JP2024537101A

JP2024537101A - 活性化可能サイトカイン構成体ならびに関連する組成物及び方法

Info

Publication number: JP2024537101A
Application number: JP2024520028A
Authority: JP
Inventors: カイ，ナ; ビー．ウィンター，マイケル; エム．ペイドフンガット，マダン; エル．ダニエル，ディラン; スコラン，エルバンル
Original assignee: シートムエックスセラピューティクス，インコーポレイテッド
Priority date: 2021-10-08
Filing date: 2022-10-06
Publication date: 2024-10-10
Also published as: WO2023060156A2; US20240400630A1; AU2022361492A1; WO2023060156A3; CA3233663A1; IL311971A; KR20240082350A; EP4413027A2; TW202334187A; MX2024004300A

Abstract

本明細書において、活性化可能サイトカイン構成体であって、（ａ）第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、ＣＭ１がＣＰ１とＤＤ１との間に置かれる第１のモノマー構成体、及び（ｂ）第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、ＣＭ２がＣＰ２とＤＤ２との間に置かれる第２のモノマー構成体を含有し、ＣＭ１及びＣＭ２がプロテアーゼの基質として機能し、ＤＤ１及びＤＤ２は互いに結合し、ＡＣＣが、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の低減を特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体を提供する。
【選択図】図２１Ｂ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１０月８日に出願された米国仮出願第６３／２５３，９３９号、及び２０２２年２月１７日に出願された米国仮出願第６３／３１１，３９７号の利益を主張するものである。上記出願の内容全体は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

電子形式配列表の参照
電子形式配列表（ＣＹＴＸ０８７．ｘｍｌ、サイズ：３６０，４４８バイト、作成日：２０２２年９月２９日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、バイオテクノロジー分野に関するものであり、より具体的には、活性化可能インターロイキン１５（ＩＬ－１５）サイトカイン構成体などの活性化可能サイトカイン構成体に関する。

サイトカインは、ウイルス感染及び／またはその他の抗原刺激に応答して、大部分の有核細胞から産生及び分泌される、天然に存在する低分子タンパク質及び糖タンパク質のファミリーである。インターロイキンは、サイトカインのサブクラスである。インターロイキンは、細胞の成長、分化及び運動性を制御する。インターロイキンは、免疫応答、例えば炎症などの刺激に特に重要である。インターロイキンは、がん、自己免疫性疾患及びその他の疾患の治療に用いられてきた。例えば、インターロイキン－２（ＩＬ２）は、黒色腫、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、神経芽細胞腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）の治療に適応され、また急性冠症候群、急性骨髄性症候群（ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アトピー性皮膚炎、自己免疫性肝疾患、基底細胞癌、膀胱癌、乳癌、カンジダ症、大腸癌、悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜腫、ＨＩＶの発見（ＨＩＶｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）、虚血性心疾患、関節リウマチ、鼻咽頭腺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵臓癌、全身性エリテマトーデス、結核及びその他の疾患を含む状態にも有用であるとみなされている。

インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の分化及び増大を促進し、抗腫瘍応答の増強をもたらすことが知られている。ＩＬ－１５は、抗がん療法の有望な候補として特定され、多数の臨床試験で試験されている。このような有望性にもかかわらず、ＩＬ－１５は、望ましくない炎症誘発作用を呈すると知られ、いくつかの自己免疫性疾患の病因に関連している。組み換えＩＬ－１５の最大耐量は、２マイクログラム／ｋｇである。組み換え可溶性ＩＬ－１５はまた、インビボでの短い半減期を有し、そのために治療用としての使用が妨げられてきた。その他のインターロイキン、とりわけＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２及びＩＬ－２１なども、がん及びその他の疾患の治療薬となる可能性がある。しかし、インターロイキン療法は、とりわけインフルエンザ様症状、吐き気、嘔吐、下痢、低血圧及び不整脈など、望ましくない副作用を伴うことが多い。

インターフェロンは、サイトカインの別のサブクラスである。インターフェロンは、現在、３種の主要なクラス、すなわちＩ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン及びＩＩＩ型インターフェロンに分類される。インターフェロンは、細胞表面にある特定の膜受容体に結合することによって、その細胞活性を発揮する。

インターフェロン療法には、多くの臨床上の利点がある。例えば、インターフェロンは、免疫系を上方制御すること、また抗ウイルス特性及び抗増殖特性を有することが知られている。これらの生物学的性質のために、インターフェロンは、ウイルス感染症及び悪性腫瘍の治療のための治療薬として臨床的に用いられてきた。さらに、インターフェロンは、患者生来の免疫系をリクルートして、がん細胞を識別し、攻撃するために有用である。したがって、インターフェロン療法は、肝炎、カポジ肉腫、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫及びその他の疾患状態の治療など、がん及び抗ウイルス治療で広く用いられてきた。ただし、インターフェロンの全身投与には、用量依存的毒性、とりわけ強いインフルエンザ様症状、神経症状、肝臓毒性、骨髄抑制及び不整脈などが伴う。黒色腫患者の試験では、ペンブロリズマブとペグ化ＩＦＮａとの併用により、６０．５％のＯＲＲが得られた。この併用治療はまた、ペグ化ＩＦＮａの用量低減を必要とする、４９％のＧ３／Ｇ４の有害事象を伴った（Ｄａｖａｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２０１８）。これらの望ましくない副作用のために、インターフェロン療法の投薬量は制限され、インターフェロン療法の中断または遅延につながることもある。

したがって、所望の標的に対するサイトカイン療法の特異性及び選択性の向上というニーズ及び要望は、大きな関心事である。サイトカイン療法の疾患部位への標的化を高めることで、全身性の機構に基づく毒性を低減させ、より幅広い治療的実用性につながる可能性がある。

本開示は、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、ＣＭ１がＣＰ１とＤＤ１との間に置かれる第１のモノマー、及び（ｂ）第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、ＣＭ２がＣＰ２とＤＤ２との間に置かれる第２のモノマーを含有し、ＣＭ１及びＣＭ２がプロテアーゼの基質として機能し、ＤＤ１及びＤＤ２は互いに結合し、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の低減を特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）を提供する。ＣＭ１及びＣＭ２を切断するプロテアーゼ（複数可）は、疾患のある組織（例えば、腫瘍組織）においては、健康な組織と比較して、過剰発現している場合がある。ＡＣＣは、疾患のある組織（例えば、腫瘍微小環境）においては、サイトカインが活性を発揮できるように、ＣＭ１及び／またはＣＭ２の開裂を受けて活性化してもよく、一方で健康な組織では、サイトカイン活性は低下する。したがって、本明細書で提供されるＡＣＣは、従来のサイトカイン療法と比較して毒性の低減をもたらし、サイトカインのより高い有効投薬量を可能にし、及び／またはサイトカインの治療域を広げることができる。

