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JP5752599B2 - 酸化脂質化合物およびその使用 - Google Patents

酸化脂質化合物およびその使用 Download PDF

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Description

本発明は、そのいくつかの実施形態において、新規な酸化脂質、および、酸化脂質を、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止するために用いる方法に関連する。本発明の実施形態の方法は、疾患および障害（例えば、アテローム性動脈硬化および関連障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、ならびに、増殖性疾患または増殖性障害など）に伴う炎症を処置または防止することにおいて利用することができる。
酸化リン脂質が、様々な医学的状態の処置において、例えば、心臓血管疾患、脳血管疾患、ならびに、炎症性疾患および炎症性障害などの処置において有用であるとして以前から記載されている。
国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ２００４／０００４５３（公開番号ＷＯ０４／１０６４８６）は、本譲受人によるものであるが、酸化脂質を内因性の酸化脂質に伴う炎症の防止および処置のために記載する。１つの例示的なそのような化合物が記載され、ＣＩ−２０１として知られている（これはまた、この技術分野ではＶＢ−２０１として示される）。
国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ０１／０１０８０（公開番号ＷＯ０２／４１８２７）は、本譲受人によるものであるが、酸化脂質をアテローム性動脈硬化および関連疾患の防止および処置のために記載する。
国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ０５／０００７３５（公開番号ＷＯ０６／００６１６１）は、本譲受人によるものであるが、カラムクロマトグラフィーの使用を伴わない、治療的に有益な酸化リン脂質の工業的調製のために適用可能な合成経路を記載する。
さらなる背景技術には、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ０２／００００５（公開番号ＷＯ０２／０５３０９２）および同ＰＣＴ／ＩＬ０８／００００１３（公開番号ＷＯ０８／０８４４７２）が含まれる（これらもまた、本譲受人によるものである）。
上記の引用刊行物のすべてが、全体が本明細書中に示されるかのように参照によって組み込まれる。
上記の引用刊行物のすべてが、アルキル鎖、酸化された部分によって置換されるアルキル鎖、および、リン酸含有基が結合する炭素骨格鎖を含むエーテル化された酸化脂質を記載する。酸化された部分によって置換されるアルキル鎖が好ましくは、エーテル結合を介して炭素骨格に結合する（したがって、化合物が「エーテル化された酸化脂質」と呼ばれる）。これは、そのような結合により、当該化合物に、上述の刊行物で詳しく記載される望ましい薬理学的性質が与えられるからである。
本発明者らは、今回、新規な酸化リン脂質を設計し、かつ、その調製および試験を首尾よく行っている。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、下記の式を有する化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
（ｉｉ）Ｒ１は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
（式中、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである）
からなる群から選択される；
（ｉｉｉ）Ｒ２は、（４−メチルカルボキシ）ブチル、（３−カルボキシ）プロピル、（６−カルボキシ）ヘキサニル、（２−カルボキシ）エチル、５，６−ジヒドロキシヘキサニル、５，５−ジエトキシペンチルおよび５，５−ジメトキシペンチルからなる群から選択される；および
（ｉｖ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、アルキル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、下記の式を有する化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
（ｉｉ）Ｒ１およびＲ２はそれぞれが独立して、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
からなる群から選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、
であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
（ｉｉｉ）Ｒ３は、Ｈ、ホスファート、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸およびホスホセリンからなる群から選択される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、下記の式を有する化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
（ｉｉ）Ｒ１は、ドデシル、オクタデシル、オクチル、エイコサニル、ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル、（２−オクチル）ドデシルおよび（１５−カルボキシ）ペンタデシルからなる群から選択される；
（ｉｉｉ）Ｒ２は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
からなる群から選択され、ただし、Ｒ１が他の（１５−カルボキシ）ペンタデシルであるならば、Ｒ２は、
であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
（ｉｖ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、アルキル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、下記の式を有する化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１はＳであり、かつ、Ａ２およびＡ３はそれぞれがＯである；
（ｉｉ）Ｒ１およびＲ２はそれぞれが独立して、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
からなる群から選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、
であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
（ｉｉｉ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、アルキル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、下記の化合物からなる群から選択される化合物が提供される：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファート（ＣＩ−２０１−ＰＡ）；
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン；
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０８）；
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０２）；
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０６）；
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０５）；
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０３）；
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０９）；
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸（ＣＩ−２１０）；
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１３）；
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１４）；
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１５）；
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１６）；
１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１７）；
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）；
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）；
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉ−ＯＨ）；
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン；
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロール；
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉＥｔＡｃ）；
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉＭｅＡｃ）；
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０７）；
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン；
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１９）；
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン；（ＣＩ−２２０）；
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＶＢ−２２１）；
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＶＢ−２２２）；および
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホセリン（ＶＢ−２２３）。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、本明細書中の化合物を有効成分として含み、かつ、医薬的に許容されるキャリアを含む医薬組成物が提供される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止する方法であって、本明細書中に記載される治療効果的な量の化合物をその必要性のある対象に投与し、それにより、内因性の酸化脂質に伴う炎症を対象において処置または防止することを含む方法が提供される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを対象において低下させる方法であって、本明細書中に記載される効果的な量の化合物を対象に投与することを含む方法が提供される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置する方法であって、本明細書中に記載される効果的な量の化合物をその必要性のある対象に投与することを含む方法が提供される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止するための医薬品の製造における、本明細書中に記載される化合物の使用が提供される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを対象において低下させるための医薬品の製造における、本明細書中に記載される化合物の使用が提供される。
本発明のいくつかの実施形態の一局面によれば、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置するための医薬品の製造における、本明細書中に記載される化合物の使用が提供される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｒ１は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖である。
本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書中に記載される化合物は、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止する方法における使用のために特定される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書中に記載される化合物は、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させるための方法における使用のために特定される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書中に記載される化合物は、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置する方法における使用のために特定される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬組成物は包装材で包装され、内因性の酸化脂質に伴う炎症の処置または防止における使用のために包装材の内部または表面において印刷で特定される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬組成物は包装材で包装され、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させるために包装材の内部または表面において印刷で特定される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬組成物は包装材で包装され、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害の処置における使用のために包装材の内部または表面において印刷で特定される。
本発明のいくつかの実施形態によれば、炎症は、特発性の炎症性疾患または炎症性障害、慢性の炎症性疾患または炎症性障害、急性の炎症性疾患または炎症性障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、感染性疾患または感染性障害、炎症性の悪性疾患または悪性障害、炎症性の移植関連疾患または移植関連障害、炎症性の変性疾患または変性障害、過敏性に伴う疾患または障害、炎症性の心臓血管疾患または心臓血管障害、炎症性の脳血管疾患または脳血管障害、末梢血管疾患または末梢血管障害、炎症性の腺疾患または腺障害、炎症性の胃腸疾患または胃腸障害、炎症性の皮膚疾患または皮膚障害、炎症性の肝疾患または肝障害、炎症性の神経学的疾患または神経学的障害、炎症性の筋骨格疾患または筋骨格障害、炎症性の腎疾患または腎障害、炎症性の生殖疾患または生殖障害、炎症性の全身疾患または全身障害、炎症性の結合組織疾患または結合組織障害、炎症性腫瘍、壊死、炎症性のインプラント関連疾患またはインプラント関連障害、炎症性老化プロセス、免疫不全疾患または免疫不全障害、および、炎症性の肺疾患または肺障害からなる群から選択される疾患または障害に伴う。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的用語および／または科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、例示的な方法および／または材料が下記に記載される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
本明細書では本発明のいくつかの実施形態を単に例示し添付の図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の実施形態を例示考察することだけを目的としていることを強調するものである。この点について、図面について行う説明によって、本発明の実施形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
図１は、様々な用量のＣＩ−２０２により処理された細胞におけるＩＬ１２／２３ｐ４０産生を示すグラフである（それぞれの棒が３つのサンプルを表す）；Ｐ＜０．００４（コントロール（０μｇ／ｍｌ）との比較でのそれぞれの用量について）。
図２は、ＣＩ−２０１、ＣＩ−２０２およびホスファチジルコリン（ＰＣ）により処理された細胞における、処理後２時間、３時間および４時間でのＩＬ１２／２３ｐ４０のｍＲＮＡ発現を示すグラフである。
図３は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１８．５μＭまたは３７μＭ）のＣＩ−２０２、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまたは３４μＭ）のＣＩ−２０１、ホスファチジルコリン（ＰＣ）およびＰＢＳ／１％エタノール（ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図４Ａ−４Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０２の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図５は、ＰＢＳまたは４ｍｇ／ｍｌのＣＩ−２０２により処置されたマウスにおけるＭＯＧ誘導実験的自己免疫脳脊髄炎の発症を示すグラフである。
図６は、ＣＩ−２０２（ＣＩ−２０１のエタノールアミン類似体）処置マウスおよびコントロールマウスにおけるコラーゲン誘導関節炎の発症を示すグラフである。
図７は、様々な用量のＣＩ−２０３により処理された細胞におけるＩＬ１２／２３ｐ４０産生（それぞれの棒が６つのサンプルを表す）、および、コントロール（０μｇ／ｍｌ）との比較でのＰ値を示すグラフである。
図８は、１μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１．６μＭまたは３３μＭ）の（Ｒ）−ＣＩ−２０３（Ｒ−ＣＩ−２０３）およびラセミ状ＣＩ−２０３（ｒａｃ−ＣＩ−２０３）、１μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１．７μＭまたは３４μＭ）の（Ｒ）−ＣＩ−２０１（Ｒ−ＣＩ−２０１）および（Ｓ）−ＣＩ−２０１（Ｓ−ＣＩ−２０１）、ならびに、１μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１．３μＭまたは２６μＭ）のホスファチジルコリン（Ｐｈ．Ｃｈ．）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図９Ａ−９Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０３の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図１０は、様々な用量のＣＩ−２０９により処理された細胞におけるＩＬ１２／２３ｐ４０産生（それぞれの棒が５つのサンプルを表す）、および、コントロール（０μｇ／ｍｌ）との比較でのＰ値（１０μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌの用量についてはＰ＜０．００８であり、１μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌの用量についてはＰ＜０．０１６である）を示すグラフである。
図１１は、２０μｇ／ｍｌ（３８μＭ）のＣＩ−２０９、ＣＩ−２０１またはホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図１２Ａ−１２Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０９の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図１３は、様々な用量のＣＩ−２１０により処理された細胞におけるＩＬ１２／２３ｐ４０産生（それぞれの棒が４つのサンプルを表す）、および、コントロール（０μｇ／ｍｌ）との比較でのＰ値（１０μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌの用量についてはＰ＜０．０２９であり、２．５μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌの用量についてはＰ＜０．０５７である）を示すグラフである。
図１４は、２０μｇ／ｍｌ（３１μＭ）のＣＩ−２１０、ＣＩ−２０１またはホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図１５Ａ−１５Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２１０の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図１６は、様々な用量のＣＩ−２１６により処理された細胞におけるＩＬ１２／２３ｐ４０産生（それぞれの棒が４つのサンプルを表す）、および、コントロール（０μｇ／ｍｌ）との比較でのＰ値を示すグラフである。
図１７は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまたは３４μＭ）のＣＩ−２１５、あるいは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）またはＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図１８は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１５μＭまたは３０μＭ）のＣＩ−２１６、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまたは３４μＭ）のＣＩ−２０１、ホスファチジルコリン（ＰＣ）あるいはＰＢＳ／１％エタノール（ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図１９は、２０μｇ／ｍｌ（３８μＭ）のＣＩ−２０６またはホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図２０は、２０μｇ／ｍｌ（３５μＭ）のＣＩ−２０５、ＣＩ−２０１またはホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図２１Ａ−２１Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０６の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図２２Ａ−２２Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０５の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図２３は、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）のＣＩ−２０８、ＣＩ−２０１またはホスファチジルコリン（ＰＣ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；α−チューブリン（α−Ｔｕｂ）がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図２４Ａ−２４Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０８の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図２５Ａ−２５Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２１３の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図２６Ａ−２６Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２１４の毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図２７は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１８μＭまたは３６μＭ）のＣＩ−２１７、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまたは３４μＭ）のＣＩ−２０１、ホスファチジルコリン（ＰＣ）あるいはＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図２８は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（３１μＭ）のＣＩ−２１９、および、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）のＣＩ−２０１、あるいは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図２９は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）のＣＩ−２２０、および、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）のＣＩ−２０１、あるいは、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図３０Ａ−３０Ｂは、それぞれが、様々な用量のＣＩ−２０１−ＰＡの毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図３１は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまたは３４μＭ）の１−Ｓ−ＣＩ−２０１（ＣＩ−Ｓ−２０１）、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまた３４μＭ）のＣＩ−２０１、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図３２は、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１８μＭまたは３６μＭ）の１−Ｓ−ＣＩ−２０２（ＣＩ−Ｓ−２０２）、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１８．５μＭまた３７μＭ）のＣＩ−２０２、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１７μＭまた３４μＭ）のＣＩ−２０１、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図３３Ａ−３３Ｂは、それぞれが、様々な用量のｄｉ−ＯＨの毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図３４は、ｄｉ−ＯＨ処置マウスおよびコントロールマウスにおけるアテローム性動脈硬化病変部の面積を示すグラフである。
図３５は、ｄｉＭｅＡｃ処置マウスおよびコントロールマウスにおけるアテローム性動脈硬化病変部の面積を示すグラフである。
図３６Ａ−３６Ｂは、それぞれが、様々な用量のｄｉＥｔＡｃの毒性を試験する個々の実験の結果を示すグラフである。
図３７は、１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１．７μＭ、８．３μＭ、１６．７μＭまたは３３．３μＭ）のＶＢ−２２３、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図３８は、１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１．６μＭ、８μＭ、１６μＭまたは３２μＭ）のＶＢ−２２１、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
図３９は、１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌ（１．７μＭ、８．４μＭ、１６．８μＭまたは３３．６μＭ）のＶＢ−２２２、あるいは、ＰＢＳ／１％エタノール（Ｓｏｌ）により処理されたサンプルにおけるホスホチロシン（ｐ−チロシン）を示すウエスタンブロットの写真を示す；ＥＲＫ１／２がタンパク質負荷のためのコントロールとして示される。
本発明は、そのいくつかの実施形態において、新規な酸化脂質、および、酸化脂質を、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止するために用いる方法に関連する。本明細書で記載される酸化脂質は、疾患および障害（例えば、アテローム性動脈硬化および関連障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、ならびに、増殖性疾患または増殖性障害など）に伴う炎症を処置または防止することにおいて利用することができる。
本発明の原理および操作は、図面および付随する説明を参照してより良く理解されることができる。
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示される細部、または、実施例によって例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の実施形態が可能であり、あるいは、様々な方法で実施、または、実行される。また、本明細書中において用いられる表現法および用語法は説明のためであって、限定として見なされるべきでないことを理解しなければならない。
実験的証拠および臨床的証拠により、酸化されたＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）およびＬＤＬ成分に対する原因的役割がアテローム性動脈硬化における過度な炎症性応答の病因において示される。斑に関連した酸化ＬＤＬに対する細胞性免疫反応性および体液性免疫反応性の両方が明らかにされており、これは、アテローム発生における重要な抗酸化ＬＤＬ自己免疫成分を示唆している。従って、ＬＤＬ、酸化ＬＤＬおよびその成分は、心臓疾患、脳血管疾患および末梢血管疾患を防止および治療するための多数の治療法の標的となっている。
炎症を処置することにおける酸化リン脂質の役割が、例えば、本譲受人による国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ２００４／０００４５３（公開番号ＷＯ０４／１０６４８６）および米国特許出願第１１／５２８６５７号（米国特許出願公開第２００７−００９９８６８号）に開示される（これらの両方が、全体が本明細書中に示されるかのように参照によって組み込まれる）。
ＣＩ−２０１（これはまた、本明細書中およびこの技術分野ではＶＢ−２０１として示される）は、現在、様々な炎症状態（例えば、アテローム性動脈硬化など）を処置するための臨床試験の進んだ段階にある有望な酸化リン脂質である。
酸化脂質に伴う炎症ならびに様々な疾患および障害の処置を改善するために、本発明者らは、改善された抗炎症効果および／または改善された薬理学的成績を示すために設計される新規な酸化リン脂質および構造的に関連する化合物を調製している。
改善された抗炎症効果は、炎症プロセスのための知られているインビトロモデルおよびインビボモデルによって容易に求めることができ、また、本明細書中下記でさらに詳述されるように、処置されるべき疾患についての改善された治療効果によって示すことができる。改善された薬理学的成績には、改善された生物学的安定性、生物学的利用能、低下した毒性、ならびに、さらには、製造、配合および／または貯蔵における改善された安定性が含まれる。これらの特徴もまた、当業者によって容易に認識される実験、および、本明細書中下記でさらに詳述されるような実験によって明らかにすることができる。
下記の実施例の節において明らかにされるように、本発明を実施に移しているとき、本明細書中に記載される新たに設計された酸化脂質は、内因性の酸化ＬＤＬに対する免疫応答および／または炎症性応答に伴うサイトカイン産生を調節し、それにより、炎症性応答を炎症性疾患において、例えば、アテローム性動脈硬化およびリウマチ様関節炎（これらに限定されない）などにおいて軽減し得ることを示すことが実際に確認された。
下記の実施例の節においてさらに明らかにされるように、本明細書中に記載される新たに設計された酸化脂質は、ＣＩ−２０１と同様にチロシンのリン酸化を調節し、したがって、このことは、これらの新たに設計された酸化脂質が、ＣＩ−２０１によって示されることが以前に示された生物学的効果（例えば、抗炎症効果）をともに有することを示している。
下記の実施例の節においてさらに明らかにされるように、本明細書中に記載される化合物は、毒性を示したとしても軽微であり、これらの化合物が実質的に無毒である用量において生物学的効果を示す。
図１および図２は、炎症促進性サイトカインであるインターロイキン−１２およびインターロイキン−２３のｐ４０サブユニットの産生が例示的化合物ＣＩ−２０２によって阻害されることを示す。図３は、ＣＩ−２０２によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。図４Ａおよび図４ＢはＣＩ−２０２の毒性プロファィルを示す。図５は、ＣＩ−２０２が、マウスの自己免疫脳脊髄炎モデル（ヒトの多発性硬化症および急性播種性脳脊髄炎の実験的モデル）において治療効果的であることを示す。図６は、ＣＩ−２０２がマウスの関節炎モデルにおいて治療効果的であることを示す。
図７は、炎症促進性サイトカインであるインターロイキン−１２およびインターロイキン−２３のｐ４０サブユニットの産生が例示的化合物ＣＩ−２０３によって阻害されることを示す。図８は、ＣＩ−２０３によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。図９Ａおよび図９ＢはＣＩ−２０３の毒性プロファイルを示す。
図１０は、炎症促進性サイトカインであるインターロイキン−１２およびインターロイキン−２３のｐ４０サブユニットの産生が例示的化合物ＣＩ−２０９によって阻害されることを示す。図１１はＣＩ−２０９によるチロシンリン酸化の調節を示す。図１２Ａおよび図１２ＢはＣＩ−２０９の毒性プロファイルを示す。
図１３は、炎症促進性サイトカインであるインターロイキン−１２およびインターロイキン−２３のｐ４０サブユニットの産生が例示的化合物ＣＩ−２１０によって阻害されることを示す。図１４はＣＩ−２１０によるチロシンリン酸化の調節を示す。図１５Ａおよび図１５ＢはＣＩ−２１０の毒性プロファイルを示す。
図１６は、炎症促進性サイトカインであるインターロイキン−１２およびインターロイキン−２３のｐ４０サブユニットの産生が例示的化合物ＣＩ−２１６によって阻害されることを示す。図１８は、ＣＩ−２１６によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。
図１７はＣＩ−２１５によるチロシンリン酸化の調節を示す。
図１９は例示的化合物ＣＩ−２０６によるチロシンリン酸化の調節を示す。図２１Ａおよび図２１ＢはＣＩ−２０６の毒性プロファイルを示す。
図２０は、例示的化合物ＣＩ−２０５によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。図２２Ａおよび図２２ＢはＣＩ−２０５の毒性プロファイルを示す。
図２３は、例示的化合物ＣＩ−２０８によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。図２４Ａおよび図２４ＢはＣＩ−２０８の毒性プロファイルを示す。
図２５Ａおよび図２５Ｂ、ならびに、図２６Ａおよび図２６Ｂは、例示的化合物のＣＩ−２１３およびＣＩ−２１４の毒性プロファイルをそれぞれ示す。
図２７は、例示的化合物ＣＩ−２１７によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。
図２８は、例示的化合物ＣＩ−２１９によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。
図２９は、例示的化合物ＣＩ−２２０によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。
図３０Ａおよび図３０Ｂは例示的化合物ＣＩ−２０１−ＰＡの毒性プロファイルを示す。
図３１は、例示的化合物１−Ｓ−ＣＩ−２０１によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。
図３２は、例示的化合物１−Ｓ−ＣＩ−２０２によるチロシンリン酸化の調節を、ＣＩ−２０１によって示されるチロシンリン酸化の調節と類似しているとして示す。
図３４は、例示的化合物ｄｉ−ＯＨがマウスのアテローム性動脈硬化モデルにおいて治療効果的であることを示す。図３３Ａおよび図３３Ｂはｄｉ−ＯＨの毒性プロファイルを示す。
図３５は、例示的化合物ｄｉＭｅＡｃがマウスのアテローム性動脈硬化モデルにおいて治療効果的であることを示す。図３６Ａおよび図３６ＢはｄｉＥｔＡｃ（ＤｉＭｅＡｃに非常に近い化合物）の毒性プロファイルを示す。
図３７〜図３９は、例示的化合物のＶＢ−２２３、ＶＢ−２２１およびＶＢ−２２２によるチロシンリン酸化の調節をそれぞれ示す。
したがって、本明細書中に記載される例示的化合物は、インビトロ試験によって生物学的に活性であることが示されており、また、これらの化合物のいくつかは、インビボにおいて治療的効果的であることが確認されている。インビボで未だ試験されていない酸化脂質の成績は、好適な動物モデルにおいて、例えば、本明細書中下記の実施例の節、ならびに、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ２００４／０００４５３（公開番号ＷＯ０４／１０６４８６）および米国特許出願第１１／５２８６５７号（米国特許出願公開第２００７−００９９８６８号）に記載される動物モデルなどにおいて、また、例えば、Ｓｉｎｇｈ他、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５１：１２、２２５２〜２２５６（２００５）（これは、全体が本明細書中に示されるように組み込まれる）に記載されるように設計されるモデルにおいてさらに試験することができる。
本明細書中に記載される酸化脂質の生物学的安定性が、エーテル結合および／またはスルフィド結合が、ほとんどの脂質に存在するエステル結合に代わって存在することに起因して改善される。生物学的安定性は典型的には、化合物の治療効果を改善する。酸化脂質の生物学的安定性は、例えば、ホスホリパーゼ−Ｃによるその酵素分解を、ＥＬＩＳＡ測定または吸光度測定を使用してアッセイすることによって求めることができる。
したがって、本明細書中に記載される酸化脂質は好都合なことに、改善された治療パラメーターおよび／または薬理学的パラメーターに関して、改善された効果を、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止することにおいて示すとして認識することができる。
したがって、本発明の実施形態の一局面によれば、本明細書中に記載されるような新規な酸化脂質（例えば、酸化リン脂質）が提供される。
例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファート（本明細書ではＣＩ−２０１−ＰＡとしても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンである。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２０８としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書ではＣＩ−２０２としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書ではＣＩ−２０６としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２０５としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２０３としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２０９としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸（本明細書ではＣＩ−２１０としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２１３としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書ではＣＩ−２１４としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２１５としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書ではＣＩ−２１６としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２１７としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書では１−Ｓ−ＣＩ−２０１としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書では１−Ｓ−ＣＩ−２０２としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではｄｉ−ＯＨとしても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンである。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールである。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではｄｉＥｔＡｃとしても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではｄｉＭｅＡｃとしても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２０７としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンである。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＣＩ−２１９としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書ではＣＩ−２２０としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（本明細書ではＶＢ−２２１としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（本明細書ではＶＢ−２２２としても言及する）である。例示的実施形態によれば、酸化脂質は、１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホセリン（本明細書ではＶＢ−２２３としても言及する）である。
本明細書中で使用される接頭辞「１−Ｓ−」は、化合物がグリセロールの誘導体の代わりに１−チオグリセロールの誘導体であるように、グリセロール骨格の１位（ｓｎ−１）における酸素原子がイオウ原子によって置換される化合物を示す。
「ＣＩ−」および「ＶＢ−」の接頭辞は本明細書中では互換的に使用される。
置換基に依存して、本明細書中に記載される化合物のそれぞれにおけるいくつかの炭素原子がキラルまたは非キラルであり得る。例えば、本明細書中上記で記載される例示的化合物において、グリセロール骨格の２位における炭素原子がキラルである。本明細書中に記載される化合物に存在するキラルな炭素原子はどれも、Ｒ配置またはＳ配置であり得るか、あるいは、ラセミ体として存在し得るかのどちらかである。したがって、本発明の実施形態は、可能な立体異性体、光学異性体およびエナンチオマーのすべてを含めて、キラルな炭素原子および非キラルな炭素原子のどのような組み合わせも包含する。
下記の実施例の節において明らかにされるように、本発明の実施形態の化合物は、出発物質の立体配置を保持しながら合成することができる。本発明の実施形態の化合物はさらに、酸化された基の立体化学に関して選択的に合成することができる。従って、適切な出発物質および適切な合成条件を選択することによって、生じる化合物の光学純度（例えば、キラルな炭素および／またはラセミ状炭素の含有）および得られる立体異性体を決定することができる。ラセミ混合物が得られる場合、知られている技術を使用して、光学異性体または立体異性体を分離することができる。そのような技術が、例えば、Ｐａｕｌａ Ｙｕｒｋａｎｉｓ Ｂｒｕｉｃｅによる「Ｏｒｇａｎｉｃ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（第４版、１８０頁〜１８５頁および２１４頁、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ、Ｕｐｐｅｒ Ｓａｄｄｅ Ｒｉｖｅｒ、ＮＪ０７４５８）に記載される。
上記の化合物はそのある種の新規な構造的要素に従って特徴づけられ得る。
したがって、上記の酸化脂質のいくつかは、酸化された側鎖がその２位に結合するグリセロール骨格を含み、ただし、この場合、酸化された側鎖は、（４−メチルカルボキシ）ブチル、（３−カルボキシ）プロピル、（６−カルボキシ）ヘキサニル、（２−カルボキシ）エチル、５，６−ジヒドロキシヘキサニル、５，５−ジエトキシペンチルおよび５，５−ジメトキシペンチルからなる群から選択される。
したがって、本発明のいくつかの実施形態によれば、下記の式によってまとめて表わされる化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
（ｉｉ）Ｒ１は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
（式中、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである）
からなる群から選択される；
（ｉｉｉ）Ｒ２は、（４−メチルカルボキシ）ブチル、（３−カルボキシ）プロピル、（６−カルボキシ）ヘキサニル、（２−カルボキシ）エチル、５，６−ジヒドロキシヘキサニル、５，５−ジエトキシペンチルおよび５，５−ジメトキシペンチルからなる群から選択される；および
（ｉｖ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、アルキル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
いくつかの実施形態によれば、Ｒ１は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖である。
本明細書中上記で記載される酸化脂質のいくつかは、これらの酸化脂質が、ホスファート、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸およびホスホセリンからなる群から選択されるホスホリル成分をその３位に含むという点で特徴づけられ得るか、または、３位においてリン酸化されず、かつ、置換されないとして特徴づけられ得る（すなわち、水素原子が３位に存在する）。
したがって、本発明のいくつかの実施形態によれば、下記の式によってまとめて表わされる化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
（ｉｉ）Ｒ１およびＲ２はそれぞれが独立して、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
からなる群から選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、
であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
（ｉｉｉ）Ｒ３は、Ｈ、ホスファート、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸およびホスホセリンからなる群から選択される。
いくつかの実施形態によれば、Ｒ１は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖である。そのような実施形態においては、Ｒ２は、
であることを理解しなければならない。
