JP6527385B2

JP6527385B2 - 血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤

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Publication number: JP6527385B2
Application number: JP2015097572A
Authority: JP
Inventors: 雅之高石; 亜砂子岡田; 郁尚藤田; 龍雄松岡
Original assignee: Mandom Corp; Suntory Holdings Ltd
Current assignee: Mandom Corp; Suntory Holdings Ltd
Priority date: 2015-05-12
Filing date: 2015-05-12
Publication date: 2019-06-05
Anticipated expiration: 2035-05-12
Also published as: JP2016210746A

Description

本発明は、血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤に関する。

血管内皮細胞増殖因子は、血管内皮細胞の表面に存在する血管内皮細胞増殖因子受容体との結合を介して血管内皮細胞の増殖を促進することにより、血管の形成に寄与することが知られている。

一方、レピディウムメイエニイワルプ（ＬｅｐｉｄｉｕｍｍｅｙｅｎｉｉＷａｌｐ．）は、主にペルーに植生する植物である。レピディウムメイエニイワルプに由来する成分は、抗アレルギー作用を有することが知られている。したがって、レピディウムメイエニイワルプに由来する成分を、抗アレルギー作用を有する化粧品、医薬品、飲食品などの原料として用いることが提案されている（例えば、特許文献１参照）。

しかしながら、本発明者らは、現時点では、レピディウムメイエニイワルプと血管内皮細胞増殖因子の産生との関連性や当該関連性を利用して、血管内皮細胞増殖因子の産生を促進する手段を具体的に記載した文献を発見していない。

国際公開第２００５／０７２６８４号

本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、血管内皮細胞増殖因子の産生を効果的に促進することができる血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤を提供することを目的とする。

すなわち、本発明の要旨は、
（１）血管内皮細胞増殖因子の産生を促進するための促進剤であって、レピディウムメイエニイワルプ（ＬｅｐｉｄｉｕｍｍｅｙｅｎｉｉＷａｌｐ．）由来成分を有効成分として含有していることを特徴とする血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤、および
（２）前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分が、レピディウムメイエニイワルプの植物体、前記植物体の一部、またはレピディウムメイエニイワルプ抽出物である前記（１）に記載の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤
に関する。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤によれば、血管内皮細胞増殖因子の産生を効果的に促進することができるという優れた効果が奏される。

試験例１において、被験試料の種類と各種遺伝子の相対発現量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例２において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例３において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例４において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例５において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例５において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例６において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。試験例６において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を示すグラフである。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の産生を促進するための促進剤であって、レピディウムメイエニイワルプ（ＬｅｐｉｄｉｕｍｍｅｙｅｎｉｉＷａｌｐ．）由来成分を有効成分として含有していることを特徴とする。このように、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を有効成分として含有しているので、血管内皮細胞増殖因子の産生を効果的に促進することができる。

前記血管内皮細胞増殖因子としては、例えば、血管内皮細胞増殖因子Ａ（以下、「ＶＥＧＦ−Ａ」という）、血管内皮細胞増殖因子Ｂ（以下、「ＶＥＧＦ−Ｂ」という）、血管内皮細胞増殖因子Ｃ（以下、「ＶＥＧＦ−Ｃ」という）、血管内皮細胞増殖因子Ｄ（以下、「ＶＥＧＦ−Ｄ」という）、血管内皮細胞増殖因子Ｅ（以下、「ＶＥＧＦ−Ｅ」という）などのアイソフォーム、これらのスプライシングバリアントなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記スプライシングバリアントとしては、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ₁₂₁、ＶＥＧＦ−Ａ₁₄₅、ＶＥＧＦ−Ａ₁₄₈、ＶＥＧＦ−Ａ₁₆₂、ＶＥＧＦ−Ａ₁₆₅、ＶＥＧＦ−Ａ₁₈₃、ＶＥＧＦ−Ａ₁₈₉、ＶＥＧＦ−Ａ₂₀₆などのＶＥＧＦ−Ａのスプライシングバリアント；ＶＥＧＦ−Ｂ₁₆₇、ＶＥＧＦ−Ｂ₁₈₆などのなどのＶＥＧＦ−Ｂのスプライシングバリアントなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの血管内皮細胞増殖因子は、機能の発現に関与する部分に、互いに類似する一次構造を有していることから、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤によってこれらの血管内皮細胞増殖因子の産生を促進することができると考えられる。本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、これらの血管内皮細胞増殖因子のなかでも、ＶＥＧＦ−Ａおよびそのスプライシングバリアントの産生をより効果的に促進することができる。

