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JP2025502061A - 再発性卵巣癌を、二重特異性抗ｍｕｃ１６×抗ｃｄ３抗体単独で、または抗ｐｄ－１抗体と組み合わせて治療する方法 - Google Patents

再発性卵巣癌を、二重特異性抗ｍｕｃ１６×抗ｃｄ３抗体単独で、または抗ｐｄ－１抗体と組み合わせて治療する方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、癌（例えば、再発性卵巣癌）を治療する、その重症度を低減する、またはその増殖を阻害するための方法を提供する。本発明の方法は、ムチン１６（ＭＵＣ１６）およびＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体の治療有効量を単独で、またはプログラム死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片の治療有効量と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む。【選択図】図４

Description

配列表の参照
本出願は、２０２３年１月６日に作成され、５４，６６０バイトを含む、１１０４８ＷＯ０１＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅと題されたＳＴ．２６ ＸＭＬ形式のコンピュータ可読配列表を参照により組み込む。
本発明は、ムチン１６（ＭＵＣ１６）およびＣＤ３に結合する二重特異性抗体を単独で、または抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて、癌を治療する方法に関する。
がん（ｃａｎｃｅｒ）抗原１２５、がん（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）抗原１２５、炭水化物抗原１２５、又はＣＡ－１２５としても知られるムチン１６（ＭＵＣ１６）は、卵巣がんで高度に発現する単一の膜貫通ドメインの高グリコシル化内在性膜糖タンパク質である。ＭＵＣ１６は、３つの主要ドメイン、すなわち、細胞外Ｎ末端ドメイン、ウニ精子、エンテロキナーゼ、及びアグリン（ＳＥＡ）のドメインが散在する大きなタンデムリピートドメイン、並びに膜貫通領域のセグメントと短い細胞質尾部とを含むカルボキシル末端ドメインから構成されている。タンパク質分解的切断により、ＭＵＣ１６の細胞外部分の多くを血流中に放出させる。ＭＵＣ１６は、卵巣がん、乳がん、膵臓がん、非小細胞肺がん、肝内胆管がん腫瘤形成型、子宮頸部の腺がん、及び胃管の腺がんを含むがん、並びに炎症性腸疾患、肝硬変、心不全、腹膜感染症、及び腹部手術を含む疾患及び状態において過剰発現する。（Ｈａｒｉｄａｓ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，２８：４１８３－４１９９）。がん細胞上での発現は、免疫系から腫瘍細胞を保護することが示されている。（Ｆｅｌｄｅｒ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，１３：１２９）ＭＵＣ１６に対する抗体を使用して卵巣がんを治療するための方法が研究されている。オレゴボマブ（Ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）及びアブゴボマブ（ａｂｇｏｖｏｍａｂ）は、抗ＭＵＣ１６抗体であり、成功は限られていた。（上記のＦｅｌｄｅｒ，Ｄａｓ，Ｓ．ａｎｄ Ｂａｔｒａ，Ｓ．Ｋ．２０１５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７５：４６６０－４６７４。）
ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）に関連してＴ細胞上に発現されるホモ二量体抗原又はヘテロ二量体抗原であり、Ｔ細胞活性化に必要である。機能的ＣＤ３は、エプシロン、ゼータ、デルタ、及びガンマの４つの異なる鎖のうちの２つの二量体会合から形成される。ＣＤ３二量体配置には、ガンマ／エプシロン、デルタ／エプシロン、及びゼータ／ゼータが含まれる。ＣＤ３に対する抗体は、Ｔ細胞上でＣＤ３をクラスター化し、それによってペプチドを搭載したＭＨＣ分子によるＴＣＲの関与と同様の方法でＴ細胞活性化を引き起こすことが示されている。したがって、抗ＣＤ３抗体は、Ｔ細胞の活性化を含む治療目的のために提案されている。更に、ＣＤ３及び標的抗原に結合することができる二重特異性抗体は、標的抗原を発現する組織及び細胞に対するＴ細胞免疫反応を標的とすることを含む治療用途のために提案されている。
腫瘍微小環境におけるプログラム死受容体－１（ＰＤ－１）シグナル伝達は、腫瘍細胞が宿主免疫系による免疫監視から逃れることを可能とする重要な役割を果たす。ＰＤ－１シグナル伝達経路の遮断は、複数の腫瘍タイプを有する患者において臨床活性が実証されており、ＰＤ－１を遮断する抗体治療剤（例えば、ニボルマブ及びペムブロリズマブ）は、例えば、転移性黒色腫及び転移性扁平上皮非小細胞肺がんの治療に承認されている。最近のデータでは、高悪性度のＮＨＬ及びホジキンリンパ腫を有する患者におけるＰＤ－１遮断の臨床活性を実証されている（Ｌｅｓｏｋｈｉｎ，ｅｔ ａｌ．２０１４，Ａｂｓｔｒａｃｔ ２９１，５６ｔｈ ＡＳＨ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．、Ａｎｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７２（４）：３１１－９）。
卵巣がんは、婦人科悪性腫瘍の最も致死的である。米国女性における卵巣がんの新規症例の推定数は、ある特定の他のがんよりもはるかに少ないが、卵巣がんの死亡率対罹患率の比はかなり高い（Ｓｉｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ ６６：７－３０，２０１６）。卵巣がんは進行期に診断されることが多く、これがその致死性に寄与している。卵巣がんに対する現在の標準治療は、手術に続く化学療法、すなわちプラチナ系薬剤及びタキサンの併用である。大半の患者が初期治療に応答する一方で、ほとんどの患者は疾患の再発を経験し、その結果、手術の繰り返し及び化学療法の追加ラウンドのサイクルがもたらされる。再発卵巣がんは更なる治療に応答し得るが、それらのほぼ全てが最終的に、現在利用可能な療法に対して抵抗性になる。ＢＲＣＡ又は他の相同組換え異常（ＨＲＤ）変異を有する患者に対するＰＡＲＰ阻害剤などの療法の最近の進歩にもかかわらず、進行卵巣がんは、依然として満たされていない高いニーズの疾患である。
卵巣がんが何らかの免疫療法に適している可能性があることを示す証拠が示唆されている（Ｋａｎｄａｌａｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２９：９２５－９３３，２０１１）。例えば、腫瘍が上皮内ＣＤ８＋ Ｔリンパ球浸潤に対して陽性であった卵巣がん患者は、上皮内ＣＤ８＋ Ｔリンパ球浸潤のない患者よりも顕著に良好な全生存期間及び無増悪生存期間を有していた（Ｈａｍａｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０４：３３６０－６５，２００７、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４８：２０３－２１３，２００３）。更に、一部の患者は、進行した疾患を有する患者の血液、腫瘍、又は腹水中の腫瘍応答性Ｔ細胞及び抗体の検出によって実証される、腫瘍に対する自然免疫応答を示している（Ｓｃｈｌｉｅｎｇａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，９：１５１７－１５２７，２００３）。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイント経路の遮断剤は、卵巣癌においてある程度の利益を示しており、ＰＤ－１遮断剤単剤療法は、早期臨床試験において約１０～１５％の全奏効率（ＯＲＲ）をもたらした（Ｈａｍａｎｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，上記）。しかしながら、この経路の遮断剤単独では明らかに十分ではない。
満たされていないニーズの高さを考慮すると、卵巣癌を標的化するための追加の療法が必要である。
一態様では、本開示は、癌（例えば、ＭＵＣ１６発現癌）の治療を、それを必要とする対象において行う方法を含み、標的腫瘍細胞上のムチン１６（ＭＵＣ１６）に特異的に結合する第一の抗原結合ドメインと、Ｔ細胞上のヒトＣＤ３に特異的に結合する第二の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも１ｍｇの用量で（例えば、毎週）対象に投与される。
一部の実施形態では、癌（例えば、ＭＵＣ１６発現癌）は、卵巣癌、卵管癌、または原発性腹膜癌である。一部の事例では、癌（例えば、ＭＵＣ１６発現癌）は、プラチナ系化学療法に耐性がある。一部の事例では、対象は、以前にプラチナ系化学療法で治療されていた。
一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる、三つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる、三つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、第一の抗原結合ドメインを含む。一部の事例では、第一の抗原結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む。一部の事例では、第一の抗原結合ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一部の事例では、第一の抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
第一の抗原結合ドメインが先に解説した通りである実施形態を含む一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる、三つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる、三つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、第二の抗原結合ドメインを含む。一部の事例では、第二の抗原結合ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む。一部の事例では、第二の抗原結合ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一部の事例では、第二の抗原結合ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む。場合によっては、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、アイソタイプＩｇＧ１である。場合によっては、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、アイソタイプＩｇＧ４である。
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、同じアイソタイプの野生型ヒンジと比較して、Ｆｃγ受容体結合を減少させるキメラヒンジを含む。
一部の実施形態では、二重特異性抗体の第一の重鎖または第二の重鎖は、両方ではないが、Ｈ４３５Ｒ（ＥＵナンバリング）修飾およびＹ４３６Ｆ（ＥＵナンバリング）修飾を含むＣＨ３ドメインを含む。
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む第一の重鎖を含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む第二の重鎖を含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む第一の重鎖、配列番号３１のアミノ酸配列を含む第二の重鎖、および配列番号３０のアミノ酸配列を含む共通軽鎖を含む。
一部の実施形態では、対象は、血清ＣＡ－１２５レベルの上昇を有する。一部の実施形態では、対象は、正常上限の少なくとも二倍の血清ＣＡ－１２５レベルを有する。一部の実施形態では、対象は、９２Ｕ／ｍｌを超えるＣＡ－１２５レベルを有する。
一部の実施形態では、方法は、第二の治療剤または治療レジメンを投与することをさらに含む。一部の事例では、第二の治療剤または治療レジメンは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を含む。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はセミプリマブである。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる、三つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる、三つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む。一部の事例では、抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む。一部の事例では、抗ＰＤ－１抗体および抗原結合性断片は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一部の事例では、抗ＰＤ－１抗体および抗原結合性断片は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む。一部の事例では、抗ＰＤ－１抗体および抗原結合性断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ－１抗体である。
一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、分割初回用量を含む投与レジメンで投与される。一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、毎週１ｍｇ～１０００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、毎週２ｍｇ～１０００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の実施形態では、初回用量（例えば、１ｍｇまたは２ｍｇ）は、等しいまたは等しくない分量の二つの分画に分割される。例えば、一部の事例では、初回用量は半分に分割される（例えば、１ｍｇの初期用量は、それぞれ０．５ｍｇの二つの分画に分割され、それらは、別々の日に、例えば、連続する日に投与される）。代替的に、初回用量は、別個の日、例えば、連続する日に投与される等しくない分画に分割されてもよい。一部の事例では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、毎週約２５０ｍｇの用量で対象に投与される。一部の事例では、２５０ｍｇの用量は、それぞれ５０ｍｇおよび２００ｍｇを含む二つの分画に分割される。一部の事例では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、毎週約８００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の事例では、８００ｍｇの用量は、それぞれ５０ｍｇおよび７５０ｍｇを含む二つの分画に分割される。一部の事例では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、３週間に一回（例えば、三週間に一回、約２５０ｍｇもしくは約８００ｍｇ、または１０ｍｇ～１０００ｍｇ）の頻度で対象に投与される。一部の事例では、二重特異性抗体または抗原結合性断片は、三週間に一度、約２５０ｍｇの用量で投与される。一部の事例では、２５０ｍｇの用量は、それぞれ５０ｍｇおよび２００ｍｇを含む二つの分画に分割される。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、少なくとも４ｍｇ／Ｌの血清濃度を達成するのに十分な用量で対象に投与される。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、（ｉ）１週目に１ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約０．５ｍｇの第一の分画および約０．５ｍｇの第二の分画に分割される、（ｉｉ）２週目に２０ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約１０ｍｇの第一の分画および約１０ｍｇの第二の分画に分割される、および（ｉｉｉ）３週目に２５０ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約５０ｍｇの第一の分画および約２００ｍｇの第二の分画に分割される、を含む投与レジメンで投与される。一部の事例では、投与レジメンは、４週目以降から週に一回、約２５０ｍｇの用量で二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の事例では、投与レジメンは、４週目以降から三週間に一回、約２５０ｍｇの用量で二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、（ｉ）１週目に１ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、（ｉｉ）２週目に２０ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約１０ｍｇの第一の分画および約１０ｍｇの第二の分画に分割される、および（ｉｉｉ）３週目に８００ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約５０ｍｇの第一の分画および約７５０ｍｇの第二の分画に分割される、を含む投与レジメンで投与される。一部の事例では、投与レジメンは、４週目以降から週に一回、約８００ｍｇの用量で二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の事例では、投与レジメンは、４週目以降から三週間に一回、約８００ｍｇの用量で二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の事例では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内投与を介して対象に投与される。一部の事例では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、皮下投与を介して対象に投与される。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、三週間に一回３００ｍｇ～４００ｍｇの用量で対象に投与される。一部の事例では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、三週間に一回３５０ｍｇの用量で対象に投与される。一部の事例では、抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片は、静脈内投与される。
本方法の一部の実施形態では、対象は、１～８００ｍｇの用量での少なくとも一週間の二重特異性抗体の投与後、病態安定、部分奏効、または完全奏効を有する。本方法の一部の実施形態では、対象は、２０～８００ｍｇの用量での少なくとも一週間の二重特異性抗体の投与後、病態安定、部分奏効、または完全奏効を有する。
本方法の一部の実施形態では、二重特異性抗体は、少なくとも４ｍｇ／Ｌの血清濃度を達成するのに十分な用量で対象に投与される、
本方法の一部の実施形態では、ＭＩＣ１６は、免疫組織化学染色によって決定されるように、対象における腫瘍細胞の≧７５％で高度に発現される。本方法の一部の実施形態では、対象は、ＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア２、またはＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア２＋、またはＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア３、またはＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア３＋、またはＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア４、またはＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア４＋、またはＭＵＣ１６発現腫瘍におけるベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア５、または腫瘍細胞の≧５０％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、または腫瘍細胞の≧５５％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、または腫瘍細胞の≧６０％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、または腫瘍細胞の≧６５％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、または腫瘍細胞の≧７０％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、または腫瘍細胞の≧７５％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、を有する。
本方法の一部の実施形態では、二重特異性抗体は、静脈内投与される。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、皮下投与される。本方法の一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片は、静脈内投与される。
本発明の他の実施形態は、後に続く発明を実施するための形態の検討から明らかになるであろう。
図１は、ＥＬＩＳＡ（本明細書の実施例２に記載される）によって決定される、様々な濃度の抗ＭＵＣ１６クローン３Ａ５およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１のＣＡ１２５への結合を示す。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびそのＭＵＣ１６親抗体は、ＭＵＣ１６の反復領域に結合する抗ＭＵＣ１６クローン３Ａ５と比較して、試験したすべての濃度で著しく低減した結合シグナルを示した。 図２は、ＣＤ３結合対照＋アイソタイプ対照（△）、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５＋アイソタイプ対照（□）、ＣＤ３結合対照＋抗ＰＤ－１（▲）、およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５＋抗ＰＤ－１（■）で治療されたマウスの群（群当たり５匹）の平均腫瘍増殖曲線を示す（本明細書の実施例３に記載される）。抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＤ３ｘＭＵＣ１６二重特異性抗体との組み合わせは、相乗的に腫瘍増殖を阻害した。 図３は、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を用いたＴ細胞のインキュベーションが、ＰＤ－１陽性Ｔ細胞の割合に与える影響を示す。 図４は、様々な患者の最良応答を示す、単剤療法ＲＥＧＮ４０１８用量漸増（２０～８００ｍｇ）のウォーターフォールプロットを示す。 図５は、ＲＥＧＮ４０１８の静脈内投与のための単剤療法投与レジメンの一実施形態を示す。 図６は、セミプリマブと組み合わせたＲＥＧＮ４０１８の静脈内投与のための併用療法投与レジメンの一実施形態を示す。 図７は、ＲＥＧＮ４０１８の皮下初回用量および移行用量での単剤療法投与レジメンの一実施形態を示す。＊最初の３人の患者が、有意なＣＲＳなしで、ＲＥＧＮ４０１８の第二の移行ＩＶ投与およびその後の総ＩＶ投与を忍容する場合、このコホートの残りについて、第二の移行ＩＶ投与を省略してもよい。 図８は、セミプリマブと組み合わせたＲＥＧＮ４０１８の皮下初回用量および移行用量での併用療法投与レジメンの一実施形態を示す。＊最初の３人の患者が、有意なＣＲＳなしで、ＲＥＧＮ４０１８の第二の移行ＩＶ投与およびその後の総ＩＶ投与を忍容する場合、このコホートの残りについて、第二の移行ＩＶ投与を省略してもよい。 図９は、セミプリマブと組み合わせたＲＥＧＮ４０１８の静脈内Ｑ３Ｗ投与での併用療法投与レジメンの一実施形態を示す。
本発明を記載する前に、記載される特定の方法及び実験条件が変化し得るため、本発明は、そのような方法及び条件に限定されないことを理解されたい。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって制限されるものとなることから、本明細書に使用される用語は、特定の実施形態のみを記載する目的で使用されており、制限することを意図しないことも理解されるべきである。実施形態の任意の実施形態又は特徴は、互いに組み合わせることができ、こうした組み合わせは、本発明の範囲内に明示的に包含される。上記又は本明細書で考察される任意の具体的な値は、範囲の上限及び下限を表す値を有する範囲を列挙するように、上記又は本明細書で考察される別の関連する値と組み合わせられてもよく、そのような範囲は、本開示の範囲内に包含される。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の言及される数値に関して使用されると、値が言及される値から１％以下だけ変化し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「約１００」という表現には、９９及び１０１、並びにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）が含まれる。
