JP3430853B2 - 胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍の予防剤並びに治療剤 - Google Patents
胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍の予防剤並びに治療剤Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヘリコバクター・
ピロリの感染によって引き起こされる胃炎、胃潰瘍およ
び十二指腸潰瘍を効果的に予防または治療しうる経口予
防剤、治療剤に関する。さらに胃炎、胃潰瘍および十二
指腸潰瘍の予防用食品にも関する。
ピロリの感染によって引き起こされる胃炎、胃潰瘍およ
び十二指腸潰瘍を効果的に予防または治療しうる経口予
防剤、治療剤に関する。さらに胃炎、胃潰瘍および十二
指腸潰瘍の予防用食品にも関する。
【０００２】
【従来の技術】現在、消化性潰瘍の根治的治療にはヘリ
コバクター・ピロリ（Helicobacter pylori)の除菌が不
可欠であると考えられており、その除菌療法としては以
下に説明するように抗生物質と胃酸分泌抑制剤との併用
療法が広く提唱されている。
コバクター・ピロリ（Helicobacter pylori)の除菌が不
可欠であると考えられており、その除菌療法としては以
下に説明するように抗生物質と胃酸分泌抑制剤との併用
療法が広く提唱されている。
【０００３】ヘリコバクター・ピロリは、一端に数本の
鞭毛 (flagella) を持つ、ら旋型をしたグラム陰性桿菌
で、ヒトの胃粘膜に生息する菌である。この菌は、1983
年オーストラリアのMarshall, B. J. とWarren, J. R.
によって胃炎、胃潰瘍患者の胃生検材料から高率に検出
されることが報告された。当時は形態および増殖性状か
らカンピロバクターに類似していたので、カンピロバク
ター・ピロリ (Campylobacter pylori) と命名された。
その後、外膜の脂肪酸組成やリボゾームの16S-ＲＮＡ配
列の相同性がカンピロバクターと大きく相違しているこ
とが分かり、新たにヘリコバクター属が設けられて、今
日、この菌はヘリコバクター・ピロリ(以下、Ｈｐと略
称することがある) と呼ばれている。
鞭毛 (flagella) を持つ、ら旋型をしたグラム陰性桿菌
で、ヒトの胃粘膜に生息する菌である。この菌は、1983
年オーストラリアのMarshall, B. J. とWarren, J. R.
によって胃炎、胃潰瘍患者の胃生検材料から高率に検出
されることが報告された。当時は形態および増殖性状か
らカンピロバクターに類似していたので、カンピロバク
ター・ピロリ (Campylobacter pylori) と命名された。
その後、外膜の脂肪酸組成やリボゾームの16S-ＲＮＡ配
列の相同性がカンピロバクターと大きく相違しているこ
とが分かり、新たにヘリコバクター属が設けられて、今
日、この菌はヘリコバクター・ピロリ(以下、Ｈｐと略
称することがある) と呼ばれている。
【０００４】以来、疫学的研究から、この菌は胃炎、胃
潰瘍、十二指腸潰瘍の起因菌であり、さらには胃癌など
の疾患と関連があるとの報告が相次いで発表されてい
る。Ｈｐが一旦胃粘膜に定着すると、感染に対する免疫
応答が強い（抗体価が高い）にもかかわらず、除菌され
ず胃内に生息し続ける。そのため、抗生物質による治療
によって完全に除菌できない限り、投薬を中止すると約
１ヵ月以内に治療前の感染状態に戻ってしまう。しかも
胃内は酸度の高い塩酸によってpHが非常に低く保たれて
いるので、多くの抗生物質は不活化される。このような
理由で、Ｈｐの除菌には、胃酸分泌を強力に抑制するプ
ロトンポンプインヒビターと除菌薬（抗生物質）が併用
の形でしばしば常用量を超える量で使用されている。ま
た、現状ではＨｐの除菌には次サリチル酸ビスマス（bi
smuth subsalicylate)、メトロニダゾールおよびテトラ
サイクリンの新３剤併用療法が最も高い除菌率を示すこ
とが分かっているが、この併用に使うメトロニダゾール
は単独で使用すると耐性発現が急速に起こることが知ら
れている。発展途上国では下痢患者に対してこの薬剤が
広く使用された結果、メトロニダゾールに耐性のＨｐ感
染が高率で生じているとの報告もある。
潰瘍、十二指腸潰瘍の起因菌であり、さらには胃癌など
の疾患と関連があるとの報告が相次いで発表されてい
る。Ｈｐが一旦胃粘膜に定着すると、感染に対する免疫
応答が強い（抗体価が高い）にもかかわらず、除菌され
ず胃内に生息し続ける。そのため、抗生物質による治療
によって完全に除菌できない限り、投薬を中止すると約
１ヵ月以内に治療前の感染状態に戻ってしまう。しかも
胃内は酸度の高い塩酸によってpHが非常に低く保たれて
いるので、多くの抗生物質は不活化される。このような
理由で、Ｈｐの除菌には、胃酸分泌を強力に抑制するプ
ロトンポンプインヒビターと除菌薬（抗生物質）が併用
の形でしばしば常用量を超える量で使用されている。ま
た、現状ではＨｐの除菌には次サリチル酸ビスマス（bi
smuth subsalicylate)、メトロニダゾールおよびテトラ
サイクリンの新３剤併用療法が最も高い除菌率を示すこ
とが分かっているが、この併用に使うメトロニダゾール
は単独で使用すると耐性発現が急速に起こることが知ら
れている。発展途上国では下痢患者に対してこの薬剤が
広く使用された結果、メトロニダゾールに耐性のＨｐ感
染が高率で生じているとの報告もある。
【０００５】このように、抗生物質の長期投与は、その
副作用に加え、耐性菌の増加という非常に重大な問題が
危惧される。
副作用に加え、耐性菌の増加という非常に重大な問題が
危惧される。
【０００６】除菌を目的とした抗生物質の投与による副
作用および耐性菌の増加などの問題を解決する方法とし
て、現在、経口ワクチンによる免疫療法のアプローチが
見られる。しかし、この目的の達成には、Ｈｐに対する
感染モデル動物の作出が必須の条件である。これまで
に、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、ブタ、サル等を用
いてＨｐの感染試験が試みられ、イヌ、ブタ、サルにお
いて成功したことが報告されている。しかしながら、マ
ウスやラット等の小動物には感染が容易に成立せず、そ
のため無菌動物を用いなければならなかったり、また、
感染を長期間持続させるには新鮮分離株を用いる必要が
あるなどの複雑な条件が障害となって、新しい予防、治
療法の確立を目指した研究はほとんど進展していない。
作用および耐性菌の増加などの問題を解決する方法とし
て、現在、経口ワクチンによる免疫療法のアプローチが
見られる。しかし、この目的の達成には、Ｈｐに対する
感染モデル動物の作出が必須の条件である。これまで
に、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、ブタ、サル等を用
いてＨｐの感染試験が試みられ、イヌ、ブタ、サルにお
いて成功したことが報告されている。しかしながら、マ
ウスやラット等の小動物には感染が容易に成立せず、そ
のため無菌動物を用いなければならなかったり、また、
感染を長期間持続させるには新鮮分離株を用いる必要が
あるなどの複雑な条件が障害となって、新しい予防、治
療法の確立を目指した研究はほとんど進展していない。
【０００７】例えば、Marchetti,M 等のScience, Vol.
