JP4385084B2

JP4385084B2 - Blood component separation method and blood component separation device

Info

Publication number: JP4385084B2
Application number: JP2002216566A
Authority: JP
Inventors: 武史湯浅; 礼子安永
Original assignee: Kawasumi Laboratories Inc
Current assignee: SB Kawasumi Laboratories Inc
Priority date: 2002-03-26
Filing date: 2002-07-25
Publication date: 2009-12-16
Anticipated expiration: 2022-07-25
Also published as: JP2004003920A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、従来の手法を用いずに全血から血漿または血清を得ることが可能な方法及び該装置に関する。また全血から血漿または血清を得る方法として、血球成分の沈降を亢進する溶液を用いることを特徴とする分離方法及びそれを容易に行うよう工夫された装置に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
現在血液検査は健康診断や疾患の治療経過を診断する手段として汎用され、検査用の分析装置の精度や稼動能力は日々向上しているものの、分析する血液検体を調整する作業はあまり改善されておらず煩雑で時間がかかる。第一に検体の採取となる採血は医者、看護婦や臨床検査技師といった有資格者のみが行える医療行為であり、検体採取の為に医療施設に出向かなければならない。次に、血液中の赤血球、白血球及び血小板が検査項目に影響することがあるため、生化学的検査の対象のほとんどが血漿や血清である。まず全血量で10mL近い血液が必要で、血清は血餅が生じるまでに時間を要し、更に遠心操作が必要になる。また抗凝固処理をした血漿は遠心操作のみであるが、遠心後血球成分が混在しないように注意深く血漿を分離する必要があるなど、血漿も血清もその調整過程は煩雑で時間を要する作業のため検査する側にとって大きな負担となる。
また作業上不可欠な遠心装置のない比較的小さな病院では検査を他の検査機関に依頼するため検査結果確認に時間を要するといった問題点もある。
このような方法では検査を受ける側行う側の両方の負担が大きく、更に検査を行う側には検体処理中の感染という危険性もある。
近年、分析装置の精度向上にともなって、微量の血漿又は血清で従来の血液検査を行うことが可能になり、更に全血から血漿又は血清を簡便に分離する手法が発明されてきた。
例えば多層の不織布フィルターを用いて全血から血漿を分離する手法が開発された（特開平11-295302）が、微量の血漿量を得るために3mL以上の全血が必要で検査を受ける側の負担は変わらず、またこのフィルターは特定の分析装置仕様であるため他の分析装置には使用できないため汎用には至っていない。
また指先をランセット等の針で傷つけて得られる微量の血液をペーパークロマトの原理で血球と血漿または血清に分離する方法（特開2001-188066）が発明されているが、分離後展開した血漿または血清の成分を界面活性剤等で抽出する必要があり、実際の測定に至るまでの工程が煩雑である上、抽出等で影響を受ける成分の測定は困難でやはり汎用には至っていない。
その他に中空糸を用いて全血から血漿を分離する方法が発明されているが、測定可能な量の血漿を得るためにはある程度の血液量が必要で、この方法でも受ける側に負担が生じる。
本発明者らは上述の課題を解決すべく鋭利検討を重ねた結果、少量の血液より血漿また血清成分を分離可能な方法を発明した。血球成分の内赤血球は電解質溶液と混合したとき、膜成分脂質のシアル酸が負に帯電する為、電離している陽イオンを血球周辺に引き寄せ、互いに反発することで血球成分同士の凝集を抑制していることが知られている（「輸血の副作用，合併症」輸血学第２版遠山博著 1989，p333〜334）。そこで、血球同士の凝集を亢進させる為、電解質ではない糖等の水溶液に血液を添加し、血球成分を沈降させ血漿又は血清成分を分離させたところ、１０分以内で血球の沈降が認められた。また糖以外のアミノ酸等でも同様の試験を実施したところ、同様の結果を得ることができた。この方法を利用することでμL単位の血液から血漿が分離可能となり、微量な検体でも測定可能な分析装置を用いることで基本的な生化学検査が十分に可能となった。
また、沈降させた血球成分は崩壊していない為、緩衝液に再溶解することで、血球を試験対象とした形態・細胞性免疫検査・遺伝子関連検査等の検査も可能である。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
［１］本発明は、
血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）の混合容器（３）と、
当該混合容器（３）内に装着され、かつ当該混合容器（３）内を上下に駆動し、かつ分離後の上澄みの血漿（血清）成分を採取する駆動部兼採取容器（５）とから構成され、
前記混合容器（３）は、上部が開口され、下部が密閉され、前記上部の開口にキャップ（６Ｂ）が装着され、
前記駆動部兼採取容器（５）は、上部が開口され、下部に前記混合容器（３）内の上澄みの血漿（血清）成分中に含まれる可能性のある血球成分を捕獲する分離手段（２）が装着され、前記上部の開口には、キャップ（６Ａ）が装着され、
前記混合容器（３）内に上部から前記駆動部兼採取容器（５）の下部を挿入し、当該駆動部兼採取容器（５）を下方に駆動させて、前記混合容器（３）内の溶液を加圧して、
当該溶液を前記分離手段（２）を通して、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を駆動部兼採取容器（５）内に分離採集することができるように形成した、血液成分分離装置（１）を提供する。
［２］本発明は、
血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）の混合容器（１３）と、
当該混合容器（１３）内に装着され、かつ当該混合容器（１３）内を上下に駆動し、かつ分離後の液状成分を採取する駆動部兼採取容器（１５）とから構成され、
前記混合容器（１３）は、上部が開口され、下部が密閉され、前記上部の開口にはキャップ（１６Ｂ）が装着され、
前記駆動部兼採取容器（１５）は上部が開口され、下部に、前記混合容器（１３）内の上澄みの血漿（血清）成分中に含まれる可能性のある血球成分を捕獲する分離手段（１２）を装着し、
前記駆動部兼採取容器（１５）内の長さ方向の側壁に通液溝（１８）を形成し、かつ当該駆動部兼採取容器（１５）内の下部に栓体止め（１９）を形成し、
前記駆動部兼採取容器（１５）のキャップ（１６Ａ）の下部に支持竿（１６Ａ２）を装着し、当該支持竿（１６Ａ２）の先端に、栓体（１７）を装着し、
前記混合容器（１３）の上部の開口から前記駆動部兼採取容器（１５）を挿入し、当該駆動部兼採取容器（１５）を下方に駆動させて、前記混合容器（１３）内の溶液を加圧して、
当該溶液を前記分離手段（１２）を通して、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を駆動部兼採取容器（１５）内に分離採集することができるように形成した、血液成分分離装置（１１）を提供する。
［３］本発明は、
血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）の混合容器（２３）と、分離後の液状成分を採取する採取容器（２５）と、
前記混合容器（２３）に着脱可能な第１接続部（２２Ａ１）と、前記採取容器（２５）に着脱可能な第２接続部（２２Ａ２）を有し、前記混合容器（２３）内の上澄みの血漿（血清）成分中に含まれる可能性のある血球成分を捕獲する分離手段（２２）とから構成され、
前記混合容器（２３）は、上部と下部が開口され、上部の開口にキャップ（２６Ｂ）を装着し、当該混合容器（２３）の内部に上下に駆動する駆動部（２７）を装着し、
前記採取容器（２５）は、上部と下部が開口し、上部の開口にキャップ（２６Ａ）を装着し、
前記分離手段（２２）の第１接続部（２２Ａ１）に、前記混合容器（２３）の上部の開口を接続し、前記分離手段（２２）の第２接続部（２２Ａ２）に前記採取容器（２５）の下部の開口を接続し、
前記駆動部（２７）を駆動させて、前記混合容器（２３）内の溶液を加圧して、当該溶液を前記分離手段（２２）を通して、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を前記採取容器（２５）内に分離採集することができるように形成した、血液成分分離装置（２１）を提供する。
［４］本発明は、
血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）の混合容器（３３）と、分離後の液状成分を採取する採取容器（３５）と、
前記混合容器（３３）に着脱可能な第１接続部（３２Ａ）と、前記採取容器（３５）に着脱可能な第２接続部（３２Ｄ）を有し、前記混合容器（２３）内の上澄みの血漿（血清）成分中に含まれる可能性のある血球成分を捕獲する分離手段（３２）とから構成され、
前記混合容器（３３）は上部と下部が開口され、上部の開口に、キャップ（３６Ｂ）を装着し、当該混合容器（３３）の内部に上下に駆動する駆動部（３７）を装着し、
前記採取容器（３５）は、上部に、前記分離手段（３２）の第２接続部（３２Ｄ）との連結部（３８Ａ）を装着し、当該連結部（３８Ａ）に、キャップ（３６Ａ）を装着し、下部は閉塞し、
前記分離手段（３２）の第１接続部（３２Ａ）に前記混合容器（３３）を接続し、第２接続部（３２Ｄ）に前記採取容器（３５）を接続し、
前記駆動部（３７）を駆動させて、前記混合容器（３３）内の溶液を加圧して、当該溶液を前記分離手段（３２）を通して、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を採取容器（３５）内に分離採集することができるように形成した、血液成分分離装置（３１）を提供する。
【０００４】
【発明の実施の形態】
本発明の血液成分の分離方法は、（１）血液（ＢＬ）と、非電解質または両性電解質または電荷し難い物質からなる群より選択される少なくとも一つの化学物質またはこれらの化学物質の組み合わせからなる化学物質（ＣＳ）を、水または電解質を全く或いはほとんど含まない溶媒（ＳＬ）より選択される少なくとも一つの溶媒（ＳＬ）またはこれらの溶媒（ＳＬ）の組み合わせからなる溶媒（ＳＬ）に溶かした液体とを混合するステップと、(2)血液成分を分離するステップの少なくとも以上の２つのステップを含む。
本発明で血液（ＢＬ）とは、血球成分（ＢＬＣ）と液状成分（ＢＬＳ）の双方を含む血液である。
本発明で血液成分とは、主に赤血球または白血球または血小板からなる群より選択される少なくとも一つの成分またはこれらの成分の組み合わせからなる血球成分（ＢＬＣ）と、主に血漿または血清からなる群より選択される少なくとも一つの液状成分（ＢＬＳ）であり、血球成分（ＢＬＣ）は主に赤血球、白血球及び血小板からなる血球成分を含み、液状成分（ＢＬＳ）は主に血漿または血清からなる成分を含む。
本発明では、前記非電解質または両性電解質または電荷し難い化学物質（ＣＳ）を水または電解質を全く或いはほとんど含まない溶媒（ＳＬ）に溶解した水溶液（ＷＳＬ）を調整し、当該水溶液（ＷＳＬ）を血液成分のうち主に血球が含まれる成分を沈降させる手段として使用する。
前記水溶液（ＷＳＬ）は血球表面に正電荷の層が形成し血球同士互いに反発しあうことを抑制する。さらに詳述すれば前記水溶液（ＷＳＬ）は、前記ステップ（１）において、血球表面へ正電荷層が形成されるのを抑制し、当該水溶液（ＷＳＬ）中に血液を添加すると血球同士の作用によって主に血球成分（ＢＬＣ）のみの沈降を亢進させる。
前記化学物質（ＣＳ）と前記溶媒（ＳＬ）は、血球表面の正電荷層の形成を抑制し、血球の沈降を亢進させることのできる前記水溶液（ＷＳＬ）を調整できるものであれば何でも良い。
例えば、前記血球沈降を亢進させる化学物質（ＣＳ）として、非電解質または糖またはポリマーからなる群より選択される少なくとも一つの物質またはこれらの二種類上の物質の組み合わせからなる物質を使用することができる。
また前記化学物質（ＣＳ）として、単糖類、二糖類、多糖類、糖アルコール、緩衝剤、水溶性のポリマー類からなる群より選択される少なくとも一つの物質またはこれらの二種類以上の物質の組み合わせからなる物質を使用することができる。
【０００５】
前記化学物質（ＣＳ）として、ブドウ糖，フルクトース，ラクト−ス，ガラクトース，サッカロース（ショ糖），マンノース，マンニトール，メビリオース，ソルビトール，キシリトール，キシロース，マルトース，マンノビオース，アラビノース，マンノケトヘプノース，グルコケトヘプトース，ガラクタン，ガラクトマンナン，デンプン，セルロース，デオキシリボース，セロビオース，ラムノース，リボース．マンノース，スクロース，フコース，ラフィノース，スタキオース，デキストラン，マルトリオース，マルチェロ−ス，グリセロース，プルラン，グリセロール，マルチトール，アドニール，アラビトール，ポリビニルピロリドン、ゼラチン，N-(2-アセトアミド)-2-アミノエタンスルホン酸，N,Nビス（2-ヒドロキシエチル）-2アミノエタンスルホン酸，N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシン，2,2-ビス(ヒドロキシメチル)-2,2’,2’’-ニトリロトリエタノール，1,3-ビス〔トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ〕プロパン，3-〔N,Nビス（2-ヒドロキシエチル）アミノ〕-2-ヒドロキシプロパンスルホン酸，2-〔4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル〕エタンスルホン酸，2-〔4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル〕エタンスルホン酸ナトリウム，N-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-N’-3-プロパンスルホン酸，N-(2-ヒドロキシルエチル)ピペラジン-N’-2-ヒドロキシプロパン-3-スルホン酸，2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸，2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸ナトリウム，3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸，3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸ナトリウム，3-(N-モルホリノ)-2-ヒドロキシプロパンスルホン酸，ピペラジン-1,4-ビス(2-エタンスルホン酸)，ピペラジン-1,4-ビス(2-エタンスルホン酸)一ナトリウム，N-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-3-アミノプロパンスルホン酸，N-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-3-アミノ-2-ヒドロキシプロパンスルホン酸，N-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-2-アミノエタンスルホン酸，N-トリス(ヒドロキシメチル)メチル-2-アミノエタンスルホン酸ナトリウム，N-〔トリス(ヒドロキシメチル)メチル〕グリシン，ポリブレン，メチルセルロースからなる群より選択される少なくとも一つの物質またはこれらの二種類以上の物質の組み合わせからなる物質を使用することができる。
【０００６】
また前記化学物質（ＣＳ）は単独または二種類以上組み合わせて、水または電解質を全くあるいはほとんど含まない溶媒（ＳＬ）で、前記水溶液（ＷＳＬ）として、細胞に影響しない浸透圧（例えば260〜290mOsm）およびｐＨ内（例えば6〜8）に調整される。
さらに本発明では、前記化学物質（ＣＳ）に加えて、前記水溶液（ＷＳＬ）中に血球成分の沈降を補助し更に早く沈澱させる補助物質（ＡＳ）を添加しても良い。
前記補助物質（ＡＳ）は、血球に特異的に相互作用する物質またはそれ自体が化学的に修飾された物質で、血球成分（ＢＬＣ）の沈降をさらに亢進させる物質である。
前記補助物質（ＡＳ）として、グリシン，レクチン，アガロース結合型レクチン，コラーゲン，アデノシン５’−二リン酸，エピネフリン，トロンビン，アラキドン酸、リストセチンまたは２価の陽イオンでありかつ血液凝固作用を有するマグネシウムもしくはカルシウムからなる群より選択される少なくとも一つの物質またはこれらの二種類以上の物質の組み合わせからなる血球成分（ＢＬＣ）に特異的に働く物質を使用することができる。
【０００７】
前記ステップ（１）において、血液（ＢＬ）と前記水溶液（ＷＳＬ）とを混合した後、０．５〜５分間放置することによって、少なくとも主に赤血球、白血球及び血小板を含む血球成分（ＢＬＣ）と、主に希釈された血漿または血清を含む液状成分（ＢＬＳ）とに分離することができる。
また本発明では、前記液状成分（ＢＬＳ）中に含まれる夾雑細胞成分が崩壊することなく捕捉可能な性能を有する分離手段により、前記液状成分（ＢＬＳ）と前記血球成分（ＢＬＣ）を分離することもできる。
前記分離手段として、炭素質もしくはシリカ炭素質もしくは金属化合物質もしくはガラス質からなる群より選択される少なくとも一つの材質またはこれらの二種類以上の材質の組み合わせからなる無機質体またはポリマー系もしくは繊維質もしくは紙質からなる群より選択される少なくとも一つの材質またはこれらの二種類以上の材質の組み合わせからなる有機体の中空糸膜または一層ないし多層からなる平膜またはろ紙または管状膜またはスポンジ質の樹脂発泡体または前記無機質体もしくは前記有機質体から構成される粒子状の樹脂を積層したカラムを使用することができる。
【０００８】
また前記分離手段の材質として、セルロースアセテート，ニトロセルロース，酢酸セルロース，セルロース，ポリビニリデンジフロライド，ポリテトラフロロエチレン，ポリカーボネイト，ポリエーテルスルホン，ポリ塩化ビニリデン，ポリプロピレン，ポリエチレン，ナイロン，ポリエチレンテレフタレート，ポリブチレンテレフタレート，ポリスルホン，ポリエーテルスルホン，ポリ塩化ビニル，ポリアミド，ポリイミド，アクリル共重合体，ポリウレタン，ポリアクロニトリル，ポリメタクリル酸メチル，エチレン，ビニルアルコール共重合体，ポリオレフィン，ポリスチレン，銀メンブレン，グラスファイバー，ガラスウール，ガラス繊維，石英繊維，アルミナ，ガラス，シリカ，フッ素樹脂からなる群より選択される少なくとも一つの材質またはこれらの二種類以上の材質の組み合わせからなる材質を使用することができる。