本明細書に記載したものと類似又は同等な任意の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料をこれから記述する。本明細書で言及される全ての特許、出願、及び非特許刊行物は、参照によりそれらの全体で本明細書に組み込まれる。
がんを治療又は阻害するための方法
本発明は、対象における少なくとも一つの癌の症状もしくは徴候の重症度を治療するか、改善するか、もしくは低減するか、または癌（例えば、再発性卵巣癌）の増殖を阻害するための方法を含む。本発明の態様による方法は、治療有効量のＭＵＣ１６およびＣＤ３に対する二重特異性抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、またはＰＤ－１に特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合性断片の治療有効量と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む。本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」などという用語は、症状を緩和すること、症状の原因を一時的若しくは永続的のいずれかで排除すること、腫瘍の増殖を遅らせるか若しくは阻害すること、腫瘍細胞量若しくは腫瘍量を低減させること、腫瘍退縮を促進すること、腫瘍の縮小、壊死及び／又は消失を引き起こすこと、腫瘍の再発を防ぐこと、及び／又は対象の生存期間を延ばすことを意味する。
本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、がんの１つ以上の症状又は徴候を示すヒト又は非ヒト哺乳動物、及び／又は卵巣がんを含む、がんと診断され、がんの治療を必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態では、「対象」という用語は、用語「患者」と互換的に使用されてもよい。例えば、ヒト対象は、原発性腫瘍又は転移性腫瘍を有し、及び／若しくは、リンパ節の肥大、腹部膨満、胸痛／胸部圧迫感、原因不明の体重減少、発熱、寝汗、持続性疲労、食欲不振、脾臓肥大、及び痒みを含むが、これらに限定されない１つ以上の症状又は徴候を有すると診断され得る。この表現には、原発性又は定着卵巣腫瘍を有する対象が含まれる。具体的な実施形態では、この表現は、卵巣癌または例えば、子宮内膜癌などのＭＵＣ１６を発現する別の腫瘍を有し、かつそれらの治療を必要とするヒト対象を含む。他の特定の実施形態では、この表現は、ＭＵＣ１６＋腫瘍（例えば、フローサイトメトリーまたは免疫組織化学によって決定されるＭＵＣ１６発現を有する腫瘍）を有する対象を含む。特定の実施形態では、発現は、腫瘍細胞の＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、または＞７５％においてＭＵＣ１６の高い発現を示す腫瘍を有するヒト対象を含む。ＭＵＣ１６の発現は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定および評価され得る（例えば、Ｓｈｉｍｉｚｕ ｅｔ ａｌ ２０１２，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１０３：７３９－７４６を参照されたい）。特定の実施形態では、発現は、ＭＵＣ１６発現腫瘍において、ベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコアが２＋（例えば、２、３、４、または５）であるヒト対象を含む。特定の実施形態では、発現は、ＭＵＣ１６発現腫瘍において、ベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコアが２、２＋、３、３＋、４、４＋、または５であるヒト対象を含む。免疫組織化学染色スコアは、この文脈において、細胞の割合、ならびに以下の基準に従う染色の強度およびパターンを組み込む：スコア１（＜５％が強いまたは弱い）、スコア２（５～５０％が強いまたは弱い）、スコア３（５１～７５％が強いまたは５１～１００％が弱い）、スコア４（７６～９９％が強い）、およびスコア５（１００％が強い染色）。ある特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という表現には、以前の療法（例えば、従来の抗がん剤での治療）に抵抗性若しくは難治性であるか、又は以前の治療によっては適切に制御されない卵巣がんを有する患者が含まれる。例えば、この表現は、プラチナ系化学療法剤（例えば、シスプラチン）又はタキソール化合物（例えば、ドセタキセル）などの化学療法で治療された対象を含む。この表現はまた、例えば、毒性副作用のために、従来の抗がん療法が推奨できない卵巣腫瘍を有する対象も含む。例えば、表現は、毒性副作用を伴う、１サイクル以上の化学療法を受けた患者を含む。ある特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という表現には、治療されたが、その後再発したか、又は転移した卵巣がんを有する患者が含まれる。例えば、１つ以上の抗がん剤を用いた治療を受けて腫瘍が退縮した可能性があるが、その後、１つ以上の抗がん剤に抵抗性のがん（例えば、化学療法抵抗性がん）を再発した卵巣がんを有する患者は、本発明の方法で治療される。
「それを必要とする対象」という表現はまた、卵巣がんを発症するリスクがある対象、例えば卵巣がんの家族歴を有する人、卵巣がんに関連する感染症の過去の既往歴を有する人、ＢＲＣＡ１／２遺伝子の変異を有する人、又はＨＩＶ感染若しくは免疫抑制薬に起因して損なわれた免疫系を有する人も含む。
特定の実施形態では、本発明の方法を使用して、一つ以上の癌関連バイオマーカー（例えば、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、ＭＵＣ１６，ＣＡ１２５ヒト精巣上体タンパク質４（ＨＥ４）、および／または癌胎児性抗原（ＣＥＡ））のレベルの上昇を示す患者を治療することができる。例えば、本発明の方法は、治療有効量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて、上昇したレベルのＭＵＣ１６および／またはＣＡ１２５を有する患者に投与することを含む。ＭＵＣ１６および／またはＣＡ１２５発現を決定する方法は、当該技術分野で周知である。特定の実施形態では、腫瘍組織におけるＭＵＣ１６の発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイによって決定される（例えば、Ｂａｓｔ ｅｔ ａｌ １９８１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６８：１３３１－１３３７参照）。ＭＵＣ１６発現は、当技術分野で公知の任意の方法によって評価され得る（例えば、Ｓｈｉｍｉｚｕ ｅｔ ａｌ ２０１２，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１０３：７３９－７４６）。特定の実施形態では、ＭＵＣ１６の発現は、例えば、免疫ポジトロン放出断層撮影またはｉＰＥＴ（本明細書の他の箇所で説明される）などによる、標識抗ＭＵＣ１６抗体を用いた撮像により決定される。
ある特定の実施形態では、本発明の方法は、卵巣がんを有する対象において使用される「腫瘍」、「がん」及び「悪性腫瘍」という用語は、本明細書では互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「卵巣がん」という用語は、卵巣及び卵管の腫瘍を指し、漿液性がん、類内膜がん、明細胞がん、及び粘液がんを含む。
ある特定の実施形態によれば、本発明は、腫瘍を治療するか、又は腫瘍の増殖を遅延させるか、若しくは阻害するための方法を含む。ある特定の実施形態では、本発明は、腫瘍退縮を促進する方法を含む。ある特定の実施形態では、本発明は、腫瘍細胞量を低減するか、又は腫瘍量を低減させる方法を含む。ある特定の実施形態では、本発明は、腫瘍再発を防ぐ方法を含む。本発明のこの態様による方法は、治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含み、各抗体は、例えば、特定の治療投与レジメンの一部として、複数回投与で対象に投与される。例えば、治療投与レジメンは、一回以上の用量の抗ＭＵＣ１６ｘＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を、およそ一日に一回、二日に一回、三日に一回、四日に一回、五日に一回、六日に一回、一週間に一回、二週間に一回、三週間に一回、四週間に一回、一ヶ月に一回、二ヶ月に一回、三ヶ月に一回、四ヶ月に一回、またはそれより少ない頻度で、対象に投与することを含んでもよい。特定の実施形態では、一回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、一回以上の用量の治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて投与され、一回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、約一日に一回、二日に一回、三日に一回、四日に一回、五日に一回、六日に一回、一週間に一回、二週間に一回、三週間に一回、四週間に一回、一ヶ月に一回、二ヶ月に一回、三ヶ月に一回、四ヶ月に一回、またはそれより少ない頻度で対象に投与される。
特定の実施形態では、抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の各用量は、所与の投与期間内に、１分画より多い、例えば、２～５分画で投与される（「分割投与」）。抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、抗体の投与に応答して誘導されるサイトカイン「スパイク」を低減または除去するために、分割用量で投与され得る。サイトカインスパイクは、サイトカイン放出症候群（「サイトカインストーム」）及び注入関連反応の臨床症状を指す。特定の実施形態では、本発明の方法は、一回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を、一回以上の用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含み、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片の用量は、所与の投与期間内に、分割用量として、または１分画より多い、例えば、２分画、３分画、４分画、または５分画で投与される。特定の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片の用量は、２分画以上に分割され、各分画は、他の分画と等しい量の抗体またはその抗原結合性断片を含む。例えば、１０００マイクログラムを含む抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の用量は、週一回投与されてもよく、用量は、当該週内に２分画で投与され、各分画は、５００マイクログラムを含む。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片の用量は、２分画以上に分割されて投与され、その分画は、第一の分画よりも多いか、または少ないなどの等しくない量の抗体を含む。例えば、１０００マイクログラムを含む抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の用量は、週一回投与されてもよく、用量は、週内に２分画に分けて投与され、第一の分画は、７００マイクログラムを含み、第二の分画は、３００マイクログラムを含む。別の例として、１０００マイクログラムを含む抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の用量は、２週間に一回投与されてもよく、用量は、２週間以内に３分画に分けて投与され、第一の分画は、４００マイクログラムを含み、第二の分画は、３００マイクログラムを含み、第三の分画は、３００マイクログラムを含む。
特定の実施形態では、本発明は、ＭＵＣ１６発現癌の治療を必要とする対象においてＭＵＣ１６発現癌（例えば、本明細書で説明した複数回の過去の療法に難治性である癌を含む、卵巣癌、卵管癌、または原発性腹膜癌）を治療する方法を提供し、標的腫瘍細胞上のムチン１６（ＭＵＣ１６）に特異的に結合する第一の抗原結合ドメインと、Ｔ細胞上のヒトＣＤ３に特異的に結合する第二の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗体を対象に投与することを含み、二重特異性抗体は、以下を含む投与レジメンで投与される：（ｉ）１週目に１ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約０．５ｍｇの第一の分画および約０．５ｍｇの第二の分画に分割される、（ｉｉ）２週目に２０ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約１０ｍｇの第一の分画および約１０ｍｇの第二の分画に分割される、（ｉｉｉ）３週目に２５０ｍｇの二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約５０ｍｇの第一の分画、および約２００ｍｇの第二の分画に分割される。一部の事例では、方法は、約２５０ｍｇの用量で、４週目以降から週に一回、二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の事例では、方法は、約２５０ｍｇの用量で、４週目以降から三週間に一回、二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の事例では、方法は、約８００ｍｇの用量で、４週目以降から三週間に一回、二重特異性抗体を投与することをさらに含む。一部の事例では、方法は、抗ＰＤ－１抗体を、三週間に一回、３００～４００ｍｇ（例えば、３５０ｍｇ）の用量で対象に投与することをさらに含む。
ある特定の実施形態では、本発明は、末梢器官への腫瘍転移又は腫瘍浸潤を阻害するか、遅延させるか、又は停止させる方法を含む。本態様による方法は、治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む。
具体的な実施形態では、本発明は、抗腫瘍効果を増加させるか、又は腫瘍阻害を増加させるための方法を提供する。本発明のこの態様による方法は、卵巣癌を有する対象に、治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を投与する前に、治療有効量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含み、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片の約１日前、１日よりも前、２日よりも前、３日よりも前、４日よりも前、５日よりも前、６日よりも前、７日よりも前、または８日よりも前に投与することができる。特定の実施形態では、方法は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の前に二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を投与された対象と比較して、例えば、約２０％、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超または８０％超の腫瘍阻害の増加を提供する。
特定の実施形態では、本発明の方法は、卵巣癌を有する対象に、治療有効量の二重特異性抗ＣＤ３ｘＭＵＣ１６抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて投与することを含む。具体的な実施形態では、卵巣がんは、漿液性がんである。更なる実施形態では、卵巣がんは、緩徐進行性であるか、又は高悪性度である。特定の実施形態では、対象は、以前の療法に応答性でないか、または以前の療法（例えば、プラチナ系の療法）の後再発している。一部の実施形態では、対象は、正常上限（ＵＬＮ）の２倍以上（例えば、約６０Ｕ／ｍｌ以上）であるＣＡ－１２５レベルを有する。様々な実施形態では、対象の血清ＣＡ－１２５レベル（治療前）は、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、または７００Ｕ／ｍｌ以上である。特定の実施形態では、本発明の方法は、追加の治療剤を対象に投与することを更に含む。
特定の実施形態では、本発明の方法は、ＭＵＣ１６＋癌を有する対象に治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。具体的な実施形態では、がんは、卵巣がんである。更なる実施形態では、卵巣がんは、緩徐進行性であるか、又は高悪性度である。一部の実施形態では、がんは、プラチナ抵抗性卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、タキソール抵抗性卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、卵管がんである。一部の実施形態では、癌は、原発性腹膜癌であり、任意選択で、患者は高い血清ＣＡ－１２５のレベルを有する（少なくとも２ｘのＵＬＮ）。ある特定の実施形態では、対象は、以前の療法に応答性でないか、又は以前の療法後再発している（例えば、化学療法）。
特定の実施形態では、本発明の方法は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて、それを必要とする対象に「ファーストライン」治療（例えば、初回治療）として投与することを含む。他の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて、「セカンドライン」治療（例えば、以前の療法後）として投与される。例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて、例えば、化学療法（例えば、プラチナ系化学療法）を用いた以前の療法後に再発した対象に「セカンドライン」治療として投与される。
ある特定の実施形態では、本発明の方法は、ＭＲＤ陽性疾患を有する患者を治療するために使用される。微小残存病変（ＭＲＤ）は、治療中又は治療後の患者に残存する少数のがん細胞を指し、患者は、疾患の症状又は兆候を示す場合も示さない場合もある。このような残存がん細胞は、除去されない場合、疾患の再発につながることが多い。本発明は、ＭＲＤ検査時に患者における残存がん細胞を阻害する、及び／又は除去する方法を含む。ＭＲＤは、当該技術分野において公知の方法（例えば、ＭＲＤフローサイトメトリー）に従ってアッセイすることができる。本発明のこの態様による方法は、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む。
特定の実施形態による本発明の方法は、対象に、治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片、任意選択で、第三の治療剤と組み合わせて投与することを含む。第三の治療剤は、例えば、放射線、化学療法、手術、癌ワクチン、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）、ＬＡＧ３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ．ｂｅｔａ．）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９）、ワクチン（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、細胞毒素、化学療法剤、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬などの抗炎症薬、ならびに抗酸化物質などの栄養補助食品、からなる群から選択される薬剤であってよい。ある特定の実施形態では、抗体は、化学療法剤（例えば、パクリタキセル、カルボプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、シスプラチン、ゲムシタビン、又はドセタキセル）、放射線、及び手術を含む療法と組み合わせて投与されてもよい。本明細書で使用される場合、語句「と組み合わせて」は、抗体が、第３の治療薬の投与と同時、投与直前、又は投与直後に対象に投与されることを意味する。ある特定の実施形態では、第３の治療剤は、抗体との共製剤として投与される。
特定の実施形態では、本発明の方法は、治療有効量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することを含む。組み合わせが投与される場合、抗体（または断片）の投与は、腫瘍増殖の阻害の増加をもたらす。特定の実施形態では、腫瘍増殖は、未治療の対象またはいずれかの抗体（または断片）を単剤療法として投与された対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％または約８０％阻害される。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与は、腫瘍退縮、腫瘍縮小および／または消失の増加を導く。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与は、腫瘍増殖および発達の遅延を導き、例えば、腫瘍増殖は、未治療の対象またはいずれかの抗体（または断片）を単剤療法として治療された対象と比較して、約３日、３日超、約７日、７日超、１５日超、１ヶ月超、３ヶ月超、６ヶ月超、１年超、２年超、または３年超、遅延され得る。特定の実施形態では、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせた抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の投与は、腫瘍再発を防止し、および／または対象の生存期間を増加させる、例えば、未治療の対象またはいずれかの抗体（または断片）を単剤療法として投与された対象より、１５日超、１ヶ月超、３ヶ月超、６ヶ月超、１２ヶ月超、１８ヶ月超、２４ヶ月超、３６ヶ月超、または４８ヶ月超、生存の持続時間を増加させる。ある特定の実施形態では、抗体の組み合わせでの投与は、無増悪生存期間又は全生存期間を増加させる。特定の実施形態では、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせた抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の投与は、対象における応答および応答の持続時間を、例えば、未治療の対象またはいずれかの抗体（または断片）を単剤療法として受けた対象より、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、２０％超、３０％超、４０％超または５０％超増加させる。特定の実施形態では、卵巣癌を有する対象への抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与は、腫瘍細胞の全ての痕跡の完全消失（「完全奏効」）を導く。特定の実施形態では、卵巣癌を有する対象への抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与は、腫瘍細胞または腫瘍サイズの少なくとも３０％以上の減少（「部分奏効」）を導く。特定の実施形態では、卵巣癌を有する対象への抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与は、新たな測定可能な病変を含む腫瘍細胞／病変の完全または部分消失を導く。腫瘍低減は、当技術分野で公知の方法、例えば、Ｘ線、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、細胞学、組織学、又は分子遺伝子解析のうちのいずれかによって測定することができる。特定の実施形態では、卵巣癌を有する対象への抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与は、単独で投与された場合の二つの薬剤の併用効果を上回る相乗的抗腫瘍効果をもたらす。
特定の実施形態では、投与された抗体（または断片）の組み合わせは、患者にとって安全であり、忍容性が高く、単剤療法として二重特異性抗体（または断片）を投与された患者と比較して、有害な副作用の増加（例えば、サイトカイン放出の増加（「サイトカインストーム」）またはＴ細胞活性化の増加）はない。
特定の事例では、療法に対する対象の応答は、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、病態進行（ＰＤ）、または病態安定（ＳＤ）として分類される。ＣＲは、すべての標的病変の消失、および任意の病理学的リンパ節（標的であっても非標的であっても）の短軸の＜１０ｍｍ（＜１ｃｍ）への減少として定義される。ＰＲは、ベースラインの直径の合計を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％の減少として定義される。ＰＤは、試験上の最小の合計（ベースラインの合計が試験上の最小である場合、それを含む）を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも２０％の増加として定義される。２０％の相対的増加に加えて、合計はまた、少なくとも５ｍｍ（０．５ｃｍ）の絶対的増加も示さなければならない。（注：一つ以上の新しい病変の出現も進行とみなされる）。ＳＤは、試験上の最小の直径合計を基準として、ＰＲに適格となるのに十分な収縮およびＰＤに適格となるのに十分な増加もないものと定義される。