267, 1655-1658頁 (1995年) には、Ｈｐ経口ワクチンの
効果の検討にマウスのモデルを用い、経口免疫によりＨ
ｐの感染が80％阻止されたことが記載されている。しか
し、この経口ワクチンではアジュバントとして大腸菌由
来の易熱性毒素(LT)を加えている。一般に、このような
経口ワクチンの実験では、アジュバントとして大腸菌由
来のLTの他にコレラトキシンを加えることが普通であ
り、これらのアジュバントなしでは粘膜免疫は成立しな
い。実用化への問題点として、大腸菌のLTもコレラトキ
シンも毒性のレベルが非常に高く、ヒトへの応用に関し
て安全性の面で多くの未解決な問題点を抱えている。ま
た、ワクチンはあくまで予防を主体とするものであり、
一旦Ｈｐが感染した患者に対しては効果は望めない。
267, 1655-1658頁 (1995年) には、Ｈｐ経口ワクチンの
効果の検討にマウスのモデルを用い、経口免疫によりＨ
ｐの感染が80％阻止されたことが記載されている。しか
し、この経口ワクチンではアジュバントとして大腸菌由
来の易熱性毒素(LT)を加えている。一般に、このような
経口ワクチンの実験では、アジュバントとして大腸菌由
来のLTの他にコレラトキシンを加えることが普通であ
り、これらのアジュバントなしでは粘膜免疫は成立しな
い。実用化への問題点として、大腸菌のLTもコレラトキ
シンも毒性のレベルが非常に高く、ヒトへの応用に関し
て安全性の面で多くの未解決な問題点を抱えている。ま
た、ワクチンはあくまで予防を主体とするものであり、
一旦Ｈｐが感染した患者に対しては効果は望めない。
【０００８】そこで、Ｈｐ制御の新しい試みとして、相
場等 (第30回日本無菌生物ノートバイオロジー学会総
会、日程と抄録第22頁、要望演題18 Helicobacter pyro
li制御の新しい試み、1997年１月）は、無菌マウスを用
いたＨｐ感染モデルで、プロバイオテックスとしての
ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus saliva
rius) 投与によるＨｐ制御効果、Ｈｐのホルマリン全
菌体死菌を鶏に免疫し、卵黄に移行した抗Ｈｐ抗体の経
口投与によるＨｐの制御効果の可能性を検討している。
その結果、Ｈｐ感染マウスの胃内のＨｐ菌数に対する
L.サリバリウスの除菌効果に関しては、対照群と比較し
て投与群のＨｐ菌数が1/10〜1/1,000 まで低下した、
抗体投与群では対照群に比較して胃内Ｈｐ菌数は1/10程
度に低下したと報告されている。
場等 (第30回日本無菌生物ノートバイオロジー学会総
会、日程と抄録第22頁、要望演題18 Helicobacter pyro
li制御の新しい試み、1997年１月）は、無菌マウスを用
いたＨｐ感染モデルで、プロバイオテックスとしての
ラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus saliva
rius) 投与によるＨｐ制御効果、Ｈｐのホルマリン全
菌体死菌を鶏に免疫し、卵黄に移行した抗Ｈｐ抗体の経
口投与によるＨｐの制御効果の可能性を検討している。
その結果、Ｈｐ感染マウスの胃内のＨｐ菌数に対する
L.サリバリウスの除菌効果に関しては、対照群と比較し
て投与群のＨｐ菌数が1/10〜1/1,000 まで低下した、
抗体投与群では対照群に比較して胃内Ｈｐ菌数は1/10程
度に低下したと報告されている。
【０００９】しかしながら、この結果は、口腔、胃およ
び腸管内に常在菌叢不在のマウスを用いて得られたもの
であり、常在菌叢を保有している通常マウスにおいても
このような結果が得られるとは限らない。通常、マウス
固有の常在菌叢を有するマウスにヒト由来の乳酸菌を接
種しても常在菌叢によって排除され、定着しないのが常
である。また、抗体はＨｐの全菌体に対する抗体を用い
ており、抗体投与群においてＨｐの胃内菌数が1/10程度
に低下したに過ぎず、完全除菌にまで至っていない。し
かもＨｐ菌数の低下と胃炎軽減効果との関連については
記載されていない。
び腸管内に常在菌叢不在のマウスを用いて得られたもの
であり、常在菌叢を保有している通常マウスにおいても
このような結果が得られるとは限らない。通常、マウス
固有の常在菌叢を有するマウスにヒト由来の乳酸菌を接
種しても常在菌叢によって排除され、定着しないのが常
である。また、抗体はＨｐの全菌体に対する抗体を用い
ており、抗体投与群においてＨｐの胃内菌数が1/10程度
に低下したに過ぎず、完全除菌にまで至っていない。し
かもＨｐ菌数の低下と胃炎軽減効果との関連については
記載されていない。
【００１０】特異的抗体の使用に関しては、特開平4-27
5232号公報にも開示があるが、これにはＨｐ全菌体を抗
原として得られた鶏卵抗体が記載されているにすぎな
い。すなわち、この公報には、Ｈｐ全菌体を抗原として
免疫した鶏の卵から調製した該抗原に特異的な抗体を有
効成分とする胃炎、胃または十二指腸潰瘍予防食品が開
示されているが、その効果は明らかではない。上記公報
においては、得られたＨｐ全菌体に対する抗体の有効性
を、インビトロの系で豚胃粘膜ムチンにＨｐが付着する
ことを利用して評価し、その結果、Ｈｐ全菌体に対する
鶏卵抗体が胃粘膜へのＨｐの付着を阻止したと記載され
ている。しかし、このインビトロ試験はpH7.4 の非常に
温和な環境下で行われているため、得られたデータが実
際に胃内というpH１〜３の強酸性環境の影響を正確に反
映しているかどうかは疑問である。強酸性の胃内での除
菌の効果を確認するにはＨｐ感染モデル動物を用いるこ
とが必要であるが、上記公報にはそのような実験の記載
はなく、従ってＨｐ全菌体に対する鶏卵抗体の投与が、
胃内でのＨｐの除菌を促すかどうかは不明である。さら
に、胃炎の発生を抑制しうるかどうかについては全く記
載されていない。
5232号公報にも開示があるが、これにはＨｐ全菌体を抗
原として得られた鶏卵抗体が記載されているにすぎな
い。すなわち、この公報には、Ｈｐ全菌体を抗原として
免疫した鶏の卵から調製した該抗原に特異的な抗体を有
効成分とする胃炎、胃または十二指腸潰瘍予防食品が開
示されているが、その効果は明らかではない。上記公報
においては、得られたＨｐ全菌体に対する抗体の有効性
を、インビトロの系で豚胃粘膜ムチンにＨｐが付着する
ことを利用して評価し、その結果、Ｈｐ全菌体に対する
鶏卵抗体が胃粘膜へのＨｐの付着を阻止したと記載され
ている。しかし、このインビトロ試験はpH7.4 の非常に
温和な環境下で行われているため、得られたデータが実
際に胃内というpH１〜３の強酸性環境の影響を正確に反
映しているかどうかは疑問である。強酸性の胃内での除
菌の効果を確認するにはＨｐ感染モデル動物を用いるこ
とが必要であるが、上記公報にはそのような実験の記載
はなく、従ってＨｐ全菌体に対する鶏卵抗体の投与が、
胃内でのＨｐの除菌を促すかどうかは不明である。さら
に、胃炎の発生を抑制しうるかどうかについては全く記
載されていない。
【００１１】また日本農芸化学会誌、講演要旨集、71,
52頁, 20p22 (1997)にも、Ｈｐ全菌体に対する鶏卵抗体
がＨｐ制菌作用を有するとの記載があるが、この場合
も、鶏を免疫するための抗原はＨｐ全菌体であり、上記
の鶏卵抗体と同様の問題を有すると考えられる。
52頁, 20p22 (1997)にも、Ｈｐ全菌体に対する鶏卵抗体
がＨｐ制菌作用を有するとの記載があるが、この場合
も、鶏を免疫するための抗原はＨｐ全菌体であり、上記
の鶏卵抗体と同様の問題を有すると考えられる。
【００１２】なお、Ｈｐ全菌体に対する抗体をウシなど
の哺乳動物の乳汁や血液から得ることが特開平４-16953
9 号公報および特開平４-330099 号公報に開示されてい
るが、このような方法では大量に安価に抗体を製造する
ことはできない。しかも、哺乳動物の免疫に用いる抗原
が全菌体であるので、上記従来技術と同様、完全な除菌
は期待できない。
の哺乳動物の乳汁や血液から得ることが特開平４-16953
9 号公報および特開平４-330099 号公報に開示されてい
るが、このような方法では大量に安価に抗体を製造する
ことはできない。しかも、哺乳動物の免疫に用いる抗原
が全菌体であるので、上記従来技術と同様、完全な除菌
は期待できない。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】上述のように、Ｈｐを
除菌するために、抗生物質を長期にわたり使用すると副
作用と共に耐性菌の増加の恐れがあり、また、ワクチン
は実用化には至っていない。さらに、乳酸菌を接種する
試み、あるいはＨｐ全体菌に対する鶏卵抗体を使用する
試みでは、Ｈｐを完全に除菌することができず、従っ
て、胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍の発生予防、また
治療に有効であるとは言えない。
除菌するために、抗生物質を長期にわたり使用すると副
作用と共に耐性菌の増加の恐れがあり、また、ワクチン
は実用化には至っていない。さらに、乳酸菌を接種する
試み、あるいはＨｐ全体菌に対する鶏卵抗体を使用する
試みでは、Ｈｐを完全に除菌することができず、従っ
て、胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍の発生予防、また
治療に有効であるとは言えない。
【００１４】本発明の目的は、抗生物質の使用に伴う副
作用や耐性菌増加という欠点を持たず、ヘリコバクター
・ピロリ感染によって引き起こされる胃炎、胃潰瘍およ
び十二指腸潰瘍に対して、効果的で安全性の高い予防剤
および治療剤、並びに予防用食品を提供することであ
る。
作用や耐性菌増加という欠点を持たず、ヘリコバクター
・ピロリ感染によって引き起こされる胃炎、胃潰瘍およ
び十二指腸潰瘍に対して、効果的で安全性の高い予防剤
および治療剤、並びに予防用食品を提供することであ
る。
【００１５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、これまで
十分に解明されていなかった、ヘリコバクター・ピロリ
