JP3504697B2 - ＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウム代謝治療薬 - Google Patents
ＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウム代謝治療薬Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＰＴＨｒＰアンタゴニ
スト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウ
ム代謝治療薬に関する。本発明のアンタゴニストは、高
カルシウム血症等の治療に用いられる。
スト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウ
ム代謝治療薬に関する。本発明のアンタゴニストは、高
カルシウム血症等の治療に用いられる。
【０００２】
【従来の技術】血液中のカルシウム代謝調節因子として
代表的なものには副甲状腺ホルモン（parathyroid horm
one, PTH) 、カルシトニン、ビタミンＤ等があるが、癌
が引き起こす高カルシウム血症の原因物質としては、上
記のいずれでもないことが指摘されていた。１９８７年
になりMoseley らにより高カルシウム血症を呈したヒト
扁平上皮癌より、ＰＴＨと同じ活性を示すタンパク質が
単離され、これは副甲状腺ホルモン関連タンパク質（pa
rathyroid hormone related protein,ＰＴＨｒＰ）と命
名された。また、癌患者における高カルシウム血症の原
因物質がこのＰＴＨｒＰであることも判明した。
代表的なものには副甲状腺ホルモン（parathyroid horm
one, PTH) 、カルシトニン、ビタミンＤ等があるが、癌
が引き起こす高カルシウム血症の原因物質としては、上
記のいずれでもないことが指摘されていた。１９８７年
になりMoseley らにより高カルシウム血症を呈したヒト
扁平上皮癌より、ＰＴＨと同じ活性を示すタンパク質が
単離され、これは副甲状腺ホルモン関連タンパク質（pa
rathyroid hormone related protein,ＰＴＨｒＰ）と命
名された。また、癌患者における高カルシウム血症の原
因物質がこのＰＴＨｒＰであることも判明した。
【０００３】さらに、Suvaらにより、ＰＴＨｒＰのアミ
ノ酸配列及びｃＤＮＡ塩基配列が決定されるに至り、Ｐ
ＴＨｒＰは１４１アミノ酸より成るものであることがわ
かった。Suvaらは、得られたｃＤＮＡより哺乳類の細胞
系でＰＴＨｒＰを発現させ、ＰＴＨ活性換算４８μｇ／
ｌの発現を確認している。
ノ酸配列及びｃＤＮＡ塩基配列が決定されるに至り、Ｐ
ＴＨｒＰは１４１アミノ酸より成るものであることがわ
かった。Suvaらは、得られたｃＤＮＡより哺乳類の細胞
系でＰＴＨｒＰを発現させ、ＰＴＨ活性換算４８μｇ／
ｌの発現を確認している。
【０００４】Rodan らは既にヒトＰＴＨｒＰのＮ末端側
から１〜３４番目のペプチドフラグメント（以下、「ヒ
トＰＴＨｒＰ（１−３４）」という）を化学的に合成
し、ラット骨肉腫由来の細胞株ROS17/2.8 におけるアデ
ニレートシクラーゼの活性の増加に関してヒトＰＴＨ
（１−３４）と同様の活性を持つことを確認している。
から１〜３４番目のペプチドフラグメント（以下、「ヒ
トＰＴＨｒＰ（１−３４）」という）を化学的に合成
し、ラット骨肉腫由来の細胞株ROS17/2.8 におけるアデ
ニレートシクラーゼの活性の増加に関してヒトＰＴＨ
（１−３４）と同様の活性を持つことを確認している。
【０００５】癌患者における高カルシウム血症は、癌患
者全体の約１０％に発症するとされ、血中のカルシウム
濃度の上昇により疼痛等様々な障害を引き起こすもので
ある。
者全体の約１０％に発症するとされ、血中のカルシウム
濃度の上昇により疼痛等様々な障害を引き起こすもので
ある。
【０００６】現在、この高カルシウム血症の治療薬とし
て、カルシトニン関連ペプチドがあるが、その効果は一
過性のものであり有効率も低い。これは、カルシトニン
は破骨細胞のレセプターに結合し、骨吸収の抑制作用を