抗ＰＤ－１抗体およびその抗原結合性断片
本発明の特定の例示的な実施形態によると、方法は、治療有効量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語には、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合によって相互接続した２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、並びにその多量体（例えば、ＩｇＭ）が包含される。典型的な抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと省略される）と重鎖定常領域とを含む。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと省略される）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的保存された領域が間に配された、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域へと更に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の異なる実施形態では、抗ＩＬ－４Ｒ抗体（又はその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、又は自然に若しくは人為的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などという用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、又は遺伝子操作されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、抗体可変領域及び任意選択的に定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現を伴う、タンパク質消化又は組換え遺伝子工学技術などの、あらゆる好適な標準的方法を使用する、完全抗体分子に由来してもよい。そのようなＤＮＡは既知であり、かつ／又は例えば、市販の供給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、若しくは合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的に又は分子生物学技法を使用することによって操作して、例えば、１つ以上の可変ドメイン及び／若しくは定常ドメインを好適な構成に配置するか、又はコドンを導入する、システイン残基を作成する、アミノ酸を改変、付加、若しくは欠失させるなどが可能である。
抗体結合断片の非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント、及び（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、又は拘束ＦＲ３‐ＣＤＲ３‐ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子もまた、本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という表現に包含される。
抗体の抗原結合断片は、典型的に、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意の大きさ又はアミノ酸組成であってもよく、一般的には、１つ以上のフレームワーク配列に隣接するか、又はインフレームである、少なくとも１つのＣＤＲを含むものとなる。ＶＬドメインと結合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で互いに対して位置し得る。例えば、可変領域は、二量体であり、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＬ二量体を含み得る。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶＨ又はＶＬドメインを含有してもよい。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本発明の抗体の抗原結合断片内で見出され得る可変ドメイン及び定常ドメインの非限定的な例示的な構成には、（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３、及び（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬが含まれる。上で列挙されたいずれかの例示的な構成を含む、可変ドメイン及び定常ドメインのいずれかの構成において、可変ドメイン及び定常ドメインは、互いに直接的に連結されていてもよいし、完全若しくは部分的なヒンジ又はリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子における隣接する可変ドメイン及び／又は定常ドメイン間の可動性又は半可動性連結をもたらす、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個又はそれ以上）のアミノ酸から構成されてもよい。更に、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いに非共有結合性会合で及び／又は１つ以上の単量体ＶＨ若しくはＶＬドメインとの非共有結合性会合（例えば、ジスルフィド結合による）で、上に列挙される可変ドメイン構成及び定常ドメイン構成のうちのいずれかのホモ二量体又はヘテロ二量体（又は他の多量体）を含み得る。
本明細書で使用される場合の「抗体」という用語はまた、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体を含む。
多重特異性抗体又は抗体の抗原結合断片は、典型的に、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別個の抗原、又は同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することが可能である。任意の多重特異性抗体形式は、当該技術分野で利用可能な常套的技法を使用して、本発明の抗体又は抗体の抗原結合断片に関連した使用のために適合され得る。例えば、本発明は、免疫グロブリンの一方のアームが、ＰＤ－１またはその断片に特異的であり、免疫グロブリンの他方のアームが、第二の治療標的に特異的であるか、または治療部分にコンジュゲートされている、二重特異性抗体の使用を含む方法を含む。本発明に関して使用することのできる例示的な二重特異性形式としては、非限定的に、例えば、ｓｃＦｖベース又はダイアボディ二重特異性形式、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、及びＭａｂ２．ｓｕｐ．２二重特異性形式（例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ ４：６，１～１１、及びそこで引用される参考文献を、前述の形式の考察のために参照）が挙げられる。二重特異性抗体はまた、ペプチド／核酸コンジュゲーションを用いて構築することもでき、例えば、直交型化学反応性を有する非天然アミノ酸を用いて、部位特異的抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成し、次いでこれを規定の組成、結合価及び幾何学的配置を有する多量体性複合体へと自己組織化させる。（例えば、Ｋａｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：Ｄｅｃ．４，２０１２］を参照されたい）。
本発明の方法で使用される抗体は、ヒト抗体であってもよい。本明細書で使用される場合の「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図している。それでもなお、本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異誘導によって、又はインビボでの体細胞変異によって導入される変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される場合の「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植されている、抗体を含むことを意図していない。
本発明の方法において使用される抗体は、組換えヒト抗体であってもよい「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって、調製されるか、発現するか、作成されるか、又は単離される全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現した抗体（以下で詳述する）、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体（以下で詳述する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子導入されている動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７－６２９５を参照されたい）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列から他のＤＮＡ配列へスプライシングすることに関与する任意の他の手段によって調製されたか、発現したか、作成されたか、若しくは単離された抗体などを含むように意図される。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロでの変異誘発（または、ヒトＩｇ配列導入動物を使用する場合、インビボでの体細胞変異誘発）に供されるため、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、関連する配列である一方で、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー中には自然に存在し得ない。
特定の実施形態によれば、本発明の方法で使用される抗体は、ＰＤ－１に特異的に結合する。「特異的に結合する」などという用語は、抗体又はその抗原結合断片が、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを判定するための方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴法などが挙げられる。例えば、本発明の文脈において使用される場合、ＰＤ－１に「特異的に結合する」抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイで測定される、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満または約０．５ｎＭ未満のＫＤでＰＤ－１またはその部分に結合する抗体を含む。しかしながら、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種由来のＰＤ－１分子などの他の抗原に対する交差反応性を有し得る。
本発明の特定の例示的な実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、米国特許第９，９８７，５００号に記載される抗ＰＤ－１抗体のアミノ酸配列のいずれかを含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。特定の例示的な実施形態では、本発明の方法に関連して使用され得る抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。特定の実施形態によれば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、三つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに三つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３３を含むＨＣＶＲおよび配列番号３４を含むＬＣＶＲを含む。特定の実施形態では、本発明の方法は、抗ＰＤ－１抗体の使用を含み、この抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲおよび配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む例示的な抗体は、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ、ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標）としても知られる）として知られる完全ヒト抗ＰＤ－１抗体である。特定の例示的な実施形態によれば、本発明の方法は、ＲＥＧＮ２８１０、またはその生物学的均等物の使用を含む。本明細書で使用される場合、「生物学的均等物」という用語は、類似の実験条件下で同じモル用量で、単回投与または複数回投与のいずれかで投与されたとき、吸収の速度および／または程度が、ＲＥＧＮ２８１０のものと有意な差を示さない医薬均等物または医薬代替物である抗ＰＤ－１抗体もしくはＰＤ－１結合タンパク質またはその断片を指す。本発明の文脈において、用語は、安全性、純度および／または効力において、ＲＥＲＥＧＮ２８１０と臨床的に意義のある差異を有しない、ＰＤ－１に結合する抗原結合タンパク質を指す。
本発明の方法の文脈において使用され得る他の抗ＰＤ－１抗体は、例えば、ニボルマブ（米国特許第８，００８，４４９号）、ペムブロリズマブ（米国特許第８，３５４，５０９号）、ＭＥＤＩ０６０８（米国特許第８，６０９，０８９号）、ピディリズマブ（米国特許第８，６８６，１１９号）、または米国特許第６，８０８，７１０号、７，４８８，８０２号、８，１６８，７５７号、８，３５４，５０９号、８，７７９，１０５号、もしくは８，９００，５８７号に記載される抗ＰＤ－１抗体のいずれかとして当該技術分野で言及され、知られている抗体を含む。
本発明の方法に関連して使用される抗ＰＤ－１抗体は、ｐＨ依存性結合特性を有し得る。例えば、本発明の方法において使用するための抗ＰＤ－１抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＤ－１への結合の低減を示し得る。あるいは、本発明の抗ＰＤ－１抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでその抗原への結合の増強を示し得る。「酸性ｐＨ」という表現には、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５．９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０以下のｐＨ値が含まれる。本明細書で使用される場合、「中性ｐＨ」という表現は、約７．０～約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現には、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値が含まれる。
特定の例では、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＤ－１への結合の低減」は、酸性ｐＨでＰＤ－１に結合する抗体のＫＤ値の中性ｐＨでＰＤ－１に結合する抗体のＫＤ値との比（または、その逆）で表される。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片が約３．０以上の酸性／中性ＫＤ比を呈する場合、本発明の目的のために、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＤ－１への結合の低減」を呈するとみなされ得る。特定の例示的な実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合断片に対する酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０、又はそれ以上とすることができる。
ｐＨ依存的結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比べて酸性のｐＨにおいて、特定の抗原との結合低減（又は結合増大）に対して抗体の集団をスクリーニングすることによって得ることができる。
加えて、アミノ酸濃度における抗原結合ドメインの改変は、ｐＨ依存的特性を有する抗体を産生し得る。例えば、抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤＲ内）の１つ以上のアミノ酸をヒスチジン残基によって置換することによって、中性ｐＨと比べ酸性ｐＨにおいて低減した抗原結合を有する抗体を得ることができる。本明細書にて使用される場合、「酸性ｐＨ」という表現は、６．０以下のｐＨを意味する。
二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体およびその抗原結合性断片
本発明の特定の例示的な実施形態によると、方法は、ＣＤ３およびＭＵＣ１６に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。そのような抗体および断片は、本明細書では、例えば、「抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３」、または「抗ＭＵＣ１６×ＣＤ３」、または「ＭＵＣ１６×ＣＤ３」二重特異性抗体もしくはその抗原結合性断片、または他の類似の用語で呼んでもよい。
本明細書で使用される場合、表現「二重特異性抗体」は、少なくとも第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインを含む免疫グロブリンタンパク質を指す。本発明の文脈において、第１の抗原結合ドメインは、第１の抗原（例えば、ＭＵＣ１６）に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメインは、第２の別個の抗原（例えば、ＣＤ３）に特異的に結合する。二重特異性抗体の各抗原結合ドメインは、各々３つのＣＤＲを含む、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を含む。二重特異性抗体の文脈では、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは、接頭辞「Ａ」で指定され得、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは、接頭辞「Ｂ」で指定され得る。したがって、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書ではＡ－ＨＣＤＲ１、Ａ－ＨＣＤＲ２、及びＡ－ＨＣＤＲ３と称され得、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書ではＢ－ＨＣＤＲ１、Ｂ－ＨＣＤＲ２、及びＢ－ＨＣＤＲ３と称され得る。
第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、各々別個の多量体形成ドメイン（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｚｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）に接続されている。本明細書で使用される場合、「多量体形成ドメイン」は、同じか又は類似の構造又は構成の第２の多量体形成ドメインと会合する能力を有する、任意の巨大分子、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、又はアミノ酸である。本発明の文脈において、多量体形成構成要素は、（ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む）免疫グロブリンのＦｃ部分、例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、並びに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメインである。
本発明の二重特異性抗原結合分子は、典型的には、２つの多量体形成ドメイン、例えば、各々が個々に別個の抗体重鎖の部分である２つのＦｃドメインを含む。第１及び第２の多量体形成ドメインは、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４などの同じＩｇＧアイソタイプのものであってもよい。あるいは、第１及び第２の多量体形成ドメインは、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４などの異なるＩｇＧアイソタイプのものであってもよい。
本発明の二重特異性抗原結合分子を作製するために、任意の二重特異性抗体形式又は技術を使用してもよい。例えば、第１の抗原結合特異性を有する抗体又はその断片は、第２の結合特異性を有する別の抗体又は抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に（例えば、化学的結合、遺伝子融合、又は非共有結合的会合、又はその他の方法で）機能的に連結して、二重特異性抗原結合分子を生成することができる。本発明に関連して使用され得る具体的に例示的な二重特異性形式としては、非限定的に、例えば、ｓｃＦｖベースまたはダイアボディ二重特異性形式、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変領域（ＤＶＤ）－Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性形式（例えば、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ ４：６，１－１１、および前述の形式の考察のためにそこで引用される参考文献を参照）が挙げられる。
本発明の二重特異性抗原結合分子に関連して、Ｆｃドメインは、野生型であるＦｃドメインの天然に存在するバージョンと比較して、１つ以上のアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失又は置換）を含み得る。例えば本発明は、ＦｃとＦｃＲｎとの間の改変された結合相互作用（例えば、強化又は減少）を有する改変されたＦｃドメインをもたらす、Ｆｃドメイン中に１つ以上の改変を含む二重特異性抗原結合分子を含む。一実施形態では、二重特異性抗原結合分子は、ＣＨ２領域又はＣＨ３領域に改変を含み、この改変は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲のエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。こうしたＦｃ改変の非限定的な例は、その全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１５／０２６６９６６号に開示されている。
本発明はまた、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＩｇ ＣＨ３ドメインを含む二重特異性抗原結合分子を含み、第１及び第２のＩｇ ＣＨ３ドメインが、少なくとも１つのアミノ酸で互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差異が、アミノ酸の差異を欠く二重特異性抗体と比較して、プロテインＡへの二重特異性抗体の結合を低減させる。一実施形態では、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、例えばＨ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエクソン付番則による；ＥＵ付番則によればＨ４３５Ｒ）など、プロテインＡ結合を低減又は消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は更に、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる、ＥＵによればＹ４３６Ｆ）を含んでいてもよい。例えば、米国特許第８，５８６，７１３号を参照されたい。第２のＣＨ３に見られ得る更なる改変としては、以下が挙げられる：ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ、ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ）、並びにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ）。
ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプに由来するＦｃ配列を組み合わせたキメラであってもよい。例えば、キメラＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、又はヒトＩｇＧ４ ＣＨ２領域に由来するＣＨ２配列の一部又は全て、及びヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、又はヒトＩｇＧ４に由来するＣＨ３配列の一部又は全てを含み得る。キメラＦｃドメインはまた、キメラヒンジ領域を含有し得る。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、又はヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わせられたヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、又はヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含み得る。本明細書に記載の抗原結合分子のうちのいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの特定の例は、Ｎ－末端からＣ末端に向かって、［ＩｇＧ４ ＣＨ１］－［ＩｇＧ４上部ヒンジ］－［ＩｇＧ２下部ヒンジ］－［ＩｇＧ４ ＣＨ２］－［ＩｇＧ４ ＣＨ３］を含む。本明細書に記載の抗原結合分子のうちのいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの別の例は、Ｎ－末端からＣ末端に向かって、［ＩｇＧ１ ＣＨ１］－［ＩｇＧ１上部ヒンジ］－［ＩｇＧ２下部ヒンジ］－［ＩｇＧ４ ＣＨ２］－［ＩｇＧ１ ＣＨ３］を含む。本発明の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインのこれら及び他の例は、米国特許公開第２０１４／０２４３５０４号に記載されており、その全体が本明細書に組み込まれる。これらの一般的な構造的配置を有するキメラＦｃドメイン及びその変異体は、変化したＦｃ受容体結合を有し得、その結果Ｆｃエフェクター機能に影響を与える。
本発明のある特定の例示的な実施形態によれば、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片は、米国特許公開第２０１８／０１１２００１号に記載される二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列のうちのいずれかを含む重鎖可変領域（Ａ－ＨＣＶＲ及びＢ－ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（Ａ－ＬＣＶＲ及びＢ－ＬＣＶＲ）、及び／又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。特定の例示的な実施形態では、本発明の方法に関連して使用され得る二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片としては、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ａ－ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（Ａ－ＨＣＤＲ１、Ａ－ＨＣＤＲ２、およびＡ－ＨＣＤＲ３）ならびに配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ａ－ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（Ａ－ＬＣＤＲ１、Ａ－ＬＣＤＲ２、およびＡ－ＬＣＤＲ３）を含む第一の抗原結合アームと、（ｂ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、または配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ（Ｂ－ＨＣＤＲ１、Ｂ－ＨＣＤＲ２、およびＢ－ＨＣＤＲ３）ならびに配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ（Ｂ－ＬＣＶＲ）の軽鎖ＣＤＲ（Ｂ－ＬＣＤＲ１、Ｂ－ＬＣＤＲ２、およびＢ－ＬＣＤＲ３）を含む第二の抗原結合アームと、が挙げられる。特定の実施形態によれば、Ａ－ＨＣＤＲ１が、配列番号８のアミノ酸配列を含み；Ａ－ＨＣＤＲ２が、配列番号９のアミノ酸配列を含み；Ａ－ＨＣＤＲ３が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み；Ａ－ＬＣＤＲ１が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み；Ａ－ＬＣＤＲ２が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み；Ａ－ＬＣＤＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み；Ｂ－ＨＣＤＲ１が、配列番号１４、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、または配列番号２６のアミノ酸配列を含み；Ｂ－ＨＣＤＲ２が、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４、または配列番号２７のアミノ酸配列を含み；およびＢ－ＨＣＤＲ３が、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２５、または配列番号２８のアミノ酸配列を含み；およびＢ－ＬＣＤＲ１が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み；Ｂ－ＬＣＤＲ２が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み；Ｂ－ＬＣＤＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１を含むＨＣＶＲ（Ａ－ＨＣＶＲ）および配列番号２を含むＬＣＶＲを含む第一の抗原結合アームと、（ｂ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、または配列番号７を含むＨＣＤＲ（Ｂ－ＨＣＤＲ）ならびに配列番号２を含むＬＣＶＲ（Ｂ－ＬＣＶＲ）を含む第二の抗原結合アームと、を含む。特定の例示的な実施形態では、二重特異性抗ＣＤ３ｘＭＵＣ１６抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＭＵＣ１６結合アームと、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＣＤ３結合アームと、を含む。特定の例示的な実施形態では、二重特異性抗ＣＤ３×ＭＵＣ１６抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＭＵＣ１６結合アームと、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＣＤ３結合アームを含む。
特定の実施形態では、本発明の二重特異性抗ＣＤ３ｘＭＵＣ１６抗体またはその抗原結合性断片の抗腫瘍活性は、高レベル（例えば、最大１０，０００Ｕ／ｍｌ）の循環ＣＡ１２５の存在によって実質的に阻害されない。ＣＡ１２５の血清レベルは、大部分の卵巣癌患者の血清中で増加する（公表されたレベルの中央値は約６５６Ｕ／ｍｌである）。以下の実施例２に示されるように、血清または腹水中の高レベルのＣＡ１２５は、本発明の二重特異性抗体の抗腫瘍プロファイルに著しく干渉しない。
本発明の方法に関連して使用され得る他の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体としては、例えば、米国特許出願公開第２０１８０１１２００１号に記載される抗体のうちのいずれかが挙げられる。
併用療法
特定の実施形態による、本発明の方法は、抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて対象に投与することを含む。特定の実施形態では、本発明の方法は、癌、好ましくは卵巣癌を治療するための相加的または相乗的活動のため抗体（または断片）を投与することを含む。本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」という表現は、抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３二重特異性抗体またはその抗原結合性断片が、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の前、後、または同時に投与されることを意味する。用語「と組み合わせて」はまた、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の逐次または同時投与を含む。例えば、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の「前に」投与される場合、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与の１５０時間超前、約１５０時間前、約１００時間前、約７２時間前、約６０時間前、約４８時間前、約３６時間前、約２４時間前、約１２時間前、約１０時間前、約８時間前、約６時間前、約４時間前、約２時間前、約１時間前、約３０分前、約１５分前または約１０分前に投与されてもよい。例えば、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の「後に」投与される場合、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与の約１０分後、約１５分後、約３０分後、約１時間後、約２時間後、約４時間後、約６時間後、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約２４時間後、約３６時間後、約４８時間後、約６０時間後、約７２時間後、または約７２時間超後に投与されてもよい。二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片との「同時」投与は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片が、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の投与の５分未満以内に（投与前、投与後、または投与と同時に）別個の剤形で対象に投与されるか、または抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の両方を含む単一の複合投与製剤として対象に投与されることを意味する。
ある特定の実施形態では、本発明の方法は、第３の治療剤の投与を含み、第３の治療剤は、抗がん剤である。特定の実施形態では、本発明の方法は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を、長期持続可能な抗腫瘍応答を生じさせ、および／または癌を有する患者の生存を強化するための放射線療法と組み合わせて投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明の方法は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を癌患者に投与する前、同時または後に放射線療法を投与することを含む。例えば、放射線療法は、一回以上の用量の抗体（または断片）の投与後に、腫瘍病変に一回以上の線量で投与されてもよい。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片および／または二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片の全身投与後に、放射線療法を腫瘍病変に局所投与して、患者の腫瘍の局所免疫原性を強化（アジュバント作用性放射線照射（ａｄｊｕｖｉｎａｔｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））、および／または腫瘍細胞を死滅させ（切除性放射線照射（ａｂｌａｔｉｖｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））てもよい。
医薬組成物および投与
本発明は、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、対象に投与することを含む方法を含み、抗体または抗体（または断片）は、別個のまたは組み合わされた（単一）医薬組成物内に含有される。本発明の医薬組成物は、好適な輸送、送達、耐性などを提供する好適な担体、賦形剤、その他の薬剤とともに、製剤化してもよい。数多くの適切な製剤が、全ての薬剤師に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａにおいて見出され得る。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、小胞を含有する脂質（カチオン性又はアニオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油及び油中水乳剤、乳剤カルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、並びにカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８－３１１も参照されたい。
様々な送達システムが公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用され得る。例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体依存性エンドサイトーシスなど（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）。
投与方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、任意の便宜的な経路によって、例えば、注入若しくはボーラス注射によって、上皮若しくは粘膜皮膚内層（ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通した吸収によって投与され得、かつ他の生物学的活性剤と一緒に投与され得る。
本発明の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジを用いて、皮下又は静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の医薬組成物の送達において、容易に適用される。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能であるか、又は使い捨てであり得る。再利用可能なペン型送達デバイスは、概して、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内部の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは、容易に廃棄することができ、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換され得る。次に、ペン型送達デバイスは再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、医薬組成物がデバイス内部のリザーバ内に保持された事前に充填された状態で販売される。いったんリザーバの医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
多数の再利用可能なペン型および自動注入装置送達デバイスは、本発明の医薬組成物の皮下送達において用途を見出す。例としては、ほんの数例を挙げると、限定されないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及びＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有する使い捨てペン送達デバイスの例としては、限定されないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ （商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ ＩＬ）が挙げられる。
ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出系で送達され得る。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、多量体性材料を使用することができる。Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａを参照されたい。更に別の実施形態では、放出制御系を組成物の標的の近傍に配置することができ、したがって全身投与量のほんの一部のみが必要となる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８を参照されたい）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３によるレビューにおいて検討されている。
注入可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、及び筋肉内注射、点滴などのための剤形を含み得る。これらの注射可能な調製物は、公知の方法によって調製されてもよい。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射に従来使用される無菌水性媒体又は油性媒体に、上述される抗体又はその塩を溶解、懸濁、又は乳化させることによって調製され得る。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースを含有する等張液、及び他の助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが採用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と併用され得る。このようにして調製した注射液は、好ましくは、適切なアンプル中に充填される。
有利に、上述の経口又は非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量で剤形に調製される。単位用量におけるこのような剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などが含まれる。
投与レジメン
本発明は、治療応答が達成される限り、対象に二重特異性抗ＭＵＣ１６ｘＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片および／または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片を、週に約四回、週に二回、週に一回、二週間に一回、三週間に一回、四週間に一回、五週間に一回、六週間に一回、八週間に一回、十二週間に一回、またはそれより少ない頻度の投与頻度で投与することを含む方法を含む。
本発明の特定の実施形態によると、複数用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、定義された時間経過にわたって対象に投与してもよい。本発明のこの態様による方法は、一回以上の用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または一回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、逐次的に対象に投与することを含む。本明細書に使用される場合、「逐次的に投与すること」とは、抗体またはその抗原結合性断片の各用量が、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日、数週、または数ヶ月）で区切られた異なる日に、異なる時点で、対象に投与されることを意味する。本発明は、抗体またはその抗原結合性断片の単回初回用量を、次に抗体またはその抗原結合性断片の一回以上の二次用量を、そして任意選択で、その後に抗体またはその抗原結合性断片の一回以上の三次用量を、患者に逐次的に投与することを含む方法を含む。
初回用量」、「二次用量」及び「三次用量」という用語は、投与の時間的順序を指す。したがって、「初回用量」は、治療レジメンの開始時に投与される用量であり（また「ベースライン用量」とも称される）、「二次用量」は初回用量の後に投与される用量であり、「三次用量」は二次用量の後に投与される用量である。初回用量、二次用量、および三次用量はすべて、同じ量の抗体またはその抗原結合性断片（抗ＰＤ－１抗体または二重特異性抗体）を含んでもよい。しかしながら、ある特定の実施形態では、初回用量、二次用量及び／又は三次用量に含有される量は、治療過程の間に（例えば適宜調整されて加減され）、互いに異なっている。ある特定の実施形態では、１回以上（例えば、１、２、３、４、又は５回）の用量が、治療レジメンの開始時に「負荷用量」として投与され、その後に、より低い頻度ベースで投与される後続の用量（例えば、「維持用量」）が続く。例えば、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、卵巣癌を有する患者に、約１～３ｍｇ／ｋｇの負荷用量で、続いて、患者の体重の約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇである一回以上の維持用量で投与されてもよい。
本発明の例示的な一実施形態では、各二次用量及び／又は三次用量は、直前の用量の１／２～１４週間後（例えば、１／２週間後、１週間後、１週間半後、２週間後、２週間半後、３週間後、３週間半後、４週間後、４週間半後、５週間後、５週間半後、６週間後、６週間半後、７週間後、７週間半後、８週間後、８週間半後、９週間後、９週間半後、１０週間後、１０週間半後、１１週間後、１１週間半後、１２週間後、１２週間半後、１３週間後、１３週間半後、１４週間後、１４週間半後、又はそれ以上後）に投与される。
本明細書で使用される場合、「直前の用量」という句は、一連の複数回投与において、介入する用量を挟まない一連のすぐ次の用量の投与前に患者に投与される、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片（および／または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片）の用量を意味する。
本発明のこの態様による方法は、患者に任意の数の二次用量および／または三次用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片（および／または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片）を投与することを含み得る。例えば、ある特定の実施形態では、患者に単回の二次用量のみが投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の二次用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態では、患者に単回の三次用量のみが投与される。他の実施形態では、２回以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれ以上）の三次用量を患者に投与する。
複数の二次用量を含む実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各二次用量は、直前の投与の１～２週間後に患者に投与されてもよい。同様に、複数回の三次用量を含む実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各三次用量は、直前の投与の２～４週間後に患者に投与されてもよい。あるいは、二次用量及び／又は三次用量が患者に投与される頻度は、治療レジメンの過程で変化する可能性がある。投与の頻度はまた、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師によって治療過程の間に調整され得る。
特定の実施形態では、一回以上の用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片（例えば、および抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片）は、治療レジメンの開始時に、「導入用量」として、より多い頻度（週に二回、週に一回または２週間に一回）で投与され、続いて、より少ない頻度（例えば、４～１２週間に一回）で投与される後続用量（「統合用量」または「維持用量」）で投与される。
本発明は、卵巣癌（例えば、漿液性癌）を治療するために、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片を単独で、または抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて、患者に逐次投与することを含む方法を含む。一部の実施形態では、本方法は、一回以上の用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を投与し、任意選択で、その後一回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。特定の実施形態では、本方法は、単回用量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を投与し、その後、一回以上の用量の二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を投与することを含む。例えば、卵巣癌を有する対象において腫瘍増殖を阻害する、および／または腫瘍再発を防ぐために、一回以上の用量の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を投与し、その後、一回以上の用量の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を投与することができる。一部の実施形態では、一回以上の用量の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を投与し、続いて、一回以上の用量の二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を投与することにより、抗腫瘍効果の増加（例えば、未治療の対象または抗体もしくはその抗原結合性断片のいずれかを単剤療法として投与された対象と比較して、腫瘍増殖のより大きな阻害、腫瘍再発の防止の向上）がもたらされる。本発明の代替的実施形態は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片と比べて、別個の投与で類似または異なる頻度で投与される抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片と二重特異性抗体またはその抗原結合性断片との同時投与に関するものである。一部の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の前、後、または同時に投与される。特定の実施形態では、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、単回投与製剤として抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片と共に投与される。