前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分は、レピディウムメイエニイワルプ（ＬｅｐｉｄｉｕｍｍｅｙｅｎｉｉＷａｌｐ．）から得られる成分である。前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分としては、例えば、レピディウムメイエニイワルプの植物体、レピディウムメイエニイワルプの植物体の一部、レピディウムメイエニイワルプ抽出物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのレピディウムメイエニイワルプ由来成分のなかでは、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点から、好ましくは、レピディウムメイエニイワルプの植物体、レピディウムメイエニイワルプの植物体の一部およびレピディウムメイエニイワルプ抽出物からなる群より選ばれた少なくとも１種である。

本明細書において、「レピディウムメイエニイワルプの植物体」とは、レピディウムメイエニイワルプの全草をいう。また、前記「レピディウムメイエニイワルプの植物体」の概念には、レピディウムメイエニイワルプの乾燥粉砕物（例えば、凍結乾燥粉砕物など）、レピディウムメイエニイワルプの生粉砕物などが包含される。

前記レピディウムメイエニイワルプの植物体の一部としては、球根、葉、花、果実、種子、茎、地下茎などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのレピディウムメイエニイワルプの植物体の一部のなかでは、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点から、好ましくは球根である。なお、前記「レピディウムメイエニイワルプの植物体の一部」の概念には、レピディウムメイエニイワルプの植物体の一部の切片、当該植物体の一部の乾燥粉砕物（例えば、凍結乾燥粉砕物など）などが包含される。

前記レピディウムメイエニイワルプ抽出物は、レピディウムメイエニイワルプの植物体または当該レピディウムメイエニイワルプの植物体の一部から得ることができる。前記「レピディウムメイエニイワルプ抽出物」の概念には、抽出溶媒を含有する抽出液、前記抽出液から抽出溶媒が除去された濃縮物、当該濃縮物の乾燥粉末などが包含される。

前記レピディウムメイエニイワルプ抽出物の原料となるレピディウムメイエニイワルプの植物体の部位としては、例えば、球根、葉、花、果実、種子、茎、地下茎などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。抽出に際しては、前記原料をそのまま用いてもよく、乾燥させて用いてもよい。また、前記原料は、そのままの状態で用いてもよく、粉砕して用いてもよい。抽出法としては、例えば、浸漬抽出法、超音波抽出法、還流抽出法などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの抽出法のなかでは、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点から、好ましくは浸漬抽出法である。抽出温度および抽出時間は、抽出溶媒の種類などにより異なるので、一概には決定することができないことから、抽出溶媒の種類などに応じて適宜設定することが好ましい。前記抽出溶媒としては、例えば、精製水；水を含んでいてもよい炭素数１〜４の１価アルコール（例えば、エチルアルコール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなど）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみ限定されるものではない。これらの抽出溶媒は、単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。これらの抽出溶媒のなかでは、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点および当該レピディウムメイエニイワルプ抽出物の取り扱い性をより向上させる観点から、好ましくは精製水、および水を含んでいてもよい炭素数１〜４の１価アルコールである。抽出溶媒が水を含む炭素数１〜４の１価アルコールである場合、アルコール水溶液中の炭素数１〜４の１価アルコールの含有量は、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点から、好ましくは５０〜１００質量％、より好ましくは８０〜１００質量％である。抽出を前記浸漬抽出法で行なう場合、前記原料を抽出溶媒に浸漬させるに際しては、原料および抽出溶媒に対し、加熱処理、加圧処理、加水分解処理などを施してもよい。抽出を前記浸漬抽出法で行なう場合、前記加水分解処理を行なうことが好ましい。前記加水分解処理は、例えば、アルカリ加水分解法、酵素加水分解法などによって行なうことができる。加水分解法は、アルカリ加水分解法および酵素加水分解法が好ましい。抽出後、必要により、精製、濃縮などの操作を行なってもよい。得られた抽出物は、そのままの液体状態で用いてもよく、濃縮乾固、噴霧乾燥、真空乾燥、凍結乾燥などによって固体状態にして用いてもよい。