示すが、高カルシウム血症の原因物質であるＰＴＨｒＰ
の活性を抑えるわけではないためであり、従って、その
効果にも限界がある。
て、カルシトニン関連ペプチドがあるが、その効果は一
過性のものであり有効率も低い。これは、カルシトニン
は破骨細胞のレセプターに結合し、骨吸収の抑制作用を
示すが、高カルシウム血症の原因物質であるＰＴＨｒＰ
の活性を抑えるわけではないためであり、従って、その
効果にも限界がある。
【０００７】本出願人は、先に、ＰＴＨｒＰのＮ末端か
ら１〜６番目のアミノ酸配列がＰＴＨｒＰ活性の発現に
必須的であること及び７〜３４番目のアミノ酸配列によ
りＰＴＨｒＰレセプターに結合し得ることを見出し、従
って、ＰＴＨｒＰのＮ末端側から７〜３４番目のアミノ
酸配列（以下、「ヒトＰＴＨｒＰ（７−３４）」はＰＴ
ＨｒＰのアンタゴニストとして有用であることを見出し
特許出願した（特開平２−２０７０９９号）。
ら１〜６番目のアミノ酸配列がＰＴＨｒＰ活性の発現に
必須的であること及び７〜３４番目のアミノ酸配列によ
りＰＴＨｒＰレセプターに結合し得ることを見出し、従
って、ＰＴＨｒＰのＮ末端側から７〜３４番目のアミノ
酸配列（以下、「ヒトＰＴＨｒＰ（７−３４）」はＰＴ
ＨｒＰのアンタゴニストとして有用であることを見出し
特許出願した（特開平２−２０７０９９号）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】上記した特開平２−２
０７０９９号公報に記載されたＰＴＨｒＰアンタゴニス
トは、ＰＴＨｒＰ活性を有さず、ＰＴＨｒＰと競合的に
ＰＴＨｒＰレセプターに結合することによりＰＴＨｒＰ
活性を拮抗する。もし、この公知のＰＴＨｒＰアンタゴ
ニストよりもアンタゴニスト活性が高いＰＴＨｒＰアン
タゴニストが得られれば、高カルシウム血症の治療によ
り有効である。
０７０９９号公報に記載されたＰＴＨｒＰアンタゴニス
トは、ＰＴＨｒＰ活性を有さず、ＰＴＨｒＰと競合的に
ＰＴＨｒＰレセプターに結合することによりＰＴＨｒＰ
活性を拮抗する。もし、この公知のＰＴＨｒＰアンタゴ
ニストよりもアンタゴニスト活性が高いＰＴＨｒＰアン
タゴニストが得られれば、高カルシウム血症の治療によ
り有効である。
【０００９】従って、本発明の目的は、上記公知のＰＴ
ＨｒＰアンタゴニストよりもアンタゴニスト活性が高い
ヒトＰＴＨｒＰアンタゴニストを提供することである。
ＨｒＰアンタゴニストよりもアンタゴニスト活性が高い
ヒトＰＴＨｒＰアンタゴニストを提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、ヒトＰＴＨｒＰ（７−３４）中の数個のアミ
ノ酸を置換することにより、そのアンタゴニスト活性が
有意に高まることを見出し本発明を完成した。
究の結果、ヒトＰＴＨｒＰ（７−３４）中の数個のアミ
ノ酸を置換することにより、そのアンタゴニスト活性が
有意に高まることを見出し本発明を完成した。
【００１１】
【００１２】 本発明は、ヒトＰＴＨｒＰ活性を
有さず、ヒトＰＴＨｒＰ又はヒトＰＴＨｒＰ活性を有す
るポリペプチドの生理学的作用に拮抗する活性を有し、
下記式[II]で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド
を提供する。Leu His Asn Leu D-Phe(4-F) Lys Ser Ile
Gln Asp Leu Arg Arg Arg Phe PheLeu His His Leu Il
e Ala Glu Ile His Thr Ala [II]
有さず、ヒトＰＴＨｒＰ又はヒトＰＴＨｒＰ活性を有す
るポリペプチドの生理学的作用に拮抗する活性を有し、
下記式[II]で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド
を提供する。Leu His Asn Leu D-Phe(4-F) Lys Ser Ile
Gln Asp Leu Arg Arg Arg Phe PheLeu His His Leu Il
e Ala Glu Ile His Thr Ala [II]
【００１３】
