JP2887524B2 - 微生物による光学分割法 - Google Patents
微生物による光学分割法Info
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- JP2887524B2 JP2887524B2 JP33572290A JP33572290A JP2887524B2 JP 2887524 B2 JP2887524 B2 JP 2887524B2 JP 33572290 A JP33572290 A JP 33572290A JP 33572290 A JP33572290 A JP 33572290A JP 2887524 B2 JP2887524 B2 JP 2887524B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は微生物を利用した光学分割法に関し、更に詳
細には合成抗癌剤として有用であるカンプトテシン誘導
体の重要な合成中間体である次式（１） で表わされる（Ｓ）−４−エチル−6,6−（エチレンジ
オキシ）−7,8−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラ
ノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）−ジオンを微
生物を利用した光学分割により製造する方法に関する。
細には合成抗癌剤として有用であるカンプトテシン誘導
体の重要な合成中間体である次式（１） で表わされる（Ｓ）−４−エチル−6,6−（エチレンジ
オキシ）−7,8−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラ
ノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）−ジオンを微
生物を利用した光学分割により製造する方法に関する。
従来、次の式（３） で表わされるカンプトテシン誘導体は、合成抗癌剤とし
て有用であり、その合成中間体として上記化合物（１）
が重要であることが知られている（特開昭63−152382号
公報）。かかる化合物（１）の製造法としては、当該化
合物（１）のラセミ体をジアステレオマーに誘導後分別
結晶化による光学分割法（特開昭63−152382号公報）等
が知られている。
て有用であり、その合成中間体として上記化合物（１）
が重要であることが知られている（特開昭63−152382号
公報）。かかる化合物（１）の製造法としては、当該化
合物（１）のラセミ体をジアステレオマーに誘導後分別
結晶化による光学分割法（特開昭63−152382号公報）等
が知られている。
しかしながら、これら従来の光学分割法は操作が煩雑
である、生成物の収率が低い等の欠点を有し、工業的な
製法としては充分満足できるものではなかった。
である、生成物の収率が低い等の欠点を有し、工業的な
製法としては充分満足できるものではなかった。
かかる実状において、本発明者らは微生物を利用して
化合物（１）のみを選択的に得るべく種々探索したとこ
ろ、バチルス属に属する微生物がラセミ体である下記化
合物（２）のＳ体にのみ作用してアシル基を除去し、Ｒ
体には作用しないことを見出し、本発明を完成するに到
った。
化合物（１）のみを選択的に得るべく種々探索したとこ
ろ、バチルス属に属する微生物がラセミ体である下記化
合物（２）のＳ体にのみ作用してアシル基を除去し、Ｒ
体には作用しないことを見出し、本発明を完成するに到
った。
本発明は次の反応式によって示される。
（式中、Ｒはアルキル基を示す） すなわち、一般式（２）で表わされる４−アシルオキ
シ−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8−ジ
ヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4
H）−ジオンのラセミ体に、バチルス属に属する微生物
の菌体、培養物又はこれらの分画物を作用せしめること
を特徴とする化合物（１）の製造法である。
シ−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8−ジ
ヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4
H）−ジオンのラセミ体に、バチルス属に属する微生物
の菌体、培養物又はこれらの分画物を作用せしめること
を特徴とする化合物（１）の製造法である。
本発明方法の原料化合物を表わす上記一般式（２）
中、Ｒで示されるアルキル基としてはメチル基、エチル
基、ｎ−プロピル基等の低級アルキル基が好ましい。
中、Ｒで示されるアルキル基としてはメチル基、エチル
基、ｎ−プロピル基等の低級アルキル基が好ましい。
かかる化合物（２）のラセミ体（以下、単に化合物
（２）という）は、例えば特開昭63−152382号記載の方
法に従って得られた４−エチル−6,6−（エチレンジオ
キシ）−7,8−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ
〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）−ジオンに、脂
肪酸無水物、脂肪酸ハライド等の脂肪酸の反応性誘導体
を反応させることにより製造される。
（２）という）は、例えば特開昭63−152382号記載の方
法に従って得られた４−エチル−6,6−（エチレンジオ
キシ）−7,8−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ
〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）−ジオンに、脂
肪酸無水物、脂肪酸ハライド等の脂肪酸の反応性誘導体
を反応させることにより製造される。
本発明方法を実施するには、まず化合物（２）を緩衝
液に懸濁し、次いでこれにバチルス属に属する微生物の
菌体、培養物又はこれらの分画物を静かに加えて撹拌す
ればよい。
液に懸濁し、次いでこれにバチルス属に属する微生物の
菌体、培養物又はこれらの分画物を静かに加えて撹拌す
ればよい。
用いられるバチルス属に属する微生物としては、バチ
ルス リケニホルミス（Bacillus licheniformis）、バ
チルス マイコデス（Bacillus mycoides）等が挙げら
れる。より具体的にはバチルス リケニホルミスNRIC−
1007（Bacillus licheniformis NRIC−1007,東京農業大
学より入手）、バチルスマイコデス IAM−1190（Bacil
lus mycoides IAM−1190,東京大学応用微生物研究所よ
り入手）等が挙げられる。これらの微生物の培養物とし
ては、当該微生物を適当な培地で培養したものを挙げる
ことができる。上記微生物の分画物としては菌体又は培
養物を水又は適当な緩衝液で抽出したもの；液体培地で
培養を行った場合には培養物の濾液、該抽出液又は濾液
に硫安又はアルコールを加えることにより得られる沈澱
物；該抽出液又は濾液をゲル濾過、限外濾過、イオン交
換クロマトグラフィー等を用いて分画したもの；菌体の
破砕物；及び該破砕物を前記の分画方法を用いて分画し
たものを挙げることができる。
ルス リケニホルミス（Bacillus licheniformis）、バ
チルス マイコデス（Bacillus mycoides）等が挙げら
れる。より具体的にはバチルス リケニホルミスNRIC−
1007（Bacillus licheniformis NRIC−1007,東京農業大
学より入手）、バチルスマイコデス IAM−1190（Bacil
lus mycoides IAM−1190,東京大学応用微生物研究所よ
り入手）等が挙げられる。これらの微生物の培養物とし
ては、当該微生物を適当な培地で培養したものを挙げる
ことができる。上記微生物の分画物としては菌体又は培
養物を水又は適当な緩衝液で抽出したもの；液体培地で
培養を行った場合には培養物の濾液、該抽出液又は濾液
に硫安又はアルコールを加えることにより得られる沈澱
物；該抽出液又は濾液をゲル濾過、限外濾過、イオン交
換クロマトグラフィー等を用いて分画したもの；菌体の
破砕物；及び該破砕物を前記の分画方法を用いて分画し
たものを挙げることができる。
反応は、通常20〜50℃、好ましくは30〜40℃、pH4〜
９好ましくは６〜７で24〜72時間程度行われる。反応に
使用する化合物（２）の濃度は、0.1〜１重量％の間で
可能であるが通常0.1〜0.2重量％程度で行うのが望まし
い。使用する菌体の量はとくに限定されないが、目安と
して原料に対して0.1ないし２重量培程度が一般的であ
るが反応条件によってはこれよりも少なくてもよい。反
応に用いられる緩衝液としては、リン酸緩衝液、クエン
酸緩衝液等が挙げられる。反応終了後反応液を濾過、減
圧濃縮、カラムクロマトグラフィー、晶析等の通常の精
製手段を用いて、化合物（１）を単離することができ
る。
９好ましくは６〜７で24〜72時間程度行われる。反応に
使用する化合物（２）の濃度は、0.1〜１重量％の間で
可能であるが通常0.1〜0.2重量％程度で行うのが望まし
い。使用する菌体の量はとくに限定されないが、目安と
して原料に対して0.1ないし２重量培程度が一般的であ
るが反応条件によってはこれよりも少なくてもよい。反
応に用いられる緩衝液としては、リン酸緩衝液、クエン
酸緩衝液等が挙げられる。反応終了後反応液を濾過、減
圧濃縮、カラムクロマトグラフィー、晶析等の通常の精
製手段を用いて、化合物（１）を単離することができ
る。
得られた化合物（１）は、例えば特開昭63−152382号
公報記載の方法により前記カンプトテシン誘導体
（３）、その他の合成抗癌剤に導くことができる。
公報記載の方法により前記カンプトテシン誘導体
（３）、その他の合成抗癌剤に導くことができる。
本発明の製造法は温和な条件下で反応を行うことがで
き、反応における副反応がほとんど無いため目的の化合
物（１）を高純度に製造することができる。従って本発
明の製造法は、化合物（１）の工業的製造方法として優
れたものである。
き、反応における副反応がほとんど無いため目的の化合
物（１）を高純度に製造することができる。従って本発
明の製造法は、化合物（１）の工業的製造方法として優
れたものである。
以下、本発明を更に実施例により説明するが、本発明
はこれにより限定されるものではない。
はこれにより限定されるものではない。
参考例１ バチルス属に属する微生物は、普通ブイヨン培地（肉
エキス0.5％、ペプトン１％、食塩0.5％、pH7.0）に、
前培養菌体を接種し、30℃で１日培養した。培養後、遠
心分離した菌体に生理食塩水を加え、再び遠心して菌体
を得た。これを五酸化リン上にて減圧乾燥して乾燥菌体
を得た。
エキス0.5％、ペプトン１％、食塩0.5％、pH7.0）に、
前培養菌体を接種し、30℃で１日培養した。培養後、遠
心分離した菌体に生理食塩水を加え、再び遠心して菌体
を得た。これを五酸化リン上にて減圧乾燥して乾燥菌体
を得た。
参考例２ ４−アセトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオキ
シ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリ
ジン−3,10（4H）−ジオン ４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8−ジヒ
ドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インド
リジン−3,10（4H）−ジオン3.07gを塩化メチレン10ml
に懸濁し氷冷撹拌下、ジメチルアミノピリジン124mg、
無水酢酸1.13mlを加え室温で４時間放置した。HPLCで反
応の終了を確認後、反応液を減圧下濃縮した。残渣をイ
ソプロピルアルコール20mlから結晶化し濾過した。結晶
を冷イソプロピルアルコールで洗浄後乾燥し標記化合物
3.41gを得た。
シ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリ
ジン−3,10（4H）−ジオン ４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8−ジヒ
ドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インド
リジン−3,10（4H）−ジオン3.07gを塩化メチレン10ml
に懸濁し氷冷撹拌下、ジメチルアミノピリジン124mg、
無水酢酸1.13mlを加え室温で４時間放置した。HPLCで反
応の終了を確認後、反応液を減圧下濃縮した。残渣をイ
ソプロピルアルコール20mlから結晶化し濾過した。結晶
を冷イソプロピルアルコールで洗浄後乾燥し標記化合物
3.41gを得た。
IR ν max cm-1 1740,1660,1610（Ｃ＝Ｏ） FT−NMR（CDCl3中のδ値ppm） 0.87（3H,t,J＝7Hz） 2.07（2H,t,J＝7Hz） 2.11（3H,s） 2.42（2H,t,J＝7Hz） 4.0〜4.3（6H,m） 5.36（2H,ABquartet,J＝17Hz,45Hz） 6.07（1H,s） 実施例１ （Ｓ）−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8
−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕
インドリジン−3,10（4H）−ジオン ４−アセトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオ
キシ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インド
リジン−3,10（4H）−ジオン1.00gを0.1Mリン酸緩衝液
（pH7.0）500mlに懸濁し、次いでバチルス マイコデス
IAM−1190の乾燥菌体1.0gを加え、30℃で48時間撹拌し
た。HPLCで反応の終了を確認後、反応液を分液（水−ク
ロロホルム）し、セライト濾過により菌体を除いた。有
機層を水で洗浄後乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルク
ロマトグラフィー（クロロホルム−アセトン）で精製し
420mgの標題化合物と494mgの（Ｒ）−４−アセトキシ−
４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8−ジヒド
ロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）
−ジオンを回収した。
−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕
インドリジン−3,10（4H）−ジオン ４−アセトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオ
キシ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インド
リジン−3,10（4H）−ジオン1.00gを0.1Mリン酸緩衝液
（pH7.0）500mlに懸濁し、次いでバチルス マイコデス
IAM−1190の乾燥菌体1.0gを加え、30℃で48時間撹拌し
た。HPLCで反応の終了を確認後、反応液を分液（水−ク
ロロホルム）し、セライト濾過により菌体を除いた。有
機層を水で洗浄後乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルク
ロマトグラフィー（クロロホルム−アセトン）で精製し
420mgの標題化合物と494mgの（Ｒ）−４−アセトキシ−
４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8−ジヒド
ロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）
−ジオンを回収した。
得られた目的化合物の機器分析値は別途合成のそれと
完全に一致し光学純度は、光学異性体分離カラムによる
分析により96％e.e.であった。
完全に一致し光学純度は、光学異性体分離カラムによる
分析により96％e.e.であった。
FT−NMR（CDCl3中のδ値ppm） 0.98（3H,t,J＝7Hz） 1.76（2H,t,J＝7Hz） 2.41（2H,t,J＝7Hz） 4.0〜4.3（6H,m） 5.37（2H,ABquartet,J＝16Hz,43Hz） 6.56（1H,s） HPLC条件 カラム:ULTRON ES−OVM（親和化工社製） 移動相:2.5％エタノール（含20mMリン酸緩衝液pH6.