【０００９】
また血球成分を沈降させた後、粗分離して得られる希釈された血漿または血清成分を含む液状成分（ＢＬＳ）を加圧若しくは引圧にて前記分離手段を通し、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分（ＢＬＳ）以外の成分を捕獲することができる。
前記分離手段は、血球成分を沈降させた後、液状成分中に混在し得る夾雑細胞成分が崩壊すること無く捕獲することが可能な性能（形態・材質）を有するものであれば何でも使用することができる。
【００１０】
本発明の血液成分の分離装置は、少なくとも化学物質（ＣＳ）と血液（ＢＬ）とを混合し、静置する手段を有し、また静置後分離した液状成分（ＢＬＳ）中に混在し得る夾雑細胞成分を捕獲するための分離手段を有することもある。
前記化学物質（ＣＳ）と血液（ＢＬ）を混合する手段として、少なくとも（１）血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）とを混合し、静置することが可能な手段を有し、少なくと（１）血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）とを混合する手段中に、前記血液成分中の血漿又は血清成分が希釈されて含まれる液状成分（ＢＬＳ）を分離する為に血液成分中に主に血球成分を沈降させる化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（ＷＳＬ）を収納（装填或いは充填ともいう）している。
本発明の血液成分の分離装置は、少なくとも（１）血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液（Ｓ）とを混合し静置する手段と、当該手段（１）に加えて、（２）静置後、沈降した血球成分（ＢＬＣ）から上澄として分離されることにより、主に前記溶媒（ＳＬ）中で希釈された血漿または血清成分を含む液状成分（ＢＬＳ）中に含まれる可能性がある血球成分（ＢＬＣ）（夾雑細胞成分ともいう）を捕獲する分離手段、（３）前記の液状成分を分離手段へと導く手段として加圧や引圧を生じさせることが可能な或いは自然力にて稼動する駆動手段、（４）分離される前記液状成分（ＢＬＳ）を収納する手段を有する。
前記液状成分（ＢＬＳ）に残存する血球成分（ＢＬＣ）を捕獲する為の分離手段は、次のいずれかの形態を採用することができる。前記化学物質（ＣＳ）と血液（ＢＬ）とを混合し静置する手段と連結及び／又は取り外しが可能な形態、または前記分離手段それ自体が前記分離される液状成分を収納する手段自体に固定した形態。
本発明で前記（１）血液成分（ＢＬ）と化学物質（ＣＳ）を含む水溶液とを混合し静置する手段とは、例えば、ポリプロピレンやポリエチレン等の高分子材料或いはガラス等の無機材料で成型された密閉性を有する容器３、１３、２３、３３（本願明細書では「混合容器」とういう場合もある）等であり、その形状は本発明の目的を達成することができるものであれば何でも採用することができる。但し、前記容器のうち２３、３３（例えば後述する図３、図４参照）は、その上部に分離手段２２、３２が接続可能なものである。
前記（２）静置後、沈降した血球成分（ＢＬＣ）から上澄として分離されることにより、主に前記溶媒（ＳＬ）中で希釈された血漿または血清成分を含む液状成分（ＢＬＳ）中に含まれる可能性がある血球成分（夾雑細胞成分ともいう）（ＢＬＣ）を捕獲する分離手段２、１２、２２、３２とは前記段落番号［０００７］に記載の分離手段そのもの（例えば平膜或いはろ紙や中空糸やスポンジ状の樹脂発泡体等）、または同分離手段を血液の出口と入口を有するハウジング内に配置されるもの（例えば後述する図３、図４参照）、また容器（筒体ともいう）の下部（口部ともいう）に固定されたもの（例えば後述する図１、図２参照）で、分離手段そのものやハウジングや容器（筒体ともいう）の形状は本発明の目的を達成することが可能なものであれば何でも採用することができる。またハウジングや容器（筒体ともいう）内のフィルターの形状や配置は本発明の目的を達成することが可能なものであれば何でも採用することができる。
前記（３）液状成分を分離する手段として加圧や引圧を生じさせることが可能な駆動部（駆動手段ともいう）或いは自然力にて稼動する駆動部（駆動手段ともいう）５、１５、２７、３７とは、例えば、シリンジのピストン２７、３７や前記容器に収まる容器（筒体）５、１５等であり、ピストンは加圧する方向に、容器（筒体）は前記容器内に挿入する方向に押すことで、容器３、１３、２３、３３内の液体を加圧する機能を有するものであれば何でも採用することができる。また前記（４）静置後分離される前記液状成分を収納する手段５、１５、２５、３５（例えば後述する図１から４参照）とは液状成分内に希釈されて含まれる血漿または血清成分に影響しないもので分離される前記液状成分を採取することができる容器等である。例えば、ポリプロピレンやポリエチレン等の高分子材料或いはガラス等の無機材料で成型された密閉性を有する容器等であり、これらの形状は、本発明の目的を達成することができるものであれば何でも採用することができる。但し、収納手段５、１５は前記（３）記載の駆動手段および前記（２）記載の分離手段としての両手段の機能を併せ持つ。
また収納手段（容器ともいう）１５は前記液状成分を収納した後、栓体１７にて下部を密閉することが可能である。
以上説明した各手段５、１５、２５、３５の機能等により、本願明細書では、収納手段５、１５は、「駆動部兼採取容器」、収納手段２５、３５は、「採取容器」という場合がある。
【００１１】
図１から４は本発明の血液成分分離装置の一例を示す概略図であり、以下これらに基づいて説明する。図１から４の血液成分分離装置はあくまでも例示であり、同様の作用効果を奏する血液成分分離装置は、全て本発明に含まれる。
図１の血液成分分離装置１は、血液成分と化学物質を含む水溶液Ｓとを混合する容器３と分離手段２、駆動部および分離後の液状成分を採取する容器５から構成される。
容器５は、人工的な加圧力で駆動或いは自然力による降下の何れによっても容器３内に挿入可能な構造（例えば容器５の外径を容器３の内径と同じかまたは若干小さく形成する）を有し、その下部（口部ともいう）に分離手段２が固定される構造（例えば分離手段２の装着溝を形成する）を有する。また、容器３内に駆動部および分離後の液状成分を採取する容器５が挿入されることで、容器３内の溶液が加圧され、分離手段２を通すことによって、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を分離することが可能な装置である。
容器３の上部、駆動部および分離後の液状成分を採取する容器５の上部と下部には密閉性を維持する為に、ポリプロピレンやポリエチレン等の高分子材料やガラス等の無機材料から成型されるキャップ６Ａ、６Ｂ等が装着される。分離手段２とは例えば、平膜２Ｍ（或いはろ紙や中空糸）を駆動部および分離される液状成分を採取する容器５の下部に固定したものである。
図１の血液成分分離装置１は例えば次の順序で血液成分を分離することができる。
（１）化学物質が含まれる水溶液の入った容器３の上部キャップ６Ｂを外し、血液を同容器３内に添加する。
（２）再び容器３にキャップ６Ｂを装着し、転倒して血液と化学物質を含む水溶液とを混合し、静置する。
（３）静置することにより容器３内で、沈降した血球成分と、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分とに分離される。
（４）容器５上部のキャップ６Ａを外し、人工的に加圧し或いは自然的に降下させ、容器３内に挿入する。
（５）容器５に固定されている分離手段２によって主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分が膜２Ｍを介し、容器５内に採取される。
（６）容器５が容器３内に完全に挿入された後、同容器５上部に、再びキャップ6Aを装着し、容器内を密閉する。
【００１２】
図２の血液成分分離装置１１は人工的な加圧或いは自然力による降下によって分離を行う装置である。図２（Ａ）は装置１の概略図（断面図）で、図２（Ｂ）は、容器１５の平面図である。血液成分分離装置１１は図１の血液成分分離装置１と比較して、新たに分離される主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分と沈降した血球成分とを完全に分離する為に、キャップ１６Ａの下部に支持竿１６Ａ２を装着し、該支持竿１６Ａ２の先端に栓体１７を装着したものである。これらの支持竿１６Ａ２及び栓体１７は、図３、図４のシリンジのピストン２７、３７と同様の役割を果たす。
キャップ１６Ａを容器１５上部に装着することによって、栓体１７は、駆動部および分離された液状成分を採取する容器１５下部を塞ぎ、容器１３内で沈降している血球成分と液状成分とを完全に分離することが可能となる。また容器１５は、キャップ１６Ａと栓体１７によって密閉性を有し、容器１３から取り外すことが可能となる。
また図１と比較して、新たに容器１３は内部に、栓体１７を挿入する時、分離された液状成分を栓体１７上部に通液するための通液溝１８と、栓体１７で容器１３内を密閉するための栓体止め１９を有する。分離手段１２とは例えば、平膜１２Ｍ（或いはろ紙や中空糸等）を駆動部および分離される液状成分を採取する容器１５の下部に固定したものである。
図２の血液成分分離装置１１は、例えば次の順序で血液成分を分離することができる。
（１）化学物質が含まれる水溶液が入った容器１３上部のキャップ１６Ｂを外し、血液を同容器１３に添加する。
（２）再び容器１３にキャップ１６Ｂを装着し、転倒して血液と化学物質を含む水溶液とを混合し、静置する。
（３）静置することにより容器１３内で、沈降した血球成分と、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分とに分画される。
（４）容器１５の上部キャップ１６Ａを外し、人工的に加圧し或いは自然的に降下させ、容器１３内に挿入する。
（５）容器１５に固定されている分離手段１２によって、主に希釈された血漿または血清成分が膜１２Ｍを介して、同容器１５内に採取される。
（６）駆動部および容器１５が容器１３内に完全に挿入されたのち、同容器１５上部にキャップ１６Ａをゆっくりと装着しながら、栓体１７を容器１５内に挿入する。
（７）容器１５内の通液溝１８によって、分離された液状成分は栓体１７上部に通液される。
（８）栓体１７を容器１５内下部の栓体止め１９に届くまで挿入する。
【００１３】
図３の血液成分分離装置２１は、加圧力を用い、容器２３内の主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を分離することが可能な装置である。
図２の血液成分分離装置１１と比較して、新たに化学物質と血液とを混合する容器２３内に上下に駆動するピストン等の駆動部２７を有する。分離手段２２とは、例えば、液状成分の入口と出口を有するハウジング２３Ｈ内に平膜２３Ｍ（或いはろ紙や中空糸等）を配置したものである。またハウジング２３Ｈは、容器２３と容器２５のそれぞれの口部に装着および取り外しが可能な構造を有している。
図３の血液成分分離装置２１は、例えば次の順序で血液成分の分離ができる。
（１）化学物質が含まれる水溶液の入った容器２３のキャップ２６Ｂを外し、血液を同容器２６内に添加する。
（２）再び容器２３にキャップ２６Ｂを装着し、転倒して血液と化学物質を含む水溶液とを混合し、静置する。
（３）静置することにより容器２６内で、沈降した血球成分と、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分とに分画される。
（４）容器２５上部のキャップ２６Ａを外す。
（５）分離手段２２の第１接続部２２Ａ１と第２接続部２２Ａ２を、容器２３の上部および容器２５の下部と装着する。
（６）駆動部２７を押して容器２３内を加圧し、分離手段２２内によって、主に希釈された血漿または血清成分が膜２２Ｍを介して容器２５内に採取される。
【００１４】
図４の血液成分分離装置３１は、加圧力により、容器３３内の主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を分離することが可能な装置である。
図３の血液成分分離装置２１と比較して、分離された液状成分を採取する容器３５上部にキャップ３６Ａが装着された連結針３８Ａを有する連結部３８を配置したものである。
分離手段３２は、図３に例示した分離手段２１の膜２２Ｍの平膜やろ紙等に代えて、中空糸膜３２Ｍを容器３３内で分離された主に液状成分の入口と分離膜３２Ｍを介して分離される液状成分の出口を有するハウジング内３２Ｈに配置した実施例である。
図４の例示に従って詳細に説明すると、ハウジング３２Ｈの下部には、容３３内で分離される内溶液の入口（液体通路を有し液体を中空糸膜３２Ｍ内側に導入する第１接続部３２Ａ）、右側部には中空糸３２Ｍにて分離された液状成分を排出する為の出口（液体通路を有し液体を容器３５に排出する第２接続部３２Ｄ）がそれぞれ装着されている。また左側部と上部にはそれぞれ分離手段３２に通液する容器３３の内溶液或いは分離手段３２外に排出される液状成分を透過しない材質・構造を有する通気部３２Ｂ、３２Ｃが装着されている。さらに同通気部３２Ｂ、３２Ｃにはそれぞれ、シート状等の封止部材３４Ａ、３４Ｂが装着され、ハウジング３２Ｈ内を外気と通気するまでは同通気部３２Ｂと３２Ｃは封止材３４Ａ、３４Ｂによって密閉された状態である。
以上説明したように、図１から図８に例示した血液成分分離装置１、１１、２１において、各分離手段２、１２、２２ないしハウジング２２Ｈ（内部には平膜やろ紙等が配置される）に代えて、本実施例のハウジング３２Ｈ（中空糸膜３２Ｍが配置される形態）を使用することも可能である。逆に、本実施例の血液成分分離装置３１において、分離手段３２のハウジング３２Ｈ（中空糸膜３２Ｍが配置される形態）に代えて、図１から図３に例示した血液成分分離装置１、１１、２１ないし前記ハウジング２２Ｈ（内部には平膜やろ紙等が配置される）を使用することも可能である。
図４の血液成分分離装置３１は例えば次の順序で血清成分を分離することができる。
（１）化学物質が含まれる水溶液の入った容器３３の上部キャップ３６Ｂを外し、血液を同容器３３内に添加する。
（２）再び容器３３にキャップ３６Ｂを装着し、転倒して血液と化学物質を含む水溶液とを混合し、静置する。
（３）静置することにより、容器３３内で、沈降した血球成分と、主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分とに分画される。
（４）容器３３に分離手段３２を装着する。
（５）分離手段３２上部の通気部３２Ｂの封止材３４Ａを外して、通気可能な状態にする。
（６）駆動部３７を押して容器３３内の溶液を加圧し、分離手段３２に通液する。
（７）分離手段３２内によって、主に希釈された血漿または血清成分が膜３２Ｍを介して容器３５内に採取される。
（８）分離手段３２上部の通気部３２Ｂを封止材３４Ｂで再び密閉し、隣接した通気部３２Ｃの封止材３４Ａを外す。
（９）容器３５上部のキャップ３６Ａを外し、同容器３５の連結部３８と分離手段３２の第２接続部３２Ｄを装着し、分離手段３２内で分離された液状成分を同容器３５内に採取する。
（１０）分離手段３２と容器３５とを取り外し、容器３５を同容器３５から外してキャップ３６Ａで同容器３５を再び密閉する。
【００１５】
実施例１．
本実施例は、数種類の化学物質を用いて水溶液を調整し、血液を添加した後血球成分の沈降が亢進し約１０分程度で、主に血球を含む成分と主に血漿又は血清である液状成分とに分離可能か否かの検討を行う為に実施した。
本実施例では、以下の材料を使用した。
人血液を用い、化学物質を含む水溶液として10%マルトース水溶液，5%及び20%マンニトール水溶液，2.25%グリシン水溶液，3.6%トリスアミノメタン水溶液，20%ポリビニルピロリドン水溶液，3%ポリビニルピロリドン／5%ソルビトール水溶液，2.45%ポリビニルピロリドン／4.25%ソルビトール水溶液，0.1%メチルセルロース／5%マンニトール水溶液，0.1%メチルセルロース／5%HEPES（2-〔4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル〕エタンスリルホン酸）水溶液，5%ACES（N-(2-アセトアミド)-2-アミノエタンスルホン酸）緩衝液，5%MOPS（3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸）緩衝液，6%BES緩衝液（(N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸)，7%HEPES（2-〔4-2(ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル〕エタンスルホン酸）緩衝液，10%デキストラン10%マルトース／リン酸緩衝液，5%及び20%マンニトール／リン酸緩衝液を調整して使用した。また市販の生理的リン酸緩衝食塩水(PBS(-))，生理食塩液，10%デキストラン注射液，赤血球保存液MAP液，全血用液保存液ACD液，CPD液又はCPDA-1液をそのまま使用した。
また必要に応じ、化学物資を含む水溶液と血液を混合する容器としてプラスチ
ック製の容器（栄研チューブ１号／栄研機材）、混合した溶液を放置するものとして1mLのシリンジ（テルモ社製）を用いた。
血液を様々な水溶液中に添加したとき、血球成分に加わる重力によって放置することでどのような水溶液を用いた場合でも血球成分と血漿または血清成分に分離する。しかし時間が経つにつれ血漿或いは血清中の成分は影響を受ける為、短時間での分離が必要となる。
従って血液と化学物質を含む溶液を混合したときから約１０分内で血球成分が沈降する条件を検討し、分離可能であったと判断した。１０分以上かかった物は分離不可能と判断した。
【００１６】
具体的な血液分離方法は以下のとおりである。
１．検討する化学物質を用いそれぞれの水溶液を調整した。
２．１．で調整した水溶液を栄研チューブに分注した。
３．２．の栄研チューブ内に、水溶液と血液とが１：５の比率となるように血液を添加した。
４．1mLのシリンジを用い３．で混合した溶液を採取した。
５．シリンジを立てて静置し、分離の可不可を判断した。
結果を表１に示す。（分離可能を○、分離不可を×とした。）
１３種類の水溶液で血球成分沈降が確認され１０分内で血球成分と血漿成分に分離した。但し同じ物質をリン酸緩衝液に溶かすと緩衝液中の電解質による為か分離を確認することができなかった。また市販の水溶液も同様でも電解質を含むためか、分離されなかった。
【００１７】
【表１】

