JP2025503454A - Ｉｌ－１２を発現するカプセル化細胞及びその使用 - Google Patents

Abstract

本開示は、ＩＬ－１２及び／又はＩＬ－１２などの治療試薬を送達するように設計された移植可能な構築物（カプセル化細胞）、並びに癌などの状態を治療するためにそれを使用する方法に関する。TIFF2025503454000020.tif164135

Description

Ｉ．関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１２月１７日に出願された米国特許仮出願第６３／２９１，１２９号に対する優先権の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ＩＩ．電子的に提出された配列表への参照
本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出されている配列表を含有し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。２０２２年１２月９日に作成された当該ＸＭＬコピーの名前は「２５８７１７＿０００８０２＿Ｓｅｑ。ＸＭＬ」であり、サイズが１７，６９５バイトである。

ＩＩＩ．発明の分野
本開示は、生物学、医学、生物工学及び医療デバイスの分野に関する。より詳細には、本発明は、抗原性治療試薬を対象に送達し、かつそれらを宿主によって生成される免疫応答から保護するように設計された移植可能な構築物の開発及び使用に関する。特に、構築物は、経時的に又は特定のシグナルに応じて分解するように設計され、それによって、治療用物質が対象に送達される時間の長さの制御を提供する。

ＩＶ．関連技術
生物医学研究の進歩により、癌などの疾患の治療のための局所及び標的療法の方法がもたらされている。しかしながら、多くの例において、これらのアプローチに応答する患者の割合は、中程度のままである（Ｐａｒｋら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１０（４３３）２０１８（非特許文献１））。

１つのアプローチは、治療用物質を送達するための移植可能なデバイスの使用を含むが、成功するデバイスベース治療に対する根本的な障壁は、対象に対して全身毒性影響を有さない持続的な量の治療薬を送達することができないことである。したがって、治療用物質の送達、分布、及び／又は有効性を増強するための新しい組成物及び方法を特定する必要がある。

Ｐａｒｋら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１０（４３３）２０１８

概要
いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ポリペプチドは、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチド、組換えＩＬ－１２ポリペプチド、又はＩＬ－１２ムテインポリペプチドである。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドは、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、複数のオリゴヌクレオチド分子は、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現されたＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び発現されたＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、ヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号１の配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号２の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドは、配列番号４と比較してＮ２２２Ｌ又はＮ２２２Ｑから選択される変異を含む。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物が提供される。

いくつかの実施形態において、対象における膵臓腫瘍などの腫瘍を治療する方法であって、癌を治療するために、対象に対して、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含む前記方法が提供される。

いくつかの実施形態において、対象における膵臓腫瘍などの腫瘍負荷を減少させる方法であって、癌を治療するために、対象に対して、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含む前記方法が提供される。

いくつかの実施形態において、対象におけるメラノーマ腫瘍などの腫瘍を治療する方法であって、癌を治療するために、対象に対して、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の皮下空間に移植することを含む前記方法が提供される。

いくつかの実施形態において、対象におけるメラノーマ腫瘍などの腫瘍負荷を減少させる方法であって、癌を治療するために、対象に対して、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の皮下空間に移植することを含む前記方法が提供される。

いくつかの実施形態において、記憶免疫を生成することによって対象における腫瘍を治療する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ８陽性エフェクターＴ細胞を選択的に活性化する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む。

いくつかの実施形態において、対象において、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）を増加させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書において提供されるカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植又は投与することを含む。

いくつかの実施形態において、対象に移植された、細胞をカプセル化するカプセルの線維形成を予防又は阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、移植されたカプセル化細胞にＩＬ－１２を発現させることを含むか、又は移植されたカプセル化細胞を移植位置においてＩＬ－１２に曝露することを含む。いくつかの実施形態において、線維形成の阻害又は予防は完全である。いくつかの実施形態において、カプセルの線維形成の阻害又は予防は部分的である。いくつかの実施形態において、生じる線維形成は、カプセルからのＩＬ－１２の発現又はＩＬ－１２へのカプセルの曝露がない場合に生じる線維形成よりも少ない。いくつかの実施形態において、生じる線維形成は、カプセル化細胞からの対象のタンパク質又は異種タンパク質の分泌を完全に遮断するのに十分ではない。いくつかの実施形態において、対象のタンパク質はＩＬ－１２である。いくつかの実施形態において、抗線維化効果は、ＩＬ－２若しくは別のサイトカインなどのＩＬ－１２ではないタンパク質を発現するか、又は細胞によって発現される細胞をカプセル化するカプセルに対して達成される。非限定的な例が本明細書に提供される。この抗線維化効果は、ＩＬ－１２を発現する同じカプセルに対して「シス」で生じると言うことができるが、ＩＬ－１２を発現しないカプセルに対しても「トランス」で作用することもできるということができる。

いくつかの実施形態において、組換えタンパク質を産生するカプセル化細胞を調製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、架橋溶液中に滴下してカプセル化細胞を形成するために、ポリマーヒドロゲルを含む第１の組成物と、ポリマーヒドロゲル中に懸濁されたカプセル化される細胞を含む第２の組成物とを同軸針を通して供給することを含み、架橋溶液は、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む。

いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の懸濁液が提供される。いくつかの実施形態において、懸濁液は、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含み、カプセル化細胞は、ポリマーヒドロゲルによってカプセル化され、懸濁液は、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む架橋溶液を含む。

特許請求の範囲及び／又は明細書において「含む」という用語と共に使用されるときの「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」という単語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又は２つ以上」の意味とも一致する。「約」という語は、記載された数の±５％を意味する。

本明細書に記載される任意の方法又は組成物は、本明細書に記載される任意の他の方法又は組成物に関して実装され得ることが企図される。本開示の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明及び具体例は、本開示の特定の実施形態を示すが、本開示の趣旨及び範囲内の様々な変更及び修正がこの詳細な説明から当業者に明らかになるので、例示のためにのみ与えられることを理解されたい。

特許又は出願ファイルは、カラーで仕上げられた少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を有するこの特許又は特許出願刊行物のコピーは、申請及び必要な料金の支払い後、特許庁によって提供される。

以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示の特定の態様を更に実証するために含まれる。本開示は、本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて、これらの図面のうちの１つ以上を参照することによって、より良く理解され得る。
本明細書に開示されるカプセル化細胞又は偽手術で皮下又は腹腔内に脅かされたメラノーマＢ１６Ｆ１０マウスについての生存曲線（上パネル）及び腫瘍成長曲線（下パネル）を図示する。 本明細書に開示されるカプセル化細胞又は偽手術で皮下的に脅かされたメラノーマＢ１６Ｆ１０マウスについての腫瘍増殖曲線を示す。 上パネルは、処置前の全てのマウス（１群当たりｎ＝５～６）におけるＰａｎ０２－ｆｌｕｃ細胞の注射の６日後に撮影されたＩＶＩＳ画像からの総フラックスの定量化を示す。下のパネルは、対照（未処置）、ＲＰＥ、ＲＰＥ－ｍＩＬ２、又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置の５日後のマウスの発光画像を示す。 上パネルは、処置の１週間後にＩＰ空間から収集された、処置によって分けられた個々の細胞（未処置、ＲＰＥ、ＲＰＥ－ｍＩＬ２、ＲＰＥｍＩＬ１２）におけるＣＤ８α遺伝子発現のｔ－ＳＮＥプロットを示す。下のパネルは、処置の１週間目にＩＰ空間から収集された処置によって分けられた個々の細胞（未処置、ＲＰＥ、ＲＰＥ－ｍＩＬ２、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２）におけるＩＦＮｇ遺伝子発現のｔ－ＳＮＥプロットを示す。 様々な用量のＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置後の経時的なマウスの発光画像を示す。平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｅｒ）のスケールバー最小値及び最大値は、それぞれ５×１０５及び５×１０８である。 ３又は１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置された動物についての経時的な個々の動物体重を示す。 ＲＰＥ－ｍＩＬ１２による処置又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２による処置の８週間後の、それぞれＩＰ空間及び膵臓の巨視的画像及びＨ＆Ｅ画像を示す。Ｈ＆Ｅ画像は倍率２０倍である。Ａは腺房細胞を示し、Ｄは管を示し、Ｉはランゲルハンス島を示す。 偽手術、ＲＰＥ、又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置による処置後２５日間にわたる、マウスから外植された腹腔内臓器の発光画像を示す。平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｅｒ）のスケールバー最小値及び最大値は、それぞれ５×１０５及び５×１０８である。 ＲＰＥ－ｍＩＬ１２あり又はなしでの処置の１週間後のＩＰ空間における転移性メラノーマを有するマウスの巨視的画像を示す。 ＲＰＥ－ｍＩＬ１２あり又はなしでの処置の１週間後の脾臓細胞充実性を示す。 ＲＰＥ又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置後のメラノーマ腫瘍を有する動物の生存曲線を示す。 偽処置、又はＲＰＥ若しくはＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置後の膵臓腫瘍を有する動物の生存曲線を示す。

詳細な説明
本開示は、制御放出様式で対象に天然ヒトＩＬ－１２を送達するための移植可能な構築物、及び関連するその使用方法を特徴とする。これらの実施形態は、以下でより詳細に説明される。

Ａ．定義
「細胞」は、本明細書で使用される場合、個々の細胞を指す。いくつかの実施形態において、細胞は、初代細胞であるか、又は細胞培養物に由来する。いくつかの実施形態において、細胞は、幹細胞であるか、又は幹細胞に由来する。細胞は、異種、自己、又は同種であってもよい。いくつかの実施形態において、細胞は、操作される（例えば、遺伝子操作される）か、又は操作されない（例えば、遺伝子操作されない）。いくつかの実施形態において、細胞はＡＰＲＥ－１９細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は天然ヒトＩＬ－１２タンパク質を発現する。

本明細書で使用される「予防」、「予防する」及び「予防すること」は、治療を投与又は適用すること、例えば、疾患又は状態の物理的発現を妨げるために、疾患又は状態の発症前に治療用物質（例えば、本明細書中に記載される治療用物質）を含む移植可能な構築物（例えば、本明細書に記載されるようなもの）を投与することを含む治療を指す。いくつかの実施形態において、「予防」、「予防する」及び「予防すること」は、疾患又は状態の徴候又は症状がまだ発症していないか、又はまだ観察されていないことを必要とする。いくつかの実施形態において、治療は予防を含み、他の実施形態において予防を含まない。いくつかの実施形態において、予防は、腫瘍又は癌が初期治療によって根絶された後の腫瘍（癌）などの疾患の再発の予防である。

本明細書で使用される場合、「対象」は、本明細書に記載される移植可能な構築物のレシピエントを指す。対象は、ヒト及び／又は他の非ヒト動物、例えば、哺乳動物（例えば、霊長類（例えば、カニクイザル、アカゲザル）；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、及び／又はイヌなどの商業的に関連する哺乳動物）及び鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、及び／又はシチメンチョウなどの商業的に関連する鳥類）を含み得る。特定の実施形態において、動物は哺乳動物である。動物は、雄又は雌であり得、任意の発達段階（例えば、任意の年齢群の雄又は雌、例えば小児対象（例えば、乳児、小児、青年）又は成人対象（例えば、若年成人、中年成人、又は高齢者）であり得る。非ヒト動物はトランスジェニック動物であってもよい。

本明細書で使用される「治療」、「治療する」及び「治療すること」は、例えば、治療を投与又は適用することによって、例えば、治療用物質（例えば、本明細書中に記載される治療用物質）を含む移植可能な構築物を投与することによって、疾患又は状態（例えば、本明細書に記載されるようなもの）の症状、徴候、又は根本的な原因の１つ以上の発症を逆転、緩和、遅延、又は進行を阻害することを指す。いくつかの実施形態において、治療することは、疾患、障害、若しくは状態の症状を低減すること、逆転させること、緩和すること、その発症を遅延させること、又はその進行を阻害することを含む。いくつかの実施形態において、治療することは、疾患又は状態の発現を減少させること、逆転させること、緩和すること、その発症を遅延させること、又はその進行を阻害することを含む。いくつかの実施形態において、治療することは、疾患又は状態の根底にある原因を低減すること、逆転させること、緩和すること、低減すること、又はその発症を遅延させることを含む。いくつかの実施形態において、「治療」、「治療する」、及び「治療すること」は、疾患又は状態の徴候又は症状が発生しているか、又は観察されていることを必要とする。他の実施形態において、治療は、例えば、予防的治療において、疾患又は状態の徴候又は症状の非存在下で投与され得る。例えば、治療は、症状の発症前に（例えば、症状の履歴を考慮して、及び／又は遺伝的因子若しくは他の感受性因子を考慮して）感受性の個体に投与され得る。治療はまた、症状が消散した後、例えば、再発を遅延又は予防するために継続され得る。治療はまた、症状が消散した後、例えば、再発を遅延又は予防するために継続され得る。いくつかの実施形態において、治療は予防を含み、他の実施形態において予防を含まない。

Ｂ．細胞
本明細書に記載される移植可能な構築物は、細胞、例えば、操作された細胞を含有し得る。細胞は、任意の哺乳動物器官又は組織（脳、神経、神経節、脊椎、眼、心臓、肝臓、腎臓、肺、脾臓、骨、胸腺、リンパ系、皮膚、筋肉、膵臓、胃、腸、血液、卵巣、子宮、又は精巣を含む）に由来する。いくつかの実施形態において、細胞はＡＰＲＥ－１９細胞である。移植可能な構築物は、カプセルと呼ぶことができる。カプセルは、細胞の集団をカプセル化する「シェル」である。本明細書で提供されるように、細胞は、（細胞に外因的に導入された）異種核酸分子から発現されるタンパク質を発現するように操作することができる。

