JP3634929B2

JP3634929B2 - Method for producing packing material for high performance liquid chromatography

Info

Publication number: JP3634929B2
Application number: JP26564096A
Authority: JP
Inventors: 陽子尾田
Original assignee: Daicel Chemical Industries Ltd
Current assignee: Daicel Corp
Priority date: 1996-09-04
Filing date: 1996-10-07
Publication date: 2005-03-30
Anticipated expiration: 2016-10-07
Also published as: JPH10132798A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、高速液体クロマトグラフィー用充填剤の製造法に関するものである。詳しくは、多糖誘導体を担体にコーティングしてなる充填剤であって、多糖誘導体由来の溶出物の量を低減させた高速液体クロマトグラフィー用充填剤の製造法に関するものである。
【０００２】
本発明の高速液体クロマトグラフィー用充填剤は、光学異性体分取の分野において、分取製品の品質の向上に寄与するものである。また、本発明は、多糖誘導体を担体にコーティングしてなる充填剤で、分離性能を低下させることなく、多糖誘導体由来の溶出物量を低減させた高速液体クロマトグラフィー用充填剤を安価に容易に得る製造法を提供するものである。
【０００３】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
高速液体クロマトグラフィー用充填剤は、大別して化学結合型充填剤とコーティング型充填剤の２種類がある。
化学結合型充填剤は、分離能を有する物質が担体に化学結合しているため、分離能を有する物質由来の溶出物の量が一般に少ない。
一方、コーティング型充填剤は、分離能を有する物質が担体に物理吸着しているため、分離能を有する物質を溶解する溶媒は使用できず、また、不適切な使用条件においては分離能を有する物質が剥離し溶出する可能性がある。この溶出は、分析の場合はクロマトグラムのベースラインのドリフト現象等として現れ、分取の場合は分取製品の汚染につながるので、避けなければならない。
【０００４】
多糖誘導体を担体にコーティングしてなる高速液体クロマトグラフィー用充填剤は、光学異性体の分離に適しており、その分離能は非常に優れていることが知られている（特開昭６０−８２８５８号公報、特開昭６０−１０８７５１号公報、特開昭６０−１４２９３０号公報等）。しかし、この多糖誘導体を担体にコーティングしてなる高速液体クロマトグラフィー用充填剤は、用いる移動相が不適切な場合には、その多糖誘導体の比較的低分子量領域のポリマーが溶出して、クロマトグラムのベースラインが安定しない、分取時の分取製品中に溶出物が混入する、分離性能が劣化する等の問題を起こすことがあった。
【０００５】
そこで、このような溶出物を非常に少なくした多糖誘導体を担体にコーティングしてなる高速液体クロマトグラフィー用充填剤の開発が望まれていた。
上記の問題を解決する方法として特開平７−２６０７６２号公報に記載の方法がある。この方法は多糖誘導体を担体にコーティングしてなる充填剤を、脂肪族炭化水素、低級アルコールまたはこれらの混合液等の溶媒で洗浄し、分離能を有する物質である多糖誘導体由来の溶出物を低減する方法である。このような方法によって、多糖誘導体由来の溶出物として、低分子量ポリマー等の溶出量が低減できた例がこの公報の実施例に記載されている。しかし、特にカルバメート誘導体の場合、多糖を誘導体化する際に原料として使用するイソシアン酸エステルは脂肪族炭化水素、低級アルコールまたはこれらの混合液等の溶媒には抽出されにくく、これらの溶媒で洗浄してもなお充填剤中に残留しやすいため、使用中にイソシアン酸エステルとして、あるいはアルコールや水と反応しイソシアン酸エステル誘導体として長時間溶出し続け、好ましくない。
【０００６】
従って、本発明の目的は、イソシアン酸エステルあるいはその誘導体等の溶媒に抽出されにくい不純物も充填剤から除去し、多糖誘導体からの溶出物量を低減せしめた、高速液体クロマトグラフィー用充填剤の製造法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは鋭意検討の結果、充填剤を脂肪族炭化水素、低級アルコールまたはこれらの混合液等の溶媒で洗浄する際に、溶媒にジエチルアミン等の塩基を少量加え、イソシアン酸エステル等の多糖誘導体に混入した不純物を誘導体化すると、分離能を低下させることなく、効率良く多糖誘導体から抽出除去できることを見出し、本発明を完成させるに到った。
【０００８】
即ち、本発明は、多糖誘導体を担体にコーティングしてなる充填剤を、塩基を含有する溶媒で洗浄することにより、多糖誘導体中に含まれる不純物を誘導体化して除き、多糖誘導体由来の溶出物量の少ない充填剤を得ることを特徴とする高速液体クロマトグラフィー用充填剤の製造法を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態を詳細に説明する。
【００１０】
本発明における多糖とは、天然多糖、合成多糖いずれを問わず、光学活性であればいかなるものでもよいが、好ましくは結合様式の規則性の高いもので、高純度の多糖を容易に得ることのできるものである。例示すれば、セルロース、アミロース、β−１，４−キトサン、キチン、β−１，４−マンナン、β−１，４−キシラン等であり、セルロース及びアミロースが特に好ましい。
【００１１】
本発明における多糖誘導体とは、多糖の水酸基の８０〜１００％が置換基により置換された化合物をいう。具体的には、ウレタン結合を形成したカルバメート誘導体、エステル結合を形成したエステル誘導体、エーテル結合を形成したエーテル誘導体であるが、特に、カルバメート誘導体を対象とする場合において好ましく適用される。
【００１２】
本発明に用いられる担体としては、多孔質有機担体または多孔質無機担体があり、好ましくは多孔質無機担体である。多孔質有機担体として適当なものは、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート等からなる高分子物質が挙げられる。多孔質無機担体として適当なものは、シリカ、アルミナ、マグネシア、酸化チタン、ガラス、ケイ酸塩、カオリン等の合成または天然の物質が挙げられ、多糖誘導体との親和性を良くするために表面処理を行っても良い。表面処理の方法としては有機シラン化合物を用いたシラン化処理やプラズマ重合による表面処理法等が挙げられる。