【００１８】
実施例２．
本実施例では血球沈降を促す補助物質を、血球沈降させる化学物質と混合して水溶液とし、補助物質の添加未添加によってその沈降に差異が見られるか否かの検討を行う為に実施した。
本実施例では以下の材料を使用した。
人血液を用い、化学物質として5%マンニトール水溶液に、補助物質として塩化マグネシウムをマグネシウムイオン濃度で0.5，1，2，5，7.5，10meq/Lとなるように添加した。
また必要に応じ化学物質及び補助物質と血液を混合し、静置する容器としてプラスチック製の容器（栄研チューブ１号／栄研機材）を用いた。
補助物質の未添加時の沈降時間と比較し、それよりも早かった場合、沈降時間を早める補助物質として効果があると判断した。
具体的な血液分離方法は以下のとおりである。
１．血球成分を沈降させる化学物質のマンニトールと補助物質の塩化マグネシウムを混合し、マンニトール終濃度は5%で固定し、塩化マグネシウムをマグネシウムイオン濃度で0.5，1，2，5，7.5，10meq/Lとなるような水溶液をそれぞれ調整した。また対照として5%マンニトールのみの水溶液を調整した。
２．１．で調整した水溶液を栄研チューブに分注した。
３．２．の栄研チューブ内に、水溶液と血液とが１：５の比率となるように血液を添加した。
４．そのまま栄研チューブを静置し、塩化マグネシウム未添加のものと沈降速度との比較をした。
結果は表２に示す。
塩化マグネシウムを添加した全ての水溶液では血球成分の沈降が、塩化マグネシウム未添加のものよりも早いことが確認された。
【００１９】
【表２】

