主細胞。
本開示の実施形態は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質と１つ以上の薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。
本開示の実施形態は、それを必要としている個体の免疫関連障害を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物の治療有効量を個体に投与することを含む。
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、方法。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与される、方法。
治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、方法。
本開示の実施形態は、それを必要としている患者のＴｒｅｇ細胞を拡大する方法を提供し、この方法は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物を患者に投与することを含む。
Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＣＤ８ Ｔエフェクター細胞が拡大されない、方法。
Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＮＫ細胞が拡大されない、方法。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与される、方法。
治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、方法。
本開示の実施形態は、治療剤としての使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質が、（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；及び（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、免疫関連障害の治療における使用。
免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、使用。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質が別の治療剤と併用して投与される、使用。
本開示の実施形態は、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療用医薬品の製造のための本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用を提供する。
免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、使用。
特定の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧクラス抗体Ｆｃ領域を含む。詳細な実施形態において、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４サブクラスＦｃ領域から選択される。抗体、抗体断片、又は抗原結合分子は、任意選択で、Ｆｃ受容体への抗体又は抗体断片の結合を調節する（即ち増加又は低下させる）少なくとも１つの修飾を含む。免疫グロブリン重鎖は、任意選択で、修飾されたエフェクター機能を付与する修飾を含み得る。詳細な実施形態において、免疫グロブリン重鎖は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異を含み得る。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、分子のＩＬ２部分の変異も含む。この変異は、単一のアミノ酸変化、単一のアミノ酸欠失、複数のアミノ酸変化及び複数のアミノ酸欠失であってもよい。分子のＩＬ２サイトカイン部分のこれらの変化は、低親和性ＩＬ２受容体に対するサイトカイングラフト化タンパク質の親和性を低下させることができる。
更には、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の少なくとも重鎖及び／又は軽鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。別の関連する態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な宿主細胞を更に提供する。詳細な実施形態において、宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の軽鎖及び／又は重鎖ポリペプチドをコードする核酸を含む。更に別の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の作製方法が提供され、この方法は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の発現、形成、及び分泌に好適な条件下で本明細書に記載されるとおりの提供される宿主細胞を培養すること、及び培養物から抗体サイトカイングラフト化タンパク質を回収することを含む。更なる態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含むキットを更に提供する。
別の関連する態様において、本開示は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物を更に提供する。一部の実施形態において、本開示は、個体に投与するための抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含む医薬組成物を提供する。
別の態様において、本開示は、それを必要としている個体の免疫関連障害を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の治療有効量を個体に投与することを含む。更なる態様において、本開示は、個体の免疫関連障害の治療又は予防における使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。
一部の実施形態において、患者は、免疫関連障害、例えば、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン脂質症候群を有する。一部の適応疾患については、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデソニド、デキサメタゾン）と共投与される。
定義
「抗体」は、四量体構造単位を含む免疫グロブリンファミリーの分子を指す。各四量体が２つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対が、ジスルフィド結合で結び付けられた１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）とを有する。認められている免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、及びμ定常領域遺伝子、並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖はκ又はλのいずれかに分類される。重鎖はγ、μ、α、δ、又はεに分類され、ひいてはこれが免疫グロブリンクラス、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを定義する。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）、又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）であり得る。
軽鎖及び重鎖は両方とも、構造的及び機能的相同性領域に分けられる。構造的及び機能的に、用語「定常」及び「可変」が用いられる。各鎖のＮ末端は、抗原認識に一義的に関与する約１００～１１０アミノ酸又はそれ以上の可変（Ｖ）領域又はドメインを画成する。用語の可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれ軽鎖及び重鎖のこれらの領域を指す。ＶＨとＶＬとが共に対になって単一の抗原結合部位を形成する。Ｖ領域に加え、重鎖及び軽鎖は両方とも定常（Ｃ）領域又はドメインを含む。分泌型の免疫グロブリンＣ領域は、３つのＣドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、任意選択でＣＨ４（Ｃμ）、及びヒンジ領域で構成される。膜結合型の免疫グロブリンＣ領域はまた、膜ドメイン及び細胞内ドメインを有する。各軽鎖はＮ末端にＶＬを有し、続いてその他端に定常ドメイン（Ｃ）を有する。軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合など、重要な生物学的特性を付与する。慣習上、定常領域ドメインの番号は、抗原結合部位又は抗体のアミノ末端から遠位になるに従い大きくなる。Ｎ末端が可変領域であり、Ｃ末端が定常領域である；実際にはＣＨ３及びＣＬドメインが、それぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端ドメインを含む。ＶＬはＶＨと整列し、及びＣＬは重鎖の第１の定常ドメインと整列する。本明細書で使用されるとき、「抗体」は、従来の抗体構造及び変種の抗体を包含する。従って、この概念の範囲内には、抗体サイトカイングラフト化タンパク質、完全長抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びその抗体断片がある。
抗体は、インタクトな免疫グロブリン鎖として存在するか、又は様々なペプチダーゼによる消化によって産生される幾つもの十分に特徴付けられた抗体断片として存在する。用語「抗体断片」は、本明細書で使用されるとき、６つのＣＤＲを保持している抗体の１つ以上の一部分を指す。従って、例えば、ペプシンがヒンジ領域のジスルフィド結合の下で抗体を消化すると、それ自体軽鎖がジスルフィド結合によってＶＨ－ＣＨ１に連結したものであるＦａｂ’の二量体、Ｆ（ａｂ）’２が産生される。Ｆ（ａｂ）’２を穏和条件下で還元するとヒンジ領域のジスルフィド結合が壊れ、それによりＦ（ａｂ）’２二量体がＦａｂ’単量体に変換され得る。Ｆａｂ’単量体は本質的に、ヒンジ領域の一部分を有するＦａｂである（Ｐａｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３ｄ ｅｄ．（１９９３））。様々な抗体断片がインタクトな抗体の消化という観点で定義されているが、当業者は、かかる断片が化学的に、或いは組換えＤＮＡ方法を用いることによりデノボ合成されてもよいことを理解するであろう。本明細書で使用されるとき、「抗体断片」は、全抗体の修飾によって作製されるか、又は組換えＤＮＡ方法を用いてデノボ合成されるかのいずれかの、結合特異性及び機能活性を保持している抗体の１つ以上の一部分を指す。抗体断片の例としては、同じ結合特異性を備えたＦｖ断片、単鎖抗体（ＳｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｄ（Ｖｈ及びＣＨ１ドメイン）、ｄＡｂ（Ｖｈ及び単離ＣＤＲ）；及びこれらの断片の多量体型（例えば、Ｆ（ａｂ’）２）が挙げられる。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、所望の結合特異性及び活性を実現するのに必要な抗体断片も含み得る。
「Ｆａｂ」ドメインは、この文脈で使用されるとき、重鎖可変ドメイン、定常領域ＣＨ１ドメイン、軽鎖可変ドメイン、及び軽鎖定常領域ＣＬドメインを含む。これらのドメインの相互作用はＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間のジスルフィド結合によって安定している。一部の実施形態において、Ｆａｂの重鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＶＨ－ＣＨの順序であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＶＬ－ＣＬの順序である。一部の実施形態において、Ｆａｂの重鎖ドメインはＮ末端からＣ末端にＣＨ－ＶＨの順序であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインはＣＬ－ＶＬの順序である。Ｆａｂ断片は歴史的にはインタクトな免疫グロブリンのパパイン消化によって同定されたが、「Ｆａｂ」は、典型的には任意の方法により組換えで作製される。各Ｆａｂ断片は抗原結合に関して一価であり、即ちそれは単一の抗原結合部位を有する。
「相補性決定ドメイン」又は「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、同義的に、ＶＬ及びＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗体鎖の中でかかる標的タンパク質に対する特異性を備えた標的タンパク質結合部位である。各ヒトＶＬ又はＶＨ中に３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１～３、Ｎ末端から連続的に番号付けされる）があり、可変ドメインの約１５～２０％を占める。ＣＤＲは、標的タンパク質のエピトープに対して構造的に相補的であり、したがって、結合特異性に直接関与している。ＶＬ又はＶＨの残りの区間、いわゆるフレームワーク領域（ＦＲ）は、アミノ酸配列の変化をあまり示さない（Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ４．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００）。
ＣＤＲ及びフレームワーク領域の位置は、当該技術分野における様々な周知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＡｂＭ（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０５－２０６（２００１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８８３（１９８９）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７９９－８１７（１９９２）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－７４８（１９９７）を参照）を用いて決定され得る。抗原結合部位の定義は、以下にも記載されている：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１９－２２１（２０００）；及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０７－２０９（２００１）；（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２７，５５－７７（２００３）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５（１９９６）；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：９２６８－９２７２（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３：１２１－１５３（１９９１）；及びＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２（１９９６）。
Ｋａｂａｔに基づけば、ＶＨのＣＤＲアミノ酸残基は３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；及びＶＬのＣＤＲアミノ酸残基は２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａに基づけば、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され；及びＶＬのアミノ酸残基は２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲはヒトＶＨにおいてアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）、及びヒトＶＬにおいてアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
「抗体可変軽鎖」又は「抗体可変重鎖」は、本明細書で使用されるとき、それぞれＶＬ又はＶＨを含むポリペプチドを指す。内因性ＶＬは遺伝子セグメントＶ（可変）及びＪ（連結）によってコードされ、及び内因性ＶＨはＶ、Ｄ（多様性）、及びＪによってコードされる。ＶＬ又はＶＨの各々はＣＤＲ並びにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。用語「可変領域」又は「Ｖ領域」は、同義的に、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む重鎖又は軽鎖を指す。Ｖ領域は天然に存在するもの、組換え又は合成であってもよい。本願において、抗体軽鎖及び／又は抗体重鎖はまとめて「抗体鎖」と称することができる。本明細書に提供され及び更に記載されるとおり、「抗体可変軽鎖」又は「抗体可変重鎖」及び／又は「可変領域」及び／又は「抗体鎖」は任意選択で、ＣＤＲに組み込まれたサイトカインポリペプチド配列を含む。
本明細書における免疫グロブリン重鎖の、例えばＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むＣ末端部分は、「Ｆｃ」ドメインである。「Ｆｃ領域」は、本明細書で使用されるとき、第１の定常領域（ＣＨ１）免疫グロブリンドメインを除外した抗体の定常領域を指す。Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメインの可動性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭについては、ＦｃはＪ鎖を含み得る。ＩｇＧについては、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３並びにＣγ１とＣγとの間のヒンジを含む。当該技術分野においては、Ｆｃ領域の境界は様々であり得るが、しかしながらヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常は残基Ｃ２２６又はＰ２３０～そのカルボキシル末端まで（使用する付番はＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，Ｖａ．）にあるＥＵインデックスに従う）を含むと定義されることが理解される。「Ｆｃ領域」は、この領域を単独で指すこともあり、又は抗体若しくは抗体断片のコンテクストでこの領域を指すこともある。「Ｆｃ領域」は、例えばエフェクター機能を調節する修飾を含め、Ｆｃ領域の天然に存在する対立遺伝子変異体を例えばＣＨ２及びＣＨ３領域に含む。Ｆｃ領域はまた、生物学的機能に変化をもたらさない変異体も含む。例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端又はＣ末端から、生物学的機能を実質的に失うことなく１つ以上のアミノ酸が欠失される。例えば、特定の実施形態においてＣ末端リジンが修飾され、置き換えられ、又は除去される。詳細な実施形態においてＦｃ領域の１つ以上のＣ末端残基が変更又は除去される。特定の実施形態においてＦｃの１つ以上のＣ末端残基（例えば、末端リジン）が欠失される。特定の他の実施形態においてＦｃの１つ以上のＣ末端残基が別のアミノ酸で置換される（例えば、末端リジンが置き換えられる）。かかる変異体は、活性に及ぶ効果が最小限となるように当該技術分野において公知の一般的規則に従い選択される（例えば、Ｂｏｗｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：３０６－１３１０，１９９０を参照のこと）。Ｆｃドメインは、ＦｃＲなどの細胞受容体によって認識される免疫グロブリン（Ｉｇ）の一部分であり、そこに補体活性化タンパク質Ｃ１ｑが結合する。ＣＨ２エクソンの５’部分にコードされる下方のヒンジ領域は、ＦｃＲ受容体への結合のための抗体内の可動性を提供する。
「キメラ抗体」は、（ａ）異なる又は変更されたクラス、エフェクター機能及び／又は種の定常領域、又はそのキメラ抗体に新規特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、及び薬物に抗原結合部位（可変領域）が連結するように定常領域、又はその一部分が変更され、置き換えられ、又は交換されている；又は（ｂ）異なる又は変更された抗原特異性を有する可変領域によって可変領域、又はその一部分が変更され、置き換えられ、又は交換されている抗体分子である。
「ヒト化」抗体は、ヒトにおいて免疫原性が低いながらも非ヒト抗体の反応性（例えば、結合特異性、活性）を保持している抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、且つ抗体の残りの部分をヒト対応物に置き換えることによって実現し得る。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５－９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．，２８：４８９－４９８（１９９１）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．，３１（３）：１６９－２１７（１９９４）を参照のこと。
「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方が、ヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域はまた、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖系列配列、又はヒト生殖系列配列の突然変異型、又は例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：５７－８６，２０００）に記載されるような、ヒトフレームワーク配列分析から得られるコンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。ヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的突然変異によって、又はインビボでの体細胞突然変異によって、又は安定性若しくは製造を促進するための保存的置換によって導入される突然変異）。
「対応するヒト生殖系列配列」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン可変領域配列によってコードされる全ての他の公知の可変領域アミノ酸配列と比較して、参照可変領域アミノ酸配列又はサブ配列との最も高い決定されたアミノ酸配列同一性を有するヒト可変領域アミノ酸配列又はサブ配列をコードする核酸配列を指す。対応するヒト生殖系列配列はまた、全ての他の評価された可変領域アミノ酸配列と比較して、参照可変領域アミノ酸配列又はサブ配列との最も高いアミノ酸配列同一性を有するヒト可変領域アミノ酸配列又はサブ配列を指し得る。対応するヒト生殖系列配列は、フレームワーク領域のみ、相補性決定領域のみ、フレームワーク及び相補性決定領域、可変セグメント（上で定義されるような）、又は可変領域を含む配列若しくはサブ配列の他の組合せであり得る。配列同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、又は当該技術分野において公知の別のアラインメントアルゴリズムを用いて、２つの配列を整列する、本明細書に記載される方法を用いて決定され得る。対応するヒト生殖系列核酸又はアミノ酸配列は、参照可変領域核酸又はアミノ酸配列との少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し得る。
用語「価数」は、本明細書で使用されるとき、ポリペプチド中の潜在的な標的結合部位の数を指す。各標的結合部位は、１つの標的分子又は標的分子の特異的部位に特異的に結合する。ポリペプチドが２つ以上の標的結合部位を含むとき、各標的結合部位は同じ又は異なる分子に特異的に結合し得る（例えば、異なる分子、例えば異なる抗原、又は同じ分子上の異なるエピトープに結合し得る）。従来の抗体は、例えば２つの結合部位を有し、二価であり；「三価」及び「四価」は、抗体分子にそれぞれ３つの結合部位及び４つの結合部位が存在することを指す。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、一価（即ち、１つの標的分子に結合する）、二価、又は多価（即ち、２つ以上の標的分子に結合する）であり得る。
語句「特異的に結合する」又は「結合特異性」は、標的（例えば、タンパク質）と抗体サイトカイングラフト化タンパク質との間の相互作用について記載する文脈で使用されるとき、タンパク質及び他の生物学的物質の異種集団中、例えば、生体試料、例えば、血液、血清、血漿又は組織試料中の標的の存在を決定付ける結合反応を指す。従って、特定の指定される条件下では、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は特定の標的にバックグラウンドの少なくとも２倍結合し、その試料中に存在する他の標的に有意な量で結合することは実質的にない。一実施形態において、指定される条件下では、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は特定の抗原にバックグラウンドの少なくとも１０倍結合し、その試料中に存在する他の標的に有意な量で結合することは実質的にない。かかる条件下での抗体サイトカイングラフト化タンパク質との特異的結合には、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が特定の標的タンパク質に対するその特異性に関して選択されている必要があり得る。本明細書で使用されるとき、特異的結合は、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含み、例えば他のサイトカイン受容体スーパーファミリーメンバーと交差反応する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含まない。一部の実施形態において、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合し、且つ非ヒト霊長類ＩＬ２Ｒ（例えばカニクイザルＩＬ２Ｒ）と交差反応する抗体サイトカイングラフト化タンパク質が選択される。一部の実施形態において、ヒトＩＬ２高親和性受容体に選択的に結合し、且つ更なる標的抗原と反応する抗体グラフト化タンパク質が選択される。特定の標的抗原タンパク質と特異的反応性を示す抗体サイトカイングラフト化タンパク質の選択には、種々のフォーマットが用いられ得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイが、タンパク質と特異的に免疫反応性の抗体を選択するのに日常的に使用される（例えば、特異的免疫反応性を決定するのに使用され得るイムノアッセイ形式及び条件の説明については、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９９８）を参照されたい）。典型的に、特異的又は選択的結合反応は、バックグラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的に、バックグラウンドより少なくとも１０～１００倍、シグナルを生成するであろう。
「平衡解離定数（ＫＤ、Ｍ）」という用語は、解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を結合速度定数（ｋａ、時間－１、Ｍ－１）で除算した値を指す。平衡解離定数は、当該技術分野における任意の公知の方法を用いて測定され得る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、一般に、約１０－７又は１０－８Ｍ未満、例えば、約１０－９Ｍ又は１０－１０Ｍ未満、ある実施形態において、約１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ又は１０－１３Ｍ未満の平衡解離定数を有するであろう。
本明細書で使用されるとき、用語「エピトープ」又は「結合領域」は、抗体ＣＤＲと抗原タンパク質との間の特異的結合に関与する抗原タンパク質におけるドメインを指す。
本明細書で使用されるとき、用語「受容体－サイトカイン結合領域」は、グラフト化されたサイトカインとその受容体（例えばＩＬ２高親和性受容体）との間の特異的結合に関与する抗体サイトカイングラフト化タンパク質のグラフト化されたサイトカイン部分におけるドメインを指す。各抗体サイトカイングラフト化タンパク質に少なくとも１つのかかる受容体－サイトカイン結合領域が存在し、結合領域の各々は他と同一であることも、又は異なることもある。
用語「アゴニスト」は、同義的に、受容体を活性化させて完全な又は部分的な受容体媒介性応答を誘導する能力を有する抗体を指す。例えば、ＩＬ２高親和性受容体のアゴニストはＩＬ２高親和性受容体に結合し、ＩＬ２媒介性細胞内シグナル伝達、細胞活性化及び／又はＴｒｅｇ細胞増殖を誘導する。抗体サイトカイングラフト化タンパク質アゴニストは、幾つかの点で天然ＩＬ２リガンドと同様にＩＬ２高親和性受容体を通じたシグナル伝達を刺激する。ＩＬ２がＩＬ２高親和性受容体に結合するとＪａｋ１及びＪａｋ２活性化が誘導され、それによりＳＴＡＴ５リン酸化がもたらされる。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質アゴニストは、ＩＬ２高親和性受容体に結合し、且つＳＴＡＴ５リン酸化、及び／又はＴｒｅｇ細胞増殖を誘導するその能力によって同定することができる。
用語「ＩＬ２」又は「ＩＬ－２」又は「インターロイキン２」又は「インターロイキン－２」は、同義的に、天然タンパク質が炎症過程の調節及び維持において機能するαヘリックスサイトカインファミリーメンバーを指す。ＩＬ２の特性は、Ｎ末端とＣ末端とが空間的に互いに近いことであり、そのためＩＬ２サイトカインタンパク質は抗体グラフトに好適となる。アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質のコンテクストでは、完全長天然ヒトの残基２１～１５３を含むＩＬ２が利用される。本明細書に開示されるとおりのヒトＩＬ２は、その全長にわたってアミノ酸配列番号２と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、及び本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の優先的なアゴニスト活性を保持し、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００５７７として公開されている。配列番号１はヒトＩＬ２ ｃＤＮＡ配列である。本明細書に開示されるとおりのＩＬ２タンパク質をコードするヒトＩＬ２核酸は、その全長にわたって配列番号１の核酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有し、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００５８６の下に公開された。
用語「抗体サイトカイングラフト化タンパク質」又は「抗体サイトカイングラフト」又は「グラフト化された」は、少なくとも１つのサイトカインが抗体のＣＤＲ内に直接取り込まれ、ＣＤＲの配列に割り込んでいることを意味する。サイトカインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３内に取り込むことができる。サイトカインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３内に取り込み、ＣＤＲのＮ末端配列の方に、又はＣＤＲのＣ末端配列の方に取り込むことができる。ＣＤＲ内に取り込まれたサイトカインは、元の標的タンパク質に対する抗体部分の特異的結合を低下させてもよく、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、その標的タンパク質に対するその特異的結合を保持していてもよい。例示的サイトカインとしては、限定はされないが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、及びＴＮＦ－βが挙げられる。また、サイトカインを抗体の一方の「アーム」の特異的ＣＤＲにグラフト化すること、及び別の異なるサイトカインを抗体の他方の「アーム」のＣＤＲにグラフト化することも可能である。例えば、ＩＬ２を抗体の一方の「アーム」のＨＣＤＲ１にグラフト化し、且つＩＬ－７を抗体サイトカイングラフト化タンパク質の他方の「アーム」のＬＣＤＲ１にグラフト化すると、二重機能抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作り出すことができる。
用語「単離された」は、核酸又はタンパク質に適用されるとき、核酸又はタンパク質に自然状態でそれが関連している他の細胞成分が本質的に含まれないことを意味する。これは好ましくは均一状態にある。これは乾燥又は水溶液のいずれかである。純度及び均一性は、典型的にはポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技法を用いて決定される。調製物中に存在する優勢種であるタンパク質が、実質的に精製される。詳細には、単離された遺伝子は、その遺伝子に隣接し、且つ目的の遺伝子以外のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームと分離されている。用語「精製される」は、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲルに本質的に１つのバンドを生じさせることを意味する。特に、これは核酸又はタンパク質が少なくとも８５％純度、より好ましくは少なくとも９５％純度、及び最も好ましくは少なくとも９９％純度であることを意味する。
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖形態又は二本鎖形態のいずれかのデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びこれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に指示される配列のみならず、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補配列も黙示的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選ばれた（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基に置換されている配列を作成することにより実現し得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４））。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書では、アミノ酸残基のポリマーを指して同義的に使用される。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、並びに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。
「アミノ酸」という用語は、天然、及び合成アミノ酸、並びに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるもの、並びに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムに結合されたα－炭素を指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化合物を指す。
「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同一の若しくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸、又は核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。遺伝子コードの縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が、任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ及びＧＣＵは全て、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定される全ての位置で、コドンは、コードされるポリペプチドを変化させずに、記載される対応するコドンのいずれかに変化され得る。このような核酸変化は、「サイレント変異」であり、これは、保存的に修飾された変異の１種である。ポリペプチドをコードする、本明細書における全ての核酸配列はまた、核酸の全ての可能なサイレント変異を説明する。当業者は、核酸中の各コドン（通常はメチオニンのための唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常はトリプトファンのための唯一のコドンであるＴＧＧを除く）が、機能的に同一の分子を生じるように修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、それぞれの記載される配列において黙示的なものである。
アミノ酸配列に関して、コード配列における単一のアミノ酸又はごく一部のアミノ酸を変化させ、付加し又は欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質配列に対する個々の置換、欠失又は付加は、その変化が化学的に同様のアミノ酸によるアミノ酸置換をもたらす場合に「保存的に修飾された変異体」であることは、当業者であれば認識するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野において周知である。このような保存的に修飾された変異体は、多型変異体、種間相同体、及び対立遺伝子に対して追加的なものであり、それらを除外しない。以下の８つの群の各々は、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。
「配列同一性パーセンテージ」は、２つの最適にアラインメントした配列を比較ウィンドウにわたって比較することにより決定され、ここでポリヌクレオチド配列のうち比較ウィンドウ内にある部分は、２つの配列の最適アラインメントのため、付加又は欠失を含まない参照配列（例えばポリペプチド）と比較したとき付加又は欠失（即ちギャップ）を含み得る。パーセンテージは、両方の配列に同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が現れる位置の数を決定してマッチする位置の数を求め、そのマッチする位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除し、その結果に１００を乗じて配列同一性パーセンテージを求めることにより計算される。
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における「同一である」又はパーセント「同一性」という用語は、２つ以上の配列又はサブ配列が同じ配列でこと程度を指す。以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを用いて、又は手作業でのアラインメント及び目視検査によって測定したとき、２つの配列が比較ウィンドウ、又は指示領域にわたって最大限対応するように比較及びアラインメントしたときに同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドを指定のパーセンテージだけ有する（即ち、参照配列の指定の領域にわたって、又は指定されない場合には配列全体にわたって少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する）場合に、２つの配列は「実質的に同一である」。本開示は、本明細書に例示されるそれぞれポリペプチド又はポリヌクレオチド（例えば、配列番号２０、配列番号３３、配列番号４６、配列番号５９、配列番号７２、配列番号８５、配列番号９８、又は配列番号１１１のいずれか１つに例示される可変領域と実質的に同一であるポリペプチド又はポリヌクレオチドを提供する。同一性は、参照配列の少なくとも約１５、２５又は５０ヌクレオチド長の領域にわたって、又はより好ましくは１００～５００又は１０００ヌクレオチド長又はそれ以上の領域にわたって、又は完全長にわたって存在する。アミノ酸配列に関して、同一性又は実質的な同一性は、参照配列の少なくとも５、１０、１５又は２０アミノ酸長、任意選択で少なくとも約２５、３０、３５、４０、５０、７５又は１００アミノ酸長、任意選択で少なくとも約１５０、２００又は２５０アミノ酸長の領域にわたって、又は完全長にわたって存在し得る。より短いアミノ酸配列、例えば、２０アミノ酸以下のアミノ酸配列に関しては、１又は２アミノ酸残基が本明細書に定義される保存的置換に従い保存的に置換されているとき、実質的な同一性が存在する。
配列比較のために、典型的に、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列として働く。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列が、コンピュータに入力され、サブ配列が、指定され、必要に応じて、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。デフォルトプログラムパラメータが使用され得るか、又は代替パラメータが指定され得る。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列と比べた試験配列に対する配列同一性パーセントを計算する。
本明細書において使用される際の「比較ウインドウ」は、２つの配列が最適に整列された後、配列が、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る、２０～６００、通常、約５０～約２００、より通常は、約１００～約１５０からなる群から選択される連続する位置の数のいずれか１つのセグメントに対する参照を含む。比較のための配列のアラインメントの方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの部分相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、又は手動によるアラインメント及び視覚的検査（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５補遺）を参照）によって行われ得る。
