JP6501913B2

JP6501913B2 - 慢性創傷治療用の組成物、その製造方法及びそれを用いた慢性創傷治療用のドレッシング材

Info

Publication number: JP6501913B2
Application number: JP2017556937A
Authority: JP
Inventors: ジョンキム，ヒュン; ギュパク，イル; ジンチョ，ワン; ヨルチェ，ファン; ジュカン，ヨン
Original assignee: ジェネウェルシーオー．，エルティーディー．
Priority date: 2015-04-30
Filing date: 2015-05-04
Publication date: 2019-04-17
Anticipated expiration: 2035-05-04
Also published as: CN107708722A; KR101777910B1; JP2018515478A; KR20160129459A; WO2016175358A1

Description

本発明は、多重成長因子を搭載可能な高分子複合体で構成される慢性創傷治療用の組成物、その製造方法及びそれを用いた慢性創傷治療用のドレッシング材に係り、さらに詳しくは、複合疾患である慢性創傷において、単一成長因子よりも治療効果を高めることができる慢性創傷治療用の組成物、その製造方法及びそれを用いた慢性創傷治療用のドレッシング材に関する。

高齢化社会への変化、医療技術の発展、期待余命の延長、生活習慣等の変化により、高血圧、糖尿病等のような慢性疾患の発生率が全世界的に増加する傾向にある。慢性疾患によって引き起こされた創傷は、急性創傷に比べて、回復速度が遅く、治癒され難いと知られている。床ずれ、慢性潰瘍（下腿潰瘍、糖尿病性足部潰瘍）等の慢性創傷では、成長因子の発現が減少していることが多いので、以前から、慢性創傷の治癒を誘導するために成長因子を用いることが仮説として立てられており、多くの研究が進行され、その一部は商品化され、臨床的に用いられている。また、上皮細胞成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）と線維芽細胞成長因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）を成分とした製品が市販されているが、このような成長因子製品の場合、高価であり、凍結保存のため、使い勝手が悪く、凍結した製品を融解して用いると、生体活性が低下するという短所があった。また、創傷に成長因子製品を使用した後、二次的に創傷被覆材を用いることにより、成長因子の殆どが創傷被覆材に吸収されてしまい、効果が落ちるという問題点があった。
前記成長因子の効果を高めるために、特許文献１には、ポリビニルアルコールハイドロゲルを用いて、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）を安定化させることにより、持続力を向上させる方法が開示されている。しかしながら、このような方法は、成長因子が水溶液状態で保管されなければならないので、活性が落ちる恐れが高く、安定性が大いに向上することは困難であった。
また、特許文献２には、線維芽細胞成長因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）をカルボキシ多糖類との共有結合を形成する方法が開示されており、特許文献３には、ヘパリン模倣高分子（ｈｅｐａｒｉｎｍｉｍｉｃｋｉｎｇｐｏｌｙｍｅｒ）に塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）との共有結合を形成させ、成長因子の安定性を向上させる方法が開示されている。
しかしながら、上記した特許文献等は、単一成長因子との結合のみに限られているため、多様な成長因子を要する慢性創傷等の複合疾患を治療するのには困難があった。

日本国登録特許第３７６１８１６号公報米国公開特許第２０１３‐０５４３００号公報米国公開特許第２０１４‐０３３５０４５号公報

本発明は、このような問題を解決するためになされたもので、その目的は、多重成長因子が安定的に結合し、慢性創傷にさらに効果的に作用する慢性創傷治療用の組成物及びその製造方法を提供することである。
また、本発明の他の目的は、前記組成物を用いた慢性創傷治療用のドレッシング材を提供することである。
本発明の上記目的及びその他の目的は、後述する本記載内容により全て達成され得る。

上記目的を達成するために、本発明は、多重成長因子を有効成分とし、アニオン系高分子、カチオン系高分子及び架橋剤を含む慢性創傷治療用の組成物及びその製造方法を提供する。
また、本発明は、前記組成物を用いた慢性創傷治療用のドレッシング材を提供する。