投薬量
本発明の方法に従って対象に投与される二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片、および任意選択で抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合性断片の量は、概して治療有効量である。本明細書で使用される場合、語句「治療有効量」は、未治療の対象またはいずれかの抗体（または断片）を単剤療法として投与された対象と比較して、（ａ）癌（例えば、卵巣癌）の重症度もしくは癌の症状の持続時間の低減；（ｂ）腫瘍増殖の阻害、もしくは腫瘍壊死の増加、腫瘍縮小および／もしくは腫瘍消失；（ｃ）腫瘍増殖および発達の遅延；（ｄ）腫瘍転移の阻害もしくは遅延もしくは停止；（ｅ）腫瘍増殖の再発の防止；（ｆ）癌（例えば、卵巣癌）を有する対象の生存の増加；ならびに／または（ｇ）従来の抗癌療法の使用もしくは必要の低減（例えば、化学療法剤もしくは細胞毒性剤の使用の低減もしくは排除）のうちの一つ以上をもたらす、抗体もしくはその抗原結合性断片（抗ＰＤ－１抗体もしくは二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体）の量を意味する。
二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片の場合、治療有効量は、約０．１ミリグラム（ｍｇ）～約１０００ｍｇ、例えば、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、または約１０００ｍｇなどの二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片であり得る。一部の事例では、用量は、約１ｍｇである。一部の事例では、用量は、約２ｍｇである。一部の事例では、用量は、約２０ｍｇである。一部の事例では、用量は、約２５ｍｇである。一部の事例では、用量は、約２５０ｍｇである。一部の事例では、用量は、約８００ｍｇである。これらの用量のいずれかは、初回用量、中間用量もしくは移行用量、または全用量であり得る。
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の場合、治療有効量は、約０．０５ｍｇ～約６００ｍｇ、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、または約６００ｍｇなどの抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片であり得る。特定の実施形態では、３５０ｍｇの抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片が投与される。
個々の用量内に含有される二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片、および任意選択で抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片の量は、対象の体重１キログラム当たりの抗体またはその抗原結合性断片のミリグラム（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）の観点で表され得る。特定の実施形態では、本発明の方法において使用される二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片、および任意選択で抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、対象の体重の約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与され得る。例えば、二重特異性抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの患者の体重の用量で投与されてもよく、任意選択の抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの患者の体重の用量で投与されてもよい。
本明細書で参照される配列及び対応する配列番号の概要が、以下の表１に示される。
Figure 2025502061000002
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物をどのように作製し使用するかという完全な開示及び説明を当業者に提供するように記載され、発明者がその発明とみなすものの範囲を限定することを意図していない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力がなされているが、いくらかの実験誤差及び偏差を考慮に入れるべきである。別段の指示がない限り、部は重量部、分子量は平均分子量、温度は摂氏、圧力は大気圧又は大気圧付近である。
実施例１：卵巣細胞特異的（ＭＵＣ１６）およびＣＤ３に結合する二重特異性抗体の生成
本発明はまた、ＣＤ３及びＭＵＣ１６に結合する二重特異性抗原結合分子も提供し、そのような二重特異性抗原結合分子はまた、本明細書では「抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３又は抗ＭＵＣ１６×ＣＤ３二重特異性分子」とも称される。
抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３二重特異性分子部分の抗ＭＵＣ１６部分は、ＭＵＣ１６（ＣＡ－１２５としても知られる）を発現する腫瘍細胞を標的化するのに有用であり、二重特異性分子の抗ＣＤ３部分は、Ｔ細胞を活性化するのに有用である。腫瘍細胞上のＭＵＣ１６とＴ細胞上のＣＤ３との同時結合は、活性化されたＴ細胞による標的腫瘍細胞の直接的な殺傷（細胞溶解）を促進する。
抗ＭＵＣ１６特異的結合ドメイン及び抗ＣＤ３特異的結合ドメインを含む二重特異性抗体は、標準的な方法論を使用して構築され、抗ＭＵＣ１６抗原結合ドメイン及び抗ＣＤ３抗原結合ドメインはそれぞれ、共通のＬＣＶＲと対の異なる別個のＨＣＶＲを含む。例示された二重特異性抗体では、分子は、抗ＣＤ３抗体由来の重鎖、抗ＭＵＣ１６抗体由来の重鎖、及び抗ＭＵＣ１６抗体由来の共通軽鎖を利用して構築された。他の例では、二重特異性抗体は、抗ＣＤ３抗体由来の重鎖、抗ＭＵＣ１６抗体由来の重鎖、及び抗ＣＤ３抗体由来の軽鎖、又は無差別であることが知られているか、若しくは様々な重鎖アームと効果的に対になることが知られている抗体軽鎖を利用して構築されてもよい。
例示的な二重特異性抗体は、２０１４年８月２８日に公開された米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２４３５０４Ａ１号に記載されるＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１、－００２、－００３、及び－００４）又は改変（キメラ）ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン（ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５）を有するように製造された。
構築された様々な抗ＭＵＣ１６×ＣＤ３二重特異性抗体の抗原結合ドメインの構成要素の概要を表２に記載する。
Figure 2025502061000003
実施例２：ＣＡ－１２５は、インビトロでの抗ＭＵＣ１６ｘＣＤ３抗体活性を妨害しない
可溶性ＣＡ－１２５（ＭＵＣ１６の脱落形態）のＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の活性に対する影響を、卵巣癌患者の腹水から精製された高レベルのＣＡ－１２５の存在下でのＦＡＣＳ結合および細胞毒性アッセイを使用して評価した。ＣＡ－１２５レベルは、大部分の卵巣癌患者の血清中で増加し、循環レベルは、抗原シンクとして作用することによって、任意のＭＵＣ１６標的療法に影響を与える可能性がある。アッセイで使用されるＣＡ－１２５のレベル（１０，０００Ｕ／ｍｌ）は、卵巣癌患者における公表レベル中央値である６５６．６Ｕ／ｍＬを大幅に超えた。ヒト腹水（ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍａｒｔ、ＮＹ、ＵＳＡ）から濃縮された可溶性ＣＡ－１２５または五つのカルボキシ末端ＳＥＡドメインおよびＭＵＣ１６の膜近傍領域を発現する膜近位構築物（ＭＵＣ１６Δ）の存在下における、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１がＭＵＣ１６発現ＯＶＣＡＲ－３細胞を殺傷する能力を、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１またはＣＤ３結合対照抗体（１００ｐＭ）の固定濃度で、およびＭＵＣ１６－１ＨまたはＭＵＣ１６Δのいずれかの連続希釈液で、３７℃で７２時間、４：１のエフェクター／標的比で行った。 ＭＵＣ１６を有する標的細胞の特異的殺傷を監視するために、ＯＶＣＡＲ－３細胞を１ｕＭのＶｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌトラッカーで標識した。標識の後、細胞を３７℃で一晩培養した。これとは別に、ヒトＰＢＭＣを、１×１０６細胞／ｍＬで補充されたＲＰＭＩ培地に培養し、付着細胞を枯渇させることによってリンパ球を濃縮するために、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、標的細胞を、付着細胞が枯渇したナイーブＰＢＭＣ（エフェクター／標的細胞比４：１）、およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１またはＣＤ３結合対照のいずれかの連続希釈液で、３７℃で７２時間共インキュベートした。トリプシンを使用して、培養プレートから細胞を除去し、ＦＡＣＳにより分析した。ＦＡＣＳ分析については、細胞を、死滅／生存遠赤色セルトラッカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で染色した。殺傷の特異性を評価するために、細胞を、バイオレットセルトラッカーで標識された集団でゲーティングした。調整された生存率を計算するために、生きている標的細胞の割合が、以下のように報告された：調整生存率＝（Ｒ１／Ｒ２）＊１００、式中、Ｒ１＝抗体の存在下での生きた標的細胞の割合、およびＲ２＝試験抗体の非存在下での生きた標的細胞の割合。Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２、ＣＤ６９、およびＣＤ２５に対する直接コンジュゲートされた抗体と細胞をインキュベートし、全Ｔ細胞（ＣＤ２＋）のうち活性化（ＣＤ６９＋）Ｔ細胞または（ＣＤ２５＋）Ｔ細胞の割合を報告することによって評価された。
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１とＣＡ－１２５（クローン３Ａ５）に結合すると知られる抗体とのヒト腹水液から得られたＣＡ１２５への結合を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。簡潔に述べると、可溶性ＣＡ－１２５（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍａｒｔ、ＮＹ、ＵＳＡ）を、ＰＢＳ中の４０００単位／ｍＬの濃度で、９６ウェルマイクロタイタープレートに４℃で一晩、受動的に吸着させた。次いで、プレートをＰＢＳＴで洗浄し、ＰＢＳ中の０．５％ＢＳＡで１時間ブロックした。ビオチン化ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１、ＭＵＣ１６親抗体、ａ－ＭＵＣ１６ ３Ａ５、および非結合対照（ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１アイソタイプ対照およびａ－ＭＵＣ１６ ３Ａ５アイソタイプ対照）を、ＰＢＳ中の０．５％ＢＳＡ中、１０、１、０．３、または０．１ｎＭの濃度でプレートに１時間添加し、続いてＰＢＳＴで洗浄した。１．０ｍｇ／ｍＬストック溶液の１：１００００希釈で西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＳＡ－ＨＲＰ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）とコンジュゲートされたストレプトアビジンをウェルに添加し、１時間インキュベートして、プレート結合ビオチン化抗体を検出した。プレートを洗浄し、製造業者の指示に従って、３－３’、５－５’－テトラメチルベンジジン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）基質で展開した。４５０ｎｍでの吸光度を、Ｖｉｃｔｏｒ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）で各ウェルについて記録した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてデータを分析した。
過剰なＣＡ－１２５は、ＯＶＣＡＲ－３細胞に結合するＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－０００１に最小限の影響を有し、ＣＡ－１２５への最小限の結合を示唆している（図１）。対照的に、ＣＡ－１２５は、ＭＵＣ１６の反復領域（抗体クローン３Ａの社内バージョン）に結合する可能性が高い比較抗体の能力を大幅に阻害した（図１）。さらに、ＭＵＣ１６の第５のＳＥＡドメインまで膜近位領域を含有する可溶性ＭＵＣ１６構築物（ＭＵＣ１６Δ）は、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の結合を劇的に阻害し、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８／０６７３３１号でより詳細に論じるように、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１が膜近位領域に結合することを示す。結合試験と整合して、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１はまた、ＣＡ－１２５の存在下でＴ細胞媒介性殺傷を誘導し得るが、高濃度のＭＵＣ１６Δの存在下では誘導し得なかった（データは示さず）。したがって、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、ＭＵＣ１６に結合し得、高濃度のＣＡ－１２５の存在下であっても、Ｔ細胞再指向性殺傷を誘導し得る。
実施例３：ＰＤ－１遮断剤は異種および同系腫瘍モデルにおける抗ＭＵＣ１６×ＣＤ３二重特異性抗体の抗腫瘍活性を強化する
抗ＭＵＣ１６／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＰＤ－１遮断剤との併用によるインビボ有効性を、異種および同系腫瘍モデルで評価した。
Ａ．異種モデル－ＯＶＣＡＲ－３／Ｌｕｃ
異種モデルでは、インビボで以前に継代された（０日）ＯＶＣＡＲ－３／Ｌｕｃ細胞株を、ヒトＰＢＭＣを移植してから十三日後に免疫不全ＮＳＧマウスに腹腔内（ＩＰ）注射した。マウスを、１２．５ｕｇ／マウスＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１でＩＰ処置するか、または１２．５ｕｇのＣＤ３結合対照を単独で、または１００ｕｇのＲＥＧＮ２８１０と組み合わせて、５日目および８日目に投与した。腫瘍負荷を、腫瘍移植後４、８、１２、１５、２０、および２５日目にＢＬＩによって評価した。２５日目のＢＬＩ測定によって決定されるように、１２．５ｕｇのＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１での処置は、ＢＬＩ測定によって決定されるように有意な抗腫瘍効果をもたらし、ＲＥＧＮ２８１０（抗ＰＤ－１）との組み合わせは、抗腫瘍効果をさらに増強した。すべての群は、投与前にＢＬＩによって評価された腫瘍量と同程度であった。群間での腫瘍負荷に有意差はなかった。
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、１２．５ｕｇで腫瘍量を有意に低減し、抗ＰＤ－１の添加は、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１単独よりも抗腫瘍効果を強化する。ヒトＴ細胞を生着させたＮＳＧマウスに、ヒトＯＶＣＡＲ－３／Ｌｕｃ細胞を移植した。マウスに、５および８日目に、１２．５ｕｇのＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１をＩＶ投与するか、またはＣＤ３結合対照もしくは非結合対照（１２．５ｕｇのＩＶ）で処置した。下記の表３に示されるデータは、腫瘍移植後２５日目のＢＬＩによって評価された腫瘍量である。統計的有意性を、対応のないノンパラメトリックなマン・ホイットニーｔ検定を使用して決定した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１＋／－ＲＥＧＮ２８１０を用いた処置を、ＣＤ３結合対照（ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１については＊ｐ＜０．０５、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびＲＥＧＮ２８１０については＊＊ｐ＜０．０１）と比較し、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を単独で用いた処置を、ＲＥＧＮ２８１０（＃ｐ＜０．０５）との組み合わせと比較した。
Figure 2025502061000004
Ｂ．同系モデル－ＩＤ８－ＶＥＧＦ／ｈｕＭＵＣ１６
免疫能力のあるモデルにおける有効性を調べるために、マウスＣＤ３遺伝子をヒトＣＤ３で置換し、マウスＭＵＣ１６遺伝子の一部をヒト配列で置換した。本置換により、Ｔ細胞がヒトＣＤ３を発現し、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５二重特異性抗体が結合するヒトＭＵＣ１６の一部を含むキメラＭＵＣ１６分子を発現するマウスが得られた。
この最初の同系腫瘍モデルについては、ヒトＭＵＣ１６の一部分を発現するように操作されたＩＤ８－ＶＥＧＦ細胞株を使用した。ＩＤ８－ＶＥＧＦ／ｈｕＭＵＣ１６細胞ＩＰをマウスに移植し、移植の三日後に、５ｍｇ／ｋｇのＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１で、またはアイソタイプ対照を用いたＣＤ３結合対照で、または抗ＰＤ－１（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）と組み合わせて処置した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を用いた処置は、ＣＤ３結合対照を投与された群と比較して、生存期間中央値を延長させたが、抗ＰＤ－１遮断剤の添加はまた、マウスの５０％の生存をもたらした。
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、ＩＤ８－ＶＥＧＦ腹水モデルの生存期間の中央値を有意に増加させ、ＰＤ－１（ＥＧＮ２８１０）遮断剤の添加により、数匹のマウスの生存が可能となる。マウスＣＤ３およびキメラＭＵＣ１６分子の代わりにヒトＣＤ３を発現するマウスに、ヒトＭＵＣ１６の一部を発現するマウス卵巣腫瘍株を移植した。マウスに、移植後３日目にＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）、またはＣＤ３結合対照（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）をアイソタイプ対照と共に、または抗ＰＤ－１と共に投与した。マウスを、腫瘍移植後３、７、１０、１４、１７日目に処置した。示されるデータは、生存期間の中央値である。マウスは、腹水によって誘発された腹部膨満のために、体重が２０％以上増加した時点で屠殺した。統計的有意性を、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ法を使用して決定した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１＋抗ＰＤ－１処置の両方が、生存期間中央値の増加をもたらし、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１＋抗ＰＤ－１の組み合わせは、５０％の生存をもたらし、ＭＵＣ１６ｘＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－１抗体との間の相乗効果を示した。結果が、以下の表４に示される。
Figure 2025502061000005
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて１ｍｇ／ｋｇで投与した場合、同様の結果が観察された。
Ｃ．同系モデル－ＭＣ３８／ｈｕＭＵＣ１６
先に記載したように、この実験で用いたマウスは、マウスＣＤ３遺伝子をヒトＣＤ３で置き換え、マウスＭＵＣ１６遺伝子の一部をヒト配列で置き換えるように遺伝子操作を行った。この置換により、Ｔ細胞がヒトＣＤ３を発現し、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５二重特異性抗体が結合するヒトＭＵＣ１６の一部を含有するキメラＭＵＣ１６分子を発現するマウスが得られた。
この第二の同系腫瘍モデルについては、ヒトＭＵＣ１６の一部分を発現するように操作されたＭＣ３８細胞株を使用した。ＭＣ３８／ｈｕＭＵＣ１６細胞ＳＣをマウスに移植し、腫瘍移植の７日後に、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５で、またはアイソタイプ対照を用いたＣＤ３結合対照（１ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）で、または抗ＰＤ－１（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）と組み合わせて処置した。この実験で使用された抗ＰＤ－１抗体は、市販のマウス抗体（クローンＲＭＰ１－１４、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）であった。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５および抗ＰＤ－１の組み合わせは、相乗的抗腫瘍効果を示した。
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５および抗ＰＤ－１遮断剤の組み合わせは、ＭＣ３８ ＳＣモデルにおいて、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５単独よりも良好な抗腫瘍効果をもたらした。マウスＣＤ３およびキメラＭＵＣ１６分子の代わりにヒトＣＤ３を発現するマウスに、ヒトＭＵＣ１６の一部を発現するマウス腫瘍株ＭＣ３８を移植した。マウスに、移植後７日目に、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５またはＣＤ３結合対照（１ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）をアイソタイプ対照または抗ＰＤ－１抗体（５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）と共に投与した。マウスを、腫瘍移植後７、１１、１４日目に処置した。結果を図２に示す。統計的有意性を、テューキーの多重比較検定を用いた二元配置分散分析により決定した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５プラス抗ＰＤ－１は、ＣＤ３結合対照よりも、有意に、かつ相乗的に腫瘍成長を阻害した。
実施例４：遺伝子操作されたマウスにおける免疫ＰＥＴ撮像は、Ｔ細胞が豊富な器官への抗ＭＵＣ１６ｘＣＤ３二重特異性抗体の局在化を示した
