JP4358927B2

JP4358927B2 - Blood test container

Info

Publication number: JP4358927B2
Application number: JP09892899A
Authority: JP
Inventors: 勝也戸川; 浩信五十川
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 1999-04-06
Filing date: 1999-04-06
Publication date: 2009-11-04
Anticipated expiration: 2019-04-06
Also published as: JP2000287954A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血清生化学検査や血清免疫学検査などの血清を用いた臨床検査分野において用いられる血液検査用容器に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、臨床検査技術の進歩に伴い、血清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査などの血液検査が広く普及し、病気の予防や早期診断に大きく貢献するに至っている。
【０００３】
上記血清検査に際しては、患者から採取した血液から血清を分離する必要がある。血清を分離するに際しては、まず血液検査用容器に血液を採取し、凝固させた後、遠心分離により血清が血餅から分離されている。
【０００４】
分離された血清は、通常、ピペットやデカンテーションなどにより他の容器に移される。もっとも、近年、検査速度を高めるため、並びに多数の検体を処理するために、自動分注機により血液検査用容器から直接血清を自動分析装置に分注する方法が広く用いられている。
【０００５】
従来の血液検査用容器としては、ガラス製の容器、あるいはポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリエチレンなどの合成樹脂からなる容器が用いられているが、これらの血液検査用容器では以下の問題点があった。
【０００６】
第１に、血液検査用容器に血液を注入した後、凝固に至るまでにかなりの時間を必要としていた。従って、緊急に血清検査を行う必要がある場合、その要求に応えることができなかった。
【０００７】
すなわち、最も血液凝固時間が短いとされているガラス製血液検査容器を用いた場合でも、血液注入後から凝固に至るまでに、４０分〜６０分の時間が必要であった。さらに、合成樹脂製血液検査容器では、血液凝固までに４時間以上の時間が必要であった。
【０００８】
上記のような問題を解決するために、シリカ、カオリン、ベントナイトなどの微粒子を凝固促進剤として血液検査容器内に投入する方法が広く用いられている。
【０００９】
また、特開平５−１５７７４７号公報には、血液凝固促進成分として、凝固反応の最終段階であるフィブリノーゲンがフィブリンに転化する反応を促進するトロンビンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤を用いる方法が開示されている。
【００１０】
上記先行技術に記載の方法では、トロンビンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤が、不織布、濾紙または布などの支持体に含浸された状態で血液検査用有底管の中央部に収納されている。この方法では、血液検査用有底管として合成樹脂からなるものを用いた場合であっても、凝固時間が大幅に短縮され、５分程度でほぼ凝固が完了するとされている。
【００１１】
しかしながら、トロンビンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤を用いた場合、凝固反応が非常に早く進行するため、採血直後に十分に混和しないと、部分的には凝固は速やかに進行するものの、全体としては凝固時間が長くなりがちであった。その結果、遠心分離後にフィブリンが多量に血清中に析出するという問題が生じる。これは、トロンビンや蛇毒酵素と直接に接触した血液部分が急激に凝固するため、生成したフィブリンあるいは三次元架橋したフィブリンゲルが酵素を包囲することになり、酵素と未凝固の血液部分とのそれ以上の接触が抑制され、それ以降の凝固反応が進行し難くなるためであると考えられる。
【００１２】
しかしながら、緊急を要する場合や多量の検体を処理する必要がある場合には、血液検査容器に血液を採取した後、十分に混和する時間的余裕はなく、従って、上記トロンビンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤を用いる方法では、多量の検体を処理する場合や緊急を要する場合には対応することが非常に困難であった。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上述した従来技術の欠点を解消し、採血直後に十分に混和する煩雑な作業を簡略化することができ、しかも、短時間に血液を凝固させることができ、さらにフィブリンの混入が少ない血清を確実に得ることができる血液検査用容器を提供することにある。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を達成するためになされたものであり、本発明に係る血液検査用容器では、容器本体内に血液凝固促進剤と、血液凝固後の遠心分離時にフィブリンが血清中に析出するのを抑制するフィブリン析出抑制剤とが収納されている。
【００１５】
血液凝固促進剤としては、例えば、ペプチド鎖のアルギニンとの任意のアミノ酸残基との結合及び／またはリジンと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る酵素を用いることができる。
【００１６】
また、本発明の特定の局面では、上記フィブリン析出抑制剤として、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の関与する反応を阻害する血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤と、フィブリン架橋を阻害するフィブリン架橋阻害剤の少なくとも一方が用いられる。