細胞は、ドナー（例えば、同種異系細胞）に由来してもよく、対象（例えば、自己細胞）に由来してもよく、又は別の種（例えば、異種細胞）に由来してもよい。いくつかの実施形態において、細胞は、細胞培養において増殖され得るか、又は確立された細胞培養株から調製され得るか、又はドナー（例えば、生きているドナー又は死体）に由来し得る。いくつかの実施形態において、細胞は遺伝子操作される。別の実施形態において、細胞は遺伝子操作されていない。細胞は、リプログラミングされた幹細胞又は人工多能性細胞などの幹細胞を含み得る。例示的な細胞としては、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、線維芽細胞（例えば、初代線維芽細胞）、ＨＥＫ細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ）、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨｅＬａ細胞、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、ＨＵＶＥＣ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＣＯＳ－７細胞、ＰＣ－３細胞、ＨＣＴ １１６細胞、Ａ５４９ＭＣＦ－７細胞、ＨｕＨ－７細胞、Ｕ－２ ＯＳ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞、及びＳＦ９細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物において使用するための細胞は、ＲＰＥ細胞である。

移植可能な構築物に含まれる細胞は、天然ヒトＩＬ－１２などの治療用物質を産生又は分泌し得る。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２は、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）を含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、治療用物質は組換えＩＬ－１２である。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２は、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）を含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２は、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）を含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２は、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）を含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、治療用物質はＩＬ－１２ムテインである。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインは、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテイン及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインを含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインは、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ムテイン及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインを含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインは、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテイン及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）を含むヘテロ二量体複合体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインは本明細書において提供されるとおりである。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物に含まれる細胞は、単一のタイプの治療用物質又は複数の治療用物質を産生又は分泌し得る。いくつかの実施形態において、複数の治療用物質は、本明細書で提供されるＩＬ－１２、及び本明細書で提供されるＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、治療用物質の発現配列を含む核酸（例えば、ベクター）で形質導入又はトランスフェクトされた細胞を含んでもよい。例えば、細胞にレンチウイルスを形質導入又はトランスフェクトすることができる。細胞に導入された核酸（例えば、形質導入又はトランスフェクションによって）は、プラスミドなどの核酸送達系に組み込まれてもよく、又は直接送達されてもよい。いくつかの実施形態において、細胞に導入された核酸（例えば、プラスミドの一部として）は、治療用物質の発現を増強し、かつ／又は標的化若しくは分泌を指向する領域、例えば、プロモーター配列、アクチベーター配列、又は細胞シグナル伝達ペプチド、又は細胞搬出ペプチドを含み得る。例示的なプロモーターとしては、ＥＦ－１α、ＣＭＶ、Ｕｂｃ、ｈＰＧＫ、ＶＭＤ２、及びＣＡＧが挙げられる。例示的な活性化因子としては、ＴＥＴ１触媒ドメイン、Ｐ３００コア、ＶＰＲ、ｒＴＥＴＲ、Ｃａｓ９（例えば、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）又はＳ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）由来）及びＣｐｆｌ（例えば、Ｌ．バクテリウム（Ｌ．ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）由来）が挙げられる。

本明細書に記載される移植可能な構築物は、１つの細胞又は複数の細胞を含み得る。複数の細胞の場合、濃度及び総細胞数は、細胞型、移植位置、及び移植可能な構築物の予想寿命などのいくつかの因子に応じて変化し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物に含まれる細胞の総数は、約２、４、６、８、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、２０００、５０００、１００００、又はそれ以上を超える。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、約１００００～約５００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、約１００００～約４００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、約１００００～約３００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、約１００００～約２００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、約２００００～約４００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、約２５０００～約３５０００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は約３００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は約４００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は約５００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は約１００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は約２００００個の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物に含まれる細胞の総数は、約１．０×１０^２、１．０×１０^３、１．０×１０^４、１．０×１０^５、１．０×１０^６、１．０×１０^７、１．０×１０^８、１．０×１０^９、１．０×１０^１０、又はそれ以上を超える。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物に含まれる細胞の総数は、約５００００、４００００、３００００、２００００、１００００、５０００、２５００、２０００、１５００、１０００、７５０、５００、２５０、２００、１００、７５、５０、４０、３０、２０、１０、８、６、４、２未満、又はそれ未満である。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物に含まれる細胞の総数は、約１．０×１０^１０、１．０×１０^９、１．０×１０^８、１．０×１０^７、１．０×１０^６、１．０×１０^５、１．０×１０^４、１．０×１０^３、１．０×１０^２未満、又はそれ未満である。いくつかの実施形態において、複数の細胞が凝集体として存在する。いくつかの実施形態において、複数の細胞が細胞分散液として存在する。

移植可能な構築物内に含まれる細胞の特定の特徴は、例えば移植可能な構築物への組み込みの前及び／又は後に決定され得る。例えば、細胞生存能力、細胞密度、又は細胞発現レベルを評価することができる。いくつかの実施形態において、細胞生存能力、細胞密度、及び細胞発現レベルは、細胞顕微鏡法、蛍光顕微鏡法、組織学的検査、又は生化学的アッセイなどの標準的な技法を使用して決定することができる。

Ｃ．治療用物質
本明細書に記載される移植可能な構築物は、例えば、天然ヒトＩＬ－１２などの細胞によって産生又は分泌される治療用物質を含有してもよい。いくつかの実施形態において、治療用物質は組換えＩＬ－１２である。いくつかの実施形態において、治療用物質はＩＬ－１２ムテインである。いくつかの実施形態において、治療用物質は天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）である。いくつかの実施形態において、治療用物質は天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）である。いくつかの実施形態において、治療用物質はＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインである。いくつかの実施形態において、治療用物質はＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインである。いくつかの実施形態において、治療用物質は組換えＩＬ－１２（ｐ３５）である。いくつかの実施形態において、治療用物質は組換えＩＬ－１２（ｐ４０）である。いくつかの実施形態において、治療用物質は組換えＩＬ－１２である。いくつかの実施形態において、治療用物質はＩＬ－１２ムテインである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の移植可能な構築物は、例えば、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）などの細胞の集団によって産生又は分泌される複数の治療用物質を含有してもよい。治療用物質は、タンパク質をコードする核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、又はオリゴヌクレオチド）、細胞から分泌されるタンパク質（例えば、抗体、酵素、サイトカイン、ホルモン、受容体）などを含み得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、治療用物質を産生又は分泌するように遺伝子操作された細胞又は複数の細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、複数の治療用物質を産生又は分泌するように遺伝子操作された細胞又は複数の細胞を含む。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２は、ＩＬ－１２（ｐ７０）、又は天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）を含むヘテロ二量体複合体を指す。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ＩＬ－１２（ｐ３５）サブユニット及びＩＬ－１２（ｐ４０）サブユニットが発現されると、それらは互いに相互作用して、ＩＬ－１２（ｐ７０）、又は本明細書においてＩＬ－１２と呼ばれるものを含むヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）は、

を含む核酸配列によってコードされるタンパク質を指す。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）は、

を含む核酸配列によってコードされるタンパク質を指す。

いくつかの実施形態において、細胞によって産生される天然ヒトタンパク質は、

の配列を含む第１のポリペプチド、並びに

の配列を含む第２のポリペプチドを含むポリペプチドを含み、第１及び第２のポリペプチドはヘテロ二量体複合体を形成する。

いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、又は１：１０の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：１の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：２の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：３の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：４の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：５の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：６の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：７の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：８の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：９の比で発現される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、１：１０の比で発現される。いくつかの実施形態において、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、又は１：１０の比で発現されたＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：１の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：２の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：３の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：４の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：５の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：６の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：７の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：８の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：９の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、１：１０の比で発現されるＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドは、互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。

いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２ムテイン、組換えＩＬ－１２、又はＩＬ－１２経路に作用する改変ＩＬ－１２分子、融合タンパク質若しくは抗体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）は、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテイン、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）、若しくは改変ＩＬ－１２（ｐ３５）分子、融合タンパク質、又は抗体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）は、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテイン、組換えＩＬ－１２（ｐ４０）、若しくは改変ＩＬ－１２（ｐ４０）分子、融合タンパク質、又は抗体である。いくつかの実施形態は、ＩＬ－１２（ｐ３５）及びＩＬ－１２（ｐ４０）は互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。

いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインは、ＩＬ－１２の残基の１つ以上を変異させることによって調製することができる。いくつかの実施形態において、変異は、欠失、置換、又は挿入である。いくつかの実施形態において、変異は置換である。いくつかの実施形態において、置換は天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインは、ＩＬ－１２（ｐ３５）の１つ以上の残基を変異させることによって調製することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、ＩＬ－１２（ｐ４０）の１つ以上の残基を変異させることによって調製することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテイン分子は、アミノ酸２２０の位置におけるポリペプチド配列中の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテイン分子は、ポリペプチド配列中のアミノ酸２２２の位置に変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテイン分子は、アミノ酸２２０及び／又は２２２の位置におけるポリペプチド配列中の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、Ｎ２２２Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２（ｐ４０）アミノ酸配列中にＮ２２２Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、配列番号４と比較して、ＩＬ－１２（ｐ４０）アミノ酸配列中にＮ２２２Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号４に対応するＮ２２２Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、ａＮ２２２Ｑ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２（ｐ４０）アミノ酸配列中にＮ２２２Ｑ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、配列番号４と比較して、ＩＬ－１２（ｐ４０）アミノ酸配列中にＮ２２２Ｑ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号４に対応するＮ２２２Ｑ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２はＮ２２０Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２（ｐ４０）アミノ酸配列中にＮ２２０Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２は、配列番号５と比較して、ＩＬ－１２（ｐ４０）アミノ酸配列中にＮ２２０Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号５に対応するＮ２２０Ｌ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、ＩＬ－１２（ｐ４０）の残基の１つ以上を変異させることによって調製することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）は、配列番号３と比較して任意の位置に変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）は、配列番号４と比較して任意の位置に変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）は、配列番号５と比較して任意の位置に変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号４と比較して２２２位にアスパラギンの変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号４と比較してＮ２２２位に置換を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号４と比較してＮ２２２Ｌの変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号４と比較してＮ２２２Ｑの変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号５に示されるマウスＩＬ－１２（ｐ４０）を含む。いくつかの実施形態において、マウスＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、配列番号５と比較してＮ２２０Ｌの変異を含む。

いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテイン、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテイン及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開番号ＷＯ２００１０６８８０２及びＷＯ２０１７２０１３５０に提供されているとおりである。

細胞はまた、天然ヒトＩＬ－１２に加えて追加のタンパク質又は分子を産生又は分泌するように改変され得る。いくつかの実施形態において、細胞は、天然ヒトＩＬ－２を産生又は分泌するように改変される。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２は、

を含む核酸配列によってコードされるタンパク質を指す。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードする核酸コード配列は、コドン最適化されている。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードする核酸コード配列は、哺乳動物細胞における発現のためにコドン最適化される。コドン最適化配列は、市販のアルゴリズム、例えば、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ ＵＳＡ）、ＧｅｎｅＧＰＳ（登録商標）（ＡＴＵＭ、Ｎｅｗａｒｋ、ＣＡ ＵＳＡ）、Ｊａｖａ Ｃｏｄｏｎ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ（ＪＣａｔ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ，Ｇｒｏｔｅ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ ３３，Ｉｓｓｕｅ ｓｕｐｐｌ＿２，ｐｐ．Ｗ５２６－Ｗ５３１（２００５）、ＩＤＴ Ｃｏｄｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＶｅｃｔｏｒＢｕｉｌｄｅｒ Ｃｏｄｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｔｏｏｌ（ＶｅｃｔｏｒＢｕｉｌｄｅｒ Ｉｎｃ．）、Ｃｏｄｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ＯｎＬｉｎｅ（ＣＯＯＬ，ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏ．ｂｔｉ．ａ－ｓｔａｒ．ｅｄｕ．ｓｇ／ＣＯＯＬ／；Ｃｈｉｎ Ｊ．Ｘ．らｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｖｏｌ ３０，Ｉｓｓｕｅ １５，ｐ．２２１０－２２１２（２０１４））、又はＥｘｐＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（ＮｏｖｏＰｒｏ、Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｃｈｉｎａ）を使用して生成することができる。天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化核酸コード配列の例としては、

が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化核酸コード配列は、配列番号７～１０に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化核酸コード配列は、配列番号７に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化核酸コード配列は、配列番号７～１０の配列に対して少なくとも９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化核酸コード配列は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、細胞によって産生される天然ヒトタンパク質は、

のアミノ酸配列から形成される。

いくつかの実施形態において、追加のタンパク質又は分子は、天然ヒトＩＬ－２である。いくつかの実施形態において、追加のタンパク質又は分子は、ＩＬ－２経路に作用するＩＬ－２ムテイン又は改変ＩＬ－２分子、融合タンパク質又は抗体である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２はペグ化ＩＬ－２分子である。いくつかの実施形態において、ペグ化ＩＬ－２分子は野生型配列を有する。いくつかの実施形態において、ペグ化ＩＬ－２は、変異体ＩＬ－２配列を有する。いくつかの実施形態において、ＮＫＴＲ－２１４、ＴＨＯＲ－７０７、ＡＬＫＳ ４２３０、Ｎｅｍｖａｌｅｕｋｉｎアルファ、ＴｒａｎｓＣｏｎ ＩＬ－２ β／γ、ＢＮＴ１５１、ＢＮＴ１５３、ＣＬＮ－６１７、ＣＵＥ－１０１、ＣＵＥ－１０２、ＣＵＥ－１０３、Ａｎｋｔｉｖａ（登録商標）（Ｎ－８０３）、ＫＹ１０４３、ＭＤＮＡ１１、ＮＬ－２０１、ＳＯ－Ｃ１０１、ＲＯ６８７４２８１、Ｓｉｍｌｕｋａｆｕｓｐアルファ、ＲＧ７４６１、ＷＴＸ－１２４、ＷＴＸ－３３０、ＸＴＸ２０２、若しくはＸＴＸ４０１、又はそれらの任意の組み合わせから選択される。追加のタンパク質は、例えば約１００Ｄａ、２００Ｄａ、２５０Ｄａ、５００Ｄａ、７５０Ｄａ、１ｋＤａ、１．５ｋＤａ、２ｋＤａ、２．５ｋＤａ、３ｋＤａ、４ｋＤａ、５ｋＤａ、６ｋＤａ、７ｋＤａ、８ｋＤａ、９ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、２５ｋＤａ、３０ｋＤａ、３５ｋＤａ、４０ｋＤａ、４５ｋＤａ、５０ｋＤａ、５５ｋＤａ、６０ｋＤａ、６５ｋＤａ、７０ｋＤａ、７５ｋＤａ、８０ｋＤａ、８５ｋＤａ、９０ｋＤａ、９５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１２５ｋＤａ、１５０ｋＤａ、２００ｋＤａ、２００ｋＤａ、２５０ｋＤａ、３００ｋＤａ、４００ｋＤａ、５００ｋＤａ、６００ｋＤａ、７００ｋＤａ、８００Ｄａ、９００ｋＤａ、又はそれ以上を超える任意のサイズであり得る。いくつかの実施形態において、タンパク質は、単一のサブユニット又は複数のサブユニット（例えば、二量体、三量体、四量体など）から構成される。細胞によって産生又は分泌されるタンパク質は、例えば、グリコシル化、メチル化、又は他の公知の天然若しくは合成タンパク質修飾によって修飾され得る。タンパク質は、プレタンパク質として、又は不活性型で産生又は分泌されてもよく、それを活性型に変換するために更なる修飾を必要としてもよい。

