JP5920831B2

JP5920831B2 - Seed disinfection method for sprout production

Info

Publication number: JP5920831B2
Application number: JP2012227689A
Authority: JP
Inventors: 重文上田; 慎一渡辺; 章秀岡本; 茂貴古谷; 國親鮫島; 陽一大和; 征徳松尾; 昭一前田
Original assignee: National Agriculture and Food Research Organization
Current assignee: National Agriculture and Food Research Organization
Priority date: 2012-10-15
Filing date: 2012-10-15
Publication date: 2016-05-18
Anticipated expiration: 2032-10-15
Also published as: JP2014080379A

Description

本発明は、スプラウト生産に用いる種子の効果的な消毒方法に関する。また、本発明は、当該消毒方法により消毒を行った種子を用いて、育苗することを特徴とする、スプラウトの生産方法に関する。 The present invention relates to an effective method for disinfecting seeds used for sprout production. The present invention also relates to a method for producing a sprout characterized in that seedlings are bred using seeds sterilized by the sterilization method.

・スプラウト食品
かいわれ大根等のスプラウト食品は、鮮度等に優れ、調理せずに容易に利用が可能な生鮮野菜であることから、近年注目を集めている食品である。
特に、近年では、栄養面や機能性食品として価値が認められ、アブラナ科野菜や各種マメ類のスプラウト等も、食材として利用されるようになっている。
また、ブロッコリースプラウト等の一部のスプラウトには、抗癌作用を有する成分（スルフォラファン、グルコラファニン等）を多く含む点でも有用性が認められており、高機能性食品としても注目を集めている。 -Sprout foods Sprout foods such as radish are foods that have been attracting attention in recent years because they are fresh vegetables that have excellent freshness and can be used easily without cooking.
In particular, in recent years, its value has been recognized as a nutritional and functional food, and cruciferous vegetables, sprout of various legumes, and the like have come to be used as food materials.
In addition, some sprout such as broccoli sprout has been recognized as useful because it contains many anti-cancer components (sulforaphane, glucoraphanin, etc.), and has attracted attention as a highly functional food. Yes.

・微生物汚染の問題
ところが、現在の我が国における食品衛生法では、スプラウト生産に関する規格基準等は特に存在しない。そのため、スプラウト生産の現場では、頻度は高くないものの微生物汚染に起因する食中毒が発生している。・ Problems of microbial contamination However, the current food hygiene law in Japan does not have any standard standards for sprout production. For this reason, food poisoning due to microbial contamination is occurring at a sprout production site, although the frequency is not high.

このスプラウト中に存在する微生物類は、主に出荷された‘種子’に付着して混入し、スプラウト生産工程において繁殖したものである。
このような微生物は、生産物の品質や日持ちに影響を及ぼすのみならず、時として食中毒の原因菌になることが懸念されている。
例えば、腸管出血性大腸菌（O157:H7）は、かいわれ大根の子葉表面で増殖し、導管を中心とした維管束に存在しうることが報告されている（非特許文献1 参照）。 The microorganisms present in the sprout are mainly adhered to and mixed with the shipped 'seed' and propagated in the sprout production process.
There is concern that such microorganisms not only affect the quality and shelf life of the product, but sometimes cause food poisoning.
For example, enterohemorrhagic Escherichia coli (O157: H7) has been reported to grow on the cotyledon surface of radish and exist in the vascular bundle centering on the duct (see Non-Patent Document 1).

・次亜塩素酸ナトリウム処理
現在のスプラウト生産における消毒工程では、膨潤後の種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム水溶液を用いて消毒が行うことが一般的である。
しかし、消毒に用いることができる次亜塩素酸ナトリウムの濃度は、食品に用いるものであることから、あまり高濃度のものを使用することができない。
そのため、生産されたかいわれ大根に付着している生菌数は、一般的に生鮮野菜類の中でも高い。かいわれ大根の生鮮重量1gあたり、約10⁶〜10⁸cfu/gもの雑菌が存在することが報告されている（非特許文献2 参照）。 -Sodium hypochlorite treatment In the current disinfection process in sprout production, it is common to disinfect the swollen seeds using a sodium hypochlorite aqueous solution.
However, since the concentration of sodium hypochlorite that can be used for disinfection is used for foods, it cannot be used at a very high concentration.
Therefore, the number of viable bacteria that are said to have been produced and attached to radish is generally high among fresh vegetables. It is reported that about 10 ⁶ to 10 ⁸ cfu / g of miscellaneous bacteria exist per 1 g of fresh weight of radish (see Non-Patent Document 2).

そこで、スプラウト生産の現場では、食品安全上の問題がないと同時に、消毒効果が著しく高い種子の消毒方法の開発が求められている。
Therefore, in the field of sprout production, there is a demand for the development of a seed disinfection method that has no food safety problem and has a significantly high disinfection effect.

Ito et al., Appl. Environ. Microbiol, 64: p1532-1535 (1998)Ito et al., Appl. Environ. Microbiol, 64: p1532-1535 (1998) 森哲也ら, 日本食品微生物学会誌, 27: p163-170 (2010)Tetsuya Mori et al., Japanese Journal of Food Microbiology, 27: p163-170 (2010)

本発明は、上記課題を受けて、食品安全上の観点からスプラウト生産に用いることが可能であると同時に、著しく消毒効果が高い種子の消毒方法、を提供することを目的とする。 In view of the above problems, an object of the present invention is to provide a seed disinfection method that can be used for sprout production from the viewpoint of food safety and at the same time has a significantly high disinfection effect.

本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、スプラウト生産に用いる種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理を行った後にリゾチーム処理を行う順番にて種子消毒を行うことによって、；それぞれの処理を単独で行った場合では想到しえない相乗的な消毒効果が発揮されることを見出した。
なお、当該消毒方法に用いる試薬等は、食品生産で認められる程度の次亜塩素酸ナトリウムとリゾチームであるため、食品安全性にも問題はないものと認められた。 As a result of intensive studies, the present inventors have conducted seed disinfection in the order of lysozyme treatment after sodium hypochlorite treatment on seeds used for sprout production; It has been found that a synergistic disinfecting effect that is unthinkable when performed alone is demonstrated.
The reagents used in the disinfection method were sodium hypochlorite and lysozyme to the extent permitted in food production, and it was recognized that there was no problem in food safety.

さらに、本発明者らは、当該消毒方法は、種子の発芽率を低下させるおそれがないことを見出した。
また、本発明者は、当該種子を用いて育苗して得たスプラウト生産物は、スプラウト可食部に付着している生菌数が、著しく低減されたものとなることを見出した。 Furthermore, the present inventors have found that the disinfection method has no risk of reducing the germination rate of seeds.
The present inventor has also found that the sprout product obtained by raising seedlings using the seeds has a significantly reduced number of viable bacteria attached to the sprout edible portion.

本発明は、これらの知見に基づいてなされたものである。
・〔請求項1〕に係る本発明は、スプラウト生産に用いる種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理を行った後、リゾチーム処理を行う順番にて消毒を行うことを特徴とする、種子の消毒方法に関するものである。
・〔請求項2〕に係る本発明は、前記リゾチーム処理が、0.2〜20mg/mLのリゾチームを含む溶液を用いて行うものである、請求項1に記載の種子の消毒方法に関するものである。
・〔請求項3〕に係る本発明は、前記リゾチーム処理が、10〜60℃にて0.5〜6時間行うものである、請求項1又は2に記載の種子の消毒方法に関するものである。
・〔請求項4〕に係る本発明は、前記リゾチームが、C型リゾチームである、請求項1〜3のいずれかに記載の種子の消毒方法に関するものである。
・〔請求項5〕に係る本発明は、前記リゾチームが、家禽類に由来するC型リゾチーム, 又は, その変異タンパク質であって、；配列番号1に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質が有するMicrococcus lysodeikticusに対する溶菌活性を1とした場合の相対活性が、0.7以上である、；請求項1〜4のいずれかに記載の種子の消毒方法、に関するものである。
・〔請求項6〕に係る本発明は、前記次亜塩素酸ナトリウム処理が、50〜500ppmの次亜塩素酸ナトリウムを含む溶液を用いて、0.5〜6時間行うものである、請求項1〜5のいずれかに記載の種子の消毒方法に関するものである。
・〔請求項7〕に係る本発明は、前記種子が、ダイコン属, アブラナ属, グンバイナズナ属, キバナスズシロ属, セイヨウワサビ属, オランダガラシ属, シロガラシ属, ワサビ属, ササゲ属, ダイズ属, エンドウ属, ラッカセイ属, ヒヨコマメ属, ヒラマメ属, ウマゴヤシ属, フェヌグリーク属, イヌタデ属, ソバ属, ゴマ属, エゴマ属, ヒマワリ属, 又は, カボチャ属, のいずれかに属する植物の種子であって、当該種子から発芽して得られるスプラウトが食用となるものである、請求項1〜6のいずれかに記載の種子の消毒方法、に関するものである。
・〔請求項8〕に係る本発明は、請求項1〜7のいずれかに記載のいずれかの方法により種子の消毒を行うことを特徴とする、スプラウト生産に用いる消毒種子の生産方法に関するものである。
・〔請求項9〕に係る本発明は、請求項1〜7のいずれかに記載のいずれかの方法により消毒を行った種子を用いて、育苗することを特徴とする、スプラウトの生産方法に関するものである。 The present invention has been made based on these findings.
-The present invention according to [Claim 1] is characterized in that the seed used for sprout production is subjected to sodium hypochlorite treatment and then sterilized in the order of lysozyme treatment. It relates to disinfection methods.
The present invention according to [Claim 2] relates to the seed disinfection method according to claim 1, wherein the lysozyme treatment is performed using a solution containing 0.2 to 20 mg / mL lysozyme.
The present invention according to [Claim 3] relates to the seed disinfection method according to claim 1 or 2, wherein the lysozyme treatment is performed at 10 to 60 ° C. for 0.5 to 6 hours.
The present invention according to [Claim 4] relates to the seed disinfection method according to any one of claims 1 to 3, wherein the lysozyme is C-type lysozyme.
-The present invention according to [Claim 5] is characterized in that the lysozyme is C-type lysozyme derived from poultry, or a mutant protein thereof; Micrococcus lysodeikticus possessed by a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 5. The seed disinfection method according to any one of claims 1 to 4, wherein the relative activity is 1 or more when the lytic activity against 1 is 1.
-The present invention according to [Claim 6] is that the sodium hypochlorite treatment is performed for 0.5 to 6 hours using a solution containing 50 to 500 ppm of sodium hypochlorite. The method for disinfecting seeds according to any one of 5 above.
-The present invention according to (Claim 7) is characterized in that the seeds are radish genus, Brassica genus, Gumba genus genus, Cervus genus, Horseradish genus, Dutch genus, White genus, Wasabi, The seeds of a plant belonging to any of the following: Pea, Peanuts, Chickpeas, Cypresses, Prunus, Fenugreek, Inuta, Buckwheat, Sesame, Egoma, Sunflower, or Pumpkin The seed disinfection method according to any one of claims 1 to 6, wherein the sprout obtained by germination from the seed is edible.
The present invention according to [Claim 8] relates to a method for producing disinfected seeds for sprout production, characterized in that seeds are disinfected by any of the methods according to any one of claims 1 to 7. It is.
-The present invention according to [Claim 9] relates to a method for producing a sprout, characterized by raising seedlings using seeds sterilized by any one of claims 1 to 7. Is.

本発明は、スプラウト生産工程において、従来法である次亜塩素酸ナトリウム処理に比べて、著しく高い消毒効率により種子消毒を行うことを可能とする。
なお、本発明における消毒方法は、スプラウトの生産効率を低下させない方法であり、食品安全性の観点においても問題がない方法である。 The present invention makes it possible to perform seed disinfection in the sprout production process with a significantly higher disinfection efficiency than the conventional method of sodium hypochlorite treatment.
In addition, the disinfection method in the present invention is a method that does not reduce the production efficiency of sprout, and is a method that has no problem from the viewpoint of food safety.

また、本発明により生産した種子を用いてスプラウトを生産することにより、スプラウト可食部に付着している生菌数を、著しく低減させることを可能とする。
これにより、スプラウト生産物（パック詰め製品）の品質及び日持ちを、大幅に向上させることを可能とする。
そして、O-157等の有害微生物の侵入に起因する、食中毒の発生リスクを大幅に低減できることが期待される。
Moreover, by producing sprout using the seeds produced according to the present invention, the number of viable bacteria adhering to the sprout edible portion can be significantly reduced.
This makes it possible to greatly improve the quality and shelf life of sprout products (packed products).
And it is expected that the risk of food poisoning caused by the invasion of harmful microorganisms such as O-157 can be greatly reduced.

