JP5025253B2 - 基礎化粧品用配合剤及び基礎化粧品 - Google Patents

Description

本発明は基礎化粧品用配合剤並びに基礎化粧品に関し、更に詳しくは、細胞賦活効果及び血行促進効果を有する、ＤＮＡの酵素分解生成物又は加水分解生成物を有効成分として含有する基礎化粧品用配合剤、並びに該基礎化粧品用配合剤を含有する基礎化粧品に関す
るものである。

肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等は、加齢による女性ホルモンのバランスの影響、日光からの紫外線の刺激、体内の過酸化物濃度の高まりによる表皮への悪影響、皮脂の過剰分泌、表皮への血流量の低下、栄養不良、精神的なストレスなど種々の事柄が原因で起こると考えられている。
顔の肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等が人々の美容上の重大な関心事であることは、近年、女性向けに限らず、男性向け基礎化粧品の製品数の増加にも現れている。顔が他人への第一印象を与える大きな要素となることから、老若男女を問わず艶やかで張りのある肌（美肌）や白く透き通った肌（美白）になりたいと切に願う人は多く、それ故、肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等を改善する基礎化粧品に関する世間一般の関心がさらに高まっている。

従来の化粧品で「基礎化粧品」の範疇にある製品においては、グリセリン等の保湿剤や油成分を入れることにより、肌の保湿効果を高め、艶やかな肌とすることが多く試みられていた。最近では肌への美白効果を意図して、メラニン生成を抑制する働きを有するＬ−アスコルビン酸及びその誘導体や、ハイドロキノン誘導体を含有する化粧品が登場している。

ところで、近年、健康に対する世間一般の関心の高まりを反映して、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）又は核タンパク質を原料又は有効成分として用いた健康食品が提供されている。高分子量の核タンパク質を水可溶性及び易消化性とするために、低分子化することも提案されている（特許文献１）。
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）又は核タンパク質は老化防止効果を有することは知られているが、基礎化粧品に適用する試みは充分に成されていない。
特開２００４−１６１４３号公報

肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等肌のトラブルの原因は、顔面の皮膚の老化、血行不良、紫外線の影響、ストレスなど種々であるが、皮膚の細胞の新陳代謝が低下し、新しい細胞の再生機能が落ちることが直接的な原因である。
従来の基礎化粧品は、皮膚細胞の新陳代謝のメカニズムに働きかけて機能を発揮するものではなく、単に肌の表面上の効果を追求しているに過ぎなかった。このため、肌荒れ、しみ、そばかす、しわ、美白等に対して充分といえるまでの効果は得られていない。
また、前述したメラニン生成を抑制する働きを有するＬ−アスコルビン酸及びその誘導体においては、安定的でなく且つ紫外線炎症防止効果が不十分であり、ハイドロキノン誘導体は安全性に問題がある。したがって、上記化合物が有するメラニン生合成抑制効果やメラニン漂白作用を、化粧品の有効成分として直接的に求めることは困難である。
すなわち、細胞賦活及び血行促進により新しい細胞の再生を促し、肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等を防止する、皮膚美白効果の高い製品が望まれているが、従来の基礎化粧品におけるその効果はまだ充分でない。
それ故、細胞自体を賦活し、生き生きとした肌にする新たな基礎化粧品の開発が望まれていた。

本発明者らは、肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等の防止効果、皮膚美白効果を有する新たな基礎化粧品を得るべく鋭意研究した結果、ＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得られたデオキシオリゴヌクレオチドを含有する分解生成物に、優れた肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等の防止効果及び皮膚美白効果があることを見出し、本発明を完成させた
。

即ち、本発明の基礎化粧品用配合剤は、ＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分であって、鎖長が２乃至１２のデオキシオリゴヌクレオチドを２０乃至５０％含有するＤＮＡ分解生成物を有効成分として含有することを特徴とする、基礎化粧品用配合剤である。
前記ＤＮＡ分解生成物は、好ましくは、鎖長が２乃至１２のデオキシオリゴヌクレオチドを３１％含有するものであることが好ましい。

本発明の基礎化粧品用配合剤の好ましい態様において、前記ＤＮＡは鮭、鱒、鰊、鰹及び鱈などの魚類の白子から得ることが好ましい。

さらに本発明の基礎化粧品は、前記基礎化粧用配合剤を含有することを特徴とする。
該基礎化粧品は、ローション、乳液、クリーム、ジェル、ゼリー、エッセンス、リップクリーム、パック又はマスクからなる群より選択されることが好ましい。

