JP2025500889A - 涙腺再生のためのｗｎｔ代替作用物質および方法 - Google Patents

Abstract

ドライアイ障害の処置のための方法および組成物が提供される。特に、本開示は、涙液減少型ドライアイ疾患を処置するために涙液産生腺房細胞の再生を調節するために対象におけるＷＮＴ（ＷｉｎｇｌｅｓｓおよびＩｎｔ－１）シグナル伝達を調節するための方法および組成物を提供する。それらの方法において使用されるＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、さらに開示される。本発明は、例えば、対象における涙腺細胞を再生する方法であって、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターを該対象に投与する工程を含む、方法を提供する。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年１２月１７日に出願された米国特許仮出願第６３／２９１，２４３号の優先権を主張し、その各々はその全体が参照により本明細書に援用される。

（配列表に関する陳述）
本出願に関連する配列表ＸＭＬがＸＭＬファイル形式で提供され、本明細書により参照により本明細書に援用される。その配列表ＸＭＬを含むＸＭＬファイルの名前はＳＲＺＮ＿０２４＿０１ＷＯ＿ＳＴ２６．ｘｍｌである。そのＸＭＬファイルは６１，４２４バイトであり、２０２２年１２月１５日に作成された。そのＸＭＬファイルはＵＳＰＴＯ特許センターを経由して電子的に提出される。

（発明の分野）
本開示は、ＷＮＴシグナルモジュレーター、および種々の眼科関連障害のための処置方法に関する。

（発明の背景）
涙腺は、ほとんどの脊椎動物の上眼瞼の外側側方部分（ｏｕｔｅｒ ｌａｔｅｒａｌ ｐｏｒｔｉｏｎ）の下に位置する外分泌腺である。涙腺は涙膜を産生し、この涙膜は、涙管によって分泌され、眼の健康に関連する。（ＹａｏおよびＺｈａｎｇ、９３９頁を参照のこと）。その涙膜は、角膜表面および眼瞼内側を湿った状態で維持し、角膜上皮および結膜上皮を物理的損傷ならびに免疫反応から保護する。（同書を参照のこと）。

涙腺障害および涙腺損傷は、顕著な眼の疾患病態、特にドライアイ疾患を引き起こし得る。（Ｄａｒｔｔ、Ｏｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ、１０５頁）。ドライアイ疾患は、涙膜の増加した容量オスモル濃度、および眼の表面の炎症によって特徴付けられる。（同書を参照のこと）。涙の不十分な産生は、刺激、疼痛をもたらし得、眼の表面に対する損傷をもたらす可能性があり得る。

以下の主要な２種類のドライアイ疾患が存在する：涙液減少型および蒸発亢進型（ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ）。次に、涙液減少型は、シェーグレン症候群（自己免疫）ドライアイおよび非シェーグレン症候群（非自己免疫）ドライアイに細分類される。

涙液減少型ドライアイの場合、涙腺は頻繁に炎症を起こし、涙液産生腺房細胞の萎縮および細胞死をもたらす。腺房細胞の損失後に、涙産生の問題は悪化して、増強する炎症－萎縮の悪循環をもたらす。したがって、涙腺が、涙液減少型ドライアイ疾患における標的である。

現在、涙液減少型ドライアイ疾患および蒸発亢進型ドライアイ疾患の両方は、眼の表面での人工涙液および／または抗炎症薬の局所投与によって処置される。（同書、１０６頁を参照のこと）。ほんの少数の処置だけが、抗炎症薬、いわゆる分泌促進物質、免疫抑制薬、および性ホルモンの全身投与によって涙腺自体を標的としている。（同書を参照のこと）。これらの処置アプローチのどれも、涙腺（涙液産生腺房細胞を含む）の萎縮および／または損傷に直接対処していない。結果的に、腺房細胞の再生により、内因性涙液産生を回復し、炎症および萎縮の循環を破壊するための、薬剤および方法についての未だ満たされていない大きな必要性が存在する。

（概要）
本明細書は、涙腺および／もしくは涙腺腺房細胞の活性化ならびに／または再生によりドライアイ障害を処置する方法、ならびにそのための組成物を提供する。

一態様において、本発明は、対象における涙腺の腺房細胞、前駆細胞、導管細胞（ｄｕｃｔａｌ ｃｅｌｌ）、筋上皮細胞、または免疫細胞を再生する方法を含み、その方法は、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターをその対象に投与する工程を含む。一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーターであり得る。別の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴアゴニストまたは操作されたＷＮＴスーパーアゴニスト、あるいは操作されたＷＮＴアンタゴニストである。特定の実施形態において、その細胞は上皮幹細胞および／または上皮前駆細胞、例えば、涙腺上皮幹細胞および／または涙腺上皮前駆細胞である。

涙腺腺房細胞を再生する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体を含み得る。任意の実施形態において、その操作されたＷＮＴアゴニストは（ｉ）ＷＮＴ３ａ；（ｉｉ）ＷＮＴ模倣物；または（ｉｉｉ）Ｒ－スポンジン模倣物から選択され得る。そのＷＮＴ模倣物はＳＷＡＰ（商標）化合物であり得る。そのＲ－スポンジン模倣物はＳＷＥＥＴＳ（商標）化合物であり得る。

涙腺腺房細胞を再生する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、ならびにＬｒｐ６、および／またはＬｒｐ５のいずれか１つもしくは複数の発現に影響を与え得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターはＦｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７からなる群のいずれか１つもしくは複数；またはＦｚｄ５およびＦｚｄ８からなる群のいずれか１つもしくは複数を標的とし得、同時にまたＬｒｐ６および／またはＬｒｐ５も標的とし得る。別の例について、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７のいずれか１つまたは複数の発現に影響を与え得る。

涙腺腺房細胞を再生する方法の一実施形態において、その方法は、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ２フラグメント、および操作されたＲＳＰＯ２模倣物からなる群の少なくとも１つを投与する工程をさらに含む。

任意の実施形態においてそのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは≧１ｎＭの濃度であり得る。任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは治療有効量で投与され得る。任意の実施形態において、その対象は、生きている哺乳動物であり得る。任意の実施形態において、その対象はヒト患者であり得る。

別の態様において、本発明は対象における涙腺障害を処置する方法を含み、その方法は、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターをその対象に投与する工程を含む。一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーターであり得る。別の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴアゴニストまたは操作されたＷＮＴアンタゴニストである。さらなる実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴスーパーアゴニストである。

涙腺障害を処置する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体を含み得る。任意の実施形態において、その操作されたＷＮＴアゴニストは（ｉ）ＷＮＴ３ａ；（ｉｉ）ＷＮＴ模倣物；または（ｉｉｉ）Ｒ－スポンジン模倣物から選択され得る。そのＷＮＴ模倣物はＳＷＡＰ（商標）化合物であり得る。そのＲ－スポンジン模倣物はＳＷＥＥＴＳ（商標）化合物であり得る。

涙腺障害を処置する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、ならびにＬｒｐ６、および／またはＬｒｐ５のいずれか１つは複数の発現に影響を与え得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７からなる群のいずれか１つもしくは複数；またはＦｚｄ５およびＦｚｄ８からなる群のいずれか１つもしくは複数を標的とし得、同時にまたＬｒｐ６および／またはＬｒｐ５を標的とし得る。別の例について、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターはＦｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７のいずれか１つまたは複数の発現に影響を与え得る。

涙腺障害を処置する方法の一実施形態において、その方法は、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ２フラグメント、および操作されたＲＳＰＯ２模倣物からなる群の少なくとも１つを投与する工程をさらに含む。

涙腺障害を処置する方法の任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは≧１ｎＭの濃度であり得る。任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは治療有効量で投与され得る。任意の実施形態において、その対象は、生きている哺乳動物であり得る。任意の実施形態において、その対象はヒト患者であり得る。

なお別の態様において、本発明は対象におけるドライアイ障害の処置のための組成物を含み、その組成物はＷＮＴシグナル伝達モジュレーターを含む。その組成物の任意の実施形態において、そのドライアイ障害はシェーグレン症候群障害、慢性移植片対宿主病（ｃＧＨＶＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、スティーブンス・ジョンソン症候群（Ｓｔｅｐｈｅｎ’ｓ Ｊｏｈｎｓｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、眼型酒さ（ｏｃｕｌａｒ ｒｏｓａｃｅａ）、化学療法、放射線腫瘍処置、糖尿病、ループスなどに起因し得る。

その組成物の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体を含み得る。その少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体は、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、ならびにＬｒｐ６、および／またはＬｒｐ５のいずれか１つまたは複数に特異的であり得る。

一実施形態において、その組成物は抗炎症薬または涙腺分泌促進物質をさらに含み得る。

その組成物の任意の実施形態において、その組成物はその構成要素の各々の治療有効量を含み得る。

その組成物の任意の実施形態において、その対象は、生きている哺乳動物であり得る。その組成物の任意の実施形態において、その対象はヒト患者であり得る。

図１は、追加の成長因子を補充したＡｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭにおいて標準的な３次元オルガノイドプロトコルを使用して７日後の初代マウス涙腺組織からのオルガノイド増殖の代表的な光学顕微鏡写真画像を示す。条件としては、Ｒ－スポンジン１（ＲＳＰＯ１）単独を含む基本（Ｂａｓｅ）（対照、左上）、または各々５ｎＭ濃度での種々のＷＮＴ模倣化合物の添加を含む基本が挙げられる。「Ｆ」は、種々のＦＺＤ受容体に結合する種々のＦＺＤ結合物質（例えば、１８Ｒ５－ＦＺＤ１，２，５，７，８結合物質（「Ｆ１２５７８」）；Ｒ２Ｈ１－ＦＺＤ１，２，７結合物質（「Ｆ１２７」）；２９１９－ＦＺＤ５，８結合物質（「Ｆ５８」）；５０６３－ＦＺＤ４結合物質（「Ｆ４」）；およびＨＢ９Ｌ９．３－ＦＺＤ１０結合物質（Ｆ１０））を示し；Ｌは、ＬＲＰ５およびＬＲＰ６に結合するＬＲＰ結合物質（ＹＷ２１１．３１．５７）である。

図２は、涙腺オルガノイド（ｌａｃｒｉｍａｌ ｏｒｇａｎｏｉｄ）の形態（左）、Ｍｉｓｔ１腺房細胞マーカー遺伝子発現（中央）を示す蛍光および合成（右）を示す顕微鏡写真画像を示し、スケールバーは１００μｍである。

図３Ａ～図３Ｃは、対照培地またはＬ６－Ｆ１２５７８ ＷＮＴ模倣化合物を含む培地で７日間増殖させた特性を明らかにした（ｐｒｏｆｉｌｅｄ）オルガノイドにおける、増殖マーカーまたは涙腺由来（ｌａｃｒｉｍａｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ）細胞に特異的なマーカーおよび腺房細胞に特異的なマーカーのいずれかの相対的遺伝子発現を示す棒グラフを示す。測定された遺伝子としては、ＷＮＴ標的Ａｘｉｎ２（図３Ａ）、涙管細胞マーカーＫｒｔ７（図３Ｂ）、および涙腺腺房細胞マーカーＭｉｓｔ１（図３Ｃ）が挙げられる。

図４は、腺房細胞オルガノイド培養物における７日間ＷＮＴ模倣物スクリーニングにおける発光によってオルガノイド増殖を定量化するグラフを示す。出発物質は涙腺腺房細胞オルガノイド細胞であった。培地は、ＲＳＰＯ１単独（対照）、または５ｎＭ濃度のＷＮＴ模倣物の添加を含んだ。

図５は、対照（左パネル）またはＬ６－Ｆ１２５７８（右パネル）におけるＷＮＴ模倣物スクリーニングの終了時のオルガノイドの形態を示す光学顕微鏡写真を示す。高ＷＮＴにおける中実な出芽形態が、初代組織からの増殖で共有され、腺房細胞である正体を示す。スケールバーは２００μｍである。

図６は、ＲＳＰＯ１（５００ｎｇ／ｍＬ）を伴ってかまたは伴わずにいくつかの用量のＬ６－Ｆ１２７ ＷＮＴ模倣物（０．０５ｎＭ～５ｎＭ）で７日間増殖させたオルガノイド細胞における発光（相対的発光量（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｌｉｇｈｔ ｕｎｉｔ）（ＲＬＵ）での）により生存オルガノイド細胞を定量化するグラフを示す。

図７は、曝露後２４時間および４８時間での急性ＷＮＴ標的遺伝子誘導を測定するための実験設計の模式的表示を示す。

図８は、プレーティング後７日目におけるＷＮＴ刺激の時点でのオルガノイド培養物の代表的な光学顕微鏡写真画像を示す。スケールバーは２００μｍである。

図９は、誘導後２４時間（左）および４８時間（右）でのＷＮＴ標的Ａｘｉｎ２発現レベルをｑＰＣＲにより定量化するグラフを示す。種々の条件についての発現が、ａｃｔｉｎＢ発現に対して正規化され、対照（ＷＮＴ模倣物なし）と比較された。

図１０は２つの非ドライアイヒト涙腺の画像を示し、これらが外植片実験で使用された。

図１１Ａおよび図１１Ｂは、解離後（図１１Ａ）および腺房細胞培地で２４時間後（図１１Ｂ）のヒト涙腺細胞培養物の光学顕微鏡写真を示す。図１１Ａおよび図１１Ｂの両方におけるスケールバーは２００μｍである。

図１２は、ＲＳＰＯ１単独（対照）またはＲＳＰＯ１＋５ｎＭ ＷＮＴ模倣物における外植片培養開始後２４時間でのｑＰＣＲによるＡｘｉｎ２発現レベルの定量化を示す。種々の条件についての発現が、ａｃｔｉｎＢ発現に対して正規化され、対照（ＷＮＴ模倣物なし）と比較された。

図１３は、ナイーブマウス涙腺組織においてインサイチュハイブリダイゼーションにより決定したＷＮＴ受容体発現レベルを示す。ピンク色のプローブシグナルを含む光学顕微鏡写真の組織学画像であり、スケールバーは１００μｍである。

図１４は、健常ヒト涙腺組織においてインサイチュハイブリダイゼーションにより決定したＷＮＴ受容体発現レベルを示す。ピンク色のプローブシグナルを含む光学顕微鏡写真の組織学画像であり、スケールバーは１００μｍである。

図１５は、１４日間の曝露（１０ｍｐｋ、ＩＰ、１週間に２回）後に４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）および増殖性細胞のマーカーである抗Ｋｉ６７で染色した（緑色）４つのナイーブマウス涙腺細胞（ｌａｃｒｉｍａｌ ｃｅｌｌ）サンプル：対照（ＲＳＰＯ１だけの）サンプルおよび３つのＷＮＴ模倣物サンプルを示す、カメラベースの蛍光顕微鏡画像を示す。

図１６は、種々のＷＮＴ模倣物（ＷＮＴ模倣物３ｍｐｋ、ＲＳＰＯ２ ０．１ｍｐｋ、ＩＰ、１週間に２回）での１４日間の処置後の涙腺の相対的重量（涙腺重量／体重）を定量化するグラフを示す。図の説明文はグラフにおいて左から右への方向である。

図１７はインビボマウス実験の模式的モデルを示し、その実験では、ドライアイ疾患がＩＬ－１ａの局所注射によってモデル化された。赤色は、組換えＩＬ－１ａおよびＷＮＴ模倣物（または対照の抗ＧＦＰ）が注射される同側を示す。黒色は、対側の対照側を示す。

図１８Ａおよび図１８Ｂは、ＩＬ－１ａ＋ＷＮＴ模倣物、およびＩＬ－１ａ＋抗ＧＦＰに８時間および２４時間曝露した後のＷＮＴ標的遺伝子であるＡｘｉｎ２（図１８Ａ）およびＲｎｆ４３（図１８Ｂ）の発現を定量化するグラフを示す。種々の条件についての発現が、ａｃｔｉｎＢ発現に対して正規化され、対照（ＧＦＰへの８時間の曝露）と比較された。