実施例1において、次亜塩素酸ナトリウム処理とリゾチーム処理を行って消毒を行ったかいわれ大根種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 1, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about a radish seed said to have disinfected by performing sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment. 実施例2において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム濃度を変えて消毒を行ったかいわれ大根種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 2, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about a radish seed said to have disinfected by changing a lysozyme density | concentration after sodium hypochlorite treatment. 実施例3において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理（0.25mg/mL）の時間を変えて消毒を行ったかいわれ大根種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 3, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about the radish seed which was said to be disinfected by changing the time of lysozyme treatment (0.25 mg / mL) after sodium hypochlorite treatment. 実施例3において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理（0.5mg/mL）の時間を変えて消毒を行ったかいわれ大根種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 3, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about the radish seed which was said to be disinfected by changing the time of lysozyme treatment (0.5 mg / mL) after sodium hypochlorite treatment. 実施例3において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理（1mg/mL）の時間を変えて消毒を行ったかいわれ大根種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 3, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about a radish seed said to have disinfected by changing the time of a lysozyme process (1 mg / mL) after a sodium hypochlorite process. 実施例4において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行ったかいわれ大根種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 4, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about a radish seed said to have disinfected by performing a lysozyme process after a sodium hypochlorite process. 実施例5において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行ったかいわれ大根種子について、発芽率を測定した結果である。In Example 5, it is the result of having measured the germination rate about the radish seed said to have disinfected by performing a lysozyme process after a sodium hypochlorite process. 実施例6において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行ったかいわれ大根種子を発芽させ、育苗して得たスプラウト生食部（胚軸部及び子葉部）に付着していた生菌に由来するコロニー数を測定した結果である。In Example 6, after treatment with sodium hypochlorite, lysozyme treatment was performed to disinfect, and radish seeds were germinated and seedlings were attached to sprout raw eating parts (hypocotyl part and cotyledon part). It is the result of having measured the number of colonies derived from bacteria. 実施例7において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行ったごま種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 7, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about the sesame seed which disinfected by the lysozyme process after the sodium hypochlorite process. 実施例7において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行っただったんそば種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 7, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about the buckwheat seed which performed the lysozyme process after the sodium hypochlorite process and disinfected. 実施例7において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行ったアルファルファ種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 7, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about the alfalfa seed which disinfected by performing the lysozyme process after the sodium hypochlorite process. 実施例7において、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行って消毒を行ったブロッコリースプラウト種子について、保菌種子率を測定した結果である。In Example 7, it is the result of having measured the germ-bearing seed rate about the broccoli sprout seed which disinfected by the lysozyme process after the sodium hypochlorite process. 本発明に係る種子の消毒方法を取り入れた場合の、スプラウト生産工程の一態様を示すフロー図である。It is a flow figure showing one mode of a sprout production process at the time of taking in a seed disinfection method concerning the present invention.

〔対象種子〕
本発明において、消毒対象となる種子としては、スプラウトの生産に用いる種子であれば、如何なる種子についても対象とすることができる。
特には、従来の消毒法である次亜塩素酸ナトリウム処理では十分な消毒効果が得られない種子に対して、極めて効果的に施用することができる。 [Target seed]
In the present invention, as a seed to be disinfected, any seed can be used as long as it is a seed used for sprout production.
In particular, it can be applied very effectively to seeds for which a sufficient disinfection effect cannot be obtained by the conventional sodium hypochlorite treatment, which is a conventional disinfection method.

ここで、スプラウト（sprout）とは、野菜類, 豆類, 穀類の種子を発芽させて得られる生食対象となる芽を指す。
生食対象とする芽の状態としては、発芽から1〜20日が経過した子葉及び／又は茎（胚軸）を食用とするものである。植物種によって、生食に適する場合もあれば、食材として利用する場合もある。
スプラウトのタイプとしては、植物種類によって、子葉を緑化させる‘かいわれ型’と、子葉を緑化させない‘もやし型’に、大きく二別することができる。 Here, the sprout (sprout) refers to a bud to be a raw eating target obtained by germinating seeds of vegetables, beans, and cereals.
As a state of buds to be eaten raw, cotyledons and / or stems (hypocotyls) that have passed 1 to 20 days from germination are edible. Depending on the plant species, it may be suitable for raw eating, or it may be used as an ingredient.
Depending on the plant type, the sprout type can be divided into two types: the “Koibe type” that greens the cotyledon and the “sprout type” that does not green the cotyledon.

・アブラナ科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のアブラナ科植物の種子を好適に用いることができる。 -Brassicaceae sprout As the seed used for producing the sprout that is the subject of the present invention, the following seeds of the cruciferous plant can be suitably used.

当該対象種子としては、具体的には、ダイコン属（Raphanus）に属するダイコン（R. sativus var. longipinnatus）, ハツカダイコン（別名：ラディッシュ、R. sativus var. sativus）の種子を対象とすることができる。
これらのうち、ダイコンの芽（かいわれ大根）は、かいわれ型のスプラウトとして生食用の需要が極めて高いスプラウトである。
そのため、かいわれ大根用として好適な品種系統（ルビーかいわれ, 四十日大根, サンゴかいわれ大根, 等）の種子は、特に好適に対象とすることができる。 Specifically, the target seeds may be radish (R. sativus var. Longipinnatus) and radish (aka radish, R. sativus var. Sativus) seeds belonging to the genus Raphanus. .
Of these, radish sprouts are sprouts that are highly demanded for raw consumption as coconut-type sprouts.
Therefore, seeds of varieties suitable for radish and radish (ruby squid, forty days radish, coral radish, etc.) can be particularly suitably targeted.

また、当該対象種子としては、アブラナ属（Brassica）に属する植物のほぼ全ての種子を対象とすることができる。アブラナ属に属する植物の葉は、ほぼ全てが食用とすることができるからである。
具体的には、ブロッコリー（B. oleracea var. italica）, カリフラワー（B. oleracea var. botrytis）, キャベツ（B. oleracea var. capitata）, ケール（B. oleracea var. acephala）, コールラビ（B. oleracea var. gongylodes）, セイヨウカラシナ（B. juncea）, カラシナ（B. juncea var. cernua）, タカナ（B. juncea var. integlifolia）, ミズナ（B. rapa var. lancinifolia）, アブラナ（B. rapa var. nippo-oleifera）, ハクサイ（B. rapa var. pekinensis）, コマツナ（B. rapa var. peruviridis）, チンゲンサイ（B. rapa var. chinensis）, カブ（B. rapa var. rapa）, ノザワナ（B. rapa var. hakabura）, ミズナ（B. nipposinica）, セイヨウアブラナ（B. napus）, タアサイ（B. campestris var. narinosa）, クロガラシ（B. nigra）, などの種子を対象とすることができる。
これらのうち、ブロッコリーの芽（ブロッコリースプラウト）, キャベツの一種である紫キャベツの芽（レッドキャベツスプラウト）, カラシナの芽（マスタードスプラウト）は、かいわれ型のスプラウトとして生食用の需要が高いスプラウトである。
そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 In addition, as the target seed, almost all seeds of plants belonging to Brassica can be targeted. This is because almost all leaves of plants belonging to the genus Brassica can be edible.
Specifically, broccoli (B. oleracea var. Italica), cauliflower (B. oleracea var. Botrytis), cabbage (B. oleracea var. Capitata), kale (B. oleracea var. Acephala), kohlrabi (B. oleracea) var. gongylodes), Atlantic mustard (B. juncea), Mustard (B. juncea var. cernua), Takana (B. juncea var. integlifolia), Mizuna (B. rapa var. lancinifolia), Brassica (B. rapa var. nippo-oleifera), Chinese cabbage (B. rapa var. pekinensis), Komatsuna (B. rapa var. peruviridis), Chingensai (B. rapa var. chinensis), Turnip (B. rapa var. rapa), Nozawana (B. rapa) var. hakabura), Mizuna (B. nipposinica), Brassica napus (B. napus), Taasai (B. campestris var. narinosa), Black pepper (B. nigra), etc. can be targeted.
Among these, broccoli sprouts (broccoli sprout), purple cabbage sprouts (red cabbage sprout), which is a kind of cabbage, mustard sprouts (mustard sprout) are sprouts that are in high demand for raw consumption as a kind of sprout .
Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

また、当該対象種子としては、グンバイナズナ属（Thlaspi）に属するコショウソウ（別名：ガーデンクレス、T. arvense）、；キバナスズシロ属（Eruca）に属するキバナスズシロ（別名：ルッコラ、E. vesicaria）、；セイヨウワサビ属（Armoracia）に属するセイヨウワサビ（別名：ホースラディッシュ、A. rusticana）、；オランダガラシ属（Nasturtium）に属するオランダガラシ（別名：クレソン、N. officinale）、；シロガラシ属（Sinapis）に属するシロガラシ（S. alba, 又は, S. hirta）、；ワサビ属（Wasabia）に属するワサビ（W. japonica）、；の種子を対象とすることができる。
これらのうち、コショウソウの芽（クレススプラウト）は、かいわれ型スプラウトとして生食用の需要が高いスプラウトである。
そのため、クレススプラウト用として好適な品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 In addition, as the target seeds, Pseudomonas belonging to the genus Thlaspi (alias: Garden Cres, T. arvense); Kibanasuzushiro belonging to the genus Eruca (alias: Arugula, E. vesicaria), A horseradish belonging to the genus Armoracia (also known as horseradish, A. rusticana); a Dutch pepper belonging to the genus Nasturtium (also known as watercress, N. officinale); a genus Sinapis; The seeds of white pepper (S. alba or S. hirta), which belongs to the genus Wasabi (W. japonica), can be targeted.
Among these, pepper sprout (cress sprout) is a sprout that has a high demand for raw food as a so-called sprout.
Therefore, seeds of a variety line suitable as a cress sprout can be particularly preferably targeted.

・マメ科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のマメ科植物の種子を好適に用いることができる。
当該対象種子としては、具体的には、ササゲ属（Vigna）に属するリョクトウ（別名：グリーンマッペ、V. radiata）, ケツルアズキ（別名：ブラックマッペ、V. mungo）、；ダイズ属（Glycine）に属するダイズ（G. max）、；エンドウ属（Pisum）に属するエンドウ（P. stivum）、；ラッカセイ属（Arachis）に属するラッカセイ（A. hypogaea）、；ヒヨコマメ属（Cicer）に属するヒヨコマメ（C. arietinum）、；ヒラマメ属（Lens）に属するヒラマメ（別名：レンズマメ、L. culinaris）、；ウマゴヤシ属（Medicago）に属するムラサキウマゴヤシ（別名：アルファルファ、M. sativa）、；フェヌグリーク属（Trigonella）に属するコロハ（T. foenum-graecum）、；の種子を対象とすることができる。
これらのうち、リョクトウの芽（緑豆もやし）, ケツルアズキの芽（豆もやし）, ダイズの芽（大豆もやし）, ムラサキウマゴヤシ（アルファルファ）の芽, コロハ（フェヌグリーク）の芽は、もやしとしての需要が極めて高いスプラウトである。
また、エンドウの芽（豆苗）は、かいわれ型スプラウトとして食材の需要が高いスプラウトである。
そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 -Legume sprout As the seed used for production of the sprout which is the subject of the present invention, the following legume seeds can be preferably used.
Specific examples of the target seeds include mungbean (also known as green mappe, V. radiata) belonging to cowpea genus (Vigna), black beetle (also known as black mappe, V. mungo), and soybean genus (Glycine). Soybean (G. max); Pea belonging to the genus Pissum (P. stivum); Peanut belonging to the genus Arachis (A. hypogaea); Chick pea (C. arietinum belonging to the genus Cicer) ),; Lentil belonging to the genus (Lens) (also known as lentil, L. culinaris); purple corn (also known as alfalfa, M. sativa) belonging to the genus Medicago; fenugreek belonging to the genus Trigonella (T. foenum-graecum); can be targeted.
Among these, mung bean sprouts (mung bean sprouts), black bean sprouts (bean sprouts), soybean sprouts (soy bean sprouts), purple palm alfalfa sprouts, fenugreek sprouts are in great demand as sprouts High sprout.
Pea sprouts (bean seedlings) are sprouts that have high demand for foodstuffs as cocoon-type sprout.
Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

・タデ科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のタデ科植物の種子を好適に用いることができる。 -Seeds of the family Taceae As seeds used for the production of the sprout that is the subject of the present invention, the seeds of the following seeds can be used preferably.

