JP2598208B2 - イネ苗立枯細菌病の防除方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、学名エルビニア・カロ
トボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）に
属する細菌を生きたままイネ籾、苗床土壌に散布または
まぶすことにより、イネ苗立枯細菌病を防除する方法に
関するものである。

【０００２】

【従来技術とその問題点】シュードモナス・プランタリ
イ細菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｌａｎｔａｒｉ
ｉ）により引き起こされるイネ苗立枯細菌病の防除方法
としては、現在適用されている農薬は少なく、効果的に
防除する農薬の開発が望まれている。

【０００３】

【問題点を解決するための手段】本発明者らは、鋭意検
討の結果、軟腐病の防除に有効な非病原性軟腐病菌を有
効成分とする微生物農薬製剤をイネ籾、苗床土壌に散布
またはまぶすことにより、イネ苗立枯細菌病を有効に防
除することができることを見出し、本発明に到達した。

【０００４】すなわち本発明は、イネ籾を病原性を欠失
させたエルビニア・カロトボーラ細菌を含む懸濁液中に
浸漬した後、土壌中に植え付けることを特徴とするイネ
苗立枯細菌病の防除方法、イネ籾に病原性を欠失させた
エルビニア・カロトボーラ細菌を含む粉末をまぶした
後、土壌中に植え付けることを特徴とするイネ苗立枯細
菌病の防除方法、苗床に病原性を欠失させたエルビニア
・カロトボーラ細菌を含む懸濁液、粉末または粒剤を灌
注または混和した後、イネ籾を植え付けることを特徴と
するイネ苗立枯細菌病の防除方法、およびイネ籾を植え
付けた苗床土壌に病原性を欠失させたエルビニア・カロ
トボーラ細菌を含む懸濁液を散布することを特徴とする
イネ苗立枯細菌病の防除方法である。さらに病原性を欠
失させたエルビニア・カロトボーラ細菌がエルビニア・
カロトボーラＣＧＥ２３４Ｍ４０３菌株であることをも
特徴とするイネ苗立枯細菌病の防除方法である。

【０００５】エルビニア・カロトボーラ細菌は、多くの
植物の貯蔵組織を軟化腐敗させるいわゆる軟腐病を引き
起こす細菌であり、不偏的に土壌に存在していることが
報告されている。５年以上この菌の宿主となる作物を作
っていない畑でも時として軟腐病の発生が観察される場
合がある。この菌の生態は次のように考えられている
（津山博之、植物防疫 第３４巻 ２９４頁−２９８頁
１９８０年）。例えば、白菜の場合には播種後、４０
日位から根部の周辺でこの細菌が増殖し、根圏土壌、葉
部などのほとんどあらゆる箇所にその存在が認められる
ようになる。そして、台風や昆虫あるいは日常の作業な
どにより白菜に傷がつくと、そこから細菌が侵入し、気
候条件さえ整えば一晩のうちに病原菌濃度が上昇し、病
斑が認められるようになる。そこで、これらの発病を防
止するため、病原性のある細菌に替って病原性のないエ
ルビニア・カロトボーラ細菌を根圈土壌や葉部で病原株
と同等に増殖させることが可能になれば、病原性のある
細菌の増殖を押さえて軟腐病を防除することが期待で
き、かかる考察のもと鋭意検討した結果、エルビニア・
カロトボーラ細菌の変異処理株のなかから、病原性を有
する系統の同細菌と競合してよく成育し、かつ、病原性
をもたない系統のものを選び出し、これらの病原性を欠
失させたエルビニア・カロトボーラ細菌の生菌を軟腐病
被災植物の根部または葉部に接種することにより、軟腐
病を有効に防除できることを見出し、特許出願した（特
開平３−１０１６０６号公報、特開平４−１７９４７５
号公報）。