図１９は、以下の４つの実験条件について５日間の時間経過にわたる同側での平均涙液体積分泌を示す：（１）ＷＮＴ模倣物の局所投与（１０μｇ、涙腺内）；（２）抗ＧＦＰの局所投与（１０μｇ、涙腺内）；（３）ＷＮＴ模倣物の全身投与（２００μｇ、ＩＰ）；および（４）抗ＧＦＰの全身投与（２００μｇ、ＩＰ）。

図２０は、ＩＬ－１ａでの涙腺注射ならびに以下の４つの異なる実験処置条件の３日後のマウスにおける、萎縮／変性の病態スコア付けおよび炎症の病態スコア付けを定量化する棒グラフを示す：（１）ＷＮＴ模倣物の局所投与（１０μｇ、涙腺内）；（２）抗ＧＦＰの局所投与（１０μｇ、涙腺内）；（３）ＷＮＴ模倣物の全身投与（２００μｇ、ＩＰ）；および（４）抗ＧＦＰの全身投与（２００μｇ、ＩＰ）。図の説明文は、各分類について左から右への方向で示されている。

図２１Ａおよび図２１Ｂは、ＩＬ－１ａ＋ＷＮＴ模倣物、およびＩＬ－１ａ＋抗ＧＦＰを注射したマウスに由来するヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染料で染色した涙腺切片の光学顕微鏡写真画像を示す。両方の画像におけるスケールバーは１００μｍである。

図２２は、３ｍｇ／ｋｇのＷＮＴ模倣物で１４日間の週２回の処置の後の唾液腺重量（グラムを単位とする）を示す。図の説明文は、グラフにおいて左から右への方向で示されている。

図２３は、種々のＷＮＴ模倣物の２週間の３ｍｇ／ｋｇでの投与後の唾液腺の組織学を示す。パネルＡは、１４日目における処置群ごとのＨＥ染色による唾液腺の組織学の画像を示す。パネルＢは、１４日目における処置群ごとのＫｉ６７（増殖マーカー）についての茶色での染色を示す。スケールバー ２００ｍｍ。

図２４Ａおよび図２４Ｂは、２週間の１０ｍｇ／ｋｇでの投与後の唾液腺の組織学を示す。図２４Ａは、１４日目における処置群ごとのＨＥ染色による唾液腺の組織学の代表的な画像を示す。図２４Ｂは、処置群ごとのＩｍａｇｅ Ｊによる漿液性腺房面積に対する粘液性腺房面積（白色）の定量化を示す。スケールバー ２００μｍ。

図２５は、種々の濃度でのＲＳＰＯ２－Ｆｃの２週間投与後の唾液腺重量（グラムを単位とする）を示すグラフである。図の説明文は、グラフにおいて左から右への方向で示されている。

図２６Ａおよび図２６Ｂは、マウス唾液腺オルガノイドの増殖を示す。図２６Ａは、ＲＳＰＯ１またはＲＳＰＯ１＋Ｌ－Ｆ１２５７８で処置した７日目における初代組織からの唾液腺オルガノイドの増殖の明視野画像を提示する。スケールバー ２００μｍ。図２６Ｂは、種々のＦＺＤ特異性を有するＷＮＴ模倣物について７日目に細胞生存度として測定した用量依存的なマウス唾液腺オルガノイドの増殖を示す。

図２７は、マウス唾液腺オルガノイドＷＮＴ受容体プロファイルを示す。定量ＰＣＲにより測定したマウス顎下腺オルガノイドにおけるＦｚｄ遺伝子およびＬｒｐ遺伝子の遺伝子発現レベル。

図２８Ａおよび図２８Ｂは、ループス（Ｌｕｐｕｓ）マウス唾液腺に対する処置の効果を示す。図２８Ａは、抗ＧＦＰまたはＬ－Ｆ１２５７８で２週間処置した対照（ＭＲＬ／ＭｐＪ）マウスおよびループス（ＭＲＬ－ｌｐｒ）マウスについての唾液腺重量（グラムを単位とする）を提示する。図２８Ｂは、１４日目におけるループスマウスおよび対照マウスについての処置群ごとのＨＥ染色による唾液腺の組織学の画像を示す。スケールバー ２００μｍ。

図２９は、ＩＬ－１αモデルにおける局所注射の２４時間後のＷＮＴ標的遺伝子Ａｘｉｎ２の発現を示す。すべての処置群は、１０μｇ注射。データは抗ＧＦＰ対照群に対して正規化されている。陽性対照Ｌ－Ｆ１２５７８および１ＳＨ１－０３について有意な増加。

図３０は、ＩＬ－１ａモデルにおける局所注射の２４時間後のＷＮＴ標的遺伝子Ａｘｉｎ２の発現を示す。３種の異なる用量：１０μｇ注射、５０μｇ注射または１５０μｇ注射での、抗ＧＦＰ対照以外のすべての処置群。データは抗ＧＦＰ対照群に対して正規化されている。すべての１ＳＨ１－０３群および高用量１ＳＨ１－２６群について有意な増加。

図３１は、ＩＬ－１ａモデルにおいてフェノールレッド糸を使用した涙液体積測定を示す。データは、１２匹の動物の平均を示す。２日目および３日目にいくつかの処置群において抗ＧＦＰ対照と比較して顕著な涙液体積増加。２日目において、線は、上から下へ、Ｌ－Ｆ１２５７８、１ＳＨ１－０３、１ＳＨ１－３６、１ＳＨ１－２６、および抗ＧＦＰに対応する。

図３２は、ＩＬ－１αモデルにおける局所注射の３日後のＷＮＴ標的遺伝子Ａｘｉｎ２の発現を示す。２種の異なる用量：１０μｇ注射または１５０μｇ注射での１ＳＨ１－０３処置群。データは抗ＧＦＰ対照群に対して正規化されている。３日目の１ＳＨ１－０３高用量におけるＡｘｉｎ２の有意な増加。

図３３は、ＩＬ－１αモデルにおいてフェノールレッドを使用した涙液体積測定を示す。データは、１２匹の動物の平均を示す。２日目、３日目、４日目にいくつかの処置群において抗ＧＦＰ対照と比較して顕著な涙液体積増加。３日目において、線は、上から下に、Ｌ－Ｆ１２５７８、１ＳＨ１－３６、１ＳＨ１－０３、１ＳＨ１－２６、および抗ＧＦＰである。

図３４Ａおよび図３４Ｂは、導管結紮モデルを示す。図３４Ａは、同側（青色）での涙腺導管結紮の模式的表示である。他の側は（対側、赤色）は対照として残した。図３４Ｂは、導管結紮モデルの研究予定表である；３日間の閉鎖、ならびに結紮の除去後に涙液体積測定し、屠殺する（ｔａｋｅ ｄｏｗｎ）。

図３５Ａおよび図３５Ｂは、導管結紮による損傷を示す。図３５Ａは、３日間の導管閉鎖後にフェノールレッド糸を使用した涙液体積測定を示す。結紮は涙液体積の強い減少をもたらし、これは２週間～３週間かけて回復する。０日目において、上の線は対側であり、下の線は同側である。図３５Ｂは、導管結紮後の涙腺の組織学の代表的な画像を示す。７日目のいくつかの萎縮、これは、１４日目および２１日目に対照と比較してゆっくり回復する。

図３６は、導管結紮モデルの３日間の導管閉鎖後の処置における２４時間でのＷＮＴ標的遺伝子Ａｘｉｎ２の発現を示す。２種の異なる用量：１０μｇ注射または１００μｇ注射での処置群。データは抗ＧＦＰ対照群に対して正規化されている。１ＳＨ１－０３および陽性対照Ｌ－Ｆ１２５７８のＡｘｉｎ２の有意な増加。

図３７。３日間の導管閉鎖後にフェノールレッド糸を使用した１週間の涙液体積測定。陽性対照Ｌ－Ｆ１２５７８および１００μｇの１ＳＨ１－０３において７日目に涙液体積の有意な増加。７日目において、線は、上から下へ、Ｌ－Ｆ１２５７８（１０μｇ）、１ＳＨ１－０３（１００μｇ）、１ＳＨ１－０３（１０μｇ）、および抗ＧＦＰである。

図３８は、（図３４からの）導管結紮研究の７日目の同側の腺および対側の腺における増殖性腺房細胞（Ｍｉｓｔ１＋ Ｋｉ６７＋）の定量化を示す。同側および高用量１ＳＨ１－０３の対側における増殖性細胞の増加。各組の棒について、棒は、左から右へ、ＧＦＰ、Ｌ－１２５７８（１０μｇ）、１ＳＨ１－０３（１０μｇ）、および１ＳＨ１－０３（１００μｇ）である。

図３９は、３日間の導管閉鎖後にフェノールレッド糸を使用した２週間の涙液体積測定を示す。陽性対照Ｌ－Ｆ１２５７８および１ＳＨ１－０３において７日目の後に涙液体積の有意な増加。最後の時点で、線は、上から下に、Ｌ－Ｆ１２５７８（１０μｇ）、１ＳＨ１－０３（１００μｇ）、１ＳＨ１－０３（１０μｇ）、および抗ＧＦＰである。

図４０は、（図３９からの）導管結紮研究の１４日目の同側の腺および対側の腺における増殖性腺房細胞（Ｍｉｓｔ１＋ Ｋｉ６７＋）の定量化を示す。同側および高用量１ＳＨ１－０３の対側における増殖性細胞の増加。各組の棒について、棒は、左から右へ、ＧＦＰ、Ｇ２１１－１８Ｒ５、１ＳＨ１－０３（１０μｇ）、および１ＳＨ－０３（１００μｇ）に対応する。

図４１Ａおよび図４１Ｂは、腺房細胞のインビトロ増殖を示す。図４１Ａは、対照または１０ｎＭの１ＳＨ１－０３で処置した涙腺細胞の代表的な画像を示す。１ＳＨ１－０３を使用したＷＮＴ活性化は、７日目により大きなオルガノイドを生じる。図４１Ｂは、対照培地または種々の用量の１ＳＨ１－０３で増殖させた７日目のオルガノイドの細胞生存度の定量化を示す。１ＳＨ１－０３を用いて顕著に多い細胞による用量依存的効果。

図４２は、動物における２週間の全身投与の際の動物における唾液腺増殖の定量化を示す。Ｌ－Ｆ１２５７８の投与は、７日目に、対照群および他の時点と比較して多い増殖性上皮細胞（Ｋｉ６７＋／ＥＣａｄ＋）を有する。各時点について、ビヒクルが左であり、Ｌ－Ｆ１２５７８が右である。各時点について、左の棒はビヒクルであり、右の棒はＬ－Ｆ１２５７８である。

図４３は、動物における２週間の全身投与の際の動物における唾液腺組織重量の定量化を示す。Ｌ－Ｆ１２５７８の投与は、７日目、９日目、１１日目および１４日目に、対照と比較して器官重量を有意に増加させる。各時点について、ビヒクルが左であり、Ｌ－Ｆ１２５７８が右である。各時点について、左の棒はビヒクルであり、右の棒はＬ－Ｆ１２５７８である。

上記の図は例示に過ぎず、本開示の範囲を限定はしないことが、当業者にとっては容易に明らかである。

（詳細な説明）
（Ｉ．定義）
本出願（添付の特許請求の範囲を含む）において使用される場合、「ある（１つの（（ａ）」、「ある（１つの）（ａｎ）」および「その（該）（ｔｈｅ）」などの単数形の語は、そうではないことを文脈が明示しない限りは、その対応する複数の参照を含む。

本明細書において引用されているすべての参考文献は、個々の公開物、特許出願、または特許の各々が参照により援用されると具体的かつ個々に示された場合と同じ程度に、参照により援用される。

分子の「活性」とは、その分子のリガンドまたは受容体への結合、触媒活性、遺伝子発現を刺激する能力、抗原性活性、他の分子の活性の調節などを記述もしくは指し得る。分子の「活性」はまた、細胞間相互作用（例えば、接着）を調節もしくは維持する際の活性、または細胞の構造（例えば、細胞膜もしくは細胞骨格）を維持する際の活性を指し得る。「活性」はまた、比活性、例えば、［触媒活性］／［タンパク質ｍｇ］、または［免疫学的活性］／［タンパク質ｍｇ］などを意味し得る。

本明細書において使用される用語「投与すること」または「導入すること」または「提供すること」とは、細胞、対象の細胞、対象の組織、および／もしくは対象の器官、または対象への、組成物の送達を指す。そのような投与することまたは導入することは、インビボ、インビトロ、またはエクスビボで行われ得る。

本明細書において使用される場合、用語「抗体」とは、抗原エピトープに特異的に結合するために必要な可変領域配列を含む、単離された結合作用物質または組換え結合作用物質を意味する。したがって、抗体は、望ましい生物学的活性（例えば、特定の標的抗原への結合）を示す任意の形態の抗体またはそのフラグメントである。したがって、それは最も広い意味で使用され、具体的にはモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体が挙げられる）、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ナノボディ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ならびに抗体フラグメント（ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、およびＦａｂ２が挙げられるが、それらに限定されない）をそれらが望ましい生物学的活性を示す限りは網羅する。

「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の部分、例えば、そのインタクトな抗体の抗原結合性領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（例えば、Ｚａｐａｔａら．、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７～１０６２（１９９５））；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、２つの同一な抗原結合性フラグメント（「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれ、各々は単一の抗原結合部位を有する）および残りの「Ｆｃ」フラグメント（容易に結晶化する能力を反映する命名）を生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有して依然として抗原に架橋可能である、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。

用語「抗原」とは、選択的結合作用物質（例えば、抗体）によって結合され得、その抗原のエピトープに結合可能な抗体を産生するために動物でさらに使用され得る、分子または分子の部分を指す。特定の実施形態において、結合作用物質（例えば、ＷＮＴ代替分子もしくはその結合領域、またはＷＮＴアンタゴニスト）は、それがタンパク質および／または高分子の複合混合物中にあるその標的抗原を優先的に認識する場合に、抗原に特異的に結合すると言われる。

本明細書において使用される用語「抗原結合性フラグメント」とは、目的の抗原（特に、１つもしくは複数のＦＺＤ受容体、またはＬＲＰ５および／もしくはＬＲＰ６）に結合する、免疫グロブリンの重鎖および／もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、あるいはＶＨＨ／ｓｄＡｂ（シングルドメイン抗体）またはＮａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）（Ｎａｂ）の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、ポリペプチドフラグメントを指す。この点に関して、本明細書において記載されている抗体の抗原結合性フラグメントは、１つもしくは複数のＦＺＤ受容体、またはＬＲＰ５および／もしくはＬＲＰ６に結合する抗体に由来するＶＨおよびＶＬの、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてのＣＤＲを含み得る。

本明細書において使用される場合、用語「生物学的活性」および「生物学的に活性」とは、細胞における特定の生物学的要素に起因する活性を指す。例えば、ＷＮＴアゴニストまたはそのフラグメントもしくはバリアントの「生物学的活性」とは、ＷＮＴシグナルを模倣または増強する能力を指す。別の例として、ポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントの生物学的活性とは、そのポリペプチドまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントが、例えば、結合、酵素活性などのそのネイティブの機能を実行する能力を指す。一部の実施形態において、機能的フラグメントまたは機能的バリアントは、対応するネイティブのタンパク質または核酸の活性の少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも１００％を保持する。第３の例として、遺伝子調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、コザック配列など）の生物学的活性とは、その調節エレメントまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントが、それが作動可能に連結されている遺伝子の発現を調節（すなわち、それぞれ、促進、増強、またはその転写を活性化）する能力を指す。

本明細書において使用される用語「二機能性抗体」とは、１つの抗原部位に対する特異性を有する第１のアームと、別の抗原部位に対する特異性を有する第２のアームとを含む抗体を指し、すなわち、その二機能性抗体は、二重特異性を有する。

