JP3639392B2

JP3639392B2 - Dry measurement test equipment

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Publication number: JP3639392B2
Application number: JP29022696A
Authority: JP
Inventors: 善彦樋口; 健次山元
Original assignee: Arkray Inc
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1996-10-31
Filing date: 1996-10-31
Publication date: 2005-04-20
Anticipated expiration: 2016-10-31
Also published as: JPH10132750A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、乾式測定試験具に関し、詳しくは、液体試料中の測定対象物質を呈色反応させたときの呈色量を反射率の測定により求めることで前記測定対象物質を定量する乾式測定試験具であって迅速且つ高精度な測定が可能な乾式測定試験具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
液体試料中の特定成分を定量する方法のうちでも、例えば試験紙の様な乾式の測定試験具を用いる方法は、操作が比較的簡便であることから、現在多くの目的のために広く利用されている。この様な乾式測定試験具は、基本的には、液体試料が浸透、展開できるような保持体中に、前記液体試料に溶解可能であり測定対象物質と反応して分析機器による検出定量が可能な、色、光等の信号を発生するような試薬を保持する試薬層を含む構造となっている。
【０００３】
上記乾式測定試験具のうちでも、測定対象物質と試薬との呈色反応により液体試料中の測定対象物質量を測定する乾式測定試験具においては、通常、上記測定対象物質と試薬との反応により呈色した色素量を試薬層に入射した光の反射率を測定することで求め、液体試料中の測定対象物質を定量している。この様な呈色反応による乾式測定試験具では、精度のよい測定を行うために、上記試薬層中に呈色用の試薬の他に反射材を保持させる方法を採っている。例えば、特公平７−２１４５５号公報に記載されている乾式測定試験具では、測定に用いられる試薬とともに反射材として、光反射性不溶性粒子、例えば、酸化チタン、酸化亜鉛、硫酸バリウム、酸化マグネシウムなどの白色顔料を、試薬層に含有させている。これらの顔料は、試料が全血である場合に、測定誤差の原因となる赤血球が試薬層中に侵入するのを阻止する役割も果たしている場合もある。
【０００４】
しかし、乾式測定試験具が反射材として上記のような白色顔料を試薬層に含有する場合には、測定可能なまでに十分な反射率が得られるように白色顔料をある程度の量含有させようとすると、白色顔料の粒径が極微小（０．１〜０．３μｍ）であるために、試薬層は液体試料が浸透し難い緻密な層となり、測定時に液体試料の浸透、展開が遅く、試薬と反応して生成する色素の量が測定可能な程度に十分な量となるまでにかかる時間が長くなり作業性の点で問題であった。
【０００５】
また、乾式測定試験具においては、試薬層で液体試料が試薬を溶解して反応が起こるため反応の濃度条件は非常に高濃度である上に、通常試薬層を構成する保持体は大気に面する表面積が大きいことから乾燥しやすい構造となっているため、比較的多量の液体試料に乾式測定試験具を浸漬して測定を行う場合はよいとしても、少量の液体試料を乾式測定試験具に点着して測定を行う場合には、上記の様に測定にかかる時間が長いと、乾燥の影響を受けて測定の精度が下がる危険性があり好ましくなかった。
【０００６】
そこで、液体試料中の測定対象物質を呈色反応させたときの呈色量を反射率の測定により求めることで前記測定対象物質を定量する乾式測定試験具において、迅速かつ高精度な測定を行うために、液体試料が乾式測定試験具の試薬層内に浸透して測定可能な色素量が生成するまでの時間が短かい構造、つまり測定時間が短く乾燥の影響が少ない構造を維持したままで、反射率測定に際して少量の呈色量にも十分対応する反射率が得られるような方法の開発が望まれていた。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記観点からなされたものであり、液体試料中の測定対象物質を呈色反応させたときの呈色量を反射率の測定により求めることで前記測定対象物質を定量する乾式測定試験具において、迅速で精度の高い測定を行うために、測定時間が短く、かつ反射率測定に際して少量の呈色量にも十分対応した反射率が得られる乾式測定試験具を提供することを課題とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、液体試料中の測定対象物質を呈色反応させたときの呈色量を反射率の測定により求めることで前記測定対象物質を定量する乾式測定試験具において、乾式測定試験具の構成要素として、前記測定対象物質と反応して呈色する色原体を含む試薬と、光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズとを含む試薬層を設けることにより、液体試料の試薬層への迅速な浸透と、試薬層への赤血球の侵入の阻止を両立させることができることを見出し本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち本発明は、色原体を含む試薬と、この試薬を層状に保持する保持体を含み、液体試料中の測定対象物質と前記試薬との反応により生じる色原体の呈色量を試薬層に入射した光の反射率により求めることで、前記測定対象物質を測定する乾式測定試験具であって、前記試薬層は光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズを含むことを特徴とする乾式測定試験具である。
【００１０】
本発明の乾式測定試験具において、試薬層が含有するポリマービーズは光反射性粒子を内部に含有するが、この様な光反射性粒子として具体的には、二酸化チタン、酸化亜鉛、硫酸バリウム、酸化マグネシウム、酸化鉄（III）、水酸化鉄（III）等を挙げることが可能である。
【００１１】
本発明の乾式測定試験具に用いる、上記光反射性粒子を内部に含有させるポリマービーズとしては、アクリル酸、メタクリル酸、マレイン酸、これらのエステル、スチレンおよびアルキルスチレンから選ばれるモノマーを主成分として得られる重合体または共重合体やポリウレタン、ポリウレア、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル等の高分子化合物を主成分として含有するポリマービーズを挙げることができる。
【００１２】
本発明の乾式測定試験具において試薬層が含有するポリマービーズの大きさについていえば、前記ポリマービーズは平均粒径で１〜４０μｍ程度の大きさであることが好ましい。
【００１３】
また、本発明の乾式測定試験具においては、ポリマービーズが含有する光反射性粒子の含有量は、ポリマービーズ全量に対して１０〜７０ｗ／ｖ％程度が好ましく、この様なポリマービーズを試薬層全体に対して５〜８０重量％程度の含有量で含有させることが好ましい。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の乾式測定試験具について詳細に説明する。まず、本発明の乾式測定試験具の試薬層（保持体により試薬を含む組成物が層状に保持された層）が含有する試薬および光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズについて説明し、次いでこれらを含有する試薬層、前記試薬層を含む本発明の乾式測定試験具の順に説明する。
【００１５】
（１）試薬