【０００６】次にこの病原性を欠失させたエルビニア・
カロトボーラ細菌を作成する方法について述べる。本発
明者らは、軟腐病斑のある、または健全な野菜類から多
数のエルビニア属細菌を採取した。病原性を欠失させた
エルビニア・カロトボーラ細菌は、これらの軟腐病菌を
変異処理して作成した。変異法としては、一般的に用い
られる変異試剤、例えばエチルメタンスルホニル、ニト
ロソグアニジンなどや紫外線を用いる方法（微生物学実
験法、微生物研究法懇談会編 ２８８頁−３０６頁 講
談社１９８２年、または、微生物遺伝学実験法、石川辰
夫編 ３頁−３２頁 共立出版 １９８２年）が知られ
ており、これらに準じて処理すればよい。

【０００７】ところで、エルビニア・カロトボーラ菌の
病原性の発現の主たる要因は、この菌により分泌される
ペクチナーゼ、特にペクチン酸リアーゼであるとされて
いる（後藤正夫著 新植物細菌病学 １６６頁 ソフト
サイエンス社 １９８１年）。そこで、病原性欠失株の
スクリーニングは、ペクチナーゼ分泌能の低下した菌株
を拾い出し、白菜切片を用いた病原性試験により行なっ
た。病原性試験は、白菜の葉切片に傷を付け、高濃度の
検定菌液を塗布し、水分存在下２８℃の恒温槽に２４時
間静置した後にその病斑長を測定することにより行なっ
た。

【０００８】このようにして得られたエルビニア・カロ
トボーラ細菌の病原性欠失株を病原株と混合して傷を付
けた白菜切片に接種したところ、病原株の増殖を抑制し
て病斑を生じさせないか、または病斑形成速度を大幅に
低下させる菌株が得られた。そして、これらの病原性欠
失株の中から病斑阻止能力の特に高い菌株を選択し、工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託し、以下の寄託番
号が付与されている。

【０００９】エルビニア・カロトボーラ サブスピ カ
ロトボーラ ＣＧＥ６Ｍ１４ 微工研菌寄第１０９９８号（ＦＥＲＭ Ｐ−１０９９
８） エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ
ＣＧＥ６Ｍ１６ 微工研菌寄第１０９９９号（ＦＥＲＭ Ｐ−１０９９
９） エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ
ＣＧＥ１０Ｍ２ 微工研菌寄第１１０００号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１００
０） エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ
ＣＧＥ１１Ｍ５ 微工研菌寄第１１００１号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１００
１） エルビニア・カロトボーラ サブスピ カロトボーラ
ＣＧＥ２３４Ｍ４０３ 微工研菌寄第１１７９２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７９
２） 本発明は、これらの病原性を欠失させたエルビニア・カ
ロトボーラ細菌を用いるものであるが、より好ましくは
ＣＧＥ２３４Ｍ４０３菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７９
２）である。

【００１０】次に本発明の微生物農薬の調製方法を述べ
る。まず、病原性を欠失させたエルビニア・カロトボー
ラ細菌を適当な培地で培養する。ここで使用する培地
は、菌が増殖するものであれば特に限定するものではな
く、通常使用されている培地を使用すればよく、２０℃
〜３５℃で１０〜３５時間培養して増殖させた後、遠心
分離して集菌を行ない、培地成分は取り除く。かかる操
作で菌密度は、通常２×１０¹¹〜３×１０¹¹ｃｆｕ／ｇ
程度に濃縮される。

【００１１】ついで湿菌体をアルミナ、シリカゲル、モ
レキュラーシーブ、パーライト、活性炭、砂または赤土
などの無機物やサッカロース、グルコース、フルクトー
ス、ソルビトールなどの１種類または２種類以上からな
る糖類溶液、あるいはまた、グルタミン酸ナトリウム、
リン酸ナトリウム緩衝液などからなる固定化剤中に入
れ、攪拌懸濁させ、凍結乾燥する。

【００１２】このようにして得られた乾燥菌体は、必要
に応じて希釈剤、補助剤などを添加、混合し、製剤化す
る。この際の剤型は、粉剤、粒剤、水和剤、懸濁液など
の通常使用されている剤型とすればよく、目的などに応
じて適宜選定すればよい。