前記レピディウムメイエニイワルプ抽出物は、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点から、レピディウムメイエニイワルプを乾燥させ、粉砕した後、得られた粉砕物を、水を含んでいてもよいエタノールによる浸漬抽出に供して得られた抽出物、および、レピディウムメイエニイワルプを乾燥させ、粉砕し、得られた粉砕物を水による浸漬抽出に供した後、得られた産物を酵素加水分解させることによって得られた抽出物が好ましい。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中における前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量は、前記血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途、前記成分の種類などによって異なるので、一概には決定することができないことから、前記血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途、前記成分の種類などに応じて適宜設定することが好ましい。本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中における前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量は、乾燥状態のレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量に換算すると、通常、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果をより向上させる観点から、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上であり、使用時における取り扱いの容易性の観点から、好ましくは１００質量％以下である。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤には、本発明の目的が阻害されない範囲内で、当該血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途に応じて、他の成分が配合されていてもよい。前記成分としては、例えば、界面活性剤、安定化剤、粘度調整剤、ｐＨ調整剤、金属イオン封鎖剤、酸化防止剤などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中における前記成分の含有量は、前記血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途、前記成分の種類などによって異なるので、一概には決定することができないことから、前記血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途、前記成分の種類などに応じて適宜設定することが好ましい。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の産生を促進することができることから、血管内皮細胞増殖因子を増加させて血管内皮細胞増殖因子を介する血管の形成を促進することが期待される。したがって、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象の改善、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態の改善などの用途に用いることができる。前記生理現象としては、例えば、肌の状態の悪化、低血圧、冷え症、肩こり、血行障害による頭痛、脱毛、薄毛などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。また、前記生理的状態としては、例えば、人為的に再生させた組織または人為的に再生させた器官における血管の欠如、裂傷または熱傷回復組織における血管の欠如などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記用途の具体例としては、肌の状態の改善、低血圧症などにおける血圧改善、冷え症の改善、肩こりの改善、頭痛の改善、脱毛または薄毛の改善、人為的に再生させた組織内または人為的に再生させた器官内における血管の形成、裂傷または熱傷回復組織における血管の形成などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤による血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果は、例えば、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤を被験試料として用い、
（Ａ）被験試料の存在下および非存在下において、血管内皮細胞増殖因子を産生する細胞を培養して得られる培養物中における血管内皮細胞増殖因子の含有量を測定すること〔以下、「評価法（Ａ）」という〕、
（Ｂ）被験試料の存在下および非存在下において、血管内皮細胞増殖因子を産生する細胞を培養して得られる細胞の核酸中における血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸の含有量を測定すること〔以下、「評価法（Ｂ）」という〕
などによって評価することができる。

前記血管内皮細胞増殖因子を産生する細胞としては、例えば、線維芽細胞、表皮角化細胞、毛乳頭細胞、骨芽細胞などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの細胞は、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途などに応じて適宜選択することができる。

前記血管内皮細胞増殖因子を産生する細胞の培養に用いられる培地、培養温度、培養時間および培養雰囲気は、用いられる細胞の種類などによって異なるので、一概に決定することができないことから、用いられる細胞の種類などに応じて適宜決定することが好ましい。

前記評価法（Ａ）において、前記培養物中における血管内皮細胞増殖因子の含有量は、例えば、血管内皮細胞増殖因子に特異的に結合する物質などを用いて測定することができる。前記血管内皮細胞増殖因子に特異的に結合する物質としては、例えば、血管内皮細胞増殖因子に対する抗体、当該抗体の断片、血管内皮細胞増殖因子と結合するアプタマーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記血管内皮細胞増殖因子に特異的に結合する物質には、検出可能な標識物質が付加されていてもよい。前記評価法（Ａ）では、被験試料の存在下に培養して得られた培養物中における血管内皮細胞増殖因子の含有量（以下、「含有量Ａ」という）と、被験試料の非存在下に培養して得られた培養物中における血管内皮細胞増殖因子の含有量（以下、「含有量Ｂ」という）とを比較することによって血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果を評価することができる。含有量Ａ／含有量Ｂが、好ましくは２／１以上、より好ましくは１０／１以上である場合、被験試料が血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果を有することの指標となる。なお、前記含有量Ａ／含有量Ｂの上限は、血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途などによって異なるので、一概に決定することができないことから、血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途などに応じて適宜決定することが好ましい。