配列同一性及び配列類似性パーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２，；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０，に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎによって公表されている。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列される場合、いくつかの正の値の閾値スコア（ｓｏｍｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ－ｖａｌｕｅｄ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｓｃｏｒｅ）Ｔと一致するか、又はそれを満たす、クエリー配列中の短いワード長Ｗを同定することによって、高スコア配列ペア（ＨＳＰ）をまず同定することを含む。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．上掲）。これらの初期近隣ワードヒットは、それらを含有するより長いＨＳＰを発見するための検索を開始させるためのシードとして働く。ワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加され得る限り、各配列に沿った両方の方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一致する残基のペアに関する報酬スコア；常に＞０）及びＮ（不一致の残基に関するペナルティースコア；常に＜０）を用いて計算される。アミノ酸配列について、スコアリングマトリックスが、累積スコアを計算するのに使用される。各方向におけるワードヒットの伸長は、以下の場合に停止される：累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘだけ減少する場合；１つ又は複数の負のスコアの残基アラインメントの累積のため、累積スコアが、ゼロ以下になる場合；又はいずれかの配列の末端に到達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長、及び１０の期待値（Ｅ）、及び５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ａｎｄ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照）アラインメントｓ（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較を使用する。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７，を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の一致が偶然生じる確率の指標を提供する最小合計確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．２未満、より好ましくは、約０．０１未満、最も好ましくは、約０．００１未満である場合、核酸は、参照配列と類似すると考えられる。
２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの別の指標は、後述されるように、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、第２の核酸によってコードされるポリペプチドに対して生じた抗体と免疫学的に交差反応することである。したがって、例えば、２つのペプチドの保存的置換のみが異なる場合、ポリペプチドは、典型的に、第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、後述されるように、２つの分子又はその補体が、ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であることのさらに別の指標は、同じプライマーを用いて、配列を増幅することができることである。
用語「連結」は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質内で結合領域がどのようにつながっているかについて記載する文脈で使用されるとき、それらの領域を物理的に結び付ける可能なあらゆる手段を包含する。多数の結合領域が高頻度で共有結合（例えば、ペプチド結合又はジスルフィド結合）又は非共有結合などの化学結合によって結び付けられ、これは直接結合（即ち、２つの結合領域間にリンカーなし）又は間接的結合（即ち、２つ以上の結合領域間に少なくとも１つのリンカー分子の助けを借りる）のいずれかであり得る。
「免疫関連障害」又は「免疫疾患」は免疫系の機能不全を指し、ここでは体自身の免疫系が健常組織を攻撃する。機能不全は、免疫細胞の構成成分におけるものであってよく、過活性及び低活性の両方の免疫系を含む。
用語「対象」、「患者」、及び「個体」は、同義的に、哺乳類、例えばヒト又は非ヒト霊長類哺乳類を指す。哺乳類はまた、実験動物哺乳類、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスターであることもある。一部の実施形態において、哺乳類は、農業動物哺乳類（例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）又は家庭内動物哺乳類（例えば、イヌ、ネコ）であることもある。
本明細書において使用される際、任意の疾患又は障害の「治療する」、「治療すること」、又は「治療」という用語は、一実施形態において、疾患又は障害を改善すること（すなわち、疾患又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を減速するか又は停止させるか又は軽減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、患者によって認識できないものを含む少なくとも１つの物理的パラメータを軽減又は改善することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」、又は「治療」は、疾患又は障害を、身体的に、（例えば、認識できる症状の安定化）、生理学的に、（例えば、物理的パラメータの安定化）、又はその両方で調節することを指す。更に別の実施形態において、「治療する」、「治療している」、又は「治療」は、疾患又は障害の発生又は発症又は進行を妨げる又は遅らせることを指す。
「治療的に許容できる量」又は「治療的に有効な用量」という用語は、所望の結果（すなわち、炎症の減少、痛みの阻害、炎症の防止、炎症反応の阻害又は防止）をもたらすのに十分な量を同義的に指す。ある実施形態において、治療的に許容できる量は、望ましくない副作用を誘導しないか、又は引き起こさない。治療的に許容できる量は、最初は低用量を投与し、次に、所望の効果が達成されるまでその用量を徐々に増加することによって決定され得るＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質の「予防的に有効な投与量」、及び「治療的に有効な投与量」は、免疫関連障害に関連する症状を含む疾患の症状の、開始を防止するか、又はその重症度の低下をもたらし得る。
「同時投与する」という用語は、個体中の２つ（以上）の活性薬剤の同時の存在を指す。同時投与される活性薬剤は、同時に又は連続的に送達され得る。
本明細書で使用されるとき、語句「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、方法又は組成物に含まれる医薬活性薬剤の属又は種、並びにその方法又は組成物の意図される目的のための任意の不活性担体又は賦形剤を指す。一部の実施形態において、語句「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、ＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質以外の１つ以上の追加的な活性薬剤の包含を明示的に除外する。一部の実施形態において、語句「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、ＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質以外の更なる追加的な活性薬剤及び第２の共投与される薬剤の包含を明示的に除外する。
用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に明確に指示されない限り複数の指示対象を含む。
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１が組換えＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較してＴｒｅｇを優先的に拡大することを示す、抗体サイトカイングラフト化構築物の表である。 抗体サイトカイングラフト化タンパク質を組換えＩＬ２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較する表である。ＳＴＡＴ５リン酸化によって測定したとき、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１分子はＴｒｅｇ細胞上のＩＬ２受容体を刺激するが、Ｔエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）又はＮＫ細胞上のＩＬ２受容体は刺激しないことに留意されたい。この分子はまた、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）より長い半減期も有し、インビボで一層のＴｒｅｇ細胞拡大を引き起こす。 種々の免疫調節細胞型のパネルにおける等モル用量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質をＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときの変化倍数の表である。 Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときの、及びＳＴＡＴ５リン酸化によって測定したときの、抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＩＬ２低親和性又は高親和性受容体の差次的活性化に関する実験データを示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１が、Ｔｒｅｇ細胞に発現するがＣＤ４＋又はＣＤ８＋ Ｔｃｏｎ細胞には発現しない高親和性ＩＬ２受容体を刺激することに留意されたい。 抗体サイトカイングラフト化タンパク質（例えばＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１）で拡大したＴｒｅｇがＴエフェクター細胞（Ｔｅｆｆ）よりも良好な抑制因子であるという実験データを示す（上のパネルを参照）。下のパネルは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質によって拡大したＴｒｅｇ細胞が、Ｆｏｘｐ３タンパク質発現により、及びＦｏｘｐ３メチル化により安定するという実験データを示す。 抗体サイトカイングラフト化タンパク質が、ＩＬ２低親和性受容体を発現するＮＫ細胞に効果をほとんど乃至全く及ぼさないという実験データを示す。対照的に、ｐＳＴＡＴ５活性化によって測定したときＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）はＮＫ細胞を刺激する。 カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）におけるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較した抗体サイトカイングラフト化タンパク質の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）及び毒性プロファイルに関する実験データを示す。例えば、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べてはるかに低い好酸球増加毒性プロファイルを有する。 ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１の半減期延長を示すグラフである。 マウスＧｖＨＤモデルにおける抗体サイトカイングラフト化タンパク質分子に関する実験データを示す。これは、このモデルにおける抗体サイトカイングラフト化タンパク質による治療がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも良好にＴｒｅｇを拡大する一方、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔｅｆｆ細胞又はＮＫ細胞にはほとんど乃至全く効果を及ぼさないことを示す。 ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１の投与に伴う体重減少がほとんどない一方での、ＧｖＨＤマウスモデルにおけるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療に伴う体重減少に関する実験データを示す。 前糖尿病（ＮＯＤ）マウスモデルにおける抗体サイトカイングラフト化タンパク質とＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）との比較に関する実験データを示し、このモデルでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１が１型糖尿病を予防することを実証する。 前糖尿病ＮＯＤマウスモデルにおけるＴｒｅｇ対ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞比の比較に関する実験データを示す。 図１３：図１３Ａは１．３ｍｇ／ｋｇ用量でのＮＯＤマウスモデルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態に関する実験データを示す。図１３Ｂは０．４３ｍｇ／ｋｇ用量でのＮＯＤマウスモデルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態に関する実験データを示す。 （上記の通り。） 前糖尿病ＮＯＤマウスモデルにおいて使用した用量範囲の表であり、等モル量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を比較する。 図１５：図１５Ａは白斑患者（ｐａｔｅｎｔ）から採取してインビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１により処理し、及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したヒトＰＢＭＣ上でのｐＳＴＡＴ５活性化の大きさを示す一連のグラフを示す。図１５Ｂは１型糖尿病患者（ｐａｔｅｎｔ）から採取してインビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）により処理したヒトＰＢＭＣ上でのｐＳＴＡＴ５活性化の大きさを示す一連のグラフを示す。 （上記の通り。） ＩＬ２を抗ＲＳＶ抗体のＣＤＲＨ１にグラフト化したとき、ＲＳＶ結合が維持されることを示すＥＬＩＳＡデータのグラフを示す。しかしながら、ＩＬ２をＣＤＲＬ３にグラフト化したときＲＳＶへの結合は低下する。ＩＬ２を異なる抗体骨格（Ｘｏｌａｉｒ）にグラフト化したとき、ＲＳＶへの結合はない。 ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の単回投与後のカニクイザルにおけるＴｒｅｇ拡大に関する実験データを示す。 漸増濃度の架橋剤抗ヒトＩｇＧ抗体がＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的活性に及ぼす効果に関する実験データを示す。 ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａによる異なる自己免疫性患者ＰＢＭＣにおける選択的シグナル伝達に関する実験データを示す。 ヒトＰＢＭＣにおけるＴエフェクター細胞よりも優先的なＴｒｅｇにおけるシグナル伝達に関してＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９ＡがＰｒｏｌｅｕｋｉｎよりも高い選択性を有することに関する実験データを示す。
ＩＬ２高親和性受容体を標的化する抗体サイトカイングラフト化タンパク質
本明細書には、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）にグラフト化されたＩＬ２を含むタンパク質構築物が提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はヒト患者での使用に好適な特性を示し、例えば、天然又は組換えヒトＩＬ２と同様の免疫刺激活性を保持している。しかしながら、負の効果、例えばＮＫ細胞の刺激は減少している。他の活性及び特徴もまた本明細書全体を通じて実証される。従って、これまで公知のＩＬ２及び修飾ＩＬ２治療剤、例えばＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べて治療プロファイルが改善された抗体サイトカイングラフト化タンパク質、及び提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の治療における使用方法が提供される。
従って、本開示は、選択的活性プロファイルを備えた、ＩＬ２高親和性受容体のアゴニストである抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。免疫グロブリン重鎖配列と免疫グロブリン軽鎖配列とを含む提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質。各免疫グロブリン重鎖配列は重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とを含み、ここで重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３定常領域からなる。各免疫グロブリン軽鎖配列は軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とを含む。各抗体サイトカイングラフト化タンパク質において、ＩＬ２分子は抗体のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれる。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、重鎖ＣＤＲに取り込まれたＩＬ２分子を含む。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）に取り込まれる。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、軽鎖ＣＤＲに取り込まれたＩＬ２分子を含む。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）に取り込まれる。特定の実施形態においてＩＬ２分子は軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）に取り込まれる。
一部の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、ＣＤＲに取り込まれるＩＬ２配列を含み、それによりＩＬ２配列がＣＤＲ配列に挿入される。挿入はＣＤＲのＮ末端領域若しくはその近傍、ＣＤＲの中央領域、又はＣＤＲのＣ末端領域若しくはその近傍であってもよい。他の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、ＣＤＲに取り込まれるＩＬ２分子を含み、それによりＩＬ２配列がＣＤＲ配列の全て又は一部に置き換わる。置き換えは、ＣＤＲのＮ末端領域、ＣＤＲの中央領域又はＣＤＲのＣ末端領域若しくはその近傍であってもよい。置き換えは、ＣＤＲ配列の１又は２アミノ酸ほどの少ないものであっても、又はＣＤＲ配列全体であってもよい。
一部の実施形態においてＩＬ２分子はペプチドリンカーなしにＣＤＲに直接グラフト化され、ＣＤＲ配列とＩＬ２配列との間に追加的なアミノ酸はない。
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧクラス抗体重鎖の免疫グロブリン重鎖を含む。特定の実施形態においてＩｇＧ重鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４サブクラスのいずれか１つである。
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、既知の臨床的に利用されている免疫グロブリン配列から選択される重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。特定の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒト化配列である重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。他の特定の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒト配列である重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、生殖細胞系列免疫グロブリン配列から選択される重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
一部の実施形態において抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＩＬ２分子の結合特異性と異なる標的に対する免疫グロブリン可変ドメインの結合特異性を有する重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列を含む。一部の実施形態において免疫グロブリン可変ドメインのその標的に対する結合特異性は、グラフト化されたサイトカインの存在下で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％保持される。特定の実施形態において保持される結合特異性は非ヒト標的に対するものである。特定の実施形態において保持される結合特異性は、ウイルス、例えばＲＳＶに対するものである。他の実施形態において結合特異性は、ＩＬ２療法と併せて治療的有用性を有するヒト標的に対するものである。特定の実施形態において、免疫グロブリンの結合特異性を標的化することにより、ＩＬ２成分に更なる治療利益が付与される。特定の実施形態において免疫グロブリンのその標的に対する結合特異性はＩＬ２との相乗活性を付与する。
なおも他の実施形態において、免疫グロブリンのその標的に対する結合特異性は、ＩＬ２分子をグラフト化することにより１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する。
提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列からなる。提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号４の配列からなる。
提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列からなる。提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のＶＨ又はＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）に取り込まれたＩＬ２分子を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２配列は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列を含む。一部の実施形態において、ＩＬ２分子は配列番号６の配列からなる。
一部の実施形態において、グラフト化される抗体サイトカインは、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも優れた抗炎症特性を付与する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＴｒｅｇ細胞に対する活性の増加を付与する一方で、比例した炎症誘発活性の低下を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、高親和性ＩＬ２受容体（登録商標）の優先的刺激を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、Ｔｅｆｆ細胞、Ｔｃｏｎ細胞、及び／又はＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の優先的活性化を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、Ｔｅｆｆ細胞、Ｔｃｏｎ細胞、及び／又はＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の優先的拡大を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又はＮＫ細胞の拡大なしにＴｒｅｇ細胞の拡大増加を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＮＫ細胞拡大比を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞拡大比を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である、およそそれである、それより大きいＴｒｅｇ細胞：ＣＤ４ Ｔｃｏｎ細胞拡大比を提供する。
一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＣＤ４ Ｔｃｏｎ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＣＤ８ Ｔｅｆｆ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＮＫ細胞において低下するＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１，０００倍、約２，０００倍、約３，０００倍、約４，０００倍、約５，０００倍、約６，０００倍、約７，０００倍、約８，０００倍、約９，０００倍、約１０，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ４ Ｔエフェクター細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１００倍、約２００倍、約３００倍、約４００倍、約５００倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍、約９００倍、約１，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ８ Ｔエフェクター細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の約１００倍、約２００倍、約３００倍、約４００倍、約５００倍、約６００倍、約７００倍、約８００倍、約９００倍、約１，０００倍、又はそれ以上高いＣＤ８ Ｔエフェクター／記憶細胞と比べたＴｒｅｇ細胞の特異的活性化を提供する。
一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、好酸球増加の拡大など、毒性の低下を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、４時間超、６時間超、８時間超、１２時間超、２４時間超、４８時間超など、半減期の増加を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）患者などにおける体重減少の軽減を提供する。一部の実施形態において、本明細書に開示される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ヒトＩＬ２、組換えヒトＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して１型糖尿病の発症に対するより良好な保護を提供する。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、修飾エフェクター機能を付与する修飾Ｆｃを有する修飾免疫グロブリンＩｇＧを含む。特定の実施形態において修飾Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む。詳細な実施形態において免疫グロブリン重鎖は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含み得る。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号２０の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号３３の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含む。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号４６の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号５８の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含む。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号７１の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号８４の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含む。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、（ｉ）配列番号９７の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域及び（ｉｉ）配列番号１１０の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態において免疫グロブリンは、任意選択で、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択されるエフェクター機能の低下を付与する突然変異又は突然変異の組み合わせを含む。
操作及び修飾された抗体サイトカイングラフト化タンパク質
特定の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ＩＬ２配列を免疫グロブリン足場のＣＤＲ領域にグラフト化することにより作成される。重鎖及び軽鎖の両方の免疫グロブリン鎖が作製されて、最終的な抗体グラフト化タンパク質が生じる。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に好ましい治療活性を付与するが、しかしながら抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、天然又は組換えヒトＩＬ２（ｒｈＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と比較したとき炎症誘発活性が低下している。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するため、特定のムテインを含有するＩＬ２配列（配列番号４又は配列番号６）が免疫グロブリン鎖足場タンパク質のＣＤＲループに挿入される。グラフト化構築物は、臨床セッティングで利用されている種々の公知の免疫グロブリン配列、現在創薬及び／又は臨床開発中の公知の免疫グロブリン配列、ヒト生殖細胞系列抗体配列、並びに新規抗体免疫グロブリン鎖の配列のいずれを使用して調製してもよい。構築物は、関連性のある配列をコードする組換えＤＮＡを利用した標準的な分子生物学的方法を用いて作製される。ＧＦＴＸ３ｂと称される例示的足場におけるＩＬ２の配列を表２に示す。挿入点は、利用可能な構造又は相同性モデルデータに基づきループの中間点となるように選択されたが、しかしながら挿入点はＣＤＲループのＮ端側又はＣ端側末端の方に調整することができる。
従って本開示は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が作成されるように異種抗体タンパク質又はポリペプチドに組み換えで挿入されたＩＬ２タンパク質を含む高親和性ＩＬ２受容体に特異的に結合する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。詳細には、本開示は、本明細書に記載される抗体又は抗体の抗原結合断片又は任意の他の関連性のある足場抗体ポリペプチド（例えば、完全抗体免疫グロブリンタンパク質、Ｆａｂ断片、Ｆｃ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ ＣＤＲ、ＶＬドメイン、ＶＬ ＣＤＲ等）と、異種サイトカインタンパク質、ポリペプチド、又はペプチド、例えばＩＬ２とを含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを抗体又は抗体断片と融合又はコンジュゲートする方法は当該技術分野において公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細書、同第５，６２２，９２９号明細書、同第５，３５９，０４６号明細書、同第５，３４９，０５３号明細書、同第５，４４７，８５１号明細書、及び同第５，１１２，９４６号明細書；欧州特許第３０７，４３４号明細書及び同第３６７，１６６号明細書；国際公開第９６／０４３８８号パンフレット及び同第９１／０６５７０号パンフレット；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０５３５－１０５３９；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０－５６００；及びＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－１１３４１を参照のこと。加えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エクソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（まとめて「ＤＮＡシャフリング」と称される）の技法によって作成することができる。ＤＮＡシャフリングは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質を調製するため、及び／又は抗体又はその断片の活性を変化させる（例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体又はその断片）ために用いることができる。概して、米国特許第５，６０５，７９３号明細書、同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同第５，８３４，２５２号明細書、及び同第５，８３７，４５８号明細書；Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３；Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８２；Ｈａｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５－７６；及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８－３１３（これらの特許及び文献の各々は、本明細書によって全体として参照により援用される）を参照のこと。抗体若しくはその断片、又はコードされる抗体若しくはその断片は、組換え前にエラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入又は他の方法によるランダム突然変異誘発に供することにより変化させることができる。目的の抗原タンパク質に特異的に結合する抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドが、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調製のため、１つ以上の異種サイトカイン分子、例えばＩＬ２の１つ以上の成分、モチーフ、セクション、パート、ドメイン、断片等で組み換えられてもよい。
抗体Ｆａｂは、サイトカインタンパク質の潜在的な挿入部位として働き得る６つのＣＤＲループ、軽鎖に３つ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）及び重鎖に３つ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）を含む。どの１つ又は複数のＣＤＲループにサイトカインを挿入すべきかの決定には、構造的及び機能的考慮点が勘案される。ＣＤＲループのサイズ及びコンホメーションは異なる抗体間で大きく変わるため、挿入に最適なＣＤＲは、各詳細な抗体／タンパク質の組み合わせについて実験的に決定されてもよい。加えて、サイトカインタンパク質はＣＤＲループに挿入されることになるため、これがサイトカインタンパク質の構造に更なる制約を課し得る。例えば、サイトカインタンパク質のアミノ末端とカルボキシ末端とは、比較的近い間隔（約２５Å）に制約される可能性を許容しなければならない。加えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、生物学的活性についてオリゴマー形成に頼ってはならない。利用可能なタンパク質データベース構造の分析からは、ＩＬ２を含めた多くのサイトカインタンパク質がこの範疇に入ることが指摘される。
免疫グロブリン鎖のＣＤＲは、本明細書に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の周知の付番方式によって決定される。例えば、ＣＤＲは、（１）Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム），ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；及び（２）Ｃｈｏｔｈｉａに記載される付番方式を用いることにより識別及び定義されており、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）“Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８を参照のこと。２０アミノ酸長未満の識別されるＣＤＲアミノ酸配列については、所望の特異的結合及び／又はアゴニスト活性をなお保持しながら、１又は２つの保存的アミノ酸残基置換が許容され得る。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は更に、出発抗体グラフト化タンパク質から特性が変化していてもよい修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための出発材料として、本明細書（例えば表２）に示されるＣＤＲ及び／又はＶＨ及び／又はＶＬ配列のうちの１つ以上を有する抗体を使用して調製することができる。或いは、修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための足場として任意の公知の抗体配列を利用してもよい。例えば、任意の公知の臨床で利用されている抗体を抗体グラフト化タンパク質の調製用の出発材料足場として利用してもよい。公知の抗体及び対応する免疫グロブリン配列としては、例えば、パリビズマブ、アリロクマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、エボロクマブ、ブリナツモマブ、ペンブロリズマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、シルツキシマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、ラキシバクマブ、ペルツズマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、デノスマブ、トシリズマブ、オファツムマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、セルトリズマブ、カツマキソマブ、エクリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、ナタリズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エファリズマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、アダリムマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、アブシキシマブ、ムロモナブ、又はこれらの修飾体が挙げられる。公知の抗体及び免疫グロブリン配列としてはまた、生殖細胞系列抗体配列も挙げられる。フレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベース又は既発表の参考文献から入手することができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列については、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース並びにＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ．ｆｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｅｕｒ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６を参照することができる。なおも他の例では、初期創薬及び／又は薬剤開発中であり得る他の公知の実体からの抗体及び対応する免疫グロブリン配列が、同様に修飾抗体サイトカイングラフト化タンパク質を操作するための出発材料として適合し得る。
結果として生じるポリペプチドがサイトカイン（例えばＩＬ２）の取り込みに適応した少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワーク又は足場を用いることができる。かかるフレームワーク又は足場は、ヒト免疫グロブリン、又はその断片の５つの主要なイディオタイプを含み、他の動物種の、好ましくはヒト化及び／又はヒトの側面を有する免疫グロブリンを含む。新規抗体、フレームワーク、足場及び断片が当業者により継続的に発見及び開発される。
抗体は、当該技術分野において公知の方法を用いて作成することができる。モノクローナル抗体の調製には、当該技術分野において公知の任意の技法を用いることができる（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ．７７－９６．Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５を参照のこと）。単鎖抗体の作製技法（米国特許第４，９４６，７７８号明細書）は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に使用するための抗体の作製に適合させることができる。また、トランスジェニックマウス、又は他の哺乳類などの他の生物を使用して霊長類化若しくはヒト化抗体又はヒト抗体を発現させ、同定してもよい。或いは、ファージディスプレイ技術を用いて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に使用するための選択の抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、前掲；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３，（１９９２）を参照のこと）。