【００１７】
上記血液凝固第ＸＩＩＩ因子は、トロンビンなどの酵素が血液に作用した時に生じるフィブリンモノマー間にイソペプチド結合による三次元架橋を形成させるトランスグルタミナーゼとして知られている。この三次元架橋によりフィブリンが強固なゲル状態となり、フィブリンゲルを構成するが、血液凝固第ＸＩＩＩ因子を阻害することにより、トロンビンや蛇毒酵素のような血液を急速に凝固させる酵素を用いたとしても、それほど緊急かつ煩雑な混和を必要とすることなく、フィブリン析出が生じ難い血清を得ることができる。
【００１８】
以下、本発明の詳細を説明する。
本発明において、血液検査用容器の容器本体構成する材料については特に限定されず、ガラス、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂、変性天然樹脂などの適宜の従来より血液検査用容器に用いられている材料を使用することができる。また、容器本体の形状についても特に限定されず、試験管のような有底筒状管、あるいはボトル状など適宜の形状のものを用いることができる。
上記血液検査用容器には、血液凝固促進剤と、フィブリン析出抑制剤とが収納されている。
【００１９】
血液凝固促進剤としては、特に限定されるわけではないが、ペプチド鎖のアルギニンと任意のアミノ酸残基との結合及び／またはリジンと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る酵素が用いられる。このような酵素としては、トロンビン、蛇毒から得られるトロンビン様酵素などのセリンプロテアーゼ、カテプシンＢ、フィシンなどのチオールプロテアーゼ、キニナーゼＩなどの金属プロテアーゼなどを挙げることができるが、特に、セリンプロテアーゼが好適に用いられる。
【００２０】
上記血液凝固促進剤の量は血液１ｍＬに対し、０．１〜１００単位が好ましい。０．１単位未満の場合には、血液凝固時間が長くなったり、凝固が不完全になることがあり、１００単位を超えると、検査値に悪影響を及ぼすことがあり、かつコストが高くなる。より好ましくは、０．５〜５０単位とされる。
【００２１】
フィブリン析出抑制剤としては、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤及び／またはフィシン架橋阻害剤が用いられる。
血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤としては、マレイミド、Ｎ−エチルマレイミド、ｐ−クロロ第２水銀安息香酸、ｐ−クロロ第２水銀フェニルスルホン酸、フェニル第２水銀などの物質及びその誘導体が用いられる。
【００２２】
また、フィブリン架橋阻害剤としては、グルタミル残基とのイソペプチド結合を阻害する物質が用いられ、具体的には、グリシン、グリシルグリシン、グリシンメチルエステル、グリシンエチルエステルなどのグリシン誘導体及びその塩、カダベリン、プトレッシンなどのジアミン化合物及びその誘導体もしくはその塩等が挙げられる。これらは、単独で用いられてもよく、２種以上併用されてもよい。
【００２３】
上記血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤の量は、その種類によっても異なるが、少ない場合にはＸＩＩＩ因子阻害効果が十分でないとがあり、多すぎると、検査値に悪影響を及ぼすことがある。従って、血液１ｍＬに対し、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤の量は０．０１〜２０ｍｇの範囲が好ましく、より好ましくは０．０５〜１０ｍｇである。
【００２４】
また、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の反応を阻害したフィブリンは、プラスミンによる線溶を受けやすいので、上記血液凝固促進剤中に抗線溶剤または抗プラスミン剤を添加してもよい。
【００２５】
上記抗線溶剤または抗プラスミン剤としては、その種類は特に限定されないが、ｔ−４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸、ε−アミノカプロン酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、アプロチニン、大豆トリプシンインヒビターなどを挙げることができる。これらは単独で用いられてもよく、２種以上併用されてもよい。
【００２６】
また、これらの抗線溶剤または抗プラスミン剤は、得られる血清を用いた臨床検査に影響しない程度の量で、血液凝固促進剤中に添加すればよい。例えば、ｔ−４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸、ε−アミノカプロン酸、ｐ−アミノメチル安息香酸については、血液１ｍＬに対し、約１０^-2〜１０^-8ｇ程度、アプロチニンの場合には、血液１ｍＬに対し、約１００〜６００ＫＩＵ（単位）、大豆トリプシンインヒビターは、血液１ｍＬに対し、約５００〜４０００ＦＵ（単位）の割合で血液凝固促進剤中に含有される。
【００２７】
上記血液凝固促進剤は、血液検査用容器内に収納されるが、その方法については特に限定されない。例を挙げると、血液凝固促進剤を溶液にして容器の内壁に塗布し、乾燥する方法、粉末もしくは塊で管内に収納する方法、不織布、織布、樹脂ビーズなどに担持させて管内に収容する方法、血液凝固促進剤を溶液にして管内に収容し、凍結乾燥する方法及びそれらを組合わせた方法などを挙げることができる。
【００２８】
容器本体の内壁に血餅付着防止成分を塗布することにより、遠心分離時の血餅剥離性を向上させることができる。
上記血餅付着防止成分としては、水に対して難溶または不溶の親水性物質が挙げられる。例えば、ジメチルポリシロキサンのような脂肪族変性シリコーンオイ、例えばメチルフェニルポリシロキサンなどの芳香族変性シリコーンオイル、アルコール変性シリコーンオイル、部分ケン化ポリビニルアルコール、ビニルピロリドンと酢酸ビニルとの共重合体などを挙げることができる。これらは単独で用いられてもよく、２種以上併用されてもよい。
【００２９】
