JP4371431B2 - 抗アレルギー性組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、植物抽出液、詳細にはコウジュ、なかでもホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキスを含有する抗アレルギー性組成物に関する。
生体には、本来的に恒常性の維持機能、自然治癒機能を有しており、様々な内的及び外的な環境変化に対応し得る機能を有しているが、近年の生活環境の劇的な変化、複雑さから、アレルギー疾患（各種の花粉症、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、小児喘息等）に悩んでいる人たちが急増している。
このアレルギー症状の発症には、分子生物学的には、肥満細胞や、好塩基球などから脱顆粒により遊離されるヒスタミン、或いはＩ型アレルギー反応によって産生されるロイコトリエンなどのケミカルメディエーターや、これら細胞から産生されるＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインが深く関係しているといわれている。
このアレルギー症状の発症には、分子生物学的には、肥満細胞や、好塩基球などから脱顆粒により遊離されるヒスタミン、或いはＩ型アレルギー反応によって産生されるロイコトリエンなどのケミカルメディエーターや、これら細胞から産生されるＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインが深く関係しているといわれている。
したがって、アレルギー疾患の治療薬としては、抗ヒスタミン剤などがもっとも一般的に使用されているが、花粉症による鼻つまりには効果が無く、また、抗ヒスタミン剤には本来的に眠気、めまい、倦怠感などの副作用が生じやすいという問題点がある。
そのため、これらの副作用のない、より効果的な抗アレルギー剤の開発が望まれているが、いまだ有効な抗アレルギー剤が登場していないのが現状である。
そのため、これらの副作用のない、より効果的な抗アレルギー剤の開発が望まれているが、いまだ有効な抗アレルギー剤が登場していないのが現状である。
本発明者らは、従来から抗アレルギー作用物質の検索を積極的に行ってきた中で、その素材として天然植物が有する薬理活性に注目してきている。すなわち、天然植物には種々の薬理活性が認められているが、本発明者らは広く天然物より抗アレルギー作用を有する物質のスクリーニングを行った結果、コウジュが有する薬理効果に注目した。
コウジュ（生薬名）は、ホソバヤマジソの全草をいい、ホソバヤマジソ（学名：Mosla chinensis Maxim.）は、シソ科（Labiatae）のイヌコウジュ（Mosla）属に属する一年草であり、わが国においては中国地方から九州北部に僅かに確認されているのみであるが、朝鮮半島及び中国大陸などでは広い範囲で分布する植物である。
コウジュ（Xiangru）は、中国においては、夏風邪、発熱、頭痛、腹痛、下痢などの症状に対して用いられている（非特許文献１）。
コウジュ（Xiangru）は、中国においては、夏風邪、発熱、頭痛、腹痛、下痢などの症状に対して用いられている（非特許文献１）。
このホソバヤマジソの揮発性成分に対する報告は、これまで多くあり、チモ−ルやカルバクロールなどの成分を多く含んでおり、その強い抗菌作用が報告されている（非特許文献２、特許文献１）。
一方、ホソバヤマジソの非揮発成分に関する報告は少なく、僅かにその成分として数種類のフラボノイドを同定しているに過ぎない（非特許文献３）。
一方、ホソバヤマジソの非揮発成分に関する報告は少なく、僅かにその成分として数種類のフラボノイドを同定しているに過ぎない（非特許文献３）。
今回本発明者らは、このコウジュとして知られているホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスに優れたケミカルメディエーター遊離抑制作用並びに肥満細胞や、好塩基球などからの脱顆粒阻害作用があり、したがって、優れた抗アレルギー作用があることを新規に見出し、本発明を完成させるに至った。
様々な植物において抗アレルギー効果を有する物質の探索が行われているが、中でもシソ科シソ（Perilla frutescens）には優れた抗アレルギー作用が報告されており、機能性食品として利用されつつある（特許文献２、特許文献３）。また、最近、同じシソ科の植物であるヒメジソ（Mosla dianthera）の抗アレルギー作用についての報告があるが（非特許文献４）、ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスがケミカルメディエーター遊離抑制作用並びに肥満細胞や、好塩基球などからの脱顆粒阻害作用に基づく抗アレルギー作用を有することは本発明者等によって初めて確認されたものであり、その点で本発明は特異的なものである。
特開２００１−３４２１０６号公報
特許３０７１６６９号公報
特許３３０２３０２号公報
中華人民共和国葯典、２００５年版、１８２−１８３頁
中葯大辞典、１９８５、１４２１−１４２２頁、小学館
Indian Journal of Chemistry, 35:392-294, 1996
Toxicology and Applied Pharmacology, 216(2006), 479-484
なお、中国葯典ではホソバヤマジソの全草をコウジュ（生薬名）として記載しており、また、流通生薬のコウジュもホソバヤマジソが一般的である。しかしながら、古い葯典においては、ホソバヤマジソに似たナギナタコウジュ（シソ科ナギナタコウジュ属、学名：Elsholtzia ciliata Hylander, Elsholtzia splendens Nakai ex F. Maekawa）をコウジュとして記載していた経緯もあり、中国では地域によってはナギナタコウジュをコウジュとして用いている場合もある。また、本邦においても、ナギナタコウジュ、或いはイヌコウジュ（シソ科イヌコウジュ属、学名：Mosla punctulata）をコウジュとして扱う場合もある。
したがって、本明細書においては、コウジュとは一般的にはホソバヤマジソ（Mosla chinensis Maxim.）のことを意味するが、特に断らない限り、広くはナギナタコウジュ、イヌコウジュも包含してコウジュと称する。
したがって本発明は、上記現状に鑑み、生薬であるコウジュ、特にホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの薬理作用の検討に基づき、その抽出エキスが有する、優れたケミカルメディエーター遊離抑制作用並びに肥満細胞や、好塩基球などからの脱顆粒阻害作用に基づく抗アレルギー作用による抗アレルギー組成物を提供することを課題とする。
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的態様として、コウジュの溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とするケミカルメディエーター遊離抑制剤である。
より詳細には、本発明は、当該ケミカルメディエーターが、ヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン、ＴＮＦ−αから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とするケミカルメディエーター遊離抑制剤である。
より詳細には、本発明は、当該ケミカルメディエーターが、ヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン、ＴＮＦ−αから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とするケミカルメディエーター遊離抑制剤である。
また本発明は別の基本的態様として、コウジュの溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とする脱顆粒阻害剤である。
すなわち、より具体的な本発明は、抽出対象となるコウジュがホソバヤマジソ又はナギナタコウジュ、好ましくはその全草乾燥物であり、抽出溶媒が、水、低級アルコール又は低級アルコールと水との混合溶媒であるケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤である。
その中でも、より好ましい具体的な本発明は、抽出溶媒である低級アルコールがエタノールであるケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤である。