細胞によって産生又は分泌されるタンパク質は、抗体又は抗体断片、例えば、抗体のＦｃ領域又は可変領域を含み得る。例示的な抗体としては、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＴＮＦα、及び抗ＶＥＧＦ抗体が挙げられる。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。他の例示的なタンパク質としては、リポタンパク質、接着タンパク質、ヘモグロビン、酵素、プロエンケファリン、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＩＧＦ－１、ＶＥＧＦα、ＨＧＦ、ＴＧＦβ、ｂＦＧＦ）、又はサイトカインが挙げられる。

細胞によって産生又は分泌されるタンパク質はまた、ホルモンを含み得る。例示的なホルモンとしては、増殖ホルモン、増殖ホルモン放出ホルモン、プロラクチン、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）、オキシトシン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、チロキシン、カルシトニン、上皮小体ホルモン、アルドステロン、コルチゾール、エピネフリン、グルカゴン、インスリン、エストロゲン、プロゲステロン、及びテストステロンが挙げられる。

細胞によって産生又は分泌されるタンパク質は、他のサイトカインを含み得る。サイトカインは、炎症促進性サイトカイン又は抗炎症性サイトカインであり得る。サイトカインの例としては、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２０、ＩＬ－２３、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＣＤ１５４、ＬＴ－β、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、ＣＤ１７８、ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、ＳＣＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＳＰ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＦ、ＯＳＭなどが挙げられる。例えば、サイトカインは、任意のサイトカインを含み得、Ｍ．Ｊ．Ｃａｍｅｒｏｎ及びＤ．Ｋｅｌｖｉｎ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（２０１３），Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓに記載され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書において提供される移植可能な構築物は、単一のタイプの治療用物質、例えば単一のタンパク質若しくは核酸を発現する細胞を含んでもよく、又は１つ以上のタイプの治療用物質、例えば複数のタンパク質若しくは核酸を発現してもよい。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２種類の治療用物質（例えば、２種類のタンパク質又は核酸）を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３種類の治療用物質（例えば、３種類のタンパク質又は核酸）を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４種類の治療用物質（例えば、４種類のタンパク質又は核酸）を発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプの核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプの核酸、例えば、複数の核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプの核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプの核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプの核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）を発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプのタンパク質を発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプのタンパク質例えば、複数のタンパク質を発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプのタンパク質を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプのタンパク質を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプのタンパク質を発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプの酵素を発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプの酵素例えば、複数の酵素を発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプの酵素を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプの酵素を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプの酵素を発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプの抗体若しくは抗体断片を発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプの抗体若しくは抗体断片例えば、複数の抗体若しくは抗体断片を発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプの抗体又は抗体断片を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプの抗体又は抗体断片を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプの抗体又は抗体断片を発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプのホルモンを発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプのホルモン例えば、複数のホルモンを発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプのホルモンを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプのホルモンを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプのホルモンを発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプの酵素を発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプの酵素例えば、複数の酵素を発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプの酵素を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプの酵素を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプの酵素を発現する細胞を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、単一のタイプのサイトカインを発現する細胞を含むか、又は１つ以上のタイプのサイトカイン例えば、複数のサイトカインを発現し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、２つのタイプのサイトカインを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、３つのタイプのサイトカインを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、４つのタイプのサイトカインを発現する細胞を含む。

Ｄ．移植可能な構築物の特徴
本明細書に記載される移植可能な構築物は、任意の好適な形状又は形態をとってもよい。例えば、移植可能な構築物は、球体、回転楕円体、チューブ、コード、ストリング、楕円体、ディスク、シリンダー、シート、トーラス、立方体、スタジアムイド、円錐、ピラミッド、三角形、長方形、正方形、又はロッドであり得る。移植可能な構築物は、湾曲した部分又は平坦な部分を含んでもよい。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、型の使用を通して調製され得、カスタム形状をもたらす。

移植可能な構築物は、例えば、移植の使用又は部位に依存して、サイズが変化し得る。例えば、移植可能な構築物は、０．１ｍｍより大きい、例えば、０．２５ｍｍ、０．５ｍｍ、０．７５、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、４ｍｍ、５ｍｍ、６ｍｍ、７ｍｍ、８ｍｍ、９ｍｍ、１０ｍｍ、２０ｍｍ、３０ｍｍ、４０ｍｍ、５０ｍｍより大きい、又はそれ以上の平均直径又はサイズを有し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、０．１ｍｍより大きい、例えば、０．２５ｍｍ、０．５ｍｍ、０．７５、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、４ｍｍ、５ｍｍ、６ｍｍ、７ｍｍ、８ｍｍ、９ｍｍ、１０ｍｍ、２０ｍｍ、３０ｍｍ、４０ｍｍ、５０ｍｍより大きい、又はそれ以上の平均直径又はサイズを有するセクション又は領域を有し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、１ｃｍ未満、例えば、５０ｍｍ、４０ｍｍ、３０ｍｍ、２０ｍｍ、１０ｍｍ、７．５ｍｍ、５ｍｍ、２．５ｍｍ、１ｍｍ、０．５ｍｍ未満、又はそれ未満の平均直径又はサイズを有し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、１ｃｍ未満、例えば、５０ｍｍ、４０ｍｍ、３０ｍｍ、２０ｍｍ、１０ｍｍ、７．５ｍｍ、５ｍｍ、２．５ｍｍ、１ｍｍ、０．５ｍｍ未満、又はそれ未満の平均直径又はサイズを有するセクション又は領域を有し得る。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、カプセル化された抗原性物質又は治療用物質の外部環境、例えば、宿主エフェクター細胞又は組織からの曝露を防止することができる少なくとも１つのゾーンを含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、内側ゾーン（ＩＺ）を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構造体は外側ゾーン（ＯＺ）を含む。いくつかの実施形態において、内側ゾーン（ＩＺ）又は外側ゾーン（ＯＺ）のいずれかは、浸食性又は分解性であってもよい。いくつかの実施形態において、ゾーン（ＩＺ）は、浸食性又は分解性である。いくつかの実施形態において、外側ゾーン（ＯＺ）は、浸食性又は分解性である。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、内側ゾーン（ＩＺ）及び外側ゾーン（ＯＺ）の両方を含み、これらのいずれかは、浸食性又は分解性であり得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、内側ゾーン（ＩＺ）及び外側ゾーン（ＯＺ）の両方を含み、外側ゾーンは浸食性又は分解性である。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、内側ゾーン（ＩＺ）及び外側ゾーン（ＯＺ）の両方を含み、内側ゾーンは浸食性又は分解性である。ゾーンのいずれか、例えば、内側ゾーン又は外側ゾーンのいずれかの厚さは、カプセル化された抗原性物質又は治療用物質が外部環境、例えば、宿主エフェクター細胞又は組織から保護又は遮蔽される「遮蔽」相の長さ又は持続時間と相関し得る。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、対象の分子を発現する細胞と混合されたポリマーのマトリックスであり得る。例えば、移植可能な構築物は、ＩＬ－１２などの対象の分子を発現する細胞の集団を取り囲むヒドロゲル（例えば、アルギン酸塩）の層を含む移植可能な構築物を作製するために、本明細書で提供される方法又は当業者に公知の方法又はそうでなければ本明細書に提供される方法に従って調製することができる。いくつかの実施形態において、層は無細胞層である。いくつかの実施形態において、外層と見なされるものは、移植可能な構築物の外側領域に分布した細胞を含む。

したがって、移植可能な構築物は、大部分の細胞を含むゾーンを含むことができるが、それらは構築物全体に分布することもできる。

本明細書中で使用される場合、用語「カプセル化された」とは、移植可能な構築物に関して使用される場合、マトリックス又はヒドロゲルポリマー（例えば、アルギン酸塩）によって取り囲まれた細胞をいう。「カプセル化された」という用語は、外層としての無細胞層、又はその中に分布した細胞を有する外層を有する構築物を指すことができる。カプセル化は一般的な用語であり、一般にポリマーと混合される細胞を含むことを意味し、構築物の表面又はその近くに細胞が存在しないことを意味するものではない。本明細書で提供されるように、これは、細胞の集団をカプセル化するカプセルと呼ぶこともできる。「カプセル化細胞の集団」という語句は、細胞の集団をカプセル化する１つ以上のカプセルを指すと理解されるべきである。医薬組成物などの組成物は、複数のカプセルを含むことができる。組成物はまた、関心対象の第１のタンパク質を異種発現する細胞をカプセル化するカプセルと、関心対象の第２のタンパク質を異種発現する細胞をカプセル化する第２のカプセルとを含むという点で、異なるカプセルを含むことができる。いくつかの実施形態において、対象の第１のタンパク質はＩＬ－２であり、対象の第２のタンパク質はＩＬ－１２である。いくつかの実施形態において、カプセルは、同じカプセルにカプセル化された同じ細胞又は異なる細胞のいずれかからＩＬ－２及びＩＬ－１２を発現する細胞の集団を含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物のゾーン（例えば、内側ゾーン又は外側ゾーン）又は層は、分解性実体、例えば、分解可能な実体を含んでもよい。分解性実体は、酵素切断部位、光不安定部位、ｐＨ感受性部位、又は経時的に侵食され得るか若しくは含まれ得る他の不安定領域を含み得る。いくつかの実施形態において、分解性実体は、第２の条件（例えば、第２の環境、例えば、第２のｐＨ又は第２の酵素への曝露）と比較して、第１の条件への曝露（例えば、第１の環境、例えば、第１のｐＨ又は第１の酵素への曝露）の際に優先的に分解される。一実施形態において、分解性実体は、第２の条件と比較して、第１の条件に曝露されると、少なくとも２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は１００倍速く分解される。いくつかの実施形態において、分解性実体は、酵素切断部位、例えばタンパク質分解部位である。いくつかの実施形態において、分解性実体は、ポリマー（例えば、合成ポリマー又は天然ポリマー、例えば、ペプチド又は多糖）である。いくつかの実施形態において、分解性実体は、内因性宿主成分、例えば分解酵素、例えばリモデリング酵素、例えばコラゲナーゼ又はメタロプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態において、分解性実体は、ポリマーに埋め込まれた切断可能なリンカー又は切断可能なセグメントを含む。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、小分子（例えば、栄養素又は廃棄物）、タンパク質、又は核酸などの物体の通過を可能にする細孔又は開口部を含む。例えば、移植可能な構築物の中又は上の細孔は、０．１ｎｍ超かつ１０μｍ未満であり得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、０．１μｍ～１０μｍ、０．１μｍ～９μｍ、０．１μｍ～８μｍ、０．１μｍ～７μｍ、０．１μｍ～６μｍ、０．１μｍ～５μｍ、０．１μｍ～４μｍ、０．１μｍ～３μｍ、０．１μｍ～２μｍのサイズ範囲を有する細孔又は開口部を含む。

本明細書に記載される移植可能な構築物は、任意のカプセル化された材料の中又は上に化学修飾を含み得る。例示的な化学修飾としては、小分子、ペプチド、タンパク質、核酸、脂質、又はオリゴ糖が挙げられる。移植可能な構築物は、少なくとも０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又はそれ以上の、例えば本明細書に記載の化学修飾で化学的に修飾された材料を含んでもよい。移植可能な構築物は、化学修飾で部分的にコーティングされてもよく、例えば化学修飾で少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又は９９．９％コーティングされてもよい。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、抗原性物質及び／又は治療用物質の放出の持続時間が調整可能であるように処方される。例えば、移植可能な構築物は、特定の量の抗原性物質又は治療用物質を経時的に、例えば、持続的様式又は制御された様式で放出するように特定の様式で構成され得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、分解性であるゾーン（例えば、内側ゾーン又は外側ゾーン）を含み、これは、カプセル化細胞の免疫保護を徐々に停止することによって、又は抗原性物質の徐放を引き起こすことによって、構築物からの治療剤放出の持続時間を制御する。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、抗原性物質又は治療用物質の放出レベルが、宿主エフェクター細胞、例えば、宿主Ｔ細胞の比率を調節するのに十分であるように構成される。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、抗原性物質又は治療用物質の放出レベルが、宿主細胞（例えば、宿主Ｔエフェクター細胞又は宿主ＮＫ細胞）を活性化するのに、又はある特定の宿主細胞（例えば、宿主Ｔエフェクター細胞又は宿主ＮＫ細胞）のレベルを増加させるのに十分であるように構成される。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、抗原性物質又は治療用物質の放出レベルが、宿主調節細胞（例えば、宿主Ｔ調節細胞）を活性化するか、又は宿主調節細胞（例えば、宿主Ｔ調節細胞）のレベルを増加させるのに十分でないように構成される。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、例えばある期間にわたって、宿主又は対象の天然の異物反応（ＦＢＲ）によって標的化されるゾーンを含む。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、例えばある期間にわたって対象に投与されると、線維性過形成でコーティングされる。移植可能な構築物の表面上の線維性過形成は、移植可能な構築物の機能の低下をもたらし得る。例えば、機能の減少は、経時的な抗原性物質若しくは治療用物質の放出の減少、孔サイズの減少、又はカプセル化細胞への酸素及び他の重要な栄養素の拡散速度の減少を含み得、細胞死をもたらす。いくつかの実施形態において、線維性過形成の速度は、投薬レジメンを設計するために調整され得る。例えば、移植可能な構築物の表面上の線維性過形成は、対象への投与（例えば、注射又は移植）の約６時間、１２時間、１８時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、２．５週間、３週間、４週間、又は６週間後に、移植可能な構築物の機能の低下をもたらし得る。

いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、特定の修飾密度で化学的に修飾される。化学修飾の比密度は、所与の面積当たりの結合した化学修飾の平均数として記載され得る。例えば、移植可能な構築物上又は中の化学修飾の密度は、平方μｍ又は平方ｍｍ当たり０．０１、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、５０、７５、１００、２００、４００、５００、７５０、１，０００、２５００、又は５０００の化学修飾であり得る。

移植可能な構築物は、対象の任意の器官、組織、細胞、又は部分への移植のために処方又は構成され得る。例えば、移植可能な構築物は、対象の腹腔内空間に移植又は配置され得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、対象の皮下空間に移植又は配置され得る。移植可能な構築物は、対象における腫瘍又は他の増殖に移植又は配置され得るか、あるいは対象における腫瘍又は他の増殖から約０．１ｍｍ、０．５ｍｍ、１ｍｍ、０．２５ｍｍ、０．５ｍｍ、０．７５、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、４ｍｍ、５ｍｍ、６ｍｍ、７ｍｍ、８ｍｍ、９ｍｍ、１０ｍｍ、２０ｍｍ、３０ｍｍ、４０ｍｍ、５０ｍｍ、１ｃｍ、５ｃｍ、１０ｃｍ、又は更に遠くに移植又は配置され得る。移植可能な構築物は、皮膚の上又は中、皮膚の下、粘膜表面、体腔、中枢神経系（例えば、脳又は脊髄）、器官（例えば、心臓、眼、肝臓、腎臓、脾臓、肺、卵巣、乳房、子宮）、リンパ系、血管系、口腔、鼻腔、胃腸管、骨、筋肉、脂肪組織、又は他の領域への移植のために構成され得るか、移植され得るか、又は配置され得る。

移植可能な構築物は、任意の期間の使用のために処方され得る。例えば、移植可能な構築物は、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１日、３６時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、１年、又はそれより長く使用され得る。移植可能な構築物は、限定された曝露（例えば、２日未満、例えば、２日未満、１日、２４時間、２０時間、１６時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、５時間、４時間、３時間、２時間、１時間又はそれ未満）のために構成され得る。移植可能な構築物は、長期曝露（例えば、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２４ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年以上）のために構成することができる。移植可能な構築物は、恒久的な曝露（例えば、少なくとも６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２４ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年以上）のために構成することができる。

いくつかの実施形態において、分解性ゾーンは、キトサン、セルロース、ヒアルロン酸、又はアルギン酸塩などであるがこれらに限定されないポリマーヒドロゲルを含む。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩はＳＬＧ２０である。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は修飾されない。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、抗線維化分子で修飾されない。明確にするために、抗線維化効果を有し得る分子を発現する細胞は、抗線維化と見なされるアルギン酸塩又はヒドロゲルの修飾ではない。

したがって、いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団が提供される。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号１及び配列番号２の配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号１の配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号２の配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞は組換えＩＬ－１２タンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、細胞は組換えＩＬ－１２（ｐ３５）タンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、細胞は、組換えＩＬ－１２（ｐ４０）タンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、細胞はＩＬ－１２ムテインタンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、細胞はＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインタンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、細胞はＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインタンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインは本明細書において提供されるとおりである。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインは本明細書において提供されるとおりである。

いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも１～１８０日間生存可能であり続ける。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、又は少なくとも１８０日間、生存可能であり続ける。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも６日間生存可能であり続ける。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも１４日間生存可能であり続ける。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも２１日間生存可能であり続ける。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも４０日間生存可能であり続ける。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の集団は、少なくとも１２０日間生存可能であり続ける。

カプセル化細胞を含む医薬組成物も本明細書で提供される。

Ｅ．治療方法
腫瘍又は疾患の治療のための医薬組成物（又は薬剤）の調製のためのカプセル化細胞の治療方法又は使用が本明細書に記載される。

いくつかの実施形態において、疾患は増殖性疾患である。いくつかの実施形態において、増殖性疾患は癌である。癌は、上皮性、間葉性、又は血液学的悪性腫瘍であり得る。癌には、原発性悪性細胞又は腫瘍（例えば、細胞が、元の悪性腫瘍又は腫瘍の部位以外の対象の身体の部位に遊走していないもの）及び続発性悪性細胞又は腫瘍（例えば、転移、悪性細胞又は腫瘍細胞の、元の腫瘍の部位とは異なる二次部位への移動から生じるもの）が含まれる。いくつかの実施形態において、癌は、固形腫瘍（例えば、カルチノイド、癌腫又は肉腫）、軟組織腫瘍（例えば、ヘム悪性腫瘍）、又は転移性病変、例えば、本明細書に開示される癌のいずれかの転移性病変である。いくつかの実施形態において、癌は、線維性又は線維形成性固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、腫瘍は膵臓腫瘍である。

したがって、いくつかの実施形態において、対象における膵臓腫瘍などの腫瘍を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、癌を治療するために、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞の集団（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含む。

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書で提供されるＩＬ－１２を発現するカプセル化細胞の複数の集団を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書で提供されるＩＬ－１２及びＩＬ－２を発現するカプセル化細胞の複数の集団を含む。

癌を有する対象に全身治療を提供する方法であって、この方法は、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞の集団（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含み、それによって、医薬組成物が腹腔内空間において免疫細胞の活性化を刺激し、活性化された免疫細胞が腹腔内空間から遠位の対象の領域に移動して、対象において癌を全身的に治療する。

いくつかの実施形態において、癌を有する対象に全身治療を提供する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書で提供される複数のカプセル化細胞集団（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、ＩＰ空間内の免疫細胞を活性化する。いくつかの実施形態において、活性化された免疫細胞は、腹腔内空間から外に（離れて）遊走して、ＩＰ空間内にない部位で対象における癌を治療する。いくつかの実施形態において、活性化された免疫細胞は、腹腔内空間から外に（離れて）遊走して、ＩＰ空間から遠位の部位で対象における癌を治療する。いくつかの実施形態において、部位は、膵臓、乳房、脳、肺、骨などの別の器官又は組織であるか、又は本明細書において別の方法で提供される。

いくつかの実施形態において、対象は、約０．０１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約７．５～約２０μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１６μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．０１μｇ／ｋｇ／日、約０．０５μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日、約０．５μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日、約３μｇ／ｋｇ／日、約４μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約７μｇ／ｋｇ／日、約８μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日、約１６μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日、約１９μｇ／ｋｇ／日、又は約２０μｇ／ｋｇ／日の、本明細書で提供されるカプセル化細胞を投与される（例えば、移植される）。

本明細書中に記載されるように、組換え天然ヒトＩＬ－１２を産生するカプセル化細胞は、腫瘍に対する記憶免疫を作製するために使用され得る。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書において提供される方法は、腫瘍の初期部位又は腫瘍の起源に対して遠位である部位のいずれかにおいて腫瘍が再発する確率を予防又は低減するために使用され得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は膵臓腫瘍である。いくつかの実施形態において、記憶免疫を生成（誘導）することによって腫瘍を治療する方法は、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む。

いくつかの実施形態において、ＣＤ８及び／又はＣＤ４陽性エフェクターＴ細胞を選択的に活性化する方法が提供される。特定の理論に束縛されるものではないが、ＣＤ８陽性及び／又はＣＤ４陽性エフェクター細胞は活性化され、腫瘍に対する免疫応答を誘発する。これは、本明細書で提供されるカプセル化細胞からのＩＰ空間における天然ヒトＩＬ－１２の分泌によって開始又は増強され得る。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書において提供されるカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む。

いくつかの実施形態において、エフェクターＴ細胞は、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸｐ３＋）と比較して選択的に活性化及び拡大される。いくつかの実施形態において、選択的に活性化されたＴ細胞は、ＩＦＮ－γを分泌する。

いくつかの実施形態において、対象に移植又は投与されたカプセル化細胞は、対象において有意に線維化しない。いくつかの実施形態において、対象に移植又は投与されたＩＬ－１２を発現するカプセル化細胞は、対象において有意に線維化しない。いくつかの実施形態において、対象に移植又は投与されたカプセル化されたＩＬ－１２発現細胞は、対象において経時的に有意に線維化しない。

本明細書で提供される方法によって治療することができる例示的な癌としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、癌は、身体の系、例えば神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）若しくは中枢神経系（ＣＮＳ））、血管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系、又は胃腸管に影響を及ぼす。いくつかの実施形態において、癌は、身体の一部、例えば、血液、眼、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣、又は陰茎に影響を及ぼす。そのような癌のより具体的な例には、扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、小細胞肺癌を含む肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺癌の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌又は胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌又は腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、並びに頭頸部癌が含まれる。

癌の他の例には、それだけに限らないが、急性小児リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、成人（原発性）肝細胞癌、成人（原発性）肝癌、成人急性リンパ球性白血病、成人急性骨髄性白血病、成人ホジキン病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ球性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝癌、成人軟部組織肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍、肛門癌、星細胞腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、骨盤及び尿路の癌、中枢神経系（原発性）リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、子宮頸癌、小児（原発性）肝細胞癌、小児（原発性）肝癌、小児急性リンパ芽球性白血病、小児急性骨髄性白血病、小児脳幹グリオーマ、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視床下部性及び視覚障害性グリオーマ、小児リンパ芽球性白血病、小児髄芽腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児松果体及びテント上原始神経外胚葉腫瘍、小児原発性肝癌、小児横紋筋肉腫、小児軟部組織肉腫、小児視覚経路及び視床下部神経膠腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、膵内分泌膵島細胞癌、子宮内膜癌、上衣腫、上皮癌、食道癌、ユーイング肉腫及び関連腫瘍、膵外分泌癌、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、女性乳癌、ゴーシェ病、胆嚢癌、胃癌、胃腸癌、胃腸腫瘍、生殖細胞腫瘍、妊娠性栄養膜腫瘍、毛様細胞白血病、頭頸部癌、肝細胞癌、ホジキン病、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血症、低咽頭癌、腸癌、眼内メラノーマ、膵島細胞癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、口唇及び口腔癌、肝臓癌、肺癌、リンパ増殖性疾患、マクログロブリン血症、男性乳癌、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、髄芽腫、メラノーマ、中皮腫、転移性潜在性原発性頸部扁平上皮癌、転移性原発性頸部扁平上皮癌、転移性頸部扁平上皮癌、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／形質細胞性腫瘍、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性白血病、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、非メラノーマ皮膚癌、非小細胞肺癌、潜在性原発性転移性扁平上皮癌、口腔咽頭癌、骨／悪性線維性肉腫、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、傍乳頭腫、紫斑病、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞性腫瘍／多発性骨髄腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝癌、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、骨盤及び尿路癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、サルコイドーシス肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、頸部扁平上皮癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍及び松果体腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行細胞癌、移行腎骨盤及び尿路癌、栄養膜腫瘍、子宮及び腎骨盤細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視経路及び視床下部グリオーマ、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、並びに上に列挙した器官系内に位置する新生物形成症以外の任意の他の過剰増殖性疾患を含む。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される移植可能な構築物（カプセル化細胞）は、対象における免疫応答を調節する（例えば、上方制御する）方法において使用され得る。例えば、対象に投与されると、移植可能な構築物（又はその中に配置された抗原性物質及び／又は治療用物質）は、対象における免疫系の成分のレベルを調節（例えば、上方制御）し得る（例えば、免疫系成分のレベルを増加又は減少させる）。本明細書に記載される移植可能な構築物又は関連する方法によって調節され得る例示的な免疫系成分としては、幹細胞（造血幹細胞）、ＮＫ細胞、Ｔ細胞（例えば、適応Ｔ細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞、若しくは制御性Ｔ細胞）又は自然様Ｔ細胞（例えば、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、若しくはγδＴ細胞）、Ｂ細胞、抗体若しくはその断片、又は他の別の成分が挙げられる。いくつかの実施形態において、調節は、Ｔ細胞又は他の免疫系成分の活性化を（例えば、対照と比較して約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上）増加又は減少させることを含む。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞（移植可能な構築物）は、ＣＤ４陽性及び／又はＣＤ８陽性免疫細胞を活性化するために使用することができる。

本明細書に記載される移植可能な構築物は、特定の期間にわたって対象における免疫応答を調節するために使用され得る。例えば、移植可能な構築物（又はその中に配置された抗原性物質及び／又は治療用物質）の投与は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間、１日、１．５日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、１．５週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、２ヶ月、２．５ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれ以上の間、対象における免疫応答を（例えば、免疫系成分のレベルの増加によって）活性化し得る。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物の投与は、１時間～１ヶ月、１時間～３週間、１時間～２週間、１時間～１週間、６時間～１週間、又は６時間～３日の間に対象における免疫応答を活性化する（例えば、免疫系成分のレベルの増加によって）。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物（例えば、本明細書に記載される移植可能な構築物）の移植は、少なくとも１日間、血液検査によって例えば測定されるように、対象におけるＴ細胞の上方制御をもたらす。

本明細書に記載される移植可能な構築物は、例えば併用療法において使用するための、抗増殖剤、抗癌剤、抗炎症剤、免疫調節剤、又は鎮痛剤などの追加の医薬品を更に含んでもよい。追加の医薬品は、移植可能な構築物の中又は上に配置されてもよく、あるいは移植可能な構築物の中又は上に配置された細胞によって産生されてもよい。いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、小分子、タンパク質、ペプチド、核酸、オリゴ糖、又は他の薬剤である。

