JP2553445B2 - 抗体の安定化方法 - Google Patents
抗体の安定化方法Info
- Publication number
- JP2553445B2 JP2553445B2 JP4337478A JP33747892A JP2553445B2 JP 2553445 B2 JP2553445 B2 JP 2553445B2 JP 4337478 A JP4337478 A JP 4337478A JP 33747892 A JP33747892 A JP 33747892A JP 2553445 B2 JP2553445 B2 JP 2553445B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- antibody
- albumin
- monoclonal antibody
- dissolved
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 9
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 9
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 claims description 5
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 230000002725 anti-mycoplasma Effects 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- STOOUUMSJPLRNI-UHFFFAOYSA-N 5-amino-4-hydroxy-3-[[4-[4-[(4-hydroxyphenyl)diazenyl]phenyl]phenyl]diazenyl]-6-[(4-nitrophenyl)diazenyl]naphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=C(N=NC=3C=CC(=CC=3)C=3C=CC(=CC=3)N=NC=3C=CC(O)=CC=3)C(O)=C2C(N)=C1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 STOOUUMSJPLRNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 230000001032 anti-candidal effect Effects 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000150790 Athletes albicans Species 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-UHFFFAOYSA-L Congo Red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(N=NC3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)N=NC3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- -1 Direct Black 22 Chemical compound 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N [3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-ylmethyl)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-en-8-yl]-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]methanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CC1=NOC2(C1)CCN(CC2)C(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- BPHHNXJPFPEJOF-UHFFFAOYSA-J chembl296966 Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(S([O-])(=O)=O)=C(N)C2=C(O)C(N=NC3=CC=C(C=C3OC)C=3C=C(C(=CC=3)N=NC=3C(=C4C(N)=C(C=C(C4=CC=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)O)OC)=CC=C21 BPHHNXJPFPEJOF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- XRPLBRIHZGVJIC-UHFFFAOYSA-L chembl3182776 Chemical compound [Na+].[Na+].NC1=CC(N)=CC=C1N=NC1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)N=NC=2C(=CC3=CC(=C(N=NC=4C=CC=CC=4)C(O)=C3C=2N)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C=C1 XRPLBRIHZGVJIC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- LWPZXDCHPRMLBN-UHFFFAOYSA-L disodium 4-amino-3-[[4-[4-[(2,4-diamino-5-methylphenyl)diazenyl]phenyl]phenyl]diazenyl]-5-oxido-6-phenyldiazenyl-7-sulfonaphthalene-2-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].Cc1cc(N=Nc2ccc(cc2)-c2ccc(cc2)N=Nc2c(N)c3c(O)c(N=Nc4ccccc4)c(cc3cc2S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)c(N)cc1N LWPZXDCHPRMLBN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DDLNJHAAABRHFY-UHFFFAOYSA-L disodium 8-amino-7-[[4-[4-[(4-oxidophenyl)diazenyl]phenyl]phenyl]diazenyl]-2-phenyldiazenyl-3,6-disulfonaphthalen-1-olate Chemical compound [Na+].