その中でも、より好ましい具体的な本発明は、抽出溶媒である低級アルコールがエタノールであるケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤である。
したがって、最も好ましい本発明は、特に、ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの全草乾燥物のエタノール抽出エキスを有効成分とすることを特徴とするケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤である。
また本発明は、別の態様として上記のケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤を含有する抗アレルギー性組成物である。
すなわち、より詳細には、生薬であるコウジュの溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー性組成物であり、特に、コウジュがホソバヤマジソ又はナギナタコウジュである抗アレルギー性組成物である。
すなわち、より詳細には、生薬であるコウジュの溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー性組成物であり、特に、コウジュがホソバヤマジソ又はナギナタコウジュである抗アレルギー性組成物である。
より具体的には、抽出対象となるコウジュがホソバヤマジソ又はナギナタコウジュ、好ましくはその全草乾燥物であり、抽出溶媒が、水、低級アルコール又は低級アルコールと水との混合溶媒である抗アレルギー性組成物である。
その中でも、より好ましい具体的な本発明は、抽出溶媒である低級アルコールがエタノールである抗アレルギー性組成物である。
その中でも、より好ましい具体的な本発明は、抽出溶媒である低級アルコールがエタノールである抗アレルギー性組成物である。
したがって、最も好ましい本発明は、特に、ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの全草乾燥物のエタノール抽出エキスを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー性組成物である。
また本発明は別の態様として、上記した抗アレルギー性組成物を含有する食品、なかでも特定保健用食品であり、また、上記した抗アレルギー性組成物を含有する医薬である。
更に本発明は、また別の態様として、上記した抗アレルギー性組成物を含有する化粧料であり、また飼料でもある。
本発明が提供するホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキス（以下、広く、コウジュの溶媒抽出エキスを含め、単に「抽出エキス」と記す場合もある）を有効成分とするケミカルメディエーター遊離抑制作用並びに脱顆粒阻害作用に基づく抗アレルギー組成物は、後記する試験例からも判明するように、
（１）肥満細胞及び好塩基球から脱顆粒阻害により産生するヒスタミン、或いはＩ型アレルギー反応によって産生されるロイコトリエン等のケミカルメディエーターの遊離を抑制する効果を有する。
（２）肥満細胞及び好塩基球からＴＮＦ−αの産生を阻害する効果を有する。
（３）アレルギー性鼻炎モデルマウスのアレルギー症状を緩和する効果を有する。
（４）アレルギー性鼻炎モデルマウスの体重減少を抑える効果（全身的な機能低下の改善）を有する。
したがって、本発明の抽出エキスを含有する抗アレルギー性組成物を応用して、日常生活の中で気軽に摂取できる安全性の高い抗アレルギー剤（医薬品、健康食品、化粧品）を提供できる利点を有している。
（１）肥満細胞及び好塩基球から脱顆粒阻害により産生するヒスタミン、或いはＩ型アレルギー反応によって産生されるロイコトリエン等のケミカルメディエーターの遊離を抑制する効果を有する。
（２）肥満細胞及び好塩基球からＴＮＦ−αの産生を阻害する効果を有する。
（３）アレルギー性鼻炎モデルマウスのアレルギー症状を緩和する効果を有する。
（４）アレルギー性鼻炎モデルマウスの体重減少を抑える効果（全身的な機能低下の改善）を有する。
したがって、本発明の抽出エキスを含有する抗アレルギー性組成物を応用して、日常生活の中で気軽に摂取できる安全性の高い抗アレルギー剤（医薬品、健康食品、化粧品）を提供できる利点を有している。
本発明において、有効成分である抽出エキスを構成するホソバヤマジソ（Mosla chinensis Maxim.）は、上記したように、シソ科（Labiatae）のイヌコウジュ（Mosla）属に属する一年草である。わが国では中国地方から九州北部に僅かに確認されているのみであるが、朝鮮半島及び中国大陸などでは広い範囲で分布する植物である。
このホソバヤマジソは、その乾燥生薬名はコウジュ（Xiangru）と呼ばれ、中国においては、夏風邪、発熱、頭痛、腹痛、下痢などの症状に対して用いられている漢方薬成分の一つである。
また、ナギナタコウジュ（シソ科ナギナタコウジュ属、学名：Elsholtzia ciliata Hylander, Elsholtzia splendens Nakai ex F. Maekawa）については、これをコウジュとして記載していた経緯もあり、中国では地域によってはナギナタコウジュをコウジュとして用いている場合もある。また、本邦においても、ナギナタコウジュ、或いはイヌコウジュ（シソ科イヌコウジュ属、学名：Mosla punctulata）をコウジュとして扱う場合もある。
このホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキスに抗アレルギー作用があることは、今まで知られておらず、その点で本発明は特異的なものである。
このホソバヤマジソは、その乾燥生薬名はコウジュ（Xiangru）と呼ばれ、中国においては、夏風邪、発熱、頭痛、腹痛、下痢などの症状に対して用いられている漢方薬成分の一つである。
また、ナギナタコウジュ（シソ科ナギナタコウジュ属、学名：Elsholtzia ciliata Hylander, Elsholtzia splendens Nakai ex F. Maekawa）については、これをコウジュとして記載していた経緯もあり、中国では地域によってはナギナタコウジュをコウジュとして用いている場合もある。また、本邦においても、ナギナタコウジュ、或いはイヌコウジュ（シソ科イヌコウジュ属、学名：Mosla punctulata）をコウジュとして扱う場合もある。
このホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキスに抗アレルギー作用があることは、今まで知られておらず、その点で本発明は特異的なものである。
本発明において、その有効成分である抽出エキスを調製するに当たって、そのホソバヤマジソ又はナギナタコウジュとしては、例えば、茎、葉、花、果実等の各部分の乾燥物、或いはこれらを含めた全草乾燥物であり、好ましくは全草乾燥物を使用するのがよい。
抽出に当たっては、当該乾燥物を適当に裁断し、溶媒抽出を行うのがよい。抽出に使用する溶媒として、水、低級アルコール又は低級アルコールと水との混合溶媒がよく、特にエタノールを使用して抽出するのが好ましい。
熱水を用いて抽出すること、或いは低級アルコールと水との混合溶媒を用いて抽出することも可能であるが、本発明者らの検討によれば、抽出エキスが有する抗アレルギー作用は、特にエタノール抽出エキスのほうが強いものであった。
熱水を用いて抽出すること、或いは低級アルコールと水との混合溶媒を用いて抽出することも可能であるが、本発明者らの検討によれば、抽出エキスが有する抗アレルギー作用は、特にエタノール抽出エキスのほうが強いものであった。
抽出の具体的手法としては、一般的に使用されている抽出手段が採用され、例えば、ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの全草乾燥物を適当に裁断した後、その全重量に対して１〜５０倍、好ましくは１０〜２０倍量の水、低級アルコール又は低級アルコールと水との混合溶媒、好ましくはエタノールを用い、１〜２４時間程度、室温〜使用溶媒の沸点の範囲で浸漬・加熱抽出を行い、得られた抽出液を減圧濃縮し、使用した抽出溶媒を除去し、目的とするホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキスを調製することができる。
かくして本発明の有効成分であるホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスを調製することができ、本発明者等の検討の結果、得られた抽出エキスには、優れたケミカルメディエーター遊離抑制作用並びに肥満細胞や、好塩基球などからの脱顆粒阻害作用に基づく、優れた抗アレルギー作用があることが判明した。