いくつかの実施形態において、追加の医薬品は抗癌剤である。いくつかの実施形態において、抗癌剤は、小分子、キナーゼ阻害剤、アルキル化剤、血管破壊剤、微小管標的化剤、有糸分裂阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管新生剤、又は代謝拮抗剤である。いくつかの実施形態において、抗癌剤はタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ラロタキセル、又はカバジタキセル）である。いくつかの実施形態において、抗癌剤は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）である。いくつかの実施形態において、抗癌剤は、白金系薬剤（例えば、シスプラチン又はオキサリプラチン）である。いくつかの実施形態において、抗癌剤は、ピリミジン類似体（例えば、ゲムシタビン）である。いくつかの実施形態において、抗癌剤は、カンプトテシン、イリノテカン、ラパマイシン、ＦＫ５０６、５－ＦＵ、ロイコボリン、又はそれらの組み合わせから選択される。他の実施形態において、抗癌剤は、タンパク質生物製剤（例えば、抗体分子）、又は核酸療法（例えば、アンチセンス又は阻害性二本鎖ＲＮＡ分子）である。

いくつかの実施形態において、追加の医薬品は、免疫調節剤、例えば共刺激分子の活性化剤、免疫チェックポイント分子の阻害剤、又は抗炎症剤のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、免疫チェックポイント分子の阻害剤（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３若しくはＣＴＬＡ４、又はそれらの任意の組み合わせの阻害剤）である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は癌ワクチンである。

いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ７３、ＣＤ１６０、２Ｂ４及び／又はＴＧＦＲベータの阻害剤である。一実施形態において、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３若しくはＣＴＬＡ４、又はそれらの任意の組み合わせを阻害する。阻害分子の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルで行うことができる。いくつかの実施形態において、阻害性核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ）を使用して、阻害性分子の発現を阻害することができる。他の実施形態において、阻害シグナルの阻害剤は、阻害分子に結合する、ポリペプチド例えば、可溶性リガンド（例えば、ＰＤ－１－Ｉｇ若しくはＣＴＬＡ－４ Ｉｇ）、又は抗体若しくはその抗原結合断片、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ７３、ＣＤ１６０、２Ｂ４及び／若しくはＴＧＦＲベータ、又はそれらの組み合わせに結合する抗体又はその断片である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、抗炎症剤、例えば本明細書に記載される抗炎症剤である。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、炎症又は炎症シグナル伝達経路からのシグナル伝達を遮断、阻害、又は低減する薬剤である。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、対象の以下の免疫成分のいずれか１つ以上の活性を阻害又は低減する。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、アナキンラ、リロナセプト、又はカナキヌマブなどのＩＬ－１又はＩＬ－１受容体アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、ＩＬ－６又はＩＬ－６受容体アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ－６抗体又は抗ＩＬ－６受容体抗体、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、オロキズマブ、クラザキズマブ、サリルマブ、シルクマブ、シルツキシマブ、又はＡＬＸ－００６１である。いくつかの実施形態において、抗炎症剤は、ＴＮＦ－αアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ－α抗体、例えば、ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））又はエタネルセプトである。一実施形態において、抗炎症剤は、例えば、本明細書に記載されるコルチコステロイドである。

Ｆ．移植可能な構築物の組成物及び投与
本開示はまた、本明細書で提供される移植可能な構築物と、任意選択で薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、医薬組成物中に有効量で提供される。いくつかの実施形態において、有効量は治療有効量である。いくつかの実施形態において、有効量は、予防的有効量である。

いくつかの実施形態において、有効量は、有効量の天然ヒトＩＬ－１２を産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量の組換えＩＬ－１２を産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量のＩＬ－１２ムテインを産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量の天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）を産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量の天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）を産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量の組換えＩＬ－１２（ｐ３５）を産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量の組換えＩＬ－１２（ｐ４０）を産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量のＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインを産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量のＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインを産生する量である。いくつかの実施形態において、有効量は、有効量のＩＬ－２を産生する量である。

本明細書に記載される医薬組成物は、薬理学の分野で公知の任意の方法によって調製することができる。一般に、このような調製方法は、移植可能な構築物をキャリア及び／又は１つ以上の他の副成分と会合させるステップ、次いで、必要及び／又は所望であれば、生成物を所望の単回用量単位又は複数回用量単位に成形及び／又は包装するステップを包含する。

医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、及び／又は複数の単一単位用量として調製、包装、及び／又は販売することができる。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量である。移植可能な構築物の量は、一般に、対象に投与される抗原性物質及び／若しくは治療用物質の投薬量、並びに／又はこのような投薬量の都合のよい画分（例えば、このような投薬量の半分若しくは３分の１）に等しくあり得る。

いくつかの実施形態において、医薬組成物は凍結又は凍結保存される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、凍結されないか、又は凍結保存されない。

本開示の医薬組成物中の移植可能な構築物、薬学的に許容される賦形剤、及び／又は任意の追加成分の相対量は、治療される対象の同一性、サイズ、及び／又は状態に応じて、更に組成物が投与される経路に応じて変化する。例として、組成物は、０．１％～１００％（ｗ／ｗ）の任意の成分を含んでもよい。

移植可能な構築物及びその医薬組成物は、経口的に、非経口的に（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）、吸入スプレーによって、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、頬側に、経膣的に、又は移植されたリザーバーを介して投与又は移植され得る。いくつかの実施形態において、提供される化合物又は組成物は、静脈内及び／又は経口投与可能である。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は皮下注射される。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は腹腔内空間に注入される。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は腹腔内空間に注入される。いくつかの実施形態において、移植可能な構築物は、デバイス例えば、カニューレ又はカテーテルを使用して対象に送達される。

本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、眼内、硝子体内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、腹腔内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。好ましくは、組成物は、経口、皮下、腹腔内又は静脈内投与される。本開示の組成物の滅菌注射用形態は、水性又は油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、当該分野で公知の技術に従って処方され得る。滅菌注射用調製物はまた、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液又は懸濁液、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液として、であり得る。使用され得る受容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。更に、無菌の不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒体として従来から用いられている。

眼科使用のために、提供される化合物、組成物、及びデバイスは、微粉化懸濁液として、又はワセリンなどの軟膏中に処方されてもよい。

いくつかの実施形態において、抗原性物質、治療用物質、又は追加の医薬品の放出は、持続様式で放出される。特定の薬剤の効果を延長するために、注射からの薬剤の吸収を遅延させることがしばしば望ましい。これは、水溶性の低い結晶性又は非晶質材料の液体懸濁液を使用することによって達成することができる。次いで、薬剤の吸収速度は、その溶解速度に依存し、溶解速度は、結晶サイズ及び結晶形態に依存し得る。あるいは、非経口投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油性ビヒクルに溶解又は懸濁することによって達成される。

本明細書で提供される医薬組成物の説明は、主にヒトへの投与に適した医薬組成物に関するものであるが、当業者であれば、このような組成物が一般にあらゆる種類の動物への投与に適していることを理解するであろう。組成物を様々な動物への投与に適したものにするための、ヒトへの投与に適した医薬組成物の改変はよく理解されており、通常の熟練した獣医薬理学者は、通常の実験を用いてそのような改変を設計及び／又は実施することができる。

本明細書で提供される移植可能な構築物は、典型的には、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、単位剤形、例えば単一単位剤形で処方される。しかし、本開示の組成物の毎日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることが理解される。任意の特定の対象又は生物に対する具体的な治療有効用量レベルは、以下を含む様々な因子に依存するであろう。処置される疾患及び障害の重症度、用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物、対象の年齢、体重、全身健康状態、性別、及び食生活；用いられる特定の化合物の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療の持続期間；用いられる特定の治療用物質と組み合わせて又はそれと同時に使用される薬物；並びに医学分野で周知の同様の要因を含む様々な要因に依存する。

有効量を達成するために必要とされる化合物の正確な量は、例えば、対象の種、年齢、及び全身状態、副作用又は障害の重症度、特定の化合物（複数可）の同一性、投与様式などに応じて、対象毎に異なる。所望の投薬量は、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、２日おき、毎週、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に送達することができる。特定の実施形態において、所望の投与量は、複数回の投与を使用して送達され得る（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又はそれ以上の投与）。

投与される治療用物質は、所望の治療効果を得るために、１日１回以上、１日当たり、対象の体重について、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な用量レベルであってよい。

本明細書に記載の用量範囲は、提供される医薬組成物を成人に投与するための指針を提供することが理解されるであろう。例えば、小児又は青年に投与される量は、医師又は当業者によって決定され得、成人に投与される量より低いか、又は同じであり得る。

構築物（例えば、カプセル化細胞）は、任意の公知の方法に従って調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、組換えタンパク質を産生するカプセル化細胞を調製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、架橋溶液中に滴下してカプセル化細胞を形成するために、ポリマーヒドロゲルを含む第１の組成物と、ポリマーヒドロゲル中に懸濁されたカプセル化される細胞を含む第２の組成物とを同軸針を通して供給することを含み、架橋溶液は、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む。

いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、天然ヒトＩＬ－１２をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、組換えＩＬ－１２をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、ＩＬ－１２ムテインをコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、組換えＩＬ－１２（ｐ４０）をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインをコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインをコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）をコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）をコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテイン及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化される細胞は、天然ヒトＩＬ－２をコードするオリゴヌクレオチド分子を含む。

いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）をコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号１の配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）をコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号２の配列を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）は互いに相互作用してヘテロ二量体複合体を形成する。いくつかの実施形態において、ヘテロ二量体複合体は、天然ヒトＩＬ－１２である。いくつかの実施形態において、細胞は天然ヒトＩＬ－１２タンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－１２タンパク質は、配列番号３及び配列番号４のアミノ酸配列から形成される。いくつかの実施形態において、細胞は組換えＩＬ－１２タンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、組換えＩＬ－１２タンパク質は、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）タンパク質及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、細胞はＩＬ－１２ムテインタンパク質を産生する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１２ムテインタンパク質は、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインタンパク質及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインタンパク質を含む。いくつかの実施形態において、天然ヒトＩＬ－２をコードするオリゴヌクレオチドは、配列番号６の配列を含む。

細胞は、任意のタイプの細胞であり得る。いくつかの実施形態において、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、上皮細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はＲＰＥ細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、ＡＲＰＥ－１９細胞、ＡＲＰＥ－１９－ＳＥＡＰ－２－ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ－Ｊ細胞、及びｈＴＥＲＴ ＲＰＥ－１細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は操作されたＲＰＥ細胞である。いくつかの実施形態において、操作された細胞はＡＲＰＥ－１９細胞株に由来する。いくつかの実施形態において、細胞は、本明細書において提供されるとおりである。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート２０）である。いくつかの実施形態において、緩衝液はＨＥＰＥＳ緩衝液である。いくつかの実施形態において、糖アルコールはマンニトールである。いくつかの実施形態において、金属塩は塩化バリウムである。

いくつかの実施形態において、方法は、本明細書で提供される方法に従って生成されたカプセル化細胞を、生成された緩衝液中で洗浄することを含む。いくつかの実施形態において、洗浄ステップは、遊離バリウム又は塩化バリウムの実質的に全て又は全てを除去する。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法に従って調製されたカプセル化細胞は、ＤＭＥＭ／Ｆ１２細胞培養培地などの保存緩衝液中に保存される。いくつかの実施形態において、保存された細胞は、少なくとも１０日間、２０日間、又は３０日間、生存能力を保持する。いくつかの実施形態において、保存緩衝液は、プラズマライト緩衝液を実質的に含まない。

本明細書で提供される方法に従って調製されたカプセル化細胞の集団も本明細書で提供される。

いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の懸濁液が提供される。いくつかの実施形態において、懸濁液は、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含む。いくつかの実施形態において、カプセル化細胞は、ポリマーヒドロゲルによってカプセル化され、懸濁液は、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む架橋溶液を含む。いくつかの実施形態において、細胞はＡＲＰＥ－１９細胞である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート２０）である。いくつかの実施形態において、緩衝液はＨＥＰＥＳ緩衝液である。いくつかの実施形態において、糖アルコールはマンニトールである。いくつかの実施形態において、金属塩は塩化バリウムである。

いくつかの実施形態において、カプセル化細胞の懸濁液が提供され、懸濁液は、本明細書で提供されるカプセル化細胞の集団を含み、カプセル化細胞は、ポリマーヒドロゲル、及びＤＭＥＭ／Ｆ１２細胞培養培地などの保存緩衝液によってカプセル化される。

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される懸濁液は、プラズマライト緩衝液を実質的に含まない。

Ｇ．列挙された実施形態
１．ＩＬ－１２ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含む、カプセル化細胞の集団。
２．ＩＬ－１２ポリペプチドが、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチド、組換えＩＬ－１２ポリペプチド、又はＩＬ－１２ムテインポリペプチドである、実施形態１に記載のカプセル化細胞の集団。
３．天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドが、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、実施形態２に記載のカプセル化細胞の集団。
４．複数のオリゴヌクレオチド分子が、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする、実施形態１～３のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
５．天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドが、

の配列を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
６．天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドが、

の配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
７．発現されたＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び発現されたＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドがヘテロ二量体複合体を形成する、実施形態１～６のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
８．組換えＩＬ－１２が、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、実施形態２に記載のカプセル化細胞の集団。
９．ＩＬ－１２ムテインが、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、実施形態２に記載のカプセル化細胞の集団。
１０．複数のオリゴヌクレオチド分子が、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードする、実施形態９に記載のカプセル化細胞の集団。
１１．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４と比較して、Ｎ２２０Ｌ、Ｎ２２２Ｌ又はＮ２２２Ｑから選択される変異を含む、実施形態９又は１０のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１２．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４と比較してＮ２２２Ｌの変異を含む、実施形態９又は１０のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１３．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４と比較してＮ２２２Ｑの変異を含む、実施形態９又は１０のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１４．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号５と比較してＮ２２０Ｌの変異を含む、実施形態９又は１０のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１５．ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドが、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、又は１：１０の比で発現する、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１６．細胞が、天然ヒトＩＬ－１２ヘテロ二量体タンパク質、組換えＩＬ－１２ヘテロ二量体タンパク質、又はＩＬ－１２ムテインヘテロ二量体タンパク質を産生する、実施形態１～１５のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１７．細胞によって発現される天然ヒトＩＬ－１２タンパク質が、