霊長類化又はヒト化非ヒト抗体のための方法は当該技術分野において周知である。概して、霊長類化又はヒト化抗体は、そこに非霊長類又は非ヒトの供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。かかる非霊長類又は非ヒトアミノ酸残基は多くの場合に移入残基（ｉｍｐｏｒｔ ｒｅｓｉｄｕｅ）と称され、これは典型的には移入可変ドメイン（ｉｍｐｏｒｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）から取られる。ヒト化は、本質的にＷｉｎｔｅｒ及び共同研究者の方法に従い（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと）、ヒト抗体の対応する配列をげっ歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列に置換することにより実施し得る。従って、かかるヒト化抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）、ここでは実質的にインタクトに満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。実際には、霊長類化又はヒト化抗体は典型的には、霊長類又はヒト抗体であって、一部の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）残基及び場合により一部のフレームワーク（「ＦＲ」）残基が結合特異性を付与するため由来種（例えばげっ歯類抗体）の類似部位からの残基によって置換されているものである。
それに代えて又は加えて、非ヒト抗体と比べて同じ結合特性を維持しつつ又はより良好な結合特性を提供しつつ抗体においてヒト可変領域で非ヒト抗体可変領域を置き換えるインビボ方法を利用して非ヒト抗体を操作されたヒト抗体に変換してもよい。例えば、米国特許出願公開第２００５０００８６２５号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２５５５５２号明細書を参照のこと。或いは、逐次的なカセット置換によりヒトＶセグメントライブラリを作成することができ、ここでは初めに参照抗体Ｖセグメントの一部のみがヒト配列のライブラリに置き換えられ；次に残りの参照抗体アミノ酸配列のコンテクストで結合を支持する同定されたヒト「カセット」が第２のライブラリスクリーニングで組み換えられて完全ヒトＶセグメントが作成される（米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号明細書を参照のこと）。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調製に使用するための様々な抗体又は抗原結合断片は、インタクトな抗体の酵素的又は化学的修飾によって作製することができ、又は組換えＤＮＡ方法を用いてデノボ合成することができ（例えば単鎖Ｆｖ）、又はファージディスプレイライブラリを用いて同定することができる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４，１９９０を参照のこと）。例えばミニボディは、当該技術分野において、例えばＶａｕｇｈａｎ ａｎｄ Ｓｏｌｌａｚｚｏ，Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ．４：４１７－３０ ２００１に記載される方法を用いて作成することができる。二重特異性抗体は、ハイブリドーマのグラフト化又はＦａｂ’断片の連結を含め、種々の方法によって作製することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）を参照のこと。単鎖抗体は、ファージディスプレイライブラリ又はリボソームディスプレイライブラリ、遺伝子シャフリングライブラリを用いて同定することができる。かかるライブラリは、合成、半合成又は天然及び免疫適格供給源から構築することができる。従って、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質構築物の調製においては、選択の免疫グロブリン配列を利用し得る。
本開示の抗体、抗原結合分子又は抗体サイトカイングラフト化分子は、二重特異性抗体を更に含む。二重特異性又は二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。他の抗原結合断片又は抗体部分としては、二価ｓｃＦｖ（ダイアボディ）、抗体分子が２つの異なるエピトープを認識する二重特異性ｓｃＦｖ抗体、シングル結合ドメイン（ｄＡｂ）、及びミニボディが挙げられる。従って、本明細書に提供されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質構築物の調製においては、選択の免疫グロブリン配列を利用することができる。
抗体の抗原結合断片、例えばＦａｂ断片、ｓｃＦｖを構成要素として使用して抗体サイトカイングラフト化タンパク質を構築することができ、任意選択で多価形態が含まれてもよい。一部の実施形態において、かかる多価分子は抗体の定常領域（例えばＦｃ）を含む。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体の一方又は両方の可変領域（即ち、ＶＨ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を修飾することにより操作することができ、及びかかる適合されたＶＨ及び／又はＶＬ領域配列は、サイトカインのグラフト化に、又はサイトカイングラフト化の調製に利用することができる。抗体は、主に６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を通じて標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間の多様性がＣＤＲ外の配列よりも高い。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体－抗原相互作用に関与し、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列にグラフトされた特異的抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより特異的抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３３；Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号明細書、並びにＱｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照のこと）。特定の例では、フレームワーク領域内の残基を突然変異させることにより抗体の抗原結合能力を維持又は増強することが有益である（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌに対する米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照のこと）。
一部の態様において、目的の抗体の１つ以上の結合特性（例えば、親和性）を改善するための、「親和性成熟」として知られるＶＨ及び／又はＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基の突然変異が、例えばサイトカイングラフト化タンパク質のコンテクストと併せた抗体の抗原結合の最適化に有益であり得る。部位特異的突然変異誘発又はＰＣＲ媒介突然変異誘発を実施して１つ又は複数の突然変異を導入することができ、及び抗体結合への効果、又はその他の目的の機能特性について、本明細書に記載され及び実施例に提供されるとおりのインビトロ若しくはインビボアッセイ及び／又は当該技術分野において公知の代替的若しくは追加的アッセイで評価することができる。保存的修飾を導入することができる。突然変異はアミノ酸置換、付加又は欠失であってもよい。更に、典型的にはＣＤＲ領域内の１、２、３、４又は５つ以下の残基を変化させる。
操作された抗体又は抗体断片は、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基に例えば抗体の特性を改善するため修飾が行われたものを含む。一部の実施形態においてかかるフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、一つの手法は、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列に変更することである。より具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、その抗体の由来である生殖系列配列と異なるフレームワーク残基を含み得る。かかる残基は、抗体フレームワーク配列をその抗体の由来である生殖系列配列と比較することにより同定し得る。フレームワーク領域配列をその生殖細胞系列構成に戻すため、体細胞突然変異を例えば部位特異的突然変異誘発によって生殖系列配列に「復帰突然変異」させることができる。追加的なフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内、又は更には１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を突然変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させることを含む。この手法は「脱免疫化」とも称され、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号明細書に更に詳細に記載されている。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調製に利用される抗体又は抗体断片の定常領域は、適宜、任意のタイプ又はサブタイプであってよく、本方法によって治療される対象の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類又は他の哺乳類、例えば、農業動物哺乳類（例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）、家庭用動物哺乳類（例えば、イヌ、ネコ）又はげっ歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター、ウサギ）から選択することができる。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に利用される抗体は、ヒト化抗体又はＨｕｍａｎｅｅｒｅｄ（登録商標）抗体が作成されるように操作される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質に利用される抗体はヒト抗体である。一部の実施形態において、抗体定常領域アイソタイプはＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４である。特定の実施形態において、定常領域アイソタイプはＩｇＧ１である。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧ１ Ｆｃを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩｇＧ２ Ｆｃを含む。
フレームワーク又はＣＤＲ領域内に行われる修飾に加えて、又はそれに代えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の調製に利用される抗体又は抗体断片は、典型的には抗体の１つ以上の機能特性、例えば血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗原依存性細胞傷害などを変化させるため、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作されてもよい。更に、抗体、抗体断片、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、この場合もやはり抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上の機能特性を変化させるため、化学的に修飾することができ（例えば、１つ以上の化学的部分を抗体に付加することができる）又はそのグリコシル化が変化するように修飾することができる。
一実施形態では、ヒンジ領域のシステイン残基の数が変化する、例えば増加又は減少するようにＣＨ１のヒンジ領域が修飾される。例えば、この手法は更にＢｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号明細書に記載され、ここでは例えば軽鎖及び重鎖のアセンブリが促進されるように、又は抗体サイトカイングラフト化タンパク質の安定性が増加若しくは減少するように、ＣＨ１のヒンジ領域にあるシステイン残基の数を変化させる。別の実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の生物学的半減期が変化するように抗体のＦｃヒンジ領域を突然変異させる。より具体的には、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のブドウ球菌プロテインＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）（ＳｐＡ）結合が天然Ｆｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて損なわれるように、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン接合部領域に１つ以上のアミノ酸突然変異が導入される。この手法については、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書に更に詳細に記載されている。
本開示は、長いインビボ半減期を有するＩＬ２高親和性受容体に特異的に結合する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を提供する。別の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、その生物学的半減期が増加するように修飾される。様々な手法が可能である。インビボ半減期が増加した抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、１つ以上のアミノ酸修飾（即ち、置換、挿入又は欠失）をＩｇＧ定常ドメイン、又はそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃ又はヒンジＦｃドメイン断片）に導入して作成することもできる。例えば、Ｗａｒｄに対する米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記載されるとおり、以下の突然変異のうちの１つ以上を導入することができる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。例えば、国際公開第９８／２３２８９号パンフレット；国際公開第９７／３４６３１号パンフレット；及び米国特許第６，２７７，３７５号明細書を参照のこと。或いは、生物学的半減期を増加させるため、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書及び同第６，１２１，０２２号明細書に記載されるとおり、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１又はＣＬ領域内で変化させる。更に他の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基に置き換えることによりＦｃ領域を変化させて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のエフェクター機能を変化させる。例えば、エフェクターリガンドに対する親和性は変化しているが、親抗体の抗原結合能力は保持している抗体サイトカイングラフト化タンパク質となるように、１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることができる。親和性を変化させる対象のエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）又は補体のＣ１成分であってもよい。この手法については、いずれもＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書に更に詳細に記載されている。
別の実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のＣ１ｑ結合が変化し及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が低下又は消失するように、アミノ酸残基から選択される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基に置き換えることができる。この手法については、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に更に詳細に記載されている。
かかる突然変異を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質によって媒介される抗体依存細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は低下し、又は全くなくなる。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｌ２３４及びＬ２３５がＡｌａ２３４及びＡｌａ２３５に置換される。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｎ２６７がＡｌａ２６７に置換される。
別の実施形態では、１つ以上のアミノ酸残基を変化させて、それにより抗体サイトカイングラフト化タンパク質の補体結合能力を変化させる。この手法については、Ｂｏｄｍｅｒらによる国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに更に記載されている。
更に別の実施形態では、抗体が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力が増加するように及び／又はＦｃγ受容体に対する抗体サイトカイングラフト化タンパク質の親和性が増加するように、Ｆｃ領域が１つ以上のアミノ酸の修飾によって修飾される。この手法については、Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号パンフレットに更に記載されている。更に、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、結合が改善した変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｎ．２７６：６５９１－６６０４を参照のこと）。
なおも別の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のグリコシル化が修飾される。例えば、非グリコシル化抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作ることができる（即ち、この抗体サイトカイングラフト化タンパク質はグリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、例えば、「抗原」に対する抗体の親和性を増加させるため変化させることができる。かかる糖質修飾は、例えば抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変化させることにより達成し得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらし、それにより当該部位でのグリコシル化を除去する１つ以上のアミノ酸置換を作ることができる。かかる非グリコシル化は抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。かかる手法については、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書に更に詳細に記載されている。
それに加えて又は代えて、フコシル残基の量が低下した低フコシル化抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体など、変化したタイプのグリコシル化を有する抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作ることができる。かかる変化したグリコシル化パターンは、抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）能力を増加させることが実証されている。かかる糖質修飾は、例えば、グリコシル化機構が変化した宿主細胞において抗体サイトカイングラフト化タンパク質を発現させることにより達成し得る。グリコシル化機構が変化した細胞については当該技術分野において記載されており、組換え抗体サイトカイングラフト化タンパク質を発現して、それによりグリコシル化が変化した抗体サイトカイングラフト化タンパク質を産生する宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書は、機能が破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株について記載しており、この遺伝子はフコシルトランスフェラーゼをコードするため、かかる細胞株において発現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は低フコシル化を呈することになる。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９７）結合糖質に付加する能力が低下した変異ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞について記載し、これもまた当該宿主細胞において発現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質の低フコシル化をもたらす（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０もまた参照のこと）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／５４３４２号パンフレットは、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）－ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株について記載しており、この操作された細胞株で発現する抗体サイトカイングラフト化タンパク質は二分ＧｌｃＮａｃ構造の増加を呈し、それにより抗体のＡＤＣＣ活性の増加がもたらされる（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０もまた参照のこと）。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上のドメイン、又は領域は、当該技術分野において周知のものなど、リンカー、例えばペプチドリンカーを介して接続される（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，ＲＪ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照のこと）。ペプチドリンカーは長さが様々であってよく、例えばリンカーは１～１００アミノ酸長であることができ、典型的にはリンカーは５～５０アミノ酸長、例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０アミノ酸長である。
一部の実施形態において、ＩＬ２は、任意選択で１つ以上のペプチドリンカー配列を用いてＣＤＲ配列にグラフト化される。特定の実施形態において、１つ以上のペプチドリンカーは、（Ｇｌｙｎ－Ｓｅｒ）ｍ配列（配列番号１１５）、（Ｇｌｙｎ－Ａｌａ）ｍ配列（配列番号１１６）、又は（Ｇｌｙｎ－Ｓｅｒ）ｍ／（Ｇｌｙｎ－Ａｌａ）ｍ配列の任意の組み合わせ（それぞれ配列番号１１５及び１１６）［式中、各ｎは独立に１～５の整数であり、各ｍは独立に０～１０の整数である］から独立して選択される。リンカーの例としては、限定はされないが、グリシンベースのリンカー又はｇｌｙ／ｓｅｒリンカーＧ／Ｓ、例えば（ＧｍＳ）ｎ［式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい正の整数であり、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい整数である］（配列番号１１７）が挙げられる。特定の実施形態において、１つ以上のリンカーはＧ４Ｓリピート（配列番号１１８）、例えばＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（Ｇ４Ｓ）ｎ［式中、ｎは１以上の正の整数である（配列番号１１８）。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０］を含む。一部の実施形態において、ＳｅｒはＡｌａに置き換えることができ、例えば、（ＧｍＡ）ｎ［式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい正の整数であり、ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０に等しい整数である］（配列番号１１９）などのリンカーＧ／Ａである。特定の実施形態において、１つ以上のリンカーはＧ４Ａリピート（配列番号１２０）、（Ｇ４Ａ）ｎ［式中、ｎは１以上の正の整数である（配列番号１２０）。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３。ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０］を含む。一部の実施形態において、リンカーはリンカーの複数のリピートを含む。他の実施形態において、リンカーは組み合わせ及び複数のＧ４Ｓ（配列番号１１８）及びＧ４Ａ（配列番号１２０）を含む。
リンカーの他の例としては、リンカー及び接合部によって生じる免疫原性を最小限に抑えるため、抗体において天然に存在する可動性リンカー配列をベースとするものが挙げられる。例えば、抗体分子構造の可変ドメインとＣＨ１定常ドメインとの間には天然の可動性連結がある。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端から４～６残基が寄与し且つＣＨ１ドメインのＮ末端から４～６残基が寄与する約１０～１２アミノ酸残基を含む。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、例えば、ＣＨ１の末端５～６アミノ酸残基、又は１１～１２アミノ酸残基をリンカーとして取り込むリンカーを用いることができる。ＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５～６アミノ酸残基は、強力な二次構造のないループコンホメーションをとり、従って可動性リンカーとして働くことができる。ＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、それがＩｇ配列の一部であるとおり、可変ドメインの天然の伸長部であり、従ってリンカー及び接合部によって潜在的に生じる可能性のある任意の免疫原性を大幅に最小限に抑える。一部の実施形態においてリンカー配列は、ヒンジ配列をベースとする修飾ペプチド配列を含む。
更に、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の精製を促進するためペプチドなどのマーカー配列に融合することができる。好ましい実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）に提供されるタグなど、ヘキサヒスチジンペプチド（配列番号１２１）であり、その多くは市販されている。Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２４に記載されるとおり、例えばヘキサヒスチジン（配列番号１２１）は、グラフト化タンパク質の好都合な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定はされないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７）、及び「ｆｌａｇ」タグが挙げられる。
抗体はまた固体支持体に付加されてもよく、これは標的抗原のイムノアッセイ又は精製に特に有用である。かかる固体支持体としては、限定はされないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンが挙げられる。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質活性のアッセイ
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を同定するためのアッセイは当該技術分野において公知であり、本明細書に記載される。アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩＬ２高親和性受容体に結合し、細胞内シグナル伝達を促進、誘導、刺激してＴｒｅｇ効果並びに免疫刺激効果をもたらす。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＩＬ２高親和性受容体への結合は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて決定することができる。例えば、ＩＬ２高親和性受容体への結合は、限定なしに、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）、及びフローサイトメトリーを含めた公知の技法を用いて決定することができる。
ＩＬ２高親和性受容体を通じた細胞内シグナル伝達は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて測定することができる。例えば、ＩＬ２を通じた活性化はＳＴＡＴ５活性化及びシグナル伝達を促進する。ＳＴＡＴ５活性化の測定方法は当該技術分野において標準的である（例えば、ＳＴＡＴ５タンパク質のリン酸化状態、レポーター遺伝子アッセイ、下流シグナル伝達アッセイ等）。ＩＬ２高親和性受容体を通じた活性化はＴｒｅｇ効果の増加を伴う。加えて、ＩＬ２低親和性受容体の結合低下によりナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖が低下する。細胞増殖の測定方法は当該技術分野において標準的である（例えば、３Ｈ－チミジン取込みアッセイ、ＣＦＳＥ標識）。サイトカイン産生の測定方法は当該技術分野において周知である（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）。インビトロアッセイの実施においては、アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質に接触させた試験細胞又は試験細胞からの培養上清と、アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質に接触させていない対照細胞又は対照細胞からの培養上清及び／又は組換えヒトＩＬ２（例えばＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））と接触させたものとを比較することができる。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の活性はまた、エキソビボ及び／又はインビボで測定することができる。一部の態様において、未治療の対照動物及び／又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で同様に治療した動物と比較したときの抗体サイトカイングラフト化タンパク質で治療した動物からエキソビボで様々な細胞型にわたってＳＴＡＴ５活性化を測定する方法を用いて、細胞型間でのアゴニスト抗体グラフト化タンパク質の差次的活性を示すことができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、Ｔｒｅｇ細胞を活性化して拡大する能力を有する。例えば、Ｔｒｅｇ細胞のインビボでの活性化及び拡大は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて、例えばフローサイトメトリーにより測定することができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、免疫関連障害、例えば：１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン脂質症候群の予防、低減、阻害又は除去において治療上有用であり得る。１型糖尿病及びＳＬＥにおけるアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質の有効性は、治療有効量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質を対象に投与し、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の投与前及び投与後の対象を比較することにより決定し得る。１型糖尿病及びＳＬＥに対する療法におけるアゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質の有効性はまた、治療有効量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質を試験対象に投与し、試験対象を抗体未投与の対照対象と比較すること及び／又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で同様に治療した対象との比較によっても決定し得る。
アゴニスト抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードするポリヌクレオチド
別の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の重鎖及び軽鎖タンパク質をコードする単離核酸が提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、限定はされないが、組換え発現、化学合成、及び抗体四量体の酵素消化を含め、当該技術分野において公知の任意の手段により作製することができる。組換え発現は、当該技術分野において公知の任意の適切な宿主細胞、例えば、哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞等からであってよい。
本明細書には、配列番号２１、配列番号３４、配列番号４７、配列番号６０、配列番号７３、配列番号８６、配列番号９９、及び配列番号１１２のいずれか１つに例示される可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
従って本開示は、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の軽鎖及び／又は重鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載されるとおりの相補性決定領域を含む軽鎖又は重鎖可変領域又はセグメントをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態において、重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２１、配列番号４７、配列番号７３、及び配列番号９９からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３４、配列番号６０、配列番号８６、及び配列番号１１２からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する配列を含む。
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２３のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３６のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４９のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６２のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７５のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８８のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
一部の実施形態において、重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１０１のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の実施形態において、軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１４のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
ポリヌクレオチドは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の可変領域配列のみをコードすることができる。ポリヌクレオチドはまた、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の可変領域及び定常領域の両方をコードすることもできる。一部のポリヌクレオチド配列は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のうちの１つの重鎖及び軽鎖の両方の可変領域を含むポリペプチドをコードする。他の一部のポリヌクレオチドは、抗体タンパク質グラフト化されたもの（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｒａｆｔｅｄｓ）のうちの１つの重鎖及び軽鎖の可変領域とそれぞれ実質的に同一の２つのポリペプチドセグメントをコードする。
特定の実施形態において、ポリヌクレオチド又は核酸はＤＮＡを含む。他の実施形態において、ポリヌクレオチド又は核酸はＲＮＡを含み、これは一本鎖であっても又は二本鎖であってもよい。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の１つ以上の免疫グロブリンタンパク質鎖、及び任意選択で分泌シグナルをコードする核酸を含む組換え宿主細胞が提供される。特定の実施形態において組換え宿主細胞は、１つの免疫グロブリンタンパク質鎖と分泌シグナルとをコードするベクターを含む。他の特定の実施形態において組換え宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の２つの免疫グロブリンタンパク質鎖と分泌シグナルとをコードする１つ以上のベクターを含む。一部の実施形態において組換え宿主細胞は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の２つの免疫グロブリンタンパク質鎖と分泌シグナルとをコードするシングルベクターを含む。一部の実施形態において組換え宿主細胞は、１つが抗体サイトカイングラフト化タンパク質の重鎖免疫グロブリンタンパク質鎖をコードし、もう１つが軽鎖免疫グロブリンタンパク質鎖をコードする２つのベクターを含み、各々が分泌シグナルを含む。組換え宿主細胞は原核細胞又は真核細胞であってもよい。一部の実施形態において宿主細胞は真核細胞株である。一部の実施形態において宿主細胞は哺乳類細胞株である。一部の実施形態において宿主細胞はＣＨＯ細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞株は抗体産生用のＣＨＯ細胞株である。
加えて、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の作製方法が提供される。一部の実施形態において、この方法は、（ｉ）抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリンタンパク質鎖をコードする１つ以上のベクターを含む宿主細胞を抗体サイトカイングラフト化タンパク質の発現、形成、及び分泌に好適な条件下で培養する工程、及び（ｉｉ）抗体サイトカイングラフト化タンパク質を回収する工程を含む。
ポリヌクレオチド配列は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質のポリペプチド鎖をコードする既存の配列（例えば、本明細書に記載される配列）のデノボ固相ＤＮＡ合成又はＰＣＲ突然変異誘発によって生成され得る。核酸の直接化学合成が、Ｎａｒａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０，１９７９のホスホトリエステル法；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９，１９７９のホスホジエステル法；Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：１８５９、１９８１のジエチルホスホロアミダイト法；及び米国特許第４，４５８，０６６号明細書の固体担体法などの、当該技術分野において公知の方法によって行われ得る。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入が、例えば、ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９２；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；Ｍａｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：９６７，１９９１；及びＥｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ １：１７，１９９１に記載されるように行われ得る。
