JP6543091B2

JP6543091B2 - Pmel17 gene expression inhibitor

Info

Publication number: JP6543091B2
Application number: JP2015107320A
Authority: JP
Inventors: 雅則濱口; 要荒巻; 和則阪井田
Original assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mikimoto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-06-03
Filing date: 2015-05-27
Publication date: 2019-07-10
Anticipated expiration: 2035-05-27
Also published as: JP2016011288A

Description

本発明は、Ｐｍｅｌ１７遺伝子発現を抑制し、美白に有効であり、さらには日焼け防止や黒色腫瘍に有効な製剤に関する。 The present invention relates to a preparation that suppresses Pmel17 gene expression, is effective for whitening, and is further effective for sun protection and black tumors.

皮膚の色素沈着の原因は、基底層ケラチノサイト内に過剰に蓄積するメラニン色素である。皮膚の色素沈着の原因となるこのメラニンは、表皮基底層にある色素細胞（メラノサイト）内のメラノソームと呼ばれる小器官において生成される。
メラノソームは構造タンパク質Ｐｍｅｌ１７が骨格となって構造を形成し、そこにメラニン色素が沈着している。（非特許文献１）
生成したメラニンはケラチノサイトに受け渡される。そして取り込まれたメラニンはターンオーバーにより自然に排出されていく。しかし、メラニンが過剰に作られるとメラニンの排出が間に合わず、シミ等が発生する。
また、インビボでＰｍｅｌ１７はＵＶＢの暴露により遺伝子の発現が増加することが確認され、Ｐｍｅｌ１７ノックアウトマウスでは淡色化が起こることが確認されている。（非特許文献２） The cause of skin pigmentation is the melanin pigment which accumulates in excess in basal layer keratinocytes. This melanin, which is responsible for skin pigmentation, is produced in an organelle called melanosome in pigment cells (melanocytes) in the basal layer of the epidermis.
In the melanosome, a structural protein Pmel17 forms a structure to form a structure, and a melanin pigment is deposited there. (Non-patent document 1)
The produced melanin is delivered to keratinocytes. And melanin taken in is naturally discharged by turnover. However, if the melanin is produced in excess, the melanin can not be excreted in time, causing stains and the like.
In addition, it has been confirmed that Pmel17 increases gene expression upon UVB exposure in vivo, and that lightening occurs in Pmel17 knockout mice. (Non-patent document 2)

真珠や貝殻の真珠層に含まれる不溶性蛋白質コンキオリンは加水分解され広く化粧品原料として利用され、肝機能改善剤、基底膜安定化剤、ＳＩＲＴ１活性化剤、皮膚角化促進剤、ストレスホルモン作用緩和剤、エラスチン産生促進剤、抗糖化作用剤、真皮タンパク質カルボニル化抑制剤、コラーゲン産生促進剤等の特許が公開されている。(特許文献１〜９) The insoluble protein conchiolin contained in the nacreous layer of pearls and shells is hydrolyzed and widely used as a cosmetic raw material, and is a liver function improving agent, basement membrane stabilizer, SIRT1 activator, skin keratinization promoting agent, stress hormone action reducing agent Patents have been published on elastin production promoters, antiglycation agents, dermal protein carbonylation inhibitors, collagen production promoters and the like. (Patent Documents 1 to 9)

特開２００３−０２４００８号公報Japanese Patent Application Publication No. 2003-024008 特開２００６−２９０８２９号公報JP, 2006-290829, A 特開２００９−１６１４９４号公報JP, 2009-161494, A 特開２０１０−１０５９２５号公報JP, 2010-105925, A 特開２０１０−１５０２１６号公報JP, 2010-150216, A 特開２０１２−０５６９３３号公報Unexamined-Japanese-Patent No. 2012-056933 特開２０１２−１２１８７４号公報JP 2012-121874 A 特開２０１２−２４６２２６号公報JP 2012-246226 A 特開２０１４−００９２１２号公報JP, 2014-009212, A Jan Borovansky, Patrick A. Riley 「Melanins and Melanosomes: Biosynthesis, Biogenesis, Physiological, and Pathological Functions」, Wiley-Blackwell June 2011 258-264Jan Borovansky, Patrick A. Riley "Melanins and Melanosomes: Biosynthesis, Biogenesis, Physiological, and Pathological Functions", Wiley-Blackwell June 2011 258-264 Wonseon Choi et.al J Invest Dermatol 2010 130(6)1685-1696Wonseon Choi et. Al J Invest Dermatol 2010 130 (6) 1685-1696