本発明によれば、創傷部位において、７日以上分解され難い持続的な効果を有し、体外での細胞培養と移植後の組織再生に適合した物性を有する慢性創傷治療用の組成物、その製造方法及びそれを用いた慢性創傷治療用のドレッシング材を提供することができる。

実施例１乃至３及び比較例１で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスの生分解性評価の結果を示すグラフである。実施例１乃至３及び比較例１、４、５、６で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスに含まれた成長因子のインビトロ放出挙動を測定した結果を示すグラフである。実施例３及び比較例１乃至６で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスの慢性創傷治癒性能を評価した結果を示すグラフである。

以下、本発明の好適な実施例について詳述する。
本発明に係る慢性創傷治療用の組成物、その製造方法及びそれを用いた慢性創傷治療用のドレッシング材は、多重成長因子を有効成分とし、アニオン系高分子、カチオン系高分子及び架橋剤を含むことを特徴とする。
成長因子は、約２０種のアミノ酸の種類及び配列によって、正電荷と負電荷が等しくなる等電点（ＩｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃＰｏｉｎｔ、ＰＩ）が異なるので、中性溶液において、等電点によって成長因子がそれぞれ異なる電荷を帯びることになる。例えば、ＥＧＦは、ＰＩ値が約４．５〜６を示し、ｐＨ７の溶液において負電荷を有し、ＦＧＦは、ＰＩ値が約９〜１１を示し、ｐＨ７の溶液において正電荷を有する。負電荷を帯びる成長因子は、ＣОО⁻基（−ＣОО⁻）が形成され、ＮＨ_３ ^＋基（−ＮＨ_３ ^＋）を有するカチオン系高分子とイオン結合し、正電荷を帯びる成長因子は、ＮＨ_３ ^＋基が形成され、ＣОО⁻基を形成する高分子とイオン結合する。

前記アニオン系高分子は、一例として、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロース（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ペクチン（Ｐｅｃｔｉｎ）、カラギーナン（Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、アルギン酸（Ａｌｇｉｎａｔｅ）、硫酸コンドロイチン（ＣｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎＳｕｌｆａｔｅ）、硫酸デキストラン（ＤｅｘｔｒａｎＳｕｌｆａｔｅ）、カラゲナン（Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、ポリアクリレート（Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｔｅ）、ポリメタクリル酸（Ｐｏｌｙｍｅｔｈａｃｒｙｌｉｃａｃｉｄ）、ポリメタクリルレート（ｐｏｌｙｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）、ポリアクリル酸（Ｐｏｌｙａｃｒｙｌｉｃａｃｉｄ）、ポリスルホン酸（Ｐｏｌｙｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ）、ポリりん酸（Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）、及びこれらの塩化合物からなる群より選ばれた１種以上であってもよく、好ましくは、ヒアルロン酸、アルギン酸、またはこれらの混合物であってもよい。
前記アニオン系高分子は、一例として、重量平均分子量が１０，０００〜５，０００，０００ｇ／ｍｏｌ、５０，０００〜４，５００，０００ｇ／ｍｏｌ、または１００，０００〜４，０００，０００ｇ／ｍｏｌであり、この範囲内で架橋剤による架橋効果がある。
前記アニオン系高分子は、３９．８〜９８．９重量％、４４．６〜９４．０重量％、または４９．４〜８９．０重量％で含まれてもよく、この範囲内で、マトリックスの表面を均一に形成することができる効果がある。

前記カチオン系高分子は、一例として、コラーゲン（Ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎ）、キチン（Ｃｈｉｔｉｎ）、キトサン（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）、フィブリン（Ｆｉｂｒｉｎ）、ポリエチレンイミン（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ）、ポリエチレンイミン誘導体、ポリプロピレンイミン（Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ）、ポリプロピレンイミン誘導体、ポリリジン（Ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、プロタミン（Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ）、ポリアミドアミン（ｐｏｌｙａｍｉｄｅａｍｉｎｅ）、ポリブレン（Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ）、及びこれらの塩化合物からなる群より選ばれた１種以上であってもよく、好ましくは、コラーゲン、キトサン、またはこれらの混合物である。
前記カチオン系高分子は、一例として、重量平均分子量が１，０００〜５００，０００ｇ／ｍｏｌ、５，０００〜４５０，０００ｇ／ｍｏｌ、または１０，０００〜４００，０００ｇ／ｍｏｌであり、この範囲内で架橋剤による架橋効果がある。
前記カチオン系高分子は、０．９〜５９．９重量％、４．９〜５４．９重量％、または９．９〜４９．０重量％で含まれてもよく、この範囲内で細胞成長を増加させる効果がある。