【００１４】 さらに本発明は、上記式[II]で表
されるポリペプチドを提供する。
されるポリペプチドを提供する。
【００１５】さらに本発明は、上記本発明のいずれかの
ポリペプチドを有効成分として含有するヒトＰＴＨｒＰ
に対するカルシウム代謝治療薬を提供する。
ポリペプチドを有効成分として含有するヒトＰＴＨｒＰ
に対するカルシウム代謝治療薬を提供する。
【００１６】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１７】 上記式[II]は、Ｎ末端側から記載さ
れている。上記式［II］中のD-Phe(4-F)は、フェニルア
ラニンのＤ体中のフェニル基の４位がフッ素原子に置換
したものを意味する。また、上記式中、Ｄ−Ｔｒｐはト
リプトファンのＤ体を意味する。その他、Ｄ、Ｌの表示
のないアミノ酸はＬ体である。なお、ポリペプチ ドを
化学合成する都合上、Ｎ末端のロイシンが脱アミノされ
てデスアミノロイシンとなり、Ｃ末端のアラニンのカル
ボキシル基にＮＨ2が結合されたものとなることがある
が、後述の実施例で明らかになるように、これらもＰＴ
ＨｒＰアンタゴニスト活性を有するものであり、上記各
式で表されるポリペプチドは、Ｎ末端が脱アミノされ、
Ｃ末端がアミノ化されたポリペプチドをも包含する。
れている。上記式［II］中のD-Phe(4-F)は、フェニルア
ラニンのＤ体中のフェニル基の４位がフッ素原子に置換
したものを意味する。また、上記式中、Ｄ−Ｔｒｐはト
リプトファンのＤ体を意味する。その他、Ｄ、Ｌの表示
のないアミノ酸はＬ体である。なお、ポリペプチ ドを
化学合成する都合上、Ｎ末端のロイシンが脱アミノされ
てデスアミノロイシンとなり、Ｃ末端のアラニンのカル
ボキシル基にＮＨ2が結合されたものとなることがある
が、後述の実施例で明らかになるように、これらもＰＴ
ＨｒＰアンタゴニスト活性を有するものであり、上記各
式で表されるポリペプチドは、Ｎ末端が脱アミノされ、
Ｃ末端がアミノ化されたポリペプチドをも包含する。
【００１８】 上記式[II]で示される各ポリペプチ
ドは、ヒトＰＴＨｒＰのＮ末端側から８〜３４番目のア
ミノ酸配列から成るポリペプチド中の数個のアミノ酸を
置換したものである。この置換により、後述の実施例に
おいて明らかになるように、驚くべきことに、アデニレ
ートシクラーゼ阻害活性、すなわち、ヒトＰＴＨｒＰア
ンタゴニスト活性が有意に高められた。
ドは、ヒトＰＴＨｒＰのＮ末端側から８〜３４番目のア
ミノ酸配列から成るポリペプチド中の数個のアミノ酸を
置換したものである。この置換により、後述の実施例に
おいて明らかになるように、驚くべきことに、アデニレ
ートシクラーゼ阻害活性、すなわち、ヒトＰＴＨｒＰア
ンタゴニスト活性が有意に高められた。
【００１９】 本発明のポリペプチドは、上記式[I
I]で表されるアミノ酸のみから成るものであってもよい
し、ヒトＰＴＨｒＰ活性を発揮しない限り、これにさら
に他のアミノ酸配列が加わったものでもよい。例 え
ば、ヒトＰＴＨｒＰの３５番目以降のアミノ酸がＣ末端
に結合したものであってもよい。
I]で表されるアミノ酸のみから成るものであってもよい
し、ヒトＰＴＨｒＰ活性を発揮しない限り、これにさら
に他のアミノ酸配列が加わったものでもよい。例 え
ば、ヒトＰＴＨｒＰの３５番目以降のアミノ酸がＣ末端
に結合したものであってもよい。
【００２０】本発明のポリペプチドは化学合成又は遺伝
子工学的手法により製造することができる。アミノ酸の
数が４０以下の場合には化学合成により製造する方法が
便利であるが、アミノ酸の数が４０を超えると化学合成
が困難になるので遺伝子工学的手法により合成すること
が好ましい。
子工学的手法により製造することができる。アミノ酸の
数が４０以下の場合には化学合成により製造する方法が
便利であるが、アミノ酸の数が４０を超えると化学合成
が困難になるので遺伝子工学的手法により合成すること
が好ましい。
【００２１】上記各式で表されるポリペプチドは、アミ
ノ酸の数が２６個又は２７個であるので、市販のペプチ
ド合成機を用いて容易に調製することができる。例え
ば、アプライドバイオシステムズ社のモデル４３０ペプ