【００１３】
本発明において多糖誘導体を担体にコーティングする方法としては、多糖誘導体を有機溶媒に溶解し、この溶液に担体を混合してよく攪拌した後に有機溶媒を留去する方法等が挙げられる。
【００１４】
上記のようにして多糖誘導体を担体にコーティングしてなる充填剤上の多糖誘導体は、非常に薄い（数十オングストローム）フィルム状になっており、このコーティング層を大きく乱すことなく洗浄するために、洗浄溶媒は、充填剤を高速液体クロマトグラフィーに使用する際に移動相として用いられる溶媒が好ましい。本発明における充填剤を高速液体クロマトグラフィー用として用いる際は、一般にｎ−ヘキサン等の脂肪族炭化水素とエタノール、２−プロパノール等の低級アルコールとの混合液を移動相として用いるため、これらの溶媒を本発明の充填剤の洗浄液として使用すると良い。即ち、本発明の洗浄溶媒としては、脂肪族炭化水素、低級アルコール、またはこれらの混合液が好ましく用いられる。脂肪族炭化水素としては、沸点、粘度、コーティング層への影響等の観点からｎ−ヘキサンが好ましいが、ｎ−ヘプタン、イソオクタン等も用いることができる。低級アルコールとしては、同様の観点から２−プロパノールが好ましいが、エタノール、１−プロパノール、１−ブタノール等も用いることができる。
【００１５】
本発明においては、充填剤をこのような溶媒で洗浄する際に、溶媒に塩基を含有せしめることにより、上記溶媒のみでは抽出されにくく、これらの溶媒で洗浄してもなお充填剤中に残留する不純物、例えば多糖誘導体がカルバメート誘導体の場合、多糖を誘導体化する際に使用するイソシアン酸エステル等を、塩基により誘導体化して除き、溶出物量を低減させるのである。
【００１６】
本発明に用いられる塩基としては、メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン等の鎖状及び環状アミンが挙げられる。
本発明において塩基を含有する溶媒中の塩基の含有量は、含まれる不純物に対して過剰であれば特に限定されないが、０．００１〜１０容量％が好ましい。
【００１７】
本発明においては、塩基を含有する溶媒で洗浄後、脂肪族炭化水素、低級アルコール又はこれらの混合液からなる溶媒で更に洗浄することが好ましい。
【００１８】
洗浄液の量に関しては、充填剤の取り扱い量にもよるが、通常、充填剤１ｇに対して３〜１０ｍｌの洗浄液を１回に使用し、複数回洗浄することが好ましい。
洗浄温度については、高温の方が洗浄能力が大きいが、多糖誘導体の熱安定性も勘案して、通常、５０〜７０℃が好ましい。
洗浄時間は、上記の条件で３０分〜１時間程度行うのが好ましい。
【００１９】
本発明による高速液体クロマトグラフィー用充填剤は溶出物の量が極めて少ないが、その指標としては、内径１ｃｍ、長さ２５ｃｍのカラムに充填した充填剤にｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝８／２（容量比）混合液を流速４．７ｍｌ／ｍｉｎ．、温度４０℃で通液した溶液１０００ｍｌを採取し、濃縮乾固して測定する方法で０．０５ｍｇ以下である。
【００２０】
本発明の方法により製造される多糖誘導体コーティング型充填剤は、通常の溶媒洗浄しない多糖誘導体コーティング型充填剤と比べて、溶出物の量が極めて少ない。特に、脂肪族炭化水素、低級アルコール、またはそれらの混合液に塩基を添加したものを洗浄液に用いることにより、誘導体化剤であるイソシアン酸エステルおよびその誘導体等の溶出量を大幅に低減することができる。このため、光学異性体等の分取の場合、分取製品中への多糖誘導体由来の溶出物が混入することなく、高純度の製品が得られる。また、分析の場合、クロマトグラムのベースラインがドリフトせず、安定するまでの時間が短いため、分析所要時間が短縮され、移動相溶媒使用量も少なくて済む。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではないことは言うまでもない。
【００２２】
合成例１
窒素雰囲気下で、セルロース（平均重合度約３００）２５０ｇをピリジン３．５リットルに加え、これにセルロースに対して大過剰のイソシアン酸４−クロロフェニル１０５０ｇを加え、９０℃で攪拌しながら６時間反応した。次いで、この反応液を冷却し、メタノール１００ｍｌを加えた後、メタノール／水＝４／１（容量比）溶液２０リットル中に投入した。生じた沈殿物を濾過により回収後、乾燥し、粗セルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）９８０ｇを得た。
【００２３】
得られた粗セルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）９８０ｇをアセトン５リットルに溶解し、この溶液をメタノール／水＝１０／１（容量比）１３リットルに投入した。生じた沈殿物を濾過により回収後、乾燥し、セルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）８８０ｇを得た。得られたセルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）の元素分析値及び分子量は以下の通りである。
【００２４】
元素分析値：
Ｃ％：５１．７２Ｈ％：３．５５Ｎ％：６．１７
分子量（ポリスチレン換算）：
数平均分子量（Ｍｎ）７．９９万
重量平均分子量（Ｍｗ）２１．５４万
Ｍｗ／Ｍｎ２．５４
得られたセルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）１ｇをアセトン１００ｍｌに溶解し、ガスクロマトグラフィーでイソシアン酸４−クロロフェニル由来の不純物含有量を測定したところ、以下の通りであった。
【００２５】
メチル４−クロロフェニルカルバメート４２０ｐｐｍ
４−クロロアニリン２００ｐｐｍ
４−クロロフェニルイソシアン酸２００ｐｐｍ
参考例
合成例１で得られたセルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）３ｇを、表１に記載の溶媒９０ｍｌに懸濁し、６０℃で３時間攪拌後濾別した。濾液を濃縮乾固後、抽出された多糖誘導体由来の不純物の含有量をガスクロマトグラフィーで定量し、抽出率を計算した。結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】

