JP6002734B2 - 化粧品 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その内容が参照により本明細書中に援用される２０１２年１月２３日に出願された米国仮出願第６１／５８９，５９２の優先権利益を主張する、非仮出願である。

本発明は、一般に、化粧品とその構成要素に関し、および特に、皮膚の質を高めるために有用な、卵孵化タンパク質抽出物およびその製剤を含む化粧品に関する。

従来の化粧品製剤は、風化効果を和らげるために保護コーティングを皮膚上に処方する、油類および様々な脂溶性物質を含んでいる。化粧品中の日焼け止めの含有もまた、老化およびフリーラジカル産生と関連する皮膚への紫外線ダメージを和らげる。化粧品組成物に慣習的な他の構成要素は、かなりの量の水を皮膚に運ぶ皮膚軟化剤であり、それは油類と混合されて、しわを隠すために、皮膚から放出または保持される水分量に影響を及ぼす。残念ながら、そのような従来の化粧品製剤は、皮膚の質の、長期の化学的改善をもたらすことができなかった。

冷水に長期間曝されてさえ並外れた皮膚の質を有する手をした養魚場の作業員の観察は、魚卵と関連する新種のタンパク質の単離の始まりであった。そのようなタンパク質は、例えば、Ｕ．Ｓ．６，３４６，２４５；６，５９２，８６６；Ｕ．Ｓ．２０１１／０２８０８８２；ＷＯ２０１１／０６４３４；およびＵ．Ｓ．２００９／０２７４７７０に詳述されている。そのように単離されたタンパク質は、ゾナーゼ（ｚｏｎａｓｅ）、ロイコレクチン（ｌｅｕｋｏｌｅｃｔｉｎ）、強酸性タンパク質（ＶＡＰＳ）およびコロエリシン（ｃｈｏｒｏｅｌｙｓｉｎ）を含んだ。これらのタンパク質の少なくともいくつかは、自己免疫疾患および炎症性疾患、ならびに損傷皮膚の治療において、全て最小限の副作用で効果的である。そのようなタンパク質は、風化および、空調設備または大気汚染物質への曝露のような様々な環境ストレスと関連する損傷皮膚の機能を改善したが、これらのタンパク質は、損傷皮膚および老化皮膚に関連する他の特性に対しては、わずかな効果があるか、または効果がないように思われる。加えて、化粧品でのそのような魚卵単離タンパク質の含有が検討されたが、タンパク質活性を維持して化粧品製剤での保管安全性をもたらす能力は、技術的挑戦を示す。

このように、卵、および特に、魚卵由来のタンパク質の抗炎症特性を組み込みながら、多様な皮膚老化を治療する、保管安定性のある化粧品の必要性が存在する。皮膚および体内蓄積の問題に対する予期せぬ有害な影響を有する合成の化粧品構成要素が実質的に不在の、そのような化粧品の必要性がさらに存在する。

哺乳類の皮膚に対して抗炎症効果を有する魚卵タンパク質単離物を含む組成物が提供される。不飽和脂肪酸およびステロール類を含む天然物抽出物も提供される。天然物抽出物は抗酸化活性を有する。単離物と抽出物の混合物を形成するために、乳化剤または可溶化剤、またはそれらの組み合わせが提供される。哺乳類の皮膚に対して抗炎症効果を有する卵孵化タンパク質単離物（ｅｇｇ ｈａｔｃｈｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｅ）を含む組成物もまた提供される。２０℃で３カ月の保管の間、卵孵化タンパク質単離物の活性を保護する少なくとも１つの殺生物剤が、保管後に対象の皮膚に適用される場合に、その活性を、製剤化されていない単離されたばかりのタンパク質の８０％は維持しながら、提供される。乳化剤は、卵孵化タンパク質単離物とともに混合物を形成し、それはｐＨ５．６〜７．９に緩衝化された水相を有する。皮膚の若返りを促進するための皮膚へのそれらの適用に関する説明書とともに、非滅菌、多用途パッケージ中に前述の組成物を含むキットが提供される。

哺乳類の皮膚に対して活性を有する卵孵化タンパク質単離物を含む化粧品を生産するための方法は、少なくとも１つの水相および少なくとも１つの疎水性相の形成を含む。乳化剤および少なくとも１つの殺生物剤は、少なくとも１つの水相および少なくとも１つの疎水性相のうちの少なくとも１つの中に存在する。少なくとも１つの水相および少なくとも１つの疎水性相は、エマルションを形成するために混合される。エマルションまたは少なくとも１つの水相は、エマルションへの卵孵化タンパク質単離物の添加の前に、ｐＨ５．５〜７．９に緩衝化される。

皮膚外観の改善を達成するために、哺乳類の皮膚に、皮膚１ｃｍ^２あたり１×１０^−６〜０．１ｍｇの単離物および２×１０^−７〜０．０２ｍｇの不飽和脂肪酸のレベルで、少なくとも１週間に３回、組成物を適用することを含む、皮膚外観を改善する方法が提供される。

本発明は、皮膚回復特性を有する化粧品としての有用性を有する。一実施態様では、本発明の化粧品は、様々な構成要素の間で相乗効果をもたらすように処方される。さらに別の実施態様では、本発明の化粧品組成物は、合成の構成要素が不存在で処方される。全実施態様における本発明の化粧品は、周囲温度でのおよび非滅菌処理と対象の使用による微生物汚染を通じた微生物チャレンジに応じた保管安定性を有しながら、タンパク質構成要素の活性を維持する。化粧品の使用および保管の条件下での、維持されたタンパク質活性および保管安定性のこれらの特性を有する化粧品製剤を与える処方の方法が提供される。

本発明によれば、卵孵化活性タンパク質、および特に、生きている哺乳類の皮膚に対して抗炎症効果を有する魚卵単離タンパク質は、不飽和脂肪酸および少なくとも１つのステロールを含む天然物抽出物と混合される。抽出物は同時に、抗酸化活性およびコラゲナーゼ阻害活性を有し、そして、タンパク質単離物および抽出物を含む混合物を安定化する乳化剤と混合される。組成要件および活性要件を達成するために、多様な抽出物が、場合により、同時に本発明中で用いられることが認められる。驚くことに、卵孵化タンパク質、および特に魚卵タンパク質および天然物抽出物の活性は、相乗的に作用して、コントロール製剤（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）中に単独で用いられるいずれかの成分に比べて、一部の本発明の実施態様において優れた皮膚外観を獲得し、一部の実施態様では皮膚の若返りを獲得することが見出されている。さらに他の実施態様では、２０℃での少なくとも３カ月の本発明の化粧品の保管安定性が、保管後に対象の皮膚に適用される場合のタンパク質構成要素の活性を、製剤化されておらず単離されたばかりのタンパク質の８０％は維持しながら、提供される。

魚卵タンパク質単離物は、例えば、ゾナーゼ、ロイコレクチン、またはそれらの組み合わせを含み、そして、Ｕ．Ｓ．６，３４６，２４５，ｃｏｌ．４ １５行目〜ｃｏｌ．５ ８行目；Ｕ．Ｓ．２００９／０２７４７７０Ａ１［０３２１］〜［０３２６］およびＵ．Ｓ．２０１１／０２８０８８２［０１５７］〜［０１９４］に詳述される特性；そのようなタンパク質を含む粗製抽出物；およびそれらの組み合わせを有する。タンパク質単離物のための魚卵の例示的な起源は、チョウザメ、サケ、ホワイトフィッシュ、シロマス、タラ、カラフトシシャモ、およびカワメンタイ由来の魚卵を含む。本明細書で有効な卵タンパク質の他の起源は、オタマジャクシ、およびサンショウウオのものなどの両生類卵嚢、爬虫類卵嚢、および鳥類卵嚢を含むことが認められる。典型的に、少なくともいくつかの上に列挙されたタンパク質を含む卵単離物、または特に、魚卵タンパク質単離物は、抽出物の０．０１〜１０％が活性タンパク質でありながら、本発明の化粧品製剤の０．０００１〜１０総重量％を占める。本発明の化粧品中に存在するタンパク質の量は、別の化粧品の他の構成要素との混和性、および皮膚ダメージの度合いを例示的に含む因子に依存することが認められる。

例えば、値の範囲が与えられる場合、この範囲は、明確にこの範囲内に含まれて、そしてこの範囲の最後の有効数字が変化するように、この範囲のエンドポイント値だけでなく、この範囲の中間値も含むことを意図することが理解されるべきである。例として、１〜４と挙げられた範囲は、１〜２、１〜３、２〜４、３〜４、および１〜４を含むことが意図される。