本発明の目的はＰｍｅｌ１７遺伝子の発現を抑制することによって、メラニンの排出を促し美白に有効であり、さらには日焼け防止や黒色腫瘍に有効な製剤を得ることにある。 The object of the present invention is to promote the elimination of melanin by suppressing the expression of the Pmel17 gene, and to be effective for whitening, and to obtain a preparation effective for sun protection and black tumors.

本発明者らが鋭意検討した結果、真珠や貝殻の真珠層に含まれる不溶性蛋白質コンキオリンの加水分解物にＰｍｅｌ１７遺伝子の発現を抑制する作用があることがわかった。
真珠や貝殻の真珠層はアコヤガイ、クロチョウガイ、シロチョウガイ等の真珠層を有する貝殻及びその真珠を、原料として用いる。
必要に応じて、真珠は核を取り除き、貝殻は付着物、稜柱層を取り除いたのち、粉砕する。
稜柱層を除くことはコストも係り、目的等に応じて必ずしも除く必要はないが、特公平０６−０４３３２０号公報、特開２００２−３３８４３０号公報の方法を取ることによってある程度容易に取り除くことができる。
これに酸やキレート剤を加える。酸は塩酸、硫酸等の無機酸、酢酸、乳酸等の有機酸から選択でき、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレングリコールビス（２−アミノエチルエーテル）四酢酸、１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）、ジ酒石酸、クエン酸、ポリリン酸、メタリン酸、又はこれらの塩が挙げられる。
酸やキレート剤は炭酸カルシウムが溶解する程度に加え、撹拌や加温を加え、炭酸カルシウムを溶解させる。
不溶物を集め、加水分解する。
加水分解の方法は、塩酸、硫酸、硝酸及びリン酸等の無機酸、酢酸、ギ酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸及びクエン酸等の有機酸等の１種以上を必要に応じて加温や撹拌を加えつつ加水分解する方法やパパイン、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン等の蛋白分解酵素で分解する方法等がある。
加水分解の方法やその後の脱塩には特公平０２−０１２９２１号公報、特公平０１−０４６４８６号公報、特開２０１４−００９２１０号公報等の技術を応用すると効率的である。 As a result of intensive investigations by the present inventors, it was found that the hydrolyzate of the insoluble protein conchiolin contained in the nacreous layer of pearls and shells has an action of suppressing the expression of Pmel17 gene.
The nacreous layer of pearls and shells uses as its raw material a shell having a nacreous layer such as pearl oysters, black chow mussels, white chow mussels and the like.
If necessary, the pearl removes the core, the shell removes the deposit, the column of pillars and then smashes.
Excluding the pillar layer is related to the cost, and it is not necessary to remove depending on the purpose etc., but it can be removed to some extent easily by adopting the methods of Japanese Examined Patent Publication No. 06-043320 and Japanese Patent Laid-Open No. 2002-338430. .
Add acids and chelating agents to this. The acid can be selected from inorganic acids such as hydrochloric acid and sulfuric acid, and organic acids such as acetic acid and lactic acid, and the chelating agent is ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), ethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA), ethylene glycol bis (2-aminoethyl ether) Tetraacetic acid, 1-hydroxyethylidene-1,1-diphosphonic acid (HEDP), ethylenediaminetetra (methylene phosphonic acid), ditartaric acid, citric acid, polyphosphoric acid, metaphosphoric acid, or salts thereof can be mentioned.
The acid and chelating agent are added to the extent that calcium carbonate dissolves, and stirring and heating are added to dissolve calcium carbonate.
Collect insolubles and hydrolyze.
As the method of hydrolysis, one or more of inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid and phosphoric acid, organic acids such as acetic acid, formic acid, malic acid, succinic acid, tartaric acid and citric acid may be heated as necessary. There are a method of hydrolyzing while adding stirring and a method of degrading with proteolytic enzymes such as papain, pepsin, trypsin, chymotrypsin and the like.
It is efficient to apply techniques such as Japanese Patent Publication No. 02-012921, Japanese Patent Publication No. 01-046486, and Japanese Patent Publication No. 2014-009210 for the method of hydrolysis and the subsequent desalting.