本明細書中上記で記載される酸化脂質のいくつかは、これらの酸化脂質が、ドデシル、オクタデシル、オクチル、エイコサニル、ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル、（２−オクチル）ドデシルおよび（１５−カルボキシ）ペンタデシルからなる群から選択される側鎖をその１位に含むという点で特徴づけられ得る。
したがって、本発明のいくつかの実施形態によれば、下記の式によってまとめて表わされる化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
（ｉｉ）Ｒ１は、ドデシル、オクタデシル、オクチル、エイコサニル、ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル、（２−オクチル）ドデシルおよび（１５−カルボキシ）ペンタデシルからなる群から選択される；
（ｉｉｉ）Ｒ２は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
からなる群から選択され、ただし、Ｒ１が他の（１５−カルボキシ）ペンタデシルであるならば、Ｒ２は、
であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
（ｉｖ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、アルキル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
本明細書中に記載される（１５−カルボキシ）ペンタデシル基は、Ｘが、炭素が１３個のアルキル鎖であり、Ｙが水素であり、かつ、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである本明細書中に記載される下記成分：
に対応することを理解しなければならない。
同様に、（４−メチルカルボキシ）ブチル、（３−カルボキシ）プロピル、（６−カルボキシ）ヘキサニル、（２−カルボキシ）エチル、５，６−ジヒドロキシヘキサニル、５，５−ジエトキシペンチルおよび５，５−ジメトキシペンチルは、Ｚが（（３−カルボキシ）プロピル、（６−カルボキシ）ヘキサニルおよび（２−カルボキシ）エチルに関しては）−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり、または、Ｚが（５，５−ジエトキシペンチルおよび５，５−ジメトキシペンチルに関しては）−ＣＨ（ＯＲ’）２であり、または、Ｚが（５，６−ジヒドロキシヘキサニルに関しては）−ＯＨである下記成分：
に対応する。
本明細書中上記で記載される酸化脂質のいくつかは、これらの酸化脂質がイオウ原子をその１位に含み、かつ、酸素原子をその２位および３位に含むという点で特徴づけられ得る。
したがって、本発明のいくつかの実施形態によれば、下記の式によって表わされる化合物：
またはその医薬的に許容される塩が提供され、ただし、上記式において、
（ｉ）Ａ１はＳであり、かつ、Ａ２およびＡ３はそれぞれがＯである；
（ｉｉ）Ｒ１およびＲ２はそれぞれが独立して、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖、および、下記の基：
からなる群から選択され、ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方が、
であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５の鎖であり、Ｙは、
−ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択される；および、
Ｚは、
からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
（ｉｉｉ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、アルキル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
いくつかの実施形態によれば、Ｒ１は、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖である。
本発明のいくつかの実施形態によれば、本明細書中上記で記載される変数Ｚは、
からなる群から選択される。
本発明の選択可能な実施形態によれば、変数Ｙは、Ｈおよび−ＯＨからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、Ｚが−ＯＨおよび／または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）Ｈであるとき、Ｙは−ＯＨである。いくつかの実施形態において、Ｚが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、−ＣＨ（ＯＲ’）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨおよび／または−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ’であるとき、ＹはＨである。
例示的実施形態によれば、Ｒ’は、飽和している非置換Ｃ１〜４アルキルである。場合により、Ｒ’は、エチルおよびメチルからなる群から選択される。
選択可能な実施形態によれば、本明細書中に記載される、長さが２個〜２８個の炭素であるアルキル鎖は、別途具体的に示されない限り、飽和している。場合により、このアルキル鎖は、別途具体的に示されない限り、非置換である。
選択可能な実施形態によれば、本明細書中に記載される変数Ｘは、別途具体的に示されない限り、長さが１個〜２５個の炭素である飽和したアルキル鎖である。場合により、このアルキル鎖は、別途具体的に示されない限り、非置換である。
本明細書中で使用される用語「アルキル」は、直鎖基および分枝鎖基を含む飽和または不飽和の脂肪族炭化水素を示す。好ましくは、アルキル基は１個〜２０個の炭素原子を有する。数値範囲、例えば「１個〜２０個」が本明細書で述べられる場合は常に、それは基（この場合はアルキル基）が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などの２０個までの炭素原子を含むということを意味する。さらに好ましくは、アルキル基は、１個〜１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキルである。最も好ましくは、他に示さない限り、アルキル基は、１個〜４個の炭素原子を有するアルキルである。アルキル基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルフォンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシおよびアミノであり得る。いくつかの実施形態では、アルキルは非置換である。
本明細書中で使用される用語「シクロアルキル」基は、環の１つまたは複数が完全共役のπ電子系を有しない、すべて炭素からなる単環基または縮合環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。シクロアルキル基の非限定な例には、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプタトリエンおよびアダマンタンがある。シクロアルキル基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルフォンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシおよびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
「アリール」基（本明細書において「芳香族官能基」としても言及される）は、完全共役のπ電子系を有する、すべて炭素からなる単環基または縮合多環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。アリール基の非限定的な例には、フェニル、ナフタレニルおよびアントラセニルがある。アリール基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルフォンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシおよびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
「ヘテロアリール」基は、例えば、窒素、酸素およびイオウなどの１個または複数個の原子を環（１つまたは複数）に有し、さらには完全共役のπ電子系を有する単環基または縮合環（すなわち、隣接炭素原子対を共有する環）基を示す。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが含まれる。ヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルフォンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシおよびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。
「複素脂環」基は、例えば、窒素、酸素およびイオウなどの１個または複数個の原子を環（１つまたは複数）に有する単環基または縮合環基を示す。環はまた、１つまたは複数の二重結合を有することができる。しかしながら、環は完全共役のπ電子系を有しない。複素脂環基は、置換または非置換であり得る。置換されるとき、置換基は、例えば、孤立電子対、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオヒドロキシ、チオアルコキシ、チオアリールオキシ、シアノ、ニトロ、アジド、スルホニル、スルフィニル、スルフォンアミド、ホスホニル、ホスフィニル、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、尿素、チオ尿素、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｃ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシおよびアミノであり得る（これらの用語は本明細書中で定義される）。代表的な例はピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルホリン及びその類似物である。
「ヒドロキシ」基は−ＯＨ基を示す。
「アジド」基は−Ｎ＝Ｎ基を示す。
「アルコキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｏ−アルキル基および−Ｏ−シクロアルキル基の両方を示す。
「アリールオキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｏ−アリール基および−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を示す。
「チオヒドロキシ」基は−ＳＨ基を示す。
「チオアルコキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｓ−アルキル基および−Ｓ−シクロアルキル基の両方を示す。
「チオアリールオキシ」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｓ−アリール基および−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を示す。
「カルボニル」または「アシル」基は、本明細書中で定義されるように、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ基（式中、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、（環の炭素を通して結合された）ヘテロアリール、または（環の炭素を通して結合された）ヘテロ脂環状である）を示す。
「アルデヒド」基は、Ｒが水素であるカルボニル基を示す。
「チオカルボニル」基は−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ基（式中、Ｒは本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｃ−カルボキシ」基は−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ基（式中、Ｒは本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｏ−カルボキシ」基はＲＣ（＝Ｏ）−Ｏ−基（式中、Ｒは本明細書中で定義される通りである）を示す。
「アセトキシ」基はＣＨ３Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−を示す。
「オキソ」基は＝Ｏ基を示す。
「カルボン酸」基は、Ｒが水素であるＣ−カルボキシル基を示す。
「ハロ」または「ハロゲン」基は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を示す。
「スルフィニル」基は−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ基（式中、Ｒは本明細書中で定義される通りである）を示す。
「スルホニル」基は−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｒ基（式中、Ｒは本明細書中で定義される通りである）を示す。
「スルホンアミド」基は−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲ２基またはＲＳ（＝Ｏ）２−ＮＲ−基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｏ−カルバミル」基は−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ２−基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｎ−カルバミル」基はＲＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ−基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｏ−チオカルバミル」基は−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ２基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｎ−チオカルバミル」基はＲＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ−基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「アミノ」基は−ＮＲ２基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｃ−アミド」基は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ２基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「Ｎ−アミド」基はＲＣ（＝Ｏ）−ＮＲ−基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「尿素」基は−ＮＲＣ（＝Ｏ）−ＮＲ２基（式中、Ｒは各々本明細書中で定義される通りである）を示す。
「ニトロ」基は−ＮＯ２基を示す。
「シアノ」基は−Ｃ≡Ｎ基を示す。
用語「ホスホニル」または「ホスホネート」は−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２基を示し、式中、Ｒは上述の通り定義される。
用語「ホスフィニル」は−ＰＲ２基（式中、Ｒは各々上述の通り定義される）を示す。
用語「チオ尿素」は、−ＮＲ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＲ−基（式中、Ｒは各々上述の通り定義される）を示す。
本実施形態はさらに、本明細書中上記に記載される化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、プロドラッグ、水和物および溶媒和物を包含する。
用語「プロドラッグ」は、活性な化合物（活性な元の薬物）にインビボで変換される薬剤を示す。プロドラッグは典型的には、元の薬物の投与を容易にするために有用である。プロドラッグは、例えば、経口投与による生体利用性を有する場合があるが、元の薬物は生体利用性を有しない。プロドラッグはまた、医薬組成物において、元の薬物と比較したとき、改善された溶解性を有し得る。プロドラッグはまた、活性な化合物の持続した放出をインビボで達成するために使用される。プロドラッグの非限定的な一例が、エステル（「プロドラッグ」）として投与される、１つまたは複数のカルボン酸部分を有する本明細書に記載の化合物である。そのようなプロドラッグはインビボで加水分解され、それにより、遊離化合物（元の薬物）をもたらす。選択されたエステルは、プロドラッグの溶解性特性および加水分解速度の両方に影響を及ぼし得る。
表現「薬学的に受容可能な塩」は元の化合物の荷電化学種およびその対イオンを示し、この場合、対イオンは、元の化合物の溶解性特性を変化させ、かつ／または、元の化合物による生物に対する何らかの著しい刺激を軽減し、一方で、投与された化合物の生物学的な活性および性質を妨げないために典型的には使用される。薬学的に受容可能な塩の非限定的な一例が、カルボキシラートアニオンおよびカチオン（例えば、アンモニウム、ナトリウムおよびカリウムなど、これらに限定されない）である。
用語「溶媒和物」は、溶質（本実施形態の化合物）および溶媒によって形成され、それにより、溶媒が溶質の生物学的活性を妨害しない、様々な化学的量論（例えば、二、三、四、五、六など）の複合体を示す。好適な溶媒には、例えば、エタノールおよび酢酸などが含まれる。
用語「水和物」は、溶媒が水である、本明細書中上記で定義されるような溶媒和物を示す。
本明細書中下記において詳しく記載されるように、本実施形態の新しく設計された化合物は非常に有益な免疫調節活性を発揮し、従って、様々な治療的適用において利用することができる。これらの化合物を治療的適用において利用することは、それ自体でのその投与、あるいは、本発明の化合物が好適なキャリアまたは賦形剤と混合される医薬組成物の一部としてのその投与のいずれかを伴う。
従って、本発明の実施形態の別の側面によれば、有効成分として、本明細書において記載される化合物のいずれかを含み、かつ、薬学的に受容可能なキャリアを含む医薬組成物が提供される。
本明細書中で使用される「医薬組成物」は、本明細書中に記載される１つまたは複数の有効成分と、生理学的に好適なキャリアおよび賦形剤などの他の化学的成分との調製物を示す。医薬組成物の目的は、化合物を生物に投与することを容易にすることである。
本明細書中において、用語「有効成分」は、生物学的作用を説明することができる上述の化合物（酸化脂質）を示す。
以降、交換可能に使用することができる表現「生理学的に受容可能なキャリア」および表現「薬学的に受容可能なキャリア」は、生物に対する著しい刺激を生じさせず、投与された化合物の生物学的な活性および性質を妨げないキャリアまたは希釈剤を示す。アジュバントはこれらの表現に含まれる。
本明細書中において、用語「賦形剤」は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性な物質を示す。賦形剤の非限定的な例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖および様々なタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
薬物の配合および投与に関する様々な技術を「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版）（これは参考として本明細書中に組み込まれる）に見出すことができる。
好適な投与経路には、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜送達（特に、経鼻腔送達）、腸送達または非経口送達（筋肉内注射、皮下注射および髄内注射、ならびにくも膜下注射、直接的な心室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射または眼内注射を含む）を挙げることができる。
あるいは、医薬組成物は、例えば、医薬組成物を患者の組織領域内に直接注射することによって、全身的な様式ではなく、局所的な様式で投与することができる。
本発明の任意選択的な実施形態において、医薬組成物は、粘膜投与を介した免疫応答および／または炎症性応答を調節するために設計される。
本発明の別の任意選択的な実施形態において、医薬組成物は、経口投与を介した免疫応答および／または炎症性応答を調節するために設計される。
任意選択的には、本発明の実施形態の医薬組成物は、本明細書中上記で詳述されたように、鼻腔投与または腹腔内投与のために設計される。
本発明の実施形態の医薬組成物は、この分野で十分に知られているプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥のプロセスによって製造することができる。
従って、本発明の実施形態に従って使用される医薬組成物は、薬学的に使用され得る調製物への有効成分の加工を容易にする、賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に受容可能なキャリアを使用して、従来の様式で配合することができる。適正な配合は、選ばれた投与経路に依存する。
注射の場合、医薬組成物の有効成分は、水溶液において、例えば、生理学的に適合し得る緩衝液（ハンクス溶液、リンゲル溶液または生理学的塩の緩衝液など）において配合することができる。経粘膜投与の場合、透過しなければならないバリアに対して適切な浸透剤が配合において使用される。そのような浸透剤はこの分野では一般に知られている。
経口投与の場合、医薬組成物は、活性な化合物を、この分野で十分に知られている薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって容易に配合することができる。そのようなキャリアにより、医薬組成物を、患者によって経口摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー剤、懸濁物などとして配合することが可能になる。経口使用される薬理学的調製物は、固体の賦形剤を使用し、得られた混合物を場合により粉砕し、そして錠剤または糖衣錠コアを得るために所望する場合には好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して作製することができる。好適な賦形剤は、具体的には、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に受容可能なポリマーである。所望する場合には、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を加えることができる。
糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有することができる。色素または顔料が、活性な化合物の量を明らかにするために、または活性な化合物の量の種々の組合せを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。
経口使用され得る医薬組成物には、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤（グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された軟いシールをされたカプセルが含まれる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（ラクトースなど）、結合剤（デンプンなど）、滑剤（タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）および場合により安定化剤と混合された有効成分を含有し得る。軟カプセルでは、有効成分を好適な液体（脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁させることができる。さらに、安定化剤を加えることができる。経口投与される配合物はすべて、選ばれた投与経路に好適な投薬形態でなければならない。
口内投与の場合、組成物は、従来の様式で配合された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
鼻吸入による投与の場合、本発明の実施形態に従って使用される有効成分は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）の使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示物の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投薬量単位は、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定することができる。ディスペンサーで使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジを、本発明の化合物と好適な粉末基剤（ラクトースまたはデンプンなど）との粉末混合物を含有して配合することができる。
本明細書中に記載される医薬組成物は、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用配合物は、単位投薬形態で、例えば、添加された保存剤を場合により伴うアンプルまたは多回用量容器で提供され得る。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクルにおける懸濁物または溶液剤またはエマルションにすることができ、そして懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの配合剤を含有することができる。
非経口投与される医薬組成物には、水溶性形態の活性な調製物の水溶液が含まれる。さらに、有効成分の懸濁物を適切な油性または水系の注射懸濁物として調製することができる。好適な親油性の溶媒またはビヒクルには、脂肪油（ゴマ油など）、または合成脂肪酸エステル（オレイン酸エチルなど）、トリグリセリドまたはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁物は、懸濁物の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁物はまた、高濃度の溶液の調製を可能にするために有効成分の溶解性を増大させる好適な安定化剤または薬剤を含有することができる。
あるいは、有効成分は、使用前に好適なビヒクル（例えば、滅菌されたパイロジェン非含有水に基づく溶液）により構成されるための粉末形態にすることができる。
本発明の実施形態の医薬組成物はまた、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤を使用して、坐薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物で配合することができる。
本発明の実施形態に関連して使用される好適な医薬組成物には、意図された目的を達成するために効果的な量で有効成分が含有される組成物が含まれる。より詳細には、治療効果的な量は、障害（例えば、アテローム性動脈硬化）の症状を防止もしくは緩和もしくは改善するために、または処置されている対象の生存を延ばすために効果的な有効成分の量を意味する。
治療効果的な量の決定は、特に本明細書中に示される詳細な開示を考慮に入れて十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明の実施形態の方法において使用される任意の調製物に関して、治療効果的な量または用量はインビトロアッセイおよび細胞培養アッセイから最初に推定することができる。例えば、用量は、所望する濃度または力価を達成するために動物モデルにおいて組み立てることができる。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。
本明細書中に記載される有効成分の毒性および治療効力は、インビトロで、細胞培養または実験動物において標準的な薬学的手法により決定することができる（例えば実施例の部分において後述される）。これらのインビトロアッセイおよび細胞培養アッセイから得られたデータは、ヒトにおける使用に対する投薬量範囲を決定するために使用することができる。投薬量は、用いられる投薬物形態および利用される投与経路に依存して変化し得る。正確な配合、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選ぶことができる（例えば、Ｆｉｎｇｌ他、１９７５、「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、第１章、１頁を参照のこと）。
投薬量および投薬間隔は、炎症（血管形成）を誘導または抑制するために十分な有効成分の血漿レベルまたは脳内レベル（最小有効濃度、ＭＥＣ）をもたらすように個々に調節することができる。ＭＥＣはそれぞれの調製物について異なるが、インビトロでのデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投薬量は、個々の特性および投与経路に依存する。様々な検出アッセイを、血漿濃度を測定するために使用することができる。
処置される状態の重篤度および応答性に依存して、投薬は単回投与または多数回の投与にすることができ、この場合、処置期間は、数日から数週間まで、または治療が達成されるまで、または疾患状態の軽減が達成されるまで続く。
投与される組成物の量は、当然のことではあるが、処置されている対象、苦痛の重篤度、投与様式、処方医の判断などに依存する。
本発明の実施形態の組成物は、所望する場合には、有効成分を含有する１つ以上の単位投薬形態物を含有し得る、ＦＤＡ承認キットなどのパックまたはディスペンサーデバイスで提供することができる。パックは、例えば、金属箔またはプラスチック箔を含むことができ、例えば、ブリスターパックなどである。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与に関する説明書が伴い得る。パックまたはディスペンサーはまた、医薬品の製造または使用または販売を規制する政府当局により定められた形式で容器に関連する通知によって規定され得る。この場合、そのような通知は、組成物の形態またはヒトもしくは動物への投与の当局の承認を反映する。そのような通知は、例えば、処方薬物または承認された製品添付文書に関する米国食品医薬品局により承認されたラベル書きであり得る。適合し得る薬学的キャリアに配合された本明細書中に記載された調製物を含む組成物もまた、本明細書中上記でさらに詳述されているように、指示された状態の処置のために調製され、適切な容器に入れられ、かつ、表示され得る。
従って、本発明の任意選択的な実施形態において、医薬組成物は、内因性の酸化脂質に関連する炎症の治療または防止における使用のために、包装材に充填され、包装材の表面または内部において活字で識別される。そのような炎症に関連する疾患および障害の代表的な例の一覧が本明細書中下記に示される。
代替として、または、加えて、医薬組成物は包装材で包装され、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させるために、ならびに／あるいは、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害の処置における使用のために包装材の内部または表面において印刷で特定される。
本明細書中下記において詳しくさらに記載されるように、本発明の実施形態の医薬組成物はさらに、本明細書中に記載された炎症の治療または防止において有用であるさらなる化合物を含むことができる。
下記の実施例の節において詳しく記載されるように、本発明の実施形態の新しく設計された化合物の代表例が、免疫応答および炎症と関連したサイトカインのレベルを調節することにおいて効果的であることが見出されている。これらの結果は、これらの化合物が内因性の酸化脂質に関連する炎症および免疫応答を抑制するために有効であることを示唆している。
従って、本発明の実施形態の別の例によれば、内因性の酸化脂質に関連する炎症を治療または防止する方法が提供される。本発明の実施形態のこの側面による方法は、治療効果的な量の１つまたは複数の本明細書に記載される酸化脂質をその必要性のある対象に投与することによって行われる。
本明細書中で使用される表現「内因性の酸化脂質」は、炎症過程および他の細胞媒介プロセスもしくは体液媒介プロセスの結果として体内に存在するか、または形成される１つまたは複数の酸化脂質を示す。
用語「方法」は、所与の課題を達成するための様式、手段、技術および手順を示し、これらには、限定されないが、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者に知られているか、または、知られている様式、手段、技術および手順から、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者によって容易に開発されるそのような様式、手段、技術および手順が挙げられる。
本明細書中で使用される表現「治療（処置）または防止する」には、疾患の進行を妨げること、実質的に阻害すること、遅くすること、または逆転させること、あるいは、疾患の臨床的症状を実質的に緩和すること、あるいは、疾患の臨床的症状の出現を実質的に防止することが包含される。
そのような処置のために好適な対象の例には、本明細書中下記で詳述されるように、炎症に関連する疾患または障害に罹患している対象が含まれる。本発明の実施形態による好適な個々の対象は哺乳動物を含み、例えば、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマおよびウシなどである。任意選択的には、本発明の実施形態による個々の対象はヒトである。
本明細書中で使用される表現「内因性の酸化脂質に伴う炎症」は、１つまたは複数の酸化脂質（例えば、酸化ＬＤＬ、酸化された膜脂質など）のインビボでの形成および存在に伴う炎症を表す。
炎症は、傷害に対する身体の防御的応答である。いくつかのサイトカインが、炎症性反応を媒介することにおいて重要な役割を果たしており、それらの中には、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３（ＩＬ−１２およびＩＬ−２３）が含まれる。過度な炎症は有害であることが多く、無数の疾患および障害に関わるか、または、無数の疾患および障害を引き起こす。本明細書中上記で詳しく説明されるように、過度な炎症性応答が典型的には、酸化脂質エピトープに関連する。
したがって、本発明の選択可能な実施形態によれば、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを対象において低下させる方法が提供される。
本発明のさらなる選択可能な実施形態によれば、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置するための方法が提供される。
上記の方法は、本明細書中に記載されるような１つまたは複数の治療効果的な量の酸化脂質をその必要性のある対象に投与することによって達成される。
本発明の実施形態の別の局面によれば、医薬品の製造における、本明細書中に記載される少なくとも１つの酸化脂質の使用が提供される。医薬品のための選択可能な配合物が本明細書中に記載される。
いくつかの実施形態において、医薬品は、本明細書中でさらに詳しく記載されるように、内因性の酸化脂質に伴う炎症を処置または防止するためのものである。
いくつかの実施形態において、医薬品は、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを対象において低下させるためのものである。
いくつかの実施形態において、医薬品は、インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置するためのものである。
本明細書中に記載される酸化脂質の抗炎症効果は、内因性の酸化ＬＤＬまたは何らかの他の内因性の酸化脂質が関与する炎症随伴疾患または炎症随伴障害を処置または防止することにおいて利用することができる。そのような疾患および障害には、例えば、アテローム性動脈硬化、アテローム性動脈硬化性心臓血管疾患、脳血管疾患、末梢血管疾患、狭窄症、再狭窄およびステント内狭窄（これらに限定されない）を含めて、プラーク形成に伴う疾患または障害、ならびに、自己免疫疾患または自己免疫障害、神経変性疾患または神経変性障害、増殖性疾患または増殖性障害および老化プロセスが含まれる。
従って、炎症に関連する疾患または障害、ひいては内在性酸化脂質に関連し、それ故本発明の方法によって治療可能である疾患または障害の代表例は、特発性炎症性疾患または特発性炎症性障害、慢性の炎症性疾患または炎症性障害、急性の炎症性疾患または炎症性障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、感染性疾患または感染性障害、炎症性の悪性疾患または悪性障害、炎症性の転移関連疾患または転移関連障害、炎症性の変性疾患または変性障害、過敏性に関連する疾患または障害、炎症性の心臓血管疾患または心臓血管障害、炎症性の脳血管疾患または脳血管障害、末梢血管疾患または末梢血管障害、炎症性の腺疾患または腺障害、炎症性の胃腸疾患または胃腸障害、炎症性の皮膚疾患または皮膚障害、炎症性の肝臓疾患または肝臓障害、炎症性の神経学的疾患または神経学的障害、炎症性の筋骨格疾患または筋骨格障害、炎症性の網膜疾患または網膜障害、炎症性の生殖系疾患または生殖系障害、炎症性の全身性疾患または全身性障害、炎症性の結合組織疾患または結合組織障害、炎症性腫瘍、壊死、炎症性の移植関連疾患または移植関連障害、炎症性の老化作用、免疫不全疾患または免疫不全障害、増殖性疾患および増殖性障害、ならびに、炎症性の肺疾患または肺障害などの様々な疾患および障害であり、これらは以下で詳述される。
過敏症の非限定的な例には、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時過敏症、抗体媒介過敏症、免疫複合体媒介過敏症、Ｔリンパ球媒介過敏症、遅延型過敏症、ヘルパーＴリンパ球媒介過敏症、細胞傷害性Ｔリンパ球媒介過敏症、ＴＨ１リンパ球媒介過敏症およびＴＨ２リンパ球媒介過敏症が挙げられる。
炎症性の心臓血管疾患または心臓血管障害の非限定的な例には、閉塞性の疾患または障害、アテローム性動脈硬化、心臓弁膜疾患、狭窄、再狭窄、ステント内狭窄、心筋梗塞、冠状動脈疾患、急性冠状動脈症候群、うっ血性心不全、狭心症、心筋性虚血、血栓症、ヴェーゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、川崎症候群、抗第ＶＩＩ因子による自己免疫疾患または自己免疫障害、壊死性小血管脈管炎、微視的多発性血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、少免疫型巣状壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、抗体誘導による心不全、血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、心臓自己免疫性、シャガス病またはシャガス障害、および抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫性が挙げられる。
狭窄は脈管構造の閉塞性疾患であり、アテローム斑および高まった血小板活性によって一般には引き起こされ、冠状動脈系脈管構造に最も重大な影響を及ぼす。
再狭窄は、狭窄性脈管構造における閉塞の軽減の後に多い進行性の再閉塞である。脈管構造の開通性のために、ステントの機械的な支持が要求される場合、ステント内再狭窄が生じることがあり、処置された血管を再び閉塞させる。
脳血管疾患または脳血管障害の非限定的な例には、卒中、脳血管の炎症、脳出血および椎骨動脈不全が挙げられる。
末梢血管疾患または末梢血管障害の非限定的な例には、壊疽、糖尿病性血管障害、虚血性腸疾患、血栓症、糖尿病網膜症および糖尿病性腎症が挙げられる。
自己免疫疾患または自己免疫障害の非限定的な例には、免疫応答（例えば、自己抗原などに対する自己抗体または細胞媒介免疫性など）によって引き起こされる疾患のすべてが挙げられる。代表的な例には、慢性的な慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、混合性結合組織病、結節性動脈周囲炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、橋本病、乾癬、原発性粘液水腫、悪性貧血、重症筋無力症、慢性の活動型肝炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、ブドウ膜炎、脈管炎およびヘパリン誘導血小板減少が挙げられる。
炎症性の腺疾患または腺障害の非限定的な例には、膵臓疾患または膵臓障害、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患または甲状腺障害、グレーヴズ病、甲状腺炎、自発性自己免疫甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣自己免疫性、自己免疫性抗精子不妊症、自己免疫性前立腺炎およびＩ型自己免疫多腺性症候群が挙げられる。
炎症性の胃腸疾患または胃腸障害の非限定的な例には、大腸炎、回腸炎、クローン病、慢性炎症性腸管疾患、炎症性腸症候群、慢性炎症性腸疾患、セリアック病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、皮膚潰瘍、床ずれ、胃潰瘍、消化性潰瘍、口内潰瘍、鼻咽頭潰瘍、食道潰瘍、十二指腸潰瘍および胃腸潰瘍が挙げられる。
炎症性の皮膚疾患または皮膚障害の非限定的な例には、ざ瘡、自己免疫性水疱性皮膚疾患、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉状天疱瘡、接触性皮膚炎および薬疹が挙げられる。
炎症性の肝臓疾患または肝臓障害の非限定的な例には、自己免疫性肝炎、肝硬変および胆汁性肝硬変が挙げられる。
炎症性の神経学的疾患または神経学的障害の非限定的な例には、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、重症筋無力症、運動神経障害、ギラン・バレー症候群、自己免疫性神経障害、ランバート・イートン筋無力症症候群、異所性新生物性の神経学的疾患または神経学的障害、異所性新生物性の小脳萎縮、非異所性新生物性の強直人間症候群、進行性小脳萎縮、ラスムセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シドナム舞踏病、ジル・ド・ラ・トゥレット症候群、自己免疫性多内分泌腺症、免疫異常神経障害、後天的神経筋緊張症、多発性関節拘縮症、ハンチントン病、ＡＩＤＳ関連痴呆、筋萎縮性側索硬化症（ＡＭＬ）、発作、炎症性の網膜疾患または網膜障害、炎症性の眼疾患または眼障害、眼神経炎、海綿様脳症、片頭痛、頭痛、群発性頭痛および強直人間症候群が挙げられる。
炎症性の結合組織疾患または結合組織障害の非限定的な例には、自己免疫性筋炎、原発性シェーグレン症候群、平滑筋の自己免疫疾患または自己免疫障害、筋炎、腱炎、靱帯の炎症、軟骨炎、関節の炎症、滑膜の炎症、手根管症候群、関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、強直性脊椎炎、骨格性の炎症、自己免疫性の耳疾患または耳障害、および、内耳の自己免疫疾患または自己免疫障害が挙げられる。
炎症性の腎臓疾患または腎臓障害の非限定的な例には、自己免疫性間質性腎炎および／または腎臓ガンが挙げられる。
炎症性の生殖器疾患または生殖器障害の非限定的な例には、反復性流産、卵巣嚢、あるいは月経関連疾患または月経関連障害が挙げられる。
炎症性の全身性疾患または全身性障害の非限定的な例には、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、敗血症性ショック、毒性ショック症候群および悪液質が挙げられる。
感染性疾患または感染性障害の非限定的な例には、慢性の感染性疾患または感染性障害、亜急性の感染性疾患または感染性障害、急性の感染性疾患または感染性障害、ウイルス性の疾患または障害、細菌性の疾患または障害、原生動物による疾患または障害、寄生虫による疾患または障害、真菌による疾患または障害、マイコプラズマによる疾患または障害、壊疽、敗血症、プリオンによる疾患または障害、インフルエンザ、結核、マラリア、後天的免疫不全症候群、および重症の急性呼吸症候群が挙げられる。
炎症性の移植関連疾患または移植関連障害の非限定的な例には、移植片拒絶反応、慢性の移植片拒絶反応、亜急性の移植片拒絶反応、急性の移植片拒絶反応、超急性の移植片拒絶反応、および移植片対宿主の疾患または障害が挙げられる。インプラントの例としては、補綴インプラント、乳房インプラント、シリコーンインプラント、歯科インプラント、陰茎インプラント、心臓インプラント、人工関節、骨折修復デバイス、骨置換インプラント、薬物送達インプラント、カテーテル、ペースメーカー、人工心臓、人工心臓弁、薬物放出インプラント、電極および呼吸チューブが挙げられる。
炎症性腫瘍の非限定的な例には、悪性腫瘍、良性腫瘍、充実腫瘍、転移性腫瘍および非充実腫瘍が挙げられる。
炎症性の呼吸器疾患または呼吸器障害の非限定的な例には、喘息、アレルギー性喘息、気腫、慢性閉塞性肺疾患または慢性閉塞性肺障害、類肉腫症および気管支炎が挙げられる。
増殖性疾患または増殖性障害の一例がガンである。
様々な疾患および症候群を治療または防止することにおけるリン脂質およびリン脂質代謝産物の関わりが、近年、報告されており（例えば、老化の酸化的ストレス（Ｏｎｏｒａｔｏ ＪＭ他、Ａｎｎａｌ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ、１９９８（１１月２０日）、８５４：２７７〜９０）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）（Ｐａｉｍｅｌａ Ｌ．他、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ、１９９６（８月）、５５（８）：５５８〜９）、若年性関節リウマチ（Ｓａｖｏｌａｉｎｅｎ Ａ他、１９９５、２４（４）：２０９〜１１）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（Ｓａｗａｉ Ｔ他、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｓｕｒｇ Ｉｎｔ、２００１（５月）、１７（４）：２６９〜７４）および腎臓ガン（Ｎｏｇｕｃｈｉ Ｓ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ、１９９２（１月３１日）、１８２（２）：５４４〜５０））、従って、これらは、これらの疾患または障害の治療または防止における酸化リン脂質の酸化脂質アナログの有益な使用をさらに裏付けている。
本発明の実施形態の方法によれば、酸化脂質は様々な経路によって対象に投与することができ、そのような経路には、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜（特に、経鼻腔）送達、腸管送達または非経口送達（筋肉内注射、皮下注射および髄内注射、ならびにくも膜下経路、直接的な心室内経路、静脈内経路、腹腔内経路、鼻腔内経路または眼内経路を含む）が含まれる。しかしながら、本明細書中を通して詳しく記載されているように、また、下記の実施例の節においてさらに明らかにされるように、好ましい投与経路には、経口経路、粘膜経路、鼻腔経路、皮内（皮下）経路および腹腔内経路が含まれる。
従って、１つの実施形態において、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの本明細書中に記載される酸化脂質が、長期にわたる療法または交互に行われる療法で、毎週、１回〜３回、好適なキャリア（例えば、ＰＢＳまたはグリセロールなど、これらに限定されない）において腹腔内に投与される。
別の実施形態において、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの本明細書中に記載される酸化脂質が、長期にわたる療法または交互に行われる療法で、毎週、１回〜３回、好適なキャリア（例えば、ＰＢＳまたはグリセロールなど、これらに限定されない）において鼻腔に投与される。
さらに別の実施形態において、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの本明細書中に記載される酸化脂質が、長期にわたる療法または交互に行われる療法で、毎週、１回〜３回、好適なキャリア（例えば、ＰＢＳまたはグリセロールなど、これらに限定されない）において皮下に投与される。
さらにもう１つの実施形態において、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの本明細書中に記載される酸化脂質が、長期にわたる療法または交互に行われる療法で、毎週、１回〜３回、好適なキャリア（例えば、ＰＢＳまたはグリセロールなど、これらに限定されない）において経口投与される。