「二重特異性抗体」とは、クアドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５（５９３４）：５３７～５４０（１９８３）を参照のこと）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的結合体化（Ｓｔａｅｒｚら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４（６０１２）：６２８～６３１（１９８５）を参照のこと）、またはノブイントゥーホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）アプローチもしくは類似のアプローチ（これはＦｃ領域に変異を導入して（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０（１４）：６４４４～６４４８（１９９３）を参照のこと）複数の異なる免疫グロブリン種を生じ、そのうちの１つだけが機能的二重特異性抗体である）によって作製される、全長抗体を指すために本明細書において使用される。二重特異性抗体は、その２つの結合アーム（１対のＨＣ／ＬＣ）のうちの１つにある１つの抗原（またはエピトープ）に結合し、その第２のアーム（別のＨＣ／ＬＣ対）にある別の抗原（またはエピトープ）に結合する。この定義によって、二重特異性抗体は、（特異性およびＣＤＲ配列の両方において）別個の２つの抗原結合性アームを有し、それが結合する各々の抗原について一価である。

「含む」によって、記載された要素が、例えば、組成物、方法、キットなどに必要とされるが、特許請求の範囲内にあるその、例えば、組成物、方法、キットなどを形成するために他の要素が含まれ得ることが意味される。例えば、プロモーターに作動可能に連結された治療ポリペプチドをコードする遺伝子を「含む」発現カセットは、その遺伝子およびプロモーターに加えて他の要素（例えば、ポリアデニル化配列、エンハンサーエレメント、他の遺伝子、リンカードメインなど）を含み得る発現カセットである。

「から本質的になる」によって、記載された例えば、組成物、方法、キットなどの範囲のその、例えば、組成物、方法、キットなどの基本的で新規な特徴に実質的には影響を与えない特定の物質または工程への限定が意味される。例えば、プロモーターおよびポリアデニル化配列に作動可能に連結された治療ポリペプチドをコードする遺伝子「から本質的になる」発現カセットは、追加の配列（例えば、リンカー配列）を、それらがその遺伝子の転写にも翻訳にも実質的には影響を与えない限り、含み得る。別の例として、記載された配列「から本質的になる」バリアントポリペプチドフラグメントまたは変異体ポリペプチドフラグメントは、それが由来した全長のナイーブポリペプチドに基づいて、記載された配列のアミノ酸配列プラスまたはマイナス約１０アミノ酸残基（例えば、記載された境界のアミノ酸残基よりも１０残基、９残基、８残基、７残基、６残基、５残基、４残基、３残基、２残基もしくは１残基少ない、または記載された境界のアミノ酸残基よりも１残基、２残基、３残基、４残基、５残基、６残基、７残基、８残基、９残基、もしくは１０残基多い）をその配列の境界に有する。

「からなる」によって、その組成物、方法、またはキットからの、特許請求の範囲において特定されていないあらゆる要素、工程、または成分の排除が意味される。例えば、記載された配列「からなる」ポリペプチドまたはポリペプチドドメインは、記載された配列のみを含む。

「制御エレメント」または「制御配列」とは、ポリヌクレオチドの機能的調節（そのポリヌクレオチドの複製、重複、転写、スプライシング、翻訳、または分解が挙げられる）に寄与する分子の相互作用に関与するヌクレオチド配列である。その調節は、そのプロセスの頻度、速度、または特異性に影響を与え得、本質的に増強的または阻害的であり得る。当該分野で公知の制御エレメントとしては、例えば、転写調節配列、例えば、プロモーターおよびエンハンサーが挙げられる。プロモーターとは、特定の条件下で、ＲＮＡポリメラーゼに結合可能であり、そのプロモーターから通常は下流（３’方向）に位置するコード領域の転写を開始可能である、ＤＮＡ領域である。

「発現ベクター」とは、目的とする遺伝子産物をコードする領域を含む、本明細書において議論されているかまたは当該分野で公知であるベクター（例えば、プラスミド、ミニサークル、ウイルスベクター、リポソームなど）であり、意図される標的細胞におけるその遺伝子産物の発現をもたらすために使用される。発現ベクターはまた、その標的におけるその遺伝子産物の発現を促進するためにそのコード領域に作動的に連結された、制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、ｍｉＲＮＡ標的配列など）を含む。発現のために作動可能に連結されている制御エレメントと遺伝子または複数の遺伝子との組合せは、時には、「発現カセット」と呼ばれ、多くの発現カセットが、当該分野で公知であり利用可能であるか、または当該分野で利用可能な構成要素から容易に構築され得る。

本明細書において使用される場合、用語「ＦＲの組」とは、重鎖Ｖ領域または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲの組のＣＤＲを形作る４つの隣接するアミノ酸配列を指す。一部のＦＲ残基は、結合した抗原と接触し得る；しかし、ＦＲは、抗原結合部位へのＶ領域の折り畳みを主に担い、特に、それらのＦＲ残基はそれらのＣＤＲに直接隣接する。ＦＲ内で、特定のアミノ残基および特定の構造的特徴が、非常に高度に保存されている。この点について、すべてのＶ領域配列は、約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含む。それらのＶ領域が結合部位に折り畳まれた場合、それらのＣＤＲが、抗原結合表面を形成する、突出したループモチーフとして提示される。その正確なＣＤＲアミノ酸配列とは無関係に、特定の「古典的」構造へと折り畳まれた形状のＣＤＲループに影響を与える、ＦＲの保存された構造領域が存在することが、一般的に認識されている。さらに、特定のＦＲ残基は、その抗体の重鎖と軽鎖との相互作用を安定化させる非共有結合的ドメイン間接触に関与することが知られている。

用語「個体」、「宿主」、「対象」、および「患者」は本明細書において交換可能に使用され、これらの用語は哺乳動物（ヒトおよび非ヒト霊長類（サルおよびヒトが挙げられる）；哺乳動物のスポーツ用動物（例えば、ウマ）；哺乳動物家畜（例えば、ヒツジ、ヤギなど）；哺乳動物ペット（イヌ、ネコなど）；ならびに齧歯類（例えば、マウス、ラットなど）が挙げられるが、それらに限定されない）を指す。

「ヒト化」抗体またはそのフラグメントとは、ヒトにおいて天然で生成される抗体バリアントに対するその類似性を増加させるためにそのタンパク質配列が改変された、非ヒト種に由来する抗体またはそのフラグメントを指す。「ヒト化」のプロセスは、ヒトへの投与のために開発されたモノクローナル抗体に通常は適用される。

「モノクローナル抗体」とは均質な抗体集団を指し、ここでモノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与するアミノ酸（天然に存在するアミノ酸および天然には存在しないアミノ酸）から構成されている。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一のエピトープに対して指向されている。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体および全長モノクローナル抗体だけではなく、そのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ（ナノボディとしても知られている））、それらのバリアント、モノクローナル抗体の抗原結合性フラグメントを含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性およびエピトープ結合能力の抗原結合性フラグメント（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変型構成（本明細書において開示されているＷＮＴ代替分子が挙げられる）もまた含む。その抗体の供給源または（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物などによって）それが作製される様式に関して、限定されることは意図されない。この用語は、免疫グロブリン全体ならびに「抗体」の定義の下で上記されたフラグメントなどを含む。

本明細書において使用される用語「ネイティブ」または「野生型」とは、野生型の細胞、組織、器官、または生物に存在する、ヌクレオチド配列（例えば、遺伝子、もしくは遺伝子産物、例えば、ＲＮＡもしくはタンパク質）を指す。本明細書において使用される用語「バリアント」とは、参照ポリヌクレオチド配列または参照ポリペプチド配列（例えば、ネイティブポリヌクレオチド配列またはネイティブポリペプチド配列）の変異体を指し、すなわち、その参照ポリヌクレオチド配列または参照ポリペプチド配列と１００％未満の配列同一性を有する。別の言い方で言えば、バリアントは、参照ポリヌクレオチド配列（例えば、ネイティブポリヌクレオチド配列またはネイティブポリペプチド配列）と比較して少なくとも１アミノ酸の差（例えば、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失）を含む。例えば、バリアントは、全長ネイティブポリヌクレオチド配列と５０％以上、６０％以上、または７０％以上の配列同一性（例えば、その全長ネイティブポリヌクレオチド配列と７５％もしくは８０％以上、例えば、８５％、９０％、もしくは９５％以上の同一性、例えば、９８％もしくは９９％の同一性）を有するポリヌクレオチドであり得る。別の例として、バリアントは、全長ネイティブポリペプチド配列と７０％以上の配列同一性（例えば、その全長ネイティブポリペプチド配列と７５％もしくは８０％以上、例えば、８５％、９０％、もしくは９５％以上の同一性、例えば、９８％もしくは９９％の同一性）を有するポリペプチドであり得る。バリアントはまた、参照（例えば、ネイティブ）配列のフラグメントと７０％以上の配列同一性（例えば、そのネイティブ配列と７５％もしくは８０％以上、例えば、８５％、９０％、もしくは９５％以上の同一性、例えば、９８％もしくは９９％の同一性）を共有する、その参照（例えば、ネイティブ）配列のバリアントフラグメントを含み得る。

「作動的に連結された」または「作動可能に連結された」とは遺伝エレメントの並置を指し、その並置において、それらのエレメントは、それらが期待される様式で作動することを可能にする関係にある。例えば、プロモーターは、そのプロモーターがコード配列の転写を開始するのを補助する場合に、そのコード領域に作動的に連結されている。そのプロモーターとコード領域との間には、この機能的関係が維持される限りは、介在残基が存在し得る。

本明細書において使用される場合、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」とは、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指す。この用語はまた、（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、リン酸化、または標識構成要素との結合体化を含むように）改変された、アミノ酸ポリマーを含む。

用語「ポリヌクレオチド」とは、任意の長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはそれらのアナログが挙げられる）のポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、改変型ヌクレオチド（例えば、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログ）を含み得、非ヌクレオチド構成要素によって中断され得る。存在する場合、そのヌクレオチド構造に対する改変は、そのポリマーのアセンブリの前または後に加えられ得る。本明細書において使用されるポリヌクレオチドという用語は、二本鎖分子と一本鎖分子とを交換可能に指す。特に特定も要求もされない限りは、ポリヌクレオチドである本明細書において記載されている発明のあらゆる実施形態は、その二本鎖形態と、その二本鎖形態を構成することが知られているかまたは予測される２つの相補的一本鎖形態の各々との両方を含む。

ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対する特定の「配列同一性」パーセントを有し、このことは、整列された場合に、そのパーセンテージの塩基またはアミノ酸が、その２つの配列を比較した場合に同じであることを意味する。２つ以上の核酸配列またはポリペプチド配列の文脈で使用される場合の用語「同一」または「同一性」とは、目的の配列中と参照配列中とで同じである残基の数またはパーセンテージを指す。そのパーセンテージは、目的の配列を参照配列に対して最適に整列させること；その２つの配列をその参照配列の長さ全体にわたって比較すること；両方の配列において同一のアミノ酸残基または核酸塩基が存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得ること；その整列を作製する際にその参照配列に導入したギャップ位置の数を追加することにより調節したその参照配列中の位置の総数によって、一致した位置の数を除算すること；およびその結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを得ることによって、算出され得る。ＤＮＡとＲＮＡとを比較する場合、チミン（Ｔ）とウラシル（Ｕ）とは等価であると考えられ得る。配列「同一性」は、２つの配列をブラスト解析するためのスタンドアローン実行可能ＢＬＡＳＴエンジンプログラム（ｂｌ２ｓｅｑ）をそのデフォルトパラメータを用いて使用することによって決定され得、このプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のｆｔｐサイト、またはｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／のワールドワイドウェブから検索され得る（ＴａｔｕｓｏｖａおよびＭａｄｄｅｎ、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．、１９９９、１７４、２４７～２５０（これはその全体が参照により本明細書に援用される））。

本明細書において使用される「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼへの結合を誘導し、それによりＲＮＡ合成を促進するＤＮＡ配列、すなわち、転写を誘導するのに十分な最小配列を含む。プロモーターおよび対応するタンパク質またはポリペプチドの発現は遍在的であり得、これは、広範囲の細胞、組織、および種において強力に活性であること、または細胞型特異的、組織特異的、または種特異的であることを意味する。プロモーターは「構成的」（これは継続的に活性であることを意味する）であり得、または「誘導性」（これは、そのプロモーターが生物要因または非生物要因の有無によって活性化または不活性化され得ることを意味する）であり得る。そのプロモーター配列と連続的であってもよく連続的でなくてもよいエンハンサー配列もまた、本発明の核酸構築物またはベクターに含まれる。エンハンサー配列はプロモーター依存的遺伝子発現に影響を与え、エンハンサー配列はそのネイティブ遺伝子の５’領域または３’領域に位置し得る。

ポリヌクレオチドに適用される「組換え」とは、そのポリヌクレオチドがクローニング工程、制限工程または連結工程、および天然で見出されるポリヌクレオチドとは異なる構築物を生じる他の手順の種々の組合せの産物であることを意味する。

本明細書において使用される場合、「シェーグレン（Ｓｊｏｅｇｒｅｎ’ｓ）症候群」または「シェーグレン（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ）症候群とは、Ｖｉｔａｌｉら（２００２）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６１：５５４に記載されるような通例の国際的診断基準にしたがって定義される、涙腺および唾液腺を冒す慢性自己免疫疾患である。シェーグレン症候群は、涙液減少型ドライアイ疾患の２つの主要なサブクラスのうちの１つであり、非シェーグレン症候群型とは区別される。

本明細書において使用される場合、「ＳＷＡＰ（商標）」（Ｓｕｒｒｏｚｅｎ ＷＮＴシグナル活性化タンパク質）とは、標的組織（例えば、涙腺組織）における古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を、ＷＮＴタンパク質と同様に、直接活性化する操作された二重特異性全長免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体を含む、ＷＮＴ模倣化合物を指す。

本明細書において使用される場合、「ＳＷＥＥＴＳ（商標）」（組織特異性について操作されたＳｕｒｒｏｚｅｎ ＷＮＴシグナルエンハンサー）とは、ＵＳ２０２０００４８３２４において記載されているとおりの抗体ベースのＲ－スポンジン模倣化合物を指す。

用語「処置」、「処置すること」などは、望ましい薬理学的および／または生理学的効果を得ることを一般的に意味するために本明細書において使用される。その効果は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防すること（例えば、対象においてその疾患もしくはその症状が発症する可能性を減少させること）に関して予防的であり得、ならびに／または疾患および／もしくはその疾患に起因する有害作用についての部分的もしくは完全な治癒に関して治療的であり得る。本明細書において使用される「処置」は哺乳動物における疾患のあらゆる処置を網羅し、その「処置」としては以下が挙げられる：（ａ）その疾患を阻害すること、すなわち、その発生を停止もしくは遅延化させること；あるいは（ｂ）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の後退もしくは減少を引き起こすこと、またはその疾患の重症度を減少させること。治療剤は、疾患または損傷の発生前、発生中、もしくは発生後に、投与され得る。進行中の疾患の処置は、その処置が患者の望ましくない臨床的症状を安定化または減少させる場合は、特に興味深い。そのような処置は、望ましくは、罹患した組織における完全な機能喪失の前に実施される。その治療は、望ましくは、その疾患の症候性段階中に、一部の場合ではその疾患の症候性段階後に、投与される。

本発明の実施は、特に示さない限りは、細胞生物学、分子生物学技術、微生物学、生化学および免疫学の従来技術を使用し、それらは当業者の範囲内にある。そのような技術は、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（Ｊ．Ｍ． ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；「ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ」（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；ならびに「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）（これらの各々は本明細書に参照により明示的に援用される）などの文献において十分に説明されている。

本発明のいくつかの態様が、例証のために例示的適用を参照して以下に記載される。多数の具体的な詳細、関係、および方法が、本発明の十分な理解を提供するために示されることが、理解されるべきである。しかし、関連分野の当業者は、本発明がそれらの具体的な詳細のうちの１つもしくは複数を用いずに、または他の方法を用いて、実施され得ることを、容易に認識する。本発明は、行為または事象についての例示された順序によって限定されない。その理由は、一部の行為は別の順序で、かつ／または他の行為もしくは事象と同時に、存在し得るからである。さらに、例示されたすべての行為または事象が本発明にしたがって方法を実施するために必要とされるわけではない。