本発明の基礎化粧品用配合剤は、ＤＮＡの酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分であって、鎖長が２乃至１２のデオキシオリゴヌクレオチドを２０乃至５０％含有するＤＮＡ分解生成物を有効成分として含有するものである。該デオキシオリゴヌクレオチドは分子量が比較的小さいので経皮的に吸収され易く、またそれらは経皮的に吸収されたとき細胞賦活作用及び血行促進作用を有する。したがって、顔面の表皮に適用した場合、優れた肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等を防止し、皮膚美白効果を奏する。

また本発明の基礎化粧品は、上記基礎化粧用配合剤を含んでなるので、顔面の表皮に適用した場合に該基礎化粧品配合剤が有する優れた肌荒れ、しみ、そばかす、しわ等を防止し、皮膚美白効果を奏する。

本発明の基礎化粧品用配合剤の有効成分である鎖長が２乃至１２のデオキシオリゴヌクレオチドはＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得ることができる。

ＤＮＡは、例えば、魚類の白子から抽出し、精製することにより得ることができる。前記魚類は、例えば、鮭、鱒、鰊、鰹及び鱈であり、とりわけ、鮭が好ましい。

以下、ＤＮＡについて更に詳しく説明する。
本発明の基礎化粧品用配合剤の製造原料であるＤＮＡは種々の態様のものでよく、例えば、二本鎖、一本鎖又は環状のＤＮＡであってよい。ＤＮＡの供給源は、動物、植物、微生物等の様々な生物である。水産加工上の廃棄物である魚類、特に鮭、鱒、鰊、鰹及び鱈の精巣（白子）は、とりわけＤＮＡを多く含むが、従来、資源として有効に利用されず、多くが廃棄されていた。それ故、廃棄物の資源化という観点から、これらの精巣由来のＤＮＡを利用することが望ましい。また、哺乳動物や鳥類、例えばブタ、ニワトリ等の胸腺から得られるＤＮＡを使用することができる。更に、合成ＤＮＡもまた使用することができる。

なお、魚類白子からＤＮＡを得るには、特開２００５−２４５３９４号公報に記載の抽出・精製方法を用いることができる。
具体的には、まず魚類白子を粗砕し、粗砕した魚類白子にＤＮＡが分解しない条件下で
タンパク質分解酵素（プロテアーゼ）処理を行い、酵素処理した溶液を濾過する。そして分画分子量が２，０００〜１，０００，０００である中空糸膜を用いて濾液に透析処理を行い、分解したタンパク質及びイオン類を除去すると共にＤＮＡを濃縮する。さらに、透析処理を行った溶液からＤＮＡ塩として沈殿させるかあるいは溶液を濃縮し、これら沈殿物あるいは濃縮物を回収する。
上記方法により得られたＤＮＡ塩を乾燥させた粉末状ＤＮＡ塩を、本発明の基礎化粧品用配合剤の製造原料として用いることができる。
魚類白子からＤＮＡを得るのは、この方法に限らず、公知の方法を用いても良い。

ＤＮＡを処理する酵素は、例えば、ヌクレアーゼであり、例えばアオカビ由来のヌクレアーゼが好ましい。

前記ヌクレアーゼは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の３’，５’−ホスホジエステル結合を加水分解し、オリゴ体重合の５’−デオキシヌクレオチドを生成する。該ヌクレアーゼの性質について特に制限はないが、ある程度の熱安定性を備えることが好ましい。このようなヌクレアーゼは、例えば天野エンザイム株式会社（旧天野製薬株式会社）、シグマ社等から市販品として入手可能である。

前記ヌクレアーゼを用いたＤＮＡの加水分解処理において重要なのは、反応を行う温度である。反応温度は６０〜７５℃の範囲内でなければならず、７０℃が最も好ましい。該温度範囲より低い温度で反応を行うと、ＤＮＡの低分子化が十分に進行せず、分解物が水溶性とならない。一方、該温度範囲より高い温度で行うと、低分子化が過度に進行し、優れた効果を失う惧れがある。

以上のようにＤＮＡをヌクレアーゼを用い６０〜７５℃で行う加水分解によって処理することにより、分子量が１０００乃至３０００である画分を２０乃至５０％含有し、そして分子量が１０００以下である画分を、通常、分子量１０００乃至３０００の画分の量よりも多い量、例えば３０乃至５０％含有する程度まで低分子化することができ、これにより、水可溶性及び経皮吸収性を兼ね備えたＤＮＡ分解生成物を製造できる。
以上の処理により得られたＤＮＡ分解生成物には、低分子化されたデオキシオリゴヌクレオチド及びデオキシモノヌクレオチドが主要な部分もしくは大部分として含まれ、そして低分子化が不十分なデオキシヌクレオチド等がごく少量の部分として含有されている。
従って、これら分解生成物に含まれるデオキシヌクレオチド類（デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド）は、そのほぼ全て乃至その大部分が、本来らせん鎖を取らないモノ体、完全な一本鎖のオリゴ体、並びに、二重らせん構造を一部にしか有しないオリゴ体で構成される。言い換えると、上述の低分子化が十分に進行しなかったような場合を想定したとしても、上記の分解生成物に含まれるデオキシヌクレオチド類の二重らせん率が２０％を超えることはない。