また、本発明の組成物は天然物抽出物も含む。天然物抽出物は、それぞれ、酸素ラジカル吸収能（ＯＲＡＣ）テストおよび天然物抽出物が１％で存在する培養培地中での脂質過酸化のトレーサーによって測定され、紫外線Ｂを１５０ミリジュール／ｃｍ^２の量で照射される際に、コントロールと比較して１０％よりも高い抗酸化活性およびコラゲナーゼ阻害活性をもたらす量で、不飽和脂肪酸およびステロールを含んでいる。Ｒ．Ｌ．Ｐｒｉｏｒ，ｅｔ ａｌ．Ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｌｉｃ ａｎｄ Ｌｉｐｏｐｈｉｌｌｉｃ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｃａｐａｃｉｔｙ（ｏｘｙｇｅｎ ｒａｄｉｃａｌ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｃａｐａｃｉｔｙ （ＯＲＡＣ_ＦＬ））ｏｆ Ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｓａｍｐｌｅｓ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．（２００３）５１：３２７３−３２７９。天然抽出物はしばしば、不飽和脂肪酸、１つまたは複数のステロール類、および異なる皮膚活性の他の構成要素の混合物を含むことが認められる。また、本発明の組成物で用いられる産物抽出物は、一部の実施態様では、コラゲナーゼ活性を阻害し、一部の実施態様では、以下の凍結皮膚スライスでのヒト生検に対する抗コラゲナーゼテストの目測のプロトコルにより、コントロール中０．１重量％抽出物に関するコントロールに対して測定されるときに、５％よりも多くコラゲナーゼ活性を阻害する：抽出物とともにおよび伴わずに、３７℃で３０分インキュベートした後、コラゲナーゼ無し（ネガティブコントロール）または１５マイクロリットル／ミリリットルのコラゲナーゼとともに３７℃で３時間のインキュベーションに続いて生検サンプルのリンスをして、その後に、マッソントリクローム（ｔｒｉｃｈｏｍｅ ｏｆ Ｍａｓｓｏｎ）の目測のための着色および顕微鏡観察がされる。一部の実施態様では、本発明の組成物で用いられる天然物抽出物は、オメガ−３、オメガ−６、およびオメガ−９脂肪酸のうちの少なくとも１つを含む。さらに他の実施態様では、不飽和脂肪酸は天然物抽出物中に、１００グラムの抽出物あたり少なくとも２０ミリグラムの量で存在する。また、本発明の天然物抽出物は、少なくとも一種のステロールを含み、ステロールは、コレステロール、カンペステロール、スチグマステロール、シトステロール、それらの水酸化型、およびそれらの組み合わせを例示的に含む。一部の実施態様では、少なくとも１つのステロールは、天然物抽出物中に、１００グラムの抽出物あたり５０ミリグラムより多い量で存在する。典型的に、天然物抽出物は、本発明の組成物中に、０．０１〜１０総重量％および一部の実施態様では０．１〜３総重量％で存在する。天然物抽出物の量を選択するのに決定的な因子は、化粧品の卵孵化タンパク質と卵孵化タンパク質存在下でのグルコシドの安定化、皮膚ダメージの度合い、および化粧品の保管寿命を例示的に含む。

本発明による天然物抽出物は、葉、茎、芽、根、果実、またはそれらの組み合わせなどの植物の一部を、親水性または疎水性のいずれかである第一溶媒で抽出して、そして、典型的に植物材料量に対して１〜２０容量である溶媒量で溶媒と１〜４８時間接触後に混合物を濾過するような従来技術によって、容易に形成される。低親水性の溶媒中での抽出および従来技術による溶出は、生産および本発明の天然物抽出物を可能にする。代表的な脂肪酸／ステロール抽出技術は、Ｊ．Ｓ．Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ａｎｄ Ａ．Ａ．Ｂｅｎｓｏｎ，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，５，１９６４，ｐｐ．４３２−４３６に見られる。有機溶媒はエーテル類、フラン類、石油蒸留物、アルカン類、ハロゲン化アルカン類、アルコール類、アセテート類、およびそれらの組み合わせを例示的に含む。典型的には２０分〜４８時間の十分な相間の相互作用後、有機相が分離されて本発明による抽出物が得られる。抽出物の適切な起源は、本明細書中で「海藻」と総称される紅藻類、緑藻類、褐藻類および房形成（ｔｕｆｔ−ｆｏｒｍｉｎｇ）シアノバクテリア、および植物、または、紫色、赤色、黒色、またはオレンジ色の果実または葉の着色を有する（葉の着色はクロロフィルの存在または不存在で測定される）それらの構成要素を含む。海藻は、高レベルの不飽和脂肪酸およびステロール類を有する本発明の天然物抽出物の一般的な起源を表す。合成および／または動物起源の不飽和脂肪酸およびステロール類は、本明細書の組成物中に容易に用いられることが認められる。

卵孵化タンパク質単離物および天然物抽出物に加えて、本発明の組成物は、一部の実施態様では、化粧品において一般的に用いられる１つまたは複数の他の構成要素を、これらの構成要素が卵孵化タンパク質単離物の特性を維持して天然物抽出物が維持されるという条件で含む。本明細書中で容易に処方される代表的な従来の化粧品の構成要素は、場合により本発明の化粧品の大部分の重量を占める脱イオン水；石油、ラノリン、セレシン、微結晶ワックス、カルナバワックス（ｃａｒｎｕｂａ ｗａｘ）、Ｃ_１０−Ｃ_３０脂肪酸、Ｃ_１０−Ｃ_３０アルコール類などの固体およびワックス類；オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、ヒマワリ油、ヘーゼルナッツ油、シアバター、およびサフラワー油などの油類；グアーガム、キサンタンガム、カラギーナン、ヒドロキシエチルセルロース、スクレロチウムガム、カルボマー類、ポリアクリレート類、およびアクリレート−Ｃ_１０−Ｃ_３０アルキルアクリレート共重合体などの粘度調整剤／安定剤；グリセリン、プロパンジオール、乳酸ナトリウム、ＰＣＡナトリウムなどの親水性保湿剤；ジカプリリルエーテル、ミリスチルミリステート、Ｃ_１０−Ｃ_３０カプレート類、カプリル酸および／またはカプリン酸を含むＣ_１０−Ｃ_３０トリグリセリド類、およびＣ_１０−Ｃ_３０グリセリド類などの皮膚軟化剤；セチルアルコール、ステアリルアルコール、グリセリルステレート、ステアリン酸、グリコールステレート、およびグリセリルジステアレートなどの共乳化剤；ラウロリルラクチレート、カプロイルラクチレート、ココイルラクチレート、ステアロイルラクチレート、セテアリルオリベート（ｏｌｉｖａｔｅ）、ソルビタンオリベート、グリセリルオレエートシトレートの塩類を例示的に含む非イオン性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤などの乳化剤であって、ここで典型的なカチオンは、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウムを含む；シリコーン油；無機添加物および無機色素などの着色剤；金属石鹸処理またはシリコーン処理された無機または有機色素および有機染料；非イオン性界面活性剤、ポリシロキサン類；水防腐剤；ｐＨ調節剤；ビタミン類およびビタミンＥ、ビタミンＫ、またはビタミンＢ複合体などのビタミン代謝物；精油；紫外線光吸収化合物；芳香剤；保湿剤；血流促進剤；冷覚誘導剤；制汗剤；活性剤（ａｃｔｉｖｅｓ）、および殺生物剤を例示的に含む。