当該対象種子としては、具体的には、イヌタデ属（Persicaria）に属するヤナギタデ（P. hydropiper）、；ソバ属（Fagopyrum）に属するソバ（F. exculentum）, ダッタンソバ（F. tataricum）、；の種子を対象とすることができる。
これらのうち、ヤナギタデの一種であるベニタデの芽, ソバの芽, ダッタンソバの芽は、かいわれ型スプラウトとして生食用の需要が高いスプラウトである。そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 As the target seed, specifically, seeds of P. hydropiper belonging to the genus Persicaria; F. exculentum, F. tataricum belonging to the genus Fagopyrum; Can be targeted.
Among these, Benitade sprout, buckwheat sprout, and tartary buckwheat sprout, which are a kind of willow, are sprouts that are in high demand for raw consumption as scallop type sprout. Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

・ゴマ科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のゴマ科植物の種子を好適に用いることができる。
当該対象種子としては、具体的には、ゴマ属（Sesamum）に属するゴマ（S. indicum）の種子を対象とすることができる。
ここで、ゴマ（白ごま, 黒ごま, 黄金ごま, 等）の芽は、かいわれ型スプラウトとして生食用の需要が高いスプラウトである。そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 -Sesame family sprout As seeds used for production of the sprout which is the subject of the present invention, the seeds of the following sesame family plants can be preferably used.
As the target seed, specifically, seeds of sesame (S. indicum) belonging to the genus Sesamum can be targeted.
Here, the buds of sesame (white sesame, black sesame, golden sesame, etc.) are sprouts that are highly demanded for raw consumption as cocoon type sprout. Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

・シソ科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のシソ科植物の種子を好適に用いることができる。
当該対象種子としては、具体的には、エゴマ属（Perilla）に属するシソ（P. frutescens）の種子を対象とすることができる。
ここで、シソ（アカシソ, アオシソ等）の芽は、かいわれ型スプラウトとして生食用の需要が高いスプラウトである。そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 -Lamiaceae sprout The following Lamiaceae plant seeds can be suitably used as seeds for production of the sprout that is the subject of the present invention.
As the target seed, specifically, seeds of perilla (P. frutescens) belonging to the genus Perilla (Perilla) can be targeted.
Here, the buds of perilla (red seaweed, blue perilla, etc.) are sprouts that are highly demanded for raw consumption as so-called sprouts. Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

・ウリ科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のウリ科植物の種子を好適に用いることができる。
当該対象種子としては、具体的には、カボチャ属（Cucurbita）に属するカボチャ（別名：西洋カボチャ、C. maxima）, トウヨウカボチャ（C. moschata）, ペポカボチャ（C. pepo）, ズッキーニ（C. pepo）, キンシウリ（C. pepo）の種子を対象とすることができる。
ここで、カボチャの芽は、かいわれ型スプラウトとして生食用の需要が期待されるスプラウトである。そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 -Cucurbitaceae sprout The seeds of the following Cucurbitaceae plants can be suitably used as seeds used in the production of the sprout that is the subject of the present invention.
Specifically, the target seeds include pumpkins belonging to the genus Cucurbita (also known as western pumpkin, C. maxima), pumpkin (C. moschata), pepo pumpkin (C. pepo), and zucchini (C. pepo). ), C. pepo seeds can be targeted.
Here, the pumpkin sprout is a sprout for which demand for raw food is expected as a so-called sprout. Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

・キク科のスプラウト
本発明の対象となるスプラウトの生産に用いる種子としては、以下のキク科植物の種子を好適に用いることができる。
当該対象種子としては、具体的には、ヒマワリ属（Helianthus）に属するヒマワリ（H. annuus）の種子を対象とすることができる。
ここで、ヒマワリの芽は、かいわれ型スプラウトとして生食用の需要が期待されるスプラウトである。そのため、これらに属する品種系統の種子は、特に好適に対象とすることができる。 Asteraceae sprout As the seed used for production of the sprout that is the subject of the present invention, the following Asteraceae seeds can be suitably used.
Specifically, the target seed can be a seed of sunflower (H. annuus) belonging to the genus of sunflower (Helianthus).
Here, the sunflower sprout is a sprout for which demand for raw food is expected as a so-called sprout. Therefore, the seeds of the variety lines belonging to these can be particularly suitably targeted.

〔浸種処理〕
浸種処理とは、対象種子に十分に吸水させて、膨潤させた状態にすることにより、発芽率の向上と均一な発芽を促す処理である。
本発明においては、発芽処理を行う前のいずれかにおいて、対象種子に対して浸種処理を行うことが好適である。 [Immersion treatment]
The soaking treatment is a treatment that promotes improvement of germination rate and uniform germination by allowing the target seeds to sufficiently absorb water to swell.
In the present invention, it is preferable to perform the soaking process on the target seed either before the germination process.

浸種処理を行うタイミングとしては、消毒工程の前に行うことが好適である。
また、消毒工程における次亜塩素酸ナトリウム処理とリゾチーム処理の間に行うことも可能である。また、消毒工程が終わってから行うことも可能である。
また、後述する消毒工程における消毒用溶液に浸漬する処理条件（時間等）によっては、消毒工程の処理が浸種処理を兼ねたものとすることもできる。
なお、生産工程の事情によっては、当該浸種処理は省略することも可能である。 The timing for performing the soaking process is preferably performed before the disinfection step.
It can also be performed between the sodium hypochlorite treatment and the lysozyme treatment in the disinfection process. It is also possible to carry out after the disinfection process.
Further, depending on the processing conditions (time, etc.) for immersing in the disinfecting solution in the disinfecting process described later, the disinfecting process can also serve as the soaking process.
Note that depending on the circumstances of the production process, the soaking process may be omitted.

当該浸種処理として一般的には、種子が十分に浸漬する量の水に浸漬することで行うことができる。浸漬の前に、種子を水で揉み洗いすると好適である。
ここで浸漬処理に用いる水としては、大規模な生産工程においては、水道水, 井戸水, 地下水, 河川水などを用いることができるが、衛生的には水道水を用いることが望ましい。なお、生産規模が小さい場合には、蒸留水や精製水を使用することが最も望ましい。
また、当該浸漬処理は、種子に悪影響を与えない程度の殺菌剤（低濃度の次亜塩素ナトリウム等）を含む溶液を用いて行っても良い。
なお、塩分を多く含む水（海水等）は、発芽率が低下するため用いるべきではない。 In general, the soaking treatment can be performed by immersing the seeds in a sufficient amount of water. It is preferred to rinse the seeds with water before soaking.
Here, tap water, well water, ground water, river water, and the like can be used as water used for the immersion treatment in a large-scale production process, but it is desirable to use tap water for hygiene purposes. When the production scale is small, it is most desirable to use distilled water or purified water.
Further, the immersion treatment may be performed using a solution containing a bactericide (low concentration sodium hypochlorite or the like) that does not adversely affect the seeds.
In addition, water containing a large amount of salt (such as seawater) should not be used because the germination rate decreases.

浸種処理を行う温度としては、種子の発芽率に悪影響を及ぼさない温度帯である1〜60℃, 好ましくは4〜40℃, の温度帯で行うことが可能である。
また、処理時間としては、通常の処理時間の範囲内で行えば良いが、0.5〜24時間, 好ましくは1〜12時間の範囲で行うことが可能である。
なお、好ましくは、暗所にて行うことが望ましい。 The temperature for the soaking treatment can be 1 to 60 ° C., preferably 4 to 40 ° C., which is a temperature range that does not adversely affect the germination rate of the seeds.
The processing time may be within the range of normal processing time, but may be 0.5 to 24 hours, preferably 1 to 12 hours.
In addition, it is preferable to carry out in a dark place.

〔次亜塩素酸ナトリウム処理〕
本発明の種子消毒では、対象種子に対して次亜塩素酸ナトリウム処理（Hpa処理）を行うことを特徴とする方法である。 [Sodium hypochlorite treatment]
The seed disinfection of the present invention is a method characterized in that sodium hypochlorite treatment (Hpa treatment) is performed on the target seed.

当該次亜塩素酸ナトリウム処理は、次亜塩素酸ナトリウムを含む水溶液を用いて行うことができる。
ここで、次亜塩素酸ナトリウムの濃度としては、30分の処理を行った場合において、ある程度の消毒効果が得られる濃度以上であれば採用することができる。
例えば、50ppm以上, 好ましくは60ppm以上, 特には70ppm以上, さらには80ppm以上, さらには90ppm以上, さらには100ppm以上, を採用することができる。 The sodium hypochlorite treatment can be performed using an aqueous solution containing sodium hypochlorite.
Here, the concentration of sodium hypochlorite can be adopted as long as it is higher than a concentration at which a certain degree of disinfecting effect can be obtained when the treatment is performed for 30 minutes.
For example, 50 ppm or more, preferably 60 ppm or more, particularly 70 ppm or more, further 80 ppm or more, further 90 ppm or more, further 100 ppm or more can be employed.

また、上限値としては、食品上問題のない濃度であり且つ発芽率に悪影響を与えない以下の濃度であればよい。例えば、500ppm以下, 好ましくは400ppm, 特には300ppm以下, を採用することができる。 Moreover, as an upper limit, what is necessary is just the following density | concentrations which are the density | concentration which does not have a problem on a foodstuff, and does not have a bad influence on a germination rate. For example, 500 ppm or less, preferably 400 ppm, particularly 300 ppm or less can be employed.

また、次亜塩素酸を含む水溶液としては、次亜塩素酸ナトリウムの消毒効果を阻害せず, 且つ, 種子発芽率や食品として問題ない範囲であれば、界面活性剤等を含むものであってもよい。 Further, the aqueous solution containing hypochlorous acid contains a surfactant or the like as long as it does not inhibit the disinfection effect of sodium hypochlorite and has no problem as a seed germination rate or food. Also good.

当該処理は、当該次亜塩素酸ナトリウム水溶液と対象種子を接触する状態にすることで行うことができる。好ましくは、種子が十分に浸漬する液量の当該溶液中において、種子を浸漬させて行うことが望ましい。
当該浸漬は、静置処理だけでも十分に効果は得られるが、緩やかな撹拌や振盪等を行って、種子と溶液をムラなく接触させるとさらに効果的である。なお、当該撹拌や振盪は、処理中に適宜行うだけでも有効である。 The treatment can be performed by bringing the sodium hypochlorite aqueous solution into contact with the target seed. Preferably, it is desirable to immerse the seeds in the solution in such a volume that the seeds are sufficiently immersed.
The immersion is sufficiently effective only by standing treatment, but it is more effective when the seed and the solution are brought into uniform contact by performing gentle stirring or shaking. Note that the stirring and shaking are effective only by appropriately performing the treatment.

当該処理の温度としては、種子の発芽率に悪影響を及ぼさない温度帯であれば、通常の温度で行うことができる。
例えば、1〜60℃, 好ましくは4〜40℃, の温度帯で行うことが好適である。特には、室温程度である10〜35℃で行うことが好適である。 The temperature of the treatment can be performed at a normal temperature as long as it does not adversely affect the germination rate of seeds.
For example, it is suitable to carry out in a temperature range of 1 to 60 ° C., preferably 4 to 40 ° C. In particular, it is preferable to carry out at 10 to 35 ° C., which is about room temperature.

また、処理時間としては、通常の処理時間の範囲内で行えば良いが、30分（0.5時間）以上, 好ましくは45分（0.75時間）以上, で行うことが望ましい。
また、処理時間の上限としては、発芽率に悪影響を与えない範囲の時間であれば問題なく採用することができるが、具体的には6時間以下, 特には4時間以下, さらには3時間以下, さらには2時間以下, で行うことが望ましい。 The processing time may be within the range of normal processing time, but it is desirable that the processing time be 30 minutes (0.5 hours) or longer, preferably 45 minutes (0.75 hours) or longer.
The upper limit of the treatment time can be adopted without any problem as long as it does not adversely affect the germination rate. Specifically, it is 6 hours or less, particularly 4 hours or less, and even 3 hours or less. In addition, it is desirable to carry out within 2 hours.