[Na+].NC1=C(C(=CC2=CC(=C(C(=C12)O)N=NC1=CC=CC=C1)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-])N=NC1=CC=C(C=C1)C1=CC=C(C=C1)N=NC1=CC=C(C=C1)O DDLNJHAAABRHFY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- WPPDXAHGCGPUPK-UHFFFAOYSA-N red 2 Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C1=CC=CC=C11)=C(C=2C=3C4=CC=C5C6=CC=C7C8=C(C=9C=CC=CC=9)C9=CC=CC=C9C(C=9C=CC=CC=9)=C8C8=CC=C(C6=C87)C(C=35)=CC=2)C4=C1C1=CC=CC=C1 WPPDXAHGCGPUPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- MPCYPRXRVWZKGF-UHFFFAOYSA-J tetrasodium 5-amino-3-[[4-[4-[(8-amino-1-hydroxy-3,6-disulfonatonaphthalen-2-yl)diazenyl]phenyl]phenyl]diazenyl]-4-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(N=NC3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)N=NC3=C(C=C4C=C(C=C(C4=C3O)N)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C(O)C2=C1N MPCYPRXRVWZKGF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗体又は標識抗体の安
定化方法に関するものである。
定化方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、抗体、標識抗体を用いた診断薬は
多数開発されており、特にモノクローナル抗体は優れた
特異反応性をもつことから、診断薬や治療薬の分野等で
広く利用されつつある。しかしながら、抗体、とりわけ
モノクローナル抗体は単一のタンパク質から構成される
ために特異な性質を持つものが多く、この溶液の安定化
は困難であった。このため、これを一般の酵素タンパク
質と同様に、凍結保存、凍結乾燥又は硫安沈澱の懸濁液
として保存する方法が試みられてきた。しかし、これら
の方法は簡便に実施できず煩雑であり、更に溶液にもど
す手間もかかり、有利な方法とは言えないものであっ
た。
多数開発されており、特にモノクローナル抗体は優れた
特異反応性をもつことから、診断薬や治療薬の分野等で
広く利用されつつある。しかしながら、抗体、とりわけ
モノクローナル抗体は単一のタンパク質から構成される
ために特異な性質を持つものが多く、この溶液の安定化
は困難であった。このため、これを一般の酵素タンパク
質と同様に、凍結保存、凍結乾燥又は硫安沈澱の懸濁液
として保存する方法が試みられてきた。しかし、これら
の方法は簡便に実施できず煩雑であり、更に溶液にもど
す手間もかかり、有利な方法とは言えないものであっ
た。
【０００３】従って、抗体を溶液の状態で保存する方法
が検討され、例えば、アルブミンを添加する方法（ＷＯ
９２／０１８０８）、加水分解された卵アルブミンを
添加する方法（特開昭６１−７６４２３号公報）等が開
示されている。しかし、これらの方法によっても抗体溶
液の安定化は、必ずしも満足の行くものではなかった。
が検討され、例えば、アルブミンを添加する方法（ＷＯ
９２／０１８０８）、加水分解された卵アルブミンを
添加する方法（特開昭６１−７６４２３号公報）等が開
示されている。しかし、これらの方法によっても抗体溶
液の安定化は、必ずしも満足の行くものではなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、更に優れた抗体の安定化方法を提供することにあ
る。
は、更に優れた抗体の安定化方法を提供することにあ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】斯かる実状に鑑み、本発
明者らは、鋭意研究を行った結果、アルブミンを含有す
る抗体溶液に、単独では安定化作用を持たない特定のア
ゾ系色素を加えると、意外にも安定性が顕著に向上する
ことを見出し、本発明を完成した。
明者らは、鋭意研究を行った結果、アルブミンを含有す
る抗体溶液に、単独では安定化作用を持たない特定のア
ゾ系色素を加えると、意外にも安定性が顕著に向上する
ことを見出し、本発明を完成した。
【０００６】すなわち本発明は、（１）抗体又は標識抗
体の溶液に、（２）アルブミン及び（３）構造中にナフ
タレンスルホン酸を含むアゾ系色素を添加することを特
徴とする抗体又は標識抗体の安定化方法を提供するもの
である。
体の溶液に、（２）アルブミン及び（３）構造中にナフ
タレンスルホン酸を含むアゾ系色素を添加することを特
徴とする抗体又は標識抗体の安定化方法を提供するもの
である。