本発明の乾式測定試験具において試薬層が含有する試薬は、液体試料中の測定対象物質と反応して呈色する色原体を含む。この色原体は、これを含む試薬と液体試料中の測定対象物質との反応により呈色することで前記測定対象物質を検出することが可能なものであれば特に制限なく用いることができる。尚、ここでいう呈色とは、発色に制限されず、変色も含まれる。また、「測定対象物質と試薬との反応」とは、測定対象物質自体が反応物質である場合の他、触媒として反応に関与することも含む。
【００１６】
上記色原体を含む試薬は、測定対象物質の種類により異なり測定対象物質の種類に応じて適宜選択されて用いられる。この選択は、従来の乾式測定試験具と特に変わるところはない。
【００１７】
例えば、本発明の乾式測定試験具は、血液、尿、唾液等の体液中の測定対象物質量を酸化還元反応を利用した呈色反応により測定する場合に好ましく用いられるが、この際に用いられる試薬として、測定対象物質を酸化する酸化酵素、色原体および必要に応じてペルオキシダーゼを含有する試薬等を好ましく挙げることができる。上記酸化酵素による酸化反応を利用した測定対象物質の定量においては、酵素作用下において測定対象物質を酸化することで生成される過酸化水素が、被酸化型の色原体を直接酸化するか、またはペルオキシダーゼ作用下において色原体を酸化カップリングすることにより、色素が生成され、これを吸光光度法や発色法などによって比色的に測定して前記測定対象物質が定量される。
【００１８】
本発明の乾式測定試験具において具体的には、例えば、測定対象物質がグルコースである場合には、グルコースオキシダーゼと、ペルオキシダーゼと、４−アミノアンチピリンと、ＭＡＯＳ（Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン）または、ＤＡＯＳ（Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン）が、
測定対象物質がコレステロールである場合には、コレステロールオキシダーゼと、ペルオキシダーゼと、４−アミノアンチピリンと、ＭＡＯＳまたはＤＡＯＳが、
測定対象物質が乳酸である場合には、乳酸脱水素酵素と、ＮＡＤ⁺と、ジアホラーゼと、テトラゾリウムヴァイオレットが、
測定対象物質がアルカリフォスファターゼである場合には、ｐ−ニトロフェニルフォスフェートが、それぞれ試薬として使用される。
【００１９】
本発明の試薬は上記のものに制限されず、測定対象物質に応じて試薬を選択すればよい。呈色反応を酵素反応により行う場合の酵素としては、上記の酵素の他に、ウリカーゼ、グリセロール−３−リン酸オキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、アシルＣｏＡオキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、各種アミノ酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、ラクトースオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ等を挙げることができる。
【００２０】
また、色原体としては、いわゆるトリンダーの試薬（アナルズ・オブ・クリニカル・バイオケミストリー(Ann.Clin.Biochem.)、６巻、２４頁、１９６０年）や、ｏ−アニンジン、ベンジジン、ｏ−トリジン、テトラメチルベンジジンなどの被酸化型色原体を挙げることができる。
【００２１】
さらに、上記酵素は試薬として用いる他に、測定対象物質とすることもできる。
【００２２】
（２）光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズ
本発明の乾式測定試験具の試薬層は、上記試薬に加えて光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズを含む。このポリマービーズは、液体試料中の測定対象物質を試薬と反応させたときの呈色量を、試薬層に入射する光の反射光として測定する際に、少量の呈色量にも十分対応した反射率を与える作用を有する。また、ポリマービーズは、液体試料が全血のように着色粒子を含む場合には、この着色粒子が試薬層に侵入あるいは透過することを阻止し、試薬層での反射光に与える影響を減少させる作用をも有する。
【００２３】
本発明に用いられるポリマービーズが含有する光反射性粒子としては、ポリマービーズに配合されて本発明の乾式測定試験具に用いられた際に少量の呈色量についても十分な反射率が与えられる様な光反射性を有する粒子であれば特に制限されず、具体的には、二酸化チタン、酸化亜鉛、硫酸バリウム、酸化マグネシウムなどの白色顔料、酸化鉄（III）（赤色）、水酸化鉄（III）（赤褐色、黄色）等の有色顔料等を挙げることが可能である。また、これらの光反射性粒子は、測定波長の光を反射する粒子であれば色については特に限定されるものではないが、本発明において好ましくは白色の光反射性粒子が用いられる。
【００２４】
また、上記光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズとしては、ビーズ形態を採ることが可能なポリマーからなり、ポリマービーズ内に上記光反射性粒子を含有することにより、本発明の乾式測定試験具に用いられた際に少量の呈色量についても十分な反射率が与えられる様なポリマービーズであれば特に制限されないが、本発明において好ましくは、アクリル酸、メタクリル酸、マレイン酸、これらのエステル、スチレン、アルキルスチレン等から選ばれる疎水性ビニルモノマーを主成分として得られる重合体または共重合体や、ポリウレタン、ポリウレア、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル等のビーズ形態を比較的採り易い高分子化合物を主成分としたポリマービーズを挙げることができる。
【００２５】
本発明の乾式測定試験具においては、この様なポリマービーズに上記光反射性粒子を含有させて用いるが、前記ポリマービーズが含有する光反射性粒子の好ましい含有量として、ポリマービーズ全量に対して１０〜７０ｗ／ｖ％程度の含有量を、またさらに好ましい含有量として、ポリマービーズ全量に対して２０〜５０ｗ／ｖ％程度の含有量を挙げることができる。さらに、本発明の乾式測定試験具においては、この様なポリマービーズを試薬層全体に対して５〜８０重量％程度の含有量で、より好ましくは１０〜３０重量％程度の含有量で含有させることで、液体試料中の測定対象物質を試薬と呈色反応させたときの呈色量を吸光光度法、発光法などにより比色的に測定する際に、少量の呈色量にも十分対応した反射率が得られる様になる。
【００２６】
また、上記本発明に用いるポリマービーズの粒子径は、平均粒径で１〜４０μｍ程度の範囲にあることが好ましく、より好ましくは平均粒径で２〜３０μｍ程度であり、さらに好ましくは平均粒径で３〜１５μｍ程度である。ポリマービーズの平均粒子径が１μｍより小さいと、これを含有する試薬層は液体試料が浸透し難い緻密な層となり、測定時に液体試料の浸透、展開が遅くなって測定に時間がかかることがある。また、ポリマービーズの平均粒子径が４０μｍより大きいと、呈色量測定を妨害する血球のような着色成分の試薬層への浸透を十分に防止できないことがある。
【００２７】
この様な本発明に用いる光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズは、通常の製造方法により、例えば、ポリマービーズ原料に光反射性粒子を適当量配合して、得られるポリマーが適当な粒子径のビーズ形態になるような条件で重合させる等の製造方法により製造することが可能である。また、上記の様な光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズは市販もされているのでこれを本発明に用いることも可能である。光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズの市販品として、具体的には、積水化成品工業（株）製のテクポリマー等を挙げることが可能である。
【００２８】