本明細書において、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含有する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、ＣＭ１がＣＰ１とＤＤ１との間に置かれ、（ｂ）第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、ＣＭ２がＣＰ２とＤＤ２との間に置かれ、ＤＤ１及びＤＤ２が互いに結合し、それによって第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体が二量体を形成し、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの低減した活性レベルを有することを特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）が提供される。

本開示は、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含む第１のモノマー、及び（ｂ）第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、開裂可能部分（ＣＭ）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、ＣＭがＣＰ２とＤＤ２との間に置かれる第２のモノマーを含有し、ＣＭがプロテアーゼの基質として機能し、ＤＤ１及びＤＤ２は互いに結合し、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の低減を特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）を提供する。

本開示は、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、開裂可能部分（ＣＭ）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、ＣＭがＣＰ１とＤＤ１との間に置かれる第１のモノマー、及び（ｂ）第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含む第２のモノマーを含有し、ＣＭがプロテアーゼの基質として機能し、ＤＤ１及びＤＤ２は互いに結合し、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の低減を特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）を提供する。

本開示は、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含む第１のモノマー、及び（ｂ）第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含む第２のモノマーを含有し、ＣＰ１、ＣＰ２、またはＣＰ１及びＣＰ２の両方が、プロテアーゼの基質として機能するアミノ酸配列を含有し、ＤＤ１及びＤＤ２は互いに結合し、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の低減を特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）を提供する。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１は、インターロイキンポリペプチドを含む、及び／またはＣＰ２は、インターロイキンポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、対応する対照インターロイキンと比較して、インターロイキン活性の低減したレベルを有することを特徴とする。例えば、いくつかの実施形態では、対照インターロイキンは、組み換えインターロイキンタンパク質またはペグ化インターロイキンタンパク質を含んでよい。いくつかの実施形態では、インターロイキンポリペプチドは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６及びＩＬ－１７からなる群から選択されるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２はＩＬ－１５を含む。

いくつかの実施形態では、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）を含む第１のモノマー及び／または第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）を含む第２のモノマーは、ペプチドマスク（ＰＭ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＰＭとＣＰとの間のＣＭをさらに含む。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含有する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１のモノマー構成体が、第１のペプチドマスク（ＰＭ１）と、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の及び第３の開裂可能部分（ＣＭ１及びＣＭ３）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、ＣＭ１がＣＰ１とＤＤ１との間に置かれ、ＣＭ３がＰＭ１とＣＰ１との間に置かれ、（ｂ）第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、ＣＭ２がＣＰ２とＤＤ２との間に置かれ、ＤＤ１及びＤＤ２が互いに結合し、それによって第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体が二量体を形成し、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性レベルが低減していることを特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）が提供される。

いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、第２のペプチドマスク（ＰＭ２）及び第４の開裂可能部分（ＣＭ４）をさらに含み、ＣＭ４はＰＭ２とＣＰ２との間に置かれる。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、ＰＭ１、ＣＭ３、ＣＰ１、ＣＭ１及びＤＤ１を含む第１のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＣＰ２、ＣＭ２及びＤＤ２を含む第２のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＰＭ２、ＣＭ４、ＣＰ２、ＣＭ２及びＤＤ２を含む第２のポリペプチドを含む。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、ＣＰ１、ＣＭ１及びＤＤ１を含む第１のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＣＰ２、ＣＭ２及びＤＤ２を含む第２のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、１対のＦｃドメイン；ヒトＩＬ－１５受容体のアルファ鎖（ＩＬ１５Ｒα）及び可溶性ＩＬ－１５からのスシ（ｓｕｓｈｉ）ドメイン；バルナーゼ及びバルスター；プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）及びＡキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）；変異ＲＮａｓｅＩフラグメントベースのアダプタ／ドッキングタグモジュール；エピトープ及びシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）；エピトープ及び単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）；タンパク質シンタキシン、シナプトタグミン、シナプトブレビン及びＳＮＡＰ２５の相互作用に基づく可溶性Ｎ－エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体（ＳＮＡＲＥ）モジュール；抗原結合ドメイン及びエピトープからなる群から選択される対である。

いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、１対のＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、１対のＦｃドメインは、１対のヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、配列番号３と少なくとも８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインはそれぞれ、配列番号３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインはそれぞれ、配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は同一である。例えば、ＤＤ１及びＤＤ２は、１対の同一のヒトＩｇＧ４Ｆｃドメインであってよい。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、それぞれ配列番号３１５及び配列番号３１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、グリコシル化を排除するための、及び／またはＦｃ－γ受容体結合を低減させるための変異を含有する。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、変異Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇを含む；いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、２３４番目及び／または２３５番目で変異、例えばＬ２３５Ｅ、またはＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＩｇＧ１内）、またはＦ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＩｇＧ４内）を含む；いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、変異Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、もしくはＰ３３１Ｓ、またはこれらの組み合わせを含むＩｇＧ２のＦｃドメインである（全てＥＵナンバリングに準拠する）。

遺伝子操作したヒトＦｃドメインの追加例は、当業者に周知である。少なくとも１つのアミノ酸の変異がＦｃ機能の低下をもたらすＩｇ重鎖定常領域アミノ酸の例としては、重鎖定常領域の２２８、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２５２、２５４、２５６、２６５、２７０、２９７、３１８、３２０、３２２、３２７、３２９、３３０及び３３１番目のアミノ酸の変異が挙げられるが、これらに限定されない（ＥＵナンバリングに準拠する）。変異アミノ酸の組み合わせの例もまた、当該技術分野において知られており、例えばＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓなど２３４、２３５及び３３１番目のアミノ酸における変異の組み合わせ、またはＥ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ及びＫ３２２Ａなど３１８、３２０及び３２２番目のアミノ酸における変異の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

遺伝子操作したＦｃドメインのさらなる例としては、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６ＩｇＧ１；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥＩｇＧ１；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０ＬＩｇＧ１；Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ；１本の重鎖におけるＬ２３４Ｙ／Ｌ２３５Ｑ／Ｇ２３６Ｗ／Ｓ２３９Ｍ／Ｈ２６８Ｄ／Ｄ２７０Ｅ／Ｓ２９８ＡＩｇＧ１、及び反対の重鎖におけるＤ２７０Ｅ／Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｍ／Ｋ３３４ＥＩｇＧ；Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥＩｇＧ１；Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３ＳＩｇＧ１；Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４ＴＩｇＧ１；Ｅ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０ＹＩｇＧ１；Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７ＱまたはＮ２９７ＧＩｇＧ１；Ｌ２３５ＥＩｇＧ１；Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡＩｇＧ１；Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡＩｇＧ４；Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１ＳＩｇＧ２；Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１ＳＩｇＧ２；Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥＩｇＧ１；Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳＩｇＧ１；Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８ＦＩｇＧ１；Ｎ３２５Ｓ／Ｌ３２８ＦＩｇＧ１などが挙げられる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作したＦｃドメインは、Ｎ２９７ＡＩｇＧ１、Ｎ２９７ＱＩｇＧ１及びＳ２２８ＰＩｇＧ４からなる群から選択される１種以上の置換を含む。

