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JP2025507889A - エクソンスキッピングのためのオリゴヌクレオチド組成物及びその方法 - Google Patents

エクソンスキッピングのためのオリゴヌクレオチド組成物及びその方法 Download PDF

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JP2025507889A
JP2025507889A JP2024552135A JP2024552135A JP2025507889A JP 2025507889 A JP2025507889 A JP 2025507889A JP 2024552135 A JP2024552135 A JP 2024552135A JP 2024552135 A JP2024552135 A JP 2024552135A JP 2025507889 A JP2025507889 A JP 2025507889A
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JP2024552135A
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English (en)
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シェリー フー，シャオ
リスター レイク，スティーブン
アンジェロ パンザラ，マイケル
ダイアン ラモア，サラ
ハリソン ハート，アンドリュー
スー，ダンリン
アンドリュー ボーマン，キース
護 清水
アドゥダ，ヴィンセント
ロウション アラム，ムハンマッド
ロス，フィリップ
ガオ，ジャンシン
チャン，イーリン
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Wave Life Sciences Pte Ltd
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Wave Life Sciences Pte Ltd
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Abstract

とりわけ、本開示は、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物を含む様々な技術並びにそのようなオリゴヌクレオチド組成物を製造及び使用するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、様々な状態、障害又は疾患、例えばデュシェンヌ筋ジストロフィーを予防又は治療するのに有用な技術を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、各々が全体として参照により本明細書に組み込まれる、２０２２年３月２日に出願された米国仮特許出願第６３／３１５，９５２号、２０２２年８月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／３９７，２２１号、２０２２年１１月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／４２４，４１８号及び２０２２年１２月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／４３３，７３３号に対する優先権を主張する。
背景
筋ジストロフィー（ＭＤ）は、経時的な（増加性の）骨格筋の弱体化及び崩壊を引き起こすことが報告されている筋肉の状態、疾患又は障害の群である。状態、疾患又は障害は、主にいずれの筋肉が影響を受けるか、脱力の程度、症状が始まる時期及び症状の悪化の速さが異なる。多くのＭＤ対象は、最終的に歩行できなくなる。多くの場合、筋ジストロフィーは、致死的である。一部の型は、中枢神経系を含む他の器官における問題とも関連する。いくつかの実施形態では、筋ジストロフィーは、デュシェンヌ（デュシェンヌ型）筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。いくつかの実施形態では、筋ジストロフィーは、ベッカー（ベッカー型）筋ジストロフィー（ＢＭＤ）である。
概要
アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）は、オリゴヌクレオチドゴロジルセン及びビルトラルセンを含む、ＤＭＤのための治療を承認し、ＤＭＤを含む筋ジストロフィーを治療するためのさらなる技術がアンメットニーズのままである。とりわけ、本発明の時点では、承認されたオリゴヌクレオチド薬物の臨床的有用性は、確立されていない。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、インビトロ及びマウスモデルにおけるエクソンスキッピング活性及びＤＭＤ機能回復を実証したオリゴヌクレオチド化合物である。構造的に、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ゴロジルセン及びビルトラルセンと異なる型のオリゴヌクレオチドに属する。例えば、ゴロジルセン及びビルトラルセンの両方がホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）である一方、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、２’－Ｆ及び２’－ＯＭｅ修飾オリゴヌクレオチドであり、ヌクレオチド間結合は、独立して、ホスホロチオエート、ｎ００１及び天然のリン酸結合である。さらに、キラル結合リン中心は、立体的に規制されておらず、ゴロジルセン及びビルトラルセンの両方が、それらのキラル結合リン中心が可能な立体配置（Ｒｐ又はＳｐ）の２つにランダムに存在する立体的に不規則な組成物として提供され、投与される。組成物は、それぞれゴロジルセン及びビルトラルセンに関して、３３００万（２２５）及び１００万（２２０）を超える種のジアステレオマーのランダムな混合物である。対照的に、ＷＶＥ－Ｎ５３１におけるキラル結合リンは、それぞれ独立して、立体的に規制されている。それぞれのホスホロチオエート結合の結合リンは、Ｓｐであり、それぞれのｎ００１結合の結合リンは、Ｒｐである。本明細書で実証されるとおり、ＷＶＥ－Ｎ５３１組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩が他のジアステレオマー又はその塩より高度に濃縮されている、キラル制御された組成物である。さらに、本開示前の本出願人の知識では、ｎ００１などのホスホリルグアニジン結合を含むオリゴヌクレオチドは、体系的に投与されておらず、治療的な使用のためにヒト対象で評価されていない。オリゴヌクレオチド、スボディルセンは、ゴロジルセン及びビルトラルセンよりＷＶＥ－Ｎ５３１に類似しており、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物としても製造され、投与された２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、ホスホロチオエート結合などの特定の化学部分を含むが、それは、ヒト臨床試験において、約４．５ｍｇ／ｋｇを含む評価用量で失敗した。
とりわけ、本開示は、ＤＭＤなどの筋ジストロフィーを治療するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象への臨床投与のために十分に安全であり、及びＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらすのに有効な用量及び投与レジメン、ＷＶＥ－Ｎ５３１の欠如と比較して野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能のレベルの改善を果たすことができる、トランケートされたＤＭＤポリペプチドの生成、ＤＭＤ機能の回復若しくは改善及び／又は臨床的有用性を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で実証されるとおり、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ヒトを含む霊長類対象におけるスボディルセンと比較して、特性及び／又は活性、例えばＡＵＣ、Ｃｍａｘ、組織分布及び／又は血漿半減期の改善を提供することができる。本明細書で示される様々な結果は、ＷＶＥ－Ｎ５３１が、ヒト対象におけるものを含む、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ変異と関連する状態、障害又は疾患を治療するために安全で効果的に利用され得ることを支持する。
いくつかの実施形態では、本開示は、筋ジストロフィー、例えばＤＭＤを治療する方法であって、それに罹患している対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇ（体重の１ｋｇ当たりのｍｇ）のＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、薬学的に許容される塩形態として投与される。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩形態として投与される。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１つ以上の薬学的に許容される塩形態を含む１つ以上の形態として投与され、全てのＷＶＥ－Ｎ５３１形態の総量は、遊離酸形態の約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇに等しい。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、医薬組成物で投与される。
いくつかの実施形態では、本開示は、筋ジストロフィー、例えばＤＭＤを治療する方法であって、それに罹患している対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、緩衝溶液であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、それは、リン酸緩衝溶液である。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、溶液中に溶解され、１つ以上の形態で存在し、全てのＷＶＥ－Ｎ５３１形態の総量は、遊離酸形態の約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇに等しい。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてトランケートされたＤＭＤポリペプチドを提供する方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、トランケートされた（野生型ＤＭＤタンパク質と比較して）ＤＭＤポリペプチドは、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされる。いくつかの実施形態では、そのようなｍＲＮＡは、エクソン５３に加えて、１つ以上の追加のエクソンを欠く場合がある。いくつかの実施形態では、そのようなトランケートされたＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を部分的に又は完全に提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有する。いくつかの実施形態では、対象は、筋ジストロフィー、例えばＤＭＤに罹患しているか又はそれになりやすい。
いくつかの実施形態では、２つ以上の用量が投与され、それぞれ独立して、本明細書に記載されるとおりの量、例えば約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい量である。いくつかの実施形態では、約２～１０用量が投与される。いくつかの実施形態では、１０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、それぞれの用量は、ほぼ同じである。
いくつかの実施形態では、２用量以上（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９又は１０用量以上）が約１週毎に投与される。いくつかの実施形態では、２用量以上（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９又は１０用量以上）が約２週毎に投与される。いくつかの実施形態では、２用量以上（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９又は１０用量以上）が約３、４、５、６、７、８、９又は１０週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約１週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約２週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約３週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約４週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約１ヶ月毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約５、６、７、８、９又は１０週毎に投与される。いくつかの実施形態では、３用量以上が約２週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、短い間隔（例えば、約２週毎）で最初に投与され、続いて長い間隔（例えば、約３、４、５、６、７、８、９又は１０週毎）に投与される。いくつかの実施形態では、２用量以上、例えば約２、３、４、５、６、７、８又は１０用量が約２週毎に投与された後、１用量以上は、それぞれ独立して、その以前の用量から約３、４、５、６、７、８、９又は１０週で投与される。いくつか実施形態では、約２、３、４、５、６、７、８、９又は１０用量が約２週毎に投与され、１用量以上が約３、４、５、６、７、８、９若しくは１０週毎又は約１ヶ月毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、最初の用量から約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６週間以上にわたって約２週毎に投与され、続いて、用量は、約３、４、５、６、７、８、９又は１０週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、最初の用量から約４、８、１２又は１６週間以上にわたって２週毎に投与され、続いて、用量は、約４週毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、最初の用量から約４、８、１２又は１６週間以上にわたって２週毎に投与され、続いて、用量は、約１ヶ月毎に投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約２週毎に最初に投与され、続いて最初の用量から約４週、８週、１２週又は１６週後、用量は、約４週毎又は約１ヶ月毎に投与される。いくつかの実施形態では、各用量は、独立して、ほぼ同じ、例えば約１０ｍｇ／ｋｇである。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物は、筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約２０～６０、例えば約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０分の静脈内注入として投与される。いくつかの実施形態では、注入は、約１、２、３又は４時間で投与される。いくつかの実施形態では、用量が欠落した場合、それは、予定された用量後に可能な限り早く投与され得る。
いくつかの実施形態では、対象は、小児対象である。いくつかの実施形態では、対象は、男児対象である。いくつかの実施形態では、対象は、５歳以上である。いくつかの実施形態では、対象は、１８歳以下である。いくつかの実施形態では、対象は、実施例に記載される組み入れ基準の１つ以上又は全てを満たす。いくつかの実施形態では、対象は、実施例に記載される組み入れ基準及び除外基準の１つ以上又は全てに基づいて選択される。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、臨床的に意義のある最大血漿濃度を達成することができる用量で投与される。
いくつかの実施形態では、対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物の最初の用量の少なくとも約６ヶ月（又は２４週）前にステロイドを投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物の最初の用量の少なくとも約６ヶ月（又は２４週）前にコルチコステロイドを投与される。いくつかの実施形態では、対象は、安定したコルチコステロイド療法レジメン中である。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドは、デフラザコートである。いくつかの実施形態では、対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物の第１の用量の少なくとも約１ヶ月前にステロイドを投与される。
いくつかの実施形態では、提供される技術（オリゴヌクレオチド、組成物、方法、用量、投与レジメンなど）は、１つ以上の所望の生物学的効果を提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、エクソン５３スキッピングを提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、臨床的に意義のあるレベルでエクソン５３スキッピングを提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、例えば、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされる、内部的にトランケートされているが、機能的なＤＭＤポリペプチドのレベルを上昇させる。いくつかの実施形態では、提供される技術は、例えば、トランケートされているが機能的なＤＭＤポリペプチドを介して、１つ以上の回復したＤＭＤ機能を提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、臨床的有用性を提供する。いくつかの実施形態では、疾患進行は、遅延されるか、遅くなるか又は妨げられる。いくつかの実施形態では、疾患進行は、１０メートル歩行試験によって評価されるとおり、遅延されるか、遅くなるか又は妨げられる。いくつかの実施形態では、提供される技術は、ベースラインと比較して肺機能の低下を低減する。いくつかの実施形態では、対象における筋力低下は、遅延されるか、遅くなるか又は妨げられる。いくつかの実施形態では、対象における筋肉量減少は、遅延されるか、遅くなるか又は妨げられる。いくつかの実施形態では、対象は、筋肉のジストロフィン評価において改善する。いくつかの実施形態では、対象は、ＤＭＤ評価において改善する。いくつかの実施形態では、改善は、ノース・スター歩行能力評価（ＮＳＡＡ）２．０、上肢のパフォーマンス（ＰＵＬ）２．０、４段昇段、手持ち式筋力測定及び肺機能検査を含む１つ以上の機能評価において達成される。いくつかの実施形態では、そのような評価は、そのような順序で実施される。いくつかの実施形態では、評価は、タイムドテスト（１０メートル歩行／走行時間、４段昇段時間及び床からの立ち上がり時間を含む）による下肢運動機能であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、評価は、手持ち式筋力計によって評価される上肢近位筋力であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、評価は、肺機能検査（最大流速［ＰＦＲ］、最大呼気流速［ＣＰＦ］及びＦＶＣ）であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、改善は、１つ以上又は全てのこれらの評価において独立して達成される。いくつかの実施形態では、評価は、実施例で開示されるものである。いくつかの実施形態では、改善は、ベースラインと比較される。いくつかの実施形態では、改善は、ＷＶＥ－Ｎ５３１投与前に比較される。いくつかの実施形態では、改善は、ＷＶＥ－Ｎ５３１投与による予測されるレベル、重症度及び／又は機能と比較される。いくつかの実施形態では、改善は、ＷＶＥ－Ｎ５３１投与の欠如と比較される。いくつかの実施形態では、改善は、参照組成物の投与と比較される。いくつかの実施形態では、参照組成物は、投与されるＷＶＥ－Ｎ５３１組成物と同等であるが、ＷＶＥ－Ｎ５３１を含有しないか又は少ない量のＷＶＥ－Ｎ５３１を含有する。
いくつかの実施形態では、提供される技術は、ベースラインと比較して歩行の喪失を低減する。
いくつかの実施形態では、提供される技術は、特定の期間にわたる投与後又は特定の数の用量後、正常レベルの約１％以上の、ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇をもたらす。いくつかの実施形態では、それは、約１％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約２％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約３％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約４％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約５％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約６％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約９％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１０％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１１％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１２％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１３％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１４％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１５％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１６％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１７％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１８％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１９％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約２０％以上である。いくつかの実施形態では、期間は、約１０～６０週である。いくつかの実施形態では、それは、約４週である。いくつかの実施形態では、それは、約８週である。いくつかの実施形態では、それは、約１０週である。いくつかの実施形態では、それは、約１２週である。いくつかの実施形態では、それは、約１３週である。いくつかの実施形態では、それは、約１４週である。いくつかの実施形態では、それは、約１５週である。いくつかの実施形態では、それは、約１６週である。いくつかの実施形態では、それは、約２０週である。いくつかの実施形態では、それは、約２４週である。いくつかの実施形態では、それは、約２５週である。いくつかの実施形態では、それは、約２８週である。いくつかの実施形態では、それは、約３０週である。いくつかの実施形態では、それは、約３２週である。いくつかの実施形態では、それは、約３５週である。いくつかの実施形態では、それは、約３６週である。いくつかの実施形態では、それは、約３７週である。いくつかの実施形態では、それは、約３８週である。いくつかの実施形態では、それは、約４０週である。いくつかの実施形態では、それは、約４５週である。いくつかの実施形態では、それは、約４８週である。いくつかの実施形態では、それは、約４９週である。いくつかの実施形態では、それは、約５０週である。いくつかの実施形態では、それは、約７２週である。いくつかの実施形態では、それは、約７３週である。いくつかの実施形態では、それは、約７４週である。いくつかの実施形態では、それは、約９６週である。いくつかの実施形態では、それは、約９７週である。いくつかの実施形態では、それは、約９８週以上である。いくつかの実施形態では、それは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ヶ月である。いくつかの実施形態では、用量の特定の数は、約５用量である。いくつかの実施形態では、それは、約６用量である。いくつかの実施形態では、それは、約７用量である。いくつかの実施形態では、それは、約８用量である。いくつかの実施形態では、それは、約９用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１０用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１１用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１２用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１３用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１４用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１５用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１６用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１７用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１８用量である。いくつかの実施形態では、それは、約１９用量である。いくつかの実施形態では、それは、約２０用量である。いくつかの実施形態では、それは、約２１用量である。いくつかの実施形態では、それは、約２２用量である。いくつかの実施形態では、それは、約２３用量である。いくつかの実施形態では、それは、約２４用量である。いくつかの実施形態では、それは、約２５用量である。いくつかの実施形態では、それは、約３０用量である。いくつかの実施形態では、それは、約３５用量である。いくつかの実施形態では、それは、約４０用量である。いくつかの実施形態では、それは、約４５用量である。いくつかの実施形態では、それは、約４８用量である。いくつかの実施形態では、それは、約４９用量である。いくつかの実施形態では、それは、約５０用量以上である。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、２週毎に投与される。
いくつかの実施形態では、提供される技術は、有害事象を引き起こさないか若しくは有害事象のレベルが低いか、又は重度及び／又は重篤な有害事象がないか若しくはレベルが低い。いくつかの実施形態では、提供される技術と関連する有害事象は、許容できるか又は管理しやすい。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬及び／又は製剤を特徴付けするための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬及び／又は製剤を特徴付けするための出荷規格を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、提供されるプロセスによって製造されるＷＶＥ－Ｎ５３１、その組成物、その原薬及び／又は製剤を提供する。
図面の簡単な説明
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤製造プロセスのための例示的な流れ図。 ＷＶＥ－Ｎ５３１は、非ヒト霊長類で強力なエクソン５３スキッピングを提供する。例のレジメン。サル動物は、ＰＢＳ又は３、７若しくは２５ｍｇ／ｋｇ ＷＶＥ－Ｎ５３１（１用量当たりｎ＝２）の６ｘ週毎のＩＶ注入を受けた。Ｗ：週。３８日目に剖検された。 ＷＶＥ－Ｎ５３１は、非ヒト霊長類で強力なエクソン５３スキッピングを提供する。ＲＴ－ＰＣＲによって評価されるエクソン５３スキッピング。健康な動物は、正常なレベルのジストロフィンを有するが、エクソンスキッピングは、スキップされた転写物の検出によって評価され得る。 試験デザインの例の概略図。略語：ＤＳＭＢ＝データ安全性モニタリング委員会、Ｎ＝患者の数。 ＷＶＥ－Ｎ５３１は、スボディルセンと比較してヒト対象で血漿濃度の上昇を実証する。ヒト対象は、１、３若しくは６ｍｇ／ｋｇ ＷＶＥ－Ｎ５３１又は５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのＩＶ注入を受けた。注入後、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はスボディルセンの血漿濃度（μｇ／ｍｌ）は、少なくとも４２日間にわたって経時的に測定された。 ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ヒト対象で血漿濃度の上昇を実証する。ヒト対象は、１、３、６又は１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１のＩＶ注入を受けた。注入後、ＷＶＥ－Ｎ５３１の血漿濃度（μｇ／ｍｌ）は、少なくとも１０５日間にわたって経時的に測定された。 ＷＶＥ－Ｎ５３１は、スボディルセンと比較してヒト対象で血漿濃度の上昇を実証する。ヒト対象は、１、３、６若しくは１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１又は５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのＩＶ注入を受けた。注入後、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はスボディルセンの血漿濃度（μｇ／ｍｌ）は、少なくとも２１日間にわたって経時的に測定された。 例の試験デザインの概略図。
定義
本明細書で使用する場合、別段の指示がない限り、下記の定義が適用されるものとする。本開示のために、化学元素は、Handbook of Chemistry and Physics, 75th Edの元素周期表、ＣＡＳ方式に従って特定される。さらに、有機化学の一般的な原理は、“Organic Chemistry”, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999及び“March’s Advanced Organic Chemistry”, 5th Ed., Ed.: Smith, M. B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001に記載されている。
本開示において本明細書で使用する場合、文脈から明らかでない限り、（ｉ）用語「１つ（a）」又は「１つ（an）」は、「少なくとも１つ」を意味すると理解され得、（ｉｉ）用語「又は」は、「及び／又は」を意味すると理解され得、（ｉｉｉ）用語「含んでいる」、「含む」、「包含している」（「限定されない」とともに使用されるかどうかにかかわらず）及び「包含する」（「限定されない」とともに使用されるかどうかにかかわらず）は、それら自体によって提示されるか又は１つ以上の追加の構成要素若しくは工程とともに提示されるかにかかわらず、項目分けされた構成要素又は工程を包含すると理解され得、（ｉｖ）用語「別の」は、少なくとも追加の／第２の１つ以上を意味すると理解され得、（ｖ）範囲が与えられる場合、端点が含まれる。
別段の指定がない限り、オリゴヌクレオチド及びその要素（例えば、塩基配列、糖修飾、ヌクレオチド間結合、結合リンの立体化学など）の説明は、５’から３’の順である。別段の指定がない限り、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、塩形態、特に、薬学的に許容される塩形態を含む様々な形態で提供され及び／又は利用され得る。当業者が本開示を読んだ後に理解するとおり、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ナトリウム又はカリウム塩などの塩として提供され得る。当業者が理解するとおり、いくつかの実施形態では、組成物内の個々のオリゴヌクレオチドは、そのような組成物（例えば、液体組成物）内であっても同じ構成及び／又は構造のものであるとみなされ得、特定のそのようなオリゴヌクレオチドは、特定の瞬間に塩形態を含む異なる形態（溶解され得、及びオリゴヌクレオチド鎖は、例えば、液体組成物中にあるときにアニオン形態として存在し得る）である可能性がある。例えば、当業者は、所与のｐＨにおいて、オリゴヌクレオチド鎖に沿った個々のヌクレオチド間結合が酸（Ｈ）形態又は複数の可能な塩形態の１つ（例えば、ナトリウム塩又は調製物若しくは組成物中に存在し得るイオンに応じて異なるカチオンの塩）であり得ることを理解し、それらの酸形態（例えば、存在する場合には全てのカチオンをＨで置き換える）が同じ構成及び／又は構造である限り、そのような個々のオリゴヌクレオチドは、適宜同じ構成及び／又は構造であるとみなされ得ることを理解するであろう。
およそ：本明細書で使用する場合、用語「約」及び「およそ」は、当業者によって理解されるとおり、標準的な変分を許容することが理解され得る。いくつかの実施形態では、数に関連して用語「およそ」又は「約」は、概して、特に指定されない限り又は文脈上特に明らかでない限り、その数のいずれの方向にも（その数より大きい又はより小さい）５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の範囲内に入る数値を含むものと解釈される。いくつかの実施形態では、範囲は、±５％である。いくつかの実施形態では、範囲は、±１０％である。
投与レジメン：本明細書で使用する場合、「投与レジメン」又は「治療レジメン」は、対象に個別に、典型的には時間を空けて投与される一組の単位用量（典型的には２用量以上）を指す。いくつかの実施形態では、所与の治療用薬剤には推奨投与レジメンがあり、これは１用量以上を含み得る。いくつかの実施形態では、投与レジメンは複数の用量を含み、そのそれぞれは、互いに同じ長さの期間だけ隔てられ、いくつかの実施形態では、投与レジメンは、複数の用量及び個々の用量を隔てる少なくとも２つの異なる期間を含む。いくつかの実施形態では、投与レジメン内にある全ての用量は、同じ単位用量の量である。いくつかの実施形態では、投与レジメン内の異なる用量は、異なる量である。いくつかの実施形態では、投与レジメンは第１の用量値の第１の用量を含み、続いて第１の用量値と異なる第２の用量値の１つ以上のさらなる用量を含む。いくつかの実施形態では、投与レジメンは第１の用量値の第１の用量を含み、続いて第１の用量値と同じ第２の用量値の１つ以上のさらなる用量を含む。
医薬組成物：本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、１つ以上の薬学的に許容される担体とともに製剤化された活性薬剤を指す。いくつかの実施形態では、活性薬剤は、関連性のある集団に投与したとき、制御された治療効果を実現する確率が統計的に有意であることを示す治療レジメンにおける投与に適切な単位用量の分量で存在する。
薬学的に許容される：本明細書で使用する場合、語句「薬学的に許容される」は、適切な医学的判断の範囲内において、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応又は他の問題若しくは合併症を起こさず、合理的なベネフィット／リスク比に対応した化合物、材料、組成物及び／又は剤形を指す。
薬学的に許容される担体：本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される担体」は、ある器官又は身体の部分から別の器官又は身体の部分に対象化合物を運ぶか又は輸送することに関与する液体若しくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤又は材料を被包する溶媒などの薬学的に許容される材料、組成物又はビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と相溶性があり、及び対象に有害でないという意味で「許容され」なければならない。
薬学的に許容される塩：用語「薬学的に許容される塩」は、本明細書で使用する場合、医薬に関連する使用に適切なそのような化合物の塩、すなわち、適切な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応などを起こさず、合理的なベネフィット／リスク比に対応した、ヒト及び下等動物の組織と接触して使用するのに適した塩を指す。薬学的に許容される塩は、当技術分野でよく知られている。例えば、S. M. Bergeらは、薬学的に許容される塩について、J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977)で詳細に説明している。いくつかの実施形態では、提供される化合物は２つ以上の酸性基を含み、例えば、提供されるオリゴヌクレオチドは、２つ以上の酸性基を（例えば、天然リン酸結合及び／又は修飾ヌクレオチド間結合に）含み得る。いくつかの実施形態では、そのような化合物の薬学的に許容される塩又は一般に塩は、同じであるか又は異なり得る２つ以上のカチオンを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩（又は一般に塩）において、十分な酸性度を有するそれぞれの酸性基は、独立して、その塩形態として存在する（例えば、天然のリン酸結合及びホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドにおいて、天然のリン酸結合及びホスホロチオエートヌクレオチド間結合の各々は、独立して、その塩形態で存在する）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、提供されるオリゴヌクレオチドのナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、提供されるオリゴヌクレオチドのナトリウム塩であり、それぞれの酸性結合、例えばそれぞれの天然のリン酸結合及びホスホロチオエートヌクレオチド間結合は、ナトリウム塩形態（全てのナトリウム塩）として存在する。
対象：本明細書で使用する場合、用語「対象」又は「試験対象」は、本開示に従い、例えば実験、診断、予防及び／又は治療を目的として、提供される化合物又は組成物が投与される任意の生物を指す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害及び／又は状態に罹患していてもよく、及び／又はそれになりやすくてもよい。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト対象である。
実質的に：本明細書で使用する場合、用語「実質的に」は、目的の特性又は特徴の全体的な又はほぼ全体的な範囲又は程度を示す定性的条件を指す。生物学分野の当業者は、生物学的及び化学的事象が完了に到り、及び／又は完全になるまで進行するか、又は絶対的な結果を達成若しくは回避することが、たとえあったとしても極めて稀であることを理解するであろう。したがって、本明細書で使用される用語「実質的に」は、多くの生物学的及び／又は化学的現象に固有の完全性の潜在的欠如をとらえるために使用される。
罹患している：疾患、障害及び／又は状態に「罹患している」個体は、疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状を有すると診断されており、及び／又はそのような症状を呈する。
なりやすい：疾患、障害及び／又は状態に「なりやすい」個体は、一般の個体のメンバーよりも疾患、障害及び／又は状態を発症するリスクが高い個体である。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／又は状態になりやすい個体は、疾患、障害及び／又は状態と診断されていない場合がある。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／又は状態になりやすい個体は、疾患、障害及び／又は状態の症状を示す場合がある。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／又は状態になりやすい個体は、疾患、障害及び／又は状態の症状を示さない場合がある。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／又は状態になりやすい個体は、疾患、障害及び／又は状態を発症することになる。いくつかの実施形態では、疾患、障害及び／又は状態になりやすい個体は、疾患、障害及び／又は状態を発症しないことになる。
全身：語句「全身投与」、「全身投与される」、「末梢投与」及び「末梢投与される」は、本明細書で使用する場合、それが被投与者の系に入り込むような化合物又は組成物の投与を指して、その当技術分野で理解される意味を有する。
治療剤：本明細書で使用する場合、語句「治療剤」は、対象への投与時に治療効果を有し、及び／又は所望の生物学的及び／又は薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、治療剤は、疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を緩和し、改善し、軽減し、阻害し、予防し、その発生を遅延させ、その重症度を低減し、及び／又はその発生率を低減するために使用することができる任意の物質である。