本発明の基礎化粧品用配合剤の有効成分として、ＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得られた分解生成物を、そのまま（精製することなく）使用することができる。前記分解生成物中に、例えば、アミノ酸などが含まれていてもよい。
また、本発明の基礎化粧品用配合剤の有効成分として、ＤＮＡ分解生成物から慣用の分離手段及び／又は精製手段を用いて分離した以下の化合物：デオキシオリゴヌクレオチド
、デオキシモノヌクレオチドを使用することができる。
このとき、ＤＮＡ分解生成物に含まれるか、又は、該分解生成物から慣用の分離手段及び／又は精製手段を用いて分離・精製されたデオキシオリゴヌクレオチドの鎖長は２乃至１２のものであることが好ましい。

前記分解生成物及び前記化合物は、それぞれ単独で使用してもよいし、又は、これらの化合物あるいは少なくとも２種類を混合して使用してもよい。前記分解生成物や前記化合物を混合して使用する場合は、その混合比率は適宜選択し得る。
このとき、前記分解生成物及び前記化合物として、鎖長が２乃至１２の前記デオキシオリゴヌクレオチドを含み、並びに鎖長が２乃至１２の前記デオキシオリゴヌクレオチドの含有量の合計が、前記分解生成物および前記化合物の全合計量に対して２０％以上であることが特に好ましい。
また、前記分解生成物や前記化合物を更に、基礎化粧品用配合剤の慣用の添加成分と所定比率で組み合わせて使用してもよい。

本発明の基礎化粧品用配合剤における有効成分（前記分解生成物及び／又は前記化合物）の濃度は適宜選択し得る。

また、本発明の基礎化粧品は、前記基礎化粧品用配合剤を含有してなる。
本発明の基礎化粧品が採り得る剤型は、皮膚に適用可能な剤型であれば適宜選択可能である。好ましくは、基礎化粧品はローション、乳液、クリーム、ジェル、ゼリー、エッセンス、リップクリーム、パック又はマスクであることが望ましい。

本発明の基礎化粧品には、前記基礎化粧用配合剤に加えて既存の基礎化粧品に配合され得る公知の成分を配合することができる。例えば香料や保湿剤等を、単独又は組み合わせて配合することができる。

また、本発明の基礎化粧品には、薬剤成分として、ビタミンＥ又はその誘導体、例えばビタミンＥアセテート；アセチルコリン誘導体等の血管拡張剤；セファランチン等の皮膚機能亢進剤；グリチルレチン酸又はその誘導体；エストラジオール、エストロン等の女性ホルモン剤；セリン、メチオニン、アルギニン等のアミノ酸類；ビタミンＡ、ビタミンＢ₁、ビタミンＢ₆、ビオチン、パントテン酸又はその誘導体等のビタミン類を単独又は組み合わせて配合することができる。

更に、本発明の基礎化粧品には、必要に応じて、通常、化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる添加剤、例えば、油分、防腐剤、界面活性剤、分散安定剤、増粘剤、湿潤剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、精製水及びアルコール等を単独又は組み合わせて配合することができる。

以下に示す実施例及び比較例において、本発明を具体的且つ更に詳細に説明する。下記実施例は本発明の説明のためのみのものであり、これらの実施例により本発明の技術的範囲が限定されるものではない。
以下の実施例及び比較例における配合量は、全体量に対する質量％である。又、実施例で用いた試作品１（ＤＮＡを酵素分解処理して得られた分解生成物をそれぞれ含有するもの）の量は固形分量として示す。

１．（デオキシ）オリゴヌクレオチドの製造
鮭白子由来のＤＮＡに対して、食品添加物として認可されているヌクレアーゼ［例えば、酵素製剤ヌクレアーゼ「アマノ」（天野エンザイム（旧天野製薬）社製）］を用いて限
定分解を行った。産生したデオキシモノヌクレオチドとデオキシオリゴヌクレオチドを電気泳動装置で分析して最適条件を決定した。
具体的には、６５℃前後に調整した温水に原料として粉末状ＤＮＡ−Ｎａ塩を投入し、撹拌後、更に７０℃に加温し、原料に対してヌクレアーゼを０．０５乃至０．２５％の範囲で適量を加えて３時間反応させた。次に、８５℃で１０分間加熱してヌクレアーゼを失活させた後、遠心分離し、上澄み液にスプレードライ法を適用して、デオキシオリゴヌクレオチドを含む乾燥粉末（分解生成物）を得た。