なお、当該処理での次亜塩素酸ナトリウム濃度は、安全上や発芽率の観点から、薄い濃度での処理を行っている。そのため、当該処理のみでの殺菌作用自体はあまり高くない。
しかし、(i) 当該処理によって、溶液中の次亜塩素酸の活性酸素の働きにより、グラム陰性菌の外膜（リゾチームでは分解されない細胞壁の外側にリポ多糖の外膜）が破壊されると認められる。
さらに、(ii) 種子の種皮に対しても、発芽に影響を与えない程度での物理的な損傷が与えられる。
従って、この点を鑑みると、当該次亜塩素酸ナトリウム処理は、後述するリゾチーム処理による殺菌作用を顕著に増幅させるための前処理的な意義を有する処理と認められる。 In addition, the sodium hypochlorite density | concentration in the said process is performing the process by a thin density | concentration from a viewpoint of safety or a germination rate. Therefore, the bactericidal action itself by the treatment alone is not so high.
However, (i) it is recognized that the outer membrane of Gram-negative bacteria (the outer membrane of lipopolysaccharide outside the cell wall that is not degraded by lysozyme) is destroyed by the action of the active oxygen of hypochlorous acid in the solution. It is done.
Furthermore, (ii) seed seed coats are also physically damaged to the extent that they do not affect germination.
Therefore, in view of this point, the sodium hypochlorite treatment is recognized as a treatment having pretreatment significance for remarkably amplifying the bactericidal action by the lysozyme treatment described later.

当該次亜塩素酸処理を行った後の種子は、水等を用いて洗浄することが望ましい。好ましくは流水にて行うことが望ましい。
水としては、水道水, 井戸水, 地下水, 河川水などを用いることができるが、衛生的には水道水を用いることが望ましい。なお、生産規模が小さい場合には、蒸留水や精製水を使用することが最も望ましい。 The seed after the hypochlorous acid treatment is desirably washed with water or the like. It is desirable to carry out with running water.
As water, tap water, well water, ground water, river water, etc. can be used, but it is desirable to use tap water for hygiene purposes. When the production scale is small, it is most desirable to use distilled water or purified water.

〔リゾチーム処理〕
本発明の種子消毒では、上記次亜塩素酸ナトリウム処理を行った後、対象種子に対してリゾチーム処理（Lys処理）を行うことを特徴とする方法である。 [Lysozyme processing]
The seed disinfection according to the present invention is a method characterized by performing lysozyme treatment (Lys treatment) on target seeds after performing the sodium hypochlorite treatment.

・リゾチーム
ここで、‘リゾチーム’（Lysozyme）とは、リゾチーム活性（Micrococcus lysodeikticusに対する溶菌活性）を有するタンパク質を指す。
具体的には、リゾチームは、真正細菌の細胞壁を構成する「N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）とN-アセチルムラミン酸（MurNAc）とがβ-1,4結合した多糖類」のペプチドグルカン層に作用し、加水分解させることにより、細菌を溶菌させる作用を発揮する酵素である。
当該作用により、リゾチームは、グラム陽性菌に対して優れた殺菌作用を発揮する。
一方、当該細胞壁の外側がさらにリポ多糖の外膜で覆われているグラム陰性菌に対しては、ほとんど殺菌作用を発揮しない。 -Lysozyme Here, 'lysozyme' (Lysozyme) refers to a protein having lysozyme activity (lytic activity against Micrococcus lysodeikticus).
Specifically, lysozyme is added to the peptide glucan layer of “polysaccharide with β-1,4-linked N-acetylglucosamine (GlcNAc) and N-acetylmuramic acid (MurNAc)” that constitutes the cell wall of eubacteria. It is an enzyme that acts to lyse bacteria by acting and hydrolyzing.
Due to this action, lysozyme exhibits an excellent bactericidal action against Gram-positive bacteria.
On the other hand, it hardly exerts a bactericidal action against Gram-negative bacteria in which the outside of the cell wall is further covered with an outer membrane of lipopolysaccharide.

リゾチームは、ほとんど全ての生物にその存在が認められる保存性の高い重要なタンパク質であり、細菌防除のために重要な抗菌タンパク質としての役割を果たす。
具体的に、真核生物からは、C型（ニワトリ型：脊椎動物全般に存在する）, G型（グース型：脊椎動物全般に存在するが大型鳥類以外では発現しない）, I型（無脊椎動物型：貝類等に存在）, b型（植物型）, h型（植物型）のチゾチームの存在が報告されている。
これらは、各タイプによって、活性の性質（GlcNAc-MurNAc間β-1,4結合の加水分解活性の強さ、糖転移活性の有無、キチナーゼ活性の有無、塩存在下での活性の強さ、など）がそれぞれ異なる。 Lysozyme is a highly conserved important protein that is present in almost all living organisms, and plays a role as an important antibacterial protein for bacterial control.
Specifically, from eukaryotes, type C (chicken: present in all vertebrates), type G (goose: present in all vertebrates but not expressed except in large birds), type I (invertebrate) Animal type: present in shellfish, etc.), b-type (plant type), and h-type (plant type) thiosozyme have been reported.
Depending on the type, the nature of the activity (hydrolysis activity of β-1,4 bond between GlcNAc and MurNAc, presence or absence of transglycosylation activity, presence or absence of chitinase activity, strength of activity in the presence of salt, Etc.) are different.

本発明においては、安定したリゾチーム活性を示し且つ耐熱性が高い‘C型リゾチーム’を好適に用いることができる。
C型リゾチームは、分子量は約14kDaであり、哺乳類、鳥類、魚類等のほとんど全ての脊椎動物に存在する保存性の高いタンパク質である。哺乳類の涙や鼻水、鳥類の卵白に多く含まれ、細菌感染に重要な役割を果たしている。
また、C型リゾチームは、安定した溶菌性を示し、熱に対して高い安定性を有するタンパク質である。例えば、80℃で加熱した場合でも約50％の活性が保持される。また、室温で放置した場合でも、数ヵ月は活性が保持される。 In the present invention, 'C-type lysozyme' which exhibits stable lysozyme activity and high heat resistance can be preferably used.
C-type lysozyme has a molecular weight of about 14 kDa and is a highly conserved protein present in almost all vertebrates such as mammals, birds and fish. It is abundant in mammalian tears and runny nose and avian egg white and plays an important role in bacterial infection.
C-type lysozyme is a protein that exhibits stable lysis and has high stability to heat. For example, even when heated at 80 ° C., about 50% of the activity is retained. Even when left at room temperature, the activity is retained for several months.

本発明において用いるC型リゾチームとしては、具体的には、「(A)：配列番号1に記載のアミノ酸配列と60％以上, 好ましくは70％以上, さらには80％以上, さらには90％以上の相同性を有するタンパク質」を挙げることができる。
ここで、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質とは、ニワトリ卵白由来のC型リゾチームである。 The C-type lysozyme used in the present invention is specifically “(A): 60% or more, preferably 70% or more, more preferably 80% or more, and more than 90% or more with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1. Can be mentioned. ”
Here, the protein consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 is C-type lysozyme derived from chicken egg white.

なお、相同性の目安としては、鳥類の卵白由来のC型リゾチームは、当該配列番号1に記載のアミノ酸配列と70％以上の相同性を示す。
また、哺乳類, 魚類, 両性類のC型リゾチームは、当該配列番号1に記載のアミノ酸配列と60〜70％の相同性を示す。 As a measure of homology, C-type lysozyme derived from avian egg white shows 70% or more homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
In addition, mammalian, fish, and amphoteric C-type lysozymes show 60-70% homology with the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.

本発明において用いるC型リゾチームとしては、上記(A)の配列を有するタンパク質であることに加えて、「(B)：配列番号1に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質が有するMicrococcus lysodeikticusに対する溶菌活性を1とした場合の相対活性が、0.7以上, 好ましくは0.8以上, さらには1以上のタンパク質」であるもの、を挙げることができる。 As the C-type lysozyme used in the present invention, in addition to the protein having the sequence (A) above, “(B): a lytic activity against Micrococcus lysodeikticus possessed by the protein consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1” And a protein having a relative activity of 0.7 or more, preferably 0.8 or more, and more preferably 1 or more.

本発明においては、酵素活性, コスト, 入手容易性, などを総合的に考慮すると、C型リゾチームの中でも特に家禽類の卵白由来のC型リゾチームを用いることが好適である。
ここで家禽類とは、例えば、ニワトリ, キンケイ, キジ, コウライキジ, インドクジャク, シチメンチョウ, ホロホロチョウ, ウズラ, アヒル, ガチョウ, コブハクチョウ, ダチョウ, レア, エミュー, などを挙げることができる。
特には、生産規模やコストの点から、ニワトリのものを用いることが好適である。 In the present invention, it is preferable to use C-type lysozyme derived from poultry egg white, among C-type lysozymes, considering enzyme activity, cost, availability and the like.
Examples of the poultry include chickens, goldfish, pheasants, pheasant pheasants, Indian peacocks, turkeys, guinea fowls, quail, ducks, geese, mute swans, ostriches, rares, and emu.
In particular, it is preferable to use a chicken from the viewpoint of production scale and cost.

さらに、本発明においては、天然のC型リゾチームに基づいて作成した変異タンパク質についても、好適に用いることができる。
この場合、変異によって活性が低下したタンパク質を用いることは好適でない。そのため、当該変異タンパク質としては、上記(B)に記載の活性を有するものであることが好適である。 Furthermore, in the present invention, a mutant protein prepared based on natural C-type lysozyme can also be suitably used.
In this case, it is not preferable to use a protein whose activity is reduced by mutation. Therefore, the mutant protein preferably has the activity described in (B) above.

また、本発明に用いるリゾチームとしては、天然材料から抽出されたものを好適に用いることができるが、遺伝子導入法によって、酵母, 昆虫（カイコ等）, 動物（ブタ等）によって生産させた組み換えタンパク質であっても好適に用いることができる。 As the lysozyme used in the present invention, those extracted from natural materials can be preferably used. Recombinant proteins produced by yeasts, insects (such as silkworms), and animals (such as pigs) by gene transfer methods. However, it can be suitably used.

本発明においては、リゾチームを含む抽出液等であれば粗抽出液等を後述する反応液に添加して用いることが可能であるが、好ましくはリゾチームを（又はリゾチームを高い純度で含む画分を）精製タンパク質として用いることが好適である。
また、リゾチーム塩（好ましくは塩化リゾチーム）として粉末化したものも、好適に用いることができる。 In the present invention, an extract containing lysozyme or the like can be used by adding a crude extract or the like to the reaction solution described later, but preferably contains lysozyme (or a fraction containing lysozyme in high purity). ) It is suitable for use as a purified protein.
Moreover, what was pulverized as a lysozyme salt (preferably lysozyme chloride) can also be used suitably.

・リゾチーム反応の条件
本発明におけるリゾチーム処理は、リゾチームを含む水溶液を用いて行うことができる。
ここで、当該リゾチームを含ませる溶媒としては、水（好ましくは、水道水, 蒸留水, 精製水など）を用いることができるが、リゾチーム活性が高く維持されるように調製された水溶液を好適に用いることができる。
例えば、添加するリゾチームの至適pHが維持されるように緩衝成分（例えばTris, HEPES, リン酸緩衝液成分, など）を添加して、pH6.5〜10に調製した水溶液を好適に用いることができる。特に、通常のリゾチームはアルカリ性に至適pHがあるので、pH7以上, 好ましくはpH8以上のアルカリ性のものが好適である。（但し、中性付近に至適pHがある変異体リゾチームの場合は、中性付近のものが好適である。）
また、リゾチームの活性を高める働きのあるグリシン, キレート剤（EDTA, CDTAなど）等の物質を含むものであると、さらに好適である。 -Conditions for lysozyme reaction The lysozyme treatment in the present invention can be carried out using an aqueous solution containing lysozyme.
Here, water (preferably tap water, distilled water, purified water, etc.) can be used as a solvent containing the lysozyme, but an aqueous solution prepared so as to maintain high lysozyme activity is preferable. Can be used.
For example, an aqueous solution prepared by adding a buffer component (for example, Tris, HEPES, phosphate buffer component, etc.) so that the optimum pH of the lysozyme to be added is maintained, and adjusted to pH 6.5 to 10 should be suitably used. Can do. In particular, since normal lysozyme has an optimum pH for alkalinity, an alkaline one having a pH of 7 or more, preferably pH 8 or more is preferred. (However, in the case of mutant lysozyme having an optimum pH in the vicinity of neutral, a neutral lysozyme is preferred.)
Further, it is more preferable to include a substance such as glycine and a chelating agent (EDTA, CDTA, etc.) having a function of enhancing the activity of lysozyme.