0） 流 速:1.0ml/min 波 長:254nm 実施例２ （Ｓ）−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8
−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕
インドリジン−3,10（4H）−ジオン ４−アセトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオ
キシ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インド
リジン−3,10（4H）−ジオン1.00gを0.1Mリン酸緩衝液
（pH7.0）500mlに懸濁し、次いでバチルス リケニホル
ミスNRIC−1007の乾燥菌体2.0gを加え、30℃で48時間撹
拌した。HPLCで反応の終了を確認後、実施例１と同様の
操作を行い415mgの標題化合物と498mgの（Ｒ）−４−ア
セトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−
7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−
3,10（4H）−ジオンを回収した。
0） 流 速:1.0ml/min 波 長:254nm 実施例２ （Ｓ）−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−7,8
−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕
インドリジン−3,10（4H）−ジオン ４−アセトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオ
キシ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インド
リジン−3,10（4H）−ジオン1.00gを0.1Mリン酸緩衝液
（pH7.0）500mlに懸濁し、次いでバチルス リケニホル
ミスNRIC−1007の乾燥菌体2.0gを加え、30℃で48時間撹
拌した。HPLCで反応の終了を確認後、実施例１と同様の
操作を行い415mgの標題化合物と498mgの（Ｒ）−４−ア
セトキシ−４−エチル−6,6−（エチレンジオキシ）−
7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−
3,10（4H）−ジオンを回収した。
得られた目的化合物の光学純度は、光学異性体分離カ
ラムによる分析により95％e.e.であった。
ラムによる分析により95％e.e.であった。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 41/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】一般式（２） （式中、Ｒはアルキル基を示す） で表わされる４−アシルオキシ−４−エチル−6,6−
（エチレンジオキシ）−7,8−ジヒドロ−1H−ピラノ
〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）−ジオンのラセ
ミ体に、バチルス属に属する微生物の菌体、培養物又は
これらの分画物を作用せしめることを特徴とする、次式
（１） で表わされる（Ｓ）−４−エチル−6,6−（エチレンジ
オキシ）−7,8−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−1H−ピラ
ノ〔3,4−ｆ〕インドリジン−3,10（4H）−ジオンの製
造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33572290A JP2887524B2 (ja) | 1990-11-30 | 1990-11-30 | 微生物による光学分割法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33572290A JP2887524B2 (ja) | 1990-11-30 | 1990-11-30 | 微生物による光学分割法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04200393A JPH04200393A (ja) | 1992-07-21 |
| JP2887524B2 true JP2887524B2 (ja) | 1999-04-26 |
Family
ID=18291739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33572290A Expired - Fee Related JP2887524B2 (ja) | 1990-11-30 | 1990-11-30 | 微生物による光学分割法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2887524B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG116433A1 (en) * | 1996-10-30 | 2005-11-28 | Tanabe Seiyaku Co | S type 2-substituted hydroxy-2-indolidinylbutyric ester compounds and process for preparation thereof. |
| CN103087072B (zh) * | 2013-02-05 | 2014-02-26 | 复旦大学 | 一种（+）-三环羟内酯制备方法 |
-
1990
- 1990-11-30 JP JP33572290A patent/JP2887524B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04200393A (ja) | 1992-07-21 |
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