の胃粘膜への定着に関し、新規な重要な知見を得たこと
に基づき本発明に至った。
十分に解明されていなかった、ヘリコバクター・ピロリ
の胃粘膜への定着に関し、新規な重要な知見を得たこと
に基づき本発明に至った。
【００１６】Ｈｐは嫌気的条件および大気中では増殖せ
ず、微好気的条件下でのみ増殖するなどの増殖条件の特
殊性から、本菌の胃内での生態に関しては十分に解明さ
れていなかった。特に、強酸性の胃内での増殖の鍵とな
る胃粘膜への定着に関して種々の研究がなされているに
もかかわらず、胃内での強い増殖能力の理由ははっきり
と説明できなかった。胃粘膜への定着は、胃内でのＨｐ
の増殖に重要な役割を果たすものであるので、定着因子
の解明は、Ｈｐにより引き起こされる胃炎、消化性潰瘍
の予防、治療法の開発に大きな意義をもつ。
ず、微好気的条件下でのみ増殖するなどの増殖条件の特
殊性から、本菌の胃内での生態に関しては十分に解明さ
れていなかった。特に、強酸性の胃内での増殖の鍵とな
る胃粘膜への定着に関して種々の研究がなされているに
もかかわらず、胃内での強い増殖能力の理由ははっきり
と説明できなかった。胃粘膜への定着は、胃内でのＨｐ
の増殖に重要な役割を果たすものであるので、定着因子
の解明は、Ｈｐにより引き起こされる胃炎、消化性潰瘍
の予防、治療法の開発に大きな意義をもつ。
【００１７】胃内でのＨｐの病原因子としては、これま
で、Ｈｐの産生するウレアーゼ、胃粘膜ムチン層を自由
に遊走するための鞭毛、炎症性サイトカインとしてのイ
ンタロイキン８の産生に関与するとされるCag A 外膜蛋
白、胃粘膜上皮細胞の空胞化・びらん・壊死および潰瘍
形成に関与するVac A 空砲化細胞毒などが考えられてい
る。
で、Ｈｐの産生するウレアーゼ、胃粘膜ムチン層を自由
に遊走するための鞭毛、炎症性サイトカインとしてのイ
ンタロイキン８の産生に関与するとされるCag A 外膜蛋
白、胃粘膜上皮細胞の空胞化・びらん・壊死および潰瘍
形成に関与するVac A 空砲化細胞毒などが考えられてい
る。
【００１８】病原因子の１つであるHpが産生するウレア
ーゼについては、胃内の尿素をアンモニアに変換するこ
とにより菌体周辺の強酸性生育環境を中和し、Ｈｐが胃
内で増殖するためのよい環境を提供するのに役立つと考
えられていた。一方、胃粘膜へのHpの定着に関しては、
ノトバイオート豚を用いた実験では、ウレアーゼ産生株
ばかりではなく、非産生株でも同程度に胃内に定着する
ことが明らかになっている（Eaton.K.A. and Krakowka,
S.1995, Scand. J. Gastroenterol. 30:434-437) 。ま
た最近の報告では、ヒトの胃粘膜上皮細胞並びに胃癌株
化細胞(Kato III)に対するHpのウレアーゼ産生株と非産
生株の付着能について検討されているが、その結果は、
両株のこれらの細胞に対する付着能に差異はなく、Hpの
ウレアーゼは付着因子(adhesin) としての機能は持たな
いと結論づけられた(Clyne,M. and Drumm,B. 1996, Inf
ect. Immun. 64:2817-2820) 。
ーゼについては、胃内の尿素をアンモニアに変換するこ
とにより菌体周辺の強酸性生育環境を中和し、Ｈｐが胃
内で増殖するためのよい環境を提供するのに役立つと考
えられていた。一方、胃粘膜へのHpの定着に関しては、
ノトバイオート豚を用いた実験では、ウレアーゼ産生株
ばかりではなく、非産生株でも同程度に胃内に定着する
ことが明らかになっている（Eaton.K.A. and Krakowka,
S.1995, Scand. J. Gastroenterol. 30:434-437) 。ま
た最近の報告では、ヒトの胃粘膜上皮細胞並びに胃癌株
化細胞(Kato III)に対するHpのウレアーゼ産生株と非産
生株の付着能について検討されているが、その結果は、
両株のこれらの細胞に対する付着能に差異はなく、Hpの
ウレアーゼは付着因子(adhesin) としての機能は持たな
いと結論づけられた(Clyne,M. and Drumm,B. 1996, Inf
ect. Immun. 64:2817-2820) 。
【００１９】本発明者らは、Ｈｐの定着に関する従来の
研究結果からは予想外の、ウレアーゼそのものがＨｐの
胃粘膜への定着に関与するとの知見を得た。すなわち、
Ｈｐの産生するウレアーゼは、尿素をアンモニアに変換
する酵素としての作用に加え、定着因子としての作用が
大きいこと、すなわちウレアーゼ自体が胃粘膜ムチンに
結合することによりこの菌の増殖が可能となることを見
出した。また、本発明者らは、Ｈｐの鞭毛についても、
胃粘膜への定着に関与していることを示唆する知見を得
た。
研究結果からは予想外の、ウレアーゼそのものがＨｐの
胃粘膜への定着に関与するとの知見を得た。すなわち、
Ｈｐの産生するウレアーゼは、尿素をアンモニアに変換
する酵素としての作用に加え、定着因子としての作用が
大きいこと、すなわちウレアーゼ自体が胃粘膜ムチンに
結合することによりこの菌の増殖が可能となることを見
出した。また、本発明者らは、Ｈｐの鞭毛についても、
胃粘膜への定着に関与していることを示唆する知見を得
た。
【００２０】本発明は上記知見に基づいてなされたもの
であり、Ｈｐの胃粘膜への定着を完全に阻止するために
は、Ｈｐの全菌体に対する抗体では不十分であり、Ｈｐ
のウレアーゼおよび／または鞭毛に対する抗体が有効で
あることを見出した結果なされたものである。さらに本
発明者らは、これらの抗体と、乳酸菌、腸球菌、酵母ま
たはバチルス属細菌との併用が相乗効果を有することも
見出し、本発明を完成した。
であり、Ｈｐの胃粘膜への定着を完全に阻止するために
は、Ｈｐの全菌体に対する抗体では不十分であり、Ｈｐ
のウレアーゼおよび／または鞭毛に対する抗体が有効で
あることを見出した結果なされたものである。さらに本
発明者らは、これらの抗体と、乳酸菌、腸球菌、酵母ま
たはバチルス属細菌との併用が相乗効果を有することも
見出し、本発明を完成した。
【００２１】すなわち、本発明の要旨は、ヘリコバクタ
ー・ピロリのウレアーゼを抗原として鶏に免疫し、この
免疫鶏が産生した卵から得た、前記抗原に特異的な抗
体、およびヘリコバクター・ピロリの鞭毛を抗原として
鶏に免疫し、この免疫鶏が産生した卵から得た、前記抗
原に特異的な抗体にある。また、これらの抗体のそれぞ
れあるいは両者を含有する、ヘリコバクター・ピロリの
胃での増殖を阻止しうる組成物にも関する。
ー・ピロリのウレアーゼを抗原として鶏に免疫し、この
免疫鶏が産生した卵から得た、前記抗原に特異的な抗
体、およびヘリコバクター・ピロリの鞭毛を抗原として
鶏に免疫し、この免疫鶏が産生した卵から得た、前記抗
原に特異的な抗体にある。また、これらの抗体のそれぞ
れあるいは両者を含有する、ヘリコバクター・ピロリの
胃での増殖を阻止しうる組成物にも関する。
【００２２】さらに、本発明は(1) ヘリコバクター・ピ
ロリのウレアーゼに対する特異的鶏卵抗体および(2) 乳
酸菌、腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を含有す
る、ヘリコバクター・ピロリの胃での増殖を阻止しうる
組成物、また、(1) ヘリコバクター・ピロリのウレアー
ゼに対する特異的鶏卵抗体、(2) ヘリコバクター・ピロ
リの鞭毛に対する特異的鶏卵抗体、および(3) 乳酸菌、
腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を含有する、ヘリ
コバクター・ピロリの胃での増殖を阻止しうる組成物に
も関する。
ロリのウレアーゼに対する特異的鶏卵抗体および(2) 乳
酸菌、腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を含有す
る、ヘリコバクター・ピロリの胃での増殖を阻止しうる
組成物、また、(1) ヘリコバクター・ピロリのウレアー
ゼに対する特異的鶏卵抗体、(2) ヘリコバクター・ピロ
リの鞭毛に対する特異的鶏卵抗体、および(3) 乳酸菌、
腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を含有する、ヘリ
コバクター・ピロリの胃での増殖を阻止しうる組成物に
も関する。
【００２３】上記組成物は、胃炎、胃潰瘍および十二指
腸潰瘍に対する予防剤並びに治療剤として使用でき、ま
た胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍予防食品として用い
ることもできる。
腸潰瘍に対する予防剤並びに治療剤として使用でき、ま
た胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍予防食品として用い
ることもできる。
【００２４】以下に本発明を詳細に説明する。
【００２５】本発明の抗体含有組成物を得るには、ま
ず、産卵鶏に免疫するための抗原としてＨｐのウレアー
ゼまたは鞭毛を調製する。抗原の調製に用いるＨｐの菌
株としては例えば#130(Cag A+)(Vac A+)、NSP#305(Cag
A+)(Vac A+) 、NSP#335(Cag A+)(Vac A+) 、NSP#355(Ca
g A-)(Vac A-) 等のヒト臨床分離株が挙げられる。これ
らの菌株を培養後、適宜手段によりウレアーゼ成分およ
び鞭毛成分をそれぞれ調製する。
ず、産卵鶏に免疫するための抗原としてＨｐのウレアー
ゼまたは鞭毛を調製する。抗原の調製に用いるＨｐの菌
株としては例えば#130(Cag A+)(Vac A+)、NSP#305(Cag
A+)(Vac A+) 、NSP#335(Cag A+)(Vac A+) 、NSP#355(Ca
g A-)(Vac A-) 等のヒト臨床分離株が挙げられる。これ
らの菌株を培養後、適宜手段によりウレアーゼ成分およ
び鞭毛成分をそれぞれ調製する。
【００２６】産卵鶏への免疫は、各抗原を所望により免
疫増強剤 (アジュバント) と共に鶏に接種することによ
り行う。この接種は皮下注射、筋肉注射などの方法が可
能である。抗原の接種量は、使用抗原の種類および免疫