また、上記血餅付着防止成分の量は、血液１ｍＬに対し、０．００１〜１０ｍｇとすることが好ましい。０．００１ｍｇ未満の場合には、十分な血餅剥離機能が発現しないことがあり、１０ｍｇを超えると、検査値に悪影響を及ぼすことがある。血餅付着防止成分は、血液検査用容器に塗布されるが、その塗布方法については特に限定されないが、溶液にして塗布し、乾燥させる方法を用いることが好ましい。また、上記血液凝固促進剤と混合し、同時に血液検査用容器の内壁に塗布してもよい。
【００３０】
さらに、本発明に係る血液検査用容器内には、血清分離剤が収納されていてもよい。血清分離剤は、通常、容器本体の底部に収容される。この場合、血液検査用容器に採血された血液が凝固した後、遠心分離を行うと、血清分離剤が血餅と血清との間に移動し、隔壁を形成することにより、血清と血餅とが分離される。
【００３１】
上記血清分離剤としては、公知のチクソトロピー性を有するゲル状物質が挙げられ、例えば、常温で流動性を有する合成樹脂などに、チクソトロピー性付与剤、比重調整剤及び粘度調整剤などの添加物を添加し、混合することにより得られる。
【００３２】
上記合成樹脂としては、例えば、ジシクロペンタジエンなどのオリゴマーが、上記チクソトロピー性付与剤としては、例えば、ソルビトールと芳香族アルデヒドとの縮合物などが、上記比重調整剤としては、例えば、シリカ、塩化パラフィンなどが、上記粘度調整剤としては、例えば、フタル酸エステル、エポキシ化大豆油などが挙げられる。
【００３３】
【実施例】
以下、本発明の具体的な実施例を挙げることにより、本発明をより詳細に説明する。本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。
【００３４】
（実施例１）
血液凝固促進剤としてトロンビン（持田製薬社製）４０００単位と、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤としてのマレイミド１０ｍｇとに生理食塩水を加えて全量を２．０ｍＬとした。この溶液を、内径１６ｍｍ×長さ１００ｍｍのポリエチレン製チューブに４０μＬ添加し、乾燥し、実施例１の血液検査用容器を得た。
【００３５】
（実施例２）
実施例１において、マレイミドの使用量を１０ｍｇから４０ｍｇに変更したことを除いては、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００３６】
（実施例３）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）２０００単位及びフィブリン架橋阻害剤としてのグリシンエチルエステル２００ｍｇに、生理食塩水を加え、全量を２．０ｍＬとした。この溶液を、実施例１と同様にして、ポリエチレン製チューブに添加し、乾燥し、実施例３の血液検査用容器を得た。
【００３７】
（実施例４）
グリシンエチルエステルの使用量を２００ｍｇから８００ｍｇに変更したことを除いては、実施例３と同様にして血液検査用容器を得た。
【００３８】
（実施例５）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）８０００単位と、フィブリン架橋阻害剤としての塩酸グリシンメチルエステル１００ｍｇとに生理食塩水及び水酸化リチウムを加え、ｐＨ＝７．５の全量２．０ｍＬの溶液を得た。この溶液を、ポリエチレン製チューブに実施例１と同様にして添加し、乾燥し、実施例５の血液検査用容器を得た。
【００３９】
（実施例６）
塩酸グリシンメチルエステルの使用量を１００ｍｇから４００ｍｇに変更したことを除いては、実施例５と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４０】
（実施例７）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位及びフィブリン架橋阻害剤としてのグリシルグリシン４００ｍｇに生理食塩水を加え、全量を２．０ｍＬとした。以下、この溶液を用い、実施例１と同様にして実施例７の血液検査用容器を得た。
【００４１】
（実施例８）
グリシルグリシンの使用量を４００ｍｇから１６００ｍｇに変更したことを除いては、実施例７と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４２】
（実施例９）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位及びフィブリン架橋阻害剤として塩酸グリシンエチルエステル４００ｍｇを配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加え、ｐＨを７．５に合わせ、全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用い、以下、実施例１と同様にして、血液検査用容器を得た。
【００４３】
（実施例１０）
塩酸グリシンエチルエステルの使用量を４００ｍｇから８００ｍｇに変更したことを除いては、実施例９と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４４】
（実施例１１）
血液凝固促進剤としての蛇毒トロンビン様酵素（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）（アメリカンダイアグノスティカ製）４０００単位及びフィブリン架橋阻害剤として塩酸グリシンエチルエステル４００ｍｇを配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加えてｐＨ値を７．５とし、全量２．０ｍＬの溶液を得た。この溶液を用い、以下実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４５】
（実施例１２）
塩酸グリシンエチルエステルの配合量を４００ｍｇから８００ｍｇに変更したことを除いては、実施例１１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４６】