前記評価法（Ｂ）において、細胞の核酸中における血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸の含有量は、例えば、
（Ｂ１）血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸を増幅するためのプライマーセットを用いて血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸を増幅し、増幅産物の量を定量すること、
（Ｂ２）血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸を検出するためのプローブを用いて血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸を定量すること
などによって測定することができる。前記評価法（Ｂ）では、被験試料の存在下に培養して得られた細胞の核酸中における血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸の含有量（以下、「含有量ａ」という）と、被験試料の非存在下に培養して得られた細胞の核酸中における血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸の含有量（以下、「含有量ｂ」という）とを比較することによって血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果を評価することができる。含有量ａ／含有量ｂが、好ましくは１．２／１以上、より好ましくは１．５／１以上である場合、被験試料が血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果を有することの指標となる。なお、前記含有量ａ／含有量ｂの上限は、血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途などによって異なるので、一概に決定することができないことから、血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の用途などに応じて適宜決定することが好ましい。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、例えば、血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを効果的に改善するための化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品などに配合して用いることができるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤を前記血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを効果的に改善するための化粧品または医薬部外品に配合して用いる場合、前記化粧品または医薬部外品中における本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の含有量は、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中におけるレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量、前記化粧品または医薬部外品の用途などに応じて異なるので、一概に決定することができないことから、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中におけるレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量、前記化粧品または医薬部外品の用途などに応じて適宜設定することが好ましい。前記化粧品または医薬部外品としては、例えば、柔軟化粧水、保湿化粧水、マッサージローション、メーキャップローション、ハンドローション、ボディローションなどの化粧水；マッサージジェル、ハンドジェル、ボディジェルなどのジェル；マッサージミルク、ハンドミルク、ボディーミルクなどの乳液；メーキャップクリーム、ベースクリーム、プレメーキャップクリーム、ファンデーションクリーム、マッサージクリーム、ボディクリーム、デオドラントクリームなどのクリーム；保湿タイプリップスティック、口紅タイプリップスティック、デオドラントスティックなどのスティック；パウダーファンデーション、デオドラントパウダー、スタイリングパウダーなどのパウダー化粧品；化粧水含浸不織布などのペーパー化粧品、軟膏、育毛剤、シャンプー、コンディショナーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記化粧品または医薬部外品は、本発明の目的を阻害しない範囲内で、他の成分、例えば、保湿剤、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、香料などをさらに含有していてもよい。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤を前記血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを効果的に改善するための医薬品に配合して用いる場合、前記医薬品中における本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の含有量は、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中におけるレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量、前記医薬品の用途などに応じて異なるので、一概に決定することができないことから、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中におけるレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量、前記医薬品の用途などに応じて適宜設定することが好ましい。前記医薬品は、本発明の目的を阻害しない範囲内で、薬学的に許容される成分をさらに含有してもよい。前記薬学的に許容される成分としては、例えば、賦形剤、乳化剤、崩壊剤、矯味剤、溶解補助剤、コーティング剤、抗酸化剤などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。また、前記医薬品の剤型としては、例えば、経皮吸収剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤、坐剤、吸入薬、点眼剤、点鼻剤などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記医薬品の投与形態としては、例えば、経口投与形態；局所注入、腹腔内投与、選択的静脈注入、静脈注射、筋肉注射、経皮吸収などの非経口投与形態などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記医薬品の使用量は、当該医薬品に含まれる本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の量、適用箇所などに応じて異なるので、一概に決定することができないことから、当該医薬品に含まれる本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の量、適用箇所などに応じて適宜設定することが好ましい。

本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤を前記血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを効果的に改善するための飲食品に配合して用いる場合、前記飲食品中における本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤の含有量は、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中におけるレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量、前記飲食品の種類などに応じて異なるので、一概に決定することができないことから、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤中におけるレピディウムメイエニイワルプ由来成分の含有量、前記飲食品の種類などに応じて適宜設定することが好ましい。前記飲食品は、本発明の目的を阻害しない範囲内で、食用に適した他の材料、油、乳化剤、香科、着色剤、酸化防止剤、増粘剤などをさらに含有していてもよい。

以下に、本発明の血管内皮細胞増殖因子を用いた具体的な実施態様を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。

以上説明したように、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の産生を効果的に促進することができることから、当該血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを効果的に改善することが期待される。したがって、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを改善するための化粧品、医薬品、医薬部外品、飲食品などに好適に用いることができる。

つぎに、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例のみに限定されるものではない。以下において、被験培地１〜２１は、表５に示された被験培地である。表５中の被験物質は、表６に示された物質である。

実験例１
新生児由来線維芽細胞ＴＩＧ−１２１〔(財)ヒューマンサイエンス振興財団製〕を、細胞密度が３０００細胞／ｃｍ²となるように１０ｃｍ径ディッシュ中のダルベッコ改変イーグル培地〔和光純薬工業（株）製、商品名：Ｄ−ＭＥＭ〕１５ｍＬに播種した。つぎに、ディッシュ中の新生児由来線維芽細胞ＴＩＧ−１２１を５体積％二酸化炭素下、３７℃で２４時間培養した。その後、ダルベッコ改変イーグル培地を、被験培地１１５ｍＬに置換した。さらに、被験培地１中の新生児由来線維芽細胞ＴＩＧ−１２１を５体積％二酸化炭素下に３７℃で４８時間培養した。得られた培養物から細胞を回収した。得られた細胞から全ＲＮＡを抽出した。得られた全ＲＮＡを全ＲＮＡの濃度が５．０μｇ／μＬとなるように精製水〔ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、商品名：ＵｌｔｒａＰｕｒｅＤＮａｓｅ/ＲＮａｓｅ−ＦｒｅｅＤｉｓｔｉｌｌｅｄＷａｔｅｒ〕を添加し、測定試料を得た。

実験例２
実験例１において、被験培地１を用いる代わりに、被験培地２を用いたことを除き、実験例１と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実験例３
実験例１において、被験培地１を用いる代わりに、対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたことを除き、実験例１と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