チドシンセサイザーを用いてＦmoc 法により行うことが
できる。
ノ酸の数が２６個又は２７個であるので、市販のペプチ
ド合成機を用いて容易に調製することができる。例え
ば、アプライドバイオシステムズ社のモデル４３０ペプ
チドシンセサイザーを用いてＦmoc 法により行うことが
できる。
【００２２】遺伝子工学的手法による本発明のポリペプ
チドの合成は、ポリペプチドをコードする領域を含み、
大腸菌中で該ポリペプチドを発現することができる発現
ベクターで大腸菌を形質転換し、該形質転換された大腸
菌を培養し、その培養物から上記ポリペプチドを回収す
ることにより行うことができる。
チドの合成は、ポリペプチドをコードする領域を含み、
大腸菌中で該ポリペプチドを発現することができる発現
ベクターで大腸菌を形質転換し、該形質転換された大腸
菌を培養し、その培養物から上記ポリペプチドを回収す
ることにより行うことができる。
【００２３】上記発現ベクターにおいて、本発明のポリ
ペプチドをコードする領域は、本発明のポリペプチドを
コードするものであればいかなる塩基配列を有していて
もよいが、発現がスムーズになるよう大腸菌の使用頻度
の高いコドンを使い、パリンドロームや相同配列を避け
ることが望ましい。
ペプチドをコードする領域は、本発明のポリペプチドを
コードするものであればいかなる塩基配列を有していて
もよいが、発現がスムーズになるよう大腸菌の使用頻度
の高いコドンを使い、パリンドロームや相同配列を避け
ることが望ましい。
【００２４】上記本発明のポリペプチドコード領域の上
流には大腸菌内での転写効率を高めるプロモーターが存
在する。プロモーターは大腸菌由来のものが好ましく、
特にトリプトファンプロモーターが好ましい。プロモー
ターの直下流に本発明のポリペプチドコード領域が位置
していてもよいが、大腸菌trpEタンパク質のような、大
腸菌由来タンパク質をコードする領域の下流に上記領域
が位置していてもよい。後者の場合には、本発明のポリ
ペプチドは融合タンパク質の形態として得られる。
流には大腸菌内での転写効率を高めるプロモーターが存
在する。プロモーターは大腸菌由来のものが好ましく、
特にトリプトファンプロモーターが好ましい。プロモー
ターの直下流に本発明のポリペプチドコード領域が位置
していてもよいが、大腸菌trpEタンパク質のような、大
腸菌由来タンパク質をコードする領域の下流に上記領域
が位置していてもよい。後者の場合には、本発明のポリ
ペプチドは融合タンパク質の形態として得られる。
【００２５】用いられるベクターは、抗生物質耐性のよ
うな適当な選択マーカー及び大腸菌内で複製するための
複製開始点を有する。さらに、上記本発明のポリペプチ
ドコード領域の下流には転写終結コドンが存在する。例
えばｐＵＣ９、ｐＢＲ３２２その他の市販の大腸菌用ベ
クターをそのまま利用することができる。
うな適当な選択マーカー及び大腸菌内で複製するための
複製開始点を有する。さらに、上記本発明のポリペプチ
ドコード領域の下流には転写終結コドンが存在する。例
えばｐＵＣ９、ｐＢＲ３２２その他の市販の大腸菌用ベ
クターをそのまま利用することができる。
【００２６】発現ベクターは、上記した本発明のポリペ
プチドコード領域を例えばホスホアミダイド法等の公知
の方法により合成し、これを大腸菌用の市販のベクター
又は大腸菌内で発現する公知のベクターにクローニング
することにより作製することができる。得られた発現ベ
クターを用いた形質転換及びその後の大腸菌の培養は周
知の方法により行うことができる。形質転換された大腸
菌により産生された本発明のポリペプチドは、菌体を遠
心分離等で集め、周知のリゾチーム処理及び／又は超音
波処理等で菌体を破壊し、これを周知の方法に基づきゲ
ルろ過クロマトグラフィー等にかけることにより分離精
製することができる。
プチドコード領域を例えばホスホアミダイド法等の公知
の方法により合成し、これを大腸菌用の市販のベクター
又は大腸菌内で発現する公知のベクターにクローニング
することにより作製することができる。得られた発現ベ
クターを用いた形質転換及びその後の大腸菌の培養は周
知の方法により行うことができる。形質転換された大腸