本明細書中に記載される医薬組成物および方法はさらに、本明細書中上記で示されたように、内因性の酸化脂質に関連する炎症を治療または防止することができる１つまたは複数のさらなる化合物の投与を伴うことができる。
従って、本発明の実施形態による方法は、酸化脂質の投与前に、または酸化脂質の投与と同時に、または酸化脂質の投与後に、そのようなさらなる化合物の１つまたは複数の治療効果的な量を同時投与することを伴うことができ、一方で、本発明の実施形態による医薬組成物は、本発明の化合物に加えて、そのようなさらなる化合物を含むことができる。
本明細書中、上記で示される内因性の酸化脂質に関連する炎症を治療または防止することができ、かつ、従って、本発明のこの実施形態に関連して使用可能なさらなる化合物の代表的な例には、限定されないが、ＨＭＧＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン）、粘膜アジュバント、コルチコステロイド、ステロイド系抗炎症性薬物、非ステロイド系抗炎症性薬物、鎮痛剤、増殖因子、トキシン、コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤、ペルオキシソーム、増殖性活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト、アテローム性動脈硬化防止薬、抗増殖性薬剤、エゼチミド、ニコチン酸、スクアレン阻害剤、ＡｐｏＥ Ｍｉｌａｎｏ、ＨＳＰ、β−２−糖タンパク質Ｉ、ならびにそれらの任意の誘導体およびアナログが挙げられる。
ＨＭＧＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン）は、コレステロール産生速度を調節する酵素を阻害し、かつ、血液に存在するＬＤＬ−コレステロールの肝臓によるクリアランスを増大させることによってＬＤＬ−コレステロールレベルを効果的に低下させる広く知られている薬物である。一般に処方されているスタチンの非限定的な例には、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンおよびシンバスタチンが挙げられる。
エゼチミドは、トリグリセリドまたは脂溶性ビタミンの吸収に影響を及ぼすことなく、腸管上皮の刷子縁における食事性コレステロールおよび胆汁性コレステロールの吸収を強力かつ選択的に阻害する新しいクラスのコレステロール吸収阻害剤の最初のものである。従って、エゼチミドは肝臓への全体的なコレステロール送達を低下させ、それにより、ＬＤＬ受容体の増大した発現を二次的に誘導し、その結果、血漿からのＬＤＬ−Ｃの増大した除去をもたらす。
ペルオキシソームは、ほぼすべての真核生物細胞に存在する単膜オルガネラである。ペルオキシソームの最も重要な代謝プロセスの１つは長鎖脂肪酸および超長鎖脂肪酸のβ−酸化である。ペルオキシソームはまた、胆汁酸合成、コレステロール合成、プラスマロゲン合成、アミノ酸代謝およびプリン代謝にも関与する。
ニコチン酸は、総コレステロール、ＬＤＬ−コレステロールおよびトリグリセリドのレベルを低下させ、同時に、ＨＤＬ−コレステロールレベルを上昇させる、既知の薬剤である。３タイプのニコチン酸系薬物が存在する：即時放出、徐放性および長期にわたる放出。ニコチン酸またはナイアシン（すなわち、水溶性ビタミンＢ）は、ビタミン要求量を十分に上回る用量で与えられたとき、すべてのリポタンパク質を改善する。
スクアレン（β−カロテンに構造的に類似するイソプレノイド化合物）はコレステロールの合成における中間代謝産物である。ヒトにおいて、食事性スクアレンの約６０パーセントが吸収される。スクアレンは、一般には超低密度リポタンパク質と会合して血清中において輸送され、ヒト組織にあまねく分配され、最大濃度は、スクアレンが皮膚表面脂質の主要な成分の１つである皮膚においてである。スクアレン阻害剤（例えば、モノオキシゲナーゼおよびシンターゼ）はコレステロール生合成阻害剤として役立つ。
増殖性活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト（例えば、フィブラート）は、脂質およびグルコースの代謝において重要な役割を果たし、かつ、肥満に関連づけられる代謝性疾患（例えば、高脂血症、インスリン抵抗性および冠状動脈疾患など）に関係している、核受容体スーパーファミリーの脂肪酸活性化メンバーである。フィブラートは、上昇した血漿トリグリセリドおよび血漿コレステロールを低下させることにおいて一般に効果的であり、ＰＰＡＲアゴニストとして作用する。フィブラートの最も顕著な作用には、血漿中のトリグリセリド高含有リポタンパク質（ＴＲＬ）の低下が含まれる。ＬＤＬ−コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）のレベルは一般に、上昇したベースライン血漿中濃度とともに個体において低下し、ＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）レベルは通常、ベースライン血漿中濃度が低いときに増大する。一般に処方されているフィブラートの非限定的な例には、ベザフィブラート、ジェムフィブロジルおよびフェノフィブラートが挙げられる。
コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤は、マクロファージ内および動脈壁内におけるコレステリルエステルの蓄積を低下させ、従って、泡沫細胞の形成を低下させ、かつ、コレステロール吸収に影響を及ぼすことによって、アテローム発生において大きな役割を果たしている。最も有望な現在知られているＣＥＴＰ阻害剤はアビシミベである。
ＡｐｏＡ−Ｉ Ｍｉｌａｎｏは、典型的には、リン脂質との組換え複合体（ＥＴＣ−２１６）として使用され、冠状動脈のアテローム性動脈硬化の著しい退行をもたらす。
粘膜アジュバントの同時投与は、粘膜表面を通過する感染性因子の侵入を防止することにおいて極めて有益であることが示されている。粘膜免疫応答の誘導の初期段階において、経口投与または鼻腔投与された抗原の取り込みが、特異な１組の抗原サンプリング細胞（誘導部位の濾胞結合上皮（ＦＡＥ）に存在するＭ細胞）を介して達成される。取り込みが成功した後、抗原は、その下に存在する樹状細胞（ＤＣ）によって直ちにプロセシングされ、提示される。
非ステロイド系抗炎症性薬物の非限定的な例には、下記の薬物が挙げられる：オキシカム系、例えば、ピロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、スドキシカムおよびＣＰ−１４３０４など；サリチル酸系、例えば、アスピリン、ジサルシド、ベノリラート、トリリサート、サファプリン、ソルプリン、ジフルーニサルおよびフェンドサルなど；酢酸誘導体、例えば、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、イソキセパク、フロフェナク、チオピナク、ジドメタシン、アセメタシン、フェンチアザク、ゾメピラク、クリンダナク、オキセピナク、フェルビナクおよびケトロラクなど；フェナム酸系、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸およびトルフェナム酸など；プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、インドプロプフェン、ピルプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、ミロプロフェン、チオキサプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェンおよびチアプロフェン酸など；ピラゾール系、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェプラゾン、アザプロパゾンおよびトリメタゾンなど。
ステロイド系抗炎症性薬物の非限定的な例には、限定されないが、下記の薬物が挙げられる：コルチコステロイド系、例えば、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシトリアムシノロン、α−メチルデキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、二プロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デスオキシメタゾン、酢酸デスオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、ジクロリゾン、二酢酸ジフロラゾン、吉草酸ジフルコルトロン、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロコルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、酢酸フルプレドニデン（フルプレドニリデン）、フルルアンドレノロン、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルオロゾン、フルルアドレノロン、フルドロコルチゾン、二酢酸ジフルロゾン、フルルアドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびそのエステルの残り、クロロプレドニゾン、酢酸クロルプレドニゾン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルルプレドナート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニゾロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、シクロペンチルプロピオン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルタマート、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、二プロピオン酸ベクロメタゾン、トリアムシノロン、およびそれらの混合物。
鎮痛剤（痛み緩和剤）の非限定的な例には、アスピリンおよび他のサリチル酸系（例えば、サリチル酸コリンまたはサリチル酸マグネシウムなど）、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ならびにアセトアミノフェンが挙げられる。
増殖因子は、数々の機能を有するホルモンであり、そのような機能には、接着分子産生の調節、細胞増殖を変化させること、血管形成を増大させること、コラーゲン合成を高めること、骨代謝を調節すること、および、特定領域への細胞の遊走を変化させることが含まれる。増殖因子の非限定的な例には、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）および骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）などが挙げられる。
トキシンの非限定的な例には、コレラトキシン（これはまた、アジュバントとして役立つ）が挙げられる。
抗増殖性薬剤の非限定的な例には、下記の薬剤が挙げられる：アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード類、エチレンイミン類およびメチルメラミン類、アルキルスルホナート、ニトロソウレア類ならびにトリアゼン類など；代謝拮抗剤、例えば、葉酸アナログ、ピリミジンアナログおよびプリンアナログなど；天然産物、例えば、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、酵素、タキサン系および生物学的応答修飾剤など；種々の薬剤、例えば、白金配位錯体、アントラセンジオン系、アントラサイクリン系、置換ウレア、メチルヒドラジン誘導体、または副腎皮質抑制剤など；あるいは、ホルモンまたはアンタゴニスト、例えば、副腎皮質ステロイドアナログ、プロゲスチンアナログ、エストロゲンアナログ、抗エストロゲンアナログ、アンドロゲンアナログ、抗アンドロゲンアナログまたは性腺刺激ホルモン放出ホルモンアナログなど。化学療法剤の具体的な例には、例えば、ナイトロジェンマスタード類、エピポドフィロトキシン、抗生物質、白金配位錯体、ブレオマイシン、ドキソルビシン、パクリタキセル、エトポシド、４−ＯＨシクロホスファミドおよびシス白金が挙げられる。
ＨＳＰファミリーは、高度に保存された構造を持ちそれらの分子量によって識別される約２５個のタンパク質からなる。ほぼすべての人間が、微生物の熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）に対する細胞性免疫反応および体液性免疫反応を有する。大きな程度の抗原相同性が、微生物（細菌および寄生虫）ＨＳＰ６０と、ヒトＨＳＰ６０との間に存在するので、微生物に対する免疫性の「代償」は、ストレスを受けた動脈の内皮細胞によって発現されるヒトＨＳＰ６０と交差反応し得る危険があることである。変化した自己ＨＳＰ６０に対する真の自己免疫性はこのプロセスを同様に開始させることがある（Ｗｉｃｋ他、自己免疫疾患としてのアテローム性動脈硬化；最新情報、ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００１、２２（１２）：６６５〜６６９）。ＨＳＰは、いくつかの実験的な自己免疫疾患（関節炎、Ｉ型糖尿病）において標的自己抗原として関係している。抗ＨＳＰ６５抗体ならびに抗ＨＳＰ６０抗体がヒトにおけるアテローム性病変に明らかに関連している。ウサギおよびマウスにおいて行われた研究では、組換えタンパク質を用いた免疫化、または、結核菌のＨＳＰ６５高含有調製物を用いた免疫化によるＨＳＰ６５誘導の免疫応答が生じることにより、アテローム発生が高まることが示される。可能な抗原性の候補物としてＨＳＰ６５に向かわせ、それにより、粘膜「寛容化」の誘導による非応答性の状態を生じさせる自己免疫プロセスが、これらの応答を阻止するために用いられているので、本発明者らのグループは、初期のアテローム性動脈硬化が、ＢＳＡまたはＰＢＳのいずれかを与えたマウスと比較して、ＨＳＰ６５を与えたマウスにおいて弱められたことを報告した（Ｈａｒａｔｓ他、熱ショックタンパク質６５による経口寛容性は結核菌誘導のアテローム性動脈硬化病変および高脂肪餌由来のアテローム性動脈硬化病変を弱める、Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ、２００２、４０：１３３３〜１３３８）。これは、ＨＳＰを用いた鼻腔ワクチン接種により、アテローム性動脈硬化に関連する炎症プロセスが低下することを明らかにしたＭａｒｏｎによってさらに裏付けられた（Ｍａｒｏｎ他、熱ショックタンパク質−６５の粘膜投与は低密度リポタンパク質受容体欠損マウスの大動脈弓におけるアテローム性動脈硬化および炎症を低下させる、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００２、１０６：１７０８〜１７１５）。
β−２−糖タンパク質Ｉ（β−２ＧＰＩ）は、前血栓性の抗リン脂質抗体に対する標的として役立つことが示されているリン脂質結合タンパク質である。免疫媒介反応を行わせ、かつ、マウスのアテローム性動脈硬化を増強することが最近になって明らかにされている。β−２ＧＰＩに対するβ−抗体は、単球および内皮細胞を活性化する能力を有しており、アテローム性動脈硬化を促進させたアテローム性動脈硬化を生じさせやすいマウスにおいてβ−２ＧＰＩに対する免疫応答を誘導することができる。β−２ＧＰＩ反応性のリンパ節および脾臓細胞をＬＤＬ受容体欠損マウスに移したとき、マウスは脂肪縞形成を促進させた。これは、β−２ＧＰＩ特異的リンパ球に対する直接的な前アテローム発生的な役割をもたらしている。抗原を事前に経口投与により与えることによってβ−２ＧＰＩに対する免疫学的寛容性を誘導することにより、アテローム硬化性病変の程度の著しい減少がもたらされた。従って、β−２ＧＰＩはアテローム硬化性斑における候補の作用因子であり、斑進行の免疫調節因子としておそらくは用いることができる。β−２ＧＰＩを経口投与により与えることにより、β−２ＧＰＩに対するリンパ節細胞の反応性が、ヒトタンパク質に対して免疫化されたマウスにおいて阻害された。ＩＬ−４およびＩＬ−１０の産生が、それぞれのタンパク質を用いて抗原刺激したとき、β−２ＧＰＩに対して免疫化されたβ−２ＧＰＩ寛容マウスのリンパ節細胞においてアップレギュレーションされた。従って、β−２ＧＰＩの経口投与は、マウスにおけるアテローム発生を抑制する効果的な手段である（Ｇｅｏｒｇｅ他、β−２−糖タンパク質Ｉを用いた経口寛容性によるＬＤＬ受容体欠損マウスにおける初期アテローム性動脈硬化の抑制、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ、２００４、６２（３）：６０３〜９）。
本明細書中に記載される酸化脂質は、化学技術分野において知られているいずれかの好適な方法に従って調製することができる。例えば、本明細書中に記載されるリン脂質を、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＩＬ０５／０００７３５（公開番号ＷＯ０６／００６１６１）または米国特許出願第１１／６５０９７３号（米国特許出願公開第２００７−０１１２２１１号）に記載される手順に従って調製することができる。
明確にするため別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴が、単一の実施形態に組み合わせて提供されることもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施形態で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで、あるいは本発明の他の記載される実施形態において好適なように提供することもできる。種々の実施形態の文脈において記載される特定の特徴は、その実施形態がそれらの要素なしに動作不能である場合を除いては、それらの実施形態の不可欠な特徴であると見なされるべきではない。
本明細書中上記に描かれるような、および、下記の請求項の節において特許請求されるような本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、実験的裏付けが下記の実施例において見出される。
次に下記の実施例が参照されるが、下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定様式で例示する。
材料および方法
材料：
酢酸（氷酢酸）をＢｉｏ−Ｌａｂから得た；
クリスタルバイオレットをＳｉｇｍａから得た；
ジチオスレイトール（ＤＴＴ）をＢｉｏ−Ｌａｂから得た；
ウシ胎児血清（熱不活化物）をＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエル）から得た；
メタノール（無水）をＢｉｏ−Ｌａｂから得た；
ＭＯＧペプチド３５−５５をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た；
マウスＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）をＰｅｐｒｏｔｅｃｈ（イスラエル）から得た；
ペニシリン／ストレプトマイシン溶液をＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエル）から得た；
赤血球溶解緩衝液をＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエル）から得た；および
Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地をＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエル）から得た。
ＣＯＳＴＡＲ（登録商標）無菌２４ウエル組織培養処理プレートをＣｏｒｎｉｎｇから得た。
リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）を、カルシウムもマグネシウムも含まないダルベッコリン酸塩緩衝化生理的食塩水の１０ｘ濃縮物（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、イスラエル）を二回蒸留水により希釈することによって調製した。
細胞を、５％ＣＯ２を含む空気で３７℃でインキュベーションした。
分光法による測定を、Ｔｅｃａｎ ＳＵＮＲＩＳＥプレートリーダーおよびＭａｇｅｌｌａｎバージョン６．３データ取得ソフトウエアを使用して行った。５９５ｎｍにおける吸収を、Ｔｅｃａｎ ＳｐｅｃｔｒａＦｌｕｏｒ ５９５ｎｍ帯域フィルターを使用して求めた。
インビトロ研究のために、試験化合物を１００ｍｇ／ｍｌの濃度にエタノールに溶解し、その後、１ｍｇ／ｍｌの濃度にＰＢＳで希釈した。
チロシンリン酸化アッセイ：
マウスのマクロファージまたは骨髄由来細胞（ＢＭＤＣ）におけるチロシンリン酸化をアッセイした。
マウスの初代マクロファージをチオグリコラート刺激後の７週齢〜８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの腹膜から単離した。細胞を、ＲＰＭＩ−１６４０培地における０．５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）により一晩、事前に飢餓培養した。マウスの初代骨髄由来細胞を、冷ＲＰＭＩ−１６４０を使用して骨髄をメスのＳＪＬマウスの大腿骨および脛骨から流し出すことによって単離した。細胞懸濁物を調製し、赤血球を、赤血球溶解緩衝液を使用して除き、リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）および０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）をマウスＢ２２０マイクロビーズおよびマウスＣＤ９０マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とともに含有する緩衝液において４℃で１５分間インキュベーションした。その後、細胞を洗浄し、同じ緩衝液に再懸濁し、ＬＤカラムまたはＬＳカラムによるＭｉｄｉ−Ｍａｃｓ分離装置（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でＢ細胞およびＴ細胞を枯渇させた。枯渇化処理された骨髄細胞を計数し、洗浄し、Ｌ−グルタミン、β−メルカプトエタノール、１０％ウシ胎児血清、抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）および２ｎｇ／ｍｌのマウス顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地において１０６細胞／ｍｌの濃度で播種した。培地を１日おきに取り換えた。培養後５日目〜６日目に細胞を集め、計数し、前記培地において２４時間播種し（１０６細胞／ｍｌ）、その後、ＲＰＭＩ−１６４０培地における０．５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）による飢餓培養を一晩行った。
その後、マクロファージまたはＢＭＤＣを、１％エタノールを含むリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）における１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌの試験化合物により１０分間処理した。１μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌのホスファチジルコリンあるいは溶媒（１％エタノールを含むＰＢＳ）のどちらかによる処理を陰性コントロールとして使用した。１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１（１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）による処理を陽性コントロールとして使用した。
その後、リン酸化チロシンを有するタンパク質を、モノクローナル抗ホスホチロシン抗体を使用してウエスタンブロットによって観察した。ＥＲＫ１／２またはα−チューブリンに対するウエスタンブロッティングをタンパク質負荷のためのコントロールとして行った。
インビトロ毒性アッセイ：
チオグリコラート誘発のマウス腹膜マクロファージを洗浄し、計数し、ＲＰＭＩ−１６４０、Ｌ−グルタミン、１０％ＦＢＳおよび抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）を含有する培地において三連のウエルで播種した（２４ウエルプレートにおいてウエルあたり２×１０５個〜３×１０５個の細胞）。２４時間の回収期間の後、試験化合物（またはコントロール）を、２μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌまたは１５０μｇ／ｍｌの用量で細胞培地に加えた。このとき、体積を溶媒で補うことによって、添加体積をすべての処理において等しく保った。
化合物を加えた後、細胞をさらに２４時間インキュベーションし、その後、細胞を洗浄し、１０％メタノール／１０％酢酸の溶液により固定処理し、クリスタルバイオレット（２０％エタノールにおいて０．４％）により染色した。細胞数を、光学濃度を５９５ｎｍで求めることによって測定した。ビヒクル（１％エタノールを含むＰＢＳ）とインキュベーションされた細胞をコントロールとして使用し、コントロールに対して、処理サンプルにおける細胞数を正規化した。
データが、平均±標準偏差として示される。ビヒクル処理の細胞に対する統計学的有意性を、スチューデントｔ検定を使用して計算し、０．０５未満のｐ値を、統計学的有意性を示すと見なした。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０産生アッセイ：
骨髄由来細胞（ＢＭＤＣ）を、チロシンリン酸化アッセイについて本明細書中上記で記載されるように、メスのＣ５７ＢＬマウスの大腿骨および脛骨から得て、培養し、培養後５日〜６日で１０６細胞／ｍｌの濃度で播種した。
その後、試験化合物を、１μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌの濃度で１時間、細胞に加えた。細胞は、１０μｇ／ｍｌのペプチドグリカン（ＰＧＮ）との２４時間のインキュベーションによってＩＬ１２／２３ｐ４０産生のために活性化された。上清からのサイトカイン産生をＥＬＩＳＡによって測定した。試験化合物を伴わない活性化細胞をコントロールとして使用した。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０のｍＲＮＡ発現アッセイ：
骨髄由来細胞の培養物を本明細書中上記で記載されるように調製した。培養後５日目〜６日目に、細胞培養物をＭＳカラムまたはＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でのマウスＣＤ１１ｃマイクロビーズによりＣＤ１１ｃ＋の樹状細胞について濃縮した（＞９０％）。ＣＤ１１ｃ＋の樹状細胞を、１０μｇ／ｍｌのペプチドグリカンだけにより、または、活性化の１時間前に加えられる２０μｇ／ｍｌの試験化合物の存在下での１０μｇ／ｍｌのペプチドグリカンにより、１時間、２時間および３時間刺激した。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を使用して細胞から抽出した。ｃＤＮＡ調製のために、１μｇのＲＮＡを、第１鎖緩衝液において７０℃で１０分間、オリゴｄＴと一緒にした。ジチオスレイトールおよびｄＮＴＰおよびｓｕｐｅｒ−ｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素（ＳＳ−ＩＩ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を４２℃で５０分間加え、反応を７０℃でのさらに１５分間のインキュベーションによって終了させた。すべてのリアルタイムＰＣＲ反応を、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ Ｔａｑｍａｎマスター（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）を使用して行い、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ装置（Ｒｏｃｈｅ）で泳動した。プライマーを伴う調製済みプローブセットをＩＬ１２／２３ｐ４０アッセイおよびＧＡＰＤＨアッセイのために使用した（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、それぞれ、アッセイ＃Ｍｍ０１２８８９９２＿ｍ１および同Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１）。後者が、ＲＮＡレベルを正規化するために役立った。２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１およびホスファチジルコリン（ＰＣ）を陽性コントロールおよび陰性コントロールとしてそれぞれ使用した。
インビボでのミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）誘導実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）アッセイ：
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、２００μｌの最終体積における示された量の試験化合物を免疫化の５日前から開始して５日間連続して経口投与した。
ＥＡＥ誘導のために、マウスを、１．５ｍｇ／ｍｌのＭＯＧペプチド３５−５５（ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ）および２．５ｍｇ／ｍｌのＣＦＡ（完全フロイントアジュバント）を含有するエマルションにより皮下に免疫化した（１００μｌのエマルションがそれぞれの脇腹に注入された）。百日咳毒素（５００μｌのＰＢＳにおいて５００ｎｇ）を免疫化の直後および４８時間後に腹腔内投与した。
ＥＡＥの発症を平均臨床スコアによって評価した。
インビボでのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）アッセイ：
オスのＤＢＡ／１マウスを、尾の基部における、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を含有するコラーゲン注入（０日目）、および、脇腹における追加免疫注入（２１日目）によって、関節炎を誘導するために免疫化した。マウスを３６日目まで関節炎の発症について追跡した。試験化合物およびコントロール物質の胃管法による投与を２２日目に開始し、毎日行った（週に６回）。
関節炎の発症を関節炎臨床スコアによって評価した。
インビボでのアテローム性動脈硬化性病変アッセイ：
１２週齢〜１６週齢のオスのＬＤＬ−ＲＤマウスに、ＰＢＳまたは示された量の試験化合物を含むＰＢＳの０．２ｍｌを５回の処置のために１日に１回、１日おきに経口投与した。マウスには５週間にわたって西洋食を与え、その後、マウスを屠殺した。
代替として、１４週齢〜１６週齢のＡｐｏＥ ＫＯマウスに、ＰＢＳまたは示された量の試験化合物を含むＰＢＳの０．２ｍｌを５回の処置のために１日に１回、１日おきに経口投与し、マウスを、８週が終了するまでに屠殺した。
アテローム性動脈硬化性病変部の定量化を、いくつかの改変とともに、以前に記載されたように［Ｐａｉｇｅｎ他、マウスにおけるアテローム性動脈硬化性病変部の定量的評価、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、１９８７、６８：２３１−２４０］、大動脈洞における病変サイズを計算することによって行った。簡単に記載すると、心臓および大動脈を動物から取り出し、周辺部の脂肪を注意深く除いた。心臓を、Ｏｐｔｉｍａｌ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（ＯＣＴ）ゲルに包埋し、凍結した。大動脈洞の病変を、大動脈洞全体（４００μｍ）にわたって、３枚〜８枚のオイルレッドＯ染色された連続切片（１０μｍの厚さ）から求めた。病変面積を、コンピューター分析法（Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓソフトウエア［バージョン４．５．１．２９］、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して計算した。
実施例１
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０２）および１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−グリセロールの合成。１１グラムの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、２０グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび２７．９６グラムの臭化ヘキサデシルを１５０ｍｌのトルエンにおいて撹拌し、６時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約４０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水を加え、反応混合物を７５ｍｌのジクロロメタンにより３回抽出した。一緒にした有機相を５０ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。残渣を９０：１０：５（体積／体積）のメタノール：水：濃塩酸の混合物の２００ｍｌに溶解し、生じた溶液を２時間還流した。室温に冷却した後、１００ｍｌの水を加えた。生成物を１００ｍｌのジクロロメタンにより３回抽出し、１００ｍｌの水、１００ｍｌの炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び１００ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶媒を減圧下で除き、生成物をヘキサン（２００ｍｌ）から結晶化させて、２１．６９グラムの純粋な（Ｓ）−１−ヘキサデシル−グリセロールを得た。これを減圧下のデシケーターにおいて乾燥した。収率が８２％であった。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールの合成。２０グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−グリセロールおよび２１．２９グラムのトリフェニルクロロメタンを３６９ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および９３ｍｌの乾燥アセトニトリルに溶解した。１７．７５ｍｌのトリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷（１００グラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルにより抽出した。有機相を２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの希硫酸（１．５％）により２回、次いで２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム水溶液により、次いで再び２００ｍｌの水により順次洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、３６．８６グラムの粗生成物を残渣として得た。この残渣を熱ヘキサン（２００ｍｌ）に溶解し、生じた溶液を４℃で一晩冷却した。沈殿した生成物をろ過し、これにより、３０．７１グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールの合成。１９．９４グラムの１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロール、６．９８グラムの６−ブロモ−１−ヘキセンおよび１５グラムの粉末化された水酸化カリウムを３５０ｍｌのヘキサンにおいて撹拌し、８時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。反応混合物を室温に冷却し、分液漏斗に移し、２００ｍｌの水により２回洗浄し、その後、溶媒を減圧下で除いた。残渣を１５０ｍｌのヘキサンに溶解し、再び２００ｍｌの水により洗浄した。有機相を４℃で一晩保った。その間に、副生成物の沈殿が生じた。ろ過し、溶媒を減圧下で除くことにより、１９．８６グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを得た。収率が８６．６％であった。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成。１５０．１６グラム（７０２ｍｍｏｌ）の過ヨウ素酸ナトリウムを、温度計および滴下漏斗を備える三口丸底フラスコにおいて５００ｍｌの水に懸濁した。７．２１グラム（８５．８ｍｍｏｌ）の重炭酸ナトリウムおよび２．４７グラム（１５．６ｍｍｏｌ）の過マンガン酸カリウムを加え、懸濁物を４０℃の温度に加熱した。５０グラム（７８ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを５００ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールに溶解し、この溶液を１時間かけて過ヨウ素酸ナトリウムおよび過マンガン酸カリウムの混合物に加えた。（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを過ヨウ素酸ナトリウムおよび過マンガン酸カリウムに加えた後、反応混合物を４０℃の温度で３時間加熱した。１．５時間後、さらに０．６２グラム（３．９ｍｍｏｌ）の過マンガン酸カリウムを、反応混合物のピンク色を維持するために加えた。３時間の期間が終了したとき、反応混合物を室温に冷却し、分液漏斗に移し、２００ｍｌのヘキサンにより抽出した。有機相を、１５グラムのＮａ２Ｓ２Ｏ５を１００ｍｌの水に溶解した溶液により洗浄した。希塩酸（１３ｍｌの水に０．６５ｍｌの濃度のＨＣｌ）を有機相に加え、２００ｍｌの溶媒を減圧下で蒸留した。残留する透明な溶液を８０℃の温度に６時間加熱し、さらに２５０ｍｌの体積の溶媒を留去した。残渣を１００ｍｌの水および１０ｍｌの３０％ＮａＯＨ溶液により処理し、これにより、１２のｐＨを得た。沈殿したトリフェニルメタノールをろ過により除き、１０ｍｌの水により４回洗浄した。ろ液を５０ｍｌのヘキサンおよび５０ｍｌの酢酸エチルの混合物により抽出して、残留するトリフェニルメタノールおよび他の不純物を除いた。水相において、１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールのナトリウム塩を８．４５ｍｌ（１０１．４ｍｍｏｌ）の濃塩酸によりプロトン化した。生じた遊離カルボン酸を１００ｍｌのヘキサンにより抽出した。蒸発乾固および１００ｍｌのヘキサンとの共蒸発により、２７．００グラムの粗（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを得た。粗生成物を、７ｍｌのアセトンおよび６８ｍｌのヘキサンの混合物に溶解し、０℃に冷却することによって結晶化させた。沈殿物をろ過し、７ｍｌの冷ヘキサンにより２回洗浄し、乾燥した。２０．９０グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを灰白色の固体として得た。収率が６４．３％であった。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成。１５．０グラム（３６．０ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを１００ｍｌのメタノールに溶解し、３ｍｌの濃塩酸を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。トリエチルアミンを、反応混合物のｐＨが７に達するまで加えた。溶液を分液漏斗に移し、２００ｍｌのヘキサンにより２回抽出した。有機相を水により洗浄した。蒸発乾固および１００ｍｌのヘキサンとの共蒸発により、１４．９２グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを得た。収率が９６．２％であった。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成。２．８８グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールおよび３ｍｌのトリエチルアミンを３０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、２ｍｌのＰＯＣｌ３を２０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解した氷冷溶液に１５分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。反応混合物を氷冷し、１．２１ｍｌのエタノールアミンおよび５．６ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を２０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともに１０分間続け、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を２４ｍｌの酢酸および１０ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、有機相を５０ｍｌの水により２回洗浄し、溶媒を減圧下で除いて、４．０グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを黄色のワックスとして得た。
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのサンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを３００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２７Ｈ５６ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５５３．７０９２であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５５４を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの化学構造と一致している。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０２）の合成。３．５グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを８：２（ｖ／ｖ）のメタノール：１０％水酸化ナトリウム溶液の混合物の１００ｍｌに溶解した。混合物を室温で５時間撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムおよびギ酸を加えることによって４に調節した。水（１００ｍｌ）およびクロロホルム（１００ｍｌ）を加えた。抽出後、相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いて、３．０グラムの粗（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを得た。粗生成物をシリカゲル（１２０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を、６０：３５：５の体積比でのクロロホルム：メタノールおよび水の混合物により溶出した。望ましい生成物を含有する分画物からの溶媒を減圧下で除き、残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、２．１１グラムの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンをワックスとして得た。このワックスを減圧下において五酸化リンで乾燥した。
ＣＩ−２０２のＮＭＲによる特徴づけ：
ＣＩ−２０２のサンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを３００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０２）の構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
ＣＩ−２０２の質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２６Ｈ５４ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５３９．３６であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５３８を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０２）の化学構造と一致している。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０産生：
ＩＬ１２／２３ｐ４０のインビトロでの産生に対するＣＩ−２０２の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１に示されるように、ＣＩ−２０２は、骨髄由来細胞によるＩＬ１２／２３ｐ４０の産生を用量依存的様式で阻害した。
ＩＬ１２／２３ｐ４０のｍＲＮＡ発現：
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０のｍＲＮＡ発現に対するＣＩ−２０２の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図２に示されるように、ＣＩ−２０２は、全試験期間（ＣＩ−２０２投与後２時間〜４時間）中、ＩＬ１２／２３ｐ４０のｍＲＮＡ発現を阻害した。ＣＩ−２０２による阻害はＣＩ−２０１による阻害と同程度であった。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２０２の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図３に示されるように、１０μｇ／ｍｌ（１８．５μＭ）のＣＩ−２０２による処理はチロシンリン酸化の誘導をもたらし、これに対して、２０μｇ／ｍｌ（３７μＭ）のＣＩ−２０２への暴露はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。これらの変化は、１０μｇ／ｍｌ（１７μＭ）および２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）の陽性コントロールＣＩ−２０１によってそれぞれ誘導される影響と非常に類似している。
ＣＩ−２０２の毒性：
ＣＩ−２０２の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図４Ａおよび図４Ｂに示されるように、ＣＩ−２０２の著しい毒性が、５０μｇ／ｍｌを越える用量でのみ検出された。ＣＩ−２０２のＬＤ５０が５０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの間にある。
ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）誘導の実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発症：
マウスにおけるインビボでのミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）誘導の実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発症に対するＣＩ−２０２の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図５に示されるように、４ｍｇ／ｍｌのＣＩ−２０２の投与は疾患の発症を遅らせ、ＥＡＥの臨床発現を軽減させた。
コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）の発症：
マウスにおけるインビボでのコラーゲン誘導関節炎の発症に対するＣＩ−２０２の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図６に示されるように、０．４ｍｇ／ｍｌのＣＩ−２０２の投与は、試験期間を通して関節炎の重篤度を著しく低下させた。関節炎のピーク臨床スコアが、コントロールのマウスに対して４２％低下した。
実施例２