したがって、本発明はかかるホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスを有効成分として含有するケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤であり、これらのケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤を含有する抗アレルギー性組成物である。
本発明が提供するケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤は、汎用されている賦形剤、添加剤等を用いて、通常の方法により種々の形態の製剤として調製することができる。
また、本発明の抗アレルギー性組成物は、上記のケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤を用いて、通常の方法により各種の形態に加工することで製造できる。例えば、固体状物、液状物、乳化状物、ペースト状物、ゼリー状物等の形態に加工して、医薬品として、また食品として製造することができる。
また、本発明の抗アレルギー性組成物は、上記のケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤を用いて、通常の方法により各種の形態に加工することで製造できる。例えば、固体状物、液状物、乳化状物、ペースト状物、ゼリー状物等の形態に加工して、医薬品として、また食品として製造することができる。
すなわち、本発明が提供する抗アレルギー性組成物は、医薬品の他に、食品として有効に適用することができる。本発明の抗アレルギー性組成物には、そのまま直ちに食品として摂取し得るものとして、また、その他調理して摂取し得るもの、あるいは食品製造用のプレミックスされた材料として提供することができる。
本発明の抗アレルギー性組成物を含有する食品としては、固形状、粉末状、顆粒状のいずれの形態であってもよい。具体的には、例えば、ビスケット、クッキー、ケーキ、スナック、煎餅などの各種の菓子類、パン、粉末飲料（粉末コーヒー、粉末ココアなど）、飴、キャラメル等が含まれるが、これらに限定されるものではない。
また、液状、乳化状、ペースト状、ゼリー状のものとしては、ジュース、炭酸飲料、乳酸菌飲料などの各種の飲料を挙げることができ、これらに限定されるものではない。そのなかでも、好ましくはペースト状、ゼリー状、液状のものである
本発明の抗アレルギー性組成物を、特に医薬品として使用する場合には、錠剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、液剤等の形態である通常の製剤とすることができる。これらの製剤は、適宜製剤学的に許容される他の添加剤、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤等の担体と共に、常法にしたがって、製剤化することができる。
また、甘味剤、着色剤等を添加して服用させることもできる。これらの製剤化にあたっては、日本薬局方の製剤総則に記載の方法によって行うことができる。
また、甘味剤、着色剤等を添加して服用させることもできる。これらの製剤化にあたっては、日本薬局方の製剤総則に記載の方法によって行うことができる。
本発明の抗アレルギー性組成物において、有効成分として使用する抽出エキスは、その抗アレルギー作用を標準として、１日約１〜２０ｇ程度、好ましくは、２〜１０ｇ程度を摂取するのがよく、一般的には、１日１〜３回、好ましくは１日３回毎食直前に服用する有効成分の含有量を設定し、その用量を摂取する製剤として設計すればよい。
また、抽出エキスそのものを含有する場合には、抽出エキスを適当な溶媒で希釈し、液状組成物とし調製することもできる。また、抽出エキスそのものを適当な担体、好ましくは脂肪酸トリグリセライドと混合し、液状のままソフトカプセル等に充填し、調製することもできる。
上記の製剤化においては、通常使用されている賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、界面活性剤、溶解補助剤、還元剤、緩衝剤、吸着剤、流動化剤、帯電防止剤、抗酸化剤、甘味剤、矯味剤、清涼化剤、遮光剤、着香剤、香料、芳香剤、コーティング剤、可塑剤等の製剤添加物の一種または二種以上を適宜選択して添加してもよいことはいうまでもない。
そのような製剤添加物としては、具体的には、例えば、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、マルトデキストリン、エチルセルロース、乳糖、ソルビトール、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸、オレイン酸、流動パラフィン、第二リン酸カルシウム、セバチン酸ジブチル、マクロゴール、プロピレングリコール、コーンスターチ、デンプン、アルファー化デンプン、ゼラチン、ポピドン、クロスポピドン、グリセリン、ポリソルベート８０、クエン酸、アセスルファムカリウム、アスパルテーム、炭酸ナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等を挙げることができる。
また、本発明の抗アレルギー性組成物としての製剤化にあたっては、有効成分である抽出エキスが有する抗アレルギー作用を損なわない程度の質及び量の範囲で、ビタミン、ミネラル等の他の成分を添加させることもできる。
さらに本発明は、上記で調製された抽出エキスを有効成分として含有する抗アレルギー性組成物であるが、かかる組成物を食品として使用することができる。すなわち、上記で調製された抗アレルギー性組成物をそのまま食品、また他の成分と共に混合し、特に特定保健用食品（特保）、または動物用の飼料の形態とすることができる。
以下、具体的実施例、試験例を説明することにより、本発明をより詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの例に限定されるものではない。
実施例１：ホソバヤマジソのエタノール抽出エキスの調製
ホソバヤマジソの全草乾燥物１００ｇに１Ｌのエタノールを加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、４．５ｇの抽出エキスを得た。
ホソバヤマジソの全草乾燥物１００ｇに１Ｌのエタノールを加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、４．５ｇの抽出エキスを得た。
実施例２：ホソバヤマジソの水抽出エキスの調製
ホソバヤマジソの全草乾燥物１００ｇに１Ｌの水を加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、１０．１ｇの抽出エキスを得た。
ホソバヤマジソの全草乾燥物１００ｇに１Ｌの水を加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、１０．１ｇの抽出エキスを得た。
実施例３：ナギナタコウジュのエタノール抽出エキスの調製
ナギナタコウジュのエタノール抽出エキスを上記実施例１と同様にして調製した。すなわち、ナギナタコウジュの全草乾燥物１００ｇを用いて、１Ｌのエタノールを加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、４．４ｇの抽出エキスを得た。
ナギナタコウジュのエタノール抽出エキスを上記実施例１と同様にして調製した。すなわち、ナギナタコウジュの全草乾燥物１００ｇを用いて、１Ｌのエタノールを加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、４．４ｇの抽出エキスを得た。
実施例３：ナギナタコウジュの水抽出エキスの調製
ナギナタコウジュの水抽出エキスを上記実施例２と同様にして調製した。すなわち、ナギナタコウジュの全草乾燥物１００ｇに１Ｌの水を加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、１８．５ｇの抽出エキスを得た。
ナギナタコウジュの水抽出エキスを上記実施例２と同様にして調製した。すなわち、ナギナタコウジュの全草乾燥物１００ｇに１Ｌの水を加え、７０℃で２時間加熱抽出し、これを濾過後、減圧下濃縮乾固して、１８．５ｇの抽出エキスを得た。
上記で得られたホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスのケミカルメディエーター遊離抑制作用並びに脱顆粒阻害作用に基づく抗アレルギー作用効果を、以下の試験例により実証する。
