JP3869556B2

JP3869556B2 - Helicobacter pylori-derived antigen and method for diagnosing Helicobacter pylori infection using the same

Info

Publication number: JP3869556B2
Application number: JP18335498A
Authority: JP
Inventors: 勇近藤; 定頼保科; 三木　　敬三郎
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-06-15
Filing date: 1998-06-15
Publication date: 2007-01-17
Anticipated expiration: 2018-06-15
Also published as: JP2000002706A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori) 由来の新規な抗原及びそれを用いたヘリコバクター・ピロリ感染の診断方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヘリコバクター・ピロリは胃潰瘍及び十二指腸潰瘍の原因菌であることが確認されており、最近の研究では、胃癌にも関与することがわかっている。日本人の４０歳代以上の５０％以上がヘリコバクター・ピロリに感染していることもわかっている。従って、ある人がヘリコバクター・ピロリに感染しているか否かを診断することは、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍の診断を行ない、また、その人が将来的に胃潰瘍及び十二指腸潰瘍並びに胃癌に罹患する可能性を予測する上でも重要である。
【０００３】
従来、ヘリコバクター・ピロリに感染しているか否かの診断は、患者の口にサイホン管を入れ、食道を経て胃にサイホン管を到達させ、このサイホン管で胃液を吸い上げ、胃粘膜に棲息する、該胃液中に含まれるヘリコバクター・ピロリ菌体が有する抗原を、該抗原に対する抗体を用いた免疫測定法により検出することにより行なわれている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、この方法では、患者の口から管を挿入して胃にまで到達させなければならないため、患者に与える苦痛が大きく、患者の胃粘膜を損傷する可能性が少なくなく、また、麻酔が必要となる等、医師の手間と技術を要する。さらに、この方法によれば、胃炎においても抗原が検出されるため、胃潰瘍である場合と胃炎である場合の区別がつかないという問題もある。
【０００５】
従って、本発明の目的は、患者に苦痛を与えることなく簡便に診断することができ、胃炎である場合を区別できる、ヘリコバクター・ピロリ感染の診断方法及び該方法に用いられるヘリコバクター・ピロリ由来の新規な抗原を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、特定の方法で調製される、ヘリコバクター・ピロリ由来の新規な抗原に対するＩｇＡ抗体がヒト血清中に存在することを見出し、血液中の該抗体を検出することによりヘリコバクター・ピロリに感染しているか否かを診断することができることに想到し本願発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、胃潰瘍患者又は十二指腸潰瘍患者の胃液中に存在するヘリコバクター・ピロリをリゾチーム処理し、次いでＮ−アセチルグルコサミニデース処理したものを電気泳動にかけることにより得られるヘリコバクター・ピロリ由来抗原であって、電気泳動により測定される分子量が６５〜７０ｋｄ、７５〜８６ｋｄ、約１３２ｋｄ又は約１４０ｋｄであり、該ヘリコバクター・ピロリに感染しているヒトの血清中に該抗原に対応するＩｇＡ抗体が存在する、ヘリコバクター・ピロリ由来抗原又はその抗体結合性断片を提供する。また、本発明は、上記本発明のヘリコバクター・ピロリ由来抗原又はその抗体結合性断片と、被検血液中の該抗原に対応する前記ＩｇＡ抗体との抗原抗体反応に基づく免疫測定により該被検血液中の前記ＩｇＡ抗体を測定する、ヘリコバクター・ピロリ感染の診断方法を提供する。さらに、本発明は、上記本発明のヘリコバクター・ピロリ由来抗原を有効成分として含有するヘリコバクター・ピロリ感染の診断試薬を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
上述のように、本発明のヘリコバクター・ピロリ由来抗原は、胃潰瘍患者又は十二指腸潰瘍患者の胃液中に存在するヘリコバクター・ピロリをリゾチーム処理し、次いでＮ−アセチルグルコサミニデース(N-acetylglucosaminidase) 処理したものを電気泳動にかけることにより得られるものである。なお、リゾチーム処理に先立ち、超音波破砕を行なうことが好ましい。本発明の抗原の好ましい調製方法は、下記実施例に具体的に記載されている。
【０００９】
なお、周知のように、抗原がその対応抗体と特異的に反応するためには、抗原全体が必要なのではなく、該抗体と結合する対応エピトープを含むその断片も該抗体と特異的に結合することが可能である。従って、上記した本発明の抗原の、上記対応ＩｇＡ抗体と特異的に結合することができる断片( 本明細書において「抗体結合性断片」という) も本発明の範囲に含まれる。
【００１０】
本発明の抗原は４種類あり、電気泳動により測定される分子量はそれぞれ６５〜７０ｋｄ、７５〜８６ｋｄ、約１３２ｋｄ及び約１４０ｋｄである。下記実施例に具体的に記載するように、これらの抗原は、いずれも、該抗原が由来するヘリコバクター・ピロリに感染しているヒトの血清中にその対応ＩｇＡ抗体が存在する。特に、分子量６５〜７０ｋｄ及び７５〜８６ｋｄの抗原は、その対応ＩｇＡ抗原が胃液中には存在せず、血清中にのみ存在する。そして、これらの対応ＩｇＡは、胃炎患者の胃液及び血清中には存在しない。従って、血液中に存在する、これらの対応ＩｇＡ抗体を測定することにより、ヘリコバクター・ピロリに感染しているか否かを診断することができる。なお、分子量６５〜７０ｋｄ及び７５〜８６ｋｄの抗原は、下記実施例で測定された分子量はそれぞれ６８ｋｄ及び７８ｋｄであるが、電気泳動の測定誤差により、それぞれ６５〜７０ｋｄ及び７５〜８６ｋｄの範囲に現れ得ると考えられる。