前記アニオン系高分子及び前記カチオン系高分子は、一例として、重量比が５０〜９５：５０〜５、６０〜９０：４０〜１０、または６５〜８５：３５〜１５であり、この範囲内で、アニオン系及びカチオン系高分子で構成された支持体の物理的強度に優れ、ドレッシング材としての使用が適しており、取扱いが容易であるという効果がある。
前記アニオン系高分子、カチオン系高分子及び架橋剤により、架橋支持体、すなわち架橋マトリックスが製造され、この場合、安全性に優れ、複合疾患の治療に有用であるという効果がある。
前記アニオン系及びカチオン系高分子は、前記架橋剤により架橋され、体内安全性が大いに向上する。前記アニオン系高分子及びカチオン系高分子の混合溶液に架橋剤を混合し、一定の大きさの型枠に入れて凍結乾燥した後、洗浄過程を経て架橋マトリックスに製造し、またはアニオン系及びカチオン系高分子で構成された支持体を製造してから、架橋剤溶液に浸漬して架橋した後、洗浄過程を経て架橋マトリックスに製造することができる。

前記架橋剤は、一例として、エチレングリコールジグリシジルエーテル（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ；ＥＧＤＧＥ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ；ＢＤＤＥ）、ヘキサンジオールジグリシジルエーテル（１，６‐ｈｅｘａｎｄｉｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ）、プロピレングリコールジグリシジルエーテル（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ）、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル（Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ）、ジグリセロールポリグリシジルエーテル（ｄｉｇｌｙｃｅｒｏｌｐｏｌｙｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ）、ＥＤＣ（１‐エチル‐３‐（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）、及びヘキサメチレンジイソシアネート（Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉｉｓｏｃｙａｎａｔｅ；ＨＭＤＩ）からなる群より選ばれた１種以上である。
前記架橋剤は、０．０９９〜４０．９３重量％、０．４９６〜３７．４９重量％、または０．９８〜３３．３３重量％で含まれてもよく、この範囲内で、体液に溶解されず、体液を吸収することができ、創傷から発生する滲出物を吸収する効果がある。

前記多重成長因子は、２種類以上の成長因子を称する用語である。
前記多重成長因子は、一例として、上皮細胞成長因子（ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）、形質転換成長因子（ＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＴＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＶＥＧＦ）、コロニー刺激因子（ＣｏｌｏｎｙＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒ；ＣＳＦ）、及び血小板由来増殖因子（ＰｌａｔｅｌｅｔＤｅｒｉｖｅｄＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＰＤＧＦ）からなる群より選ばれた２種以上を含んでもよく、好ましくは、ＥＧＦ及びＦＧＦであり、この場合、創傷部位において持続的な効果を有し、体外での細胞培養と移植後の組織再生に優れた効果がある。
前記多重成長因子は、０．０００５８〜０．１７５重量％、０．００３〜０．１５６重量％、または０．００６〜０．１３３重量％で含まれてもよく、この範囲内で慢性創傷への治療効果に優れる。

前記多重成長因子は、両成長因子間の混合比が、一例として、１〜９：９〜１、２〜８：８〜２、または３〜７：７〜３であり、この範囲内で慢性創傷への治療効果に優れる。
前記多重成長因子、特にＥＧＦ及びＦＧＦが搭載された架橋マトリックスは、創傷部位に成長因子が持続的に作用するように水和状態を維持し、７日以上創傷部位に存在する効果がある。

前記慢性創傷治療用の組成物は、安定化剤、賦形剤、等張化剤、保湿剤、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、抗菌剤、及び抗炎症剤からなる群より選ばれた１種以上をさらに含んでもよい。
本発明に係る慢性創傷治療用の組成物は、ドレッシング材として用いられ得る。