【００１３】上記の希釈剤としては、珪藻土、タルク、
粘土、酸性白土、ベントナイト、カオリン、木粉、タブ
粉、粕粉、炭酸カルシウム、水などが具体例として挙げ
られ、これらの１種類のみを用いることはもちろん、２
種類以上のものを組み合わせて用いることもできる。

【００１４】また、補助剤としては、界面活性剤、安定
剤、その他有効成分の効力増加のための強力剤などが具
体例として挙げられ、これらの１種類のみを用いること
はもちろん、２種類以上のものを組み合わせて用いるこ
ともできる。

【００１５】以上のようにして本発明の微生物農薬が調
製される。この際、製剤中の菌密度は、粉剤、粒剤の場
合には１×１０⁶〜１×１０¹¹ｃｆｕ／ｇ程度、また、
懸濁液の場合には１×１０⁶〜１×１０⁹ｃｆｕ／ｍｌ程
度となるように調製するのが好ましい。

【００１６】次に本発明の微生物農薬の使用方法を述べ
る。通常、イネを育苗する場合、育苗中に生じる各種の
植物病、たとえばイネ籾枯細菌病（苗腐敗症）、立枯病
などを防除するためなど種子伝染性の病原菌の消毒のた
めに各種農薬が用いられている。その使用法として幾つ
かの方法があり、農薬液の中に籾を浸漬する方法、農薬
粉を籾に粉衣する方法、苗床土壌に農薬液を灌注、また
は農薬粉、粒を混和する方法、籾を植え付けた土壌に農
薬液を散布する方法などがある。本発明の病原性を欠失
させたエルビニア・カロトボーラ細菌を有効成分とする
微生物農薬についてもこれらの方法をそのまま用いるこ
とができる。

【００１７】つまり、本発明の微生物農薬の使用方法と
しては、イネ籾を病原性を欠失させたエルビニア・カロ
トボーラ細菌を含む懸濁液中に浸漬した後、土壌中に植
え付ける方法、イネ籾に病原性を欠失させたエルビニア
・カロトボーラ細菌を含む粉末をまぶした後、土壌中に
植え付ける方法、苗床に病原性を欠失させたエルビニア
・カロトボーラ細菌を含む懸濁液、粉末または粒剤を灌
注または混和した後、イネ籾を植え付ける方法、あるい
はイネ籾を植え付けた苗床土壌に病原性を欠失させたエ
ルビニア・カロトボーラ細菌を含む懸濁液を散布する方
法などを用いることができる。

【００１８】これらのうち、イネ籾を病原性を欠失させ
たエルビニア・カロトボーラ細菌を含む懸濁液中に浸漬
した後、土壌中に植え付ける方法の場合、懸濁液中に浸
漬する時間は特に制限はなく、１０分程度から浸種に要
する数日間でもかまわない。また、浸種時または種子消
毒時に種子消毒剤と混合して用いてもよいし、浸種の前
後でもかまわない。

【００１９】また、イネ籾に病原性を欠失させたエルビ
ニア・カロトボーラ細菌を含む粉末をまぶした後、土壌
中に植え付ける方法の場合、粉末をまぶす時間は特に制
限はなく、１０分程度から数日間でもかまわない。ま
た、浸種の前に行なっても後に行なってもよい。

【００２０】また、苗床に病原性を欠失させたエルビニ
ア・カロトボーラ細菌を含む懸濁液、粉末または粒剤を
灌注または混和した後、イネ籾を植え付ける方法、およ
びイネ籾を植え付けた苗床土壌に病原性を欠失させたエ
ルビニア・カロトボーラ細菌を含む懸濁液を散布する方
法の場合、灌注、混和または散布する薬剤の量は、粉
末、粒剤の場合には土壌１Ｌあたり１ｇ〜１００ｇ程
度、また、懸濁液の場合には土壌１Ｌあたり１０ｍｌ〜
１０００ｍｌ程度とするのが好ましい。