コンキオリン加水分解物の他に、医薬品、食品、化粧品に利用できる原料とともに、製剤を作成するか、既存の医薬品、食品、化粧品にこれらを加えて利用することもできる。
利用できる原料を例示すれば、
アボガド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）等の各種油脂類。
ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等のロウ類。
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等の鉱物油。 In addition to the conchiolin hydrolyzate, together with the raw materials that can be used for medicines, foods and cosmetics, it is possible to make a preparation or add them to existing medicines, foods and cosmetics and use them.
To illustrate the raw materials that can be used,
Avocado oil, almond oil, fennel oil, sesame oil, olive oil, orange oil, orange lather oil, sesame oil, cacao butter, chamomile oil, carot oil, cucumber oil, tallow fatty acid, kukui oil, safflower oil, shea butter, liquid shea Fat, soybean oil, camel oil, corn oil, rapeseed oil, persic oil, castor oil, castor oil, cottonseed oil, peanut oil, turtle oil, mink oil, egg yolk oil, palm oil, palm kernel oil, palm oil, coconut oil, beef fat, pork fat And various fats and oils such as squalene, squalane, pristane or hydrogenated products of these fats and oils (hardened oils and the like).
Waxes such as beeswax, carnauba wax, spermaceti wax, lanolin, liquid lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, candelilla wax, montan wax, shellac wax and rice wax.
Mineral oil such as liquid paraffin, petrolatum, paraffin, ozoceride, ceresin, microcrystalline wax.

ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、12-ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の脂肪酸類。
エタノール、イソピロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール、2-ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、2-オクチルドデカノール等のアルコール類。
エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、ガラクチトール、ソルビトール、ラクチトール、マルチトール等の多価アルコール類。 Fatty acids such as lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, docosahexaenoic acid, eicosapentaenoic acid, 12-hydroxystearic acid, undecylenic acid, tall oil, lanolin fatty acid and the like.
Alcohols such as ethanol, isopropionol, lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, phytosterol, phenoxyethanol, 2-hexyldecanol, isostearyl alcohol, 2-octyldodecanol and the like.
Ethylene glycol, diethylene glycol, triethylene glycol, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol monobutyl ether, diethylene glycol monomethyl ether, diethylene glycol monoethyl ether, polyethylene glycol, propylene glycol, polypropylene glycol, 1,3-butylene glycol, pentyl glycol, glycerin, Polyvalent alcohols such as pentaerythritol, threitol, arabitol, xylitol, galactitol, sorbitol, lactitol, maltitol and the like.

ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等のエステル類。
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛等の金属セッケン類。
アラビアゴム、グアヤク脂、カラヤゴム、トラガントゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン(Ｃ２〜Ｃ４)オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル(Ｃ２〜Ｃ４)キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等のガム質、糖類又は水溶性高分子化合物。
アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩、アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩、カルボン酸型両性界面活性剤、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤等のアニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤。 Isopropyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, myristyl myristate, oleyl oleate, decyl oleate, octyl dodecyl myristate, hexyl decyl dimethyl octanoate, cetyl lactate, myristyl lactate, diethyl phthalate, phthalate Esters such as dibutyl acid, lanolin acetate, ethylene glycol monostearate, propylene glycol monostearate and propylene glycol dioleate.
Metal soaps such as aluminum stearate, magnesium stearate, zinc stearate, calcium stearate and zinc palmitate.
Gum arabic, guaiac fat, karaya gum, tragacan gum, quinseed, agar, casein, lactose, fructose, sucrose or its ester, trehalose or its derivative, dextrin, gelatin, pectin, starch, carrageenan, carboxymethyl chitin or chitosan, ethylene oxide Hydroxyalkyl (C2 to C4) chitin or chitosan, low molecular weight chitin or chitosan, sulfated chitin or chitosan, phosphorylated chitin or chitosan, alginic acid or a salt thereof, to which an alkylene (C2 to C4) oxide is added Hyaluronic acid or a salt thereof, chondroitin sulfate or a salt thereof, heparin, ethylcellulose, methylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxyethylcellulose, sodium carboxyethylcellulose, Droxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, nitrocellulose, crystalline cellulose, polyvinyl alcohol, polyvinyl methyl ether, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl methacrylate, polyacrylate, polyalkylene oxides such as polyethylene oxide and polypropylene oxide, or crosslinked polymers thereof, carboxy Gums such as vinyl polymers and polyethylene imines, saccharides or water-soluble polymer compounds.
Alkyl carboxylates, alkyl sulfonates, alkyl sulfates, alkyl phosphates, alkyl amines, alkyl quaternary ammonium salts, carboxylic acid type amphoteric surfactants, sulfuric acid ester type amphoteric surfactants, sulfonic acid type Amphoteric surfactant, phosphate ester type amphoteric surfactant, ether type nonionic surfactant, ether ester type nonionic surfactant, ester type nonionic surfactant, block polymer type nonionic surfactant, nitrogen containing Type anionic surfactant such as anionic surfactant, cationic surfactant, amphoteric surfactant, nonionic surfactant.

レチノール、レチナール、デヒドロレチナール、カロチン、リコピン、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩、リボフラビン、ピリドキシン、シアノコバラミン、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ又はその誘導体、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類等の各種ビタミン類又はその誘導体。
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等の各種アミノ酸類。 Retinol, retinal, dehydroretinal, carotene, lycopene, thiamine hydrochloride, thiamine sulfate, riboflavin, pyridoxine, cyanocobalamin, folates, nicotinic acids, pantothenic acids, biotins, choline, inositols, vitamin C or derivatives thereof, ergocalci Various vitamins or derivatives thereof such as ferrol, cholecalciferol, dihydrotachysterol, vitamin E or derivatives thereof, ubiquinones;
Valine, leucine, isoleucine, threonine, methionine, phenylalanine, tryptophan, lysine, glycine, alanine, asparagine, glutamine, serine, cysteine, cystine, tyrosine, proline, hydroxyproline, aspartic acid, glutamic acid, hydroxylysine, ornithine, etc And various amino acids such as their sulfates, phosphates, nitrates, citrates, or amino acid derivatives such as pyrrolidone carboxylic acid.