【００１１】
上記血清中の対応ＩｇＡ抗体は、上記本発明の抗原又はその抗体結合性断片と、被検血液中の該抗原に対応する前記ＩｇＡ抗体との抗原抗体反応に基づく免疫測定により測定することができる。免疫測定方法自体は周知であり、公知のいずれの方法をも適用することができる。すなわち、標識に基づいて分類すれば、酵素法、蛍光法、放射法、ビオチン法等があり、測定方式に基づいて分類すればサンドイッチ法、競合法、凝集法、比濁法等があるが、これらのいずれをも採用することができる。これらの各免疫測定方法自体はこの分野において周知であり、当業者が容易に実施できるものである。例えば、酵素標識抗体を用いたサンドイッチ法( サンドイッチＥＬＩＳＡ) により免疫測定を実施する場合を説明すると、先ず、本発明の抗原又はその抗体結合性断片を、例えばマイクロプレートのウェルやガラズビーズ等の固相に不動化し、非特異的反応を防ぐためにウシ血清アルブミン( ＢＳＡ) 、カゼイン等のタンパク質でブロッキング後、被検試料を反応させ、洗浄後、酵素標識した抗ヒトＩｇＡ抗体を反応させ、洗浄後、固相に結合した抗ヒトＩｇＡ抗体をその標識酵素による酵素反応に基づいて測定する。なお、被検試料としては、血清及び血漿並びにその希釈物が好ましいが、ドライケミストリーのように全血を検体として用いることができる系を用いる場合には、全血であってもよい。なお、本明細書における「測定」とは、検出及び定量の両者を包含する。
【００１２】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００１３】
(1) 抗原を含む試料の調製
典型的な胃潰瘍再発患者又は重度胃炎患者の胃液からヘリコバクター・ピロリを分離し、２００ｍｌのブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）にウシ胎児血清( ＦＣＳ) ）を２０％溶解したものに植え、微好気性の環境で５日間、３７℃で培養した。これを10,000 rpmで２０分間遠心し、沈渣として得られた菌をリン酸バッファー( ＰＢＳ) で洗浄し、さらに10,000 rpmで２０分間遠心した。これにＰＢＳを２ｍｌ加え、３０秒の超音波破砕を３回行い、これにＮ−アセチルグルコサミニデースを１ｍｇとリゾチームを１ｍｇ加え、３７℃で１時間保温した。これに、これと等量の２×ＳＤＳサンプルバッファー( ２０％グリセロール、１０％メルカプトエタノール、４．６％ＳＤＳ（ラウリル流酸ナトリウム）、０．１２６Ｍ Tris-HCl(pH6.8)、１２％ブロモフェノールブルー) を加え、９５℃で５分間加熱し、氷中で急冷した。
【００１４】
(2) 電気泳動
上述のように調製した抗原含有試料をポリアクリルアミド電気泳動にかけた。用いた濃縮ゲルは4.5%ポリアクリルアミドゲル(0.125 M Tris-HCl (pH6.8), 0.1% SDS)であり、分離ゲルは１０％ポリアクリルアミドゲル(0.56 M Tris-HCl (pH8.8), 0.15% SDS)であり、用いた電気泳動用バッファーは0.192 M グリシン、0.025 M Tris, 0.1% SDSであった。１つのウェルにつき、上記試料３０μｌを入れ、１４ｍＡで３．５時間泳動した。また、蛋白質分子量マーカーとしてチトクロムＣ( １４ｋｄ) 、ラビット筋肉ホスホリダーゼ( ９７．４ｋｄ) 及びβ−ガラクトシダーゼ( １１６ｋｄ) を用いた。
【００１５】
(3) ブロッティング
次いで、電気泳動後のゲルを転写用膜( イモビロンＰ( 商品名) ミリポア社製) にブロッティングした。ブロッティング装置はBIO RAD 社製TRANS-BLOT SD SEMI-DRY TRANSFER CELLを用い、ブロッティングバッファーとしては10％メタノール含有６×電気泳動用バッファーを用いた。ブロッティング装置にバッファーに浸した２枚のろ紙をひき、その上に親水化した転写用膜を載せた。その上に泳動後のゲルを載せ、さらにバッファーに浸した２枚のろ紙を載せて、１２０ｍＡで５０分間ブロッティングした。
【００１６】
(4) ブロッティング後の転写膜上の蛋白の検出
ブロッティング後の転写膜を染色液（100 ％メタノールにクマジーを1 ％溶かしたもの）に１０分間浸し、脱染液( メタノール、酢酸、水を50：5 ：45で混合したもの) でバンドが見えるまで脱染色した。
【００１７】
(5) バンドと患者血清又は胃液中のＩｇＡ抗体との反応
転写後の転写膜をＴＮ−ＴＸ(10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 0.5% Triton X100(商品名))で親水化した。次いで、1 ％ＢＳＡ−ＴＮ−ＴＸ( ＴＮ−ＴＸにＢＳＡを1 ％溶解) で１時間ブロッキングした。次いで転写膜をＰＢＳ−Ｔ( ＰＢＳに0.05％になるようにTween 20( 商品名) を溶解したもの) で５分間洗浄を５回し、ＰＢＳ−Ｔに患者血清又は患者胃液を0.2 ％溶解したものに浸し、９０分間振った。転写膜をＰＢＳ−Ｔで５分間洗浄を５回した後、ＰＢＳ−Ｔにアルカリ性ホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＡ抗体（DAKO社製）が０．１％になるように溶解したものに浸し、1 時間静置した。次いで転写膜をＰＢＳ−Ｔで１５分間洗浄を1 回、5 分間洗浄を4 回した。次いで転写膜をＡＰバッファー(100 mM Tris-HCl (pH 9.5), 100 mM NaCl, 5 mM MgCl₂, 0.3%５−ブロモ−４−クロロ−3 −インドリルホスフェート、0.6% NBT（ニトロブルーテトラゾリウム）) に４０分間浸した。軽く水洗し、風乾した。各バンドがアルカリ性ホスファターゼの酵素反応により着色したか否かを調べた。
【００１８】
(6) 結果
結果を下記表１に示す。なお、表中、「＋」の記号は、そのバンドが血清又は胃液中のＩｇＡ抗体と反応したことを示す。
【００１９】
【表１】