本発明に係る慢性創傷治療用組成物の製造方法は、蒸留水に酸成分を加え、ｐＨ３．０〜５．０に調節した後、カチオン系高分子を投入し、混合溶液（Ｉ）を製造する段階と、前記混合溶液（Ｉ）に塩基成分を投入し、ｐＨ６．０〜８．０に調節した後、アニオン系高分子を投入し、混合溶液（2）に製造する段階と、前記混合溶液（2）に架橋剤を混合し、架橋して架橋マトリックスに製造する段階と、前記架橋マトリックスに多重成長因子を投入して凍結した後、凍結乾燥し、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造する段階と、を含む。

前記多重成長因子は、一例として、上皮細胞成長因子（ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）、形質転換成長因子（ＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＴＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＶＥＧＦ）、コロニー刺激因子（ＣｏｌｏｎｙＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒ；ＣＳＦ）、及び血小板由来増殖因子（ＰｌａｔｅｌｅｔＤｅｒｉｖｅｄＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＰＤＧＦ）からなる群より選ばれた２種以上を含んでもよく、好ましくはＥＧＦ及びＦＧＦであり、この場合、創傷部位において持続的な効果を有し、体外での細胞培養と移植後の組織再生に優れた効果がある。

前記混合溶液（Ｉ）を製造する段階においてカチオン系高分子を、前記混合溶液（2）を製造する段階においてアニオン系高分子を含み、混合後、ホモジナイザーにてホモジナイズする。
前記酸成分は、塩酸、硫酸、リン酸、及び硝酸からなる群より選ばれた１種以上であってもよい。
前記塩基性成分は、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、及び水酸化アンモニウムからなる群より選ばれた１種以上であってもよい。
前記アニオン系高分子は、一例として、濃度４〜１０ｍｇ／ｇ、４．５〜９．５ｍｇ／ｇ、または５〜９ｍｇ／ｇで含まれ、この範囲内で、マトリックスの表面を均一に形成する効果がある。
前記カチオン系高分子は、一例として、濃度０．１〜６ｍｇ／ｇ、０．５〜５．５ｍｇ／ｇ、または１〜５ｍｇ／ｇで含まれ、この範囲内で細胞成長を増加させる効果がある。
前記アニオン系高分子及び前記カチオン系高分子は、重量比が５０〜９５：５０〜５，６０〜９０：４０〜１０、または６５〜８５：３５〜１５であり、この範囲内で、アニオン系及びカチオン系高分子で構成された支持体の物理的強度に優れ、ドレッシング材としての使用が適しており、取扱いが容易であるという効果がある。

前記混合溶液（2）に架橋剤を混合し、２５〜３５℃で３〜２４時間の間、架橋して架橋マトリックスを製造する。
前記架橋剤は、一例として、濃度０．０１〜７ｍｇ／ｇ、０．５〜６ｍｇ／ｇ、または０．１〜５ｍｇ／ｇで含まれ、この範囲内で、体液に溶解されず、体液を吸収することができ、創傷から発生する滲出物を吸収する効果がある。

前記架橋マトリックスに多重成長因子を投入し、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造する。
前記多重成長因子は、一例として、濃度０．１〜３０μｇ／ｇ、０．５〜２５μｇ／ｇ、または１．０〜２０μｇ／ｇで含まれ、この範囲内で慢性創傷への治療効果に優れる。
前記多重成長因子の両成長因子間の重量比は、一例として、１〜９：９〜１、２〜８：８〜２、または３〜７：７〜３であり、この範囲内で慢性創傷への治療効果に優れる。
前記成長因子が搭載された架橋マトリックスを一定形態の型枠に注入後、−８５℃〜−７５℃で４〜１２時間の間凍結した後、凍結乾燥器において、温度−４０〜−１０℃で１２〜３５時間の間乾燥する。

以下、本発明の理解を助けるために好適な実施例を提示するが、これらの実施例は本発明を例示するものに過ぎず、本発明の範疇及び技術思想の範囲内で種々の変更及び修正を加えることが可能であることは当業者にとって明らかであり、これらの変形及び修正が添付の特許請求の範囲に属することも当然のことである。