【００２０】
実施例３．
本実施例は、血液と化学物質を含む水溶液とを混合し、静置することによって主に血球成分を沈降し、上清には主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分と血球成分が若干残存しており、前記液状成分のみを最終的に分離する為、この残存する血球成分を幾つかの分離手段で捕獲可能か否かを検討したものである。
本実施例では以下の材料を使用した。
人血液を用い、分離手段として多孔質体ポリマーの平膜（親水性ポリビニリデンジフロライド、ニトロセルロース、親水性ポリテトラフロロエチレン）：直径13mm，孔径0.65〜2.0μmおよび無機材質のガラスろ紙：直径13mm，保留粒子径0.4〜0.8μm，血球成分を沈降させるための化学物質として5%マンニトール水溶液、駆動手段としてシリンジ（2.5mL）、血液と化学物質を含む水溶液とを混合する手段として先端口部を密閉したシリンジ（5mL）、分離体は駆動手段であるシリンジ(2.5mL)にシリコンゴムを用いて固定した。
具体的な血液成分の分離方法は以下の通りである。
１．5mLのシリンジのピストンを抜き、先端口部を下に向けてセットした。
２．5mLのシリンジ内に5%マンニトール水溶液を入れ、血液を添加した。
３．そのまま５分間静置し、血球成分を沈降させた。
４．分離体を固定した2.5mLのシリンジを、5mLのシリンジ内に押し入れ、分離体を介し主に血漿または血清成分を含む液状成分を2.5mLのシリンジ内に採取した。
５．分離前の液状成分と採取した液状成分の血球計測を行って、分離の可否を確認した。
結果は表３に示す。
【００２１】
試験に使用した多孔質分離体の詳細は次の通りである。
１．親水性ポリビニリデンジフロライドフィルター(PVDF)：直径13mm，孔径0.65μm
２．ニトロセルロースフィルター：直径13mm，孔径0.8，1.2μm
３．親水性ポリテトラフロロエチレン(PTFE)：直径13mm，孔径1.2μm
４．ガラス繊維ろ紙：直径13mm，保留粒子径0.4，0.5，0.6，0.8μm
【００２２】
【表３】

【００２３】
実施例４．
本実施例は5%マンニトール水溶液及び10%マルトース水溶液を用いて血液から血漿成分を分離し、分離された血漿成分（TP，ALB，GOT，GPT，γ-GTP，T-CHO，TG，HDL-C，BUN，CRNN，UA，GLU）の分析を行った。
本実施例では以下の材料を使用した。
血液成分として人全血を用いた。血液と化学物質を混合する溶液として栄研チューブ（栄研機材社製）、混合後放置する容器として1mLシリンジ（テルモ社製）、分離される血漿中に若干残存する血球成分を捕獲する分離手段として孔サイズ0.25μmのPVDF性メンブランフィルター(Milipore社製)を用いて試験を行った。
また血漿成分の測定装置として、日本電子社製自動分析装置のBM-2000Cを使用した。
【００２４】
具体的な血液成分の分離方法は以下のとおりである。
１．各水溶液を調整し、栄研チューブ内に分注した。
２．血液と化学物質を含む水溶液との混合比が１：５となる様、栄研チューブに血液を添加した。
３．1mLのシリンジを用い、２．で混合した溶液を採取し、立てた状態で静置した。
４．血球成分が沈降したらシリンジの先端にフィルターを接続した。
５．シリンジを加圧し、分離された血漿をフィルターに通しながら、分析装置用カップに分注した。
６．血漿成分１２項目について自動分析装置BM-2000Cにて測定を行った。
７．化学物質の変わりに生食を用いて同比率で血液を希釈したものを対照とし、その値との一致率を求めた。
結果は表４に示す。
マンニトールで分離した血漿成分は全て対照の測定値との一致率が８割以上近く見られ、分離方法或いは操作による血漿成分の影響は無いと判断した。
一方、マルトースで分離した血漿成分は、TP及びグルコース以外の項目は全て対照の測定との一致率が９割近いが、TP及びグルコースの測定値が対照測定値のTPは130%以上，グルコースは190%以上で測定系に何らかの影響があったことが確認された。マルトースはグルコース２分子が結合した構造を持つ為、グルコース濃度に影響があったと考える。従って実際の仕様ではマンニトールを用いることが望ましいと考えられる。
【００２５】
【表４】