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０３）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールの合成：（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを使用して（Ｓ）−ヘキサデシル−グリセロールを最初に調製することによって、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールを実施例１で記載されるように調製した。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−３−トリチル−グリセロールの合成：５グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールおよび２ｍｌの７−ブロモヘプタン酸エチルを７０ｍｌのベンゼンに溶解した。２３グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を撹拌し、１４時間還流した。その間、反応で形成される水を共沸蒸留によって除いた。反応混合物を室温に冷却し、７０ｍｌの水により３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除き、得られた残渣を２５ｍｌの熱ヘキサンに溶解し、溶液を４℃に一晩冷却した。沈殿した副生成物をろ過し、溶媒を減圧下で除いて、５グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−３−トリチル−グリセロールを白色の固体として得た。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−グリセロールの合成：５グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−３−トリチル−グリセロールを９０ｍｌのエタノールに溶解した。２０ｍｌの濃塩酸をゆっくり加え、混合物を撹拌し、４時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、１００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を、１００ｍｌの水、１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液、再び１００ｍｌの水により洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。硫酸ナトリウムをろ過した後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を熱ｎ−ヘキサンに溶解し、その後、混合物を４℃で一晩保った。沈殿物をろ過した後、溶媒を減圧下で除いて、３．１グラムの黄色のオイルを得た。この残渣をシリカゲルカラム（１４０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を３００ｍｌのＣＨＣｌ３：酢酸エチル（６：４、ｖ／ｖ）により溶出した。溶媒を減圧下で除いて、１．３４グラムの無色のオイルを得た。減圧下において五酸化リンで乾燥することにより、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−グリセロールを無色の固体として得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−ホスホエタノールアミンの合成：１．３４グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−グリセロールおよび１．２ｍｌのトリエチルアミンを１５ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、０．８ｍｌのＰＯＣｌ３を１０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に１５分かけて滴下により加えた。溶液を冷却とともにさらに１０分間撹拌し、室温でさらに４５分間撹拌した。反応混合物を氷で冷却し、０．５２ｍｌのエタノールアミンおよび２．４ｍｌのトリエチルアミンを２５ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を１５分かけて滴下により加えた。反応混合物の撹拌を、氷浴で冷却を行いながら１０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を２４ｍｌの酢酸および１０ｍｌの水の混合物に溶解し、その後、７０℃の温度に１時間加熱した。その後、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、５０ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、１．８７グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：１．８７グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを５０ｍｌのイソプロパノールおよび１８ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解した。２．１７グラムの炭酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液を、反応液を３５℃〜４０℃の温度で保ちながら５分かけて滴下により加えた。１．５２ｍｌの硫酸ジメチルを１０ｍｌのイソプロパノールに溶解した溶液を１０分かけて４０℃の温度で滴下により加えた。反応液を４０℃の温度で９０分間保ち、その後、水を加え、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより２回抽出した。有機相を５０ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いて、１．８グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをワックスとして得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０３）の合成：１．８グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−エチルカルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを５０ｍｌのメタノールに溶解した。１０％水酸化ナトリウムの溶液を加え、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムを加えることによって４〜５の範囲に調節した。７０ｍｌの水および７０ｍｌのクロロホルムを加えた。水相および有機相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いて、１．２９グラムの白色のワックスを得た。この残渣をシリカゲル（６２グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を６０：３５：５の体積比でのＣＨＣｌ３：メタノール：Ｈ２Ｏにより溶出した。溶媒を減圧下で除いた後、残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、１．０グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを白色のワックスとして得た。
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３１Ｈ６４ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が６０９．８２であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝６０９を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（６−カルボキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０産生：
ＩＬ１２／２３ｐ４０のインビトロでの産生に対するＣＩ−２０３の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図７に示されるように、ＣＩ−２０３は、骨髄由来細胞によるＩＬ１２／２３ｐ４０の産生を用量依存的様式で阻害した。
チロシンリン酸化：
骨髄由来細胞におけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２０３の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。ＣＩ−２０３のＲ−エナンチオマーおよびラセミ状ＣＩ−２０３の両方を試験した。ＣＩ−２０１のＲ−エナンチオマーおよびＳ−エナンチオマーの両方をコントロールとして使用した。
図８に示されるように、（Ｒ）−ＣＩ−２０３およびラセミ状ＣＩ−２０３の両方の２０μｇ／ｍｌ（３３μＭ）による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こし、これに対して、１μｇ／ｍｌ（１．７μＭ）のＣＩ−２０３による処理は明瞭な影響がなかった。（Ｒ）−ＣＩ−２０３およびラセミ状ＣＩ−２０３の影響は、ＣＩ−２０１のＲ−エナンチオマーおよびＳ−エナンチオマーの両方によって誘導される影響と類似していた。
ＣＩ−２０３の毒性：
ＣＩ−２０３の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図９Ａおよび図９Ｂに示されるように、ＣＩ−２０３の著しい毒性が１００μｇ／ｍｌの用量でのみ認められた。ＣＩ−２０３のＬＤ５０が５０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの間にある。
実施例３
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０９）
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｓ）−１−ドデシル−グリセロールの合成：１１グラムの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、２０．６グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび２４．０８グラムの臭化ドデシルを３００ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、１４時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。その後、反応混合物を室温に冷却し、１５０ｍｌの水を加えた。その後、反応混合物を１５０ｍｌのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）により３回抽出し、一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、その後、溶媒を減圧下で除き、これにより、２９．７１グラムの明褐色のオイルを得た。この残渣を１００ｍｌのメタノールに溶解した。６ｍｌの濃塩酸を加え、生じた溶液を、透明な溶液が得られるまで還流し、その後、室温に冷却し、１００ｍｌの水を加えた。生成物を１５０ｍｌのクロロホルムにより抽出し、１５０ｍｌの水、１５０ｍｌの重炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び１５０ｍｌの水により順次洗浄した。溶媒を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で除き、これにより、２３．７７グラムの粗生成物を得た。粗生成物を２００ｍｌのヘキサンから４℃で結晶化させて、１９．８３グラムの純粋な（Ｓ）−１−ドデシル−グリセロールを白色の結晶として得た。
（Ｒ）−１−ドデシル−３−トリチル−グリセロールの合成：１９．８３グラムの（Ｓ）−１−ドデシル−グリセロールおよび２１．０グラムのトリフェニルクロロメタンを２５０ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および６０ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に加えた。２２ｍｌの乾燥トリエチルアミンを加え、反応混合物を窒素下で１７時間還流した。その後、反応混合物を室温に冷却し、５ｍｌのトリエチルアミンおよび１０グラムの氷を加えた。混合物を分液漏斗に移し、１００ｍｌのＭＴＢＥにより抽出した。有機相を、１５０ｍｌの水、１５０ｍｌの希Ｈ２ＳＯ４（１．５％）、１５０ｍｌの水、１５０ｍｌの濃重炭酸ナトリウム水溶液、再び１５０ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。残渣、すなわち、４０．６３グラムの褐色のオイルを２００ｍｌの酢酸エチルに溶解し、−２０℃に数日間冷却した。混合物を−１０℃の温度で遠心分離し、母液を捨てた。固体は室温で融解した。この固体をシリカゲルカラム（１９５グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１８．５７グラムの純粋な（Ｒ）−１−ドデシル−３−トリチル−グリセロールが、クロロホルムおよびヘキサンの混合物、それに続く、９：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：酢酸エチルの混合物によって溶出された。収率が４８．５％であった。
（Ｓ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−グリセロールの合成：１８．５７グラムの（Ｒ）−１−ドデシル−３−トリチル−グリセロール、４ｍｌの６−ブロモ−１−ヘキセンおよび２２．５７グラムの粉末化された水酸化カリウムを１００ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、９時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水を加え、溶液を分液漏斗に移した。溶液を５０ｍｌのジエチルエーテルにより４回抽出し、一緒にした有機相からの溶媒を減圧下で除き、これにより、１９．３１グラムの残渣を得た。残渣を１００ｍｌのメタノールに溶解し、その後、６ｍｌの濃ＨＣｌ（３７％）を加えた。反応混合物を４時間還流し、室温に冷却し、この温度で９６時間以上にわたって撹拌した。反応混合物を、溶媒を減圧下で除くことによって約５０ｍｌに濃縮し、５０ｍｌの水を加えた。溶液を分液漏斗に移し、１００ｍｌのＭＴＢＥにより２回抽出した。その後、溶媒を減圧下で除いた。残渣（１８．８５グラム）をヘキサンに溶解し、得られた溶液を氷浴で３０分間冷却した。沈殿物をろ過により除き、冷却されたヘキサンにより洗浄し、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。残渣（１５．２３グラム）を熱ヘキサンに再び溶解し、４℃に一晩冷却した。ろ過し、溶媒をろ液から除いた後、ろ液をシリカゲル（７７．３４グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。溶出を、クロロホルムおよび酢酸エチルの１：１（ｖ／ｖ）混合物、それに続く、純クロロホルム、次いで、３％アセトンを含むクロロホルムにより行った。１０．０３グラムの純粋な（Ｓ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−グリセロールを得た。収率が７８．１％であった。
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：５．７５グラムの（Ｓ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロール（これはデシケーターにおいてＰ２Ｏ５で乾燥された）および３．１１ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、１．７ｍｌのＰＯＣｌ３を２０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に３０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに３０分間続け、その後、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、１．３ｍｌのエタノールアミンおよび３．３ｍｌのトリエチルアミンを３０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を１５分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で３０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。残渣を３６ｍｌの酢酸および１５ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱し、室温に冷却した。溶液をクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物の５０ｍｌにより２回抽出し、薄い重炭酸ナトリウム溶液により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、８．５４グラムの粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲル（５５グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。４．９９グラムの純粋な（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、２．５％〜４０％のメタノールとの混合物によって溶出された。収率が６３．８５％であった。
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：４．９９グラムの（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを３５ｍｌのメタノールおよび１００ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解した。１０グラムの炭酸カリウムを２０ｍｌの水に溶解した溶液を加えた。その後、２．５ｍｌの硫酸ジメチルを１時間かけて滴下により加え、反応液を室温で一晩撹拌した。薄層クロマトグラフィーによって明らかにされるように、いくらかの出発物質が反応混合物に依然として存在していた。さらに１ｍｌの硫酸ジメチルを加え、反応混合物を４０℃に５時間加熱した。その後、反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水を加え、その後、クロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより３回抽出した。有機相からの溶媒を減圧下で除き、これにより、５．８グラムの粗（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０９）の合成：２．７６グラムの重炭酸ナトリウムを、５．１８グラムの（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを１００ｍｌの水に溶解した溶液に加えた。その後、２０．４グラムの過ヨウ素酸ナトリウムを１００ｍｌの水に溶解した溶液を加えた。２７０ｍｇの過マンガン酸カリウムを８２ｍｌの水に溶解した溶液を滴下漏斗に入れ、反応混合物のピンク色を維持するために必要に応じて滴下により加えた。合計で５８ｍｌの過マンガン酸塩溶液を反応期間中に加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応液のｐＨを、２０グラムのリン酸二水素ナトリウム、次いで３ｍｌの８０％リン酸を加えることによっておよそ４に調節した。反応混合物をクロロホルム：メタノールの２：１混合物の５０ｍｌにより３回抽出し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。残渣をクロロホルムに溶解し、水により洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、４．８９グラムの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲル（５８．２グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１．８１グラムの純粋な（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、１０％〜６０％のメタノールとの混合物により溶出された。収率が３３．７６％であった。
ＣＩ−２０９の合成のためのさらなる合成経路を下記のように行った：
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−３−アセチル−グリセロールの合成：（Ｒ）−１−ドデシル−３−トリチル−グリセロール（６７グラム）（これは本明細書中上記で記載されるように調製された）、６−ブロモ−１−ヘキセン（２６．１４グラム）および粉末化されたＫＯＨ（３５グラム）をベンゼン（２００ｍｌ）において撹拌し、９時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約１００ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、水（１５０ｍｌ）を加えた。溶液を分液漏斗に移し、ジエチルエーテルにより抽出した（１５０ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を水により洗浄し（１５０ｍｌ、３回）、その後、溶媒を減圧下で除いた。残渣（７８グラム）を酢酸（２００ｍｌ）に溶解し、溶液を氷浴で冷却した。この冷却された溶液に、４０ｍｌの無水酢酸（４０ｍｌ）および１ｍｌの７０％過塩素酸の混合物を加えた。反応混合物を室温にし、その後、室温で一晩撹拌した。氷を加え、その後、ジエチルエーテル（４００ｍｌ）および水（４００ｍｌ）を加えた。有機相を分離し、溶媒を減圧下で除いた。残渣を熱ヘキサンに溶解し、溶液を４℃の温度で一晩貯蔵した。沈殿した副生成物をろ過により除き、ろ液からの溶媒を減圧下で除いて、５５グラムの油状の褐色生成物を得た。この粗生成物をシリカゲルカラム（３５０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。純粋な（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−３−アセチル−グリセロールが、１：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：ヘキサンの混合物（１５００ｍｌ）、それに続く、クロロホルム（１５００ｍｌ）により溶出された。生成物を含有する分画物から溶媒を除くことにより、５２グラムの生成物を得た。
（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの合成：過ヨウ素酸ナトリウム（１５０グラム）、過マンガン酸カリウム（２．５グラム）および炭酸水素ナトリウム（１０グラム）を水（５００ｍｌ）に懸濁した。（Ｒ）−１−ドデシル−２−（５’−へキセニル）−３−アセチル−グリセロール（５２グラム）をｔｅｒｔ−ブタノール（５００ｍｌ）に溶解した溶液を１時間かけて水性懸濁物に加え、その後、反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をセライトのパッドでろ過し、セライトのパッドをｔｅｒｔ−ブタノールによりさらに洗浄した。溶液をヘキサンにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を重亜硫酸ナトリウム水溶液（１００ｍｌの水に１５グラム）により２回洗浄し、次いで水（１００ｍｌ）により洗浄した。溶媒を減圧下で濃縮し、１００ｍｌの水および１０ｍｌの３０％ＮａＯＨにより処理して、１２のｐＨにした。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を、残留する不純物を除くために、ヘキサン：ＭＴＢＥの８：２（ｖ／ｖ）混合物（２００ｍｌ）により抽出した。塩基性水溶液をＨＣｌ（６ｍｌ）により酸性化してｐＨ１にし、その後、ヘキサン：酢酸エチルの７：３（ｖ／ｖ）混合物により抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。残渣（３０グラムの黄色オイル）をシリカゲルカラム（５００グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。純粋な（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールが、クロロホルム：ヘキサンの１：１（ｖ／ｖ）混合物（１０００ｍｌ）、それに続く、クロロホルム（１０００ｍｌ）、次いで、クロロホルム：酢酸エチルの混合物（９：１（ｖ／ｖ）から１：１（ｖ／ｖ）に）により溶出された。生成物を含有する分画物から溶媒を除くことにより、１３．４グラムの生成物を得た。
（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロール（１３．３８グラム）を１００ｍｌのメタノールに溶解し、２ｍｌの濃塩酸を加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。水（５０ｍｌ）を加え、溶液を分液漏斗に移し、クロロホルムにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を、水（１００ｍｌ）、濃重炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）、再び水（１００ｍｌ）により洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で蒸発させることにより、１３．９グラムの粗生成物を残渣として得た。この残渣をシリカゲルカラム（２００グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。純粋な（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールが、クロロホルム、それに続く、クロロホルム：酢酸エチルの混合物（９：１（ｖ／ｖ）から７：３（ｖ／ｖ）に）により溶出された。生成物を含有する分画物から溶媒を除くことにより、１０．７グラムの純粋な生成物を得た。
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：１０．７グラムの（Ｓ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロール（これはベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥された）および５．２ｍｌの乾燥トリエチルアミンをＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、ＰＯＣｌ３（３．２ｍｌ）を５０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に９０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１５分間続け、その後、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、エタノールアミン（２２ｍｌ）およびトリエチルアミン（７．２ｍｌ）を５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、撹拌を行いながら６０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で３０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。残渣（１４グラムの黄色オイル）を酢酸（１２０ｍｌ）および水（５０ｍｌ）の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱し、室温に冷却した。溶液をクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により抽出し（１００ｍｌ、３回）、一緒にした有機相を水により洗浄し（１００ｍｌ、２回）、溶媒を減圧下で除き、これにより、１５グラムの（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンをオレンジ色のオイルとして得た。（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１４グラム）をイソプロパノール（１００ｍｌ）およびジクロロメタン（５５ｍｌ）の混合物に溶解した。炭酸カリウム（２２グラム）を水（１００ｍｌ）に溶解した溶液を、反応混合物を３５℃〜４０℃で保ちながら滴下により加えた。硫酸ジメチル（１４ｍｌ）をイソプロパノール（５０ｍｌ）に溶解した溶液を４０℃で滴下により加えた。混合物を４０℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。水（８０ｍｌ）を加え、混合物をクロロホルムにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を水（１００ｍｌ）により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、粗（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４．６グラム）をオレンジ色のワックスとして得た。
（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０９）の合成：（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１４．６グラム）を８：２（ｖ／ｖ）のメタノール：１０％ＮａＯＨ溶液（１００ｍｌ）に溶解し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムおよびギ酸を加えることによって５に調節した。水（１５０ｍｌ）、クロロホルム（１５０ｍｌ）およびメタノール（５０ｍｌ）を加えた。水相および有機相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１５グラムをワックスとして得た。このワックスをシリカゲル（２２４グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を、クロロホルム（６００ｍｌ）、それに続く、クロロホルム：メタノールの８：２（ｖ／ｖ）混合物（６００ｍｌ）により、次いで、クロロホルム：メタノール：Ｈ２Ｏの混合物（６０：３５：５、ｖ／ｖ）によって溶出した。溶媒を、所望される生成物を含有する分画物から減圧下で除いた後、残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１０．５グラムの（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを白色のワックスとして得た。
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ２５Ｈ５２ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５２５．３４３１であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５２４を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０産生：
ＩＬ１２／２３ｐ４０のインビトロ産生に対するＣＩ−２０９の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１０に示されるように、ＣＩ−２０９は、骨髄由来細胞によるＩＬ１２／２３ｐ４０の産生を用量依存的様式で阻害した。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージ細胞におけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２０９の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１１に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０９による処理はホスホチロシンレベルにおける増大を誘導し、これに対して、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。
ＣＩ−２０９の毒性：
ＣＩ−２０９の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図９Ａおよび図９Ｂに示されるように、行われた２回の実験において、ＣＩ−２０９の毒性が、試験された用量のいずれにおいても認められなかった。したがって、ＣＩ−２０９のＬＤ５０は１５０μｇ／ｍｌ（２８６μＭ）を越えていた。
実施例４
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸（ＣＩ−２１０）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸を、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸が、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが出発物質として用いられる。
（Ｒ）−および（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成が本明細書中上記において実施例１に記載される。
１．８５グラム（３．３３ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを１７５ｍｌのジクロロメタンに溶解し、１．３９ｍｌのトリエチルアミンを加えた。この溶液を、０．４２グラムの無水グルタル酸を１７５ｍｌのジクロロメタンに溶解した溶液に１５分かけて滴下により加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。２０グラムのリン酸水素ナトリウムを１００ｍｌの水に溶解した溶液を加え、反応混合物を激しく２０分間撹拌した。反応混合物を分液漏斗に移し、相を分離し、水相を１００ｍｌのクロロホルムにより２回抽出した。一緒にした有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。１．１６グラムの粗生成物が得られ、これをシリカゲル（６０グラム）で精製した。生成物を、２００ｍｌのクロロホルム、それに続く、９：１（ｖ／ｖ）、８：２（ｖ／ｖ）および７：３（ｖ／ｖ）の比率でのクロロホルム：メタノールの混合物、次いで、２００ｍｌのクロロホルム：メタノール（１：１、体積比）により溶出した。生成物を含有する分画物からの溶媒を減圧下で除き、残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、１３１．４ｍｇの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸（ＣＩ−２１０）を灰白色のワックスとして得た。
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸の構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸の構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸の構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸の質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸（Ｃ３１Ｈ５９ＮＯ１１Ｐ）についての計算質量が６５２．７７４６であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝６５２を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸（ＣＩ−２１０）の化学構造と一致している。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０産生：
ＩＬ１２／２３ｐ４０のインビトロ産生に対するＣＩ−２１０の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１３に示されるように、ＣＩ−２１０は、骨髄由来細胞によるＩＬ１２／２３ｐ４０の産生を用量依存的様式で阻害した。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージ細胞におけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２１０の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１４に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２１０による処理はホスホチロシンレベルにおける増大を誘導し、これに対して、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。
ＣＩ−２１０の毒性：
ＣＩ−２１０の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図１５Ａおよび図１５Ｂに示されるように、ＣＩ−２１０の著しい毒性が１００μｇ／ｍｌ（１５６．６μＭ）以上の用量で認められた。ＣＩ−２１０のＬＤ５０はおよそ１５０μｇ／ｍｌ（２３５μＭ）であった。
実施例５
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１６）および１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１５）
（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｓ）−１−オクタデシル−グリセロールの合成：２０ｍｌの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、２７グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび５９グラムの１−ブロモオクタデカンを２５０ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、６時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約２００ｍｌにした。その後、反応混合物を室温に冷却し、この温度で一晩撹拌した。２００ｍｌの水を加え、反応混合物を２００ｍｌのジメチルエーテルにより２回抽出し、一緒にした有機相を２００ｍｌの水により洗浄し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を９０：１０：５（ｖ／ｖ）のメタノール：水：濃塩酸の混合物の１００ｍｌに溶解し、生じた溶液を１時間還流し、その後、室温に冷却し、２００ｍｌの水を加えた。生成物を２００ｍｌのクロロホルムにより２回抽出し、２００ｍｌの水、２００ｍｌの炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び２００ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶媒を減圧下で除き、粗生成物を５００ｍｌのヘキサンから結晶化させて、３９．５グラムの純粋な（Ｓ）−１−オクタデシル−グリセロールを得た。これを減圧下のデシケーターにおいて酸化リンにより乾燥した。
（Ｒ）−１−オクタデシル−３−トリチル−グリセロールの合成：３９グラム（１１３ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−１−オクタデシル−グリセロールおよび４０グラム（１３７ｍｍｏｌ）のトリフェニルクロロメタンを５００ｍｌの乾燥ＴＨＦおよび１３０ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に加えた。３２ｍｌの乾燥トリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。その後、反応混合物を室温に冷却し、氷（１キログラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、２００ｍｌのジエチルエーテルにより２回抽出した。有機相を２００ｍｌの水により、次いで１００ｍｌの希Ｈ２ＳＯ４（１．５％）により２回、次いで２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの濃重炭酸ナトリウム水溶液により、次いで再び２００ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。残渣、すなわち、褐色のオイルを２５０ｍｌの酢酸エチルに溶解し、−２０℃に一晩冷却した。混合物を−１０℃の温度で遠心分離し（３５００回転／分）（３５００ＲＰＭ）、その後、母液を捨てた。残留する固体をヘキサンに溶解し、一晩冷蔵した（５±３℃）。沈殿物のろ過により、５０グラムの純粋な（Ｒ）−１−オクタデシル−３−トリチル−グリセロールを得た。
（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールの合成：５０グラム（８９．２ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−１−オクタデシル−３−トリチル−グリセロールおよび１８グラム（１０２ｍｍｏｌ）の５−へキセニル−１−メタンスルホナートを１５０ｍｌのベンゼンに溶解した。２０グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を撹拌し、６時間還流した。その間、反応で形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約５０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、２００ｍｌの水を加えた。混合物を２００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出し、一緒にした有機相を２００ｍｌの水により３回洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、５０グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールをオレンジ色のオイルとして得た。
（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの合成：１４５グラムのＮａＩＯ４を５００ｍｌの水に溶解した。この溶液に、１４グラムのＫ２ＣＯ３および２．４グラムのＫＭｎＯ４を加え、懸濁物を４０℃の温度に加熱した。５０グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを５００ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールに溶解した溶液を１．５時間かけて滴下により加え、混合物をさらに４時間加熱した。さらなる量のＫＭｎＯ４溶液を、ピンク色を維持するために必要に応じて加えた。反応混合物を室温に冷却し、この温度で一晩撹拌した。重亜硫酸ナトリウムを、ピンク色、次いで褐色の色が消失し、反応混合物が黄色になるまで少量ずつ加えた。この溶液を室温で３０分間撹拌した後、１００ｍｌの１０％硫酸を滴下により加え、溶液を分液漏斗に移し、２００ｍｌのヘキサンにより３回抽出した。有機相を、１５グラムのＮａ２Ｓ２Ｏ５を１００ｍｌの溶解した溶液により２回洗浄し、次いで２００ｍｌの水により洗浄した。有機相を、約５００ｍｌの溶媒を減圧下で除くことによって濃縮した。残留する溶液に対して、１５ｍｌの水および１．５ｍｌの濃塩酸を加え、得られた混合物を６時間還流し、その後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除くことによって再び濃縮した。残留物のｐＨを、１００ｍｌの水および１０ｍｌの３０％ＮａＯＨ溶液を加えることによって１２に調節した。沈殿物をろ過により除き、１０ｍｌの水により４回洗浄した。ろ液をヘキサン：酢酸エチルの１：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより抽出した。水相を、８ｍｌの濃塩酸を加えることによって１のｐＨに酸性化し、その後、１００ｍｌのヘキサンにより抽出した。無水ＮａＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、粗生成物を１：９（ｖ／ｖ）のアセトン：ヘキサンの混合物から５±３℃で一晩再結晶することにより、１９グラムの純粋な（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを灰白色の固体として得た。
（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールの合成：１７グラムの（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを１００ｍｌのメタノールに溶解した。２ｍｌの濃ＨＣｌ（３７％）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除き、１００ｍｌの水を得られた残渣に加えた。混合物を７０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。一緒にした有機相を、７０ｍｌの水、７０ｍｌの濃重炭酸ナトリウム溶液、再び７０ｍｌの水により洗浄した。その後、溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させ、１４グラムの（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールを白色のワックスとして得た。
（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：７グラムの（Ｓ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロール（これはベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥された）および７ｍｌのトリエチルアミンを６０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、４．３ｍｌのＰＯＣｌ３を４０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に３０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１５分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、３ｍｌのエタノールアミンおよび１３ｍｌのトリエチルアミンを６０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を３０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で１５分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を７２ｍｌの酢酸および３０ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃の温度に１時間加熱した。混合物を８０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、１００ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、１０グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１６）の合成：３グラムの（Ｒ）−１−ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンをメタノールおよび１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌに溶解し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。その後、反応混合物のｐＨをギ酸の添加によっておよそ４に調節した。その後、１００ｍｌの水および１００ｍｌのクロロホルムを加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（３グラム）をシリカゲル（５５グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルムおよびヘキサンの混合物、それに続く、クロロホルムおよびメタノールの混合物、最後に、クロロホルム、メタノールおよび水の混合物を使用して、７６０ｍｇの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンをカラムから溶出した。
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１ＨＮＭＲスペクトルおよび１３ＣＮＭＲスペクトルを６００ＭＨｚで測定した。