治療有効量：いくつかの実施形態では、用語「治療有効量」は、治療レジメンの一部として投与された場合に所望の生物学的応答を誘発する物質（例えば、治療剤、組成物及び／又は製剤）の量を意味する。いくつかの実施形態では、物質の治療有効量は、疾患、障害及び／又は状態に罹患しているか又はそれになりやすい対象に投与されるとき、疾患、障害及び／又は状態を治療し、診断し、予防し、及び／又はその発症を遅らせるのに十分な量である。当業者によって理解されるとおり、物質の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達されることになる物質、標的細胞又は組織などのような要因に応じて変動し得る。例えば、疾患、障害及び／又は状態を治療するための製剤中の化合物の有効量は、疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を軽減し、改善し、緩和し、阻害し、予防し、その発症を遅らせ、その重症度を低減し、及び／又はその発生率を低減する量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、単一用量で投与され、いくつかの実施形態では、複数回の単位用量が治療有効量を送達するために必要となる。いくつかの実施形態では、単一用量は注入であり、これは最大１時間以上かかる場合がある。
治療する：本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療」又は「治療すること」という用語は、疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を部分的に又は完全に軽減し、改善し、緩和し、阻害し、予防し、その発症を遅らせ、その重症度を低減し、及び／又はその発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。治療は、疾患、障害及び／又は状態の徴候を示さない対象に対して施され得る。いくつかの実施形態では、治療は、例えば、疾患、障害及び／又は状態と関連する病変を発症するリスクを減少させるために、疾患、障害及び／又は状態の初期の徴候のみを示すの対象に施され得る。
キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物：用語「キラル制御された（立体制御された又は立体規制された）オリゴヌクレオチド組成物」、「キラル制御された（立体制御された又は立体規制された）核酸組成物」などは、本明細書で使用されるとき、１）共通の塩基配列、２）共通の骨格結合のパターン、３）共通の骨格キラル中心のパターン、及び４）共通の骨格リン修飾のパターン（特定の型のオリゴヌクレオチド）を共有する複数のオリゴヌクレオチド（又は核酸、キラル制御されたオリゴヌクレオチド又はキラル制御された核酸）を含む組成物を指し、ここで、複数のオリゴヌクレオチド（又は核酸）は、１つ以上のキラルなヌクレオチド間結合に同じ立体化学を共有する（キラル制御されたヌクレオチド間結合、そのキラル結合リンがＲｐ又はＳｐであり、キラル制御されていないヌクレオチド間結合のようにランダムなＲｐ及びＳｐ混合物でない）。キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物中の複数のオリゴヌクレオチド（又は核酸）のレベルは、ランダムではない（予め規定される、制御される）。キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、通常、キラル制御されたオリゴヌクレオチド調製による１つ以上のキラルヌクレオチド間結合の立体選択的な形成を通じて（例えば、本開示に例示されるとおりの不斉補助剤を使用する、不斉補助剤又はキラル触媒を使用して立体選択性を意図的に制御しようとしない従来のホスホラミダイトに基づくオリゴヌクレオチド合成など、キラル制御されない（立体的に不規則な、非立体選択的な、ラセミ体の）オリゴヌクレオチド合成と比較して）調製される。キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、共通の塩基配列、共通の骨格結合のパターン及び共通の骨格リン修飾のパターンを有するオリゴヌクレオチドの実質的にラセミの調製物と比べて、複数のオリゴヌクレオチドに関して濃縮されている。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、１）塩基配列、２）骨格結合のパターン、３）骨格キラル中心のパターン、及び４）骨格リン修飾のパターンによって定義される特定のオリゴヌクレオチド型の複数のオリゴヌクレオチドを含み、それは、同じ塩基配列、骨格結合のパターン及び骨格リン修飾のパターンを有するオリゴヌクレオチドの実質的にラセミの調製物と比べて、特定のオリゴヌクレオチド型のオリゴヌクレオチドに関して濃縮されている。当業者は容易に理解するとおり、そのような濃縮は、実質的にラセミの調製物と比較して、それぞれのキラル制御されたヌクレオチド間結合で、より高いレベルの結合リンが所望の立体配置を有するという点で特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、それぞれのキラル制御されたヌクレオチド間結合は、独立して、キラル結合リンに関して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のジアステレオ純度を有する。いくつかの実施形態では、各々は、独立して、少なくとも９０％のジアステレオ純度を有する。いくつかの実施形態では、各々は、独立して、少なくとも９５％のジアステレオ純度を有する。いくつかの実施形態では、各々は、独立して、少なくとも９７％のジアステレオ純度を有する。いくつかの実施形態では、各々は、独立して、少なくとも９８％のジアステレオ純度を有する。いくつかの実施形態では、複数のオリゴヌクレオチドは、同じ構成を有する。いくつかの実施形態では、複数のオリゴヌクレオチドは、同じ構成及び立体化学を有し、構造的に同一である。
いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物中の複数のオリゴヌクレオチドは、同じ塩基配列、存在する場合には同じ核酸塩基、糖及びヌクレオチド間結合修飾並びに同じ立体化学（Ｒｐ又はＳｐ）を１つ以上のキラル制御されたヌクレオチド間結合の結合リンキラル中心で独立に共有するが、特定の結合リンのキラル中心の立体化学は、異なり得る。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物中の全てのオリゴヌクレオチドの約０．１％～１００％、（例えば、約１％～１００％、５％～１００％、１０％～１００％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０～１００％、９０～１００％、９５～１００％、５０％～９０％又は約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％又は少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％）は、複数のオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、共通の塩基配列を共有するキラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物中の全てのオリゴヌクレオチドの約０．１％～１００％、（例えば、約１％～１００％、５％～１００％、１０％～１００％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０～１００％、９０～１００％、９５～１００％、５０％～９０％又は約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％又は少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％）は、複数のオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、共通の塩基配列、共通の骨格結合パターン及び共通の骨格リン修飾パターンを共有するキラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物中の全てのオリゴヌクレオチドの約０．１％～１００％、（例えば、約１％～１００％、５％～１００％、１０％～１００％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０～１００％、９０～１００％、９５～１００％、５０％～９０％又は約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％又は少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％）は、複数のオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物中の全てのオリゴヌクレオチド又は共通の塩基配列を共有する組成物中の全てのオリゴヌクレオチド（例えば、複数のオリゴヌクレオチド型又は１つのオリゴヌクレオチド型の）又は共通の塩基配列、共通の骨格結合のパターン及び共通の骨格リン修飾のパターンを共有する組成物中の全てのオリゴヌクレオチド（例えば、複数のオリゴヌクレオチド型又は１つのオリゴヌクレオチド型）又は共通の塩基配列、共通の塩基修飾のパターン、共通の糖修飾のパターン、共通のヌクレオチド間結合型のパターン及び／又は共通のヌクレオチド間結合修飾のパターンを共有する組成物中の全てのオリゴヌクレオチド（例えば、複数のオリゴヌクレオチド型又は１つのオリゴヌクレオチド型）又は同じ構成を共有する組成物中の全てのオリゴヌクレオチドの約０．１％～１００％、（例えば、約１％～１００％、５％～１００％、１０％～１００％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０～１００％、９０～１００％、９５～１００％、５０％～９０％又は約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％又は少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％）は、複数のオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、パーセンテージは、少なくとも（ＤＰ）ＮＣＩであり、ＤＰは、８５％～１００％から選択されるパーセンテージであり、ＮＣＩは、キラル制御されたヌクレオチド間結合の数である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも８５％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも９０％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも９５％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも９６％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも９７％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも９８％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、少なくとも９９％である。いくつかの実施形態では、ＤＰは、結合リンのキラル中心のキラル制御されたヌクレオチド間結合のジアステレオ純度を反映する。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド間結合の結合リンのキラル中心のジアステレオ純度は、通常、そのようなヌクレオチド間結合及びヌクレオチド間結合によって連結されている２つのヌクレオシド単位を含む適切な二量体を使用して評価され得る。いくつかの実施形態では、複数のオリゴヌクレオチドは、約１～５０個（例えば、約１～１０、１～２０、５～１０、５～２０、１０～１５、１０～２０、１０～２５、１０～３０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０個）のキラルヌクレオチド間結合で同じ立体化学を共有する。いくつかの実施形態では、複数のオリゴヌクレオチドは、約０．１％～１００％（例えば、約１％～１００％、５％～１００％、１０％～１００％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０～１００％、９０～１００％、９５～１００％、５０％～９０％、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは１００％又は少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％）のキラルヌクレオチド間結合で同じ立体化学を共有する。いくつかの実施形態では、各キラルヌクレオチド間結合は、キラル制御されたヌクレオチド間結合であり、組成物は、完全にキラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物である。いくつかの実施形態では、全てのキラルヌクレオチド間結合がキラル制御されたヌクレオチド間結合であるというわけではなく、組成物は、部分的にキラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物である。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、所定のレベルの個別のオリゴヌクレオチド又は核酸型を含む。例えば、いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、１つのオリゴヌクレオチド型を所定のレベルで含む（例えば、上記のとおり）。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、２つ以上のオリゴヌクレオチド型をそれぞれ独立して所定のレベルで含む。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、複数のオリゴヌクレオチド型をそれぞれ独立して所定のレベルで含む。いくつかの実施形態では、キラル制御されたオリゴヌクレオチド組成物は、あるオリゴヌクレオチド型のオリゴヌクレオチドの組成物であり、この組成物は、所定のレベルのそのオリゴヌクレオチド型の複数のオリゴヌクレオチドを含む。
特定の実施形態の詳細な説明
とりわけ、本開示は、筋ジストロフィーを治療するための、例えばエクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する対象のある量の本明細書に記載されるＷＶＥ－Ｎ５３１を対象に投与することによる治療の方法を提供する。ジストロフィンは、筋肉機能で重要な役割を果たし、様々な筋肉関連疾患がこの遺伝子の変異形態によって特徴付けられる。特定の実施形態では、本明細書に記載される方法は、転写物、例えば筋肉のジストロフィン、例えばＤＭＤ及びＢＭＤで見出される変異したジストロフィン遺伝子形態などのヒトジストロフィン遺伝子の変異形態のｍＲＮＡでエクソンスキッピングを誘導するために使用され得る。いくつかの実施形態では、提供される技術は、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、そのようなＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされるＤＭＤポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、そのようなＤＭＤポリペプチドの生成は、いくつかの実施形態では、部分的に、いくつかの実施形態では、完全に、１つ以上のＤＭＤ機能を回復させる。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、エクソン５３スキッピング及びジストロフィンタンパク質の回復を誘導することができる。エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異は、ＤＭＤを有する対象のおよそ８％で生じることが報告されている。当業者が理解するとおり、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすい様々なＤＭＤ変異が報告されており、変異がエクソン５３スキッピングに影響を受けやすいかどうかを決定するために様々な技術が利用可能である。いくつかの実施形態では、Δ３～５２、Δ４～５２、Δ５～５２、Δ６～５２、Δ９～５２、Δ１０～５２、Δ１１～５２、Δ１３～５２、Δ１４～５２、Δ１５～５２、Δ１６～５２、Δ１７～５２、Δ１９～５２、Δ２１～５２、Δ２３～５２、Δ２４～５２、Δ２５～５２、Δ２６～５２、Δ２７～５２、Δ２８～５２、Δ２９～５２、Δ３０～５２、Δ３１～５２、Δ３２～５２、Δ３３～５２、Δ３４～５２、Δ３５～５２、Δ３６～５２、Δ３７～５２、Δ３８～５２、Δ３９～５２、Δ４０～５２、Δ４１～５２、Δ４２～５２、Δ４３～５２、Δ４５～５２、Δ４７～５２、Δ４８～５２、Δ４９～５２、Δ５０～５２、Δ５１～５２、Δ５２、Δ５４～５８、Δ５４～６１、Δ５４～６３、Δ５４～６４、Δ５４～６６、Δ５４～７６、Δ５４～７７などのＤＭＤ変異は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすい。いくつかの実施形態では、変異は、Δ４５～５２である。いくつかの実施形態では、変異は、Δ４７～５２である。いくつかの実施形態では、変異は、Δ４８～５２である。いくつかの実施形態では、変異は、Δ４９～５２である。いくつかの実施形態では、変異は、Δ５０～５２である。いくつかの実施形態では、変異は、Δ５１～５２である。いくつかの実施形態では、変異は、Δ５２を含む。いくつかの実施形態では、変異は、Δ５２である。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、リーディングフレームを回復させるためにＤＭＤの効果的なエクソン５３スキッピングを媒介し、その結果、短いが少なくとも部分的に機能的なジストロフィンが生成され得る（得られるジストロフィンタンパク質は、必ずしもジストロフィンの「野生型」形態ではないが、トランケートされているにもかかわらず、ジストロフィンの機能的な形態であり、ＷＶＥ－Ｎ５３１／エクソン５３スキッピングの欠如と比較して１つ以上のジストロフィン機能のレベルの上昇をもたらす）。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、高い筋肉濃度、例えば様々な筋肉で例えば約又は少なくとも約５μｇ／ｇ、８μｇ／ｇ、１０μｇ／ｇ、１５μｇ／ｇ、２０μｇ／ｇ、２５μｇ／ｇ、３０μｇ／ｇ、３３μｇ／ｇ、３５μｇ／ｇ、４０μｇ／ｇ、４５μｇ／ｇ、５０μｇ／ｇ、５５μｇ／ｇ、６０μｇ／ｇ、６５μｇ／ｇ、７０μｇ／ｇ、７５μｇ／ｇ、８０μｇ／ｇ、８５μｇ／ｇ、９０μｇ／ｇなどをもたらす。いくつかの実施形態では、そのような筋肉濃度は、初回投与の約６週間後及び／又は約３回の投与後の時点でもたらされ、各用量は、約１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１である。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、例えば、約又は少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％などのレベルでエクソン５３スキッピングをもたらす。いくつかの実施形態では、エクソンスキッピングは、初回投与の約６週間後及び／又は約３回の投与後の時点でもたらされ、各用量は、約１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１である（用量は、ゴロジルセン及び／又はビルトラルセンより著しく少ない）。
いくつかの実施形態では、本開示は、筋肉細胞中のＤＭＤでエクソン５３スキッピングを誘導するためにＷＶＥ－Ｎ５３１を使用することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、筋肉細胞中の機能的なジストロフィンタンパク質のレベルを上昇させるためにＷＶＥ－Ｎ５３１を使用することを含む方法を提供する。それは、筋ジストロフィー、特に、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすい筋ジストロフィーのそれらの形態の予防及び治療に有用である。とりわけ、本明細書に記載される方法は、筋ジストロフィーを有する対象のために改善された治療選択肢を提供し、他の方法、例えば他のオリゴヌクレオチド治療薬を使用する方法より著しく及び実用的な利点を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてエクソンスキッピングを誘導することによって筋ジストロフィーを治療するための改善された方法に関する。いくつかの実施形態では、対象におけるＤＭＤ中のエクソン５３スキッピングは、本明細書に記載されるとおりの有効量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することによって誘導される。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてジストロフィンポリペプチド及び／又はその活性のレベルを回復させること／上昇させることによって（例えば、機能的なジストロフィンタンパク質のレベルを回復させること／上昇させることによって）筋ジストロフィーを治療するための改善された方法に関する。
いくつかの実施形態では、本開示は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有する対象においてＤＭＤを治療する方法であって、例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい有効用量においてＷＶＥ－Ｎ５３１（任意選択により組成物、例えば医薬製剤又は剤形の一部として）を好適な頻度（例えば、１週毎、２週毎、３週毎、４週毎、５週毎、６週毎、７週毎、８週毎、９週毎又は１０週毎）で投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、罹患している対象においてＤＭＤを治療する方法であって、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有し、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてＤＭＤエクソンスキッピングをもたらす方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてエクソン５３がスキップされたＤＭＤ転写物のレベルを上昇させる方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてトランケートされたＤＭＤポリペプチドのレベルを上昇させる方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法を提供する。いくつかの実施形態では、トランケートされたＤＭＤポリペプチドは、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされる。いくつかの実施形態では、そのようなｍＲＮＡは、エクソン５３に加えて１つ以上の追加のエクソンを欠く場合がある。いくつかの実施形態では、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有する。いくつかの実施形態では、対象は、筋ジストロフィー、例えばＤＭＤに罹患しているか又はそれになりやすい。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１の各用量は、独立して、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を独立して含む医薬組成物で投与され、各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、様々な形態で投与され得る。例えば、多くの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、塩形態で投与される。いくつかの実施形態では、組成物中に単一の形態が存在する。いくつかの実施形態では、ある用量中に単一の形態が存在する。いくつかの実施形態では、形態は、薬学的に許容される塩形態である。いくつかの実施形態では、形態は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、組成物中に２つ以上の形態が存在する。いくつかの実施形態では、ある用量中に２つ以上の形態が存在する。いくつかの実施形態では、２つ以上の形態の各々は、独立して、薬学的に許容される塩形態である。いくつかの実施形態では、それらの１つは、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、リン酸緩衝食塩水中に溶解されたＷＶＥ－Ｎ５３１を含む液体組成物である。いくつかの実施形態では、溶液中に１つ以上の型のカチオンが存在する。いくつかの実施形態では、各々は、独立して、Ｈ＋又は金属カチオンである。いくつかの実施形態では、金属カチオンは、Ｎａ＋である。いくつかの実施形態では、金属カチオンは、Ｋ＋である。いくつかの実施形態では、それぞれの金属カチオンは、独立して、Ｎａ＋又はＫ＋である。
いくつかの実施形態では、用量は、約１～２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１～５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約５～２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約５～１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１０～２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１０～１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１５～２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約４ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約６ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約７ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約８ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約９ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１４ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１６ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１７ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１８ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約１９ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量は、約２０ｍｇ／ｋｇである。
いくつかの実施形態では、用量は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、緩衝液中の本明細書に記載されるとおりのＷＶＥ－Ｎ５３１溶液である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、等張性である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるとおりのリン酸緩衝食塩水中のＷＶＥ－Ｎ５３１溶液である。
いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９又は５０以上）の用量が投与される。いくつかの実施形態では、約１０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約２０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約３０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約４０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約５０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約６０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約７０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約８０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約９０用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約１００用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約２００用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、約５００用量以上が投与される。いくつかの実施形態では、各用量は、独立して、本明細書に記載されるとおりの約１～２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、各用量は、独立して、本明細書に記載されるとおりのＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与される。いくつかの実施形態では、２つ以上の用量は、ほぼ同じｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、各用量は、ほぼ同じｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、２つ以上の用量に関して投与される医薬組成物は、構成成分及びそれらの相対的な量に関してほぼ同じである。いくつかの実施形態では、全ての用量に関して投与される医薬組成物は、構成成分及びそれらの相対的な量に関してほぼ同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の先の用量は、独立して、１つ以上の後の用量より少ない。いくつかの実施形態では、１つ以上の先の用量は、独立して、１つ以上の後の用量より多い。
いくつかの実施形態では、用量は、約１週毎、又は約２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０毎、又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０ヶ月毎に投与される。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、約２週毎に投与され、各用量は、独立して、本明細書に記載されるとおりである。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、約４週毎に投与され、各用量は、独立して、本明細書に記載されるとおりである。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、約４週以上毎に投与され、各用量は、独立して、本明細書に記載されるとおりである。いくつかの実施形態では、各用量の間隔（ある用量とその前又は後の用量との間の時間）は、ほぼ同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の先の用量の間隔は、独立して、１つ以上の後のものより長い。いくつかの実施形態では、１つ以上の先の用量の間隔は、独立して、１つ以上の後のものより短い。
いくつかの実施形態では、「約」は、＋／－１％（値の９９％～１０１％）である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－２％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－３％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－４％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－５％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－６％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－７％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－８％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－９％である。いくつかの実施形態では、それは、＋／－１０％である。
別段の指定がない限り、ＷＶＥ－Ｎ５３１の量、濃度、用量などは、遊離酸形態のものである。
量、濃度、用量などは、通常、純度補正される。いくつかの実施形態では、純度は、％面積に基づいて本明細書に記載されるとおりのＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される。
Vyondys 53（商標）（ゴロジルセン）は、エクソンスキッピングを介してジストロフィン生成を増加させることが意図されるホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）サブクラスのオリゴヌクレオチドである。ゴロジルセンは、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の確認された変異を有する患者の治療のために米国で２０１９年に承認された。承認は、３０ｍｇ／ｋｇ／週での治療の４８週後の正常レベルの０．９２％（標準偏差［ＳＤ］１．０１）のジストロフィンレベルのベースラインからの平均変化に基づいた。別のＰＭＯサブクラスエクソンスキッピングＡＳＯであるViltepso（商標）（ビルトラルセン）は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ患者の治療のために２０２０年に米国で承認された。承認は、８０ｍｇ／ｋｇ／週の治療の２５週後に測定される標準レベルの５．３％（ＳＤ４．５）の平均増加を伴ってジストロフィン生成の観察された増加にも基づいた。ゴロジルセン及びビルトラルセンの両方は、ジストロフィン生成の代替エンドポイントにおける変化に基づいて米国の迅速承認の仕組みを介して承認され、いずれの薬物の臨床的有用も、承認時にＤＭＤを有する患者で依然として実証されていない。米国における継続承認は、検証的試験における検証時の臨床的有用性を条件とする。本発明の時点では、いずれの薬物も英国又は欧州連合（ＥＵ）で承認されていない。
とりわけ、提供される技術は、ゴロジルセン及び／又はビルトラルセンと比較して、例えば単回用量が少ない、総用量が少ない、投与頻度が少ない、ＤＭＤにおけるエクソン５３スキッピングの改善、機能的なＤＭＤポリペプチドのレベルが高い、臨床結果の改善などの様々な利点を提供する。
ジストロフィン
いくつかの実施形態では、ジストロフィン（ＤＭＤ）遺伝子若しくはその産物又はそのバリアント若しくは部分は、ＤＭＤ、ＢＭＤ、ＣＭＤ３Ｂ、ＤＸＳ１４２、ＤＸＳ１６４、ＤＸＳ２０６、ＤＸＳ２３０、ＤＸＳ２３９、ＤＸＳ２６８、ＤＸＳ２６９、ＤＸＳ２７０、ＤＸＳ２７２、ＭＲＸ８５又はジストロフィン；外部ＩＤ：ＯＭＩＭ：３００３７７ ＭＧＩ：９４９０９；HomoloGene：２０８５６；GeneCards：ＤＭＤ；ヒトにおいて：Entrez：１７５６；Ensembl：ＥＮＳＧ０００００１９８９４７；UniProt：Ｐ１１５３２；ＲｅｆＳｅｑ（ｍＲＮＡ）：ＮＭ＿０００１０９；ＮＭ＿００４００６；ＮＭ＿００４００７；ＮＭ＿００４００９；ＮＭ＿００４０１０；ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）：ＮＰ＿０００１００；ＮＰ＿００３９９７；ＮＰ＿００４０００；ＮＰ＿００４００１；ＮＰ＿００４００２；位置（ＵＣＳＣ）：Ｃｈｒ Ｘ：３１．１－３３．３４Ｍｂ；マウスにおいて：Entrez：１３４０５；Ensembl：ＥＮＳＭＵＳＧ００００００４５１０３；UniProt：Ｐ１１５３１；ＲｅｆＳｅｑ（ｍＲＮＡ）：ＮＭ＿００７８６８；ＮＭ＿００１３１４０３４；ＮＭ＿００１３１４０３５；ＮＭ＿００１３１４０３６；ＮＭ＿００１３１４０３７；ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）：ＮＰ＿００１３００９６３；ＮＰ＿００１３００９６４；ＮＰ＿００１３００９６５；ＮＰ＿００１３００９６６；ＮＰ＿００１３００９６７；位置（ＵＣＳＣ）：Ｃｈｒ Ｘ：８２．９５－８５．２１Ｍｂと称され得る。
ジストロフィンは、筋肉細胞に見出されることが報告されており、筋繊維を強化し、保護するのに非常に重要である。正常なジストロフィンタンパク質は、ジストロフィン－糖タンパク質複合体と呼ばれるタンパク質複合体の一部であると報告され、様々な報告によれば、これは骨格筋に構造的安定性を提供し、収縮及び弛緩中に損傷から筋肉を保護する。加えて、ジストロフィンは、膜貫通シグナル伝達機能及び身体活動に対する血管運動反応の調節を介して細胞生存に必須であると報告されている。
ＤＭＤ遺伝子は、報告によれば、Ｘ染色体上の遺伝的スペースの２３０万ｂｐにわたって分布する７９個のエクソンを含有するが、およそ１４，０００ｂｐ（＜１％）のみがタンパク質（コード配列）への翻訳のために使用されることが報告されている。遺伝子配列の約９９．５％であるイントロン配列は、２３０万ｂｐの最初の異核ＲＮＡ転写物からスプライシングされて、ジストロフィンタンパク質生成のための全ての重要な情報を含む成熟した１４，０００ｂｐのｍＲＮＡをもたらすことが報告されている。いくつかの実施形態では、ＤＭＤを有する対象は、野生型ＤＭＤ ｍＲＮＡの適切な構築及び／又は野生型ジストロフィンタンパク質の生成を妨げるＤＭＤ遺伝子中の変異を有し、ＤＭＤを有する対象は、その筋肉で顕著なジストロフィン欠損を示す場合が多い。
いくつかの実施形態では、ジストロフィン転写物、例えばｍＲＮＡ又はタンパク質は、選択的スプライシングに関連するか又はそれから生成されるものを包含する。例えば、ジストロフィン遺伝子の少なくとも１６個の選択的転写物は、骨格筋、脳及び心臓組織におけるＤＭＤ遺伝子のスプライシングパターンの分析に従って報告された。
ジストロフィンは、いくつかのアイソフォームを有することが報告されている。いくつかの実施形態では、ジストロフィンは、特定のアイソフォームを指す。少なくとも３つの全長ジストロフィンアイソフォームが報告されており、各々は、組織特異的プロモーターによって制御される。筋肉アイソフォームは、主に骨格筋に発現するが、平滑筋及び心筋にも発現すると報告されており、脳ジストロフィンは、皮質ニューロンに特異的であるが、心臓及び小脳ニューロンにも検出され得ると報告されており、プルキンエ細胞型は、小脳ジストロフィンのほぼ全てを占めると報告されている。選択的スプライシングは、報告によれば、ジストロフィン多様化のための手段を提供する：遺伝子の３’領域は、報告によれば、脳神経細胞、心臓プルキンエ線維及び平滑筋細胞で組織特異的な転写物をもたらす選択的スプライシングを受ける一方、選択的スプライシングの１２個のパターンは、骨格筋における遺伝子の５’領域で報告されている。
いくつかの実施形態では、ジストロフィンｍＲＮＡ、遺伝子又はタンパク質は、復帰変異体のバージョンである。
ＤＭＤ遺伝子における様々な変異は、筋ジストロフィーを引き起こすことができ、及び／又は引き起こすことが報告された。大規模の欠失（１つ以上のエクソン）の形態における変異は、全てのＤＭＤ遺伝子変異のおよそ３分の２を占めると報告され、残存する変異は、重複及び小規模な欠失、挿入、点変異又はスプライシング変異に起因すると報告されている。特定の報告によれば、欠失は、通常、エクソン４５及び５５間のホットスポット領域中にクラスター化され、ジストロフィンの翻訳を妨げる。ＤＭＤ遺伝子変異から生じるジストロフィンタンパク質の不在又は欠損は、ジストロフィン－糖タンパク質複合体を破壊することが報告され、筋膜の脆弱性の増大、慢性的な筋肉損傷、炎症、脂肪及び線維性組織による筋繊維の置き換え並びにその後の筋肉機能の消失を引き起こす。
筋ジストロフィー
筋ジストロフィー（ＭＤ）は、経時的な（増加性の）骨格筋の弱体化及び崩壊を引き起こす筋肉の状態、疾患又は障害の群のいずれかである。状態、疾患又は障害は、主にいずれの筋肉が影響を受けるか、脱力の程度、症状が始まる時期、症状の悪化の速さが異なる。多くのＭＤ対象が最終的に歩行できなくなる。多くの場合、筋ジストロフィーは、致死的である。一部の型は、中枢神経系を含む他の器官における問題とも関連する。いくつかの実施形態では、筋ジストロフィーは、デュシェンヌ（デュシェンヌ型）筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。いくつかの実施形態では、筋ジストロフィーは、ベッカー（ベッカー型）筋ジストロフィー（ＢＭＤ）である。
いくつかの実施形態では、デュシェンヌ筋ジストロフィーの症状は、筋消耗と関連する筋力低下であり、随意筋、特に、臀部、骨盤領域、大腿、肩部及びふくらはぎのものが最初に冒される。筋力低下は、腕部、頸部及び他の領域でも後に起こる可能性がある。ふくらはぎは、肥大する場合が多い。症状は、通常、６歳前に現れ、乳児期早期に現れる場合がある。他の身体的な症状は、歩き方、足踏み又は走り方のぎこちなさ（いくつかの症例では、対象は、ふくらはぎの筋緊張の高まりに起因して前足で歩く傾向がある）、頻繁な転倒、疲労、運動技能の困難（例えば、走ること、片足跳び、跳ぶこと）、腰椎過前弯（場合により股関節屈筋の短縮につながる）、全体的な姿勢及び／又は歩き方、足踏み又は走り方の異常、アキレス腱の筋拘縮及びハムストリングの機能障害、進行性の歩行困難、筋繊維の変形、舌及びふくらはぎの筋肉の偽肥大（肥大）、神経行動障害（例えば、ＡＤＨＤ）、学習障害（例えば、失読症）及び特定の認知能力（例えば、短期言語記憶）における非進行性の欠点のより高いリスク（これは脳内のジストロフィンの欠如又は機能不全の結果であると考えられている）、歩行能力の最終的な消失（通常、１２歳まで）、骨格変形（一部の症例では脊柱側弯症を含む）並びに横になった状態又は座位からの起き上がりの困難である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、１つ以上の症状の発症を遅延させ、その進行を遅くし、その重症度を低減し、及び／又はそれを予防する。
いくつかの実施形態では、ベッカー筋ジストロフィー（ＢＭＤ）は、短縮されているがインフレームの転写物をもたらして、トランケートされているが部分的に機能的なタンパク質の生成をもたらす変異によって引き起こされる。そのような部分的に機能的なタンパク質は、重要なアミノ末端ドメイン、システインリッチドメイン及びＣ末端ドメインを保持するが、通常、機能的意義が低いものであると報告された中央のロッドドメインの要素を欠くことが報告された。England et al.1990 Nature, 343, 180-182。