の配列を含む第１のポリペプチドと、

の配列を含む第２のポリペプチドと
を含むポリペプチドを含み、第１及び第２のポリペプチドがヘテロ二量体複合体を形成する、実施形態１６に記載のカプセル化細胞の集団。
１８．細胞の集団が、約１０～約５０、約１０～約３０、約１０～約２０、又は約２０ナノグラム／細胞／日の天然ヒトＩＬ－１２を産生する、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
１９．細胞が本明細書に提供されるものである、実施形態１～１８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２０．細胞が、ＡＲＰＥ－１９細胞、ＡＲＰＥ－１９－ＳＥＡＰ－２－ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ－Ｊ細胞、ｈＴＥＲＴ ＲＰＥ－１細胞、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態１～１９のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２１．細胞が、ポリマーヒドロゲルでカプセル化されている、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２２．ポリマーヒドロゲルが、キトサン、セルロース、ヒアルロン酸、又はアルギン酸塩を含む、実施形態１～２１のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２３．ポリマーヒドロゲルがアルギン酸塩を含む、実施形態１～２２のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２４．アルギン酸塩がＳＬＧ２０を含む、実施形態１～２３のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２５．細胞が、少なくとも５、１０、１５、２０、４０、１２０、又は１８０日間生存可能であり続ける、実施形態１～２４のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２６．カプセル化細胞が増殖しない、実施形態１～２５のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２７．カプセル化細胞が、対象への移植後に経時的に線維性過形成を示さない、実施形態１～２６のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２８．カプセル化細胞が、対象への移植後に経時的に小さな線維性過形成を示す、実施形態１～２７のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団。
２９．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物。
３０．天然ヒトＩＬ－２をコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団を更に含む、実施形態２９に記載の医薬組成物。
３１．天然ヒトＩＬ－２をコードするオリゴヌクレオチドが、

の配列を含む、実施形態３０に記載の医薬組成物。
３２．天然ヒトＩＬ－２をコードするオリゴヌクレオチドが、コドン最適化された配列を含む、実施形態３１に記載の医薬組成物。
３３．天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化オリゴヌクレオチドが、配列番号７に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施形態３２に記載の医薬組成物。
３４．細胞が、組換え天然ヒトＩＬ－２タンパク質を産生する、実施形態３０～３３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
３５．細胞によって発現される組換え天然ヒトＩＬ－２タンパク質が、

のアミノ酸配列を含む、実施形態３０～３４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
３６．細胞の集団が、約１～約１０、約１～約５、又は約２～約４ ＰＣＤ（ピコグラム／細胞／日）の天然ヒトＩＬ－２を産生する、実施形態３０～３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
３７．癌を治療するために、対象に対して、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含む、対象における膵臓腫瘍などの腫瘍を治療する方法。
３８．癌を治療するために、対象に対して、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の腹腔内空間に移植することを含む、対象における膵臓腫瘍などの腫瘍量を低減する方法。
３９．対象に、約０．０１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約７．５～約２０μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１６μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．０１μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日、約３μｇ／ｋｇ／日、約４μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約７μｇ／ｋｇ／日、約８μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日、約１９μｇ／ｋｇ／日、又は約２０μｇ／ｋｇ／日の、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞が投与される、実施形態３７又は３８に記載の方法。
４０．癌を治療するために、対象に対して、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の皮下空間に対象に移植することを含む、対象におけるメラノーマ腫瘍などの腫瘍を治療する方法。
４１．癌を治療するために、対象に対して、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物を対象の皮下空間に対象に移植することを含む、対象におけるメラノーマ腫瘍などの腫瘍量を減少させる方法。
４２．対象に、約０．０１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約７．５～約２０μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１６μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．０１μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日、約３μｇ／ｋｇ／日、約４μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約７μｇ／ｋｇ／日、約８μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日、約１９μｇ／ｋｇ／日、又は約２０μｇ／ｋｇ／日の、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞が投与される、実施形態４０又は４１に記載の方法。
４３．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む、記憶免疫を生じさせることによって対象における腫瘍を治療する方法。
４４．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む、記憶免疫を生成することによって対象における腫瘍負荷を低減する方法。
４５．腫瘍が膵臓腫瘍又はメラノーマ腫瘍である、実施形態４３又は４４に記載の方法。
４６．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植することを含む、ＣＤ８陽性エフェクターＴ細胞を選択的に活性化する方法。
４７．エフェクターＴ細胞が、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）と比較して選択的に活性化及び拡大される、実施形態４６に記載の方法。
４８．選択的に活性化されたエフェクターＴ細胞がＩＦＮ－γを分泌する、実施形態４７記載の方法。
４９．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植又は投与することを含む、対象においてインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）を増加させる方法。
５０．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物を移植又は投与することを含む、対象におけるメラノーマを治療する方法。
５１．対象に移植又は投与されたカプセル化細胞が、対象において有意に線維化しない、実施形態３７～５０のいずれか１つに記載の方法。
５２．対象に移植又は投与されたカプセル化細胞が、対象において線維化しない、実施形態５１に記載の方法。
５３．移植されたカプセル化細胞にＩＬ－１２を発現させること、又は移植されたカプセル化細胞を移植位置においてＩＬ－１２に曝露することを含む、対象に移植されたカプセル化細胞の線維形成を予防又は阻害する方法。
５４．移植されたカプセル化細胞が、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含むか、又はＩＬ－１２を発現するカプセル化細胞の集団を含む環境に移植されるか、又はＩＬ－１２が存在する環境に移植される、実施形態５３に記載の方法。
５５．架橋溶液中に滴下してカプセル化細胞を形成するために、ポリマーヒドロゲルを含む第１の組成物と、ポリマーヒドロゲル中に懸濁されたカプセル化される細胞を含む第２の組成物とを同軸針を通して供給することであって、架橋溶液が、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む、前記供給すること
を含む、組換えタンパク質を産生するカプセル化細胞を調製する方法。
５６．カプセル化される細胞が、ＩＬ－１２ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含む、実施形態５５に記載の方法。
５７．ＩＬ－１２ポリペプチドが、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチド、組換えＩＬ－１２ポリペプチド、又はＩＬ－１２ムテインポリペプチドである、実施形態５６に記載の方法。
５８．天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドが、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、実施形態５６又は５７のいずれか１つに記載の方法。
５９．複数のオリゴヌクレオチド分子が、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする、実施形態５６～５８のいずれか１つに記載の方法。
６０．天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドが、

の配列を含む、実施形態５６～５９のいずれか１つに記載の方法。
６１．天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドが、

の配列を含む、実施形態５６～６０のいずれか１つに記載の方法。
６２．発現されたＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び発現されたＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドがヘテロ二量体複合体を形成する、実施形態５６～６１のいずれか１つに記載の方法。
６３．組換えＩＬ－１２が、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、実施形態５７に記載の方法。
６４．複数のオリゴヌクレオチド分子が、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする、実施形態６３に記載の方法。
６５．ＩＬ－１２ムテインが、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、実施形態５７に記載の方法。
６６．複数のオリゴヌクレオチド分子が、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドをコードする、実施形態６５に記載の方法。
６７．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４と比較して、Ｎ２２０Ｌ、Ｎ２２２Ｌ又はＮ２２２Ｑから選択される変異を含む、実施形態６５又は６６のいずれか１つに記載の方法。
６８．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４と比較してＮ２２２Ｌの変異を含む、実施形態６５又は６６のいずれか１つに記載の方法。
６９．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４と比較してＮ２２２Ｑの変異を含む、実施形態６５又は６６のいずれか１つに記載の方法。
７０．ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号５と比較してＮ２２０Ｌの変異を含む、実施形態６５又は６６のいずれか１つに記載の方法。
７１．ＩＬ－１２（ｐ３５）及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドが、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、又は１：１０の比で発現される、実施形態５５～７０のいずれか１つに記載の方法。
７２．ＩＬ－１２（ｐ３５）及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドが１：３の比で発現される、実施形態５５～７１のいずれか１つに記載の方法。
７３．細胞が、組換え天然ヒトＩＬ－１２ヘテロ二量体タンパク質を産生する、実施形態５５～７２のいずれか１つに記載の方法。
７４．細胞によって発現される組換え天然ヒトＩＬ－１２タンパク質が、

の配列を含む第１のポリペプチドと、

の配列を含む第２のポリペプチドと
を含むポリペプチドを含み、第１及び第２のポリペプチドがヘテロ二量体複合体を形成する、実施形態５５～７３のいずれか１つに記載の方法。
７５．細胞が、ＡＲＰＥ－１９細胞、ＡＲＰＥ－１９－ＳＥＡＰ－２－ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ－Ｊ細胞、ｈＴＥＲＴ ＲＰＥ－１細胞、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態３７～７４のいずれか１つに記載の方法。
７６．界面活性剤が、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（ポリソルベート２０）である、実施形態３７～７５のいずれか一つに記載の方法。
７７．緩衝液がＨＥＰＥＳ緩衝液である、実施形態３７～７６のいずれか１つに記載の方法。
７８．糖アルコールがマンニトールである、実施形態３７～７７のいずれか１つの方法。
７９．金属塩が塩化バリウムである実施形態３７～７８のいずれか１つの方法。
８０．緩衝液中でカプセル化細胞を洗浄することを更に含む、実施形態３７～７９のいずれか１つに記載の方法。
８１．ＤＭＥＭ／Ｆ１２細胞培養培地などの保存緩衝液中にカプセル化細胞を保存することを更に含む、実施形態３７～８０のいずれか１つに記載の方法。
８２．保存された細胞が少なくとも３０日間の生存能力を保持する、実施形態８１に記載の方法。
８３．保存緩衝液がプラズマライト緩衝液を実質的に含まない、実施形態８１又は８２に記載の方法。
８４．実施形態５５～８３のいずれか１つに記載の方法に従って調製されたカプセル化細胞の集団。
８５．懸濁液は、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含み、カプセル化細胞がポリマーヒドロゲルによってカプセル化されており、懸濁液が、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む架橋溶液である、カプセル化細胞の懸濁液。
８６．細胞が、ＡＲＰＥ－１９細胞、ＡＲＰＥ－１９－ＳＥＡＰ－２－ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ－Ｊ細胞、ｈＴＥＲＴ ＲＰＥ－１細胞、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態８５に記載の懸濁液。
８７．界面活性剤がＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（ポリソルベート２０）である、実施形態８５又は８６に記載の懸濁液。
８８．緩衝液がＨＥＰＥＳ緩衝液である、実施形態８５～８７のいずれか１つに記載の懸濁液。
８９．糖アルコールがマンニトールである、実施形態８５～８８のいずれか１つに記載の懸濁液。
９０．金属塩が塩化バリウムである、実施形態８５～８９のいずれか１つに記載の懸濁液。
９１．懸濁液が、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のカプセル化細胞の集団を含み、カプセル化細胞が、ポリマーヒドロゲル、及びＤＭＥＭ／Ｆ１２細胞培養培地などの保存緩衝液によってカプセル化されている、カプセル化細胞の懸濁液。
９２．懸濁されたカプセル化細胞が、少なくとも３０日間の生存能力を保持する、実施形態９１に記載の懸濁液。
９３．懸濁緩衝液が、プラズマライト緩衝液を実質的に含まない、実施形態８５～９２のいずれか１つに記載の懸濁液。

Ｈ．実施例
以下の実施例は、好ましい実施形態を実証するために含まれる。以下の実施例に開示される技術は、実施形態の実践において良好に機能することが本発明者によって発見された技術を表し、したがって、その実践のための好ましい様式を構成すると見なされ得ることが、当業者によって理解されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでも本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく同様又は類似の結果を得ることができることを理解すべきである。

以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態を実証するために含まれる。以下の実施例において開示される技術は、本開示の実施において良好に機能することが本発明者によって発見された技術を表し、したがって、その実施のための好ましい様式を構成すると考えることができることが、当業者によって理解されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態において多くの変更を行うことができ、それでも本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく同様又は類似の結果を得ることができることを理解すべきである。

実施例１．カプセル化細胞は非腫瘍形成性である
移植可能な細胞は、腫瘍形成性になり得、したがって、カプセル化細胞が腫瘍形成性になるか又は制御不能に分裂することができないことを実証することが重要である。使用された細胞であるＡＲＰＥ－１９細胞は、非腫瘍形成性であり、２Ｄ培養において接触阻害増殖特性を示し、遺伝子改変に対して修正可能であり、以前の臨床研究において安全であることが示されているので選択された。カプセル化後のＡＲＰＥ－１９細胞の運命を評価するために、カプセル内のカプセル化ＡＲＰＥ－１９細胞の生存能力及び増殖を分析するために様々なアッセイを行った。これらの研究は、カプセル化されたＡＲＰＥ－１９細胞が、少なくとも４週間の培養における生存能力、２Ｄ培養における増殖、及びカプセル化の際の接触阻害を含む所望の特徴を示し、カプセル内での更なる細胞増殖を防止することを実証した。簡潔に述べると、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ生存率／細胞毒性キットを使用して、カプセル化内のＡＲＰＥ－１９生存能力を経時的にインビトロで評価し、細胞内エステラーゼ活性（生細胞）を示す緑色蛍光染色及び原形質膜完全性の喪失を示す赤色蛍光エチジウムホモダイマー－１（死細胞）で同時に染色することによって、生細胞を死細胞から迅速に特定した。カプセル内の細胞の増殖を、Ｃｌｉｃｋ－ｉＴ ＥｄＵ画像化キットを使用して測定した。培地で希釈したＥｄＵの１Ｘ作業溶液を各カプセルに添加した。０、２４、７２時間、及び７日目に、培地を除去し、カプセルを４％ＰＦＡ中で固定した。カプセルを３％ＢＳＡで洗浄し、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を用いて透過処理した。細胞を染色するために、０．２ｍｌのＣｌｉｃｋ－ｉＴ反応カクテルを各カプセルに添加し、３０分間インキュベートした。続いてカプセルを３％ＢＳＡで洗浄した。最後に、ヘキスト３３３４３（ＮｕｃＢｌｕ）を用いて細胞核を染色した。４倍の倍率でＥＶＯＳ ＸＬ顕微鏡を使用してカプセルを画像化した。