【０００７】本発明に用いられる抗体は、特に限定され
ないが、その使用の目的に応じて種類、濃度等を適宜選
択、決定すればよい。また、必要により抗体をフルオレ
ッセイン等で標識した標識抗体を用いてもよい。
ないが、その使用の目的に応じて種類、濃度等を適宜選
択、決定すればよい。また、必要により抗体をフルオレ
ッセイン等で標識した標識抗体を用いてもよい。
【０００８】本発明に用いられるアルブミンとしては、
牛血清アルブミン、ヒトアルブミン、オボアルブミン、
ラクトアルブミン等が挙げられるが、抗体がモノクロー
ナル抗体である場合は、抗血清から得られるポリクロー
ナル抗体とは異なり、単一のタンパク質から構成される
ために、特異な性質を持つものが多く、安定性も様々で
あるので、抗体の種類によりアルブミンの種類を適宜選
択して少なくとも１種類を利用することが好ましい。ま
たアルブミンの溶液中の濃度も抗体により決定される
が、通常１〜２０mg／mlとすることが好ましい。
牛血清アルブミン、ヒトアルブミン、オボアルブミン、
ラクトアルブミン等が挙げられるが、抗体がモノクロー
ナル抗体である場合は、抗血清から得られるポリクロー
ナル抗体とは異なり、単一のタンパク質から構成される
ために、特異な性質を持つものが多く、安定性も様々で
あるので、抗体の種類によりアルブミンの種類を適宜選
択して少なくとも１種類を利用することが好ましい。ま
たアルブミンの溶液中の濃度も抗体により決定される
が、通常１〜２０mg／mlとすることが好ましい。
【０００９】また、構造中にナフタレンスルホン酸を含
むアゾ系色素としては、例えばダイレクトグリーン１、
ダイレクトグリーン６、ダイレクトグリーン５９、ダイ
レクトブラック４、ダイレクトブラック２２、ダイレク
トブラック３８、ダイレクトブルー１、ダイレクトブル
ー６、ダイレクトブルー５３（エバンスブルー）、ダイ
レクトレッド２、ダイレクトレッド２８（コンゴーレッ
ド）、ダイレクトレッド７９等が挙げられる。
むアゾ系色素としては、例えばダイレクトグリーン１、
ダイレクトグリーン６、ダイレクトグリーン５９、ダイ
レクトブラック４、ダイレクトブラック２２、ダイレク
トブラック３８、ダイレクトブルー１、ダイレクトブル
ー６、ダイレクトブルー５３（エバンスブルー）、ダイ
レクトレッド２、ダイレクトレッド２８（コンゴーレッ
ド）、ダイレクトレッド７９等が挙げられる。
【００１０】このものは、単独では抗体の安定化に寄与
しないものであるが、アルブミン等と組み合わせること
により高い安定化作用を呈する。この色素の配合量は、
用いる抗体等により適宜決定されるが、通常、本発明溶
液中１〜１００μg ／mlとすることが好ましい。通常１
種類を用いればよいが、必要に応じ２種類以上を適当な
比率で併用してもよい。
しないものであるが、アルブミン等と組み合わせること
により高い安定化作用を呈する。この色素の配合量は、
用いる抗体等により適宜決定されるが、通常、本発明溶
液中１〜１００μg ／mlとすることが好ましい。通常１
種類を用いればよいが、必要に応じ２種類以上を適当な
比率で併用してもよい。
【００１１】抗体溶液には、上記必須成分の他、必要に
よりアジ化ナトリウム等の防腐剤や保存剤等を添加する
こともできる。
よりアジ化ナトリウム等の防腐剤や保存剤等を添加する
こともできる。
【００１２】本発明方法により抗体溶液を製造するに
は、常法により上記（１）、（２）及び（３）を混合す
ればよく、例えば、抗体をアルブミン１〜２０ｍｇ／ｍ
ｌを含有する溶液に溶解し、アゾ系色素を１〜１００μ
ｇ／ｍｌ加えることにより製造される。また抗体溶液を
調製し、その他の成分の溶液を調製し、この２者を混合
する方法でもよい。すなわち、（１）、（２）及び
（３）成分の添加、混合の順序は問わない。この後、必
要により防腐剤や保存剤を加え、溶液中の溶存酸素を除
去し、更に、遮光容器に充填すれば、安定な抗体溶液の
製品とすることができる。
は、常法により上記（１）、（２）及び（３）を混合す
ればよく、例えば、抗体をアルブミン１〜２０ｍｇ／ｍ
ｌを含有する溶液に溶解し、アゾ系色素を１〜１００μ
ｇ／ｍｌ加えることにより製造される。また抗体溶液を
調製し、その他の成分の溶液を調製し、この２者を混合
する方法でもよい。すなわち、（１）、（２）及び
（３）成分の添加、混合の順序は問わない。この後、必
要により防腐剤や保存剤を加え、溶液中の溶存酸素を除
去し、更に、遮光容器に充填すれば、安定な抗体溶液の
製品とすることができる。
【００１３】
【発明の効果】本発明の抗体の安定化方法によれば、抗
体を利用に便利な溶液の状態で安定に保存することがで
きる。
体を利用に便利な溶液の状態で安定に保存することがで
きる。
【００１４】
【実施例】以下、実施例を挙げて、本発明を更に詳細に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、実施例中で用いたモノクローナル抗体、Ｇ１
−Ｅ６は、特開昭６３−１８４０６４号公報に示されて
いるものであ。Ｃ２Ｈ５−Ｃ１０、３−１９−１１は、
同じ特開昭６３−１８４０６４号公報に示された方法と
同様な方法で別途分離されたモノクローナル抗体であ
る。また、抗カンジダ・アルビカンスプロテアーゼモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ）は、病原性酵母Ｃａｎｄｉｄ
ａ ａｌｂｉｃａｎｓの酸性プロテアーゼ（Ｆ．Ｍａｃ
ｄｎａｌｄ ａｎｄ Ｆ．Ｃ．Ｏｄｄｓ、Ｊ．Ｍｅｄ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１３、４２３−４３５、１９８
０）を、フロイント完全アジュバントと共にマウス（Ｂ
ａｌｂ／ｃ、メス）に免疫し、追加免疫後、脾臓細胞と
ミエローマ細胞（Ｘ６３−Ａｇ８．６．５．３）をポリ
エチレングリコールを用いて特開昭６３−１８４０６４
号公報に示された方法と同様な方法で融合させ、得られ
たモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを培養して採
取された抗体である。
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、実施例中で用いたモノクローナル抗体、Ｇ１
