JP5759663B2 - 皮膚バリア機能改善剤等 - Google Patents

Description

本発明は、皮膚のバリア機能を改善させる皮膚バリア機能改善剤、皮膚の保湿機能を改善させる皮膚保湿機能改善剤、皮膚のセラミドを増加させる皮膚セラミド増加剤、及び表皮の角化を促進する角化改善剤等に関する。

皮膚の角質層は、体内からの水分の蒸散を抑制するとともに、外界からの刺激を防ぐバリア機能を有している。不全角化による角層の形成不全、あるいはバリア機能が紫外線、界面活性剤、乾燥、機械的刺激、活性酸素、水道水中の残留塩素等により損なわれると、乾燥肌、アトピー性皮膚炎、肌あれ等を誘発することが知られている。

従来、表皮の角化を改善する手段として、アミン誘導体の外用等が報告され（例えば、特許文献１参照）、また、バリア機能を改善する手段としては、アルニカ、ウコン等の植物成分（例えば、特許文献２参照）やパマキン、パヒマラン等の多糖類（例えば、特許文献３参照）を外用投与する方法が報告され、また角層の主要な成分の１つであり、皮膚バリア機能にとって重要なセラミドの産生を促進する手段としては、ユーカリやガマ、サボンソウ等を外用投与する方法が報告されている（例えば、特許文献４参照）。また、セラミドの経口摂取により、皮膚の保湿機能が改善されることが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。

しかし、外用投与製剤は、連日全身に適用することは困難であり、また、炎症、刺激、アレルギー等を引き起こす場合もある。一方、経口摂取によれば、手軽に全身へ適用することが可能であるが、セラミドの経口摂取では、必ずしも効果が十分であるとはいえない。
従って、経口摂取することにより皮膚の保湿・バリア機能、角化改善やセラミドの増加を十分に発揮させる方法が望まれている。

一方、中〜長鎖の脂肪酸のうち生理活性のあるものとしては、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）やＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）が知られ、これらを含む脂質が心血管系疾患の予防等に使用されている。また、最近では、パルミトレイン酸を含有する脂質に表皮中の抗菌性脂肪酸量を増大する作用があること（例えば、特許文献５参照）、あるいはＤＧＬＡ（ジホモ−γ−リノレン酸）を含有する脂質に皮膚疾患を改善する作用があること（例えば、特許文献６参照）、またα−リノレン酸を含有する脂質に角質細胞の成熟化を促進する作用が報告されている（例えば、特許文献７参照）。
しかしながら、中〜長鎖の飽和の遊離脂肪酸に皮膚のバリア機能の改善や保湿作用、角化改善作用があることは知られていない。
特許２６９９１３２号公報 特開２００３−１７１３１０号公報 特開２００２−２７５０４６号公報 特許３８１６２６２号公報 特表２００４−５０４０４４号公報 国際公開第２００６／０８５６８７号パンフレット 特開２００４−３５４５６公報 Fragrance Journal 123(1), 81(1995)

本発明は、皮膚バリア機能改善効果、保湿機能改善効果、セラミド増加効果、角化改善効果等の優れた皮膚機能改善効果を発揮する食品又は医薬品を提供することに関する。

本発明者らは、皮膚機能改善効果を発揮する成分について検討したところ、特定の炭素数を有する飽和の遊離脂肪酸が、経口摂取によって、角層セラミド量を増加し、皮膚バリア機能及び保湿機能を改善する作用、更には角化改善作用を有し、当該機能を発揮する食品又は医薬品として有用であることを見出した。

すなわち本発明は、以下の１）〜９）の発明に係るものである。
１）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする皮膚バリア機能改善剤。
２）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする皮膚セラミド増加剤。
３）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする皮膚保湿機能改善剤。
４）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする角化改善剤。
５）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とするロリクリン発現促進剤。
６）経口投与のための１）の皮膚バリア機能改善剤、２）の皮膚セラミド増加剤、３）の皮膚保湿機能改善剤、４）の角化改善剤又は５）のロリクリン発現促進剤。
７）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする皮膚バリア機能改善剤を含有する皮膚バリア機能改善用食品。
８）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする皮膚保湿機能改善剤を含有する皮膚保湿用食品。
９）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする角化改善剤を含有する角化改善用食品。
１０）炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする皮膚セラミド増加剤を含有する皮膚セラミド増加用食品。

本発明の皮膚バリア機能改善剤、皮膚セラミド増加剤、皮膚保湿機能改善剤、角化改善剤等によれば、経口摂取によって、全身の皮膚セラミドを増加でき、皮膚のバリア機能を改善・強化し、皮膚の水分含量を高めることができ、また角層形成の正常化を図ることができる。