いくつかの実施形態では、ＤＤ１は抗原結合ドメインを含み、ＤＤ２は対応するエピトープを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗Ｈｉｓタグ抗原結合ドメインであり、ＤＤ２はＨｉｓタグを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２の少なくとも一方は、非ポリペプチドポリマー及び小分子からなる群から選択される、二量体化ドメインの置換基を含む。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、互いに共有結合した非ポリペプチドポリマーを含む。いくつかの実施形態では、非ポリペプチドポリマーは硫黄含有ポリエチレングリコールであり、ＤＤ１及びＤＤ２は、１個以上のジスルフィド結合を介して互いに共有結合されている。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２の少なくとも一方は、小分子を含む。いくつかの実施形態では、小分子はビオチンである。いくつかの実施形態では、ＤＤ１はビオチンを含み、ＤＤ２はアビジンを含む。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は、成熟サイトカインである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２はそれぞれ、成熟サイトカイン配列を含み、シグナルペプチド（本明細書において「シグナル配列」とも称される）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、それぞれ独立して、インターフェロン、インターロイキン、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＤ１５４、ＬＴ－β、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、４－１ＢＢＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、ＣＤ１７８、ＧＩＴＲＬ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＡＬＬ－１、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、ＴＲＡＮＣＥ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β３、Ｅｐｏ、Ｔｐｏ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、Ｍ－ＣＳＦ及びＭＳＰからなる群から選択される。

ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、野生型ヒトもしくは非ヒトの動物の配列、変異体配列、トランケートされた配列、ハイブリッド配列、または挿入を含む配列であってよい。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は同一である。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は異なり、本開示は、本明細書に列挙されるサイトカインタンパク質の、任意の２種の選択及び組み合わせを包含する。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキンである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は、いずれもインターロイキンである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は、異なるインターロイキンである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は、同一のインターロイキンである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１またはＣＰ２は、インターロイキンである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２の一方はインターロイキンであり、もう一方のＣＰ１またはＣＰ２は、インターロイキン以外のサイトカインである。いくつかの態様では、一方または両方のサイトカインは、単量体サイトカインである。いくつかの態様では、一方または両方のインターロイキンは、単量体インターロイキンである。いくつかの態様では、ＣＰ１またはＣＰ２の一方は単量体インターロイキンであり、もう一方のＣＰ１またはＣＰ２は異なるサイトカインである。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、それぞれ独立して、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６及びＩＬ－１７からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２はＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、変異体サイトカイン配列を含有する。いくつかの態様では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、ユニバーサルサイトカイン配列を含有する。いくつかの態様では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、サイトカイン活性を保持するトランケートされた配列を含有する。

いくつかの実施形態では、インターロイキン（複数可）は、ヒト野生型成熟インターロイキンである。いくつかの実施形態では、インターロイキン（複数可）は、ＩＬ－１５であってよい。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２はいずれもＩＬ－１５である。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２はいずれもヒト成熟ＩＬ－１５である。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２はいずれも、ヒト成熟ＩＬ－１５に由来するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５は、トランケートされてよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５のアミノ酸４９－１６１（配列番号３４７）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５のアミノ酸４９－１６２（配列番号３４８）を含む。いくつかの実施形態では、インターロイキン（複数可）は、変異体インターロイキンである。いくつかの実施形態では、インターロイキン（複数可）は、内因性プロテアーゼ開裂部位が、１種以上のアミノ酸の置換、欠失または挿入によって機能不全にされている変異体インターロイキンである。いくつかの実施形態では、インターロイキン（複数可）は、例えば、異なるサイトカインサブタイプのハイブリッド配列、またはキメラサイトカイン配列、またはヒト化サイトカイン配列を有しているユニバーサルサイトカイン分子である。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号３４７と少なくとも８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号３４７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号３４７の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６及びＩＬ－１７からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ－２及びＩＬ－１５からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２はそれぞれ、合計約３個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及びＣＭ２は、異なるプロテアーゼの基質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及びＣＭ２は同じ長さであり、同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及びＣＭ２は、同一プロテアーゼの基質を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ（複数可）は、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＢＡＣＥ、レニン、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１４、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＶ／Ｌ２、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、クルジパイン、レグマイン、オツベイン－２（Ｏｔｕｂａｉｎ－２）、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、ＢＭＰ－１、マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－１６、ＭＭＰ－１７、ＭＭＰ－１９、ＭＭＰ－２０、ＭＭＰ－２３、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－２６、ＭＭＰ－２７）、活性化タンパク質Ｃ、カテプシンＡ、カテプシンＧ、キマーゼ、ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ、エラスターゼ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾアターゼ、ＨｔｒＡ１、ヒト好中球リアーゼ、ラクトフェリン、マラプシン（ｍａｒａｐｓｉｎ）、ＮＳ３／４Ａ、ＰＡＣＥ４、プラスミン、ＰＳＡ、ｔＰＡ、トロンビン、トリプターゼ、ｕＰＡ、ＤＥＳＣ１、ＤＰＰ－４、ＦＡＰ、ヘプシン、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＭＰＲＳＳ３及びＴＭＰＲＳＳ４からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ（複数可）は、ｕＰＡ、レグマイン、ＭＴ－ＳＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＢＭＰ－１、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、及びＭＭＰ－１４からなる群から選択される。