２．（デオキシ）オリゴヌクレオチドの分析
６５℃前後に調整した温水に原料として鮭白子由来の粉末状ＤＮＡ−Ｎａ塩を投入し、撹拌後、更に７０℃に加温し、原料に対して酵素製剤ヌクレアーゼ「アマノ」（天野エンザイム（旧天野製薬）社製）を０．０５％加えて３時間反応させて分解生成物を得た。次に、８５℃で１０分間加熱してヌクレアーゼを失活させた後、分解生成物をＨＰＬＣで分析した。
図１に、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による、分解生成物のデオキシオリゴヌクレオチドの分析例を示す。図１において、５’−デオキシモノヌクレオチド及び３’−デオキシモノヌクレオチドはピーク２０までに溶出しており、以降の比較的大きなピーク、すなわちピーク２６以後をデオキシオリゴヌクレオチドの吸収とみなすことができる。また、ピーク４１以後は分子量が３０００を超える分解生成物の吸収とみなすことができる。このため、ピーク２６乃至４１のピーク強度から算出した結果、本例では分解生成物全体に対して、３１％のデオキシオリゴヌクレオチド（分子量１０００〜３０００）の分画が含まれていることがわかった。

３．（デオキシ）オリゴヌクレオチドを用いた基礎化粧品の製造
前記製造方法にて得たデオキシオリゴヌクレオチドを含む乾燥粉末（分解生成物）を試作品１とし、この試作品１を用いて、本発明の基礎化粧品を以下のように製造した。また対照として、試作品１を含有しない基礎化粧品を製造した。これらの組成を下記表１にまとめて示す。
［実施例１］
９５％エタノールに精製水を加え、これにポリオキシエチレン（２５モル）硬化ヒマシ油エーテル、グリセリン、プロピレングリコールを加えて攪拌後、試作品１を加えて攪拌溶解し、透明液状の実施例１の基礎化粧品を得た。
［比較例１］
試作品１の代わりに同量のグリセリンを用い、実施例１と同様の製法で比較例１の基礎化粧品を得た。

４．血流量測定試験
実施例１の基礎化粧品と比較例１の基礎化粧品をそれぞれ、ヒト上腕に１０μＬ塗布し、塗布１時間後に、レーザードップラー計で血流量を測定した。試験結果の判定は、下記判定基準により行った。
＋＋：比較例に比べて血流量が極めて増加した（著効）
＋ ：比較例に比べて血流量が増加した（有効）
± ：比較例に比べて血流量がやや増加した（やや有効）
− ：比較例に比べて血流量が同等以下であった（無効）
結果を下記表１にまとめて示す。

５．肌荒れの改善試験
下肢に肌荒れを有する中高年女性１０名を被試験対象として、実施例１の基礎化粧品と比較例１の基礎化粧品をそれぞれ、左右の下肢の異なる場所に、入浴後に約１ｇ／１回／１日、塗布した。
試験実施前と１ヵ月後の塗布した箇所の皮膚の状態により、以下の判定基準を用いて、皮膚の剥離状態と水分状態の観点から試験結果の判定を行った。
５−１．皮膚剥離の判定基準及び有効性の判断
試験実施前後の皮膚の剥離の状態を以下の判定基準で判断した。
０：剥離なし １：剥離軽度 ２：剥離中程度 ３：剥離重度
上記判定により、試験実施後の判定が実施前より１段階改善されたものを「やや有効」とし、２段階以上改善されたものを「有効」とし、同レベル又は悪化したものは「無効」とした。
５−２．水分状態の判定基準
１ヶ月後の皮膚の水分状態（保湿性）を保湿計によって測定し、下記基準により判定を行った。
＜水分状態の判定基準＞
＋＋：塗布した部分の保湿性が試験実施前より５％以上増加した（著効）
＋ ：塗布した部分の保湿性が試験実施前より２〜５％増加した（有効）
± ：塗布した部分の保湿性が試験実施前より０〜２％増加した（やや有効）
− ：塗布した部分の保湿性が試験実施前と同等以下であった（無効）
結果を下記表１にまとめて示す。