増強剤の種類に応じて、目的とする特異的抗体が体内に
適当量形成され、しかも鶏に対して過度の毒性が発揮さ
れないように決定する。通常は、抗原の投与から数週間
以内に鶏の体内に投与した抗原に特異的な抗体が形成さ
れ、その鶏が産生する卵、特に卵黄にこの抗体が含まれ
るようになる。なお、抗原の接種は数回に分けて行うこ
とができ、また高力価が持続するように追加接種するこ
ともできる。
疫増強剤 (アジュバント) と共に鶏に接種することによ
り行う。この接種は皮下注射、筋肉注射などの方法が可
能である。抗原の接種量は、使用抗原の種類および免疫
増強剤の種類に応じて、目的とする特異的抗体が体内に
適当量形成され、しかも鶏に対して過度の毒性が発揮さ
れないように決定する。通常は、抗原の投与から数週間
以内に鶏の体内に投与した抗原に特異的な抗体が形成さ
れ、その鶏が産生する卵、特に卵黄にこの抗体が含まれ
るようになる。なお、抗原の接種は数回に分けて行うこ
とができ、また高力価が持続するように追加接種するこ
ともできる。
【００２７】鶏卵中の抗体価は、既知の測定方法、例え
ばELISA や凝集反応を用いる方法により測定できる。
ばELISA や凝集反応を用いる方法により測定できる。
【００２８】これらの方法によって鶏卵中に抗体が適当
量生成したことが確認できた後、鶏卵を採取し、目的と
する特異的抗体を回収する。本発明の抗体含有組成物と
しては、全卵もしくは卵黄をそのまま用いてもよいし、
また全卵もしくは卵黄からスプレードライ法や凍結乾燥
法などにより粉末化したものでもよい。あるいは、卵黄
からヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、
ポリエチレングリコールなどを用いる方法により卵黄脂
質成分を除去した後粉末化したもの、さらに硫酸アンモ
ニウム塩析、硫酸ナトリウム塩析、低温エタノール沈殿
法等の既知の蛋白質精製法により精製したものなど、種
々の形態のものを目的に応じて使用することができる。
量生成したことが確認できた後、鶏卵を採取し、目的と
する特異的抗体を回収する。本発明の抗体含有組成物と
しては、全卵もしくは卵黄をそのまま用いてもよいし、
また全卵もしくは卵黄からスプレードライ法や凍結乾燥
法などにより粉末化したものでもよい。あるいは、卵黄
からヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、
ポリエチレングリコールなどを用いる方法により卵黄脂
質成分を除去した後粉末化したもの、さらに硫酸アンモ
ニウム塩析、硫酸ナトリウム塩析、低温エタノール沈殿
法等の既知の蛋白質精製法により精製したものなど、種
々の形態のものを目的に応じて使用することができる。
【００２９】このようにして得られた、Ｈｐのウレアー
ゼに対する特異的抗体およびＨｐの鞭毛に対する特異的
抗体は、以下の実験例で実証したように、Ｈｐ感染モデ
ル動物において、胃粘膜に付着しているＨｐをほぼ完全
に除菌し、胃炎の発生を抑制するという効果を有する。
すなわち、これらの抗体はＨｐの胃粘膜への付着を防止
して、胃での増殖を完全に抑えることとができる。この
ような優れた効果は従来の全菌体に対する抗体では得ら
れなかったものである。しかも、鶏卵を用いて得た抗体
は、哺乳動物由来の抗体よりも優れた除菌効果を示す。
ゼに対する特異的抗体およびＨｐの鞭毛に対する特異的
抗体は、以下の実験例で実証したように、Ｈｐ感染モデ
ル動物において、胃粘膜に付着しているＨｐをほぼ完全
に除菌し、胃炎の発生を抑制するという効果を有する。
すなわち、これらの抗体はＨｐの胃粘膜への付着を防止
して、胃での増殖を完全に抑えることとができる。この
ような優れた効果は従来の全菌体に対する抗体では得ら
れなかったものである。しかも、鶏卵を用いて得た抗体
は、哺乳動物由来の抗体よりも優れた除菌効果を示す。
【００３０】さらに、抗ウレアーゼ抗体と抗鞭毛抗体を
併用した場合、あるいはこれらの抗体と乳酸菌、腸球
菌、酵母もしくはバチルス属細菌を併用した場合には、
抗体の力価が多少低い場合でも併用による相乗効果によ
り優れたＨｐ除菌効果および胃炎抑制効果を示した。
併用した場合、あるいはこれらの抗体と乳酸菌、腸球
菌、酵母もしくはバチルス属細菌を併用した場合には、
抗体の力価が多少低い場合でも併用による相乗効果によ
り優れたＨｐ除菌効果および胃炎抑制効果を示した。
【００３１】従って、本発明で得られる、Ｈｐウレアー
ゼまたはＨｐ鞭毛に対する特異的抗体は、単独でもしく
は併用して、あるいは乳酸菌、腸球菌、酵母もしくはバ
チルス属細菌と併用して、胃炎、胃潰瘍および十二指腸
潰瘍の予防剤、または治療剤として用いることができ
る。さらには、食品に添加することにより胃炎、胃潰瘍
および十二指腸潰瘍の予防用食品としても利用できる。
その際、抗体含有組成物は、全卵や卵黄をそのままある
いは精製して、液状または粉末状として用いることがで
きる。
ゼまたはＨｐ鞭毛に対する特異的抗体は、単独でもしく
は併用して、あるいは乳酸菌、腸球菌、酵母もしくはバ
チルス属細菌と併用して、胃炎、胃潰瘍および十二指腸
潰瘍の予防剤、または治療剤として用いることができ
る。さらには、食品に添加することにより胃炎、胃潰瘍
および十二指腸潰瘍の予防用食品としても利用できる。
その際、抗体含有組成物は、全卵や卵黄をそのままある
いは精製して、液状または粉末状として用いることがで
きる。
【００３２】使用できる乳酸菌としてはラクトバチルス
・アシドフィルス、ラクトバチルス・ギャセリ、ラクト
バチルス・クリスパータスなどがある。腸球菌としては
エンテロコッカス・フェカリース、エンテロコッカス・
フェシウムなどが、酵母としてはイースト、カンジダ属
のものが、バチルス属細菌としてはバチルス・ズブチリ
ス等が例示できる。
・アシドフィルス、ラクトバチルス・ギャセリ、ラクト
バチルス・クリスパータスなどがある。腸球菌としては
エンテロコッカス・フェカリース、エンテロコッカス・
フェシウムなどが、酵母としてはイースト、カンジダ属
のものが、バチルス属細菌としてはバチルス・ズブチリ
ス等が例示できる。
【００３３】予防剤、治療剤として用いる場合は、本発
明の特異的抗体を主剤とし、これに制酸剤（炭酸水素ナ
トリウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、合
成ヒドロタルサイト等）、胃粘膜保護剤（合成ケイ酸ア
ルミニウム、スクラルファート、銅クロロフィリンナト
リウム等）や消化酵素（ビオジアスターゼ、リパーゼ
等）を加えてもよい。製剤化は既知の方法で行えばよ
い。本発明の予防剤、治療剤は経口により投与され、投
与量は精製した鶏卵抗体として、予防の場合には成人１
日当たり0.25〜25.0mg／kg、治療の場合で成人１日当た
り1.25〜125mg ／kgの範囲が好ましい。
明の特異的抗体を主剤とし、これに制酸剤（炭酸水素ナ
トリウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、合
成ヒドロタルサイト等）、胃粘膜保護剤（合成ケイ酸ア
ルミニウム、スクラルファート、銅クロロフィリンナト
リウム等）や消化酵素（ビオジアスターゼ、リパーゼ
等）を加えてもよい。製剤化は既知の方法で行えばよ
い。本発明の予防剤、治療剤は経口により投与され、投
与量は精製した鶏卵抗体として、予防の場合には成人１
日当たり0.25〜25.0mg／kg、治療の場合で成人１日当た
り1.25〜125mg ／kgの範囲が好ましい。
【００３４】胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍の予防用
食品の場合は、精製した鶏卵抗体として食品中0.01〜0.
1 重量％、好ましくは0.05重量％程度含まれるよう添加
する。
食品の場合は、精製した鶏卵抗体として食品中0.01〜0.
1 重量％、好ましくは0.05重量％程度含まれるよう添加
する。
【００３５】次に、本発明を実施例によってさらに詳細
に説明するが、本発明はそれらによって制限されるもの
ではない
に説明するが、本発明はそれらによって制限されるもの
ではない
【００３６】
【００３７】
【実施例１】(1) Ｈｐ抗原の調製
ア. 全菌体抗原の調製
胃炎患者由来のHp#130株（東海大学医学部生体防御機構
系感染症学部門より分与）を５％馬血液加ブレインハー
トインフュージョン寒天培地に接種した後、ガスパック
嫌気性ジャーで37℃72時間培養した。培養終了後、弱い
α溶血を示すスムーズで透明な光沢のあるコロニーを釣
菌し、１〜10％牛胎児血清加ブルセラブロースに浮遊
し、気相を10％CO2 、10％H2および80％N2混合ガスと置
換して37℃で24〜48時間振とう培養した。継代ごとに培
養液量を増やし、４代まで継代培養した。各培養液につ
いては、継代ごとにグラム染色性、運動性、ウレアー
ゼ、カタラーゼおよびオキシダーゼ産生能を確認した。
４代継代した培養菌液(5.2×108CFU/ml)を12,000×ｇで
20分間遠心し、その菌体を出発培養液量の約1/100 にな
るように滅菌精製水に浮遊した後、超高速ホモゲナイザ
ー (キネマティカ社製)で15,000rpm 60秒間処理するこ
とにより菌体を可溶化した。菌体が破砕されたかどうか
は、破砕物を10％馬血液加寒天培地に接種し、菌の発育
の有無によって判定した。
系感染症学部門より分与）を５％馬血液加ブレインハー
トインフュージョン寒天培地に接種した後、ガスパック
嫌気性ジャーで37℃72時間培養した。培養終了後、弱い
α溶血を示すスムーズで透明な光沢のあるコロニーを釣
菌し、１〜10％牛胎児血清加ブルセラブロースに浮遊
し、気相を10％CO2 、10％H2および80％N2混合ガスと置
換して37℃で24〜48時間振とう培養した。継代ごとに培
養液量を増やし、４代まで継代培養した。各培養液につ
いては、継代ごとにグラム染色性、運動性、ウレアー
ゼ、カタラーゼおよびオキシダーゼ産生能を確認した。
４代継代した培養菌液(5.2×108CFU/ml)を12,000×ｇで
20分間遠心し、その菌体を出発培養液量の約1/100 にな