試験例１
実験例１〜３で得られた各測定試料を鋳型とし、ＰＣＲ用キット〔ＳＡバイオサイエンス社製、商品名：ＲＴ² Ｆｉｒｓｔｓｔｒａｎｄｋｉｔ〕とリアルタイムＰＣＲ装置〔アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製、商品名：ＶｉｉＡ７〕と、細胞増殖に関連する因子の遺伝子またはハウスキーピング遺伝子を増幅するためのプライマー対とを用い、細胞増殖に関連する因子の遺伝子またはハウスキーピング遺伝子それぞれのｍＲＮＡレベルでの発現量が閾値に達するまでのサイクル数（以下、「Ｃｔ値」という）を測定した。つぎに、細胞増殖に関連する因子について、遺伝子の相対発現量を、式（Ｉ）：
遺伝子の相対発現量
＝〔２−（Ｃｔ_A−Ｃｔ_B）〕／〔２−（Ｃｔ_C−Ｃｔ_D）〕（Ｉ）
（式中、Ｃｔ_Aは被験培地を用いたときの細胞増殖に関連する因子の遺伝子のＣｔ値、Ｃｔ_Bは被験培地を用いたときのハウスキーピング遺伝子のＣｔ値、Ｃｔ_Cは対照培地を用いたときの細胞増殖に関連する因子の遺伝子のＣｔ値、Ｃｔ_Dは対照培地を用いたときのハウスキーピング遺伝子のＣｔ値を示す）
に基づいて算出した。

試験例１において、被験試料の種類と各種遺伝子の相対発現量との関係を調べた結果を図１に示す。図中、レーン１はトランスフォーミング増殖因子β１〔ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂｅｔａ１（以下、「ＴＧＦβ１」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン２はトランスフォーミング増殖因子β受容体３〔ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂｅｔａｒｅｃｅｐｔｏｒ３（ＴＧＦβＲ３）〕の遺伝子の相対発現量、レーン３は上皮増殖因子〔ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（以下、「ＥＧＦ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン４は増殖分化因子６〔ｇｒｏｗｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ６（以下、「ＧＤＦ６」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン５は増殖分化因子７〔ｇｒｏｗｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ６（以下、「ＧＤＦ７」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン６は血小板由来増殖因子αポリペプチド〔ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（以下、「ＰＤＧＦＡ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン７は血小板由来増殖因子βポリペプチド〔ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｅｔａｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（以下、「ＰＤＧＦＢ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン８は血小板由来増殖因子受容体αポリペプチド〔ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｌｐｈａｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（以下、「ＰＤＧＦＲＡ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン９は塩基性線維芽細胞増殖因子〔ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２（以下、「ＢＦＧＦ２」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン１０はインスリン様増殖因子１〔ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ１（以下、「ＩＧＦ１」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン１１はインスリン様増殖因子２〔ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２（以下、「ＩＧＦ２」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン１２は神経増殖因子〔ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（以下、「ＮＧＦ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン１３は角化細胞増殖因子〔ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（以下、「ＫＧＦ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン１４は肝細胞増殖因子〔ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（以下、「ＨＧＦ」という）〕の遺伝子の相対発現量、レーン１５はＶＥＧＦ−Ａの遺伝子の相対発現量、レーン１６は線維芽細胞増殖因子１８〔ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ１８（以下、「ＦＧＦ１８」という）〕の遺伝子の相対発現量を示す。また、図中、白色バーは被験培地１を用いたときの遺伝子の相対発現量、ハッチングが施されたバーは被験培地２を用いたときの遺伝子の相対発現量を示す。

図１に示された結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地１を用いた場合のＶＥＧＦ−Ａの遺伝子の発現量は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地１を用いた場合のＴＧＦβ１、ＴＧＦβＲ３、ＥＧＦ、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＢＦＧＦ２、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＮＧＦ、ＫＧＦ、ＨＧＦおよびＦＧＦ１８それぞれの遺伝子の発現量に比べ、著しく増加していることがわかる。特に、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地１を用いた場合のＶＥＧＦＡの遺伝子の相対発現量が４０であることから、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地１を用いた場合のＶＥＧＦＡの遺伝子の発現量は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない対照培地を用いた場合のＶＥＧＦＡの遺伝子の発現量と比べて有意に増加していることがわかる。また、ＶＥＧＦ−Ａと、そのアイソフォーム（例えば、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅなど）およびスプライシングバリアントは、機能に関与する部分に、互いに類似する一次構造を有していることから、前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分により、これらの血管内皮細胞増殖因子の産生を促進することができることが示唆される。したがって、これらの結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分は、血管内皮細胞増殖因子の産生を遺伝子レベルで促進する作用を有することが示唆される。これに対し、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない被験培地２を用いた場合、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地１を用いた場合のようなＶＥＧＦＡの遺伝子の発現量の増加が見られないことがわかる。