【００２７】
表１から明らかなように、セルロースの誘導体化剤であるイソシアン酸４−クロロフェニルはこれらの溶媒では抽出されにくいが、メチル４−クロロフェニルカルバメート、および４−クロロアニリンは抽出されやすいことが分かる。また、洗浄液中には、２−プロパノールが含まれるが、イソプロピル４−クロロフェニルカルバメートが検出されていないことより、洗浄中にイソシアン酸４−クロロフェニルを２−プロパノールで誘導体化後、抽出除去することは困難であることが分かる。
【００２８】
実施例１
合成例１で得られたセルローストリス（４−クロロフェニルカルバメート）１０ｇをアセトン６５ｍｌに溶解し、これを３−アミノプロピルシラン処理したシリカゲル（粒子径５０μｍ、孔径１３００オングストローム）４０ｇに攪拌しながら滴下し、完全に混合した後、溶媒を留去して充填剤５０ｇを得た（以降、充填剤Ａ’と呼称する）。
【００２９】
充填剤Ａ’５０ｇを２−プロパノール／ジエチルアミン＝１００／０．１（容量比）混合液３００ｍｌに懸濁し、温度６０℃で３０分攪拌、洗浄した。充填剤を濾別後、ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝１／３（容量比）混合液３００ｍｌに懸濁し、温度６０℃で３０分攪拌、洗浄後濾別することを５回繰り返し、乾燥して、洗浄された充填剤（以降、充填剤Ａと呼称する）を得た。
【００３０】
原料シリカゲル、充填剤Ａ’、充填剤Ａの元素分析を行った結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】