【００２０】
表１に示されるように、分子量６８ｋｄ及び７８ｋｄの抗原は胃潰瘍患者の血清中に含まれるＩｇＡ抗体とのみ反応し、胃炎患者の血清及び胃液中のＩｇＡとは反応しなかった。また、分子量１３２ｋｄ及び１４０ｋｄの抗原は、胃潰瘍患者の血清及び胃液中に含まれるＩｇＡ抗体とのみ反応し、胃炎患者の血清及び胃液中のＩｇＡとは反応しなかった。従って、これら４種類の抗原に対応する、血清中のＩｇＡ抗体を測定することにより、ヘリコバクター・ピロリに感染しているか否かを診断することができる。なお、これらの４種類の抗原は、公知の文献には対応すると思われるものが記載されておらず、新規なものである。
【００２１】
【発明の効果】
本発明により、胃潰瘍患者の血清中に対応ＩｇＡ抗体が存在し、胃炎患者の血清及び胃液中に対応ＩｇＡ抗体が存在しないヘリコバクター・ピロリの新規な抗原が提供された。本発明の抗原は、従来の抗原と異なりその対応抗体が患者血清中に存在するので、血清中の該対応抗体を測定することによりヘリコバクター・ピロリに感染しているか否かを診断することができる。従って、従来のように患者の胃液を採取する必要がなく、このため患者に苦痛を与えることなく、かつ簡便にヘリコバクター・ピロリ感染の診断を行なうことができる。また、本発明の抗原に対応するＩｇＡ抗体は胃炎患者の血清中には存在しないので、胃潰瘍と胃炎の識別も可能である。従って、本発明は胃潰瘍及び十二指腸潰瘍並びに胃癌の診断及び予防に大いに貢献するものと期待される。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel antigen derived from Helicobacter pylori and a method for diagnosing Helicobacter pylori infection using the same.
[0002]
[Prior art]
Helicobacter pylori has been confirmed to be the causative agent of gastric and duodenal ulcers, and recent studies have shown that it is also involved in gastric cancer. It is also known that over 50% of Japanese people in their 40s are infected with Helicobacter pylori. Therefore, diagnosing whether a person is infected with Helicobacter pylori makes a diagnosis of gastric ulcer and duodenal ulcer, and indicates that the person may suffer from gastric ulcer and duodenal ulcer and gastric cancer in the future. It is also important for prediction.
[0003]
Conventionally, diagnosis of whether or not Helicobacter pylori is infected, put a siphon tube in the patient's mouth, let the siphon tube reach the stomach through the esophagus, suck up gastric juice with this siphon tube, and inhale in the gastric mucosa, This is carried out by detecting an antigen contained in Helicobacter pylori cells contained in the gastric juice by an immunoassay using an antibody against the antigen.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
However, with this method, a tube must be inserted from the patient's mouth to reach the stomach, so there is a great deal of pain to the patient, and there is little possibility of damaging the patient's stomach mucosa, and anesthesia is required. It takes a lot of time and skill from a doctor. Further, according to this method, since an antigen is detected even in gastritis, there is a problem that it is impossible to distinguish between gastric ulcer and gastritis.
[0005]
Accordingly, an object of the present invention is to provide a method for diagnosing Helicobacter pylori infection that can be easily diagnosed without causing pain to the patient and can distinguish between cases of gastritis, and a novel method derived from Helicobacter pylori used in the method Is to provide the right antigen.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies, the present inventors have found that an IgA antibody against a novel antigen derived from Helicobacter pylori prepared by a specific method exists in human serum, and detects the antibody in blood. Thus, the present invention has been completed by conceiving that it is possible to diagnose whether Helicobacter pylori is infected.
[0007]
That is, the present invention relates to a Helicobacter pylori-derived antigen obtained by subjecting Helicobacter pylori present in the gastric fluid of a gastric ulcer patient or duodenal ulcer patient to lysozyme treatment, and then subjecting it to N-acetylglucosaminidase treatment. And the molecular weight measured by electrophoresis is 65 to 70 kd, 75 to 86 kd, about 132 kd or about 140 kd, and the IgA antibody corresponding to the antigen is present in the serum of a human infected with Helicobacter pylori. Provided is an antigen derived from Helicobacter pylori or an antibody-binding fragment thereof. Further, the present invention provides the test blood by immunoassay based on the antigen-antibody reaction of the above-described Helicobacter pylori-derived antigen of the present invention or an antibody-binding fragment thereof and the IgA antibody corresponding to the antigen in the test blood. A method for diagnosing Helicobacter pylori infection, comprising measuring the IgA antibody in the medium, is provided. Furthermore, the present invention provides a diagnostic reagent for Helicobacter pylori infection containing the above-described Helicobacter pylori-derived antigen of the present invention as an active ingredient.