（３）試薬層
試薬層は、上記試薬を含む組成物が保持体に層状に保持されることにより形成されるものである。本発明の乾式測定試験具が含む試薬層は、液体試料中の測定対象物質と反応して呈色することで前記測定対象物質を検出することが可能な上記試薬と、光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズとを保持含有する。
【００２９】
試薬層における試薬の含有量に関しては、従来の乾式測定試験具において試薬層に含有される試薬と同程度の含有量とすればよい。つまり、測定時に乾式測定試験具に吸収される液体試料中の測定対象物質量に対して十分かつ適当量の含有量であればよい。また、試薬層における光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズの含有量は上述の通りである。
【００３０】
また、本発明の乾式測定試験具において試薬層は、上記試薬と光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズ以外に、必要に応じてさらに、緩衝剤、親水性高分子、界面活性剤、可塑剤、安定化剤、前処理試薬等を適当量の範囲で含有することが可能である。
【００３１】
上記緩衝剤として具体的には、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、トリス緩衝剤、グッド緩衝剤、例えば、ＴＥＳ（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（ピペリジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸））等を挙げることができる。また、親水性高分子として具体的には、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、修飾ゼラチン、寒天、アクリルアミドポリマー、アガロース等を挙げることができるが、これら親水性高分子には、乳化エマルジョン系接着剤、例えば、プロピオン酸ビニルと酢酸ビニルの共重合体であるプロピオファン（ＢＡＳＦ社製）等、やラテックス粒子を添加することも可能である。さらに、上記界面活性剤として具体的には、トリトンＸ−１００、トリトンＸ−４０５、ツイーン−２０、ツイーン−８０、ブリッジ−３５等が挙げられる。また、上記前処理試薬としては、アスコルビン酸オキシダーゼ等を挙げることができる。
【００３２】
本発明の乾式測定試験具が有する上記試薬層において、上記試薬と光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズと必要に応じて添加される上記各種成分とを層状に保持含有させるために用いる保持体としては、通常の乾式測定試験具において試薬層に用いられる保持体を特に制限することなく挙げることが可能である。この様な保持体として、具体的には、濾紙、木綿紙、ガラス布またはガラス繊維の不織布、石綿紙または石綿布、ナイロン、ポリエステル、ポリスチレン等の合成繊維からなる布または不織布等を挙げることができる。また、試薬層には、上述の様に親水性高分子を含有させることも可能であるが、これらはそれ自体が保持体を構成する材料となり得るので、試薬層が上記親水性高分子を含有する場合には、さらに上記濾紙等の材料を用いないこともある。また、保持体として上記濾紙等を用いた場合でも、親水性高分子のみで保持体を構成した場合でも、その厚さは、概ね５〜１００μｍであることが好ましい。
【００３３】
上記保持体に上記試薬と光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズとさらにそれ以外の各種成分とを層状に保持含有させる方法としては、やはり一般的な方法を用いればよく、例えば、上記含有させたい成分を液体に溶解、分散させることで液状にしてトレーに入れ、これに保持体を漬けて直接含浸させる方法、ポリエチレンテレフタレート（以下「ＰＥＴ」と省略する）等の剥離性のよい樹脂フィルム上に一定の厚さで上記各種成分を含む液体を塗工し、その上へ保持体をのせて吸い込ませ乾燥後、樹脂フィルムと分離する方法、上記各種成分を含む液体をスプレー等により保持体に噴霧する方法、バーコーター等により保持体に塗工する方法等が挙げられる。含浸後の乾燥は、通常の方法で行われるが、本発明の乾式測定試験具の試薬層においては、乾燥温度を２０〜６０℃とすることが好ましい。
【００３４】
また、上記親水性高分子のみで保持体を形成させる場合には、例えば、上記試薬と光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズと親水性高分子とさらにこれら以外の各種任意成分とを水等の液体に溶解、分散させることで液状とし、これをＰＥＴ等の樹脂フィルム上に適当な濡れ厚さで塗工して乾燥後、樹脂フィルムと分離する方法が取られる。なお、試薬層を樹脂フィルム上に作製する場合には、樹脂フィルムは必要に応じてそのまま残すことも可能である。
【００３５】
上記の様にして、試薬と光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズとを１層に含有する試薬層を得ることができるが、必要に応じて、試薬層を試薬含有層と光反射性粒子含有ポリマービーズ含有層の２層構造とすることも可能である。この場合の各層の作製は上記１層の場合の作製方法に準じて行うことが可能であり、また積層についても通常の方法に従って行うことが可能である。
【００３６】
（４）乾式測定試験具
本発明の乾式測定試験具は、上記の様に、液体試料中の測定対象物質と反応して呈色することで前記測定対象物質を検出することが可能な上記試薬と光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズおよび各種任意成分が保持体に層状に保持されることにより形成された試薬層を含むものである。
【００３７】
本発明の乾式測定試験具においては、試薬層に液体試料が点着され、浸透、展開する間に、試薬層に含有する試薬と液体試料中の測定対象物質が反応して色素を生成する。これにより生成した色素量を吸光光度法、発光法などにより比色的に定量する際に、試薬層に存在する光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズが作用して測定のために十分な反射率を得るものである。さらに、液体試料が全血のように着色粒子を含む場合には、この着色粒子が試薬層に浸透することを阻止するものである。
【００３８】
本発明の乾式測定試験具は、上記試薬層の他に必要に応じて、従来の乾式測定試験具が有する部材、例えば、試薬層を支持する基材、液体試料を保持する試料保持層、液体試料保持のための空間を設けるための支持体等を有することが可能である。
【００３９】
上記試薬層を支持するために設けられる基材としては、上記試薬層の作製で述べたような樹脂フィルム、好ましくは光透過性であって液体不透過性の樹脂フィルム、例えば、ＰＥＴ、ポリプロピレン等を挙げることができる。基材を光透過性を有する液体不透過性樹脂フィルムとして試薬層と積層して用いれば、試薬層表面に液体試料を点着後、試薬層が吸収しきれなかった液体試料を試薬層表面から除去することなく、基材側から光を照射して呈色量を測定することが可能となる。
【００４０】
また、上記試薬層において光反射性粒子を内部に含有するポリマービーズは、上述の様に、試薬層内に浸入することで呈色量測定の感度低下を招くような液体試料中の粒子成分、例えば血球等を試薬層に浸透するのを防止する役割も果たしているが、上記基材を用いることで液体試料が供給される側と反対側からの呈色量測定を行うことが可能となれば、上記血球等の着色成分は供給側に留まっているので、これらによる影響のないより正確な測定を行うことが可能となる。
【００４１】