（実施例１３）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位及び血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤としてマレイミド４０ｍｇ、及び血餅剥離剤としてアルコール変性シリコーンオイル２０ｍｇを配合し、生理食塩水を加えて全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用い、以下、実施例１と同様にして、血液検査用容器を得た。
【００４７】
（実施例１４）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位、フィブリン架橋阻害剤として塩酸グリシンメチルエステル２００ｍｇ、血餅剥離剤としてアルコール変性シリコーンオイル２０ｍｇを配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加えて、ｐＨ＝７．５とし、かつ全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用いて、以下実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４８】
（比較例１）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位に生理食塩水を加えて、全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用いて、以下、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００４９】
（比較例２）
トロンビンの使用量を４０００単位から８０００単位に変更したことを除いては、比較例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００５０】
（比較例３）
血液凝固促進剤としての蛇毒（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）トロンビン様酵素（ナスカ製）４０００単位に、生理食塩水を加えて全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用いて、以下、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００５１】
（比較例４）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤としてマレイミド３．０ｍｇを配合し、これらに生理食塩水を加えて全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用いて、以下、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００５２】
（比較例５）
血液凝固促進剤としてのトロンビン（持田製薬社製）４０００単位及びフィブリン架橋阻害剤として塩酸グリシンメチルエステル３．０ｍｇを配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加えてｐＨを７．５に合わせ、かつ全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用い、以下、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。
【００５３】
〔評価〕
上記のようにして得た実施例１〜１４及び比較例１〜５の各血液検査用容器を用い、ヒト新鮮血８ｍＬを各血液検査用容器に加え、緩やかに１回だけ混和し、５分間静置した。５分後に、毎分３０００回転で５分間遠心分離し、分離後の血清の状態を目視により確認した。結果を下記の表１に示す。
【００５４】
【表１】

【００５５】
上記５分間の遠心分離後に、実施例１〜１４及び比較例１〜５の何れの血液検査用容器においても凝固は一応完了していたが、比較例１〜５では血清中にフィブリンが析出していた。すなわち、架橋した強固なフィブリンが凝固成分の拡散を妨げ、部分的に未凝固な部分が残っているものと考えられる。
【００５６】
これに対して、実施例１〜１４では、分離後の血清にフィブリンの析出は認められなかった。
【００５７】
【発明の効果】
以上のように、本発明に係る血液検査用容器では、容器本体に血液凝固促進剤と、フィブリン析出抑制剤とが収納されているので、採血後に血液凝固が速やかに進行し、血液凝固時間を短縮することができるとともに、凝固に際し、フィブリン析出抑制剤によりフィブリンの血清中への析出が抑制されるので、フィブリンの混入がほとんど生じない血清を得ることができる。
【００５８】
よって、短時間で血清を得ることができるので、緊急を要する医療現場において用いることができ、かつフィブリンの析出がほとんど生じないので、信頼性に優れた検査結果を得ることが可能となる。
【００５９】
本発明において、上記血液凝固成分が、ペプチド鎖のアルギニンと任意のアミノ酸残基との結合及び／またはリジンと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る酵素で構成されている場合には、血液凝固がより一層速やかに進行する。従って、血清を得るまでの時間を短縮することができ、さらに上記フィブリン析出抑制剤が添加されているので、フィブリンの析出が抑制されるだけでなく、採血直後それほど十分に混和する必要がない。
【００６０】
フィブリン析出抑制剤として、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤及び／またはフィブリン架橋阻害剤を用いた場合には、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤の関与する反応が阻害され、あるいはフィブリン架橋阻害剤によりフィブリンの架橋が阻害されるので、血清中へのフィブリンの析出を効果的に抑制することができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a blood test container used in the field of clinical tests using serum such as serum biochemical tests and serum immunology tests.