−Ｅ６は、特開昭６３−１８４０６４号公報に示されて
いるものであ。Ｃ２Ｈ５−Ｃ１０、３−１９−１１は、
同じ特開昭６３−１８４０６４号公報に示された方法と
同様な方法で別途分離されたモノクローナル抗体であ
る。また、抗カンジダ・アルビカンスプロテアーゼモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ）は、病原性酵母Ｃａｎｄｉｄ
ａ ａｌｂｉｃａｎｓの酸性プロテアーゼ（Ｆ．Ｍａｃ
ｄｎａｌｄ ａｎｄ Ｆ．Ｃ．Ｏｄｄｓ、Ｊ．Ｍｅｄ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１３、４２３−４３５、１９８
０）を、フロイント完全アジュバントと共にマウス（Ｂ
ａｌｂ／ｃ、メス）に免疫し、追加免疫後、脾臓細胞と
ミエローマ細胞（Ｘ６３−Ａｇ８．６．５．３）をポリ
エチレングリコールを用いて特開昭６３−１８４０６４
号公報に示された方法と同様な方法で融合させ、得られ
たモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを培養して採
取された抗体である。
【００１５】実施例１ ５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解したフルオ
レッセイン（ＦＩＴＣ）標識抗マイコプラズマ・ニュー
モニエモノクローナル抗体（Ｇ１−Ｅ６）の溶液（１ｍ
ｇ／ｍｌ）８ｍｌと、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）５０
０ｍｇ、塩化ナトリウム８５０ｍｇ、エバンスブルー４
ｍｇ、及びアジ化ナトリウム５０ｍｇを溶かした５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）９２ｍｌを混合し、全量
を１００ｍｌにした。この溶液を褐色ガラス瓶に１ｍｌ
ずつ分注した。
レッセイン（ＦＩＴＣ）標識抗マイコプラズマ・ニュー
モニエモノクローナル抗体（Ｇ１−Ｅ６）の溶液（１ｍ
ｇ／ｍｌ）８ｍｌと、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）５０
０ｍｇ、塩化ナトリウム８５０ｍｇ、エバンスブルー４
ｍｇ、及びアジ化ナトリウム５０ｍｇを溶かした５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）９２ｍｌを混合し、全量
を１００ｍｌにした。この溶液を褐色ガラス瓶に１ｍｌ
ずつ分注した。
【００１６】比較例１ ５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）に溶解した実施例１と
同じＦＩＴＣ標識抗マイコプラズマ・ニューモニエモノ
クローナル抗体溶液（１mg／ml）８mlと、ＢＳＡ５００
mg、塩化ナトリウム８５０mg、及びアジ化ナトリウム５
０mgを溶かした５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）９２ml
を混合し、全量を１００mlにした。この溶液を褐色ガラ
ス瓶に１mlずつ分注した。
同じＦＩＴＣ標識抗マイコプラズマ・ニューモニエモノ
クローナル抗体溶液（１mg／ml）８mlと、ＢＳＡ５００
mg、塩化ナトリウム８５０mg、及びアジ化ナトリウム５
０mgを溶かした５０mMリン酸緩衝液（pH７．０）９２ml
を混合し、全量を１００mlにした。この溶液を褐色ガラ
ス瓶に１mlずつ分注した。
【００１７】試験例１ 実施例１、比較例１の方法で製造した蛍光標識抗マイコ
プラズマ・ニューモニエモノクローナル抗体によるマイ
コプラズマ・ニューモニエ診断薬中のモノクローナル抗
体の活性を経時的にＥＬＩＳＡ法（酵素標識免疫吸着ア
ッセイ）で測定し、安定性を比較した。結果を表１に示
す。
プラズマ・ニューモニエモノクローナル抗体によるマイ
コプラズマ・ニューモニエ診断薬中のモノクローナル抗
体の活性を経時的にＥＬＩＳＡ法（酵素標識免疫吸着ア
ッセイ）で測定し、安定性を比較した。結果を表１に示
す。
【００１８】
【表１】
【００１９】実施例２ 以下の４種類の溶液を調製し、苛酷な条件下におけるモ
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
【００２０】
【表２】溶液Ａ：１／１５Ｍリン酸緩衝生理食塩液（pH
７．２）に溶解した抗マイコプラズマ・ニューモニエモ
ノクローナル抗体（Ｃ２Ｈ５−Ｃ１０、ＩｇＧ）溶液
（０．１mg／ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にコンゴーレ
ッドを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にコンゴーレッ
ドを溶解させた溶液。
７．２）に溶解した抗マイコプラズマ・ニューモニエモ
ノクローナル抗体（Ｃ２Ｈ５−Ｃ１０、ＩｇＧ）溶液
（０．１mg／ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にコンゴーレ
ッドを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にコンゴーレッ
ドを溶解させた溶液。
【００２１】以上の４種類の溶液を褐色のガラス瓶に分
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に７日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表３に
示した。
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に７日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表３に
示した。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例３ 以下の４種類の溶液を調製し、苛酷な条件下におけるモ
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
【００２４】
【表４】 溶液Ａ：１／１５Ｍリン酸緩衝生理食塩液（pH７．２）