本明細書において用いられる活性剤（ａｃｔｉｖｅ）とは、クレンジング、美容、魅力促進、または外観変化のためにヒト皮膚に適用される有機化合物であって、実際に化合物が極性または非極性であるかどうかにかかわらず、皮膚特性の改善に有効性のあるものとして定義される。本明細書において用いられるように、この用語は、卵孵化タンパク質、卵孵化タンパク質の混合物、および天然物抽出物を特に除外する。本明細書で有効な活性有機化合物は、ｍｕｓｈｒｏｏｍ ｍｐｏ Ｓｏｎｇｙｉ，Ａｃａｃｉａ ｆａｒｎｅｓｉａｎａ，Ｅｕｔｅｒｐｅ ｏｌｅｒａｃｅａ，Ｍａｌｐｉｇｈｉａ ｇｌａｂｒａ，Ｂｉｘａ ｏｒｅｌｌａｎａ，Ｐｒｕｎｕｓ ｄｕｌｃｉｓ，Ａｌｏｅ ｖｅｒａ，Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｍ，Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｃａｕｄａｔｕｓ，Ａｎｇｅｌｉｃａ ａｒｃｈａｎｇｅｌｉｃａ，Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌａ ａｎｉｓｕｍ，Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ，Ｍｅｎｔｈａ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ，Ｏａｔ ａｖｅｎａｎｔｈｒａｍｉｄｅ，Ｐｒｕｎｕｓ ａｒｍｅｎｉａｃａ，Ａｒｎｉｋａ ｍｏｎｔａｎａ，Ｃｙｎａｒａ ｓｃｏｌｙｍｕｓ，Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｐｅｒｓｅａ ａｍｅｒｉｃａｎａ，Ｃａｒｄｉｏｓｐｅｒｍｕｍ ｈａｌｉｃａｃａｂｕｍ，Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｂａｍｂｕｓａ ｖｕｌｇａｒｉｓ，Ｍｕｓａ ｐａｒａｄｉｓｉａｃａ，Ａｄａｎｓｏｎｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ，Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ，Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ，Ｌａｕｒｕｓ ｎｏｂｉｌｉｓ，Ｅｐｉｌｏｂｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ，Ａｌｌｉｕｍ ｕｒｓｉｎｕｍ，Ｇｅｕｍ ｕｒｂａｎｕｍ，Ｂｅｔｕｌａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ，Ｑｕａｓｓｉａ ａｍａｒａ，Ｎｉｇｅｌｌａ ｓａｔｉｖａ，Ｒｉｂｅｓ ｎｉｇｒｕｍ，Ｍｏｒｕｓ ｎｉｇｒａ，Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ，Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ，Ｉｒｉｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ，Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ，Ｂｏｒａｇｏ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｖｉｃｉａ ｆａｂａ，Ｍｅｎｙａｎｔｈｅｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ，Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ，Ａｒｃｔｉｕｍ ｌａｐｐａ，Ｒｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ，Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ，Ａｃｏｒｕｓ ｃａｌａｍｕｓ，Ｃａｒｕｍ ｃａｒｖｉ，Ｅｌａｔｔａｒｉａ ｃａｒｄａｍｏｍｕｍ，Ｄａｕｃｕｓ ｃａｒｏｔａ ｓａｔｉｖｕｓ，Ｅｒｙｔｈｒｏｘｙｌｕｍ ｃａｔｕａｂａ，Ｃｅｎｔａｕｒｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒａｅａ，Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ，Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ，Ｃｉｃｅｒ ａｒｉｅｔｉｎｕｍ，Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ，Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ，Ｃｉｎｃｈｏｎａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ，Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｖｅｒｕｍ，Ｓｙｚｙｇｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ，Ｃｏｃｏｓ ｎｕｃｉｆｅｒａ，Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ，Ｐｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓ ｂａｒｂａｔｕｓ，Ｔｕｓｓｉｌａｇｏ ｆａｒｆａｒａ，Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ，Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ，Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ，Ｚｅａ ｍａｙｓ，Ｐａｐａｖｅｒ ｒｈｏｅａｓ，Ｃｅｎｔａｕｒｅａ ｃｙａｎｕｓ，Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｅｒｂａｃｅｕｍ，Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ，Ｐｒｉｍｕｌａ ｖｅｒｉｓ，Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ，Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ，Ｃｕｒｃｕｍａ ｌｏｎｇａ，Ｂｅｌｌｉｓ ｐｅｒｅｎｎｉｓ，Ｒｏｓａ ｄａｍａｓｃｅｎａ，Ｔｕｒｎｅｒａ ｄｉｆｆｕｓａ，Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ，Ｐｈｏｅｎｉｘ ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ，Ｌａｍｉｕｍ ａｌｂｕｍ，Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ，Ｈｙｌｏｃｅｒｅｕｓ ｕｎｄａｔｕｓ，Ｄａｅｍｏｎｏｒｏｐｓ ｄｒａｃｏ，Ｅｃｈｉｎａｃｅａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ，Ｌｅｏｎｔｏｐｏｄｉｕｍ ａｌｐｉｎｕｍ，Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ，Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ，Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ ｅｍｂｌｉｃａ，Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｇｌｏｂｕｌｕｓ，Ｏｅｎｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ，Ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ ａｒｅｎａｒｉｕｍ，Ｅｕｐｈｒａｓｉａ ｒｏｓｔｋｏｖｉａｎａ，Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ，Ｆｉｃｕｓ ｃａｒｉｃａ，Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ，Ｐｌｕｍｅｒｉａ ａｌｂａ，Ｆｕｍａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｒｕｍｅｘ ａｃｅｔｏｓａ，Ｇａｒｄｅｎｉａ Ｙｅｓｓｍｉｎｏｉｄｅｓ，Ｇｅｎｔｉａｎａ ｌｕｔｅａ，Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ，Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ，Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ，Ｓｏｌｉｄａｇｏ ｖｉｒｇａｕｒｅａ，Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ，Ｃｉｔｒｕｓ ｐａｒａｄｉｓｉ，Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｐａｕｌｌｉｎｉａ ｃｕｐａｎａ，Ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆｌｏｓ，Ｃｏｒｙｌｕｓ ａｖｅｌｌａｎａ，Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｅｒｍｉｓ，Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｓａｂｄａｒｉｆｆａ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａ，Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ，Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ，Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ ａｒｖｅｎｓｅ，Ｓｅｍｐｅｒｖｉｖｕｍ ｔｅｃｔｏｒｕｍ，Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｃｅｔｒａｒｉａ ｉｓｌａｎｄｉｃａ，Ｂａｐｔｉｓｉａ ｔｉｎｃｔｏｒｉａ，Ｃｈｏｎｄｒｕｓ ｃｒｉｓｐｕｓ，Ｈｅｄｅｒａ ｈｅｌｉｘ，Ｊａｓｍｉｎｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ，Ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ，Ａｎｔｈｙｌｌｉｓ ｖｕｌｎｅｒａｒｉａ，Ｋｉｇｅｌｉａ ａｆｒｉｃａｎａ，Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，Ｐｕｅｒａｒｉａ ｌｏｂａｔａ，Ａｌｃｈｅｍｉｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ，Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ，Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ，Ｃｙｍｂｏｐｏｇｏｎ ｃｙｔｒａｔｕｓ，Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ，Ｌｉｌｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ，Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ，Ｔｉｌｉａ ｃｏｒｄａｔａ，Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ，Ｍａｃａｄａｍｉａ ｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ，Ｍａｇｎｏｌｉａ ｂｉｏｎｄｉｉ，Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ａｑｕｉｆｏｌｉｕｍ，Ｍａｌｖａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ，Ｍａｎｇｉｆｅｒａ ｉｎｄｉｃａ，Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｃａｓｔａｎｅａ ｓａｔｉｖａ，Ａｌｔｈａｅａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ ｕｌｍａｒｉａ，Ｃｕｃｕｍｉｓ ｍｅｌｏ，Ｓｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉａｎｕｍ，Ｐａｎｉｃｕｍ ｍｉｌｉａｃｅｕｍ，Ｃｏｌｏｐｈｏｓｐｅｒｍｕｍ ｍｏｐａｎｅ，Ｓｏｒｂｕｓ ａｕｃｕｐａｒｉａ，Ｖｅｒｂａｓｃｕｍ ｔｈａｐｓｕｓ，Ｇｕａｚｕｍａ ｕｌｍｉｆｏｌｉａ，Ｍｙｒｔｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ，Ｔｒｏｐａｅｏｌｕｍ ｍａｊｕｓ，Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ ｉｎｄｉｃａ，Ｕｒｔｉｃａ ｄｉｏｉｃａ，Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ ｎｏｄｏｓｕｍ，Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ ｆｒａｇｒａｎｓ，Ｑｕｅｒｃｕｓ ｒｏｂｕｒ，Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ，Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ，Ｕｓｎｅａ ｂａｒｂａｔａ，Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ，Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ，Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｍｅｎｔｈａ ｃｉｔｒａｔａ，Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ，Ｖｉｏｌａ ｔｒｉｃｏｌｏｒ，Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ，Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ，Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ ｃｒｉｓｐｕｍ，Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ ｉｎｃａｒｎａｔａ，Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ，Ｐｙｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ，Ｃｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａ，Ｐａｅｏｎｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｐｉｐｅｒ ｎｉｇｒｕｍ，Ｍｅｎｔｈａ ｐｉｐｅｒｉｔａ，Ａｎａｎａｓ ｃｏｍｏｓｕｓ，Ｐｒｕｎｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ，Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍ，Ｐｕｌｍｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｐｅｐｏ，Ｃｙｄｏｎｉａ ｏｂｌｏｎｇａ，Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ，Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｐｒａｔｅｎｓｅ，Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ，Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ ｌｉｎｅａｒｉｓ，Ｒｏｓａ ｃｅｎｔｉｆｏｌｉａ，Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｓｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌｅ，Ｓａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ，Ｓｅｓａｍｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ，Ｃａｐｓｅｌｌａ ｂｕｒｓａ ｐａｓｔｏｒｉｓ，Ａｌｂｉｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ，Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｂｒｏｔａｎｕｍ，Ｍｅｎｔｈａ ｓｐｉｃａｔａ，Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ，Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ，Ｐｉｃｅａ ａｂｉｅｓ，Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ，Ａｖｅｒｒｈｏａ ｃａｒａｍｂｏｌａ，Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ，Ｆｒａｇａｒｉａ ａｎａｎａｓｓａ，Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ，Ｍｅｌｉｌｏｔｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｔａｎａｃｅｔｕｍ ｃｉｎｅｒａｒｉｉｆｏｌｉｕｍ，Ｃｉｔｒｕｓ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ，Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ，Ｓａｌｖａｄｏｒａ ｐｅｒｓｉｃａ，Ｖａｌｅｒｉａｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｖａｎｉｌｌａ ｐｌａｎｉｆｏｌｉａ，Ｖｅｒｂｅｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，Ｖｉｏｌａ ｏｄｏｒａｔａ，Ｊｕｇｌａｎｓ ｒｅｇｉａ，Ｎａｓｔｕｒｔｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ，Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｌａｎａｔｕｓ，Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ，Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｒｈｉｐｉｄｏｐｈｙｌｌａ，Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ，Ｓａｌｉｘ ａｌｂａ，Ｈａｍａｍｅｌｉｓ ｖｉｒｇｉｎｉａ，Ｉｓａｔｉｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉａ，Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ，Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｂｓｉｎｔｈｉｕｍ，Ａｃｈｉｌｌｅａ ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ，Ｈｙｍｅｎａｅａ ｃｏｕｒｂａｒｉｌ，Ｃａｎａｎｇａ ｏｄｏｒａｔａ，Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ ｍａｔｓｕｔａｋｅ Ｓｉｎｇｅｒまたはそれらの組み合わせの抽出物などの、さらなる抽出物を例示的に含む。そのような抽出物は、特定の実施態様では殺生物剤の有効性を高める、ある程度の抗菌活性も有し得ることが認められる。活性有機化合物は、典型的に、本発明の製剤において、０〜１総重量％および一部の実施態様では最大で５総重量％まで用いられる。これらの活性剤は、従来の化粧品の処理条件に、より寛容になりがちで、多くの場合、卵孵化タンパク質および天然物抽出物と異なる水性相または親油性相中に含めることができるが、そのような活性有機化合物は、一部の実施態様では、Ｃ相を介したエマルション形成の後に加えられるか、または他では別々にエマルションに加えられることが認められるべきである。