本発明における炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸としては、炭素数１２〜３０のものがより好ましく、炭素数１６〜２４のものがより好ましい。
炭素数１０〜３６の飽和脂肪酸は、植物油脂又は動物油脂に含まれ、その殆どはトリグリセリドの状態で存在しているが、本発明の効果は、斯かるトリグリセリドの状態では得られず、遊離脂肪酸又はその塩の状態で発揮される（後記実施例参照）。
本発明の飽和の遊離脂肪酸としては、例えば、カプリン酸（Ｃ１０）、ラウリン酸（Ｃ１２）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ペンタデシル酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、マルガリン酸（Ｃ１７）、ステアリン酸（Ｃ１８）、アラキジン酸（Ｃ２０）、ベヘン酸（Ｃ２２）、リグノセリン酸（Ｃ２４）、セロチン酸（Ｃ２６）、モンタン酸（Ｃ２８）等が挙げられ、このうち、炭素数１２〜２４のものが好ましく、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸がより好ましい。

これら飽和の遊離脂肪酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などの金属塩、アルギニン塩、リジン塩などのアミノ酸塩、トリエタノールアミン塩、モノエタノールアミン塩等のアミン塩などが挙げられ、そのいずれであってもよい。
斯かる飽和の遊離脂肪酸又はその塩は、単独で使用する他、複数を組み合わせて使用することでも良い。

本発明の飽和の遊離脂肪酸は、植物油脂又は動物油脂から、公知の方法により単離、精製することにより、また、グリセロ脂質やリン脂質、脂肪酸エステル等の脂質を公知の方法により加水分解することにより得ることができる。

本発明の炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩は、後記実施例に示すように、角層セラミド量及び水分量を増加させ、皮膚のバリア機能を改善する作用を有する。従って、本発明の飽和の遊離脂肪酸又はその塩は、皮膚セラミド増加剤、保湿効果、乾燥肌の予防・改善効果等を発揮する皮膚保湿機能改善剤、及び皮膚のバリア機能の向上或いは改善効果、乾燥による肌荒れの防止・改善、アトピー性皮膚炎の予防・改善効果等を発揮する皮膚バリア機能改善剤となり得、皮膚セラミド増加剤、皮膚保湿機能改善剤又は皮膚バリア機能改善剤を製造するために使用することができる。
また、本発明の炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩は、ロリクリンの発現増加作用を有する。ロリクリンは角化過程の最終的段階で発現される分子量２６ｋＤａの不溶性のタンパク質であり、コニファイドセルエンベロープの主要成分である。ロリクリンはトランスグルタミナーゼ1の作用によってコニファイドセルエンベロープに取り込まれることが知られている。ロリクリンのノックアウトマウスでは胎生期に皮膚バリア形成の遅延が生じることが報告されている（Koch PJ , et al., J Cell Biol 2000）。従って、本発明の飽和の遊離脂肪酸又はその塩は、ロリクリン発現促進剤及び角化改善剤となり得、ロリクリン発現促進剤及び角化改善剤を製造するために使用することができる。
斯かる皮膚バリア機能改善剤、皮膚セラミド増加剤、皮膚保湿機能改善剤、角化改善剤及びロリクリン発現促進剤（以下、「皮膚バリア機能改善剤等」ともいう）は、食品或いは経口医薬品等として使用可能である。ここで、食品としては、一般飲食品の他、皮膚のバリア機能を改善させるための食品、皮膚の保湿機能の向上、皮膚のセラミドの増加、皮膚乾燥の予防・改善、肌荒れの予防・改善、アトピー性皮膚炎の予防・改善、ロリクリンの発現促進、角化改善、ニキビやフケの予防・改善、日焼け後の肌荒れの予防・改善等の美容食品、健康食品、特定保健用食品等の特別用途飲食品とすることができる。

食品の形態としては、例えば、ドリンク等のドリンク飲料、粉末ジュース等の粉末飲料、キャンディ、ドロップ、ゼリー、クッキー、チョコレート、ケーキ、ヨーグルト、ガム等の菓子類、調味料、調理油、乳製品、パン、加工米等が挙げられる。また、錠剤（タブレット）、カプセル、顆粒等の美容食品、健康食品等とすることでもよい。また犬、猫、ハムスター等のペット用の食品としてもよい。

斯かる食品は、例えば、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、ビタミン類、香料、ミネラル等の添加剤、タンパク質、脂質、糖質、炭水化物、食物繊維等の食品原料に、上記の炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸を混合し、常法に従って各種の食品形態とすることにより調製することができる。

本発明の皮膚バリア機能改善剤等を医薬品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、懸濁化剤、シロップ剤等による経口投与が挙げられる。斯かる医薬製剤の調製には、本発明の遊離脂肪酸又はその塩を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤等を適宜組み合わせて用いることができる。

本発明の皮膚バリア機能改善剤等の摂取又は投与量は、その形態、摂取者の年齢、性別その他の条件等により適宜選択されるが、通常炭素数１０〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩として、１日体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１００mg程度、好ましくは１ｍｇ〜４０ｍｇ程度とするのがよく、１日に１回又は２〜４回に分けて摂取・投与することができる。