本明細書において使用される用語法は特定の実施形態を記載することのみを目的とし、本発明を限定するものであることは意図されない。本明細書において使用される場合、単数形「ある（１つの）（ａ）」、「ある（１つの）（ａｎ）」および「その（該）（ｔｈｅ）」は、そうではないことを文脈が明示しない限りは、その複数形もまた含むことが意図される。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（用いる）（伴う）（ｗｉｔｈ）」、またはそれらの変化形が詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかにおいて使用される範囲の限り、そのような用語は用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同様な様式で包括的であることが意図される。

用語「約」または「およそ」は当業者によって決定されるとおりの特定の値について許容可能な誤差の範囲内を意味し、それは、その値が測定または決定される方法（すなわち、その測定システムの限界）に部分的には依存する。例えば、「約」は、当該分野における実務にしたがって１標準偏差以内または１よりも大きい標準偏差以内を意味し得る。あるいは，「約」は、所定の値の２０％まで、好ましくは１０％まで、より好ましくは５％まで、より好ましくは１％までもの範囲を意味し得る。あるいは、特に生物学的システムまたは生物学的プロセスに関して、この用語は、ある値の１桁の範囲内、好ましくは５倍の範囲内、より好ましくは２倍の範囲内を意味し得る。特定の値が本出願および特許請求の範囲において記載される場合、特に反対の記載がない限りは、用語「約」はその特定の値について許容可能な誤差範囲内を意味することが、想定されるべきである。

本明細書において言及されているすべての公開物は、関連してその公開物が引用される方法および／または材料を開示および記載するために参照により本明細書に援用される。本開示は、矛盾が存在する範囲では援用されている公開物のあらゆる開示に優先することが理解される。

特許請求の範囲はあらゆる任意選択要素を排除するように起草され得ることが、さらに留意される。したがって、この陳述は、請求項の要素の記載に関する「のみ（ｓｏｌｅｌｙ）」、「だけ（ｏｎｌｙ）」などのような排他的用語法の使用、または「否定的」限定の使用について、先行詞として役立つことが意図される。

特に示されない限り、本明細書において使用されるすべての用語は、それらが当業者に対して有するのと同じ意味を有し、本発明の実施は、微生物学および組換えＤＮＡ技術の従来技術を使用し、それらは当業者の知識の範囲内にある。

（ＩＩ．概説）
本発明は、シェーグレン症候群障害、慢性移植片対宿主病（ｃＧＨＶＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼型酒さ、化学療法、放射線腫瘍処置、糖尿病、酒さ（ｒｏａｓａｃｅａ）、ループスなど（が挙げられるが、これらに限定されない）に起因する涙腺障害を処置するためにＷＮＴシグナルを調節する方法を提供する。

ＷＮＴ（「Ｗｉｎｇｌｅｓｓ関連組込み部位」または「ＷｉｎｇｌｅｓｓおよびＩｎｔ－１」または「Ｗｉｎｇｌｅｓｓ－Ｉｎｔ」）リガンドおよびそれらのシグナルは、多くの必須器官ならびに必須組織（骨、肝臓、皮膚、胃、腸、腎臓、中枢神経系、乳腺、味蕾、卵巣、蝸牛、肺、および多くの組織が挙げられる）の発生、ホメオスタシスおよび再生の制御において重要な役割を果たす（例えば、Ｃｌｅｖｅｒｓ、Ｌｏｈ、およびＮｕｓｓｅ、２０１４；３４６：１２４８０１２によって概説されている）。ＷＮＴシグナル伝達経路の調節は、変性疾患および組織損傷の処置について可能性を有する。

治療法としてＷＮＴシグナル伝達を調節することについての困難の一つは、複数のＷＮＴリガンドおよびＷＮＴ受容体のＦｒｉｚｚｌｅｄ １～Ｆｒｉｚｚｌｅｄ １０（Ｆｚｄ１～Ｆｚｄ１０）の存在であり、多くの組織が複数の重複するＦｚｄを発現する。古典的ＷＮＴシグナルはまた、Ｆｚｄに加えて、共受容体としての低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体関連タンパク質５（ＬＲＰ５）または低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体関連タンパク質６（ＬＲＰ６）にも関連し、これらは種々の組織において広範に発現される。Ｒ－スポンジン１～Ｒ－スポンジン４は、ＷＮＴシグナルを増幅するリガンドのファミリーである。これらのＲ－スポンジンの各々は、一方の端部にＺｉｎｃおよびＲｉｎｇフィンガー３（ＺＮＲＦ３）またはＲｉｎｇフィンガータンパク質４３（ＲＮＦ４３）を含みもう一方の端部にロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質共役受容体４～６（ＬＧＲ４～ＬＧＲ６）を含む受容体複合体を通じて、機能する（例えば、ＫｎｉｇｈｔおよびＨａｎｋｅｎｓｏｎ、２０１４、Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ．３７：１５７～１６１によって概説されている）。Ｒ－スポンジンはまた、追加の作用機構を通じて機能し得る。ＺＮＲＦ３およびＲＮＦ４３は、分解のためにＷＮＴ受容体（Ｆｚｄ１～Ｆｚｄ１０およびＬＲＰ５またはＬＲＰ６）を特異的に標的とする、２つの膜結合型Ｅ３リガーゼである。ＺＮＲＦ３／ＲＮＦ４３およびＬＧＲ４～ＬＧＲ６へのＲ－スポンジンの結合はその三元複合体の除去または隔離を引き起こし、これはＥ３リガーゼをＷＮＴ受容体から除去してＷＮＴ受容体を安定化させて、増強したＷＮＴシグナルをもたらす。各Ｒ－スポンジンは２つのＦｕｒｉｎドメイン（１および２）を含み、Ｆｕｒｉｎドメイン１はＺＮＲＦ３／ＲＮＦ４３に結合し、Ｆｕｒｉｎドメイン２はＬＧＲ４～ＬＧＲ６に結合する。Ｆｕｒｉｎドメイン１および２を含むＲ－スポンジンフラグメントは、ＷＮＴシグナル伝達を増幅するのに十分である。Ｒ－スポンジンの効果はＷＮＴシグナルに依存するが、ＬＧＲ４～ＬＧＲ６およびＺＮＲＦ３／ＲＮＦ４３の両方は種々の組織で広範に発現されるので、Ｒ－スポンジンの効果は組織特異的ではない。

ＷＮＴシグナル伝達をＷＮＴアゴニストによって活性化することが、種々の涙腺疾患および涙腺障害（ドライアイ疾患が挙げられる）の処置のために使用され得る。同様に、ＷＮＴシグナル伝達をＲＳＰＯまたはＲＳＰＯ模倣物によって増幅することが、種々の涙腺疾患および涙腺障害（種々のドライアイ疾患および唾液腺疾患が挙げられる）の処置のために使用され得る。ＷＮＴアゴニスト分子はまた、ドライアイ障害および唾液腺障害の処置のためにも使用され得る。特に、活性なＷＮＴシグナル伝達は、主要な幹細胞維持シグナルを提供し得、例えば、唾液腺において、腺房細胞の再生を調節することにおいて重要な役割を果たす。

（ＩＩＩ．操作されたＷＮＴアゴニスト）
本開示は操作されたＷＮＴアゴニストを提供し、本開示は、例えば、古典的ＷＮＴ／β－カテニンシグナル伝達経路を通じて、ＷＮＴシグナル伝達を刺激し、作動させ、または促進するための操作されたＷＮＴアゴニストの使用を企図する。そのような操作されたＷＮＴアゴニストはまた、ＷＮＴ／β－カテニンシグナル伝達アゴニストまたはＷｎｔ模倣物とも呼ばれ得る。

本開示は、薬物様特性を有する操作されたＷｎｔ模倣物を提供し、特に、ＦｚｄとＬｒｐとを合わせてシグナル伝達を刺激して内在性Ｗｎｔリガンドを模倣する組換え形態である二重特異性抗体を提供する。本開示のＷｎｔ模倣物は、自由に拡散し得、損傷した組織に接近し得、Ｗｎｔシグナルが必要とされる組織修復を導き得る。本開示はまた、ＲＳＰＯと組み合わされることなく、損傷した涙腺組織または唾液腺組織を修復可能なＷｎｔ模倣物を提供する。

一部の実施形態において、そのＷＮＴ／β－カテニンシグナル伝達アンタゴニストまたはＷＮＴ／β－カテニンシグナル伝達アゴニストは、１つもしくは複数のＦＺＤ受容体に結合してＷＮＴシグナル伝達を阻害もしくは増強する、結合作用物質またはエピトープ結合ドメインを含み得る。特定の実施形態において、その作用物質または抗体は、それが結合するヒトｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体内のシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）に特異的に結合する。さらに、ＬＲＰに対するエピトープ結合ドメインを含むアンタゴニスト性結合作用物質もまた、使用され得る。一部の実施形態において、そのＷＮＴ／β－カテニンアンタゴニストは、Ｅ３リガーゼＺＮＲＦ３／ＲＮＦ４３と１つもしくは複数のＦＺＤ受容体または１つもしくは複数のＬＲＰ共受容体とに結合してＦＺＤ受容体またはＬＲＰ受容体の分解を促進する、結合作用物質またはエピトープ結合ドメインを保有し、この分子はまた、標的化のために細胞型特異的エピトープに結合する結合ドメインも含み得る。そのＥ３リガーゼアゴニスト抗体またはそのフラグメントは、単一の分子であってもよく、または他のＷＮＴアンタゴニスト（例えば、ＦＺＤ受容体アンタゴニスト、ＬＲＰ受容体アンタゴニストなど）と組み合わせられてもよい。

当該分野で周知であるとおり、抗体は、それ自体の可変領域に位置する少なくとも１つのエピトープ結合ドメインを通じて標的（例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなど）に特異的に結合可能な免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、この用語は、インタクトなポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけでなく、エピトープ結合ドメインを含むそれらのフラグメント（例えば、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、単鎖（ｓｃＦｖ）、ＶＨＨ（すなわち、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標））またはシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＤＶＤ－Ｉｇ（Ｆｖ－Ｉｇとしても知られている）、それらの合成バリアント、天然に存在するバリアント、エピトープ結合ドメインを含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および抗原結合部位または必要とされる特異性のフラグメント（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変型構成を含む。遺伝子融合によって構築された多価フラグメントまたは多重特異性フラグメントである「ダイアボディ」（ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０、６４４４～６４４８、１９９３）もまた、本明細書において企図される抗体の特定の形態である。ＣＨ３ドメインに結合されたｓｃＦｖを含むミニボディもまた、本明細書に含まれる（Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５６、３０５５～３０６１、１９９６）。例えば、Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１、５４４～５４６（１９８９）；Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２、４２３～４２６、１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５，５８７９～５８８３、１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５；ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０、６４４４～６４４８、１９９３；Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１４、１２３９～１２４５、１９９６；Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５６、３０５５～３０６１、１９９６；Ｃ．Ｂｅｖｅｒら、Ａｎａｌ Ｂｉｏａｎａｌ Ｃｈｅｍ．、２０１６年９月；４０８（２２）；５９８５～６００２を参照のこと。

タンパク質分解酵素であるパパインは、ＩｇＧ分子を優先的に切断していくつかのフラグメントを生じ、それらのフラグメントのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）フラグメント）は各々、インタクトな抗原結合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。ペプシンという酵素は、ＩｇＧ分子を切断していくつかのフラグメントを提供可能であり、それらのフラグメントは、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む。本開示の特定の実施形態にしたがう使用のためのＦｖフラグメントは、ＩｇＭ免疫グロブリン分子の優先的なタンパク質分解性切断によって作製され得、まれにＩｇＧ免疫グロブリン分子またはＩｇＡ免疫グロブリン分子のタンパク質分解性切断によって作製され得る。しかし、Ｆｖフラグメントは、より一般的には、当該分野で公知の組換え技術を使用して誘導される。そのＦｖフラグメントは、ネイティブ抗体分子の抗原認識能力および抗原結合能力の多くを保持する抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒら（１９７２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、６９：２６５９～２６６２；Ｈｏｃｈｍａｎら（１９７６）Ｂｉｏｃｈｅｍ、１５：２７０６～２７１０；およびＥｈｒｌｉｃｈら（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９：４０９１～４０９６。

特定の実施形態において、単鎖Ｆｖ抗体またはｓｃＦＶ抗体が企図される。例えば、Ｋａｐｐａボディ（Ｉｌｌら、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．、１０：９４９～５７（１９９７））；ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎら、ＥＭＢＯ Ｊ、１３：５３０５～９（１９９４））；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：６４４４～８（１９９３））；またはＪａｎｕｓｉｎ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ、１０：３６５５～５９（１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、補遺７：５１～５２（１９９２））が、望ましい特異性を有する抗体を選択することに関して本出願の技術にしたがって標準的分子生物学技術を使用して調製され得る。さらに他の実施形態において、本開示のリガンドを含む二重特異性抗体またはキメラ抗体が、作製され得る。例えば、キメラ抗体は異なる抗体に由来するＣＤＲとフレームワーク領域とを含み得るが、１つの結合ドメインを通じて１つまたは複数のＦＺＤ受容体に特異的に結合し、第２の結合ドメインを通じて第２の分子に特異的に結合する、二重特異性抗体が作製され得る。これらの抗体は、組換え分子生物学的技術を通じて作製され得、または物理的に一緒に結合体化され得る。

単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ポリペプチドは共有結合されたＶＨ：ＶＬヘテロ二量体であり、これは、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨコード遺伝子とＶＬコード遺伝子とを含む遺伝子融合物から発現される。Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５（１６）：５８７９～５８８３。抗体Ｖ領域に由来する天然で凝集した（が化学的に分離された）ポリペプチド軽鎖およびポリペプチド重鎖をｓｃＦｖ分子へと変換するための化学構造を識別するための多くの方法が記載されており、そのｓｃＦｖ分子は、抗原結合部位の構造に実質的に類似する３次元構造へと折り畳まれる。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらの米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号、ならびにＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと。

特定の実施形態において、本明細書において記載されている抗体は、ダイアボディの形態である。ダイアボディはポリペプチドの多量体であり、各ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、それらの２つのドメインは（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが、抗原結合部位を形成するように互いに会合することは不可能であり：抗原結合部位は、その多量体内の１つのポリペプチドの第１のドメインとその多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの会合によって形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。

抗体のｄＡｂフラグメントはＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４～５４６）。

二重特異性抗体が使用される場合、これらは従来の二重特異性抗体であり、それらは種々の様式で製造（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．およびＷｉｎｔｅｒ Ｇ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、４、４４６～４４９（１９９３））（例えば、化学的にもしくはハイブリッドハイブリドーマから調製）され得、または上記の二重特異性抗体フラグメントのいずれかであり得る。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、Ｆｃ領域を含まずに可変ドメインのみを使用して構築され得、抗イディオタイプ反応の影響を減少させる可能性があり得る。

二重特異性ダイアボディはまた、それらは容易に構築され得てＥ．ｃｏｌｉで発現され得るので、二重特異性抗体全体とは対照的に、特に有用である。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体フラグメントなどの他の多くのポリペプチド）は、ファージディスプレイ（ＷＯ９４／１３８０４）を使用してライブラリーから容易に選択され得る。そのダイアボディの一方のアームが、例えば、抗原Ｘに対する特異性を有して、一定で維持される場合、もう一方のアームが変化したライブラリーが作製され得、適切な特異性の抗体が選択され得る。二重特異性抗体全体は、ノブイントゥーホール操作によって作製され得る（Ｊ．Ｂ．Ｂ．Ｒｉｄｇｅｗａｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、９、６１６～６２１（１９９６））。

特定の実施形態において、本明細書において記載されている抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供され得る。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ、Ｕｔｒｅｃｈｔ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを参照のこと；例えば、ＵＳ２００９／０２２６４２１もまた参照のこと）。この知的所有権のある抗体技術は、現在の小さい抗体形式よりも長い治療ウインドウ（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｗｉｎｄｏｗ）が予期される安定でより小さい抗体形式を作製する。ＩｇＧ４抗体は、不活性であると考えられており、したがって、免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体はその抗体のヒンジ領域を除去することによって改変され得て、対応するインタクトなＩｇＧ４と比較して別個の安定性特性を有する半分子フラグメントを生じ得る（ＧｅｎＭａｂ、Ｕｔｒｅｃｈｔ）。そのＩｇＧ４分子を半分にすると、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）上には同族抗原（例えば、疾患標的）に結合し得るただ１つの領域が残り、したがって、そのＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は標的細胞上の１つの部位だけに一価的に結合する。