本発明の化粧品は、化粧水、スプレーミスト、美容液、クリーム、マスク、日焼け止めクリーム、洗顔クリーム、保湿剤、浴剤、リキッドファンデーション、収斂剤、シェービング剤、ヘアケア製品、および他の皮膚ケア製品を例示的に含む水ベースの化粧品中、または抗炎症性剤を例示的に含む局所的薬剤中に、容易に処方される。本発明の特定の実施態様では、シリコーン、鉱油、ワセリン、および合成パラベン類が実質的に存在しない、ラクチレートなどの植物性乳化剤を含む化粧品が提供される。これらの化合物が「実質的に存在しない」乳化剤とは、本明細書中で、合計で乳化剤の１０総重量％未満でこれらの化合物を有することを定義する。本発明の製剤は、全体としての顔を特におよび例示的に含む領域；口、目、額、こめかみ、頬、または顎周りの顔の領域；手；足；首；頭皮；肘；胸；前腕；肩；脚；およびそれらの組み合わせにおいて、ヒトの皮膚に容易に適用される。

本発明の化粧品は、タンパク質活性を維持する処方において困難性を示す。一般に、化粧品の処方に一般的な技術である加熱および高せん断混合は、活性タンパク質を変性させる傾向があることが観察されている。さらに、活性タンパク質は、特に、本発明の化粧品が非滅菌条件下で処理されて２０℃の室温で保管される場合、微生物分解する傾向がある。本発明の化粧品の処方は、そこに存在する卵孵化タンパク質の活性を維持するために、処方プロセス中に、卵孵化タンパク質が制限された範囲のｐＨ値、せん断混合、および加熱に曝されることを必要とする。卵孵化タンパク質の活性を維持するために、化粧品処方プロセスは、任意の化粧品の構成相を、卵孵化タンパク質をその相に入れる前にｐＨ５．６〜８に緩衝化するステップを含む。緩衝化は一般に、領域内で行われて、水溶液またはエマルションの水相を所望のｐＨに平衡化するための酸、塩基、酸の塩、またはそれらの組み合わせの添加を含む。ｐＨ測定は日常的であり、定量滴定により、またはＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ ＭＡ，ＵＳＡ）から市販される物のような電位電極で、定量的に測定され；および、リトマス紙キットで定性的に測定されることが認められる。

本発明の化粧品が、タンパク質活性維持のためにそのｐＨ値が５．６〜７．９に調節されていることは、卵孵化タンパク質の微生物分解を部分的に阻害する一方、殺生物剤は、製剤化の間に存在する生物に対して、および複数回の容器の使用の間に、本発明の化粧品と対象との局所的および呼吸による接触を通じた微生物による化粧品の継続的なシーディングに対して、タンパク質活性を維持するために、本発明の製剤中に存在する。結果として、多用途および保管安定製剤での本発明の化粧品製剤は、広域スペクトルの殺生物剤または殺生物剤の組み合わせを含む。広域スペクトルの殺生物剤とは、本明細書において、健常なヒト対象に関連する、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、および菌類に対する活性を有することと定義される。本明細書で有効な殺生物剤は、安息香酸、パラベン類、サリチル酸、石炭酸、ソルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸アルキルエステル、ｐ−クロロメタクレゾール、ヘキサクロロフェン、塩化ベンザルコニウム、塩化クロロヘキシジン、トリクロロカルバニリド、フェノキシエタノール、アシルサルコシン類、グルタチオン、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、アスコルベート、植物精油、ミュータシンタンパク質、およびそれらの組み合わせを例示的に含む。本発明の特定の実施態様では、天然由来の殺生物剤のみ存在する。天然由来の殺生物剤は、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス・ミュータンス、およびロイコノストック属のものなどの発酵濾液；ビサボロール；ユーカリプトール；チモール；イノシトール；サポニン；および、スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａ）、ギシギシ（Ｒｕｍｅｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、クララ（Ｓｏｐｈｏｒａ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、スイレン、野生オレガノ、オレンジ、セージ、ｍａｎｉｆｏｉｌ、一般的なアオイ、センキュウ（Ｃｎｉｄｉｉ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｍａｋｉｎｏ）、センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｍａｋｉｎｏ）、ビサボロール、タイム、ｄａｎｇｕｉｉ（Ａｎｇｅｌｉｃａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、オレンジピール、カバノキ、スギナ、ヘチマ、マロニエ、ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇｅ ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、アルニカ、ユリ、ヨモギ、シャクヤク、アロエ、クチナシ、および「Ｍ．Ｍ．Ｃｏｗａｎ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１２（４）Ｏｃｔ．１９９９，ｐ．５６４−５８２」に詳述されるものなどの植物の天然抽出物；またはそれらの組み合わせを例示的に含む。そのような抽出物は、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１２（４）Ｏｃｔ．１９９９，ｐａｇｅｓ．５７３−５７４」に詳述される方法により、そしてしばしば、Ｃ_１−Ｃ_８アルコール、多価アルコール類、水、および水性アルコール類などの親水性有機溶媒を用いて、得られる。本発明の特定の実施態様では、スイカズラ、フロレチン（リンゴ）、ガランギン（Ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ ａｕｒｅｏｎｉｔｅｎｓ）が、それぞれ単独で、または組み合わせて、天然由来の殺生物剤として用いられる。殺生物剤の特性に加えて、天然抽出物はしばしば、本発明の化粧品に芳香を与えることが認められる。殺生物剤は、特定の実施態様では０．１〜５総重量％で、本発明の化粧品の多用途パッケージ中に存在する。５総重量％を超える量の殺生物剤が、所望のとおりに容易に含められることが認められる。

本発明の化粧品は、特定の実施態様では、ｐＨが５．６〜７．９の値に緩衝化されて、およびさらに他の実施態様ではｐＨ６．５〜６．８に、一方でさらに他の実施態様では６．８〜７．３のｐＨに緩衝化される。特定の理論に束縛されることを意図せずに、そのようなｐＨ値は、魚卵単離物などの卵抽出物、および天然物抽出物の構成要素の安定化および保管安定性を向上させる。本発明の化粧品の処方は、少なくとも２つの構成要素を予め製剤化することにより容易化され、そのような構成要素として、水中油エマルション、および、例えば魚卵単離物などの活性の卵抽出物および／または天然物抽出物を含む第三相などの随意的な追加の相を有する、第二相としての油中水またはシリコーンエマルションを含む。あるいは、卵孵化単離物または天然物抽出物の片方または両方は、水中油エマルション、油中水、シリコーン中水エマルションまたは美容液製剤のいずれかに、容易に分散されることが認められる。驚くことに、活性の卵抽出タンパク質の添加の前に様々な相のｐＨを緩衝化することが、結果として得られる本発明の化粧品に関する保管安定性および対象皮膚上でのタンパク質の活性を確立するのに非常に重要であることが発見されている。