試験例１：脱顆粒に対する効果試験
脱顆粒阻害試験は、ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３：東北大学加齢医学研究所・医用細胞資源センターから入手）から脱顆粒によりヒスタミン等と共に遊離されるβ−hexosaminidaseの活性を測定する方法を用いた。
脱顆粒阻害試験は、ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３：東北大学加齢医学研究所・医用細胞資源センターから入手）から脱顆粒によりヒスタミン等と共に遊離されるβ−hexosaminidaseの活性を測定する方法を用いた。
［方法］
すなわち、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に遊離させ、４８ウェルプレートに３．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を４００μＬずつ播種し、６０分後に抗dinitrophenyl(ＤＮＰ)−ＩｇＥ抗体を最終濃度が０．４５μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下に２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞をsiraganian buffer（１１９ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カリウム、０．４ｍＭ塩化マグネシウム、２５ｍＭ ＰＩＰＥＳ、４０ｍＭ水酸化ナトリウム、ｐＨ７．２）５００μＬで洗浄した後、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）含有siraganian buffer（５．６ｍＭグルコース、１ｍＭ塩化カルシウム、０．１％ＢＳＡ含有）１６０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。
すなわち、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に遊離させ、４８ウェルプレートに３．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を４００μＬずつ播種し、６０分後に抗dinitrophenyl(ＤＮＰ)−ＩｇＥ抗体を最終濃度が０．４５μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下に２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞をsiraganian buffer（１１９ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カリウム、０．４ｍＭ塩化マグネシウム、２５ｍＭ ＰＩＰＥＳ、４０ｍＭ水酸化ナトリウム、ｐＨ７．２）５００μＬで洗浄した後、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）含有siraganian buffer（５．６ｍＭグルコース、１ｍＭ塩化カルシウム、０．１％ＢＳＡ含有）１６０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。
これにＤＭＳＯ又はＤＭＳＯにて適当量に希釈した試料２０μＬを添加し（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％）、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。次いで、抗原となるＤＮＰ−ＢＳＡを最終濃度１０μｇ／ｍＬとなるように２０μＬ加えて、５％炭酸ガス、３７℃下で３０分間培養して脱顆粒を惹起させた。その後、氷上で１０分間反応を停止させ遠心（１０００ｒｐｍ、４℃、５分間）後、上清５０μＬを９６ウェルプレートに移し、これに１ｍＭ ＰＮＡＧ（p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosamide ３．４２ｇを０．１Ｍクエン酸緩衝液 ｐＨ４．５、１００ｍＬに溶解して調製）を５０μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下で６０分間反応させた。反応後、２００μＬのstop buffer（０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３、ｐＨ１０）を加えた後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、以下の式によりβ−hexosaminidase遊離阻害率（％）を求めた。
β−hexosaminidase遊離阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｂ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
上記において、
Ａ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｂ：ＤＮＰ−ＢＳＡ非刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｃ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、試料（＋）の吸光値
Ｄ：試料（＋）のみの吸光値
上記において、
Ａ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｂ：ＤＮＰ−ＢＳＡ非刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｃ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、試料（＋）の吸光値
Ｄ：試料（＋）のみの吸光値
試験試料として、実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキスを１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ、及び実施例２で得られたホソバヤマジソの水抽出エキスを１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ、実施例３で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキスを１００及び２００μｇ／ｍＬ、実施例４で得られたナギナタコウジュの水抽出エキスを１００μｇ／ｍＬ用いた。
対照試料として、シソ（蘇葉）から実施例１及び２と同様にして調製した蘇葉のエタノール抽出エキス並びに水抽出エキスをそれぞれ１００μｇ／ｍＬ用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）並びにトラニラスト（一般名）を１０及び１００μｇ／ｍＬを用いた。
［結果］
得られた、各試験試料のＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのβ−hexosaminidase遊離に対する阻害効果（ｎ＝３）を、下記表１に示した。
阻害率は、平均値±標準偏差で示した。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）並びにトラニラスト（一般名）を１０及び１００μｇ／ｍＬを用いた。
［結果］
得られた、各試験試料のＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのβ−hexosaminidase遊離に対する阻害効果（ｎ＝３）を、下記表１に示した。
阻害率は、平均値±標準偏差で示した。
表中に示した結果からも判明するように、本発明のホソバヤマジソのエタノール及び水抽出エキス、ナギナタコウジュのエタノール抽出エキスに阻害効果が認められた。特に、ホソバヤマジソのエタノール抽出エキスは、蘇葉よりも強く、優れた阻害率を示していることが判明する。
試験例２：ＴＮＦ−α産生に対する効果試験
［方法］