[0002]
[Prior art]
In recent years, blood tests such as serum biochemical tests, serum immunology tests, and blood cell tests have become widespread with the progress of clinical test techniques, and have greatly contributed to disease prevention and early diagnosis.
[0003]
In the serum test, it is necessary to separate the serum from the blood collected from the patient. When separating serum, blood is first collected in a blood test container and coagulated, and then the serum is separated from the clot by centrifugation.
[0004]
The separated serum is usually transferred to another container by pipette or decantation. However, in recent years, in order to increase the test speed and to process a large number of specimens, a method of dispensing serum directly from a blood test container to an automatic analyzer using an automatic dispenser has been widely used.
[0005]
As a conventional blood test container, a glass container or a container made of a synthetic resin such as polystyrene, polymethyl methacrylate, or polyethylene is used. However, these blood test containers have the following problems. .
[0006]
First, after injecting blood into a blood test container, a considerable amount of time was required until coagulation. Therefore, when it is necessary to perform a serum test urgently, the request could not be met.
[0007]
That is, even when a glass blood test container that is said to have the shortest blood coagulation time is used, it takes 40 minutes to 60 minutes after blood injection until coagulation. Furthermore, the synthetic resin blood test container required a time of 4 hours or more until blood coagulation.
[0008]
In order to solve the above-mentioned problems, a method in which fine particles such as silica, kaolin, bentonite and the like are put into a blood test container as a coagulation accelerator is widely used.
[0009]
Japanese Patent Application Laid-Open No. 5-157747 discloses a method using an enzyme drug such as thrombin or snake venom enzyme that promotes a reaction in which fibrinogen, which is the final stage of the coagulation reaction, is converted to fibrin as a blood coagulation promoting component. ing.
[0010]
In the method described in the above prior art, an enzyme drug such as thrombin or snake venom enzyme is housed in the central portion of the bottomed tube for blood test while being impregnated in a support such as a nonwoven fabric, filter paper, or cloth. In this method, even when a tube made of synthetic resin is used as a bottomed tube for blood test, the coagulation time is greatly shortened and coagulation is almost completed in about 5 minutes.
[0011]
However, when enzyme drugs such as thrombin and snake venom enzymes are used, the coagulation reaction proceeds very quickly, so if not mixed well immediately after blood collection, coagulation proceeds rapidly in part, but overall The coagulation time tended to be long. As a result, there arises a problem that a large amount of fibrin precipitates in serum after centrifugation. This is because the blood part in direct contact with thrombin or the snake venom enzyme rapidly coagulates, so that the produced fibrin or three-dimensionally cross-linked fibrin gel surrounds the enzyme, and that between the enzyme and the uncoagulated blood part. This is considered to be because the above contact is suppressed, and the subsequent coagulation reaction is difficult to proceed.
[0012]
However, when urgent or a large amount of sample needs to be processed, there is no time to mix well after collecting blood in a blood test container. Therefore, enzymes such as thrombin and snake venom enzyme are not available. In the method using a systemic drug, it has been very difficult to cope with a case where a large amount of specimen is processed or an emergency is required.
[0013]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention eliminates the above-mentioned drawbacks of the prior art, simplifies the cumbersome work of mixing well immediately after blood collection, allows blood to coagulate in a short time, and prevents fibrin contamination. An object of the present invention is to provide a blood test container capable of reliably obtaining a small amount of serum.
[0014]
[Means for Solving the Problems]
The present invention has been made in order to achieve the above-mentioned problem. In the blood test container according to the present invention, a blood coagulation promoter and fibrin are precipitated in the serum during centrifugation after blood coagulation. And a fibrin precipitation inhibitor that suppresses this.
[0015]
As the blood coagulation promoter, for example, an enzyme capable of hydrolyzing the bond between arginine of a peptide chain and any amino acid residue and / or the bond between lysine and any amino acid residue can be used.
[0016]
In a specific aspect of the present invention, as the fibrin deposition inhibitor, at least one of a blood coagulation factor XIII inhibitor that inhibits a reaction involving blood coagulation factor XIII and a fibrin crosslinking inhibitor that inhibits fibrin crosslinking. Is used.
[0017]
The blood coagulation factor XIII is known as a transglutaminase that forms a three-dimensional cross-link by an isopeptide bond between fibrin monomers generated when an enzyme such as thrombin acts on blood. This three-dimensional cross-linking results in a fibrin gel that forms a fibrin gel. Even if an enzyme that rapidly coagulates blood such as thrombin or snake venom enzyme by inhibiting blood coagulation factor XIII is used. Thus, serum that is unlikely to cause fibrin deposition can be obtained without requiring such urgent and complicated mixing.