水中油エマルションのマイナー相の構成要素は、上に詳述したように、油類、ワックス類、エステル類、エーテル類、バター類、グリセリド類、またはそれらの組み合わせを例示的に含む。水中油エマルションのメジャー相の構成要素は、水、水性塩類、保湿剤、および上に詳述した様々な水溶性材料を含む。そのような系のための乳化剤は、上に詳述したイオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤を含み、および、レシチン、リポソーム、およびオレオソームも含む。粘度調整剤、エマルション安定剤、芳香剤などを含む、他の必須でない添加剤は、上に詳述のように容易に提供される。特定の実施態様では、水中油エマルションは５．６〜７．９のｐＨ値を有する。特定の実施態様では、水中油エマルションは、６．５および６．８のｐＨ値を有する。

油中水またはシリコーン中水エマルションは、マイナー相およびメジャー相の構成要素の相対量が変化して、および、好ましくは非イオン性界面活性剤および乳化剤としてのシリコーン誘導体に依存する。粘度調整剤および／またはエマルション安定剤は、上に詳述した水溶性の塩類、ガム類、ワックス類、およびそれらの組み合わせを例示的に含む。特定の実施態様では、内部相は、５．６〜７．９のｐＨ値にｐＨ調節されている。特定の実施態様では、内部相のｐＨ値は６．５〜６．８である。ビタミンＥ、ビタミンＫ、アスコルビン酸グルコシドなどのアスコルビン酸誘導体のような様々なビタミン類は、前述のエマルション相の片方または両方に容易に与えられて、または、別個の第三相として与えられることが認められる。

本発明の化粧品は、上で詳述の予め混合された相の組み合わせにより容易に形成されて、またはあるいは、全てのそのような構成要素は、統合混合物（ｕｎｉｆｉｅｄ ｍｉｘｔｕｒｅ）として当該分野に慣習的な順序で混合される。皮膚外観の改善を達成するために、哺乳類の皮膚に、皮膚１ｃｍ^２あたり１×１０^−６〜０．１ｍｇの単離物および２×１０^−７〜０．０２ｍｇの不飽和脂肪酸のレベルで、少なくとも１週間に３回、本発明の組成物を適用することを含む、皮膚外観を改善する方法が提供される。

本発明の化粧品に関する典型的な範囲の概要を表１〜３に示す。他の従来に基づく製剤は、単独で、または脂肪酸およびステロール類を含む天然物抽出物と組み合わせて、卵孵化タンパク質を安定化するために、本明細書中に詳述のように容易に適合されることが認められるはずである。化粧品に関して本明細書で有用な、様々な従来に基づく製剤は、Ｅ．Ｗ．Ｆｌｉｃｋの「Ｃｏｓｍｅｔｉｃ ａｎｄ Ｔｏｉｌｅｔｒｙ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」，２^ｎｄ Ｅｄ．，Ｖｏｌ．８；２００１，Ｎｏｙｅｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ（ＩＳＢＮ ０−１８５５−１４５４−９）に提供されている。

本発明は、以下の非限定的な実施例を参照して、さらに説明される。

（実施例１）
化粧用クリームは、三相の処方後に調製される。Ａ相は、均質な混合物を形成するために、十分な混合とともに７５〜８０℃に加熱される。Ｂ相は、周囲温度で、別個の容器内で予め混合されて、４０℃、またはより低い温度でＡ相に加えられる。Ｃ相は、均質なクリームが形成されるまで、十分な混合で順々に、新たに混合されたＡ相およびＢ相混合物に加えられる。均質で保管安定性のクリームが生じる。

（実施例２）
実施例１による別個のＣ相中に存在する魚卵タンパク質単離物および天然物抽出物の代わりに魚卵タンパク質単離物および天然物抽出物がＡ相の構成要素である化粧用クリームが提供される。タンパク質変性を避けるためにＡ相が周囲温度で形成されるのに伴って、クリーム様が得られる。

（比較例）
実施例１と比較する組成物が、魚卵単離物が存在しないクリームとして生成される（比較例Ａ）。別の組成物は天然物抽出物を欠く（比較例Ｂ）。魚卵タンパク質単離物および天然物抽出物の両方を欠くコントロール製剤もまた、生成される（比較例Ｃ）。試験グループの４０人は４グループに分けられて、各グループは、実施例１または比較例Ａ〜Ｃのうちの１つのクリームを１２週間、毎日適用する。基準皮膚弾性が、各対象に関して、研究の終了時に比較例Ｃのコントロールに標準化される際に測定され、実施例１の組成物は、比較例Ａ〜Ｃと比較して優れた張りと滑らかさを示す。全ての組成物は、１適用あたり、皮膚１ｃｍ^２あたり１×１０^−６ｍｇの単離物および（存在するならば）２×１０^−７ｍｇの不飽和脂肪酸（存在するならば）のレベルに標準化される。

（実施例３）
生殖相（晩秋）のメスから回収された新鮮で未授精のサケ（大西洋サケ）の卵は、氷上に保たれて、そして抽出物が好ましくは直ちに作られる。抗凍結剤（例えば、１．５Ｍの１，２−プロパンジオールおよび０．２Ｍのスクロース）中で、卵膜を壊さずに卵を凍結乾燥することが可能である。徐々に（−１℃／分）、−８０℃まで凍結すべきである。卵は解凍されて抽出物の調製方法中ずっと氷上に保たれるべきである。

卵は、プロテアーゼ阻害剤（１０μｇ／ｍｌ）を有するＨＢＳＳまたは海水中で２度洗浄される。洗浄溶液が取り除かれて、卵は溶解されて、予め冷却されたＤｏｕｎｃｅのガラス−ガラスホモジナイザー中でホモジナイズされる。溶解物は、卵殻の移行を避けながら、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｕｌｔｒａ Ｃｌｅａｒポリマー遠心分離管（５ｍｌ）に移されて、そして、ＳＷ５５Ｔ１ローターを用いたＢｅｃｋｍａｎ超遠心分離機中で、４℃にて１５，０００ｇで１５分間、遠心分離される。それにより３つの画分が得られる；脂質の上画分、細胞質の中画分、および卵殻と核破片を有する底画分。細胞質の中画分は集められる抽出物である。この抽出物は、ミトコンドリア、リソソームおよびペルオキシソームを含む細胞質オルガネラの大部分を含むことが期待されて、透明で粘性があるはずであり、そして、オレンジの色合いを有する。プロテアーゼ阻害剤（１０μｇ／ｍｌストック）が添加されて、抽出物は−８０℃で保存される。中期胞胚のゼブラフィッシュ胚が集められて、液体が除去されて、そして−２０℃に凍結される。抽出物を調製するために、胚は氷上で解凍されて、少量のＨＢＳＳまたは海水のいずれか（好ましくは５０％ｖ／ｖ未満の液体）中に溶解されてＤｏｕｎｃｅのガラス−ガラスホモジナイザーによりホモジナイズされる。溶解物は滅菌リネン布を通して濾過されて、そして、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｘ−２２Ｒ遠心分離機を用いてＳＸ４２５０ローター中で４℃にて５，０００ｇで２０分間、遠心分離される。細胞質抽出物（上清）が集められて、そして、プロテアーゼ阻害剤（１０μｇ／ｍｌ）が添加される。抽出物はＭｉｌｌｉｐｏｒｅで濾過されてよい（０．２２ミクロンＭｉｌｌｉＱ滅菌フィルター）。抽出物は−８０℃で保存される。抽出物のｐＨはリトマス紙で測定されて、タンパク質濃度はブラッドフォード分析で測定されて、そしてモル浸透圧濃度はオスモメーターで測定される。