ここで、リゾチームの濃度としては、上記次亜塩素酸ナトリウム処理後に30分の処理を行った場合において、十分な消毒効果が得られる濃度以上であれば採用することができる。
例えば、0.2mg/mL以上, 好ましくは0.25mg/mL以上, 特には0.3mg/mL以上, さらには0.4mg/mL以上, さらには0.5mg/mL以上, さらには0.6mg/mL以上, さらには0.7mg/mL以上, さらには0.8mg/mL以上, さらには0.9mg/mL以上, さらには1.0mg/mL以上,を採用することができる。
また、上限値としては、食品上問題のない濃度であり且つ発芽率に悪影響を与えない以下の濃度であればよい。
例えば、20mg/mL以下, 好ましくは15mg/mL以下, さらには10mg/mL以下, さらには7.5mg/mL以下, さらには5mg/mL以下を採用することができる。 Here, the concentration of lysozyme can be adopted as long as it is not less than a concentration at which a sufficient disinfection effect can be obtained when the treatment is performed for 30 minutes after the treatment with sodium hypochlorite.
For example, 0.2 mg / mL or more, preferably 0.25 mg / mL or more, especially 0.3 mg / mL or more, further 0.4 mg / mL or more, further 0.5 mg / mL or more, further 0.6 mg / mL or more, or even 0.7 mg / mL or more, further 0.8 mg / mL or more, further 0.9 mg / mL or more, or 1.0 mg / mL or more can be employed.
Moreover, as an upper limit, what is necessary is just the following density | concentrations which are the density | concentration which does not have a problem on a foodstuff, and does not have a bad influence on a germination rate.
For example, 20 mg / mL or less, preferably 15 mg / mL or less, further 10 mg / mL or less, further 7.5 mg / mL or less, and further 5 mg / mL or less can be employed.

当該処理は、当該リゾチーム水溶液と対象種子を接触する状態にすることで行うことができる。好ましくは、種子が浸漬する液量の当該溶液中において、種子を浸漬させて行うことが望ましい。
当該浸漬は、静置処理だけでも十分に効果は得られるが、緩やかな撹拌や振盪等を行って、種子と溶液をムラなく接触させるとさらに効果的である。なお、当該撹拌や振盪は、処理中に適宜行うだけでも有効である。
一方、激しい撹拌や振盪操作は、リゾチームを失活させるおそれがあるため、行うべきではない。 The treatment can be performed by bringing the aqueous lysozyme solution into contact with the target seed. Preferably, it is desirable to immerse the seed in the amount of the solution in which the seed is immersed.
The immersion is sufficiently effective only by standing treatment, but it is more effective when the seed and the solution are brought into uniform contact by performing gentle stirring or shaking. Note that the stirring and shaking are effective only by appropriately performing the treatment.
On the other hand, vigorous stirring and shaking operations should not be performed because they may deactivate lysozyme.

当該処理の温度としては、リゾチーム活性が高く維持され, 且つ, 種子の発芽率に悪影響を及ぼさない温度帯であれば、幅広い温度帯で行うことができる。
例えば、酵素活性が維持される10℃以上, 好ましくは15℃以上, 特には20℃以上であれば、当該処理を行うことが可能である。なお、活性の点を考慮すると、25℃以上, さらには30℃以上で行うことが好適である。
また、リゾチームは、耐熱性を有するタンパク質であるため高温での反応が可能であるが、あまりに高い温度で処理した場合、種子の発芽率に悪影響を及ぼす。
そのため、処理温度としては、60℃以下, 好ましくは55℃以下, さらには50℃以下, さらには45℃以下, で行うことが好適である。 The temperature of the treatment can be performed in a wide temperature range as long as the lysozyme activity is maintained at a high level and the germination rate of the seeds is not adversely affected.
For example, if the enzyme activity is maintained at 10 ° C. or higher, preferably 15 ° C. or higher, particularly 20 ° C. or higher, the treatment can be performed. In consideration of the activity, it is preferable to carry out at 25 ° C. or higher, more preferably 30 ° C. or higher.
In addition, lysozyme is a heat-resistant protein and can react at high temperatures. However, when it is treated at a too high temperature, it adversely affects the germination rate of seeds.
Therefore, the treatment temperature is preferably 60 ° C. or lower, preferably 55 ° C. or lower, further 50 ° C. or lower, and further 45 ° C. or lower.

なお、リゾチームの酵素活性だけに注目した場合、リゾチームの至適活性温度帯である40〜60℃付近（好ましくは45〜55℃）で行うと最も高い活性が期待される。 When attention is paid only to the enzyme activity of lysozyme, the highest activity is expected when carried out in the vicinity of 40 to 60 ° C. (preferably 45 to 55 ° C.) which is the optimum temperature range of lysozyme.

〔消毒工程における処理順番の意義〕
本発明の種子消毒では、対象種子に対して次亜塩素酸ナトリウム処理（Hpa処理）を行った後、リゾチーム処理（Lys処理）を行うという順番にて消毒を行うことを最大の特徴とする方法である。
即ち、本発明では、消毒工程を当該順番（Hpa処理→Lys処理）にて行うことにより、極めて高い消毒効果が発揮されるものとなる。 [Significance of treatment order in disinfection process]
In the seed disinfection of the present invention, a method characterized by performing disinfection in the order of performing sodium hypochlorite treatment (Hpa treatment) on the target seed and then performing lysozyme treatment (Lys treatment). It is.
That is, in the present invention, an extremely high disinfection effect is exhibited by performing the disinfection process in this order (Hpa treatment → Lys treatment).

当該組み合わせによる消毒効果は、次亜塩素酸ナトリウム処理、リゾチーム処理をそれぞれ単独で行った場合と比べて、顕著に高い効果と認められる。
これは、前記次亜塩素酸ナトリウム処理の効果により、(i) 本来はグラム陽性菌にしか殺菌効果を示さないリゾチームが、前記次亜塩素酸ナトリウム処理によりグラム陰性菌に対しても殺菌作用が発揮されるようになったこと、(ii) 種皮内部の細菌に対しても殺菌作用を発揮できるようになったこと、によって初めて発揮されるようになった効果と認められる。 The disinfection effect by the combination is recognized to be significantly higher than the case where the sodium hypochlorite treatment and the lysozyme treatment are performed individually.
This is because of the effect of the sodium hypochlorite treatment, (i) lysozyme, which originally has a bactericidal effect only on Gram-positive bacteria, has a bactericidal action on Gram-negative bacteria by the sodium hypochlorite treatment. It is recognized that it has been demonstrated for the first time by (ii) being able to exert bactericidal action against bacteria inside the seed coat.

一方、次亜塩素酸ナトリウム処理とリゾチーム処理を行う順番を逆にした場合（Lys処理→Hpa処理で行った場合）、所望の消毒効果（相乗的な消毒効果）を得ることができない。
これは、リゾチーム処理の前に次亜塩素酸ナトリウム処理を行わなかった場合、リゾチームは、グラム陰性菌の外膜に対しては十分な殺菌効果が発揮することができないためと推測される。
また、種子内部に侵入した細菌の殺菌についても、殺菌効果を発揮することができないものと推測される。 On the other hand, when the order of performing the sodium hypochlorite treatment and the lysozyme treatment is reversed (in the case of Lys treatment → Hpa treatment), a desired disinfection effect (synergistic disinfection effect) cannot be obtained.
This is presumably because lysozyme cannot exert a sufficient bactericidal effect on the outer membrane of gram-negative bacteria when sodium hypochlorite treatment is not performed before lysozyme treatment.
Moreover, it is estimated that the sterilization effect cannot be exhibited also about the sterilization of the bacteria which invaded the seed inside.

〔消毒後の滅菌種子〕
上記工程を経て得られた消毒後の種子は、保菌率が著しく低い種子であるにも関わらず、発芽率が全く低下していない種子である。さらに、食品安全性の点からも、全く問題がないものである。
ちなみに、通常の次亜塩素酸ナトリウム処理により、本発明と同程度の消毒効果を得ようとした場合、大幅に高い濃度及び／又は長時間の次亜塩素酸ナトリウム処理が必要となり、発芽率が大幅低下したものとなる。また、高濃度の次亜塩素酸ナトリウム処理の場合、食品安全上の問題も懸念される。 [Sterilized seed after disinfection]
The seed after disinfection obtained through the above-mentioned process is a seed whose germination rate is not lowered at all even though it is a seed having a remarkably low germination rate. Furthermore, there is no problem from the viewpoint of food safety.
By the way, when trying to obtain the same level of disinfection effect as that of the present invention by ordinary sodium hypochlorite treatment, a significantly higher concentration and / or prolonged sodium hypochlorite treatment is required, and the germination rate is increased. It will be greatly reduced. In addition, in the case of high concentration sodium hypochlorite treatment, there are concerns about food safety problems.

〔スプラウト生産〕
上記工程を経て得られた種子は、対象種子の種類に応じた一般的な方法により、スプラウト生産に用いることが可能となる。
また、以下の工程は、通常の食品衛生上の管理が施された清潔な環境で行うことが望ましいが、必ずしも滅菌環境にて行う必要はない。
なお、スプラウトの種類によっては、清潔な栽培容器（例えば、プラスチック製のポット等）にて、直接、発芽・育苗処理を行うことで、そのまま収穫と出荷が行うことができる。 [Sprout production]
The seeds obtained through the above steps can be used for sprout production by a general method according to the type of the target seed.
Moreover, although it is desirable to perform the following processes in a clean environment in which normal food hygiene management is performed, it is not always necessary to perform in a sterilized environment.
Depending on the type of sprout, the germination and seedling treatment can be directly performed in a clean cultivation container (for example, a plastic pot or the like), so that harvesting and shipping can be performed as they are.

上記消毒した種子は、水を含ませた支持体に播種し、常温（例えば10〜35℃）に置くことで発芽させることができる。なお、発芽処理は、好ましくは暗所にて行うことが望まし。また、多湿条件で行うことも好ましい。
また、必要に応じて、支持体に液肥を添加することも有効である。 The sterilized seed can be sown on a support soaked with water and allowed to germinate by placing it at room temperature (for example, 10 to 35 ° C.). The germination treatment is preferably performed in a dark place. Moreover, it is also preferable to carry out on humid conditions.
It is also effective to add liquid fertilizer to the support as necessary.

ここで、支持体としては、保水性を有する清潔なものであれば如何なるものを用いることができるが、例えば、ロックウール, パルプ, コットン, キッチンペーパー, 濾紙, スポンジ, ガーゼ, ピートモス, バーミキュライト, 寒天培地などを用いることができる。 Here, as the support, any clean material having water retention can be used. For example, rock wool, pulp, cotton, kitchen paper, filter paper, sponge, gauze, peat moss, vermiculite, agar A culture medium etc. can be used.

発芽後の種子は、対象種子の植物に応じて、1〜20日間育苗させることで、スプラウトを収穫することができる。
ここで、スプラウトが、緑化の必要のない‘もやし型’の場合、そのまま暗所にて育苗することができる。
一方、スプラウトが、緑化の必要のある‘かいわれ型’の場合、自然光や人工光下にて育苗する必要がある。
育苗後は、常法により収穫することができる。ポッド栽培であればポットごと回収して冷却し、そのまま出荷することができる。 The sprout can be harvested by raising the seed after germination for 1 to 20 days depending on the plant of the target seed.
Here, if the sprout is a “sprout type” that does not require greening, it can be grown in the dark as it is.
On the other hand, if the sprout is “Kai-Kou type” that needs to be greened, it is necessary to grow seedlings under natural light or artificial light.
After raising seedlings, it can be harvested by a conventional method. If it is pod cultivation, the pot can be collected, cooled, and shipped as it is.

このようにして生産されたスプラウトは、スプラウト可食部に付着している生菌数（特に細菌数）が、著しく低減されたものとなる。
従って、当該スプラウト（例えばパック詰め製品）は、品質及び日持ちが大幅に向上したものとなる。また、食中毒の発生リスクを大幅に低減されたものとなる。
In the sprout thus produced, the number of viable bacteria (particularly the number of bacteria) adhering to the sprout edible portion is significantly reduced.
Therefore, the sprout (for example, a packed product) has greatly improved quality and shelf life. In addition, the risk of food poisoning is greatly reduced.

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の範囲はこれらにより限定されるものではない。
EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated, the scope of the present invention is not limited by these.

〔調整例1〕『試薬の調製』
以下の実施例にて用いる試薬を調製した。 [Example 1] “Preparation of reagents”
Reagents used in the following examples were prepared.

(1)「次亜塩素酸水溶液の調製」
ビーカーに蒸留水500mLを注ぎ、推定残存塩素濃度が120ppmとなるように次亜塩素酸ナトリウム加え、次亜塩素酸水溶液を調製した。 (1) "Preparation of hypochlorous acid aqueous solution"
Distilled water (500 mL) was poured into a beaker, and sodium hypochlorite was added so that the estimated residual chlorine concentration was 120 ppm to prepare an aqueous hypochlorous acid solution.