【００２６】
【発明の作用効果】
（１）本発明を用いることにより、従来の煩雑で検査を受ける側行う側両方に大きな負担となっていた血清分離法や血漿分離法を用いなくとも、基本的な生化学的検査を行うことができるようになった。
（２）例えば従来検査を行う為に必要であった10mL近い血液がμL単位の血液量で検査対照となる血漿や血清が得られ、また微量であるため医療機関に出向く必要も無く、場所・時間を選ばず誰もが検査を受けることが可能になるため被験者の負担が大変軽くなる。
（３）またこれまでのように煩雑な手段でなく大変容易な方法であること、そのため検体処理を有資格者が行う必要も無く被験者自身でも可能となる等検査側の負担もかなり軽くなる。
（４）特に被験者自身が血漿または血清の分離を行った場合、検査者は検体を分析装置のオートサンプラー等に並べるだけとなり、検査費用の低下をも可能とする。
（５）また用いる物質も特殊で無く血球や血漿成分への影響も見られ無い為、従来の検査結果に劣らない信憑性の高い結果を得ることができるようになった。
（６）これまでに発明されたペーパークロマトグラフを用いた在宅用検査用具の方法とは異なり、本方法は前記方法において必要であった検査までの煩雑な手法が全く無く、前述した通り誰もが可能な安易な方法である。
（７）また微量の血漿で分析可能な装置が必要となるものの、今日の分析装置機能向上からすれば将来的に問題とはならず、どのような機械でも測定可能な利点を有している。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の血液成分分離装置の一例を示す概略図
【図２】本発明の血液成分分離装置の一例を示す概略図（（Ａ）は装置１の概略図（断面図）で、（Ｂ）は容器１５の平面図）
【図３】本発明の血液成分分離装置の一例を示す概略図
【図４】本発明の血液成分分離装置の一例を示す概略図
【符号の説明】
１、１１、２１、３１血液成分分離装置
２、１２、２２、３２分離手段
２２Ａ１第１接続部
２２Ａ２第２接続部
３２Ａ第１接続部
３２Ｄ第２接続部
３２Ｂ、３２Ｃ通気部
２Ｍ、１２Ｍ、２２Ｍ、３２Ｍ膜（平膜或いはろ紙或いは中空糸）
２２Ｈ、３２Ｈハウジング
３、１３、２３、３３血液と化学物質を含む溶液を混合する手段（容器）
３４Ａ、３４Ｂ封止材
５、１５分離される主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を採取する手段（駆動部兼採取容器）
２５、３５分離される主に希釈された血漿または血清成分を含む液状成分を採取する手段（採取容器）
６Ａ、６Ｂ、１６Ａ、１６Ｂ、２６Ａ、２６Ｂ、３６Ａ、３６Ｂキャップ
１６Ａ栓体を挿入する為の駆動部
１６Ａ２支持竿
１７栓体
２７、３７駆動部
１８通液溝
２８連結部
１９栓体止め
Ｓ血液と化学物質を含む水溶液[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method and apparatus capable of obtaining plasma or serum from whole blood without using conventional techniques. Further, the present invention relates to a separation method characterized by using a solution that enhances sedimentation of blood cell components as a method for obtaining plasma or serum from whole blood, and an apparatus devised to easily perform the separation method.
[0002]
[Prior art and problems to be solved by the invention]
Currently, blood tests are widely used as a means of diagnosing the progress of medical examinations and disease treatments, and although the accuracy and operating capacity of test analyzers are improving daily, the work of adjusting blood samples to be analyzed has been greatly improved. It is cumbersome and time consuming. First, blood collection for sample collection is a medical action that can be performed only by qualified personnel such as doctors, nurses, and clinical technologists, and must be sent to a medical facility for sample collection. Next, since red blood cells, white blood cells, and platelets in the blood may affect the test items, most of the targets for biochemical tests are plasma and serum. First, nearly 10 mL of blood is required for the whole blood volume, and it takes time for serum to clot, and further centrifugation is required. The anticoagulated plasma is only centrifuged, but it is necessary to carefully separate the plasma so that blood cell components are not mixed after centrifugation. This is a heavy burden on the inspection side.
There is also a problem that in a relatively small hospital without a centrifuge device that is indispensable for work, it takes time to confirm the test result because the test is requested to another test organization.
In such a method, the burden on both sides of the test is large, and there is a risk of infection during sample processing on the side of the test.
In recent years, with the improvement in accuracy of analyzers, it has become possible to perform conventional blood tests with a small amount of plasma or serum, and a method for easily separating plasma or serum from whole blood has been invented.
For example, a technique for separating plasma from whole blood using a multi-layer non-woven filter has been developed (Japanese Patent Laid-Open No. 11-295302), but 3 mL or more of whole blood is required to obtain a small amount of plasma. The burden does not change, and since this filter is a specific analyzer specification, it cannot be used for other analyzers, so it has not been widely used.
Further, a method of separating a small amount of blood obtained by damaging a fingertip with a needle such as a lancet into blood cells and plasma or serum according to the principle of paper chromatography (Japanese Patent Laid-Open No. 2001-188066) has been invented. It is necessary to extract serum components with a surfactant or the like, and the process up to the actual measurement is complicated, and it is difficult to measure components that are affected by extraction or the like, and it has not yet been widely used.
In addition, a method for separating plasma from whole blood using a hollow fiber has been invented. However, in order to obtain a measurable amount of plasma, a certain amount of blood is required, and this method also creates a burden on the receiving side. .
As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors have invented a method capable of separating plasma or serum components from a small amount of blood. When erythrocytes of blood cell components are mixed with an electrolyte solution, sialic acid, a membrane component lipid, is negatively charged, attracting ionized cations to the periphery of the blood cells and repelling them to suppress aggregation of blood cell components ("Side effects and complications of blood transfusion", Transfusion Science 2nd edition, Hiroshi Toyama, 1989, p333-334). Therefore, in order to enhance aggregation of blood cells, blood was added to an aqueous solution such as sugar that is not an electrolyte, and blood cell components were precipitated to separate plasma or serum components. As a result, blood cell sedimentation was observed within 10 minutes. . Moreover, when the same test was implemented also with amino acids other than sugar, the same result was able to be obtained. By using this method, plasma can be separated from blood in μL units, and basic biochemical tests are sufficiently possible by using an analyzer that can measure even a very small amount of sample.
In addition, since the sedimented blood cell components are not disintegrated, by re-dissolving them in a buffer solution, it is possible to perform tests such as morphology, cellular immunity test, gene-related test, etc. using blood cells as test subjects.
[0003]
[Means for Solving the Problems]
[1The present invention
  A mixing container (3) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS);
  Mounted in the mixing container (3) and driven up and down in the mixing container (3); andPlasma (serum) component of the supernatant after separationA drive unit and a collection container (5) for collecting
  Said mixing container (3)The upper part is open and the lower part is sealed.Cap (6B) is attachedAnd
  The drive unit and collection container (5)The upper part is opened, and the lower part is equipped with separation means (2) for capturing blood cell components that may be contained in the supernatant plasma (serum) component in the mixing container (3). ,Cap (6A) is attached,
  Said mixing container (3)Insert the lower part of the drive unit and collection container (5) from above into the inside,The drive and sampling container (5)And pressurizing the solution in the mixing vessel (3),
  The solutionAboveA blood component separation device (1) formed so that a liquid component containing mainly diluted plasma or serum component can be separated and collected in the drive unit and collection container (5) through the separation means (2). provide.
[2The present invention
  A mixing container (13) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS);
  It is composed of a drive unit / collecting container (15) mounted in the mixing container (13) and driven up and down in the mixing container (13) and collecting the liquid component after separation.
  The mixing container (13) is opened at the top and sealed at the bottom, and the cap (16B) is attached to the opening at the top.
  The drive unit / collection container (15) is opened at the top, and at the bottom, separation means (12 for capturing blood cell components that may be contained in the plasma (serum) component of the supernatant in the mixing container (13). )
  A liquid passage groove (18) is formed in the side wall in the longitudinal direction in the drive unit and collection container (15), and a stopper (19) is formed in the lower part in the drive unit and collection container (15). ,
  A support rod (16A2) is attached to the lower part of the cap (16A) of the drive unit / collecting container (15), and a plug (17) is attached to the tip of the support rod (16A2).,
  The drive unit / collection container (15) is inserted from the upper opening of the mixing container (13), and the drive unit / collection container (15) is driven downward to remove the solution in the mixing container (13). Pressurize,
  The solution was formed so that the liquid component containing mainly diluted plasma or serum component could be separated and collected in the drive unit and collection container (15) through the separation means (12).A blood component separation device (11) is provided.
[3The present invention
  A mixing vessel (23) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS), a collection vessel (25) for collecting the separated liquid component,
  In the mixing container (23)In the supernatant plasma (serum) component in the mixing container (23), the first connection part (22A1) that can be attached and detached and the second connection part (22A2) that can be attached and detached to the collection container (25). Capture blood cell components that may be includedSeparating means (22),
  The mixing container (23)The top and bottom are open and the top openingAttach the cap (26B)A drive unit (27) for driving up and down is installed inside the mixing container (23),
  Collection container (25)The top and bottom are open and the top is openAttach the cap (26A)
  The upper opening of the mixing container (23) is connected to the first connection portion (22A1) of the separation means (22), and the collection container (25) is connected to the second connection portion (22A2) of the separation means (22). Connect the bottom opening)
  Driving the drive unit (27);Said mixingPressurize the solution in the container (23),AboveProvided is a blood component separation device (21) formed so that a liquid component containing mainly diluted plasma or serum components can be separated and collected in the collection container (25) through the separation means (22). .
[4The present invention
  A mixing container (33) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS), a collecting container (35) for collecting the liquid component after separation,
  Detachable to the mixing container (33)It has a first connection part (32A) and a second connection part (32D) that can be attached to and detached from the collection container (35), and can be contained in the supernatant plasma (serum) component in the mixing container (23) Capture sexual blood cell componentsSeparating means (32),
  The mixing container (33)Is open at the top and bottom,Attach the cap (36B)Of the mixing container (33)Install the drive unit (37) that drives up and down inside,
  The collection container (35)IsAt the top,AboveOf the separating means (32)With the second connection (32D)Attach the connecting part (38A), attach the cap (36A) to the connecting part (38A), close the lower part,
  Of the separating means (32)First connection part (32A)And connecting the mixing container (33) toTo the second connection (32D)Connecting the collection container (35);
  Drive the drive unit (37),Said mixingPressurize the solution in the container (33) toAboveThere is provided a blood component separation device (31) formed so that a liquid component mainly containing diluted plasma or serum components can be separated and collected in a collection container (35) through the separation means (32).
[0004]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The blood component separation method of the present invention comprises (1) blood (BL), at least one chemical substance selected from the group consisting of non-electrolytes, ampholytes, or substances that are difficult to charge, or a combination of these chemical substances. A liquid in which a chemical substance (CS) is dissolved in at least one solvent (SL) or a combination of these solvents (SL) selected from water (SL) containing little or no water or electrolyte And (2) at least two steps of separating blood components.
In the present invention, blood (BL) is blood containing both a blood cell component (BLC) and a liquid component (BLS).
In the present invention, the blood component is a blood cell component (BLC) composed of at least one component selected from the group consisting mainly of red blood cells, white blood cells or platelets, or a combination of these components, and a group consisting mainly of plasma or serum. At least one selected liquid component (BLS), the blood cell component (BLC) includes a blood cell component mainly composed of red blood cells, white blood cells and platelets, and the liquid component (BLS) includes a component mainly composed of plasma or serum. .
In the present invention, an aqueous solution (WSL) prepared by dissolving the non-electrolyte or ampholyte or a chemical substance (CS) that is difficult to be charged in water or a solvent (SL) containing little or no electrolyte is prepared, and the aqueous solution (WSL) is prepared. It is used as a means for precipitating blood components mainly containing blood cells.
The aqueous solution (WSL) suppresses the formation of a positively charged layer on the blood cell surface and the repulsion of the blood cells. More specifically, the aqueous solution (WSL) suppresses the formation of a positive charge layer on the blood cell surface in the step (1), and when blood is added to the aqueous solution (WSL), the action of the blood cells It mainly enhances sedimentation of only blood cell components (BLC).
The chemical substance (CS) and the solvent (SL) may be anything as long as they can adjust the aqueous solution (WSL) that can suppress the formation of a positively charged layer on the surface of blood cells and enhance the sedimentation of blood cells.
For example, as the chemical substance (CS) for enhancing blood cell sedimentation, at least one substance selected from the group consisting of non-electrolytes, sugars or polymers, or a substance composed of a combination of these two kinds of substances may be used. it can.
Further, as the chemical substance (CS), at least one substance selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, sugar alcohols, buffers, water-soluble polymers, or a combination of two or more of these substances The substance consisting of can be used.
[0005]
As said chemical substance (CS), glucose, fructose, lactose, galactose, saccharose (sucrose), mannose, mannitol, mebilose, sorbitol, xylitol, xylose, maltose, mannobiose, arabinose, mannoketoheptose, glucoketohe Ptose, galactan, galactomannan, starch, cellulose, deoxyribose, cellobiose, rhamnose, ribose. Mannose, sucrose, fucose, raffinose, stachyose, dextran, maltriose, marcellose, glycerose, pullulan, glycerol, maltitol, adenyl, arabitol, polyvinylpyrrolidone, gelatin, N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid , N, N bis (2-hydroxyethyl) -2aminoethanesulfonic acid, N, N-bis (2-hydroxyethyl) glycine, 2,2-bis (hydroxymethyl) -2,2 ', 2' '- Nitrilotriethanol, 1,3-bis [tris (hydroxymethyl) methylamino] propane, 3- [N, N bis (2-hydroxyethyl) amino] -2-hydroxypropanesulfonic acid, 2- [4- (2- Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid, sodium 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid, N- (2- Roxyethyl) piperazine-N'-3-propanesulfonic acid, N- (2-hydroxylethyl) piperazine-N'-2-hydroxypropane-3-sulfonic acid, 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid, 2- ( N-morpholino) ethanesulfonic acid sodium, 3- (N-morpholino) propanesulfonic acid, 3- (N-morpholino) propanesulfonic acid sodium, 3- (N-morpholino) -2-hydroxypropanesulfonic acid, piperazine-1 , 4-bis (2-ethanesulfonic acid), piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) monosodium, N-tris (hydroxymethyl) methyl-3-aminopropanesulfonic acid, N-tris (hydroxy Methyl) methyl-3-amino-2-hydroxypropanesulfonic acid, N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid, N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid sodium, N- [Tris (Hydroxymethyl) methyl] glycine, polybrene, methylcellulose, or at least one substance selected from the group consisting of two or more of these substances can be used.
[0006]
In addition, the chemical substance (CS) is a solvent (SL) containing no or almost no water or electrolyte, alone or in combination of two or more kinds, and as the aqueous solution (WSL), an osmotic pressure that does not affect cells (for example, 260 to 290 mOsm) And within the pH (eg 6-8).
Further, in the present invention, in addition to the chemical substance (CS), an auxiliary substance (AS) that assists sedimentation of blood cell components and precipitates faster in the aqueous solution (WSL) may be added.
The auxiliary substance (AS) is a substance that specifically interacts with blood cells or a substance that has been chemically modified, and further enhances sedimentation of blood cell components (BLC).
Magnesium which is glycine, lectin, agarose-binding lectin, collagen, adenosine 5′-diphosphate, epinephrine, thrombin, arachidonic acid, ristocetin or divalent cation and has blood coagulation action as the auxiliary substance (AS) Alternatively, a substance that specifically acts on a blood cell component (BLC) comprising at least one substance selected from the group consisting of calcium or a combination of two or more of these substances can be used.
[0007]
In the step (1), after mixing the blood (BL) and the aqueous solution (WSL), the blood cell component (BLC) mainly containing red blood cells, white blood cells and platelets is allowed to stand for 0.5 to 5 minutes. Can be separated into liquid components (BLS) containing mainly diluted plasma or serum.
In the present invention, the liquid component (BLS) and the blood cell component (BLC) are separated by a separating means having a performance capable of capturing the contaminated cell component contained in the liquid component (BLS) without collapsing. You can also.
As the separation means, at least one material selected from the group consisting of carbonaceous, silica carbonaceous, metal compound or glassy, or an inorganic material or a polymer system or fibrous material composed of a combination of two or more of these materials Organic hollow fiber membranes made of at least one material selected from the group consisting of paper, or a combination of two or more materials, flat membranes made of one or more layers, filter papers, tubular membranes, or sponge-like resin foams Alternatively, a column in which a particulate resin composed of the inorganic body or the organic body is laminated can be used.
[0008]
Further, as the material of the separation means, cellulose acetate, nitrocellulose, cellulose acetate, cellulose, polyvinylidene difluoride, polytetrafluoroethylene, polycarbonate, polyether sulfone, polyvinylidene chloride, polypropylene, polyethylene, nylon, polyethylene terephthalate, poly Butylene terephthalate, polysulfone, polyethersulfone, polyvinyl chloride, polyamide, polyimide, acrylic copolymer, polyurethane, polyacrylonitrile, polymethyl methacrylate, ethylene, vinyl alcohol copolymer, polyolefin, polystyrene, silver membrane, glass fiber , Glass wool, glass fiber, quartz fiber, alumina, glass, silica, at least one selected from the group consisting of fluororesins It can be used in the material or material comprising a combination of two or more of these materials.
[0009]
Further, after the blood cell component is precipitated, the diluted plasma obtained by rough separation or the liquid component (BLS) containing a serum component is passed through the separation means by pressurization or suction, and the diluted plasma or Components other than liquid components (BLS) including serum components can be captured.
Any separation means may be used as long as it has a performance (form / material) that can capture a cell component that can be mixed in the liquid component without collapsing after the blood cell component is settled. Can do.
[0010]
  The blood component separation device of the present invention has means for mixing at least a chemical substance (CS) and blood (BL) and allowing it to stand, and can be mixed in the liquid component (BLS) separated after standing There may be separation means for capturing contaminating cell components.
  As means for mixing the chemical substance (CS) and blood (BL), at least (1) the blood component (BL) and the aqueous solution (S) containing the chemical substance (CS) can be mixed and allowed to stand. And at least (1) means for mixing the blood component (BL) and the aqueous solution (S) containing the chemical substance (CS), wherein the plasma or serum component in the blood component is diluted and contained In order to separate the liquid component (BLS), an aqueous solution (WSL) containing a chemical substance (CS) that mainly precipitates the blood cell component in the blood component is stored (also referred to as loading or filling).
  In addition to the means (1), the blood component separation device of the present invention comprises at least (1) a means for mixing the blood component (BL) and the aqueous solution (S) containing the chemical substance (CS) and allowing to stand, (2) Included in the liquid component (BLS) mainly containing plasma or serum component diluted in the solvent (SL) by being separated as a supernatant from the sedimented blood cell component (BLC) after standing Separation means for capturing blood cell components (BLC) (also referred to as contaminated cell components) that may be generated, (3) Pressurization or suction pressure can be generated as means for guiding the liquid component to the separation means Or it has a drive means operated by natural force, and (4) means for storing the liquid component (BLS) to be separated.
  The separation means for capturing the blood cell component (BLC) remaining in the liquid component (BLS) can adopt any of the following forms. The chemical substance (CS) and blood (BL) can be connected to and / or removed from the means for mixing and leaving, or the separation means itself is fixed to the means for containing the liquid component to be separated. Form.
  In the present invention, the means for mixing (1) the blood component (BL) and the aqueous solution containing the chemical substance (CS) and allowing to stand is, for example, molded with a polymer material such as polypropylene or polyethylene or an inorganic material such as glass.