試験例１と同様に、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に浮遊させ、２４ウェルプレートに７．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を４００μＬずつ播種し、６０分後に抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体を最終濃度が０．４５μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下で２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を培養液で洗浄した後、培養液１６０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。これにＤＭＳＯ又はＤＭＳＯにて適当量に希釈した試料２０μＬを添加し（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％）、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。次いで、抗原となるＤＮＰ−ＢＳＡを最終濃度１０μｇ／ｍＬとなるように２０μＬ加えて、５％炭酸ガス、３７℃下で４時間培養した。
培養液中に産生されたＴＮＦ−αの濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡ法（Rat TNF OptEIA ELISA Set. 日本ベクトン・デキソン社製）にて測定し、以下の式によりＴＮＦ−α産生阻害率（％）を求めた。
［方法］
試験例１と同様に、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に浮遊させ、２４ウェルプレートに７．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を４００μＬずつ播種し、６０分後に抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体を最終濃度が０．４５μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下で２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を培養液で洗浄した後、培養液１６０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。これにＤＭＳＯ又はＤＭＳＯにて適当量に希釈した試料２０μＬを添加し（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％）、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。次いで、抗原となるＤＮＰ−ＢＳＡを最終濃度１０μｇ／ｍＬとなるように２０μＬ加えて、５％炭酸ガス、３７℃下で４時間培養した。
培養液中に産生されたＴＮＦ−αの濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡ法（Rat TNF OptEIA ELISA Set. 日本ベクトン・デキソン社製）にて測定し、以下の式によりＴＮＦ−α産生阻害率（％）を求めた。
ＴＮＦ−α産生阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｂ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
上記において、
Ａ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｂ：ＤＮＰ−ＢＳＡ非刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｃ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、試料（＋）の吸光値
上記において、
Ａ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｂ：ＤＮＰ−ＢＳＡ非刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｃ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、試料（＋）の吸光値
試験試料として、実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキスを１０、５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ、及び実施例２で得られたホソバヤマジソの水抽出エキスを１００及び２００μｇ／ｍＬ、実施例３で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキスを１００及び２００μｇ／ｍＬ、実施例４で得られたナギナタコウジュの水抽出エキスを１００μｇ／ｍＬ用いた。
また対照試料として、シソ（蘇葉）から実施例１及び２と同様にして調製した蘇葉のエタノール抽出エキス並びに水抽出エキスをそれぞれ１００μｇ／ｍＬ用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）並びにトラニラスト（一般名）を１０及び１００μｇ／ｍＬを用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）並びにトラニラスト（一般名）を１０及び１００μｇ／ｍＬを用いた。
［結果］
得られた、各資料のＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのＴＮＦ−α産生に対する阻害効果（ｎ＝３）を、下記表２に示した。
阻害率は、平均値±標準偏差で示した。
得られた、各資料のＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのＴＮＦ−α産生に対する阻害効果（ｎ＝３）を、下記表２に示した。
阻害率は、平均値±標準偏差で示した。
表中に示す結果からの判明するように、本発明のホソバヤマジソのエタノール及び水抽出エキス、ナギナタコウジュのエタノール抽出エキスに阻害効果が認められた。特に、ホソバヤマジソのエタノール抽出エキスにおいては、用量依存的な優れたＴＮＦ−α産生阻害効果が認められた。
試験例３：ロイコトリエン産生に対する効果試験
［方法］
試験例１と同様に、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に遊離させ、２４ウェルプレートに７．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を４００μＬずつ播種し、６０分後に抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体を最終濃度が０．４５μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下に２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を培養液で洗浄した後、培養液１６０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。
［方法］
試験例１と同様に、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に遊離させ、２４ウェルプレートに７．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を４００μＬずつ播種し、６０分後に抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体を最終濃度が０．４５μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ加え、５％炭酸ガス、３７℃下に２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を培養液で洗浄した後、培養液１６０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。
これにＤＭＳＯ又はＤＭＳＯにて適当量に希釈した試料２０μＬを添加し（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％）、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。次いで、抗原となるＤＮＰ−ＢＳＡを最終濃度１０μｇ／ｍＬとなるように２０μＬ加えて、５％炭酸ガス、３７℃下で１時間培養した。