赤芽柏、地黄、木通、地胆頭、一薬草、イチョウ、ウーロン茶、ウイキョウ、ウコン、夏枯草、陳皮、エゾウコギ、決明子、オウレン、白朮、オオバナサルスベリ、オクラ、オタネニンジン又はトチバニンジン (人参)、オリーブ、オレガノ、オレンジ、カミツレ又はローマカミツレ、カムカム、ガラナ、厚朴、ギョリュウ、グースベリー、クララ、クランベリー、グレープフルーツ、クローブ、コブシ、モクレン、威霊仙、サクラ、升麻、サンシチニンジン、山茱萸、山椒、サンズコン、シクンシ、シソ紫蘇、紫蘇、シャクヤク、スイカズラ、セイヨウトチノキ、セロリ、センキュウ、センブリ、ダイオウ、タチジャコウソウ、チクセツニンジン、テングサ、甜茶、テンダイウヤク、トクサ、ドクダミ、トチュウ、トネリコ、ナツメ、桂皮、五倍子、ノイバラ、ノバラ、ハトムギ、バラ、菱実、ビワ、ブラックベリー、プルーン、ホウノキ、ボウフウ(防風)、ホオノキ、ボダイジュ、ボタン、ホップ、ホホバ、マオウ、マカ、マカデミアナッツ、桑白皮、苦参、マンネンタケ、枳実、ミロバラン、ムクロジ、ムラサキ、益母草、メマツヨイグサ、メリッサ、メリロート、モッコウ、ヤーコン、ユーカリ、ユキノシタ、ユッカ、ユズ、ユリ、ヨロイグサ、ヨモギ、ラベンダー、レモン、レモングラス、ローズマリー、地楡、クロレラ、クロレラ、コンブ、ワカメ、ジャイアントケルプ、ヒジキ、ヒバマタ、キリンサイ、アサクサノリ、スサビノリ、スピルリナ、イシゲ、イロロ、フクロノリ等の植物、海藻、藻類の各種抽出物。 Red sprouts, ground yellows, treetails, ground biles, medicinal herbs, ginkgo biloba, oolong tea, fennel, turmeric, summer foliage, sage skin, licorice, ezoukogi, clear aiko, ouare, birch, obana salsberg, okra, ginseng or ginseng, olive, oregano , Orange, camomile or roman camomile, camphor, camphor, gourd, goosew, gooseberry, Clara, cranberry, grapefruit, clove, kobushi, magnolia, mausoleum, cherry, flaxseed, ginseng, yam, yam, sanzukone, Shikunshi, Shiso Shiso, Shiso, Peony, honeysuckle, celery, celery, semuri, rhubarb, rhubarb, sage ginseng, sage ginseng, tengusa, mochi tea, snails, sea bream, sea bream, sea bream, sea cucumber, sea nut, sea skin Heiko, Noybara, Novara, Cleavage, Rose, Rhomicide, Loquat, Blackberry, Prune, Alderbush (Windproof), Poppy, Bodice, Button, Hop, Jojoba, Maow, Macada, Macadamia Nuts, Ginseng, Ginseng , Mannentake, Fruit, Myrobaran, Mukuroji, Murasaki, Mashu, Agaricus erythraea, Melissa, Meriloto, Mokko, Yacon, Eucalyptus, Yukinoshita, Yucca, Yuzu, Lily, Persimmon, Yomogi, Lavender, Lemongrass, Rosemary, Rosemary, Earth, Various extracts of plants such as Chlorella, Chlorella, Kombu, Wakame, Giant Kelp, Hijiki, Hibamata, Giraffe rhinoceros, Asaxananori, Susabinori, Spirulina, Ishige, Irulo, Fuchronoli, seaweed, algae.

馬又は豚の胎盤抽出物、シルク蛋白及びその分解物又はそれらの誘導体、牛乳、カゼイン及びその分解物又はそれらの誘導体、脱脂粉乳及びその分解物又はそれらの誘導体、ラクトフェリン又はその分解物、鶏卵成分、魚肉分解物、核酸関連物質（リボ核酸、デオキシリボ核酸）等の動物系原料由来物質。
海洋成分深層水、海水塩、海水乾燥物、死海又は大西洋又は太平洋の海より得た無機塩、海泥等の海洋産物。
酵母菌抽出エキス、細菌代謝物、細菌抽出エキス、カビ又は放線菌代謝物、カビ又は放線菌抽出エキス、納豆菌代謝物、納豆抽出エキス、米発酵エキス、米糠（赤糠、白糠）発酵エキス、生乳又は脱脂粉乳の乳酸発酵物、マメ科植物の乳酸菌発酵物、ココヤシ属植物の乳酸菌発酵物等の菌類由来物質。
グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸等のα-ヒドロキシ酸類。
無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミン等の無機顔料。
ベンゾフェノン誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、メトキシ桂皮酸誘導体、サリチル酸誘導体、ウロカニン酸誘導等の紫外線吸収または遮断剤。 Horse or pig placenta extract, silk protein and its degradation products or derivatives thereof, milk, casein and its degradation products or derivatives thereof, skimmed milk powder and its degradation products or their derivatives, lactoferrin or its degradation products, egg components And substances derived from animal sources such as fish meat decomposition products and nucleic acid related substances (ribonucleic acid, deoxyribonucleic acid).
Marine components Deepwater, seawater, dried seawater, mineral salts obtained from the Dead Sea or the Atlantic or Pacific Ocean, marine products such as sea mud.
Yeast extract extract, bacterial metabolite, bacterial extract, mold or actinomycete metabolite, mold or actinomycete extract, natto bacillus metabolite, natto extract, rice fermented extract, rice bran extract (red yeast, red yeast) fermented extract, Fungal-derived substances such as lactic acid fermented raw milk or skimmed milk powder, lactic acid bacteria fermented leguminous plants, and lactic acid bacteria fermented coconut palm plants.
Α-hydroxy acids such as glycolic acid, citric acid, malic acid, tartaric acid, lactic acid and the like.
Silica, magnesium silicate, talc, kaolin, bentonite, mica, mica titanium, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, calcium carbonate, magnesium carbonate, yellow iron oxide, red iron oxide, black iron oxide Inorganic pigments such as gunjo, chromium oxide, chromium hydroxide, carbon black and calamine.
UV-absorbing or blocking agents such as benzophenone derivatives, para-aminobenzoic acid derivatives, methoxycinnamic acid derivatives, salicylic acid derivatives, urocanic acid derivatives and the like.