るように滅菌精製水に浮遊した後、超高速ホモゲナイザ
ー (キネマティカ社製)で15,000rpm 60秒間処理するこ
とにより菌体を可溶化した。菌体が破砕されたかどうか
は、破砕物を10％馬血液加寒天培地に接種し、菌の発育
の有無によって判定した。
【００３８】イ. 鞭毛抗原の調製
上記と同様にして培養して得たブルセラブローズ培養菌
液(4.0×108CFU/ml)を12,000×ｇで20分遠心し、得られ
た菌体を精製水に溶解し、ボルテックスミキサーで攪拌
することによりウレアーゼ成分を除去した。その後、菌
体をトリス塩酸緩衝液(pH7.2) に浮遊し、菌体を超高速
ホモゲナイザー (キネマティカ社製) で15,000rpm 60秒
間処理した。さらに、この菌体を6,700 ×ｇで６分間遠
心することにより鞭毛と菌体に分けた。鞭毛を含む上清
にトリプシン (１mg/ml)を加え、37℃で20分間処理する
ことにより混在するウレアーゼ等の蛋白成分を除去し
た。鞭毛を含む成分を25〜60％のショ糖密度勾配に重層
し、90,000×ｇで22時間遠心した(+４℃) 。その後、フ
ラクションコレクターで分取し、各分画の蛋白濃度をデ
ンシトメーターを用いてモニターするとともに、SDS-PA
GEで鞭毛の所在を検討した。それに基づき、50kDa 前後
の蛋白を含む分画をプールし、精製水で３〜10倍に希釈
した後、180,000 ×ｇで60分間遠心することによりペレ
ットを得た。さらに、これを精製水で溶解し、6,700 ×
ｇで２分間遠心を行い、上清についてSDS-PAGEを実施し
たところ、鞭毛 A(53 kDa)および鞭毛 B(54 kDa)からな
ることを確認した。
液(4.0×108CFU/ml)を12,000×ｇで20分遠心し、得られ
た菌体を精製水に溶解し、ボルテックスミキサーで攪拌
することによりウレアーゼ成分を除去した。その後、菌
体をトリス塩酸緩衝液(pH7.2) に浮遊し、菌体を超高速
ホモゲナイザー (キネマティカ社製) で15,000rpm 60秒
間処理した。さらに、この菌体を6,700 ×ｇで６分間遠
心することにより鞭毛と菌体に分けた。鞭毛を含む上清
にトリプシン (１mg/ml)を加え、37℃で20分間処理する
ことにより混在するウレアーゼ等の蛋白成分を除去し
た。鞭毛を含む成分を25〜60％のショ糖密度勾配に重層
し、90,000×ｇで22時間遠心した(+４℃) 。その後、フ
ラクションコレクターで分取し、各分画の蛋白濃度をデ
ンシトメーターを用いてモニターするとともに、SDS-PA
GEで鞭毛の所在を検討した。それに基づき、50kDa 前後
の蛋白を含む分画をプールし、精製水で３〜10倍に希釈
した後、180,000 ×ｇで60分間遠心することによりペレ
ットを得た。さらに、これを精製水で溶解し、6,700 ×
ｇで２分間遠心を行い、上清についてSDS-PAGEを実施し
たところ、鞭毛 A(53 kDa)および鞭毛 B(54 kDa)からな
ることを確認した。
【００３９】ウ. ウレアーゼ抗原の調製
上記アと同様にして培養して得たブルセラブローズ培養
菌液(3.5×108 CFU/ml) を12,000×ｇで20分間遠心した
後、ペレットを精製水に溶解し、ボルテックスミキサー
で60秒間処理した。再び遠心し、ウレアーゼを含む抽出
上清液を得た。精製は以下に示した方法によって行っ
た。緩衝液(20mM リン酸塩、pH6.8, 1mM EDTA, 1mM 2-
メルカプトエタノールおよび10％PEG 300)で平衡化した
DEAE−セファセルカラムに上記抽出液をアプライし、0.
5ml/分の流速でゲルに吸着させた。溶出は０〜0.5M KCl
の濃度勾配によって実施した。各分画液についてウレア
ーゼ活性をモニターした。ウレアーゼ活性のピークが認
められた分画をプールし、濃縮した。
菌液(3.5×108 CFU/ml) を12,000×ｇで20分間遠心した
後、ペレットを精製水に溶解し、ボルテックスミキサー
で60秒間処理した。再び遠心し、ウレアーゼを含む抽出
上清液を得た。精製は以下に示した方法によって行っ
た。緩衝液(20mM リン酸塩、pH6.8, 1mM EDTA, 1mM 2-
メルカプトエタノールおよび10％PEG 300)で平衡化した
DEAE−セファセルカラムに上記抽出液をアプライし、0.
5ml/分の流速でゲルに吸着させた。溶出は０〜0.5M KCl
の濃度勾配によって実施した。各分画液についてウレア
ーゼ活性をモニターした。ウレアーゼ活性のピークが認
められた分画をプールし、濃縮した。
【００４０】次に、緩衝液(20mM リン酸塩、pH6.8, 150
mM NaCl)で平衡化したセファクリルS-300 カラムに、上
記濃縮液をアプライし、溶出した。各分画液のウレアー
ゼ活性を測定し、ウレアーゼ活性のピークを各々プール
し、SDS-PAGEで分析したところ、ウレアーゼ A(32kDa)
とウレアーゼ B(60kDa) の蛋白からなることを確認し
た。
mM NaCl)で平衡化したセファクリルS-300 カラムに、上
記濃縮液をアプライし、溶出した。各分画液のウレアー
ゼ活性を測定し、ウレアーゼ活性のピークを各々プール
し、SDS-PAGEで分析したところ、ウレアーゼ A(32kDa)
とウレアーゼ B(60kDa) の蛋白からなることを確認し
た。
【００４１】(2) 産卵鶏への免疫
免疫には18週齢前後の白色レグホン種、ハイラインW77
系群を用いた。実施例１で得られた３種の抗原 (蛋白量
を0.5 〜1.0mg/mlに調整) を別々に油性アジュバントと
混和した後、左右の胸筋内に0.5 mlずつ注射した (初回
免疫) 。その６週後にブスターとして同量の抗原を各々
免疫し、卵黄中の抗体価が有意に上昇して安定した、ブ
スター注射２週後から集卵を開始し、４週間卵を集め
た。なお、卵黄中の抗体価は４〜６ヶ月間安定してい
た。その後、抗体価が低下したので、同様の方法で再注
射したところ、元の抗体価のレベルまで回復した。
系群を用いた。実施例１で得られた３種の抗原 (蛋白量
を0.5 〜1.0mg/mlに調整) を別々に油性アジュバントと
混和した後、左右の胸筋内に0.5 mlずつ注射した (初回
免疫) 。その６週後にブスターとして同量の抗原を各々
免疫し、卵黄中の抗体価が有意に上昇して安定した、ブ
スター注射２週後から集卵を開始し、４週間卵を集め
た。なお、卵黄中の抗体価は４〜６ヶ月間安定してい
た。その後、抗体価が低下したので、同様の方法で再注
射したところ、元の抗体価のレベルまで回復した。
【００４２】(3) 鶏卵卵黄中の抗体価の測定
免疫卵を割卵して卵黄を取り出した後、重量を計り、こ
れに等量の生理的食塩水を加えて卵黄成分をよく溶解
し、この混合物に対して等量のクロロホルムを加え、激
しく振とう攪拌した後、遠心して上清を得た。この上清
を抗体価測定用試料とした。抗体価の測定はELISA によ
って行った。方法は以下に示した通りであるが、固相化
抗原並びにホースラディッシュペルオキシダーゼ−抗ニ
ワトリＩｇＧコンジュゲートはチェッカーボードタイト
レーションを行うことにより、至適濃度を設定した。プ
レートは96ウエルヌンクイムノプレートを用い、固相化
にはHp全菌体可溶化抗原を用いた。抗原は蛋白量が５μ
g/mlになるように炭酸緩衝液(pH9.6) で希釈し、１ウエ
ル当たり100 μl ずつ加え、＋４℃で18時間静置した。
使用時にはPBS-Tween で各ウエルを３回洗浄した後、ブ
ロッキングのため２％スキムミルク溶液に200 μl ずつ
加え、37℃で60分静置した。次に、各ウエルをPBS-Twee
n で３回洗浄した後、各試料をウエル当たり100 μl ず
つ加え、37℃で60分反応させた。反応後、再びPBS-Twee
n で洗浄し、12,000倍に希釈したコンジュゲートを100
μl/ウエルに加え、再び37℃で60分反応させた。ウエル
を５回洗浄した後、基質 (H2O2を含むO-フェニレンジア
ミン塩酸塩) を加えて室温で発色させ、20分後に50μl/
ウエルの3N H2SO4を添加して反応を停止させた。その
後、各ウエルの吸光度(490nm) をELISA オートリーダー
で測定した。試料の抗体価は最終的に陽性ならびに陰性
対照の吸光度を基準にして補正して求めた。
れに等量の生理的食塩水を加えて卵黄成分をよく溶解
し、この混合物に対して等量のクロロホルムを加え、激
しく振とう攪拌した後、遠心して上清を得た。この上清
を抗体価測定用試料とした。抗体価の測定はELISA によ
って行った。方法は以下に示した通りであるが、固相化
抗原並びにホースラディッシュペルオキシダーゼ−抗ニ
ワトリＩｇＧコンジュゲートはチェッカーボードタイト
レーションを行うことにより、至適濃度を設定した。プ
レートは96ウエルヌンクイムノプレートを用い、固相化
にはHp全菌体可溶化抗原を用いた。抗原は蛋白量が５μ
g/mlになるように炭酸緩衝液(pH9.6) で希釈し、１ウエ
ル当たり100 μl ずつ加え、＋４℃で18時間静置した。
使用時にはPBS-Tween で各ウエルを３回洗浄した後、ブ
ロッキングのため２％スキムミルク溶液に200 μl ずつ
加え、37℃で60分静置した。次に、各ウエルをPBS-Twee
n で３回洗浄した後、各試料をウエル当たり100 μl ず
つ加え、37℃で60分反応させた。反応後、再びPBS-Twee
n で洗浄し、12,000倍に希釈したコンジュゲートを100
μl/ウエルに加え、再び37℃で60分反応させた。ウエル
を５回洗浄した後、基質 (H2O2を含むO-フェニレンジア
ミン塩酸塩) を加えて室温で発色させ、20分後に50μl/
ウエルの3N H2SO4を添加して反応を停止させた。その
後、各ウエルの吸光度(490nm) をELISA オートリーダー
で測定した。試料の抗体価は最終的に陽性ならびに陰性
対照の吸光度を基準にして補正して求めた。
【００４３】(4) 鶏卵卵黄抗体の調製
免疫卵を水洗、消毒後、割卵機にて卵黄を分離し、８kg
ずつ小分けして使用時まで−20℃以下に保存した。精製
は以下に示した方法により実施した。すなわち、卵黄7.