いくつかの実施形態では、ＢＭＤ表現型は、正確な変異及び生成されるジストロフィンのレベルに応じて、軽度のＤＭＤから実質的に無症状の範囲にある。Yin et al.2008 Hum. Mol. Genet. 17: 3909-3918。
いくつかの実施形態では、アウト・オブ・フレーム変異を有するジストロフィー対象は、一般に、より重度のデュシェンヌ筋ジストロフィーと診断され、インフレーム変異を有するジストロフィー対象は、一般に、より重度ではないベッカー筋ジストロフィーと診断される。
筋ジストロフィーのための治療としてのエクソンスキッピング
エクソンスキッピングは、１つ以上の標的化されたエクソンをスキップし、リーディングフレームを回復させる細胞機構を誘導して、内部的にトランケートされているが機能的なジストロフィンポリペプチドの生成をもたらすことができる。様々なエクソンスキッピング手法では、オリゴヌクレオチドは、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）で相補的配列を標的化するために結合することができ、最終転写物からエクソンを排除するスプライシング機構と関わる。ＤＭＤを有する対象では、この手法は、重度のＤＭＤ症状を、ベッカー筋ジストロフィー（ＢＭＤ）を有する患者に見られるものなどのより軽度の症状に変換することによって疾患進行を遅くする場合があり、患者は、歩行時間が長くなり、より長い平均余命を有する。
様々なＤＭＤ遺伝子型は、エクソン５３スキッピングを含むエクソンスキッピングに影響を受けやすい。エクソンスキッピングは、ＤＭＤ ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させて、より短いが機能的なジストロフィンタンパク質の生成をもたらすことができる。エクソン５３スキッピングは、限定されないが、エクソン４３～５２、４５～５２、４７～５２、４８～５２、４９～５２、５０～５２、５１～５２又はエクソン５２単独のＤＭＤ遺伝子における欠失を有する患者に適用可能である。いくつかの報告によれば、ＤＭＤを有する患者のおよそ８％～１０％は、エクソン５３スキッピングによって治療され得る。エクソン４４、４５、５１又は５３のスキッピングに影響を受けやすい欠失を有する患者のコホートにおける３６ヶ月の長期の自然経過データは、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすい患者が特に、他の亜群と比較して、減退の発生が早く現れ、劇的な機能低下（例えば、歩行の喪失）のより高いリスクを有することを示した。
いくつかの実施形態では、エクソンスキッピングは、適切なリーディングフレームを回復させるか若しくは維持し、及び／又は少なくとも部分的に改善されたか又は完全に回復した生物活性をもたらす人工的に内部的にトランケートされたＤＭＤタンパク質を作り出す。いくつかの実施形態では、スキップされたエクソンを有するジストロフィン転写物から生成される内部的にトランケートされたＤＭＤタンパク質は、例えば、アウト・オブ・フレーム欠失を有するジストロフィン転写物から生成される末端がトランケートされたＤＭＤタンパク質より機能的である。
いくつかの実施形態では、スキップされたエクソンを有するジストロフィン転写物から生成される内部的にトランケートされたＤＭＤタンパク質は、例えば、アウト・オブ・フレーム欠失を有するジストロフィン転写物から生成される末端がトランケートされたＤＭＤタンパク質を分解することができるナンセンス媒介性の崩壊に対してより抵抗性である。
いくつかの実施形態では、ＤＭＤ対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の投与前にＤＭＤ遺伝子型について分析され、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有することが確認される。いくつかの実施形態では、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異は、１つ以上の核酸塩基の変化（例えば、異なる核酸塩基によって置き換えられる）、挿入及び／又は欠失などであるか又はそれを含み、エクソン５３スキッピングは、エクソン５３スキッピングを有しないものと比較して改善された機能をもたらすことができるＤＭＤポリペプチドを生成することができる。
本開示前に、Emflaza（登録商標）（デフラザコート）は、ＤＭＤの治療のために米国で承認されたコルチコステロイドである。Emflazaは、０．９ｍｇ／ｋｇ／日の用量で１２週の治療期間後に筋力を改善することが示された（Medical Research Councilセールによって測定されるとおりの平均変化０．１５ポイント）。６～１２歳のＤＭＤを有する小児における長期のプラセボ対照試験では、２年目の平均筋力スコアに対してデフラザコートの著しい効果はなかった。Emflazaは、欧州連合（ＥＵ）でＤＭＤの治療のために承認されていない一方、デフラザコートなどのコルチコステロイドは、一般に、筋力の低下を遅くし、歩行運動及び呼吸機能を延長するために、ＥＵでは、ＤＭＤを有する患者において適応外で使用されている。しかしながら、コルチコステロイドの長期的な使用は、免疫抑制並びに感染症のリスクの上昇、内分泌機能の変化、高血圧、白内障、骨の脱ミネラル化、消化管穿孔及び小児における発達遅滞などの重度の副作用と関連付けられている。さらに、コルチコステロイドは、ＤＭＤで根底にある遺伝的欠陥を補正しない。
Vyondys 53（商標）（ゴロジルセン）は、エクソン５３スキッピングを介してジストロフィン生成を増加させることが意図されるホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）サブクラスのオリゴヌクレオチドである。ゴロジルセンは、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の確認された変異を有する患者の治療のために米国で２０１９年に承認された。承認は、３０ｍｇ／ｋｇ／週での治療の４８週後の正常レベルの０．９２％（標準偏差［ＳＤ］１．０１）のジストロフィンレベルのベースラインからの平均変化に基づいた。別のＰＭＯサブクラスエクソンスキッピングオリゴヌクレオチドであるViltepso（商標）（ビルトラルセン）は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすい変異を有するＤＭＤ患者の治療のために２０２０年に米国及び日本で承認された。承認は、８０ｍｇ／ｋｇ／週の治療の２５週後に測定される標準レベルの５．３％（ＳＤ４．５）の平均増加を伴ってジストロフィン生成の観察された増加にも基づいた。ゴロジルセン及びビルトラルセンの両方は、ジストロフィン生成の代替エンドポイントにおける増加に基づいて米国の迅速承認の仕組みを介して承認され、いずれの薬物も、ＤＭＤを有する患者で臨床的有用性をもたらすことが示されていない。米国における継続承認は、検証的試験における検証時の臨床的有用性を条件とする。いずれの薬物も本開示前に英国（ＵＫ）又はＥＵで承認されていない。
同様に、一部の患者は、エクソン５３スキッピングオリゴヌクレオチド及びTranslarna（商標）（アタルレン）又はExondys 51（登録商標）（エテプリルセン）の両方による治療に適格になる変異を有し得る。アタルレンは、米国（ＵＳ）における使用のために承認されていないナンセンス変異のリボソームリードスルーを増強することが意図される小分子である。それは、５歳以上の歩行可能な患者でジストロフィン遺伝子におけるナンセンス変異から生じるＤＭＤの治療のためにＥＵで条件付販売承認を受けた。アタルレンの臨床的有効性は、歩行不能な患者で確立されておらず、追加の証拠がＥＵにおけるその継続承認を支持するために要求される。アタルレンの使用は、ナンセンス変異の低い有病率及び歩行可能な患者へのその限定的な効能を考慮すると、ＤＭＤ集団の小さいパーセンテージに限定されることになると予測される。エテプリルセンは、エクソンスキッピングを介してジストロフィン生成を増加させることが意図されるＰＭＯサブクラスのオリゴヌクレオチドである。エテプリルセンは、エクソン５１スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の確認された変異を有する患者の治療のために米国で承認された。承認は、エテプリルセン治療に応答するジストロフィン発現の推定が可能であった唯一の試験では、ジストロフィンタンパク質レベルの平均が正常な筋肉のジストロフィンレベルの０．９３％及びトランケートされたジストロフィン発現の中央値の０．１％の増加の検出に基づいた。この薬物は、本開示前にＥＵで承認されていない。
ゴロジルセンの血漿Ｃｍａｘ及び血漿濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、用量に比例して増加し、半減期は、およそ３時間であり、血漿蓄積は観察されない。ビルトラルセンの第１相試験に基づいて、尿中排泄率は、２４時間以内に投与された総薬物の７０％～８０％の除去を示し、短い半減期（＜２４時間）を示した。全ての患者の腎臓機能は、正常範囲内にあった。エテプリルセンは、血漿から迅速に排除され、薬物排出の大部分は、２４時間以内に生じる。注入の終了の２４時間後、エテプリルセンの平均濃度は、血漿中の薬物の最大（ピーク）濃度（Ｃｍａｘ）の０．０７％であった。エテプリルセンの腎クリアランスは、投与された用量の６０％超を占め、３～４時間の終末半減期（ｔ１／２）を有する。週に１回の投与中のエテプリルセンの蓄積は観察されていない。
とりわけ、本開示は、ＤＭＤを治療し、ＤＭＤエクソン５３スキッピングを誘導し、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ転写物のレベルを上昇させ、エクソン５３スキッピングからトランケートされたＤＭＤポリペプチドを生成するか若しくはそのレベルを上昇させ、１つ以上ＤＭＤ機能などのレベルを上昇させ、及び／又は１つ以上ＤＭＤ機能などを回復させるための技術であって、対象に本開示によるＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物を投与することを含み、対象がエクソン５３スキッピングに影響を受けやすい変異したＤＭＤを有する技術を提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、１つ以上の既存の承認された薬物を超える様々な利点、例えば改善された安全性、忍容性、クリアランス、蓄積、エクソンスキッピング、臨床効果及び／又は１つ以上の他の薬物動態若しくは薬力学的態様を提供する。
ＷＶＥ－Ｎ５３１
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、本明細書に記載され得る（当業者が理解するとおり、別段の指定がない限り、５’～３’）：
ｆＣ＊ＳｆＵ＊ＳｆＣｎ００１ＲｆＣ＊ＳｆＧ＊ＳｆＧｎ００１ＲｆＵ＊ＳｆＵ＊ＳｍＣｆＵ＊ＳｍＧ＊ＳｆＡ＊ＳｍＡｆＧ＊ＳｆＧ＊ＳｆＵ＊ＳｆＧｎ００１ＲｆＵ＊ＳｆＵ＊ＳｆＣ
ｍ：２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオシド、
ｆ：２’－Ｆ修飾ヌクレオシド、
＊Ｓ：Ｓｐホスホロチオエート結合、及び
ｎ００１Ｒ：Ｒｐ Ｎ－（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）ホスホロアミダート結合。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、認められるオリゴヌクレオチド命名法によって命名され得る：（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－シチジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｒｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－（（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）アミノ）－シチジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－シチジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－グアニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｒｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－（（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）アミノ－グアニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－２’－Ｏ－メチルシチジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－Ｏ－メチル－Ｐ－チオ－グアニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－アデニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－２’－Ｏ－メチルアデニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－グアニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－グアニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｒｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－（（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）アミノ）－グアニリル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－（Ｓｐ）－２’－フルオロ－２’－デオキシ－Ｐ－チオ－ウリジルイル－（Ｏ３’→Ｏ５’）－２’－フルオロ－２’－デオキシシチジン。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、組成物、例えば医薬組成物中で提供され、及び／又は１つ以上の薬学的に許容される塩として投与される。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩を提供する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である。
ＷＶＥ－Ｎ５３１及びそのヘキサデカナトリウム塩の分子式及び分子量は、以下に記載される：
分子式（遊離酸形態）：Ｃ２０６Ｈ２５０Ｆ１７Ｎ７８Ｏ１０９Ｐ１９Ｓ１４
分子量（遊離酸形態）：６９２３．０２ｇ／モル
分子式（ヘキサデカナトリウム塩形態）：Ｃ２０６Ｈ２３４Ｆ１７Ｎ７８Ｏ１０９Ｐ１９Ｓ１４Ｎａ１６
分子量（ヘキサデカナトリウム塩形態）：７２７４．７３ｇ／モル。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１７個の立体的に規制されたヌクレオチド間結合を有し、そのうちの１４個は、Ｓｐホスホロチオエート結合として同定され、３個は、Ｒｐ Ｎ－（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）ホスホロアミダート結合として同定される。そのヌクレオチド間結合は、５’－ＳＳＲＳＳＲＳＳＯＳＳＳＯＳＳＳＲＳＳ－３’（式中、「Ｓ」、「Ｒ」及び「Ｏ」は、それぞれＳｐのホスホロチオエート結合、Ｒｐ Ｎ－（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）ホスホロアミダート結合及びリン酸結合を表す）として示され得る。Ｎ－（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）ホスホロアミダート結合は、ｎ００１結合と称され得る。
ＷＶＥ－Ｎ５３１の構造は、式Ｉ：
Figure 2025507889000001
 として示され得る。
ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩は、式Ｉ－ａ：
Figure 2025507889000002
 として記載され得る。
式Ｉ及びＩ－ａでは、構造のサイズに起因して、構造は、４行で示され、その各々に５つのヌクレオチド単位が存在する。これらの式に示されるとおり、ＷＶＥ－Ｎ５３１における各結合は、独立して、Ｓｐホスホロチオエート結合、Ｒｐ ｎ００１結合又は天然のリン酸結合であり、ＷＶＥ－Ｎ５３１塩では、ホスホロチオエート結合及びリン酸結合の酸性水素原子は、独立して、カチオンと置き換えられ得、例えば、ヘキサデカナトリウム塩では、各々は、ナトリウムと置き換えられる。
ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩の水溶液は、通常、無色透明から淡黄色溶液であり、ＵＶによって決定されるとおり約１５０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度を有し得る。いくつかの実施形態では、精製水中のＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩のｐＨは、６．０～８．０の範囲である。
ＷＶＥ－Ｎ５３１の吸光係数は、２６０ｎｍで１８６，４８６Ｍ－１ｃｍ－１（水中で決定される）である。別段の記述がない限り、ＵＶがＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度／量を測定するために利用されるとき、２６０ｎｍが利用され、この数が計算で利用される。６９１８．７２ｇ／モル（遊離酸形態）の分子量を使用して、これは、２７．０ＯＤ／ｍｇの吸光係数に等しい。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ＩＶ注入のための希釈のために等張溶液として供給される。いくつかの実施形態では、注入の総体積は、対象の体重に基づいて１００～５００ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入は、およそ１時間かけて施される。いくつかの実施形態では、注入は、例えば、忍容性を高めるために、約３時間まで延長される。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１の希釈された注入溶液は、保存剤を含有せず、遅延を伴わないか又は希釈の４時間以内に投与される。いくつかの実施形態では、０．４５％の塩化ナトリウム注射液が希釈のために利用される。いくつかの実施形態では、０．９％の塩化ナトリウム注射液が希釈のために利用される。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ＷＶＥ－Ｎ５３１が他のジアステレオマーより濃縮されるキラル制御された組成物として提供され、投与される。
とりわけ、本開示は、高純度のＷＶＥ－Ｎ５３１を提供する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、約７０％～９０％、例えば約７０％～８５％、約７０％～８０％、約７５％～８５％又は約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％若しくは９０％の純度のレベルを有する。いくつかの実施形態では、純度のレベルは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７０％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７１％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７２％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７３％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７４％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７５％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７６％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７７％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７８％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約７９％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８０％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８１％以上である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８２％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８３％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８４％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８５％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８６％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８７％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８８％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約８９％である。いくつかの実施形態では、それは、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり約９０％以上である。いくつかの実施形態では、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣは、セットＡパラメーターを利用する。いくつかの実施形態では、純度は、所与の波長、例えば２６０ｎｍ付近の％面積である。
いくつかの実施形態では、不純物のレベルは、約１０％～３０％以下である。いくつかの実施形態では、それは、１０％～３０％である。いくつかの実施形態では、それは、１５％～３０％である。いくつかの実施形態では、それは、２０％～３０％である。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、それは、約３０％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２９％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２８％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２７％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２６％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２５％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２４％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２３％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２２％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２１％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約２０％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１９％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１８％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１７％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１６％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１５％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１４％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１３％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１２％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１１％以下である。いくつかの実施形態では、それは、約１０％以下である。いくつかの実施形態では、不純物のレベルは、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを使用して評価される。いくつかの実施形態では、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣは、セットＡパラメーターを利用する。いくつかの実施形態では、純度は、所与の波長、例えば２６０ｎｍ付近の％面積である。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物を特徴付けるための様々な技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物の純度を評価するための技術を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物を放出するための技術を提供する。
製造
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩、例えばＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその薬学的に許容される塩形態及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を製造するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤を提供する。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩、例えばＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩は、優良医薬品製造基準（ｃＧＭＰ）規制に従って化学的に製造される。
いくつかの実施形態では、提供される技術は、固相オリゴヌクレオチド合成、固体支持体からの粗製の保護されたオリゴヌクレオチドの切断、保護基の除去（脱保護）、分取アニオン交換（ＡＥＸ）クロマトグラフィー精製、濃縮及び／又は脱塩を含む複数工程のプロセスを含む。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩の立体化学は、合成のための出発材料及び合成プロセスの制御を通して確立される。例えば、いくつかの実施形態では、提供される技術は、それぞれ確実に意図される立体的に規制されたＳｐホスホロチオエート及びＲｐ ｎ００１結合が得られるようにカップリング工程中に不斉補助剤（Ｌ）－ＤＰＳＥ及び（Ｌ）－ＰＳＭから調製されるホスホラミダイトの使用を含む。
原薬としてのＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩のための有用な製造プロセス及び特定の結果が例として以下に記載される。
有用な製造プロセス
いくつかの実施形態では、製造プロセスは、以下の合成サイクルに示されるとおりにホスホラミダイト化学反応を使用して、固体支持体上で３種類のヌクレオチド間結合（ホスホジエステル、立体的に規制されたホスホロチオエート及び立体的に規制されたｎ００１）の組み合わせを含有するオリゴヌクレオチドを合成することからなる。立体的に規制されたホスホロチオエート又は立体的に規制されたｎ００１を導入するための各サイクルは、５’－脱トリチル化、カップリング、それぞれ暴露された不斉補助剤二級アミンのキャップ付加（キャップ付加－１）、チオール化又はイミド化及び未反応の５’－ヒドロキシル基のキャップ付加（キャップ付加－２）からなる。ホスホジエステルを導入するための各サイクルは、脱トリチル化、カップリング、酸化及びキャップ付加－２からなる。それぞれのカップリング反応は、適切なホスホラミダイトの活性化及び支持体に固定化された保護されたヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの遊離５’－ヒドロキシル基との反応によって実行される。適切な数のサイクル及び最終的な脱トリチル化後、（Ｌ）－ＰＳＭ不斉補助剤及びシアノエチルリン酸保護基は、アセトニトリル（ＡＣＮ）中のジエチルアミン（ＤＥＡ）によるカラム上での処理によって粗製のオリゴヌクレオチドから除去される。次に、（Ｌ）－ＤＰＳＥ不斉補助剤は、ＮＥｔ３・ＨＦ（トリエチルアミンフッ化水素）溶液による処理によって除去される。次に、粗製のオリゴヌクレオチドは、固体支持体から切断され、アンモニア処理によってカラムから除去される。塩基保護基は、適切にサイズが調整された反応容器中での継続的なアンモニア処理によって除去される。得られた粗製のオリゴヌクレオチドは、分取アニオン交換（ＡＥＸ）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して精製された後、濃縮及び脱塩により、いくつかの実施形態では、原薬としてＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩、例えばＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩を得る。
ホスホロチオエート構築のための有用なサイクル
Figure 2025507889000003
ｎ００１構築のための有用なサイクル
Figure 2025507889000004
リン酸構築のための有用なサイクル
Figure 2025507889000005
Figure 2025507889000006
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬を製造する工程は、以下でさらに詳細に記載される。
段階１：合成
オリゴヌクレオチドの合成は、自動オリゴヌクレオチド合成機において５’－ＯＤＭＴｒ－２’－Ｆ－ｄＣ（Ｎ４－Ａｃ）で官能化されたコントロールドポアガラス（ＣＰＧ）固体支持体上で実行される。全ての反応は、カラムに充填された固体支持体上で行われる。
１．脱トリチル化
Figure 2025507889000007
 合成を開始するために、ＣＰＧ－５’－ＯＤＭＴｒ－２’－Ｆ－ｄＣ（Ｎ４－Ａｃ）固体支持体は、トルエン中の３％ジクロロ酢酸（ＤＣＡ）による処理によって５’－ヒドロキシルからＤＭＴｒ保護基の酸に触媒された除去にかけられる。完全なＤＭＴｒ除去は、合成プログラムにおけるwatchコマンドに基づく直列のＵＶモニタリングによって確実にされる。ＤＭＴｒ除去は、それぞれの合成サイクルの開始時及び最終サイクル後に同じ方法で実施される。全ての場合において、脱トリチル化後、支持体に結合した材料を、合成の次の工程のために調製物中においてアセトニトリルで洗浄する。
２．カップリング
Figure 2025507889000008
 発達中のオリゴヌクレオチド鎖の伸長は、アセトニトリル中で溶解された活性化剤、５－（エチルチオ）－１Ｈ－テトラゾール（ＥＴＴ）又は１－シアノメチルイミダゾリウムトリフレート塩（ＣＭＩＭＴ）のいずれかの存在下での支持体に結合したオリゴヌクレオチドの５’－ヒドロキシル基と過剰量の保護されたホスホラミダイトの溶液との反応によって達成される。ホスホラミダイトは、アセトニトリル又は８０：２０ｖ／ｖアセトニトリル：イソブチロニトリル混合物中で溶解される。それぞれのカップリング工程で必要となるホスホラミダイトは、オリゴヌクレオチド配列によって決定される。リン酸結合の導入のために、ホスホラミダイト及びＥＴＴが使用される。立体的に規制されたホスホロチオエート又はｎ００１結合の導入のために、（Ｌ）－ＤＰＳＥ又は（Ｌ）－ＰＳＭに由来するホスホラミダイト及びＣＭＩＭＴが使用される。いずれの場合にも、ホスホラミダイト／活性化剤溶液を直列で混合し、合成カラム上に押し入れ、続いて適切な時間でカラムを介して循環される。その後、過剰な試薬は、アセトニトリルで合成カラムをフラッシングすることによって除去される。
３．キャップ付加－１
Figure 2025507889000009
 キャップ付加１は、カップリング工程中に補助基で開環するオキサザホスホリジン環から生じる二級アミンを保護し、合成の残りで非反応性にすることができる。二級アミンは、キャップ付加試薬Ｂ（［キャップＢ］：無水酢酸／２，６－ルチジン／アセトニトリル（２０：３０：５０、ｖ：ｖ：ｖ）を合成カラムに流すことによってキャップ付加される。過剰な試薬は、アセトニトリルにより合成カラムからフラッシングされる。
４．酸化、チオール化又はイミド化
新たに生成されたＰ（ＩＩＩ）亜リン酸トリエステル結合は、３つの方法の１つで処理される：
１．ピリジン：水（９０：１０、ｖ：ｖ）中のヨウ素による処理での酸化により、Ｐ（Ｖ）ホスホジエステル結合の生成をもたらす。
Figure 2025507889000010
 ２．ピリジン：アセトニトリル（１：１、ｖ：ｖ）中のキサンタンヒドリド（ＸＨ）による処理でのチオール化により、立体的に規制されたＰ（Ｖ）ホスホロチオエートトリエステル結合の生成をもたらす。
Figure 2025507889000011
 ３．アセトニトリル中の２－アジド－１，３－ジメチルイミダゾリニウムヘキサフルオロホスフェート（ＡＤＩＨ）による処理でのイミド化により、立体的に規制されたＰ（Ｖ）ホスホロイミダートトリエステル結合の生成をもたらす。
Figure 2025507889000012
それぞれの場合において、その工程後、過剰な試薬は、アセトニトリルにより合成カラムからフラッシングされる。
５．キャップ付加－２
通常、カップリング反応は、非常に高い収率で進行するが、それは、定量的ではない。任意の所与のサイクルで利用可能な５’－ヒドロキシ基のごく一部は、活性化されたホスホラミダイトとカップリングできない可能性がある。その後のサイクル中に反応を妨げるために、これらの部位は、試薬の混合物（１：１、ｖ：ｖ）（キャップ付加試薬Ａ［キャップＡ］：Ｎ－メチルイミダゾール／アセトニトリル（２０：８０、ｖ：ｖ）及びキャップＢ）によるキャップ付加によって遮断される。結果として、５’－Ｏ－アセチル化（「キャップ付加」）支持体結合オリゴヌクレオチド配列が形成される。過剰なキャップ付加試薬は、アセトニトリルによりカラムから洗浄される。
Figure 2025507889000013
オリゴヌクレオチド構築及び最終工程
適切な保護されたホスホラミダイトを使用する上で示される３つのサイクルの独立した反復により、５’末端位に存在するＤＭＴｒ保護基により全体的に保護された配列を構築する。配列中の最後のヌクレオチドの付加後、５’末端ＤＭＴｒ基は、最終的な脱トリチル化工程中に除去される。
段階２：切断及び脱保護
立体的に規制されたホスホロイミダートトリエステル及びホスホロチオエートトリエステルからのリン酸保護基並びに（Ｌ）－ＰＳＭ及び（Ｌ）－ＤＰＳＥ不斉補助剤の除去、固体支持体からの粗製のオリゴヌクレオチドの切断及び環外核酸塩基保護基の除去は、３工程のプロセスで実施される。
工程１：ジエチルアミン処理による（Ｌ）－ＰＳＭ不斉補助剤及びシアノエチルの除去
Figure 2025507889000014
 固体支持体上の粗製のオリゴヌクレオチドを、ＡＣＮ中のジエチルアミンの溶液で処理し、これによりリン酸トリエステル結合からシアノエチル保護基及びホスホロイミダートトリエステルから（Ｌ）－ＰＳＭ不斉補助剤を同時に除去して、それぞれホスホジエステル結合及びホスホロアミダートジエステル結合を生成することができる。
工程２：フッ化物処理による（Ｌ）－ＤＰＳＥ不斉補助剤の除去
Figure 2025507889000015
 固体支持体上の粗製のオリゴヌクレオチドを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＮＥｔ３及びＨ２Ｏの混合物中のＮＥｔ３・３ＨＦの温度制御された溶液で処理して、不斉補助剤の除去をもたらす。このプロセスは、立体的に規制されたホスホロチオエートトリエステルを上で示されるとおりの立体的に規制されたホスホロチオエートジエステルに変換する。
工程３：切断及び全体的な核酸塩基の脱保護
Figure 2025507889000016
Figure 2025507889000017
 次に、粗製のオリゴヌクレオチドを、適切にサイズが調整された圧力定格容器中での水酸化アンモニウムによる処理によって固体支持体から切断する。この反応は、シアノエチルリン酸基（早期の工程で脱保護され得る）及び環外アミノ基の全体的な脱保護（例えば、アセチル、ベンゾイル、イソブチリルなどの保護基の除去）をもたらすことができる。式Ｐでは、各Ｍ＋は、独立して、カチオンである。いくつかの実施形態では、各Ｍ＋は、Ｈ＋である（「式Ｐ酸」のような化合物）。いくつかの実施形態では、各Ｍ＋は、独立して、カチオンである。いくつかの実施形態では、粗製のオリゴヌクレオチドは、式Ｐ酸の塩である。いくつかの実施形態では、粗製のオリゴヌクレオチド組成物は、式Ｐ酸の塩を含む。いくつかの実施形態では、粗製のオリゴヌクレオチド組成物は、式Ｐ酸の２つ以上の塩を含む。
通常、脱保護後、１つ以上のＷＶＥ－Ｎ５３１塩が提供される。いくつかの実施形態では、塩は、アンモニウム塩である。いくつかの実施形態では、脱保護産物の組成物は、１つ以上のＷＶＥ－Ｎ５３１塩を含む。いくつかの実施形態では、脱保護産物の組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１アンモニウム塩を含む。
段階３：アニオン交換クロマトグラフィーによる精製
粗製のオリゴヌクレオチド溶液の精製は、ＡＥＸ－ＨＰＬＣによって達成される。粗製のオリゴヌクレオチドの溶液を、TSK-GEL Super Q-5PW媒体で充填された精製カラム上にロードする。精製ランは、水酸化ナトリウムで緩衝化された溶離液を使用して実施される。塩化ナトリウム勾配を使用して、カラムからオリゴヌクレオチドを溶出する。精製は、周囲温度で実行される。溶出プロファイルは、紫外線（ＵＶ）分光光度法によってモニターされる。画分を回収し、偽プールをＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって評価する。標的純度レベル以上のオリゴヌクレオチドを含有するプールを、プロセスにおける次の工程にかける。
段階４：濃縮及び脱塩（最終ＵＦ／ＤＦ）
次に、選択された画分プールを濃縮し、精製水に対してダイアフィルターにかけて、再生セルロース膜カセットを使用するタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によって精製緩衝液を除去する。プールを濃縮し、ｐＨを、塩酸又は水酸化ナトリウムで６．５～７．５に調整する。濃縮されたオリゴヌクレオチドを、精製水に対してダイアフィルターにかけ、１２００～１４００ＯＤ／ｍＬの標的まで濃縮した後、脱塩されたオリゴヌクレオチドを回収する。系を、精製水でフラッシングして、脱塩濃縮されたオリゴヌクレオチドをすすぎ水と組み合わせて収率を最大化して、８７８±６８ＯＤ／ｍＬ（３２．５±２．５ｍｇ／ｍＬ）の標的最終脱塩濃度にする。
段階５：濾過及び包装
オリゴヌクレオチド溶液を、０．２ミクロンフィルターに通して濾過した後、原薬貯蔵容器に充填する。原薬を、無菌高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）ボトル中に包装し、その各々にラベルを貼り、Mylarホイルパウチ中に密封し、－２０℃で保管する。
出発材料
特定の有用な出発材料が以下に列記される。
Figure 2025507889000018
Figure 2025507889000019
Figure 2025507889000020
Figure 2025507889000021
Figure 2025507889000022
出発材料は、９種のホスホラミダイト、コントロールドポアガラス（ＣＰＧ）固体支持体及び２－アジド－１，３－ジメチルイミダゾリニウムヘキサフルオロホスフェートを含む。核酸塩基上の反応性の環外基は、オリゴヌクレオチド合成中にそれらを非反応性にするように適切に保護され、５’－ヒドロキシ官能性は、４，４’－ジメトキシトリチルエーテル（ＤＭＴｒ）として保護される。ホスホラミダイトは、約９０％、約９５％又はいくつかの場合、約９８％以上（約２６０ｎｍ（面積％）でのＲＰ－ＨＰＬＣ及び／又は積分による３１Ｐ ＮＭＲ）、約９７％以上のＰ（ＩＩＩ）純度（３１Ｐ ＮＭＲ積分による）の純度レベル及び０．２％（ｗ／ｗ）未満の水含量を有する。コントロールドポアガラス－５’－ＯＤＭＴｒ－２’－Ｆ－ｄＣ（Ｎ４－Ａｃ）コハク酸固体支持体は、約１２０～２００メッシュの粒径（分析的篩分け）、約５４０～６６０Åの孔径（水銀圧入）、約０．２０～０．２４ｇ／ｃｃの密度（タップ密度）、≧約０．８ｃｃ／ｇの孔体積（水銀圧入）、≧約７５ｍ２／ｇの表面積Ｈｇ圧入（水銀圧入）及びＤＭＴリガンドアッセイによって評価される７０～８０μｍｏｌ／ｇ（４９８ｎｍでの分光光度法）である。２－アジド－１，３－ジメチルイミダゾリニウムヘキサフルオロホスフェートは、約９８．０％以上の純度（ＨＰＬＣ）及び約２３．７０～２４．８０％（元素分析）の窒素含量を有する。
立体化学は、合成のための出発材料の制御及び合成プロセスを通して確立され得る。立体的に規制されたホスホラミダイトは、適切に保護されたヌクレオシド及び不斉補助剤、例えば（Ｌ）－ＤＰＳＥ又は（Ｌ）－ＰＳＭから調製される。立体的に規制されたホスホラミダイトの化学的純度は、３１Ｐ ＮＭＲによって決定され得る。立体配置は、３１Ｐ ＮＭＲ、１Ｈ ＮＭＲ及び１３Ｃ ＮＭＲの組み合わせによって決定され得る。保護されたヌクレオシド及び不斉補助剤の立体化学的立体配置は固定されているため、カップリング反応から生じる可能性のある２種の可能なジアステレオマー（トランス及びシス）が存在し、その中ではトランス型が支配的であり、シス型は、微量な不純物として存在する。