【００３２】
また、各洗浄工程において、洗浄後、充填剤を濾別して得られた濾液をそれぞれ濃縮乾固して、抽出された多糖誘導体由来の不純物の含有量をガスクロマトグラフィーで測定した。結果を表３に示す。
【００３３】
【表３】

【００３４】
表３から明らかなように、充填剤の多糖誘導体中に含まれていた不純物は、上記洗浄処理によってほぼ完全に抽出除去されたことが分かる。
【００３５】
充填剤Ａを内径１ｃｍ、長さ２５ｃｍのステンレス製カラムに充填し、充填剤Ａの充填カラム（以降、カラムＡと呼称する）を作成した。
次に、作成直後のカラムＡにｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝８／２（容量比）混合液を、流速４．７ｍｌ／ｍｉｎ．、温度４０℃で通液し、この溶液１０００ｍｌを採取した。これを濃縮乾固して、残渣重量を測定した。結果を表４に示す。
【００３６】
さらに、カラムＡについて、下記の条件で表５に示すラセミ体の光学分割実験を行った。結果を表５に示す。
【００３７】
＜光学分割条件＞
移動相：表５
流速：４．７ｍｌ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍ
温度：２５℃
比較例１
上記の洗浄しない充填剤Ａ’を乾燥し、実施例１と同様の方法でカラムに充填し、充填カラムを作成した（以降、カラムＡ’と呼称する）。
次に、作成直後のカラムＡ’にｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝８／２（容量比）混合液を、流速４．７ｍｌ／ｍｉｎ．、温度４０℃で通液し、この溶液１０００ｍｌを採取した。これを濃縮乾固して、残渣重量を測定した。結果を表４に示す。
【００３８】
さらに、カラムＡ’について、実施例１と同様の条件で表５に示すラセミ体の光学分割実験を行った。結果を表５に示す。
【００３９】
【表４】

【００４０】
表４から明らかなように、洗浄しない充填剤Ａ’を用いた場合（比較例１）と比べて、洗浄した充填剤Ａを用いた場合（実施例１）は溶出物量が格段に少なくなっていることがわかる。
【００４１】
【表５】