実施例１
蒸留水１００ｍｌに塩酸または硫酸を加え、ｐＨ４．０にし、コラーゲン（重量平均分子量：３００，０００ｇ／ｍｏｌ）を、酸水溶液基準に濃度１ｍｇ／ｇとなる量で混合し、ホモジナイザーを用いて混合溶液（Ｉ）を製造した。前記混合溶液（Ｉ）に水酸化ナトリウムを投入し、ｐＨ７．０〜８．０に調節した後、ヒアルロン酸（重量平均分子量：１，５００，０００ｇ／ｍｏｌ）を、酸水溶液基準に濃度９ｍｇ／ｇとなる量で混合し、ホモジナイザーを用いて混合溶液（2）を製造した。前記混合溶液（2）に架橋剤として１，４‐ブタンジオールジグリシジルエーテルを濃度５ｍｇ／ｇ（固形粉に対して）で混合し、３０℃で１２時間の間架橋させ、架橋マトリックスを製造した。前記架橋マトリックスに、ＥＧＦとＦＧＦを、５：５の重量の割合で合計５μｇ／ｇとなる量で投入して混合した後、一定形態の型枠に注入した。前記型枠を−８０℃で６時間の間凍結した後、凍結乾燥器において、温度−２０℃で２４時間の間乾燥し、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

実施例２
前記実施例１において、コラーゲンを最終濃度に対して２ｍｇ／ｇとなる量で、またヒアルロン酸を最終濃度に対して８ｍｇ／ｇとなる量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

実施例３
前記実施例１において、コラーゲンを最終濃度に対して５ｍｇ／ｇとなる量で、またヒアルロン酸を最終濃度に対して５ｍｇ／ｇとなる量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

実施例４
前記実施例１において、架橋剤として１，４‐ブタンジオールジグリシジルエーテルの代わりに、ＥＤＣを用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

実施例５
前記実施例１において、架橋剤として１，４‐ブタンジオールジグリシジルエーテルの代わりに、ＨＭＤＩを用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

比較例１
前記実施例１において、架橋剤を用いていないことを除いては、前記実施例１と同様にして、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

比較例２
前記実施例１において、ＥＧＦ単独で５μｇ／ｇとなるような量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

比較例３
前記実施例１において、ＦＧＦ単独で５μｇ／ｇとなるような量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

比較例４
前記実施例１において、ヒアルロン酸とコラーゲンの代わりに、デキストランを１ｍｇ／ｇとなる量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

比較例５
前記実施例１において、ヒアルロン酸とコラーゲンの代わりに、ヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｇとなる量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

比較例６
前記実施例１において、ヒアルロン酸とコラーゲンの代わりに、コラーゲンを１０ｍｇ／ｇとなる量で用いることを除いては、前記実施例１と同様にして、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造した。

実験例
実験例１．多重成長因子が搭載された架橋マトリックスの生分解性の評価
実施例１、２、３及び比較例１で製造した多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを、２×２ｃｍの大きさに切り出した後、ディッシュに入れた。ここに、ヒアルロニダーゼ（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ）２００Ｕｎｉｔとコラゲナーゼ（Ｃｏｌｌａｇｅｎa s e）２００Ｕｎｉｔを投入したリン酸緩衝液（ＰＢＳ）２０ｍｌを前記ディッシュに入れ、３７℃、５０ｒｐｍで保管し、１、３、７、１４、２１日となる時点で、多重成長因子が搭載された架橋マトリックスの変化した大きさを測定し、図１に示した。
実験の結果、架橋されていないマトリックス（比較例１）は、速く分解され、１日以前に全て分解されたが、架橋された多重成長因子が搭載された架橋マトリックス（実施例１〜３）は、７日以上維持されることが確認された。

実験例２．架橋形成度の評価
架橋形成度を吸収能を通じて評価した。実施例３〜５で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを一定の大きさに切り出し、初期重量を測定した後、ディッシュに入れ、蒸留水を充分に吸収させた後の重量を測定した。吸収能は、下記の式１によって計算し、その結果を表１に示す。
（式１）
吸収能＝（蒸留水吸収後の重量（ｍｇ）−初期重量（ｍｇ））／初期重量（ｍｇ）