[0008]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
As described above, the Helicobacter pylori-derived antigen of the present invention is obtained by treating lysozyme of Helicobacter pylori present in the gastric fluid of a stomach ulcer patient or a duodenal ulcer patient and then treating it with N-acetylglucosaminidase. Is obtained by electrophoresis. In addition, it is preferable to perform ultrasonic crushing prior to the lysozyme treatment. Preferred methods for preparing the antigens of the present invention are specifically described in the examples below.
[0009]
As is well known, in order for an antigen to react specifically with its corresponding antibody, the entire antigen is not necessary, and its fragment containing the corresponding epitope that binds to the antibody also specifically binds to the antibody. It is possible. Therefore, a fragment of the antigen of the present invention described above that can specifically bind to the corresponding IgA antibody (hereinafter referred to as “antibody-binding fragment”) is also included in the scope of the present invention.
[0010]
There are four types of antigens of the present invention, and the molecular weights measured by electrophoresis are 65 to 70 kd, 75 to 86 kd, about 132 kd, and about 140 kd, respectively. As specifically described in the Examples below, each of these antigens has its corresponding IgA antibody present in the serum of a human infected with Helicobacter pylori from which the antigen is derived. In particular, antigens with molecular weights of 65-70 kd and 75-86 kd have their corresponding IgA antigens not in the gastric juice but only in the serum. These corresponding IgAs are not present in the gastric fluid and serum of gastritis patients. Therefore, by measuring these corresponding IgA antibodies present in the blood, it is possible to diagnose whether or not they are infected with Helicobacter pylori. The antigens with molecular weights of 65 to 70 kd and 75 to 86 kd have molecular weights of 68 kd and 78 kd, respectively, measured in the following examples, but appear in the ranges of 65 to 70 kd and 75 to 86 kd, respectively, due to electrophoresis measurement errors. It is thought to get.
[0011]
The corresponding IgA antibody in the serum can be measured by immunoassay based on the antigen-antibody reaction between the antigen of the present invention or an antibody-binding fragment thereof and the IgA antibody corresponding to the antigen in the test blood. . The immunoassay method itself is well known, and any known method can be applied. That is, if classified based on the label, there are enzyme method, fluorescence method, radiation method, biotin method, etc. If classified based on the measurement method, there are sandwich method, competitive method, aggregation method, turbidimetric method, etc. Any of these can be employed. Each of these immunoassay methods is well known in the art and can be easily carried out by those skilled in the art. For example, a case where immunoassay is performed by a sandwich method using an enzyme-labeled antibody (sandwich ELISA) will be described. First, the antigen of the present invention or an antibody-binding fragment thereof is mixed with a solid phase such as a well of a microplate or a glass beads. In order to prevent non-specific reactions, blocking with proteins such as bovine serum albumin (BSA) and casein, reacting the test sample, washing, reacting with enzyme-labeled anti-human IgA antibody, washing, The anti-human IgA antibody bound to the solid phase is measured based on the enzyme reaction with the labeled enzyme. As the test sample, serum and plasma and dilutions thereof are preferable, but whole blood may be used when a system that can use whole blood as a specimen, such as dry chemistry, is used. In the present specification, “measurement” includes both detection and quantification.