【００４２】
表５から明らかなように、洗浄しない充填剤Ａ’を用いた場合（比較例１）と比べて、洗浄した充填剤Ａを用いた場合（実施例１）は分離能は低下していないことがわかる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for producing a packing material for high performance liquid chromatography. More specifically, the present invention relates to a method for producing a filler for high performance liquid chromatography in which a polysaccharide derivative is coated on a carrier and the amount of eluate derived from the polysaccharide derivative is reduced.
[0002]
The packing material for high performance liquid chromatography of the present invention contributes to the improvement of the quality of a preparative product in the field of optical isomer fractionation. In addition, the present invention is a packing formed by coating a polysaccharide derivative on a carrier, and easily and inexpensively obtains a packing for high-performance liquid chromatography in which the amount of eluate derived from the polysaccharide derivative is reduced without reducing the separation performance. A manufacturing method is provided.
[0003]
[Background Art and Problems to be Solved by the Invention]
The packing for high performance liquid chromatography is roughly classified into two types: a chemical bonding type packing and a coating type packing.
Chemically bonded fillers generally have a small amount of eluate derived from a substance having a separating ability because a substance having a separating ability is chemically bonded to a carrier.
On the other hand, the coating-type filler has a separable substance physically adsorbed on the carrier, so that a solvent that dissolves the separable substance cannot be used, and has a separability under improper use conditions. There is a possibility that the substance peels and elutes. In the case of analysis, this elution appears as a drift phenomenon in the baseline of the chromatogram, and in the case of fractionation, it leads to contamination of the preparative product and must be avoided.
[0004]
It is known that a packing material for high-performance liquid chromatography formed by coating a polysaccharide derivative on a carrier is suitable for separation of optical isomers and has an excellent separation ability (Japanese Patent Laid-Open No. 60-82858). No., JP-A-60-108751, JP-A-60-142930, etc.). However, this high-performance liquid chromatography packing with a polysaccharide derivative coated on the carrier elutes the polymer in the relatively low molecular weight region of the polysaccharide derivative when the mobile phase used is inappropriate. In some cases, the baseline of the product is not stable, the eluate is mixed in the preparative product at the time of fractionation, and the separation performance is deteriorated.
[0005]
Therefore, it has been desired to develop a packing material for high performance liquid chromatography in which a carrier is coated with a polysaccharide derivative in which such an eluate is extremely reduced.
As a method for solving the above problem, there is a method described in JP-A-7-260762. In this method, the filler formed by coating the polysaccharide derivative on the carrier is washed with a solvent such as aliphatic hydrocarbon, lower alcohol, or a mixture thereof to reduce the eluate derived from the polysaccharide derivative, which is a substance having separation ability. It is a method to do. An example in which the elution amount of a low molecular weight polymer or the like can be reduced as an eluate derived from a polysaccharide derivative by such a method is described in the examples of this publication. However, particularly in the case of carbamate derivatives, the isocyanate used as a raw material when derivatizing the polysaccharide is difficult to extract into a solvent such as aliphatic hydrocarbon, lower alcohol or a mixture thereof, and is washed with these solvents. However, since it tends to remain in the filler, it is not preferable because it is eluted during use for a long time as an isocyanate ester or by reacting with alcohol or water as an isocyanate ester derivative.
[0006]
Accordingly, an object of the present invention is to provide a method for producing a packing material for high performance liquid chromatography, in which impurities that are difficult to be extracted into a solvent such as an isocyanate ester or a derivative thereof are removed from the packing material, and the amount of eluate from the polysaccharide derivative is reduced. Is to provide.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies, the present inventors have added a small amount of a base such as diethylamine to the solvent when washing the filler with a solvent such as an aliphatic hydrocarbon, lower alcohol or a mixture thereof, and a polysaccharide such as an isocyanate ester. It has been found that when impurities mixed in a derivative are derivatized, they can be efficiently extracted and removed from the polysaccharide derivative without reducing the separation ability, and the present invention has been completed.
[0008]
That is, the present invention is to remove the impurities contained in the polysaccharide derivative by rinsing the filler formed by coating the polysaccharide derivative on the carrier with a solvent containing a base, and to reduce the amount of eluate derived from the polysaccharide derivative. The present invention provides a method for producing a packing material for high performance liquid chromatography, which is characterized by obtaining a small amount of packing material.
[0009]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail.
[0010]
The polysaccharide in the present invention may be any natural activity or synthetic polysaccharide as long as it is optically active, but preferably has a high regularity of the binding mode and can easily obtain a high-purity polysaccharide. It can be done. Examples include cellulose, amylose, β-1,4-chitosan, chitin, β-1,4-mannan, β-1,4-xylan and the like, and cellulose and amylose are particularly preferable.
[0011]
The polysaccharide derivative in the present invention refers to a compound in which 80 to 100% of the hydroxyl group of the polysaccharide is substituted with a substituent. Specifically, a carbamate derivative in which a urethane bond is formed, an ester derivative in which an ester bond is formed, and an ether derivative in which an ether bond is formed are particularly preferable when carbamate derivatives are targeted.
[0012]
The carrier used in the present invention includes a porous organic carrier or a porous inorganic carrier, and preferably a porous inorganic carrier. Suitable examples of the porous organic carrier include polymer substances made of polystyrene, polyacrylamide, polyacrylate and the like. Suitable porous inorganic carriers include synthetic or natural substances such as silica, alumina, magnesia, titanium oxide, glass, silicate, kaolin, etc., and surface treatment to improve the affinity with polysaccharide derivatives. May be performed. Examples of the surface treatment method include a silanization treatment using an organosilane compound and a surface treatment method by plasma polymerization.