特定の実施形態において、本明細書において記載されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは重鎖ＣＤＲの組および軽鎖ＣＤＲの組を含み、これらはそれぞれ、重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）の組の間および軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）の組の間に挿入されており、これらは、それらのＣＤＲに対する支持を提供しそれらのＣＤＲの互いに対する空間関係を規定する。本明細書において使用される場合、用語「ＣＤＲの組」とは、重鎖Ｖ領域または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域を指す。重鎖または軽鎖のＮ末端から始めて、これらの領域は、それぞれ「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と表される。したがって、抗原結合部位は６つのＣＤＲを含み、これらのＣＤＲは、重鎖Ｖ領域および軽鎖Ｖ領域の各々に由来するＣＤＲの組を含む。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書において「分子認識単位」と呼ばれる。多くの抗原－抗体複合体の結晶解析は、ＣＤＲのアミノ酸残基は結合している抗原との広範囲の接触を形成し、その最も広範囲の抗原接触は重鎖ＣＤＲ３との接触であることを実証している。したがって、それらの分子認識単位は、抗原結合部位の特異性を主に担う。

本明細書において使用される場合、用語「ＦＲの組」とは、重鎖Ｖ領域または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲの組のＣＤＲを形作る４つの隣接するアミノ酸配列を指す。一部のＦＲ残基は、結合している抗原と接触し得る；しかし、ＦＲは、抗原結合部位へのＶ領域の折り畳みを主に担い、特に、それらのＦＲ残基はそれらのＣＤＲに直接隣接する。ＦＲ内で、特定のアミノ残基および特定の構造的特徴が、非常に高度に保存されている。この点について、すべてのＶ領域配列は、約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含む。それらのＶ領域が結合部位に折り畳まれた場合、それらのＣＤＲが、抗原結合表面を形成する、突出したループモチーフとして提示される。その正確なＣＤＲアミノ酸配列とは無関係に、特定の「古典的」構造へと折り畳まれた形状のＣＤＲループに影響を与える、ＦＲの保存された構造領域が存在することが、一般的に認識されている。さらに、特定のＦＲ残基は、その抗体の重鎖と軽鎖との相互作用を安定化させる非共有結合的ドメイン間接触に関与することが知られている。

「モノクローナル抗体」とは均質な抗体集団を指し、ここでモノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与するアミノ酸（天然に存在するアミノ酸および天然には存在しないアミノ酸）から構成されている。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一のエピトープに対して指向されている。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体および全長モノクローナル抗体だけではなく、そのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）、それらのバリアント、モノクローナル抗体の抗原結合性フラグメントを含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性およびエピトープ結合能力の抗原結合性フラグメント（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変型構成（本明細書において開示されているＷＮＴ代替分子が挙げられる）もまた含む。その抗体の供給源または（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物などによって）それが作製される様式に関して、限定されることは意図されない。この用語は、免疫グロブリン全体ならびに「抗体」の定義の下で上記されたフラグメントなどを含む。

特定の実施形態において、本開示の抗体は、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）の形態を採り得る。ｓｄＡｂ技術は、元々は、ラクダ科動物（例えば、ラクダ、アルパカ、およびラマ）が、重鎖だけからなり、したがって軽鎖を欠如した、完全に機能的な抗体を保有するという発見および同定後に開発された。これらの重鎖だけの抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）と２つの定常ドメイン（ＣＨ２、ＣＨ３）とを含む。クローン化され単離されたその単一の可変ドメインは、完全な抗原結合能力を有し、非常に安定である。これらの単一の可変ドメインは、それらの独特な構造的特性および機能的特性を有し、ｓｄＡｂの基礎を形成する。ｓｄＡｂは、単一遺伝子によってコードされ、ほとんどのすべての原核生物宿主および真核生物宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、米国特許第６，７６５，０８７号を参照のこと）、カビ（例えば、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）および酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、またはＰｉｃｈｉａ（例えば、米国特許第６，８３８，２５４号を参照のこと）において効率的に産生される。その産生プロセスは、規模変更可能であり、多キログラム量のｓｄＡｂが産生されている。ｓｄＡｂは、長い貯蔵寿命を有する使用準備済の溶液として製剤化され得る。Ｎａｎｏｃｌｏｎｅ（登録商標）法（例えば、ＷＯ０６／０７９３７２を参照のこと）は、望ましい標的に対するｓｄＡｂを作製するための知的所有権のある方法であり、Ｂ細胞の自動化高スループット選択に基づく。ｓｄＡｂは、ラクダ科特異的な、重鎖だけの抗体のシングルドメイン抗原結合性フラグメントである。ｓｄＡｂ（ＶＨＨ抗体とも呼ばれる）は、典型的には約１５ｋＤａという小さいサイズを有する。Ｃ．Ｂｅｖｅｒら、Ａｎａｌ Ｂｉｏａｎａｌ Ｃｈｅｍ．、２０１６年９月；４０８（２２）；５９８５～６００２を参照のこと。

企図される別の抗体フラグメントは、二重可変ドメイン－免疫グロブリン（ＤＶＤ－ＩｇまたはＦｖ－Ｉｇ）であり、これは、１つの分子実体中に２つのモノクローナル抗体の機能および特異性を組み合わせる操作されたタンパク質である。Ｆｖ－Ｉｇは、各々の軽鎖および重鎖が、ＩｇＧ中の１つの可変ドメインの代わりに、短いペプチド結合によって２つの可変ドメインを直列に含むこと以外は、ＩｇＧ様分子として設計されている。それらの２つの可変ドメインの融合の配向およびリンカー配列の選択が、この分子の機能的活性および効率的発現にとって重要である。Ｆｖ－Ｉｇは、製造および精製のために単一の種として従来の哺乳動物発現系によって産生され得る。Ｆｖ－Ｉｇは、その親抗体の特異性を有し、インビボで安定であり、ＩｇＧ様の物理化学的特性および薬物動態特性を示す。Ｆｖ－Ｉｇおよびその作製方法は、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ、２５：１２９０～１２９７（２００７））に記載されている。

特定の実施形態において、本明細書において開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒト化される。これは、組換え技術を使用して一般的には調製され、非ヒト種由来の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位と、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく分子の残りの免疫グロブリン構造とを有する、キメラ分子を指す。その抗原結合部位は、定常ドメインに融合された完全な可変ドメインまたはその可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域に移植されたＣＤＲだけのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であってもよく、または１つもしくは複数のアミノ酸置換によって改変されてもよい。これは、その定常領域をヒト個体における免疫原として排除するが、外来可変領域に対する免疫反応の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ら（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８６：４２２０～４２２４；Ｑｕｅｅｎら、ＰＮＡＳ（１９８８）８６：１００２９～１００３３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８８）３３２：３２３～３２７）。本明細書において開示されている抗Ｆｚｄ抗体または抗ＬＲＰ抗体のヒト化のための例示的方法としては、米国特許第７，４６２，６９７号に記載されている方法が挙げられる。

別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供することだけでなく、可変領域を改変してそれを可能な限りヒト形態に近くなるように作り変えることにもまた、焦点を当てる。重鎖および軽鎖の両方の可変領域は、問題のエピトープに対応して変化して結合能力を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、所定の種において比較的保存されていてそのＣＤＲに足場を提供すると推定される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）によって挟まれていることが、知られている。非ヒト抗体が特定のエピトープに関して調製される場合、その可変領域は、改変されるヒト抗体中に存在するＦＲに非ヒト抗体由来のＣＤＲを移植することによって、「作り変えられ」得、または「ヒト化」され得る。種々の抗体へのこのアプローチの適用が、Ｓａｔｏ，Ｋ．，ら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、５３：８５１～８５６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３～３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．ら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４～１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、４：７７３～３７８３；Ｍａｅｄａ，Ｈ．ら（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、２：１２４～１３４；Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８８：４１８１～４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．ら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：２６６～２７１；Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８８：２８６９～２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ら（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８９：４２８５～４２８９；およびＣｏ，Ｍ．Ｓ．ら、（１９９２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４８：１１４９～１１５４によって報告されている。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、すべてのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体に由来する６つすべてのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体に対して変化した１つまたは複数（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）のＣＤＲを有し、これらのＣＤＲはまた、元の抗体由来の１つまたは複数のＣＤＲに「由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。

特定の実施形態において、本開示の抗体はキメラ抗体であり得る。この点について、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に作動可能に連結されているかまたは他の方法で融合されている、ある抗体の抗原結合性フラグメントから構成される。特定の実施形態において、その異種Ｆｃドメインはヒト起源である。他の実施形態において、その異種Ｆｃドメインは、その親抗体由来の異なるＩｇクラスに由来し得、そのクラスとしては、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ならびにＩｇＭが挙げられる。さらなる実施形態において、その異種Ｆｃドメインは、種々のＩｇクラスのうちの１つまたは複数に由来するＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインから構成され得る。ヒト化抗体に関して上記されたとおり、キメラ抗体の抗原結合性フラグメントは、本明細書において記載されている抗体のＣＤＲのうちの１つだけもしくは複数（例えば、本明細書において記載されている抗体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つのＣＤＲ）を含み得、または可変ドメイン（ＶＬ、ＶＨもしくはその両方）全体を含み得る。

免疫グロブリンのＣＤＲならびに可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ、第４版、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、１９８７、および現在インターネット（ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ）で利用可能なその最新版を参照することによって決定され得る。

特定の実施形態において、そのアンタゴニスト結合作用物質またはアゴニスト結合作用物質は、約１μＭ以下、約１００ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、または約１０ｎＭ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合する。例えば、特定の実施形態において、１つよりも多くのＦＺＤに結合する本明細書において記載されているＦＺＤ結合作用物質またはＦＺＤ抗体は、それらのＦＺＤに約ｌ００ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、または約１０ｎＭ以下のＫ_Ｄで結合する。特定の実施形態において、その結合作用物質は１つまたは複数のその標的抗原に約１μＭ以下、約１００ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、または約１ｎＭ ２０以下のＥＣ５０で結合する。

本発明の抗体または他の作用物質は、当該分野で公知の任意の方法によって特異的結合についてアッセイされ得る。使用され得るイムノアッセイとしては、バイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）解析、ＦＡＣＳ解析、免疫蛍光法、免疫細胞化学、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈殿反応、ゲル拡散沈殿反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインＡイムノアッセイなどの技術を使用する、競合的アッセイシステムおよび非競合的アッセイシステムが挙げられるが、それらに限定されない。そのようなアッセイは、慣用的であり、当該分野で周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９４、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これはその全体が本明細書に参照により援用される）を参照のこと。

例えば、標的抗原への抗体の特異的結合は、ＥＬＩＳＡを使用して決定され得る。ＥＬＩＳＡアッセイは、抗原を調製する工程、９６ウェルマイクロタイタープレートのウェルを抗原でコーティングする工程、検出可能な化合物（例えば、酵素基質（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼもしくはアルカリホスファターゼ））に結合体化された抗体または他の結合作用物質をそのウェルに添加する工程、一定時間インキュベートする工程、およびその抗原の存在を検出する工程を含む。一部の実施形態において、その抗体または作用物質は、検出可能な化合物に結合体化されないが、代わりに、その第１の抗体または作用物質を認識する第２の結合体化抗体がそのウェルに添加される。一部の実施形態において、そのウェルを抗原でコーティングする代わりに、その抗体または作用物質がそのウェルにコーティングされ得、検出可能な化合物に結合体化された第２の抗体が、そのコーティングされたウェルへのその抗原の添加後に添加され得る。当業者は、検出されるシグナルを増加させるために改変され得るパラメータならびに当該分野で公知である他のＥＬＩＳＡの変化形に関して知識がある（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９９４、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１１．２．１を参照のこと）。

標的抗原に対する抗体または他の作用物質の結合親和性およびその抗体－抗原間相互作用の解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）は、競合的結合アッセイによって決定され得る。競合的結合アッセイの一例は、標識された抗原（例えば、Ｆｚｄ、ＬＲＰ）、またはそのフラグメントもしくはバリアントと目的の抗体とを、漸増量の非標識抗原の存在下でインキュベートすること、およびその後、その標識された抗原に結合した抗体を検出することを含む、ラジオイムノアッセイである。その抗体の親和性および結合解離速度は、散布図解析によってデータから決定され得る。一部の実施形態において、ＢＬＩ解析が、抗体または作用物質の結合速度（ｏｎ ｒａｔｅ）および解離速度を決定するために使用される。ＢＬＩ動態解析は、表面に抗原が固定されたチップからの抗体の結合および解離を分析することを含む。

（ＩＶ．ＷＮＴアゴニストの組成物および使用方法）
本明細書は、例えば、涙腺腺房細胞の活性化および／または再生によって、涙腺疾患および涙腺障害（ドライアイ障害が挙げられるが、これに限定されない）を処置する方法、ならびにそのための組成物を提供する。

涙腺はマイボーム腺および副涙腺と類似しており、本明細書において記載されている方法および組成物は涙液減少型ドライアイまたは蒸発亢進型ドライアイにおいてマイボーム腺および／もしくは副涙腺の処置のために適用され得ることが、当業者には容易に理解される。マイボーム腺は眼瞼の縁に沿って並ぶ脂腺である。これらの腺は、自然な涙と混合する脂を眼瞼に分泌させて、その自然な涙の過剰蒸発を防止する。眼型酒さに罹患している患者は、しばしば、マイボーム腺機能不全（ＭＧＤ）を有し、その際、その眼瞼はより少量の脂しか分泌せず、ドライアイを生じる。ＭＧＤは、ドライアイ疾患の主因であると考えられている。ＷＮＴアゴニスト分子もまた、マイボーム腺障害の処置のために使用され得る。特に、活性なＷＮＴシグナル伝達は、基底前駆細胞に維持シグナルを提供する可能性が有り得、マイボーム腺細胞（ｍｅｉｂｏｃｙｔｅ）の再生を調節することにおいて重要な役割を果たす（例えば、Ｐａｒｆｉｔｔら（２０１６）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．、７：３９９～４１０を参照のこと）。一態様において、本発明は、対象における涙腺腺房細胞を再生する方法を含み、その方法は、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターをその対象に投与する工程を含む。一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーター（例えば、ＳＷＡＰ（商標）化合物）であり得る。別の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴアゴニストまたは操作されたＷＮＴアンタゴニストである。なおさらなる実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは組織特異的ＷＮＴシグナル増強分子（例えば、ＳＷＥＥＴＳ（商標）分子）である。ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターはまた、ＷＮＴアゴニストと組織特異的ＷＮＴシグナルエンハンサーとの組合せであり得る。

本明細書において開示されている方法のいずれかの特定の実施形態において、そのＷＮＴアゴニストは、以下のうちのいずれかにおいて開示されたＷＮＴアゴニストから選択される：ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１６／０４０８９５；米国特許出願公開第２０１７－０３０６０２９号；米国特許出願公開第２０１７－０３４９６５９号；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１９／１２６３９８；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０２０／０１０３０、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０２１／１７３７２６、または米国特許出願公開第１７／８０６，６２４号（これらすべてはその全体が参照により本明細書に援用される）。本明細書において開示されている方法のいずれかの特定の実施形態において、その組織特異的ＷＮＴシグナル増強分子は、以下のうちのいずれかにおいて開示された組織特異的ＷＮＴシグナル増強分子から選択される：ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１８／１４０８２１；米国特許出願公開第２０２０－００４８３２４号；またはＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０２０／１４２７１（これらすべてはその全体が参照により本明細書に援用される）。