[0012]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples. However, the present invention is not limited to the following examples.
[0013]
(1) Preparation of antigen-containing sample Helicobacter pylori was isolated from the gastric fluid of a typical gastric ulcer recurrence patient or severe gastritis patient, and 20% fetal calf serum (FCS) was dissolved in 200 ml of brain heart infusion (BHI). The plants were planted and cultured at 37 ° C. for 5 days in a microaerobic environment. This was centrifuged at 10,000 rpm for 20 minutes, and the bacteria obtained as a sediment were washed with a phosphate buffer (PBS), and further centrifuged at 10,000 rpm for 20 minutes. 2 ml of PBS was added thereto, and ultrasonic crushing for 30 seconds was performed three times. To this was added 1 mg of N-acetylglucosaminidase and 1 mg of lysozyme, and the mixture was kept at 37 ° C. for 1 hour. To this, an equal volume of 2 × SDS sample buffer (20% glycerol, 10% mercaptoethanol, 4.6% SDS (sodium lauryl sulfate), 0.126 M Tris-HCl (pH 6.8), 12% bromo Phenol blue) was added, heated at 95 ° C. for 5 minutes, and rapidly cooled in ice.
[0014]
(2) Electrophoresis The antigen-containing sample prepared as described above was subjected to polyacrylamide electrophoresis. The concentration gel used was 4.5% polyacrylamide gel (0.125 M Tris-HCl (pH 6.8), 0.1% SDS), and the separation gel was 10% polyacrylamide gel (0.56 M Tris-HCl (pH 8.8), 0.15). The electrophoresis buffer used was 0.192 M glycine, 0.025 M Tris, 0.1% SDS. In each well, 30 μl of the above sample was placed and electrophoresed at 14 mA for 3.5 hours. Moreover, cytochrome C (14 kd), rabbit muscle phosphoridase (97.4 kd) and β-galactosidase (116 kd) were used as protein molecular weight markers.
[0015]
(3) Blotting Next, the gel after electrophoresis was blotted onto a transfer membrane (Immobilon P (trade name) manufactured by Millipore). As a blotting apparatus, TRANS-BLOT SD SEMI-DRY TRANSFER CELL manufactured by BIO RAD was used, and 6 × electrophoresis buffer containing 10% methanol was used as a blotting buffer. Two filter papers immersed in a buffer were drawn on a blotting apparatus, and a hydrophilic transfer film was placed thereon. On top of this, the gel after electrophoresis was placed, and further two filter papers soaked in buffer were placed, and blotted at 120 mA for 50 minutes.
[0016]
(4) Detection of protein on the transfer membrane after blotting The blotted transfer membrane is immersed in a staining solution (100% methanol in 1% coomassie) for 10 minutes, and then destained solution (methanol, acetic acid, water 50%). : 5: 45) and destained until a band was seen.
[0017]
(5) Reaction of band with IgA antibody in patient serum or gastric juice Transfer membrane after transfer with TN-TX (10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 0.5% Triton X100 (trade name)) Hydrophilized. Subsequently, it was blocked with 1% BSA-TN-TX (1% BSA dissolved in TN-TX) for 1 hour. Next, the transfer membrane was washed 5 times for 5 minutes with PBS-T (Tween 20 (trade name) dissolved in PBS to 0.05%), and 0.2% of patient serum or patient gastric juice was dissolved in PBS-T. Soaked for 90 minutes. The transfer membrane was washed 5 times with PBS-T for 5 minutes, then immersed in PBS-T in which alkaline phosphatase-labeled anti-human IgA antibody (DAKO) was dissolved to 0.1%, and allowed to stand for 1 hour. I put it. Next, the transfer membrane was washed once with PBS-T for 15 minutes and four times for 5 minutes. Next, the transfer membrane was AP buffer (100 mM Tris-HCl (pH 9.5), 100 mM NaCl, 5 mM MgCl ₂ , 0.3% 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate, 0.6% NBT (nitroblue tetrazolium) ) For 40 minutes. Lightly washed with water and air dried. It was examined whether each band was colored by alkaline phosphatase enzymatic reaction.
[0018]
(6) The results are shown in Table 1 below. In the table, the symbol “+” indicates that the band reacted with IgA antibody in serum or gastric juice.
[0019]
[Table 1]