さらに、液体試料中の測定対象物質と試薬との呈色反応が酸素等の気体の透過により促進される呈色反応の場合には、上記基材として光透過性かつ液体不透過性であってさらに気体透過性を有する多孔性フィルムを用いることが好ましい。基材のフィルムを多孔性とすることにより呈色反応が促進され反応時間の短縮を図ることができるためである。この様な光透過性かつ液体不透過性であってさらに気体透過性を有する多孔性フィルムについては、特公平７−２１４５５号公報に詳しく記載されているのでこれを参照することができる。また、この様な多孔性フィルムは市販されており、これらを本発明の乾式測定試験具に用いることが可能である。上記特性を有する市販の多孔性フィルムとしては、例えば、ニュークリポア（ニュークリポア社製）、セルガード（ヘキストセラニーズ社製）、サイクロポア（ワットマン社製）等を挙げることができる。
【００４２】
上記液体試料を保持するための試料保持層としては、従来の乾式測定試験具が有する試料保持層（一般には「拡散層」、「展開層」などと呼ばれることもある）と同様の構成のものを挙げることができる。
【００４３】
また、本発明の乾式測定試験具においては、上記試料保持層の替わりに液体試料保持のための空間を設けることが可能であり、そのための支持体等を有することが可能であるが、前記支持体を有する乾式測定試験具として例えば、図１に断面図を示す様な、上記基材が積層されていてもよい試薬層と、液体試料保持のための空間を設けるための支持体と、で構成された乾式測定試験具を挙げることができる。
【００４４】
図１において、支持体１は内部に液体試料を保持するための毛細管室２を有し、前記毛細管室と支持体外部とを連絡する３つの孔、すなわち呈色量測定のための光照射孔３と液体試料注入孔４と空気孔５とを有する。試薬層６は前記光照射孔３を覆うかたちで支持体の毛細管室内に設置されている。試薬層に基材が積層されている場合には、基材側から測定光が照射されるように設置する。この様な乾式測定試験具において支持体は、液体不透過性で液体試料への溶出がない樹脂等で構成することができるが、本発明においては、支持体を黒色にする等して支持体に遮光性を持たせることが好ましい。支持体に遮光性を持たせることにより、液体試料中の固形分による測定光の吸収、散乱の影響や、支持体外部より入射する外部迷光の影響が小さくなる。
【００４５】
本発明の乾式測定試験具は、各種試薬と反応して色素を生成させることが可能な物質を含有する液体試料中の前記物質を定量する場合の何れにも適用することが可能であるが、血液、尿、唾液等の体液中の測定対象物質量を酸化還元反応を利用した呈色反応により測定する場合、例えば、血液中のグルコース量を上記で詳述したような試薬を用いて測定する場合などに好ましく適用される。
【００４６】
【実施例】
以下に本発明の実施例を説明する。
【００４７】
＜乾式測定試験具の作製＞
表１に組成を示す各成分を混合して試薬層用の塗工液を作製した。ガラス板に試薬層の保持体となるセルガード（ヘキストセラニーズ社製）をシワのないように貼り付け、このセルガード上にナイフコーターを用いて上記塗工液を塗布厚５０μｍで塗布し、乾燥温度２５℃、乾燥湿度１５％で３０分間乾燥させて試薬層を形成させた。その後、試薬層をセルガードごとガラス板よりはがして、７ｍｍ×７ｍｍの大きさに切断した。
【００４８】
上記で得られた７ｍｍ角のセルガード付き試薬層を、４ｍｍφの穴（測定光照射孔）のあいた３０ｍｍ×７ｍｍの大きさのＰＥＴフィルム上に穴を覆うかたちでセルガード側をＰＥＴフィルム側にして貼付けた。試薬層を上にしてこれを覆いながらＰＥＴフィルムとの間に毛細管室を形成する様に、ＰＥＴフィルム上に熱可塑性樹脂を用いてカバーを固定して乾式測定試験具とした。なお、このカバーは液体試料供給孔と空気孔を有していた（図１参照）。
【００４９】
また、比較のために上記実施例において試薬層用塗工液の光反射性粒子含有ポリマービーズ（テクポリマーＭＢＸ−５／Ｗｈｉｔｅ）のかわりに前記ポリマービーズが含有する光反射性粒子（二酸化チタン）を用いた以外は、上記実施例と全く同様にして乾式測定試験具を作製した。
【００５０】
【表１】

【００５１】
なお、上記表１中、テクポリマーＭＢＸ−５／Ｗｈｉｔｅ（積水化成品工業（株）製）は、架橋ポリメタクリル酸メチルに５０ｗ／ｖ％の割合で二酸化チタンを含有した平均粒子径５μｍの真球状のポリマービーズである。
【００５２】
＜本発明の乾式測定試験具の評価＞
上記実施例および比較例で得られた乾式測定試験具について浸透性、および反応速度に関する試験を行った。
【００５３】
（１）浸透性試験
全血を室温で１日放置して解糖させた後、これに食用色素青色１号を任意量添加して溶解させ、次いでヘマトクリット値が６８％となるように調整して検体Ｉを得た。検体Ｉの１０μｌを上記実施例で得られた乾式測定試験具の液体試料供給孔より試薬層に導入し、５秒後より６４０ｎｍの光を測定光照射孔を通してセルガード側から照射し、得られる反射率を反射率計（色差計）にて１０秒間隔で１２５秒まで経時的に測定した。比較例で得られた乾式測定試験具についても同様の測定を行った。実施例および比較例で得られた乾式測定試験具を用いて測定された上記検体Ｉについての反射率の経時変化の結果を図２に示す。なお、図２において縦軸は反射率（％）を横軸は測定時間（ｓｅｃ）を示す。
【００５４】
（２）反応速度試験
解糖阻止剤（ＮａＦ）添加全血（グルコース濃度９９ｍｇ／ｄｌ）を、ヘマトクリット値が６８％になるように調整して検体IIとした。検体IIの１０μｌを上記実施例で得られた乾式測定試験具の液体試料供給孔より試薬層に導入し、５秒後より６４０ｎｍの光を測定光照射孔を通してセルガード側から照射し、得られる反射率を反射率計（色差計）にて１０秒間隔で１２５秒まで測定した。比較例で得られた乾式測定試験具についても同様の測定を行った。実施例および比較例で得られた乾式測定試験具を用いて測定された上記検体IIについての反射率の経時変化の結果を図３に示す。なお、図３において縦軸は反射率（％）を横軸は測定時間（ｓｅｃ）を示す。
【００５５】
これらの結果から明かな様に、実施例で得られた乾式測定試験具においては、反射材として二酸化チタンを含有する従来の乾式測定試験具に比べて、液体試料の試薬層への浸透性がよく、また実際に試薬と測定対象物質との反応速度も高い。
【００５６】
【発明の効果】
本発明の乾式測定試験具を、液体試料中の測定対象物質を呈色反応させたときの呈色量を反射率の測定により求めることで前記測定対象物質を定量する乾式測定試験具として用いれば、測定時間が短く、かつ反射率測定に際して少量の呈色量にも十分対応した反射率が得られることで、迅速で高精度な測定を行うことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の乾式測定試験具の一例の断面図を示す図である。
【図２】実施例および比較例で得られた乾式測定試験具を用いて解糖全血に食用色素青色１号を添加したものを検体として測定された６４０ｎｍでの反射率の経時変化を示す図である。
【図３】実施例および比較例で得られた乾式測定試験具を用いて全血を検体として測定された６４０ｎｍでの反射率の経時変化を示す図である。
【符号の説明】
１．支持体
２．毛細管室
３．測定光照射孔
４．液体試料注入孔
５．空気孔
６．試薬層[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a dry measurement test device, and more specifically, a dry measurement test for quantifying the measurement target substance by obtaining a coloration amount by measuring reflectance when a measurement target substance in a liquid sample is subjected to a color reaction. The present invention relates to a dry-type measurement test tool that is capable of quick and highly accurate measurement.