好適な開裂可能部分は、ＷＯ２０１０／０８１１７３、ＷＯ２０１５／０４８３２９、ＷＯ２０１５／１１６９３３、ＷＯ２０１６／１１８６２９及びＷＯ２０２０／１１８１０９において開示され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２は、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号５）、ＴＧＲＧＰＳＷＶ（配列番号６）、ＰＬＴＧＲＳＧＧ（配列番号７）、ＴＡＲＧＰＳＦＫ（配列番号８）、ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号９）、ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号１０）、ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１１）、ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１２）、ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号１３）、ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号１４）、ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号１５）、ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１６）、ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号１７）、ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号１８）、ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１９）、ＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号２０）、ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号２１）、ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号２２）、ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号２３）、ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号２４）、ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号２５）、ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号２６）、ＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３０）、ＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号３１）、ＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号３２）、ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号３４）、ＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号３５）、ＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号３６）、ＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号３７）、ＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号３８）、ＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号３９）、ＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号４０）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）、ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号４２）、ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号４３）、ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号４４）、ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号４５）、ＩＳＳＧＬ（配列番号４６）、ＩＳＳＧＬＬＳ（配列番号４７）、ＩＳＳＧＬＬ（配列番号４８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号４９）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号５０）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号５１）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号５２）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号５３）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号５４）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号５５）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号５６）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号５７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号５８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号５９）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６０）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６１）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６２）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６３）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号６４）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６５）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６６）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６８）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６９）、ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号７０）、ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号７１）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号７２）、ＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号７３）、ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号７４）、ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号７５）、ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号７６）、ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号７７）、ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号７８）、ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号７９）、ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号８０）、ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号８１）、ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号８２）、ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号８３）、ＧＰＲＳＦＧ（配列番号８４）、ＳＡＲＧＰＳＲＷ（配列番号８５）、ＧＧＷＨＴＧＲＮ（配列番号８６）、ＨＴＧＲＳＧＡＬ（配列番号８７）、ＡＡＲＧＰＡＩＨ（配列番号８８）、ＲＧＰＡＦＮＰＭ（配列番号８９）、ＳＳＲＧＰＡＹＬ（配列番号９０）、ＲＧＰＡＴＰＩＭ（配列番号９１）、ＲＧＰＡ（配列番号９２）、ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ（配列番号９３）、ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ（配列番号９４）、ＳＰＬＴＧＲＳＧ（配列番号９５）、ＳＡＧＦＳＬＰＡ（配列番号９６）、ＬＡＰＬＧＬＱＲＲ（配列番号９７）、ＳＧＧＰＬＧＶＲ（配列番号９８）、ＰＬＧＬ（配列番号９９）、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）、ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号３３）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号５４）、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６８）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）、及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ（複数可）は対象の腫瘍によって産生され、例えばプロテアーゼは、対象の健康な組織内よりも、腫瘍内でより多量に産生される。いくつかの実施形態では、対象はがんを有すると診断または特定されている。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体において、ＣＰ１及びＣＭ１は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体において、ＣＭ１及びＤＤ１は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体において、ＣＰ２及びＣＭ２は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体において、ＣＭ２及びＤＤ２は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、ＣＭ１に直接的に隣接しているＣＰ１、及びＤＤ１に直接的に隣接しているＣＭ１を含み、ＣＭ１は、配列番号５～１００及び配列番号３４９からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＣＭ２に直接的に隣接しているＣＰ２、及びＤＤ２に直接的に隣接しているＣＭ２を含み、ＣＭ２は配列番号５～１００及び配列番号３４９からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、ＣＭ１に直接的に隣接しているＣＰ１、及びＤＤ１に直接的に隣接しているＣＭ１を含み、ＣＭ１は１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の長さのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＣＭ２に直接的に隣接しているＣＰ２、及びＤＤ２に直接的に隣接しているＣＭ２を含み、ＣＭ２は１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の長さのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は、サイトカイン（それぞれＣＭ１及びＣＭ２）が、１０、９、８、７、６、５または４個以下の長さのアミノ酸である開裂可能部分（それぞれＣＭ１及びＣＭ２）に直接的に隣接し、開裂可能部分が、ヒトＩｇＧのＦｃ領域である二量体化ドメイン（それぞれＤＤ１及びＤＤ２）に直接的に隣接するようにそれぞれ構成され、Ｆｃ領域のＮ末端が、Ｎ末端からＣ末端方向に読み取ったヒンジ領域における最初のシステイン残基（例えば、ＥＵナンバリングを用いて、ヒトＩｇＧ１のシステイン２２６）となる。いくつかの態様では、二量体化ドメインは、上部ヒンジの残基が欠失したＩｇＧのＦｃ領域である。例えば、Ｆｃは、Ｎ末端配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３８７）、ＥＲＫ、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ（配列番号３８８）またはＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号３８９）が欠失した変異体である。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、少なくとも１個のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のリンカーは、ＣＰ１とＣＭ１との間に配置されたリンカーＬ１及び／またはＣＭ１とＤＤ１との間に配置されたリンカーＬ２である。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、少なくとも１個のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１個のリンカーは、ＣＰ２とＣＭ２との間に配置されたリンカーＬ３及び／またはＣＭ２とＤＤ２との間に配置されたリンカーＬ４である。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体はリンカーＬ１を含み、第２のモノマー構成体はリンカーＬ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ１及びＬ３は同一である。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体はリンカーＬ２を含み、第２のモノマー構成体はリンカーＬ４を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ２及びＬ４は同一である。いくつかの実施形態では、各リンカーは、１個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸の全長を有する。いくつかの実施形態では、各リンカーは、少なくとも５個のアミノ酸の全長を有する。本明細書で使用する場合、用語「リンカー」は、アミノ酸配列がプロテアーゼの基質でないペプチドを意味する。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、少なくとも１個のリンカーを含み、各リンカーは独立して、単一のグリシン（Ｇ）；２個のグリシン残基（ＧＧ）；ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号２１０）；ＧＧＧＳ（配列番号２）；ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２１１）；ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２１２）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１４）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１５）；ＧＧＧＧＳ（配列番号２１６）；ＧＳ；ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１７）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１８）；ＧＧＳＬＤＰＫＧＧＧＧＳ（配列番号２１９）；ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号２２０）；ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号２２１）；ＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳ（配列番号２２２）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＫＧ（配列番号２２３）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＳＧＳＴＫＧ（配列番号２２４）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２２５）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）；（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２２７）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２８）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１６）、各ｎは少なくとも１である整数である；ＧＧＳＧ（配列番号２２９）；ＧＧＳＧＧ（配列番号２３０）；ＧＳＧＳＧ（配列番号２３１；ＧＳＧＧＧ（配列番号２３２）；ＧＧＧＳＧ（配列番号２３３）；ＧＳＳＳＧ（配列番号２３４）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３５）；及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号２）の配列を含む。