培養液中に産生されたロイコトリエンの濃度を競合ＥＩＡ法（Cysteinyl-Leukotriene EIA KIT、Cayman Chemical Company社製）測定し、以下の式によりロイコトリエン産生阻害率（％）を求めた。
培養液中に産生されたロイコトリエンの濃度を競合ＥＩＡ法（Cysteinyl-Leukotriene EIA KIT、Cayman Chemical Company社製）測定し、以下の式によりロイコトリエン産生阻害率（％）を求めた。
ロイコトリエン産生阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｂ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
上記において、
Ａ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｂ：ＤＮＰ−ＢＳＡ非刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｃ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、試料（＋）の吸光値
上記において、
Ａ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｂ：ＤＮＰ−ＢＳＡ非刺激、ＤＭＳＯのみの吸光値
Ｃ：ＤＮＰ−ＢＳＡ刺激、試料（＋）の吸光値
試験試料として、実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキスを２、１０、５０及び１００μｇ／ｍＬ、及び実施例２で得られたホソバヤマジソの水抽出エキスを５０、１００及び２００μｇ／ｍＬ、実施例３で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキスを５０及び１００μｇ／ｍＬ、実施例４で得られたナギナタコウジュの水抽出エキスを１００μｇ／ｍＬ用いた。
また対照試料として、シソ（蘇葉）から実施例１及び２と同様にして調製した蘇葉のエタノール抽出エキス並びに水抽出エキスをそれぞれ１００μｇ／ｍＬ用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）を１０及び１００μｇ／ｍＬ、並びにトラニラスト（一般名）を５０及び１００μｇ／ｍＬ用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）を１０及び１００μｇ／ｍＬ、並びにトラニラスト（一般名）を５０及び１００μｇ／ｍＬ用いた。
［結果］
得られた、各資料のＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのロイコトリエン産生に対する阻害効果（ｎ＝３）を、下記表３に示した。
阻害率は、平均値±標準偏差で示した。
得られた、各資料のＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのロイコトリエン産生に対する阻害効果（ｎ＝３）を、下記表３に示した。
阻害率は、平均値±標準偏差で示した。
表中に示した結果からも判明するように、本発明のホソバヤマジソのエタノール及び水抽出エキス、ナギナタコウジュのエタノール抽出エキスにロイコトリエン産生阻害効果が認められた。特に、ホソバヤマジソのエタノール抽出エキスにおいては、優れた阻害活性を有することが示された。
試験例４：細胞に対する毒性試験
［方法］
試験例１と同様に、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に遊離させ、９６ウェルプレートに７．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を１００μＬずつ播種し、５％炭酸ガス、３７℃下に２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を培養液で洗浄した後、培養液９０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。
［方法］
試験例１と同様に、継代培養により増殖させたＲＢＬ−２Ｈ３細胞を、１０％牛胎児血清の入ったＭＥＭ培養液に遊離させ、９６ウェルプレートに７．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度の細胞を１００μＬずつ播種し、５％炭酸ガス、３７℃下に２４時間培養した。培養したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を培養液で洗浄した後、培養液９０μＬを加え、５％炭酸ガス、３７℃下で１０分間培養した。
これにＤＭＳＯ又はＤＭＳＯにて適当量に希釈した試料１０μＬを添加し（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％）、５％炭酸ガス、３７℃下で２４時間培養した。培養後、細胞増殖アッセイキット（Cell counting Kit-8、同仁化学研究所社製）を用いて生存率を測定した。
生存率（％）は、対照（ＤＭＳＯのみを添加した場合の吸光度）を１００％とし、各試料を添加した場合の生存率を示した。
生存率（％）は、対照（ＤＭＳＯのみを添加した場合の吸光度）を１００％とし、各試料を添加した場合の生存率を示した。
試験試料として、実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキスを５０及び１００μｇ／ｍＬ、及び実施例２で得られたホソバヤマジソの水抽出エキスを５０及び１００μｇ／ｍＬ、実施例３で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキスを５０及び１００μｇ／ｍＬ、実施例４で得られたナギナタコウジュの水抽出エキスを５０及び１００μｇ／ｍＬ用いた。
また対照試料として、シソ（蘇葉）から実施例１及び２と同様にして調製した蘇葉のエタノール抽出エキス並びに水抽出エキスをそれぞれ５０及び１００μｇ／ｍＬ用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）を２、１０及び５０μｇ／ｍＬ、並びにトラニラスト（一般名）を１０及び５０μｇ／ｍＬ用いた。
さらに、活性対照としてアゼラスチン（一般名）を２、１０及び５０μｇ／ｍＬ、並びにトラニラスト（一般名）を１０及び５０μｇ／ｍＬ用いた。
［結果］
得られた、各資料の生存率（ｎ＝３）を、下記表４に示した。
得られた、各資料の生存率（ｎ＝３）を、下記表４に示した。
表中に示した結果からも判明するように、本発明のホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスは、添加後２４時間後も生存率が９０％以上と高く、細胞に対する毒性はないものと判断された。このことから、本発明のホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスの脱顆粒抑制作用並びに各ケミカルメディエーター産生抑制作用は、細胞毒性によるものではないことが示唆された。
試験例５：アレルギー性鼻炎モデルマウスに対する効果試験
［方法］
ＯＶＡ（卵白アルブミン）１０μｇ及び水酸化アルミニウムゲル１．３ｍｇを生理食塩水０．２ｍＬに溶解し、balb/cマウス（６週齢／雌性）の腹腔内へ１週間に１回、計３回感作した。さらに、最終感作日の１週間後から両側鼻腔にＯＶＡ２５ｍｇ／ｍＬの溶液をマイクロピペットで１０μＬずつ７日間点鼻することによりくしゃみ及び鼻掻き行動を誘発させた。
実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキス、及び活性対照のアゼラスチンは０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液に懸濁して投与に用いた。試験群は、０．５％ＣＭＣのみを投与した対照群（１０匹）、ホソバヤマジソ抽出エキスを５０、２００、８００ｍｇ／ｋｇの用量で投与した３群（各群１０匹）、アゼラスチン１０ｍｇ／ｋｇを投与した群（７匹）を設けた。被験物の投与はＯＶＡ点鼻期間中、毎日、点鼻１時間前に１回経口投与し、ＯＶＡ点鼻最終日の点鼻直後から１０分間のくしゃみ及び鼻掻き回数を測定して、抗アレルギー効果を評価した。
各群間の検定には、ボンフェローニの多重比較検定を用い、危険率５％以下のものを有意差ありと判断した。
［方法］
ＯＶＡ（卵白アルブミン）１０μｇ及び水酸化アルミニウムゲル１．３ｍｇを生理食塩水０．２ｍＬに溶解し、balb/cマウス（６週齢／雌性）の腹腔内へ１週間に１回、計３回感作した。さらに、最終感作日の１週間後から両側鼻腔にＯＶＡ２５ｍｇ／ｍＬの溶液をマイクロピペットで１０μＬずつ７日間点鼻することによりくしゃみ及び鼻掻き行動を誘発させた。