また、上記に記載される抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作製するための発現ベクター及び宿主細胞も提供される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリンポリペプチド鎖、又は断片をコードするポリヌクレオチドを発現させるため、様々な発現ベクターを用いることができる。哺乳類宿主細胞における免疫グロブリンタンパク質の作製には、ウイルスベースの発現ベクター及び非ウイルス発現ベクターの両方を使用することができる。非ウイルスベクター及び系としては、典型的に、タンパク質又はＲＮＡを発現するための発現カセットを含む、プラスミド、エピソームベクター、及びヒト人工染色体（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １５：３４５，１９９７を参照）が挙げられる。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞内での抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリヌクレオチド及びポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターとしては、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、Ｂ ＆ Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ Ａ、Ｂ ＆ Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、及び他のタンパク質を発現するための当該技術分野において公知の多くの他のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０に基づくベクター、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバーウイルス、ワクシニアウイルスベクター及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．、上掲；Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：８０７，１９９５；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６８：１４３，１９９２を参照されたい。
発現ベクターの選択は、ベクターが発現される意図される宿主細胞に応じて決まる。典型的に、発現ベクターは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されるプロモーター及び他の調節配列（例えば、エンハンサー）を含有する。ある実施形態において、誘導性プロモーターが、誘導条件下を除いて挿入された配列の発現を防止するのに用いられる。誘導性プロモーターとしては、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター又は熱ショックプロモーターが挙げられる。形質転換された生物の培養物が、発現生成物が宿主細胞によってより良好に許容されるコード配列について集団を偏らせずに非誘導条件下で拡張され得る。プロモーターに加えて、他の調節エレメントも抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリン鎖又はフラグメントの効率的発現のために必要とされるか又は所望され得る。これらのエレメントは、典型的に、ＡＴＧ開始コドン及び隣接するリボソーム結合部位又は他の配列を含む。さらに、発現の効率が、使用の際に細胞系への適切なエンハンサーの包含によって高められ得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５，１９９４；及びＢｉｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６，１９８７を参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサー又はＣＭＶエンハンサーは、哺乳動物宿主細胞内での発現を増加させるのに使用され得る。
発現ベクターはまた、細胞から運び出されて培養培地中に入る抗体サイトカイングラフト化タンパク質を形成するように分泌シグナル配列位置も提供することができる。特定の態様において、挿入される抗体サイトカイングラフト化タンパク質の免疫グロブリン配列は、ベクターに含める前にシグナル配列に連結される。免疫グロブリン軽鎖及び重鎖可変ドメインをコードする配列を受け取るために使用されるベクターは、時にまた定常領域又はその一部もコードする。かかるベクターは、定常領域を含むグラフト化タンパク質としての可変領域の発現を可能にし、それによりインタクトな抗体サイトカイングラフト化タンパク質又はその断片の作製につながる。典型的には、かかる定常領域はヒトである。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質鎖を担持及び発現するための宿主細胞は、原核又は真核のいずれかであり得る。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本開示のポリヌクレオチドをクローニングし、発現するのに有用な１つの原核宿主である。使用するのに好適な他の微生物宿主としては、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの桿菌、並びにサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び様々なシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種などの他の腸内細菌科が挙げられる。これらの原核宿主においては、典型的に、宿主細胞と適合する発現制御配列（例えば、複製起点）を含む発現ベクターを作製することもできる。さらに、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、β－ラクタマーゼプロモーター系、又はラムダファージに由来するプロモーター系などの、任意の数の様々な周知のプロモーターば存在することになる。プロモーターは、典型的に、任意選択的に、オペレーター配列とともに発現を制御し、転写及び翻訳を開始及び完了させるためのリボソーム結合部位配列などを有する。酵母などの他の微生物も、抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリペプチドを発現するのに用いられ得る。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用され得る。
一部の好ましい実施形態では、抗体サイトカイングラフト化タンパク質ポリペプチドの発現及び作製に哺乳類宿主細胞が使用される。例えば、それは外因性発現ベクターを有するいずれかの哺乳類細胞株であってもよい。これらは、任意の正常な死滅する又は正常若しくは異常な不死の動物又はヒト細胞を含む。例えば、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換されたＢ細胞及びハイブリドーマを含む、無傷の免疫グロブリンを分泌することが可能ないくつかの好適な宿主細胞株が開発されている。ポリペプチドを発現するための哺乳動物組織細胞培養物の使用は、例えば、Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７に一般に記載されている。哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、及びエンハンサーなどの発現制御配列（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９－６８，１９８６を参照）、並びにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列などの必要なプロセッシング情報部位を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳動物遺伝子又は哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターを含有する。好適なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的、及び／又は調節可能又は制御可能であり得る。有用なプロモーターとしては、限定はされないが、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰｐｏｌＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト最初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、及び当該技術分野において公知のプロモーター－エンハンサーの組合せが挙げられる。
対象とするポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入するための方法は、細胞宿主の型に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが、原核細胞のために一般的に用いられるが、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポレーションが、他の細胞宿主のために使用され得る（一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，上掲を参照）。他の方法としては、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介性形質転換、インジェクション及びマイクロインジェクション、弾道法、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２へのグラフト化（Ｅｌｌｉｏｔ ａｎｄ Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｃｅｌｌ ８８：２２３，１９９７）、ＤＮＡの薬剤促進性取り込み、及びエクスビボ形質導入が挙げられる。組み換えタンパク質の長期の高収率の生成のために、安定した発現が望ましいことが多い。例えば、抗体サイトカイングラフト化タンパク質鎖を安定に発現する細胞株は、ウイルスの複製起点又は内因性発現エレメントと、選択マーカー遺伝子とを含有する発現ベクターを用いて調製され得る。ベクターの導入後、細胞が、富化培地中で１～２日間成長されてから、選択培地に切り替えられる。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在が、選択培地中で導入された配列を首尾よく発現する細胞の成長を可能にする。耐性の安定にトランスフェクトされた細胞が、細胞型にとって適切な組織培養技術を用いて増殖され得る。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含む組成物
薬学的に許容可能な担体と共に製剤化された抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含む医薬組成物が提供される。任意選択で、医薬組成物は、所与の障害の治療又は予防に好適な他の治療剤を更に含む。薬学的に許容可能な担体は組成物を増強し、若しくは安定化させるか、又は組成物の調製を促進する。薬学的に許容可能な担体としては、生理的に適合性のある溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが挙げられる。
医薬組成物は、当該技術分野において公知の種々の方法によって投与することができる。投与経路及び／又は投与様式は所望の結果に応じて変わる。投与が非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、又は皮下のいずれかから選択される）によるか、又は標的部位の近位に投与されることが好ましい。薬学的に許容可能な担体は、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、皮下、鼻腔内、吸入、脊髄又は表皮投与（例えば、注射により、又は移植で）のうちの任意の１つ以上による投与に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、例えば抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、酸の作用及びその他、化合物を不活性化し得る天然条件から化合物を保護する材料でコーティングすることができる。一部の実施形態において、医薬組成物は静脈内投与用に製剤化される。一部の実施形態において、医薬組成物は皮下投与用に製剤化される。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、単独で、又は他の好適な成分と組み合わせて、吸入によって投与するためのエアロゾル製剤にされてもよい（即ち、それは「噴霧化」されてもよい）。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など、加圧された許容可能な噴射剤の中に置かれ得る。
一部の実施形態において、医薬組成物は無菌且つ流動体である。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散剤の場合には必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖類、マンニトール又はソルビトールなどの多価アルコール類、及び塩化ナトリウムを含むことが好ましい。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム又はゼラチンを組成物中に含めることにより、注射用組成物の長期吸収をもたらすことができる。特定の実施形態では、組成物は、適切な賦形剤（例えばスクロース）を使用して凍結乾燥形態での貯蔵用に調製することができる。
医薬組成物は、当該技術分野において周知の常法に従い調製することができる。薬学的に許容可能な担体は、一部には、投与される詳細な組成物、並びに組成物の投与に用いられる詳細な方法によって決まる。従って、医薬組成物の好適な製剤の種類は幅広くある。抗体サイトカイングラフト化タンパク質の製剤化並びに適切な投与及びスケジュールの決定に適用可能な方法については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）；及びＭａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｓｗｅｅｔｍａｎ，２００５，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ．、及びＭａｒｔｉｎｄａｌｅ，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，３１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ．，１９９６，Ａｍｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｎ、及びＳｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８（これらの各々は本明細書によって参照により本明細書に援用される）を参照することができる。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、医薬組成物中には治療有効用量又は効果的用量の抗体サイトカイングラフト化タンパク質が利用される。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、当業者に公知の従来方法によって薬学的に許容可能な剤形に製剤化される。投薬量レジメンは、所望の応答（例えば治療応答）を提供するように調整される。治療上又は予防上有効な用量の決定においては、低用量を投与し、次に望ましくない副作用は最小限として又は全くなく所望の応答が達成されるまで漸増させることができる。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、数回に分割された用量が時間をかけて投与されてもよく、又は治療状況の危急性が示すところに従い用量を比例的に増減させてもよい。特に、容易な投与及び投薬量の均一性のため、非経口組成物を投薬量単位形態で製剤化することが有利である。投薬量単位形態は、本明細書で使用されるとき、治療対象への単位投薬量として適した物理的に別個の単位を指し；各単位が、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の分量の活性化合物を含有する。
本開示の医薬組成物中にある活性成分の実際の投薬量レベルは、患者にとって毒性でなく、詳細な患者、組成物、及び投与様式に対して所望の治療応答を実現するのに有効な活性成分の量に達するように変えられてもよい。選択される投薬量レベルは、用いられる詳細な組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いられる詳細な化合物の排泄速度、治療継続期間、他の薬物、用いられる詳細な組成物と併用して使用される化合物及び／又は材料、治療下の患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康及び前病歴などの要因を含め、種々の薬物動態学的要因に依存する。
第２の薬剤との共製剤化
一部の実施形態において、薬理学的組成物は、抗体サイトカイングラフト化タンパク質と１つ以上の追加的な薬理学的薬剤との混合物を含む。本抗体サイトカイングラフト化タンパク質と共に混合物中に含められる例示的な第２の薬剤としては、限定なしに、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質が挙げられる。適切な選択は、好ましい製剤、投薬量及び／又は送達方法に依存し得る。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗炎症剤と共製剤化される（即ち、混合物として提供されるか、又は混合物中に調製される）。詳細な実施形態において、コルチコステロイド抗炎症剤が抗体サイトカイングラフト化タンパク質と併せて使用されてもよい。使用のためのコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｉｓｏｎｉｄｅ）、メサラミン、及びデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は製剤化及び送達の優先性に依存することになる。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は免疫調節剤と共製剤化される。詳細な実施形態において、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、タクロリムス、及びメトトレキサートのいずれかから選択される免疫調節薬。詳細な実施形態において、免疫調節薬は、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブ、及びベドリズマブから選択される。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はアミノサリチル酸剤と共製剤化される。詳細な実施形態において、アミノサリチル酸は、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジン又は他の５－アミノサリチル酸誘導体から選択される。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗細菌剤と共製剤化される。例示的抗細菌剤としては、限定なしに、スルホンアミド類（例えば、スルファニルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソオキサゾール、スルファセタミド）、トリメトプリム、キノロン類（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロキサシン、ペフロキサシン（ｐｅｒｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン、ガレノキサシン及びゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン類（例えば、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリン、及びピペラシリン）、セファロスポリン類（例えば、セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフロキシムアキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ａｃｅｔｉｌ）、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシムプロキセチル、セフチブテン（ｃｅｆｉｂｕｔｅｎ）、セフジニル、セフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ ｐｉｖｏｒｘｉｌ）、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジム、及びセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｎｅ））、カルバペネム類（例えば、イミペネム、アズトレオナム）、及びアミノグリコシド類（例えば、ネオマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン（ｔｏｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン、及びアミカシン）が挙げられる。
製品／キット
一部の態様において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は製品（即ちキット）で提供される。提供される抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、概してバイアル又は容器内にある。従って、製品は、容器及び容器上にある又はそれと関連付けられたラベル又は添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、溶液バッグ等が挙げられる。適宜、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は液体又は乾燥形態（例えば、凍結乾燥形態）であってもよい。容器は、それ自体で、又は別の組成物との組み合わせで、免疫関連障害の治療、予防及び／又は改善用の組成物の調製に有効な組成物を保持する。ラベル又は添付文書は、組成物が免疫関連障害の治療、予防及び／又は改善に使用されることを指示する。本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含む製品（キット）は、任意選択で１つ以上の追加的薬剤を含む。一部の実施形態において、製品（キット）は抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的に許容可能な希釈剤とを含む。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、製品（キット）において１つ以上の追加的な活性薬剤と共に同じ製剤に（例えば、混合物として）提供される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は製品（キット）において第２又は第３の薬剤と共に別個の製剤に（例えば、別個の容器に）提供される。特定の実施形態において、製品（キット）は抗体サイトカイングラフト化タンパク質のアリコートを含み、ここでアリコートは１用量以上を提供する。一部の実施形態において複数回投与用のアリコートが提供され、ここで用量は均一であるか、又は変化する。詳細な実施形態において、変化する投与レジメンは、適宜、漸増又は漸減するものである。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質及び第２の薬剤の投薬量は、独立に均一であるか、又は独立に変化する。特定の実施形態において、製品（キット）は、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質のいずれかから選択される追加的薬剤を含む。１つ以上の追加的薬剤の選択は、投薬量、送達、及び治療しようとする疾患状態に依存することになる。
免疫関連障害の治療方法及びその治療用組成物の使用
治療又は予防の対象となる病態
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、免疫関連障害の治療、改善又は予防に使用が見出される。一態様において、本開示は、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療方法を提供し、この方法は、本明細書に記載されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質の治療有効量を個体に投与することを含む。本開示はまた、一態様において、治療剤としての使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質も提供する。一部の実施形態において、個体の免疫関連障害の治療又は予防における治療剤としての使用のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質が提供される。一部の実施形態において、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療用医薬品の製造のための抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用が提供される。更なる態様において、本開示は、それを必要としている個体の免疫関連障害の治療又は改善における使用のためのかかる抗体サイトカイングラフト化タンパク質を含む組成物を提供する。
治療の対象となる病態としては、免疫関連障害が挙げられる。治療目的については、個体は免疫関連障害を有し得る。防御又は予防目的については、個体は、活性状態の免疫関連障害から寛解していてもよく、又は将来的な発生が予測されてもよい。一部の実施形態において、患者は免疫関連障害を有するか、免疫関連障害を有する疑いがあるか、又は免疫関連障害から寛解している。抗体サイトカイングラフト化タンパク質による治療の対象となる免疫関連障害は、Ｔｒｅｇ細胞上でのＩＬ２受容体シグナル伝達の活性化から利益を得る。治療の対象となる免疫関連障害としては、限定なしに：１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア及び原発性抗リン脂質症候群が挙げられる。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の投与
医師又は獣医師は、医薬組成物中に用いる抗体サイトカイングラフト化タンパク質の用量を所望の治療効果の実現に必要な用量よりも低いレベルで開始し、所望の効果が実現するまで投薬量を徐々に増加させることができる。一般に、組成物の有効用量は、治療されることになる具体的な疾患又は病態、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトか、それとも動物か、投与されている他の薬物療法、及び治療が予防的か、それとも療法的かを含め、多くの異なる要因に応じて変わる。治療投薬量は、安全性及び有効性を最適化するため典型的には滴定が必要である。抗体サイトカイングラフト化タンパク質を伴う投与について、投薬量は宿主体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、及びより通常は０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば投薬量は１ｍｇ／ｋｇ体重又は１０ｍｇ／ｋｇ体重又は１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。投与は必要又は所望に応じて毎日、毎週、隔週、毎月、又はそれより多い若しくは少ない頻度であってもよい。例示的治療レジームは必然的に、週１回、２週間毎に１回又は月１回又は３～６ヵ月毎に１回の投与を伴う。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質は単回用量又は分割用量で投与することができる。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は通常、複数の機会に投与される。単回投薬量間の間隔は、必要又は所望に応じて毎週、隔週、毎月又は毎年であってもよい。間隙はまた、患者における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の血中レベルの測定によって指示されるとおり不規則であってもよい。一部の方法では、投薬量は、１～１０００μｇ／ｍｌ、及び一部の方法では２５～３００μｇ／ｍｌの血漿抗体サイトカイングラフト化タンパク質濃度が実現するように調整される。或いは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は徐放製剤として投与することができ、この場合より低い頻度での投与が必要である。投薬量及び頻度は患者における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の半減期に応じて変わる。一般に、抗体グラフト化タンパク質は天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）などの組換えサイトカインよりも長い半減期を示す。投薬量及び投与頻度は、治療が予防的か、それとも療法的かに応じて変わり得る。一般に予防適用については、比較的低い投薬量が比較的低い頻度間隔で長期にわたって投与される。一般に療法適用については、疾患の進行が減少又は終了するまで、及び好ましくは患者が疾患の症状の部分的又は完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が時に必要となる。その後、患者は予防レジームを投与されてもよい。
第２の薬剤との共投与
用語「併用療法」は、本開示に記載される治療上の病態又は障害を治療するための２つ以上の治療剤の投与を指す。このような投与は、固定比の活性成分を有する単一のカプセルなどの、実質的に同時の様式でのこれらの治療剤の同時投与を包含する。或いは、このような投与は、各活性成分について、複数の、又は別々の容器（例えば、カプセル、粉末、及び液体）中での同時投与を包含する。粉末及び／又は液体は、投与前に所望の用量に再構成又は希釈され得る。さらに、このような投与は、ほぼ同時に又は異なる時間に、連続的様式での、それぞれのタイプの治療剤の使用も包含する。いずれの場合も、治療計画は、本明細書に記載される病態又は障害を治療する際に薬物の組合せの有益な効果を提供する。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は１つ以上の追加的な薬理学的薬剤と共投与される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質及び追加的な１つ以上の薬剤は、混合物として投与される。一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質及び追加的な１つ以上の薬剤は、別個の製剤として投与される。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は同時である。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は逐次的である。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は同じ経路による。別個の製剤が利用される特定の実施形態において、投与は異なる経路による。抗体サイトカイングラフト化タンパク質と共投与するための例示的な追加的薬剤としては、限定なしに、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸、及び抗生物質が挙げられる。適切な選択は、好ましい製剤、投薬量及び／又は送達方法に依存し得る。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はまた、免疫関連障害病態を治療するための追加的な確立された手技、例えば外科手術との併用療法にも使用が見出される。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗炎症剤と共投与される。詳細な実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質と併せてコルチコステロイド抗炎症剤が使用されてもよい。使用のためのコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｎｉｓｏｎｉｄｅ）、メサラミン、及びデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は製剤化及び送達の優先性に依存することになる。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は免疫調節剤と共投与される。詳細な実施形態において、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、タクロリムス、及びメトトレキサートのいずれかから選択される免疫調節薬。別の実施形態において免疫調節薬は、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブ、及びベドリズマブから選択される。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質はアミノサリチル酸剤と共投与される。詳細な実施形態においてアミノサリチル酸は、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジン又は他の５－アミノサリチル酸誘導体から選択される。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は抗細菌剤と共投与される。例示的抗細菌剤としては、限定なしに、スルホンアミド類（例えば、スルファニルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフイソオキサゾール、スルファセタミド）、トリメトプリム、キノロン類（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロキサシン、ペフロキサシン（ｐｅｒｌｏｘａｃｉｎ）、レボフロキサシン、ガレノキサシン及びゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン類（例えば、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン（ｎａｆｃｉｌｉｎ）、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリン、及びピペラシリン）、セファロスポリン類（例えば、セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフロキシムアキセチル（ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ａｃｅｔｉｌ）、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシムプロキセチル、セフチブテン（ｃｅｆｉｂｕｔｅｎ）、セフジニル、セフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ ｐｉｖｏｒｘｉｌ）、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジム、及びセフェピム（ｃｅｆｅｐｉｎｅ））、カルバペネム類（例えば、イミペネム、アズトレオナム）、及びアミノグリコシド類（例えば、ネオマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン（ｔｏｒａｍｙｃｉｎ）、ネチルマイシン、及びアミカシン）が挙げられる。
一部の実施形態において、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は標準治療と共投与される。例えば、１型糖尿病の治療においては、標準治療はインスリンの投与又はインスリン療法である。本明細書に開示されるとおりの抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、インスリンが正常糖値を一次的に回復することに伴い免疫寛容の促進においてなおも良好に機能するであろう。
実施例１：ＩＬ２抗体サイトカイングラフト化タンパク質の創製
ＩＬ２配列を様々な免疫グロブリン足場のＣＤＲ領域内に操作することにより抗体サイトカイングラフト化タンパク質を作成し、次に重鎖及び軽鎖の両方の免疫グロブリン鎖を使用して最終的な抗体サイトカインタンパク質を作成した。抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＩＬ２の好ましい治療特性を付与する；しかしながら、抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、ｒｈＩＬ２と比較したときＮＫ細胞活性の増加などの望ましくない効果が低下している。
抗体サイトカイングラフト化タンパク質を創製するため、ムテインを含むＩＬ２配列（配列番号４又は６）を免疫グロブリン鎖足場のＣＤＲループに挿入した。臨床的セッティングで利用されている種々の公知の免疫グロブリン配列並びに生殖細胞系列抗体配列を使用して抗体サイトカイングラフト化タンパク質を調製した。ＧＦＴＸ３ｂと称される例示的足場におけるＩＬ２の配列を表２に示す。挿入点は、利用可能な構造的又は相同性モデルデータに基づいて、ループの中間点であると選択された。抗体サイトカイン移植タンパク質を、関連する配列をコードする組み換えＤＮＡを用いる標準的な分子生物学方法を用いて生成した。
サイトカイングラフト化にどのＣＤＲを選ぶかの選択は、以下のパラメータに関して選択される：要求される生物学、生物物理学的特性及び好ましい開発プロファイル。どのＣＤＲ及びＣＤＲ内のどの位置が所望のパラメータを提供することになるかを予測する際にモデル化ソフトウェアが部分的にのみ有用であったため、従って６つ全ての可能な抗体サイトカイングラフトを作り、次に生物学的アッセイで評価する。要求される生物学的活性が実現する場合、次に抗体サイトカイングラフト化分子がそれぞれのサイトカイン受容体とどのように相互作用するかに関する構造分解などの生物物理学的特性を解く。
抗体ＩＬ２グラフト化分子について、初めにサイトカイングラフト化に考えられる抗体候補の構造を解いた。この構造から、抗体のなかでエピトープと相互作用する一部分であるパラトープが抗体「アーム」のＮ末端先端にあること、及びサイトカインをこの位置にグラフト化すればそのそれぞれの受容体に対してサイトカインが提示されるであろうことが分かった。グラフト技術に起因して、各抗体ＩＬ２グラフト化タンパク質は、異なる長さ、配列及び構造環境のＣＤＲループの制約を受ける。そのため、ＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２、ＬＣＤＲ－３及びＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２及びＨＣＤＲ－３に対応する６つ全てのＣＤＲにＩＬ２をグラフト化した。図１は、様々な点突然変異を含む、及びＩＬ２挿入点をＣＤＲループのＮ部分又はＣ部分のいずれかにシフトさせて（ｎＨ１、ｃＨ１、ｎＨ２、ｃＨ２）作製した異なる例示的バージョンのＩＬ２抗体サイトカイングラフトを示す。図１のこの表から、ＣＤＲ２の軽鎖にグラフト化されたＩＬ２（ＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ２）が発現しなかったことを含め、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が全てその活性の点で異なることが明らかである。また、Ｆｃ機能が変化した（例えばＦｃサイレントの）ＩＬ２抗体サイトカイングラフトがより良好なプロファイルを有することも観察された。
特性（生物物理学的及び生物学的）の最良の組み合わせを有し、且つ含まれたＩＬ２点突然変異が所望の生物学的特性を増強したため、ＨＣＤＲ－１が選択された。挿入点の選択については、ＣＤＲループの構造中心が、いずれの側にも最も大きい（直線サイズ３．８Å×残基数の）間隔をもたらし得ることに伴い選ばれ、及びいかなる一つの理論によっても拘束されるものではないが、これはＩＬ２のより容易な折り畳みを独立に可能にすることにより安定分子を提供した。グラフト足場ＧＦＴＸ３ｂの構造は既に分かっていたため、各ＣＤＲの構造中心もまた分かっていた。これは、Ｃｈｏｔｈｉａ付番方式を用いて定義したときのＣＤＲループ配列の中心と一致した。既述のとおり、ＩＬ－２グラフトの挿入点をＣＤＲループの中心から離れてＮ末端部分又はＣ末端部分のいずれかの方にシフトさせた。しかしながら、ＣＤＲループ内でＩＬ２をシフトさせても生物学的活性に大きな差は生じなかった。
要約すれば、ＣＤＲ内にグラフトすることによりあるレベルの立体障害がＩＬ２受容体の個々のサブユニットにもたらされ得るという仮説の下、構造に基づき各ＣＤＲにおける挿入点を選択した。特定のサイトカインにどのＣＤＲグラフトが最良かについての最終的な選択は、所望の生物学及び生物物理学的特性に基づいた。サイトカイン受容体の性質、サイトカイン／受容体相互作用及びシグナル伝達機構もまた役割を果たしたとともに、これは各個別の抗体サイトカイン分子をそのそれぞれの特性に関して比較することにより行った。
Figure 0007093794000001
Figure 0007093794000002
Figure 0007093794000003
Figure 0007093794000004
Figure 0007093794000005
Figure 0007093794000006
Figure 0007093794000007
Figure 0007093794000008
Figure 0007093794000009
Figure 0007093794000010
Figure 0007093794000011
Figure 0007093794000012
Figure 0007093794000013
Figure 0007093794000014
実施例２：抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に対するより高い活性及び増加した半減期を示す
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を上回る所望の生物学的効果を実現したことに伴いＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３を選択した（図１に相対的変化をまとめている）。これらの効果には以下が含まれる；Ｔｃｏｎ及びＮＫ細胞よりも優先的なＴｒｅｇ上のＩＬ－２Ｒ選択性、マウスにおけるＴｃｏｎ及びＮＫ細胞と比べたＴｒｅｇのより大きい半減期拡大。
高親和性ＩＬ－２受容体刺激の評価においては、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１グラフトの両方がＴｒｅｇ細胞上で同等のシグナル効力を示したが、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と異なり、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞及びＮＫ細胞の両方で低下した活性乃至無活性を示した。ＣＤＲＬ３にグラフト化されたＩＬ２（ＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３）は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも低いＴｒｅｇ上でのシグナル効力を示したが、ＮＫ細胞上では活性を示さなかった。ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐ．からヒト末梢血単核球（ｈＰＢＭＣ）を購入し、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３のいずれかによってインビトロで試験してＩＬ－２高親和性受容体に対する選択的活性を評価した。細胞を無血清試験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルに抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は天然ヒトＩＬ－２のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。