本明細書で使用する場合、用語「スペーサー」は、本明細書において、成熟ＡＣＣの遊離末端に、例えばシグナルペプチドと成熟ＡＣＣのＮ末端との間に組み込まれるアミノ酸残基またはペプチドを意味する。いくつかの態様では、スペーサー（または「ヘッダー」）は、グルタミン（Ｑ）残基を含有してよい。いくつかの態様では、スペーサー内の残基は、アミノペプチダーゼ及び／またはエキソペプチダーゼの作用を最小限にして、Ｎ末端アミノ酸の開裂を防ぐ。例示的かつ非限定的なスペーサーアミノ酸配列は、以下：ＱＧＱＳＧＳ（配列番号３７５）；ＧＱＳＧＳ（配列番号３７６）；ＱＳＧＳ（配列番号３７７）；ＳＧＳ；ＧＳ；Ｓ；ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号３７８）；ＧＱＳＧＱＧ（配列番号３７９）；ＱＳＧＱＧ（配列番号３８０）；ＳＧＱＧ（配列番号３８１）；ＧＱＧ；ＱＧ；Ｇ；ＱＧＱＳＧＱ（配列番号３８２）；ＧＱＳＧＱ（配列番号３８３）；ＱＳＧＱ（配列番号３８４）；ＱＧＱＳＧ（配列番号３８５）；ＱＧＱＳ（配列番号３８６）；ＳＧＱ；ＧＱ；及びＱの例示的なアミノ酸配列のいずれかを含んでよい、またはからなってよい。いくつかの実施形態では、スペーサー配列は省略されてもよい。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、任意選択的ＰＭ１、任意選択的ＣＭ３、ＣＰ１、ＣＭ１、及びＣＭ１のＣ末端に直接または間接的に連結されたＤＤ１を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、Ｃ末端からＮ末端の方向で、任意選択的ＰＭ１、任意選択的ＣＭ３、ＣＰ１、ＣＭ１、及びＣＭ１のＮ末端に直接または間接的に連結されたＤＤ１を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の方向で、任意選択的ＰＭ２、任意選択的ＣＭ４、ＣＰ２、ＣＭ２、及びＣＭ２のＣ末端に直接または間接的に連結されたＤＤ２を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、Ｃ末端からＮ末端の方向で、ＣＰ２、ＣＭ２、及びＣＭ２に直接または間接的に連結されたＤＤ２を含む。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、ＣＰ１、任意選択的リンカー、ＣＭ１、任意選択的リンカー、及びＤＤ１を含み、ＤＤ１はＩｇＧのＦｃ領域であり、Ｆｃ領域のＮ末端が、Ｎ末端からＣ末端方向に読み取ったヒンジ領域における最初のシステイン残基（例えば、ＥＵナンバリングを用いて、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４のシステイン２２６）であり、ＣＰ１とＤＤ１のＮ末端システインとの間に配置されるＣＭ１及び任意のリンカー（複数可）は、合わせて１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下のアミノ酸、好ましくは１０個以下のアミノ酸、特に好ましくは７個以下のアミノ酸の全長を有する。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、ＣＰ２、任意選択的リンカー、ＣＭ２、任意選択的リンカー、及びＤＤ２を含み、ＤＤ２はＩｇＧのＦｃ領域であり、Ｆｃ領域のＮ末端が、Ｎ末端からＣ末端方向に読み取ったヒンジ領域における最初のシステイン残基（例えば、ＥＵナンバリングを用いて、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４のシステイン２２６）であり、ＣＰ２とＤＤ２のＮ末端システインとの間に配置されるＣＭ２及び任意のリンカー（複数可）は、合わせて１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下のアミノ酸、好ましくは１０個以下のアミノ酸、好ましくは８個以下のアミノ酸、特に好ましくは７個以下のアミノ酸の全長を有する。

いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体が同一であり、配列番号３５０のアミノ酸配列を含む、ホモ二量体である。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体が同一であり、配列番号３５０のアミノ酸２１－３５９を含む、ホモ二量体である。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体が同一であり、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５及び配列番号３５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むホモ二量体である。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体はそれぞれ、配列番号３５０のアミノ酸２１－３５９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体はそれぞれ、配列番号３５０、配列番号３５０のアミノ酸２１－３５９、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５及び配列番号３５６からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体はそれぞれ、配列番号３４７と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端の方向に、配列番号３４７；配列番号４１、配列番号６８、配列番号１００及び配列番号３４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＭ；ならびに二量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ヒトＩＬ－１５に特異的に結合する任意選択的ペプチドマスク；任意選択的ＣＭ３；ヒトＩＬ－１５のアミノ酸配列を含むＣＰ１；配列番号５～１００及び配列番号３４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＭ１；ならびにヒトＩｇＧのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体はそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ヒトＩＬ－１５に特異的に結合する任意選択的ペプチドマスク；任意選択的ＣＭ３；配列番号３４７；配列番号４１、配列番号６８、配列番号１００及び配列番号３４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＭ；ならびにヒトＩｇＧのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１はＩＬ－１５であり、ＡＣＣは、配列番号３５８～３７４からなる群に由来するアミノ酸配列を含むペプチドマスクを含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１はＩＬ－１５であり、ＡＣＣは、配列番号３５８～３７４からなる群から選択されるアミノ酸配列に由来する、４０個以下のアミノ酸のペプチドマスクを含む。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性は、表面プラズモン共鳴を使用して決定される、その同族受容体に対するＣＰ１及び／またはＣＰ２の結合親和性（Ｋ_Ｄ）である。例えば、ＣＰ１またはＣＰ２がインターロイキンである場合、同族受容体は、例えばＣＤ２５（ＩＬ－２Ｒα）、ＣＤ１２２（ＩＬ－２Ｒβ）及びＣＤ１３２（ＩＬ－２Ｒγ）を含むインターロイキン受容体であってよい。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性は、リンパ腫細胞の増殖レベルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性は、リンパ腫細胞における、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＩＳＧＦ３経路の活性化レベルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの活性は、細胞、例えばリンパ腫細胞またはＨＥＫ細胞における分泌型アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）の産生レベルである。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ（プロテアーゼへの曝露前）は、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、対照のレベルと比較して少なくとも２倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、対照のレベルと比較して少なくとも５倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性が、対照のレベルと比較して少なくとも１０倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、対照のレベルと比較して、少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルは、ＡＣＣをプロテアーゼ（複数可）に曝露した後の、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２の対照レベルは、対応する野生型成熟サイトカインの、対応するＣＰ１及び／またはＣＰ２活性である。

いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、プロテアーゼ（複数可）への曝露後に、切断産物を生成することを特徴とし、切断産物は、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性を含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性は、抗増殖活性である。いくつかの実施形態では、対照レベルは野生型成熟サイトカインのＥＣ５０値であり、ＥＣ５０（野生型対照レベル）に対するＥＣ５０（切断産物）の比率は、約１０未満、または約９未満、または約８未満、または約７未満、または約６未満、または約５未満、または約４未満、または約３未満、または約２未満、または約１．５未満であるか、または約１に等しい。いくつかの実施形態では、切断産物のＥＣ５０は、野生型成熟サイトカインのＥＣ５０とほぼ同一であり、これは開裂の後、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性が、完全に回復する、またはほぼ完全に回復することを示している。いくつかの実施形態では、野生型対照のＥＣ５０に対する切断産物のＥＣ５０の比率は、約１～約１０、または約２～約８、または約３～約７、または約４～約６であり、プロテアーゼ活性化後のサイトカイン活性の良好な回復を示している。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２はＩＬ－１５であり、ＡＣＣはプロテアーゼ活性化後に切断産物を有することを特徴とし、組み換えＩＬ－１５のＥＣ５０に対する切断産物のＥＣ５０の比率は、ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞において測定するとき、１～約１０、または約２～約８、または約３～約７、または約４～約６、または約５～約７、または約６である。

本明細書において、本明細書に記載のＡＣＣのいずれか１つを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態では、本組成物は、薬学的組成物である。本明細書においては、本明細書に記載される組成物のいずれか１つの、少なくとも１回の用量を含むキットもまた提供される。

本明細書において、治療を必要とする対象の治療方法であって、治療有効量の、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか１つ、または本明細書に記載される組成物のいずれか１つを対象に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象はがんを有すると特定または診断されている。いくつかの非限定的な実施形態では、がんは、カポジ肉腫、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫、神経芽細胞腫、基底細胞癌、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭腺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、膵臓癌である。いくつかの非限定的な実施形態では、がんはリンパ腫である。いくつかの非限定的な実施形態では、リンパ腫はバーキットリンパ腫である。