パラアミノ安息香酸誘導体、サルチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、ニコチン酸誘導体、コウジ酸又はその誘導体、オキシベンゾン、ベンゾフェノン、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン、胎盤エキス、エラグ酸、ルシノール等の美白剤。
イクタモール、インドメタシン、カオリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸メチル、アセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、d-カンフル、dl-カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイアズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩の抗炎症剤。
アクリノール、イオウ、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、トリクロサン等の抗菌・殺菌・消毒薬。
ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリス、イランイラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カルダモン精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、シダーウッド精油、ジャスミン精油、バラ精油、ベルガモット精油、ラベンダー精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油等の動植物性香料、その他合成香料等。
感光素１０１号、感光素２０１号、感光素４０１号、感光素３０１号、ヒノキチオール、パントテン酸又はその誘導体、アラントイン、ペンタデカン酸グリセリド、尿素、グアニジン等の各種薬剤。
その他ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤等が挙げられる。 Para-aminobenzoic acid derivative, salicylic acid derivative, anthranilic acid derivative, coumarin derivative, amino acid compound, benzotriazole derivative, hydroquinone or its derivative, nicotinic acid derivative, kojic acid or its derivative, oxybenzone, benzophenone, arbutin, guaiazulene, shikonin, baicalin , Baicalein, berberine, placenta extract, ellagic acid, lucinol etc.
Iktamol, indomethacin, kaolin, salicylic acid, sodium salicylate, methyl salicylate, acetylsalicylic acid, diphenhydramine hydrochloride, d-camphor, dl-camphor, hydrocortisone, guaiazulene, camazulene, chlorpheniramine maleate, glycyrrhizinic acid or its salt, glycyrrhetinic acid or its salt Salt anti-inflammatory agent.
Antibacterial, disinfectant and disinfectant drugs such as acrinol, sulfur, calcium gluconate, chlorhexidine gluconate and triclosan.
Musk, civet, kasutrium, amber squirrel, essential oil, squirrel oil, orange essential oil, orange essential oil, cardamom essential oil, cinnamon essential oil, geranium essential oil, copaiba balsam essential oil, cedarwood essential oil, jasmine essential oil, rose essential oil, bergamot essential oil, lavender essential oil, Animal and vegetable flavors such as lemongrass essential oil, lemon essential oil, rosemary essential oil, and other synthetic flavors.
Photosensitive element 101, Photosensitive element 201, Photosensitive element 401, Photosensitive element 301, Hinokitiol, pantothenic acid or derivatives thereof, various agents such as allantoin, pentadecanoic acid glyceride, urea, guanidine and the like.
Other examples include hormones, sequestering agents, pH adjusters and the like.