実験の結果、実施例３〜５は、水分により溶け難く、水分を吸収することが確認された。したがって、本発明の組成物は、創傷面で安定した形態で維持され、滲出物の吸収及び水分環境を維持することができ、慢性創傷の回復に有利な環境を提供することができる。
これに対して、架橋剤が用いられなかった比較例１は、水に直ちに溶解されてしまい、測定が不可能であった。

実験例３．多重成長因子の安全性の評価
実施例１、２及び３と比較例１、４、５及び６で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスに含まれた成長因子のインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）放出挙動を測定した。実施例１と比較例１、４、５及び６で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスを直径３０ｍｍの円形に切り出し、フランツセル（ＦｒａｎｚＣｅｌｌ）に装着した。フランツセルにリン酸緩衝液１４ｍｌを満たし、３７℃で５０ｒｐｍで撹拌した。１、３、７、１４、２１、２８日目に１ｍｌをサンプリングし、リン酸緩衝液１ｍｌをさらに投入した。
ＥＬＩＳＡｋｉｔでＥＧＦ、ＦＧＦの定量分析を行い、その結果を図２に示す。

実験の結果、実施例１で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスは、比較例１、４、５及び６で製造されたマトリックスに比べて、成長因子が長期間持続的に放出されることが確認された。このため、本発明に係る組成物は、成長因子の持続性を向上させることにより、慢性創傷においてより効果的に作用し、創傷の回復速度を向上させることができる。

実験例４．慢性創傷動物モデルでの創傷治癒性能の評価
実施例３及び比較例１〜６で製造された多重成長因子が搭載された架橋マトリックスの慢性創傷治癒性能を評価した。慢性創傷モデルを具現するために、ストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ；ＳＴＺ）を用いた１型糖尿病モデルを開発し、１型糖尿病モデルを誘導するために、６週齢マウスを１週間安定化させてから、１２時間節食後、ＳＴＺを２００ｍｇ/ｋｇで腹腔内注射した。注射後、１週間の間、毎日血糖を測定して、糖尿病が誘発された実験動物を選別し、背中部位の中央に直径１ｃｍの深傷（ｄｅｅｐｗｏｕｎｄ；筋膜層まで除去）を誘発した後、創傷収縮（ｗｏｕｎｄｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ）を防ぐために、シリコンリングを用いて縫合糸で縫合した後、傷の大きさを測定した。７日と１４日後、創傷の面積変化率により治癒性能を評価し、その結果を図３に示す。

実験の結果、多重成長因子（ＥＧＦ、ＦＧＦ）がマトリックスと安定的に結合した実施例３において、最も速い創傷回復速度を示した。時間の経過にもかかわらず、多重成長因子が持続的に放出され、１４日では、実施例３が比較例１〜６に比べて創傷面積が顕著に減少した。
したがって、多重成長因子は、カチオン系及びアニオン系高分子とのイオン結合により持続性を向上させ、単一成長因子に比べて、多重成長因子が慢性創傷における創傷の回復速度を増加させることができる。