本明細書において、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか１つのＣＰ１及びＣＭ１を含むポリペプチドをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるＤＤ１のいずれか１つをさらに含む。本明細書において、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか１つのＣＰ２及びＣＭ２を含むポリペプチドをコードする核酸もまた提供される。モノマーが同一である場合、本開示は、二量体化してＡＣＣを形成するモノマーをコードする単一の核酸を提供する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載されるＤＤ２のいずれか１つをさらに含む。本明細書において、本明細書に記載される核酸のいずれか１つを含むベクターもまた提供される。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。本明細書において、本明細書に記載される核酸のいずれか１つ、または本明細書に記載されるベクターのいずれか１つを含む細胞もまた提供される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードする核酸は、配列番号３５７に従うポリヌクレオチドを含む。

本明細書において、核酸の対であって、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか１つの、第１のモノマー構成体のＣＰ１及びＣＭ１を含むポリペプチドと、第２のモノマー構成体のＣＰ２及びＣＭ２を含むポリペプチドと、を一緒になってコードする核酸の対が提供される。本明細書において、本明細書に記載される核酸の対のいずれか１つを一緒になって含むベクターの対もまた提供される。いくつかの実施形態では、ベクターの対は、発現ベクターの対である。本明細書においては、本明細書に記載される核酸の対のいずれか１つ、または本明細書に記載されるベクターの対のいずれか１つを含む細胞もまた提供される。その他の実施形態では、本発明は、ベクターの対を含むベクターを提供する。

本明細書において、ＡＣＣを作製する方法であって、本明細書に記載されるいずれか１つの細胞を、液体培地中で、ＡＣＣを作製するのに十分な条件下にて培養することと、細胞または液体培地からＡＣＣを回収することとを含む、ＡＣＣを生成する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞または液体培地から回収したＡＣＣを単離することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、単離したＡＣＣを薬学的組成物に調製することをさらに含む。

本明細書において、本明細書に記載の方法のいずれか１つで作製したＡＣＣが提供される。本明細書において、本明細書に記載のＡＣＣのいずれか１つを含む組成物もまた提供される。本明細書において、本明細書に記載される組成物のいずれか１つの組成物もまた提供され、組成物は薬学的組成物である。本明細書においては、本明細書に記載される組成物のいずれか１つの、少なくとも１回の用量を含むキットもまた提供される。

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書では、本明細書で使用するための方法及び材料を記載する。当該技術分野で知られている他の好適な方法及び材料も使用することができる。材料、方法、及び例は、例示に過ぎず、限定的であることは意図されない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及び他の参考文献は、参照によってその全体が組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が優先する。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。

用語「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的語のうちの１つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指す。一例として、「細胞（ａｃｅｌｌ）」は、１個以上の細胞を包含する。

本明細書で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」及び「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、数値または範囲で明記される量を修飾するために使用されるとき、その数値だけでなく、当業者に既知の、その値からの合理的な逸脱も示す。例えば、適切な場合、±２０％、±１０％または±５％は、詳述された値が意図する意味の範囲内である。

濃度、量及びその他の数値データは、本明細書において、範囲形式で表されてよい、または示されてよい。係る範囲形式は便宜上及び簡略性のためのみに使用され、したがって範囲の制限として明示的に列挙された数値だけでなく、あたかも各数値及び部分的な範囲が明示的に列挙されるかのように、その範囲内に包含された全ての個々の数値または部分的な範囲もまた含むと柔軟に解釈されるべきであることを理解されたい。実例として、「約０．０１～２．０」の数値の範囲は、約０．０１～約２．０という明示的に列挙された値だけでなく、示された範囲内の個々の数値及び部分的な範囲もまた含むと解釈されるべきである。したがって、この数値の範囲内には、個々の値、例えば０．５、０．７及び１．５など、ならびに部分的な範囲、例えば０．５～１．７、０．７～１．５、及び１．０～１．５などが含まれる。さらに、このような解釈は、記載されている範囲の幅または特性に関係なく適用されるべきである。加えて、全ての百分率は、特に明記しない限り、重量％であると留意されたい。

本開示の範囲を理解する上で、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及びそれらの派生形は、本明細書で使用する場合、記載された特徴、要素、構成成分、グループ、整数及び／または工程の存在を規定するが、その他の記載されていない特徴、要素、構成成分、グループ、整数及び／または工程の存在を排除しない、オープンエンドの用語であることを意図する。上記は、類似の意味を有する単語、例えば用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及びそれらの派生形にも適用される。用語「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」及びその派生形は、本明細書で使用する場合、記載された特徴、要素、構成成分、グループ、整数及び／または工程の存在を規定するが、その他の記載されていない特徴、要素、構成成分、グループ、整数及び／または工程の存在を排除する、クローズドの用語であることを意図する。用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」は、本明細書で使用する場合、記載された特徴、要素、構成成分、グループ、整数及び／または工程の存在の規定に加えて、特徴、要素、構成成分、グループ、整数及び／または工程の基本的かつ新規の特徴（複数可）に実質的に影響を及ぼさないものの存在の規定を意図する。これらの移行句のいずれか１つ（すなわち、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」または「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」）への言及は、具体的には用いられていない、その他の移行句のいずれかへの置き換えに対する直接的な支持を提供すると理解される。例えば、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」から「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」への修正は、本開示を通して開示される任意の要素がこのように定義されるために、直接的な支持が見いだされる。この定義に基づいて、本明細書に開示される、または参照によって組み込まれる任意の要素は、特許請求される発明に含まれてもよく、または除外されてもよい。

本明細書で使用する場合、便宜上、複数の化合物、要素または工程が一般的な一覧において提示されてよい。ただし、これらの一覧は、一覧の各メンバーが別個の一意のメンバーとして個別に識別されるかのように解釈されるべきである。したがって、このような一覧の個別のメンバーは、そうでないという表示がない場合、単に一般的なグループでの提示のみに基づいて、同じ一覧の任意のその他のメンバーと事実上同等のものとして解釈されるべきでない。

さらに、特定の分子、構成体、組成物、要素、部分、賦形剤、疾患、状態、特性、ステップなどは、本開示のある特定の実施形態もしくは態様、または別個の段落もしくはセクションの文脈で議論されてよい。これは単に便宜上及び簡潔さのためのものであり、このような任意の開示は、等しく適用可能であり、本開示及び特許請求の範囲の任意の場所に見いだされる、任意のその他の実施形態または態様と組み合わせることを意図すると理解され、これらは全て、出願日における出願及び特許請求する発明を形成する。例えば、構成体、組成物もしくは方法に関して記載された構成体、分子、方法ステップ、キット、または組成物の一覧は、本開示の任意のその他の部分に記載される構成体、組成物、配合物及び方法に関連した実施形態の直接的な支持を、それらの方法ステップ、有効な薬剤、キットまたは組成物が、その実施形態または態様の文脈またはセクションにおいて再列挙されていない場合であっても、見いだすことが意図され、直接的な支持を見いだす。