菌により産生された本発明のポリペプチドは、菌体を遠
心分離等で集め、周知のリゾチーム処理及び／又は超音
波処理等で菌体を破壊し、これを周知の方法に基づきゲ
ルろ過クロマトグラフィー等にかけることにより分離精
製することができる。
【００２７】本発明のカルシウム代謝治療薬は、上記本
発明のポリペプチドを有効成分とするものである。本発
明のカルシウム代謝治療薬のヒトに対する投与量は、通
常、本発明のポリペプチドの量で３ｘ１０-6モルないし
３ｘ１０-7モル程度であり、投与経路は静脈注射又は筋
肉内注射が好ましい。また、カルシウム代謝治療薬とし
ての具体的な製剤例として、生理食塩水又はクエン酸緩
衝液中に本発明のポリペプチドを１ｘ１０-5Ｍないし１
ｘ１０-6Ｍ含むものを挙げることができる。
発明のポリペプチドを有効成分とするものである。本発
明のカルシウム代謝治療薬のヒトに対する投与量は、通
常、本発明のポリペプチドの量で３ｘ１０-6モルないし
３ｘ１０-7モル程度であり、投与経路は静脈注射又は筋
肉内注射が好ましい。また、カルシウム代謝治療薬とし
ての具体的な製剤例として、生理食塩水又はクエン酸緩
衝液中に本発明のポリペプチドを１ｘ１０-5Ｍないし１
ｘ１０-6Ｍ含むものを挙げることができる。
【００２８】本発明のカルシウム代謝治療薬は、カルシ
ウム代謝に異常のある種々の疾病、例えば高カルシウム
血症、骨粗鬆症のような骨疾患及び慢性腎不全による高
カルシウム血症の治療に用いることができる。
ウム代謝に異常のある種々の疾病、例えば高カルシウム
血症、骨粗鬆症のような骨疾患及び慢性腎不全による高
カルシウム血症の治療に用いることができる。
【００２９】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づき、さらに具体
的に説明する。
的に説明する。
【００３０】 実施例１ ポリペプチドの合成
アプライドバイオシステムズ社製モデル４３０ペプチド
シンセサイザーにより、式［Ｉ］ないし［III]で表され
るポリペプチドを合成した。ただし、Ｎ末端のロイシン
は脱アミノしたデスアミノロイシンであり、Ｎ末端のア
ラニン（式［III]のものではスレオニン）のカルボキシ
ル基にはアミノ基が結合したものが得られた。合成され
た各ポリペプチドのアミノ酸分析の結果をその理論値と
ともに下記表１に示す。また、各ポリペプチドのＨＬＰ
Ｃにおける滞留時間とＦＡＢ−ＭＳの結果を表２に示
す。なお、式 [I] 及び式 [III] は次の通りである。 Leu His Asn Leu D-Trp Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg
Arg Arg Phe Phe LeuHis His LeuIle Ala Glu Ile His
Thr Ala [I] Leu His Asn Leu D-Trp Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg
Arg Arg Phe Phe LeuHis His LeuIle Ala Glu Ile His
Thr [III]
シンセサイザーにより、式［Ｉ］ないし［III]で表され
るポリペプチドを合成した。ただし、Ｎ末端のロイシン
は脱アミノしたデスアミノロイシンであり、Ｎ末端のア
ラニン（式［III]のものではスレオニン）のカルボキシ
ル基にはアミノ基が結合したものが得られた。合成され
た各ポリペプチドのアミノ酸分析の結果をその理論値と
ともに下記表１に示す。また、各ポリペプチドのＨＬＰ
Ｃにおける滞留時間とＦＡＢ−ＭＳの結果を表２に示
す。なお、式 [I] 及び式 [III] は次の通りである。 Leu His Asn Leu D-Trp Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg
Arg Arg Phe Phe LeuHis His LeuIle Ala Glu Ile His
Thr Ala [I] Leu His Asn Leu D-Trp Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg
Arg Arg Phe Phe LeuHis His LeuIle Ala Glu Ile His
Thr [III]
【００３１】
【表１】
【００３２】
【表２】
【００３３】実施例２ ポリペプチドのアンタゴニスト
活性（生体外試験） 実施例１で合成した各ポリペプチドのアンタゴニスト活
性を、ラット骨髄腫細胞株ROS17/2.8 を用い、in vitro
で試験した。試験方法は、具体的には次のように行っ
た。ＲＯＳ細胞に対して、最大刺激近くまで充分ｃＡＭ
Ｐ産生能が得られた５ｘ１０-9ＭのＰＴＨｒＰ（１−３
４）の刺激に対する抑制効果を、各種ポリペプチドを段
階的に希釈して、比較した。ROS17/2.8 をHam's F12 培
地で２日間培養した。Ｆ１２培地で細胞を洗った後、濃
度を変えた合成ポリペプチドとＰＴＨｒＰ（１−３４）
を加え、３７℃、１０分間インキュベートした。氷上、
１ＮＨＣｌを加えた後、細胞を集め、上清を市販（ヤマ
サ社製）のｃＡＭＰ ＲＩＡのキットで濃度を測定し
た。なお、ポリペプチド（Ｉ−III)単独で加えた場合、
ｃＡＭＰの上昇（アゴニスト活性）は認められなかっ
た。
活性（生体外試験） 実施例１で合成した各ポリペプチドのアンタゴニスト活
性を、ラット骨髄腫細胞株ROS17/2.8 を用い、in vitro
で試験した。試験方法は、具体的には次のように行っ
た。ＲＯＳ細胞に対して、最大刺激近くまで充分ｃＡＭ
Ｐ産生能が得られた５ｘ１０-9ＭのＰＴＨｒＰ（１−３
４）の刺激に対する抑制効果を、各種ポリペプチドを段
階的に希釈して、比較した。ROS17/2.8 をHam's F12 培
地で２日間培養した。Ｆ１２培地で細胞を洗った後、濃
度を変えた合成ポリペプチドとＰＴＨｒＰ（１−３４）
を加え、３７℃、１０分間インキュベートした。氷上、
１ＮＨＣｌを加えた後、細胞を集め、上清を市販（ヤマ
サ社製）のｃＡＭＰ ＲＩＡのキットで濃度を測定し
た。なお、ポリペプチド（Ｉ−III)単独で加えた場合、
ｃＡＭＰの上昇（アゴニスト活性）は認められなかっ
た。
【００３４】結果を図１に示す。この図から明らかなよ
うに、本発明のポリペプチドは、公知のヒトＰＴＨｒＰ
（７〜３４）に比べ、アデニレートシクラーゼ活性の阻
害率が有意に高く、ヒトＰＴＨｒＰアンタゴニストとし
てより優れていることが明らかになった。
うに、本発明のポリペプチドは、公知のヒトＰＴＨｒＰ
（７〜３４）に比べ、アデニレートシクラーゼ活性の阻
害率が有意に高く、ヒトＰＴＨｒＰアンタゴニストとし
てより優れていることが明らかになった。
【００３５】実施例３ ポリペプチドのアンタゴニスト
活性（生体内試験） １群４匹のマウスに１日当たり２５０ｐｍｏｌのヒトＰ
ＴＨｒＰ（１−３４）を投与し、これと同時に１日当た
り５００ｎｍｏｌの実施例１で合成した式［Ｉ］で表さ
れるポリペプチドを投与した。これらの投与経路は皮下
に連続投与（オスモテックミニポンプ）であり、担体と
して２％システイン−ＨＣｌを含む生理食塩水を用い
た。担体中の有効成分の濃度は、ヒトＰＴＨｒＰ（１−
３４）が１０．４μＭ、式［Ｉ］のポリペプチドが２
０．８μＭであり、１日当たり２４μｌ投与した。ま
た、対照として、ヒトＰＴＨｒＰ（１−３４）のみを上
記担体中に含むものを投与した。投与開始前及び投与開
始３日後に血清中のカルシウム濃度を測定した。結果を
図３に示す。
活性（生体内試験） １群４匹のマウスに１日当たり２５０ｐｍｏｌのヒトＰ
ＴＨｒＰ（１−３４）を投与し、これと同時に１日当た
り５００ｎｍｏｌの実施例１で合成した式［Ｉ］で表さ
れるポリペプチドを投与した。これらの投与経路は皮下
に連続投与（オスモテックミニポンプ）であり、担体と
して２％システイン−ＨＣｌを含む生理食塩水を用い
た。担体中の有効成分の濃度は、ヒトＰＴＨｒＰ（１−
３４）が１０．４μＭ、式［Ｉ］のポリペプチドが２
０．８μＭであり、１日当たり２４μｌ投与した。ま
た、対照として、ヒトＰＴＨｒＰ（１−３４）のみを上
記担体中に含むものを投与した。投与開始前及び投与開
始３日後に血清中のカルシウム濃度を測定した。結果を
図３に示す。
【００３６】図２から明らかなように、本発明のポリペ