に溶解した抗マイコプラズマ・ニューモニエモノクロー
ナル抗体（３−１９−１１、ＩｇＭ）溶液（０．１mg／
ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にエバンスブ
ルーを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にエバンスブル
ーを溶解させた溶液。
に溶解した抗マイコプラズマ・ニューモニエモノクロー
ナル抗体（３−１９−１１、ＩｇＭ）溶液（０．１mg／
ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にエバンスブ
ルーを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にエバンスブル
ーを溶解させた溶液。
【００２５】以上の４種類の溶液を褐色のガラス瓶に分
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に７日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表５に
示した。
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に７日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表５に
示した。
【００２６】
【表５】
【００２７】実施例４ 以下の４種類の溶液を調製し、苛酷な条件下におけるモ
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
ノクローナル抗体の安定化作用を検討した。
【００２８】
【表６】 溶液Ａ：１／１５Ｍリン酸緩衝生理食塩液（pH７．２）
に溶解した抗カンジダ・アルビカンスプロテアーゼモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ）溶液（０．１mg／ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にエバンスブ
ルーを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にエバンスブル
ーを溶解させた溶液。
に溶解した抗カンジダ・アルビカンスプロテアーゼモノ
クローナル抗体（ＩｇＧ）溶液（０．１mg／ml）。 溶液Ｂ：溶液Ａに５mg／mlの濃度にＢＳＡを溶解させた
溶液。 溶液Ｃ：溶液Ｂに０．００４mg／mlの濃度にエバンスブ
ルーを溶解させた溶液。 溶液Ｄ：溶液Ｂに０．０４mg／mlの濃度にエバンスブル
ーを溶解させた溶液。
【００２９】以上の４種類の溶液を褐色のガラス瓶に分
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に３日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表７に
示した。
注し、密栓したのち、５０℃の条件下に３日間放置し、
残存抗体活性をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を表７に
示した。
【００３０】
【表７】
【００３１】
Claims (1)
- 【請求項１】 抗体又は標識抗体の溶液に、アルブミン
及び構造中にナフタレンスルホン酸を含むアゾ系色素を
添加することを特徴とする抗体又は標識抗体の安定化方
法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4337478A JP2553445B2 (ja) | 1992-12-17 | 1992-12-17 | 抗体の安定化方法 |
| DE69325634T DE69325634T2 (de) | 1992-12-17 | 1993-12-14 | Stabile Antikörperlösung und Stabilisierung von Antikörpern |
| EP93120142A EP0602601B1 (en) | 1992-12-17 | 1993-12-14 | Stable antibody solution and stabilization of antibody |
| KR1019930027983A KR100263398B1 (ko) | 1992-12-17 | 1993-12-16 | 안정한 항체용액 및 항체의 안정화 |
| TW082110685A TW348217B (en) | 1992-12-17 | 1993-12-16 | Stable antibody solution and stabilization of antibody |
| CA002111603A CA2111603A1 (en) | 1992-12-17 | 1993-12-16 | Stable antibody solution and stabilization of antibody |
| US08/387,375 US5602234A (en) | 1992-12-17 | 1995-02-13 | Stable antibody solution and method for preparing same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4337478A JP2553445B2 (ja) | 1992-12-17 | 1992-12-17 | 抗体の安定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06186230A JPH06186230A (ja) | 1994-07-08 |
| JP2553445B2 true JP2553445B2 (ja) | 1996-11-13 |
Family
ID=18309028
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4337478A Expired - Lifetime JP2553445B2 (ja) | 1992-12-17 | 1992-12-17 | 抗体の安定化方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5602234A (ja) |