製造プロセス中、様々なプロセス内制御が適用される。合成及び切断及び脱保護段階の完了時、得られた粗製のオリゴヌクレオチドにおけるＷＶＥ－Ｎ５３１原薬の存在は、ＬＣ／ＭＳによって同定され、その純度はＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって定量化される。精製中、個々の画分及び選択された偽プールがＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによる純度及び不純物に関して評価される。選択された画分がプールされ、濃縮されてから、得られた溶液の脱塩が伝導率、ｐＨ及び濃度のプロセス内測定を介して制御される。いくつかの実施形態では、原薬又は製剤は、以下の基準の１つ以上又は全てを満たして製造される。いくつかの実施形態では、原薬、例えばＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩形態は、本明細書に記載されるとおりの特定のレベルの純度を有する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩は、本明細書に記載されるとおりの特定のレベルの純度を有する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩は、組成物、例えば医薬組成物中で特定のレベルの純度を有する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩は、製剤中で特定のレベルの純度を有する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定されるとおり、約７０％～９０％、約７０％～８５％、約７０％～８０％、約７５％～８５％又は約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％若しくは９０％以上の純度のレベルを有する。
特徴付け
とりわけ、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその組成物を評価するための技術を提供する。
生成物は、様々な技術によって特徴付けられ得る。例えば、ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物は、質量分析によって特徴付けられ得る。ある調製物に関して、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）分析が実施され、６７２２Ｄａの実験的に決定された値は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬の理論平均質量（遊離酸形態）（６７２３Ｄａ）と一貫している。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩の配列は、ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ配列決定によって確認された。例えば、ある評価では、配列における１９個の核酸塩基に関して、少なくとも１つの配列に関連するフラグメントイオンは、それぞれの計算された（予測された）質量の５ｐｐｍ誤差内で観察された。全長オリゴヌクレオチドのモノアイソトピック質量もＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ分析で検証されたため、２０個全ての核酸塩基の同一性及び位置が実証され、配列が確認された。
立体化学的同一性は、オリゴヌクレオチド中のそれぞれのキラル結合リン（Ｒｐ又はＳｐ）（ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩に関して、ホスホロチオエート又はホスホロアミダート基におけるそれぞれの結合リン）の絶対立体化学的立体配置の組み合わせを含む。この組み合わせが２ｎ個のジアステレオマー（ｎ＝キラル結合リンの数）のうちの固有の単一のジアステレオマーを生じ得る。ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩の場合、この組み合わせは、５’－ＳＳＲＳＳＲＳＳＯＳＳＳＯＳＳＳＲＳＳ－３’（式中、Ｓ、Ｐ及びＯは、それぞれＳｐホスホロチオエート、Ｒｐ Ｎ－（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）ホスホロアミダート結合及びリン酸結合を表す）により示され得る。ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩は、２’－フルオロ（Ｆ）及び２’－Ｏ－メチル（ＯＭｅ）修飾も含む。
立体化学的同一性の確立は、合成のための出発材料の制御を含む。（Ｌ）－ＤＰＳＥ又は（Ｌ）－ＰＳＭから調製されるホスホラミダイトの合成的カップリングがそれぞれＳｐキラリティーのホスホロチオエート結合及びＲｐキラリティーのホスホロアミダート結合を生じ、（Ｄ）－ＤＰＳＥ又は（Ｄ）－ＰＳＭから調製されるものは、Ｒｐキラリティーのホスホロチオエート結合及びＳｐキラリティーのホスホロアミダート結合を生じる。各カップリング反応のための立体的に規制されたホスホラミダイトの一貫した使用は、各ホスホロチオエート又はホスホロアミダート結合の立体化学的同一性の制御を可能にする。
立体化学的同一性は、本開示に従う様々な技術を使用して確認され得る。例えば、それは、いくつかの異なる技術を使用する測定によって確認することができ、これらを組み合わせ、適切な標準物質との比較により、この属性についての正確な情報及び確証を提供する。有用な分析技術は、ＮＭＲ（１Ｈ、１９Ｆ、３１Ｐ、多次元など）及び酵素的消化を含む。いくつかの例では、ＮＭＲは、リン酸緩衝液（例えば、ｐＨ７．０）中で実施される。様々な調製物の１Ｈ、１９Ｆ及び３１Ｐ ＮＭＲ並びに酵素的消化を含む結果は、生成物の構造と一致する。いくつかの実施形態では、ＮＭＲは、ＤＳＳ標準に基づいて水に対して参照される。特定の実験から観察されるデータが以下に記載される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬（ヘキサデカナトリウム塩）の調製物に関する３１Ｐ ＮＭＲデータ。１６１．９８ＭＨｚで取得され、記録される。
Figure 2025507889000023
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬（ヘキサデカナトリウム塩）の調製物に関する１９Ｆ ＮＭＲデータ。３４８Ｋで取得され、記録される。
Figure 2025507889000024
いくつかの実施形態では、標準品、例えばＮＭＲ、酵素的消化などによって特徴付けられるものを使用して、バッチ出荷の一部としてＵＰＬＣによる立体化学的同一性を決定する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、標準品を提供する。
原薬としての固体ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩のＦＴＩＲスペクトルが記録された。１６４３ｃｍ－１及び１６８２ｃｍ－１での主要な吸光度バンドは、アミドのＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｎ及びＣ＝Ｃ伸縮振動と一貫している。３２００～３３００ｃｍ－１領域におけるブロードピークもオリゴヌクレオチド官能基と一貫している。
対イオンは、本開示に従って分析され得る。例えば、５．１％のナトリウム含量値は、５．１％の理論的ナトリウム含量値（ｗ／ｗ）（ヘキサデカナトリウム塩）と一致して、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬ロットの調製のためにＩＣＰ－ＯＥＳによって決定されている。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬の調製された溶液は、透明な（目に見える材料がなく、及び粒子状物質を本質的に含まない）無色の溶液である。精製水中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬のｐＨは、約７．３であることが見出された。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬のモル吸光係数は、あるロットを使用して１８６４８６Ｍ－１ｃｍ－１であると水中で実験的に決定された。６９１８．７２ｇ／モル（遊離酸形態）の分子量を使用して、これは、２７．０ＯＤ／ｍｇの吸光係数に等しい。
様々な実施形態では、不純物は、本明細書に記載されるとおりに低レベルで制御される。例えば、いくつかの実施形態では、不純物レベルは、本明細書に記載されるとおり約３０％未満である。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬調製物（関連する不純物を含む）は、インビトロでの遺伝毒性試験及びインビボでの微小核試験においてＧＬＰで評価された。遺伝毒性は、観察されなかった。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬の様々な調製物は、アセトニトリル、トルエン及びピリジン（ＩＣＨクラス２）を含む残留溶媒並びにＩＣＨクラス１、２Ａ、３などにおける様々な元素を含む元素状の不純物に関して指定された制約を満たした。
オリゴヌクレオチド合成中のＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩中のそれぞれの立体的に規制されたホスホラミダイトからその立体的に規制されたＳｐホスホロチオエート又はＲｐ Ｎ－（１，３－ジメチルイミダゾリジン－２－イリデニル）ホスホロアミダート（ＰＮ）結合へのキラル情報（ジアステレオ選択性）の移行の忠実度は、非常に高い。オリゴヌクレオチドの全体的な立体化学的純度は、１７個の立体的に規制されたヌクレオチド間結合の各々の組み込みのジアステレオ選択性の積によって表され得る。
いくつかの実施形態では、立体純度は、二量体モデリングを使用して評価される。ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬内の立体的に規制されたホスホロチオエート又はＰＮヌクレオチド間結合の組成を表す１４個の二量体単位（ｆＧｎ００１ＲｆＵ、ｆＧ＊ＳｆＧ及びｆＵ＊ＳｆＣ二量体はそれぞれ２回表される）は、独立して合成され、立体化学的純度に関して評価された。ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩の立体化学的純度は、１７個の個々の二量体の測定されたジアステレオ選択性の積として推定され得る。それぞれの二量体を生成するために使用される合成条件は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬に適用されるものと同一であった。全長ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬と比較して、これらのモデル二量体単位は、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣなどの標準的な分析方法によってさらに容易に分析され、Ｒｐ及びＳｐジアステレオ異性体の両方は、容易に分離され、この技術によって定量化される。モデル二量体に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣデータは、以下に示される。
Figure 2025507889000025
このモデル調査は、それぞれの位置で優れた立体化学的忠実度を実証し、配列中のそれぞれの位置で≧９８％の立体化学的純度値を有する。それぞれの個々の構成物二量体の立体化学的純度の積に基づく全体的な立体化学的純度は、８５％である（８４．９％＝上の１７個のジアステレオ選択性忠実度値の積）。
いくつかの実施形態では、本開示は、例えば、本明細書に記載される二量体モデリングを使用して評価されるとおり、高い立体純度を有するＷＶＥ－Ｎ５３１を提供する。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８０％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８１％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８２％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８３％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８４％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８５％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８６％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８７％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８８％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８９％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約９０％以上である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８０％～９０％である。いくつかの実施形態では、立体純度は、約８３％～８７％である。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬の出荷規格は、本明細書に記載される１つ以上の規格、例えば外観（例えば、目視での）、配列同一性（例えば、ＭＳ／ＭＳによる）、分子量、純度（例えば、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによる面積％）、不純物（例えば、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによる面積％）、ナトリウム含量（例えば、ＩＣＰ－ＯＥＳなどによる）、濃度（遊離酸形態）（例えば、ＵＶ分光光度法による）、ｐＨ（例えば、精製水中の溶液の）、残留溶媒（例えば、ガスクロマトグラフィーによる）、元素状の不純物（例えば、ＩＣＰ－ＭＳによる）、立体化学的同一性（例えば、ＵＰＬＣによる）、菌体内毒素（例えば、ＵＳＰ＜８５＞、Ｐｈ．Ｅｕｒ ２．６．１４による）、生物汚染度（ＵＳＰ＜６１）による総好気性微生物数、総酵母及び糸状菌数など）及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ ２．６．１２）などを含み得る。
ＬＣ ＭＳによる同一性（分子量）に関する有用なパラメーターは、以下に記載される。
Figure 2025507889000026
いくつかの実施形態では、システムの適合性は、分析用参照材料の最初の３回の注入のための全長生成物（ＦＬＰ）に関する分子量（デコンボリューション質量）がＷＶＥ－Ｎ５３１に関して６９２３±３Ｄａであるべき時に確認され、加えて、空白のクロマトグラムは、ソルベントフロント及び勾配シフト以外に干渉ピークを有しない。
ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩の同一性は、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）によって決定され得る。試料は水中で調製され、Waters Acquity BEH C18カラム上に注入される。分析は、移動相Ａ（水中のヘキサフルオロイソプロパノール［ＨＦＩＰ］及びトリエチルアミン［ＴＥＡ］）及び移動相Ｂ（アセトニトリル）の勾配を利用する。方法のパラメーターの概要は、例として以下に提供される。
Figure 2025507889000027
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１純度及び／又は不純物を評価するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１の純度及び不純物は、例えば、Waters BEH C18カラムを使用してイオン対逆相ＵＰＬＣ（ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ）によって決定され得る。有用な手順は、例として以下に記載される（プロトコルＡ）。分離は、移動相Ａ（水中のヘキサフルオロイソプロパノール［ＨＦＩＰ］及びジイソプロピルエチルアミン［ＤＩＰＥＡ］）及び移動相Ｂ（水中の３０％アセトニトリル）の勾配を使用して達成される。パラメーターの有用なセットが以下に提供され（セットＡ）、本明細書に記載される様々な調製物に関して純度／不純物のレベルを決定するために利用されている。ジアステレオマー不純物を含む様々な不純物がこの方法を使用して分離され得る（各々が単一の結合リンでのみＷＶＥ－Ｎ５３１と異なる１７個のＷＶＥ－Ｎ５３１ジアステレオマー（ＤＳ１～ＤＳ１７）のうち、６つのジアステレオマーは、完全に分割され、９つは、部分的に分割される）。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１若しくはその塩又はＷＶＥ－Ｎ５３１若しくはその塩を含む組成物を特徴付ける方法であって、パラメーターの１つ以上又は全てを含むＨＰＬＣ又はＵＰＬＣ分析（例えば、カラム、移動相Ａ中の１つ以上の溶媒、移動相Ｂ中の１つ以上の溶媒、移動相Ａ中の１つ以上又は全ての溶媒を含む移動相、移動相Ｂ中の１つ以上又は全ての溶媒を含む移動相、移動相Ａ、移動相Ｂ、流速、実行時間、勾配など）を含む方法を提供する。
Figure 2025507889000028
Figure 2025507889000029
いくつかの実施形態では、メインピークに対する相対保持時間の関数としての全ての個々の不純物≧０．１０面積％及び全ての不純物の合計≧０．１０面積％が分析に含まれる。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１同一性は、相対保持時間をシステム適合性の標準と比較することによって確認される。
いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上の結合リンに関してＷＶＥ－Ｎ５３１又はそのジアステレオマーの立体化学的同一性を確認するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、Waters BEH C18カラムを使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって決定される。有用な手順は、例として以下に記載される（プロトコルＢ）。分離は、移動相Ａ（水中のヘキサフルオロイソプロパノール［ＨＦＩＰ］及びＤＩＰＥＡ）及び移動相Ｂ（水中の３０％アセトニトリル）の勾配を使用して達成される方法パラメーター（セットＢ）の概要は、以下に提供される。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１若しくはその塩又はＷＶＥ－Ｎ５３１若しくはその塩を含む組成物を特徴付ける方法であって、パラメーターの１つ以上又は全てを含むＨＰＬＣ又はＵＰＬＣ分析（例えば、カラム、移動相Ａ中の１つ以上の溶媒、移動相Ｂ中の１つ以上の溶媒、移動相Ａ中の１つ以上又は全ての溶媒を含む移動相、移動相Ｂ中の１つ以上又は全ての溶媒を含む移動相、移動相Ａ、移動相Ｂ、流速、実行時間、勾配など）を含む方法を提供する。
Figure 2025507889000030
とりわけ、本開示は、本明細書に記載されるとおりの高純度のＷＶＥ－Ｎ５３１を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、例えば、セットＡ及び／又はセットＢのパラメーターとともにＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用して決定されるとおり、高い立体化学的純度のＷＶＥ－Ｎ５３１を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つ以上（「第１の群」）を含み、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つ以上（「第２の群」）のいずれも含まず、及び任意選択により低下したレベルのＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つ以上（「第３の群」）を含む組成物を提供し、それぞれの低下したレベルは、独立して、第１の群のメンバーのレベルの１つ以上又は各々より低い（例えば、その約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％又は１０％以下、いくつかの実施形態ではその約５０％又は約５０％以下）。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つを含む組成物を提供し、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７）を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの２つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの３つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの４つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの５つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの６つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの７つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの８つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの９つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１０個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１１個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１２個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１３個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１４個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１５個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１６個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１７個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ２を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ３を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ４を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ５を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ７を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ８を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ９を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１１を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１２を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１３を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１４を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１５を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１７を含む。いくつかの実施形態では、少なくともＷＶＥ－Ｎ５３１は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ２は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ３は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ４は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ５は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ６は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ７は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ８は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ９は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１０は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１１は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１２は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１３は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１４は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１５は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１６は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１７は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、本開示は、そのような組成物を調製するための技術、例えば本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ技術（例えば、ジアステレオマーを完全に又は部分的に分割することができるもの）を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つに関するピークがＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つ以上の１つ以上のピークから完全に分割されるとき、そのピークは、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つ以上を含まないＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つを含む組成物を表す。いくつかの実施形態では、存在、非存在及び／又はレベルは、提供される技術、例えば本明細書に記載されるとおりのＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを使用して評価される。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１を含む組成物を提供し、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７）を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の２つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の３つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の４つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の５つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の６つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の７つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の８つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の９つを含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１０個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１１個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１２個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１３個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１４個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１５個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１６個を含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、ＤＳ１～ＤＳ１７の１７個を含まない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ２は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ３は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ４は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ５は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ６は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ７は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ８は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ９は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１０は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１１は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１２は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１３は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１４は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１５は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１６は、組成物中に存在しない。いくつかの実施形態では、少なくともＤＳ１７は、組成物中に存在しない。
ＷＶＥ－Ｎ５３１と同様に、ＤＳ１～ＤＳ１７の各々は、独立して、様々な形態で存在し得る。いくつかの実施形態では、組成物において、それは、１つの形態で存在し、いくつかの実施形態では、それは、２つ以上の形態で存在する。いくつかの実施形態では、形態は、塩形態である。いくつかの実施形態では、形態は、薬学的に許容される塩形態である。いくつかの実施形態では、それぞれの形態は、独立して、塩形態である。いくつかの実施形態では、それぞれの形態は、独立して、薬学的に許容される塩形態である。いくつかの実施形態では、形態は、ヘキサデカナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、液体組成物、例えば任意選択により緩衝溶液にＷＶＥ－Ｎ５３１及び／又はＤ１～ＤＳ１７が溶解され、カチオン及びアニオンをもたらすように解離し得る。
液体ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、ラベルが貼られ、高レベルの摩耗及び穿刺耐性を有する気体／水分障壁を提供するMylarホイルパウチ中で密封されたポリプロピレンスクリュー蓋を有する無菌高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）ボトルに包装される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩の様々なバッチは、いくつかの例では、約２０ｍｍｏｌスケール（例えば、一例では、２×２３ｍｍｏｌスケール）で原薬として製造されている。特定の調製物は、ＧＬＰ毒性試験を含む非臨床試験で利用された。特定の調製物が臨床試験のために製造された。製造された製品は、安定である：－２０℃±５℃の長期間の保管条件での保管の２４ヶ月後及び５℃±３℃の促進された条件での保管の１４日後に複数のロットのＧＭＰ原薬に関して、属性を示す安定性に著しい変化は観察されなかった。
製剤
いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１又はその薬学的に許容される塩形態及び薬学的に許容される担体を含むか又は送達する医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤を提供する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬、例えば上記のプロセスを使用して製造されるＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩を含む。
いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、緩衝溶液であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝溶液であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、等張性リン酸緩衝溶液であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、等張性リン酸緩衝溶液中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ｐＨ及び浸透圧に関して血液中の生理学的条件と密接に適合する医薬組成物又は製剤である。いくつかの実施形態では、それは、静脈内（ＩＶ）投与のためである。
特定のＷＶＥ－Ｎ５３１製剤及び有用な製造技術が例として以下に記載される。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１医薬組成物、例えば製剤は、FluroTec（登録商標）でコーティングされたクロロブチルゴム栓及び白色フリップオフキャップを伴うアルミニウムオーバーシールで蓋をされた１０ｍＬのＵＳＰ１型の透明なガラスバイアル中に包装される。いくつかの実施形態では、それぞれの製剤バイアルは、３６ｍｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に相当するＷＶＥ－Ｎ５３１原薬を含有する（６ｍｇ／ｍＬ、名目上の含量３６ｍｇ、抽出可能な合計体積６ｍＬ）。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤の構成成分は、注射用水（ＷＦＩ）中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬、第一リン酸カリウム、第二リン酸ナトリウム及び塩化ナトリウムを含むか又はそれである。水酸化ナトリウム及び／又は塩酸も、製剤化された溶液のｐＨを要求される範囲に調整するために使用され得る。
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤の例の組成が以下に示される。
Figure 2025507889000031
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、目に見える材料がなく、及び微粒子を本質的に含まない無色の溶液である。いくつかの実施形態では、リン酸緩衝食塩水溶液中の６ｍｇ／ｍＬ溶液のｐＨは、７．０～７．８であり、２８０～３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲の重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤の密度は、１．０ｇ／ｍＬである。
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤ロットは、３６ｍｇ／バイアル（遊離酸形態）の濃度で製造された。３６ｍｇの強度は、６ｍＬの名目上の体積を０．３５ｍＬ超えて含んだ６．３５ｍＬの６ｍｇ／ｍＬの製剤を充填することによって達成される。全ての材料接触構成成分は、使用前に無菌化された。ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤のための容器の閉鎖方式は、FluroTec（登録商標）でコーティングされたゴム栓及び白色フリップオフキャップを伴うアルミニウムオーバーシールで密封された１０ｍＬのＵＳＰ１型の透明なガラスバイアルを含むか又はそれらからなる。この容器の閉鎖は、微生物混入から無菌化された製品を保護することができる。
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、通常、無菌溶液である。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、いくつかの実施形態では、静脈内（ＩＶ）投与前に無菌保存剤不含溶液としての０．９％塩化ナトリウム又は０．４５％塩化ナトリウムで希釈され得る。製剤ロットは、複数の原薬ロットをプールすることによって作製され得る。
いくつかの実施形態では、製剤は、本明細書に記載されるとおりの純度、例えばＷＶＥ－Ｎ５３１又はその塩（例えば、ヘキサデカナトリウム塩）、ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬などに関して記載されるものを有する。いくつかの実施形態では、純度は、純度に関して本明細書に記載されるＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法を使用して決定され、評価される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤製造プロセスのための流れ図は、例として図１に提供される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬容器は、２～８℃でおよそ４８時間解凍され得る。原薬の解凍が行われている間、１×及び２×の強度のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液が調製され、１×溶液は、ｐＨ７．４±０．２及び２８５～３１５ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度で１０ｍＭのリン酸ナトリウム／リン酸カリウム及び１４２ｍＭの塩化ナトリウムを含有する。それぞれの容器からの解凍された原薬の内容物が製剤容器中にプールされ、十分に混合される。
原薬の単一のロットが製剤のために使用されるとき、出荷純度の結果が純度補正係数として使用される。原薬の複数のロットがプールされることになる場合、それぞれの原薬ロットからの有効成分の量に基づく純度補正係数が決定される。
いくつかの実施形態では、注射用水（ＷＦＩ）がそれぞれの原薬容器をすすぐために使用され、すすぎ水が次の原薬容器に加えられる。最終的な原薬容器からのすすぎ水が製剤容器に加えられる。原薬の総量を秤量し、等量の２×ＰＢＳ溶液が製剤容器に加えられる。プロセス内試料を採取して、紫外線（ＵＶ）分光光度法による濃度及び密度を測定する。
ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬濃度及び溶液質量の結果に基づいて、６．０ｍｇ／ｍＬ（ＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態）のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬濃度を達成するための１×ＰＢＳの要求される体積が計算される。次に、要求される量の１×ＰＢＳが製剤容器に直接的に加えられ、容器の内容物が溶液均一性を確実にするために混合される。
いくつかの実施形態では、最終的なプロセス内試料がＵＶ分光光度法による濃度、密度、重量オスモル濃度及びｐＨのために製剤容器から回収される。いくつかの実施形態では、製剤中のＷＶＥ－Ｎ５３１濃度は、約６ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、それは、約５．５～６．５ｍｇ／ｍＬ（遊離酸形態、補正された純度）である。最終的な製剤が清澄化濾過を受ける。
いくつかの実施形態では、プロセス内の前濾過の生物汚染度試料が無菌濾過前に回収される。いくつかの実施形態では、最終的な製剤は、充填前に連続して２つの０．２μｍフィルターに通して無菌濾過される。いくつかの実施形態では、無菌フィルターは、濾過の前後に泡立ち点法によってフィルターの完全性に関して確認される。