プチドを投与した群では、対照群に比べて血清中のカル
シウム濃度が有意に低く、本発明のポリペプチドの生体
内におけるＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性が確認され
た。
プチドを投与した群では、対照群に比べて血清中のカル
シウム濃度が有意に低く、本発明のポリペプチドの生体
内におけるＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性が確認され
た。
【００３７】
【発明の効果】本発明により、公知のものよりも優れた
ヒトＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有する新規なポリ
ペプチド及びそれを有効成分として含有するカルシウム
代謝治療薬が提供された。従って、本発明により、カル
シウム代謝に異常のある種々の疾病、例えば高カルシウ
ム血症、骨粗鬆症のような骨疾患及び慢性腎不全による
高カルシウム血症の治療がより有効に行えるようにな
る。
ヒトＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有する新規なポリ
ペプチド及びそれを有効成分として含有するカルシウム
代謝治療薬が提供された。従って、本発明により、カル
シウム代謝に異常のある種々の疾病、例えば高カルシウ
ム血症、骨粗鬆症のような骨疾患及び慢性腎不全による
高カルシウム血症の治療がより有効に行えるようにな
る。
【図１】 本発明の実施例のポリペプチドのアデニレー
トシクラーゼ阻害活性を、ヒトＰＴＨｒＰ（７−３４）
と比較して示す図である。
トシクラーゼ阻害活性を、ヒトＰＴＨｒＰ（７−３４）
と比較して示す図である。
【図２】 ヒトＰＴＨｒＰ（１−３４）で誘起した高カ
ルシウム血症マウスにおける本発明のポリペプチドによ
る血清カルシウム濃度低下効果を示す図である。
ルシウム血症マウスにおける本発明のポリペプチドによ
る血清カルシウム濃度低下効果を示す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 大植 千春
埼玉県入間郡大井町西鶴ケ岡１−３−１
東燃株式会社総合研究所内
(72)発明者 松崎 淳一
埼玉県入間郡大井町西鶴ケ岡１−３−１
東燃株式会社総合研究所内
(56)参考文献 特開 平２−22292（ＪＰ，Ａ)
特開 平４−217997（ＪＰ，Ａ)
Ｐｅｐｔ．Ｃｈｅｍ．，Ｓｅｐｔ.
27，1993，Ｖｏｌ．1992，ｐ．547−549
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07K 14/635
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】 ヒトＰＴＨｒＰ活性を有さず、ヒトＰ
ＴＨｒＰ又はヒトＰＴＨｒＰ活性を有するポリペプチド
の生理学的作用に拮抗する活性を有し、下記式[II]で表
されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。Leu His Asn
Leu D-Phe(4-F) Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg
Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His Thr A
la [II] - 【請求項２】 上記式[II]で表されるポリペプチド。
- 【請求項３】 請求項１又は２に記載のポリペプチド
を有効成分として含有するヒトＰＴＨｒＰに対するカル
シウム代謝治療薬。
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| JP26831193A JP3504697B2 (ja) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | ＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウム代謝治療薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26831193A JP3504697B2 (ja) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | ＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウム代謝治療薬 |