血漿中でのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３の薬物動態は、僅か１用量後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べて半減期の延長を示した。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）又はグラフトのいずれかによる１回の治療後８日における前糖尿病ＮＯＤマウスの脾臓で細胞拡大を評価した。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＴエフェクター細胞及びＮＫ細胞と比べて優れたＴｒｅｇ拡大を実現し、前糖尿病マウスにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも良好に忍容された。ＳＴＡＴ５刺激、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２．Ｌ３のＰＫ／ＰＤの要約を図２に示す。これは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有するのみならず、Ｔエフェクター細胞及びＮＫ細胞の望ましくない刺激なしに標的Ｔｒｅｇ細胞を刺激できることを示している。
実施例３：抗体サイトカイングラフト化タンパク質はＴｒｅｇ細胞に対してより高い活性を示す
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスは１型糖尿病を自然発症し、ヒト１型糖尿病の動物モデルとして用いられることが多い。前糖尿病ＮＯＤマウスに等モルのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週３回）及び種々の抗体サイトカイングラフト化タンパク質（１回／週）を投与した。初回治療から８日後、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ ＃Ｒ７７５７）で溶解させて、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を使用してＦＡＣＳ染色を実施した。細胞を表面抗体：ラット抗マウスＣＤ３－ＢＶ６０５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５６３００４）、ラット抗マウスＣＤ４－パシフィックブルー（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５８１０７）、ラット抗マウスＣＤ８－ＰｅｒＣｐ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３０３６）、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３１３３）ラット抗マウスＣＤ２５－ＡＰＣ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－０２５１）で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染色した。細胞はＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）又はＢＤ ＦＡＣＳ ＬＳＲ ＩＩ（登録商標）で分析し、及びデータはＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。図３は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ１１３Ａ．Ｈ１をＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較した、各脾臓から絶対数として計算した倍数値及び比を示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又はＮＫ細胞の拡大のないＴｒｅｇ細胞の拡大の増加が一番上の列に示される。これは、全ての細胞型の拡大につながる低用量及び高用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と対照的である。
実施例４：インビトロでＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力はＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣＤ８ Ｔｅｆｆにおいて低下するがＴｒｅｇにおいては低下しない
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を両方ともにＩＬ－２Ｒに対するシグナル効力に関してヒトＰＢＭＣ及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）ＰＢＭＣの両方でインビトロで試験した。等モルＩＬ２濃度のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は両方ともに、高親和性ＩＬ－２Ｒを発現するＴｒｅｇ細胞に対しては同様のシグナル効力を示したが、低親和性ＩＬ－２受容体を発現する従来のＣＤ４及びＣＤ８ Ｔエフェクター細胞に対してはＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１のみが効力の低下を示した。これらの結果はヒト及びカニクイザルの両方のＰＢＭＣで観察された。このアッセイについて、ＰＢＭＣ細胞は無血清試験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。細胞はＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、及びデータはＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。
図４に示されるとおりの結果が特に明らかであった。ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｏｇｕｓ）の両方のＰＢＭＣにおいて、ＴｒｅｇでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によるｐＳＴＡＴ５活性化が見られ、これはＣＤ８ Ｔエフェクターではほとんど見られなかった。
実施例５：ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はインビトロで機能性安定Ｔｒｅｇを拡大する
Ｔｒｅｇ選択性の改善には機能的効果が伴う。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で拡大したＴｒｅｇは、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で拡大したＴｒｅｇと比べて同等か又はより良好なＴエフェクターの抑制因子である。このアッセイのため、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ勾配（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ カタログ番号１７－１４４０－０３）で遠心することにより全血からヒトＰＢＭＣを精製した。ＰＢＭＣをＲＢＣ溶解させた（Ａｍｉｍｅｄ カタログ番号３－１３Ｆ００－Ｈ）。ＥａｓｙＳｅｐ ＣＤ４＋ Ｔ細胞エンリッチメントキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号１９０５２）を使用してＣＤ４＋ Ｔ細胞をエンリッチした。エンリッチしたＣＤ４＋をＶ５００抗ＣＤ４（クローンＲＰＡＴ４）、ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５抗ＣＤ１２７（及びＡＰＣ抗ＣＤ２５で染色し、ＣＤ４＋ＣＤ１２７－ＣＤ２５＋天然調節性Ｔ細胞（ｎＴｒｅｇ）及びＣＤ４＋ＣＤ１２７＋ＣＤ２５－ Ｔレスポンダー（Ｔｒｅｓｐ）を単離するため選別した。選別したＴｒｅｇを培地を満たした９６ウェル丸底マイクロプレートにレプリケートでプレーティングし（１×１０５／１００μｌ／ウェル）、等モル濃度の１ｎＭ又は０．３ｎＭ Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）又はＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の存在下において３：１のビーズ対細胞比でマイクロビーズによって刺激した。３７℃で２４時間インキュベートした後、ウェルに同じＩＬ２濃度を含む１００μｌ培地を補充した。３日目、培養物を懸濁し、半分に分割し、同じＩＬ２濃度を含む１００μｌ培地を補充した。６日目、培養物を３日目と同じく処理した。８日目、細胞を回収し、チューブにプールし、チューブをマルチスタンド磁石上に１～２分間置くことによりビーズを除去した。細胞を含有する上清を収集し、室温下２００ｇで５分間遠心した。次に細胞をカウントし、元のＩＬ２濃度の５分の１を含む培地を補充した４８ウェル平底マイクロプレートに約５×１０５／ｍｌで再びプレーティングした。２日間静置した後、細胞を回収し、カウントし、分析するか、又は抑制アッセイに使用した。拡大したＴｒｅｇ及び新鮮に解凍したＣＤ４＋ＣＤ１２７＋ＣＤ２５－ Ｔレスポンダー（Ｔｒｅｓｐ）細胞をそれぞれ０．８μＭ ＣＴＶｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ３４５５７）及び１μＭ ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ カタログ番号Ｃ３４５５４）で製造者の指示に記載されるとおり標識した。拡大したＴｒｅｇの抑制特性を評価するため、３×１０４ ＣＦＳＥ標識Ｔｒｅｓｐを単独で、又はＣＴＶｉｏｌｅｔ標識Ｔｒｅｇと共に（異なるＴｒｅｓｐ：Ｔｒｅｇ比）トリプリケートでプレーティングし、Ｄｙｎａｂｅａｄｓによって１：８のビーズ対細胞比で刺激した（最終容積２００μｌ／ウェル）。４～５日後、細胞を収集し、レスポンダー細胞の増殖をフローサイトメトリーによって判定した。
新鮮な拡大したＴｒｅｇにおいて、Ｔｒｅｓｐ細胞と比較してメチル化状態を判定した。ＱｉａｇｅｎからのＡｌｌｐｒｅｐ（登録商標）ＤＮＡ／ＲＮＡ Ｍｉｎｉ（カタログ番号８０２０４）を使用して＞５．０×１０５細胞からゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を単離した。次に、ＳｉｇｍａからのＩｍｐｒｉｎｔ（登録商標）ＤＮＡ修飾キット（カタログ番号ＭＯＤ５０）を使用して２００ｎｇのｇＤＮＡを処理し、非メチル化シトシンをウラシルに変換した（一方でメチル化シトシンは変化しないままとした）。次に、ＥｐｉＴｅｃｔ ＭｅｔｈｙＬｉｇｈｔ（登録商標）ＰＣＲ＋ＲＯＸ（Ｑｉａｇｅｎ カタログ番号５９４９６）、Ｅｐｉｔｅｃｔ対照ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ カタログ番号５９６９５）、標準メチル化（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２ＡＡＺ７ＦＰ）及び非メチル化（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１２ＡＡＺ７ＦＰ）プラスミド、Ｔｒｅｇ特異的脱メチル化領域（ＴＳＤＲ）、メチル化及び非メチル化フォワード及びリバースプライマー、及びプローブ（ＭｉｃｒｏＳｙｎｔｈ）を利用した配列特異的プローブベースのリアルタイムＰＣＲを用いて８ｎｇの亜硫酸水素変換ｇＤＮＡに関して定量的メチル化を判定した。メチル化パーセンテージはＥｐｉＴｅｃｔ ＭｅｔｈｙＬｉｇｈｔ（登録商標）ＰＣＲハンドブックに記載されるとおり計算した。
図５は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で拡大したＴｒｅｇによるＦｏｘｐ３遺伝子座の安定脱メチル化をグラフで示す。インビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１によって拡大したヒトＴｒｅｇはＦｏｘｐ３発現及び脱メチル化によって安定し、これが安定Ｔｒｅｇ細胞につながる。
実施例６：インビトロでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１によるＩＬ－２Ｒシグナル伝達に対する効力はヒトＮＫにおいて低下した
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は等モル濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較してＮＫ細胞におけるシグナル伝達効力の低下を示した。ＰＢＭＣ細胞を無血清試験培地中に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを加え、３７℃で２０分間インキュベートした。２０分後、細胞を１．６％ホルムアルデヒドで固定し、洗浄し、表面マーカーで染色した。室温で３０分後、試料を洗浄し、再懸濁した細胞ペレットを－２０℃メタノールで透過処理し、洗浄して、ＳＴＡＴ５及びＤＮＡインターカレーターで染色した。細胞をＣｙｔｏｆにかけ、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。結果は図６に示し、ここでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＫ細胞にほとんど乃至全く効果を及ぼさなかった。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療の望ましくない副作用として、ＮＫ細胞上のｐＳＴＡＴ５活性を増加させた。
実施例７：雌カニクイザルに皮下投与したときのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、及び毒性効果の判定
カニクイザルにおけるＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、薬物動態の延長、Ｔエフェクター細胞よりも優先的な優れたＴｒｅｇ拡大及び低用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも低い毒性を示した。この非臨床的実験室試験は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ実験動物委員会（Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が承認済みの一般的プロトコル第ＴＸ ４０３９号、本プロトコル及び施設内標準実施要領（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ＳＯＰ）に従い行われた。
試験初日に動物にＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）のいずれかを皮下投与した。試験における各用量レベルで全ての動物から血液を採取した。投与１日前、投与後１時間、６時間及び１２時間、その後２、３、４、５、６、７、８、１０、及び１２日目。薬物動態学及び薬力学用の血液試料は全て遠心し、血漿試料を入手した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－７０℃以下で凍結した。全ての試料を分析し、血漿中のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の濃度を免疫アッセイを用いて測定した。半減期などの薬物動態パラメータを計算し、薬力学用にＦＡＣＳによって細胞の免疫表現型を決定した。ＩＬ－２／ＩＬ－２ Ｇｙｒｏｓアッセイプロトコルは以下のとおりである。各試料はデュプリケートで実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要であった。捕捉抗体はヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）であり、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００３１５）ＬＯＱ：０．０８ｎｇ／ｍｌで検出し、イムノアッセイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００（登録商標）と共に使用して行った。
図７は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１とＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）との対比を示す。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は１２時間の半減期を有し、一方、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）は３時間の半減期を有する。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の半減期の延長に伴いＴｒｅｇ活性が増加し、好酸球増加毒性がはるかに低くなる。
実施例８：ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）を上回る半減期の延長を示す
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、単回投与後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の４時間の半減期と比較して約１２時間の半減期を示した。ナイーブＣＤ－１動物に静脈内又は皮下投与し、投与前、投与後１時間、３、７、２４、３１、４８、５５及び７２時間に全ての動物から血液を採取した。血液試料を遠心し、血漿試料を入手した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－８０℃で凍結した。全ての試料を分析し、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の血漿中濃度をイムノアッセイを用いて測定した。ＩＬ－２／ＩＬ－２ Ｇｙｒｏｓアッセイプロトコルは以下のとおりである。各試料はデュプリケートで実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要であった。捕捉抗体はヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）であり、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００３１５）ＬＯＱ：０．０８ｎｇ／ｍｌで検出し、イムノアッセイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００（登録商標）と共に使用して行った。このアッセイは、実施例７の半減期の決定を更に展開したものである。このアッセイの結果は図８に示し、ここでＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の半減期は１２～１４時間であると決定され、これは４時間の半減期を有するＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と対照的である。
実施例９：異種ＧｖＨＤマウスにおいてヒトＴｒｅｇは拡大するが、Ｔエフェクター又はＮＫ細胞は拡大しない
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は異種ＧｖＨＤモデルにおいてＴエフェクター又はＮＫ細胞と比べてＴｒｅｇを選択的に拡大するが、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ではこれはない。ＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ２Ｒγヌルマウス（ＮＳＧ）に健常ドナーからのｈＰＢＭＣを腹腔内注射によって注射した（ＨｅｍａＣａｒｅ Ｃｏｒｐ）。注射２４時間後、動物にＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１ １回／週又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）５回／週を試験期間中にわたって毎週投与した。試験期間中にわたって体重を週２回モニタした。初回投与の２８日後に各群４匹のマウスを回収し、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した。細胞を表面抗体で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。倍数値及び比は各脾臓絶対数から計算した相対数に基づく。図９は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がこのマウスモデルにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりもはるかに良好にＴｒｅｇ細胞を拡大し、またＴｃｏｎ及びＮＫ細胞の望ましくない拡大も低減することを示している。
異種ＧｖＨＤマウスをＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１で治療し、それにヒトＰＢＭＣ（外来細胞）を注射したとき、マウスは治療経過中、正常体重を維持した。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で治療したマウスには重篤な体重減少があった。体重は試験期間中にわたって週２回モニタし、パーセント体重は、登録時点における動物の初期体重を考慮に入れて計算した。この改善は、このモデルにおいてＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がＴｒｅｇ増強に及ぼす効果と関連付けられ、データは図１０にグラフで示す。このデータは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及び他の抗体サイトカイングラフト化タンパク質がより高い治療指数及び安全性の幅を有することを示している。
実施例１０：ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＯＤマウス糖尿病モデルにおいて１型糖尿病の発症を予防する
前糖尿病ＮＯＤ雌に等モルのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週３回）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。試験の継続期間中（初回投与後４ヵ月）、血糖及び体重に関してマウスを週２回モニタした。図１１は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療マウスが低血糖値を維持することを示す。このように、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１で治療したマウスでは顕性１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）に進行しなかった。対照的に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）治療マウスは初めは低血糖値であったが、しかしこれは時間が経つと上昇し、１型糖尿病の症状をもたらした。
実施例１１：前糖尿病ＮＯＤマウスにおける低用量Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比べたＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１はＮＯＤマウスモデルにおいて３用量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較して１用量で優れたＴｒｅｇ拡大、より良好な忍容性及び有害事象なしを示した。前糖尿病ＮＯＤ雌に低用量等モルＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（週３回）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。初回投与後４日で各群４匹のマウスを取り、脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した。細胞を表面抗体：ラット抗マウスＣＤ３－ＢＶ６０５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５６３００４）、ラット抗マウスＣＤ４－パシフィックブルー（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５８１０７）、ラット抗マウスＣＤ８－ＰｅｒＣｐ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３０３６）、ＣＤ４４ ＦＩＴＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５３１３３）ラット抗マウスＣＤ２５－ＡＰＣ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－０２５１）で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）又はＢＤ ＦＡＣＳ ＬＳＲ ＩＩ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。倍数値及び比は各脾臓絶対数から計算した相対数に基づく。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の単回用量の投与は、図１２に示されるとおり、ＮＯＤマウスモデルにおいてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の反復投与よりも大きいＴｒｅｇ拡大を示した。
実施例１２：ＮＯＤマウスモデルにおける効果的用量のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態
１．３ｍｇ／ｋｇ及び０．４３ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の薬物動態を１用量後に４８時間まで血漿中でアッセイした。前糖尿病１０週齢ＮＯＤマウスに２つの異なる濃度のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を腹腔内投与し、投与後１時間、３、７、２４及び４８時間に全ての動物から血液を採取した。血液試料を遠心し、血漿試料を入手した。得られた血漿試料を単一ポリプロピレンチューブに移し、－８０℃で凍結した。Ｇｙｒｏｓプラットフォームに適合させた３つの異なる方法：１）ＩＬ２ベースの捕捉及び検出、２）ＩＬ２ベースの捕捉及びｈＦｃベースの検出、及び３）ｈＦｃベースの捕捉及び検出を用いて各試料を分析することによりＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１血漿濃度を検出した。
各試料はデュプリケートで実行し、デュプリケートの分析の各々に５μＬの１：２０希釈した試料が必要であった。Ｇｙｒｏｓ ＩＬ－２／ＩＬ－２アッセイは捕捉ヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）を使用し、Ａｌｅｘａ ６４７抗ヒトＩＬ－２、クローンＭＱ１－１７Ｈ１２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ５００３１５）で検出する。ＩＬ－２／Ｆｃ検出には、捕捉ヤギ抗ヒトＩＬ－２ビオチン化抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＢＡＦ２０２）を使用し、検出には、Ａｌｅｘａ ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ １０９－６０５－０９８）抗体を使用する。ヒトＦｃ／Ｆｃアッセイには、捕捉ビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１０９－０６５－０９８）を使用した。検出工程にはＡｌｅｘａ ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１０９－６０５－０９８）を使用した。イムノアッセイは全て、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ２００（登録商標）をＧｙｒｏｓ ＣＤ－２００と共に用いて行った。このマウスモデルにおける定量限界（ＬＯＱ）は、図１３Ａに示されるとおり４８時間である。図１３ＢにおいてこれをＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）及びＩＬ２－Ｆｃ融合タンパク質と比較する。このグラフは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１などの抗体サイトカイン（ｃｙｏｋｉｎｅ）グラフト化タンパク質についてＬＯＱがより高いことを示している。
実施例１３：前糖尿病ＮＯＤマウスにおける用量範囲設定
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、同じ等モル濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣＤ８ Ｔエフェクターのいずれよりも優先的な優れたＴｒｅｇ拡大を示した。最も高いＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）群では死亡などの有害事象が認められ、いずれの用量のＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１で治療したマウスにも死亡は見られなかった。
前糖尿病ＮＯＤ雌に低用量等モルＩＬ－２（週３回）及びＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１（１回／週）を腹腔内注射によって投与した。初回投与後８日で各群３匹のマウスを安楽死させ、脾臓を摘出した。脾臓を処理して単一細胞懸濁液を入手し、ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）で洗浄した。血液を採取し、赤血球を赤血球溶解緩衝液で溶解させて、細胞を細胞数及び生存率に関してカウントした。標準プロトコルに基づきＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％ナトリウムアジド）を用いてＦＡＣＳ染色を実施した。細胞を表面抗体で染色し、続いて固定／透過処理し、抗マウス／ラットＦｏｘＰ３染色セットＰＥ（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃７２－５７７５）に従いＦｏｘＰ３に関して染色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。比は、各脾臓から計算した相対細胞数に基づく。このデータは図１４に提供される。この表は抗体サイトカイングラフト化タンパク質の用量範囲フォーマットを提供する。これはまた、投与がより広い範囲にわたって良好に忍容されたことに伴いＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも高い治療指数を有したことも実証する。対照的に、高用量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）の投与ではマウスに罹患及び死亡が生じた。最も高用量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）では、この用量での治療を中断せざるを得ない十分な罹患及び死亡が生じた。
実施例１４：ヒトＰＢＭＣ上でのＳＴＡＴ５シグナル伝達
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、健常ドナーヒトＰＢＭＣ並びに自己免疫性ドナーからのＰＢＭＣにおいてＴｃｏｎ及びＮＫよりも優先的にＴｒｅｇ活性化に選択的であった。ＳＴＡＴ５シグナル伝達効力は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９．Ｈ１によるインビトロ治療後にＴｃｏｎでは低下したが、Ｔｒｅｇでは低下しなかった。健常及び自己免疫性患者からのヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ Ｃｏｒｐ）細胞を無血清試験培地に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を加え、３７℃で２０分間インキュベートした。２０分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、ＳＴＡＴ５抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で製造者の指示に従い染色した。細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（登録商標）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアで分析した。図１５Ａのデータは、ヒト白斑患者から採取したＰＢＭＣのＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療について、Ｔｒｅｇ活性が維持された一方で、ＮＫ、ＣＤ４ Ｔｃｏｎ、又はＣＤ８ Ｔエフェクター細胞の活性化がほとんどなかったことを示している。この結果はまた、ＳＬＥ及び橋本病患者から採取されたＰＢＭＣにおいても観察された（データは示さず）。図１５Ｂは、１型糖尿病（Ｔｙｐｅ １ Ｄｉａｂｅｔｉｅｓ）（Ｔ１Ｄ）のヒト患者から採取してＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１及びＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）で治療したＰＢＭＣにおいて、ＮＫ細胞、ＣＤ８ Ｔエフェクター細胞又はＣＤ４ Ｔｃｏｎ細胞上のｐＳＴＡＴ５活性が大きく低下していたことを示している。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１治療が正常ＰＢＭＣで有効であったとともにＴ１Ｄ患者から採取されたＰＢＭＣで良好に忍容されたことに伴い、これは、患者がインスリン療法を受けている場合であっても、抗体サイトカインタンパク質がＴ１Ｄの治療において有用となるであろうことを示している。これは、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１がこれらの免疫関連障害を有する患者で良好に忍容されるであろうこと、及びこれらの免疫関連障害への対処において有効であることを示している。
実施例１５：抗体サイトカイングラフト化タンパク質の結合
ムテインを含むＩＬ２配列（配列番号４又は６）を免疫グロブリン鎖足場のＣＤＲループに挿入した。抗体サイトカイングラフト化タンパク質は、臨床セッティングで利用されている種々の既知の免疫グロブリン配列並びに生殖細胞系列抗体配列を使用して調製した。使用した抗体のうちの１つはその抗原としてＲＳＶを有する。ＩＬ２をこの抗体のＣＤＲにグラフト化するとＲＳＶへの結合が低下又は消失したかどうかを決定するため、ＰＢＳ又は炭酸塩緩衝液のいずれかにおいてＲＳＶタンパク質に関するＥＬＩＳＡアッセイを行った。図１６に示すとおり、これはＩＬ２グラフト化にどのＣＤＲを選択したかに影響を受けるように見える。例えば、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は、元の非グラフト化（非修飾）抗体と同様のＲＳＶ結合を有する。対照的に、ＩＬ２をＣＤＲ３の軽鎖（ＣＤＲ－Ｌ３）又はＣＤＲ－Ｈ３にグラフト化すると、結合が低下する。予想どおり、ＩＬ２を無関係の抗体（Ｘｏｌａｉｒ）にグラフト化すると、結合は生じない。これは、抗体サイトカイングラフト化タンパク質が抗体足場の元の標的に対する結合を保持し得ること、又はこの結合が低下し得ることを実証している。
実施例１６：非ヒト霊長類におけるＴｒｅｇ拡大
ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１を２用量群（３匹の雄／群）間で交互に４週間の無投与間隔を伴い与える２つの単回漸増皮下投与でカニクイザルに投与した。この後、緩衝液又は５ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１の６回の皮下用量（隔日で２週間）を受けた２群（３匹の雄／群）における２週間複数回投与相が続いた。「単回投与相」（２９日の間隔を空けて２用量が投与された）からのフローサイトメトリー（免疫表現型タイピング）によって評価したリンパ球集団の変化を図１７に示す。１２５及び３７５μｇ／ｋｇ用量では、Ｔｃｏｎ又はＮＫ細胞に対する明らかな効果は何らなしに、Ｔｒｅｇ絶対数の３～４倍及び最大５．５倍の増加が観察された。最大のＴｒｅｇ拡大は４日目に見られたとともに、Ｔｒｅｇ数は１０日目までにほぼベースラインに戻る。ＩｇＧ．ＩＬ２Ｄ４９Ａ．Ｈ１は安全で且つ良好に忍容され、死亡、臨床徴候、又は体重、摂食量、サイトカインレベル若しくは臨床病理の変化はなかった。更に、この試験において最高２．４ｍｇ／ｋｇの単回投与後又は２週間にわたる５ｍｇ／ｋｇの隔日の複数回投与後に心血管効果（ＥＣＧ又は血圧）は観察されなかった。血液漏出の徴候又は他のＣＶ関連所見はなかった。
実施例１７：抗薬物抗体効果のリスク
ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的プロファイルに対する抗薬物抗体効果のリスクを決定するため、用量反応においてＦｃ架橋結合抗体の存在下でシグナル伝達アッセイを行った。
ヒトＰＢＭＣをＲＰＭＩ完全培地に３×１０６細胞／ｍｌで再懸濁し、３×１０５細胞／ウェル（１００ｕｌ）でプレーティングして２時間静置した。別個の９６ウェルプレートに、最高濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ、ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ及びＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ＋モル過剰のヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ、ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ単独（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ カタログ番号２０４２－０１、ロット番号Ｊ１７１５－ＰＩ７７）、及び培地中２×最終濃度で滴定曲線を作成した。全ての条件について、最高濃度のＩＬ２当量は２００ｎＭであった。最高濃度を調製し、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ及びＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａについて、最高濃度の下に１０ｐｔ希釈曲線を（１：２希釈物を間に入れて）作成した。加えて、２００ｎＭ（ＩＬ－２当量）のＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ最高濃度及びモル濃度に基づき０．５×、１×、２．５×、５×及び１０×ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの抗ヒトＩｇで滴定曲線を作成した。各条件について最高濃度の下に１０ｐｔ、１：１０希釈曲線を作成した。抗ヒトＩｇＧ＋ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ滴定を調製し、室温で２０分間インキュベートした後、ＰＢＭＣに加えた。
調製した条件（又は媒体単独）を１００ｕｌ／ウェルの最終容積となるようにＰＢＭＣに加えた。ＰＢＭＣを３７℃、５％ＣＯ２で２５分間刺激した。インキュベーション後、細胞を速やかに固定し、バーコード付加の処理をし、表面に関して染色し、透過処理し、ｐＳＴＡＴ５及びＦｏｘｐ３に関して染色した。細胞をＣｙｔｏｆで読み取り、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。漸増濃度の架橋剤抗ヒトＩｇＧ抗体はＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａの選択的活性に干渉しない（図１８）。
実施例１８：種々の自己免疫性患者において維持された選択的シグナル伝達
自己免疫性患者からのヒトＰＢＭＣ（Ｈｅｍａｃａｒｅ Ｃｏｒｐ）細胞を無血清試験培地に静置し、各ウェルに加えた。別個のプレートに、最高濃度のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ又はＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａのいずれかを作り、培地中４×最終濃度で滴定曲線を作成した。最高濃度（２００ｎＭのＩＬ－２当量）を調製し、最高濃度のＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａ又は天然ヒトＩＬ－２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）のいずれかの下に４ｐｔ希釈曲線（又はＡＤについて１０ｐｔ）を作成した。作成した条件をウェルに加え、３７℃で２５分間インキュベートした。２５分後、細胞を固定し、表面マーカーで染色し、透過処理し、及び細胞内抗体（ｐＳＴＡＴ５、Ｆｏｘｐ３）で染色して、Ｃｙｔｏｆで（抗体は全てＦｌｕｉｄｉｇｍから）製造者の指示に従い取得した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いてデータを分析した。
ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２－Ｈ１－Ｄ４９Ａは、１型糖尿病、ＳＬＥ、白斑及びアトピー性皮膚炎を含めた幾つかの試験した自己免疫性適応疾患においてＣＤ４ Ｔｃｏｎ及びＣＤ８ Ｔｅｆｆよりも優先的にＴｒｅｇに選択的であった（図１９）。インビトロでのＩＬ－２Ｒシグナル伝達効力はＴｃｏｎ及びＴｅｆｆで低下したが、Ｔｒｅｇでは低下しなかった。
実施例１９：ヒトＰＢＭＣにおけるＴエフェクター細胞よりも優先的なＴｒｅｇにおけるシグナル伝達選択性
ＰＢＭＣ細胞をＲＰＭＩ培地に静置し、各ウェルに加えた。ウェルにＩＬ－２グラフトＤ４９Ａ又は天然ヒトＩＬ－２のいずれかを加え、３７℃で２５分間インキュベートした。２５分後、細胞を１．６％ホルムアルデヒドで固定し、洗浄して、表面マーカーで染色した。室温で３０分後、試料を洗浄し、再懸濁した細胞ペレットを－２０℃メタノールで透過処理し、洗浄して、ＳＴＡＴ５及びＤＮＡインターカレーターで染色した。細胞をＣｙｔｏｆにかけ、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
ＧＦＴＸ３ｂ＿ＩＬ－２Ｄ４９Ａは、等モル濃度のＩＬ－２でＴエフェクターよりも優先的なＴｒｅｇ上でのシグナル伝達に関してＰｒｏｌｅｕｋｉｎと比べてより高い特異性を示した（図２０）。
本明細書に記載される例及び実施形態は例示を目的とし、それらを踏まえた様々な修正又は変更が当業者に提案され得るとともに本願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範囲に包含されるべきであることが理解される。本明細書に引用される刊行物、配列受託番号、特許、及び特許出願は全て、本明細書によってあらゆる目的から全体として参照により援用される。