[0002]
[Prior art]
Among methods for quantifying specific components in a liquid sample, for example, a method using a dry measurement test tool such as a test paper is widely used for many purposes because of its relatively simple operation. ing. Basically, such a dry measurement test device can be dissolved in the liquid sample in a holder that allows the liquid sample to permeate and expand, and can be detected and quantified by an analytical instrument by reacting with the substance to be measured. The structure includes a reagent layer that holds a reagent that generates a signal such as color and light.
[0003]
Among the dry measurement test instruments, in the dry measurement test instrument that measures the amount of the measurement target substance in the liquid sample by the color reaction between the measurement target substance and the reagent, the reaction between the measurement target substance and the reagent is usually performed. The amount of the colored dye is determined by measuring the reflectance of light incident on the reagent layer, and the substance to be measured in the liquid sample is quantified. In such a dry measurement test device based on a color reaction, a method of holding a reflective material in addition to the color reagent in the reagent layer is employed in order to perform accurate measurement. For example, in the dry measurement test device described in Japanese Examined Patent Publication No. 7-21455, light reflecting insoluble particles such as titanium oxide, zinc oxide, barium sulfate, magnesium oxide and the like are used as a reflective material together with a reagent used for measurement. The white pigment is contained in the reagent layer. These pigments may also play a role in preventing red blood cells that cause measurement errors from entering the reagent layer when the sample is whole blood.
[0004]
However, when the dry measurement test instrument contains the above-mentioned white pigment as a reflective material in the reagent layer, an attempt is made to contain a certain amount of white pigment so that sufficient reflectivity can be obtained until measurement is possible. Then, since the particle size of the white pigment is extremely small (0.1 to 0.3 μm), the reagent layer becomes a dense layer in which the liquid sample is difficult to permeate, and the penetration and development of the liquid sample during measurement is slow, and the reagent It took a long time until the amount of the dye produced by the reaction was sufficient to be measured, which was a problem in terms of workability.
[0005]
Also, in the dry measurement test device, the liquid sample dissolves the reagent in the reagent layer and the reaction takes place, so the reaction concentration condition is very high, and the holder that normally constitutes the reagent layer faces the atmosphere. Since it has a large surface area, it is easy to dry, so even if it is good to immerse a dry measurement test instrument in a relatively large amount of liquid sample, a small amount of liquid sample should be used as a dry measurement test instrument. In the case where the measurement is performed by spotting, if the time required for the measurement is long as described above, there is a risk that the accuracy of the measurement is lowered due to the influence of drying, which is not preferable.
[0006]
Therefore, quick and highly accurate measurement is performed in a dry measurement test tool for quantifying the measurement target substance by obtaining the coloration amount when the measurement target substance in the liquid sample is subjected to a color reaction by measuring reflectance. Therefore, the structure in which the time until the liquid sample penetrates into the reagent layer of the dry measurement test device and the measurable amount of dye is generated, that is, the measurement time is short and the effect of drying is kept is maintained. Therefore, it has been desired to develop a method capable of obtaining a reflectance sufficiently corresponding to a small amount of coloration when measuring the reflectance.
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made from the above viewpoint, and a dry measurement test for quantifying the measurement target substance by determining the coloration amount when the measurement target substance in a liquid sample is subjected to a color reaction by measuring reflectance. It is an object of the present invention to provide a dry measurement test tool that has a measurement time that is short and provides a reflectivity sufficiently corresponding to a small amount of color at the time of reflectivity measurement in order to perform quick and accurate measurement. To do.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies in order to solve the above problems, the present inventors have determined the coloration amount when the measurement target substance in the liquid sample is caused to undergo a color reaction by measuring reflectance, thereby measuring the measurement target. In a dry measurement test device for quantifying a substance, as components of the dry measurement test device, a reagent containing a chromogen that reacts with the measurement target substance and colors, and a polymer bead containing light-reflective particles therein The present invention has been completed by finding that the provision of a reagent layer containing can simultaneously achieve rapid penetration of a liquid sample into the reagent layer and prevention of infiltration of red blood cells into the reagent layer.
[0009]
That is, the present invention includes a reagent containing a chromogen and a holder that holds the reagent in a layer form, and the amount of color of the chromogen generated by the reaction between the measurement target substance in the liquid sample and the reagent is determined as the reagent layer. A dry measurement test instrument for measuring the substance to be measured by obtaining the reflectance of light incident on the reagent, wherein the reagent layer includes polymer beads containing light-reflective particles therein. It is a measurement test device.
[0010]
In the dry measurement test device of the present invention, the polymer beads contained in the reagent layer contain light-reflective particles inside. Specifically, as such light-reflective particles, titanium dioxide, zinc oxide, barium sulfate, Examples thereof include magnesium oxide, iron (III) oxide, and iron (III) hydroxide.
[0011]
The polymer beads used in the dry measurement test device of the present invention that contain the light-reflective particles therein are mainly composed of a monomer selected from acrylic acid, methacrylic acid, maleic acid, esters thereof, styrene, and alkylstyrene. Examples thereof include polymer beads containing a polymer or copolymer as a main component and a polymer compound such as polyurethane, polyurea, polyethylene, polypropylene, and polyvinyl chloride.
[0012]
Regarding the size of the polymer beads contained in the reagent layer in the dry measurement test device of the present invention, the polymer beads preferably have an average particle size of about 1 to 40 μm.
[0013]
In the dry measurement test device of the present invention, the content of the light reflective particles contained in the polymer beads is preferably about 10 to 70 w / v% based on the total amount of the polymer beads. It is preferable to make it contain by about 5 to 80 weight% with respect to the whole.
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the dry measurement test device of the present invention will be described in detail. First, the reagent contained in the reagent layer of the dry measurement test device of the present invention (the layer in which the composition containing the reagent is held in the form of a holder) and the polymer beads containing the light-reflective particles inside will be described. The reagent layer containing these and the dry measurement test device of the present invention including the reagent layer will be described in this order.
[0015]
(1) Reagent
The reagent contained in the reagent layer in the dry measurement test device of the present invention includes a chromogen that reacts with the substance to be measured in the liquid sample and is colored. This chromogen can be used without particular limitation as long as it can detect the substance to be measured by coloring it by the reaction between the reagent containing it and the substance to be measured in the liquid sample. The coloration here is not limited to color development but also includes discoloration. In addition, the “reaction between the substance to be measured and the reagent” includes not only the case where the substance to be measured itself is a reactive substance but also the involvement in the reaction as a catalyst.
[0016]
The reagent containing the chromogen varies depending on the type of the substance to be measured, and is appropriately selected and used depending on the kind of the substance to be measured. This selection is no different from conventional dry measurement test devices.