密度の最終的な測定値に基づいて、目標充填重量が警告限界及び処置基準値とともに決定される（６．３５ｍＬ／バイアルの目標充填体積に達する）。充填は、定期的な充填重量確認とともに行われる。バイアルが充填され、栓をされ、グレードＡ環境で無菌的に密封される。終了したバイアルは、出荷試験、バルク包装及び／又は安定性試験前に視覚的に検査される。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤の製造中に適用されるプロセス制御及びプロセス内制御試験並びに合格限度値は、ＷＶＥ－Ｎ５３１濃度、ｐＨ、重量オスモル濃度、生物汚染度、フィルターの完全性、充填重量、外観などを含む。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤の製造は、紫外線（ＵＶ）分光光度法を介するプロセス内濃度測定を含む。いくつかの実施形態では、プロセス内濃度測定は、等量の２×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）によるＷＶＥ－Ｎ５３１原薬の最初の希釈時になされる。この結果は、無菌濾過及び充填前に測定される最終的な濃度のために加えられる１×ＰＢＳの量を決定するために使用される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤の出荷規格は、本明細書に記載される１つ以上の規格、例えば外観（例えば、目視での）、同一性（例えば、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣの保持時間による）、純度（例えば、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによる面積％）、不純物（例えば、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによる面積％）、％ラベル表示（例えば、ＵＶによる、例えば＋／－１０％）、ｐＨ（例えば、ＵＳＰ＜７９１＞及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ．２．２．３）、重量オスモル濃度（例えば、ＵＳＰ＜７８５＞及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ．２．２．３５）、細菌内毒素（例えば、ＵＳＰ＜８５＞及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ．２．６．１４）、無菌性（例えば、ＵＳＰ＜７１＞及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ．２．６．１）、用量の均一性（例えば、ＵＳＰ＜９０５＞及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ．２．９．４０）、粒子状物質（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞及び／又はＰｈ．Ｅｕｒ．２．９．１９）、容器含量（例えば、ＵＳＰ＜６９７＞）、容器閉鎖の完全性試験（例えば、ＵＳＰ＜１２０７＞）などを含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上又は全てのセットＡパラメーターを利用するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ技術は、同一性（保持時間）、純度及び／又は不純物を評価するために利用される。いくつかの実施形態では、純度レベルは、本明細書に記載されるとおり約７０％～８５％である。いくつかの実施形態では、それは、約７０％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７１％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７２％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７３％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７４％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７５％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７６％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７７％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７８％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約７９％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８０％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８１％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８２％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８３％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８４％以上である。いくつかの実施形態では、それは、約８５％以上である。いくつかの実施形態では、それは、セットＡパラメーターを使用する２６０ｎｍでのＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ面積％によって測定される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載されるとおりのレベルでＷＶＥ－Ｎ５３１原薬と同様の不純物を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤のための容器閉鎖方式は、アルミニウムオーバーシールを伴うFluroTec（登録商標）でコーティングされたエラストマー配合４４３２／５０灰色から成形された栓及び白色フリップオフキャップを伴うＵＳＰ１型ガラスバイアル（１０ｍＬ容量、２０ｍｍ開口部）を含むか又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤のための保管条件は、－２０±５℃である。いくつかの実施形態では、例えば相対的に短い期間の保管のための５℃±３℃の条件。
とりわけ、本開示は、以下の例示的実施形態を提供する。
１．筋ジストロフィーを治療する方法であって、それに罹患している対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する、方法。
２．筋ジストロフィーを、それに罹患している対象において治療する方法であって、対象にＷＶＥ－Ｎ５３１の１つ以上の用量を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しく、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有する、方法。
３．対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法。
４．対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法。
５．対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法。
６．対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法。
７．対象においてＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法。
８．対象においてＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法。
９．対象においてＤＭＤポリペプチドを提供する方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較してトランケートされる、方法。
１０．対象においてＤＭＤポリペプチドを提供する方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しく、ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較してトランケートされる、方法。
１１．ＤＭＤポリペプチドは、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされる、実施形態９～１０のいずれか１つの方法。
１２．ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を提供する、実施形態９～１１のいずれか１つの方法。
１３．対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法。
１４．対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法。
１５．対象は、筋ジストロフィーに罹患している、実施形態３～１４のいずれか１つの方法。
１６．対象は、ＤＭＤに罹患している、実施形態３～１５のいずれか１つの方法。
１７．対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有する、実施形態３～１６のいずれか１つの方法。
１８．ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１つ以上の形態で投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９．ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１つ以上の薬学的に許容される塩形態で投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２０．１つの形態は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である、実施形態１８～１９のいずれか１つの方法。
２１．ＷＶＥ－Ｎ５３１の各用量は、独立して、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物で投与される、実施形態１８～２０のいずれか１つの方法。
２２．筋ジストロフィーを治療する方法であって、それに罹患している対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する、方法。
２３．対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
２４．対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
２５．ＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
２６．対象においてＤＭＤポリペプチドを提供する方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較してトランケートされる、方法。
２７．ＤＭＤポリペプチドは、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされる、実施形態２６の方法。
２８．ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を提供する、実施形態２６～２７のいずれか１つの方法。
２９．対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
３０．対象は、筋ジストロフィーに罹患している、実施形態２３～２９のいずれか１つの方法。
３１．対象は、ＤＭＤに罹患している、実施形態２３～３０のいずれか１つの方法。
３２．対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有する、実施形態２３～３１のいずれか１つの方法。
３３．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
３４．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
３５．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約２ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
３６．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約３ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
３７．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約４ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
３８．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約５ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
３９．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４０．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約７ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４１．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約８ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４２．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約９ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４３．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４４．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４５．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１２ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４６．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１３ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４７．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１４ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４８．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１５ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
４９．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
５０．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１７ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
５１．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１８ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
５２．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１９ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
５３．用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約２０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
５４．約は、±１％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
５５．約は、±２％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
５６．約は、±３％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
５７．約は、±４％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
５８．約は、±５％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
５９．約は、±６％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
６０．約は、±７％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
６１．約は、±８％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
６２．約は、±９％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
６３．約は、±１０％である、実施形態３３～５３のいずれか１つの方法。
６４．２つ以上（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０）の用量が投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
６５．約１０用量以上は、投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
６６．各用量は、独立して、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物で投与される、実施形態６４～６５のいずれか１つの方法。
６７．各用量は、ほぼ同じ量のＷＶＥ－Ｎ５３１を有する、実施形態６４～６６のいずれか１つの方法。
６８．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
６９．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７０．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約２ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７１．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約３ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７２．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約４ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７３．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約５ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７４．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７５．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約７ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７６．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約８ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７７．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約９ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７８．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
７９．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８０．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１２ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８１．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１３ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８２．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１４ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８３．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１５ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８４．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８５．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１７ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８６．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１８ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８７．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１９ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８８．各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約２０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態６４～６７のいずれか１つの方法。
８９．約は、±１％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９０．約は、±２％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９１．約は、±３％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９２．約は、±４％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９３．約は、±５％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９４．約は、±６％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９５．約は、±７％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９６．約は、±８％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９７．約は、±９％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９８．約は、±１０％である、実施形態６７～８８のいずれか１つの方法。
９９．ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１つ以上の薬学的に許容される塩形態として医薬組成物中に存在する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１００．薬学的に許容される塩形態は、ヘキサデカナトリウム塩である、実施形態９９の方法。
１０１．医薬組成物は、溶解されたＷＶＥ－Ｎ５３１を含む液体組成物である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０２．薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝溶液であるか又はそれを含む、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０３．医薬組成物中の構成成分は、ＷＶＥ－Ｎ５３１、第一リン酸カリウム、第二リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び水並びにｐＨ調整のための塩酸及び／又は水酸化ナトリウムである、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０４．医薬組成物は、等張性である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０５．医薬組成物は、約７～８のｐＨを有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０６．医薬組成物は、約７．３のｐＨを有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０７．医薬組成物は、約７．４のｐＨを有する、実施形態１０５の方法。
１０８．２つ以上の連続した用量は、約１週毎又は約２、３、４、５、６、７、８、９、１０週毎又は約１、２、３、４、５、６ヶ月以上毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１０９．１０以上の連続した用量は、約１週毎又は約２、３、４、５、６、７、８、９、１０週毎又は約１、２、３、４、５、６ヶ月以上毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１０．全ての用量は、約１週毎又は約２、３、４、５、６、７、８、９、１０週毎又は約１、２、３、４、５、６ヶ月以上毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１１．２つ以上の連続した用量は、約２週毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１２．３つの連続した用量は、約２週毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１３．３つ以上の連続した用量は、約２週毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１４．１０以上の連続した用量は、約２週毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１５．全ての用量は、約２週毎に投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１１６．２つ以上の連続した用量は、約４週毎に投与される、実施形態１～１１４のいずれか１つの方法。
１１７．１０以上の連続した用量は、約４週毎に投与される、実施形態１～１１４のいずれか１つの方法。
１１８．連続した用量の各々は、独立して、約１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態１０８～１１７のいずれか１つの方法。
１１９．全ての用量は、約４週毎に投与される、実施形態１～１１０のいずれか１つの方法。
１２０．１つ以上の用量は、最初の用量から約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６週間約２週毎に投与され、続いて、用量は、約３、４、５、６、７、８、９又は１０週毎に投与される、実施形態１～１１０のいずれか１つの方法。
１２１．用量は、約２週毎に最初に投与され、続いて最初の用量から約４週、８週、１２週又は１６週後、用量は、約４週毎に投与される、実施形態１～１１０のいずれか１つの方法。
１２２．用量は、約２週毎に最初に投与され、続いて最初の用量から約４週、８週、１２週又は１６週後、用量は、約１ヶ月毎に投与される、実施形態１～１１０のいずれか１つの方法。
１２３．２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上）の用量は、約２週毎に投与され、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上）の用量は、約４週毎に投与される、実施形態１～１１０のいずれか１つの方法。
１２４．２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上）の用量は、約２週毎に投与され、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上）の用量は、約１ヶ月毎に投与される、実施形態１～１１０のいずれか１つの方法。
１２５．約２週毎に投与される２つ以上の用量は、約４週毎又は１ヶ月毎に投与される２つ以上の用量の前に投与される、実施形態１２３～１２４のいずれか１つの方法。
１２６．組成物は、約７０％～８５％の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１２７．組成物は、約７０％～９０％の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１２８．組成物は、約７０％～８０％の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１２９．組成物は、約７０％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３０．組成物は、約７１％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３１．組成物は、約７２％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３２．組成物は、約７３％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３３．組成物は、約７４％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３４．組成物は、約７５％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３５．組成物は、約７６％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３６．組成物は、約７７％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３７．組成物は、約７８％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３８．組成物は、約７９％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１３９．組成物は、約８０％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４０．組成物は、約８１％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４１．組成物は、約８２％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４２．組成物は、約８３％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４３．組成物は、約８４％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４４．組成物は、約８５％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４５．組成物は、約８６％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４６．組成物は、約８７％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４７．組成物は、約８８％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４８．組成物は、約８９％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１４９．組成物は、約９０％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５０．純度は、２６０ｎｍでの面積％を使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態１２６～１４９のいずれか１つの方法。
１５１．純度は、２６０ｎｍでの面積％及びセットＡパラメーターを使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態１２６～１５０のいずれか１つの方法。
１５２．純度は、本明細書に記載されるとおりの純度に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって測定される、実施形態１２６～１５０のいずれか１つの方法。
１５３．組成物中の不純物は、約１０％～３０％以下である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５４．組成物中の不純物は、約１５％～３０％以下である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５５．組成物中の不純物は、約２０％～３０％以下である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５６．組成物中の不純物は、約３０％以下又は約３０％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５７．組成物中の不純物は、約２９％以下又は約２９％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５８．組成物中の不純物は、約２８％以下又は約２８％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１５９．組成物中の不純物は、約２７％以下又は約２７％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６０．組成物中の不純物は、約２６％以下又は約２６％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６１．組成物中の不純物は、約２５％以下又は約２５％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６２．組成物中の不純物は、約２４％以下又は約２４％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６３．組成物中の不純物は、約２３％以下又は約２３％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６４．組成物中の不純物は、約２２％以下又は約２２％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６５．組成物中の不純物は、約２１％以下又は約２１％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６６．組成物中の不純物は、約２０％以下又は約２０％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６７．組成物中の不純物は、約１９％以下又は約１９％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６８．組成物中の不純物は、約１８％以下又は約１８％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１６９．組成物中の不純物は、約１７％以下又は約１７％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７０．組成物中の不純物は、約１６％以下又は約１６％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７１．組成物中の不純物は、約１５％以下又は約１５％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７２．組成物中の不純物は、約１４％以下又は約１４％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７３．組成物中の不純物は、約１３％以下又は約１３％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７４．組成物中の不純物は、約１２％以下又は約１２％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７５．組成物中の不純物は、約１１％以下又は約１１％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７６．組成物中の不純物は、約１０％以下又は約１０％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１７７．不純物は、２６０ｎｍでの面積％を使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態１５３～１７６のいずれか１つの方法。
１７８．不純物は、２６０ｎｍでの面積％及びセットＡパラメーターを使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態１５３～１７７のいずれか１つの方法。
１７９．不純物は、本明細書に記載されるとおりの純度に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって測定される、実施形態１５３～１７８のいずれか１つの方法。
１８０．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８０％以上である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８１．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８５％以上である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８２．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８０％～９０％である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８３．立体化学的純度は、二量体モデリングによって評価される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８４．ＷＶＥ－Ｎ５３１の量は、２６０ｎｍのＵＶ及び２７ＯＤ／ｍｇによって測定される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８５．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載されるプロセスによって製造される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８６．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８７．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８８．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、セットＢパラメーターに従ってＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１８９．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、本明細書に記載されるとおりの立体化学的同一性に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって確認される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９０．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９１．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９２．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、ヘキサデカナトリウム塩である、実施形態１８５～１９１のいずれか１つの方法。
１９３．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載されるプロセスによって製造される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９４．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９５．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９６．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９７．医薬組成物は、本明細書に記載されるプロセスによって製造される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９８．医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
１９９．医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２００．医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２０１．ＷＶＥ－Ｎ５３１は、静脈内投与される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２０２．ＤＭＤ変異は、Δ３－５２、Δ４－５２、Δ５－５２、Δ６－５２、Δ９－５２、Δ１０－５２、Δ１１－５２、Δ１３－５２、Δ１４－５２、Δ１５－５２、Δ１６－５２、Δ１７－５２、Δ１９－５２、Δ２１－５２、Δ２３－５２、Δ２４－５２、Δ２５－５２、Δ２６－５２、Δ２７－５２、Δ２８－５２、Δ２９－５２、Δ３０－５２、Δ３１－５２、Δ３２－５２、Δ３３－５２、Δ３４－５２、Δ３５－５２、Δ３６－５２、Δ３７－５２、Δ３８－５２、Δ３９－５２、Δ４０－５２、Δ４１－５２、Δ４２－５２、Δ４３－５２、Δ４５－５２、Δ４７－５２、Δ４８－５２、Δ４９－５２、Δ５０－５２、Δ５１－５２、Δ５２、Δ５４－５８、Δ５４－６１、Δ５４－６３、Δ５４－６４、Δ５４－６６、Δ５４－７６又はΔ５４－７７である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２０３．変異は、Δ５２を含む、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２０４．変異は、Δ５２である、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２０５．変異は、Δ４５－５２である、実施形態２０３の方法。