６．試用による評価試験
中高年女性を対象に、一重盲検にて、実施例１の基礎化粧品並びに比較例１の基礎化粧品の評価試験を行った。なお各化粧品の被試験者は１０名ずつとした。評価は被試験者に対するアンケートで、「滑らかさ」、「肌理の細かさ」、「美白の状態」、「皮膚の弾力性」、「しみそばかすの改善」の５項目を、使用前と１ヶ月使用後に回答を得た。
得られた回答より、試験結果の判定は、下記判定基準により行った。
＋＋：使用前に比べて改善した（有効）
＋ ：使用前に比べてやや改善した（やや有効）
± ：使用前に比べて同等以下だった（無効）
結果を下記表１にまとめて示す。

表１に示した結果より、以下のことが判った。
（１）実施例１の化粧品の血流量測定試験の評価は＋＋［比較例に比べて血流量が極めて増加した（著効）］であり、実施例１の化粧品の有効成分がヒトの皮膚から浸透して血流量を著しく増加させることは明らかである。
（２）実施例１の化粧品の肌荒れ改善試験では、試作品１を含んでいる化粧品は有効性が顕著であった。なお、対照として塗布しなかった左下肢には肌荒れの改善が殆ど認められず、試作品１を含んだ化粧品の有効性が明らかとなった。
（３）表１に示した試験結果において、試作品１（ＤＮＡ分解生成物）を含んだ化粧品による化粧品の試用による評価試験は、特に「滑らかさ」「肌理の細かさ」「皮膚の弾力性」において顕著な改善効果が認められるとする評価結果であった。
（４）一方、実施例１における試用による評価試験では、「美白効果」「しみそばかすの改善」は一部の被試験者で認められたが、皮膚の新陳代謝等を考慮すると、もう少し長期の使用が求められるとする結果となった。

なお、実施例１では、有効成分として試作品１（ＤＮＡ塩分解生成物）を使用したが、試作品１の代わりに、それから分離・精製したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチドを単独で又は組み合わせて使用しても、試作品１を使用した場合と同様に効果が認められた。

すなわち本実施例から、デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチドを含有する基礎化粧品用配合剤並びに該基礎化粧用配合剤を含有する基礎化粧品は、血流量の増加、肌荒れ改善効果、並びに肌の滑らかさ、肌理の細かさ、皮膚の弾力性を改善する効果を有することが認められた。

以下に、上記試作品１を用いた基礎化粧品の処方例を、実施例２乃至実施例４として示す。なお、以降に記載した「試作品（類）」とは、試作品１の意味を表すものとする。
いずれの実施例においても血流量の増加、肌荒れ改善効果、並びに肌の滑らかさ、肌理の細かさ、皮膚の弾力性を改善する効果を有することが認められた。

実施例２：リップクリーム

＜製造方法＞
上記配合成分のうち香料以外の成分を混合、溶解した後、香料を加えて撹拌混合した後、型に流し込み冷却してリップクリームを調製した。

実施例３：コールドクリーム

＜製造方法＞
精製水に試作品（類）、石鹸粉末を加え加熱溶解して７０℃に保った（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保った（油相）。水相に油相を撹拌しながら徐々に加え、終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よく撹拌しながら３０℃まで冷却し、
コールドクリームを調製した。

実施例４：クレイパック

＜製造方法＞
１，３−ブチレングリコール、グリセリン、セスキステアリン酸ＰＥＧ−２０セチルグルコース、キサンタンガム、防腐剤、精製水を混合・撹拌して全体を均一とした。
これをホモミキサーで撹拌しながら、試作品（類）及びカオリンを加え、全体を均一とし、さらにエタノールを加えて撹拌・混合し、クレイパックを調製した。

図１は、ＤＮＡのヌクレアーゼ処理品（分解生成物）の、ＨＰＬＣによるデオキシオリゴヌクレオチドの分析例を示す図である。

Claims (5)

1. ＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分であって、鎖長が２乃至１２のデオキシオリゴヌクレオチドを２０乃至５０％含有するＤＮＡ分解生成物を有効成分として含有する基礎化粧品用配合剤。
2. 前記ＤＮＡ分解生成物は、鎖長が２乃至１２のデオキシオリゴヌクレオチドを３１％含有するものであることを特徴とする、請求項１に記載の基礎化粧品用配合剤。
3. 前記ＤＮＡ分解生成物は鮭、鱒、鰊、鰹及び鱈からなる群から選択される魚類の白子から得ることを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の基礎化粧品用配合剤。
4. 請求項１乃至３のいずれか１項に記載の基礎化粧用配合剤を含有することを特徴とする基礎化粧品。
5. 前記基礎化粧品が、ローション、乳液、クリーム、ジェル、ゼリー、エッセンス、リップクリーム、パック又はマスクからなる群より選択されることを特徴とする請求項４に記載の基礎化粧品。
   

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