[0017]
For example, the dry measurement test device of the present invention is preferably used when measuring the amount of a substance to be measured in a body fluid such as blood, urine, saliva, etc., by a color reaction using an oxidation-reduction reaction. Preferred examples of the reagent include an oxidase that oxidizes the substance to be measured, a chromogen, and a reagent containing peroxidase as necessary. In the quantification of the measurement target substance using the oxidation reaction by the oxidase, hydrogen peroxide generated by oxidizing the measurement target substance under the action of the enzyme directly oxidizes the chromogen that is oxidized, Alternatively, the chromogen is oxidatively coupled under the action of peroxidase to produce a dye, which is colorimetrically measured by an absorptiometric method, a color developing method, or the like to quantify the substance to be measured.
[0018]
Specifically, in the dry measurement test device of the present invention, for example, when the substance to be measured is glucose, glucose oxidase, peroxidase, 4-aminoantipyrine, MAOS (N-ethyl-N- (2- Hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline) or DAOS (N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline),
When the substance to be measured is cholesterol, cholesterol oxidase, peroxidase, 4-aminoantipyrine, MAOS or DAOS
When the substance to be measured is lactic acid, lactate dehydrogenase and NAD ⁺ And diaphorase and tetrazolium violet
When the substance to be measured is alkaline phosphatase, p-nitrophenyl phosphate is used as a reagent.
[0019]
The reagent of the present invention is not limited to the above, and the reagent may be selected according to the substance to be measured. In addition to the above-mentioned enzymes, enzymes used for the color reaction by enzymatic reaction include uricase, glycerol-3-phosphate oxidase, choline oxidase, acyl CoA oxidase, sarcosine oxidase, various amino acid oxidases, bilirubin oxidase, and lactate. Examples include oxidase, lactose oxidase, pyruvate oxidase, galactose oxidase, and glycerol oxidase.
[0020]
Further, as chromogens, so-called Trinder's reagent (Ann. Clin. Biochem., 6, 24, 1960), o-aniline, benzidine, o-tolidine And oxidizable chromogens such as tetramethylbenzidine.
[0021]
Furthermore, in addition to using the enzyme as a reagent, it can also be used as a substance to be measured.
[0022]
(2) Polymer beads containing light-reflective particles inside
The reagent layer of the dry measurement test device of the present invention includes polymer beads containing light-reflective particles inside in addition to the reagent. This polymer bead sufficiently copes with a small amount of color when measuring the amount of coloration when a substance to be measured in a liquid sample is reacted with a reagent as reflected light of light incident on the reagent layer. It has an effect of giving reflectance. In addition, when the liquid sample contains colored particles such as whole blood, the polymer beads prevent the colored particles from entering or passing through the reagent layer and reduce the influence on the reflected light from the reagent layer. Also has an effect.
[0023]
As the light-reflective particles contained in the polymer beads used in the present invention, sufficient reflectance is given even for a small amount of color when blended with the polymer beads and used in the dry measurement test device of the present invention. The particles are not particularly limited as long as the particles have such light reflectivity, and specifically, white pigments such as titanium dioxide, zinc oxide, barium sulfate, magnesium oxide, iron (III) oxide (red), iron hydroxide ( III) Colored pigments such as (reddish brown, yellow) can be mentioned. In addition, these light-reflecting particles are not particularly limited as long as they are particles that reflect light having a measurement wavelength, but white light-reflecting particles are preferably used in the present invention.
[0024]
In addition, the polymer beads containing the light-reflective particles are made of a polymer that can take a bead form, and the light-reflective particles are contained in the polymer beads, whereby the dry measurement test of the present invention. Although it is not particularly limited as long as it is a polymer bead that can provide sufficient reflectance even for a small amount of color when used in a tool, acrylic acid, methacrylic acid, maleic acid, and these are preferred in the present invention. Polymers or copolymers obtained mainly from hydrophobic vinyl monomers selected from esters, styrene, alkyl styrene, etc., and polymers that are relatively easy to adopt beads such as polyurethane, polyurea, polyethylene, polypropylene, polyvinyl chloride, etc. Examples thereof include polymer beads mainly composed of a compound.
[0025]
In the dry measurement test device of the present invention, such a polymer bead is used by containing the above-mentioned light-reflective particles. The preferred content of the light-reflective particles contained in the polymer bead is based on the total amount of the polymer beads. A content of about 10 to 70 w / v%, and a more preferable content is a content of about 20 to 50 w / v% with respect to the total amount of polymer beads. Furthermore, in the dry measurement test device of the present invention, such polymer beads are contained at a content of about 5 to 80% by weight, more preferably at a content of about 10 to 30% by weight with respect to the entire reagent layer. Therefore, when colorimetrically measuring the target substance in a liquid sample with a reagent and performing a colorimetric measurement using absorptiometry, luminescence method, etc., it can handle even a small amount of color. Reflectivity can be obtained.
[0026]
The particle size of the polymer beads used in the present invention is preferably in the range of about 1 to 40 μm in average particle size, more preferably in the range of about 2 to 30 μm in average particle size, and still more preferably average particle size. Is about 3 to 15 μm. When the average particle diameter of the polymer beads is smaller than 1 μm, the reagent layer containing the polymer beads becomes a dense layer that is difficult for the liquid sample to permeate. . On the other hand, if the average particle size of the polymer beads is larger than 40 μm, it may not be possible to sufficiently prevent the penetration of colored components such as blood cells that interfere with the measurement of the coloration amount into the reagent layer.
[0027]
Such polymer beads containing the light-reflective particles used in the present invention are prepared by a normal production method, for example, by mixing an appropriate amount of light-reflective particles into the polymer bead raw material, and the resulting polymer is a suitable particle. It can be produced by a production method such as polymerization under conditions that result in a bead shape having a diameter. Moreover, since the polymer beads containing the light reflecting particles as described above are commercially available, they can be used in the present invention. Specific examples of commercially available polymer beads containing light-reflective particles can include techpolymers manufactured by Sekisui Plastics Co., Ltd.
[0028]
(3) Reagent layer
The reagent layer is formed by holding a composition containing the reagent in a layered form on a holding body. The reagent layer included in the dry measurement test device of the present invention includes the reagent capable of detecting the measurement target substance by reacting with the measurement target substance in the liquid sample and coloring, and the light-reflecting particles inside. And containing polymer beads.
[0029]
The reagent content in the reagent layer may be the same as the reagent contained in the reagent layer in the conventional dry measurement test device. That is, the content may be sufficient and appropriate for the amount of the substance to be measured in the liquid sample absorbed in the dry measurement test tool at the time of measurement. Further, the content of the polymer beads containing the light reflective particles in the reagent layer is as described above.
[0030]
In addition, in the dry measurement test device of the present invention, the reagent layer may further include a buffer, a hydrophilic polymer, a surfactant, a plastic, in addition to the polymer beads containing the reagent and the light-reflective particles. It is possible to contain an agent, a stabilizer, a pretreatment reagent and the like in an appropriate amount range.