| EP (1) | EP0602601B1 (ja) |
| JP (1) | JP2553445B2 (ja) |
| KR (1) | KR100263398B1 (ja) |
| CA (1) | CA2111603A1 (ja) |
| DE (1) | DE69325634T2 (ja) |
| TW (1) | TW348217B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006069697A1 (en) * | 2004-12-30 | 2006-07-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Colorimetrically assessing peptide characteristics |
| WO2006079091A1 (en) * | 2005-01-24 | 2006-07-27 | Mallinckrodt Inc. | Methods of providing long-term stability to biocompatible optical dyes and bodily fluids |
| JP4965302B2 (ja) * | 2007-03-26 | 2012-07-04 | 東洋紡績株式会社 | 抗体の安定化方法 |
| US8003314B2 (en) | 2007-04-16 | 2011-08-23 | Diagnostic Hybrids, Inc. | Methods for direct fluorescent antibody virus detection in liquids |
| WO2015125501A1 (ja) * | 2014-02-24 | 2015-08-27 | 国立大学法人名古屋大学 | タンパク質凍結保存用保護剤 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1180957A (en) * | 1967-12-13 | 1970-02-11 | Sterling Winthrop Group Ltd | Improvements in or relating to Immunological Reagents for Diagnostic Techniques. |
| DE2364792A1 (de) * | 1973-01-15 | 1974-07-18 | South African Inventions | Verfahren zum reinigen von gammaglobulin |
| JPS56145222A (en) * | 1980-04-28 | 1981-11-11 | Toshiyuki Hamaoka | Improved antibody and its preparation |
| US4474893A (en) * | 1981-07-01 | 1984-10-02 | The University of Texas System Cancer Center | Recombinant monoclonal antibodies |
| US4748018A (en) * | 1984-02-07 | 1988-05-31 | Stolle Research & Development Corp. | Method of passive immunization of mammals using avian antibody |
| US4650772A (en) * | 1984-08-09 | 1987-03-17 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibody stabilization |
| JPS62289523A (ja) * | 1986-06-09 | 1987-12-16 | Green Cross Corp:The | 静脈投与用免疫グロブリンの加熱処理方法 |
| WO1992001808A1 (en) * | 1990-07-18 | 1992-02-06 | Dojin Iyaku-Kako Co., Ltd. | Reagent for diagnosing mycoplasma pneumoniae |
| JPH04173799A (ja) * | 1990-11-05 | 1992-06-22 | Sanyo Chem Ind Ltd | プロラクチン水溶液 |
-
1992
- 1992-12-17 JP JP4337478A patent/JP2553445B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-12-14 EP EP93120142A patent/EP0602601B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-12-14 DE DE69325634T patent/DE69325634T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-12-16 KR KR1019930027983A patent/KR100263398B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-12-16 CA CA002111603A patent/CA2111603A1/en not_active Abandoned
- 1993-12-16 TW TW082110685A patent/TW348217B/zh active
-
1995
- 1995-02-13 US US08/387,375 patent/US5602234A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR940013537A (ko) | 1994-07-15 |
| KR100263398B1 (ko) | 2000-08-01 |
| CA2111603A1 (en) | 1994-06-18 |