[0013]
Examples of the method for coating the carrier with the polysaccharide derivative in the present invention include a method in which the polysaccharide derivative is dissolved in an organic solvent, the carrier is mixed in this solution and stirred well, and then the organic solvent is distilled off.
[0014]
The polysaccharide derivative on the filler formed by coating the polysaccharide derivative on the carrier as described above is in a very thin film (several tens of angstroms), and in order to clean this coating layer without greatly disturbing, The washing solvent is preferably a solvent used as a mobile phase when the filler is used for high performance liquid chromatography. When the filler in the present invention is used for high performance liquid chromatography, generally a mixed liquid of an aliphatic hydrocarbon such as n-hexane and a lower alcohol such as ethanol or 2-propanol is used as a mobile phase. May be used as a cleaning liquid for the filler of the present invention. That is, as the cleaning solvent of the present invention, an aliphatic hydrocarbon, a lower alcohol, or a mixture thereof is preferably used. As the aliphatic hydrocarbon, n-hexane is preferable from the viewpoint of boiling point, viscosity, influence on the coating layer, etc., but n-heptane, isooctane and the like can also be used. As the lower alcohol, 2-propanol is preferable from the same viewpoint, but ethanol, 1-propanol, 1-butanol and the like can also be used.
[0015]
In the present invention, when the filler is washed with such a solvent, by adding a base to the solvent, it is difficult to extract with only the above-mentioned solvent, and it still remains in the filler even after washing with these solvents. When the impurities, for example, the polysaccharide derivative is a carbamate derivative, the isocyanate used for derivatizing the polysaccharide is derivatized with a base to reduce the amount of eluate.
[0016]
Examples of the base used in the present invention include chain and cyclic amines such as methylamine, dimethylamine, ethylamine, diethylamine, pyrrolidine, piperidine, piperazine and morpholine.
In the present invention, the content of the base in the solvent containing the base is not particularly limited as long as it is excessive with respect to the impurities contained, but 0.001 to 10% by volume is preferable.
[0017]
In the present invention, after washing with a solvent containing a base, washing with a solvent comprising an aliphatic hydrocarbon, a lower alcohol or a mixture thereof is preferably performed.
[0018]
Regarding the amount of the cleaning liquid, although depending on the handling amount of the filler, it is usually preferable to use 3 to 10 ml of the cleaning liquid at a time for 1 g of the filler, and to wash a plurality of times.
As for the washing temperature, the higher the washing performance, the higher the washing ability. However, taking into consideration the thermal stability of the polysaccharide derivative, 50 to 70 ° C. is usually preferred.
The washing time is preferably about 30 minutes to 1 hour under the above conditions.
[0019]
The amount of the eluate of the packing material for high performance liquid chromatography according to the present invention is extremely small, but as an indicator, n-hexane / 2-propanol = 8/2 is added to the packing material packed in a column having an inner diameter of 1 cm and a length of 25 cm. (Volume ratio) The mixture was flowed at a flow rate of 4.7 ml / min. In this method, 1000 ml of a solution passed at a temperature of 40 ° C. is collected, concentrated to dryness, and measured to be 0.05 mg or less.
[0020]
The polysaccharide derivative-coated filler produced by the method of the present invention has an extremely small amount of eluate compared to a polysaccharide derivative-coated filler that is not usually washed with a solvent. In particular, the use of aliphatic hydrocarbons, lower alcohols, or mixtures thereof with a base added to the washing solution can significantly reduce the amount of elution of isocyanate derivatives and their derivatives as derivatizing agents. it can. For this reason, in the case of fractionation of optical isomers and the like, a high-purity product can be obtained without mixing an eluate derived from a polysaccharide derivative into the fractionated product. In the case of analysis, since the baseline of the chromatogram does not drift and the time until stabilization is short, the time required for analysis is shortened and the amount of mobile phase solvent used can be reduced.
[0021]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention concretely, it cannot be overemphasized that this invention is not limited to these.
[0022]
Synthesis example 1
Under a nitrogen atmosphere, add 250 g of cellulose (average polymerization degree of about 300) to 3.5 liters of pyridine, add 1050 g of 4-chlorophenyl isocyanate, which is a large excess to the cellulose, and react at 90 ° C. for 6 hours with stirring. did. Next, the reaction solution was cooled, 100 ml of methanol was added, and then the solution was put into 20 liters of a methanol / water = 4/1 (volume ratio) solution. The resulting precipitate was collected by filtration and dried to obtain 980 g of crude cellulose tris (4-chlorophenylcarbamate).
[0023]
980 g of the obtained crude cellulose tris (4-chlorophenylcarbamate) was dissolved in 5 liters of acetone, and this solution was put into 13 liters of methanol / water = 10/1 (volume ratio). The resulting precipitate was collected by filtration and dried to obtain 880 g of cellulose tris (4-chlorophenylcarbamate). The elemental analysis value and molecular weight of the obtained cellulose tris (4-chlorophenyl carbamate) are as follows.
[0024]
Elemental analysis values:
C%: 51.72 H%: 3.55 N%: 6.17
Molecular weight (polystyrene conversion):
Number average molecular weight (Mn) 79,990,000 Weight average molecular weight (Mw) 21.54 million Mw / Mn 2.54
1 g of the obtained cellulose tris (4-chlorophenyl carbamate) was dissolved in 100 ml of acetone, and the content of impurities derived from 4-chlorophenyl isocyanate was measured by gas chromatography.
[0025]
Methyl 4-chlorophenylcarbamate 420ppm
4-Chloroaniline 200ppm
4-chlorophenylisocyanic acid 200ppm
Reference Example 3 g of cellulose tris (4-chlorophenylcarbamate) obtained in Synthesis Example 1 was suspended in 90 ml of the solvent described in Table 1, stirred at 60 ° C. for 3 hours, and filtered. After the filtrate was concentrated to dryness, the content of impurities derived from the extracted polysaccharide derivative was quantified by gas chromatography, and the extraction rate was calculated. The results are shown in Table 1.
[0026]
[Table 1]