Publications (2)
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|---|---|
| JPH07165790A JPH07165790A (ja) | 1995-06-27 |
| JP3504697B2 true JP3504697B2 (ja) | 2004-03-08 |
Family
ID=17456776
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP26831193A Expired - Fee Related JP3504697B2 (ja) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | ＰＴＨｒＰアンタゴニスト活性を有するポリペプチド及びそれを含むカルシウム代謝治療薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3504697B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| AU750021C (en) | 1997-05-15 | 2003-10-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cachexia remedy |
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| AU5708500A (en) * | 1999-07-02 | 2001-01-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remedies for diseases caused by pth or pthrp |
| CA2373945A1 (en) * | 1999-07-06 | 2001-01-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remedies for drug-resistant hypercalcemia |
| ATE420661T1 (de) | 2000-04-28 | 2009-01-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Zellproliferation-inhibitoren |
| US8563513B2 (en) | 2009-03-27 | 2013-10-22 | Van Andel Research Institute | Parathyroid hormone peptides and parathyroid hormone-related protein peptides and methods of use |
-
1993
- 1993-09-30 JP JP26831193A patent/JP3504697B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Title |
|---|
| Ｐｅｐｔ．Ｃｈｅｍ．，Ｓｅｐｔ．２７，１９９３，Ｖｏｌ．１９９２，ｐ．５４７−５４９ |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7174969B2 (en) | 2003-05-14 | 2007-02-13 | Black & Decker Inc. | Rotary hammer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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