Sealed container

3, 13, 23, 33(In the present specification, it may be referred to as “mixing container”)Any shape can be employed as long as the object of the present invention can be achieved. However, among the containers 23 and 33 (for example, see FIGS. 3 and 4 described later), the separating means 22 and 32 can be connected to the upper part thereof.
In the liquid component (BLS) mainly containing plasma or serum components diluted in the solvent (SL) by separating as a supernatant from the sedimented blood cell component (BLC) after standing (2) Separation means for capturing blood cell components (also referred to as contaminated cell components) (BLC) that may be contained2, 12, 22, 32Means the separation means itself described in paragraph [0007] (for example, a flat membrane, filter paper, hollow fiber, sponge-like resin foam, etc.) or the separation means is disposed in a housing having an outlet and an inlet for blood. Means (for example, see FIGS. 3 and 4 to be described later), and those fixed to the lower part (also referred to as a mouth portion) of the container (also referred to as a cylinder) (for example, see FIGS. Any shape of the housing itself, the housing, and the container (also referred to as a cylinder) can be employed as long as the object of the present invention can be achieved. Further, any shape or arrangement of the filter in the housing or the container (also referred to as a cylinder) can be adopted as long as the object of the present invention can be achieved.
(3) A drive unit (also referred to as drive unit) capable of generating pressurization and suction as a unit for separating liquid components, or a drive unit (also referred to as drive unit) that operates by

natural force

5, 15, 27 , 37 are, for example, the

pistons

27 and 37 of the syringe and the containers (cylinders) 5 and 15 that fit in the container. The piston is in a direction to pressurize, and the container (cylinder) is inserted in the container. Anything can be used as long as it has a function of pressurizing the liquid in the

containers

3, 13, 23 and 33. The (4) means 5, 15, 25, 35 (for example, see FIGS. 1 to 4 described later) for storing the liquid component to be separated after standing is a plasma or serum component diluted and contained in the liquid component A container or the like that can collect the liquid component that is separated by a substance that does not affect the process. For example, a container having a sealing property molded from a polymer material such as polypropylene or polyethylene or an inorganic material such as glass, and any shape can be used as long as the object of the present invention can be achieved. can do. However, the storing means 5 and 15 have the functions of both means as the driving means described in (3) and the separating means described in (2).
The storage means (also referred to as a container) 15 can seal the lower portion with a plug 17 after storing the liquid component.
In the present specification, the storage means 5 and 15 are referred to as “driving unit / collecting container”, and the storage means 25 and 35 are referred to as “collection container” due to the functions of the

respective means

5, 15, 25, and 35 described above. There is.
[0011]
FIGS. 1 to 4 are schematic views showing an example of the blood component separation device of the present invention, which will be described below. The blood component separation device shown in FIGS. 1 to 4 is merely an example, and all blood component separation devices that exhibit the same effects are included in the present invention.
A blood component separation device 1 in FIG. 1 includes a container 3 for mixing a blood component and an aqueous solution S containing a chemical substance, a separation means 2, a drive unit, and a container 5 for collecting a separated liquid component.
The container 5 has a structure (for example, the outer diameter of the container 5 is formed to be the same as or slightly smaller than the inner diameter of the container 3) that can be inserted into the container 3 by either driving with artificial pressure or by lowering by natural force. In addition, it has a structure (for example, a mounting groove for the separating means 2 is formed) in which the separating means 2 is fixed to the lower part (also referred to as an opening). In addition, the drive unit and the container 5 for collecting the separated liquid component are inserted into the container 3, so that the solution in the container 3 is pressurized and passed through the separating means 2 to mainly dilute plasma. Or it is an apparatus which can isolate | separate the liquid component containing a serum component.
The upper part of the container 3, the driving part, and the upper and lower parts of the container 5 for collecting the separated liquid components are molded from a polymer material such as polypropylene and polyethylene and an inorganic material such as glass in order to maintain hermeticity.

Caps

6A and 6B are mounted. The separating means 2 is, for example, a flat membrane 2M (or filter paper or hollow fiber) fixed to the drive unit and the lower part of the container 5 for collecting separated liquid components.
The blood component separation device 1 of FIG. 1 can separate blood components in the following order, for example.
(1) The upper cap 6B of the container 3 containing the aqueous solution containing the chemical substance is removed, and blood is added to the container 3.
(2) The cap 6B is attached to the container 3 again, falls down, mixes blood and an aqueous solution containing a chemical substance, and is allowed to stand.
(3) By allowing to stand, it is separated into a sedimented blood cell component and a liquid component containing mainly diluted plasma or serum component in the container 3.
(4) Remove the cap 6 A at the top of the container 5, artificially pressurize or lower naturally, and insert into the container 3.
(5) A liquid component mainly containing plasma or serum component diluted by the separation means 2 fixed to the container 5 is collected in the container 5 through the membrane 2M.
(6) After the container 5 is completely inserted into the container 3, the cap 6A is attached to the upper part of the container 5 again to seal the inside of the container.
[0012]
The blood component separation device 11 in FIG. 2 is a device that performs separation by artificial pressurization or natural force drop. FIG. 2A is a schematic view (cross-sectional view) of the apparatus 1, and FIG. 2B is a plan view of the container 15. Compared with the blood component separation device 1 of FIG. 1, the blood component separation device 11 is for completely separating the liquid component containing mainly diluted plasma or serum component to be separated from the precipitated blood cell component. , A support rod under the cap 16A16A2And attach the support rod16A2A plug body 17 is attached to the tip of each. These support kites16A2The stopper 17 plays the same role as the