[0027]
As is clear from Table 1, 4-chlorophenyl isocyanate, which is a derivatizing agent for cellulose, is difficult to extract with these solvents, but methyl 4-chlorophenylcarbamate and 4-chloroaniline are easily extracted. In addition, although 2-propanol is contained in the cleaning liquid, but isopropyl 4-chlorophenylcarbamate is not detected, it is possible to extract and remove 4-chlorophenyl isocyanate after derivatization with 2-propanol during the cleaning. It turns out to be difficult.
[0028]
Example 1
10 g of cellulose tris (4-chlorophenylcarbamate) obtained in Synthesis Example 1 was dissolved in 65 ml of acetone, and this was added dropwise to 40 g of silica gel treated with 3-aminopropylsilane (particle size 50 μm, pore size 1300 angstrom) with stirring. After complete mixing, the solvent was distilled off to obtain 50 g of filler (hereinafter referred to as filler A ′).
[0029]
50 g of filler A ′ was suspended in 300 ml of a 2-propanol / diethylamine = 100 / 0.1 (volume ratio) mixed solution, and stirred and washed at a temperature of 60 ° C. for 30 minutes. After filtering off the filler, suspending in 300 ml of n-hexane / 2-propanol = 1/3 (volume ratio) mixed solution, stirring at a temperature of 60 ° C. for 30 minutes, washing and filtering, repeated 5 times and dried. Thus, a washed filler (hereinafter referred to as filler A) was obtained.
[0030]
Table 2 shows the results of elemental analysis of raw material silica gel, filler A ′, and filler A.
[0031]
[Table 2]