[0020]
As shown in Table 1, antigens with molecular weights of 68 kd and 78 kd reacted only with IgA antibody contained in the serum of gastric ulcer patients, and did not react with serum of gastritis patients and IgA in gastric juice. In addition, antigens with molecular weights of 132 kd and 140 kd reacted only with IgA antibodies contained in the serum and gastric juice of gastric ulcer patients, and did not react with the serum of gastritis patients and IgA in the gastric juice. Therefore, by measuring IgA antibodies in serum corresponding to these four types of antigens, it is possible to diagnose whether or not they are infected with Helicobacter pylori. Note that these four types of antigens are novel ones that are not described in the known literature.
[0021]
【The invention's effect】
According to the present invention, a novel antigen of Helicobacter pylori in which a corresponding IgA antibody is present in the serum of a gastric ulcer patient and no corresponding IgA antibody is present in the serum and gastric juice of a gastritis patient is provided. The antigen of the present invention is different from conventional antigens in that the corresponding antibody is present in the patient serum, so that it is possible to diagnose whether the virus is infected with Helicobacter pylori by measuring the corresponding antibody in the serum. . Therefore, it is not necessary to collect the gastric juice of the patient as in the prior art, and therefore it is possible to easily diagnose Helicobacter pylori infection without causing pain to the patient. Moreover, since the IgA antibody corresponding to the antigen of the present invention does not exist in the serum of gastritis patients, it is possible to distinguish gastric ulcer from gastritis. Therefore, the present invention is expected to greatly contribute to the diagnosis and prevention of gastric and duodenal ulcers and gastric cancer.