以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［発明１］
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
（ｃ）ＶＨ又はＶＬのＣＤＲにグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２］
前記ＩＬ２分子が重鎖ＣＤＲにグラフト化されている、発明１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３］
前記重鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）から選択される、発明２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明４］
前記ＩＬ２分子がＨＣＤＲ１にグラフト化されている、発明３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明５］
前記ＩＬ２分子が軽鎖ＣＤＲにグラフト化されている、発明１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明６］
前記軽鎖ＣＤＲが、相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）から選択される、発明５に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明７］
前記ＩＬ２分子が、低親和性ＩＬ２受容体に対する前記ＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含む、発明１～６のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明８］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、発明１～７のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明９］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、発明１～８のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１０］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有する、発明１～９のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１１］
前記ＩＬ２分子が配列番号４からなる、発明１～１０のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１２］
前記ＩＬ２分子が配列番号６からなる、発明１～１０のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１３］
ＩｇＧクラス抗体重鎖を更に含む、発明１～１２のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１４］
前記ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、発明１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１５］
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子によって１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する、発明１～１４のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１６］
標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子の存在下で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％保持される、発明１～１５のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１７］
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ２分子の結合特異性と異なる、発明１～１６のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１８］
前記ＣＤＲの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、発明１～１７のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明１９］
前記非ヒト抗原がウイルスである、発明１８に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２０］
前記ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、発明１９に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２１］
前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、発明２０に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２２］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質の前記抗体足場部分がヒト化又はヒトである、発明１～２１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２３］
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号６９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号８２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８３のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｖ）（ａ）配列番号９５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号１０８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０９のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１１０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２４］
（ｉ）配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号４６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号５９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号７２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号８５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；又は
（ｉｖ）配列番号９８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号１１１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２５］
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を更に含む、発明１～２４のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２６］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、発明２５に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２７］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、発明２６に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２８］
配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明２９］
配列番号４３のＨＣＤＲ１、配列番号４４のＨＣＤＲ２、配列番号４５のＨＣＤＲ３、配列番号５６のＬＣＤＲ１、配列番号５７のＬＣＤＲ２、配列番号５８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３０］
配列番号６９のＨＣＤＲ１、配列番号７０のＨＣＤＲ２、配列番号７１のＨＣＤＲ３、配列番号８２のＬＣＤＲ１、配列番号８３のＬＣＤＲ２、配列番号８４のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３１］
配列番号９５のＨＣＤＲ１、配列番号９６のＨＣＤＲ２、配列番号９７のＨＣＤＲ３、配列番号１０８のＬＣＤＲ１、配列番号１０９のＬＣＤＲ２、配列番号１１０のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
［発明３２］
（ｉ）配列番号２３の重鎖及び配列番号３６の軽鎖；
（ｉｉ）配列番号４９の重鎖及び配列番号６２の軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７５の重鎖及び配列番号８８の軽鎖；又は
（ｉｖ）配列番号１０１の重鎖及び配列番号１１４の軽鎖
を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
［発明３３］
抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞であって、前記タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチド、及び任意選択で分泌シグナルをコードする発明３２に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
［発明３４］
哺乳類細胞株である、発明３３に記載の組換え宿主細胞。
［発明３５］
前記哺乳類細胞株がＣＨＯ細胞株である、発明３４に記載の組換え宿主細胞。
［発明３６］
発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
［発明３７］
それを必要としている個体の免疫関連障害の治療方法であって、発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は発明３６に記載の医薬組成物の治療有効量を前記個体に投与することを含む方法。
［発明３８］
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、発明３７に記載の方法。
［発明３９］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は医薬組成物が別の治療剤と併用して投与される、発明３７又は３８に記載の方法。
［発明４０］
前記治療剤が別の抗体サイトカイングラフト化タンパク質である、発明３９に記載の方法。
［発明４１］
それを必要としている患者のＴｒｅｇ細胞を拡大する方法であって、発明１～３１のいずれか一つに記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質又は発明３６に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む方法。
［発明４２］
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＣＤ８ Ｔエフェクター細胞が拡大されない、発明４１に記載の方法。
［発明４３］
前記Ｔｒｅｇ細胞が拡大され、且つＮＫ細胞が拡大されない、発明４１又は４２に記載の方法。
［発明４４］
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉｉ）（ａ）配列番号４３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び（ｄ）配列番号５６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５７のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む免疫関連障害の治療における抗体サイトカイングラフト化タンパク質の使用。
［発明４５］
前記免疫関連障害が、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、白斑、慢性移植片対宿主病（ｃＧｖＨＤ）、急性移植片対宿主病予防（ｐＧｖＨＤ）、ＨＩＶ誘発性脈管炎、円形脱毛症、全身性硬化症モルフェア、及び原発性抗リン脂質症候群からなる群から選択される、発明４４に記載の使用。
［発明４６］
前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が別の治療剤と併用して投与される、発明４４又は４５に記載の使用。