実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキス、及び活性対照のアゼラスチンは０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液に懸濁して投与に用いた。試験群は、０．５％ＣＭＣのみを投与した対照群（１０匹）、ホソバヤマジソ抽出エキスを５０、２００、８００ｍｇ／ｋｇの用量で投与した３群（各群１０匹）、アゼラスチン１０ｍｇ／ｋｇを投与した群（７匹）を設けた。被験物の投与はＯＶＡ点鼻期間中、毎日、点鼻１時間前に１回経口投与し、ＯＶＡ点鼻最終日の点鼻直後から１０分間のくしゃみ及び鼻掻き回数を測定して、抗アレルギー効果を評価した。
各群間の検定には、ボンフェローニの多重比較検定を用い、危険率５％以下のものを有意差ありと判断した。
［結果］
下記表５に、アレルギー性鼻炎マウスのくしゃみ及び鼻掻き行動に対するホソバヤマジソ抽出エキス、及び活性対照としてのアゼラスチンの効果を示した。
また、図１及び図２にそれらの結果をグラフとして示した。
下記表５に、アレルギー性鼻炎マウスのくしゃみ及び鼻掻き行動に対するホソバヤマジソ抽出エキス、及び活性対照としてのアゼラスチンの効果を示した。
また、図１及び図２にそれらの結果をグラフとして示した。
図１は、アレルギー性鼻炎モデルマウスのくしゃみに対する作用を示す図である。対照およびホソバヤマジソ投与群は各１０匹、アゼラスチン投与群は７匹のデータについて平均値±標準偏差で示した。
図中、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１で対照に対して統計学的有意差あり（ボンフェローニの多重比較検定）
図中、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１で対照に対して統計学的有意差あり（ボンフェローニの多重比較検定）
図２は、アレルギー性鼻炎モデルマウスの鼻掻き行動に対する作用を示す図である。対照およびホソバヤマジソ投与群は各１０匹、アゼラスチン投与群は７匹のデータについて平均値±標準偏差で示した。
＊＊：危険率１％以下で無投与対照群と比較し、有意差あり。
対照群（０．５％ＣＭＣ投与群）に対して、本発明のホソバヤマジソ抽出エキスを経口投与した群では、用量依存的なくしゃみ、及び鼻掻き行動の抑制が認められた。特にくしゃみ回数においては、ホソバヤマジソ抽出エキス２００ｍｇ／ｋｇ及び８００ｍｇ／ｋｇの用量から統計的に有意な抑制効果が認められた。
活性対照のアゼラスチンにおいても１０ｍｇ／ｋｇの投与でくしゃみ、及び鼻掻き回数の抑制効果が認められた。
活性対照のアゼラスチンにおいても１０ｍｇ／ｋｇの投与でくしゃみ、及び鼻掻き回数の抑制効果が認められた。
図３に、７日間の抗原点鼻期間における体重の変化に対する本発明のホソバヤマジソ抽出エキス及びアゼラスチンの効果を示した。
図中の結果から判明するように、対照群（０．５％ＣＭＣ投与群）では、抗原点鼻開始から最終日まで徐々に体重の低下が認められたが、本発明のホソバヤマジソ抽出エキス投与群では、２００ｍｇ／ｋｇの用量から体重低下を押さえる効果が認められた。
なお、活性対照であるアゼラスチン投与群では、体重低下の抑制効果は認められなかった。
図中の結果から判明するように、対照群（０．５％ＣＭＣ投与群）では、抗原点鼻開始から最終日まで徐々に体重の低下が認められたが、本発明のホソバヤマジソ抽出エキス投与群では、２００ｍｇ／ｋｇの用量から体重低下を押さえる効果が認められた。
なお、活性対照であるアゼラスチン投与群では、体重低下の抑制効果は認められなかった。
以上の試験結果から、本発明のホソバヤマジソ抽出エキスは、肥満細胞及び好塩基球から脱顆粒阻害によりヒスタミン等のケミカルメディエーターの遊離を抑制する効果を有するものであり、また、肥満細胞及び好塩基球からＴＮＦ−αの産生を阻害する効果を有することが確認された。
さらにアレルギー性鼻炎モデルマウスのアレルギー症状を緩和する効果を有するものであり、加えてアレルギー性鼻炎モデルマウスの体重減少を抑える効果（全身的な機能低下の改善）を有することが確認された。
さらにアレルギー性鼻炎モデルマウスのアレルギー症状を緩和する効果を有するものであり、加えてアレルギー性鼻炎モデルマウスの体重減少を抑える効果（全身的な機能低下の改善）を有することが確認された。
試験例４：毒性試験
［方法］
ｄｄｙマウス（７週齢、雄性）を用いてホソバヤマジソ抽出エキスの単回大量投与による毒性試験を行った。
実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキスを０．５％ＣＭＣ溶液に懸濁して経口投与に用いた。試験群は、０．５％ＣＭＣのみを投与した対照群、及びホソバヤマジソ抽出エキスを２５００ｍｇ／ｋｇの用量で投与した群（各群３匹）を設け、投与後１４日間のマウスの状態を観察した。
［方法］
ｄｄｙマウス（７週齢、雄性）を用いてホソバヤマジソ抽出エキスの単回大量投与による毒性試験を行った。
実施例１で得られたホソバヤマジソのエタノール抽出エキスを０．５％ＣＭＣ溶液に懸濁して経口投与に用いた。試験群は、０．５％ＣＭＣのみを投与した対照群、及びホソバヤマジソ抽出エキスを２５００ｍｇ／ｋｇの用量で投与した群（各群３匹）を設け、投与後１４日間のマウスの状態を観察した。
［結果］
ホソバヤマジソ抽出エキス投与後１４日間の一般症状、及び体重経過は、対照群と変わり無い状態を維持していた。また、投与後１４日目に、開腹して各臓器（胸腺、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、精巣）を摘出し、臓器重量の測定、及び肉眼的観察を行ったが、いずれの臓器にも異常は見られなかった。
ホソバヤマジソ抽出エキス投与後１４日間の一般症状、及び体重経過は、対照群と変わり無い状態を維持していた。また、投与後１４日目に、開腹して各臓器（胸腺、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、精巣）を摘出し、臓器重量の測定、及び肉眼的観察を行ったが、いずれの臓器にも異常は見られなかった。
実施例３：コウジュ（ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュ）抽出エキスを含有する医薬品
実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス５５．０ｇを、乳糖２４９．５ｇおよびステアリン酸マグネシウム０．５ｇとともに、単発式打錠機にて打錠することにより、直径１０ｍｍ、重量３００ｍｇの錠剤を製造した。
実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス５５．０ｇを、乳糖２４９．５ｇおよびステアリン酸マグネシウム０．５ｇとともに、単発式打錠機にて打錠することにより、直径１０ｍｍ、重量３００ｍｇの錠剤を製造した。
（２）散剤：
上記実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス１００．０ｇにステアリン酸マグネシウム０．５ｇを加え、圧縮、粉砕、整粒、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を得た。
上記実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス１００．０ｇにステアリン酸マグネシウム０．５ｇを加え、圧縮、粉砕、整粒、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を得た。
実施例４：コウジュ（ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュ）のエタノール抽出エキスを含有する各種飲食物
以下に示す組成にて、実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス（以下、単に抽出エキスと記す）入りの各種飲食物を製造した。
（１）飴：
（組成） （重量部）
粉末ソルビトール ８９．７０
香料 ０．２５
抽出エキス １０．００
ソルビトールシード ０．０５
全量 １００．００
以下に示す組成にて、実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス（以下、単に抽出エキスと記す）入りの各種飲食物を製造した。
（１）飴：
（組成） （重量部）
粉末ソルビトール ８９．７０
香料 ０．２５
抽出エキス １０．００