Claims

A Helicobacter pylori-derived antigen obtained by subjecting Helicobacter pylori present in the gastric fluid of a gastric ulcer patient or duodenal ulcer to lysozyme treatment and then subjecting to N-acetylglucosaminidase treatment, electrophoresis A Helicobacter pylori-derived antigen or an antibody-binding fragment thereof, which has a molecular weight of 65 kd to 70 kd and wherein IgA antibody corresponding to the antigen is present in human serum infected with Helicobacter pylori.

2. The antigen or antibody-binding fragment thereof according to claim 1, wherein the molecular weight is about 68 kd.

A Helicobacter pylori-derived antigen obtained by subjecting Helicobacter pylori present in the gastric fluid of a gastric ulcer patient or duodenal ulcer to lysozyme treatment and then subjecting to N-acetylglucosaminidase treatment, electrophoresis A Helicobacter pylori-derived antigen or an antibody-binding fragment thereof, wherein the molecular weight measured by is from 75 kd to 86 kd, and an IgA antibody corresponding to the antigen is present in the serum of a human infected with the Helicobacter pylori.

The antigen or antibody-binding fragment thereof according to claim 3, wherein the molecular weight is about 78 kd.

A Helicobacter pylori-derived antigen obtained by subjecting Helicobacter pylori present in the gastric fluid of a gastric ulcer patient or duodenal ulcer to lysozyme treatment and then subjecting to N-acetylglucosaminidase treatment, electrophoresis A Helicobacter pylori-derived antigen or an antibody-binding fragment thereof, wherein the molecular weight measured by is about 132 kd, and an IgA antibody corresponding to the antigen is present in the serum of a human infected with the Helicobacter pylori.

A Helicobacter pylori-derived antigen obtained by subjecting Helicobacter pylori present in the gastric fluid of a gastric ulcer patient or duodenal ulcer to lysozyme treatment and then subjecting to N-acetylglucosaminidase treatment, electrophoresis A Helicobacter pylori-derived antigen or an antibody-binding fragment thereof, wherein the molecular weight measured by is about 140 kd, and an IgA antibody corresponding to the antigen is present in the serum of a human infected with the Helicobacter pylori.

The Helicobacter pylori-derived antigen according to any one of claims 1 to 6 or an antibody-binding fragment thereof and the immunoassay based on an antigen-antibody reaction of the IgA antibody corresponding to the antigen in the test blood. A method for diagnosing Helicobacter pylori infection, wherein the IgA antibody in the test blood is measured.

A diagnostic reagent for Helicobacter pylori infection comprising the Helicobacter pylori-derived antigen or antibody-binding fragment thereof according to any one of claims 1 to 6 as an active ingredient.