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５のインビボ局在化、ならびにＭＵＣ１６タンパク質の発現を、ＰＥＴ撮像を使用して野生型および遺伝子ヒト化マウスで評価した。８９Ｚｒ標識抗ＭＵＣ１６抗体（本明細書では「親」と称される、二重特異性と同じ抗ＭＵＣ１６重鎖および軽鎖を使用して生成された二価抗ＭＵＣ１６抗体）の生体内分布は、野生型およびヒト化マウスの両方で類似しており、ヒト化ＭＵＣ１６タンパク質の抗体への低い発現／利用能を示唆している。対照的に、マウスに８９Ｚｒ標識ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１二重特異性抗体の治療的に関連する用量を投与した場合、脾臓およびリンパ節への分布は、これらのリンパ器官におけるＣＤ３陽性Ｔ細胞の認識に起因して明らかであった（データは示さず）。個々の組織におけるエクスビボ生体内分布解析により、リンパ節および脾臓への局在が確認された（データは示さず）。リンパ組織における８９Ｚｒ標識ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５二重特異性抗体の取り込みは、ＣＤ３に対する親和性が低いため、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１と比較して大幅に減少した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５がＭＵＣ１６発現腫瘍に蓄積し得るかどうかを評価するために、８９Ｚｒ標識ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１および８９Ｚｒ標識ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５を、ＩＤ８－ＶＥＧＦ－ｈｕＭＵＣ１６Δ腫瘍を有するマウスに投与した。二重特異性抗体間の腫瘍取り込みは、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１のより高いリンパ球取り込みにもかかわらず、有意には異なっていなかった（データは示さず）。
免疫コンジュゲートの調製および小動物ＰＥＴ：ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１および対照抗体を、ＰＮＧａｓｅ Ｆを用いた抗体の脱グリコシル化の後、微生物トランスグルタミナーゼによるトランスアミド化を介して、２９５位のグルタミン残基にＤＦＯとコンジュゲートした。次いで、ＤＦＯコンジュゲート抗体をＺｉｒｃｏｎｉｕｍ－８９（８９Ｚｒ）でキレートした。マウスは、尾静脈注射を介して０．５ｍｇ／ｋｇの最終用量で抗体を受けた。次いでＰＥＴ撮像を実施して、エクスビボ生体内分布試験の前に、投与後６日目に放射免疫複合体のインビボ局在化を評価した。腫瘍を有するマウスにおける実験については、マウスに１０×１０６個のＩＤ８－ＶＥＧＦ－ｈｕＭＵＣ１６Δ腫瘍細胞を皮下移植した。腫瘍を有するマウスに、腫瘍の平均が１５０ｍｍ３である場合、移植の２０日後に８９Ｚｒ放射標識抗体を投与した。
予め較正したＳｏｆｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｇ８ ＰＥＴ／ＣＴ 装置 （Ｓｏｆｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社（Ｃｕｌｖｅｒ ｃｉｔｙ、ＣＡ）およびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）を用いて、ＰＥＴ／およびＣＴ画像を撮影した。エネルギー窓は、視野の中央で１．４ ｍｍの再構成された解像度で、１５０～６５０ｋｅＶの範囲であった。投与後６日目に、マウスに、イソフルランを使用して導入麻酔を行い、１０分間の静的ＰＥＴ撮影の間、イソフルランの連続的フロー下に置いた。ＣＴ画像をＰＥＴ取得後に取得した。ＰＥＴ画像を、その後、事前設定された設定を使用して再構成した。減衰補正されたＰＥＴデータおよびＣＴデータは、ＶｉｖｏＱｕａｎｔソフトウェア（ｉｎｖｉＣＲＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）を使用して、％ＩＤ／ｇとして表される、体積当たりの注入量の０～３０％の信号範囲を示すように較正されたカラースケールで、偽色の同時登録されたＰＥＴ－ＣＴ最大値投影画像に処理された。エクスビボ生体内分布分析については、投与後６日目の撮像後にマウスを安楽死させた。血液を心臓穿刺を介して計数管に採取した。次いで、正常な組織（鼠径部および腋窩リンパ節、胸腺、脾臓、心臓、肺、胃、小腸、肝臓、腎臓、骨および卵巣）を切除し、計数管に入れた。腫瘍を同様に計数管に収集した。すべての管を予め計量し、その後再計量して、血液および組織の重量を決定した。次いで、全試料のγ放出の放射活性を自動ガンマカウンター（Ｗｉｚａｒｄ ２４７０，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で計数し、結果を一分当たりの計数（ｃｐｍ）で報告した。各試料の％ＩＤは、元の注入材料から調製された用量標準数に対する試料数を使用して決定された。その後、個々の％ＩＤ／ｇ値は、％ＩＤを適切な血液、組織、または腫瘍サンプルのそれぞれの重量で割ることによって導出した。
８９Ｚｒ標識ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１および８９Ｚｒ標識ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００５は、ＭＵＣ１６＋腫瘍およびＣＤ３＋リンパ組織への特異的局在を示し、リンパ球分布は相対的ＣＤ３親和性と相関していた。両方のＭＵＣ１６ｘＣＤ３二重特異性体は、ＣＤ３＋組織の存在下で同等の腫瘍局在を示した。
実施例５：カニクイザルにおける毒性試験では抗ＭＵＣ１６ｘＣＤ３二重特異性抗体に対する明白な毒性は示されなかった
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、サルＭＵＣ１６およびＣＤ３と交差反応する。二重特異性抗体の安全性および忍容性を決定し、その薬物動態を特徴付けるために、カニクイザルにおいて複数回投与毒性試験を実施した。六匹のサル／性別／群に、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を毎週投与し、０．０１、０．１、または１ｍｇ／ｋｇで合計五用量を投与した。投与期間の完了時に、３匹の動物／性別／群を安楽死させ、組織を顕微鏡的所見について調べ、残りの三匹の動物／性別／群には、１２週間の無処置回復を行い、任意のＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１関連効果の可逆性または持続性を評価した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は忍容性良好であり、すべての動物は予定された剖検の時点まで生存した。毒性動態解析は、用量群にわたって用量比例的曝露および線形動態を示し、性別差は観察されなかった（データは示さず）。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１への継続的な曝露は、投与フェーズ全体を通して観察され、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１曝露は、それぞれ、０．１ｍｇ／ｋｇ群および１．０ｍｇ／ｋｇ群のすべて（ｎ＝６）および５０％の動物で回復フェーズの終了まで維持された。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、回復８週目の後は０．０１ｍｇ／ｋｇ群のいずれの動物においても血清中で検出されなかった。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の消失半減期は、約１０日であった。
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１関連の臨床所見はなく、投与期間中または回復期間中、尿検査パラメータ、末梢血免疫表現型検査、食物消費量、または体重に変化はなかった。重要なことに、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１投与は、ＥＣＧパラメータの無変化を含む、呼吸、神経、または心血管安全性薬理学的評価の変化をもたらさなかった。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１関連の臓器重量の変化は見出されず、終末または回復剖検のいずれにおいても肉眼的変化は観察されなかった。１．０または０．１ｍｇ／ｋｇの初回用量から１日以内に循環炎症マーカー（Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）およびＩＬ－６）の用量関連の可逆的な上昇が観察されたが、これらの上昇は後続用量後には明らかではなかった（データは示さず）。血清サイトカインの最小限の増加に従って、血液腫瘍に対するいくつかのＣＤ３二重特異性分子について記載されているものとは対照的に、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１投与後にＴ細胞再分布は検出されなかった（データは示さず）。
カニクイザル試験は、ＩＡＣＵＣのガイドラインに従って実施された。カニクイザル（６匹／性別／群）に、対照物質（希釈プラセボ）またはＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１（０．０１、０．１、または１ｍｇ／ｋｇ）を３０分間のＩＶ注入を介して週一回投与した。対照物質は、１０％のスクロースおよび０．０５％のポリソルベート２０、ｐＨ６を有する１０ｍＭのヒスチジンであり、注射用０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ（滅菌生理食塩水）で希釈されている。血液試料または組織を、臨床病理学および病理組織学のために様々な時点で採取した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１濃度をＥＬＩＳＡによって決定し、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎソフトウェアを使用して毒性動態分析を実施した。ＣＲＰをＲｏｃｈｅＲｏｃｈｅ Ｐ ８００システムで分析した。サイトカインをＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）によって測定した。Ｔ細胞を、フローサイトメトリーを使用して定量した。簡潔に述べると、血液をカリウムＥＤＴＡチューブに収集し、溶解し、ＣＤ３，ＣＤ４、およびＣＤ８について染色し（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、各表現型の相対値をＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩを使用して決定する。次いで、これらの値に絶対リンパ球値（血液学的分析を介して）を乗じて、各表現型の絶対細胞数を計数する。
ＭＵＣ１６の免疫組織化学染色は、予想される組織、膵臓（中皮、管上皮）、心臓および卵巣（データは示さず）、ならびに唾液腺（杯細胞）、肝臓（中皮、胆管）、肺（中皮、細気管支／気管支上皮）、小腸（中皮）、精巣（中皮、精巣網／輸出管）、および扁桃腺（上皮、粘液腺）（示さず）に存在した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１関連顕微鏡的変化は、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）の組織学的染色によって評価され、炎症（白血球の浸潤）、ならびに複数の胸部および腹膜器官の漿膜内層および／または中皮下結合組織の非有害な肥厚につながる中皮細胞のサイズおよび細胞性の増加を含む。これらの変化は、概して局所性または多局所性であり、重症度は最小限から軽微であり、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の標的であるとみなされ、漿膜上皮（中皮）細胞上に発現されるＭＵＣ１６の関与およびＴ細胞の活性化から生じた。重要なことに、回復期間の終了時に漿膜変化は逆転していたまたは逆転に向かう傾向であった（データは示さず）。
カニクイザルにおける毒性試験は、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１投与後の血清サイトカインおよびＣ反応性タンパク質の最小かつ一過性の増加を示し、明白な毒性はなかった。
実施例６：腫瘍担持マウスにおける血清サイトカイン誘導の評価
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、ＣＤ３二重特異性およびＣＡＲ Ｔ細胞療法の頻繁な重篤な副作用であるため、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を用いた治療後の関連モデルにおける血清サイトカインを監視する試験を実施した。腫瘍を有しない遺伝子ヒト化ＭＵＣ１６／ＣＤ３マウスでは、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１投与の際に血清サイトカイン応答は明白ではなかった。
ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１によるインビボＴ細胞活性を評価するために、腫瘍を有するマウスからの血清サイトカインレベルを測定した。血清試料を、０．５ｍｇ／ｋｇのＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１、ＣＤ３結合対照、および非結合対照群において、最初の抗体投与の４時間後に採取した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を用いた処置は、非結合対照およびＣＤ３結合対照と比較して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－６，ＩＬ－８、およびＩＬ－１０の誘導によって決定されるようにＴ細胞を活性化した（データは示さず）。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１誘導性サイトカイン応答は、Ｔ細胞ならびにＯＶＣＡＲ－３／Ｌｕｃ細胞の存在を必要とし、ＯＶＣＡＲ－３／Ｌｕｃ細胞のみを有するマウスは血清中に検出可能なヒトＩＦＮγを有さず、架橋のためにＭＵＣ１６を提供する腫瘍細胞を有しないマウスは、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１に応答して血清ＩＦＮγの増加を示さなかった（データは示さず）。
血清サイトカインレベルの測定：ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１を用いた治療に応答するＴ細胞活性化を、最初の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の四時間後にインターフェロンγ（ＩＦＮ γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１３、およびＩＬ－１Ｂの血清濃度を測定することによって評価した。製造業者の指示に従って、Ｖ－ｐｌｅｘ Ｈｕｍａｎ ＰｒｏＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ－１０ Ｐｌｅｘキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＡ）を使用してサイトカインレベルを分析した。サイトカインを、１群当たり４～６匹のマウスを用いた二つの別個の試験で測定した。
実施例７：ヒト化マウスにおけるＭＵＣ１６発現、およびＭＵＣ１６陽性組織上の抗ＭＵＣ１６ｘＣＤ３二重特異性抗体の効果
完全に無傷の免疫系を有するマウスにおけるＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の抗腫瘍効果を調査するために、マウスを遺伝子操作して、Ｔ細胞上のヒトＣＤ３と、抗体結合領域を覆うＭＵＣ１６の領域とを内因性マウス遺伝子座に発現させた（ノックインマウス）。これらのマウスを検証するために、ＭＵＣ１６発現をＲＴ－ＰＣＲおよびＩＨＣの両方によって調べた。マウスＭＵＣ１６発現に関する公開データと同様に、ＲＮＡ発現が、気管ならびに肺、心臓、卵巣、膵臓、および膀胱において低レベルで検出された（データは示さず）。ＭＵＣ１６タンパク質発現を評価するために、ＭＵＣ１６の膜近位領域を認識する抗ヒトＭＵＣ１６抗体を使用して、選択された組織に対してＩＨＣを実施した。ＭＵＣ１６タンパク質発現は、これらのマウスの卵巣および胃の表面上皮で確認された。ＭＵＣ１６は、ヒトで記載されているように、気管内層／上皮ならびに粘膜下腺でも観察された（データは示さず）。
マウス組織の組織学：ヒト化マウスまたはＷＴマウス由来の組織を採取し、ベンタナディスカバリーＸＴ（Ｖｅｎｔａｎａ；Ｔｕｃｓｏｎ、ＡＺ）を使用してＩＨＣによりＭＵＣ１６の膜近位ドメインに結合する抗ＭＵＣ１６抗体で染色した。５μｍのパラフィン切片をＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ ＰＬＵＳスライド上に切断して設置し、６０℃で一時間ベークした。免疫組織化学染色を、ベンタナＤＡＢマップ検出キットを使用して、ディスカバリーＸＴ自動ＩＨＣ染色システムで行った。脱パラフィン化を、ＥＺ Ｐｒｅｐ溶液を使用して７５℃で８分間行った。ベンタナのＴｒｉｓ－ＥＤＴＡ緩衝液ｐＨ９（ＣＣ１）を使用して、軽度の抗原回収（９５℃、８分、続いて１００℃、２４分）を行った。これに続いて、複数の遮断工程を行った。組織切片を抗ＭＵＣ１６抗体（２μｇ／ｍｌ）と室温で８時間インキュベートした。無関係な非結合抗体を認識するアイソタイプ対照抗体を、陰性対照として使用した。一次抗体および陰性対照を手動で適用した。ビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を二次抗体（１μｇ／ｍｌ）として使用し、試料をＲＴで一時間インキュベートした。発色シグナルは、ベンタナＤＡＢ ＭＡＰキットを使用して開発された。スライドを、ヘマトキシリンで手動で対比染色し（２分）、脱水し、カバーガラスで覆った。画像はＡｐｅｒｉｏ ＡＴ ２スライドスキャナ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｆｆａｌｏ Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）で取得し、Ｉｎｄｉｃａ ＨＡＬＯソフトウェア（Ｉｎｄｉｃａ Ｌａｂｓ、Ｃｏｒｒａｌｅｓ、ＮＭ）を使用して分析した。Ｈ＆Ｅ染色は、Ｈｉｓｔｏｓｅｒｖ，Ｉｎｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ、ＵＳＡ）によって実施された。
これらのマウスのＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｖβ使用によって評価されるように多クローン性であり、ヒトＣＤ３を発現し、野生型マウスと類似の数で存在する（データは示さず）。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１がこれらの動物の正常組織に対する任意のＴ細胞活性化または効果を誘導したかどうかを決定するために、腫瘍を有さないマウスに高用量のＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１（１０ｍｇ／ｋｇ）を注射し、次いで血液中のＴ細胞数、血清サイトカイン、および病理組織学を調べた。Ｔ細胞は、血液からのＴ細胞の辺縁化および血清サイトカインのレベルの増加によって測定されるように、抗ヒトＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によって活性化され得るが（データは示さず）、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、そのような効果を誘発せず、ＭＵＣ１６標的へのアクセスが限定的であることを示唆する（データは示さず）。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１がＭＵＣ１６発現組織において何らかの顕微鏡的変化を誘導したかどうかを決定するために、ＭＵＣ１６およびＣＤ３ヒト化マウスに、０日目および３日目に１０ｍｇ／ｋｇのＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の二用量を投与した。５日目に、いくつかのＭＵＣ１６発現組織（気管、胃、および卵巣）を調べ、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１投与後にこれらの組織に細胞浸潤または壊死は見られなかった（データは示さず）。
病理組織検査により、マウスにおいて、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１投与後の調べた時点ではＭＵＣ１６発現組織への炎症または浸潤がないことが明らかになった。
この研究の結果、ならびに実施例５で記載されたカニクイザル試験は、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１の安全性プロファイルを実証する。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は、最小の血清サイトカインのみを誘導し、ＭＵＣ１６発現において炎症の焦点誘導および漿膜内層の肥厚があり、標的活性を示唆するが、これらの効果は回復期間の終わりまでに解決し、修復を示す炎症および細胞性の増加と一致した。観察された漿膜変化は、任意の臨床所見、臨床病理（炎症反応を除く）、または下層の実質の顕微鏡的変化と相関しなかった。したがって、遺伝子ヒト化マウスおよびカニクイザルの両方における研究は、ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１は忍容性が良好であることを示す。
実施例８：ナイーブヒトエフェクター細胞を使用したＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイにおけるＰＤ－１発現の監視
フローサイトメトリーによりＭｕｃ１６を有する標的細胞の特異的殺傷を監視するために、卵巣細胞株ＯＶＣＡＲ－３を、１ｕＭのＶｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌトラッカーで標識した。標識の後、細胞を３７℃で一晩培養した。これとは別に、ヒトＰＢＭＣを、１×１０６細胞／ｍＬで補充されたＲＰＭＩ培地に培養し、付着マクロファージ、樹状細胞、および位置の単球を枯渇させることによってリンパ球を濃縮するために、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、標的細胞を、付着細胞が枯渇したナイーブＰＢＭＣ（エフェクター／標的細胞比４：１）およびＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１またはＣＤ３結合対照のいずれかの連続希釈液で、３７℃で７２時間共インキュベートした。トリプシンを使用して、細胞を培養プレートから除去し、ＦＡＣＳにより分析した。ＦＡＣＳ分析については、細胞を、死滅／生存遠赤色セルトラッカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で染色した。殺傷の特異性を評価するために、細胞を、バイオレットセルトラッカーで標識された集団でゲーティングした。
ＰＤ－１発現を、細胞をＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＰＤ－１に直接コンジュゲートされた抗体とインキュベートすることによって、および総Ｔ細胞（ＣＤ２＋）中のＰＤ－１／ＣＤ４陽性Ｔ細胞またはＰＤ－１／ＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合を報告することによって評価した。ＢＳＭＵＣ１６／ＣＤ３－００１とのインキュベーションは、対照と比較して、ＰＤ－１＋Ｔ細胞の割合を１０倍超（ＣＤ４＋Ｔ細胞）または３倍超（ＣＤ８＋Ｔ細胞）増加させた。結果を図３に示す。
実施例９：卵巣癌を抗ＭＵＣ１６ｘ抗ＣＤ３二重特異性抗体単独で、または抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて治療する方法
プラチナ含有療法を含むすべての治療選択肢を使い果たした再発性卵巣癌を有する患者におけるＲＥＧＮ４０１８（抗ＭＵＣ１６×抗ＣＤ３二重特異性抗体）の安全性、忍容性、予備的抗腫瘍活性、および薬物動態（ＰＫ）の第１／２相試験が実施されており、意義のある臨床的利益を示している。
治療が困難な、進行性の、プラチナ系療法を経験した、および／または不耐性の上皮性卵巣癌（癌肉腫を除く）、原発性腹膜癌、または卵管癌を有する患者は、ＲＥＧＮ４０１８研究の一部として研究されている。
卵巣癌の臨床試験では、治療評価は腫瘍応答に基づく。腫瘍応答評価は、測定可能な疾患を有する、および有さない患者における腫瘍マーカーであるＣＡ－１２５のレベルに基づく。さらに、バイオマーカー解析には、ＲＥＧＮ４０１８治療が末梢ＣＤ３ Ｔ細胞の集団を一過性に減少させることが予想されるため、末梢Ｔ細胞表現型解析が含まれる。さらなる分析には、ＭＵＣ１６およびＰＤ－Ｌ１などのタンパク質の腫瘍発現などのバイオマーカーが含まれ、基礎疾患の臨床経過に影響を与えるか、または治療副作用を調節する変動についてのｃｔＤＮＡ、腫瘍（ＲＮＡおよび体細胞ＤＮＡシーケンシング）遺伝子分析が含まれ得る。
目的：主要評価項目および副次評価項目の両方を探索する。
この試験の主要な目的は：
（１）試験の用量漸増期において：意義のある臨床的利益をもたらすと予想される全ての治療選択肢を使い果たした再発性卵巣癌を有する患者における、ＲＥＧＮ４０１８の単剤療法としての、およびセミプリマブと組み合わせた最大耐量（ＭＴＤ）または推奨第２期用量（ＲＰ２Ｄ）を決定するために、安全性および薬物動態（ＰＫ）を評価すること。ＲＰ２Ｄの決定は、安全性、薬物動態（ＰＫ）、およびＰＫ／ＰＤ（薬物動態／薬力学）の関係に関するものを含む、非臨床および全ての臨床データのレビューに基づく。
（２）試験の用量拡大期において、固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ １．１）による客観的奏効率によって決定されるＲＥＧＮ４０１８の単剤療法としての、およびセミプリマブと組み合わせた（コホート別）予備的有効性を評価すること。
試験の副次的目的は（用量漸増期および用量拡大期の両方において）、