結果は１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２８Ｈ５８ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５６７であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５６６を有する分子イオンを示した。正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）は、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９０を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１６）の化学構造と一致している。
（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：６グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを５０ｍｌのイソプロパノールおよび１８ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解し、混合物を３５℃〜４０℃の範囲における温度に加熱した。７．５グラムの炭酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液を、温度を３５℃〜４０℃で保ちながら滴下により加えた。その後、５ｍｌの硫酸ジメチルを１０ｍｌのイソプロパノールに溶解した溶液を４０℃の温度で滴下により加えた。反応液を４０℃で２時間保ち、その後、室温で一晩保った。１００ｍｌの水を加え、その後、混合物を１００ｍｌのジクロロメタンにより３回抽出した。有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いて、６グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１５）の合成：６グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを８：２（ｖ／ｖ）のメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の混合物の１００ｍｌに溶解し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。その後、反応混合物のｐＨをギ酸の添加によっておよそ４に調節した。その後、１００ｍｌの水および１００ｍｌのクロロホルムを加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（５．３グラム）をシリカゲル（１１２グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルムおよびヘキサンの混合物、それに続く、クロロホルムおよびメタノールの混合物、最後に、クロロホルム、メタノールおよび水の混合物を使用して、生成物を溶出した。溶媒を、生成物を含有する分画物から減圧下で除くことにより、２．８グラムの（Ｒ）−１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１５）を白色のワックスとして得た。
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１ＨＮＭＲスペクトルおよび１３ＣＮＭＲスペクトルを６００ＭＨｚで測定した。
結果は１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３１Ｈ６４ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が６０９であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝６１０を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−オクタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１５）の化学構造と一致している。
インビトロでのＩＬ１２／２３ｐ４０産生：
ＩＬ１２／２３ｐ４０のインビトロ産生に対するＣＩ−２１６の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１６に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２１６は、骨髄由来細胞によるＩＬ１２／２３ｐ４０の産生を阻害した。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージ細胞におけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２１５およびＣＩ−２１６の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１７に示されるように、１０μｇ／ｍｌ（１７μＭ）のＣＩ−２１５による処理はホスホチロシンレベルにおける増大を誘導し、これに対して、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）のＣＩ−２１５による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。
同様に、図１８に示されるように、１０μｇ／ｍｌ（１５μＭ）のＣＩ−２１６による処理はチロシンリン酸化の誘導をもたらし、これに対して、２０μｇ／ｍｌ（３０μＭ）のＣＩ−２１６に対する暴露はホスホチロシン濃度における低下を引き起こした。これらの変化は、１０μｇ／ｍｌ（１７μＭ）および２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）の陽性コントロールＣＩ−２０１によってそれぞれ誘導される影響と非常に類似していた。
実施例６
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０６）および１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０５）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールの合成。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−グリセロールを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを使用して最初に調製することによって、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールを実施例１に記載されるように調製した。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−ペンテニル）−３−トリチル−グリセロールの合成。７．３５グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールおよび１．８７ｍｌの５−ブロモ−１−ペンテンを１５０ｍｌのベンゼンに溶解した。３グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を撹拌し、１０時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。ベンゼンを、ほぼ乾固するまで蒸留した。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌのジエチルエーテルを加え、混合物を水により洗浄し（５０ｍｌ、３回）、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（７．８グラム）を２０ｍｌのヘキサンに溶解し、４℃に一晩冷却した。沈殿した副生成物をろ過により除き、溶媒を減圧下で除いて、７．７５グラムの生成物を黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−３−トリチル−グリセロールの合成。７．７５グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４’−ペンテニル）−３−トリチル−グリセロールを２８０ｍｌのｔ−ブタノールに溶解した。３．２グラムの炭酸カリウムを９０ｍｌの水に溶解した溶液を加えた。その後、３４グラムの過ヨウ素酸ナトリウムを２５０ｍｌの水に溶解した溶液の５０ｍｌと、４７０ｍｇの過マンガン酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液の２ｍｌとを加えた。混合物を撹拌し、残る量の過ヨウ素酸塩溶液を１０分かけて加えた。さらなる量の過マンガン酸塩溶液を、ピンク色を維持するために必要に応じて加えた。混合物を４０℃に４．５時間加温し、室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。重亜硫酸ナトリウムを少量ずつ加えた。混合物の色が褐色に変わり、その後、固体が消失し、色が黄色になった。その後、混合物を３０分間撹拌し、２５ｍｌの１０％硫酸溶液を滴下により加えた。溶液をジエチルエーテルにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を５０ｍｌの水により洗浄し、次いで、２０ｍｌの重亜硫酸ナトリウム溶液（これは５グラムの重亜硫酸ナトリウムから２０ｍｌの水において調製された）により２回洗浄し、次いで、５０ｍｌの水により２回洗浄し、その後、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させ、１１グラムの生成物を黄色のワックスとして得た。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロールの合成。１１グラムの１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−３−トリチル−グリセロールを１００ｍｌのギ酸に溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。その後、ギ酸を減圧下で除いた。トルエン：ヘキサンの１：１溶液の１００ｍｌを加え、混合物を室温で撹拌した。溶液をメタノール：１０％ＮａＯＨ水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより２回抽出した。塩基性溶液を、４〜５の範囲のｐＨが得られるまでリン酸二水素ナトリウムにより酸性化した。１００ｍｌのジエチルエーテルおよび１００ｍｌの水を加え、相を分離し、水相を１００ｍｌのジエチルエーテルにより２回洗浄した。その後、一緒にした有機相を１００ｍｌの水および１００ｍｌのブラインにより洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いて、８グラムの生成物を得た。生成物をアセトン：ヘキサンの１：９混合物から結晶化させて、２．４グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロールを得た。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−グリセロールの合成。２．４グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロールを５０ｍｌのメタノールに溶解した。１ｍｌの濃ＨＣｌを加え、混合物を室温で６時間撹拌し、その後、４℃で一晩放置した。溶媒を減圧下で除き、５０ｍｌの水を加え、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を、５０ｍｌの水、５０ｍｌの濃重炭酸ナトリウム、再び５０ｍｌの水により洗浄した。混合物を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いて、２．９グラムの生成物を得た。生成物を減圧下において五酸化リンにより乾燥した。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成。２．９グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−グリセロールおよび３ｍｌのトリエチルアミンを３０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、２ｍｌのＰＯＣｌ３を２０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に１５分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。１．３ｍｌのエタノールアミンおよび６ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、氷冷された反応混合物に１５分かけて滴下により加えた。撹拌を０℃で１０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。残渣を２４ｍｌの酢酸および１０ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、５０ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、３．８グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを褐色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０６）の合成：０．８グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを８：２（ｖ／ｖ）のメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の２０ｍｌに溶解した。１０％水酸化ナトリウム溶液を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムを加えることによって４〜５の範囲に調節した。５０ｍｌの水および５０ｍｌのクロロホルムを加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いて、６８４ｍｇの粗生成物を残渣として得た。この残渣をシリカゲル（３０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を６０：３５：５の体積比でのクロロホルム：メタノール：水の混合物により溶出した。溶媒を減圧下で除き、残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、３１４ｍｇの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを白色のワックスとして得た。これを減圧下において五酸化リンにより乾燥した。
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０６）の構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
ＣＩ−２０６の構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
ＣＩ−２０６の構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２５Ｈ５２ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５２５．６５６０であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５２４を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２０６）の化学構造と一致している。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成。２．８グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを５０ｍｌのイソプロパノールおよび１８ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解した。３．７グラムの炭酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液を、反応混合物を３５℃〜４０℃の範囲における温度で保ちながら滴下により加えた。２．５２ｍｌの硫酸ジメチルを１０ｍｌのイソプロパノールに溶解した溶液を５分かけて４０℃で滴下により加えた。その後、反応混合物を４０℃で９０分間保ち、室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。水を加え、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を５０ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いて、３グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを褐色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０５）の合成：３グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−メチルカルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の５０ｍｌに溶解し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムを加えることによって４〜５の範囲に調節した。５０ｍｌの水および５０ｍｌのクロロホルムを加え、得られた溶液を分液漏斗に移した。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いて、２．３グラムの粗生成物を残渣として得た。この残渣をシリカゲル（１１０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を６０：３５：５の体積比でのクロロホルム：メタノール：水の混合物により溶出した。溶媒を減圧下で除いた後、残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、６７７ｍｇの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０５）を白色のワックスとして得た。これを減圧下において五酸化リンにより乾燥した。
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２８Ｈ５８ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５６７．７３５８であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５６６を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（３−カルボキシ）プロピル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２０５およびＣＩ−２０６の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図１９に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０６による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。
同様に、図２０に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０５による処理は、２０μｇ／ｍｌの陽性コントロールＣＩ２０１による処理が引き起こしたように、ホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。
ＣＩ−２０５およびＣＩ−２０６の毒性：
ＣＩ−２０５およびＣＩ−２０６の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図２１Ａおよび図２１Ｂに示されるように、ＣＩ−２０６の著しい毒性が５０μｇ／ｍｌ以上の用量で検出された。ＣＩ−２０６のＬＤ５０が５０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの間にある。
図２２Ａおよび図２２Ｂに示されるように、ＣＩ−２０５の著しい毒性が２回の実験では１００μｇ／ｍｌの用量で検出され、１回のみの実験では２０μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌの用量で検出された。ＣＩ−２０５のＬＤ５０が５０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの間にある。
実施例７
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０７）および１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン
（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｓ）−１−オクチル−グリセロールの合成：２１ｍｌの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、２９グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび３２ｍｌの１−ブロモオクタンを１５０ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、６時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約１００ｍｌにした。その後、反応混合物を室温に冷却し、２００ｍｌの水を加えた。その後、反応混合物を１５０ｍｌのジメチルエーテルにより３回抽出し、一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をメタノール：水：濃塩酸の９０：１０：５（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌに溶解し、生じた溶液を２時間還流し、その後、室温に冷却し、１００ｍｌの水を加えた。生成物を１５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、１５０ｍｌの水、１５０ｍｌの重炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び１００ｍｌの水により順次洗浄した。溶媒を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除き、これにより、３４グラムの（Ｓ）−１−オクチル−グリセロールを得た。
（Ｒ）−１−オクチル−３−トリチル−グリセロールの合成：３４グラムの（Ｓ）−１−オクチル−グリセロールおよび６１グラムのトリフェニルクロロメタンを５００ｍｌの乾燥ＴＨＦおよび１３０ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に加えた。４６ｍｌの乾燥トリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。その後、反応混合物を室温に冷却し、氷（１キログラム）に注いだ。混合物を分液漏斗に移し、２００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を１５０ｍｌの水により、次いで１００ｍｌの希Ｈ２ＳＯ４（１．５％）により２回、次いで２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの濃重炭酸ナトリウム水溶液により、次いで再び２００ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶液を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣、すなわち、８０グラムの褐色のオイルを５００ｍｌの熱ヘキサンに溶解し、４℃の温度で一晩保った。沈殿物をろ過により除き、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製した。得られる純粋な（Ｒ）−１−オクチル−３−トリチル−グリセロールが、クロロホルムと、１０％ヘキサンとの混合物、クロロホルムと、５％ヘキサンとの混合物、それに続く、クロロホルムと、酢酸エチル（５％および１０％）との混合物によって溶出された。収率が７３％であった。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチルグリセロールの合成：１８．７グラムの（Ｒ）−１−オクチル−３−トリチル−グリセロール、５．５グラムの６−ブロモ−１−ヘキセンおよび２２グラムの粉末化された水酸化カリウムを１００ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、９時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約３０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水を加えた。得られた混合物を分液漏斗に移し、ジエチルエーテルにより抽出した。一緒にした有機相を２００ｍｌの水により２回洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、２０．２グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチルグリセロールを得た。
（Ｓ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールの合成：２０．２グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチルグリセロールを１００ｍｌのメタノールに溶解し、１０ｍｌの濃塩酸（３２％）を加え、得られた反応混合物を４時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。１００ｍｌの水を加え、溶液を１００ｍｌのジエチルエーテルにより２回抽出した。一緒にした有機相を、１００ｍｌの水、１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム水溶液、再び１００ｍｌの水により洗浄した。溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（２０．１グラム）を２５０ｍｌのヘキサンに溶解し、得られた溶液を４℃の温度で９６時間貯蔵し、これにより、トリフェニルカルビノールのほとんどを沈殿させた。ろ過し、溶媒をろ液から除いた後、残留する生成物（１２グラム）をシリカゲル（９１．４グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。純粋な（Ｓ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロール（５．７グラム）を、クロロホルム、それに続く、５％のアセトンを含むクロロホルムにより溶出した。収率が５２％であった。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：４．９グラムの（Ｓ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロール（これはデシケーターにおいてＰ２Ｏ５で乾燥された）および２．６５ｍｌのトリエチルアミンを４０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、１．４ｍｌのＰＯＣｌ３を２０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に３０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに３０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、１．１ｍｌのエタノールアミンおよび２．８ｍｌのトリエチルアミンを３０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、撹拌を行いながら１５分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で３５分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、固体を１５ｍｌのＴＨＦにより２回洗浄し、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（５．６グラム）を３６ｍｌの酢酸および１５ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃の温度に１時間加熱した。室温に冷却した後、溶液を分液漏斗に移し、クロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により２回抽出し、薄い重炭酸ナトリウム溶液により洗浄し、その後、溶媒を減圧下で除き、これにより、４．６グラムの粗（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを得た。この粗生成物をシリカゲル（５９グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。２．６グラムの純粋な生成物が、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、１０％〜４０％のメタノールとの混合物により溶出された。収率が７５．９％であった。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：２．１グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを、６グラムの炭酸カリウムを伴う１００ｍｌのエタノールの溶液に溶解した。８ｍｌの硫酸ジメチルを加え、反応混合物を４０℃の温度に６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水を加えた。その後、混合物を１００ｍｌのクロロホルムにより２回抽出した。有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。粗生成物をシリカゲル（５９グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。２．０グラムの純粋な（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、２０％〜６０％のメタノールとの混合物により溶出された。収率が８６．４％であった。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０７）の合成：１７２ｍｇの重炭酸ナトリウムを１７ｍｌの水に溶解した溶液を、７００ｍｇの（Ｒ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを２８ｍｌの水に溶解した溶液に加えた。その後、３．０グラムの過ヨウ素酸ナトリウムを２８ｍｌの水に溶解した溶液を加えた。４０ｍｇの過マンガン酸カリウムを１２ｍｌの水に溶解した溶液を滴下漏斗に入れ、反応混合物のピンク色を維持するために必要に応じて反応混合物に滴下により加えた。過マンガン酸塩溶液のおよそ半量を反応期間中に加えた。室温で３時間撹拌した後、６グラムのリン酸二水素ナトリウムを加え、反応混合物をクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物の５０ｍｌにより３回抽出した。一緒にした有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、３６０ｍｇの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲル（１２．２３グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１１９ｍｇの純粋な（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンが、クロロホルム、それに続く、１０％〜６０％のメタノールを含むクロロホルムにより溶出された。
本明細書中上記で記載されるように調製される（Ｓ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを使用する代替合成を下記のように行った：
（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：７７グラムのＮａＩＯ４を３００ｍｌの水に溶解した。この溶液に、９グラムのＮａＨＣＯ３および１．２６グラムのＫＭｎＯ４を加え、懸濁物を４０℃に加熱した。２１グラムの（Ｓ）−１−オクチル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを３００ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールに溶解した溶液を１時間かけて反応混合物に滴下により加え、混合物をさらに３時間加熱した。さらなる量のＫＭｎＯ４溶液を、ピンク色を維持するために必要に応じて加えた。反応混合物を室温に冷却し、セライトでろ過し、セライトをｔｅｒｔ−ブタノールにより洗浄した。１００ｍｌの１０％硫酸溶液を滴下により加え、溶液を分液漏斗に移し、２００ｍｌのヘキサンにより３回抽出した。有機相を、２０グラムのＮａ２Ｓ２Ｏ５を１００ｍｌの水に溶解した溶液により洗浄し、次いで２００ｍｌの水により洗浄した。有機相を、体積が約１５０ｍｌに減少するまで、溶媒を減圧下で除くことによって濃縮した。１５ｍｌの水および２ｍｌの濃ＨＣｌを残留する溶液に加え、得られた混合物を６時間還流し、その後、室温に冷却し、溶媒を減圧下で除くことによって再び濃縮した。残留物のｐＨを、１００ｍｌの水および１０ｍｌの３０％ＮａＯＨ溶液を加えることによって１２に調節した。沈殿物をろ過により除き、２０ｍｌの水により４回洗浄した。ろ液をヘキサン：酢酸エチルの１：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより抽出した。水相を１０ｍｌの濃ＨＣｌの添加によって１のｐＨに酸性化し、１００ｍｌのヘキサンにより３回抽出した。無水ＮａＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、７．４グラムの粗生成物を黄色のオイルとして得た。粗生成物をシリカゲル（１００グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。４．８グラムの純粋な（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールが、クロロホルム、それに続く、５％〜５０％の酢酸エチルを含むクロロホルムにより溶出された。収率が３９．７％であった。
（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：１．１４グラムの（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを２０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。７４８ｍｇのジフェニルジアゾメタン（これは、Ｊ．Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍ．（１９５９）、２４：５６０〜５６１に記載されるように調製された）を加え、暗赤色の反応混合物を、溶液が無色になるまで室温で約３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除いた。残渣（１．９グラム）をシリカゲル（４３グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１．０８グラムの純粋な（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールが、クロロホルム、それに続く、５％〜２０％の酢酸エチルを含むクロロホルムにより溶出された。収率が６１．４％であった。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：１グラムの（Ｓ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロール（これはベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥された）および０．８８５ｍｌのトリエチルアミンを３０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、０．２３５ｍｌのＰＯＣｌ３を２０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に１５分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１５分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、０．１５４ｍｌのエタノールアミンおよび０．８８５ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、撹拌を行いながら１５分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で１５分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を２４ｍｌの酢酸および１０ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。混合物を８０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、５０ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、１．１２グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：１．１２グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを６５ｍｌのメタノールおよび１８ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解し、混合物を３５℃〜４０℃の範囲における温度に加熱した。１．３グラムの炭酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液を、反応混合物を３５℃〜４０℃の温度で保ちながら滴下により加えた。その後、７．２ｍｌの硫酸ジメチルを１０ｍｌのメタノールに溶解した溶液を４０℃で滴下により加えた。反応混合物を４０℃の温度で２時間保ち、その後、室温で一晩保った。５０ｍｌの水を加え、その後、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を５０ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いて、１グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０７）の合成：ガス状ＨＣｌを、１グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを４０ｍｌのクロロホルムに溶解した氷冷溶液に９０分間吹き込んだ。生じた溶液を氷浴でさらに２時間撹拌した。その後、反応混合物のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムを加えることによっておよそ６に調節した。５０ｍｌの水を加え、混合物を６０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。一緒にした有機相を６０ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、０．３７０グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。収率が５０．２％であった。
（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：ガス状ＨＣｌを、５グラムの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−ベンズヒドリルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（これは本明細書中上記で記載されるように調製された）を４０ｍｌのクロロホルムに溶解した氷冷溶液に９０分間吹き込んだ。ＨＣｌの添加が完了した後、反応混合物を氷浴でさらに２時間撹拌した。反応混合物のｐＨを、リン酸水素二ナトリウムの水溶液を加えることによっておよそ６に調節した。混合物をクロロホルムにより抽出し（５０ｍｌ、３回）、一緒にした有機相を水（１００ｍｌ）により洗浄した。溶媒を減圧下で除き、これにより、３．５グラムの褐色のオイルを得た。このオイルをシリカゲル（６８．５グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を、クロロホルム、それに続く、クロロホルム：メタノールの８：２（ｖ／ｖ）混合物、次いで、クロロホルム：メタノール：Ｈ２Ｏの７００：２６：４５（ｖ／ｖ）混合物により溶出した。溶媒を、所望される生成物を含有する分画物から減圧下で除いた後、得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１５０ｍｇの（Ｒ）−１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを黄色のワックスとして得た。
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０７）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを３００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１Ｈ−ＮＭＲ
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ２１Ｈ４４ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が４６９であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝４６８を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ１８Ｈ３８ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が４２７であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝４２６を有する分子イオンを示した。正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝４２８を有する分子イオン、および、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝４５０を有する分子イオンを示した。したがって、ＭＳスペクトルは１−オクチル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの化学構造と一致している。
実施例８
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０８）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールから本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールから合成される。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールおよび（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールの合成が実施例１に記載される。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０８）の合成：８．６０グラム（１９．９７ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロール（これは実施例１に記載されるように調製された）および２．６３グラム（２６ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを５００ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、３．９０グラム（２６ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ３を１００ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に２５分かけて滴下により加えた。撹拌を冷浴でさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。１．６ｍｌのエタノールアミンおよび６．４ｍｌのトリエチルアミンを５００ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、激しい撹拌のもと、氷冷された反応混合物に滴下により加えた。撹拌を氷浴でさらに１０分間続け、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。残渣を２４ｍｌの酢酸および１００ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、２５０ｍｌのジクロロメタンにより２回抽出した。その後、溶媒を減圧下で除いた。残渣を５００ｍｌのイソプロパノールおよび１８０ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解した。５０グラムの炭酸カリウムを１００ｍｌの水に溶解した溶液を加えて、１１を越えるｐＨが得られるようにした。溶液を、１００ｍｌのイソプロパノールにおける１１．１５グラムのメチルトシラートを４５分かけて滴下により加えている期間中、３５℃〜４０℃の範囲における温度で保った。さらに９０分の後、混合物を塩酸により酸性化し、１００ｍｌの水および５５０ｍｌのジクロロメタンを加え、相を分離した。有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。粗生成物をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。１１．０グラム（１８．４６ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルム、メタノールおよび水の混合物によって溶出された。収率が９２．４５％であった。
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０８）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを３００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２０８）の質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３０Ｈ６２ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５９５．７９であった。
高速原子衝撃（ＦＡＢ＋）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９６．３２４を有する分子イオンを示した。ＭＳスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２０８の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図２３に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０８による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。この低下は、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１コントロールによる処理によって引き起こされる低下よりも強い。
ＣＩ−２０８の毒性：
ＣＩ−２０８の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図２４Ａおよび図２４Ｂに示されるように、ＣＩ−２０８の毒性が５０μｇ／ｍｌ以上の用量で検出されたが、２０μｇ／ｍｌの用量での毒性が２回の実験の一方でのみ検出された。ＣＩ−２０８のＬＤ５０が５０μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの間にあるようであった。
実施例９