pistons

27 and 37 of the syringe shown in FIGS.
 By attaching the cap 16A to the upper part of the container 15, the plug 17 closes the driving part and the lower part of the container 15 for collecting the separated liquid component, and completely removes blood cell components and liquid components that have settled in the container 13. Can be separated. The container 15 is hermetically sealed by the cap 16 A and the plug 17 and can be detached from the container 13.
 Compared to FIG. 1, when the plug body 17 is newly inserted into the container 13, a liquid passage groove 18 for passing the separated liquid component to the upper part of the plug body 17 and the plug body 17. A stopper 19 for sealing the inside of the container 13 is provided. The separation means 12 is, for example, a flat membrane 12M (or filter paper, hollow fiber, etc.) fixed to the drive unit and the lower part of the container 15 for collecting liquid components to be separated.
 The blood component separation device 11 in FIG. 2 can separate blood components in the following order, for example.
 (1) Remove the cap 16B on the top of the container 13 containing the aqueous solution containing the chemical substance, and add blood to the container 13.
 (2) The cap 16B is attached to the container 13 again, falls down, mixes blood and an aqueous solution containing a chemical substance, and is allowed to stand.
 (3) The container 13 is fractionated into a blood cell component that has settled and a liquid component that mainly contains diluted plasma or serum components by allowing to stand.
 (4) The upper cap 16A of the container 15 is removed, and the container 15 is artificially pressurized or naturally lowered and inserted into the container 13.
 (5) By the separation means 12 fixed to the container 15, mainly diluted plasma or serum components are collected in the container 15 through the membrane 12M.
 (6) After the drive unit and the container 15 are completely inserted into the container 13, the stopper 17 is inserted into the container 15 while slowly attaching the cap 16 A to the upper part of the container 15.
 (7) The liquid component separated by the liquid flow groove 18 in the container 15 is passed through the upper part of the plug body 17.
 (8) Insert the stopper 17 until it reaches the stopper 19 in the lower part of the container 15.
[0013]
 The blood component separation device 21 in FIG. 3 is a device capable of separating a liquid component containing mainly diluted plasma or serum components in the container 23 using a pressurizing force.
 Compared with the blood component separation device 11 of FIG.DrivingIt has a drive unit 27 such as a moving piston. The separating means 22 is, for example, a flat membrane 23M (or filter paper, hollow fiber, etc.) disposed in a housing 23H having an inlet and an outlet for liquid components. The housing 23 H has a structure that can be attached to and detached from the mouths of the container 23 and the container 25.
 The blood component separation device 21 in FIG. 3 can separate blood components in the following order, for example.
(1) The cap 26B of the container 23 containing the aqueous solution containing the chemical substance is removed, and blood is added to the container 26.
(2) The cap 26B is attached to the container 23 again, and the container is turned over to mix blood and an aqueous solution containing a chemical substance, and left to stand.
(3) By standing, in the container 26, the blood cell component settled and the liquid component containing mainly diluted plasma or serum component are fractionated.
(4) Remove the cap 26A at the top of the container 25.
(5) of the separation means 22The first connecting portion 22A1 and the second connecting portion 22A2 areThe upper part of the container 23 and the lower part of the container 25 are attached.
(6) The inside of the container 23 is pressurized by pushing the driving unit 27, and mainly diluted plasma or serum components are collected in the container 25 through the membrane 22M by the separation means 22.
[0014]
 The blood component separation device 31 in FIG. 4 is a device that can separate a liquid component containing mainly diluted plasma or serum components in the container 33 by applying pressure.
 Compared to the blood component separation device 21 of FIG. 3, a connecting portion 38 having a connecting needle 38A having a cap 36A attached to the upper portion of a container 35 for collecting the separated liquid component is disposed.
 In place of the flat membrane or filter paper of the membrane 22M of the separation means 21 illustrated in FIG. 3, the separation means 32 is separated from the hollow fiber membrane 32M in the container 33 mainly through the liquid component inlet and the separation membrane 32M. It is the Example arrange | positioned in the housing 32H which has the exit of the liquid component isolate | separated by this.
 Describing in detail with reference to the illustration of FIG. 4, the lower part of the housing 32 H has an inlet of an inner solution separated in the container 33 (having a liquid passage and introduces the liquid into the hollow fiber membrane 32 M).First connection32A), on the right side is an outlet for discharging the liquid component separated by the hollow fiber 32M (has a liquid passage and discharges the liquid to the container 35).Second connection32D) are mounted. In addition,

ventilation portions

32B and 32C having materials and structures that do not transmit the internal solution of the container 33 that passes through the separation means 32 or the liquid component discharged to the outside of the separation means 32 are mounted on the left side and the top, respectively. Further, sheet-

like sealing members

34A and 34B are attached to the

ventilation portions

32B and 32C, respectively, and the

ventilation portions

32B and 32C are sealed with the sealing

materials

34A and 34B until the inside of the housing 32H is vented to the outside air. It is the state that was done.
As described above, in the blood

component separation devices

1, 11, 21 illustrated in FIGS. 1 to 8, the separation means 2, 12, 22 or the housing 22H (a flat membrane, filter paper, etc. are arranged inside). Instead of this, it is also possible to use the housing 32H of this embodiment (a configuration in which the hollow fiber membrane 32M is disposed). Conversely, in the blood component separation device 31 of the present embodiment, instead of the housing 32H of the separation means 32 (the form in which the hollow fiber membrane 32M is disposed), the blood component separation devices 1, 11 illustrated in FIGS. 21 to the housing 22H (in which a flat membrane, filter paper or the like is disposed) can be used.
The blood component separation device 31 in FIG. 4 can separate serum components in the following order, for example.
(1) The upper cap 36B of the container 33 containing the aqueous solution containing the chemical substance is removed, and blood is added to the container 33.
(2) The cap 36B is attached to the container 33 again, falls down, mixes blood and an aqueous solution containing a chemical substance, and is allowed to stand.
(3) By standing, it is fractionated in the container 33 into a sedimented blood cell component and a liquid component mainly containing diluted plasma or serum components.
(4) The separation means 32 is attached to the container 33.
(5) Remove the sealing material 34A from the ventilation portion 32B above the separation means 32 to make it ventable.
(6) Press the drive unit 37 to pressurize the solution in the container 33 and pass it through the separation means 32.
(7) By the separation means 32, mainly diluted plasma or serum components are collected in the container 35 through the membrane 32M.
(8) The ventilation part 32B above the separating means 32 is again sealed with the sealing material 34B, and the sealing material 34A of the adjacent ventilation part 32C is removed.
(9) Remove the cap 36A on the top of the container 35, and connect the connecting portion 38 of the container 35 and the separating means 32Second connectionThe liquid component separated in the separation means 32 is collected in the container 35.
(10) The separating means 32 and the container 35 are removed, the container 35 is removed from the container 35, and the container 35 is sealed again with the cap 36A.
[0015]
Example 1.
In this example, an aqueous solution is prepared using several kinds of chemical substances, and after blood is added, the sedimentation of blood cell components is enhanced, and the liquid mainly consisting of blood cells and mainly plasma or serum is about 10 minutes. It was carried out in order to investigate whether or not it could be separated into components.
In this example, the following materials were used.
Using human blood, 10% maltose aqueous solution, 5% and 20% mannitol aqueous solution, 2.25% glycine aqueous solution, 3.6% trisaminomethane aqueous solution, 20% polyvinylpyrrolidone aqueous solution, 3% polyvinylpyrrolidone / 5% sorbitol as an aqueous solution containing chemical substances Aqueous solution, 2.45% polyvinylpyrrolidone / 4.25% sorbitol aqueous solution, 0.1% methylcellulose / 5% mannitol aqueous solution, 0.1% methylcellulose / 5% HEPES (2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanethril phonic acid) Aqueous solution, 5% ACES (N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid) buffer, 5% MOPS (3- (N-morpholino) propanesulfonic acid) buffer, 6% BES buffer ((N , N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid), 7% HEPES (2- [4-2 (hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid) buffer, 10% dextran 10% Maltose / Rin Acid buffer solution, 5% and 20% mannitol / phosphate buffer solutions were used for adjustment, and commercially available physiological phosphate buffer saline solution (PBS (-)), physiological saline solution, 10% dextran injection solution, red blood cells The preservation solution MAP solution, whole blood solution preservation solution ACD solution, CPD solution or CPDA-1 solution was used as they were.
If necessary, use plastic as a container for mixing aqueous solutions containing chemicals and blood.
A 1 mL syringe (manufactured by Terumo Corp.) was used as a container (Eiken Tube No. 1 / Eiken Equipment Co., Ltd.) and a mixed solution for leaving the mixed solution.
When blood is added to various aqueous solutions, it is separated from blood cell components and plasma or serum components in any aqueous solution by leaving them by gravity applied to the blood cell components. However, as time passes, the components in plasma or serum are affected, and separation in a short time is required.
Therefore, the conditions under which blood cell components settled within about 10 minutes after mixing the solution containing blood and chemical substances were examined and judged to be separable. Items that took 10 minutes or more were judged to be inseparable.
[0016]
A specific blood separation method is as follows.
1. Each aqueous solution was prepared using the chemical substances to be studied.
2.1. The aqueous solution prepared in step 1 was dispensed into Eiken tubes.
3.2. In the Eiken tube, blood was added so that the aqueous solution and blood had a ratio of 1: 5.
4. Use a 1 mL syringe. The solution mixed in was collected.
5). The syringe was set up and allowed to stand to determine whether separation was possible.
The results are shown in Table 1. (Separable is indicated by ○, and non-separable is indicated by ×)
Sedimentation of blood cell components was confirmed in 13 types of aqueous solutions, and blood cell components and plasma components were separated within 10 minutes. However, when the same substance was dissolved in the phosphate buffer, separation could not be confirmed due to the electrolyte in the buffer. In addition, the commercially available aqueous solution was not separated either because it contained an electrolyte.
[0017]
[Table 1]

[0018]
Example 2
In this example, an auxiliary substance that promotes blood cell sedimentation was mixed with a chemical substance that causes blood cell sedimentation to form an aqueous solution, and this was carried out in order to examine whether or not a difference was observed in the sedimentation depending on whether or not the auxiliary substance was added.
In this example, the following materials were used.
Using human blood, magnesium chloride was added as a chemical substance to a 5% mannitol aqueous solution as an auxiliary substance so that the magnesium ion concentration would be 0.5, 1, 2, 5, 7.5, 10 meq / L.
In addition, a plastic container (Eiken Tube No. 1 / Eiken Equipment Co., Ltd.) was used as a container for mixing chemical substances and auxiliary substances and blood as necessary and allowing them to stand.
If it was earlier than the settling time when no auxiliary substance was added, it was judged to be effective as an auxiliary substance that shortened the settling time.
A specific blood separation method is as follows.
1. The chemical substance mannitol that precipitates blood cell components and the auxiliary substance magnesium chloride are mixed, the final concentration of mannitol is fixed at 5%, and the magnesium chloride concentration is 0.5, 1, 2, 5, 7.5, 10 meq / L. Each aqueous solution was prepared. As a control, an aqueous solution containing only 5% mannitol was prepared.
2.1. The aqueous solution prepared in step 1 was dispensed into Eiken tubes.
3.2. In the Eiken tube, blood was added so that the aqueous solution and blood had a ratio of 1: 5.
4). The Eiken tube was left as it was, and the sedimentation rate was compared with that without magnesium chloride.
The results are shown in Table 2.
It was confirmed that the precipitation of blood cell components was faster in all the aqueous solutions to which magnesium chloride was added than in the case where magnesium chloride was not added.
[0019]
[Table 2]