[0031]
Specific examples of the buffer include phosphate buffer, acetate buffer, borate buffer, Tris buffer, Good buffer, such as TES (N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid. ), PIPES (piperidine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid)) and the like. Specific examples of the hydrophilic polymer include hydroxypropyl cellulose, methyl cellulose, sodium alginate, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, gelatin, modified gelatin, agar, acrylamide polymer, agarose and the like. An emulsion emulsion adhesive such as propiophane (BASF), which is a copolymer of vinyl propionate and vinyl acetate, or latex particles can be added to the molecule. Specific examples of the surfactant include Triton X-100, Triton X-405, Tween-20, Tween-80, and Bridge-35. Examples of the pretreatment reagent include ascorbate oxidase.
[0032]
In the above-mentioned reagent layer of the dry measurement test device of the present invention, holding used to hold and contain the reagent and the polymer beads containing the light-reflective particles therein and the various components added as necessary. Examples of the body include, without particular limitation, a holding body used for a reagent layer in a normal dry measurement test device. Specific examples of such a holding body include filter paper, cotton paper, glass cloth or glass fiber non-woven fabric, asbestos paper or asbestos cloth, cloth or non-woven fabric made of synthetic fibers such as nylon, polyester and polystyrene. it can. The reagent layer can contain a hydrophilic polymer as described above. However, since the reagent layer itself can be a material constituting the holding body, the reagent layer contains the hydrophilic polymer. In this case, a material such as the above filter paper may not be used. Moreover, even when the above filter paper or the like is used as the holding body, or when the holding body is constituted by only a hydrophilic polymer, the thickness is preferably approximately 5 to 100 μm.
[0033]
As a method of holding and containing the above-mentioned reagent and light-reflective particles inside the polymer bead and various other components in layers in the holding body, a general method may be used, for example, the above-mentioned containing Resin film with good releasability such as polyethylene terephthalate (hereinafter abbreviated as “PET”), a method in which the components to be dissolved are dissolved and dispersed in a liquid to be made into a liquid and put in a tray, and a holder is immersed in the tray. A method of coating a liquid containing the above-mentioned various components on the top with a certain thickness, placing the holding body thereon, sucking it, drying it, separating it from the resin film, and holding the liquid containing the various ingredients by spraying or the like For example, a method of spraying on a holding body with a bar coater or the like. Drying after the impregnation is performed by a normal method, but in the reagent layer of the dry measurement test device of the present invention, the drying temperature is preferably 20 to 60 ° C.
[0034]
In the case of forming the holding body only with the hydrophilic polymer, for example, the polymer beads containing the reagent and the light-reflective particles inside, the hydrophilic polymer, and various other optional components other than A method is used in which a liquid is obtained by dissolving and dispersing in a liquid such as PET, and this is coated on a resin film such as PET with an appropriate wet thickness, dried, and then separated from the resin film. In addition, when producing a reagent layer on a resin film, it is also possible to leave a resin film as it is as needed.
[0035]
As described above, a reagent layer containing a reagent and polymer beads containing light-reflecting particles in one layer can be obtained. If necessary, the reagent layer is separated from the reagent-containing layer and light-reflective. It is also possible to have a two-layer structure of particle-containing polymer bead-containing layers. Each layer in this case can be manufactured in accordance with the manufacturing method in the case of the single layer, and lamination can also be performed in accordance with a normal method.
[0036]
(4) Dry measurement test equipment
As described above, the dry measurement test device of the present invention includes the reagent capable of detecting the measurement target substance by reacting with the measurement target substance in the liquid sample and coloring, and the light-reflecting particles inside. It contains a reagent layer formed by holding the polymer beads and various optional components contained in the holder in layers.
[0037]
In the dry measurement test device of the present invention, the liquid sample is spotted on the reagent layer, and the reagent contained in the reagent layer reacts with the measurement target substance in the liquid sample to generate a dye while penetrating and spreading. When the amount of dye produced by this is colorimetrically quantified by absorptiometry, luminescence method, etc., the polymer beads containing the light-reflective particles present in the reagent layer act and are sufficient for measurement. The reflectance is obtained. Furthermore, when the liquid sample contains colored particles such as whole blood, the colored particles are prevented from penetrating into the reagent layer.
[0038]
In addition to the reagent layer, the dry measurement test device of the present invention includes, as necessary, members of a conventional dry measurement test device, for example, a substrate that supports the reagent layer, a sample holding layer that holds a liquid sample, a liquid It is possible to have a support for providing a space for holding the sample.
[0039]
The substrate provided to support the reagent layer may be a resin film as described in the preparation of the reagent layer, preferably a light transmissive and liquid impermeable resin film, such as PET, polypropylene, etc. Can be mentioned. If the substrate is used as a liquid-impermeable resin film having optical transparency and laminated with the reagent layer, after the liquid sample is spotted on the surface of the reagent layer, the liquid sample that the reagent layer has not absorbed can be removed from the reagent layer surface. Without removal, the amount of coloration can be measured by irradiating light from the substrate side.
[0040]
In addition, as described above, the polymer beads containing light-reflective particles in the reagent layer, as described above, particle components in the liquid sample that cause a decrease in the sensitivity of coloration measurement by entering the reagent layer, For example, it plays the role of preventing blood cells and the like from penetrating into the reagent layer, but if the substrate is used, it is possible to measure the amount of color from the side opposite to the liquid sample supply side. Since the colored components such as the blood cells remain on the supply side, it is possible to perform more accurate measurement without being affected by these components.
[0041]
Furthermore, in the case of a color reaction in which a color reaction between a measurement target substance and a reagent in a liquid sample is promoted by permeation of a gas such as oxygen, the substrate is light transmissive and liquid impermeable. Furthermore, it is preferable to use a porous film having gas permeability. This is because by making the base film porous, the color reaction is promoted and the reaction time can be shortened. Such a light-transmissive and liquid-impermeable porous film having gas permeability is described in detail in Japanese Patent Publication No. 7-21455, and can be referred to. Moreover, such porous films are commercially available, and these can be used for the dry measurement test device of the present invention. Examples of the commercially available porous film having the above-mentioned properties include Nuclepore (manufactured by Nuclepore), Celgard (manufactured by Hoechst Celanese), cyclopore (manufactured by Whatman), and the like.
[0042]
The sample holding layer for holding the liquid sample has the same structure as the sample holding layer (generally referred to as “diffusion layer”, “deployment layer”, etc.) of a conventional dry measurement test device. Can be mentioned.
[0043]
In the dry measurement test device of the present invention, a space for holding a liquid sample can be provided instead of the sample holding layer, and a support for that purpose can be provided. As a dry measurement test device having a body, for example, as shown in a sectional view in FIG. 1, a reagent layer on which the base material may be laminated, and a support for providing a space for holding a liquid sample. Mention may be made of the constructed dry measurement test device.
[0044]
In FIG. 1, a support 1 has a capillary chamber 2 for holding a liquid sample therein, and has three holes communicating with the capillary chamber and the outside of the support, that is, a light irradiation hole for measuring a color amount. 3, a liquid sample injection hole 4, and an air hole 5. The reagent layer 6 is installed in the capillary chamber of the support so as to cover the light irradiation hole 3. When the base material is laminated | stacked on the reagent layer, it installs so that measurement light may be irradiated from the base material side. In such a dry measurement test device, the support can be composed of a resin or the like that is impermeable to liquid and does not elute into the liquid sample. However, in the present invention, the support is made by blackening the support. It is preferable to provide light shielding properties. By providing the support with light shielding properties, the influence of absorption and scattering of measurement light due to the solid content in the liquid sample and the influence of external stray light incident from the outside of the support are reduced.
