JP6875619B2 - 多血小板血漿の保存方法 - Google Patents
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Description
本発明は、多血小板血漿の保存方法に関する。
多血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ：以下「ＰＲＰ」と略称する）は、血液中に含まれる３種類の血球（赤血球、白血球、血小板）のうちの血小板のみを高濃度に濃縮させたものであり、細胞の再生を促す種々の成分が含まれていることから、骨、血管、皮膚などの再生促進機能を有することが知られており、難治性皮膚潰瘍などの治療に用いられている。ＰＲＰの調製は、例えば、ＰＲＰを適用する患者から採血した血液を、採血に用いたシリンジのままやシリンジからスピッツに移し替えて遠心分離することで行われ、ＰＲＰを調製する時とＰＲＰを患者に適用する時が同じ場合、シリンジ内やスピッツ内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取って患者に適用する。しかしながら、ＰＲＰを調製する時とＰＲＰを患者に適用する時が異なる場合、ＰＲＰを調製する時からＰＲＰを患者に適用する時まで、ＰＲＰをいかに保存するかという問題への対処が必要となる。現在のところ、ＰＲＰの保存は、シリンジ内やスピッツ内からシリンジで抜き取ったＰＲＰをバイアル瓶に移し替え、冷凍保存することで行われており（例えば非特許文献１）、ＰＲＰを患者に適用する際には、バイアル瓶内のＰＲＰを例えば自然解凍した後にシリンジで抜き取ることが行われているが、こうした操作は手間がかかるものであり、また、操作が適切に行われなかった場合には雑菌によってＰＲＰが汚染されるリスクを伴うものである。さらに、ＰＲＰをシリンジで抜き取った後のバイアル瓶内に少なからず残ってしまったＰＲＰは、患者に適用されずに廃棄されている。
Ｇｉｏｖａｎｎｉ Ｃｒｏｖｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０（２００４），１４５−１５１
そこで本発明は、ＰＲＰを適用する患者の血液から調製したＰＲＰを、手間をかけず、また、雑菌による汚染のリスクを回避し、かつ、患者に適用する際に無駄にすることなく、保存する方法を提供することを目的とする。
上記の点に鑑みてなされた本発明のＰＲＰの保存方法は、請求項１記載の通り、ＰＲＰを適用する患者からクエン酸ナトリウム入りのシリンジに採血した血液を遠心分離し、遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま、ＰＲＰを−４〜−２０℃で予備凍結させてから、凍結したＰＲＰを−３０〜−７０℃で冷却しながら凍結乾燥処理して保存することを特徴とする。
また、本発明のＰＲＰ充填シリンジ製剤は、請求項２記載の通り、ＰＲＰを適用する患者からクエン酸ナトリウム入りのシリンジに採血した血液を遠心分離し、遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま、ＰＲＰを−４〜−２０℃で予備凍結させてから、凍結したＰＲＰを−３０〜−７０℃で冷却しながら凍結乾燥処理して保存することで製造されてなることを特徴とする。
また、本発明のＰＲＰ充填シリンジ製剤は、請求項２記載の通り、ＰＲＰを適用する患者からクエン酸ナトリウム入りのシリンジに採血した血液を遠心分離し、遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま、ＰＲＰを−４〜−２０℃で予備凍結させてから、凍結したＰＲＰを−３０〜−７０℃で冷却しながら凍結乾燥処理して保存することで製造されてなることを特徴とする。
本発明によれば、ＰＲＰを適用する患者の血液から調製したＰＲＰを、手間をかけず、また、雑菌による汚染のリスクを回避し、かつ、患者に適用する際に無駄にすることなく、保存する方法を提供することができる。
本発明のＰＲＰの保存方法は、ＰＲＰを適用する患者から採血した血液を遠心分離し、遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま冷凍保存または凍結乾燥保存することを特徴とするものである。
本発明において、ＰＲＰを適用する患者から採血した血液を遠心分離する方法や、遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取る方法は、自体公知の方法であってよく、例えば、ＰＲＰを適用する患者から採血した血液を、採血に用いたシリンジのままやシリンジからスピッツに移し替えて遠心分離し、シリンジ内やスピッツ内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取ればよい。