最初に、本発明者らは、蛍光顕微鏡による生／死染色を使用して、カプセル化されたＡＲＰＥ－１９の生存能力を評価した。本発明者らは、２８日間にわたって、カプセル化された生存ＡＲＰＥ－１９細胞の数にインビトロで差異を観察しなかった。次に、本発明者らは、ＡＲＰＥ－１９細胞の増殖状態を調査した。カプセル化されたＡＲＰＥ細胞の増殖を、アルギン酸塩ヒドロゲル内で継続的なインビトロ増殖を示すことが知られている細胞（ＨＥＫ細胞）と比較するために、カプセルのインビトロ評価を行った。ＡＲＰＥ細胞（又は対照としてのＨＥＫ細胞）を１．５ｍｍのアルギン酸塩カプセルにカプセル化し、最大７日間のあいだ経時的にインビトロで画像化した。別々の時点で、カプセルを無作為に主集団から取り出し、カプセル内の細胞を可視化するためのＤＡＰＩ染色及び増殖マーカーとしてのＥｄＵ（ＧＦＰ）を使用して定性的にアッセイした。画像を４倍の倍率で撮影した。ＨＥＫ細胞のみがＧＦＰマーカーで染色され、ＡＲＰＥ－１９細胞がアルギン酸塩ヒドロゲル内へのカプセル化後に増殖しないことが確認された（データ示さず）。この観察は、ＰＣＲ分析を用いて確認された。結論として、カプセル化されたＡＲＰＥ－１９は、インビトロで少なくとも２８日間生存可能であり続けた。カプセル化されたＡＲＰＥ－１９細胞株は、２Ｄ培養において増殖することができたが、カプセル化の際に接触阻害を示し、したがって、カプセルの内側で増殖し続けなかった。この特徴は、投与後のカプセル当たりのサイトカイン分泌の用量を調節するために重要である。

実施例２．カプセル化細胞の調製
ポリクローナルＡＲＰＥ－１９細胞を増殖させ、リポフェクタミンプロトコルを使用して５：１（トランスポザーゼ：トランスポゾン）の比でトランスフェクトし、ヒト天然ＩＬ－１２を発現する細胞を作製した。トランスフェクトされた細胞を培養し、単一細胞成長のために０．５細胞／ウェルでプレーティングしたが、細胞のポリクローナルサンプルが使用され得る場合、濃度は異なり得る。選択されたクローンのＩＬ－１２産生は、約３．８ ＰＣＤ（ピコグラム／細胞／日）であった。クローンを細胞フラスコ／スタック中で最大２週間増殖させた後、細胞ペレット中に回収し、カプセル化のためにアルギン酸塩（ＳＬＧ２０）中に懸濁した。カプセル化プロセスは、２つのシリンジ（１つはＳＬＧ２０、１つはアルギン酸塩（ＳＬＧ２０）に懸濁した細胞ペレット（１０，５００，０００細胞／ｍＬ））を装填することを含む。電源（電流）の使用によって、シリンジを同軸針に提供して、マンニトール、塩化バリウム、ＨＥＰＥＳ緩衝液及びＴｗｅｅｎ２０を含有する架橋浴中に液滴が落下することを可能にし、そこでカプセルが成形された。浴中に５分間位置した後にカプセルを浴から回収し、緩く結合したバリウムの除去を助けるために、１：２５の比のカプセル対ＨＥＰＥＳ緩衝液で８回洗浄した（２分／洗浄）。カプセル化細胞を、コニカルチューブ、バイオテイナーボトル、又は他の滅菌容器などの容器中、周囲温度で、ＤＭＥＭ／Ｆ１２細胞培養培地中に保存した。

実施例３．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルは、処置の１０日未満で膵臓癌を根絶する
ＰＡＮ０２－Ｆｌｕｃ細胞（５×１０^６）をＢ６アルビノマウスのＩＰ空間に注射して、ＩＰ ＰＡＮ０２腫瘍を確立した。注射後７日目に、マウスを無作為に８匹の群に分け、２０個のＲＰＥカプセル（約３０ｋ細胞／キャップ）、偽手術、又は２０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約４００ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）で処置した。処置後２５日目に、マウスを屠殺し、肝臓、腎臓、腹壁、脾臓、及び腫瘍を、ＩＶＩＳ画像化を使用してエキソビボで検査した。分析は、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置マウスにおいて処置後１０日目又は２５日目に陽性ＩＶＩＳシグナルを示さなかった。

実施例４．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルは、経時的に減少した線維形成を示す
ＨＢＳＳに懸濁したＰａｎ０２－Ｆｌｕｃ細胞（５×１０６）を、アルビノＢ６マウス（性別混合）のＩＰ空間に注射した。ＩＰ注射の６日後、マウスをＩＶＩＳによって画像化し、５～６匹のマウスからなる４つの群に階層化した。ＩＰ注射の７日後、マウスを、（１）未処置、（２）２００個のＲＰＥカプセル、（３）２００個のＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル（約７０００ｎｇ ｍＩＬ２／日）、（４）１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約２００ｎｇ ｍＩＬ１２／日）のいずれかで処置した。全てのカプセルを外科的移植によって投与した。カプセル移植の５日後、ＩＰ腫瘍負荷の程度を可視化するために、マウスをＩＶＩＳによって画像化した。カプセル移植の７日後、マウスを屠殺し、１０ｍＬのＰＢＳ洗浄液を用いてＩＰ細胞を回収した。細胞懸濁液を７０μｍフィルターを用いて濾過し、遠心分離機（２０００ｒｐｍ、４分）を用いてスピンダウンした。上清を廃棄し、３ｍＬのＲＢＣ溶解緩衝液を室温で１０分間添加した。１０ｍＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳを各チューブに添加した。細胞をスピンダウンした（５０００ｒｐｍ、１０分）。上清を捨て、細胞ペレットを２ｍＬの完全培地（ＤＭＥ／Ｆ１２＋１０％ ＦＢＳ＋１％ＡｎｔｉＡｎｔｉ）に再懸濁した。各群の個々の試料をプールした。細胞をスピンダウンした（２０００ｒｐｍ、１０分）。上清を捨て、細胞を氷上のＦＣブロック中に１０分間再懸濁し、次いでスピンダウンした（２０００ｒｐｍ、１０分間）。細胞を氷上で３０分間ＣＤ４５抗体で染色し、次いでスピンダウンした（２０００ｒｐｍ、１０分間）。上清を廃棄し、細胞を４ｍＬの完全培地に再懸濁した。細胞をＲｅａｄｉＤｒｏｐヨウ化プロピジウムで染色し、選別した（ＰＩ－ＣＤ４５＋）。選別された細胞を処理し、ライブラリーを調製し、ＢＣＭコアで配列決定した。視覚分析、並びにＣＳＦ１Ｒ及びＦＮ１マクロファージマーカーの分析は、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルが処置後７日目に最小の線維性過形成を示したが、ＲＰＥ及びＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセルは広範な過形成を示したことを示した。したがって、カプセル間の唯一の差異であったカプセルからのＩＬ－１２の発現は、線維性過形成を阻害するようである。これは、アルギン酸塩を抗線維性化合物又は修飾で修飾することなく達成されたため、驚くべき結果であった。

実施例５．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、ＣＤ８α、ＰＲＦ１、及びＩＦＮ－γの発現の増加をもたらす
ＨＢＳＳに懸濁したＰａｎ０２－Ｆｌｕｃ細胞（５×１０６）を、アルビノＢ６マウス（性別混合）のＩＰ空間に注射した。ＩＰ注射の６日後、マウスをＩＶＩＳによって画像化し、５～６匹のマウスからなる４つの群に階層化した。ＩＰ注射の７日後、マウスを、（１）未処置、（２）２００個のＲＰＥカプセル、（３）２００個のＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル（約７０００ｎｇ ｍＩＬ２／日）、（４）１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約２００ｎｇ ｍＩＬ１２／日）のいずれかで処置した。全てのカプセルを外科的移植によって投与した。カプセル移植の５日後、ＩＰ腫瘍負荷の程度を可視化するために、マウスをＩＶＩＳによって画像化した。カプセル移植の７日後、マウスを屠殺し、１０ｍＬのＰＢＳ洗浄液を用いてＩＰ細胞を回収した。細胞懸濁液を７０μｍフィルターを用いて濾過し、遠心分離機（２０００ｒｐｍ、４分）を用いてスピンダウンした。上清を廃棄し、３ｍＬのＲＢＣ溶解緩衝液を室温で１０分間添加した。１０ｍＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳを各チューブに添加した。細胞をスピンダウンした（５０００ｒｐｍ、１０分）。上清を捨て、細胞ペレットを２ｍＬの完全培地（ＤＭＥ／Ｆ１２＋１０％ ＦＢＳ＋１％ＡｎｔｉＡｎｔｉ）に再懸濁した。各群の個々の試料をプールした。細胞をスピンダウンした（２０００ｒｐｍ、１０分）。上清を捨て、細胞を氷上のＦＣブロック中に１０分間再懸濁し、次いでスピンダウンした（２０００ｒｐｍ、１０分間）。細胞を氷上で３０分間ＣＤ４５抗体で染色し、次いでスピンダウンした（２０００ｒｐｍ、１０分間）。上清を廃棄し、細胞を４ｍＬの完全培地に再懸濁した。細胞をＲｅａｄｉＤｒｏｐヨウ化プロピジウムで染色し、選別した（ＰＩ－ＣＤ４５＋）。選別された細胞を処理し、ライブラリーを調製し、ＢＣＭコアで配列決定した。データは、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２で処置されたマウスが、未処置又はＲＰＥ処置マウスと比較してＣＤ８α、ＰＲＦ１、及びＩＦＮ－γの発現を示すことを示した。データは更に、局所高用量ＲＰＥ－ｍＩＬ２がＴｒｅｇのマーカーであるＦｏｘＰ３発現の増加を引き起こさなかったが、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置はＩＦＮ－γ発現の増加を引き起こしたことを示した。

実施例６．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２の皮下投与又は腹腔内投与は、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマモデルにおける皮下腫瘍増殖を遅延させる
ＨＢＳＳに懸濁したＢ１６Ｆ１０（５×１０^５）細胞を、Ｂ６マウス（雌雄混合）の右脇腹に皮下注射した。ＩＰ注射の６日後、デジタルキャリパーを使用して腫瘍を測定し、３～４匹のマウスの４つの群に階層化した。ＩＰ注射の７日後、マウスを、（１）偽手術、（２）皮下移植された１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル、（３）ＩＰ腔内に移植された１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル、（４）ＩＰ腔内に移植された１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル＋５個の凍結融解されたＢ１６Ｆ１０カプセル（抗原）のいずれかで処置した。全てのカプセルを外科的移植によって投与した。抗原を調製するために、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞をアルギン酸カプセルにカプセル化し、－８０℃で３ラウンドの凍結／解凍サイクルに供して細胞を破壊した。

投与時に、抗原カプセルを解凍し、皮下Ｂ１６Ｆ１０腫瘍を有するマウスのＩＰ空間に１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルと共に投与した。カプセル投与後、腫瘍がいずれかの方向で１５ｍｍに達するまで、腫瘍を２～４日毎に測定した。ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル又は抗原と同時投与されたＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、図１に示されるように、生存を増加させ、腫瘍増殖を遅延させた。

実施例７．ＲＰＥ－ｍＩＬ２及びＲＰＥ－ｍＩＬ１２の同時投与は、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマモデルにおける皮下腫瘍増殖を遅延させる
ＨＢＳＳに懸濁したＢ１６Ｆ１０（５×１０^５）細胞を、Ｂ６マウス（雄）の右脇腹に皮下注射した。皮下注射の６日後、デジタルキャリパーを使用して腫瘍を測定し、３群のマウスに階層化した。皮下注射の７日後、マウスを、ＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルと同時投与されたＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル、又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルのいずれかで処置した。ＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルと同時投与されたＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル、又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、図２に示されるように、腫瘍増殖を遅延させた。

実施例８．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルは、１週間未満の処置で再発なしにＫＰＣ膵臓腫瘍の減少を引き起こした
ＫＰＣ－Ｆｌｕｃ細胞（１×１０^６）をＢ６マウスのＩＰ空間に注射して、ＩＰ ＫＰＣ腫瘍を確立した。注射後７日目に、１５匹のマウスを３群に階層化し、３個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約６０ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）、１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約２００ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）又は１５個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約３００ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）で処置した。処置後６、１４及び２１日目のＩＶＩＳ分析は、ＫＰＣ膵臓腫瘍の減少を示した。３個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約６０ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）、１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約２００ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）で処置したマウスを、１８０日目まで更に観察し、腫瘍再発を示さなかった。処置後１８０日目の内臓の分析は、未処置ＫＰＣ腫瘍対照マウスにおいて観察されたような血管新生又は変色の増加を示さなかった。

実施例９．サイトカイン工場は、処置の７日未満で膵臓癌腫瘍負荷を減少させる
ＰＡＮ０２－Ｆｌｕｃ細胞（５×１０^６）をＢ６アルビノマウスのＩＰ空間に注射して、ＩＰ ＰＡＮ０２ Ｆｌｕｃ腫瘍を確立した。注射後７日目に、マウスを５～６匹の群に階層化し、未処置、２００個のＲＰＥカプセル（約３０ｋ細胞／キャップ）、２００個のＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約７０００ｎｇ ｍＩＬ－２／日）又は１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル（約３０ｋ細胞／キャップ、約２００ｎｇ ｍＩＬ－１２／日）で処置した。処置の７日後、マウスを屠殺し、ＩＰ流体を単一細胞ＲＮＡｓｅｑのために処理した。処置後５日目のＩＶＩＳ分析は、ＲＰＥ－ｍＩＬ２又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置したマウスにおけるＫＰＣ膵臓腫瘍の減少を示した。ＲＮＡｓｅｑによる免疫細胞集団の分析は、未処置マウスと比較して、ＲＰＥ－ｍＩＬ２又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置されたマウスにおけるＢ細胞及び樹状細胞数の相対的減少、並びに単球又はＮＫ／Ｔ細胞の増加を示した。