[0045]
The dry measurement test device of the present invention can be applied to any of the cases where the substance in a liquid sample containing a substance capable of generating a pigment by reacting with various reagents is quantified. When measuring the amount of a substance to be measured in a body fluid such as blood, urine, saliva or the like by a color reaction utilizing an oxidation-reduction reaction, for example, the amount of glucose in the blood is measured using a reagent as detailed above. It is preferably applied to cases.
[0046]
【Example】
Examples of the present invention will be described below.
[0047]
<Preparation of dry measurement test device>
Each component which shows a composition in Table 1 was mixed and the coating liquid for reagent layers was produced. A cell guard (manufactured by Hoechst Celanese Co., Ltd.) that serves as a reagent layer holder is affixed to a glass plate so as not to be wrinkled. The reagent layer was formed by drying for 30 minutes at 25 ° C. and 15% dry humidity. Then, the reagent layer was peeled off from the glass plate together with the cell guard and cut into a size of 7 mm × 7 mm.
[0048]
The reagent layer with 7 mm square cell guard obtained above is pasted with the cell guard side facing the PET film in a shape of covering the hole on a 30 mm x 7 mm size PET film with a 4 mmφ hole (measurement light irradiation hole). It was. A cover was fixed on the PET film using a thermoplastic resin so as to form a capillary chamber with the PET film while covering the reagent layer with the reagent layer facing up, thereby obtaining a dry measurement test device. This cover had a liquid sample supply hole and an air hole (see FIG. 1).
[0049]
For comparison, the light reflective particles (titanium dioxide) contained in the polymer beads in place of the light reflective particle-containing polymer beads (Techpolymer MBX-5 / White) in the reagent layer coating liquid for comparison. A dry measurement test device was produced in the same manner as in the above example except that was used.
[0050]
[Table 1]

[0051]
In Table 1 above, techpolymer MBX-5 / White (manufactured by Sekisui Plastics Co., Ltd.) is a true particle having an average particle diameter of 5 μm containing titanium dioxide in a ratio of 50 w / v% to crosslinked polymethyl methacrylate. Spherical polymer beads.
[0052]
<Evaluation of the dry measurement test device of the present invention>
The dry measurement test devices obtained in the above examples and comparative examples were tested for permeability and reaction rate.
[0053]
(1) Penetration test
Whole blood was allowed to stand for 1 day at room temperature for glycolysis, and then an arbitrary amount of food dye Blue No. 1 was added and dissolved therein, and then adjusted so that the hematocrit value was 68% to obtain Sample I. . 10 μl of the sample I is introduced into the reagent layer from the liquid sample supply hole of the dry measurement test device obtained in the above example, and after 5 seconds, 640 nm light is irradiated from the cell guard side through the measurement light irradiation hole, and the resulting reflection The rate was measured over time with a reflectometer (color difference meter) at intervals of 10 seconds up to 125 seconds. The same measurement was performed on the dry measurement test device obtained in the comparative example. FIG. 2 shows the results of the change over time in the reflectance of the specimen I measured using the dry measurement test tools obtained in Examples and Comparative Examples. In FIG. 2, the vertical axis represents the reflectance (%), and the horizontal axis represents the measurement time (sec).
[0054]
(2) Reaction rate test
Whole blood (glucose concentration 99 mg / dl) added with a glycolysis inhibitor (NaF) was adjusted to have a hematocrit value of 68%, and used as Sample II. 10 μl of the sample II is introduced into the reagent layer from the liquid sample supply hole of the dry measurement test device obtained in the above example, and after 5 seconds, 640 nm light is irradiated from the cell guard side through the measurement light irradiation hole, and the resulting reflection The rate was measured with a reflectometer (color difference meter) at intervals of 10 seconds up to 125 seconds. The same measurement was performed on the dry measurement test device obtained in the comparative example. FIG. 3 shows the results of the change over time in the reflectance of the specimen II measured using the dry measurement test tools obtained in the examples and comparative examples. In FIG. 3, the vertical axis represents the reflectance (%), and the horizontal axis represents the measurement time (sec).
[0055]
As is clear from these results, in the dry measurement test device obtained in the example, the permeability of the liquid sample to the reagent layer is higher than that of the conventional dry measurement test device containing titanium dioxide as a reflector. In addition, the reaction rate between the reagent and the substance to be measured is actually high.
[0056]
【The invention's effect】
If the dry measurement test device of the present invention is used as a dry measurement test device for quantifying the measurement target material by determining the coloration amount when the measurement target material in a liquid sample is subjected to a color reaction by measuring reflectance. In addition, since the measurement time is short and the reflectivity sufficiently corresponding to a small amount of coloration can be obtained at the time of reflectivity measurement, it is possible to perform a quick and highly accurate measurement.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a cross-sectional view of an example of a dry measurement test device of the present invention.
FIG. 2 shows the change over time in the reflectance at 640 nm measured using a sample obtained by adding the food dye Blue No. 1 to glycolytic whole blood using the dry measurement test devices obtained in Examples and Comparative Examples. FIG.
FIG. 3 is a graph showing the change over time in reflectance at 640 nm measured using whole blood as a specimen using the dry measurement test devices obtained in Examples and Comparative Examples.
[Explanation of symbols]
1. Support
2. Capillary chamber
3. Measurement light irradiation hole
4). Liquid sample injection hole
5. Air hole
6). Reagent layer

Claims

A light containing a reagent containing a chromogen and a holder that holds the reagent in a layer, and the amount of color of the chromogen generated by the reaction between the measurement target substance in the liquid sample and the reagent incident on the reagent layer A dry measurement test instrument for measuring the substance to be measured by obtaining the reflectance of the reagent, wherein the reagent layer includes polymer beads containing light reflective particles therein.

The dry-type measuring test instrument according to claim 1, wherein the light-reflective particles are selected from titanium dioxide, zinc oxide, barium sulfate, magnesium oxide, iron (III) oxide and iron (III) hydroxide.

A polymer or copolymer obtained by using a monomer selected from acrylic acid, methacrylic acid, maleic acid, esters thereof, styrene and alkylstyrene as a main component, polyurethane, polyurea, polyethylene, polypropylene, and polyvinyl chloride. The dry-type measurement test device according to claim 1, comprising a polymer compound selected from:

The dry measurement test device according to claim 1, wherein the average particle diameter of the polymer beads is 1 to 40 μm.

The dry measurement test device according to claim 1, wherein the content of the light-reflective particles with respect to the total amount of the polymer beads is 10 to 70 w / v%, and the content of the polymer beads with respect to the entire reagent layer is 5 to 80% by weight.