涙腺腺房細胞を再生する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体を含み得る。任意の実施形態において、その操作されたＷＮＴアゴニストは（ｉ）ＷＮＴ３ａ；（ｉｉ）ＷＮＴ模倣物；または（ｉｉｉ）Ｒ－スポンジン模倣物から選択され得る。そのＷＮＴ模倣物はＳＷＡＰ（商標）化合物であり得る。そのＲ－スポンジン模倣物はＳＷＥＥＴＳ（商標）化合物であり得る。そのＷＮＴ模倣物は、配列番号１～１４のいずれかに示されているポリペプチド配列を含むかまたは有する１つもしくは複数のポリペプチド、またはそれらのアイソフォームおよびホモログと、そのために適切な発現ベクターとを含み得る。そのＷＮＴ模倣物は、配列番号１～１４に示されているポリペプチド配列のいずれかと８０％～１００％の相同性を有する１つまたは複数のポリペプチドを含み得る。特定の実施形態において、そのＷＮＴ模倣物は、配列番号１～１４に示されているポリペプチド配列のいずれかと８０％～１００％の相同性を有する２つのポリペプチド配列を含む。特定の実施形態において、そのＷＮＴ模倣物は２つの重鎖ポリペプチド配列および２つの軽鎖ポリペプチド配列を含み、その各々は、配列番号１～１４に示されているポリペプチド配列のいずれかと８０％～１００％の相同性を有する。特定の実施形態において、そのＷＮＴ模倣物中に存在する重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドは、以下の組合せのいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または１００％の同一性を有する：配列番号１および２；配列番号３および４；配列番号５および６；配列番号７および８；または配列番号９および１０、または配列番号１１および１４、または配列番号１２および１４、または配列番号１３および１４。特定の実施形態において、そのＷＮＴ模倣物は、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含むＩｇＧ抗体構造を有し、その２つの重鎖は互いに結合されており、それらの軽鎖の各々は、それらの２つの重鎖の別々の１つに結合されている。

涙腺腺房細胞を再生する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、ならびにＬｒｐ６、および／またはＬｒｐ５のいずれか１つもしくは複数の発現に影響を与え得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７からなる群のいずれか１つもしくは複数；またはＦｚｄ５およびＦｚｄ８からなる群のいずれか１つもしくは複数を標的とし得、同時にまたＬｒｐ６および／またはＬｒｐ５を標的とし得る。別の例について、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７のいずれか１つまたは複数の発現に影響を与え得る。

涙腺腺房細胞を再生する方法の一実施形態において、その方法は、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ２フラグメント、および操作されたＲＳＰＯ２模倣物からなる群の少なくとも１つを投与する工程をさらに含む。

一部の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、ＷＮＴプラットフォームのスーパーアゴニストであり得る。このスーパーアゴニスト活性は、ＷＮＴシグナル伝達経路の強力なアクチベーターとして作用する、ＬＲＰ、ＦＺＤ、およびＲＳＰＯと融合したＷＮＴ分子で観察された。そのＷＮＴスーパーアゴニストは、以下において開示されたＷＮＴスーパーアゴニストから選択される：ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０２１／１７３７２６。

任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは≧１ｎＭの濃度であり得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、１ｎＭ、１．１ｎＭ、１．５ｎＭ、２．０ｎＭ、２．５ｎＭ、３．０ｎＭ、３．５ｎＭ、４．０ｎＭ、４．５ｎＭ、５．０ｎＭの濃度であり得る。特定の実施形態において、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターの濃度は≧５ｎＭであり得る。任意の実施形態においてそのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは治療有効量で投与され得る。

任意の実施形態において、その対象は、生きている哺乳動物であり得る。例えば、その対象は、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得る。任意の実施形態において、その対象はヒト患者であり得る。

任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは全身投与または局所投与され得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、点眼水溶液または局所涙腺内注射によって、局所投与され得る。

別の態様において、本発明は対象における涙腺障害を処置する方法を含み、その方法は、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターをその対象に投与する工程を含む。一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーターであり得る。別の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、操作されたＷＮＴアゴニストまたは操作されたＷＮＴアンタゴニストである。

涙腺障害を処置する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体を含み得る。任意の実施形態において、その操作されたＷＮＴアゴニストは（ｉ）ＷＮＴ３ａ；（ｉｉ）ＷＮＴ模倣物；または（ｉｉｉ）Ｒ－スポンジン模倣物から選択され得る。そのＷＮＴ模倣物はＳＷＡＰ（商標）化合物であり得る。そのＲ－スポンジン模倣物はＳＷＥＥＴＳ（商標）化合物であり得る。

涙腺障害を処置する方法の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、ならびにＬｒｐ６および／またはＬｒｐ５のいずれか１つもしくは複数の発現に影響を与え得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７からなる群のいずれか１つもしくは複数；またはＦｚｄ５およびＦｚｄ８からなる群のいずれか１つもしくは複数を標的とし得、同時にまたＬｒｐ６および／またはＬｒｐ５を標的とし得る。別の例について、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７のいずれか１つまたは複数の発現に影響を与え得る。

涙腺障害を処置する方法の一実施形態において、その方法は、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ２フラグメント、および操作されたＲＳＰＯ２模倣物からなる群の少なくとも１つを投与する工程をさらに含む。

涙腺障害を処置する方法の任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは≧１ｎＭの濃度であり得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、１ｎＭ、１．１ｎＭ、１．５ｎＭ、２．０ｎＭ、２．５ｎＭ、３．０ｎＭ、３．５ｎＭ、４．０ｎＭ、４．５ｎＭ、５．０ｎＭの濃度であり得る。特定の実施形態において、ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターの濃度は≧５ｎＭであり得る。任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは治療有効量で投与され得る。

任意の実施形態において、その対象は、生きている哺乳動物であり得る。例えば、その対象は、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得る。任意の実施形態においてその対象はヒト患者であり得る。

任意の実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは全身投与または局所投与され得る。例えば、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、点眼水溶液または局所涙腺内注射によって、局所投与され得る。

なお別の態様において、本発明は対象におけるドライアイ障害の処置のための組成物を含み、その組成物はＷＮＴシグナル伝達モジュレーターを含む。その組成物の任意の実施形態において、そのドライアイ障害はシェーグレン症候群障害であり得る。

その組成物の一実施形態において、そのＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体を含み得る。その少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体は、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ，２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、およびＬｒｐ６またはＬｒｐ５のいずれか１つもしくは複数に特異的であり得る。

一実施形態において、その組成物は少なくとも１つの追加の薬剤（抗炎症薬、人工涙液剤、または涙腺分泌促進物質が挙げられる）をさらに含み得る。特に、その抗炎症薬は、抗生物質またはステロイド薬（シクロスポリンＡ（例えば、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））およびリフィテグラスト眼科溶液（例えば、Ｘｉｉｄｒａ（登録商標）が挙げられる）であり得る。人工涙液剤としては、涙を刺激する非処方点眼薬、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（Ｌａｃｒｉｓｅｒｔ（登録商標））挿入物が挙げられ得る。涙腺分泌促進物質としてはバレニクリン点鼻薬が挙げられ得、これはニコチン性アセチルコリン受容体を選択的に作動させる。また、自己血清点眼薬も企図される。

その組成物の任意の実施形態において、その組成物は、その構成要素の各々の治療有効量を含み得る。

その組成物の任意の実施形態において、その対象は、生きている哺乳動物であり得る。例えば、その対象は、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシであり得る。その組成物の任意の実施形態において、その対象はヒト患者であり得る。

さらなる実施形態において、本明細書において記載されているＷＮＴアンタゴニスト分子／ＷＮＴアゴニスト分子をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター（例えば、ウイルスベクター）と、１つもしくは複数の薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、または賦形剤とを含む医薬組成物もまた、開示される。特定の実施形態において、そのＷＮＴアンタゴニスト分子をコードする核酸配列と、ＷＮＴアゴニストをコードする核酸配列とは、同じポリヌクレオチド（例えば、発現カセット）中にある。

本開示は、ＷＮＴアンタゴニスト分子／ＷＮＴアゴニスト分子をコードする核酸に作動的に連結されたプロモーターを含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞と、１つもしくは複数の薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、または賦形剤とを含む、医薬組成物をさらに企図する。特定の実施形態において、その医薬組成物は、ＷＮＴアンタゴニストおよびＷＮＴアゴニストをコードする核酸配列に作動的に連結されたプロモーターを含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む細胞をさらに含む。特定の実施形態において、そのＷＮＴアンタゴニスト分子をコードする核酸配列と、ＷＮＴアゴニスト分子をコードする核酸配列とは、同じポリヌクレオチド（例えば、発現カセット）中および／または同じ細胞中にある。特定の実施形態において、その細胞は、異種細胞であるか、または処置されるべき対象から取得された自己細胞である。

特定の実施形態において、その細胞は、幹細胞（例えば、脂肪由来幹細胞または造血幹細胞）である。本開示は、第１の活性作用物質としてのＷＮＴアンタゴニスト分子の送達のための第１の分子と、第２の分子としてのＷＮＴアゴニストとを含む、医薬組成物を企図する。その第１の分子と第２の分子とは、同じ種類の分子であってもよく、または異なる種類の分子であってもよい。例えば、特定の実施形態において、その第１の分子および第２の分子は、各々、以下の種類の分子から独立的に選択され得る：ポリペプチド、有機低分子、その第１の活性作用物質もしくは第２の活性作用物質をコードする核酸（必要に応じてＤＮＡもしくはｍＲＮＡ、必要に応じて改変型ＲＮＡ）、その第１の活性作用物質もしくは第２の活性作用物質をコードする核酸配列を含むベクター（必要に応じて発現ベクターもしくはウイルスベクター）、およびその第１の活性作用物質もしくは第２の活性作用物質をコードする核酸配列を含む細胞（必要に応じて発現カセット）。

その分子（単独または組合せ）は、概して安全で非毒性で望ましい製剤を調製する際に有用な薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤および試薬と組み合わせられ得、製剤は、哺乳動物（例えば、ヒトまたは霊長類）での使用のために許容可能な賦形剤を含む。そのような賦形剤は、固体、液体、半固体、または（エアロゾル組成物の場合には）気体状であり得る。そのようなキャリア、希釈剤および賦形剤の例としては、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、それらに限定されない。補充的活性化合物もまたその製剤に組み込まれ得る。その製剤のために使用される溶液または懸濁物としては、滅菌した希釈剤（例えば、注射用水、食塩溶液、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；抗菌化合物（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）；キレート化化合物（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝液（例えば、酢酸、クエン酸またはリン酸）；界面活性剤（例えば、凝集を防止するためのＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）；ならびに張度の調節のための化合物（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）が挙げられ得る。そのｐＨは酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）で調節され得る。特定の実施形態において、その医薬組成物は滅菌されている。

医薬組成物は、滅菌した水溶液または分散物、および滅菌した注射可能な溶液または分散物の即時調製のための滅菌した粉末をさらに含み得る。静脈内投与について、適したキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。一部の場合では、その組成物は滅菌されており、その組成物は、それがシリンジに吸い込まれ得るかまたはシリンジから対象に送達され得るように流体であるべきである。特定の実施形態において、それは製造条件下および保管条件下で安定であり、微生物（例えば、細菌および真菌）の混入作用に対抗して保存される。そのキャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの適切な混合物を含む、例えば、溶媒または分散媒であり得る。その適切な流動性は、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用によって、分散物の場合は必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムをその組成物に含むことが好ましい。その内部組成物の長期吸収は、その組成物に吸収を遅延させる作用物質（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を含めることによってもたらされ得る。

滅菌した溶液は、上記に列挙された成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中にＷＮＴアンタゴニスト抗体／ＷＮＴアゴニスト抗体あるいはその抗原結合性フラグメント（またはコードポリヌクレオチドもしくはそれを含む細胞）を必要な量で組み込むこと、必要な場合は、その後で滅菌濾過することによって、調製され得る。一般的には、分散物は、基本分散媒と上記に列挙された成分に由来する他の必要な成分とを含む滅菌したビヒクル中にその活性化合物を組み込むことによって、調製される。滅菌した注射可能溶液の調製のための滅菌した粉末の場合は、調製方法は、その活性成分に加えて望ましい任意の追加成分の粉末を以前に滅菌濾過したそれらの溶液から生じる、減圧乾燥および凍結乾燥である。

一実施形態において、その医薬組成物は、その抗体またはその抗原結合性フラグメントを身体からの迅速な排出に対して保護するキャリア（例えば、制御放出製剤（移植物およびマイクロカプセル化送達システムが挙げられる）を用いて調製される。生分解性生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）が使用され得る。そのような製剤の調製のための方法は、当業者には明らかである。それらの材料はまた、商業的に入手され得る。リポソーム懸濁物もまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、当業者に公知の方法にしたがって調製され得る。

投与の容易さおよび投与量の均一性のためにその医薬組成物を投与量単位形態（ｄｏｓａｇｅ ｕｎｉｔ ｆｏｒｍ）で製剤化することが、有利であり得る。本明細書において使用される投与量単位形態とは、処置されるべき対象への単位投与量として適した物理的に分離した単位を指し；各単位は、望ましい治療効果を生じるように算出された所定量の活性な抗体またはその抗原結合性フラグメントを、必要とされる薬学的キャリアと組み合わせて含む。その投与量単位形態についての仕様は、その抗体またはその抗原結合性フラグメントの独特な特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体の処置のためにそのような活性な抗体またはその抗原結合性フラグメントを配合する分野に固有の限界によって、規定され、それらに直接的に依存する。

その医薬組成物は、容器、パック、またはディスペンサー（例えば、点眼器、例えば、充填済みの点眼器）に投与についての指示と一緒に含まれ得る。

本開示の医薬組成物は、丸剤、カプセル剤、クリーム、軟膏、シロップ剤、皮膚パッチ、坐剤、静脈内点滴、局所注射水溶液、非水性溶液、洗眼溶液、またはそれらの任意の組合せの形態でその対象に送達され得る。

本開示の医薬組成物は、直接点眼によって、筋肉注射によって、涙腺内注射によって、結膜下注射によって、マイボーム腺注射によって、静脈内注射によって、腹腔内注射によって、経鼻的に、経口的に、直腸に、またはそれらの任意の組合せによって、対象に送達され得る。

本開示の医薬組成物は、ヒトを含む動物への投与の際にその生物学的に活性な抗体またはその抗原結合性フラグメントを（直接的または間接的に）提供可能である、任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、もしくはそのようなエステルの塩、または他の任意の化合物を含む。

本開示は、本明細書において記載されているＷＮＴアンタゴニスト分子／ＷＮＴアゴニスト分子の薬学的に受容可能な塩を含む。用語「薬学的に受容可能な塩」とは、本開示の化合物の生理学的および薬学的に受容可能な塩：すなわち、その親化合物の望ましい生物学的活性を保持し望ましくない毒性学的作用をそれに付与しない塩を指す。種々の薬学的に受容可能な塩が当該分野で公知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１７版、Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｍａｒｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡ、１９８５（およびそのより最近の版）、「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、第３版、Ｊａｍｅｓ Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ（編）、Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＵＳＡ（Ｉｎｃ．）、ＮＹ、ＵＳＡ、２００７、ならびにＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：２（１９７７）において記載されている。また、適切な塩に関する概説については、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ」、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００２）を参照のこと。薬学的に受容可能な塩基付加塩は、金属またはアミン（例えば、アルカリ金属およびアルカリ土類金属、または有機アミン）を用いて形成される。

カチオンとして使用される金属としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどが挙げられる。アミンとしては、Ｎ－Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、およびプロカインが挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍａ Ｓｃｉ．、１９７７、６６、１１９を参照のこと）。上記の酸性化合物の塩基付加塩は、従来どおりの様式で、その遊離酸形態をその塩を生成するのに十分な量の望ましい塩基と接触させることによって調製される。その遊離酸形態は、従来どおりの様式で、その塩形態を酸と接触させ、その遊離酸を単離することによって生成され得る。その遊離酸形態は、特定の物理的特性（例えば、極性溶媒中での溶解度）がそのそれぞれの塩形態とはいくらか異なるが、他の点ではそれらの塩は本開示の目的のためにはそのそれぞれの遊離酸と同等である。