(2)「リゾチーム溶液の調製」
50mLの遠心チューブ（ファルコンチューブ(R)）内に、蒸留水50mlを入れ、ニワトリ卵白由来のC型リゾチーム（Sigma社製）50mgを入れて懸濁することによって、1mg/mLリゾチーム溶液を作成した。
また、蒸留水で希釈することで、各希釈溶液を調製した。
(2) "Preparation of lysozyme solution"
In a 50 mL centrifuge tube (Falcon tube (R)), 50 ml of distilled water was added, and 50 mg of C-type lysozyme derived from chicken egg white (manufactured by Sigma) was added and suspended to prepare a 1 mg / mL lysozyme solution. .
Moreover, each diluted solution was prepared by diluting with distilled water.

〔実施例1〕『次亜塩素酸ナトリウム処理とリゾチーム処理を組み合わせた場合の消毒効果』
かいわれ大根の生産における種子の消毒において、次亜塩素酸ナトリウム処理とリゾチーム処理を組み合わせて行った場合の消毒効果を検討した。 [Example 1] "Disinfection effect when sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment are combined"
In the disinfection of seeds in the production of squid radish, the disinfection effect when sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment were combined was examined.

(1)「浸種処理」
かいわれ大根種子（品種：ルビーかいわれ）を水道水で軽く揉み洗いし、種子が十分に浸漬する量の水道水（水温18℃）に浸漬した。
その後、暗所にて、室温（25〜28℃）で約3時間静置することで種子に十分に吸水させ、種子を膨潤させた。 (1) `` Immersion treatment ''
Scalloped radish seeds (variety: ruby or sardine) were lightly rinsed with tap water and soaked in tap water (water temperature 18 ° C.) in an amount sufficient to immerse the seeds.
Thereafter, the seed was allowed to absorb water sufficiently by allowing it to stand at room temperature (25 to 28 ° C.) for about 3 hours in a dark place, thereby swelling the seed.

(2)「種子消毒」
上記膨潤後の種子を、120ppm次亜塩素酸水溶液に浸漬した。そして、室温（25℃）にて時々軽く攪拌しながら1時間静置することで、種子の消毒を行った。当該処理後の種子は、水道水の流水にて充分に洗浄した。
上記水洗浄後の種子（体積で約5mL分：約150粒）をプラスチックチューブ（50mL）内に入れ、種子全粒が十分に浸漬する量の1mg/mLリゾチーム溶液中に浸漬した。そして、35℃で1時間静置することで、種子の消毒を行った。当該処理後の種子は、水道水の流水にて充分に洗浄した（試験区1-1）。 (2) "Seed disinfection"
The swollen seeds were immersed in a 120 ppm hypochlorous acid aqueous solution. The seeds were sterilized by allowing to stand at room temperature (25 ° C) for 1 hour with occasional light stirring. The treated seeds were thoroughly washed with running tap water.
The seeds after washing with water (about 5 mL in volume: about 150 grains) were placed in a plastic tube (50 mL) and immersed in a 1 mg / mL lysozyme solution in an amount sufficient to immerse all seed grains. The seeds were sterilized by allowing to stand at 35 ° C. for 1 hour. The treated seeds were thoroughly washed with running tap water (Test Section 1-1).

一方、上記膨潤後の種子に対して、先にリゾチーム処理（1mg/mL, 35℃, 1時間）を行い、次いで次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区1-2）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理の各処理は、上記と同様にして行った。 On the other hand, the swollen seeds are first treated with lysozyme (1 mg / mL, 35 ° C, 1 hour), then treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C, 1 hour) to disinfect. Seeds were prepared (test group 1-2).
In addition, each process of a sodium hypochlorite process and a lysozyme process was performed like the above.

また、対照として、上記膨潤後の種子に対して、リゾチーム処理のみの消毒を行った種子を調製した（対照区）。なお、リゾチーム処理は、上記と同様にして行った。 Further, as a control, a seed was prepared by disinfecting only the lysozyme treatment on the seed after swelling (control group). The lysozyme treatment was performed in the same manner as described above.

(3)「保菌種子率の測定」
上記の方法にて消毒した種子（試験区1-1, 1-2, 対照区）を、LB寒天培地のプレート上に1粒ずつ（プレート1枚あたり約30粒）静置した。
これらのプレートを35℃で1晩培養し、種子から派生するバクテリア由来のコロニーの有無を観察した。また、37℃の培養後、さらに25℃で2日間培養を継続し、25℃条件で新たに生じるコロニーの有無も合わせて観察した。
観察結果に基づき、プレート上に静置した全種子数に対する、コロニーが観察された種子数の割合を算出し、保菌種子率（％）を求めた。なお、当該測定は2反復行い、その平均値を求めた。当該保菌種子率の結果を表1, 図1に示した。 (3) “Measurement of germ-bearing seed rate”
Seeds sterilized by the above method (test groups 1-1, 1-2, control group) were allowed to stand on the LB agar plate one by one (about 30 grains per plate).
These plates were cultured overnight at 35 ° C., and the presence or absence of bacterial-derived colonies derived from seeds was observed. Further, after culturing at 37 ° C., culturing was further continued at 25 ° C. for 2 days, and the presence or absence of newly formed colonies was also observed under the condition of 25 ° C.
Based on the observation results, the ratio of the number of seeds in which colonies were observed to the total number of seeds allowed to stand on the plate was calculated, and the retained seed rate (%) was determined. The measurement was repeated twice and the average value was obtained. The results of the germ-bearing seed ratio are shown in Table 1 and FIG.

(4)「結果」
その結果、次亜塩素酸ナトリウム処理の後にリゾチーム処理を行った種子（試験区1-1：Hpa処理→Lys処理）では、保菌種子率が2％と著しく低い値を示すことが明らかになった。
この値は、リゾチーム処理のみで消毒した種子（対照区：Lys処理のみ）と比べて約1/7という極めて低い値であった。 (4) "Result"
As a result, it was clarified that the seeds treated with lysozyme after sodium hypochlorite treatment (test section 1-1: Hpa treatment → Lys treatment) showed a remarkably low 2% colonization rate. .
This value was about 1/7 that of the seeds sterilized only by lysozyme treatment (control group: only Lys treatment).

一方、リゾチーム処理を行った後に次亜塩素酸ナトリウム処理を行った種子（試験区1-2：Lys処理→Hpa処理）では、保菌種子率が8.6％とやや高い値を示した。
この値は、次亜塩素酸ナトリウム処理の後にリゾチーム処理を行った種子（試験区1-1：Hpa処理→Lys処理）での値の約4.3倍であった。 On the other hand, the seeds that were treated with sodium hypochlorite after lysozyme treatment (test section 1-2: Lys treatment → Hpa treatment) showed a slightly high value of 8.6%.
This value was about 4.3 times the value in the seed (test section 1-1: Hpa treatment → Lys treatment) which was treated with lysozyme after sodium hypochlorite treatment.

これらの結果から、種子の消毒工程において、次亜塩素酸ナトリウム処理を行った後にリゾチーム処理を行う順番で消毒を行うことにより、極めて高い消毒効果が発揮されることが示された。
一方、次亜塩素酸ナトリウム処理とリゾチーム処理を行う順番を逆にした場合には、著しい消毒効果が発揮されなかった。このことから、試験区1-1の消毒効果は、それぞれの処理を単独で行った場合では想到しえない相乗的な効果であることが示された。 From these results, it was shown that in the seed disinfection process, an extremely high disinfection effect is exhibited by performing disinfection in the order of performing the lysozyme treatment after the sodium hypochlorite treatment.
On the other hand, when the order of performing the sodium hypochlorite treatment and the lysozyme treatment was reversed, the significant disinfection effect was not exhibited. From this, it was shown that the disinfection effect of test section 1-1 is a synergistic effect that cannot be conceived when each treatment is performed alone.

(5)「処理順番に関する考察」
・試験区1-1（Hpa処理→Lys処理）の場合
種子の消毒において次亜塩素酸ナトリウム処理を先に行った場合、(i) 次亜塩素酸の活性酸素の働きにより（当該殺菌作用自体はあまり高いものではないが）、グラム陰性菌の外膜（リゾチームでは分解されない細胞壁の外側にリポ多糖の外膜）が、破壊されるものと考えられる。
また、(ii) 次亜塩素酸の活性酸素は、発芽に影響を与えない程度で種子の種皮に物理的な損傷を与えていると考えられる。
これらの点を鑑みると、次亜塩素酸ナトリウム処理は、リゾチーム処理による殺菌作用を増幅させるための前処理的な意義を有する処理と認められる。 (5) “Study on processing order”
・ In the case of test section 1-1 (Hpa treatment → Lys treatment) When the sodium hypochlorite treatment was first performed in the disinfection of seeds, (i) due to the action of active oxygen of hypochlorous acid (the bactericidal action itself) Is not very high), but the outer membrane of gram-negative bacteria (the outer membrane of lipopolysaccharide outside the cell wall that is not degraded by lysozyme) is thought to be destroyed.
In addition, (ii) active oxygen of hypochlorous acid is considered to cause physical damage to the seed coat of seeds to the extent that it does not affect germination.
In view of these points, the sodium hypochlorite treatment is recognized as a treatment having pretreatment significance for amplifying the bactericidal action by the lysozyme treatment.

従って、試験区1-1（Hpa処理→Lys処理）では、グラム陽性菌（リソチーム単独でも殺菌が可能な細菌）だけでなく、グラム陰性菌（本来はリゾチーム単独での殺菌ができない細菌）に対しても、強力な殺菌効果が発揮されると推測される。
さらに、種皮から種子内部に侵入した細菌に対しても、リゾチームの殺菌作用が発揮されると推測される。 Therefore, in Test Group 1-1 (Hpa treatment → Lys treatment), not only Gram-positive bacteria (bacteria that can be sterilized by lysozyme alone) but also Gram-negative bacteria (bacteria that cannot be sterilized by lysozyme alone) However, it is estimated that a strong bactericidal effect is exhibited.
Furthermore, it is speculated that the bactericidal action of lysozyme is also exerted against bacteria that have entered the seed from the seed coat.

・試験区1-2（Lys処理→Hpa処理）の場合
一方、リゾチーム処理を先に行った場合、リゾチームはグラム陰性菌に対しては十分な殺菌効果が発揮することができないと認められる。また、種子内部に侵入した細菌の殺菌についても、殺菌効果を発揮することができないと考えられる。
また、次亜塩素酸ナトリウム処理での活性酸素による殺菌作用については、リゾチーム処理の影響はないものと考えられる。
これらのことより、試験区1-2（Lys処理→Hpa処理）では、リゾチーム処理と次亜塩素酸ナトリウム処理の組み合わせによる相乗効果が発揮されていないと推測される。
・ In the case of test section 1-2 (Lys treatment → Hpa treatment) On the other hand, when lysozyme treatment is performed first, it is recognized that lysozyme cannot exert a sufficient bactericidal effect against gram-negative bacteria. Moreover, it is thought that the bactericidal effect cannot be exhibited also about the disinfection of the bacteria which invaded the seed inside.
Moreover, it is thought that there is no influence of a lysozyme process about the bactericidal action by the active oxygen in a sodium hypochlorite process.
From these facts, it is presumed that in the test section 1-2 (Lys treatment → Hpa treatment), the synergistic effect by the combination of the lysozyme treatment and the sodium hypochlorite treatment is not exhibited.

〔実施例2〕『リゾチーム濃度の検討』
次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う種子消毒において、リゾチーム処理におけるリゾチーム濃度を変化させた時の消毒効果への影響を検討した。 [Example 2] “Examination of lysozyme concentration”
In the seed disinfection after lysozyme treatment after sodium hypochlorite treatment, the effect on the disinfection effect when lysozyme concentration in lysozyme treatment was changed was examined.

(1)「種子消毒」
実施例1(1)で調製した膨潤後の大根種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行い、次いでリゾチーム処理（表2に記載の各濃度, 35℃, 1時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区2-1〜2-4）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理は、表2で示した濃度の各リゾチーム溶液を用いたことを除いては、実施例1に記載の方法と同様にして行った。
また、対照として、次亜塩素酸ナトリウム処理のみの消毒を行った種子を調製した（対照区）。 (1) "Seed disinfection"
The swollen radish seeds prepared in Example 1 (1) were treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C., 1 hour), followed by lysozyme treatment (each concentration shown in Table 2, 35 ° C. , 1 hour) to prepare disinfected seeds (test groups 2-1 to 2-4).
The sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment were performed in the same manner as in Example 1 except that each lysozyme solution having the concentration shown in Table 2 was used.
In addition, as a control, seeds that were disinfected only with sodium hypochlorite treatment were prepared (control group).