実施例１０．サイトカイン工場は、５日間の処置で膵臓癌腫瘍負荷を減少させる
マウス（１群当たりｎ＝５～６）に、処置前にＰａｎ０２－ｆｌｕｃ細胞（５×１０^６）を注射した。図３Ａの上パネルに示すように、ＩＶＩＳ画像化は、注射６日後に安定したレベルの総フラックスを示した。対照（未処置）、ＲＰＥ、ＲＰＥ－ｍＩＬ２、又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置の５日後、図３Ａの下のパネルに示すように、発光画像化は、腫瘍量の減少を示した。平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｅｒ）のスケールバー最小値及び最大値は、それぞれ５×１０５及び５×１０８であった。次に、処置によって分けられた個々の細胞（未処置、ＲＰＥ、ＲＰＥ－ｍＩＬ２、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２）を、処置の１週間後にＩＰ空間から収集し、ＣＤ８α遺伝子発現を評価した。ＣＤ８α遺伝子発現のｔ－ＳＮＥプロット埋め込みは、ＲＰＥ－ｍＩＬ２又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置後の発現の増加を示す（図３Ｂ、上パネル、ヒートマップは、細胞におけるＣＤ８αのｌｏｇ２スケール発現を表した）。処置の１週間後にＩＰ空間から収集された、処置によって分けられた個々の細胞（未処置、ＲＰＥ、ＲＰＥ－ｍＩＬ２、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２）における、ＩＦＮｇ遺伝子発現のｔ－ＳＮＥプロット埋め込みは、ＲＰＥ－ｍＩＬ２又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置後のＩＦＮｇ発現の増加を示した（図３Ｂ、下パネル、ヒートマップは、細胞におけるＩＦＮｇのｌｏｇ２スケール発現を表した）。

実施例１１．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルは、膵臓癌腫瘍負荷の長期持続的減少をもたらした
ＫＰＣ細胞（１×１０^６）をマウスのＩＰ空間に注射して、ＩＰ ＫＰＣ腫瘍を確立した。注射後７日目に、マウスを３群に階層化し、３個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル、１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセル、又は１５個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置した。処置後６、１４、２１、４０、及び１２０日目のＩＶＩＳ分析は、ＫＰＣ膵臓腫瘍減少を示した（図４Ａ）。更に、３又は１０個のＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置した動物において、処置後１８０日目まで、体重の漸増が観察された（図４Ｂ）。ＲＰＥ－ｍＩＬ１２を用いた、又は用いない処置の８週間後の膵臓の肉眼的及びヘマトキシリン及びエオシン画像化は、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置した動物の膵臓が、保存された細胞形態及び構造を示すことを示した（図４Ｃ）。

実施例１２．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルは、肝臓、腎臓、腹壁、及び脾臓における膵臓癌腫瘍負荷を減少させた
上記の実施例において提供されるように、マウスに、処置の前にＰａｎ０２－ｆｌｕｃ細胞（５×１０^６）を注射した。膵臓癌細胞を注射した７日後に、マウスを偽処置、ＲＰＥ処置、又はＲＰＥ－ｍＩＬ１２処置に供した。処置後２５日目に、肝臓、腎臓、腹壁、及び脾臓をマウスから抽出した。発光画像化は、ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルで処置された動物の肝臓、腎臓、腹壁、又は脾臓において膵臓癌腫瘍を示さなかった（図５）。

実施例１３．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２の投与は、メラノーマモデルにおいて腫瘍増殖を減少させ、脾臓細胞充実性を保存した
メラノーマ細胞（５×１０^５）細胞をマウスのＩＰ空間に注射した。メラノーマ細胞注射の７日後、マウスを未処置（対照）とするか、又はＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセルで処置した。ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、図６Ａに示されるように、腫瘍増殖の減少をもたらした（１群当たりｎ＝３～４）。次に、脾臓を抽出し、自動細胞計数のために単一細胞懸濁液に解離した。ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、図６Ｂに示されるように、保存された脾臓細胞充実性をもたらした。

実施例１４．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２の投与は、メラノーマ腫瘍を有する動物の生存を増加させた
メラノーマ細胞（５×１０^５）細胞をマウスのＩＰ空間に注射した。メラノーマ細胞注射の７日後、マウス（１群当たりｎ＝４～６匹のマウス）をＲＰＥカプセル又はＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセルで処置した。ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、図７に示されるように、生存の確率の増加をもたらした。

実施例１５．ＲＰＥ－ｍＩＬ１２の投与は、膵臓腫瘍を有する動物の生存を増加させた
Ｐａｎ０２－ｆｌｕｃ細胞（５×１０^６）細胞をマウスのＩＰ空間に注射した。メラノーマ細胞注射の７日後、マウス（１群当たりｎ＝５～８匹のマウス）を偽手術（対照）に供し、ＲＰＥカプセルで処置し、又はＲＰＥ－ｍＩＬ２カプセルで処置した。ＲＰＥ－ｍＩＬ１２カプセルによる処置は、図８に示されるように、生存の確率の増加をもたらしたが、対照又はＲＰＥ処置動物は、より低い生存の確率を示した。

本明細書において開示され、特許請求される方法の全ては、本開示に照らして過度の実験を行うことなく作製及び実行することができる。本開示の組成物及び方法を好ましい実施形態に関して記載してきたが、本開示の概念、趣旨及び範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の方法及び方法のステップ又は一連のステップに変形を適用してもよいことが５当業者には明らかであろう。より具体的には、化学的及び生理学的の両方で関連する特定の薬剤が、本明細書中に記載される薬剤の代わりに使用され得るが、同一又は類似の結果が達成されることが明らかである。当業者に明らかな全てのそのような類似の置換及び修正は、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の趣旨、範囲及び概念内にあると見なされる。

Claims (50)

1. ＩＬ－１２ポリペプチドをコードする複数のオリゴヌクレオチド分子を含む、カプセル化細胞の集団。
2. ＩＬ－１２ポリペプチドが、天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチド、組換えＩＬ－１２ポリペプチド、又はＩＬ－１２ムテインポリペプチドである、請求項１に記載のカプセル化細胞の集団。
3. 天然ヒトＩＬ－１２ポリペプチドが、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、請求項２に記載のカプセル化細胞の集団。
4. 前記複数のオリゴヌクレオチド分子が、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする、請求項１～３のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
5. 天然ヒトＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチドをコードする前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１の配列を含み、天然ヒトＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドをコードする前記オリゴヌクレオチドが、配列番号２の配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
6. 発現されたＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び発現されたＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドがヘテロ二量体複合体を形成する、請求項１～５のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
7. 組換えＩＬ－１２が、組換えＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及び組換えＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、請求項２に記載のカプセル化細胞の集団。
8. ＩＬ－１２ムテインが、ＩＬ－１２（ｐ３５）ムテインポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドを含むヘテロ二量体複合体である、請求項２に記載のカプセル化細胞の集団。
9. ＩＬ－１２（ｐ４０）ムテインポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列と比較して、Ｎ２２０Ｌ、Ｎ２２２Ｌ又はＮ２２２Ｑから選択される変異を含む、請求項８に記載のカプセル化細胞の集団。
10. ＩＬ－１２（ｐ３５）ポリペプチド及びＩＬ－１２（ｐ４０）ポリペプチドが、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、又は１：１０の比（ＩＬ－１２（ｐ３５）：ＩＬ－１２（ｐ４０））で発現する、請求項１～９のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
11. 前記細胞が、天然ヒトＩＬ－１２ヘテロ二量体タンパク質、組換えＩＬ－１２ヘテロ二量体タンパク質、又はＩＬ－１２ムテインヘテロ二量体タンパク質を産生する、請求項１～１０のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
12. 前記細胞によって発現される天然ヒトＩＬ－１２タンパク質が、配列番号３の配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号４の配列を含む第２のポリペプチドとを含むポリペプチドを含み、前記第１及び第２のポリペプチドがヘテロ二量体複合体を形成する、請求項１１に記載のカプセル化細胞の集団。
13. 細胞の前記集団が、約１０～約５０、約１０～約３０、約１０～約２０、又は約２０ナノグラム／細胞／日の天然ヒトＩＬ－１２を産生する、請求項１～１２のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
14. 前記細胞が、ＡＲＰＥ－１９細胞、ＡＲＰＥ－１９－ＳＥＡＰ－２－ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ－Ｊ細胞、ｈＴＥＲＴ ＲＰＥ－１細胞、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項１～１３のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
15. 前記細胞がポリマーヒドロゲルでカプセル化されている、請求項１～１４のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
16. ポリマーヒドロゲルが、キトサン、セルロース、ヒアルロン酸、又はアルギン酸塩を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
17. ポリマーヒドロゲルが、アルギン酸塩を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
18. アルギン酸塩がＳＬＧ２０を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
19. 前記細胞が、少なくとも５、１０、１５、２０、４０、１２０、又は１８０日間生存可能であり続ける、請求項１～１８のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
20. 前記カプセル化細胞が増殖しない、請求項１～１９のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団。
21. 細胞の前記集団をカプセル化するカプセルが、対象への移植後に、線維性過形成を起こさないか、又は部分的な線維性過形成を起こす、請求項１に記載のカプセル化細胞の集団。
22. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団を含む、医薬組成物。
23. 天然ヒトＩＬ－２をコードするオリゴヌクレオチド分子を含むカプセル化細胞の集団を更に含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
24. 天然ヒトＩＬ－２をコードする前記オリゴヌクレオチドが、配列番号６の配列を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
25. 天然ヒトＩＬ－２をコードする前記オリゴヌクレオチドが、コドン最適化された配列を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
26. 天然ヒトＩＬ－２をコードするコドン最適化オリゴヌクレオチドが、配列番号７に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
27. 前記細胞が組換え天然ヒトＩＬ－２タンパク質を産生する、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
28. 前記細胞によって発現される組換え天然ヒトＩＬ－２タンパク質が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項２２～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
29. 細胞の前記集団が、約１～約１０、約１～約５、又は約２～約４ ＰＣＤ（ピコグラム／細胞／日）の天然ヒトＩＬ－２を産生する、請求項２２～２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
30. 対象における腫瘍を治療する方法であって、癌を治療するために、前記対象に対して、請求項１～２１のいずれか一項に記載の複数のカプセル化細胞（例えば、１つ以上のカプセル）を含む医薬組成物又は請求項２２～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象の腹腔内空間に移植することを含む、前記方法。
31. 癌を治療するために、対象に対して、請求項１～２１のいずれか一項に記載の複数のカプセル化細胞（例えば、カプセル）を含む医薬組成物又は請求項２２～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象の腹腔内空間に移植することを含む、前記対象における腫瘍負荷を減少させる方法。
32. 前記腫瘍が膵臓腫瘍又はメラノーマ腫瘍である、請求項３０又は３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記対象に、約０．０１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約７．５～約２０μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日～約１５μｇ／ｋｇ／日、約１６μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日～約２０μｇ／ｋｇ／日、約０．０１μｇ／ｋｇ／日、約０．１μｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日、約２μｇ／ｋｇ／日、約３μｇ／ｋｇ／日、約４μｇ／ｋｇ／日、約５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約７μｇ／ｋｇ／日、約８μｇ／ｋｇ／日、約９μｇ／ｋｇ／日、約１０μｇ／ｋｇ／日、約１１μｇ／ｋｇ／日、約１２μｇ／ｋｇ／日、約１３μｇ／ｋｇ／日、約１４μｇ／ｋｇ／日、約１５μｇ／ｋｇ／日、約６μｇ／ｋｇ／日、約１７μｇ／ｋｇ／日、約１８μｇ／ｋｇ／日、約１９μｇ／ｋｇ／日、又は約２０μｇ／ｋｇ／日の、請求項１～２８のいずれか一項に記載のカプセル化細胞が投与される、請求項３０～３２のいずれか１項に記載の方法。
34. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物又は請求項２２～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に移植又は投与することを含む、記憶免疫を生成することによって前記対象において腫瘍を治療する又は腫瘍負荷を低減する方法。
35. 前記腫瘍が膵臓腫瘍又はメラノーマ腫瘍である、請求項３４に記載の方法。
36. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物又は請求項２２～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に移植又は投与することを含む、ＣＤ８陽性エフェクターＴ細胞を選択的に活性化する方法。
37. 前記エフェクターＴ細胞が、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）と比較して選択的に活性化及び拡大される、請求項３６に記載の方法。
38. 前記選択的に活性化されたエフェクターＴ細胞がＩＦＮ－γを分泌する、請求項３７に記載の方法。
39. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のカプセル化細胞の集団を含む医薬組成物又は請求項２２～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に移植又は投与することを含む、対象においてインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）を増加させる方法。
40. 前記対象に移植又は投与された前記カプセル化細胞を含む前記カプセルが、移植後又は投与後に線維形成を起こさないか、又は部分的な線維形成を起こす、請求項３０～３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 対象に移植された、細胞をカプセル化する前記カプセルの線維形成を予防又は阻害する方法であって、前記移植されたカプセル化細胞にＩＬ－１２を発現させること、又は前記移植されたカプセル化細胞を移植位置でＩＬ－１２に曝露することを含む、前記方法。
42. 架橋溶液中に滴下して前記カプセル化細胞を形成するために、ポリマーヒドロゲルを含む第１の組成物と、ポリマーヒドロゲル中に懸濁されたカプセル化される細胞を含む第２の組成物とを同軸針を通して供給することであって、前記架橋溶液が、糖アルコール、緩衝液、金属塩、及び界面活性剤を含む、前記供給すること
    を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載のカプセル化細胞を調製する方法。
43. 前記細胞が、ＡＲＰＥ－１９細胞、ＡＲＰＥ－１９－ＳＥＡＰ－２－ｎｅｏ細胞、ＲＰＥ－Ｊ細胞、ｈＴＥＲＴ ＲＰＥ－１細胞、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項４２に記載の方法。
44. 界面活性剤が、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０（ポリソルベート２０）である、請求項４２～４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 緩衝液がＨＥＰＥＳ緩衝液である、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 糖アルコールがマンニトールである、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 金属塩が塩化バリウムである、請求項４２～４６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記カプセル化細胞をＤＭＥＭ／Ｆ１２細胞培養培地などの保存緩衝液に保存することを更に含む、請求項４２～４７のいずれか一項に記載の方法。
49. 前記保存された細胞が、少なくとも３０日間の生存能力を保持する、請求項４８に記載の方法。
50. 請求項４２～４９のいずれか１項に記載の方法に従って調製された、カプセル化細胞の集団。

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