この一般的な方法は、ウニ、エビ、魚の卵／魚卵またはカエルの卵由来の抽出物の調製に有用である。手短に言うと、魚卵は、受胎したメスの魚から、産卵プログラム（卵の放出前６〜８時間に、通常は夜明け（午前２〜４）に、ｈＣＧホルモン（１ｍｌ／ｋｇ）が注入される）においてそれらがそれらの卵を放出した後すぐに、または受胎したカエルから集められる。魚卵／卵は凍結乾燥されて、または、−２０℃で凍結されて、または、生で用いられる。魚卵は異なる種類の魚から集められる。ウニに関しては、卵の分断を引き起こすために、０．５ＭのＫＣｌが、口の周りに注入される。抽出物は、破砕（細胞クラッカーまたはＤｏｕｎｃｅホモジナイゼーション）により、または、全ての内容物を有する細胞質を、卵殻（透明帯）を含むもの／含まないもの、核／細胞基質を含むもの／含まないもの、オルガネラを含むもの／含まないものと、脂質を含むもの／含まないものに、分離するための異なるスピードでの遠心分離により、卵／魚卵から調製される。さらなる分画を、１つまたは複数のｍＲＮＡ、タンパク質、小ペプチド、炭水化物および脂質を単離するために行うことができる。魚卵中の脂肪酸の主な構成要素は、オレイン酸、リノール酸、およびオメガ−３脂肪酸である。

サケ卵抽出物に関する上記のプロトコルの適用の際、サケ卵抽出物は、驚くことに、１００〜３８０ｍｇ／ｍｌに変動する高いタンパク質濃度を有し、ｐＨ６．４〜６．８であり、およびモル浸透圧濃度がおよそ３５０ｍＯｓｍであった。抽出物は、透明で粘性で非濾過性（０．４５ミクロンＭｉｌｌｉＱフィルターにより）である。抽出物中のタンパク質は、高いタンパク質含有量および低いｐＨのために、低緩衝能である水または含水溶液の添加時に容易に沈殿した。水および含水溶液中の希釈が可能である場合はすぐに、抽出物は、アルカリ（１〜３μｌの１Ｍ ＮａＯＨ／ｍｌ抽出物）の添加によりｐＨ７．０に中和され得る。ゼブラフィッシュ抽出物は、２３〜２６ｍｇ／ｍｌに変動するタンパク質濃度を有し、ｐＨ６．４〜６．８であり、およびモル浸透圧濃度８０〜１５０ｍＯｓｍであった。抽出物は透明で非粘性、濾過性であり、そして、全希釈で水に容易に希釈される。

（実施例４）
ゲル濾過精製＋アフィニティ精製されたサケのゾナーゼは、１回の最終のクロマトグラフ法により、シーケンス−グレードの純度にさらに精製することができる。この方法は、トリス−アセテート（１０ｍＭ、ｐＨ９．０）バッファーでのＰＢＥ９４カラムを用いて、その後にこのバッファー中で、塩勾配（最大で１Ｍまでの塩化ナトリウム塩）で溶出される。このステップ自体では、ゾナーゼの触媒活性をさらに７．６倍増大させるものであり、全ての精製に関しては７１４倍で、出発原料から２８％の収率である。この精製ステップは、ゾナーゼのタンパク質同一性を、２８ｋＤａ部分としてそのままにしておく。それ故に、このステップは、関係のない、主なタンパク質汚染物質を、ゾナーゼ製剤から除去しない。精製ゾナーゼの分子量は、孵化流体（ｈａｔｃｈｉｎｇ ｆｌｕｉｄ）中、および「粗製ゾナーゼ」中に存在するゾナーゼ部分に関してウエスタンブロッティング技術によって観察されるのと同一である。

三番目および最終のクロマトグラフ法で一見起きていることは、小さな、混入ペプチドが除去されていることである。これらのペプチドは、たいがい卵殻由来および／またはサケ胚由来である、約１２残基を有するオリゴペプチドであると考えられる。それらの除去はゾナーゼの触媒活性を増大させるので、これらのペプチド汚染物質はゾナーゼ触媒作用に対して阻害効果を及ぼすと考えられる。また、それらの存在は、このゾナーゼ生産物のエドマン分解法における最初のステップを妨げる。この三番目の精製ステップで見られるゾナーゼの２つの形態は、カラムマトリックスに、やや異なって結合する。しかしながら、両方の形態は、それらのＮ末端部分に似たアミノ酸配列を有する。

ＣＮＢｒ生産のペプチド由来の部分的アミノ酸配列は、ゾナーゼは、異なるタンパク質であると実証した。構造分析は、ゾナーゼは、異なる触媒および基質結合ドメインを有し得て、それは、高分子（生理学的）の基質に作用する場合のカルシウムキレート剤に対するそれらの感受性（結合が阻害されて、それ故に触媒作用が間接的に阻害される）、そしてまた、小基質に作用する場合のセリンプロテアーゼ阻害剤に対する感受性（触媒作用が直接的に阻害される）の主な原因となり得ることを示唆した。

（実施例５）
ゾナーゼおよびロイコレクチンの両方は、サケ孵化流体から精製される。孵化流体のタンパク質濃度を改善するために、サケ卵は、孵化の前に最少量の水に移される。高同期孵化は、昇温（室温）により、または脱酸素により誘導することができて（Ｏｐｐｅｎ−Ｂｅｒｎｔｓｅｎ ｅｔ ａｌ．１９９０，Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，８６，ｐｐ．４１７−４３０）、粗製ゾナーゼおよび関連タンパク質の、少量の高濃度製剤を産出する。

ゾナーゼの最初の精製は、孵化サケ卵のチーズクロスを通した濾過を含んだ。この濾液は、解凍されてさらなるタンパク質精製に用いられる前に、重大なゾナーゼ分解がされずに何年もの間、凍結され得る。この事実は、サケのゾナーゼ、および、ロイコレクチンを含む関連タンパク質を精製するための出発原料の生産を、非常に単純化する。

次の随意的なステップは、サケ卵殻フラグメントを分離するために、タンパク質濾液を４Ｍ尿素に調節するステップを含み、それは、低スピードの遠心分離（１５，０００ｇ；１５分間、２回）により、外部からの破片と一緒にそれらの除去を可能にした。この材料は、上述のものと異なって調製される粗製材料の特徴であるカラム目詰まりの兆候を示さなかった。この粗製タンパク質製剤は、従来のクロマトグラフ技術による精製に適切である。

孵化流体由来のロイコレクチンは、ゾナーゼと一緒に単離され得る。ゾナーゼは、その天然型においてロイコレクチンよりも実質的に大きいので、部分的に精製されたゾナーゼ製剤（上述のとおり）から、ロイコレクチンは、排除クロマトグラフィーにより単離され得る。最初の分離のために、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ１６／６０カラムが用いられて、その後に、ゾナーゼはＢｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上でのアフィニティクロマトグラフィーにより除去され得る。

ゾナーゼはその天然型で、ロイコレクチンとは違って、１００ｋＤａのサイズを除いて、限外濾過膜を滅多に透過しないので、限外濾過の使用もまた、大量調製のために適切である。

用いられるバッファーは、５ｍＭのＮａＣｌを含む、中性付近またはわずかにアルカリ性（ｐＨ７．５〜８．５）のｐＨでのミリモルのトリス（例えば１０ｍＭ）である。ロイコレクチンタンパク質は、ゾナーゼと共精製されることが分かる。自然条件下でのクロマトグラフィーで推定されるこの新規のタンパク質のサイズは、３０ｋＤａ弱である。

レクチンの推定分子量（ＭＷ）は、約２５〜３０ｋＤａである。対応するサケのレクチンに関する推定ｐ１は、約ｐＨ＝６．５である。観測されたｐＩ（Ｒｉｓｔｅ、未発表）は、サケの囲卵レクチンにおいてｐＨ６．５〜６．９であり、そしてサケの白血球レクチンにおいてｐＨ６．４〜６．６である（レクチンはウエスタンブロッティング技術により同定される）。

（実施例６）
１２週間の試験期間中の、上述の製剤を用いたデイクリームおよびアイクリームの形態での化粧品製品の安全性および有効性を評価するための試験。３７〜６０才の範囲の合計４０人の女性対象が試験に選択される。全ての４０人の参加者が試験を完了した。

本試験の条件下で、デイクリームおよびアイクリームとして特定される試験材料は、１２週間の使用期間中に、顔の小じわ、しわ、色素沈着過剰、皮膚の色調の均一性、皮膚の透明感、皮膚のたるみ、および触感の粗さを改善する能力を示した。加えて、試験材料は耐容性良好であり、そして、顔に適用した場合に重大な皮膚炎症を引き起こす可能性を示さなかった。

表面的な顔のしわに関するＰａｃｋｍａｎとＧａｎｓのスコアでの、および、顔色素沈着過剰、皮膚の色調の均一性、皮膚の透明感、皮膚のたるみ、および触感の粗さに関するＶｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇ Ｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）スコアでの、統計的に有意な改善が、毎日２回の適用の２週間、６週間および１２週間の後に観察される。炎症（紅斑、浮腫、乾燥、刺傷、焼損およびタイト／ドライの感触）におけるベースラインからの統計的に有意な増加は、いずれの処置期間後にも見られない。