[0018]
Details of the present invention will be described below.
In the present invention, the material constituting the container body of the blood test container is not particularly limited, and has been used in blood test containers from appropriate conventional methods such as glass, thermoplastic resin, thermosetting resin, and modified natural resin. Material can be used. Further, the shape of the container main body is not particularly limited, and a bottomed cylindrical tube such as a test tube or an appropriate shape such as a bottle shape can be used.
The blood test container contains a blood coagulation promoter and a fibrin deposition inhibitor.
[0019]
The blood coagulation promoter is not particularly limited, but an enzyme capable of hydrolyzing the bond between arginine and any amino acid residue of the peptide chain and / or the bond between lysine and any amino acid residue is used. It is done. Examples of such enzymes include serine proteases such as thrombin and thrombin-like enzymes obtained from snake venom, thiol proteases such as cathepsin B and ficin, metal proteases such as kininase I, and serine proteases are particularly preferred. Used for.
[0020]
The amount of the blood coagulation promoter is preferably 0.1 to 100 units with respect to 1 mL of blood. If it is less than 0.1 unit, the blood coagulation time may be prolonged or coagulation may be incomplete. If it exceeds 100 unit, the test value may be adversely affected and the cost will be high. More preferably, it is 0.5 to 50 units.
[0021]
As the fibrin precipitation inhibitor, a blood coagulation factor XIII inhibitor and / or a ficin crosslinking inhibitor is used.
As the blood coagulation factor XIII inhibitor, substances such as maleimide, N-ethylmaleimide, p-chloro mercuric benzoic acid, p-chloro mercuric phenyl sulfonic acid, phenyl mercuric and derivatives thereof are used.
[0022]
In addition, as the fibrin crosslinking inhibitor, a substance that inhibits isopeptide bonding with a glutamyl residue is used, and specifically, glycine derivatives such as glycine, glycylglycine, glycine methyl ester, glycine ethyl ester, and salts thereof. Diamine compounds such as cadaverine and putrescine, and derivatives or salts thereof. These may be used alone or in combination of two or more.
[0023]
The amount of the blood coagulation factor XIII inhibitor varies depending on the type, but if it is small, the factor XIII inhibitory effect may not be sufficient, and if it is too large, the test value may be adversely affected. Therefore, the amount of the blood coagulation factor XIII inhibitor is preferably in the range of 0.01 to 20 mg, more preferably 0.05 to 10 mg per 1 mL of blood.
[0024]
Further, since fibrin that inhibits the reaction of blood coagulation factor XIII is susceptible to fibrinolysis by plasmin, an anti-ray solvent or an antiplasmin agent may be added to the blood coagulation promoter.
[0025]
The type of the anti-ray solvent or antiplasmin agent is not particularly limited, but t-4- (aminomethyl) -cyclohexanecarboxylic acid, ε-aminocaproic acid, p-aminomethylbenzoic acid, aprotinin, soybean trypsin inhibitor, etc. Can be mentioned. These may be used alone or in combination of two or more.
[0026]
In addition, these anti-ray solvents or antiplasmin agents may be added to the blood coagulation promoter in such an amount that does not affect clinical tests using the obtained serum. For example, about t-4- (aminomethyl) -cyclohexanecarboxylic acid, ε-aminocaproic acid, p-aminomethylbenzoic acid, about 10 ⁻² to 10 ⁻⁸ g for 1 mL of blood, in the case of aprotinin About 100 to 600 KIU (unit) per 1 mL of blood, soybean trypsin inhibitor is contained in the blood coagulation promoter at a ratio of about 500 to 4000 FU (unit) per 1 mL of blood.
[0027]
The blood coagulation promoter is stored in a blood test container, but the method is not particularly limited. For example, a blood coagulation promoter is applied to the inner wall of the container as a solution, dried, stored in a tube with powder or lump, and supported on a nonwoven fabric, woven fabric, resin beads, etc. and stored in the tube. Examples thereof include a method, a method in which a blood coagulation accelerator is stored in a tube and freeze-dried, and a method of combining them.
[0028]
By applying a clot adhesion preventing component to the inner wall of the container main body, the clot removability at the time of centrifugation can be improved.
Examples of the clot adhesion preventing component include hydrophilic substances that are hardly soluble or insoluble in water. For example, aliphatic modified silicone oil such as dimethylpolysiloxane, aromatic modified silicone oil such as methylphenylpolysiloxane, alcohol modified silicone oil, partially saponified polyvinyl alcohol, copolymer of vinyl pyrrolidone and vinyl acetate, etc. Can be mentioned. These may be used alone or in combination of two or more.