（１）ＯＲＲ、最良総合効果（ＢＯＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、疾患制御率、およびＣＲ率によって測定される、ＲＥＧＮ４０１８の単剤療法としての、およびセミプリマブと組み合わせた予備的有効性を評価すること；
（２）ＣＡ－１２５レベルによって測定される、ＲＥＧＮ４０１８の単剤療法としての、およびセミプリマブと組み合わせた有効性を評価すること；
（３）ＲＥＧＮ４０１８およびセミプリマブの免疫原性を特徴解析すること、
（４）用量漸増期においてのみ：ＯＲＲによって測定される、ＲＥＧＮ４０１８の単剤療法としての、およびセミプリマブと組み合わせた予備的有効性を評価すること；ならびに
（５）用量拡大期においてのみ：単剤療法としての、およびセミプリマブと組み合わせたＲＥＧＮ４０１８の安全性、ＰＫ、および忍容性を評価すること。
本試験の探索的目的は、以下の通りである：
（１）Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ（ＧＣＩＧ）基準を使用したＲＥＣＩＳＴおよびＣＡ－１２５の複合評価に基づいたＯＲＲによって測定される、ＲＥＧＮ４０１８の単剤療法およびセミプリマブと（コホートごとに別々に）組み合わせた予備的有効性を評価すること；
（２）作用機序、疾患／標的の理解の向上、観察された毒性、および以下を含むがそれに限定されない潜在的な抗腫瘍活性と相関し得るバイオマーカーを評価すること：
－ 循環タンパク質
－ 循環免疫細胞
－ 末梢血および腫瘍における遺伝子発現の変化
－ ＭＵＣ１６およびプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）などのタンパク質の腫瘍発現レベル
（３）腫瘍遺伝子変異量および循環腫瘍ＤＮＡの両方の評価；
（４）可能な場合、曝露と有効性と安全性評価項目との関係を評価すること；ならびに
（５）全生存期間（ＯＳ）。
試験デザイン：ＲＥＧＮ４０１８単剤療法の最も低い２用量レベル（ＤＬ）での加速漸増（コホート当たりｎ＝１人の患者）を伴う修正された３＋３用量漸増設計（「４＋３」）を利用する。ＲＥＧＮ４０１８単剤療法の用量漸増は、最大耐量（ＭＴＤ）が達成されるまで、または忍容性および活性の十分な証拠に基づいて用量が拡大のために選択される（ＲＰ２Ｄ）まで進行する。
ＲＥＧＮ４０１８の一連のＤＬを単剤療法として調査する。用量漸増は、０．１ｍｇの静脈内（ＩＶ）の１週目の用量および０．３ｍｇのＩＶの２週目の用量（１週目が忍容性である場合）でＤＬ１で開始される。ＤＬ２は、０．３ｍｇ ＩＶの１週目の用量および１ｍｇ ＩＶの２週目の用量を使用する（１週目が忍容性である場合）。次いで、用量漸増は、用量制限毒性（ＤＬＴ）、重篤な注射関連反応（ＩＲＲ）、またはＣＲＳが特定されない場合、ＤＬ３、ＤＬ４、ＤＬ４ａ、およびその後のＤＬを通じて進行する。
したがって、各ＲＥＧＮ４０１８ ＤＬは、初回用量、および（初回用量が忍容性であるならば）より高い全用量からなる。ＣＲＳのリスクを最小限に抑えるために、初回用量は、ＤＬ４／ＤＬ４ａ以上からＤＬに割り当てられたすべての患者について最大１ｍｇに設定され、ＤＬ５ａから、初回用量と全用量との間に２０ｍｇの強制的な移行用量が設定される。患者の安全性のために、必要に応じて中間用量レベルを追加してもよい。
ＲＥＧＮ４０１８およびセミプリマブの併用療法をＤＬＣ２で開始し、これは耐容性があり、薬理学的に活性であるＲＥＧＮ４０１８単剤療法の用量であるとみなされた。ＲＥＧＮ４０１８とセミプリマブとの併用療法については、登録された患者は、単剤療法患者と同様に、４＋３用量漸増設計に従って用量漸増された。推定ＲＰ２Ｄ／ＭＴＤをより効果的に特定し、患者を治療量以下および／または過剰毒性の用量に曝露する可能性を最小限に抑えるために、用量レベルの継続的な漸増（ＤＬ）がＢＯＩＮ設計に従う。
併用療法は、単剤療法ＭＴＤを超えて漸増しない。併用療法コホートの試験実施は、単剤療法コホートと同様の様式で行われ、ＲＥＧＮ４０１８が徐々に導入される単剤療法リードインサイクルを含む。
ＤＬＣ４に続いて、選択された移行用量およびその後の用量漸増経路は、単剤療法の移行用量に従って行われる。例えば、２０ｍｇの移行用量が単剤療法コホートで使用される場合、２０ｍｇの移行用量は併用療法コホートで使用される。したがって、用量漸増は、ＤＬＣ４ａ（ＤＬＣ４ａからの安全性データが適切であるとみなされることを条件として）に続き、その後ＤＬＣ５ａ～ＤＬＣ９ａに続く。
患者がセミプリマブ併用療法でサイクル２を開始するためには、ＣＲＳなしでＲＥＧＮ４０１８の単回全用量が忍容されなければならない。組み合わせサイクル１は、患者がＣＲＳを発症することなく少なくとも一回の全用量のＲＥＧＮ４０１８を受けるまで、４～５週間継続する。
単剤療法拡大コホートは、ＲＥＧＮ４０１８ ＭＴＤおよび／またはＲＰ２Ｄの特定後に登録され、第二の併用療法拡大コホートは、セミプリマブと組み合わせたＲＥＧＮ４０１８のＭＴＤおよび／またはＲＰ２Ｄの特定後に登録される。ＲＥＧＮ４０１８の用量レベルは、単剤療法拡大コホートと併用療法拡大コホートとの間で異なり得る。さらに、用量は、三つの用量を評価する３群の、無作為化第２期コホートを介して評価される：ＲＥＧＮ４０１８ ２５０ｍｇ ＩＶ Ｑ３Ｗ； 単剤療法としてのＲＥＧＮ４０１８ ８００ｍｇ ＩＶ Ｑ３Ｗ；およびセミプリマブ３５０ｍｇ ＩＶ Ｑ３Ｗと組み合わされたＲＥＧＮ４０１８ ２５０ｍｇ（または２５０ｍｇ ＱＷが忍容性でない場合、セミプリマブと組み合わせた最大耐容用量）ＩＶ Ｑ３Ｗ。
用量漸増の安全性を決定するためのＤＬＴ観察期間は、単剤療法および併用療法コホートについて異なって定義される。単剤療法コホートのＤＬＴ観察期間の目的は、単剤療法用量漸増中に最低２回のＲＥＧＮ４０１８の全用量の安全性および忍容性を監視することである。ＤＬ１～ＤＬ４については、移行用量が使用されないため、ＤＬＴウィンドウは２８日である。ＤＬ５ａ／ＤＬＣ５ａおよびすべてのより高いＤＬについては、ＤＬＴ観察期間は、サイクル１の１日目から開始して２８～３５日（二回目の全用量がいつ投与されるかに依存して）である。
併用療法ＤＬＴ観察期間は、ＲＥＧＮ４０１８およびセミプリマブ併用療法の最初の３週間の安全性および忍容性を監視する目的で、サイクル２の１日目から開始する併用療法の２１日間として定義される。併用療法における用量漸増の安全性を決定するためのＤＬＴ観察期間は、ＲＥＧＮ４０１８単剤療法を評価する必要はない。なぜなら、各併用療法ＤＬでは、ＲＥＧＮ４０１８用量は、ＲＥＧＮ４０１８単剤療法用量漸増中は忍容性であると以前みなされていたためである。
本試験の第１期部分では、追加のコホートは、ＲＥＧＮ４０１８の初回用量および移行用量の皮下（ＳＣ）投与を、ＳＣ投与経路がＣＲＳなどの急性毒性の低減と関連しているかどうかを評価するためにのみ探索する。このコホートに対するＲＥＧＮ４０１８の全用量（単剤療法として、またはセミプリマブとの組み合わせとして）は、これまでに実証された安全性および有効性データのレビューに基づいて、このコホートに対して選択される。
試験期間：スクリーニング期間は、すべての患者について最大２８日間である。ＲＥＧＮ４０１８単剤療法の場合、各サイクルは、６週間（４２日）の長さである。ＲＥＧＮ４０１８およびセミプリマブを用いた併用療法の場合、患者がＣＲＳを伴わずＲＥＧＮ４０１８の全用量を忍容する場合に基づいて、最初のサイクルは２８または３５日の長さである。併用療法のその後のサイクルは、６週間（４２日）の長さである。治療は、疾患進行、不忍容性の有害事象、同意の撤回、または他の治療中止基準のいずれかが満たされるまで継続される。治療中止の理由に基づき、治療後追跡は約９０日（コア追跡）または１６８日（監視追跡）のいずれかである。
試験対象集団：最大５５４人の患者（用量漸増期では２９２人、探索的ＳＣコホートでは１２人、拡大コホートでは２５０人）が登録されると予想する。登録された患者の実際の数は、単剤療法および併用療法用量漸増コホート中に観察されたＤＬＴ、追加された患者数、（サイモンの２段階設計の）第二段階が各拡大コホートに登録されているかどうか、および用量拡大中にトリガ事象が発生したかどうかに依存する。この試験は、血清ＣＡ－１２５レベルが上昇（≧正常上限の２ｘ）しているプラチナ系療法を経験した、および／または不耐性の卵巣癌、卵管癌、または原発性腹膜癌を有する患者を登録する。
選択基準－患者は、本試験に含まれるように適格であるためには、以下の基準を満たす必要がある：
１．１８歳以上の女性
２．進行性上皮性卵巣癌（癌肉腫を除く）、原発性腹膜癌、または卵管癌の組織学的または細胞学的に確認された診断を有し、以下の全てを有する患者：
ａ．血清ＣＡ－１２５レベル≧正常上限の２ｘ（ＵＬＮ）（スクリーニング時）、
ｂ．少なくとも１回のプラチナ含有療法を受けた、またはプラチナ不耐性であること、
ｃ．最新の治療ラインでの、またはその後の再発または進行の記録、および
ｄ．臨床的利益をもたらす可能性のある標準療法オプションの不存在
３．クリニックビジットおよび試験関連手順を順守する意思があり、可能であること
注：
ａ．漸増コホートでは、患者は、新たに取得された生検（医学的に不適切および医療モニターと協議されない限り、スクリーニング時に新たに取得された生検が必要である）またはアーカイブされた腫瘍組織のいずれかを提供しなければならない。
ｂ．拡大コホートでは、患者はスクリーニング時に新鮮な腫瘍生検を提供しなければならない。
４．拡大コホートのみ：放射線学的に記録された以前の療法の進行を有していなければならず、固形腫瘍の応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）によって正確に測定され得る少なくとも１つの測定可能な病変（以前に照射されていない）を有していなければならない。
５．０または１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）性能状態
６．以下の適切な器官および骨髄の機能：
ａ．ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ
ｂ．絶対好中球数≧１．５×１０９／Ｌ
ｃ．血小板数≧７５×１０９／Ｌ
ｄ．血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮまたは推定糸球体濾過速度＞５０ｍＬ／分／１．７３ｍ２（用量漸増コホート）または推定糸球体濾過速度＞３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２（用量拡大コホート）
ｅ．総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
ｆ．アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦３×ＵＬＮまたは≦５×ＵＬＮ、肝転移の場合
ｇ．アルカリホスファターゼ≦２．５×ＵＬＮ（または肝臓もしくは骨転移の場合、≦５．０×ＵＬＮ）
７．少なくとも３ヶ月の推定余命。
８．試験患者または法的に許容される代表者によって署名されたインフォームドコンセントの提供
９．無作為化第２相拡大コホートのみ：
ａ．以下の基準の１つを満たすプラチナ耐性卵巣癌：
・ プラチナ系治療を１回のみ受けた患者は、少なくとも４回のプラチナ系治療を受けていなければならず、奏効（完全奏効／寛解［ＣＲ］または部分奏効／寛解［ＰＲ］）を経験しなければならず、その後、プラチナの最終投与日から０ヶ月～６ヶ月の間に進行しなければならない。
・ ２回または３回のプラチナ系治療を受けた患者は、プラチナの最終投与日から６か月以内に進行しなければならない。
ｂ．ＢＲＣＡ変異を有する患者、または相同組換え修復（ＨＲＤ）が欠損していることが知られている患者、またはＰＡＲＰ阻害剤を受ける資格がない患者に対する、ＰＡＲＰ阻害剤を用いた以前の治療
ｃ．ベバシズマブによる以前の治療、またはベバシズマブ投与に不適格
除外基準－以下の基準のいずれかを満たす患者は、本試験から除外される：
１．別の治療研究で現在治療を受けている、もしくは治験薬の研究に参加し、治療を受けたか、または試験療法の第一の投薬の４週間以内に治験装置を使用したか、または試験療法の第一の投薬の３週間以内に承認された全身療法での処置を受けたか、または試験療法の第一の投薬の５半減期以内に任意の以前の全身療法を受けた（いずれか長い方）。最小用量の治験免疫ＰＥＴ試薬を用いた治療を含む試験を受けた、または試験に登録された患者は除外されない。ベバシズマブで以前に治療された患者は、ベバシズマブの腸穿孔または創傷合併症の病歴がなく、ＲＥＧＮ４０１８の最終投与が最初の投与から＞３０日である場合、スポンサーとの協議後に許可され、７日よりも長い半減期を有する他の非治験非免疫調節性抗体は、最後の治療から少なくとも３つの半減期が経過した場合、スポンサーとの協議後に許可される。
２．以下に記載される以前の抗癌免疫療法：
ａ．初回投与の５半減期以内の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法を用いた以前の治療
注記：併用療法コホートおよび無作為化第２期コホートでは、毒性のために抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法を以前に中止した患者も除外される。
ｂ．試験薬初回投与から３０日以内のＣＡＲ－Ｔ細胞療法歴
３．ＭＵＣ１６標的化療法を用いた以前の治療。
４．拡大コホートのみ：４回以上の以前の細胞毒性化学療法。
注記：用量漸増コホートでは、適格となるための以前の治療の回数に上限はない。
５．試験薬の第一の投薬前１週間以内のコルチコステロイド療法（＞１０ｍｇのプレドニゾン／１日または均等なもの）。短期間のステロイド治療を必要とする患者（登録前の週で最大２日間）は除外されない。
６．試験療法での治療開始の少なくとも３０日前にベースラインに回復していない、免疫調節剤（抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１または抗ＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体またはＰＩ３Ｋｄｅｌｔａ阻害剤を含むが、これらに限定されない）による治療関連免疫媒介性ＡＥ。
注記：ホルモン療法もしくは他の非免疫抑制療法（消散なし）で管理した内分泌免疫介在性ＡＥ、または登録前の消散を伴う、グレード１のｉｒＡＥ投与の任意の器官系。
７．拡大コホートのみ：潜在的に治癒可能な療法を経験した非黒色腫皮膚癌もしくはインサイツ子宮頸癌を除く、進行しているか、もしくは積極的な治療を必要とする別の悪性腫瘍、または登録前の少なくとも２年間、決定的な局所制御（継続的なアジュバントホルモン療法の有無にかかわらず）で有効に処置されているとみなされる任意の他の腫瘍。
８．未治療または活動性の原発性脳腫瘍、ＣＮＳ転移、または脊髄圧迫。以前に処置された中枢神経系転移または脊髄圧迫を有する患者は、それらが安定している（すなわち、試験治療の第一の投薬の前少なくとも４週間画像化することにより、進行の証拠がなく、神経学的症状がベースラインまで戻っている）限り、参加してもよく、新規のまたは拡大している中枢神経系転移を示す証拠がなく、患者は、試験療法の第一の投薬前２週間以内に中枢神経系転移または脊髄圧迫の管理のために全身コルチコステロイドを全く必要としない。
９．インフォームドコンセントの前年の脳炎、髄膜炎、または管理不能な発作。
１０．治験責任医師が決定した臨床的に有意なＥＣＧ測定値異常を有する、および／または以下の基準を満たす：
ａ．ＱＴｃ（フリデリシア）間隔＞４７０ミリ秒。無症状の長時間のＱＴｃ間隔（＞４７０ミリ秒）の場合、ＥＣＧは最大２回繰り返され得る。その後のＱＴｃ間隔が＜４７０ミリ秒である場合、患者は、心臓専門医によるレビューおよび承認の後でのみ登録され得る。
ｂ．第二度ＡＶブロックＩＩ型（Ｍｏｂｉｔｚ ＩＩ型）またはＡＶブロックＩＩＩ型（完全な心臓ブロック）の証拠。
１１．ベースラインの心エコー図によって測定される、左心室駆出分画率（ＬＶＥＦ）は５０％未満である。臨床症状がないＬＶＥＦ ４５～５０％の場合、心臓専門医によるレビューおよびクリアランス後、患者は登録され得る。
１２．スクリーニング前６か月以内の、以下を含むがこれに限定されない臨床的に有意な心疾患の病歴：
－ 心筋梗塞
－ 不安定な狭心症
－ 脳卒中または一過性虚血性発作
－ 末梢動脈疾患事象
－ 心不全（ＮＹＨＡクラスＩＩＩおよびＩＶまたはＡＣＣ／ＡＨＡ心不全分類ＣもしくはＤ）
１３．発作性心膜細動を含む任意の臨床的に有意な不整脈の病歴、またはペースメーカーもしくは除細動器の移植。
１４．心筋炎の病歴。
１５．活動性の狭心症、不整脈、または心不全の徴候または症状。
１６．外科的にまだ管理されていない、任意の中程度から重度の弁異常（狭窄または逆流）および／または臨床的に有意な弁膜心疾患。
１７．ベースラインの心エコー図によって測定される、中程度から大きな心外膜液（例えば、＞約１００ｍＬ）。
１８．スクリーニング前の月に２つ以上の治療的穿刺を必要とする患者。
１９．施設の正常上限を上回っているベースライン血清トロポニン。臨床症状の非存在下でトロポニンが最小限に上昇する場合、心臓専門医によるクリアランス後、患者は登録され得る。
２０．ｉｒＡＥのリスクを示唆し得る、全身性免疫抑制処置を用いた処置を必要とする重大な自己免疫疾患の進行中または最近（５年以内に）の証拠。以下は除外されない：白斑、回復した小児喘息、ホルモン補充のみを必要とする甲状腺機能低下症、１型糖尿病、または全身治療を必要としない乾癬。
２１．間質性肺疾患、または活性な非感染性肺炎（過去５年間）の既往、または任意の証拠。
２２．拡大のサイズまたはスピードにより、次の４週間以内に胸腔穿刺を必要とする可能性があるベースライン胸部Ｘ線により測定される、中等度から重度の胸水。患者が他のすべての選択／除外基準に合致する場合、既存の胸部チューブは許容可能である。
２３．ヒト免疫不全ウイルスによる管理不能な感染、Ｂ型肝炎もしくはＣ型肝炎感染、または免疫不全の診断。
注：
－ 感染が管理されたＨＩＶ（自然発生的または安定した抗ウイルスレジメンのいずれかで、検出不能なウイルス量および３５０を超えるＣＤ４カウント）患者は許可する。
－ 感染を管理しているＢ型肝炎（ＨｅｐＢｓＡｇ＋）（検出限界未満である血清Ｂ型肝炎ウイルスＤＮＡ ＰＣＲ、かつＢ型肝炎のための抗ウイルス療法を受けている）を有する患者は、許容する。
－ Ｃ型肝炎ウイルス抗体陽性（ＨＣＶ Ａｂ＋）であり、管理された感染（自然治癒、または成功裏な以前の抗ＨＣＶ療法のコースに応答してのいずれかで、ＰＣＲによって検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡ）を有する患者は、許可される。
２４．全身療法を必要とする活動性の感染。
２５．試験薬開始計画から３０日以内の生ワクチンの接種。
２６．登録前２週間以内の大きな外科処置、開放生検、または重大な外傷性損傷。
２７．以前の同種幹細胞移植。
２８．過去３ヶ月以内の腸閉塞、または腸閉塞（治験責任医師の意見による）の高いリスクまたは非経口栄養の現在の必要性。
２９．治験責任医師の意見により、試験参加が患者の最善の利益とならない任意の医学的状態。
３０．抗体治療に起因するアレルギー反応または急性過敏症反応の記録。
３１．治験薬の成分に対する既知のアレルギーまたは過敏性を有する。
３２．研究の要件での参加を妨げる、既知の精神医学的または薬物乱用障害。
３３．臨床施設試験チームのメンバーおよび／またはその近親者。
３４．妊娠中または授乳中の女性。
３５．初回投与前／最初の治療の開始前、本試験期間中、および最後の投与後少なくとも６ヶ月間、高度に有効な避妊法を実施する意思のない、妊娠可能性のある女性＊における継続的な性的活動。極めて有効な避妊手段には、以下が含まれる：
ａ．スクリーニング前に２回以上の月経サイクルで開始される、排卵の阻害に関連する併用（エストロゲンおよびプロゲステロン含有）ホルモン避妊法（経口、膣内、経皮）またはプロゲステロンのみのホルモン避妊法（経口、注射可能、移植可能）の安定した使用；
ｂ．子宮内デバイス（ＩＵＤ）；子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）；
ｃ．卵管結紮術；
ｄ．精管切除されたパートナー（ただし、男性の精管切除されたパートナーは、ＷＯＣＢＰ試験参加者の唯一の性的パートナーであり、その精管切除されたパートナーは、手術の外科的成功の医学的評価を受けていることを条件とする）、および／または
ｅ．性的禁欲†‡
＊ ＷＯＣＢＰは、恒久的に不妊ではない限り、初経後は閉経後になるまで繁殖力のある女性として定義される。永久避妊方法には、子宮摘出術、両側卵管切除術、及び両側卵巣摘出術が含まれる。
閉経後状態は、代替的な医学的原因がなく１２ヶ月間月経がないものとして定義される。閉経後範囲内の高い卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）レベルが、ホルモン避妊法又はホルモン補充療法を使用しない女性における閉経後状態を確認するために使用され得る。しかしながら、１２ヶ月の無月経がない場合、単一のＦＳＨ測定は、閉経後状態の発生を決定するには不十分である。上記の定義は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ（ＣＴＦＧ）のガイダンスに従う。妊娠検査及び避妊は、子宮摘出術又は卵管結紮術が書面で証明できる女性には要求されない。
† 性的禁欲とは、試験治療と関連するリスクのある全期間中に、異性間性交を慎むこととして定義される場合にのみ、高度に有効な方法とみなされる。性的禁欲の信頼性は、臨床試験の持続時間、及び患者の好ましい通常の生活様式に関連して評価される必要がある。
‡ 定期的な禁欲（カレンダー法、症状体温法、排卵後法）、膣外射精（膣外射精）、殺精子剤のみ、および授乳性無月経法（ＬＡＭ）は、許容可能な避妊法ではない。女性用コンドームと男性用コンドームは、一緒には使用されないものとする。
３６．スクリーニング時の重度および／または制御不能な高血圧。抗高血圧薬を受けている患者は、安定的な抗高血圧レジメンを受けていなければならない。
治療：単剤療法（用量、経路、およびスケジュール）
用量漸増および用量拡大コホート：ＲＥＧＮ４０１８は、週一回、または三週間に一回のＩＶ注入により、最大４時間±１５分（フラッシュを含む）にわたって投与される。
１週目（初回用量）および２週目（移行用量）におけるＲＥＧＮ４０１８のＳＣ投与を探索するコホート：ＲＥＧＮ４０１８は、１週目および２週目に週一回のＳＣ注射によって投与される。後続用量（第二の移行用量、および該当する場合、全用量を含む）は、週一回のＩＶ注入により、最大４時間（フラッシュを含む）にわたり投与される。
一連の用量漸増コホートを使用する。ＤＬ４ａを超える漸増スキームは、ＤＬ４およびＤＬ４ａの忍容性に基づいて選択される（以下を参照）。
Figure 2025502061000006
治療：併用療法（用量、経路、およびスケジュール）
すべての併用療法コホートにおけるセミプリマブ：セミプリマブＱ３Ｗ ３５０ｍｇは、３０分間にわたってＩＶ注入により投与される。
用量漸増および用量拡大における併用療法コホートでのＲＥＧＮ４０１８：ＲＥＧＮ４０１８は、週一回の静脈（ＩＶ）注入により、最大４時間±１５分（フラッシュを含む）にわたって投与される。両方の薬剤を同日に投与する場合、セミプリマブを最初に投与する。一連の用量漸増コホートが使用され、一連の用量漸増コホートは、追加の安全性データが収集された後に選択された漸増スキームに依存する。
Figure 2025502061000007
１週目（初回用量）および２週目（移行用量）におけるＲＥＧＮ４０１８のＳＣ投与を探索するコホート：ＲＥＧＮ４０１８（２ｍｇ）は、１週目にＳＣ注射によって投与され、ＲＥＧＮ４０１８（２５ｍｇ）は、２週目に皮下投与される。その後の用量（第二の移行用量、および該当する場合、全用量を含む）は、週一回のＩＶ注入により、最大４時間±１５分（フラッシュを含む）にわたり投与される。三群無作為化用量拡大には、以下が含まれる：ＩＶによりＱ３Ｗ投与されるＲＥＧＮ４０１８（２５０ｍｇ単剤療法）；ＩＶによりＱ３Ｗ投与されるＲＥＧＮ４０１８（８００ｍｇ単剤療法）；およびセミプリマブ（３５０ｍｇ ＩＶ Ｑ３Ｗ）と組み合わせて、ＩＶによりＱ３Ｗ投与されるＲＥＧＮ４０１８（２５０ｍｇまたはセミプリマブと組み合わせた最高耐容用量）。各用量拡大コホートでは、Ｑ３Ｗ投与前、患者は、四週間にわたってＲＥＧＮ４０１８の毎週のステップアップ投与を受ける。
試験評価項目：
用量漸増期の主要評価項目は、用量制限毒性、治療中に発現した有害事象（ＴＥＡＥ；免疫関連有害事象［ｉｒＡＥ］を含む）、重篤なＡＥ（ＳＡＥ）、死亡、検査所見の異常（ＣＴＣＡＥによるグレード３以上）、および単剤療法およびセミプリマブとの併用でのＰＫである。
用量拡大期では、本試験の主要評価項目は、単剤療法およびセミプリマブとの併用の両方で測定されるＯＲＲである。
用量漸増期の副次的評価項目は、固形腫瘍の応答評価基準（ＲＥＳＩＳＴ １．１）に基づくＯＲＲである。
用量拡大期の副次的評価項目は、以下のとおりである：
１）免疫関連、ＳＡＥ、死亡、および検査所見の異常を含むＴＥＡＥ（ＣＴＣＡＥによるグレード３以上）；
２）経時的な血清中のＲＥＧＮ４０１８の濃度；
３）Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ （ＥＯＲＴＣ） Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＱＬＱ）－Ｃ３０ ＧＨＳ／ＱｏＬ ｓｃｏｒｅによって測定されるＱｏＬのベースラインからの変化；
４）ＥＯＲＴＣ ＱＬＱ－Ｃ３０身体機能スコアによって測定される身体機能のベースラインからの変化；
５）卵巣症状および治療尺度（ＭＯＳＴ）－腹部指標スコアによって測定される腹部症状のベースラインからの変化；
６）ＧＨＳ／ＱｏＬ、身体機能、および腹部症状の悪化までの時間；ならびに
７）ＥＱ－５Ｄによって測定されるＱｏＬのベースラインからの変化。
（用量漸増期および用量拡大期の両方における）副次的評価項目は、以下のとおりである：
１）ｉＲＥＣＩＳＴに基づくＯＲＲ、最良総合効果（ＢＯＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、疾患制御率、ＣＲ率、ＲＥＣＩＳＴ １．１およびｉＲＥＣＩＳＴに基づくＰＦＳ、およびＣＡ－１２５応答；ならびに