実施例１ 脂肪酸配合エマルジョンの調製
表１に示す組成のエマルジョンを調製した。すなわち、脂肪酸又はトリグリセリド（比較例）と乳化剤（ショ糖脂肪酸エステル：ＤＫエステルＦ−１６０（第一工業製薬社）、卵黄由来ホスファチジルコリン（シグマ社））をクロロホルムに溶解し、減圧下溶媒を留去してリピッドフィルムを作製した。その後、２％牛血清アルブミン（純度９８％、Ｉｎｉｔｉａｌ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｂｙ ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ）（シグマ社）水溶液を添加し、ソニケーションにより乳化状態とした（最終脂肪酸濃度２％）。コントロール群は脂肪酸を２％アルブミン水溶液に置き換えエマルジョンとした。調製したエマルジョンは−２０℃で保存した。

実施例２ 皮膚バリア機能改善効果、角層水分量の増加効果、セラミド量増加効果
６週齢のＨＲ１ヘアレスマウスの雌を実験に用いた。実験開始前１週間は予備飼育として基本食餌（ＡＩＮ−７６Ａ配合の固形飼料（オリエンタルバイオサービス社））と水の自由摂取とした。体重により群分けを実施後（各群１０匹）、表１に示したエマルジョンを２週間連日投与した（実験中の基本食餌、飲水についても予備飼育と同様にした）。
投与は、各脂肪酸濃度２％のエマルジョン、比較例については脂肪酸当量２％のエマルジョン、およびコントロールのエマルジョンをエーテル麻酔下ゾンデ針を用いて１回／日投与した。１匹あたりの投与量はエマルジョンを０．２ｍｌ／日（脂肪酸投与量は４ｍｇ／日）とした。

１）皮膚バリア機能（経皮水分蒸散量：ＴＥＷＬ）
エマルジョンの連続投与２週間後にネンブタール麻酔下でＴＥＷＬ値の測定を行った（TewameterTM210, CK electronic GmbH社製：マウス背部3ヵ所）。本測定より各個体における平均値、および群毎の平均値を得た。
２）角層水分量（コンダクタンス）
ＳＫＩＣＯＮ―２００（ＩＢＳ社）で背部皮膚を１０ヵ所測定し、各個体における平均値および群毎の平均値を得た。
３）セラミド量（角層１mgあたりのセラミド量）：
エマルジョンを２週間投与したヘアレスマウス（各群８匹ずつ）をと殺後背部皮膚を剥離し、６０℃水浴中で１分間加熱後真皮を除去した。直ちにトリプシン溶液中で表皮を３７℃１時間処理し表皮生細胞を除き、角層を得た。凍結乾燥後角層重量を測定し、Bligh and Dyer法（「生物化学実験法９ 脂質・酸化脂質分析法入門」宮沢陽夫・藤野泰郎編著ｐ４５、2000年１月３０日改訂版初刷）により脂質を抽出し、ＴＬＣ法によりセラミドを分離し、１０％硫酸銅・８％リン酸水溶液で発色した。標準物質（Ceramides with non-hydroxy fatty acidおよびCeramides with hydroxyl fatty acid（いずれもシグマ社））の検量線から角層中のセラミド量を求めた。
結果を表２に示す。

遊離脂肪酸を含む本発明品の摂取により、遊離脂肪酸を含まないコントロール食摂取群、およびグリセロ脂質である比較品投与群と比較して、角層セラミド量の増加、コンダクタンスの増加で示される角層水分量の顕著な増加及びＴＥＷＬの低下で示されるバリア機能に有意な改善効果が認められた。

実施例３ ロリクリンの発現定量
コントロール、本発明品４、比較品２のエマルジョンを２週間連続投与したヘアレスマウス（各群10匹ずつ）をと殺後、背部皮膚を剥離し皮下脂肪を取り除いた。その後、1cm四方の皮膚を採取し、RNAlater溶液（QIAGEN社）に浸漬した。RNA easy mini kit（QIAGEN社）を用いて皮膚組織からRNAを回収し、1μgのRNAをSuperscript III （Invitrogen社）を用い、50℃の温度下で逆転写を行った。ロリクリンの発現定量はReal −Time PCR（Applied Biosystems :7500 Fast Real-Time PCR System）を用いて行い、内部標準としてGAPDH（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）の値で補正し、ロリクリンの発現量を算出した（TaqMan Gene Expression Assays:ロリクリン Mm01219255_m1 GAPDH: Mm99999915_g1）。
図１に示すように、飽和遊離脂肪酸を含む本発明品は、ロリクリンの発現増加効果が認められた。

ロリクリンの発現量を示すグラフ。

Claims (5)

1. 炭素数１２〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする経口投与のための皮膚バリア機能改善剤。
2. 炭素数１２〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする経口投与のための皮膚セラミド増加剤。
3. 炭素数１２〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする経口投与のための皮膚保湿機能改善剤。
4. 炭素数１２〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする経口投与のための角化改善剤。
5. 炭素数１２〜３６の飽和の遊離脂肪酸又はその塩を有効成分とする経口投与のためのロリクリン発現促進剤。

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