これらより、種々選択し、任意の形態にして利用に供する。形態の例としては、カプセル、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル、気泡、乳液、クリーム、軟膏、シート等が挙げられる。
コンキオリン加水分解物の製剤への配合量は、固形分として好ましくは０．００００１〜１０重量％、さらに好ましくは０．０００１〜１．０重量％である。 From these, various choices are made available in any form. Examples of forms include capsules, powders, granules, solids, liquids, gels, bubbles, emulsions, creams, ointments, sheets and the like.
The compounding amount of the conchiolin hydrolyzate in the preparation is preferably 0.00001 to 10% by weight, more preferably 0.0001 to 1.0% by weight as a solid content.

実施例-１
貝殻の付着物を水、ブラシで除去し、約１〜５mm程度に粉砕したアコヤガイ貝殻５０kgに水４５０kgを加えて撹拌しつつ、塩酸１００kgを徐々に加えた。さらに水１００kgを加え３日間撹拌した。塩酸１０kgを徐々に加えた。さらに水２００kgを加え２日間撹拌した。撹拌しつつ、水酸化ナトリウム３kgを徐々に加えた。
ｐＨ７になるように２５％水酸化ナトリウムで調整した後水２００kg加えた。これをシャープレス遠心機で沈殿を集めた。
沈殿を解砕し、０．１モル塩酸２０kgを加えて２４日間ゆっくり撹拌した。これに水１０００kgを撹拌しつつ加えたのち、シャープレス遠心機で沈殿を集めた。
沈殿を解砕し、これに水１０００kgを撹拌しつつ加えたのち、シャープレス遠心機で沈殿を集めた。
この沈殿２００ｇに１０倍希釈した硫酸を３kg加え、１１０℃のオイルバスで２４時間加水分解した。
放冷後、水酸化バリウムを徐々に加えながらｐＨ３．０に調整した後、遠心分離（６０００rpm、１５分間）し、上澄みにアンバーライトＩＲＡ９１０をｐＨ７．０になるまで徐々に加えた。これを濾過して濾液に活性炭を１０ｇ加え３０分間撹拌した。
これを濾過し、凍結乾燥した。 Example 1
The deposit of shells was removed with water and a brush, and 50 kg of water was added to 50 kg of pearl oyster shells crushed to about 1 to 5 mm and 100 kg of hydrochloric acid was gradually added while stirring. Further, 100 kg of water was added and stirred for 3 days. 10 kg of hydrochloric acid was gradually added. Further, 200 kg of water was added and stirred for 2 days. While stirring, 3 kg of sodium hydroxide was gradually added.
After adjusting with 25% sodium hydroxide to adjust to pH 7, 200 kg of water was added. The precipitate was collected with a Sharpless centrifuge.
The precipitate was disintegrated and 20 kg of 0.1 molar hydrochloric acid was added and stirred slowly for 24 days. To this, 1000 kg of water was added while stirring, and then the precipitate was collected by a Sharpless centrifuge.
The precipitate was disintegrated and 1000 kg of water was added to this while stirring, and then the precipitate was collected by a Sharpless centrifuge.
To 200 g of this precipitate, 3 kg of 10-fold diluted sulfuric acid was added and hydrolyzed in an oil bath at 110 ° C. for 24 hours.
After allowing to cool, the pH was adjusted to 3.0 while gradually adding barium hydroxide, followed by centrifugation (6000 rpm, 15 minutes), and Amberlite IRA 910 was gradually added to the supernatant until the pH reached 7.0. The mixture was filtered, 10 g of activated carbon was added to the filtrate, and the mixture was stirred for 30 minutes.
It was filtered and lyophilized.