5 kgを出発材料とし、卵黄重量に対し10倍量の精製水を
加えて脱脂した。上清に40％飽和になるように硫酸アン
モニウムを加えて攪拌し、遠心によりペレットを得た。
ペレットを生理的食塩水で溶かし、再び30％飽和塩析を
行いペレットを得た。このペレットを少量の生理的食塩
水で溶解し、これに最終濃度が50％になるように攪拌し
ながら、−20℃に冷却したエタノールを徐々に加えた。
遠心後、ペレットを生理的食塩水で溶かし凍結乾燥し
た。その結果、淡黄白色の粉末が約11ｇ得られた。抗体
の回収率は47％前後、IgG 純度は95％以上、水分含量は
２％以下であった。
ずつ小分けして使用時まで−20℃以下に保存した。精製
は以下に示した方法により実施した。すなわち、卵黄7.
5 kgを出発材料とし、卵黄重量に対し10倍量の精製水を
加えて脱脂した。上清に40％飽和になるように硫酸アン
モニウムを加えて攪拌し、遠心によりペレットを得た。
ペレットを生理的食塩水で溶かし、再び30％飽和塩析を
行いペレットを得た。このペレットを少量の生理的食塩
水で溶解し、これに最終濃度が50％になるように攪拌し
ながら、−20℃に冷却したエタノールを徐々に加えた。
遠心後、ペレットを生理的食塩水で溶かし凍結乾燥し
た。その結果、淡黄白色の粉末が約11ｇ得られた。抗体
の回収率は47％前後、IgG 純度は95％以上、水分含量は
２％以下であった。
【００４４】
【実験例１】Ｈｐ感染マウスを用いた各種鶏卵抗体の効力
この試験は、Hp感染に対して高感受性を示す通常ヘアレ
スマウス(NS:Hr/ICR系)(財団法人動物繁殖研究所、受託
番号 IAR-NHI-9701)を感染モデルとして用い、この感染
モデルに抗全菌体鶏卵抗体 (比較例) 、抗ウレアーゼお
よび抗鞭毛鶏卵抗体を連続経口投与することにより、胃
粘膜に付着しているHpが除菌でき、胃炎の発生を有意に
抑制できるかどうかを検討したものである。
スマウス(NS:Hr/ICR系)(財団法人動物繁殖研究所、受託
番号 IAR-NHI-9701)を感染モデルとして用い、この感染
モデルに抗全菌体鶏卵抗体 (比較例) 、抗ウレアーゼお
よび抗鞭毛鶏卵抗体を連続経口投与することにより、胃
粘膜に付着しているHpが除菌でき、胃炎の発生を有意に
抑制できるかどうかを検討したものである。
【００４５】ヘアレスマウス♂に臨床材料から分離した
NSP 335 株を１×109CFU経口的に３日間連続接種した。
感染後８週目に表１に示したように、実施例１で調製し
た各種の鶏卵抗体を１日１回の割合で14日間強制経口投
与した。投与終了時に各群のマウスを屠殺し、血清を採
取し、Hpに対する抗体価をELISA によって測定した。ま
た、剖検時に各群の胃を採取し、Hp菌数の測定並びに病
理組織標本の作成に供した。Hpの胃粘膜への付着菌数は
胃内容物を完全に除去した後、胃組織をＰＢＳ（pH7.2
）で８回洗浄し、ホモゲナイズ処理した。得られた胃
組織乳剤をHp検出用選択培地 (ポアメデアHp分離培地、
栄研化学) に接種した後、ガスパック法で37℃５日間培
養した。一方、胃組織はホルマリン固定の後、常法に従
いヘマトキシリン・エオジン重染色を行い、胃炎の有無
を検討した。
NSP 335 株を１×109CFU経口的に３日間連続接種した。
感染後８週目に表１に示したように、実施例１で調製し
た各種の鶏卵抗体を１日１回の割合で14日間強制経口投
与した。投与終了時に各群のマウスを屠殺し、血清を採
取し、Hpに対する抗体価をELISA によって測定した。ま
た、剖検時に各群の胃を採取し、Hp菌数の測定並びに病
理組織標本の作成に供した。Hpの胃粘膜への付着菌数は
胃内容物を完全に除去した後、胃組織をＰＢＳ（pH7.2
）で８回洗浄し、ホモゲナイズ処理した。得られた胃
組織乳剤をHp検出用選択培地 (ポアメデアHp分離培地、
栄研化学) に接種した後、ガスパック法で37℃５日間培
養した。一方、胃組織はホルマリン固定の後、常法に従
いヘマトキシリン・エオジン重染色を行い、胃炎の有無
を検討した。
【００４６】その結果、表１に示したように、鶏卵抗体
投与群は、用量依存的に胃内Hp菌数が減少する傾向を示
した。抗全菌体抗体の投与でも、胃内Ｈｐ菌数を1/10程
度に減少させることはできるが、完全に除去することは
できない。これに対して、抗鞭毛抗体および抗ウレアー
ゼ抗体投与群では、用量依存的に胃内Ｈｐ菌数が顕著に
減少し、投与量0.5 mlでは略完全に除菌されている。こ
のことは、ELISA により測定した血中抗体価からも裏付
けられる。すなわち、投与群では用量依存的に低くなっ
ており、さらに抗全菌体抗体投与群に比べ、抗鞭毛抗体
および抗ウレアーゼ抗体投与群での血中抗体価の減少は
顕著である。
投与群は、用量依存的に胃内Hp菌数が減少する傾向を示
した。抗全菌体抗体の投与でも、胃内Ｈｐ菌数を1/10程
度に減少させることはできるが、完全に除去することは
できない。これに対して、抗鞭毛抗体および抗ウレアー
ゼ抗体投与群では、用量依存的に胃内Ｈｐ菌数が顕著に
減少し、投与量0.5 mlでは略完全に除菌されている。こ
のことは、ELISA により測定した血中抗体価からも裏付
けられる。すなわち、投与群では用量依存的に低くなっ
ており、さらに抗全菌体抗体投与群に比べ、抗鞭毛抗体
および抗ウレアーゼ抗体投与群での血中抗体価の減少は
顕著である。
【００４７】さらに注目すべきことは、抗全菌体抗体の
投与では胃内菌数はある程度低下するものの胃炎の発生
を抑制する効果は低く、わずかに投与量0.5 mlにおける
１匹を除きすべて陽性である。これに対し、抗鞭毛抗体
および抗ウレアーゼ抗体の投与では、投与量0.5 mlで全
マウスの胃炎を抑制することができた。
投与では胃内菌数はある程度低下するものの胃炎の発生
を抑制する効果は低く、わずかに投与量0.5 mlにおける
１匹を除きすべて陽性である。これに対し、抗鞭毛抗体
および抗ウレアーゼ抗体の投与では、投与量0.5 mlで全
マウスの胃炎を抑制することができた。
【００４８】以上のことから、Hp感染マウスにおいて本
発明の鶏卵抗体投与による顕著な除菌効果および胃炎抑
制効果が確認された。
発明の鶏卵抗体投与による顕著な除菌効果および胃炎抑
制効果が確認された。
【００４９】前述の相場らの実験では、生後４週齢の無
菌BALB/cマウス♂に、臨床材料から分離したHp #130 株
を１×109CFU経口的に３日間連続接種した。感染４〜７
週後にHp全菌体ホルマリン死菌に対する鶏卵抗体を１日
１回14日間経口投与し、胃内のHp菌数を対照群のそれと
比較した結果、Hpの抗全菌体抗体を連続投与することに
より、対照群に比較して胃内Hp菌数を約1/10低下できる
ことを示した。しかしながら、相場らの成績では、Hpの
胃内菌数が1/10程度に低下したに過ぎず、完全除去菌ま
でに至っていない。さらに胃炎発生の抑制効果に関して
は記載がなく、効果があるとは認められない。
菌BALB/cマウス♂に、臨床材料から分離したHp #130 株
を１×109CFU経口的に３日間連続接種した。感染４〜７
週後にHp全菌体ホルマリン死菌に対する鶏卵抗体を１日
１回14日間経口投与し、胃内のHp菌数を対照群のそれと
比較した結果、Hpの抗全菌体抗体を連続投与することに
より、対照群に比較して胃内Hp菌数を約1/10低下できる
ことを示した。しかしながら、相場らの成績では、Hpの
胃内菌数が1/10程度に低下したに過ぎず、完全除去菌ま
でに至っていない。さらに胃炎発生の抑制効果に関して
は記載がなく、効果があるとは認められない。
【００５０】
【表１】
【００５１】
【実験例２】Ｈｐ感染マウスを用いた抗ウレアーゼ鶏卵抗体と抗鞭毛
鶏卵抗体との併用効果 本実験は、ウレアーゼに対する鶏卵抗体と、鞭毛に対す
る鶏卵抗体を同時に投与した時の除菌の相乗効果を示す
ものである。
鶏卵抗体との併用効果 本実験は、ウレアーゼに対する鶏卵抗体と、鞭毛に対す
る鶏卵抗体を同時に投与した時の除菌の相乗効果を示す
ものである。
【００５２】試験方法は基本的に実験例１と同じである
が、抗体の投与量はいずれも０．１ ｍｌとし、１日１
回１４日間投与した。対照群は滅菌生理食塩水を0.1 ml
ずつ投与した。
が、抗体の投与量はいずれも０．１ ｍｌとし、１日１
回１４日間投与した。対照群は滅菌生理食塩水を0.1 ml
ずつ投与した。
【００５３】表２に示した通り、単独で投与する抗体と
しては、ここでは抗体価2,560 のものを用い、投与量0.