ソルビトールシード ０．０５
全量 １００．００
（２）ガム：
（組成） （重量部）
ガムベース ２０．００
炭酸カルシウム ２．００
ステビオサイド ０．１０
抽出エキス １０．００
乳糖 ６６．９０
香料 １．００
全量 １００．００
（組成） （重量部）
ガムベース ２０．００
炭酸カルシウム ２．００
ステビオサイド ０．１０
抽出エキス １０．００
乳糖 ６６．９０
香料 １．００
全量 １００．００
（３）キャラメル：
（組成） （重量部）
グラニュー糖 ３２．００
水飴 ２０．００
粉乳 ３０．００
硬化油 ４．００
食塩 ０．６０
香料 ０．０３
水 ３．３７
抽出エキス １０．００
全量 １００．００
（組成） （重量部）
グラニュー糖 ３２．００
水飴 ２０．００
粉乳 ３０．００
硬化油 ４．００
食塩 ０．６０
香料 ０．０３
水 ３．３７
抽出エキス １０．００
全量 １００．００
（４）炭酸飲料：
（組成） （重量部）
グラニュー糖 ８．００
濃縮レモン果汁 １．００
Ｌ−アスコルビン酸 ０．１０
クエン酸 ０．０９
クエン酸ナトリウム ０．０５
着色料 ０．０５
炭酸水 ８０．７１
抽出エキス １０．００
全量 １００．００
（組成） （重量部）
グラニュー糖 ８．００
濃縮レモン果汁 １．００
Ｌ−アスコルビン酸 ０．１０
クエン酸 ０．０９
クエン酸ナトリウム ０．０５
着色料 ０．０５
炭酸水 ８０．７１
抽出エキス １０．００
全量 １００．００
（５）ジュース：
（組成） （重量部）
冷凍濃縮オレンジ果汁 ５．００
果糖ブドウ糖液糖 １．００
クエン酸 ０．１０
Ｌ−アスコルビン酸 ０．０９
抽出エキス １０．００
香料 ０．２０
色素 ０．１０
水 ８３．５１
全量 １００．００
（組成） （重量部）
冷凍濃縮オレンジ果汁 ５．００
果糖ブドウ糖液糖 １．００
クエン酸 ０．１０
Ｌ−アスコルビン酸 ０．０９
抽出エキス １０．００
香料 ０．２０
色素 ０．１０
水 ８３．５１
全量 １００．００
（６）乳酸菌飲料：
（組成） （重量部）
乳固形２１％発酵乳 １４．７６
果糖ブドウ糖液糖 １３．３１
ペクチン ０．５０
クエン酸 ０．０８
香料 ０．１５
水 ６１．２０
抽出エキス １０．００
全量 １００．００
（組成） （重量部）
乳固形２１％発酵乳 １４．７６
果糖ブドウ糖液糖 １３．３１
ペクチン ０．５０
クエン酸 ０．０８
香料 ０．１５
水 ６１．２０
抽出エキス １０．００
全量 １００．００
（７）アルコール飲料：
（組成） （重量部）
５０％エタノール ３２．００
砂糖 ８．６０
果汁 ２．４０
抽出エキス １０．００
水 ４７．００
全量 １００．００
（組成） （重量部）
５０％エタノール ３２．００
砂糖 ８．６０
果汁 ２．４０
抽出エキス １０．００
水 ４７．００
全量 １００．００
実施例５：コウジュ（ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュ）のエタノール抽出エキスを含有する各種化粧品
以下に示す組成にて、実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス（以下、単に抽出エキスと記す）含有の各種化粧品を製造した。
（１）エモリエントクリーム：
（組成） （重量部）
ミツロウ ２．０
ステアリルアルコール ５．０
ステアリン酸 ８．０
スクアラン １０．０
自己乳化型プロピレングリコール ３．０
モノステアレートポリオキシエチレン
セチルエーテル（２０ＥＯ） １．０
香料 ０．５
酸化防止剤 微量
防腐剤 微量
プロピレングリコール ４．８
グリセリン ３．０
ヒアロルン酸ナトリウム ０．１
抽出エキス ０．１
トリエタノールアミン １．０
精製水 ６１．５
全量 １００．０
以下に示す組成にて、実施例１で得たホソバヤマジソ又は実施例２で得られたナギナタコウジュのエタノール抽出エキス（以下、単に抽出エキスと記す）含有の各種化粧品を製造した。
（１）エモリエントクリーム：
（組成） （重量部）
ミツロウ ２．０
ステアリルアルコール ５．０
ステアリン酸 ８．０
スクアラン １０．０
自己乳化型プロピレングリコール ３．０
モノステアレートポリオキシエチレン
セチルエーテル（２０ＥＯ） １．０
香料 ０．５
酸化防止剤 微量
防腐剤 微量
プロピレングリコール ４．８
グリセリン ３．０
ヒアロルン酸ナトリウム ０．１
抽出エキス ０．１
トリエタノールアミン １．０
精製水 ６１．５
全量 １００．０
（２）乳液状ファンデーション：
（組成） （重量部）
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
パラオキシ安息香酸プロピル 微量
精製水 ６４．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ３．８
ヒアロルン酸ナトリウム ０．１
抽出エキス ０．１
トリエタノールアミン １．１
パラオキシ安息香酸メチル 微量
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色含量 微量
香料 微量
スクアラン １０．０
全量 １００．０
（組成） （重量部）
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
パラオキシ安息香酸プロピル 微量
精製水 ６４．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ３．８
ヒアロルン酸ナトリウム ０．１
抽出エキス ０．１
トリエタノールアミン １．１
パラオキシ安息香酸メチル 微量
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色含量 微量
香料 微量
スクアラン １０．０
全量 １００．０
以上記載のように、本発明は、天然植物であるコウジュ、具体的にはホソバヤマジソ並びにナギナタコウジュの薬理作用の検討に基づき、その抽出エキスが有する、優れた抗アレルギー作用による、抗アレルギー組成物を提供するものであり、本発明のホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの抽出エキスを応用して、日常生活の中で気軽に摂取できる安全性の高い抗アレルギー剤（医薬品、健康食品、化粧品等）を提供できることから、その産業上の利用性は多大なものである。
Claims (6)
- ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とするケミカルメディエーター遊離抑制剤。
- ケミカルメディエーターが、ヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエン、ＴＮＦ−αから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする請求項１に記載のケミカルメディエーター遊離抑制剤。
- ホソバヤマジソ又はナギナタコウジュの溶媒抽出エキスを有効成分とすることを特徴とする脱顆粒阻害剤。
- 抽出溶媒が、水、低級アルコール又は低級アルコールと水との混合溶媒である請求項１又は３に記載のケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤。
- 低級アルコールがエタノールである請求項４に記載のケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤。
- 請求項１〜５のいずれかに記載のケミカルメディエーター遊離抑制剤又は脱顆粒阻害剤を含有する抗アレルギー用組成物。
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|---|---|---|---|
| JP2008038474A JP4371431B2 (ja) | 2007-05-29 | 2008-02-20 | 抗アレルギー性組成物 |
Applications Claiming Priority (2)
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| JP2007141496 | 2007-05-29 | ||
| JP2008038474A JP4371431B2 (ja) | 2007-05-29 | 2008-02-20 | 抗アレルギー性組成物 |
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-
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