確認試験
２継代目の正常ヒト表皮メラニン細胞（クラボウ）を１．５×１０³個となるよう播種し、４日間培養した。その後、増殖添加剤を含まないＤｅｒｍａＬｉｆｅ（登録商標）Ｍ（クラボウ）へ、ホルスコリンを終濃度１００μＭとなるように加えた。そして、その培地へ検体（実施例-１）を添加し試験培地とした。 Confirmation Test The second passage normal human epidermal melanocytes (Kurabo) were seeded to 1.5 × 10 ³ cells and cultured for 4 days. Thereafter, forskolin was added to a final concentration of 100 μM to DermaLife® M (Kurabo) containing no growth additive. Then, the sample (Example 1) was added to the medium to prepare a test medium.

ＲＮＡの抽出
細胞からのＴｏｔａｌＲＮＡの抽出は、ＰｕｒｅＬｉｎｋ（登録商標）ＲＮＡＭｉｎｉＫｉｔ（ライフテクノロジーズ・ジャパン）を用い、添付マニュアルに従い調整した。ＲＮＡ濃度は、ＮａｎｏＤｏｐ１０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて算出した。 Extraction of RNA Extraction of total RNA from cells was adjusted using a PureLink® RNA Mini Kit (Life Technologies Japan) according to the attached manual. The RNA concentration was calculated using NanoDop 1000 (Thermo Fisher scientific).

ＲＴ反応およびリアルタイムＰＣＲ
３０ｎｇのＴｏｔａｌＲＮＡを使い、Ｈｉｇｈ−ＣａｐａｃｉｔｙＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡＫｉｔ（ライフテクノロジーズ・ジャパン）を用いて、添付マニュアルに従いＲＴ反応を行った。
リアルタイムＰＣＲは、７５００Ｒｅａｌ−ＴｉｍｅＰＣＲＳｙｓｔｅｍ（ライフテクノロジーズ・ジャパン）を用いて実施した。
詳細には、前述のＲＴ産物と、Ｐｍｅｌ１７または内在性コントロールとしてＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ（登録商標）プライマー（ライフテクノロジーズ・ジャパン）、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ライフテクノロジーズ・ジャパン）を用いて、ΔΔＣＴ法により遺伝子発現量の比較を行った。 RT reaction and real time PCR
Using 30 ng of total RNA, RT reaction was performed according to the attached manual using High-Capacity RNA-to-cDNA Kit (Life Technologies Japan).
Real-time PCR was performed using 7500 Real-Time PCR System (Life Technologies Japan).
Specifically, using the RT product described above and Pmel17 or TaqMan (registered trademark) primer of GAPDH (Life Technologies Japan) as an endogenous control, TaqMan (registered trademark) Gene Expression Master Mix (Life Technologies Japan) The gene expression levels were compared by the ΔΔCT method.

結果を図１に示す。
左より、

１．検体（実施例-１）未添加、ホルスコリン未添加
２．検体（実施例-１）未添加、ホルスコリン終濃度１００μＭ添加
３．検体（実施例-１）終濃度５mg／ml添加、ホルスコリン終濃度１００μＭ添加
の結果を示す。
ホルスコリンによって発現が増加したＰｍｅｌ１７遺伝子発現を実施例-１は終濃度５mg／mlで約８０％抑制した。 The results are shown in FIG.
From the left

1. Specimen (Example 1) not added, forskolin not added 2. Specimen (Example 1) Not added, Forskolin final concentration 100 μM added The result of a test substance (example 1) final concentration 5 mg / ml addition and forskolin final concentration 100 μM addition is shown.
Example 1 inhibited about 80% of Pmel17 gene expression upregulated by forskolin at a final concentration of 5 mg / ml.

また、コンキオリン加水分解物を配合した外用剤を作成し、実際に使用してみた結果、美白は勿論、日焼け防にも有効な製剤が得られた。 Moreover, as a result of producing the external preparation which mix | blended the conchiolin hydrolyzate and actually using it, the formulation effective also for sun protection as well as whitening was obtained.

実施例-１の確認試験（Ｐｍｅｌ１７の遺伝子発現量）の結果を示す図である。It is a figure which shows the result of the confirmatory test (gene expression level of Pmel17) of Example-1.

Claims

Pmel 17 gene expression inhibitor containing conchiolin hydrolyzate as an active ingredient (except for whitening use)