Claims (27)

  1. （ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
    （ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び
    （ｃ）前記ＨＣＤＲ１にグラフト化されたインターロイキン２（ＩＬ２）分子
    を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、
    前記ＩＬ２分子が配列番号４からなる、
    前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  2. 前記ＩＬ２分子が、低親和性ＩＬ２受容体に対する前記ＩＬ２分子の親和性を低下させる突然変異を含む、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  3. 前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＴｒｅｇ細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも大きい、請求項１又は２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  4. 前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質によるＣＤ８ Ｔエフェクター細胞増殖の刺激が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも小さい、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  5. 前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質が天然ＩＬ２又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）よりも長い半減期を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  6. ＩｇＧクラス抗体重鎖を更に含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  7. 前記ＩｇＧクラス抗体重鎖が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４から選択される、請求項６に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  8. 標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子によって１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％低下する、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  9. 標的に対する前記ＣＤＲの結合特異性が前記グラフト化されたＩＬ２分子の存在下で１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％保持される、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  10. 前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ２分子の結合特異性と異なる、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  11. 前記ＣＤＲの結合特異性が非ヒト抗原に対するものである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  12. 前記非ヒト抗原がウイルスである、請求項１１に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  13. 前記ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、請求項１２に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  14. 前記ＲＳＶが、ＲＳＶサブグループＡ及びＲＳＶサブグループＢから選択される、請求項１３に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  15. 前記抗体サイトカイングラフト化タンパク質の前記抗体足場部分がヒト化又はヒトである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  16. （ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域及び（ｄ）配列番号３０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３１のＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  17. 配列番号２０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号３３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  18. 低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域を更に含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  19. 前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異を含む、請求項１８に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  20. 前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの１つ以上から選択される突然変異の組み合わせを含む、請求項１９に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  21. 配列番号１７のＨＣＤＲ１、配列番号１８のＨＣＤＲ２、配列番号１９のＨＣＤＲ３、配列番号３０のＬＣＤＲ１、配列番号３１のＬＣＤＲ２、配列番号３２のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域を含む抗体サイトカイングラフト化タンパク質であって、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）と比較したときＮＫ細胞の拡大に対する刺激が低い抗体サイトカイングラフト化タンパク質。
  22. 配列番号２２を含む重鎖、及び配列番号３５を含む軽鎖を含む、抗体サイトカイングラ フト化タンパク質。
  23. 配列番号２３の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び配列番号３６の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む、抗体サイトカイングラフト化タンパク質をコードする単離核酸。
  24. 抗体サイトカイングラフト化タンパク質の産生に好適な組換え宿主細胞であって、前記タンパク質の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする請求項２３に記載の核酸を含む、組換え宿主細胞。
  25. 哺乳類細胞株である、請求項２４に記載の組換え宿主細胞。
  26. 前記哺乳類細胞株がＣＨＯ細胞株である、請求項２５に記載の組換え宿主細胞。
  27. 請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフト化タンパク質と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
JP2019564885A 2017-05-24 2018-05-22 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法 Active JP7093794B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2022098525A JP2022130504A (ja) 2017-05-24 2022-06-20 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762510514P 2017-05-24 2017-05-24
US62/510,514 2017-05-24
PCT/IB2018/053622 WO2018215935A1 (en) 2017-05-24 2018-05-22 Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use for immune related disorders