（実施例７）
２つの４週間試験の期間中の、上述の製剤を用いたデイクリームおよびアイクリームの形態での化粧品製品における、微生物汚染に対する殺生物防腐剤の有効性を評価するための試験が行われる。用いられる方法は、ＣＴＦＡ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ，Ｓｅｃｔｉｏｎ ２０，Ｍ−３，Ａ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｗａｔｅｒ Ｍｉｓｃｉｂｌｅ Ｐｅｒｓｏｎａｌ Ｃａｒｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ＵＳＰ ３４，Ｓｅｃｔｉｏｎ ６１，Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ／Ｒｅｍｏｖａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙである。試験生物は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ），大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ），緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ），カンジダ菌（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ），黒色アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）を含んだ。カテゴリー２の製品に関して、防腐剤は、ａ）生菌の濃度が７日目において最初の数から３．０ ｌｏｇ以上の減少（９９．９％）を示して、そして試験期間の継続の増加がなく、およびｂ）生酵母と生カビの濃度が７日目において最初の数から１．０ ｌｏｇ以上の減少（９０．０％）を示して、試験期間の継続の増加がない場合に、試験されたサンプルにおいて効果的であると考えられる。

試験結果は、デイクリームおよびアイクリームがカテゴリー２の製品に関する許容基準に適合することを示した。

（実施例８）
閉塞性のパッチ条件下での４週間の繰り返し適用後、ネガティブコントロール（用量無しパッチ）と比較して、試験材料が極小面皰を生じさせるかどうか評価することにより、上述の製剤を有するデイクリームおよびアイクリームの形態での試験材料が面皰を生じる可能性を決定するために、試験が行われる。アセチル化ラノリンアルコールが、試験の正当性を立証するためにポジティブコントロール材料としての役割を果たした。試験は、４週間の試験期間中行われた。２２〜４５才の範囲の合計１５対象が試験に選択される。全ての１５人の参加者が試験を完了した。

試験部位から採取された濾胞状生検材料の評価は、試験とコントロールの材料は、平均総合評価スコア０．５（１〜２４％の小さめの角質塊（１−２４％ ｓｍａｌｌｉｓｈ ｈｏｒｎｙ ｍａｓｓｅｓ））をもたらすことを示した。濾胞あたりの極小面皰の平均比率は、試験材料とネガティブコントロールに関して１％、および、ポジティブコントロールに関して６％である。試験材料とネガティブコントロールの間の、濾胞に対する極小面皰の比率に統計的に有意な違いはなく、一方で、ポジティブコントロールはネガティブコントロールよりも有意に大きな比率を示した。

試験は、試験期間中に報告された有害事象がないことを示した。試験材料は、面皰を生じる可能性を示さなかった。濾胞あたりの極小面皰の比率は、それぞれの試験材料で処置される部位および未処置ネガティブコントロールパッチが適用される部位によって統計的に異ならない。

（実施例９）
上述の製剤を有するアイクリームの形態での試験材料の皮膚炎症と感作潜在性を決定するために試験が行われる。試験は８週間の試験期間中行われる。この試験は２２５人の対象で始められる。１１人の対象が、試験材料に関係のない理由で、試験参加を中断した。合計２１４人の対象が試験を完了した。

試験は、７０％イソプロピルアルコールで拭いて乾燥させた試験領域に、試験材料を有するパッチを適用することにより行われる。試験材料は上背部（肩甲骨の間）に適用されて、２４時間、直接皮膚に接触したままにさせられる。パッチは、誘導期間（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ Ｐｅｒｉｏｄ）中、月曜日、水曜日、および金曜日に、合計９回適用され、同一部位に適用される。このスケジュールは、逃した回または休日を考慮に入れるために変更されてよい。対象がもしも、指定された試験日に報告することが不可能の場合は、試験材料は、誘導期間中、連続２日適用されて、および／または、振替日が誘導期間の終わりに追加される。パッチのスケジュールが上述のように変更されない限り、部位は、火曜日および木曜日の対象によるパッチ除去後２４時間および土曜日のパッチ除去後４８時間の皮膚炎症に関して、試験監督官によりグレード分けされる。

「２＋」の反応またはそれより高い反応が生じる場合は、試験材料は、隣接する初めての部位に適用される。「２＋」の反応またはそれより高い反応がその新しい部位で生じる場合は、対象は誘導期間中に再度パッチはされないが、適切な試験日にチャレンジされる。試験責任者の裁量で、「２＋」未満のスコアを有するパッチ部位は変更されてよい。

およそ２週間の休憩期間に続き、チャレンジパッチは、背中の、以前に未処置の試験部位に適用される。２４時間後、パッチはＣＲＬ技術者により除去されて、試験部位は、皮膚の反応に関して評価される。試験部位は、４８時間および７２時間に再評価される。試験のチャレンジフェイズ（Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ Ｐｈａｓｅ）中に反応を示す対象は、９６時間での測定（ｒｅａｄｉｎｇ）のために戻ることを要求され得る。

２１４対象の試験集団に基づき、および、本試験の条件下で、アイクリーム試験材料は、皮膚炎症または感作を引き起こす可能性を示さなかった。

（実施例１０）
一連の試験は、製剤に加えられたさらなる日焼け防止指数（ＳＰＦ）構成要素を有する、上述の製剤を有するデイクリームおよびアイクリームの形態での試験材料の、皮膚炎症および感作の可能性を決定するために行われる。ＳＰＦは、処置されていない皮膚上に最小紅斑を産生するのに必要とされるエネルギー量に対する、保護された皮膚上に最小紅斑を産生するのに必要とされるエネルギー量の比として定義され、以下の式のように計算される：

Ｉ．上記で処方されるデイクリームと混合された、日焼け止め製品の有効性を評価するために、静止状態下で、国際日焼け防止指数（ＳＰＦ）試験方法（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｕｎ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ（ＳＰＦ）Ｔｅｓｔ Ｍｅｔｈｏｄ）（２００６年５月）を用いて日焼け防止指数（ＳＰＦ）を決定することにより、試験が行われる。標準の日焼け止め製剤が、試験材料と同時に試験される。標準は、Ｐａｄｉｍａｔｅ Ｏ／オキシベンゾンＳＰＦ標準（ＣＯＬＩＰＡ Ｐ２）（１６．６３±３．４３）である。試験／コントロール材料の適用部位は背中であり、それぞれの試験材料での処置を受ける背中の領域が全ての対象に関して同一ではないようにランダム化される。２５〜５７才の範囲でおおむね健康良好である、合計１０人の男性と女性の対象が、試験に選択される。試験の経過中に報告された有害事象はない。

ＩＩ．上記で処方されるデイクリームと混合された、ＳＰＦ３０を有する日焼け止め製品の有効性を評価するために、ＵＶＡ保護に関する日本化粧品工業連合会（ＪＣＩＡ）測定法基準（０１／０１１９６）に従って、静止状態下で、紫外線Ａ（ＵＶＡ）保護指数（ＰＦＡ）（ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ Ａ（ＵＶＡ）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ（ＰＦＡ））を決定することにより、試験が行われる。合計１０人の大人対象が試験に参加した。ＵＶＡおよびＵＶＢ領域（２９０〜４００ｎｍ）での紫外線の連続的な発光スペクトルを有する、Ｘｅｎｏｎ Ａｒｃ Ｍｕｌｔｉ−Ｐｏｒｔ Ｓｏｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｏｒ（１５０ｗ，Ｍｏｄｅｌ １５Ｓ，Ｓｏｌａｒ Ｌｉｇｈｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）が紫外線照射源として用いられて、基本的な太陽様のスペクトルを提供するためにフィルターがかけられる。以下のフィルター：Ｓｃｈｏｔｔ ＷＧ３３５１３ ｍｍおよびＵＧ１１１１ ｍｍが、適切なスペクトル出力を確実にするために用いられる。ランプ出力は、各対象の試験の開始のすぐ前に、ＵＶ強度計（Ｍｏｄｅｌ ＰＭＡ２１００，Ｓｏｌａｒ Ｌｉｇｈｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）で測定される。太陽シミュレーターの光出力のスペクトル分布は、毎年認証される。

色素黒化は、無色のメラニン前駆体が酸化されて色素性メラニンになる光酸化反応に起因して、ＵＶＡ露光後にヒト皮膚で見られる茶灰色〜茶黒色の反応である。最小持続型色素黒化（ＭＰＰＤ）は、処置されていない皮膚でのそのような反応を誘導するために必要なＵＶＡ光照射線量として定義される。試験フェイズの前に、各対象のＭＰＰＤが、前進的で幾何学的な並び（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）のＵＶ光露光により判定される。ＵＶＡ放射線の線量増加は１．２５である。照射後２〜４時間に、部位は、以下のスコアシステムに従って、色素黒化に関して評価される：