1 mlとした。この投与量では、抗ウレアーゼ抗体ではあ
る程度の菌数の減少と胃炎の抑制がみられるが、抗鞭毛
抗体では菌数に対照群との有意差は認められず、胃炎の
抑制効果もない。しかしながら、抗体価のさらに低い抗
体価640 の抗体を使用しても、抗鞭毛抗体と抗ウレアー
ゼ抗体とを併用することにより、完全な除菌効果が認め
られ、胃炎の発生も全マウスにおいて抑制された。この
ように抗鞭毛抗体と抗ウレアーゼ抗体との併用による相
乗効果が認められる。
しては、ここでは抗体価2,560 のものを用い、投与量0.
1 mlとした。この投与量では、抗ウレアーゼ抗体ではあ
る程度の菌数の減少と胃炎の抑制がみられるが、抗鞭毛
抗体では菌数に対照群との有意差は認められず、胃炎の
抑制効果もない。しかしながら、抗体価のさらに低い抗
体価640 の抗体を使用しても、抗鞭毛抗体と抗ウレアー
ゼ抗体とを併用することにより、完全な除菌効果が認め
られ、胃炎の発生も全マウスにおいて抑制された。この
ように抗鞭毛抗体と抗ウレアーゼ抗体との併用による相
乗効果が認められる。
【００５４】
【表２】
【００５５】
【実験例３】Ｈｐ感染マウスを用いた抗ウレアーゼ鶏卵抗体と乳酸菌
との併用効果 Bhatia,S.J. ら（J.Clin.Microbiol., 27:2328-2330, 1
989)は、インビトロの研究においてラクトバチルス・ア
シドフィルス(Lactobacillus acidophilus) がHpの増殖
を抑制すること、およびその抑制効果は乳酸によること
を記載している。また、Midolo,P.D. ら(J.Appl. Bacte
riol., 79:475-479,1995) は、インビトロの系でラクト
バチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カセイ
(Lactobacillus casei)、ラクトバチルス・ブルガリカ
ス (Lactobacillus bulgaricus) 、ペディオコッカス・
ペントサセウス (Pediococcus pentosaceus ) およびビ
フィドバクテリウム・ビフィズス (Bifidobacterium bi
fidus)が同様にHpの増殖を抑制すること、その作用はこ
れらの菌によって産生される有機酸によることを報告し
ているが、いずれもインビトロの系での実験であり、実
際の胃内での結果は予測できない。
との併用効果 Bhatia,S.J. ら（J.Clin.Microbiol., 27:2328-2330, 1
989)は、インビトロの研究においてラクトバチルス・ア
シドフィルス(Lactobacillus acidophilus) がHpの増殖
を抑制すること、およびその抑制効果は乳酸によること
を記載している。また、Midolo,P.D. ら(J.Appl. Bacte
riol., 79:475-479,1995) は、インビトロの系でラクト
バチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カセイ
(Lactobacillus casei)、ラクトバチルス・ブルガリカ
ス (Lactobacillus bulgaricus) 、ペディオコッカス・
ペントサセウス (Pediococcus pentosaceus ) およびビ
フィドバクテリウム・ビフィズス (Bifidobacterium bi
fidus)が同様にHpの増殖を抑制すること、その作用はこ
れらの菌によって産生される有機酸によることを報告し
ているが、いずれもインビトロの系での実験であり、実
際の胃内での結果は予測できない。
【００５６】また、前述の相場らは生後４週齢の無菌BA
LB/cマウス♂に臨床材料から分離したHp #130 を１×10
9CFU経口的に３日間連続接種し、感染４〜７週後にヒト
由来のラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus
salivarius） 1×108CFUを３日間経口投与した。その４
週後に屠殺し、胃内のHp菌数を対照群のそれと比較し
た。その結果、対照群の胃内菌数が105CFU/gであったの
に対し、Lactobacillussalivarius投与群では、感染４
週後に投与した群でHp菌数が102 〜103CFU/g、感染６週
後に投与した場合には、104 GFU/g であったと報告して
いる。
LB/cマウス♂に臨床材料から分離したHp #130 を１×10
9CFU経口的に３日間連続接種し、感染４〜７週後にヒト
由来のラクトバチルス・サリバリウス（Lactobacillus
salivarius） 1×108CFUを３日間経口投与した。その４
週後に屠殺し、胃内のHp菌数を対照群のそれと比較し
た。その結果、対照群の胃内菌数が105CFU/gであったの
に対し、Lactobacillussalivarius投与群では、感染４
週後に投与した群でHp菌数が102 〜103CFU/g、感染６週
後に投与した場合には、104 GFU/g であったと報告して
いる。
【００５７】相馬らの成績は口腔、胃および腸管内に正
常常在菌叢不在の無菌マウスを用いているため、正常常
在菌叢を保有している通常マウスでも同じ結果が得られ
るかどうか非常に疑問である。すなわち、マウス固有の
細菌叢を保有する通常マウスにヒト由来の乳酸菌を接種
しても、マウス固有細菌叢がバリアとなって定着するこ
とはない。
常常在菌叢不在の無菌マウスを用いているため、正常常
在菌叢を保有している通常マウスでも同じ結果が得られ
るかどうか非常に疑問である。すなわち、マウス固有の
細菌叢を保有する通常マウスにヒト由来の乳酸菌を接種
しても、マウス固有細菌叢がバリアとなって定着するこ
とはない。
【００５８】この実験例３は、正常細菌叢を保有してい
るヘアレスマウスにヒト由来ラクトバチルス・アシドフ
ィルス（JCM 1028) 単独投与群と、ウレアーゼに対する
鶏卵抗体とL.アシドフィルスを併用した群を設定し、胃
内におけるHpの除菌効果と胃炎発生との関連を検討した
ものである。試験方法は基本的に実施例２と同じであ
る。なおL.アシドフィルスはブリッグスリバーブロース
を用いて培養し、菌数の測定は光岡の方法（1979）によ
り実施した。投与菌数は１×109CFUとし、１日１回14日
間連続して投与した。
るヘアレスマウスにヒト由来ラクトバチルス・アシドフ
ィルス（JCM 1028) 単独投与群と、ウレアーゼに対する
鶏卵抗体とL.アシドフィルスを併用した群を設定し、胃
内におけるHpの除菌効果と胃炎発生との関連を検討した
ものである。試験方法は基本的に実施例２と同じであ
る。なおL.アシドフィルスはブリッグスリバーブロース
を用いて培養し、菌数の測定は光岡の方法（1979）によ
り実施した。投与菌数は１×109CFUとし、１日１回14日
間連続して投与した。
【００５９】その結果、表３に示したように、L.アシド
フィルス単独投与群では胃内Hp菌数は対照群のそれとほ
どんど同じであり、両群に有意差は認められなかった。
また、胃炎病変も確認され効力は認められなかった。こ
の点は相場らの無菌マウスを用いた成績とは著しく異な
る。このように正常細菌叢を保有するマウスでのＨｐ除
菌効果および胃炎抑制効果は認められない。しかしなが
ら、L.アシドフィルスと抗ウレアーゼ鶏卵抗体を併用し
て14日間投与した群では、胃内Hpがほとんど除菌され、
かつ胃炎病変は検出されなかった。なお、併用した抗体
は力価640 のものである。
フィルス単独投与群では胃内Hp菌数は対照群のそれとほ
どんど同じであり、両群に有意差は認められなかった。
また、胃炎病変も確認され効力は認められなかった。こ
の点は相場らの無菌マウスを用いた成績とは著しく異な
る。このように正常細菌叢を保有するマウスでのＨｐ除
菌効果および胃炎抑制効果は認められない。しかしなが
ら、L.アシドフィルスと抗ウレアーゼ鶏卵抗体を併用し
て14日間投与した群では、胃内Hpがほとんど除菌され、
かつ胃炎病変は検出されなかった。なお、併用した抗体
は力価640 のものである。
【００６０】
【表３】
【００６１】
【実験例４】Ｈｐ感染マウスを用いた抗ウレアーゼ鶏卵抗体と抗ウレ
アーゼ家兎血清抗体の除菌効果の比較 この実験は、鶏卵抗体が哺乳動物由来の抗体よりもＨｐ
の除菌効果が高いことを示すものである。
アーゼ家兎血清抗体の除菌効果の比較 この実験は、鶏卵抗体が哺乳動物由来の抗体よりもＨｐ
の除菌効果が高いことを示すものである。
【００６２】すなわち、抗ウレアーゼ鶏卵抗体と抗ウレ
アーゼ家兎血清抗体を用いて、Hpの除菌効率を比較検討
した。試験方法は実施例２と基本的に同じである。抗体
投与量は0.1 mlとし、１日１回14日間の連続投与をし
た。
アーゼ家兎血清抗体を用いて、Hpの除菌効率を比較検討
した。試験方法は実施例２と基本的に同じである。抗体
投与量は0.1 mlとし、１日１回14日間の連続投与をし
た。
【００６３】その結果、表４に示したように、マウス当
たり投与した抗体の力価は両群とも同じであったにもか
かわらず、鶏卵抗体投与群のみが胃内のHpを完全に除菌
し、胃炎の発生も抑制した。これに対し、家兎由来抗ウ
レアーゼ抗体投与群では、胃内Hp菌数がやや低下する程
度であった。また、胃炎の軽減は全く認められなかっ
た。このように、受動免疫療法によるＨｐ除菌の効果に
関して、意外にも同じ哺乳動物由来の抗体よりも、異種
抗体である鶏卵抗体の方が優れていることが判明した。
たり投与した抗体の力価は両群とも同じであったにもか
かわらず、鶏卵抗体投与群のみが胃内のHpを完全に除菌
し、胃炎の発生も抑制した。これに対し、家兎由来抗ウ
レアーゼ抗体投与群では、胃内Hp菌数がやや低下する程
度であった。また、胃炎の軽減は全く認められなかっ
た。このように、受動免疫療法によるＨｐ除菌の効果に
関して、意外にも同じ哺乳動物由来の抗体よりも、異種