一部の実施形態において、本明細書において提供されている医薬組成物は、治療有効量のＷＮＴアンタゴニスト分子／ＷＮＴアゴニスト分子またはその薬学的に受容可能な塩を、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤および／または賦形剤、例えば、食塩水、リン酸緩衝食塩水、リン酸塩およびアミノ酸、ポリマー、ポリオール、糖、緩衝液、保存剤および他のタンパク質と混合した状態で含む。例示的なアミノ酸、ポリマーおよび糖などは、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール化合物、ポリエチレングリコールモノステアレート化合物、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、スクロース、フルクトース、デキストロース、マルトース、グルコース、マンニトール、デキストラン、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、キシリトール、ラクトース、トレハロース、ウシ血清アルブミンまたはヒト血清アルブミン、クエン酸塩、酢酸塩、リンゲル液およびハンクス液、システイン、アルギニン、カルニチン、アラニン、グリシン、リジン、バリン、ロイシン、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンならびにグリコールである。好ましくは、この製剤は、４℃にて少なくとも６か月間安定である。

一部の実施形態において、本明細書において提供されている医薬組成物は、緩衝液、例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）またはリン酸ナトリウム／硫酸ナトリウム、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、滅菌水および当業者に公知の他の緩衝液、例えば、Ｇｏｏｄら（１９６６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５：４６７によって記載されている緩衝液を含む。その緩衝液のｐＨは、６．５～７．７５、好ましくは７～７．５、最も好ましくは７．２～７．４の範囲にあり得る。

本開示の特定の実施形態が例示目的のために本明細書に記載されてきたが、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく種々の改変が行われ得ることが、上記から理解される。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲によるほかは限定されない。

本発明の広範な範囲は以下の実施例を参照して最も良く理解される。以下の実施例は、それらの発明を特定の実施形態へと限定することは意図されない。

（実施例）
（Ｉ．方法）
分子生物学の標準的方法を使用した。それらとしては、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ、第２１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．に記載されている方法が挙げられる。標準的方法はまたＡｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１巻～第４巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．にも記載されており、これらは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ変異誘発（第１巻）、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング（第２巻）、複合糖質およびタンパク質発現（第３巻）、ならびにバイオインフォマティクス（第４巻）を記載している。

タンパク質精製のための方法（免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、および結晶化が挙げられる）が、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。化学解析、化学的改変、翻訳後修飾、融合タンパク質の作製、タンパク質のグリコシル化が、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮＹ、Ｎ．Ｙ．、１６．０．５頁～１６．２２．１７頁；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．、４５頁～８９頁；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、３８４頁～３９１頁に記載されている。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の産生、精製および断片化が、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（上記）に記載されている。リガンド／受容体相互作用を特徴付けるための標準的技術が、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋで利用可能である。

フローサイトメトリーのための方法（蛍光活性化セルソーティング検出システム（ＦＡＣＳ（登録商標））が挙げられる）が、例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、Ｎ．Ｊ．；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、第２版；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、Ｎ．Ｊ．；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、Ｎ．Ｊ．で利用可能である。核酸（核酸プライマーおよび核酸プローブを含む）、ポリペプチド、ならびに抗体を、例えば、診断試薬としての使用のために改変するために適した蛍光試薬が、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．で利用可能である。

免疫系の組織学の標準的方法が、例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、およびＷｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａ、Ｐａ．；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．に記載されている。

例えば、抗原性フラグメント、リーダー配列、タンパク質のフォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位、および配列整列を決定するためのソフトウェアパッケージならびにデータベースが、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．、Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ、Ｎｅｖ．）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１６：７４１～７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ、１６：７４１～７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．、６８：１７７～１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１３３：１７～２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１４：４６８３～４６９０で利用可能である。

（ＩＩ．オルガノイドの樹立および増殖）
野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来の涙腺および唾液腺を解剖し、氷上にあるＡｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ／Ｆ１２（ＧＩＢＣＯ）中で保管した。マウスの複数の涙腺または唾液腺をペトリ皿にプールし、筋肉、導管および結合組織を可能な限り除去して廃棄した。外科用メスを使用して、残りの腺上皮を刻んでおよそ１ｍｍ片にした。それらの組織片を、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ／Ｆ１２（ＧＩＢＣＯ）中に１０μＭ ＲＯＣＫインヒビターＹ－２７６３２（Ａｂｍｏｌｅ、Ｍ１８１７）を含むコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃ９４０７、１ｍｇ／ｍＬ）溶液中で、３７℃にて振盪して約１５分間酵素消化した。プレーティング前に、その均一な細胞懸濁物を（１２００ｒｐｍで５分間）ペレット化し、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ／Ｆ１２で２回洗浄した。同じプロトコルをヒトの死後の涙腺物質に適用した。細胞を、Ｃｕｌｔｒｅｘ Ｐａｔｈｃｌｅａｒ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｂａｓｅｍｅｎｔ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｅｘｔｒａｃｔ（ＢＭＥ）（３５３３－００１、Ａｍｓｂｉｏ）またはＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）ＧＦＲ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｍａｔｒｉｘ（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＣＢ４０２３０Ｃ）の２０μＬ液滴中でプレーティングした。１５分間の凝固後に、種々の哺乳動物の成長因子およびサイトカイン、ＲＳＰＯ１、ならびに代替ＷＮＴ（５ｎＭのＬ－Ｆ１２５７８；Ｌ－Ｆ１２７；Ｌ－Ｆ５８；Ｌ－Ｆ４；またはＬ－Ｆ１０）を含む増殖培地を添加した。図１に示すとおり、Ｌ－Ｆ１２５７８、Ｌ－Ｆ１２７またはＬ－Ｆ５８で処置した細胞は、中実な出芽形態を伴って急速に増殖し、一方、対照処置および他の代替ＷＮＴ処置で処置した細胞は、ほとんど増殖がないか、または管形態を有した（例えば、Ｂａｎｎｉｅｒ－Ｈｅｌａｏｕｅｔら（２０２１）Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、２８：１２２１～１２３２を参照のこと）。

（ＩＩＩ．腺房細胞における代替ＷＮＴのスクリーニング）
代替ＷＮＴ（すなわち、ＷＮＴ模倣物）の増殖活性スクリーニングのために、マウスの涙腺初代細胞もしくは唾液腺初代細胞またはオルガノイド細胞（＜継代５）を、ＴｒｙｐＬＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して３７℃にて１０分間消化して、ほぼ単一細胞懸濁物にした。活性アッセイのための基本培地は、ＲＳＰＯ１もいかなる代替ＷＮＴも含まず、１μＭポルクピンインヒビターＷｎｔ－Ｃ５９（＃５１４８、Ｔｏｃｒｉｓ）および１０μＭ Ｙ－２７６３２（＃５０９２２８０００１、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）を補充した、増殖培地からなった。実験条件は、特に記載しない限りは、５００ｎｇ／ｍＬ組換えＲＳＰＯ１および５ｎＭ代替ＷＮＴ（Ｌ－Ｆ１２５７８、Ｌ－Ｆ１２７、Ｌ－Ｆ５８、Ｌ－Ｆ４、またはＬ－Ｆ１０）のうちの１つまたは組合せからなった。すべての条件のためのすべての細胞を９６ウェルプレート中の１５μＬ Ｍａｔｒｉｇｅｌ液滴中にプレーティングし、丸底９６ウェルプレート中にある１２０μＬの実験培地に浸した。定量化の前に、細胞をオルガノイドとして７日間増殖させた。増殖効率を、細胞生存度アッセイＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）（Ｇ９６８３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して定量化し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐａｒａｄｉｇｍマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）にて製造業者のプロトコルにしたがって測定した。それらの結果を図４および図５に示す。ＲＳＰＯ依存性アッセイのために、オルガノイドを、５００ｎｇ／ｍＬ ＲＳＰＯ１を伴ってかまたは伴わずに、ある用量範囲の代替ＷＮＴ（０．０５ｎＭ、０．５ｎＭ、５ｎＭ、５０ｎＭ）とともに培養した。それらの結果を図６に示す。

代替ＷＮＴ刺激の際のＷＮＴ標的遺伝子発現のスクリーニングのために、図７に示すとおり、マウス腺房細胞オルガノイドを完全増殖日数で５日間増殖させた後、ＲＳＰＯ１、代替ＷＮＴの休薬および１μＭポルクピンインヒビターＷｎｔ－Ｃ５９（＃５１４８、Ｔｏｃｒｉｓ）の添加を４８時間行った。このＷＮＴ休薬期間後に、図８に示すとおり、ＲＳＰＯ１および／または５ｎＭ代替ＷＮＴ（Ｌ－Ｆ１２５７８、Ｌ－Ｆ１２７、Ｌ－Ｆ５８、Ｌ－Ｆ４、もしくはＬ－Ｆ１０）を示した期間再導入して、ＷＮＴ標的遺伝子誘導を評価した。ＱＩＡｐｒｅｐミニプレップキット（＃２７１０４、ＱＩＡＧＥＮ）を製造業者のプロトコルにしたがって使用して、ＲＮＡを抽出した。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（＃Ｋ０２４３、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造業者のプロトコルにしたがって使用して、ｑＰＣＲによってＡｘｉｎ２の発現を決定した。それらの結果を図９に示す。

代替ＷＮＴスクリーニングにおけるヒトＡＸＩＮ２の誘導を、完全増殖培地中にある新鮮なヒト涙腺組織由来のヒト涙腺外植片培養物で実施した（図１０に示す）。細胞を上記のとおりＭａｔｒｉｇｅｌにプレーティングし（図１１Ａ～図１１Ｂを参照のこと）、ＲＳＰＯ１と組み合わせた種々の代替ＷＮＴ（Ｌ－Ｆ１２５７８、Ｌ－Ｆ１２７、Ｌ－Ｆ５８、Ｌ－Ｆ４、またはＬ－Ｆ１０）にプレーティング時点から曝露した。２４時間の曝露後に、ＱＩＡＧＥＮミニプレップキットを製造業者のプロトコルにしたがって使用して、そのＲＮＡを抽出した。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を製造業者のプロトコル（以下に提示するプライマー配列）にしたがって使用して、ｑＰＣＲによってＡＸＩＮ２の発現を決定した。それらの結果を図１２に示す。

（ＩＶ．免疫蛍光染色およびインサイチュハイブリダイゼーション）
オルガノイドを細胞回収溶液（３５４２５３、Ｃｏｒｎｉｎｇ）に収集し、４％ホルムアルデヒド（Ｒ３７８１４、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）中に室温にて少なくとも２時間固定し、ＰＢＳ中０．２％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００（＃ＩＣＮ１９４８５４５０、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して透過処理した。ウサギ抗ＭＩＳＴ１（＃１４８９６、ＣＳＴ）およびＤＡＰＩ（＃ＥＮ６２２４８、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してホールマウント染色を２％ロバ血清中で一晩実施し、二次抗体はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８ロバ抗ウサギＩｇＧ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａ１００４２）であった。オルガノイドをＬｅｉｃａ ＴＨＵＮＤＥＲ画像化システムで画像化した（図２）。マウス涙腺の免疫蛍光染色をパラフィン包埋組織由来の切片に対して行った。手短に述べると、切片を脱パラフィン処理し、熱抗原賦活化を行い、透過処理し、ブロッキングし、Ｋｉ６７（＃ａｂ１５５８０、Ａｂｃａｍ）およびＤＡＰＩ（＃ＥＮ６２２４８、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）について染色した。その二次抗体であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８ロバ抗ウサギＩｇＧ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａ１００４２）を使用して二次染色を実施し、画像化をＬｅｉｃａ ＤＭｉ８システムで実施した（図１５）。示しているＷＮＴ受容体についてのヒト特異的プローブまたはマウス特異的プローブを用いてインサイチュハイブリダイゼーションを製造業者のプロトコル（ＡＣＤＢｉｏ）にしたがって実施し、Ｌｅｉｃａ ＤＭｉ８システムで画像化した。それらの結果を図１３～図１４に示す。

（Ｖ．動物および処置）
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢～１０週齢）に１０ｍｐｋの種々のＷｎｔ模倣物を０日目、３日目、７日目および１０日目に腹腔内投与した。１４日目に、増殖中の細胞をＫｉ６７シグナルによってＬ－Ｆ１２５７８処置群、Ｌ－Ｆ１２７処置群およびＬ－Ｆ５８処置群で検出した（図１５）。ＲＳＰＯと組み合わせたＷＮＴ模倣物の同様のタイミングの投与は、２週間後に、Ｌ－Ｆ１２５７８処置群およびＬ－Ｆ１２７処置群において、対照およびＲＳＰＯ単独と比較して涙腺重量の増加をもたらした（図１６）。

雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢～１０週齢）をＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から購入した。すべての動物手順はＩＡＣＵＣ委員会規則にしたがって実施した。マウスに麻酔し、図１７に示すとおり、その左眼窩外涙腺を処置しないままにし、一方、その右涙腺にはＩＬ－１α、またはＩＬ－１αとＳＷＡＰ（商標）（すなわち、ＷＮＴ模倣物）とのカクテルを注射した。

すべての動物実験は、Ｓｕｒｒｏｚｅｎ，Ｉｎｃ．の機関内動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＡＣＵＣ）による指針及び承認に加えて、国内の倫理指針にしたがって実施した。１２週齢ＭＲＬ－ｌｐｒ（ストック０００４８５）雌マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ、ＵＳＡ）から入手し、ケージ１つにつき４匹収容した。１ｋｇ当たり３ｍｇおよび１ｋｇ当たり１０ｍｇでのタンパク質処置を、０日目、３日目、７日目および１０日目に、Ｃ５７Ｂｌ／６ＪマウスならびにＭＲＬ－ｌｐｒマウスに加えてＭＲＬ／ＭｐＪマウスにそれぞれ腹腔内投与した。１ｋｇ当たり０．１ｍｇ、０．３ｍｇ、１ｍｇおよび３ｍｇでのＲＳＰＯ２－ｎＦｃＦｃ処置を、０日目、３日目、７日目および１０日目にＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスに腹腔内投与した。動物の骨密度（ＢＭＤ）および脂肪含量を、Ｆａｘｉｔｒｏｎ ＵｌｔｒａＦｏｃｕｓ（Ｆａｘｉｔｒｏｎ Ｂｉｏｐｔｉｃｓ、Ｔｕｃｓｏｎ、Ａｒｉｚｏｎａ）を使用するインビボＤＥＸＡ法によって ０日目、７日目および１３日目に測定した。画像化中に動物にイソフルランで麻酔した。サンプルＲＯＩは、頭蓋骨のＸ線撮影強度の増加が原因で頸椎より上の物質は除き、マウス骨格全体を含んだ。付随するＶｉｓｉｏｎ ＤＸＡソフトウェアを使用して、ＢＭＤおよび脂肪含量を算出した。動物を１４日目に殺処分し、唾液腺を組織学のために収集した。

（ＶＩ．涙腺内注射）
涙腺内注射を、Ｚｏｕｋｈｒｉら、Ａ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ Ｉｎｄｕｃｅｓ ａ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ａｑｕｅｏｕｓ－ｔｅａｒ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，Ｌａｃｒｉｍａｌ Ｇｌａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ａｃｉｎａｒ ａｎｄ Ｄｕｃｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ、Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．、８４、８９４～９０４（２００７）において以前に記載されたとおりに、微細な変更を加えて実施した。簡単に述べると、イソフルランで麻酔した動物の耳の前側に小切開部を作って、その眼窩外涙腺を露出させた。体積１μＬを、その露出させた涙腺に３回（総体積３μＬ）注射した。