(2)「保菌種子率の測定」
上記の方法にて消毒した種子（試験区2-1〜2-4, 対照区）に対して、実施例1に記載の方法と同様にして、保菌種子率（％）を測定した。当該保菌種子率の結果を表2, 図2に示した。 (2) “Measurement of germ-bearing seed rate”
For the seeds sterilized by the above method (test groups 2-1 to 2-4, control group), the carrier-retaining seed rate (%) was measured in the same manner as in the method described in Example 1. The results of the germ-bearing seed ratio are shown in Table 2 and FIG.

(3)「結果」
その結果、リゾチーム処理におけるリゾチーム濃度の濃さと相関して、保菌種子率が低くなることが示された。
特に、リゾチーム濃度0.25mg/mL以下の溶液（試験区2-2〜2-4）を用いた場合では、1時間のリゾチーム処理を行っただけで、次亜塩素酸ナトリウム処理しか行わなかった種子（対照区）の約4割以下にまで保菌種子率が低下することが示された。 (3) "Result"
As a result, it was shown that the germ-bearing seed rate decreased in correlation with the lysozyme concentration in the lysozyme treatment.
In particular, when a solution with a lysozyme concentration of 0.25 mg / mL or less (Test Group 2-2 to 2-4) was used, seeds that were only treated with sodium hypochlorite after only 1 hour of lysozyme treatment It was shown that the germ-bearing seed rate decreased to about 40% or less of (control group).

〔実施例3〕『リゾチーム処理時間の検討』
次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う消毒方法において、リゾチーム処理時間を変化させた時の消毒効果への影響を検討した。 [Example 3] "Examination of lysozyme processing time"
In the disinfection method of performing lysozyme treatment after sodium hypochlorite treatment, the influence on the disinfection effect when lysozyme treatment time was changed was examined.

(1)「種子消毒」
実施例1(1)で調製した膨潤後の大根種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行い、次いでリゾチーム処理（表3に記載の各濃度, 35℃, 表3に記載の各時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区3-1〜3-6）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理は、表3で示した濃度の各リゾチーム溶液を用いて表3に示した時間の処理を行ったことを除いては、実施例1に記載の方法と同様にして行った。
また、対照として、次亜塩素酸ナトリウム処理のみの消毒を行った種子を調製した（対照区）。 (1) "Seed disinfection"
The swollen radish seed prepared in Example 1 (1) was treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C., 1 hour), and then treated with lysozyme (each concentration shown in Table 3, 35 ° C. , Each time described in Table 3) was performed to prepare disinfected seeds (test groups 3-1 to 3-6).
The sodium hypochlorite treatment and the lysozyme treatment were the methods described in Example 1 except that the treatments for the times shown in Table 3 were performed using the lysozyme solutions having the concentrations shown in Table 3. And performed in the same manner.
In addition, as a control, seeds that were disinfected only with sodium hypochlorite treatment were prepared (control group).

(2)「保菌種子率の測定」
上記の方法にて消毒した種子（試験区3-1〜3-6, 対照区）に対して、実施例1に記載の方法と同様にして、保菌種子率（％）を測定した。当該保菌種子率について対照区での値を100とした時の相対値の結果を算出し、表3, 図3に示した。 (2) “Measurement of germ-bearing seed rate”
For the seeds sterilized by the above method (test groups 3-1 to 3-6, control group), the carrier-retaining seed rate (%) was measured in the same manner as in the method described in Example 1. With respect to the carrier-bearing seed rate, the relative value was calculated when the value in the control group was 100, and the results are shown in Table 3 and FIG.

(3)「結果」
その結果、リゾチーム処理における処理時間の長さと相関して、保菌種子率が低くなることが示された。
特に、3時間のリゾチーム処理を行った場合では、0.25mg/mLのリゾチーム溶液を用いた場合（試験区3-2）でも、次亜塩素酸ナトリウム処理しか行わなかった種子（対照区）の約0.6割以下にまで保菌種子率が低下することが示された。
なお、当該結果は、リゾチーム濃度が異なる3種類の溶液を用いた場合で全て同じ結果であった。 (3) "Result"
As a result, it was shown that the germ-bearing seed rate decreased in correlation with the length of the treatment time in the lysozyme treatment.
In particular, when lysozyme treatment was carried out for 3 hours, even when a 0.25 mg / mL lysozyme solution was used (test group 3-2), it was about that of seeds (control group) that had only been treated with sodium hypochlorite. It was shown that the germ-bearing seed rate decreased to 0.6% or less.
The results were the same in all cases where three types of solutions having different lysozyme concentrations were used.

〔実施例4〕『統計的検証』
次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う消毒方法において、0.25mg/mLリゾチーム溶液を用いて1時間の処理を行った場合の消毒効果を、統計的に検証した。 [Example 4] "Statistical verification"
In the disinfection method in which lysozyme treatment was performed after sodium hypochlorite treatment, the disinfection effect when treated for 1 hour using a 0.25 mg / mL lysozyme solution was statistically verified.

(1)「種子消毒」
実施例1(1)で調製した膨潤後の大根種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行い、次いでリゾチーム処理（0.25mg/mL, 35℃, 1時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区4-1）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理は、0.25mg/mLのリゾチーム溶液を用いたことを除いては、実施例1に記載の方法と同様にして行った。
また、対照として、次亜塩素酸ナトリウム処理のみの消毒を行った種子を調製した（対照区）。 (1) "Seed disinfection"
The swollen radish seed prepared in Example 1 (1) was treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C, 1 hour), and then treated with lysozyme (0.25 mg / mL, 35 ° C, 1 hour). ) To prepare disinfected seeds (Test Section 4-1).
The sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment were performed in the same manner as described in Example 1, except that a 0.25 mg / mL lysozyme solution was used.
In addition, as a control, seeds that were disinfected only with sodium hypochlorite treatment were prepared (control group).

(2)「保菌種子率の測定」
上記の方法にて消毒した種子（試験区4-1, 対照区）に対して、LB寒天培地のプレート上に1粒ずつ（プレート1枚あたり約30粒）静置した。
これらのプレートを35℃で1晩培養し、種子から派生するバクテリア由来のコロニーの有無を観察した。 (2) “Measurement of germ-bearing seed rate”
The seeds sterilized by the above method (test group 4-1, control group) were allowed to stand on the LB agar plate one by one (about 30 grains per plate).
These plates were cultured overnight at 35 ° C., and the presence or absence of bacterial-derived colonies derived from seeds was observed.

観察結果に基づき、プレート上に静置した全種子数に対する、コロニーが観察された種子数の割合を算出し、保菌種子率（％）を求めた。なお、当該測定は4反復行いその平均値を求めた。当該保菌種子率の結果を表4, 図4に示した。 Based on the observation results, the ratio of the number of seeds in which colonies were observed to the total number of seeds allowed to stand on the plate was calculated, and the retained seed rate (%) was determined. The measurement was repeated 4 times and the average value was obtained. The results of the germ-bearing seed ratio are shown in Table 4 and FIG.

そして、当該試験区と対照区（次亜塩素酸ナトリウム処理のみを行った処理区）との間でのｔ-検定を行い、有意水準0.05（危険率5％）で対照区との間で有意差があった場合は、表及び図中に「＊」を記した。 Then, a t-test was performed between the test group and the control group (treated with sodium hypochlorite treatment only), and it was significant between the control group at a significance level of 0.05 (risk rate 5%). When there was a difference, “*” was marked in the table and the figure.

(3)「結果」
その結果、次亜塩素酸ナトリウム処理後に0.25mg/mLリゾチーム溶液で1時間処理して消毒した種子（試験区4-1）の保菌種子率の値（0.8％）は、次亜塩素酸ナトリウム処理のみで消毒した種子（対照区）での値（10.0％）と比べて、有意水準0.05で有意に低い値であることが示された。
（なお、当該例での保菌種子率の値が、全体的に実施例2より低い値となっていることは、保菌種子率を算出する際のプレート培養の時間が短いことに起因する。） (3) "Result"
As a result, the seed retention rate (0.8%) of the seeds that were disinfected by treatment with sodium chlorite for 1 hour after treatment with 0.25mg / mL lysozyme solution (test section 4-1) was the sodium hypochlorite treatment. Compared with the value (10.0%) of the seeds (control group) sterilized only by the control, it was shown that the value was significantly lower at a significance level of 0.05.
(Incidentally, the value of the carrier-retained seed rate in this example is lower than that in Example 2 because the plate culture time for calculating the carrier-retained seed rate is short.)

この結果から、次亜塩素酸ナトリウム処理後に0.25mg/mLリゾチーム溶液を用いて1時間の処理を行う消毒（試験区4-1）は、次亜塩素酸ナトリウム処理のみでの消毒（対照区）に対して、統計的に有意な消毒効果を発揮することが示された。 From this result, disinfection (test group 4-1), which was treated with 0.25 mg / mL lysozyme solution after sodium hypochlorite treatment for 1 hour, was disinfected only with sodium hypochlorite treatment (control group). In contrast, a statistically significant disinfecting effect was shown.

〔実施例5〕『発芽率への影響』
次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う消毒方法が、種子の発芽率に影響を与えるかを調べた。 [Example 5] “Effect on germination rate”
It was investigated whether the disinfection method of performing lysozyme treatment after sodium hypochlorite treatment affects the germination rate of seeds.

(1)「種子消毒」
実施例1(1)で調製した種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行い、次いでリゾチーム処理（1mg/mL, 35℃, 1時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区5-1）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理は、実施例1に記載の方法と同様にして行った。
また、対照として、次亜塩素酸ナトリウム処理のみの消毒を行った種子を調製した（対照区）。 (1) "Seed disinfection"
The seeds prepared in Example 1 (1) were treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C., 1 hour), followed by lysozyme treatment (1 mg / mL, 35 ° C., 1 hour), Disinfected seeds were prepared (Test Section 5-1).
The sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment were carried out in the same manner as described in Example 1.
In addition, as a control, seeds that were disinfected only with sodium hypochlorite treatment were prepared (control group).

(2)「発芽率の測定」
上記の方法にて消毒した種子（試験区5-1, 対照区）を、滅菌シャーレ内（シャーレ1枚あたり約100粒ずつ）に静置し、暗所にて25℃で一晩静置した。
翌日、1粒ずつの発芽の有無を観察し、発芽率（％）を測定した。なお、当該測定は2反復行いその平均値を求めた。当該発芽率の結果を表5, 図5に示した。 (2) "Measurement of germination rate"
Seeds disinfected by the above method (test group 5-1, control group) were left in a sterile petri dish (about 100 grains per petri dish) and left overnight at 25 ° C in the dark. .
The next day, the presence or absence of germination was observed for each grain, and the germination rate (%) was measured. The measurement was repeated twice to obtain the average value. The results of the germination rate are shown in Table 5 and FIG.

(3)「結果」
その結果、次亜塩素酸ナトリウム処理後に1mg/mLリゾチーム溶液で1時間処理して消毒した種子（試験区5-1）の発芽率の値（97.55％）は、次亜塩素酸ナトリウム処理のみで消毒した種子（対照区）での値（97.49％）と比べて、極めて近い値を示した。
この結果から、1mg/mL以下でのリゾチーム処理は、種子の発芽率を低下させないことが示された。 (3) "Result"
As a result, the germination rate value (97.55%) of the seeds (test section 5-1) that were sterilized by treatment with 1 mg / mL lysozyme solution for 1 hour after sodium hypochlorite treatment was obtained only by sodium hypochlorite treatment. Compared to the value (97.49%) in the disinfected seed (control group), the value was very close.
From these results, it was shown that lysozyme treatment at 1 mg / mL or less did not reduce seed germination rate.

また、当該例でのリゾチーム溶液は、1mg/mLという高濃度のリゾチーム溶液であった。このことを踏まえると、当該リゾチーム処理を高濃度で行ったとしも、種子の発芽率を低下させるおそれがないことが示唆された。 In addition, the lysozyme solution in this example was a lysozyme solution having a high concentration of 1 mg / mL. Based on this, it was suggested that even if the lysozyme treatment was carried out at a high concentration, there was no possibility of reducing the germination rate of seeds.