抗体である鶏卵抗体の方が優れていることが判明した。
【００６４】なお、鶏卵抗体のみならず、家兎血清由来
抗体とも、ウレアーゼを抗原として免疫して得られた抗
体であるにもかかわらず、精製ウレアーゼの酵素活性を
ほとんど中和しなかった。
抗体とも、ウレアーゼを抗原として免疫して得られた抗
体であるにもかかわらず、精製ウレアーゼの酵素活性を
ほとんど中和しなかった。
【００６５】
【表４】
【００６６】
【実験例５】精製Hpウレアーゼのラット胃ムチンへの特異的結合
前述のように従来の研究結果からは、Hpのウレアーゼは
胃内の尿素をアンモニアに変換することにより、本菌が
定着している部位のpHを中性とし、胃内で増殖するため
のよい環境を提供するのに役立つと考えられていた。ま
た、Eaton K.A.らの研究およびClyne M.らの研究から、
胃粘膜へのHpの定着に関し、Hpのウレアーゼは付着因子
としての機能は持たないことが結論づけられた。
胃内の尿素をアンモニアに変換することにより、本菌が
定着している部位のpHを中性とし、胃内で増殖するため
のよい環境を提供するのに役立つと考えられていた。ま
た、Eaton K.A.らの研究およびClyne M.らの研究から、
胃粘膜へのHpの定着に関し、Hpのウレアーゼは付着因子
としての機能は持たないことが結論づけられた。
【００６７】しかしながら、上記実験例１の実験におい
て、抗ウレアーゼ鶏卵抗体は他の抗原に対する抗体より
も胃内に定着しているHpを最も効率よく除菌でき、胃炎
の発生を顕著に抑制した。さらに、Hp攻撃に対する抗体
価の上昇も抑制された。この実験から、Hpのウレアーゼ
が最も重要な病原因子であることが示唆される。
て、抗ウレアーゼ鶏卵抗体は他の抗原に対する抗体より
も胃内に定着しているHpを最も効率よく除菌でき、胃炎
の発生を顕著に抑制した。さらに、Hp攻撃に対する抗体
価の上昇も抑制された。この実験から、Hpのウレアーゼ
が最も重要な病原因子であることが示唆される。
【００６８】本発明者らはさらに、Hpのウレアーゼが胃
粘膜への付着因子として機能するかどうかをインビトロ
実験で精製ウレアーゼを用いて検討した。その結果、図
１に示したように、ウレアーゼは用量依存的にラット胃
ムチンに付着した。次に、ムチン糖タンパクにおけるウ
レアーゼの結合部位を推定するために、図２に示した実
験を行ったところ、ウレアーゼの結合部位はムチンのス
ルファチドであることが示唆された。
粘膜への付着因子として機能するかどうかをインビトロ
実験で精製ウレアーゼを用いて検討した。その結果、図
１に示したように、ウレアーゼは用量依存的にラット胃
ムチンに付着した。次に、ムチン糖タンパクにおけるウ
レアーゼの結合部位を推定するために、図２に示した実
験を行ったところ、ウレアーゼの結合部位はムチンのス
ルファチドであることが示唆された。
【００６９】また、鶏卵抗体について、Hpのヒト胃癌MK
N 45細胞への付着阻止に関しても検討したところ、Hpの
付着阻止能は抗ウレアーゼ抗体が最も高く、次に抗鞭毛
抗体であった (図３) 。精製鞭毛がラット胃ムチンに特
異的に付着するかどうかについてはまだ確認されていな
いが、Hpの鞭毛が付着に関与していることは十分考えら
れる。
N 45細胞への付着阻止に関しても検討したところ、Hpの
付着阻止能は抗ウレアーゼ抗体が最も高く、次に抗鞭毛
抗体であった (図３) 。精製鞭毛がラット胃ムチンに特
異的に付着するかどうかについてはまだ確認されていな
いが、Hpの鞭毛が付着に関与していることは十分考えら
れる。
【００７０】なお、前述のように、抗ウレアーゼ鶏卵抗
体は精製ウレアーゼの酵素活性をほとんど中和せず、抗
ウレアーゼ家兎抗体でも同様であった。
体は精製ウレアーゼの酵素活性をほとんど中和せず、抗
ウレアーゼ家兎抗体でも同様であった。
【００７１】以上のことから、Hp感染マウスにおいて抗
ウレアーゼ鶏卵抗体が最も高い除菌効果を示したのは、
この抗体が菌体表層ウレアーゼと特異的に結合し、Hpが
胃ムチンに付着するのを抑制するためと考えられる。す
なわち、Hpのウレアーゼは胃ムチンに対する付着因子と
しての機能を有する。
ウレアーゼ鶏卵抗体が最も高い除菌効果を示したのは、
この抗体が菌体表層ウレアーゼと特異的に結合し、Hpが
胃ムチンに付着するのを抑制するためと考えられる。す
なわち、Hpのウレアーゼは胃ムチンに対する付着因子と
しての機能を有する。
【００７２】
【発明の効果】以上より明らかなように、本発明によれ
ば、ヘリコバクター・ピロリ感染によって引き起こされ
る胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍に対して、安全で効
果的な予防剤および治療剤、並びに予防用食品を提供す
ることができる。本発明の抗体含有組成物は、ヘリコバ
クター・ピロリの胃内での定着に関与する因子を見出し
たことにより得られたものであるので、胃内のヘリコバ
クター・ピロリを完全に除菌することができ、従って、
胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を有効に抑制すること
ができる。しかも、本発明では鶏卵を利用して抗体を得
るので、簡便な手段で多量、かつ安価に目的の特異的抗
体を製造できる。
ば、ヘリコバクター・ピロリ感染によって引き起こされ
る胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍に対して、安全で効
果的な予防剤および治療剤、並びに予防用食品を提供す
ることができる。本発明の抗体含有組成物は、ヘリコバ
クター・ピロリの胃内での定着に関与する因子を見出し
たことにより得られたものであるので、胃内のヘリコバ
クター・ピロリを完全に除菌することができ、従って、
胃炎、胃潰瘍および十二指腸潰瘍を有効に抑制すること
ができる。しかも、本発明では鶏卵を利用して抗体を得
るので、簡便な手段で多量、かつ安価に目的の特異的抗
体を製造できる。
【図１】Ｈｐウレアーゼがラット胃ムチンに濃度依存的
に結合することを示す図である。
に結合することを示す図である。
【図２】ヘパリンで前吸着されたラット胃ムチンへのウ
レアーゼの付着性を示す図である。
レアーゼの付着性を示す図である。
【図３】各種鶏卵抗体によるヘリコバクター・ピロリの
ヒト胃癌NKM45 細胞への付着阻止効果を示す図である。
ヒト胃癌NKM45 細胞への付着阻止効果を示す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 1/04
31/04 31/04
(72)発明者 木村 修武
埼玉県入間郡大井町鶴ケ岡５丁目３番１
号 日清製粉株式会社ファインケミカル
研究所内
(72)発明者 有賀 正人
埼玉県入間郡大井町鶴ケ岡５丁目３番１
号 日清製粉株式会社ファインケミカル
研究所内
(56)参考文献 特開 平４−275232（ＪＰ，Ａ)
国際公開94／006474（ＷＯ，Ａ１)
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ，Ｆｅｂ 1991，Ｖｏｌ.
173，Ｎｏ．３，ｐｐ．937−946
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 39/00 - 39/44
ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (11)
- 【請求項１】 ヘリコバクター・ピロリのウレアーゼを
抗原として鶏に免疫し、この免疫鶏が産生した卵から得
た、前記抗原に特異的な抗体。 - 【請求項２】 ヘリコバクター・ピロリの鞭毛を抗原と
して鶏に免疫し、この免疫鶏が産生した卵から得た、前
記抗原に特異的な抗体。 - 【請求項３】 請求項１記載の抗体もしくは請求項２記
載の抗体、またはその両者を含有する、ヘリコバクター
・ピロリの胃での増殖を阻止しうる組成物。 - 【請求項４】 請求項１記載の抗体もしくは請求項２記
載の抗体、またはその両者を有効成分として含有する胃
炎、胃潰瘍または十二指腸潰瘍に対する予防剤および治
療剤。 - 【請求項５】 請求項１記載の抗体もしくは請求項２記
載の抗体、またはその両者を含有する胃炎、胃潰瘍また
は十二指腸潰瘍の予防用食品。 - 【請求項６】 (1) 請求項１記載の抗体および(2) 乳酸
菌、腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を含有する、
ヘリコバクター・ピロリの胃での増殖を阻止しうる組成
物。 - 【請求項７】 (1) 請求項１記載の抗体および(2) 乳酸
菌、腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を有効成分と
して含有する胃炎、胃潰瘍または十二指腸潰瘍に対する
予防剤および治療剤。 - 【請求項８】 (1) 請求項１記載の抗体および(2) 乳酸
菌、腸球菌、酵母もしくはバチルス属細菌を含有する胃
炎、胃潰瘍または十二指腸潰瘍の予防用食品。 - 【請求項９】 (1) 請求項１記載の抗体、(2) 請求項２
記載の抗体、および(3) 乳酸菌、腸球菌、酵母もしくは
バチルス属細菌を含有する、ヘリコバクター・ピロリの
胃での増殖を阻止しうる組成物。 - 【請求項１０】 (1) 請求項１記載の抗体、(2) 請求項
２記載の抗体、および(3) 乳酸菌、腸球菌、酵母もしく
はバチルス属細菌を有効成分として含有する胃炎、胃潰
瘍または十二指腸潰瘍に対する予防剤および治療剤。 - 【請求項１１】 (1) 請求項１記載の抗体、(2) 請求項
２記載の抗体、および(3) 乳酸菌、腸球菌、酵母もしく
はバチルス属細菌を含有する胃炎、胃潰瘍または十二指
腸潰瘍の予防用食品。
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