[0020]
Example 3 FIG.
In this example, blood and an aqueous solution containing a chemical substance are mixed and left to stand to mainly precipitate blood cell components. In the supernatant, a liquid component and blood cell component mainly containing diluted plasma or serum components. In order to finally separate only the liquid component, whether or not the remaining blood cell component can be captured by some separation means was examined.
In this example, the following materials were used.
Porous polymer flat membrane (hydrophilic polyvinylidene difluoride, nitrocellulose, hydrophilic polytetrafluoroethylene) as separation means using human blood: diameter 13mm, pore diameter 0.65-2.0μm, inorganic glass filter paper: Diameter 13mm, retention particle size 0.4-0.8μm, 5% mannitol aqueous solution as chemical for precipitating blood cell components, syringe (2.5mL) as driving means, tip opening as means for mixing blood and aqueous solution containing chemical substances A syringe (5 mL) with a sealed part and a separator were fixed to a syringe (2.5 mL) as driving means using silicon rubber.
The specific blood component separation method is as follows.
1. The piston of the 5 mL syringe was pulled out and set with the tip opening facing down.
2. A 5% mannitol aqueous solution was placed in a 5 mL syringe, and blood was added.
3. The mixture was allowed to stand for 5 minutes to precipitate blood cell components.
4). A 2.5 mL syringe with the separated body fixed was pushed into a 5 mL syringe, and a liquid component mainly containing plasma or serum components was collected into the 2.5 mL syringe through the separated body.
5). A blood cell measurement of the liquid component before separation and the collected liquid component was performed to confirm the possibility of separation.
The results are shown in Table 3.
[0021]
Details of the porous separator used in the test are as follows.
1. Hydrophilic polyvinylidene difluoride filter (PVDF): Diameter 13mm, pore diameter 0.65μm
2. Nitrocellulose filter: Diameter 13mm, pore size 0.8, 1.2μm
3. Hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE): Diameter 13mm, pore diameter 1.2μm
4). Glass fiber filter: Diameter 13mm, retention particle size 0.4, 0.5, 0.6, 0.8μm
[0022]
[Table 3]

[0023]
Example 4
In this example, a plasma component was separated from blood using a 5% mannitol aqueous solution and a 10% maltose aqueous solution, and the separated plasma components (TP, ALB, GOT, GPT, γ-GTP, T-CHO, TG, HDL- C, BUN, CRNN, UA, GLU) were analyzed.
In this example, the following materials were used.
Human whole blood was used as a blood component. Eiken tube (manufactured by Eiken Kikai Co., Ltd.) as a solution that mixes blood and chemical substances, 1 mL syringe (manufactured by Terumo) as a container to be left after mixing, and separation means for capturing some blood cell components remaining in the separated plasma As a test, a PVDF membrane filter (Milipore) having a pore size of 0.25 μm was used.
As an apparatus for measuring plasma components, an automatic analyzer BM-2000C manufactured by JEOL Ltd. was used.
[0024]
The specific blood component separation method is as follows.
1. Each aqueous solution was prepared and dispensed into the Eiken tube.
2. Blood was added to the Eiken tube so that the mixing ratio of blood to the aqueous solution containing the chemical substance was 1: 5.
3. Use a 1 mL syringe. The solution mixed in was collected and left standing.
4). When blood cell components settled, a filter was connected to the tip of the syringe.
5). The syringe was pressurized, and the separated plasma was dispensed into the analyzer cup while passing through the filter.
6). The 12 plasma components were measured with an automatic analyzer BM-2000C.
7. Contrasting with the value obtained by diluting blood at the same ratio using raw food instead of chemical substances was obtained.
The results are shown in Table 4.
All the plasma components separated by mannitol showed a coincidence rate of almost 80% or more with the measured value of the control, and it was judged that there was no influence of the plasma components by the separation method or operation.
On the other hand, the plasma components separated by maltose are nearly 90% consistent with the control measurements for all items other than TP and glucose, but the measured values for TP and glucose are more than 130% of the control measured values. It was confirmed that there was some influence on the measurement system at 190% or more. Since maltose has a structure in which two molecules of glucose are bonded, it is considered that the glucose concentration was affected. Therefore, it is considered desirable to use mannitol in actual specifications.
[0025]
[Table 4]

[0026]
[Effects of the invention]
(1) By using the present invention, a basic biochemical test can be performed without using a serum separation method or a plasma separation method, which has been a heavy burden on both the conventional and complicated side of the test. Can now.
(2) For example, nearly 10 mL of blood, which was necessary for conventional tests, can be obtained as blood and plasma in the order of μL, and since it is a trace amount, it is not necessary to visit a medical institution. Anyone can take the test at any time, so the burden on the subject is very light.
(3) Moreover, it is not a complicated means as in the past, but is a very easy method. Therefore, it is not necessary for a qualified person to perform the sample processing, and the burden on the inspection side can be considerably reduced.
(4) In particular, when the subject himself / herself separates plasma or serum, the examiner simply arranges the specimen on an autosampler of the analyzer, etc., and the examination cost can be reduced.
(5) Since the substance used is not special and does not affect blood cells or plasma components, it is possible to obtain highly reliable results that are not inferior to conventional test results.
(6) Unlike the method of the home inspection tool using the paper chromatograph invented so far, this method has no complicated method until the inspection required in the method, and as described above, no one Is an easy way.
(7) Although a device capable of analyzing with a small amount of plasma is required, it will not be a problem in the future if the function of today's analyzer is improved, and has the advantage that it can be measured by any machine. .
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a schematic diagram showing an example of a blood component separation device of the present invention.
2A and 2B are schematic views showing an example of a blood component separation apparatus of the present invention ((A) is a schematic view (cross-sectional view) of the apparatus 1 and (B) is a plan view of a container 15).
FIG. 3 is a schematic view showing an example of a blood component separation device of the present invention.
FIG. 4 is a schematic view showing an example of a blood component separation device of the present invention.
[Explanation of symbols]
1, 11, 21, 31 Blood component separation device
2, 12, 22, 32 Separation means
22A1 first connection part
22A2 second connection part
32A first connection part
32D second connection
32B, 32C Ventilation part
2M, 12M, 22M, 32M membrane (flat membrane or filter paper or hollow fiber)
22H, 32H housing
3, 13, 23, 33 Means (containers) for mixing a solution containing blood and a chemical substance
34A, 34B Sealing material
5, 15 Means for collecting liquid components including mainly diluted plasma or serum components to be separated (driving unit and collection container)
25, 35 Means for collecting liquid components containing mainly diluted plasma or serum components to be separated (collection containers)
6A, 6B, 16A, 16B, 26A, 26B, 36A, 36B Cap
16A Drive unit for inserting plug
16A2 support rod
17 Plug
27, 37 Drive unit
18 Fluid passage
28 Connecting part
19 Stop stopper
S Aqueous solution containing blood and chemical substances

Claims

A mixing container (3) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS);
A drive unit and collection container (5) that is mounted in the mixing container (3), drives up and down in the mixing container (3), and collects the supernatant plasma (serum) component after separation. And
The mixing container (3) is opened at the top and sealed at the bottom, and a cap (6B) is attached to the opening at the top .
The drive / collecting container (5) has an upper opening, and a separation means (2) for capturing blood cell components that may be contained in the supernatant plasma (serum) component in the mixing container (3) at the lower part. ), And a cap (6A) is attached to the upper opening ,
The lower part of the drive unit / collection container (5) is inserted into the mixing container (3) from above, and the drive unit / collection container (5) is driven downward so that the solution in the mixing container (3) is obtained. Pressurize
The solution through the separating means (2), was formed so as to be able to mainly separate collecting liquid component containing the diluted plasma or serum components to the drive unit and collection container (5) inside, and characterized in that Blood component separation device (1).

A mixing container (13) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS);
It is composed of a drive unit / collecting container (15) mounted in the mixing container (13) and driven up and down in the mixing container (13) and collecting the liquid component after separation.
The mixing container (13) is opened at the top and sealed at the bottom, and the cap (16B) is attached to the opening at the top.
The drive unit / collection container (15) is opened at the top, and at the bottom, separation means (12 for capturing blood cell components that may be contained in the plasma (serum) component of the supernatant in the mixing container (13). )
A liquid passage groove (18) is formed in the side wall in the longitudinal direction in the drive unit and collection container (15), and a stopper (19) is formed in the lower part in the drive unit and collection container (15). ,
A support rod (16A2) is attached to the lower part of the cap (16A) of the drive / collecting container (15), and a plug (17) is attached to the tip of the support rod (16A2) ,
The drive unit / collection container (15) is inserted from the upper opening of the mixing container (13), and the drive unit / collection container (15) is driven downward to remove the solution in the mixing container (13). Pressurize,
The solution was formed so that the liquid component containing mainly diluted plasma or serum component could be separated and collected in the drive unit and collection container (15) through the separation means (12).
A blood component separation device (11) characterized by the above.

A mixing vessel (23) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS), a collection vessel (25) for collecting the separated liquid component,
It has a first connection part (22A1) that can be attached to and detached from the mixing container (23) and a second connection part (22A2) that can be attached to and detached from the collection container (25), and the supernatant in the mixing container (23) Separating means (22) for capturing blood cell components that may be contained in plasma (serum) components ,
The mixing container (23) has an upper part and a lower part opened, a cap (26B) is attached to the upper opening, and a drive unit (27) that is driven up and down is attached to the inside of the mixing container (23),
The collection container (25) is open at the top and bottom, and a cap (26A) is attached to the top opening .
The upper opening of the mixing container (23) is connected to the first connection portion (22A1) of the separation means (22), and the collection container (25) is connected to the second connection portion (22A2) of the separation means (22). Connect the bottom opening)
Wherein by driving the driving unit (27), pressurizes the solution of the mixing vessel (23) in through the separating means the solution (22), a liquid component comprising a predominantly diluted plasma or serum component A blood component separation device (21), wherein the blood component separation device (21) is formed so as to be separated and collected in the collection container (25).

A mixing container (33) of an aqueous solution (S) containing a blood component (BL) and a chemical substance (CS), a collecting container (35) for collecting the liquid component after separation,
It has a first connection part (32A) that can be attached to and detached from the mixing container (33) and a second connection part (32D) that can be attached to and detached from the collection container (35), and the supernatant in the mixing container (23) Separating means (32) for capturing blood cell components that may be contained in plasma (serum) components ,
The mixing container (33) is open at the top and bottom, and a cap (36B) is attached to the upper opening, and a drive unit (37) for driving up and down is installed inside the mixing container (33) .
It said collection container (35), the upper, the connecting portion between the second connecting part of the separating means (32) (32D) equipped with (38A), to the connecting portion (38A), mounted cap (36A) And the lower part is blocked
Connecting the mixing container (33) to the first connecting part (32A ) of the separating means (32), connecting the sampling container (35) to the second connecting part (32D) ,
Wherein by driving the driving unit (37), pressurizes the solution of the mixing vessel (33) through the separating means the solution (32), a liquid component comprising a predominantly diluted plasma or serum component A blood component separation device (31), which is formed so as to be separated and collected in a collection container (35).