〔実施例6〕『発芽後のスプラウト生食部に付着している生菌数』
上記方法により消毒した種子を発芽させ、育苗して得たスプラウト生食部に付着している生菌数について調査した。 [Example 6] "Number of viable bacteria adhering to sprout raw eating part after germination"
The number of viable bacteria adhering to the sprout raw eating part obtained by germinating and raising seeds disinfected by the above method was investigated.

(1)「種子消毒」
実施例1(1)で調製した膨潤後の大根種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行い、次いでリゾチーム処理（1mg/mL, 35℃, 1時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区6-1）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理は、実施例1に記載の方法と同様にして行った。
また、対照として、次亜塩素酸ナトリウム処理のみの消毒を行った種子を調製した（対照区）。 (1) "Seed disinfection"
The swollen radish seeds prepared in Example 1 (1) were treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C., 1 hour), followed by lysozyme treatment (1 mg / mL, 35 ° C., 1 hour). And sterilized seeds were prepared (Test Section 6-1).
The sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment were carried out in the same manner as described in Example 1.
In addition, as a control, seeds that were disinfected only with sodium hypochlorite treatment were prepared (control group).

(2)「スプラウト生食部での生菌数の調査」
上記の方法にて消毒した種子（試験区6-1, 対照区）に対して、水道水（流水）で充分洗浄し、滅菌チューブ1本ずつに種子を1粒ずつ入れ、滅菌水を少量（200μL）加えた。
そして、暗所にて25℃で一晩静置することで発芽させた後、引き続き暗所にて25℃で6日間育苗した。 (2) “Investigation of the number of viable bacteria in the sprout eating section”
The seeds sterilized by the above method (test group 6-1 and control group) are washed thoroughly with tap water (running water), one seed is put in each sterilized tube, and a small amount of sterilized water ( 200 μL) was added.
After germination by allowing to stand overnight at 25 ° C. in the dark, seedlings were subsequently grown for 6 days at 25 ° C. in the dark.

種子から伸長した胚軸部及び子葉部（＝生食部）を、根を取り除いて回収し、磨際した。磨砕液は、滅菌水を用いて1/100及び1/1000倍に希釈し、LB寒天培地プレートに塗布し、35℃で一晩培養した後に生じたコロニー数を測定した。
胚軸部及び子葉部（＝生食部）の生鮮重量1gあたりのコロニー数を算出した結果を、表6, 図6に示した。 The hypocotyl part and cotyledon part (= raw eating part) extended from the seed were removed by removing the roots and polished. The grinding solution was diluted 1/100 and 1/1000 times with sterilized water, applied to an LB agar plate, and cultured at 35 ° C. overnight, and the number of colonies generated was measured.
The results of calculating the number of colonies per 1 g of fresh weight of the hypocotyl part and the cotyledon part (= raw eating part) are shown in Table 6 and FIG.

(3)「結果」
その結果、次亜塩素酸ナトリウム処理後に1mg/mLリゾチーム溶液で1時間処理して消毒した種子（試験区6-1）を発芽させ、育苗して得たスプラウト生食部からは、約3.3×10^３のコロニーの発生が全く確認されなかった。
それに対して、従来法である次亜塩素酸ナトリウム処理のみで消毒した種子（対照区）を発芽させ、育苗して得たスプラウト生食部からは、生鮮重量1gあたり約1.3×10^６のコロニーの発生が確認された。 (3) "Result"
As a result, the sprout raw food part obtained by germinating and raising seeds treated with 1 mg / mL lysozyme solution for 1 hour after sodium hypochlorite treatment (Test Section 6-1) was about 3.3 × 10 ^{The generation of 3} colonies was not confirmed at all.
On the other hand, the sprout raw food part obtained by germinating seeds (control group) sterilized only by sodium hypochlorite treatment, which is the conventional method, has about 1.3 × 10 ⁶ colonies per 1 g of fresh weight. Occurrence was confirmed.

この結果から、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行った種子（保菌種子率が著しく減少した種子）を用いてスプラウト生産を行った場合、生産したスプラウトに付着する生菌数は、顕著に減少することが示された。 From this result, when sprout production was performed using seeds that had been treated with lysozyme after sodium hypochlorite treatment (seed with a significantly reduced seeding rate), the number of viable bacteria attached to the sprout produced was significantly It was shown to decrease.

〔実施例7〕『他のスプラウト種子への応用』
次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う消毒の著しい効果が、他のスプラウト種子に対しても応用可能かを検討した。 [Example 7] “Application to other sprout seeds”
We examined whether the significant effect of disinfection after lysozyme treatment after sodium hypochlorite treatment can be applied to other sprout seeds.

(1)「浸種処理」
表7に示した各スプラウト種子について、実施例1に記載の方法と同様にして浸種処理を行い、種子に十分に吸水させ、種子を膨潤させた。 (1) `` Immersion treatment ''
Each sprout seed shown in Table 7 was subjected to a seeding treatment in the same manner as in the method described in Example 1, and the seed was sufficiently absorbed to swell the seed.

(2)「種子消毒」
上記膨潤後の各種子に対して、次亜塩素酸ナトリウム処理（120ppm, 25℃, 1時間）を行い、次いでリゾチーム処理（1mg/mL, 35℃, 1時間）を行って、消毒した種子を調製した（試験区7-1〜7-4）。
なお、次亜塩素酸ナトリウム処理およびリゾチーム処理は、実施例1に記載の方法と同様にして行った。
また、対照として、次亜塩素酸ナトリウム処理のみの消毒を行った各スプラウト種子を調製した（対照区1〜4）。 (2) "Seed disinfection"
Each swollen child is treated with sodium hypochlorite (120 ppm, 25 ° C, 1 hour), then treated with lysozyme (1 mg / mL, 35 ° C, 1 hour) to disinfect the seeds. Prepared (test sections 7-1 to 7-4).
The sodium hypochlorite treatment and lysozyme treatment were carried out in the same manner as described in Example 1.
In addition, as a control, sprout seeds that were disinfected only with sodium hypochlorite treatment were prepared (control group 1 to 4).

(3)「保菌種子率の測定」
上記の方法にて消毒した種子（試験区7-1〜7-4, 対照区1〜4）に対して、LB寒天培地のプレート上に1粒ずつ（プレート1枚あたり約30粒）静置した。
これらのプレートを35℃で1晩培養し、種子から派生するバクテリア由来のコロニーの有無を観察した。
観察結果に基づき、プレート上に静置した全種子数に対する、コロニーが観察された種子数の割合を算出し、保菌種子率（％）を求めた。なお、当該測定は2反復行い、その平均値を求めた。当該保菌種子率の結果を表7, 図7に示した。 (3) “Measurement of germ-bearing seed rate”
Seeds sterilized by the above method (test groups 7-1 to 7-4, control groups 1 to 4), left on a LB agar plate (about 30 tablets per plate). did.
These plates were cultured overnight at 35 ° C., and the presence or absence of bacterial-derived colonies derived from seeds was observed.
Based on the observation results, the ratio of the number of seeds in which colonies were observed to the total number of seeds allowed to stand on the plate was calculated, and the retained seed rate (%) was determined. The measurement was repeated twice and the average value was obtained. The results of the germ-bearing seed ratio are shown in Table 7 and FIG.

そして、当該試験区と対照区（次亜塩素酸ナトリウム処理のみを行った処理区）との間でのｔ-検定を行い、有意水準0.05（危険率5％）で対照区との間で有意差があった試験区については、表及び図中に「＊」を記した。 Then, a t-test was performed between the test group and the control group (treated with sodium hypochlorite treatment only), and it was significant between the control group at a significance level of 0.05 (risk rate 5%). For the test plots with differences, “*” was marked in the table and the figure.

(4)「結果」
・スプラウト種子全般への適用性
その結果、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行うことによって、ごまの種子（試験区7-1）, だったんそばの種子（試験区7-2）, アルファルファの種子（試験区7-3）, ブロッコリースプラウトの種子（試験区7-4）, の保菌種子率も、大幅に低い値を示すことが明らかになった。
また、これらの値は、次亜塩素酸ナトリウム処理のみで消毒した種子（対照区1〜4）と比べて、有意水準0.05で有意に低い値であり、顕著な消毒効果が発揮されていることが示された。
これらの結果から、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う消毒方法は、スプラウト種子全般に対して、幅広く適用可能な技術であることが実証された。 (4) "Result"
・ Applicability to all kinds of sprout seeds As a result, lysozyme treatment after sodium hypochlorite treatment gave sesame seeds (test group 7-1), soba seeds (test group 7-2), alfalfa It was clarified that the rate of seeds of the seeds of the seeds (test group 7-3) and broccoli sprout seeds (test group 7-4) was significantly low.
In addition, these values are significantly lower at a significance level of 0.05 compared to seeds sterilized only by sodium hypochlorite treatment (control group 1 to 4), and a significant disinfection effect is exhibited. It has been shown.
From these results, it was demonstrated that the disinfection method in which lysozyme treatment is performed after sodium hypochlorite treatment is a technique that can be widely applied to sprout seeds in general.

・アブラナ科植物の種子への適用性
上記スプラウト種子の中で、特にブロッコリースプラウト（試験区7-4）では、保菌種子率が0％に低下しており著しい消毒効果が発揮されていた。
この点、同じアブラナ科であるかいわれ大根について、本実施例と同じ条件（Hpa処理→Lys処理(1mg/mL,1hr)）での例（実施例2の試験区2-4）を参照すると、その保菌種子率は、対照区と比較して約1/10（16.7%→1.7%）に低減されており、著しい消毒効果が発揮されていた。
これらの結果から、次亜塩素酸ナトリウム処理後にリゾチーム処理を行う消毒方法は、特にアブラナ科の種子に対して特に好適に適用できることが示唆された。 -Applicability to the seeds of cruciferous plants Among the sprout seeds, in particular broccoli sprout (test group 7-4), the germ-bearing seed rate was reduced to 0% and a significant disinfection effect was exhibited.
In this regard, with regard to radish, which is the same cruciferous family, with reference to the example (Test section 2-4 of Example 2) under the same conditions as this example (Hpa treatment → Lys treatment (1 mg / mL, 1 hr)), The germ-bearing seed rate was reduced to about 1/10 (16.7% → 1.7%) compared to the control group, and a significant disinfection effect was exhibited.
From these results, it was suggested that the disinfection method in which the lysozyme treatment was performed after the sodium hypochlorite treatment can be particularly suitably applied to the cruciferous seeds.

本発明によれば、スプラウトの生産工程において、食品上安全であり且つ極めて効果の高い種子の消毒方法を提供することが可能となる。
これにより、本発明は、スプラウトの品質及び日持ちの向上に貢献する技術となり、食中毒の発生が防除できることが期待される。
これにより、本発明は、スプラウト生産及び販売等に関わる食品産業において、極めて有用な技術となることが期待される。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, in the production process of a sprout, it is possible to provide a seed disinfection method that is safe on food and extremely effective.
Thereby, this invention becomes a technique which contributes to the improvement of the quality and shelf life of a sprout, and it is anticipated that generation | occurrence | production of food poisoning can be controlled.
Thus, the present invention is expected to be a very useful technique in the food industry related to sprout production and sales.

Claims

A seed disinfection method comprising disinfecting seeds used for sprout production after performing sodium hypochlorite treatment and then performing lysozyme treatment.

2. The seed disinfection method according to claim 1, wherein the lysozyme treatment is performed using a solution containing 0.2 to 20 mg / mL lysozyme.

The seed sterilization method according to claim 1 or 2, wherein the lysozyme treatment is performed at 10 to 60 ° C for 0.5 to 6 hours.

The seed sterilization method according to any one of claims 1 to 3, wherein the lysozyme is C-type lysozyme.

The lysozyme is C-type lysozyme derived from poultry, or a mutant protein thereof; the relative activity when the lytic activity against Micrococcus lysodeikticus which the protein consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 has is 1 The seed disinfection method according to any one of claims 1 to 4, wherein 0.7 or more.

The seed disinfection method according to any one of claims 1 to 5, wherein the sodium hypochlorite treatment is performed for 0.5 to 6 hours using a solution containing 50 to 500 ppm of sodium hypochlorite.

The seeds are radish genus, Brassica genus, Gambia spp. Seeds of plants belonging to any one of the genus Umanago, Fenugreek, Inuta, Soba, Sesame, Egoma, Sunflower, or Pumpkin, and sprouts obtained from germination of the seeds are edible. The seed disinfection method according to any one of claims 1 to 6, wherein

A method for producing disinfected seeds for use in sprout production, characterized in that seeds are disinfected by the method according to any one of claims 1 to 7.

A sprout production method, comprising raising seedlings using seeds sterilized by any one of the methods according to any one of claims 1 to 7.