[0029]
Moreover, it is preferable that the quantity of the said clot adhesion prevention component shall be 0.001-10 mg with respect to 1 mL of blood. If it is less than 0.001 mg, a sufficient clot peeling function may not be exhibited, and if it exceeds 10 mg, the test value may be adversely affected. The clot adhesion preventing component is applied to a blood test container, but the application method is not particularly limited, but it is preferable to use a method of applying the solution in a solution and drying. Further, it may be mixed with the blood coagulation promoter and applied to the inner wall of the blood test container at the same time.
[0030]
Furthermore, a serum separating agent may be accommodated in the blood test container according to the present invention. The serum separating agent is usually stored at the bottom of the container body. In this case, when the blood collected in the blood test container is coagulated and then centrifuged, the serum separating agent moves between the clot and the serum to form a septum, thereby Are separated.
[0031]
Examples of the serum separating agent include known thixotropic gel substances, such as synthetic resins having fluidity at room temperature, and additives such as thixotropic imparting agents, specific gravity adjusting agents, and viscosity adjusting agents. It is obtained by adding and mixing.
[0032]
Examples of the synthetic resin include oligomers such as dicyclopentadiene, examples of the thixotropic property-imparting agent include condensates of sorbitol and aromatic aldehyde, and examples of the specific gravity adjusting agent include silica and chloride. Examples of the viscosity modifiers such as paraffin include phthalate esters and epoxidized soybean oil.
[0033]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail by giving specific examples of the present invention. The present invention is not limited to the following examples.
[0034]
(Example 1)
Saline was added to 4000 units of thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) as a blood coagulation promoter and 10 mg of maleimide as a blood coagulation factor XIII inhibitor to make a total volume of 2.0 mL. 40 μL of this solution was added to a polyethylene tube having an inner diameter of 16 mm and a length of 100 mm and dried to obtain a blood test container of Example 1.
[0035]
(Example 2)
In Example 1, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1 except that the amount of maleimide used was changed from 10 mg to 40 mg.
[0036]
(Example 3)
Saline was added to 2000 units of thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) as a blood coagulation promoter and 200 mg of glycine ethyl ester as a fibrin crosslinking inhibitor to make the total volume 2.0 mL. In the same manner as in Example 1, this solution was added to a polyethylene tube and dried to obtain a blood test container of Example 3.
[0037]
(Example 4)
A blood test container was obtained in the same manner as in Example 3 except that the amount of glycine ethyl ester was changed from 200 mg to 800 mg.
[0038]
(Example 5)
Saline and lithium hydroxide are added to 8000 units of thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) as a blood coagulation promoter and 100 mg of glycine methyl ester as a fibrin crosslinking inhibitor, and the total amount of pH = 7.5 is 2.0 mL. Solution was obtained. This solution was added to a polyethylene tube in the same manner as in Example 1 and dried to obtain a blood test container of Example 5.
[0039]
(Example 6)
A blood test container was obtained in the same manner as in Example 5 except that the amount of hydrochloric acid glycine methyl ester was changed from 100 mg to 400 mg.
[0040]
(Example 7)
Saline was added to 4000 units of thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) as a blood coagulation promoter and 400 mg of glycylglycine as a fibrin crosslinking inhibitor to make the total volume 2.0 mL. Hereinafter, using this solution, a blood test container of Example 7 was obtained in the same manner as Example 1.
[0041]
(Example 8)
A blood test container was obtained in the same manner as in Example 7 except that the amount of glycylglycine used was changed from 400 mg to 1600 mg.
[0042]
Example 9
Thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) 4000 units as a blood coagulation promoter and 400 mg glycine ethyl ester hydrochloride as a fibrin crosslinking inhibitor are added, physiological saline and lithium hydroxide are added, the pH is adjusted to 7.5, and the total amount is adjusted. 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0043]
(Example 10)
A blood test container was obtained in the same manner as in Example 9 except that the amount of hydrochloric acid glycine ethyl ester was changed from 400 mg to 800 mg.
[0044]
Example 11
4,000 units of snake venom thrombin-like enzyme (Bataxobin) (manufactured by American Diagnostics) as a blood coagulation promoter and 400 mg of glycine ethyl ester hydrochloride as a fibrin cross-linking inhibitor were added, and physiological saline and lithium hydroxide were added to adjust the pH value. Was 7.5, and a total amount of 2.0 mL of solution was obtained. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0045]
Example 12
A blood test container was obtained in the same manner as in Example 11 except that the amount of glycine hydrochloride ethyl ester was changed from 400 mg to 800 mg.