２）ＲＥＧＮ４０１８およびセミプリマブに対する抗薬物抗体の有無。
手法および評価：
ＲＥＧＮ４０１８単独またはセミプリマブと組み合わせた安全性および忍容性を、ＡＥの臨床評価ならびにバイタルサイン（体温、血圧、脈拍、および呼吸）、身体検査（完全および限定的）、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、心エコー図、胸部ｘ腺、および標準血液学、化学、および尿検査を含む臨床検査評価を含む臨床評価の反復測定によってモニターする。
初回投与（初回用量および／または後続用量）後のサイトカイン放出が、二重特異性抗体および類似の分子で観察されているため、本試験では特定の措置が実施された。これらの措置には、ＤＬ４以上（単剤療法）およびＤＬＣ３以上（併用療法）での１ｍｇの初回用量（サイクル１の１日目）、２０ｍｇの移行用量（サイクル１の８日目）、他の投与日での分割用量の選択肢、選択された用量投与での必要とされる監視、ならびにＩＲＲ／ＣＲＳの管理のための抗ＩＬ－６経路療法（例えば、トシリズマブ）およびコルチコステロイドの使用が含まれる。さらに、安全性モニタリングスキームを、トリガ事象の累積発生率（ｃＴＥ）に基づく停止境界を含めることによって、拡大コホートにおいて実施する。ＴＥ（ｃＴＥ）の推定累積発生率の片側８０％信頼区間の下限が２５％を除外する場合、所与のコホートへの登録を一時停止することができる。例えば、用量漸増コホートおよび拡大コホートの両方からの１１人の患者のうち４人以上の患者がＴＥを経験した場合、登録は一時停止される。治験責任医師と安全性監視委員会との間の協議により、登録を再開することができるかどうか、および再開する場合、ＲＥＧＮ４０１８の同じ用量またはより低い用量においてかが決定される。
角膜および結膜上皮上のＭＵＣ１６の発現のため、ベースラインの眼検査が必要である。
薬物濃度の測定およびＡＤＡ評価のための血液試料が採取される。
血清および血漿試料を、追加のバイオマーカーの分析のために収集する。ＲＥＧＮ４０１８治療曝露、臨床活性、または基礎疾患に関連する探索的予測バイオマーカーおよび薬力学バイオマーカーを、採取された血清、血漿、全血、体液、保存された腫瘍組織、試験中の腫瘍生検組織、腫瘍ＤＮＡ（循環腫瘍ＤＮＡを含む）、および腫瘍ＲＮＡ試料から調査する。
抗腫瘍活性は、ＣＴまたはＭＲＩまたはＰＥＴ－ＣＴ、ならびにパフォーマンス状態および血清ＣＡ－１２５レベルのモニタリングによって評価される。
患者報告アウトカム（ＰＲＯ）は、用量拡大期中に評価される。
統計計画：
用量漸増期：本試験の用量漸増期に対する正式な統計的仮説はない。この期の分析は、本質的に記述的および探索的である。用量漸増期については、ＤＬＴ評価期間中に観察されたＤＬＴを、用量コホート毎に要約する。
用量拡大期：
統計的仮説－各用量拡大コホート（第２期コホートの各無作為化群を含む）について、ＲＥＧＮ４０１８単剤療法またはＲＥＧＮ４０１８／セミプリマブ併用療法で治療された患者は、２５％（Ｈ１）以上のＯＲＲを達成すると仮定する。０．０５の片側アルファ、８５％の出力、および最適な設計を使用して、ステージ１の２０人の患者を含む合計５０人の患者が各コホートに必要とされる。各コホートについて独立して２０人の患者がステージ１に登録されると、ステージ２は、ステージ１に登録された２０人の患者内での治療の最初の６ヶ月間にわたって３人以上の応答者が観察された場合にのみ、登録を開始する。１０％の帰無仮説は、５０人の患者において９人以上の応答が観察された場合に拒否される。確認済みと未確認の応答を組み合わせて、ステージ２に進むために最小数の応答が達成されたかどうかを判断する。
一次効果分析－所定の拡大コホートについては、応答者の数が、サイモンの２段階設計で特定した応答者の最小数以上である場合、治療は、有効で、さらなる調査の価値があるとみなされる。ＯＲＲを、９５％信頼区間と共に、記述統計によって要約する。ＯＲＲについて評価できない安全性解析集団（ＳＡＦ）の患者は、非応答者とみなされる。各拡大コホートについての有効性の統計解析を、実施し、別個に報告する、すなわち、各コホートからの有効性結果および臨床的結論は、他のコホートに影響せず、その逆も同様である。
薬剤曝露、ＡＥ、臨床検査データ、およびバイタルサインを含む安全性観察および測定値を要約する。
予備的結果：
再発性卵巣癌を有する患者におけるヒト初回投与第１期用量漸増試験のＲＥＧＮ４０１８（ウバマタマブ）単剤療法部分からの初期安全性、薬物動態（ＰＫ）、および有効性データを以下に示す。
癌抗原（ＣＡ）－１２５レベルの上昇を伴う再発性の、プラチナ系治療を経験した、および／または不耐性卵巣癌を有する患者に、ＲＥＧＮ４０１８を０．１～８００ｍｇの用量範囲で、毎週静脈内（ＩＶ）投与した。用量漸増は、修正された３＋３（４＋３）設計に従った。用量制限毒性（ＤＬＴ）期間は、２８～３５日であった。最初の二回の投与のステップアップ投与を利用して、薬物曝露の段階的増加を介したサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）のリスクを軽減した。主要評価項目には、安全性およびＰＫが含まれた。副次的評価項目には、固形腫瘍の応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１による客観的奏効率（ＯＲＲ）により判定された予備的有効性が含まれる。
７８人の患者が、試験の第１期部分でＲＥＧＮ４０１８単剤療法を受け、曝露期間の中央値は、１２週間（範囲、０．４～１１７）であった。組織学に基づき、７８名の患者には、７１名（９１．０％）の高グレードの漿液、２名（２．６％）の明細胞、１名（１．３％）の高グレードの類内膜、１名（１．３％）の低グレードの漿液、および３名（３．８％）のその他が含まれた。ＣＡ－１２５ベースライン血清レベルは、１０７～１００００の範囲であり、中央値は７０９Ｕ／ｍＬであった。７８人の患者のうち、２６人（３３％）が内臓転移を有し、３０人（５８％）が＞７５％の腫瘍細胞を有し、２＋ベースラインＭＵＣ１６ ＩＨＣ染色を有した。前治療数の中央値は４．５（範囲、１～１７）であった。最も一般的な治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）は、ＣＲＳ（７３．１％、すべてグレード１～２）および疼痛（８７．２％、ほとんどがグレード１～２）であり、これらは、主に当初のステップアップ投与の１～２週目の間に発生した。最も一般的なグレード≧３のＴＥＡＥは、貧血（２３．１％）および腹部疼痛（１９．２％）であった。２０～８００ｍｇの用量で客観的応答が観察された（ｎ＝５０）。≧１の全用量（ｎ＝４２）を受けている者のＯＲＲは、１４．３％（９５％ ＣＩ ５．４～２８．５）であり、疾患制御率（ＤＣＲ）は、５７．１％（４１．０～７２．３）であった。ベースラインの内臓転移を伴わないこれらのサブセット（ｎ＝２９）では、ＯＲＲは２０．７％（８．０～３９．７）およびＤＣＳは７２．４％（５２．８～８７．３）であった。応答期間中央値は１２．２ヶ月であった。２＋のベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色を有する腫瘍細胞が＞７５％であり、≧２０ｍｇの≧１用量を受けた患者（ｎ＝１３）の探索的解析は、３０．８％（９．１～６１．４）のＯＲＲ、およびＤＣＲ６１．５％（３１．６～８６．１）を示した。２＋のベースラインＭＵＣ１６ ＩＨＣ染色を有する腫瘍細胞が＞７５％である患者の４６．２％が、ＣＡ－１２５応答を示した。血清中ウバマタマブ濃度は、用量比例的に増加し、線形の薬物動態を示した。２０～８００ｍｇの間の安全性または有効性において、決定的な用量応答関係は観察されなかった。
ＲＥＧＮ４０１８安全性プロファイルは許容され、広範な用量範囲にわたって卵巣癌を有するこの重度に前治療された集団における持続的な応答が示された。この解析からのデータは、再発性の、プラチナ系治療を経験した卵巣癌におけるＲＥＧＮ４０１８のさらなる調査を支持する。
第２期では、進行性のプラチナ耐性ＯＣおよび血清ＣＡ－１２５の上昇を有する最大１５０人の患者を、三つのＩＶ群（１：１：１）に無作為化し、ウバマタマブ（ＲＥＧＮ４０１８）２５０ｍｇのＩＶ Ｑ３Ｗもしくは８００ｍｇのＩＶ Ｑ３Ｗを単剤療法として、またはセミプリマブ３５０ｍｇのＱ３Ｗとの併用療法としてウバマタマブ２５０ｍｇのＩＶ Ｑ３Ｗの投与を行う。すべての群は、Ｑ３Ｗ投与に進む前のサイトカイン放出症候群のリスクを制限するために、ウバマタマブ（１週目に１ｍｇ、２週目に２０ｍｇ、ならびに３週目および４週目に全用量）の毎週のステップアップ投与を含む。拡大コホートは、最初の２０人の患者の後に中間解析を伴うサイモンの２段階試験設計を使用する。≧３の部分奏効またはそれよりも良好な任意の群は、５０人の患者に拡大される。
この用量拡大期では、主要評価項目は、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準によって定義される各群に対する客観的奏効率である。副次的評価項目には、奏効期間および無増悪生存期間の評価、ならびに安全性および薬物動態のさらなる評価が含まれる。探索的評価項目には、応答の予測因子としてのベースラインの腫瘍ＭＵＣ１６免疫組織化学的発現および他のバイオマーカーの評価が含まれる。ウバマタマブの生活の質および身体機能への影響も評価する。
一部の事例では、２５０ｍｇの用量は、二つの分画に分割されてもよく、第一の分画は５０ｍｇを含み、第二の分画は２００ｍｇを含む。
実施例１０：再発性卵巣癌を有する患者におけるＲＥＧＮ４０１８の試験からの翻訳的所見
実施例９に詳述した第１期試験において、卵巣癌を有する患者に、ウバマタマブを単剤療法（７８ｐｔｓ）として、または抗ＰＤ－１セミプリマブ（２７ｐｔｓ）と組み合わせて、静脈内投与を行った。第１週（Ｗ）の第一のステップアップ用量を、インビトロサイトカインアッセイ結果に基づいて選択した。マウス腫瘍退縮モデルは、腫瘍成長を抑制するための有効濃度を示唆した。サルの薬物動態（ＰＫ）データを測定して、薬物曝露を予測した。ＣＤ３二重特異性抗体＋セミプリマブのモデルを使用して、セミプリマブ＋ウバマタマブの投与の順序を設定した。用量漸増からの前臨床および臨床ＰＫ、サイトカイン、および有効性データを統合して、用量拡大におけるレジメンを決定した。集団ＰＫモデルにより対象のレジメンをシミュレーションした。
インビトロデータは、０．０１ｍｇ／Ｌおよび≧０．１ｍｇ／Ｌの濃度で、最小および最大サイトカイン放出を示した。データは、０．１～１ｍｇの範囲でＷ１ステップアップ用量を支持し、０．０２～０．３ｍｇ／Ｌの観察されたＣｍａｘをもたらした。患者のすべてのコホートにおけるＷ１でのＣｍａｘ値は、測定から良好に予測された（±３０％以内）。マウス腫瘍退縮モデルからのＰＫデータは、≧２０ｍｇの有効用量でＣｍｉｎ＞４ｍｇ／Ｌと一致する有効濃度（０．５～５０ｍｇ／Ｌ）を示した。ＰＫシミュレーションは、拡大において≧２５０ｍｇ Ｑ３Ｗの試験を支持した。モデルが予測したように、ウバマタマブ単剤療法の導入後にセミプリマブをウバマタマブと組み合わせた場合、有意なサイトカイン放出は発生しなかった。
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際には、本明細書に記載されるものに加えて本発明の様々な修正が、前述の記載から当業者に明らかとなるであろう。そのような修正は、添付される特許請求の範囲内にあることを意図している。
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Figure 2025502061000008

Claims (49)

  1. ＭＵＣ１６発現癌の治療を必要とする対象においてＭＵＣ１６発現癌を治療する方法であって、標的腫瘍細胞上のムチン１６（ＭＵＣ１６）に特異的に結合する第一の抗原結合ドメインと、Ｔ細胞上のヒトＣＤ３に特異的に結合する第二の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗体を前記対象に投与することを含み、前記二重特異性抗体は、前記対象に少なくとも１ｍｇの用量で投与される、方法。
  2. 前記癌が、卵巣癌、卵管癌、または原発性腹膜癌である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記癌が、プラチナ系化学療法に対して耐性がある、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記対象が、以前にプラチナ系化学療法で治療されてた、請求項１または２に記載の方法。
  5. 前記第一の抗原結合ドメインが、以下：
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる、三つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
    （ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる、三つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記第一の抗原結合ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、請求項５に記載の方法。
  7. 前記第一の抗原結合ドメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項５または６に記載の方法。
  8. 前記第一の抗原結合ドメインが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲと、配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲと、を含む、請求項５～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記第二の抗原結合ドメインが、以下：
    （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる、三つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
    （ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる、三つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記第二の抗原結合ドメインが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、請求項９に記載の方法。
  11. 前記第一の抗原結合ドメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項９または１０に記載の方法。
  12. 前記第二の抗原結合ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲと、配列番号２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲと、を含む、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記二重特異性抗体が、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、アイソタイプＩｇＧ１である、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記ヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、アイソタイプＩｇＧ４である、請求項１３に記載の方法。
  16. 前記二重特異性抗体が、同じアイソタイプの野生型ヒンジと比較して、Ｆｃγ受容体結合を減少させるキメラヒンジを含む、請求項１４または１５に記載の方法。
  17. 第一の重鎖または第二の重鎖が、両方ではないが、Ｈ４３５Ｒ（ＥＵナンバリング）修飾およびＹ４３６Ｆ（ＥＵナンバリング）修飾を含むＣＨ３ドメインを含む、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記二重特異性抗体が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む第一の重鎖を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記二重特異性抗体が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む第二の重鎖を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記二重特異性抗体が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む第一の重鎖、配列番号３１のアミノ酸配列を含む第二の重鎖、および配列番号３０のアミノ酸配列を含む共通軽鎖を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記対象が、６０Ｕ／ｍｌ以上の血清ＣＡ－１２５レベルを有する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 第二の治療剤または治療レジメンを投与することを更に含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記第二の治療剤または治療レジメンが、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片が、
    （ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる、三つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
    （ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる、三つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、を含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片が、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記抗ＰＤ－１抗体および抗原結合性断片が、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項２４または２５に記載の方法。
  27. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片が、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記抗ＰＤ－１抗体および抗原結合性断片が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ－１抗体である、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記二重特異性抗体が、分割初回用量を含む投与レジメンで投与される、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記二重特異性抗体が、前記対象に毎週１０ｍｇ～１０００ｍｇの用量で投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記二重特異性抗体が、毎週約２５０ｍｇの用量で前記対象に投与され、任意選択で、前記用量が、約５０ｍｇの第一の分画、および約２００ｍｇの第二の分画に分割される、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記二重特異性抗体が、毎週約８００ｍｇの用量で前記対象に投与され、任意選択で、前記用量が、約５０ｍｇの第一の分画、および約７５０ｍｇの第二の分画に分割される、請求項３０に記載の方法。
  33. 前記二重特異性抗体が、前記対象に三週間に一回１０ｍｇ～１０００ｍｇの用量で投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記二重特異性抗体が、三週間に一回約２５０ｍｇの用量で前記対象に投与され、任意選択で、前記用量が、約５０ｍｇの第一の分画、および約２００ｍｇの第二の分画に分割される、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記二重特異性抗体が、三週間に一回約８００ｍｇの用量で前記対象に投与され、任意選択で、前記用量が、約５０ｍｇの第一の分画および、約７５０ｍｇの第二の分画に分割される、請求項３３に記載の方法。
  36. 前記二重特異性抗体が、（ｉ）１週目に１ｍｇの前記二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約０．５ｍｇの第一の分画および約０．５ｍｇの第二の分画に分割される、（ｉｉ）２週目に２０ｍｇの前記二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約１０ｍｇの第一の分画および約１０ｍｇの第二の分画に分割される、および（ｉｉｉ）３週目に２５０ｍｇの前記二重特異性抗体を投与すること、任意選択で、用量は、約５０ｍｇの第一の分画および約２００ｍｇの第二の分画に分割される、を含む投与レジメンで投与される、請求項３０に記載の方法。
  37. ４週目以降から週に一回、約２５０ｍｇの用量で前記二重特異性抗体を投与することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
  38. ４週目以降から三週間に一回、約２５０ｍｇの用量で前記二重特異性抗体を投与することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
  39. ４週目以降から三週間に一回、約８００ｍｇの用量で前記二重特異性抗体を投与することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
  40. 前記抗ＰＤ－１抗体が、三週間に一回、前記対象に３００ｍｇ～４００ｍｇの用量で投与される、請求項２３～３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記抗ＰＤ－１抗体が、三週間に一回、前記対象に３５０ｍｇの用量で投与される、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記対象が、１～８００ｍｇの用量での少なくとも一週間の前記二重特異性抗体の投与後に、病態安定、部分奏効、または完全奏効を有する、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記対象が、２０～８００ｍｇの用量での少なくとも一週間の前記二重特異性抗体の投与後に、病態安定、部分奏効、または完全奏効を有する、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記二重特異性抗体が、少なくとも４ｍｇ／Ｌの血清濃度を達成するのに十分な用量で前記対象に投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
  45. ＭＵＣ１６が、免疫組織化学染色によって決定されるように、前記対象において腫瘍細胞の≧７５％で高度に発現する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記対象が、
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア２；または
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア２＋；または
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア３；または
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア３＋；または
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア４；または
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア４＋；または
    ・ＭＵＣ１６発現腫瘍においてベースラインＭＵＣ１６免疫組織化学染色スコア５；または
    ・腫瘍細胞の≧５０％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍；または
    ・腫瘍細胞の≧５５％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍；または
    ・腫瘍細胞の≧６０％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍；または
    ・腫瘍細胞の≧６５％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍；または
    ・腫瘍細胞の≧７０％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍；または
    ・腫瘍細胞の≧７５％においてＭＵＣ１６発現を有する腫瘍、を有する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記二重特異性抗体が、静脈内投与される、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記二重特異性抗体が、皮下投与される、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗原結合性断片が、静脈内投与される、請求項２３～４８のいずれか一項に記載の方法。
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