本発明の特徴は、遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰをシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま冷凍保存または凍結乾燥保存することにある。こうすることで、これまで行われていたＰＲＰのバイアル瓶への移し替えやバイアル瓶からの抜き取りといった操作の手間を省くことができるとともに、こうした操作が適切に行われなかった場合の雑菌によるＰＲＰの汚染のリスクを回避することができ、かつ、ＰＲＰを無駄なく患者に適用することができる。
ＰＲＰを充填したシリンジの冷凍保存は、シリンジの先端をルアーキャップなどで密封し、−１８℃〜−１９６℃で行えばよい。なお、ＰＲＰを充填したシリンジは、シリンジの先端をルアーキャップなどで密封した後、真空パックに封入してから冷凍保存してもよい。こうして冷凍保存したＰＲＰ充填シリンジは、ＰＲＰが安定に保存されたものであり、ＰＲＰを患者に適用する時に例えば自然解凍し、シリンジからＰＲＰを患者に適用することができる。
シリンジに充填したＰＲＰの凍結乾燥は、シリンジの先端に濾過滅菌フィルタを取り付けた後、ＰＲＰに対してできるだけ温和な条件、例えば−４〜−２０℃でＰＲＰを３〜２４時間予備凍結させてから、シリンジを凍結乾燥機の処理室に収容し、例えば６０ｍＴｏｒｒ以下の圧力に５分以内に到達させて１０〜２４時間凍結乾燥処理することで行うことが望ましい（ＰＲＰが雑菌によって汚染されることもない）。なお、−４〜−２０℃といった高温の氷点下でＰＲＰを予備凍結させてから凍結乾燥処理すると、シリンジの内部はＰＲＰに含まれる水分が昇華するためのＰＲＰの表面積が非常に小さいため、凍結乾燥機の処理室環境に暴露される表面から離れた深部のＰＲＰが途中で溶けてしまったりすることで、ＰＲＰの全体を均一に凍結乾燥処理できないといった事態が想定される。従って、このような事態を防ぐため、凍結乾燥装置の処理室に収容したシリンジの周囲に例えば−３０〜−７０℃で凍結させた氷を配置し、凍結したＰＲＰを冷却しながら凍結乾燥処理することが望ましい。ＰＲＰの凍結乾燥は、先端に濾過滅菌フィルタを取り付けたＰＲＰを充填したシリンジをガス透過性の滅菌バックに封入してから行ってもよい。こうして充填されたＰＲＰが凍結乾燥されたシリンジは、先端に取り付けた濾過滅菌フィルタをルアーキャップなどに交換して先端を密封することで、室温にて保存することができ、注射用蒸留水などの溶媒をシリンジの内部に吸引させてＰＲＰを懸濁すれば、シリンジからＰＲＰを患者に適用することができる。
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
実施例１：
抗凝固剤として、４ｍｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を５０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、難治性皮膚潰瘍患者から５６ｍｌの採血を行った後、クリーンルーム内のクリーンベンチでスピッツを用いて２回遠心分離法を実施した（１回目：１０００Ｇで１０分間、２回目：７００Ｇで８分間）。２回目の遠心分離に用いたスピッツ内で分離した６ｍｌのＰＲＰを、４本の２．５ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に１．５ｍｌずつ抜き取り、それぞれのシリンジの先端をルアーキャップ（テルモ株式会社）で密封した。それぞれのＰＲＰを充填封入したシリンジを、２０×１３ｃｍの真空パック（株式会社シー・シー・ピー）に封入してから、市販の超低温冷凍庫にて−８０℃で冷凍保存し、ＰＲＰ充填シリンジ製剤を得た。こうして得られた４本のＰＲＰ充填シリンジ製剤は、患者の治療スケジュールに合わせて、７〜１０日間毎に合計４回、治療前に自然解凍し、シリンジからＰＲＰを余すことなく患者に適用（創傷部に塗布）した。
抗凝固剤として、４ｍｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を５０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、難治性皮膚潰瘍患者から５６ｍｌの採血を行った後、クリーンルーム内のクリーンベンチでスピッツを用いて２回遠心分離法を実施した（１回目：１０００Ｇで１０分間、２回目：７００Ｇで８分間）。２回目の遠心分離に用いたスピッツ内で分離した６ｍｌのＰＲＰを、４本の２．５ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に１．５ｍｌずつ抜き取り、それぞれのシリンジの先端をルアーキャップ（テルモ株式会社）で密封した。それぞれのＰＲＰを充填封入したシリンジを、２０×１３ｃｍの真空パック（株式会社シー・シー・ピー）に封入してから、市販の超低温冷凍庫にて−８０℃で冷凍保存し、ＰＲＰ充填シリンジ製剤を得た。こうして得られた４本のＰＲＰ充填シリンジ製剤は、患者の治療スケジュールに合わせて、７〜１０日間毎に合計４回、治療前に自然解凍し、シリンジからＰＲＰを余すことなく患者に適用（創傷部に塗布）した。