[0046]
(Example 13)
Thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) 4000 units as a blood coagulation accelerator, maleimide 40 mg as a blood coagulation factor XIII inhibitor, and alcohol-modified silicone oil 20 mg as a blood clot release agent are added, and physiological saline is added to make a total amount. 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0047]
(Example 14)
Thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) 4000 units as a blood coagulation promoter, glycine methyl ester 200 mg as a fibrin crosslinking inhibitor, alcohol-modified silicone oil 20 mg as a clot release agent, and physiological saline and lithium hydroxide are added. PH = 7.5 and the total volume was 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0048]
(Comparative Example 1)
Saline was added to 4000 units of thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical) as a blood coagulation promoter to make the total volume 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0049]
(Comparative Example 2)
A blood test container was obtained in the same manner as in Comparative Example 1 except that the amount of thrombin used was changed from 4000 units to 8000 units.
[0050]
(Comparative Example 3)
To 4000 units of snake venom thrombin-like enzyme (manufactured by Nasca) as a blood coagulation promoter, physiological saline was added to make a total volume of 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0051]
(Comparative Example 4)
4000 units of thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) as a blood coagulation promoter and 3.0 mg of maleimide as a blood coagulation factor XIII inhibitor were added, and physiological saline was added thereto to make a total volume of 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0052]
(Comparative Example 5)
Thrombin (manufactured by Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) 4000 units as a blood coagulation promoter and 3.0 mg glycine methyl ester hydrochloride as a fibrin crosslinking inhibitor were added, and physiological saline and lithium hydroxide were added to adjust the pH to 7.5, The total amount was 2.0 mL. Using this solution, a blood test container was obtained in the same manner as in Example 1.
[0053]
[Evaluation]
Using each blood test container of Examples 1 to 14 and Comparative Examples 1 to 5 obtained as described above, 8 mL of human fresh blood was added to each blood test container and gently mixed once for 5 minutes. Left to stand. After 5 minutes, centrifugation was performed at 3000 rpm for 5 minutes, and the state of the serum after separation was visually confirmed. The results are shown in Table 1 below.
[0054]
[Table 1]

[0055]
After centrifugation for 5 minutes, coagulation was temporarily completed in any of the blood test containers of Examples 1 to 14 and Comparative Examples 1 to 5, but in Comparative Examples 1 to 5, fibrin was precipitated in the serum. It was. That is, it is considered that the cross-linked strong fibrin hinders diffusion of the coagulation component, and a partially uncoagulated portion remains.
[0056]
In contrast, in Examples 1 to 14, no fibrin deposition was observed in the serum after separation.
[0057]
【The invention's effect】
As described above, in the blood test container according to the present invention, since the blood coagulation promoter and the fibrin precipitation inhibitor are stored in the container body, blood coagulation proceeds rapidly after blood collection, and the blood coagulation time is increased. In addition to being able to be shortened, the fibrin precipitation inhibitor suppresses the precipitation of fibrin into the serum during coagulation, so that serum with little fibrin contamination can be obtained.
[0058]
Therefore, since serum can be obtained in a short time, it can be used in an emergency medical field and fibrin is hardly precipitated, so that a highly reliable test result can be obtained.
[0059]
In the present invention, when the blood coagulation component is composed of an enzyme capable of hydrolyzing the bond between arginine and any amino acid residue of the peptide chain and / or the bond between lysine and any amino acid residue. Blood clotting proceeds more rapidly. Accordingly, the time required to obtain serum can be shortened, and since the fibrin precipitation inhibitor is added, not only fibrin precipitation is suppressed, but it is not necessary to mix so much immediately after blood collection.
[0060]
When a blood coagulation factor XIII inhibitor and / or a fibrin crosslinking inhibitor is used as a fibrin precipitation inhibitor, the reaction involving the blood coagulation factor XIII inhibitor is inhibited, or fibrin crosslinking inhibitor Since the crosslinking is inhibited, it is possible to effectively suppress the deposition of fibrin in the serum.

Claims

The container body contains a serine protease that is a blood coagulation promoter and a blood coagulation factor XIII inhibitor and / or a fibrin cross-linking inhibitor that inhibits fibrin from depositing in the serum during centrifugation after blood coagulation. A blood test container.

The blood coagulation factor XIII inhibitor is selected from the group consisting of maleimide, N-ethylmaleimide, p-chloro mercuric benzoic acid, p-chloro mercuric phenyl sulfonic acid and phenyl mercuric and derivatives or salts thereof. The blood test container according to claim 1 , wherein the blood test container is at least one kind.

The blood test container according to claim 1 , wherein the fibrin crosslinking inhibitor is at least one selected from the group consisting of glycine, a diamine compound, and derivatives or salts thereof.