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022098525A Division JP2022130504A (ja) 2017-05-24 2022-06-20 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2020520667A JP2020520667A (ja) 2020-07-16
JP7093794B2 true JP7093794B2 (ja) 2022-06-30

Family

ID=62685010

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019564885A Active JP7093794B2 (ja) 2017-05-24 2018-05-22 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
JP2022098525A Pending JP2022130504A (ja) 2017-05-24 2022-06-20 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022098525A Pending JP2022130504A (ja) 2017-05-24 2022-06-20 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法

Country Status (25)

Country Link
US (3) US11122825B2 (ja)
EP (1) EP3630812A1 (ja)
JP (2) JP7093794B2 (ja)
KR (1) KR102381237B1 (ja)
CN (1) CN110650973B (ja)
AR (1) AR112239A1 (ja)
AU (2) AU2018274215B2 (ja)
BR (1) BR112019024544A2 (ja)
CA (1) CA3063527A1 (ja)
CL (1) CL2019003392A1 (ja)
CO (1) CO2019013000A2 (ja)
CR (1) CR20190535A (ja)
CU (1) CU20190093A7 (ja)
EA (1) EA201992776A1 (ja)
EC (1) ECSP19083343A (ja)
IL (1) IL270772B2 (ja)
JO (1) JOP20190271A1 (ja)
MA (1) MA50433A (ja)
MY (1) MY200872A (ja)
PE (1) PE20200302A1 (ja)
PH (1) PH12019502617A1 (ja)
TW (1) TWI825020B (ja)
UY (1) UY37738A (ja)
WO (1) WO2018215935A1 (ja)
ZA (1) ZA201907481B (ja)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110520436A (zh) 2017-03-15 2019-11-29 潘迪恩治疗公司 靶向免疫耐受性
EP3630163A4 (en) 2017-05-24 2021-06-09 Pandion Operations, Inc. Targeted immunotolerance
USRE50550E1 (en) 2017-12-06 2025-08-26 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
MX2021014178A (es) 2019-05-20 2022-01-04 Pandion Operations Inc Inmunotolerancia dirigida a la molecula de adhesion celular de adresina vascular de mucosas (madcam).
EP4107187A4 (en) 2020-02-21 2024-07-03 Pandion Operations, Inc. TISSUE-TARGETED IMMUNOTOLERANCE WITH A CD39 EFFECTOR

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002515247A (ja) 1998-05-15 2002-05-28 バイエル・コーポレーシヨン Ｉｌ−２の選択的アゴニスト及びアンタゴニスト
JP2006518585A (ja) 2002-12-02 2006-08-17 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 合理的に設計された抗体
JP2009102369A (ja) 1999-04-27 2009-05-14 Nevagen Llc 体細胞導入遺伝子免疫および関連方法
JP2015504896A (ja) 2012-01-09 2015-02-16 ザ・スクリップス・リサーチ・インスティテュート 超長相補性決定領域及びその使用
JP2016020344A (ja) 2000-12-12 2016-02-04 メディミューン，エルエルシー 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
DK0517895T3 (da) 1990-12-14 1997-04-07 Univ California Kimæriske kæder til receptorforbundne signaltransduktionsveje
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
HUT76369A (en) 1994-07-29 1997-08-28 Smithkline Beecham Corp Novel soluble protein compounds
CA2205572A1 (en) 1994-12-12 1996-06-20 Beth Israel Hospital Association Chimeric cytokines and uses thereof
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
AU728657B2 (en) 1996-03-18 2001-01-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
JP2002512624A (ja) 1997-05-21 2002-04-23 バイオベーション リミテッド 非免疫原性タンパク質の製造方法
EP1060194A1 (en) 1998-02-25 2000-12-20 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
US7279462B1 (en) 1998-04-27 2007-10-09 Nevagen Llc Somatic transgene immunization and related methods
MX353234B (es) 1999-01-15 2018-01-08 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con función efectora alterada.
DK1176195T3 (da) 1999-04-09 2013-06-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle
WO2002044197A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Fish Eleanor N Cytokine receptor binding peptides
US20040253242A1 (en) 2000-12-05 2004-12-16 Bowdish Katherine S. Rationally designed antibodies
ES2258558T3 (es) 2000-12-05 2006-09-01 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos diseñados racionalmente.
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
BR0214650A (pt) * 2001-12-04 2005-05-03 Merck Patent Gmbh Imunocitoquinas com seletividade modulada
US8603472B2 (en) * 2002-04-09 2013-12-10 The Curators Of The University Of Missouri Methods and compositions reversing pre-diabetes using fusion proteins comprising a GAD peptide
US7939641B2 (en) 2002-04-09 2011-05-10 The Scripps Research Institute Motif-grafted hybrid polypeptides and uses thereof
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20050008625A1 (en) 2003-02-13 2005-01-13 Kalobios, Inc. Antibody affinity engineering by serial epitope-guided complementarity replacement
WO2004108078A2 (en) 2003-06-02 2004-12-16 Alexion Pharmaceuticals Inc. Rationally designed antibodies
US7981843B2 (en) 2004-01-20 2011-07-19 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Antibody specificity transfer using minimal essential binding determinants
CA2585891A1 (en) 2004-10-29 2006-05-11 Medimmune, Inc. Methods of preventing and treating rsv infections and related conditions
WO2006055778A2 (en) 2004-11-16 2006-05-26 Kalobios, Inc. Immunoglobulin variable region cassette exchange
GB0502358D0 (en) 2005-02-04 2005-03-16 Novartis Ag Organic compounds
BRPI0821906B1 (pt) 2008-01-03 2022-06-07 The Scripps Research Institute Anticorpo isolado de comprimento total, seu uso, polinucleotideo, vetor, e célula hospedeira
CN102428105B (zh) 2009-02-24 2015-09-30 阿雷克森制药公司 含有治疗性tpo/epo模拟肽的抗体
CN102573922B (zh) 2009-08-17 2015-08-05 罗切格利卡特公司 靶向性免疫缀合物
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
WO2012045334A1 (en) 2010-10-05 2012-04-12 Synthon Bv Biologically active il-10 fusion proteins
MX340671B (es) 2011-02-10 2016-07-20 Roche Glycart Ag Polipeptidos interleuquina- 2 mutantes.
AU2012215572A1 (en) 2011-02-10 2013-05-02 Roche Glycart Ag Improved immunotherapy
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
CN104411717A (zh) 2012-01-09 2015-03-11 斯克利普斯研究所 具有超长cdr3s的人源化抗体
EP3434695B1 (en) 2012-08-07 2020-12-02 Roche Glycart AG Improved immunotherapy
JP2015530983A (ja) 2012-08-08 2015-10-29 ロシュ グリクアート アーゲー インターロイキン−１０融合タンパク質及びその使用
US20140044675A1 (en) 2012-08-10 2014-02-13 Roche Glycart Ag Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
EP2943512A4 (en) 2013-01-11 2016-06-01 California Inst Biomedical Res BOVINE FUSION ANTIBODY
JP2016510766A (ja) 2013-03-08 2016-04-11 ザ キュレイターズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミズーリ １型糖尿病の処置及び／又は予防のための方法及び組成物
US9546203B2 (en) 2013-03-14 2017-01-17 Amgen Inc. Aglycosylated Fc-containing polypeptides with cysteine substitutions
EP3019531A4 (en) 2013-07-11 2017-03-15 The California Institute for Biomedical Research Immunoglobulin fusion proteins and compositions thereof
EP3022224A2 (en) 2013-07-18 2016-05-25 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
AU2014290361B2 (en) 2013-07-18 2019-04-18 Taurus Biosciences, Llc Humanized antibodies with ultralong complementarity determining regions
WO2015118016A1 (en) 2014-02-06 2015-08-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
SI3186283T1 (sl) 2014-08-29 2020-04-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Kombinirana terapija z imunocitokini različice IL-2, usmerjenimi proti tumorju in protitelesi proti humanemu PD-L1
KR102213790B1 (ko) 2015-12-04 2021-02-09 노파르티스 아게 항체 시토카인 그라프트된 조성물 및 면역조절을 위한 사용 방법
US20170204154A1 (en) 2016-01-20 2017-07-20 Delinia, Inc. Molecules that selectively activate regulatory t cells for the treatment of autoimmune diseases

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002515247A (ja) 1998-05-15 2002-05-28 バイエル・コーポレーシヨン Ｉｌ−２の選択的アゴニスト及びアンタゴニスト
JP2009102369A (ja) 1999-04-27 2009-05-14 Nevagen Llc 体細胞導入遺伝子免疫および関連方法
JP2016020344A (ja) 2000-12-12 2016-02-04 メディミューン，エルエルシー 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途
JP2006518585A (ja) 2002-12-02 2006-08-17 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 合理的に設計された抗体
JP2015504896A (ja) 2012-01-09 2015-02-16 ザ・スクリップス・リサーチ・インスティテュート 超長相補性決定領域及びその使用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Arenas-Ramirez N. et al.，Interleukin-2: Biology, Design and Application，Trends in Immunology，2015年，vol. 36(12)，pp. 763-777
Laurent J. et al.，T-cell activation by treatment of cancer patients with EMD 521873 (Selectikine), an IL-2/anti-DNA fusion protein，Journal of Translational Medicine，2013年，vol. 11，article no. 5 (pp. 1-12)
Liu T. et al.，Functional human antibody CDR fusions as long-acting therapeutic endocrine agonists，Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America，2015年，vol. 112(5)，pp. 1356-1361
Neri D. et al.，Immunocytokines for cancer treatment: past, present and future，Current Opinion in Immunology，2016年，vol. 40，pp. 96-102

Also Published As

Publication number Publication date
KR20200008614A (ko) 2020-01-28
IL270772B1 (en) 2023-04-01
ECSP19083343A (es) 2019-11-30
US20200113974A1 (en) 2020-04-16
RU2019142660A (ru) 2021-06-24
CL2019003392A1 (es) 2020-03-13
AU2018274215A1 (en) 2019-12-12
CO2019013000A2 (es) 2020-01-17
AU2022200528A1 (en) 2022-02-17
CA3063527A1 (en) 2018-11-29
TW201900222A (zh) 2019-01-01
JOP20190271A1 (ar) 2019-11-21
PH12019502617A1 (en) 2020-06-08
JP2020520667A (ja) 2020-07-16
BR112019024544A2 (pt) 2020-06-23
TWI825020B (zh) 2023-12-11
AR112239A1 (es) 2019-10-09
IL270772B2 (en) 2023-08-01
ZA201907481B (en) 2023-02-22
US20220039441A1 (en) 2022-02-10
EA201992776A1 (ru) 2020-10-12
EP3630812A1 (en) 2020-04-08
WO2018215935A1 (en) 2018-11-29
US11122825B2 (en) 2021-09-21
CN110650973B (zh) 2023-02-24
UY37738A (es) 2019-01-02
US20220346415A1 (en) 2022-11-03
IL270772A (en) 2020-01-30
KR102381237B1 (ko) 2022-04-01
CN110650973A (zh) 2020-01-03
MY200872A (en) 2024-01-20
CU20190093A7 (es) 2021-03-11
AU2018274215B2 (en) 2021-10-28
US11930837B2 (en) 2024-03-19
RU2019142660A3 (ja) 2021-10-05
MA50433A (fr) 2020-09-02
JP2022130504A (ja) 2022-09-06
CR20190535A (es) 2020-01-15
PE20200302A1 (es) 2020-02-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7093794B2 (ja) 免疫関連障害のための抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
JP6794448B2 (ja) 抗体サイトカイングラフト組成物および免疫調節のための使用方法
US20220002412A1 (en) Humanized Anti-PD-1 Antibody and The Use Thereof
JP2021525080A (ja) ＧＵＣＹ２ｃに特異的な抗体及びその使用
CN113454119B (zh) 抗btla抗体
JP7711079B2 (ja) Ｉｌ４ｒに結合する抗体とその使用
CN114907479B (zh) 抗cd112r抗体及其用途
EP3842071A1 (en) Use of tim-3 antibody in preparation of medicines for treating tumors
JP2023527583A (ja) Ｌａｇ３に結合する抗体およびその使用
CA3135032A1 (en) Anti-alpha beta tcr binding polypeptides with reduced fragmentation
CN111094339A (zh) 抗pd-1抗体和抗lag-3抗体联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途
WO2019242619A1 (zh) 全人源的抗lag-3抗体及其应用
JP7278623B2 (ja) 抗ｃｄ２７抗体およびその使用
TW202307004A (zh) 抗ｃｅａ抗體及使用方法
CN115466327A (zh) 结合tigit的抗体及其用途
US20240269276A1 (en) Specific binding protein targeting pd-l1 and cd73
RU2786730C2 (ru) Белки на основе антитела с привитым цитокином и способы их применения при иммунных нарушениях
TWI894360B (zh) 抗tigit抗體及雙抗體和它們的應用
CN110300763A (zh) 用于治疗白癜风的抗人cxcr3抗体
TW202305007A (zh) 靶向pd-l1和cd73的特異性結合蛋白
WO2022095698A1 (zh) 抗人cd38抗体及其制备方法和用途
HK40089099A (en) Anti-tigit antibody and double antibody and their application

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20191209

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20191209

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20201106

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20201117

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20210127

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210517

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20210928

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20211213

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220225

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20220607

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20220620

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7093794

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150