【００２１】

【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例により限定されるもので
はない。

【００２２】なお、実施例に用いた培地の組成を次に示
す。 ８０２培地：ポリペプトン １０ｇ、酵母エキス ２
ｇ、ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ １ｇ、水 １Ｌ、ＰＨ７．
０ （プレートの場合は寒天１５ｇを含む）実施例１ ８０２培地にエルビニア・カロトボーラＣＧＥ２３４Ｍ
４０３菌株〔微工研菌寄第１１７９２号（ＦＥＲＭ Ｐ
−１１７９２）として寄託されている〕を接種し、３０
℃で１５時間培養した。培養液は遠心分離機を用いて集
菌を行ない、菌体濃縮液（菌数３．０×１０¹¹ｃｆｕ／
ｍｌ）を得た。ついで、固定化剤〔４０％（ｗ／ｗ）サ
ッカロース、２％（ｗ／ｗ）グルタミン酸ナトリウム、
０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液Ｐｈ７．０〕を含む溶
液を乾燥凍結した後、水に溶解して菌密度が１×１０⁸
ｃｆｕ／ｍｌとなるように調整した懸濁液を作成した。

【００２３】イネ苗立枯細菌病菌に感染したイネ籾を上
記の懸濁液に３日間浸し、新しい菌懸濁液に替え、さら
に３日間浸した後、播種した。対照区は菌懸濁液の代り
に水を用いて同様の操作を行なった。上記の操作は、い
ずれも液温１５℃で行ない、その後１日間、催芽のため
３０℃に昇温した。植え付けから１ヵ月後にイネ苗立枯
細菌病の発病調査をしたところ、表１の結果が得られ
た。防除価は１００％であった。

【００２４】

【表１】 実施例２ 実施例１と同様にして調製したエルビニア・カロトボー
ラＣＧＥ２３４Ｍ４０３菌株〔微工研菌寄託第１１７９
２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７９２）として寄託されてい
る〕の懸濁液（菌密度１×１０⁸ｃｆｕ／ｍｌ）を苗床
土壌に土壌１Ｌあたり１００ｍｌ散布した。次いで、た
だちにイネ苗立枯細菌病菌に感染したイネ籾を播種し
た。対照区は菌懸濁液の代りに水を用いて同様の操作を
行なった。上記の操作は、いずれも液温１５℃で行な
い、その後１日間、催芽のため３０℃に昇温した。播種
から１５日後にイネ苗立枯細菌病の発病調査をしたとこ
ろ、表２の結果が得られた。防除価は９６．３％であっ
た。

【００２５】

【表２】

【００２６】

【発明の効果】本発明により、従来防除が困難とされて
いた植物細菌病の主要な１つであるイネ苗立枯細菌病を
効果的に防除することが可能となった。本発明は、生き
た細菌をいわゆる生物防徐策として用いる方法であり、
しかも薬害がなく安全なイネ苗立枯細菌病の防除方法を
提供するものである。

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】イネ籾を病原性を欠失させたエルビニア・
   カロトボーラ細菌を含む懸濁液中に浸漬した後、土壌中
   に植え付けることを特徴とするイネ苗立枯細菌病の防除
   方法。
2. 【請求項２】イネ籾に病原性を欠失させたエルビニア・
   カロトボーラ細菌を含む粉末をまぶした後、土壌中に植
   え付けることを特徴とするイネ苗立枯細菌病の防除方
   法。
3. 【請求項３】苗床に病原性を欠失させたエルビニア・カ
   ロトボーラ細菌を含む懸濁液、粉末または粒剤を灌注ま
   たは混和した後、イネ籾を植え付けることを特徴とする
   イネ苗立枯細菌病の防除方法。
4. 【請求項４】イネ籾を植え付けた苗床土壌に病原性を欠
   失させたエルビニア・カロトボーラ細菌を含む懸濁液を
   散布することを特徴とするイネ苗立枯細菌病の防除方
   法。
5. 【請求項５】病原性を欠失させたエルビニア・カロトボ
   ーラ細菌がエルビニア・カロトボーラＣＧＥ２３４Ｍ４
   ０３菌株であることを特徴とする請求項１ないし請求項
   ４のいずれかに記載のイネ苗立枯細菌病の防除方法。