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１３）および１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１４）
（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを、（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｓ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（−）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオールが出発物質として用いられる。
１−トリチル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成。５グラム（２７．４４ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−（＋）−３−ベンジルオキシ−１，２−プロパンジオールおよび１０グラム（３５．８７ｍｍｏｌ）のトリフェニルクロロメタンを１００ｍｌの乾燥ＴＨＦおよび２５ｍｌの乾燥アセトニトリルに加えた。８ｍｌの乾燥トリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷（１００グラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、１００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を１００ｍｌの水により、次いで１００ｍｌの希Ｈ２ＳＯ４（１．５％）により２回、次いで１００ｍｌの水により、次いで１００ｍｌの濃重炭酸ナトリウム溶液により、次いで再び１００ｍｌの水により順次洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１１グラムの１−トリチル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを黄色のオイルとして得た。収率が９４％であった。
１−トリチル−２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成：１１グラムの１−トリチル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールおよび５．７グラムの５−へキセニル−１−メタンスルホナートを１１０ｍｌのベンゼンに溶解した。６グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を撹拌し、１２時間還流した。その間、反応で形成される水を共沸蒸留によって除いた。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水により３回洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。残渣を１５０ｍｌの熱ヘキサンに溶解し、４℃で一晩保った。その期間中に、副生成物の沈殿が生じた。ろ過し、溶媒を減圧下でろ液から除くことにより、１３グラムの−１−トリチル−２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを褐色のオイルとして得た。
２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成：１３グラムの−１−トリチル−２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを１００ｍｌのメタノールに溶解した。４ｍｌの濃塩酸（３７％）を加え、溶液を４時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷（１００グラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、１００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を、１００ｍｌの水、１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液、再び１００ｍｌの水により順次洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、１４．５グラムの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラム（１５０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。３．１７グラムの２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールが、ジクロロメタン、それに続く、ジクロロメタンおよび酢酸エチルの混合物によって溶出された。収率が４６．８％であった。
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成。３グラムの２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを１００ｍｌのベンゼンに溶解した。３グラムのＫＯＨを加え、反応混合物を共沸蒸留によって２時間乾燥した。この混合物に、５．３５グラムの１６−ブロモヘキサデカン酸ｔｅｒｔ−ブチルを１００ｍｌのベンゼンに溶解した溶液を３時間かけて滴下により加えた。添加が完了した後、反応混合物をさらに１２時間還流した。溶媒の体積を徐々に減らして約２０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの水および１００ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールを加えた。反応混合物のｐＨを、濃ＨＣｌを加えることによっておよそ１に調節した。混合物を室温で２時間撹拌し、１００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。一緒にした有機相を、ｐＨが中性になるまで、１００ｍｌ量の水により数回洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、６グラムの褐色のオイルを得た。このオイルをヘキサン：酢酸エチルの１：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌに溶解した。この溶液をメタノール：１０％ＮａＯＨ水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより２回抽出した。塩基性溶液を、ＮａＨ２ＰＯ４を加えることによって４〜５のｐＨに酸性化した。１００ｍｌのジエチルエーテルおよび１００ｍｌの水を加え、その後、相を分離した。水相を１００ｍｌのジエチルエーテルにより２回抽出し、有機相と一緒にした。有機相を１００ｍｌの水および１００ｍｌのブラインにより洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、５．３グラムの１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを黄色のオイルとして得た。収率が９０％であった。
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールの合成。５．３グラムの１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（５’−へキセニル）−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを１３０ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールに溶解し、１．２グラムの重炭酸ナトリウムを４０ｍｌの水に溶解した溶液を加えた。その後、１ｍｌの水における５４ｍｇのＫＭｎＯ４を加えた。２０グラムのＮａＩＯ４を１１５ｍｌの水に溶解し、その後、この溶液を１０分かけて反応混合物に加えた。２１６ｍｇのＫＭｎＯ４を４ｍｌの水に溶解した溶液のさらなる量を、反応液のピンク色を維持するために必要に応じて加えた。撹拌を室温で６時間続け、その後、反応混合物を４℃で一晩保った。重亜硫酸ナトリウムを、反応混合物の色が明黄色になるまで加えた。混合物を３０分間撹拌し、２５ｍｌの１０％硫酸溶液を滴下により加え、混合物を１００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。一緒にした有機相を１００ｍｌの水により、次いで、２５グラムの重亜硫酸ナトリウムを１００ｍｌの水に含有する溶液の１００ｍｌにより２回、次いで１００ｍｌの水により２回、順次洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、５．３グラムの粗１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを黄色のワックスとして得た。
（Ｓ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成。５．０グラムの１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−３−ベンジル−ｓｎ−グリセロールを５０ｍｌのメタノールに溶解し、１０ｍｌの８５％ギ酸を加えた。５グラムのパラジウム黒を加え、反応混合物を窒素下で６０℃に２４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトでろ過した。セライトをメタノールにより洗浄し、次いで水により洗浄した。洗浄液をろ液と一緒にし、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。残渣（５グラム）を１０ｍｌの１０％水酸化ナトリウム水溶液および４０ｍｌのメタノールの混合物に溶解し、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をヘキサン：トルエンの１：１（ｖ／ｖ）混合物の５０ｍｌにより洗浄した。反応混合物のｐＨをリン酸二水素ナトリウムの添加によって５に調節し、その後、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を５０ｍｌのブラインにより洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。粗生成物（４グラム）を９：１（ｖ／ｖ）のヘキサン：アセトンの混合物から再結晶し、これにより、３グラムの（Ｓ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを無色の固体として得た。収率が７２％であった。
（Ｓ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成。３グラムの（Ｓ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを５０ｍｌのメタノールに溶解した。１ｍｌの濃塩酸（３７％）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で約１０ｍｌに濃縮し、５０ｍｌの水を加え、その後、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。一緒にした有機相を、５０ｍｌの水、５０ｍｌの濃重炭酸ナトリウム溶液および５０ｍｌの水により順次洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、３グラムの（Ｓ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成。２．８グラムの（Ｓ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールおよび２．５ｍｌの乾燥トリエチルアミンを３０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、１．６５ｍｌのＰＯＣｌ３を２０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に２０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴でさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。１．１ｍｌのエタノールアミンおよび５ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、撹拌を行いながら、氷冷された反応混合物に６０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴でさらに１０分間続け、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を２４ｍｌの酢酸および１００ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、有機相を５０ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、４グラムの粗（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを褐色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１４）の合成。１．５グラムの（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンをメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の５０ｍｌに溶解し、得られた混合物を室温で５時間撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムおよびギ酸を加えることによって４に調節した。１００ｍｌの水および１００ｍｌのクロロホルムを加えた。抽出後、相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、５００ｍｇの粗（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ホスホエタノールアミンを得た。粗生成物をシリカゲル（１５グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。溶出を、１００ｍｌのクロロホルム、それに続く、１００ｍｌのクロロホルム：メタノールの混合物（体積比で９：１および８：２）、次いで２００ｍｌのクロロホルム：メタノール：水の混合物（体積比で７０：２６：４および６０：３５：５）により行った。所望される生成物を含有する分画物からの溶媒を減圧下で除き、残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧によって除いて、８８ｍｇの純粋な（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２１４）を黄色のワックスとして得た。
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２６Ｈ５２ＮＯ１０Ｐ）についての計算質量が５６９．６６５５であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５６８を有する分子イオンを示した。
加えて、ｍ／ｚ＝５７０を有する分子カチオンが、正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）によって観測された（この分子イオンは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する）。
したがって、ＭＳスペクトルは１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの化学構造と一致している。
（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成。１．２グラムの（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを６０ｍｌのメタノールおよび２０ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解した。２グラムの炭酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液を加え、溶液を加熱し、３５℃〜４０℃の範囲における温度で保った。１．２５ｍｌの硫酸ジメチルを１０ｍｌのメタノールに溶解した溶液を滴下により加えた。添加が完了した後、反応混合物を４０℃でさらに９０分間撹拌し、その後、室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。１００ｍｌの水を加え、１００ｍｌのクロロホルムによる抽出を３回行った。一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、９００ｍｇの（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを褐色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１３）の合成。１．８８グラムの（Ｒ）−１−（１５’−メチルカルボキシ）ペンタデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の５０ｍｌに溶解し、得られた混合物を室温で５時間撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムおよびギ酸を加えることによって４に調節した。１００ｍｌの水および１００ｍｌのクロロホルムを加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、８６０ｍｇの粗（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ホスホコリンを得た。粗生成物をシリカゲル（２０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。溶出を、１００ｍｌのクロロホルム、それに続く、１００ｍｌのクロロホルム：メタノールの混合物（体積比で９：１および８：２）、次いで２００ｍｌのクロロホルム：メタノール：水の混合物（体積比で７０：２６：４および６０：３５：５）により行った。所望される生成物を含有する分画物からの溶媒を減圧下で除き、残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、１０５ｍｇの純粋な（Ｒ）−１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１３）を黄色のワックスとして得た。
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。スペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ２９Ｈ５８ＮＯ１０Ｐ）についての計算質量が６１１．７４５３であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝６１０を有する分子イオンを示した。
加えて、正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）は、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６１２を有する分子イオンを示し、これには、カチオン化されたイオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６３４を有する分子カチオンが付随した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−（１５’−カルボキシ）ペンタデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
ＣＩ−２１３およびＣＩ−２１４の毒性：
ＣＩ−２１３およびＣＩ−２１４の毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図２５Ａおよび図２５Ｂに示されるように、ＣＩ−２１３は、著しい毒性を、試験された用量の範囲（すなわち、最大１５０μｇ／ｍｌ（２４５．２μＭ））において明確に示さなかった。細胞数における統計学的に有意な減少が１００μｇ／ｍｌ（１６３．５μＭ）の用量で１回のみの実験で検出された。
同様に、図２６Ａおよび図２６Ｂに示されるように、ＣＩ−２１４は、著しい毒性を、試験された用量の範囲（すなわち、最大１５０μｇ／ｍｌ（２６３．３μＭ））において明確に示さなかった。細胞数における統計学的に有意な減少が１００μｇ／ｍｌ（１７５．５μＭ）の用量で１回のみの実験で検出された。
これらの結果は、ＣＩ−２１３およびＣＩ−２１４の両方のＬＤ５０が１５０μｇ／ｍｌよりも高いことを示している。
実施例１０
１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１７）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロールの合成：４０グラムの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、８０グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび１００グラムの臭化ヘキサデシルを３５０ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、７時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約５０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、３００ｍｌの氷冷された水を加え、混合物を１５０ｍｌのジクロロメタンにより４回抽出した。一緒にした有機相を水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をメタノール：水：濃塩酸の９０：１０：５（ｖ／ｖ）混合物の５００ｍｌに溶解し、生じた溶液を２時間還流した。室温に冷却した後、２００ｍｌの水を加えた。生成物を２００ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、２００ｍｌの水、２００ｍｌの炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び２００ｍｌの水により順次洗浄した。溶媒を減圧下で除き、生成物を４℃で４５０ｍｌの石油エーテルから結晶化させ、これにより、６９．９３グラムの純粋な（Ｓ）−１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロールを得た。収率が７３％であった。
１−ヘキサデシル−３−トリチル−グリセロールの合成：１８．４７グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロールおよび１９グラムのトリフェニルクロロメタンを２５０ｍｌの乾燥ＴＨＦおよび５８ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に溶解した。１７ｍｌのトリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷（２０グラム）およびトリエチルアミン（５ｍｌ）に注ぎ、分液漏斗に移し、ジエチルエーテルにより抽出した。有機相を２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの希硫酸（１．５％）により２回、次いで２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの重炭酸ナトリウム飽和水溶液により、次いで再び２００ｍｌの水により順次洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、４１．７９グラムの粗生成物を残渣として得た。この残渣を３００ｍｌの酢酸エチルに溶解し、−２０℃で一晩冷却した。混合物を−１０℃で遠心分離し（３５００回転／分）、母液を捨てた。得られた固体は融解し、これをヘキサンに溶解し、一晩冷蔵した（５±３℃）。沈殿物をろ過することにより、１８．９７グラムの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを灰白色の固体として得た。
３−へキセニル−１−メタンスルホナートの合成：１００ｍｌの乾燥ジクロロメタンにおける２０ｍｌのｃｉｓ−３−ヘキセン−１−オールおよび４０ｍｌの乾燥トリエチルアミンの混合物を氷浴で冷却した。２０ｍｌのメタンスルホニルクロリドを５０ｍｌのジクロロメタンに溶解した溶液を７５分かけて滴下により加え、その後、混合物を４℃で２時間保った。氷（５０グラム）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、１００ｍｌのクロロホルムにより２回抽出した。有機相を、５０ｍｌの水、５０ｍｌの１０％硫酸溶液、５０ｍｌの水、５０ｍｌの１０％重炭酸ナトリウム水溶液により洗浄し、その後、５０ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で除いた。得られた残渣（３４．９０グラム）をシリカゲル（８５．３７グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１８．８３グラムの３−へキセニル−１−メタンスルホナートをクロロホルムおよびヘキサンの１：１（ｖ／ｖ）混合物による溶出によって得た。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−グリセロールの合成。１０．６０グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを５０ｍｌのベンゼンおよび５０ｍｌの石油エーテルの混合物に溶解した。１６．６５グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を窒素下で加熱還流した。１０ｍｌの３−へキセニル−１−メタンスルホナートを５０ｍｌのベンゼンおよび２００ｍｌの石油エーテルに溶解した溶液を、反応で形成される水を共沸蒸留によって除きながら１０時間以上かけて、還流している反応混合物に滴下により加えた。添加が完了した後、撹拌を２時間続けた。反応混合物を室温に冷却し、２００ｍｌの水を加えた。混合物を２００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出し、一緒にした有機相を２００ｍｌの水により３回洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１１．８８グラムの粗（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３−へキセニル）−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを得た。この１−ヘキサデシル−２−（３−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールを１００ｍｌのメタノールに溶解し、４ｍｌの濃ＨＣｌを加え、生じた溶液を４時間還流した。１００ｍｌの水を加え、混合物を１００ｍｌのジエチルエーテルにより４回抽出した。一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をヘキサンに溶解し、４℃で一晩貯蔵した。沈殿物をろ過し、溶媒を減圧下で除くことにより、１０．０８グラムの粗生成物を得た。この生成物をシリカゲル（９５．９１グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。３．７１グラムの生成物、すなわち、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールが、ヘキサンおよびクロロホルムの１：１（ｖ／ｖ）混合物、それに続く、クロロホルム、次いで、２％のアセトンを含むクロロホルムにより溶出された。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：２．０８グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロール（これはデシケーターにおいてＰ２Ｏ５で乾燥された）および１．２ｍｌのトリエチルアミンを６０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、０．８４ｍｌのＰＯＣｌ３および０．７ｍｌのトリエチルアミンを４０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に５５分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、０．５５ｍｌのエタノールアミンおよび２．０ｍｌのトリエチルアミンを１５ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を２５分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で３０分間続け、その後、室温で一晩続けた。さらに０．１８ｎｌのエタノールアミンを加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を４８ｍｌの酢酸および２０ｍｌの水の混合物に溶解し、７７℃に１時間加熱し、室温に冷却した。溶液をクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより３回抽出し、希重炭酸ナトリウム溶液および１００ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、２．５７グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：６．８グラムの炭酸カリウムを、２．５４グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを１００ｍｌのメタノールおよび１００ｍｌのジクロロメタンに溶解した溶液に加えた。その後、３ｍｌの硫酸ジメチルを滴下により加え、反応混合物を室温で７時間撹拌した。さらに１ｍｌの硫酸ジメチルを加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。２６．４グラムのリン酸二水素ナトリウムを反応混合物に加え、その後、１００ｍｌの水を加え、その後、混合物をクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより３回抽出した。一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、３．４４グラムの粗（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１７）の合成：３．４グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（３’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを２００ｍｌの水に溶解した溶液を３５℃に加熱し、４．３３グラムの重炭酸ナトリウムを加えた。その後、１３．５グラムの過ヨウ素酸ナトリウムを９０ｍｌの水に溶解した溶液を滴下漏斗に入れ、滴下により加えた。１８０ｍｇの過マンガン酸カリウムを１０ｍｌの水に溶解した溶液を第２の滴下漏斗に入れ、反応混合物のピンク色を維持するために必要に応じて滴下により加えた。合計で約４ｍｌの過マンガン酸塩溶液を加えた。反応混合物を３５℃〜４０℃で５時間撹拌し、その後、室温で一晩撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウム、次いでリン酸（８０％）を加えることによっておよそ３に調節した。反応混合物を１００ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、５０ｍｌの重亜硫酸ナトリウム溶液により２回洗浄し、その後、５０ｍｌの水により洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、２．７８グラムの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲル（３０．８９グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１．９８グラムの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンが、ヘキサンと、２０％〜５０％のクロロホルムとの混合物、それに続く、クロロホルム、次いで、クロロホルムと、１０％〜８０％のメタノールとの混合物により溶出された。
１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノールとともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ２７Ｈ５６ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５５４であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５５３を有する分子イオンを示した。
加えて、正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）によって行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５５５を有する分子イオンを示し、これには、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５７７を有する分子イオンが付随した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（２−カルボキシ）エチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２１７の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図２７に示されるように、２０μｇ／ｍｌ（３６μＭ）のＣＩ−２１７による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こし、これに対して、１０μｇ／ｍｌ（１８μＭ）のＣＩ−２１７による処理は影響がほとんどなかった。これらの結果は、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）および１０μｇ／ｍｌ（１７μＭ）の陽性コントロールＣＩ−２０１によるそれぞれの処理の結果と非常に類似していた。
実施例１１
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１９）および１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２２０）
（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｒ１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
（Ｓ）−１−エイコサニル−ｓｎ−グリセロールの合成：８．６ｍｌ（７６．０８ｍｍｏｌ）の（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、１５グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび２７．５グラム（７６．０８ｍｍｏｌ）の１−ブロモエイコサンを１５０ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、６時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約７０ｍｌにした。その後、反応混合物を室温に冷却し、１５０ｍｌの水を加えた。その後、反応混合物を１５０ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出し、一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を９０：１０：５（ｖ／ｖ）のメタノール：水：濃塩酸の混合物の１０５ｍｌに溶解し、生じた溶液を、溶液が透明になるまで還流した。その後、溶液を室温に冷却し、１００ｍｌの水を加えた。生成物を１５０ｍｌのクロロホルムにより抽出し、１５０ｍｌの水、１５０ｍｌの炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び１５０ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶媒を減圧下で除き、生成物を２００ｍｌのヘキサンから結晶化させ、これにより、２１．０グラムの純粋な１−エイコサニル−ｓｎ−グリセロールを得た。これを減圧下のデシケーターにおいて酸化リンにより乾燥した。収率が８１．５％であった。
（Ｒ）−１−エイコサニル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールの合成。２０グラムの１−エイコサニル−ｓｎ−グリセロールおよび１８グラムのトリフェニルクロロメタンを４００ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および１００ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に加えた。１５ｍｌの乾燥トリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。その後、反応混合物を室温に冷却し、氷（５００グラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、２００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を１５０ｍｌの水により、次いで１５０ｍｌの希Ｈ２ＳＯ４（１．５％）により２回、次いで１５０ｍｌの水により、次いで１５０ｍｌの濃重炭酸ナトリウム水溶液により、次いで再び１５０ｍｌの水により順次洗浄した。その後、溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣、すなわち、褐色のオイルを３００ｍｌの酢酸エチルに溶解し−２０℃で一晩冷却した。混合物を−１０℃で遠心分離し（３５００回転／分）、母液を捨てた。得られた固体をヘキサンに溶解し、一晩冷蔵した（５±３℃）。沈殿物をろ過することにより、２６．０グラムの純粋な（Ｒ）−１−エイコサニル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを灰白色の固体として得た。収率が７９％であった。
（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールの合成：２６グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールおよび１０グラムの５−へキセニル−１−メタンスルホナートを１５０ｍｌのベンゼンに溶解した。１２グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を撹拌し、６時間還流した。その間、反応で形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約７５ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、２００ｍｌの水を加えた。混合物を１５０ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出し、一緒にした有機相を１５０ｍｌの水により３回洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣、すなわち、２８グラムの褐色のオイルをシリカゲルカラム（２００グラム）で精製した。２８グラムの生成物が明黄色のオイルとしてクロロホルムにより溶出された。収率が８７．５％であった。
（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：７０グラムのＮａＩＯ４を２５０ｍｌの水に溶解した。この溶液に、６グラムのＮａＨＣＯ３および１．２グラムのＫＭｎＯ４を加え、懸濁物を４０℃に加熱した。２５グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを２５０ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールに溶解した溶液を９０分かけて滴下により加え、混合物をさらに６時間加熱した。さらなる量のＫＭｎＯ４溶液を、ピンク色を維持するために必要に応じて加えた。反応混合物を室温に冷却し、セライトでろ過し、その後、セライトを５０ｍｌのｔｅｒｔ−ブタノールにより洗浄した。１００ｍｌの１０％硫酸溶液を加え、溶液を分液漏斗に移し、２００ｍｌのヘキサンにより３回抽出した。有機相を、２０グラムのＮａ２Ｓ２Ｏ５を１００ｍｌの溶解した溶液により洗浄し、次いで１００ｍｌの水により洗浄した。有機相を、約４００ｍｌの溶媒を減圧下で除くことによって濃縮した。残留する溶液に対して、１５ｍｌの水および２ｍｌの濃ＨＣｌを加え、得られた混合物を６時間還流した。その後、混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除くことによって再び濃縮した。残留物のｐＨを、１００ｍｌの水および１０ｍｌの３０％ＮａＯＨ溶液を加えることによって１２に調節した。沈殿物をろ過し、２０ｍｌの水により４回洗浄した。ろ液をヘキサン：酢酸エチルの１：１（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌにより抽出した。水相を、１０ｍｌの濃ＨＣｌを加えることによって１のｐＨに酸性化し、その後、１００ｍｌのヘキサンにより３回抽出した。無水ＮａＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、その後、粗生成物を１：９（ｖ／ｖ）のアセトン：ヘキサンの混合物から５±３℃で一晩再結晶することにより、９．０グラムの純粋な（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを得た。収率が５３．１％であった。
（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：８．９グラムの（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを５０ｍｌのメタノールに溶解した。１ｍｌの濃ＨＣｌ（３２％）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除き、５０ｍｌの水を得られた残渣に加えた。混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。一緒にした有機相を、５０ｍｌの水、５０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液、再び５０ｍｌの水により洗浄した。その後、溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させ、８．９グラムの（Ｓ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを白色のワックスとして得た。
（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：８．９グラムの１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロール（ベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥されたもの）および８ｍｌのトリエチルアミンを７０ｍｌのＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、５．３６ｍｌのＰＯＣｌ３を４０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に３０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに３０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、その後、３．５ｍｌのエタノールアミンおよび１６ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、撹拌を行いながら３０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で３０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（１４グラムの黄色のオイル）を７２ｍｌの酢酸および３０ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。得られた混合物を１５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、１５０ｍｌの水により２回洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、１３グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを黄色のオイルとして得た。
（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２２０）の合成：４グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを１００ｍｌのメタノールおよび１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物のｐＨを、ギ酸を加えることによっておよそ４に調節した。その後、１５０ｍｌの水および１５０ｍｌのクロロホルムを加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をシリカゲル（７０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルムおよびヘキサンの混合物、それに続く、クロロホルムおよびメタノールの混合物、最後に、クロロホルム、メタノールおよび水の混合物を使用して、８３５ｍｇの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＣＩ−２２０）をカラムから溶出した。収率が２１％であった。
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ３０Ｈ６２ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５９５．４２であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化されたイオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５９４を有する分子イオンを示した。
正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９６を有する分子イオンを示し、これには、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６１８を有する分子イオンが付随した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの化学構造と一致している。
（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：９グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを４０ｍｌのイソプロパノールおよび１８ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解し、混合物を３５℃〜４０℃に加熱した。１０．３グラムの炭酸カリウムを２０ｍｌの水に溶解した溶液を、反応混合物を３５℃〜４０℃で保ちながら滴下により加えた。その後、７．２ｍｌの硫酸ジメチルを１０ｍｌのイソプロパノールに溶解した溶液（１０ｍｌ）を４０℃で滴下により加えた。反応混合物を４０℃で２時間保ち、その後、室温で一晩保った。１５０ｍｌの水を加え、混合物を１５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を１５０ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いて、８グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをワックスとして得た。