２０６．変異は、Δ４７－５２である、実施形態２０３の方法。
２０７．変異は、Δ４８－５２である、実施形態２０３の方法。
２０８．変異は、Δ４９－５２である、実施形態２０３の方法。
２０９．変異は、Δ５０－５２である、実施形態２０３の方法。
２１０．変異は、Δ５１－５２である、実施形態２０３の方法。
２１１．筋肉のジストロフィンは、ＤＭＤである、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１２．エクソン５３は、ＤＭＤ ｍＲＮＡでスキップされる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１３．エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡのレベルは、上昇する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１４．ＤＭＤ ｍＲＮＡの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％以上は、特定の期間にわたる投与後又は特定の数の用量後、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡである、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１５．トランケートされたＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較して生成される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１６．トランケートされたＤＭＤポリペプチドのレベルは、上昇する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１７．トランケートされたＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を果たす、実施形態２１５～２１６のいずれか１つの方法。
２１８．特定の期間にわたる投与後又は特定の数の用量後、正常レベルの約１％以上の、ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇をもたらす、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２１９．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約２％以上である、実施形態２１８の方法。
２２０．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約５％以上である、実施形態２１８の方法。
２２１．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約５．３％以上である、実施形態２１８の方法。
２２２．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約６％以上である、実施形態２１８の方法。
２２３．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約７％以上である、実施形態２１８の方法。
２２４．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約８％以上である、実施形態２１８の方法。
２２５．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約９％以上である、実施形態２１８の方法。
２２６．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１０％以上である、実施形態２１８の方法。
２２７．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１１％以上である、実施形態２１８の方法。
２２８．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１２％以上である、実施形態２１８の方法。
２２９．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１３％以上である、実施形態２１８の方法。
２３０．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１４％以上である、実施形態２１８の方法。
２３１．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１５％以上である、実施形態２１８の方法。
２３２．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１６％以上である、実施形態２１８の方法。
２３３．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１７％以上である、実施形態２１８の方法。
２３４．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１８％以上である、実施形態２１８の方法。
２３５．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約１９％以上である、実施形態２１８の方法。
２３６．ジストロフィンレベルにおけるベースラインからの上昇は、正常レベルの約２０％以上である、実施形態２１８の方法。
２３７．上昇は、最初の用量から約１２週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２３８．上昇は、最初の用量から約１３週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２３９．上昇は、最初の用量から約１４週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４０．上昇は、最初の用量から約２４週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４１．上昇は、最初の用量から約２５週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４２．上昇は、最初の用量から約２６週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４３．上昇は、最初の用量から約３６週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４４．上昇は、最初の用量から約３７週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４５．上昇は、最初の用量から約３８週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４６．上昇は、最初の用量から約４８週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４７．上昇は、最初の用量から約４９週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４８．上昇は、最初の用量から約５０週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２４９．上昇は、最初の用量から約７２週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２５０．上昇は、最初の用量から約７３週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２５１．上昇は、最初の用量から約７４週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２５２．上昇は、最初の用量から約９６週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２５３．上昇は、最初の用量から約９７週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２５４．上昇は、最初の用量から約９８週間の投与後に測定される、実施形態２１８～２３６のいずれか１つの方法。
２５５．上昇は、６用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２５６．上昇は、７用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２５７．上昇は、８用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２５８．上昇は、１２用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２５９．上昇は、１３用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６０．上昇は、１４用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６１．上昇は、２４用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６２．上昇は、２５用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６３．上昇は、３０用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６４．上昇は、３５用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６５．上昇は、４０用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６６．上昇は、４５用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６７．上昇は、４８用量後に測定される、実施形態２１８～２５４のいずれか１つの方法。
２６８．ＤＭＤ機能は、上昇する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２６９．ＤＭＤ機能は、回復される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７０．対象における歩行の喪失は、低減される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７１．対象における疾患進行は、遅延されるか又は遅くなる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７２．対象における筋力低下は、遅延されるか又は遅くなる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７３．対象における筋肉量の減少は、遅延されるか又は遅くなる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７４．対象における肺機能の低下は、遅延されるか又は遅くなる、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７５．対象は、筋ジストロフィー評価において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７６．対象は、１０メートル歩行試験において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７７．対象は、１つ以上の機能評価において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７８．対象は、ノース・スター歩行能力評価（ＮＳＡＡ）２．０において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２７９．対象は、上肢のパフォーマンス（ＰＵＬ）２．０において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８０．対象は、タイムドテストによる１つ以上の下肢運動機能において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８１．対象は、４段昇段において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８２．対象は、床からの立ち上がり時間において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８３．対象は、上肢近位筋力において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８４．対象は、手持ち式筋力測定において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８５．対象は、１つ以上の肺機能検査において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８６．対象は、最大流速［ＰＦＲ］、最大呼気流速［ＣＰＦ］及びＦＶＣの１つ以上において改善する、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８７．改善は、ベースラインと比較される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８８．改善は、ＷＶＥ－Ｎ５３１投与の欠如と比較される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２８９．改善は、参照組成物の投与と比較される、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２９０．参照組成物は、投与されるＷＶＥ－Ｎ５３１組成物と同等であるが、ＷＶＥ－Ｎ５３１を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの方法。
２９１．対象は、小児対象である、先行する実施形態のいずれかの方法。
２９２．対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の最初の用量の少なくとも約１ヶ月前にステロイドを投与される、先行する実施形態のいずれかの方法。
２９３．対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の最初の用量の少なくとも約６ヶ月前にステロイドを投与される、先行する実施形態のいずれかの方法。
２９４．対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の最初の用量の少なくとも約１ヶ月前にコルチコステロイドを投与される、先行する実施形態のいずれかの方法。
２９５．対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の最初の用量の少なくとも約６ヶ月前にコルチコステロイドを投与される、先行する実施形態のいずれかの方法。
２９６．コルチコステロイドは、デフラザコートである、実施形態２９４～２９５のいずれか１つの方法。
２９７．ＷＶＥ－Ｎ５３１を含む組成物。
２９８．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１の形態は、薬学的に許容される塩形態である、実施形態２９７の組成物。
２９９．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１の各形態は、独立して、塩形態である、実施形態２９７～２９８のいずれか１つの組成物。
３００．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１の各形態は、独立して、薬学的に許容される塩形態である、実施形態２９７～２９９のいずれか１つの組成物。
３０１．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１の形態は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である、実施形態２９７～３００のいずれか１つの組成物。
３０２．原薬である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３０３．製剤である、実施形態２９７～３０１のいずれか１つの組成物。
３０４．液体組成物であり、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、溶解されている、先行する実施形態のいずれか１つの化合物。
３０５．薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３０６．薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝溶液であるか又はそれを含む、実施形態３０５の組成物。
３０７．組成物中の構成成分は、ＷＶＥ－Ｎ５３１、第一リン酸カリウム、第二リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び水並びにｐＨ調整のための塩酸及び／又は水酸化ナトリウムである、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３０８．等張性である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３０９．約７～８のｐＨを有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３１０．約７．３のｐＨを有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３１１．医薬組成物は、約７．４のｐＨを有する、実施形態３０９の組成物。
３１２．ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約５～４５ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３１３．ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約２５～４０ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態３１２の組成物。
３１４．ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約５～７ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態３１２の組成物。
３１５．ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約６ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、実施形態３１２の組成物。
３１６．バイアル中に包装され、バイアル中の組成物の体積は、少なくとも６ｍＬである、実施形態３１５の組成物。
３１７．バイアル中に包装され、バイアル中の組成物の体積は、少なくとも６～７ｍＬである、実施形態３１５～３１６のいずれか１つの組成物。
３１８．バイアル中に包装され、バイアル中の組成物の体積は、少なくとも６～６．５ｍＬである、実施形態３１５～３１６のいずれか１つの組成物。
３１９．約７０％～９０％の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２０．約７０％～８５％の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２１．約７０％～８０％の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２２．約７０％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２３．約７１％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２４．約７２％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２５．約７３％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２６．約７４％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２７．約７５％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２８．約７６％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３２９．約７７％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３０．約７８％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３１．約７９％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３２．約８０％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３３．約８１％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３４．約８２％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３５．約８３％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３６．約８４％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３７．約８５％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３８．約８６％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３３９．約８７％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４０．約８８％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４１．約８９％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４２．約９０％以上の純度を有する、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４３．純度は、２６０ｎｍでの面積％を使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態３１９～３４２のいずれか１つの組成物。
３４４．純度は、２６０ｎｍでの面積％及びセットＡパラメーターを使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態３１９～３４２のいずれか１つの組成物。
３４５．純度は、本明細書に記載されるとおりの純度に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって測定される、実施形態３１９～３４２のいずれか１つの組成物。
３４６．組成物中の不純物は、約１０％～３０％以下である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４７．組成物中の不純物は、約１５％～３０％以下である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４８．組成物中の不純物は、約２０％～３０％以下である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３４９．組成物中の不純物は、約３０％以下又は約３０％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５０．組成物中の不純物は、約２９％以下又は約２９％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５１．組成物中の不純物は、約２８％以下又は約２８％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５２．組成物中の不純物は、約２７％以下又は約２７％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５３．組成物中の不純物は、約２６％以下又は約２６％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５４．組成物中の不純物は、約２５％以下又は約２５％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５５．組成物中の不純物は、約２４％以下又は約２４％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５６．組成物中の不純物は、約２３％以下又は約２３％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５７．組成物中の不純物は、約２２％以下又は約２２％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５８．組成物中の不純物は、約２１％以下又は約２１％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３５９．組成物中の不純物は、約２０％以下又は約２０％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６０．組成物中の不純物は、約１９％以下又は約１９％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６１．組成物中の不純物は、約１８％以下又は約１８％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６２．組成物中の不純物は、約１７％以下又は約１７％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６３．組成物中の不純物は、約１６％以下又は約１６％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６４．組成物中の不純物は、約１５％以下又は約１５％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６５．組成物中の不純物は、約１４％以下又は約１４％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６６．組成物中の不純物は、約１３％以下又は約１３％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６７．組成物中の不純物は、約１２％以下又は約１２％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６８．組成物中の不純物は、約１１％以下又は約１１％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３６９．組成物中の不純物は、約１０％以下又は約１０％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７０．不純物は、２６０ｎｍでの面積％を使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態３４６～３６９のいずれか１つの組成物。
３７１．不純物は、２６０ｎｍでの面積％及びセットＡパラメーターを使用してＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、実施形態３４６～３７０のいずれか１つの組成物。
３７２．不純物は、本明細書に記載されるとおりの純度に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって測定される、実施形態３４６～３７１のいずれか１つの組成物。
３７３．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８０％以上である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７４．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８５％以上である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７５．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８０％～９０％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７６．立体化学的純度は、二量体モデリングによって評価される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７７．ＷＶＥ－Ｎ５３１の量は、２６０ｎｍのＵＶによって測定される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７８．ＷＶＥ－Ｎ５３１の量は、２６０ｎｍのＵＶ及び２７ＯＤ／ｍｇによって測定される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３７９．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載されるプロセスによって製造される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８０．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられる、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８１．組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８２．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８３．ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、ヘキサデカナトリウム塩である、実施形態３７９～３８２のいずれか１つの組成物。
３８４．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８５．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載されるプロセスによって製造される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８６．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられる、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８７．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８８．ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３８９．本明細書に記載されるプロセスによって製造される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９０．医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられる、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９１．医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９２．医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９３．ＤＳ１を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９４．ＤＳ２を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９５．ＤＳ３を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９６．ＤＳ４を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９７．ＤＳ５を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９８．ＤＳ６を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
３９９．ＤＳ７を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４００．ＤＳ８を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０１．ＤＳ９を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０２．ＤＳ１０を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０３．ＤＳ１１を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０４．ＤＳ１２を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０５．ＤＳ１３を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０６．ＤＳ１４を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０７．ＤＳ１５を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０８．ＤＳ１６を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４０９．ＤＳ１７を含有しない、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４１０．ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つを含む組成物であって、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７）を含まない組成物。
４１１．ＷＶＥ－Ｎ５３１を含む、実施形態４１０の組成物。
４１２．ＤＳ１を含む、実施形態４１０の組成物。
４１３．ＤＳ２を含む、実施形態４１０の組成物。
４１４．ＤＳ３を含む、実施形態４１０の組成物。
４１５．ＤＳ４を含む、実施形態４１０の組成物。
４１６．ＤＳ５を含む、実施形態４１０の組成物。
４１７．ＤＳ６を含む、実施形態４１０の組成物。
４１８．ＤＳ７を含む、実施形態４１０の組成物。
４１９．ＤＳ８を含む、実施形態４１０の組成物。
４２０．ＤＳ９を含む、実施形態４１０の組成物。
４２１．ＤＳ１０を含む、実施形態４１０の組成物。
４２２．ＤＳ１１を含む、実施形態４１０の組成物。
４２３．ＤＳ１２を含む、実施形態４１０の組成物。
４２４．ＤＳ１３を含む、実施形態４１０の組成物。
４２５．ＤＳ１４を含む、実施形態４１０の組成物。
４２６．ＤＳ１５を含む、実施形態４１０の組成物。
４２７．ＤＳ１６を含む、実施形態４１０の組成物。
４２８．ＤＳ１７を含む、実施形態４１０の組成物。
４２９．約は、±１％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３０．約は、±２％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３１．約は、±３％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３２．約は、±４％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３３．約は、±５％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３４．約は、±６％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３５．約は、±７％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３６．約は、±８％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３７．約は、±９％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３８．約は、±１０％である、先行する実施形態のいずれか１つの組成物。
４３９．本明細書に記載される方法に従ってＷＶＥ－Ｎ５３１組成物を製造する方法。
４４０．ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用して、製造されたＷＶＥ－Ｎ５３１組成物中の純度及び／又は不純物を評価し、及び純度及び／又は不純物が特定の基準を満たす場合に調製物を出荷することを含む、実施形態４３９の方法。
４４１．組成物は、原薬である、実施形態４３９～４４０のいずれか１つの方法。
４４２．組成物は、製剤である、実施形態４３９～４４０のいずれか１つの方法。
４４３．ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物を出荷する方法であって、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用して、ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物中の純度及び／又は不純物を評価し、及び純度及び／又は不純物が特定の基準を満たす場合に調製物を出荷することを含む方法。
４４４．ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用するＷＶＥ－Ｎ５３１の純度を評価する方法。
４４５．ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣは、本明細書に記載される１つ以上のパラメーターを利用した、実施形態４４０～４４４のいずれか１つの方法。
４４６．ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣは、セットＡの１つ以上のパラメーターを利用した、実施形態４４０～４４４のいずれか１つの方法。
４４７．ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣは、セットＡパラメーターを利用した、実施形態４４０～４４４のいずれか１つの方法。
４４８．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認される、実施形態４３９～４４７のいずれか１つの方法。
４４９．ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用してＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性を確認する方法。
４５０．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、セットＢパラメーターに従ってＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認される、実施形態４３９～４４９のいずれか１つの方法。
４５１．ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、本明細書に記載されるとおりの立体化学的同一性に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって確認される、実施形態４３９～４４９のいずれか１つの方法。
４５２．組成物は、先行する実施形態のいずれか１つである、実施形態４３９～４５１のいずれか１つの方法。
４５３．本明細書に記載される化合物、オリゴヌクレオチド、組成物、方法、プロセス、使用、用量又は投与レジメン。
前述は、本開示の特定の非限定的な実施形態の説明であった。したがって、本明細書に記載される本開示の実施形態は、本開示の原理の適用の単なる例示であることを理解されたい。例示される実施形態の詳細に対する本明細書における参照は、いずれかの特許請求の範囲を限定することを意図されない。
本開示の特定の実施形態の機能及び利点は、下記の実施例からより詳細に理解され得る。以下の実施例は、そのような実施形態の特定の利点を例示することを意図される。
実施例１．ＷＶＥ－Ｎ５３１はインビトロ及び動物での試験に基づいてヒト投与のために十分に安全である
とりわけ、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１が本明細書に記載されるとおりの様々な用量及び投与レジメンに従ってヒト対象に投与され得ることを実証する霊長類におけるものを含むデータを提供する。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ヒトデュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）を標的化して、ＤＭＤを有する患者における機能的なジストロフィンタンパク質のエクソン５３スキッピング及び回復を誘導することができるオリゴヌクレオチドである。