| EP0602601A3 (en) | 1995-05-24 |
| EP0602601A2 (en) | 1994-06-22 |
| TW348217B (en) | 1998-12-21 |
| US5602234A (en) | 1997-02-11 |
| DE69325634T2 (de) | 1999-12-09 |
| DE69325634D1 (de) | 1999-08-19 |
| EP0602601B1 (en) | 1999-07-14 |
| JPH06186230A (ja) | 1994-07-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6214984B1 (en) | Isolated nucleic acid encoding, and methods for preparing, antibody fragments | |
| RU98103237A (ru) | Стабильная изотоническая лиофилизированная протеиновая композиция | |
| JPH05501399A (ja) | 敗血症治療用組成物 | |
| JPS62500027A (ja) | エプスタイン、バールウィルス核抗原と免疫反応する抗体を産生する化学的に合成されたポリペプチド | |
| JPH02500004A (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクローナル抗体 | |
| Smith et al. | Gastric parietal cell H (+)-K (+)-ATPase microsomes are associated with isoforms of ankyrin and spectrin | |
| Arnheim et al. | Immunochemical resemblance between human leukemia and hen egg-white lysozyme and their reduced carboxymethyl derivatives | |
| Nisonoff et al. | Properties of crystallized rabbit anti-p-azobenzoate antibody | |
| JP2553445B2 (ja) | 抗体の安定化方法 | |
| Agodoa et al. | The appearance of nonlinear deposits of immunoglobulins in Goodpasture's syndrome | |
| Schubart et al. | Identification of a calcium-regulated insulinoma cell phosphoprotein as an islet cell keratin. | |
| DE4240056A1 (de) | Streptolysin O Peptidantigene und Verfahren zur Bestimmung von Streptolysin-Antikörper | |
| Janeway | Progress in immunology: Syndromes of diminished resistance to infection | |
| Aten et al. | Antigenic specificities of glomerular-bound autoantibodies in membranous glomerulopathy induced by mercuric chloride | |
| Daugharty et al. | Antibodies against staphylococcal teichoic acids and type-specific antigens in man | |
| CN102818896B (zh) | 一种基于特异抗体的硝基化修饰位点的检测方法及特异识别scot硝基化位点的抗体 | |
| JPH0213376A (ja) | 緑膿菌に対するモノクローナル抗体、ならびにその調製および使用 | |
| Swartzwelder et al. | Heart-reactive antibodies in rabbit anti-Streptococcus mutans sera fail to cross-react with Streptococcus mutans. | |
| AU662917B2 (en) | Antibodies to streptolysin O derivatives and variants | |
| Ruggeri et al. | Antibodies for denatured human H‐ferritin stain only reticuloendothelial cells within the bone marrow | |
| Lindquist et al. | NEPHRITIS INDUCED BY ANTILYMPHOCYTE SERUM AN ELECTRON MICROSCOPIC AND IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY | |
| Milgrom et al. | Antibodies in guinea-pigs immunized with kidney and lung basement membranes | |
| JPH0257177A (ja) | モノクローナル抗体産生細胞ラインおよびモノクローナル抗体 | |
| DE4238806A1 (en) | Methicillin-resistant staphylococcus aureus (MRSA)detection method - by detection of MRSA penicillin binding protein (PBP)2 antigen-antibody complex, and synthetic MRSA PBP2 peptides | |
| JP2000060551A (ja) | 抗プリオン抗体 |