（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＣＩ−２１９）の合成：８グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンをメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物の１００ｍｌに溶解し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。その後、反応混合物のｐＨを、リン酸二水素ナトリウム、次いでギ酸を加えることによっておよそ に調節した。その後、１００ｍｌの水および１５０ｍｌのクロロホルムを加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、その後、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（７．５グラム）をシリカゲル（１５０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルム、それに続く、クロロホルムおよびメタノールの混合物、最後に、クロロホルム、メタノールおよび水の混合物を使用して、生成物を溶出した。溶媒を、生成物を含有する分画物から減圧下で除くことにより、４グラムの（Ｒ）−１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを白色の固体として得た。収率が５１．１％であった。
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３３Ｈ６８ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が６３７．４７であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝６３７を有する分子イオンを示した。
加えて、正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６３８を有する分子イオンを示し、これには、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６６０を有する分子イオンが付随した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−エイコサニル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＣＩ−２１９およびＣＩ−２２０の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図２８に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２１９による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こし、これに対して、１０μｇ／ｍｌのＣＩ−２１９による処理は、影響があるにしても、非常に小さかった。２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２１９の影響は、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１の影響と類似していた。
同様に、図２９に示されるように、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２２０による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こし、これに対して、１０μｇ／ｍｌのＣＩ−２２０による処理は、影響があるにしても、非常に小さかった。２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２２０の影響は、２０μｇ／ｍｌのＣＩ−２０１の影響と類似していた。
実施例１２
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファート（ＣＩ−２０１−ＰＡ）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファートを、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールから本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファートが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールが用いられる。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールおよび（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールの合成が実施例１に記載される。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファートの合成：（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロール（１．４４グラム）（これは、実施例１に記載される手順に従って調製された）およびトリエチルアミン（１．５ｍｌ）をＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解した溶液を、撹拌を行いながら、ＰＯＣｌ３（１ｍｌ）をＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解した氷冷溶液に２０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに３０分間続け、室温でさらに１時間続けた。溶媒を減圧下で蒸発させた。得られた残渣を、飽和した重炭酸ナトリウムの氷冷された溶液（１００ｍｌ）に溶解し、反応混合物を氷浴で４５分間撹拌した。溶液のｐＨをＨＣｌ（３２％）の添加によって４〜５の範囲に調節した。混合物をクロロホルムにより抽出し（５０ｍｌ、３回）、有機相を水（５０ｍｌ）により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。混合物をクロロホルムに溶解し、シリカゲル（３０グラム）で精製した。クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、１０％〜５０％のメタノールとの混合物を使用して、４７０ｍｇの純粋な１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファートを溶出した。
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファート（ＣＩ−２０１−ＰＡ）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファートの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファートの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファートの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファートの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファート（Ｃ２４Ｈ４９Ｏ８Ｐ）についての計算質量が４９６．３１６５であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化されたイオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝４９５を有する分子イオンを示した。したがって、ＭＳスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスファート（ＣＩ−２０１−ＰＡ）の化学構造と一致している。
ＣＩ−２０１−ＰＡの毒性：
ＣＩ−２０１−ＰＡの毒性を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように評価した。
図３０Ａおよび図３０Ｂに示されるように、毒性が２０μｇ／ｍｌ以上の用量でＣＩ−２０１−ＰＡについて検出された。ＬＤ５０がおよそ５０μｇ／ｍｌである。１０μｇ／ｍｌの濃度では、毒性が２回の実験の一方でのみ認められた。
実施例１３
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）および１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを、（Ｒ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールｐ−トルエンスルホナートを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。３−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−１−ホスホコリンおよび３−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−１−ホスホエタノールアミンが、（Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールｐ−トルエンスルホナートを出発物質として使用して、同じ手順を使用して合成される。
１−Ｓ−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロールの合成：４８ｍｌの１−ヘキサデカンチオールを１５０ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、水を共沸蒸留によって除きながら還流した。溶媒の体積を徐々に減らして約１２５ｍｌにした。エタノールにおけるナトリウムエチラート溶液の５８ｍｌを加え、混合物を窒素下で３０分間撹拌した。１００ｍｌの乾燥ベンゼンにおける３０グラムの（Ｒ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールｐ−トルエンスルホナートを加え、混合物を３時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を氷に注ぎ、１５０ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を１５０ｍｌの水により２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を９：１：０．５（ｖ／ｖ）のメタノール：水：濃ＨＣｌの混合物の１００ｍｌに溶解し、生じた溶液を２時間還流し、その後、室温に冷却した。反応混合物を氷に注ぎ、２００ｍｌのクロロホルムにより３回抽出し、その後、２００ｍｌの水、２００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液、再び２００ｍｌの水により洗浄した。溶媒を減圧下で除き、これにより、７０グラムのオレンジ色の固体を得た。この残渣を４００ｍｌのヘキサンから２回再結晶して、３０グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロール（３０ｇ）を白色の固体として得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールの合成：２８グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−グリセロールおよび３１グラムのクロロトリフェニルメタンを３７０ｍｌの乾燥ＴＨＦおよび１００ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に入れた。２５ｍｌの乾燥トリエチルアミンを加え、反応混合物を１７時間還流した。その後、反応混合物を室温に冷却し、氷（１キログラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、２００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。有機相を２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの希硫酸（１．５％）により２回、次いで２００ｍｌの水により、次いで２００ｍｌの濃重炭酸ナトリウム溶液により、次いで２００ｍｌの水により洗浄した。その後、溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、６０グラムの褐色のオイルを得た。このオイルを１５０ｍｌの酢酸エチルに溶解し、得られた溶液を−２０℃で一晩保った。その後、混合物を（−１０℃で）遠心分離し、母液を捨てた。得られた固体を４℃でヘキサンから再結晶した。ろ過後、３６グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを白色の固体として得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−ｔ−ブチル−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：１０グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを１５０ｍｌのベンゼンおよび５０ｍｌの石油エーテルの混合物に溶解し、その後、２０．４８グラムの粉末化されたＫＯＨを加えた。反応混合物を撹拌し、還流した。１０ｍｌの吉草酸ｔ−ブチルを２００ｍｌの石油エーテルに溶解した溶液を、形成される水を共沸蒸留によって除きながら約１０時間かけて、還流された溶液に滴下により加えた。添加が完了した後、反応混合物をさらに１時間還流して、溶媒の体積を減らした。その後、反応混合物を室温に冷却し、１００ｍｌの氷冷された水および２０ｍｌのギ酸の混合物を加えた。その後、反応混合物を１００ｍｌのクロロホルムにより２回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、１５．６５グラムの明褐色のオイルを得た。得られたオイルを１６０ｍｌのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）および２０ｍｌのメタノールの混合物に溶解した。３ｍｌの濃ＨＣｌを加え、生じた溶液を４時間還流し、その後、室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を１００ｍｌの炭酸ナトリウム飽和水溶液により洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いて、１４．１０グラムの明褐色のオイルを得た。このオイルをシリカゲルカラム（９１グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。ヘキサン、それに続く、ヘキサンおよびクロロホルムの混合物、次いで、クロロホルムおよびアセトンの混合物を使用して、生成物をカラムから溶出した。溶媒を減圧下で除いて、６．８４グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−ｔ−ブチル−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：６．８４グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−ｔ−ブチル−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを８０ｍｌのエタノールに溶解した。３．７グラムのＫＯＨを５ｍｌの水に溶解した溶液を加え、混合物を撹拌し、６時間還流した。混合物を室温に冷却した後、１６ｍｌの水および１００ｍｌの８：２（ｖ／ｖ）のヘキサン：酢酸エチルの混合物を加えた。相を分離し、５０ｍｌの水および５ｍｌのギ酸を有機相に加えた。クロロホルムにより抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、３．８９グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを明褐色のオイルとして得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：３．８９グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを１００ｍｌのメタノールに溶解し、１ｍｌの濃塩酸を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、１００ｍｌのクロロホルムにより２回抽出した。有機相を５０ｍｌの水により２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、その後、溶媒を減圧下で除いて、３．７５グラムの残渣を得た。この残渣をシリカゲルカラム（４９グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルム、それに続く、クロロホルムおよびアセトンの混合物を使用して、生成物をカラムから溶出した。溶媒を減圧下で除いて、２．９４グラムの純粋な１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：２．８３グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールおよび１．７ｍｌのトリエチルアミンを２０ｍｌのベンゼンおよび１２０ｍｌのＴＨＦの混合物に溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、１．１４ｍｌのＰＯＣｌ３および０．９８ｍｌのトリエチルアミンを２０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に６０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、１．０２ｍｌのエタノールアミンおよび２．８ｍｌのトリエチルアミンを５０ｍｌのＴＨＦに溶解した溶液を、氷冷された反応混合物に４０分かけて滴下により加えた。撹拌を０℃で１０分間続け、その後、室温で一晩続けた。その後、反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。残渣（４．２３グラム）を４８ｍｌの酢酸および２０ｍｌの水の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。その後、溶液は５０ｍｌの２：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：メタノールの混合物による３回の抽出を受けた。有機溶媒を減圧下で除いて、４．０５グラムの粗１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：０．９７グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを５０ｍｌのメタノールに溶解した。７ｍｌの１０％水酸化ナトリウム溶液を加え、得られた溶液を室温で８時間撹拌した。２ｍｌのギ酸を加え、その後、混合物を５０ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。一緒にした有機溶媒を減圧下で除いて、０．７０グラムのワックス状残渣を得た。この残渣をシリカゲル（３２グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルム、それに続く、クロロホルムおよびメタノールの混合物を使用して、生成物をカラムから溶出した。溶媒を減圧下で除いて、０．６２５グラムの純粋な１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）を得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを１３Ｃ−ＮＭＲ分光法によって測定した。
結果は１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）の構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）の構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）の質量分析法による特徴づけ：
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ２６Ｈ５４ＮＯ７ＰＳ）についての計算質量が５５５．７５であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化されたイオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５５４を有する分子イオンを示した。
正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５５６を有する分子イオン、および、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５７８を有するイオンを示した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１−Ｓ−ＣＩ−２０２）の化学構造と一致している。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：３．４８グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを３５ｍｌのメタノールおよび１００ｍｌのジクロロメタンの混合物に溶解した。１０グラムの炭酸カリウムを２０ｍｌの水に溶解した溶液を加えた。その後、３．５ｍｌの硫酸ジメチルを加え、反応液を室温で一晩撹拌した。反応液のｐＨを１ｍｌのギ酸の添加によって４に調節した。混合物を７５ｍｌの２：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：メタノールの混合物により３回抽出し、その後、溶媒を除くことにより、３．７２グラムの粗１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。
（Ｒ）−１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：３．７２グラムの１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを１００ｍｌのメタノールに溶解した。１０ｍｌの１０％水酸化ナトリウム溶液を加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。１．２ｍｌのギ酸を加え、混合物を１００ｍｌの２：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：メタノールの混合物により３回抽出した。一緒にした有機溶媒を減圧下で除いて、２．９２グラムの残渣を得た。この残渣の２．４６グラムをシリカゲル（５４グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。クロロホルムおよびヘキサンの混合物、それに続く、クロロホルム、次いで、クロロホルムおよびメタノールの混合物を使用して、生成物をカラムから溶出した。溶媒を減圧下で除いて、１．２１グラムの純粋な１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）を得た。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを１３Ｃ−ＮＭＲ分光法によって測定した。
結果は１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）の構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）の構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）の質量分析法による特徴づけ：
１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ２９Ｈ６０ＮＯ７ＰＳ）についての計算質量が５９７であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、脱プロトン化されたイオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝５９６を有する分子イオンを示した。
正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９８を有する分子イオン、および、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６２０を有するイオンを示した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−Ｓ−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（１−Ｓ−ＣＩ−２０１）の化学構造と一致している。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対する１−Ｓ−ＣＩ−２０１および１−Ｓ−ＣＩ−２０２の影響を本明細書中上記に記載されるように求めた。
図３１に示されるように、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）の１−Ｓ−ＣＩ−２０１による処理は、２０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）の陽性コントロールＣＩ−２０１が引き起こしたように、ホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こした。しかしながら、１０μｇ／ｍｌ（１７μＭ）の１−Ｓ−ＣＩ−２０１による処理は、影響があるにしても、非常に小さく、これに対して、１０μｇ／ｍｌ（３４μＭ）のＣＩ−２０１はホスホチロシンレベルにおける増大を引き起こした。
同様に、図３２に示されるように、２０μｇ／ｍｌ（３６μＭ）の１−Ｓ−ＣＩ−２０２による処理はホスホチロシンレベルにおける低下を引き起こし、これに対して、１０μｇ／ｍｌ（１８μＭ）の１−Ｓ−ＣＩ−２０２による処理はホスホチロシンレベルにおける増大を引き起こした。これらの結果は、ＣＩ−２０１およびＣＩ−２０２のそれぞれの１０μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌについてそれぞれ得られる結果と非常に類似していた。
実施例１４
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉ−ＯＨ）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンが、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して、同じ手順を使用して合成される。
１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロールの合成：１９．４ｍｌの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、４９グラムの粉末化されたＫＯＨおよび４．８グラムの臭化ヘキサデシルを５００ｍｌのトルエン（５００ｍｌ）において撹拌し、６時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約１００ｍｌにし、反応混合物を室温に冷却した。冷却された反応混合物を５００ｍｌのジクロロメタンに溶解し、２００ｍｌの水により２回洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を５００ｍｌのメタノール：水：濃Ｈ２ＳＯ４の９０：１０：５（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、生じた溶液を３０分間還流し、室温に冷却し、５００ｍｌのジクロロメタンにより抽出した。抽出液を、中性になるまで、１００ｍｌの水により２回、次いで１００ｍｌの５％炭酸ナトリウム水溶液により、次いで再び１００ｍｌの水により洗浄した。溶媒を減圧下で除き、粗生成物を４℃でヘキサンから再結晶し、これにより、３５．３グラムの純粋な１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロールを得た。収率が７６％であった。
１−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールの合成：３５．３グラムの１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロール、３７．３グラムのトリフェニルクロロメタンおよび２２．４４グラムの乾燥トリエチルアミンを４７０ｍｌの乾燥テトラヒドロフランおよび１２０ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に溶解した溶液を、窒素雰囲気下、１５時間還流した。室温に冷却した後、反応混合物をろ過した。ろ液を氷（５００グラム）に注ぎ、その後、２００ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を５００ｍｌの水により、次いで５００ｍｌの０．１５Ｎ ＨＣｌにより、次いで５００ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液により、次いで再び水により順次洗浄した。抽出液をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた黄色の残渣を５００ｍｌの温ヘキサンに溶解し、得られた透明な溶液を一晩冷蔵した（５±３℃）。この期間中に、沈殿が生じた。沈殿物をろ過した後、ろ液からの溶媒を減圧下で除き、これにより、５８．３グラムの１−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールを得た。収率が９５％であった。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールの合成：３６．３グラムの１−ヘキサデシル−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールおよび１１．５グラムの５−へキセニル−メタンスルホナート（これは、乾燥ピリジンにおいて５−ヘキセン−１−オールおよびメタンスルホニルクロリドから調製された）を５００ｍｌのトルエンに溶解した。２０グラムの粉末化されたＫＯＨを加え、反応混合物を撹拌し、８時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約１００ｍｌにし、反応混合物を室温に冷却した。冷却された反応混合物を５００ｍｌのジクロロメタンに溶解し、２００ｍｌの水により２回洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。生じた１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチルグリセロールを５００ｍｌのメタノール：水：濃ＨＣｌ（３２％）の９０：１０：５（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、得られた溶液を３時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、５００ｍｌの水を加え、その後、混合物を２５０ｍｌのジクロロメタンにより３回抽出した。一緒にした有機相を１００ｍｌの水により２回洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を２５０ｍｌのヘキサンに溶解し、得られた溶液を−２０℃で４８時間貯蔵し、これにより、トリフェニルカルビノールのほとんどを沈殿させた。ろ過し、溶媒をろ液から除いた後、残留する生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製した。１１．６５グラムの純粋な（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールが１：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：石油エーテルにより溶出された。収率が４５％であった。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの合成：１１．６５グラムの１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールおよび３．２３グラムのトリエチルアミンを６５０ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、５．３４グラムのオキシ塩化リンを１３０ｍｌのＴＨＦに溶解した氷冷溶液に滴下により加えた。添加を、反応液における温度が１５℃を超えないような速度で行った。撹拌を冷却とともにさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。その後、反応混合物を氷浴で冷却し、２．１０ｍｌのエタノールアミンおよび９．７３ｍｌのトリエチルアミンをＴＨＦに溶解した溶液を、撹拌を行いながら３０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷浴で２０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣（１５．９３グラム）を２４０ｍｌの酢酸および１００ｍｌの水の混合物に溶解した。生じた溶液を７０℃に１時間加熱し、室温に冷却し、２５０ｍｌのクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により２回抽出した。有機相からの溶媒を減圧下で除き、これにより、１２．５０グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−３−ホスホエタノールアミンを６５０ｍｌのイソプロパノールおよび２２０ｍｌのジクロロメタンに溶解した。６６．５グラムのＫ２ＣＯ３を１３０ｍｌの水に溶解した溶液を加え、反応混合物を４０℃に加熱した。１３．３ｍｌの硫酸ジメチルを１３０ｍｌのイソプロパノールに溶解した溶液を、反応液における温度が３５℃〜４０℃を超えないような速度で（４５分かけて）滴下により加えた。添加が完了した後、撹拌を４０℃で９０分間続けた。その後、反応混合物を室温に冷却し、クロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物の５００ｍｌにより３回抽出し、有機相からの溶媒を減圧下で除き、これにより、１２．５０グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ−ヘキシル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：８．５７グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを８０ｍｌのギ酸に溶解した。１８．７ｍｌの３０％過酸化水素を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。２５０ｍｌの水を加え、溶液を分液漏斗に移し、１００ｍｌのクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により５回抽出した。有機相からの溶媒を減圧下で除き、得られた残渣を１５０ｍｌのメタノールに溶解した。５５ｍｌの水酸化ナトリウム水溶液（１０％）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。１５０ｍｌの水における３ｍｌの濃ＨＣｌ（３２％）の冷混合物を加え、得られた溶液を分液漏斗に移し、生成物を１００ｍｌのクロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により５回抽出した。有機相からの溶媒を減圧下で除き、得られた粗生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製した。４．５グラムの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ−ヘキシル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉ−ＯＨ）が、クロロホルムと、４％〜６０％のメタノールとの混合物により溶出された。収率が５０％であった。
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ−ヘキシル）−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３０Ｈ６４ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５９７．４３７０であった。
高速原子衝撃法（ＦＡＢ＋）を使用して得られた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９８．４００を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシ）ヘキサニル−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉ−ＯＨ）の化学構造と一致している。
ｄｉ−ＯＨの毒性：
ｄｉ−ＯＨの毒性を本明細書中上記で記載されるように評価した。
図３３Ａおよび図３３Ｂに示されるように、ｄｉ−ＯＨの毒性が２０μｇ／ｍｌ以上の用量で検出された。ｄｉ−ＯＨのＬＤ５０は２０μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌの間である。
アテローム性動脈硬化性病変アッセイ：
アテローム性動脈硬化性病変に対するｄｉ−ＯＨのインビボ効力を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように、オスのＬＤＬ−ＲＤマウスにおいて試験した。ｄｉ−ＯＨを１ｍｇ／マウスの用量（これは６０ｍｇ／ｋｇの用量に等しい）で投与した。
図３４に示されるように、１ｍｇ／マウスのｄｉ−ＯＨは、コントロール（ＰＢＳ）と比較したとき、アテローム性動脈硬化性病変の面積を２５％減少させた。
これらの結果は、ｄｉ−ＯＨがアテローム性動脈硬化に対して効果的であることを示している。
実施例１５
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン
（Ｒ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して、同じ手順を使用して合成される。
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−ｓｎ−グリセロールの合成：５．３２グラムの（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール、１２．２６グラムの粉末化された水酸化カリウムおよび１０グラムのｃｉｓ−９−ヘキサデセニル−メタンスルホナートを２５０ｍｌのベンゼンにおいて撹拌し、１０．５時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約５０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、５０ｍｌの水を加え、混合物を１００ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出した。一緒にした有機相を１００ｍｌの水により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。残渣（１２．０１グラム）を２００ｍｌのメタノール：水：濃塩酸の９０：１０：３（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、生じた溶液を室温で一晩撹拌し、その後、１時間還流した。室温に冷却した後、１００ｍｌの水を加えた。生成物を７５ｍｌのジエチルエーテルにより３回抽出し、１００ｍｌの水、１００ｍｌの重炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び１００ｍｌの水により順次洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、溶媒を減圧下で除き、これにより、９．１０４グラムの粗１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−ｓｎ−グリセロールを得た。粗生成物をシリカゲル（３０グラム）のカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。９．０７グラムの純粋な１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−グリセロールが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムおよび５％メタノールの混合物によって溶出された。収率が９１．８％であった。
（Ｓ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールの合成：９．０７グラムの１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−グリセロールを乾燥ＴＨＦ（１６０ｍｌ）および乾燥アセトニトリル（４０ｍｌ）の混合物に溶解した。１０．５２グラムのトリフェニルクロロメタンおよび１０ｍｌのトリエチルアミンを加え、反応混合物を１５時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷（１００グラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、１００ｍｌのクロロホルムにより３回抽出した。有機相を、１００ｍｌの水、１００ｍｌの希硫酸（１．０％）、１００ｍｌの水、１００ｍｌの重炭酸ナトリウム飽和水溶液、再び１００ｍｌの水により順次洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を熱ヘキサン（１００ｍｌ）に溶解し、生じた溶液を４℃で３６時間冷却した。沈殿した副生成物をろ過し、溶媒を減圧下で除くことにより、１４．５７グラムの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲル（２００グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。９．８１グラムの純粋な１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールがクロロホルムにより溶出された。収率が６１．１％であった。
（Ｓ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールの合成：８．８３グラムの１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−３−トリチル−ｓｎ−グリセロールをベンゼン（１７０ｍｌ）および石油エーテル（１００ｍｌ）の混合物に溶解した。粉末化されたＫＯＨ（２３．１グラム）を加え、反応混合物を加熱して穏やかに還流した。吉草酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０ｍｌ）を石油エーテル（４２０ｍｌ）に溶解した溶液を、形成される水を共沸蒸留によって除きながら２５時間かけて滴下により加えた。室温に冷却した後、反応混合物のｐＨを、ギ酸（１０ｍｌ）を加えることによっておよそ６に調節した。混合物をジエチルエーテルにより抽出し（１００ｍｌ、３回）、有機相を水（１００ｍｌ）により洗浄した。溶媒を減圧下で除くことにより、１７．７２グラムのオイル状の生成物を得た。この残渣をメタノール（５０ｍｌ）に溶解し、４ｍｌの濃ＨＣｌ（３２％）を加え、反応混合物を５．５時間還流した。室温に冷却した後、５０ｍｌの水を加え、混合物をジエチルエーテルにより抽出した（５０ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を水（５０ｍｌ）により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１４．２６グラムの粗生成物を得た。２．９３グラムの純粋な１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールがシリカゲル（１１０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製された。生成物が、クロロホルム：ヘキサンの混合物（体積比で１：１）、それに続く、クロロホルムと、３％に至るまでの酢酸エチルとの混合物により溶出された。所望される生成物を含有する分画物からの溶媒を減圧下で除いた。収率が３９．２％であった。
（Ｒ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：１．５９グラムの（Ｓ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロール（これはベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥された）および０．７ｍｌのトリエチルアミンをＴＨＦ（４５ｍｌ）に溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、ＰＯＣｌ３（０．５ｍｌ）およびトリエチルアミン（０．０５ｍｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した氷冷溶液に１８分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１０分間続け、室温でさらに４５分間続けた。反応混合物を氷浴で冷却し、エタノールアミン（０．３８ｍｌ）およびトリエチルアミン（３．２５ｍｌ）をＴＨＦ（５４ｍｌ）に溶解した溶液を、撹拌を行いながら６５分かけて滴下により加えた。撹拌を、冷却を行いながら１０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、ＴＨＦにより洗浄し（１０ｍｌ、２回）、溶媒を減圧下で除いた。残渣（２．１グラム）を酢酸（４８ｍｌ）および水（２０ｍｌ）の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。ジエチルエーテルによる抽出（５０ｍｌ、２回）、水による洗浄（５０ｍｌ、２回）、および、減圧下での溶媒の除去により、２．１５グラムの粗生成物を明褐色のオイルとして得た。このオイルをメタノール（３５ｍｌ）およびジクロロメタン（１００ｍｌ）の混合物に溶解した。炭酸カリウム（１０グラム）を水（２０ｍｌ）に溶解した溶液を加え、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。硫酸ジメチル（２．５ｍｌ）を加え、反応混合物を室温で６時間撹拌した。さらに１ｍｌの硫酸ジメチルを加え、反応混合物を室温で４８時間撹拌した。混合物をクロロホルムにより抽出し（５０ｍｌ、３回）、一緒にした有機相からの溶媒を減圧下で除いて、２．４８グラムのワックス状の生成物を得た。この残渣をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、水酸化リチウム（０．１９ｇ）を水（６ｍｌ）に溶解した溶液（ｐＨ≒１１）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物のｐＨを、ギ酸を加えることによって４〜５に調節し、その後、混合物をクロロホルムにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相からの溶媒を減圧下で除いた。薄層クロマトグラフィーによる分析は約６０％の転換率を示した。得られた残渣をエタノール（１００ｍｌ）に溶解し、水酸化リチウム（０．２グラム）を水（５ｍｌ）に溶解した溶液（ｐＨ≒１１）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物のｐＨを、ギ酸（０．２２ｍｌ）を加えることによって４〜５に調節し、その後、混合物を２：１（ｖ／ｖ）のクロロホルム：メタノールより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、２．１８グラムの粗生成物を得た。１．１４グラムの純粋な（Ｒ）−１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、１０％〜８０％のメタノールとの混合物により溶出された。
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造を完全に裏付けた。
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの質量分析法による特徴づけ：
１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ２９Ｈ５８ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５７９．３９００であった。