実施例２：
抗凝固剤として、４ｍｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を５０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、難治性皮膚潰瘍患者から５６ｍｌの採血を行った後、クリーンルーム内のクリーンベンチでスピッツを用いて２回遠心分離法を実施した（１回目：１０００Ｇで１０分間、２回目：７００Ｇで８分間）。２回目の遠心分離に用いたスピッツ内で分離した６ｍｌのＰＲＰを、４本の２．５ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に１．５ｍｌずつ抜き取り、それぞれのシリンジの先端に孔径が０．２２μｍの濾過滅菌フィルタ（倉敷紡績株式会社）を取り付けた後、滅菌したガス透過性滅菌バック（株式会社ホギメディカル）にシリンジを封入してから、市販のフードフリーザを用いて−１０℃でＰＲＰを４時間予備凍結させた。次に、こうして充填されたＰＲＰを予備凍結させたシリンジを、凍結乾燥機（ヤマト科学株式会社）の処理室に収容し、５０ｍＴｏｒｒ以下の圧力に３分以内に到達させて１６時間凍結乾燥処理した。この際、シリンジの周囲に約−５０℃で凍結させた氷塊を配置し、凍結したＰＲＰを冷却した。こうして充填されたＰＲＰが凍結乾燥されたシリンジは、滅菌バックから取り出した後、先端に取り付けた濾過滅菌フィルタをルアーキャップ（テルモ株式会社）に交換して先端を密封し、室温で保存した。こうして得られた４本のＰＲＰ充填シリンジ製剤は、患者の治療スケジュールに合わせて、７〜１０日間毎に合計４回、治療前に注射用蒸留水（株式会社大塚製薬工場）をシリンジの内部に吸引させてＰＲＰを懸濁し、シリンジからＰＲＰを余すことなく患者に適用（創傷部に塗布）した。
抗凝固剤として、４ｍｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を５０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、難治性皮膚潰瘍患者から５６ｍｌの採血を行った後、クリーンルーム内のクリーンベンチでスピッツを用いて２回遠心分離法を実施した（１回目：１０００Ｇで１０分間、２回目：７００Ｇで８分間）。２回目の遠心分離に用いたスピッツ内で分離した６ｍｌのＰＲＰを、４本の２．５ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に１．５ｍｌずつ抜き取り、それぞれのシリンジの先端に孔径が０．２２μｍの濾過滅菌フィルタ（倉敷紡績株式会社）を取り付けた後、滅菌したガス透過性滅菌バック（株式会社ホギメディカル）にシリンジを封入してから、市販のフードフリーザを用いて−１０℃でＰＲＰを４時間予備凍結させた。次に、こうして充填されたＰＲＰを予備凍結させたシリンジを、凍結乾燥機（ヤマト科学株式会社）の処理室に収容し、５０ｍＴｏｒｒ以下の圧力に３分以内に到達させて１６時間凍結乾燥処理した。この際、シリンジの周囲に約−５０℃で凍結させた氷塊を配置し、凍結したＰＲＰを冷却した。こうして充填されたＰＲＰが凍結乾燥されたシリンジは、滅菌バックから取り出した後、先端に取り付けた濾過滅菌フィルタをルアーキャップ（テルモ株式会社）に交換して先端を密封し、室温で保存した。こうして得られた４本のＰＲＰ充填シリンジ製剤は、患者の治療スケジュールに合わせて、７〜１０日間毎に合計４回、治療前に注射用蒸留水（株式会社大塚製薬工場）をシリンジの内部に吸引させてＰＲＰを懸濁し、シリンジからＰＲＰを余すことなく患者に適用（創傷部に塗布）した。
本発明は、ＰＲＰを適用する患者の血液から調製したＰＲＰを、手間をかけず、また、雑菌による汚染のリスクを回避し、かつ、患者に適用する際に無駄にすることなく、保存する方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
Claims (2)
- 多血小板血漿を適用する患者からクエン酸ナトリウム入りのシリンジに採血した血液を遠心分離し、遠心分離機にかけた容器内で分離した多血小板血漿をシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま、多血小板血漿を−４〜−２０℃で予備凍結させてから、凍結した多血小板血漿を−３０〜−７０℃で冷却しながら凍結乾燥処理して保存することを特徴とする多血小板血漿の保存方法。
- 多血小板血漿を適用する患者からクエン酸ナトリウム入りのシリンジに採血した血液を遠心分離し、遠心分離機にかけた容器内で分離した多血小板血漿をシリンジで抜き取ったそのシリンジのまま、多血小板血漿を−４〜−２０℃で予備凍結させてから、凍結した多血小板血漿を−３０〜−７０℃で冷却しながら凍結乾燥処理して保存することで製造されてなることを特徴とする多血小板血漿充填シリンジ製剤。
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