以下の手順を涙腺の導管結紮のために確立し、これはＬｉｕら、２０１７から適合させた。動物にイソフルランで麻酔する。そのマウスが身体の２つの異なる四分の一区分（ｑｕａｄｒａｎｔ）にある２つの体肢をつまむことにもはや反応しなくなった後に、そのマウスを解剖スコープのステージに移し、イソフルランによる麻酔を継続するようにノーズコーンで形作る。その耳の前側に小切開部を作って眼窩外涙腺を露出させ、その眼窩外涙腺を持ち上げてその主排出管を露出させる。その後、サイズ４－０の絹糸を使用して、その管を結紮する。管の結紮後に、その皮膚切開部を閉じ、縫合し、その後、抗生物質軟膏をその皮膚に塗布する。その対側の涙腺には手術をせず、対照として役立たせる。３日後、その皮膚の縫合を再び開いて、その涙腺を露出させる。その後、その絹縫合糸を小さいハサミで切断することにより、その管の結紮を解放する。同じ手術において、２ｍＬの被験物質を処置群のその結紮と同側の涙腺に注射する。注射後に、その皮膚切開部を閉じ、縫合し、その後、抗生物質軟膏を塗布する。その後、その結紮を解放した２４時間後、３日後または１４日後に、それらの動物を屠殺し、同側の涙腺および対側の涙腺を収集する。

（ＶＩＩ．ドライアイの誘導およびＳＷＡＰ（商標）処置）
ドライアイの誘導のために、３μＬの２μｇ／μＬ組換えヒトＩＬ－１α（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を涙腺に注射した。局所ＳＷＡＰ（商標）処置のために、ＳＷＡＰ（商標）（３．５μｇ／μＬ）をＩＬ－１α（２μｇ／μＬ）と総体積３μＬで混合し、その後、涙腺に注射した。全身ＳＷＡＰ（商標）処置のために、図１９～図２０に示すとおり、ＳＷＡＰ（商標）を１週間に２回、１０ｍｇ／ｋｇで２週間にわたり腹腔内注射した。

（ＶＩＩＩ．涙液分泌の測定）
涙液分泌を、拘束した非麻酔マウスに対して、フェノールに含浸した綿糸（Ｚｏｎｅ－Ｑｕｉｃｋ、Ｍｅｎｉｃｏｎ）を使用して測定した。それらの糸を鉗子で保持し、両方の眼の外眼角に３０秒間適用した。涙液と接触して黄色から赤色に変わった糸の湿りをミリメートル単位で測定した。それらの結果を図１９に示す。

（ＩＸ．ＷＮＴ模倣物分子は唾液腺肥大を誘導する）
唾液腺の重量および組織学に対するインビボでの全身ＷＮＴ模倣物投与の効果を調べた。１４日目に、３ｍｐｋで投与したＬ－Ｆ１２５７８の群、Ｌ－Ｆ１２７の群、Ｌ－Ｆ４の群、およびＬ－Ｆ１０の群において、ビヒクル群と比較して唾液腺重量の有意な（それぞれ、１０１％（Ｐ＜０．００１）、１１４％（Ｐ＜０．００１）、２９％（ｐ＜０．０１）および２２％（Ｐ＜０．０５）の）増加を観察し、Ｌ－Ｆ１２５７８の効果およびＬ－Ｆ１２７の効果が最も顕著であった（図２２）。種々のＦＺＤ受容体を標的とするそれらのＷＮＴ模倣物分子はいずれも、インビボで顎下腺の組織学に対してＨＥ染色によって観察可能ないかなる効果も有しなかった（図２３Ａ）。増殖性細胞についてのＫｉ６７による染色は処置群間でほとんど差を示さず、このことは、より早い可能性がある細胞分裂ピークが器官重量の差を駆動することを示した（図２３Ｂ）。同じ分子であるが１０ｍｐｋ（１４日間、週２回の全身処置）を投与した動物は、明確な組織病理学的表現型を有した。Ｌ－Ｆ１２５７８処置動物およびＬ－Ｆ１２７処置動物は漿液粘液性腺房において染色の差を示し、独立した病理学者によって決定される細胞質好塩基球増加症の量の増加が存在した（図２４Ａ）。Ｉｍａｇｅ Ｊによるその唾液腺の粘液性部分および漿液性部分の自動定量化は、Ｌ－Ｆ１２５７８処置動物およびＬ－１２７処置動物において粘液性腺房面積の有意な減少を示す（図２４Ｂ）。また、全身ＲＳＰＯ２投与は、その唾液腺において肥大反応を惹起した。ある範囲のＲＳＰＯ２－ｎＦｃ用量での２週間の処置において、１ｍｐｋ用量および３ｍｐｋ用量は、１４日目に唾液腺重量の有意な増加を有する（図２５）。

唾液腺細胞に対するＷＮＴ活性化の効果を理解するために、実験プラットフォームとしてマウス唾液腺オルガノイド（例えば、Ｍａｉｍｅｔｓら（２０１６）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、６：１５０～１６２を参照のこと）を利用した。組換えＲＳＰＯ１と組み合わせたＬ－Ｆ１２５７８（５ｎＭ）での処置はＲＳＰＯ１単独と比較して増殖を増加させ、より大きなオルガノイドの迅速な増殖をもたらした（図２６Ａ）。この増殖促進表現型のＦＺＤ特異性を、増殖アッセイにおいてＷＮＴ模倣物をスクリーニングすることによって調べ、それを抗ＧＦＰ抗体と比較した。用量依存的様式で、Ｌ－Ｆ１２７５８およびＬ－Ｆ１２７は１０日目に細胞生存度として測定した増殖効率を有意に増加させ、高濃度のＬ－Ｆ５８についてわずかな効果を観察した（図２６Ｂ）。Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ１およびＦｚｄ２は、唾液腺に対するインビトロでの効果およびインビボでの効果と一致して、マウス唾液腺オルガノイドにおいて最も多く発現されるＦｒｉｚｚｌｅｄであることが示された（図２７）。

シェーグレン症候群は、外分泌腺（例えば、唾液腺）を特に冒す全身自己免疫疾患である。免疫細胞浸潤を伴うその腺における慢性炎症は、腺房細胞萎縮を生じて口腔乾燥症をもたらす（例えば、ＪｅｎｓｅｎおよびＶｉｓｓｉｎｋ（２０１４）Ｏｒａｌ Ｍａｘｉｌｌｏｆａｃ．Ｓｕｒｇ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．、２６：３５～５３を参照のこと）。ＭＲＬ－ｌｐｒマウス系統（ループスマウスとしても知られている）は、ヒトのシェーグレン症候群におけるものと類似する唾液腺異常（例えば、唾液産生の減少およびリンパ球浸潤）を伴う全身自己免疫を示す（例えば、Ｍａら（２０１４）Ｄｉａｇ．Ｐａｔｈｏｌ．、９：５を参照のこと）。Ｌ－Ｆ１２５７８ ＷＮＴ模倣物が進行中の損傷環境において唾液腺重量を増加させて回復させ得るか否かを試験するために、老齢のループスマウスおよびＭＲＬ／ＭｐＪ対照マウスに２週間投与した。Ｌ－Ｆ１２５７８での処置は、両方の遺伝系統において唾液腺重量を有意に増加させ、組織学に対して観察可能ないかなる有害効果も伴わなかった（図２８Ａおよび図２８Ｂ）。そのループスマウスおよび対照系統の両方は湿った毛皮を示し、Ｌ－Ｆ１２５７８での処置の際に軽度に色が変化した。

（Ｘ．試薬および材料）
ＷＮＴ模倣物は、本明細書においてその全体が本明細書に援用されているＷＯ２０２０／０１０３０８Ａ１に記載されているとおりに構築した。すべての組換えタンパク質は、特に示さない限りは、一過性トランスフェクションによってＥｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において産生させた。すべてのＩｇＧベースの構築物およびＦｃ含有構築物は、まずプロテインＡ樹脂で精製し、０．１Ｍグリシン（ｐＨ３．５）で溶出させた。その後、すべてのタンパク質をＨＢＳ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）中でサイズ排除カラムによって精製した。－８０℃での長期保管のために、タンパク質にグリセロールを１０％まで補充した。

涙腺再生実験で使用する試薬としては、以下が挙げられる（が、これらに限定されない）：

実験において使用するプライマーとしては、以下が挙げられる：

実験で使用するＷＮＴ模倣物構築物は、以下のアミノ酸配列を含む（太字＝ＬＲＰ結合可変ドメイン；下線＝リンカー；斜体＝ＦＺＤ結合可変ドメイン；装飾なし（太字ではなく、下線なしかつ斜体ではない＝Ｆｃドメイン）。

上記の構築物は変更されて、種々のホモログおよびアイソフォームとして発現され得、非結合ドメイン配列において編集され得、種々の適切な発現ベクター系を使用して種々の同義ヌクレオチド配列を使用して発現され得ることが、当業者には容易に理解される。
（参考文献）
以下参考文献はそれら全体が本明細書に援用される。

Claims (42)

1. 対象における涙腺細胞を再生する方法であって、
   ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターを該対象に投与する工程
   を含む、方法。
2. 前記涙腺細胞が腺房細胞、前駆細胞、導管細胞、筋上皮細胞、または免疫細胞である、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーターである、請求項１に記載の方法。
4. 前記操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーターがＷＮＴアゴニストである、請求項３に記載の方法。
5. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、変異体Ｒ－スポンジン（ＲＳＰＯ）タンパク質；およびＥ３リガーゼ特異的抗体またはその機能的フラグメントからなる群より選択されるＥ３リガーゼ結合ドメインを含む操作されたＷＮＴスーパーアゴニストである、請求項１に記載の方法。
6. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する、少なくとも１つの操作された二重特異性ＩｇＧ抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
7. 前記二重特異性ＩｇＧ抗体またはその抗原結合性フラグメントが、少なくとも１つのＦＺＤ受容体に特異的な結合組成物と、少なくとも１つのＬＲＰ受容体に特異的な結合組成物とを含む、請求項６に記載の方法。
8. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが（ｉ）ＷＮＴ３ａ；（ｉｉ）ＷＮＴ模倣物；または（ｉｉｉ）Ｒ－スポンジン模倣物から選択され；
   ａ）前記ＦＺＤ結合組成物がＦｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８の少なくとも１つに結合し；
   ｂ）前記ＬＲＰ結合組成物がＬｒｐ６、および／またはＬｒｐ５の少なくとも１つに結合する、
   請求項１に記載の方法。
9. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、Ｆｚｄ５およびＦｚｄ８、ならびにＬｒｐ６および／またはＬｒｐ５からなる群に結合する、請求項１に記載の方法。
10. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、およびそれらの任意のアイソフォームまたはホモログからなる群より選択される１つもしくは複数のポリペプチドを含む、請求項１に記載の方法。
11. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、
    ａ）配列番号１の２つのポリペプチドおよび配列番号２の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；
    ｂ）配列番号３の２つのポリペプチドおよび配列番号４の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；
    ｃ）配列番号５の２つのポリペプチドおよび配列番号６の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；
    ｄ）配列番号７の２つのポリペプチドおよび配列番号８の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；または
    ｅ）配列番号９の２つのポリペプチドおよび配列番号１０の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；
    ｆ）配列番号１１の２つのポリペプチドおよび配列番号１４の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；
    ｇ）配列番号１２の２つのポリペプチドおよび配列番号１４の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；
    ｈ）配列番号１３の２つのポリペプチドおよび配列番号１４の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント；または
    ｉ）配列番号１５の２つのポリペプチドおよび配列番号１６の２つのポリペプチド、もしくはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有するそれらのバリアント
    を含む、請求項１０に記載の方法。
12. ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ２フラグメント、および操作されたＲＳＰＯ２模倣物からなる群からの少なくとも１つの分子の同時投与をさらに含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記対象が哺乳動物である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記対象がヒトである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記対象が涙腺障害を原因として涙腺細胞再生を必要とする、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記涙腺障害がドライアイ疾患である、請求項１５に記載の方法。
17. 前記ドライアイ疾患がシェーグレン症候群、慢性移植片対宿主病（ｃＧＨＶＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼型酒さ、化学療法、放射線腫瘍処置、糖尿病、ループス、またはマイボーム腺機能不全（ＭＧＤ）によって引き起こされる、請求項１６に記載の方法。
18. 前記ドライアイ疾患がシェーグレン症候群である、請求項１７に記載の方法。
19. 対象における涙腺障害を処置する方法であって、
    ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターを該対象に投与する工程
    を含む、方法。
20. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、操作されたＷＮＴシグナル伝達モジュレーターである、請求項１９に記載の方法。
21. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、操作されたＷＮＴアゴニストである、請求項１９に記載の方法。
22. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する、少なくとも１つの操作された二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項１９に記載の方法。
23. 前記操作されたＷＮＴアゴニストが（ｉ）ＷＮＴ３ａ；（ｉｉ）ＷＮＴ模倣物；または（ｉｉｉ）Ｒ－スポンジン模倣物から選択される、請求項１９に記載の方法。
24. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、
    ａ）Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８からなる群のうちのいずれか１つまたは複数；ならびに
    ｂ）Ｌｒｐ６、および／またはＬｒｐ５
    に結合する、請求項１９に記載の方法。
25. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、
    ａ）Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７からなる群のいずれか１つまたは複数；ならびに
    ｂ）Ｌｒｐ６、および／またはＬｒｐ５
    に結合する、請求項１９に記載の方法。
26. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、
    ａ）Ｆｚｄ５およびＦｚｄ８からなる群のいずれか１つまたは複数；ならびに
    ｂ）Ｌｒｐ６および／または、Ｌｒｐ５
    に結合する、請求項２０に記載の方法。
27. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、および前記のいずれかのその任意のアイソフォームまたはホモログからなる群より選択される配列を含み、必要に応じて、該ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターは、
    ａ）配列番号１の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号２の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；
    ｂ） 配列番号３の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号４の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；
    ｃ）配列番号５の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号６の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；
    ｄ）配列番号７の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号８の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；あるいは
    ｅ）配列番号９の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号１０の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；
    ｆ）配列番号１１の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性、少なくとも９５％同一性、もしくは少なくとも９８％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号１４の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；
    ｇ）配列番号１２の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号１４の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；
    ｈ）配列番号１３の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号１４の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）；あるいは
    ｉ）配列番号１５の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）および配列番号１６の２つのポリペプチド（またはそれらに対して少なくとも９０％同一性を有する一方もしくは両方のバリアント）
    を含む、請求項１９に記載の方法。
28. ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ２フラグメント、および操作されたＲＳＰＯ２模倣物からなる群の少なくとも１つを投与する工程
    をさらに含む、請求項１９～２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが治療有効量で投与される、請求項１９～２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記対象が、生きている哺乳動物である、請求項１９～２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記対象がヒト患者である、請求項１９～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記涙腺障害がドライアイ疾患である、請求項１９～３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記ドライアイ疾患がシェーグレン症候群、慢性移植片対宿主病（ｃＧＨＶＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼型酒さ、化学療法、放射線腫瘍処置、糖尿病、ループス、またはマイボーム腺機能不全（ＭＧＤ）によって引き起こされる、請求項３２に記載の方法。
34. 前記ドライアイ疾患がシェーグレン症候群によって引き起こされる、請求項３３に記載の方法。
35. ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターを含む、対象におけるドライアイ障害の処置のための組成物。
36. 前記ＷＮＴシグナル伝達モジュレーターが、古典的ＷＮＴシグナル伝達経路を直接活性化する、少なくとも１つの操作された二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む、請求項３５に記載の組成物。
37. 少なくとも１つの操作された二重特異性全長ＩｇＧ抗体またはその抗原結合性フラグメントが、以下のＦｚｄの組合せ：
    ａ）Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８；
    ｂ）Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、およびＦｚｄ７；または
    ｃ）Ｆｚｄ５およびＦｚｄ８
    のいずれか１つに特異的であるかあるいは優先的に結合し、
    該操作された二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントはまたＬｒｐ５および／またはＬｒｐ６にも結合する、請求項３５に記載の組成物。
38. 抗炎症薬をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
39. 治療有効量のその構成要素を含む、請求項３５～３８に記載の組成物。
40. 前記対象が、生きている哺乳動物である、請求項３５～３８に記載の組成物。
41. 前記対象がヒト患者である、請求項３５～３８に記載の組成物。
42. 涙液減少型ドライアイ障害がシェーグレン症候群、障害、慢性移植片対宿主病（ｃＧＨＶＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼型酒さ、化学療法、放射線腫瘍処置、糖尿病、ループス、またはマイボーム腺機能不全（ＭＧＤ）によって引き起こされる、請求項３５～３８に記載の組成物。

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