[0032]
Moreover, in each washing | cleaning process, after washing | cleaning, the filtrate obtained by filtering a filler was each concentrated and dried, and the content of the impurity derived from the extracted polysaccharide derivative was measured with the gas chromatography. The results are shown in Table 3.
[0033]
[Table 3]

[0034]
As is clear from Table 3, it can be seen that the impurities contained in the polysaccharide derivative of the filler were almost completely extracted and removed by the washing treatment.
[0035]
Packing agent A was packed in a stainless steel column having an inner diameter of 1 cm and a length of 25 cm to prepare a packing column of packing material A (hereinafter referred to as column A).
Next, a mixed liquid of n-hexane / 2-propanol = 8/2 (volume ratio) was added to column A immediately after preparation at a flow rate of 4.7 ml / min. The solution was passed at a temperature of 40 ° C., and 1000 ml of this solution was collected. This was concentrated to dryness and the residue weight was measured. The results are shown in Table 4.
[0036]
Further, for column A, an optical resolution experiment of a racemate shown in Table 5 was performed under the following conditions. The results are shown in Table 5.
[0037]
<Optical resolution conditions>
Mobile phase: Table 5
Flow rate: 4.7 ml / min
Detection wavelength: 254 nm
Temperature: 25 ° C
Comparative Example 1
The unwashed packing material A ′ was dried and packed into a column in the same manner as in Example 1 to prepare a packed column (hereinafter referred to as column A ′).
Next, a mixed liquid of n-hexane / 2-propanol = 8/2 (volume ratio) was added to column A ′ immediately after preparation at a flow rate of 4.7 ml / min. The solution was passed at a temperature of 40 ° C., and 1000 ml of this solution was collected. This was concentrated to dryness and the residue weight was measured. The results are shown in Table 4.
[0038]
Further, for column A ′, an optical resolution experiment of the racemate shown in Table 5 was performed under the same conditions as in Example 1. The results are shown in Table 5.
[0039]
[Table 4]

[0040]
As is apparent from Table 4, the amount of the eluate is markedly reduced when the washed filler A is used (Example 1) as compared with the case where the unwashed filler A ′ is used (Comparative Example 1). I understand that.
[0041]
[Table 5]

[0042]
As is clear from Table 5, the separation ability is not lowered when the washed filler A is used (Example 1) as compared with the case where the unwashed filler A ′ is used (Comparative Example 1). I understand.

Claims

Impurities derived from polysaccharide derivatives including isocyanates or their derivatives are derivatized and removed by washing the filler formed by coating a polysaccharide derivative, which is a carbamate derivative of cellulose or amylose, with a solvent containing a base. A method for producing a filler for high-performance liquid chromatography, which comprises obtaining a filler with a small amount of eluate derived from a polysaccharide derivative.

The process according to claim 1, wherein the polysaccharide derivative is cellulose tris (4-chlorophenylcarbamate) .

The process according to claim 1 or 2, wherein the base is an amine, and the impurity derived from the polysaccharide derivative is an isocyanate or a derivative thereof.

The production method according to any one of claims 1 to 3, wherein the base-containing solvent is an aliphatic hydrocarbon, a lower alcohol, or a mixture thereof.

The manufacturing method as described in any one of Claims 1-4 which wash | cleans further with the solvent which consists of aliphatic hydrocarbon, a lower alcohol, or these liquid mixture after wash | cleaning with the solvent containing a base.

The amount of eluate derived from a polysaccharide derivative is n-hexane / 2-propanol = 8/2 (volume ratio) mixed in a packing material packed in a column with an inner diameter of 1 cm and a length of 25 cm. The production method according to any one of claims 1 to 5, wherein 1000 ml of the passed solution is collected, concentrated to dryness, and washed to 0.05 mg or less by a measurement method.