Claims

多重成長因子を有効成分とし、アニオン系高分子、カチオン系高分子及び架橋剤を含むことを特徴とする慢性創傷治療用の組成物であって、
前記多重成長因子は、上皮細胞成長因子（ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）及び線維芽細胞成長因子（ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）であり、前記両成長因子間の混合比が３〜７：７〜３であり、
前記架橋剤は、ブタンジオールジグリシジルエーテル（英語表記及び略語は１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ；ＢＤＤＥ）及びＥＤＣ〔化学名は１‐エチル‐３‐（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド〕からなる群より選ばれた１種以上であり,
前記架橋剤は、慢性創傷治療用の組成物内に０．９８〜３３．３３重量％で含むことを特徴とする慢性創傷治療用の組成物。
多重成長因子０．０００５８〜０．１７５重量％、アニオン系高分子３９．８〜８９．０重量％、カチオン系高分子０．９〜５４．９重量％、及び架橋剤０．９８〜３３．３３重量％を含むことを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記アニオン系高分子は、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロース（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ペクチン（Ｐｅｃｔｉｎ）、カラゲニン（ｃａｒｒａｇｅｅｎｉｎ）、アルギン酸（Ａｌｇｉｎａｔｅ）、硫酸コンドロイチン（ＣｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎＳｕｌｆａｔｅ）、硫酸デキストラン（ＤｅｘｔｒａｎＳｕｌｆａｔｅ）、カラゲナン（Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）、ポリアクリレート（ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｔｅ）、ポリメタクリル酸（Ｐｏｌｙｍｅｔｈａｃｒｙｌｉｃａｃｉｄ）、ポリメタクリルレート（ｐｏｌｙｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）、ポリアクリル酸（Ｐｏｌｙａｃｒｙｌｉｃａｃｉｄ）、ポリスルホン酸（Ｐｏｌｙｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ）、ポリりん酸（Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）、及びこれらの塩化合物からなる群より選ばれた１種以上であることを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記アニオン系高分子は、重量平均分子量が１０，０００〜５，０００，０００ｇ／ｍｏｌであることを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記カチオン系高分子は、コラーゲン（Ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎ）、キチン（Ｃｈｉｔｉｎ）、キトサン（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）、フィブリン（Ｆｉｂｒｉｎ）、ポリエチレンイミン（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ）、ポリエチレンイミン誘導体、ポリプロピレンイミン（Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ）、ポリプロピレンイミン誘導体、ポリリジン（Ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、プロタミン（Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ）、ポリアミドアミン（ｐｏｌｙａｍｉｄｅａｍｉｎｅ）、ポリブレン（Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ）、及びこれらの塩化合物からなる群より選ばれた１種以上であることを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記カチオン系高分子は、重量平均分子量が１，０００〜５００，０００ｇ／ｍｏｌであることを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記アニオン系高分子及び前記カチオン系高分子は、重量比が５０〜９５：５０〜５であることを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記アニオン系高分子とカチオン系高分子は、前記架橋剤で架橋され、架橋支持体を形成することを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
前記組成物に、安定化剤、賦形剤、等張化剤、保湿剤、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、抗菌剤、及び抗炎症剤からなる群より選ばれた１種以上をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の慢性創傷治療用の組成物。
請求項１乃至請求項９のいずれか一項に記載の慢性創傷治療用の組成物がドレッシング材として用いられることを特徴とする慢性創傷治療用の組成物。
蒸留水に酸成分を加え、ｐＨ３．０〜５．０にした後、カチオン系高分子を投入し、混合溶液（Ｉ）を製造する段階と、
前記混合溶液（Ｉ）に塩基成分を投入し、ｐＨ６．０〜８．０に調節した後、アニオン系高分子を投入し、混合溶液（2）に製造する段階と、
前記混合溶液（2）に架橋剤を混合し、架橋して架橋マトリックスに製造する段階と、
前記架橋マトリックスに多重成長因子を投入して凍結した後、凍結乾燥し、成長因子が搭載された架橋マトリックスを製造する段階と、を含むことを特徴とする慢性創傷治療用組成物の製造方法であって、
前記アニオン系高分子は、濃度が５〜９ｍｇ／ｇであり、
前記カチオン系高分子は、濃度が１〜５ｍｇ／ｇであり、
前記架橋剤は、ブタンジオールジグリシジルエーテル（１，４‐ｂｕｔａｎｄｉｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ；ＢＤＤＥ）及びＥＤＣ〔１‐エチル‐３‐（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド〕からなる群より選ばれた１種以上であり、
前記架橋剤は、濃度が０．１〜５ｍｇ／ｇであり、
前記多重成長因子は、濃度が１〜２０μｇ／ｇであり、
前記多重成長因子は、上皮細胞成長因子（ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）及び線維芽細胞成長因子（ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）であり、前記両成長因子間の混合比が３〜７：７〜３であることを特徴とする慢性創傷治療用組成物の製造方法。
前記酸成分は、塩酸、硫酸、リン酸、及び硝酸からなる群より選ばれた１種以上であり、前記塩基性成分は、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、及び水酸化アンモニウムからなる群より選ばれた１種以上であることを特徴とする請求項１１に記載の慢性創傷治療用組成物の製造方法。