とりわけ、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、患者に由来する細胞株でエクソンスキッピング及びタンパク質回復を誘導した。インビボにおいて、エクソンスキッピング、ジストロフィンタンパク質回復及び生存の改善は、代替分子を使用してｍｄｘ２３及び／又は二重ノックアウト（ｄＫＯ）マウスモデルで達成された。これらのモデルは、エクソン２３における点変異を有し、したがって、ＷＶＥ－Ｎ５３１の化学反応を模倣するホスホロアミダート（ＰＮ）骨格を有するマウスエクソン２３を特異的に標的化することを意図される配列を有するマウス代替オリゴヌクレオチドがこれらの実験で使用された。インビボでの標的関与も、ＷＶＥ－Ｎ５３１を使用して薬理学的に関連する種である健康なカニクイザルで実証された。ジストロフィンが欠損した筋肉では、体内分布及びエクソンスキッピングは、他のオリゴヌクレオチドで観察された健康な正常な筋肉におけるものより多い場合がある。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、非臨床毒性試験で評価され、ヒトにおけるＷＶＥ－Ｎ５３１の投与を妨げることになるリスクは同定されていない。４５ｍｇ／ｋｇでのサルにおける１４週の反復投与後、所見の軽度の重症度、希発の発生率及び／又は動物の健康及び幸福に対する影響の欠如から、有害な作用はないとみなされた。最大無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、評価された最高用量である少なくとも４５ｍｇ／ｋｇ／用量であるとみなされた。
マウス及びサルの両方で観察される他の所見は、オリゴヌクレオチドで一般的に観察されるものと一致しており、有害ではなく可逆的から部分的に可逆的な腎臓及び肝臓所見、炎症促進作用及び凝固因子［プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）及びフィブリノーゲン］に対する一過的な作用を含んだ。これらのリスクは、診療所で容易にモニターされ得る。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、インビトロ若しくはインビボでの遺伝毒性又はヒトゲノムに対するハイブリダイゼーションを介するオフターゲット効果を伴わないことが観察された。インビトロにおいて、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ヒトレポーター細胞でトール様受容体９（ＴＬＲ９）を活性化しなかったか、又はエクスビボでヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）における炎症性サイトカインを増加させなかった。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、評価された最高用量（４５ｍｇ／ｋｇ）までサルにおける心血管又は呼吸器機能に影響を及ぼさなかった。マウスで評価された最高用量（１８０ｍｇ／ｋｇ）まで、ＣＮＳ機能に対する有害作用は観察されなかった。
様々な非臨床試験で観察される様々な所見は、他のオリゴヌクレオチドで観察されるクラス効果と一致する。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ＤＭＤ患者由来筋芽細胞株（例えば、ＤＭＤ Δ４５－５２及びＤＭＤ Δ５２）でＤＭＤエクソンスキッピングをもたらし、ジストロフィンタンパク質を回復させることが実証されている。さらに、ＷＶＥ－Ｎ５３１、ＷＶ－２１２１８と同等の化学を有するマウスエクソン２３特異的オリゴヌクレオチドは、ＤＭＤのｍｄｘ２３マウスモデルでエクソン２３スキッピング及びジストロフィン回復に対する用量反応を実証した。このオリゴヌクレオチドは、ユートロフィン及びジストロフィンの両方を欠き、ＤＭＤを有する患者で観察されるものと同等の重度の筋ジストロフィー表現型を発症するＤＭＤに関するｄＫＯマウスモデルにおいて、エクソンスキッピング、ジストロフィンタンパク質回復及び寿命の延長を含む他の生物学的作用も実証した。例えば、国際公開第２０２１／２３７２２３号を参照されたい。
バイオインフォマティクスツールを使用して、ＷＶＥ－Ｎ５３１に対する配列相同性に基づいて潜在的なオフターゲット効果を決定した。分析は、配列依存的なオフターゲット効果が最小限であることを示唆した。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、細胞に基づくレポーターアッセイにおいて、自然免疫タンパク質ＴＬＲ９を活性化する能力に関して分析された。試験される細胞（ヒトＴＬＲ９を過剰発現するヒト胚性腎臓細胞）に対するＷＶＥ－Ｎ５３１暴露は、水で処理した細胞（陰性対照）と比較して最大３０μＭの濃度でＴＬＲ９レポーター活性を増大させなかった。ヒトＴＬＲ９を活性化するＷＶＥ－Ｎ５３１の潜在力は、これらの試験データに基づいて無視できる。
ＷＶＥ－Ｎ５３１の免疫活性化の潜在力も、健康なヒトドナー由来のＰＢＭＣとＷＶＥ－Ｎ５３１をインキュベートした後のサイトカイン放出の評価によって評価された。ＷＶＥ－Ｎ５３１に対するサイトカイン応答は、７つの分析物のいずれに関しても水に対するサイトカイン応答と統計的有意に異ならなかった：ＩＦＮα２、ＩＬ１２ｐ４０、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＮＦα。ＭＣＰ－１レベルにおける統計的に有意な低下は、陰性（Ｈ２Ｏ）及び陽性対照（ＴＬＲ７／ＴＬＲ８アゴニストＲ８４８）の両方と比較して観察された。これらのデータは、ＷＶＥ－Ｎ５３１が、このエクスビボのＰＢＭＣアッセイで測定されるとおり、無視できる免疫刺激潜在力を有することを示した。
ＩＶ投与後のカニクイザルにおける心血管及び呼吸器機能並びにＣＤ－１マウスにおけるＣＮＳ機能に対するＷＶＥ－Ｎ５３１の効果は、ＧＬＰ試験で評価された。試験デザインの概要は、以下の表に示される（ＩＶ＝静脈内）。
Figure 2025507889000032
マウスにおける試験では、ＣＮＳ機能に対するＷＶＥ－Ｎ５３１の効果は、１、１５、２９、４３、５７、７１、８５及び９９日目の隔週でのＷＶＥ－Ｎ５３１のＩＶ（ボーラス）注射による溶媒（カルシウム又はマグネシウムを伴わないｄＰＢＳ）又は１５、６０若しくは１８０ｍｇ／ｋｇ／用量後に雄及び雌ＣＤ－１マウスで評価された。機能観察総合評価（ＦＯＢ）データによれば、最大１８０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量で有害なＣＮＳ効果は観察されなかった。
サルにおける１つの試験では、心血管及び呼吸器機能に対するＷＶＥ－Ｎ５３１の効果は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の単回投与後に意識下でラジオテレメトリーを装着した雄カニクイザルで評価された。動物は、６０分のＩＶ注入を介してＷＶＥ－Ｎ５３１（３、１５又は４５ｍｇ／ｋｇ）又はｄＰＢＳ（カルシウム又はマグネシウムを伴わない）を受容した。心血管又は呼吸器機能に対するＷＶＥ－Ｎ５３１関連効果は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の最大４５ｍｇ／ｋｇの投与後に観察されなかった。補体因子Ｂｂ及びＣ３ａ血漿濃度における用量依存的な増大が１５及び４５ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１でのＥＯＩ後の２分目に観察された。対照と比較して、ＥＯＩ後の２分目で、因子Ｂｂにおける増大は、それぞれ１５及び４５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで３．７倍及び３４．６倍であり、Ｃ３ａにおける増大は、それぞれ１５及び４５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで２．０倍及び３２．４倍であり、２４時間までにベースラインに戻った。
サルにおける別の試験では、心血管機能に対するＷＶＥ－Ｎ５３１の効果は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の反復投与後に麻酔された雄及び雌カニクイザルで評価された。動物は、隔週の１時間のＩＶ注入を介して溶媒（カルシウム又はマグネシウムを伴わないｄＰＢＳ）又は３、１５若しくは４５ｍｇ／ｋｇの用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容した。心電図（ＥＣＧ）は、投与前期に１回並びに投与期の１５及び７１日目の投与後０．５時間（±０．２５時間）に収集された。最大４５ｍｇ／ｋｇ／用量の雄又は雌カニクイザルへのＷＶＥ－Ｎ５３１の１時間のＩＶ注入投与後、効果は観察されなかった。
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、マウス及びサルを含む動物で実行される薬物動態試験におけるヒト対象への投与のための、血漿タンパク質結合、組織分布、代謝などを含む好適な薬物動態プロファイルを実証した。
ＣＤ－１マウス（最大１４週）及びカニクイザル（最大１４週）でＩＶ投与経路を使用することを含む非ＧＬＰ及びＧＬＰ反復投与毒性試験が実行されている。ＷＶＥ－Ｎ５３１は、２つのインビトロ試験及びマウスにおけるインビボ試験で潜在的な毒性についても評価されている。全てのＧＬＰ試験は、経済協力開発機構（ＯＥＣＤ）のデータ相互受け入れ基準［OECD Decision Reference C(89) 87 (Final)］を満たした。
ＷＶＥ－Ｎ５３１を評価する１つの非臨床プログラムは、マウス及びサルの両方における非ＧＬＰ反復投与毒性試験、両方の種における１３週の回復を伴う１４週の反復投与ＧＬＰ毒性試験、インビトロ及びインビボ遺伝毒性学並びにインビボ安全性薬理学を含む。
マウス：雄マウスでは、１週毎のＩＶボーラス注射（０、３０、９０又は１８０ｍｇ／ｋｇ／用量）を介するＷＶＥ－Ｎ５３１投与の６週後、いくつかの炎症作用が観察された。全体的に、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、最大１８０ｍｇ／ｋｇの用量でマウスにおいて忍容性が良好であるとみなされた。雄及び雌ＣＤ－１マウスでＩＶボーラス注射（合計で８用量）を介して隔週で１４週間投与されたＷＶＥ－Ｎ５３１（０、１５、６０又は１８０ｍｇ／ｋｇ／用量）の反復投与が評価された。この試験に関するＮＯＡＥＬは、６０ｍｇ／ｋｇ／用量であるとみなされた。この用量レベルは、投与期の９９日目にそれぞれ１００２±１３５μｇ／ｍＬ及び１３３０±１０９μｇ・ｈ／ｍＬの性別を組み合わせた平均Ｃｍａｘ及びＡＵＣlast値に対応した。
サル：雄サルでは、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１週間に１回投与された２５ｍｇ／ｋｇ及び隔週で投与された４５ｍｇ／ｋｇの用量レベルまで忍容性は良好であるとみなされた。４５ｍｇ／ｋｇ／用量が投与された動物の重症度が軽度の所見、発生頻度が低いこと及び／又は健康及び幸福に対する影響の欠如を鑑みて、この用量に関する効果は、有害ではないとみなされた。この試験に関するＮＯＡＥＬは、４５ｍｇ／ｋｇ／用量であるとみなされた。４５ｍｇ／ｋｇ／用量の用量レベル（隔週で投与される）は、投与期の２９日目のそれぞれ５２９μｇ／ｍＬ及び４３８０μｇ・ｈｒ／ｍＬのＣｍａｘ及びＡＵＣlast値に対応した。
様々な非臨床試験の結果は、マウス及びサルにおけるＷＶＥ－Ｎ５３１と関連する主要所見が、全身性の炎症及び凝固作用に関するいくらかの可能性、胸腺の細胞充実性の低下（マウスのみ）並びに肝臓及び腎臓における効果を含むオリゴヌクレオチドのクラス効果と一致することを示す。最大４５ｍｇ／ｋｇ／用量で雄カニクイザルに投与されたＷＶＥ－Ｎ５３１の６０分のＩＶ注入後、心血管又は呼吸器機能に対して効果は観察されなかった。ＷＶＥ－Ｎ５３１は、標準的なインビトロ及びインビボアッセイで評価された遺伝毒性と関連付けられなかった。
これらの所見は、とりわけ、ＷＶＥ－Ｎ５３１が、本明細書に記載される様々な用量及び投与レジメンを含む様々な方法に従うヒト対象への投与に関して十分に安全であることを確立する。
実施例２．ＷＶＥ－Ｎ５３１は、霊長類で安全及び効果的なエクソンスキッピングをもたらす
とりわけ、本開示は、ＷＶＥ－Ｎ５３１が様々な投与量において非ヒト霊長類で効果的なエクソンスキッピングをもたらすことができることを実証する。サルは、６回の１週毎の投与の最後から２日後に剖検された。ＤＭＤ転写物におけるエクソン５３スキッピングを検出するために、ｃＤＮＡがＲＮＡ試料から調製された。非定量的ＲＴ－ＰＣＲアッセイを使用して、エクソン５３スキッピングは、ＷＶＥ－Ｎ５３１を受容するサルで評価された。図２に示されるとおり、「スキップされていない」転写物は、全ての試料で検出された一方（パネルＡ、バンドを示す矢印）、「スキップされた」転写物は、ＷＶＥ－Ｎ５３１で治療された動物（動物＃３～＃８、パネルＢ）由来の試料のみで検出され、エクソンスキッピングが３ｍｇ／ｋｇ以上の全ての用量で達成されたことを実証している。
スボディルセン（２５ｍｇ／ｋｇで週に２回）と比較して、ＷＶＥ－Ｎ５３１（４５ｍｇ／ｋｇで隔週）は、非ヒト霊長類動物でより高い血漿Ｃｍａｘ（いくつかの例では、約２～３倍）、ＡＵＣ（いくつかの例では、約８～１３倍）及びCtroughをもたらした。心臓及び横隔膜を含む筋肉におけるＷＶＥ－Ｎ５３１濃度は、非ヒト霊長類動物でスボディルセンより実質的に高く、様々な例で複数倍高かった。
実施例３．ＷＶＥ－Ｎ５３１の臨床試験。
ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性及び有効性は、臨床試験で評価される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１による臨床試験は、エクソン５３スキッピング介入に影響を受けやすい変異を有するＤＭＤを有する患者でＩＶ ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ及び臨床効果を評価するための第１ｂ／２ａ相非盲検試験である。
１ｍｇ／ｋｇ（別段の指定がない限り、用量は、ＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい）は、ヒト対象で安全であることが示された。
より高い様々な用量、例えば約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ｍｇ／ｋｇの１つ以上が用量漸増試験を介して投与され、様々な用量及び投与レジメンの安全性プロファイル及び効果（例えば、ＤＭＤエクソン５３スキッピング、ＤＭＤタンパク質回復、生物学的機能の回復など）が評価される。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約４ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約６ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約７ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約８ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約９ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１４ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１６ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１７ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１８ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約１９ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、用量又は各用量は、独立して、約２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、約１ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約３ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約５ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約８ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約１０ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約１５ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約２０ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約３～５ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約５～１０ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約１０～１５ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、約１５～２０ｍｇ／ｋｇが投与される。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、１つ以上の用量、それぞれ独立して、約３～２０ｍｇ／ｋｇ、例えば約３～５、５～１０、１０～１５、１５～２０又は約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０ｍｇ／ｋｇを含むか又はそれからなり、それぞれ独立して、その直前の用量の約１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０週又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２ヶ月後に投与される（２つ以上の用量が投与される場合）。いくつかの実施形態では、投与レジメン中の各用量は、ほぼ同じである。いくつかの実施形態では、２つの連続した用量間の２つ以上又は全ての間隔は、同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の後の用量は、最初又は初期の用量と比較してより長い間隔で投与され得る。
いくつかの実施形態では、臨床試験は、ＮＣＴ０４９０６４６０の１つ以上の条件、治験実施計画書、方法、基準、尺度外、デザインなどであるか又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、臨床試験は、ＮＣＴ０４９０６４６０である。
有用な臨床試験の治験実施計画書は、例として以下に示される。いくつかの実施形態では、臨床試験は、下記の試験の１つ以上の条件、治験実施計画書、方法、基準、尺度外、デザインなどであるか又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、臨床試験は、下記の試験に従って実行される。当業者は、試験が調整され得ることを理解している。
デュシェンヌ筋ジストロフィーを有する患者におけるＷＶＥ－Ｎ５３１の非盲検第１ｂ／２ａ相試験
とりわけ、試験は、例えば、三角筋組織におけるジストロフィンレベルの変化、ＷＶＥ－Ｎ５３１の薬物動態（ＰＫ）及びＷＶＥ－Ｎ５３１の臨床効果を評価することにより、例えば筋肉機能、筋力及び肺機能の変化を評価することによってエクソン５３スキッピング介入に影響を受けやすいデュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）を有する患者におけるＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性及び忍容性、筋肉組織におけるＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度、ＷＶＥ－Ｎ５３１の薬力学的（ＰＤ）効果の１つ以上を評価する。
試験に参加するために、患者は、エクソン５３スキッピング介入に影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の実証された変異を有しなければならない。
この試験は、２つのパートを有する。パートＡにおける患者（最大５名の患者）は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の漸増投与を受けた後、各投与間で最も低い用量レベルで始まる≧２８日の安全性モニタリング期間を受けることになる。治験依頼者は、ＰＤ反応に最適化された用量レベルに用量設定する試みでは、漸増用量による急性の忍容性を慎重に評価するため、４つの用量レベルを評価するように計画する。用量レベルの数は、この試験のパートＢにおける複数回投与の治療のための用量レベルと同様に、安全性及びＰＫデータの進行中の審査に基づいて決定されることになる。パートＢのおよそ１２名の患者は、選択された用量レベルにおいて隔週で投与される７回の投与を受けることになる。パートＡの患者は、この試験へのさらなる参加を妨げることになるいずれの安全性事象も経験しなかったことを条件として、固定用量レベルで隔週において最大でさらなる３用量のＷＶＥ－Ｎ５３１の投与を受け得る。パートＡの患者は、最大で合計７用量の投与を受けることになる。全ての推奨用量は、現場の治験責任医師からの入力とともに、独立したデータ安全性モニタリング委員会（ＤＳＭＢ）によって審査され、支持されることになる。
パートＡの患者は、７用量を受容した後の追跡調査期間に生検（三角筋から）を受けることになる。パートＢの患者は、ベースライン生検及び投与の完了後の追跡調査期間に生検を受けることになる。
パートＡにおける用量選択に関する基準及びパートＢを開始する判断は、以下で詳述される。
パートＡ。
患者は、パートＡの開始の６週前までにスクリーニングを開始することになる。パートＡは、患者内用量漸増部分及び複数回投与部分を有することになる。最小で３名の患者が登録されることになり、最大で７用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容することになる。最大５名の患者が登録され得る。
・ＷＶＥ－Ｎ５３１の４つの漸増用量は、各用量間で≧２８日の安全性モニタリング期間で投与されることになる。
・固定用量レベルで隔週において最大でさらなる３用量。
評価される第１の用量レベルは、１ｍｇ／ｋｇである。全ての用量レベルでのパートＡの投与は、時間差様式で実施されることになる。４８時間当たり２名以上の患者がパートＡ中に投与されることはない。全ての患者は、安全性追跡調査のために２４時間の投与後モニタリング期間を通して診療所に滞在することになり、３日目（投与のおよそ４８時間後）に戻ることになる。同じ用量レベルで次の患者の投与に進む判断は、投与された以前の患者の４８時間の観察期間の安全性データの審査に基づくことになり、次の患者に進む判断は、治験責任医師の評価を考慮に入れることになる。少なくとも３名の患者は、ある用量レベルでの２週間の投与後追跡調査来院を完了した後、全ての利用可能な安全性及びＰＫデータが審査されることになる。後の用量投与のための推奨用量レベルは、現場の治験責任医師からの入力により、ＤＳＭＢによって審査され、支持されることになる。患者は、次の用量レベルを受容する前に、評価される各用量レベルに関して投与後最低で２８日間、安全性、ＰＫ及び機能評価に関して評価が継続されることになる。ＤＳＭＢ審査後に登録された任意の追加の患者は、評価のために選択される後の用量レベルを受容することになる。ＤＳＭＢ審査に関する詳細は、以下で提供される。
最大耐用量（ＭＴＤ）が達成されてから、パートＡの患者は、この試験へのさらなる参加を妨げることになるいずれの安全性事象も経験しなかったことを条件として、固定用量レベル（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ）で隔週において最大でさらなる３用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容することになる。患者は、この試験のパートＡにおいて最大で７用量を受容することになる。患者は、治療期間全体にわたって安全性及びＰＫ評価を受けることになる。患者は、複数回投与の治療の完了の２週間後に切開筋肉生検を受けることになる。患者は、最終用量後の１０週にわたって安全性に関してモニタリングが継続されることになる。いくつかの実施形態では、漸増する患者内単一用量は、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ及び約１０ｍｇ／ｋｇを含むか又はそれらである。いくつかの実施形態では、隔週の約１０ｍｇ／ｋｇの３つのさらなる用量が投与される。
ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性、ＰＫ及び筋肉組織濃度の審査に基づいて、パートＢの開始についての判断がなされることになる。
パートＢ。
パートＢでは、およそ１２名の新規の患者が登録されることになる。患者は、投与の６週前までにスクリーニングを開始することになる。患者の適格性が判断されてから、患者はベースライン切開筋肉生検を受けることになる。ベースライン生検は、その後の最初の用量の少なくとも２週前に行われるべきである。パートＢの患者は、隔週で７用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容することになる。全ての患者は、パートＢでＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性、ＰＫ、ＰＤ及び臨床効果に関して評価されることになる。加えて、患者は、ノース・スター歩行能力評価（ＮＳＡＡ）２．０、上肢のパフォーマンス（ＰＵＬ）２．０、４段昇段、手持ち式筋力測定及び肺機能検査を含む通常の機能評価を受けることになる。これらの評価は、以下で指定される順序で実施されるべきである。機能評価は、投与の２４時間前まで実施され得、その日のいずれかの他の評価、特に採血前に実施されるべきである。患者は、最終用量の投与の２週後に２回目の切開筋肉生検を受けることになる。患者は、最終用量後の１０週にわたって安全性に関してモニタリングが継続されることになる。
用量選択は、臨床安全性、忍容性及びＰＫデータによって主に導かれることになる。加えて、試験されることになる最高用量での計画される暴露は、マウスの１４週の優良試験所基準（ＧＬＰ）毒性試験（６０ｍｇ／ｋｇ／用量）の無毒性量（ＮＯＡＥＬ）で観察される１３３０μｇ・ｈ／ｍＬのゼロ時から最後まで数量化できる濃度（ＡＵＣlast）値の血漿濃度－時間曲線下の最小面積又はサルの１４週のＧＬＰ毒性試験（４５ｍｇ／ｋｇ／用量）のＮＯＡＥＬで観察される８５２μｇ／ｍＬの最も低い最大観察濃度（Ｃｍａｘ）値を超えないことが提案される。
各用量レベルに関する用量の増加は、前の用量レベルから３倍以下である。
パートＡの複数回投与部分と同じ用量レベルがパートＢで評価されることになるが、異なる用量レベルがパートＡからの所見に基づいて選択され得る。パートＢで使用される用量は、パートＡで決定されるＭＴＤを超えない。
患者の数：およそ１５名の患者。
試験集団：患者は、以下の組み入れ及び除外基準の全てに従って認定する場合、登録されることになる。
組み入れ基準：
１．患者及び／又は親若しくは法的保護者は、いずれかの試験関連手順前に書面によるインフォームドコンセントを提供する能力を有し、その意思を有しなければならない。
２．血清クレアチンキナーゼの増加を有する臨床表現型に基づくＤＭＤの診断。
３．エクソン５３介入に影響を受けやすいＤＭＤと関連するＤＭＤ遺伝子中の実証された変異。
４．ＰＵＬの肩部の構成要素の項目１又は２における≧１のスコア。
５．歩行可能な又は歩行不能な男性。
６．スクリーニング時に≧５歳及び≦１８歳。
７．予定される来院、薬物投与計画、臨床検査、試験の制約及び筋肉生検手順を受けることを含む全ての試験手順を遵守する意思があり、その能力を有すること。
８．以下によって測定されるとおりの安定した肺機能及び心機能：
ａ．≧５０％の再現性のある予測される努力肺活量（ＦＶＣ）のパーセント。
ｂ．心エコー像（ＥＣＨＯ）又は心臓核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって測定されるとおり（及び実証されるとおり）の＜１０歳の患者における＞５５％及び≧１０歳の患者における＜４５％の左室駆出率（ＬＶＥＦ）。
９．切開筋肉生検を実施するためのスクリーニング時の十分な三角筋。
１０．スクリーニングの≧６ヵ月前に行われた全身性コルチコステロイド療法を開始し、スクリーニング来院の≦３ヵ月前に用量に変更がないものとして規定された、安定したコルチコステロイド療法レジメンを現在受けている。
１１．性的に成熟した男性は、患者が性的に活発である場合、試験期間中及び試験薬物の最終用量後１０週間（すなわち、５半減期）避妊する意思がなければならない。
１２．患者及び介護者は、ソーシャルメディア上にいずれの試験関連情報も投稿しないことに同意しなければならない。
除外基準：
１．治験責任医師の判断による、患者が試験手順への参加及び／又は試験手順の完了に適さなくなる、ＤＭＤ以外の身体検査における臨床的に意義のある医学的所見。
２．以下を含む他の以前の又は進行中の医学的状態：
ａ．最初のスクリーニング来院の４週以内の急性疾病、
ｂ．ＤＭＤに起因する筋骨格所見と関連するもの以外の異常な身体所見。
３．患者の安全性に有害な影響を及ぼし、治療又は追跡調査の期間が完了する見込みがないか、又は試験結果の評価を損なうと治験責任医師が判断した臨床検査値異常。これらには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
ａ．スクリーニング来院時に正常範囲上限（ＵＬＮ）の＞１．５×の血清シスタチンＣレベルの上昇によって定義されるとおりの異常な腎機能、
ｂ．≧２．５×ＵＬＮの肝機能グルタミン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＬＤＨ）及び≧２×ＵＬＮ（又は国際標準比［ＩＮＲ］≧１．５×ＵＬＮ）のビリルビンの肝機能の障害、
ｃ．≧１．５×ＵＬＮの活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）値、
ｄ．正常範囲下限（ＬＬＮ）未満の血小板数。
４．実証された陽性のＢ型肝炎表面抗原又はＣ型肝炎抗体検査。
５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に関して陽性であることが知られている。
６．治験責任医師の判断による、この試験への参加を禁止する可能性のある重度の認知能力障害及び／又は行動上の問題。
７．心不全：
ａ．治験責任医師の判断によりこの試験への参加を禁止する重度の心筋症、しかしながら、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤又はベータ遮断薬によって管理される心筋症は、患者がＬＶＥＦ組み入れ基準を満たすという条件で許容される。
ｂ．臨床的に意義のある構造的又は機能的心臓異常の任意の他の証拠。
８．治験責任医師の判断では、日中に機械的換気若しくは非侵襲的換気が必要であるか、又は今後１年以内に日中に機械的換気若しくは非侵襲的換気が必要と予測される。夜間の非侵襲的換気は許容される。
９．スクリーニング来院前１ヵ月以内に栄養補助食品若しくはハーブ系栄養補助食品又は併用薬を変更するか又は試験中に改変する（用量又はレジメン）予定がある。
１０．現在、抗凝固薬又は慢性の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）及びヘパリンなどの出血のリスクを著しく高めることが知られている薬物を使用している。
１１．治験のペプチドにコンジュゲートされたホスホロジアミダートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）又はドリサペルセンにより以前に治療を受けた。
１２．ＤＭＤのための遺伝子療法により以前に治療を受けた。
１３．スクリーニング前の１４週以内にアタルレン、ビルトラルセン、エテプリルセン又はゴロジルセンによる治療を受けた。
１４．スクリーニング前の３ヶ月以内又は５半減期のいずれか長い期間内に任意の治験薬を受容した。
１５．脈拍、血圧、呼吸機能の変化などの全身性のアレルギー反応によって実証されるとおりの任意のオリゴヌクレオチドに対する既知の過感受性。
１６．親又は法的保護者が治験責任医師、治験分担医師、治験コーディネーター又は他の治験スタッフとして直接的又は間接的にこの試験の実施及び管理に関与しているか、又は患者が、この試験に直接的又は間接的に関与している上記の人物の一親等の家族、重要な他者又は同居親族である。
治験薬、用量、経路、レジメン：ＷＶＥ－Ｎ５３１は、注入用の希釈のための等張性溶液として提供されることになる。ＷＶＥ－Ｎ５３１の４つの用量レベルが計画される。投与経路は、ＩＶである。注入は、最低６０分にわたって投与されるべきである。しかしながら、注入時間は、忍容性を高めるために必要である場合、最大３時間まで延長され得る。
試験期間：パートＡは、各用量間で≧２８日の安全性モニタリング期間を伴って用量の漸増を含有する。複数回投与レベルの選択後、パートＡの患者は、最大３つの追加用量を隔週で受容し、その後、最終用量後１０週間の追跡調査を受けることになる。患者は、合計で７用量を受容することになる。パートＢは、隔週の７用量及び最終用量後の１０週の追跡調査からなる。
評価項目：
安全性
・ＡＥ：生命徴侯、安全性臨床検査（血液学、化学、凝固、検尿）及び心電図（ＥＣＧ）を含む身体検査所見は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性及び忍容性を評価するためにモニター／収集されることになる。
薬物動態及び薬物動力学
・ＷＶＥ－Ｎ５３１の複数回投与後の筋肉組織のウエスタンブロットによって評価されるとおりのジストロフィンレベル（％正常ジストロフィン）。
・筋肉組織におけるＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度。
・ＷＶＥ－Ｎ５３１のＰＫ。
臨床効果
・ＮＳＡＡ（バージョン２．０）
・ＰＵＬ（バージョン２．０）
・タイムドテスト（１０メートル歩行／走行時間、４段昇段時間及び床からの立ち上がり時間を含む）による下肢運動機能
・手持ち式筋力計によって評価される上肢近位筋力
・肺機能検査（最大流速［ＰＦＲ］、最大呼気流速［ＣＰＦ］及びＦＶＣ）
統計方法：
パートＡに関する正式な標本サイズの決定は実施されなかった。最大で５名の患者は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の漸増用量の安全性、忍容性及びＰＫの予備的な評価に十分であるとみなされた。
パートＢは、ベースラインと比較してジストロフィン（％正常）に対するＷＶＥ－Ｎ５３１の効果を実証するために設計された。標本サイズの決定は、以下の前提に基づいた：
・ジストロフィンにおけるベースラインからの変化が０より大きいことを試験する１標本ｔ検定。
・５（正常の％）以上のジストロフィンにおけるベースラインからの変化の平均増加。
・２．５％の片側有意水準。
・４．５％のジストロフィンレベルにおけるベースラインからの変化の標準偏差（ＳＤ）。
・１０％の脱落率又は非評価率。
分析集団
安全性集団は、全ての治療される患者を含むことになる。
ジストロフィン分析集団は、安全性集団のサブセットであり、ベースライン後ジストロフィン値を有する患者を含むことになる。
ＰＫ集団は、安全性集団のサブセットであり、評価可能なＰＫデータを有する対象を含むことになる。
安全性の分析
ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性の評価は、ＴＥＡＥ、治療中断を引き起こすＴＥＡＥ、重症度によるＴＥＡＥ、関連性によるＴＥＡＥ及び重篤なＴＥＡＥの概要を含むことになる。臨床評価の変更も要約されることになる。
ジストロフィンレベル（正常の％）における変化の分析
ベースラインからのジストロフィンレベル（正常の％）の変化は、１標本ｔ検定を使用して分析されることになる。
特定の試験デザイン
これは、ＤＭＤを有する患者における静脈内（ＩＶ）ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ及び臨床効果を評価するための非盲検試験である。試験に参加するために、患者は、エクソン５３スキッピング介入に影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の実証された変異を有しなければならない。
スクリーニング
スクリーニング期間は、試験に関する患者の適格性の判断を可能にする。それは、試験のインフォームドコンセントが患者及び／又は親若しくは法的保護者（適宜）によって署名されたときに開始することになる。加えて、患者は、同意の提供が要求される場合がある（該当する場合）。患者は、投与の６週前までにスクリーニングを開始することになる。スクリーニング評価は、それらがスクリーニング期間内であれば、複数の日に行うことができる。治験責任医師は、患者が適格性基準を満たすかどうかを判断し、患者の十分な特徴付けを可能にする人口統計及び医学的データを収集することになる。
患者は、この試験に参加するために、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の実証された変異を有しなければならない。この評価は、変異分析のための一般に認められている検査法を使用して実施されなければならなかった。
治療
パートＡ
パートＡは、患者内用量漸増部分及び複数回投与部分からなる。３名の患者が登録されることになり、最大で７用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容することになる。
用量漸増部分
患者内用量漸増部分では、患者は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の漸増投与を受け、各投与間で最も低い用量レベルで始まる≧２８日の安全性モニタリング期間を受けることになる。評価される第１の用量レベルは、１ｍｇ／ｋｇとする。全ての用量レベルでのパートＡの投与は、時間差様式で実施されることになる。４８時間当たり２名以上の患者がパートＡ中に投与されることはない。全ての患者は、安全性追跡調査のために２４時間の投与後モニタリング期間を通して診療所に滞在することになり、３日目／４回目来院（投与のおよそ４８時間後）に戻ることになる。同じ用量レベルで次の患者の投与に進む判断は、投与された以前の患者の４８時間の観察期間の安全性データの審査に基づくことになり、次の患者に進む判断は、治験責任医師の評価を考慮に入れることになる。患者は、２２日目／７回目来院まで週毎の来院のために診療所に戻ることになる。その後の週毎の安全性モニタリングは、患者が次の用量の投与のために戻るまで、電話／遠隔医療来院を介して治験責任医師によって完了されることになる。用量間は、最低で２８日空けなければならない。
最小で３名の患者がある用量レベルでの２週間の投与後追跡調査来院を完了した後、全ての利用可能な安全性及びＰＫデータが審査されることになる。後の用量投与のための推奨用量レベルは、治験責任医師からの入力により、ＤＳＭＢによって審査され、支持されることになる。患者は、次の用量レベルを受容する前に、評価される各用量レベルに関して投与後最低で２８日間、安全性、ＰＫ及び機能評価に関して評価が継続されることになる。ＤＳＭＢ審査後に登録された任意の追加の患者は、評価のために選択される後の用量レベルを受容することになる。
複数投与部分
最大耐用量（ＭＴＤ）が達成されてから、パートＡの患者は、この試験へのさらなる参加を妨げることになるいずれの安全性事象も経験しなかったことを条件として、固定用量レベルで隔週において最大でさらなる３用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容することになる。全ての患者は、合計で最大７用量を受容することになる。患者は、治療期間全体にわたって安全性及びＰＫ評価を受けることになる。患者は、複数回投与の治療の完了の２週間後に三角筋から切開筋肉生検を受けることになる。患者は、最終用量後の最大１０週にわたって安全性に関してモニタリングが継続されることになる。ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性、ＰＫ及び筋肉組織濃度の審査に基づいて、パートＢの開始についての判断がなされることになる。
パートＢ
パートＢでは、およそ１２名の新規の患者が登録されることになる。パートＢの患者は、固定用量レベルにおいて隔週で７用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を受容することになり、安全性、ＰＫ、ＰＤ及び臨床効果に関して評価されることになる。パートＢの患者は、ベースラインの切開筋肉生検を受けることになる。この切開筋肉生検は、三角筋から採取されることになり、ベースライン機能評価を得る前の外科手術からの回復を可能にするために、その後の１回目の用量（パートＢ１日目／２回目来院）の少なくとも２週前に採取されることになる。患者は、最終用量の完了の２週後に２回目の切開筋肉生検を受けることになる。全ての患者は、パートＢ全体にわたってＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性、ＰＫ及びＰＤの通常の評価を受けることになる。加えて、患者は、ＮＳＡＡ ２．０、ＰＵＬ ２．０、４段昇段、手持ち式筋力測定及び肺機能検査を含む通常の機能評価を受けることになる。機能評価は、投与の２４時間前まで実施され得、その日のいずれかの他の評価、特に採血前に実施されるべきである。
パートＢの１４週目／１０回目の来院（最終用量の最低で２週後）で、全ての患者は、筋肉組織に対するＷＶＥ－Ｎ５３１のＰＤ効果を評価するための２回目の筋肉生検を受けることになる。加えて、筋肉組織中のＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度が評価されることになる。パートＢの全ての患者は、安全性のために２２週目／１３回目の来院（最終用量の１０週後）まで追跡されることになる。
患者が早期に試験から離れる場合、患者は、早期中止（ＥＴ）来院を完了しなければならない。試験評価項目
安全性
・有害事象（ＡＥ）並びに生命徴侯、安全性臨床検査（血液学、化学、凝固、検尿）及び心電図（ＥＣＧ）を含む身体検査所見は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性及び忍容性を評価するためにモニター／収集されることになる。
薬物動態及び薬物動力学
・ＷＶＥ－Ｎ５３１の複数回投与後の筋肉組織のウエスタンブロットによって評価されるとおりのジストロフィンレベル（％正常ジストロフィン）
・筋肉組織におけるＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度
・ＷＶＥ－Ｎ５３１のＰＫ
臨床効果
・ＮＳＡＡ（バージョン２．０）
・ＰＵＬ（バージョン２．０）
・タイムドテスト（１０メートル歩行／走行時間、４段昇段時間及び床からの立ち上がり時間を含む）による下肢運動機能
・手持ち式筋力計によって評価される上肢近位筋力
・肺機能検査（最大流速［ＰＦＲ］、最大呼気流速［ＣＰＦ］及びＦＶＣ）