高速原子衝撃法（ＦＡＢ＋）を使用して得られた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５８０．３９９５を有する分子イオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−（ｃｉｓ−９−ヘキサデセニル）−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
実施例１６
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロール
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロールを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して実施例１で記載されるように合成した。（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用する（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの合成もまた、実施例１に記載される。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１３Ｃ−ＮＭＲ
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロール（Ｃ２４Ｈ４８Ｏ５）についての計算質量が４１６．６３５であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝４１７．０を有する分子イオンを示した。したがって、ＭＳスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールの化学構造と一致している。
実施例１７
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉＭｅＡｃ）および１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉＥｔＡｃ）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、本明細書中下記で記載されるように（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシヘキサニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンから調製した。同じ手順を使用して、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンが（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシヘキサニル）−グリセロ−３−ホスホコリンから調製される。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシヘキサニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンおよび（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５，６−ジヒドロキシヘキサニル）−グリセロ−３−ホスホコリンの合成が実施例１４に記載される。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−オキソ−ペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの合成：２グラムの過ヨウ素酸ナトリウムを、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，６’−ジヒドロキシヘキサニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２グラム）を水（２００ｍｌ）に溶解した氷冷溶液に加え、反応混合物を冷却とともに３０分間撹拌し、室温で一晩撹拌した。反応混合物を分液漏斗に移し、クロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により抽出し（１００ｍｌ、３回）、一緒にした有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いた。得られた粗生成物をシリカゲル（２１グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。１．２グラムの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−オキソ−ペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、４０％〜６０％のメタノールとの混合物により溶出された。収率が６３％であった。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉＥｔＡｃ）の合成：反応を窒素下で行った。（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−オキソ−ペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（５０ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍｌ）に溶解した。オルトギ酸トリエチル（０．０５３ｍｌ、０．０４７６グラム、０．３２ｍｍｏｌ）および３滴の濃硫酸（９５％〜９７％）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を、ジクロロメタン（７５ｍｌ）の助けをかりて分液漏斗に移した。溶液を、水（７５ｍｌ）、２．５％重炭酸ナトリウム水溶液（７５ｍｌ）および水（７５ｍｌ）により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒をろ過し、減圧下で除くことにより、５０ｍｇの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。収率が８８．４％であった。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ｄｉＭｅＡｃ）の合成：反応を窒素下で行った。（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−オキソ−ペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（５５ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解した。オルトギ酸トリメチル（０．０４３ｍｌ、０．０４１４グラム、０．３９ｍｍｏｌ）および３滴の濃硫酸（９５％〜９７％）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。ジクロロメタン（７５ｍｌ）を加え、反応混合物を分液漏斗に移した。溶液を、水（７５ｍｌ）、２．５％重炭酸ナトリウム水溶液（７５ｍｌ）、再び水（７５ｍｌ）により順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、３６．８ｍｇの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを得た。収率が６２％であった。
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤｉＥｔＡｃ）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤｉＥｔＡｃ）の質量分析法による特徴づけ：
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３３Ｈ７０ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が６３９．８８であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６４０を有する分子イオン（これには、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６６２を有するイオンが付随する）、および、脱エトキシル化された分子イオン［Ｍ−ＯＥｔ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９４を有するイオンを示した。したがって、質量分析法によるスペクトルは１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジエトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤｉＭｅＡｃ）のＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを３００ＭＨｚで測定した。
結果は１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤｉＭｅＡｃ）の構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−ヘキサデシル−２−（５’，５’−ジメトキシペンチル）−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
アテローム性動脈硬化性病変アッセイ：
アテローム性動脈硬化性病変に対するｄｉＭｅＡｃのインビボ効力を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように、ＡｐｏＥ ＫＯマウスにおいて試験した。ｄｉＭｅＡｃを１ｍｇ／マウスの用量（これは４０ｍｇ／ｋｇの用量に等しい）で投与した。
図３５に示されるように、１ｍｇ／マウスのｄｉＭｅＡｃは、コントロール（ＰＢＳ）と比較したとき、アテローム性動脈硬化性病変の面積を２３％減少させた。
これらの結果は、ｄｉＭｅＡｃがアテローム性動脈硬化に対して効果的であることを示している。
ｄｉＥｔＡｃの毒性：
ｄｉＥｔＡｃの毒性を本明細書中上記で記載されるように評価した。
図３６Ａおよび図３６Ｂに示されるように、ｄｉＥｔＡｃは２０μｇ／ｍｌ以上の用量で毒性を示した。ｄｉＥｔＡｃのＬＤ５０は２０μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌの間である。１０μｇ／ｍｌの濃度において、毒性が２回の実験の１回のみで認められた。
実施例１８
１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホセリン（ＶＢ−２２３）
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホセリンを、本明細書中下記で記載されるように（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールから調製した。同じ手順を使用して、（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−グリセロ−３−ホスホセリンが（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−グリセロールから調製される。
（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロールおよび（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−グリセロールの合成が実施例１４に記載される。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファートの合成：１．０グラムの（Ｓ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−グリセロール（これはベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥された）および乾燥ピリジン（１ｍｌ）をＴＨＦ（６０ｍｌ）に溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、ＰＯＣｌ３（０．３ｍｌ）をＴＨＦ（１２ｍｌ）に溶解した氷冷溶液に滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに３時間続けた。冷却された反応混合物に、重炭酸ナトリウム（２．４４グラム）を水（２４ｍｌ）に溶解した溶液を加え、混合物を氷浴でさらに３０分間撹拌した。反応混合物のｐＨを、１０％塩酸をゆっくり加えることによっておよそ１に調節した。ジエチルエーテルにより抽出し（１５０ｍｌ、３回）、一緒にした有機相を水により洗浄し（１５０ｍｌ、２回）、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除くことにより、１．４３グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファートを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−セリン−ベンズヒドリルエステルの合成：１．３０グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファートおよび０．９５グラムのＮ−Ｂｏｃ−セリン−ベンズヒドリルエステル（これはデシケーターにおいてＰ２Ｏ５により乾燥された）をピリジン（３０ｍｌ）に溶解した。２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（２．９９グラム）を加え、反応混合物を窒素下において室温で２０時間撹拌した。水（５０ｍｌ）を加え、混合物を分液漏斗に移した。抽出をヘキサン：酢酸エチルの８：２（ｖ／ｖ）混合物により行い（５０ｍｌ、３回）、一緒にした有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をヘキサン：酢酸エチルの８：２（ｖ／ｖ）混合物（５０ｍｌ）に溶解し、冷却された希酢酸（５％）により洗浄した。その後、溶媒を減圧下で除き、これにより、１．３３グラムの粗（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−セリン−ベンズヒドリルエステルを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボニル）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−セリン−ベンズヒドリルエステルの合成：過ヨウ素酸ナトリウム（３．０グラム）、過マンガン酸カリウム（０．０５グラム）、炭酸ナトリウム（０．１５グラム）および炭酸カリウム（０．０３グラム）を水（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液に、（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（５’−へキセニル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−セリン−ベンズヒドリルエステル（０．９０グラム）をｔｅｒｔ−ブタノール（１００ｍｌ）に溶解した溶液を室温で３０分かけて滴下により加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温で２時間撹拌した。さらなる量の過マンガン酸カリウム（０．０２グラム）を加え、反応混合物を９０分間撹拌した。リン酸二水素ナトリウム（１０グラム）を水（１００ｍｌ）に溶解した溶液を加え、反応混合物をクロロホルムにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相をブライン（１００ｍｌ）により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、１．０２グラムの粗（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボニル）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−セリン−ベンズヒドリルエステルを得た。
（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＶＢ−２２３）の合成：１．０２グラムの（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボニル）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−セリン−ベンズヒドリルエステルをジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液を氷浴で冷却し、ＨＣｌガスで３０分間飽和させた。反応混合物をさらに１時間撹拌した。その後、反応混合物をリン酸二水素ナトリウムの水溶液の添加によって中和し、その後、クロロホルム：メタノールの２：１（ｖ／ｖ）混合物により抽出した（１００ｍｌ、３回）。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除いた。得られた粗生成物（０．７２グラム）をシリカゲル（１２．６０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。０．６０グラムの純粋な（Ｒ）−１−ヘキサデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリンが、ヘキサン：クロロホルムの１：１（ｖ／ｖ）混合物、それに続く、クロロホルム、次いで、クロロホルムと、１０％メタノールとの混合物により溶出された。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＶＢ−２２３の影響を本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図３７に示されるように、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌ（８．３μＭ、１６．７μＭおよび３３．３μＭ）のＶＢ−２２３による処理、ならびに、もしかすると、１μｇ／ｍｌ（１．７μＭ）のＶＢ−２２３による処理もまた、チロシンリン酸化の誘導を生じさせる。
実施例１８
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＶＢ−２２１）および１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＶＢ−２２２）
（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを、（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを出発物質として使用して本明細書中下記で記載されるように合成した。（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンおよび（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンが、同じ手順を使用して合成され、しかし、この場合には、（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールが出発物質として用いられる。
メタンスルホン酸２−オクチル−ドデシルエステル：２−オクチル−１−ドデカノール（２０ｍｌ、５６．１４ｍｍｏｌ）および無水トリエチルアミン（１６ｍｌ、１１２．２８ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（６０ｍｌ）に溶解した。この溶液を０℃に冷却し、乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）におけるメタンスルホニルクロリド（５．２ｍｌ、６７．３６ｍｍｏｌ）を滴下により加えた。添加が完了した後、混合物を０℃で３時間撹拌し、その後、一晩冷蔵した（２℃〜８℃）。反応混合物を氷（５００グラム）に注ぎ、室温に加温し、エーテルにより抽出した（１５０ｍｌ、３回）。有機相を、水（１５０ｍｌ）、２％Ｈ２ＳＯ４（１５０ｍｌ）、水（１５０ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（１５０ｍｌ）、再び水（１５０ｍｌ）により順次洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、２２．８グラムのメタンスルホン酸２−オクチル−ドデシルエステルを黄色のオイルとして得た。
１−（２−オクチル）ドデシル−グリセロール：（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（８．３ｍｌ、６６．５９ｍｍｏｌ）、粉末化された水酸化カリウム（１２グラム）およびメタンスルホン酸２−オクチル−ドデシルエステル（２２．７７グラム、６０．５０ｍｍｏｌ）をベンゼン（２５０ｍｌ）において撹拌し、５時間還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約１５０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却し、室温で一晩撹拌した。２００ｍｌの水を加え、混合物をジエチルエーテルにより抽出した（２００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を水（２００ｍｌ）により洗浄し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を１０５ｍｌのメタノール：水：濃塩酸の９０：１０：５（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、生じた溶液を３０分間還流した。溶液を室温に冷却した後、水（１００ｍｌ）を加えた。生成物をクロロホルムにより抽出し（１００ｍｌ、３回）、水（１５０ｍｌ）、炭酸ナトリウム飽和水溶液（１００ｍｌ）、再び水（１００ｍｌ）により順次洗浄した。溶媒を減圧下で除き、粗生成物をシリカゲル（４００グラム）のカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。１７グラムの純粋な１−（２−オクチル）ドデシル−グリセロールが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムおよび１０％〜３０％の酢酸エチルの混合物によって、無色のオイルとして溶出された。収率が７５．５％であった。
（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−３−トリチル−グリセロール：１７グラムの１−（２−オクチル）ドデシル−グリセロール（これはベンゼンとの共沸蒸留によって乾燥された）を乾燥ＴＨＦ（４００ｍｌ）および乾燥アセトニトリル（１６０ｍｌ）の混合物に溶解した。トリフェニルクロロメタン（１５．８グラム）および乾燥トリエチルアミン（１４ｍｌ）を加え、反応混合物を１７時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、氷（１キログラム）に注ぎ、分液漏斗に移し、ジエチルエーテルにより抽出した（２００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を、水（２００ｍｌ）、希Ｈ２ＳＯ４（１．５％）（１００ｍｌ、２回）、水（２００ｍｌ）、濃重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）、再び水（２００ｍｌ）により順次洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、得られた粗生成物をシリカゲル（３５０グラム）のカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。２６グラムの純粋な（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−３−トリチル−グリセロールが、ヘキサン、それに続く、ヘキサンおよびクロロホルム（５０％〜１００％）の混合物によって、黄色のオイルとして溶出された。収率が９２．７％であった。
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロール：１−（２−オクチル）ドデシル−３−トリチル−グリセロール（２６グラム、４２．２８ｍｍｏｌ）および５−へキセニル−１−メタンスルホナート（９．４グラム、５０．７３ｍｍｏｌ）をベンゼン（１５０ｍｌ）に溶解した。粉末化されたＫＯＨ（１７グラム）を加え、反応混合物を５．５時間にわたって加熱還流した。その間、形成される水を共沸蒸留によって除いた。溶媒の体積を徐々に減らして約５０ｍｌにした。反応混合物を室温に冷却した後、２００ｍｌの水を加え、混合物をジエチルエーテルにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相をブラインにより洗浄し（１００ｍｌ、３回）、溶媒を減圧下で除き、これにより、２２．８グラムの粗生成物を得た。２１グラムの純粋な１−（２−オクチル）ドデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロールが、粗生成物をシリカゲル（３００グラム）でのクロマトグラフィーによって精製することによって得られた。生成物が、黄色のオイルとして、クロロホルムにより溶出された。収率が７１．２％であった。
（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロール：過ヨウ素酸ナトリウム（５８グラム）、過マンガン酸カリウム（９６０ｍｇ）および炭酸カリウム（７グラム）を水（２５０ｍｌ）に懸濁した。１−（２−オクチル）ドデシル−２−（５’−へキセニル）−３−トリチル−グリセロール（２１グラム）をｔｅｒｔ−ブタノール（２５０ｍｌ）に溶解した溶液を２．５時間かけて滴下により加えた。その後、反応混合物を一晩撹拌した（過マンガン酸塩溶液を、ピンク色を維持するために必要に応じて加えた）。混合物をセライトのパッドでろ過し、セライトのパッドをｔｅｒｔ−ブタノールによりさらに洗浄した。１０ｍｌの硫酸（１０％）を滴下により加え、その後、得られた溶液をヘキサンにより抽出した（２００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を、重亜硫酸ナトリウム（２０グラム）を水（１００ｍｌ）に溶解した溶液により２回洗浄し、次いで水（２００ｍｌ）により洗浄した。溶媒を減圧下で濃縮して、１５０ｍｌの体積にした。２０ｍｌの水および５ｍｌの濃ＨＣｌを加え、得られた混合物を６時間還流した。混合物を室温に冷却した後、溶媒を減圧下で除き、得られた残渣を３０％水酸化ナトリウム（１０ｍｌ）および水（１００ｍｌ）の混合物により処理し、反応混合物が１２のｐＨに達した。沈殿したトリフェニルメタノールをろ過し、水により洗浄した（１０ｍｌ、４回）。ろ液をヘキサン：酢酸エチルの１：１（ｖ／ｖ）混合物（１００ｍｌ）により抽出した。塩基性溶液を濃ＨＣｌ（１０ｍｌ）により酸性化して１のｐＨにし、ヘキサン（１００ｍｌ）により抽出した。有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、８．５グラムの（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロールを黄色のオイルとして得た。収率が６０％であった。
（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４’−カルボキシメチル）ブチル−グリセロール：（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロール（８．３９グラム）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解した。２ｍｌの濃ＨＣｌ（３２％）を加え、溶液を室温で一晩撹拌した。水（１００ｍｌ）を加え、混合物をクロロホルムにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を、水（１００ｍｌ）、濃重炭酸ナトリウム溶液（１００ｍｌ）および水（１００ｍｌ）により順次洗浄し、その後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除くことにより、８．４８グラムの（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロールを黄色のオイルとして得た。収率が９８％であった。
（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン：（Ｓ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−グリセロール（８．４８グラム）およびトリエチルアミン（７．３ｍｌ）を乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解した。この溶液を、撹拌を行いながら、ＰＯＣｌ３（４．８５ｍｌ）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解した氷冷溶液に６０分かけて滴下により加えた。撹拌を冷却とともにさらに１５分間続け、室温でさらに４５分間続けた。この反応混合物を氷で冷却し、エタノールアミン（３．２ｍｌ）およびトリエチルアミン（１５ｍｌ）を乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解した溶液を、撹拌を行いながら６０分かけて滴下により加えた。撹拌を氷において１０分間続け、その後、室温で一晩続けた。反応混合物をろ過し、ろ液からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣を酢酸（２４ｍｌ）および水（１０ｍｌ）の混合物に溶解し、７０℃に１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、クロロホルムにより抽出した（８０ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を水により洗浄し（５０ｍｌ、２回）、溶媒を減圧下で除いた。残渣（１１グラム）をシリカゲル（２２０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。４．２５グラムの純粋な（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、クロロホルム、それに続く、クロロホルムと、５％〜２０％のメタノールとの混合物、最後に、７０：２６：４のクロロホルム：メタノール：水の混合物により溶出された。収率が４０％であった。
（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＶＢ−２２２）：（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１．２グラム）を１００ｍｌのメタノール：１０％水酸化ナトリウム溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物に溶解した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応液のｐＨをリン酸二水素ナトリウムの添加によって５に調節した。水（１００ｍｌ）およびクロロホルム（１００ｍｌ）を加えた。相を分離し、有機相からの溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いた。粗生成物（１．２グラム）をシリカゲル（２３グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物が、８：２（ｖ／ｖ）のクロロホルム：メタノールの混合物、それに続く、７０：２６：４の体積比でのクロロホルム：メタノール：水の混合物、次いで、６０：３５：５の体積比でのクロロホルム：メタノール：水の混合物により溶出された。所望される生成物を含有する分画物からの溶媒を減圧下で除き、得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、５００ｍｇの純粋な（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンをワックスとして得た。収率が４２．６５％であった。
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの質量分析法による特徴づけ：
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（Ｃ３０Ｈ６２ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が５９５．４２であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して行われた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝５９６を有する分子イオンを示し、これには、カチオン化されたイオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６１８を有する分子イオンが付随した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンの化学構造と一致している。
（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン：（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（２．６２グラム）をイソプロパノール（１８ｍｌ）およびジクロロメタン（４０ｍｌ）の混合物に溶解した。炭酸カリウム（３グラム）を水（１０ｍｌ）に溶解した溶液を、反応混合物を３５℃〜４０℃の温度で保ちながら滴下により加えた。硫酸ジメチル（２．１ｍｌ）をイソプロパノール（１０ｍｌ）に溶解した溶液を４０℃で滴下により加えた。反応混合物を４０℃で２時間保ち、その後、室温に冷却し、室温で一晩保った。水（１００ｍｌ）を加え、混合物をクロロホルムにより抽出した（１００ｍｌ、３回）。一緒にした有機相を水（１００ｍｌ）により洗浄し、溶媒を減圧下で除き、これにより、２．７８グラムの（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを白色のワックスとして得た。
（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＶＢ−２２１）：（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−メチルカルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２．７８グラム）を１００ｍｌのメタノール：１０％水酸化ナトリウム水溶液の８：２（ｖ／ｖ）混合物に溶解し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応液のｐＨを、リン酸二水素ナトリウムを加えることによって５に調節した。水（１００ｍｌ）およびクロロホルム（１００ｍｌ）を加えた。相を分離し、溶媒を減圧下で除いた。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、溶媒を減圧下で除いた。残渣（２．７グラム）をシリカゲル（５０グラム）でのクロマトグラフィーによって精製した。非極性の不純物を８：２（ｖ／ｖ）のクロロホルム：メタノールにより溶出した。その後、生成物を、７０：２６：４の体積比でのクロロホルム：メタノール：水の混合物、それに続く、６０：３５：５の体積比でのクロロホルム：メタノール：水の混合物により溶出した。溶媒を減圧下で除いた後、得られた残渣をクロロホルムに溶解し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除き、これにより、８００ｍｇの純粋な（Ｒ）−１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを白色のワックスとして得た。収率が２９．４％であった。
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンのＮＭＲによる特徴づけ：
サンプルを数滴の重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）とともに重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）に溶解した。その後、スペクトルを６００ＭＨｚで測定した。サンプルを１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ−ＮＭＲ分光法の両方によって測定した。
結果は１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの構造要素についての予想されたシグナルを示し、したがって、その構造を完全に裏付けた。
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１Ｈピークの帰属は下記の通りであった：
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの構造に従う、観測された１３Ｃピークの帰属は下記の通りであった：
質量分析法による特徴づけ：
１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ３３Ｈ６８ＮＯ８Ｐ）についての計算質量が６３７．８７であった。
エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、脱プロトン化された分子イオン［Ｍ−Ｈ］−に対応する、ｍ／ｚ＝６３６を有する分子イオンを示した。
正のエレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ＋−ＭＳ）を使用して得られた質量スペクトルは、プロトン化された分子イオン［Ｍ＋Ｈ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６３８を有する分子イオンを示し、これには、カチオン化された分子イオン［Ｍ＋Ｎａ］＋に対応する、ｍ／ｚ＝６６０を有するイオンが付随した。
したがって、ＭＳスペクトルは１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリンの化学構造と一致している。
チロシンリン酸化：
初代マクロファージにおけるインビトロでのチロシンリン酸化に対するＶＢ−２２１およびＶＢ−２２２の影響を、本明細書中上記において材料および方法の節で記載されるように求めた。
図３８に示されるように、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌ（８μＭ、１６μＭおよび３２μＭ）のＶＢ−２２１による処理はチロシンリン酸化の誘導をもたらす。
同様に、図３９に示されるように、１０μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌ（１６．８μＭおよび３３．６μＭ）のＶＢ−２２２による処理はチロシンリン酸の誘導をもたらす。
本発明はその特定の実施形態によって説明してきたが、多くの別法、変更および変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更および変形すべてを包含するものである。
本明細書で挙げた刊行物、特許および特許出願はすべて、個々の刊行物、特許および特許出願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用または確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。節の見出しが使用されている程度まで、それらは必ずしも限定であると解釈されるべきではない。

Claims (25)

  1. 下記の式を有する化合物：
    またはその立体異性体、光学異性体、鏡像異性体、ラセミ混合物、または立体異性体混合物、またはその医薬的に許容される塩、ただし、上記式において、
    （ｉ）Ａ１、Ａ２およびＡ３はそれぞれが独立して、ＯおよびＳからなる群から選択される；
    （ｉｉ）Ｒ１は、（２−オクチル）ドデシルである；
    （ｉｉｉ）Ｒ２は、下記の基：
    であり、上記式において、ＸはＣ１〜２５のアルキルであり、Ｙは、
    −ＯＨ、−Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アセトキシおよび芳香族官能基からなる群から選択され、
    Ｚは、
    からなる群から選択され、ただし、これらの式において、Ｒ’はＣ１〜４アルキルである；および
    （ｉｖ）Ｒ３は、Ｈ、アシル、ホスファート、ホスホコリン、ホスホエタノールアミン、ホスホエタノールアミン−Ｎ−グルタル酸、ホスホセリンおよびホスホイノシトールからなる群から選択される。
  2. Ａ１はＳであり、Ａ２およびＡ３はそれぞれＯである、請求項１に記載の化合物、その立体異性体、光学異性体、鏡像異性体、ラセミ混合物、または立体異性体混合物。
  3. Ｒ２は、（４−メチルカルボキシ）ブチル、（３−カルボキシ）プロピル、（６−カルボキシ）ヘキサニル、５，６−ジヒドロキシヘキサニル，５，５−ジエトキシペンチルおよび５，５−ジメトキシペンチルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
  4. 請求項１に記載の化合物、またはその立体異性体、光学異性体、鏡像異性体、ラセミ混合物、または立体異性体混合物であって、化合物が下記の化合物からなる群から選択される、化合物：
    １−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＶＢ−２２１）；および
    １−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＶＢ−２２２）。
  5. 請求項４に記載の化合物、またはその立体異性体、光学異性体、鏡像異性体、ラセミ混合物、または立体異性体混合物であって、化合物が１−（２−オクチル）ドデシル−２−（４−カルボキシ）ブチル−グリセロ−３−ホスホコリン（ＶＢ−２２１）である、化合物。
  6. 以下のものからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物：
  7. 下記の式を有する、請求項６に記載の化合物：
  8. 炎症に関連する疾患または障害を処置または防止する方法における使用のための、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
  9. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させる方法における使用のための、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
  10. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置する方法における使用のための、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
  11. 請求項１〜７のいずれかに記載の化合物を有効成分として含み、かつ、医薬的に許容されるキャリアを含む医薬組成物。
  12. 炎症に関連する疾患または障害の処置または防止における使用のための、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させるための、請求項１１に記載の医薬組成物。
  14. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害の処置における使用のための、請求項１１に記載の医薬組成物。
  15. 炎症に関連する疾患または障害を処置または防止する方法に使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物であって、前記方法が、治療効果的な量の化合物をその必要性のある対象に投与することを含む、化合物。
  16. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを対象において低下させる方法に使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物であって、前記方法が、効果的な量の化合物を対象に投与することを含む、化合物。
  17. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置する方法に使用するための請求項１〜７のいずれかに記載の化合物であって、前記方法が、効果的な量の化合物をその必要性のある対象に投与することを含む、化合物。
  18. 炎症に関連する疾患または障害を処置または防止するための医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
  19. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを対象において低下させるための医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
  20. インターロイキン−１２およびインターロイキン−２３からなる群から選択されるサイトカインのレベルを低下させることが有益である疾患または障害を処置するための医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
  21. 前記炎症は、特発性の炎症性疾患または炎症性障害、慢性の炎症性疾患または炎症性障害、急性の炎症性疾患または炎症性障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、感染性疾患または感染性障害、炎症性の悪性疾患または悪性障害、炎症性の移植関連疾患または移植関連障害、炎症性の変性疾患または変性障害、過敏性に伴う疾患または障害、炎症性の心臓血管疾患または心臓血管障害、炎症性の脳血管疾患または脳血管障害、末梢血管疾患または末梢血管障害、炎症性の腺疾患または腺障害、炎症性の胃腸疾患または胃腸障害、炎症性の皮膚疾患または皮膚障害、炎症性の肝疾患または肝障害、炎症性の神経学的疾患または神経学的障害、炎症性の筋骨格疾患または筋骨格障害、炎症性の腎疾患または腎障害、炎症性の生殖疾患または生殖障害、炎症性の全身疾患または全身障害、炎症性の結合組織疾患または結合組織障害、炎症性腫瘍、壊死、炎症性のインプラント関連疾患またはインプラント関連障害、炎症性老化プロセス、免疫不全疾患または免疫不全障害、および、炎症性の肺疾患または肺障害からなる群から選択される疾患または障害に伴う、請求項８または１５に記載の化合物。
  22. 前記炎症は、特発性の炎症性疾患または炎症性障害、慢性の炎症性疾患または炎症性障害、急性の炎症性疾患または炎症性障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、感染性疾患または感染性障害、炎症性の悪性疾患または悪性障害、炎症性の移植関連疾患または移植関連障害、炎症性の変性疾患または変性障害、過敏性に伴う疾患または障害、炎症性の心臓血管疾患または心臓血管障害、炎症性の脳血管疾患または脳血管障害、末梢血管疾患または末梢血管障害、炎症性の腺疾患または腺障害、炎症性の胃腸疾患または胃腸障害、炎症性の皮膚疾患または皮膚障害、炎症性の肝疾患または肝障害、炎症性の神経学的疾患または神経学的障害、炎症性の筋骨格疾患または筋骨格障害、炎症性の腎疾患または腎障害、炎症性の生殖疾患または生殖障害、炎症性の全身疾患または全身障害、炎症性の結合組織疾患または結合組織障害、炎症性腫瘍、壊死、炎症性のインプラント関連疾患またはインプラント関連障害、炎症性老化プロセス、免疫不全疾患または免疫不全障害、および、炎症性の肺疾患または肺障害からなる群から選択される疾患または障害に伴う、請求項１２に記載の医薬組成物。
  23. 前記炎症は、特発性の炎症性疾患または炎症性障害、慢性の炎症性疾患または炎症性障害、急性の炎症性疾患または炎症性障害、自己免疫疾患または自己免疫障害、感染性疾患または感染性障害、炎症性の悪性疾患または悪性障害、炎症性の移植関連疾患または移植関連障害、炎症性の変性疾患または変性障害、過敏性に伴う疾患または障害、炎症性の心臓血管疾患または心臓血管障害、炎症性の脳血管疾患または脳血管障害、末梢血管疾患または末梢血管障害、炎症性の腺疾患または腺障害、炎症性の胃腸疾患または胃腸障害、炎症性の皮膚疾患または皮膚障害、炎症性の肝疾患または肝障害、炎症性の神経学的疾患または神経学的障害、炎症性の筋骨格疾患または筋骨格障害、炎症性の腎疾患または腎障害、炎症性の生殖疾患または生殖障害、炎症性の全身疾患または全身障害、炎症性の結合組織疾患または結合組織障害、炎症性腫瘍、壊死、炎症性のインプラント関連疾患またはインプラント関連障害、炎症性老化プロセス、免疫不全疾患または免疫不全障害、および、炎症性の肺疾患または肺障害からなる群から選択される疾患または障害に伴う、請求項１８に記載の使用。
  24. 対象がヒトである、請求項１５〜１７のいずれかに記載の化合物。
  25. 対象がヒトである、請求項１９に記載の使用。
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