実施例１
新生児由来線維芽細胞ＴＩＧ−１２１〔(財)ヒューマンサイエンス振興財団製〕を、細胞密度が３０００細胞／ｃｍ²となるように１０ｃｍ径ディッシュ中のダルベッコ改変イーグル培地〔和光純薬工業（株）製、商品名：Ｄ−ＭＥＭ〕１５ｍＬに播種した。つぎに、ディッシュ上の新生児由来線維芽細胞ＴＩＧ−１２１を５体積％二酸化炭素下、３７℃で２４時間培養した。その後、ダルベッコ改変イーグル培地を、被験培地１１５ｍＬに置換し、２４時間培養し、測定試料を得た。

実施例２
実施例１において、培地の置換後２４時間培養を行なう代わりに、培地の置換後７２時間培養を行なったことを除き、実施例と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例１
実施例１において、被験培地１を用いる代わりに、対照培地〔ダルベッコ改変イーグル培地〕を用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例２
実施例２において、被験培地１を用いる代わりに、対照培地〔ダルベッコ改変イーグル培地〕を用いたことを除き、実施例２と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例３
実施例１において、被験培地１を用いる代わりに、被験培地２を用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例４
実施例２において、被験培地１を用いる代わりに、被験培地２を用いたことを除き、実施例２と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

試験例２
実施例１〜２、比較例１〜４で得られた各測定試料と、ＥＬＩＳＡキット〔アール・アンド・ディー・システムズ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）社製、商品名：ＶＥＧＦＥＬＩＳＡｋｉｔ〕とを用い、血管内皮細胞増殖因子の産生量を測定した。

試験例２において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図２に示す。図中、レーン１は対照培地を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１および２）、レーン２は被験培地１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１および２）、レーン３は被験培地２を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例３および４）を示す。また、図中、白色バーは培地の置換後２４時間培養を行なったときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１、比較例１および３）、ハッチングが施されたバーは培地の置換後７２時間培養を行なったときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２、比較例２および４）を示す。

図２に示された結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地１を用いた場合の血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１〜２）は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない培地（対照培地および被験培地２）を用いた場合の血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１〜４）と比べ、著しく増加していることがわかる。また、ＶＥＧＦ−Ａと、そのアイソフォーム（例えば、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅなど）およびスプライシングバリアントは、機能に関与する部分に、互いに類似する一次構造を有していることから、前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分により、これらの血管内皮細胞増殖因子の産生を促進することができることが示唆される。

したがって、これらの結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分は、血管内皮細胞増殖因子の産生をタンパク質レベルで促進する作用を有することがわかる。

実施例３
毛乳頭細胞〔タカラバイオ（株）製〕を、細胞密度が２００００細胞／ｃｍ²となるように４８ウェルプレート中のダルベッコ改変イーグル培地〔和光純薬工業（株）製、商品名：Ｄ−ＭＥＭ〕０．３ｍＬに播種した。つぎに、ディッシュ上の毛乳頭細胞を５体積％二酸化炭素下、３７℃で２４時間培養した。その後、ダルベッコ改変イーグル培地を、被験培地３０．３ｍＬに置換した。さらに、被験培地３中の毛乳頭細胞を５体積％二酸化炭素下に３７℃で２４時間培養し、測定試料を得た。

実施例４〜６
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地４（実施例４）、被験培地５（実施例５）または被験培地６（実施例６）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例５
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例６〜８
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地７（比較例６）、被験培地８（比較例７）または被験培地９（比較例８）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。なお、前記被験培地７に含まれるジメチルスルホキシドは、アデノシンの溶媒として用いられたジメチルスルホキシドが毛乳頭細胞に影響を与えないことを確認するための対照である。また、前記被験培地８に含まれるアデノシンおよび前記被験培地９に含まれるミノキシジルは、ＶＥＧＦ産生効果を有する物質として、試験方法の妥当性を検証するための対照である。

試験例３
実施例３〜６、比較例５〜８で得られた各測定試料と、ＥＬＩＳＡキット〔アール・アンド・ディー・システムズ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）社製、商品名：ＶＥＧＦＥＬＩＳＡｋｉｔ〕とを用い、被験試料と２４時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量を測定した。

試験例３において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図３に示す。図中、レーン１は被験培地３を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例３）、レーン２は被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例４）、レーン３は被験培地５を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例５）、レーン４は被験培地６を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例６）、レーン５は対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例５）、レーン６は被験培地７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例６）、レーン７は被験培地８を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例７）、レーン８は被験培地９を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例８）を示す。