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ＩＶ注入用の希釈のための等張性溶液として提供されることになる。ＷＶＥ－Ｎ５３１は、単回使用バイアルで溶液として供給される。試験薬物は、指示書に従って注入前に０．４５％塩化ナトリウム注射液又は０．９％塩化ナトリウム注射液で希釈されるべきである。試験薬物は、訓練を受けた担当者によって試験現場で投与されることになる。投与経路は、ＩＶとなり、注入の総体積は、患者重量に基づいて１００ｍＬ～５００ｍＬとなる。注入は、最低６０分間にわたって投与されるべきである。しかしながら、注入時間は、忍容性を潜在的に高めるために、必要な場合、最大で３時間まで延長され得る。調製された注入溶液は、保存剤を含有せず、４時間以内に投与されるべきである。ＷＶＥ－Ｎ５３１は、生理食塩水注入バッグ／容器中で再構成／希釈される。患者は、注入中に定位置のままであるべきである。
治療遵守：これは、診療所で投与されることになるＩＶ投与される薬物であるため、治療の非遵守は問題にならないと予想される。
評価の方法及び評価項目
安全性評価。安全性評価は、以下を含むことになる。
・ＡＥ
・病歴及び人口統計
・以前及び同時の薬物療法
・身体検査（神経学的及び精神医学的なものを含む）
・生命徴侯
・身長及び体重
・１２－リードＥＣＧ
・ＥＣＨＯ又は心臓ＭＲＩ
・臨床検査値の評価（臨床化学、血液学及び検尿を含む）
治験責任医師の医学的及び科学的判断で臨床的に意義のあるいずれかの異常な臨床検査結果（血液学、臨床化学若しくは尿）又は他の安全性評価（例えば、生命徴候測定）は、ＡＥ又はＳＡＥとして記録されることになる。
薬物動態評価
血漿薬物動態：全ての患者に関する試料採取は、上の予定に従って収集されることになる。血液試料は、治験依頼者に承認されたＣＲＯによってなされる分析のために収集されることになる。試料は、ＤＭＤのための治療の開発に関連する調査のためにのみ治験依頼者及び／又は契約したベンダーによって使用されることになり、最大で１５年間保管されることになる。全ての生物材料は、権限のないアクセスが禁止され、試料が偶発的に又は不法に失われないか、劣化しないか又は破壊されないことを確実にするように保管され、保証されることになる。試料収集、保管、加工及び出荷のための詳細な指示書は、試験に特異的なマニュアルで提供されることになる。
ＷＶＥ－Ｎ５３１の筋肉濃度：筋肉組織におけるＷＶＥ－Ｎ５３１濃度は、ハイブリダイゼーション－ライゲーション酵素結合免疫吸着測定（ＨＬ－ＥＬＩＳＡ、十分な組織試料が利用可能である場合）によって評価され得る。試料は、ＤＭＤのための治療の開発に関連する調査のためにのみ治験依頼者及び／又は契約したベンダーによって使用されることになり、最大で１５年間保管されることになる。全ての生物材料は、権限のないアクセスが禁止され、試料が偶発的に又は不法に失われないか、劣化しないか又は破壊されないことを確実にするように保管され、保証されることになる。試料収集、保管、加工及び出荷のための詳細な指示書は、試験に特異的なマニュアルで提供されることになる。
免疫原性：免疫原性試料は、評価の予定に従い、血清中の抗薬物及び抗ジストロフィン抗体を評価するために収集されることになる。試料は、ＤＭＤのための治療の開発に関連する調査のためにのみ治験依頼者及び／又は契約したベンダーによって使用されることになり、最大で１５年間保管されることになる。全ての生物材料は、権限のないアクセスが禁止され、試料が偶発的に又は不法に失われないか、劣化しないか又は破壊されないことを確実にするように保管され、保証されることになる。試料収集、保管、加工及び出荷のための詳細な指示書は、試験に特異的なマニュアルで提供されることになる。
薬力学的評価：筋肉生検から採取される組織試料は、ジストロフィンタンパク質レベルにおける変化に関して評価されることになる。加えて、薬物又はバイオマーカーの存在に関する探索的免疫組織化学評価が実施され得る。潜在的に出現するバイオマーカーのための血清試料も、評価の計画に記述される時点で収集されることになる。試料は、ＤＭＤのための治療の開発に関連する調査のためにのみ治験依頼者及び／又は契約したベンダーによって使用されることになり、最大で１５年間保管されることになる。全ての生物材料は、権限のないアクセスが禁止され、試料が偶発的に又は不法に失われないか、劣化しないか又は破壊されないことを確実にするように保管され、保証されることになる。
ウエスタンブロットによるジストロフィン定量化：ジストロフィンのレベルは、ベースライン（パートＢ）及び治療の最後（パートＡ及びＢ）で収集される筋肉組織においてウエスタンブロットによって定量化され得る。筋肉組織由来の回復したジストロフィンタンパク質の量は、検証ウエスタンブロット法を使用して評価されることになる。
臨床効果：全ての機能評価は、投与前（投与日又はそれぞれの投与の最大２４時間前）に実施されなければならない。ＮＳＡＡ及びタイムドテストの両方に含まれる機能評価は、ＮＳＡＡの一部として１時点毎に１回のみ施されることになり、両方の評価に従ってスコア化されることになる。機能評価は、以下で指定される順序で実施されるべきである。
・ＮＳＡＡ ２．０
・ＰＵＬ ２．０
・４段昇段
・手持ち式筋力測定
・肺機能検査（ＰＦＲ、ＣＰＦ及びＦＶＣ）
運動機能の測定は、評価の計画に従って実施されることになる。患者は、可能な場合にのみ運動機能及び強度検査を実施するべきである。患者が試験を完了することができない場合、これは、症例報告フォームで文書化されるべきである。
ノース・スター歩行能力評価－機能評価：ＮＳＡＡは、ＤＭＤを有する歩行可能な小児で運動機能を測定するために特異的に設計された検証された一次元スケールである。このスケールは、多施設の世界的な研究に好適であり、ＤＭＤを有する患者のための適切な機能評価として国際的に広く使用される。ＮＳＡＡは、起立（項目１）から走行（項目１７）までの機能的に歩行を維持するのに必要な１７の項目を含む。このスケールは、頭を上げる及びかかとで立つなどの疾患の初期段階に存在し得る能力並びに一般に未治療のＤＭＤを有する小児では完全に達成されることのない片足跳び又は走行などの他の活動を評価する項目を含む。それぞれの項目は、以下の単純な基準を使用する３点スケール上でスコア化される。２ － 正常、いずれの補助も伴わずに目標を達成する、１ － 修正された方法、別の人からの身体的な補助に依存せずに目標を達成する、及び０ － 独立して達成することができない。合計スコアは、個々の項目スコアの和である。スコアは、独立して活動ができない０から、全ての活動をいずれの補助も伴わずに達成することができる３４までの範囲であり得る。スケールは、一般に、最大１５分で完了される。ＮＳＡＡは、下肢運動機能の以下の時間評価も含む：仰臥位から起立までの時間及び１０メートル歩行する時間。ＮＳＡＡの一部ではない追加の時間機能試験は、４段の標準サイズの階段を昇る時間である。
上肢のパフォーマンス（ＰＵＬ ２．０）試験：ＰＵＬ試験は、歩行可能なＤＭＤ患者及び歩行不能なＤＭＤ患者の上肢機能を評価する評価ツールであり、ＤＭＤを有する男児及びその家族を含む国際共同グループによって開発された。ＰＵＬ試験は、ＤＭＤにおける脱力の進行及び機能低下の自然経過を反映している概念的枠組みで設計された。
４段昇段：４段の標準サイズの階段を昇る時間は、歩行可能な患者で下肢運動機能を測定することになる。
手持ち式筋力測定：上肢近位筋力は、手持ち式筋力計によって評価されることになる。
肺機能検査：肺機能検査（ＰＦＲ、ＣＰＦ及びＦＶＣ）は、Microlab肺活量計を使用して実施されることになる。ＰＦＲ及びＣＰＦ：神経筋障害によって引き起こされる筋力低下は、ＰＦＲの値の低下をもたらす。この試験は、労力に依存する。ＣＰＦの使用は、労力に関連する変動を最小化し得る。したがって、神経筋脱力を有する患者に関して、最大流量計によって測定されるＣＰＦは、呼気性筋力の信頼できる測定値である。ＦＶＣ：ＦＶＣ評価中、患者は、最大限の呼吸を行い、肺を全肺気量（ＴＬＣ）まで満たし、続いて最大限まで呼息する。最大の吸息後の強制的な呼息中に排出される気体の総体積がＦＶＣである。値は、神経筋疾患を有する患者で低減される。ＦＶＣの測定値は、患者が座位にある間に収集されることになる。患者が胸腰椎デバイスを装着している場合、測定値は、デバイスを装着し、座位にある患者で取得されることになる。
統計方法
試験薬物暴露及び遵守：試験薬物暴露及び遵守の程度は、安全性集団に関して要約されることになる。
安全性データの分析
分析は、パートＡ及びパートＢ分析を含むことになる。全ての安全性分析は、以下の共通の規則を使用して安全性集団に対して実施されることになる。
・ベースライン値は、試験薬物の最初の用量前の最後の利用可能な値として一般に定義される。
・有害事象の観察期間は、以下のとおりに定義される：
○治療前ＡＥは、試験薬物の最初の用量前に発症したか又は悪化したＡＥである。
○治療中ＡＥは、試験薬物の最初の用量から試験完了／中断までに発症したか又は悪化したＡＥである。ＴＥＡＥの概要は、全ての治療中ＡＥを含むことになる。
・中央検査機関／測定値の記述統計学の読み取りに基づく定量的安全性パラメーターは、ベースライン値から来院までの結果及び変化を要約するために使用されることになる。
血漿及び筋肉中に存在するＷＶＥ－Ｎ５３１の量が評価される。薬物動態パラメーターは、Ｃｍａｘ（最大観察濃度）、ＡＵＣlast（ゼロ時から最後の数量化できる濃度までの血漿濃度－時間曲線下面積）、ＡＵＣｉｎｆ（ゼロ時から無限大までの血漿濃度－時間曲線下面積）、ｔ１／２（終末半減期）、ＣＬ（全身クリアランス）及びＶｄｓｓ（定常状態での分布容積）を含む。いくつかの実施形態では、提供される技術は、既存のオリゴヌクレオチド治療薬と比較して薬物動態特性の改善を提供する。
ＷＶＥ－Ｎ５３１及び／又はジストロフィンに対する抗体を含むＷＶＥ－Ｎ５３１の免疫原性が評価される。いくつかの実施形態では、提供される技術は、血清中のＷＶＥ－Ｎ５３１及び／又はジストロフィンに対する抗体を誘導しないか、又はそのような抗体のレベルは、ＷＶＥ－Ｎ５３１が対象に投与され得るように許容される。
いくつかの実施形態では、ベースラインからのジストロフィンレベル（正常の％）の変化が評価される。いくつかの実施形態では、それは、１標本ｔ検定を使用して分析される。
いくつかの実施形態では、中間解析が実施される。いくつかの実施形態では、中間解析が実施されない。
いくつかの実施形態では、試験は、臨床試験で医薬品の臨床試験の実施の基準（ＧＣＰ）のための医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）によって提供されるガイドライン及び任意の他の適用可能な現地の規制要件を満たす治験実施計画書及びＳＯＰに従って実行されることになる。
第１ｂ／２ａ相非盲検臨床試験では、患者は、両方ともに１ｍｇ／ｋｇでＷＶＥ－Ｎ５３１及びスボディルセンの単一用量を受容した。ＷＶＥ－Ｎ５３１に関する血漿ＡＵＣは、スボディルセンのものの約４倍であり、ＷＶＥ－Ｎ５３１に関するＣｍａｘは、スボディルセンのものの約２．５倍であった。ＷＶＥ－Ｎ５３１は、スボディルセンよりはるかに長い血漿半減期を実証した：スボディルセンに関する血漿半減期は２４時間未満であったが、ＷＶＥ－Ｎ５３１の半減期は、１週間を超えると推定された。
追加のデータは、ＷＶＥ－Ｎ５３１が、本明細書に記載されるその治療的使用を支持する様々な利点を提供することができることを確証した。第１ｂ／２ｂ相、非盲検臨床試験では、患者は、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１の単回投与又は１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのスボディルセンの単回投与を受けた。図４及び図６並びに以下の表１に示されるとおり、６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１に関する血漿ＡＵＣlastは、５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのものの約４．６倍であり、６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１に関する血漿Ｃｍａｘは、５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのものの約２．１倍であった。６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１に関する血漿濃度は、７日目に５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのものの約４３倍であった。図５に示されるとおり、６ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１の単回投与は、注入後の少なくとも１０５日目に数量化できる血漿濃度（例えば、＞０．００２μｇ／ｍＬ）をもたらすことができる。さらに、図６及び以下の表１に見られるとおり、１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１に関する血漿ＡＵＣlastは、５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのものの約１１倍であり、１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１に関する血漿濃縮は、７日目に５ｍｇ／ｋｇのスボディルセンのものの約５８倍であった。いくつかの実施形態では、１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１の単回投与に関する血漿濃度及び他の薬物動態パラメーターは、およそ２５日の半減期を実証し、月毎の投与を支持し得る。より低い用量でさえ、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、スボディルセンと比較して高い血漿濃度をもたらすことができる（例えば、５ｍｇ／ｋｇ又はさらに１０ｍｇ／ｋｇのスボディルセンに関するものと比較した３ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１に関するデータを参照されたい）。
Figure 2025507889000033
第１ｂ／２ａ相非盲検臨床試験では、患者は、１、３、６及び１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１の単回の漸増用量を受容し、続いて約１～２ヶ月後、隔週（０週目、２週目、４週目）の１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１の３回の投与を受けた。最終用量（６週目）後の２週目に、筋肉生検が実施された。筋肉生検は、ＷＶＥ－Ｎ５３１濃度、ＷＶＥ－Ｎ５３１局在化、％エクソン５３スキッピング及びジストロフィン発現について分析された。個々の患者に関する特定のデータは、表２で以下に示される。平均ＷＶＥ－Ｎ５３１筋肉濃度は、およそ４２μｇ／ｇ（およそ６．１μＭ）であった。高レベルのエクソン５３スキッピングが観察された：ＲＴ－ＰＣＲによる平均エクソン５３スキッピングは、およそ５３％であった。本出願人の知る限り、それは、２０２２年１２月１９日時点で、エクソンスキッピングがＤＭＤを有する男児の臨床試験で報告された最も早い時点であった。ウエスタンブロットによる平均ジストロフィン発現は、正常のおよそ０．２７％であった（１％の定量限界未満である）。理論によって制限される意図はないが、本出願人は、タンパク質生成がＲＮＡ転写物のスプライシングに遅れる場合があることを認めている。いくつかの実施形態では、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、ＲＮＡインサイチュハイブリダイゼーションを使用して筋線維核で可視化されたが、これは、ＷＶＥ－Ｎ５３１が筋肉細胞で核に到達できることを確証している。とりわけ、これらのデータは、ＷＶＥ－Ｎ５３１が、ゴロジルセン及び／又はビルトラルセンより著しく低い２週毎の１０ｍｇ／ｋｇでさえ、非常に高いレベルのエクソン５３スキッピングをもたらすことができることを確証している。
Figure 2025507889000034
ＷＶＥ－Ｎ５３１は、安全であり、忍容性が良好であるように見える。治療により発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、中等度の強度の単回のＣＯＶＩＤ－１９感染を除いて、軽度であった。ＷＶＥ－Ｎ５３１に関連する全ての有害事象（ＡＥ）（頭痛、そう痒性皮疹）は、軽度で一過的であり、後遺症を伴わずに消散した。重篤な有害事象（ＳＡＥ）、中止基準を満たす事象、ＴＥＡＥの増加に関する傾向及びオリゴヌクレオチドクラス関連安全性事象（例えば、血小板減少症、凝固、補体活性化、サイトカイン活性化）の証拠はなかった。
追加の臨床試験も設計され、ＷＶＥ－Ｎ５３１の安全性及び有効性を評価するために本開示に従って当業者によって実行され得る。例えば、より長い期間が、ジストロフィンの生成を評価し、確認するために利用され得る。

Claims (76)

  1. 筋ジストロフィーを治療する方法であって、それに罹患している対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、前記対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する、方法。
  2. 対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法、又は
    対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法、又は
    対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、前記対象に１つ以上の用量のＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、各用量は、独立して、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、方法、又は
    対象においてＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法、又は
    対象においてＤＭＤポリペプチドを提供する方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含み、前記ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較してトランケートされる、方法、又は
    対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量でＷＶＥ－Ｎ５３１を投与することを含む方法。
  3. 前記ＤＭＤポリペプチドは、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされ、及び／又は前記ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を提供する、請求項２に記載の方法。
  4. 前記対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有し、及び／又は前記対象は、筋ジストロフィーに罹患しており、任意選択により、前記対象は、ＤＭＤに罹患している、請求項２に記載の方法。
  5. ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１つ以上の形態、任意選択により１つ以上の薬学的に許容される塩形態で投与され、任意選択により、１つの形態は、ＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 筋ジストロフィーを治療する方法であって、それに罹患している対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、前記対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子の変異を有する、方法。
  7. 対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法、又は
    対象においてＤＭＤエクソン５３スキッピングをもたらす方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法、又は
    ＤＭＤ ＲＮＡリーディングフレームを回復させる方法であって、対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法、又は
    対象においてＤＭＤポリペプチドを提供する方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、前記ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較してトランケートされる、方法、又は
    対象においてＤＭＤ機能のレベルの上昇をもたらす方法であって、前記対象に、約１～２０（例えば、約１～５、約５～１０、約１０～１５、約１５～２０又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０）ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい用量において、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
  8. 前記ＤＭＤポリペプチドは、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡによってコードされ、及び／又は前記ＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を提供する、請求項７に記載の方法。
  9. 前記対象は、エクソン５３スキッピングに影響を受けやすいＤＭＤ遺伝子中の変異を有し、及び／又は前記対象は、筋ジストロフィーに罹患しており、任意選択により、前記対象は、ＤＭＤに罹患している、請求項７又は８に記載の方法。
  10. 用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ又は約２０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. ２用量以上（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０用量以上）が投与される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 各用量は、独立して、ＷＶＥ－Ｎ５３１及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物で投与される、請求項１１に記載の方法。
  13. 各用量は、ほぼ同じ量のＷＶＥ－Ｎ５３１を有し、任意選択により、各用量中のＷＶＥ－Ｎ５３１は、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ又は約２０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、請求項１１又は１２に記載の方法。
  14. 約は、±１％、±２％、±３％、±４％、±５％、±６％、±７％、±８％、±９％又は±１０％である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. ＷＶＥ－Ｎ５３１は、１つ以上の薬学的に許容される塩形態として前記医薬組成物中に存在し、任意選択により、薬学的に許容される塩形態は、ヘキサデカナトリウム塩である、請求項６～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記医薬組成物は、溶解されたＷＶＥ－Ｎ５３１を含む液体組成物である、請求項６～１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝溶液であるか又はそれを含む、請求項６～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 医薬組成物中の構成成分は、ＷＶＥ－Ｎ５３１、第一リン酸カリウム、第二リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び水並びにｐＨ調整のための塩酸及び／又は水酸化ナトリウムである、請求項６～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記医薬組成物は、等張性である、請求項６～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記医薬組成物は、約７～８のｐＨを有し、任意選択により、前記医薬組成物は、約７．３又は７．４のｐＨを有する、請求項６～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. ２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の連続した用量は、約１週毎若しくは約２、３、４、５、６、７、８、９、１０週毎又は約１、２、３、４、５、６ヶ月以上毎に投与される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 全ての用量は、約１週毎若しくは約２、３、４、５、６、７、８、９、１０週毎又は約１、２、３、４、５、６ヶ月以上毎に投与される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記連続した用量の各々は、独立して、約１０ｍｇ／ｋｇのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、請求項２１又は２２に記載の方法。
  24. 前記組成物は、約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％以上の純度を有する、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記純度及び／又は不純物は、２６０ｎｍでの面積％を使用して、任意選択により２６０ｎｍでの面積％及びセットＡパラメーターを使用して、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、請求項２４に記載の方法。
  26. 立体化学的純度は、二量体モデリングによって評価され、及び／又はＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８０％、８５％、９０％以上である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. ＷＶＥ－Ｎ５３１の量は、２６０ｎｍのＵＶ及び２７ＯＤ／ｍｇによって測定される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、任意選択によりセットＢパラメーターに従ってＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載されるプロセスによって製造され、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられ、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷され、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、ヘキサデカナトリウム塩である、請求項２９に記載の方法。
  31. ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載されるプロセスによって製造され、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられ、記載される１つ以上の方法によって出荷され、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 医薬組成物は、本明細書に記載されるプロセスによって製造され、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられ、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷され、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. ＷＶＥ－Ｎ５３１は、静脈内投与される、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. ＤＭＤ変異は、Δ３－５２、Δ４－５２、Δ５－５２、Δ６－５２、Δ９－５２、Δ１０－５２、Δ１１－５２、Δ１３－５２、Δ１４－５２、Δ１５－５２、Δ１６－５２、Δ１７－５２、Δ１９－５２、Δ２１－５２、Δ２３－５２、Δ２４－５２、Δ２５－５２、Δ２６－５２、Δ２７－５２、Δ２８－５２、Δ２９－５２、Δ３０－５２、Δ３１－５２、Δ３２－５２、Δ３３－５２、Δ３４－５２、Δ３５－５２、Δ３６－５２、Δ３７－５２、Δ３８－５２、Δ３９－５２、Δ４０－５２、Δ４１－５２、Δ４２－５２、Δ４３－５２、Δ４５－５２、Δ４７－５２、Δ４８－５２、Δ４９－５２、Δ５０－５２、Δ５１－５２、Δ５２、Δ５４－５８、Δ５４－６１、Δ５４－６３、Δ５４－６４、Δ５４－６６、Δ５４－７６又はΔ５４－７７であり、任意選択により、前記ＤＭＤ変異は、Δ５２を含むか又はΔ５２である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡのレベルが上昇するか、又はＤＭＤ ｍＲＮＡの約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％以上は、特定の期間にわたる投与後又は特定の数の用量後、エクソン５３がスキップされたＤＭＤ ｍＲＮＡである、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. トランケートされたＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質と比較して生成され、任意選択により、前記トランケートされたＤＭＤポリペプチドは、野生型ＤＭＤタンパク質の１つ以上の機能を果たす、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. トランケートされたＤＭＤポリペプチドのレベルが上昇するか、又は前記方法は、特定の期間にわたる投与後又は特定の数の用量後、正常レベルの約１％、２％、３％、４％、５％、５．３％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％以上の、ジストロフィンレベルのベースラインからの上昇をもたらす、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記上昇は、最初の用量から、約１２週、約１３週、約１４週、約２４週、約２５週、約２６週、約３６週、約３７週、約３８週、約４８週、約４９週、約５０週、約７２週、約７３週、約７４週、約９６週、約９７週又は約９８週にわたる投与後に測定され、及び／又は前記上昇は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、４８、４９又は５０用量後に測定される、請求項３７に記載の方法。
  39. ＤＭＤ機能は、上昇及び／又は回復される、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記対象における歩行の喪失は、低減され、前記対象における疾患進行は、遅延されるか又は遅くなり、前記対象における筋力低下は、遅延されるか又は遅くなり、前記対象における筋肉量の減少は、遅延されるか又は遅くなり、及び／又は前記対象における肺機能の低下は、遅延されるか又は遅くなり、及び／又は前記対象は、筋ジストロフィー評価及び／又は１つ以上の機能評価において改善し、及び／又は前記対象は、１０メートル歩行試験、ノース・スター歩行能力評価（ＮＳＡＡ）２．０、上肢のパフォーマンス（ＰＵＬ）２．０、４段昇段、上肢近位筋力、手持ち式筋力測定、床からの立ち上がり時間及び／又はタイムドテストによる１つ以上の下肢運動機能において改善し、及び／又は前記対象は、１つ以上の肺機能検査において改善し、任意選択により、１つ以上の肺機能検査は、最大流速（ＰＦＲ）、最大呼気流速（ＣＰＦ）及び／又はＦＶＣである、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 改善は、ベースライン、ＷＶＥ－Ｎ５３１投与の欠如又は参照組成物の投与と比較され、任意選択により、前記参照組成物は、投与されるＷＶＥ－Ｎ５３１組成物と同等であるが、ＷＶＥ－Ｎ５３１を含有しない、請求項３９又は４０に記載の方法。
  42. 前記対象は、小児対象である、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記対象は、ＷＶＥ－Ｎ５３１の最初の用量の少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月又は６ヶ月前にステロイドを投与され、任意選択により、前記ステロイドは、コルチコステロイドであり、任意選択により、前記コルチコステロイドは、デフラザコートである、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. ＷＶＥ－Ｎ５３１を含む組成物。
  45. 前記組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１の形態は、薬学的に許容される塩形態及び／又はＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である、請求項４４に記載の組成物。
  46. 前記組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１の各形態は、独立して、塩形態、任意選択により薬学的に許容される塩形態及び／又はＷＶＥ－Ｎ５３１ヘキサデカナトリウム塩である、請求項４４又は４５に記載の組成物。
  47. 原薬及び／又は製剤である、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の組成物。
  48. 液体組成物であり、ＷＶＥ－Ｎ５３１は、溶解されている、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の化合物。
  49. 薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物であり、任意選択により、前記薬学的に許容される担体は、リン酸緩衝溶液であるか又はそれを含む、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の組成物。
  50. 前記組成物中の構成成分は、ＷＶＥ－Ｎ５３１、第一リン酸カリウム、第二リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び水並びにｐＨ調整のための塩酸及び／又は水酸化ナトリウムであり、及び／又は前記組成物は、等張性であり、及び／又は前記組成物は、約７～８のｐＨを有し、任意選択により、前記組成物は、約７．３又は７．４のｐＨを有する、請求項４４～４９のいずれか一項に記載の組成物。
  51. ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約５～４５ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しく、任意選択により、ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約２５～４０ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、請求項４４～５０のいずれか一項に記載の組成物。
  52. ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約５～７ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しく、任意選択により、ＷＶＥ－Ｎ５３１の濃度は、約６ｍｇ／ｍＬのＷＶＥ－Ｎ５３１遊離酸形態に等しい、請求項５１に記載の組成物。
  53. バイアル中に包装され、前記バイアル中の前記組成物の体積は、少なくとも６～７ｍＬ、少なくとも６～６．５ｍＬ又は少なくとも６ｍＬである、請求項５２に記載の組成物。
  54. 約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％以上の純度を有する、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の組成物。
  55. 前記純度及び／又は不純物は、本明細書に記載されるとおりの純度に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法及び／又は２６０ｎｍでの面積％を使用する、任意選択により２６０ｎｍでの面積％及びセットＡパラメーターを使用するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって測定される、請求項５４に記載の組成物。
  56. 立体化学的純度は、二量体モデリングによって評価され、及び／又はＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的純度は、約８０％、８５％、９０％以上である、請求項４４～５５のいずれか一項に記載の組成物。
  57. ＷＶＥ－Ｎ５３１の量は、２６０ｎｍのＵＶ、任意選択により２６０ｎｍ及び２７ＯＤ／ｍｇによって測定される、請求項４４～５６のいずれか一項に記載の組成物。
  58. 前記組成物中のＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、本明細書に記載されるプロセスによって製造され、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられ、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷され、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、請求項４４～５７のいずれか一項に記載の組成物。
  59. 前記ＷＶＥ－Ｎ５３１原薬は、ヘキサデカナトリウム塩である、請求項５８に記載の組成物。
  60. ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤である、請求項４４～５９のいずれか一項に記載の組成物。
  61. ＷＶＥ－Ｎ５３１製剤は、本明細書に記載されるプロセスによって製造され、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられ、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷され、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、請求項４４～６０のいずれか一項に記載の組成物。
  62. 医薬組成物は、本明細書に記載されるプロセスによって製造され、本明細書に記載される１つ以上の方法によって特徴付けられ、本明細書に記載される１つ以上の方法によって出荷され、及び／又は本明細書に記載される１つ以上の方法によって保管される、請求項４９～６１のいずれか一項に記載の組成物。
  63. ＤＳ１、ＤＳ２、ＤＳ３、ＤＳ４、ＤＳ５、ＤＳ６、ＤＳ７、ＤＳ８、ＤＳ９、ＤＳ１０、ＤＳ１１、ＤＳ１２、ＤＳ１３、ＤＳ１４、ＤＳ１５、ＤＳ１６及び／又はＤＳ１７を含有しない、請求項４４～６２のいずれか一項に記載の組成物。
  64. ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の１つを含む組成物であって、ＷＶＥ－Ｎ５３１及びＤＳ１～ＤＳ１７の残りの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７）を含まない組成物。
  65. ＷＶＥ－Ｎ５３１を含む、請求項６４に記載の組成物。
  66. ＤＳ１、ＤＳ２、ＤＳ３、ＤＳ４、ＤＳ５、ＤＳ６、ＤＳ７、ＤＳ８、ＤＳ９、ＤＳ１０、ＤＳ１１、ＤＳ１２、ＤＳ１３、ＤＳ１４、ＤＳ１５、ＤＳ１６又はＤＳ１７を含む、請求項６４に記載の組成物。
  67. 本明細書に記載される方法に従ってＷＶＥ－Ｎ５３１組成物を製造する方法。
  68. ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用して、前記製造されたＷＶＥ－Ｎ５３１組成物中の純度及び／又は不純物を評価し、及び前記純度及び／又は不純物が特定の基準を満たす場合に前記調製物を出荷することを含む、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記組成物は、原薬又は製剤である、請求項６７～６７のいずれか一項に記載の方法。
  70. ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物を出荷する方法であって、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用して、前記ＷＶＥ－Ｎ５３１調製物中の純度及び／又は不純物を評価し、及び前記純度及び／又は不純物が特定の基準を満たす場合に前記調製物を出荷することを含む方法、又は
    ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用してＷＶＥ－Ｎ５３１の純度を評価する方法。
  71. 前記ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣは、本明細書に記載される１つ以上のパラメーター及び／又はセットＡの１つ以上のパラメーターを利用する、請求項７０に記載の方法。
  72. ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認される、請求項６７～７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. ＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣを利用してＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性を確認する方法。
  74. ＷＶＥ－Ｎ５３１の立体化学的同一性は、セットＢパラメーターに従ってＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣによって確認されるか、又は本明細書に記載されるとおりの立体化学的同一性に関するＩＰ－ＲＰ－ＵＰＬＣ法によって確認される、請求項６７～７３のいずれか一項に記載の方法。
  75. 前記組成物は、請求項４４～６６のいずれか一項に記載のものである、請求項１～４３又は６７～７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 本明細書に記載されるか、又は実施例実施形態１～４５３のいずれか１つの化合物、オリゴヌクレオチド、組成物、方法，プロセス、使用、用量又は投与レジメン。
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