試験部位測定の５×１０ｃｍは、対象の肩甲骨間の背中および正中線の外側にある胴回り上に、外科用マーキングペンで輪郭を描かれる。これらの領域は、試験材料または標準の日焼け止めのために指定される。隣接部位は、処置されていない皮膚上の同時的なＭＰＰＤ判定のために指定される。製品の適用後、各試験領域は、決められた連続のＵＶＡ光露光のために用いられる、およそ１−ｃｍ^２の部位に分割される。
試験材料または標準の０．１ｍｌ部分が、適切な試験部位に適用されて、指サックを用いて部位上に均一に広げられる（２μｌ／ｃｍ２に相当）。部位の照射は、適用後１５分〜３０分に始められた。露光時間は、以前に決定された保護されていない皮膚のＭＰＰＤおよび試験材料または標準の予測ＰＦＡに基づいて、各処置部位に関して選択される。全ての試験部位は、最小持続型色素黒化反応を決定するために、露光後２〜４時間に評価される。

ＵＶＡ保護指数（ＰＦＡ）は、処置されていない皮膚上にＭＰＰＤを産生するのに必要とされる時間量に対する、保護された皮膚上にＭＰＰＤを産生するのに必要とされる時間量の比として定義されて、以下の式のように計算される：

標準誤差は測定値の１０％の範囲内であるべきである。

提案された試験材料であるＳＰＦ３０を有するデイクリームは、１０人の対象において、ＰＦＡ６．５の平均ＵＶＡ保護値を示した。

ＩＩＩ．上記で処方されて、広域スペクトル保護のための日焼け止め活性剤を含む、デイクリームの試験材料を評価するために、ＦＤＡ（Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｉｓｔｅｒ／Ｖｏｌ ７６，Ｎｏ１１７／Ｆｒｉｄａｙ，Ｊｕｎｅ １７，２０１１／Ｒｕｌｅｓ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）に従って、その臨界波長を決定することにより、試験が行われる。

日焼け止めの吸光度は、紫外線領域（２９０〜４００ｎｍ）における日焼け止めの全吸光度の９０％に合計が到達するまで、２９０ｎｍからＵＶ波長全域にわたって統合（合計）される。合計吸光度が全吸光度の９０％に到達する波長は、「臨界波長」として定義されて、日焼け止め保護の幅の尺度であると考えられる。ＵＶＡにおいてそれらの吸光度のかなりの部分を有する日焼け止めは、臨界波長が３７０ｎｍよりも長い場合に、「広域スペクトル」として分類され得る。

全ＵＶスペクトル（２９０〜４００ｎｍ）にわたる各波長に関する分光透過率が決定される。透過率値は、１ｎｍ間隔で測定される。

ＳＰＦを有する試験材料デイクリームの臨界波長は３７１．００ｎｍであり、それは、「広域スペクトル」に分類されるために要求される臨界波長基準の最小値３７０ｎｍを満たす。

上記で処方されて、広域スペクトル保護のための日焼け止め活性剤を含む、試験材料デイクリームを評価するために、そのインビトロＵＶＡ保護指数（ＵＶＡ−ＰＦ）、そのＳＰＦ／ＵＶＡ−ＰＦ比を決定することにより、同様のテスト試験が行われて、デイクリーム臨界波長は、２０１１年のＣＯＬＩＰＡガイドラインに順守していることが分かる。

本明細書中で言及される任意の特許または出版物は、あたかもそれぞれの個々の出版物が具体的におよび個々に参照により援用されることが示されるかのように、同じ範囲まで、参照により本明細書中に援用される。

前述の説明は、本発明の特定の実施態様の実例であるが、それらの実施に対する制限となることを意図しない。

Claims (26)

1. 皮膚の外観を改善するための化粧品組成物であって、前記組成物はエマルションの形態であり；
   孵化魚卵から得られる、活性なタンパク質；
   不飽和脂肪酸およびステロールを含む天然物抽出物；および、
   乳化剤、
   を含み、
   ここで、前記活性なタンパク質がゾナーゼである、
   化粧品組成物。
2. 請求項１に記載の化粧品組成物であって、
   前記組成物は、水中油エマルションの形態である、
   化粧品組成物。
3. 請求項１または２に記載の化粧品組成物であって、
   前記天然物抽出物が、藻類抽出物または房形成シアノバクテリア由来の抽出物である、
   化粧品組成物。
4. 請求項１〜３のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
   前記天然物抽出物が、褐藻類の抽出物である、
   化粧品組成物。
5. 請求項１または２に記載の化粧品組成物であって、
   前記天然物抽出物が、植物の葉、茎、芽、または、根、もしくはこれらの組み合わせからの抽出物である、
   化粧品組成物。
6. 請求項１〜５のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
   前記活性なタンパク質が、前記組成物の１×１０^−８〜１×１０^−５総重量％を構成する、
   化粧品組成物。
7. 請求項１〜６のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
   さらにロイコレクチンを含む、
   化粧品組成物。
8. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
   さらにアスコルビン酸グルコシドを含む、
   化粧品組成物。
9. 請求項１〜８のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
   前記組成物は、皮膚に適用されたときに、皮膚の張りを改善する、
   化粧品組成物。
10. 請求項１〜９のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記組成物は、皮膚に適用されたときに、皮膚の滑らかさを改善する、
    化粧品組成物。
11. 請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記魚卵がサケの卵である、
    化粧品組成物。
12. 皮膚の外観を改善するための化粧品組成物であって、前記組成物はエマルションであり；
    孵化魚卵から得られ、活性なタンパク質を含む、タンパク質単離物；
    不飽和脂肪酸およびステロールを含む藻類抽出物；および、
    殺生物剤、
    を含み、
    ここで前記活性なタンパク質がゾナーゼである、
    化粧品組成物。
13. 請求項１２に記載の化粧品組成物であって、
    前記組成物は、アスコルビン酸グルコシドを含む、
    化粧品組成物。
14. 請求項１２または１３に記載の化粧品組成物であって、
    前記活性なタンパク質が、前記組成物の１×１０^−８〜１×１０^−５総重量％を構成する、
    化粧品組成物。
15. 請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記藻類抽出物が、紅藻類、または褐藻類由来である、
    化粧品組成物。
16. 請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記組成物は、皮膚に適用されたときに、皮膚の張りを改善する、
    化粧品組成物。
17. 請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記組成物は、皮膚に適用されたときに、皮膚の滑らかさを改善する、
    化粧品組成物。
18. 請求項１２〜１７のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記ゾナーゼが、前記組成物の１×１０^−８〜１×１０^−５総重量％を構成する、
    化粧品組成物。
19. 請求項１２〜１８のいずれか１項に記載の化粧品組成物であって、
    前記タンパク質単離物が、さらにロイコレクチンを含む、
    化粧品組成物。
20. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化粧品組成物の製造方法であって、
    前記方法は：
    少なくとも１つの水相および少なくとも１つの疎水性相を形成する工程、ここで、少なくとも１つの相は前記乳化剤を含み、少なくとも１つの相は前記天然物抽出物を含む；
    全ての相を混合し、エマルションを形成させる工程；および、
    前記エマルションが形成された後、前記エマルションに前記活性タンパク質を加える工程、
    を含む、
    製造方法。
21. 皮膚の外観を改善する方法であって、
    前記方法は、皮膚の外観の改善を達成するために、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化粧品組成物を、少なくとも１週間に３回、ヒトの顔面皮膚に適用する工程を含む、
    方法。
22. 請求項２１に記載の方法であって、
    前記化粧品組成物は少なくとも１日１回顔面皮膚に適用され、皮膚の張りの改善において効果的である、
    方法。
23. 請求項２１または２２に記載の方法であって、
    前記化粧品組成物は少なくとも１日１回顔面皮膚に適用され、皮膚の滑らかさの改善において効果的である、
    方法。
24. 皮膚の外観を改善する方法であって、
    前記方法は、皮膚の外観の改善を達成するために、請求項１２〜１９のいずれか１項に記載の化粧品組成物を、少なくとも１週間に３回、ヒトの顔面皮膚に適用する工程を含み、それぞれ回において、皮膚の平方センチメートルあたり、前記タンパク質単離物を１×１０^−６〜０．１ｍｇおよび前記不飽和脂肪酸を２×１０^−７〜０．０２ｍｇの量で適用する結果となる、
    方法。
25. 請求項２４に記載の方法であって、
    前記化粧品組成物は少なくとも１日１回顔面皮膚に適用され、皮膚の張りの改善において効果的である、
    方法。
26. 請求項２４または２５に記載の方法であって、
    前記化粧品組成物は少なくとも１日１回顔面皮膚に適用され、皮膚の滑らかさの改善において効果的である、
    方法。