図３に示された結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地３〜６を用いた場合の血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例３〜６）は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない培地（対照培地、被験培地７、被験培地８および被験培地９）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例５〜８）と比べ、著しく増加していることがわかる。

したがって、これらの結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分は、血管内皮細胞増殖因子の産生を促進する作用を有することがわかる。

実施例７
実施例３において、培地の置換後２４時間培養を行なう代わりに、培地の置換後７２時間培養を行なったことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例８〜１０
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地４（実施例８）、被験培地５（実施例９）または被験培地６（実施例１０）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例９
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例１０〜１２
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地７（比較例１０）、被験培地８（比較例１１）または被験培地９（比較例１２）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

試験例４
実施例７〜１０、比較例９〜１２で得られた各測定試料と、ＥＬＩＳＡキット〔アール・アンド・ディー・システムズ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）社製、商品名：ＶＥＧＦＥＬＩＳＡｋｉｔ〕とを用い、被験試料と７２時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量を測定した。

試験例４において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図４に示す。図中、レーン１は被験培地３を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例７）、レーン２は被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例８）、レーン３は被験培地５を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例９）、レーン４は被験培地６を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１０）、レーン５は対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例９）、レーン６は被験培地７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１０）、レーン７は被験培地８を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１１）、レーン８は被験培地９を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１２）を示す。

図４に示された結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地３〜６を用いた場合の血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例７〜１０）は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない培地（対照培地、被験培地７、被験培地８および被験培地９）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例９〜１２）と比べ、著しく増加していることがわかる。さらに、図４に示された結果と図３に示された結果を比較すると、レピディウムメイエニイワルプ由来成分と７２時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分と２４時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量よりも顕著に増加していることがわかる。

実施例１１〜１３
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１０（実施例１１）、被験培地１１（実施例１２）または被験培地１２（実施例１３）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例１４〜１６
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１３（実施例１４）、被験培地１４（実施例１５）および被験培地１５（実施例１６）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例１７〜１９
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１６（実施例１７）、被験培地１７（実施例１８）または被験培地１８（実施例１９）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例２０
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１（実施例２０）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例１３〜１５
実施例３において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１９（比較例１３）、被験培地２０（比較例１４）または被験培地２１（比較例１５）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

試験例５
実施例４、１１〜２０、比較例５、８、１３〜１５で得られた各測定試料と、ＥＬＩＳＡキット〔アール・アンド・ディー・システムズ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）社製、商品名：ＶＥＧＦＥＬＩＳＡｋｉｔ〕とを用い、被験試料を２４時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量を測定した。

試験例５において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図５に示す。図中、レーン１は被験培地１０を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１１）、レーン２は被験培地１１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１２）、レーン３は被験培地１２を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１３）、レーン４は被験培地１３を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１４）、レーン５は被験培地１４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１５）、レーン６は被験培地１５を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１６）、レーン７は被験培地１６を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１７）、レーン８は被験培地１７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１８）、レーン９は被験培地１８を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１９）、レーン１０は被験培地１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２０）、レーン１１は被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例４）、レーン１２は対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例５）、レーン１３は被験培地１９を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１３）、レーン１４は被験培地２０を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１４）、レーン１５は被験培地９を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例８）、レーン１６は被験培地２１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１５）を示す。

図５に示された結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地４、１０〜１８および１を用いた場合の血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例４、１１〜２０）は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない培地（対照培地、被験培地９、被験培地１９、被験培地２０および被験培地２１）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例５、８、１３〜１５）と比べ、著しく増加していることがわかる。

つぎに、図５に示された結果において、被験培地１１、１４および１７それぞれに含まれるレピディウムメイエニイワルプ由来乾燥残分の量を被験培地４のレピディウムメイエニイワルプ由来乾燥残分の量と同量となるように設定し、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた。

試験例５において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図６に示す。図中、レーン１は被験培地１１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１２）、レーン２は被験培地１４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１５）、レーン３は被験培地１７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１８）、レーン４は被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例４）を示す。

図６に示された結果から、被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例４）が最も多く、被験培地１７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１８）、被験培地１１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１２）および被験培地１４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例１５）の順で、血管内皮細胞増殖因子の産生量が減少することがわかる。

実施例２１〜２３
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１０（実施例２１）、被験培地１１（実施例２２）または被験培地１２（実施例２３）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例２４〜２６
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１３（実施例２４）、被験培地１４（実施例２５）または被験培地１５（実施例２６）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例２７〜２９
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１６（実施例２７）、被験培地１７（実施例２８）または被験培地１８（実施例２９）を用いたことを除き、実施例３と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

実施例３０
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１（実施例３０）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

比較例１６〜１８
実施例７において、被験培地３を用いる代わりに、被験培地１９（比較例１６）、被験培地２０（比較例１７）または被験培地２１（比較例１８）を用いたことを除き、実施例７と同様の操作を行ない、測定試料を得た。

試験例６
実施例８、２１〜３０、比較例９、１２、１６〜１８で得られた各測定試料と、ＥＬＩＳＡキット〔アール・アンド・ディー・システムズ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）社製、商品名：ＶＥＧＦＥＬＩＳＡｋｉｔ〕とを用い、被験試料と７２時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量を測定した。

試験例６において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図７に示す。図中、レーン１は被験培地１０を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２１）、レーン２は被験培地１１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２２）、レーン３は被験培地１２を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２３）、レーン４は被験培地１３を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２４）、レーン５は被験培地１４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２５）、レーン６は被験培地１５を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２６）、レーン７は被験培地１６を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２７）、レーン８は被験培地１７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２８）、レーン９は被験培地１８を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２９）、レーン１０は被験培地１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例３０）、レーン１１は被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例８）、レーン１２は対照培地（ダルベッコ改変イーグル培地）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例９）、レーン１３は被験培地１９を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１６）、レーン１４は被験培地２０を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１７）、レーン１５は被験培地９を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１２）、レーン１６は被験培地２１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例１８）を示す。

図７に示された結果から、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有する被験培地４、１０〜１８および１を用いた場合の血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例８、２１〜３０）は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分を含有しない培地（対照培地、被験培地９、被験培地１９、被験培地２０および被験培地２１）を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（比較例９、１２、１６〜１８）と比べ、著しく増加していることがわかる。さらに、図７に示された結果と図５に示された結果を比較すると、レピディウムメイエニイワルプ由来成分と７２時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分と２４時間接触させたときの毛乳頭細胞による血管内皮細胞増殖因子の産生量よりも顕著に増加していることがわかる。

つぎに、図７に示された結果において、被験培地１１、１４および１７それぞれに含まれるレピディウムメイエニイワルプ由来乾燥残分の量を被験培地４のレピディウムメイエニイワルプ由来乾燥残分の量と同量となるように設定し、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた。

試験例６において、被験試料の種類と血管内皮細胞増殖因子の産生量との関係を調べた結果を図８に示す。図中、レーン１は被験培地１１を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２２）、レーン２は被験培地１４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２５）、レーン３は被験培地１７を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例２８）、レーン４は被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量（実施例８）を示す。

図８に示された結果から、被験培地４を用いたときの血管内皮細胞増殖因子の産生量が最も多く、被験培地１７、被験培地１１および被験培地１４の順で、血管内皮細胞増殖因子の産生量が減少することがわかる。これらの結果から、血管内皮細胞増殖因子の産生促進効果を発揮する成分は、レピディウムメイエニイワルプ由来成分中における加水分解されない成分に含まれていることが示唆される。

以上説明したように、レピディウムメイエニイワルプ由来成分によれば、血管内皮細胞増殖因子の産生を促進させることができることから、血管内皮細胞増殖因子を増加させて血管内皮細胞増殖因子を介する血管の形成を促進することが期待される。そのため、前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分を有効成分として含有する血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを効果的に改善することが期待される。したがって、本発明の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤は、血管内皮細胞増殖因子の減少に起因する生理現象、血管内皮細胞増殖因子の増加によって状態の改善が期待される生理的状態などを改善するための化粧品、医薬品、医薬部外品、飲食品などに好適に用いることができる。

Claims

血管内皮細胞増殖因子の産生を促進するための促進剤であって、レピディウムメイエニイワルプ（ＬｅｐｉｄｉｕｍｍｅｙｅｎｉｉＷａｌｐ．）由来成分を有効成分として含有しており、
前記促進剤を被験試料として用い、当該被験試料の存在下に培養して得られた培養物中における血管内皮細胞増殖因子の含有量Ａと、被験試料の非存在下に培養して得られた培養物中における血管内皮細胞増殖因子の含有量Ｂとの比（含有量Ａ／含有量Ｂ）が２／１以上である、又は、
前記促進剤を被験試料として用い、当該被験試料の存在下に培養して得られた細胞の核酸中における血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸の含有量ａと、被験試料の非存在下に培養して得られた細胞の核酸中における血管内皮細胞増殖因子をコードする核酸の含有量ｂとの比（含有量ａ／含有量ｂ）が１．２／１以上であることを特徴とする血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤。
前記レピディウムメイエニイワルプ由来成分が、レピディウムメイエニイワルプの植物体、前記植物体の一部およびレピディウムメイエニイワルプ抽出物からなる群より選ばれた少なくとも１種である請求項１に記載の血管内皮細胞増殖因子の産生促進剤。