特に指定のない限り、「タンパク質をコードする核酸配列」は、互いの縮重バージョンであり、そのため同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。

用語「Ｎ末端に置かれる」は、ポリペプチドの一次アミノ酸配列における第１のドメインまたは配列の位置について第２のドメインまたは配列と比較して言及する場合、第１のドメインまたは配列は、第２のドメインまたは配列よりも、ポリペプチドの一次アミノ酸配列のＮ末端の近くに位置することを意味する。いくつかの実施形態では、第１のドメインまたは配列と第２のドメインまたは配列との間に、さらなる配列及び／またはドメインがあってもよい。

用語「Ｃ末端に置かれる」は、ポリペプチドの一次アミノ酸配列における第１のドメインまたは配列の位置について第２のドメインまたは配列と比較して言及する場合、第１のドメインまたは配列は、第２のドメインまたは配列よりも、ポリペプチドの一次アミノ酸配列のＣ末端の近くに位置することを意味する。いくつかの実施形態では、第１のドメインまたは配列と第２のドメインまたは配列との間に、さらなる配列及び／またはドメインがあってもよい。

用語「外因性」は、細胞、組織または生物体の外から導入される、または由来する任意の物質で、それが導入される同じ細胞、組織または生物体によって産生されない、または由来しない物質を意味する。

用語「形質導入された」、「トランスフェクトされた」または「形質転換された」は、外因性核酸が細胞に導入または移入されるプロセスを意味する。「形質導入された」、「トランスフェクトされた」または「形質転換された」細胞（例えば、哺乳動物細胞）は、本明細書に記載される活性化可能サイトカイン構成体のいずれかをコードする外因性核酸を含有する外因性核酸（例えば、ベクター）を用いて形質導入された、トランスフェクトされた、または形質転換された細胞である。

用語「核酸」は、１本鎖または２本鎖の形態の、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、またはリボ核酸（ＲＮＡ）または、これらの組み合わせを意味する。特に限定されない限り、この用語は、参照のヌクレオチドと類似した結合特性を有する、天然のヌクレオチドの周知の類似体を含有する核酸を包含する。特に指定のない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に示される配列に加えて相補的配列も暗に包含する。本明細書に記載される核酸のいずれかのいくつかの実施形態では、核酸はＤＮＡである。本明細書に記載される核酸のいずれかのいくつかの実施形態では、核酸はＲＮＡである。

当該技術分野において既知の、標準的な技術、例えば部位特異的変異誘発及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）媒介変異誘発によって、ヌクレオチド配列への修飾を導入することができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換されている置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン及びヒスチジン）、非極性アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン及びトリプトファン）、無電荷極性アミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン及びチロシン）、親水性アミノ酸（例えば、アルギニン、アスパラギン、アスパルテート、グルタミン、グルタメート、ヒスチジン、リシン、セリン及びスレオニン）、疎水性アミノ酸（例えば、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン及びバリン）が挙げられる。アミノ酸のその他のファミリーとしては、脂肪族ヒドロキシアミノ酸（例えば、セリン及びスレオニン）、アミドファミリー（例えば、アスパラギン及びグルタミン）、脂肪族ファミリー（例えば、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン）、芳香族ファミリー（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン）が挙げられる。

本明細書で使用する場合、「特異的に結合する」、または「と免疫反応する」という語句は、活性化可能抗原結合タンパク質複合体が、所望の標的抗原の１個以上の抗原決定基と反応し、その他のポリペプチドと反応しない、または極めて低い親和性、例えば約１０^－６Ｍ以上で結合することを意味する。

用語「治療」は、疾患の少なくとも１つの症状を改善することを意味する。いくつかの実施形態では、治療される疾患はがんであり、がんの少なくとも１つの症状を緩和するためのものである。

それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１１４０及びＤＤ２１９０を介して、共有結合または非共有結合で、互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１１００と、第１の任意選択的リンカー１１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１１２０と、第２の任意選択的リンカー１３０と、第１の二量体化ドメインＤＤ１１４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２１５０と、第３の任意選択的リンカー１６０と、第２の開裂可能部分ＣＭ２１７０と、第４の任意選択的リンカー１８０と、第２の二量体化ドメインＤＤ２１９０と、を含む。第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１２００及びＤＤ２２５０をそれぞれ介して、共有結合または非共有結合で、互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の二量体化ドメインＤＤ１２００と、第２の任意選択的リンカー２１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１２２０と、第１の任意選択的リンカー２３０と、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１２４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の二量体化ドメインＤＤ２２５０と、第４の任意選択的リンカー２６０と、第２の開裂可能部分ＣＭ２２７０と、第３の任意選択的リンカー２８０と、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２２９０と、を含む。Ｎ末端からＣ末端に、（１）所望によりＰＭ１１１９、所望によりＣＭ３１１７、ＣＰ１１１５、ＣＭ１１１３及びＤＤ１１１１を有する第１のモノマー構成体１１０と；（２）所望によりＰＭ２１２９、所望によりＣＭ４１２７、ＣＰ２１２５、ＣＭ２１２３及びＤＤ２１２１を有する第２のモノマー構成体１２０と；（３）第２のモノマー構成体１２０に第１のモノマー構成体１１０を結合させる１つ以上の共有または非共有結合（←→）と、を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。ＡＣＣは、構成成分間に、１個以上の任意選択的リンカー１１２、１１４、１１６、１１８、１２２、１２４、１２６及び１２８をさらに含んでよい。一例では、ＤＤ１１１１及びＤＤ２１２１は同一である。別の例では、ＤＤ１１１１及びＤＤ２１２１は異なる。それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１３４０及びＤＤ２３９０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１３００と、第１の任意選択的リンカー３１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１３２０と、第２の任意選択的リンカー３３０と、第１の二量体化ドメインＤＤ１３４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２３５０と、第３の任意選択的リンカー３６０と、第２の開裂可能部分ＣＭ２３７０と、第４の任意選択的リンカー３８０と、第２の二量体化ドメインＤＤ２３９０と、を含む。それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１４００及びＤＤ２４５０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の二量体化ドメインＤＤ１４００と、第２の任意選択的リンカー４１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１４２０と、第１の任意選択的リンカー４３０と、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１４４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の二量体化ドメインＤＤ２４５０と、第４の任意選択的リンカー４６０と、第２の開裂可能部分ＣＭ２４７０と、第３の任意選択的リンカー４８０と、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２４９０と、を含む。イタリック体での任意選択的なシグナル配列、下線での成熟ＩＬ－１５（アミノ酸４９－１６１）配列、及び太字体での開裂可能部分（ＣＭ）の配列を有する、マスクしたサイトカイン構成体、ＰｒｏＣ１４７１の配列を示す。ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞を用いてインビトロで試験した、組み換えＩＬ－１５と比較した、ＰｒｏＣ１４７１の活性を示す。プロテアーゼｕＰＡ及びＭＴ－ＳＰ１によるＰｒｏＣ１４７１の活性化を示す。ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞を用いてインビトロで試験した、活性化されていないＰｒｏＣ１４７１及び組み換えＩＬ－１５と比較した、プロテアーゼ活性化ＰｒｏＣ１４７１の活性を示す。Ａは、インターフェロン－α２ｂ－Ｆｃ融合体の柔軟なリンカーの長さの、ＨＥＫ２９３細胞系レポーターアッセイによって決定される、ＥＣ５０への影響を示す。Ｂは、インターフェロン－α２ｂ－Ｆｃ融合体の連結領域（ＬＲ）の長さの、ＨＥＫ２９３細胞系レポーターアッセイによって決定される、ＥＣ５０への影響を示す。インターフェロン－α２ｂ－Ｆｃ融合タンパク質のリンカーの長さの、Ｄａｕｄｉアポトーシスアッセイから決定される、ＥＣ５０への影響を示す。インターフェロン－α２ｂ－Ｆｃ融合タンパク質の連結領域（ＬＲ）の長さの、Ｄａｕｄｉアポトーシスアッセイから決定される、ＥＣ５０への影響を示す。ＡＣＣ（ＩＦＮａ２ｂ１２０４ＤＮＩｄＬＮｈＧ４）；プロテアーゼ処置（活性化）ＡＣＣ（ＩＦＮα－２ｂ１２０４ＤＮＩｄＬＮｈＧ４＋ｕＰＡ）；Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）；及び組み換え親サイトカイン（ＩＦＮａ２ｂ）の活性を評価するための、ＨＥＫ２９３細胞系レポーターアッセイの結果を示す。結果は、プロテアーゼによるＡＣＣの処置後、ＡＣＣのサイトカインの活性は、組み換え親サイトカインと同等のレベルに回復し得ることを示した。ＡＣＣ（ＰｒｏＣ４４０）、プロテアーゼ処置ＡＣＣ（ＰｒｏＣ４４０＋ｕＰＡ）、及び幹細胞ＩＦＮａ２ｂの、抗増殖活性を測定するためのＤａｕｄｉリンパ腫細胞系アッセイの結果（上）、及び活性を測定するためのＨＥＫ２９３細胞系レポーターアッセイの結果（下）を示す。結果は、本開示のＡＣＣ構造を作ることによって活性が１０００倍低下し、プロテアーゼによるＡＣＣの処置後、ＡＣＣのサイトカインの活性が、組み換え親サイトカインと同等のレベルに回復し得ることを示した。Ａは、ＰｒｏＣ４４０の構造を図示し、ｕＰａを用いた、ＣＭ中の予想される部位での開裂を、質量分析によって確認したことを示す。ｕＰａ活性化への感応性に加えて、ＰｒｏＣ４４０はＭＭＰ４によって切断される。Ｂは、質量分析による分析によって、開裂可能部分の近くである、ＩＦＮａのＣ末端の先端のＭＭＰ１４開裂部位（Ｌ１６１）を特定したことを示す。ＭＭＰ１４を用いたプロテアーゼ活性化により、組み換えサイトカインと同等のレベルまで活性が回復した。それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１５４０及びＤＤ２５９０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１５００と、第１の任意選択的リンカー５１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１５２０と、第２の任意選択的リンカー５３０と、第１の二量体化ドメインＤＤ１５４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２５５０と、第３の任意選択的リンカー５８０と、第２の二量体化ドメインＤＤ２５９０と、を含む。それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１６００及びＤＤ２６５０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の二量体化ドメインＤＤ１６００と、第１の任意選択的リンカー６３０と、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１６４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の二量体化ドメインＤＤ２６５０と、第２の任意選択的リンカー６６０と、開裂可能部分ＣＭ６７０と、第３の任意選択的リンカー６８０と、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２６９０と、を含む。それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１７４０及びＤＤ２７９０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ７００と、第１の任意選択的リンカー７１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１７２０と、第２の任意選択的リンカー７３０と、第１の二量体化ドメインＤＤ１７４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、サイトカイン活性を欠くポリペプチドまたはタンパク質７８０と、第２の二量体化ドメインＤＤ２７９０と、を含む。サイトカイン活性を欠くポリペプチドまたはタンパク質７８０は、例えば、サイトカイン活性を欠くトランケートされたサイトカインタンパク質、サイトカイン活性を欠く変異サイトカインタンパク質、スタブ配列、またはＣＰ７００に高い親和性を持って結合し、第２の部分の対照レベルと比較して、第２の部分のサイトカイン活性を低下させるポリペプチド配列であってよい。ＤＤ１７４０とＤＤ２７９０は、同一であっても異なっていてもよい。それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１８００及びＤＤ２８５０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第１の二量体化ドメインＤＤ１８００と、サイトカイン活性を欠くポリペプチドまたはタンパク質８３０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の二量体化ドメインＤＤ２８５０と、第１の任意選択的リンカー８６０と、開裂可能部分ＣＭ８７０と、第２の任意選択的リンカー８８０と、成熟サイトカインタンパク質ＣＰ８９０と、を含む。サイトカイン活性を欠くポリペプチドまたはタンパク質８３０は、例えば、サイトカイン活性を欠くトランケートされたサイトカインタンパク質、サイトカイン活性を欠く変異サイトカインタンパク質、スタブ配列、またはＣＰ７００に高い親和性を持って結合し、第２の部分の対照レベルと比較して、第２の部分のサイトカイン活性を低下させるポリペプチド配列であってよい。ＤＤ１８００とＤＤ２８５０は、同一であっても異なっていてもよい。連結領域（ＬＲ）を図示するＡＣＣの実施形態を概略的に示す。（１）開裂可能部分１２０４を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃ（１２０４）；（２）プロテアーゼ膜型セリンプロテアーゼ１（ＭＴ－ＳＰ１）と、開裂可能部分１２０４を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃとの生成物（１２０４ＭＴ－ＳＰ１）；（３）開裂可能部分１２０４を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃと、プロテアーゼｕＰＡとの生成物（１２０４ｕＰＡ）；（４）５アミノ酸リンカーと縮合した、開裂可能部分１２０４を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃ（１２０４＋１）；（５）ＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃ１２０４＋１と、ＭＴ－ＳＰ１との生成物（１２０４＋１ＭＴ－ＳＰ１）；（６）開裂可能部分１４９０を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃ；（７）ＭＴ－ＳＰ１と、開裂可能部分１４９０を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃとの生成物；ｕＰＡと、開裂可能部分１４９０を有するＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃとの生成物（１４９０ｕＰＡ）、とともに充填したゲルの画像である。Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）（ペグインターフェロンα－２ｂ）、ならびに各種インターフェロンα－２ｂ（ＩＦＮａ２ｂ）融合体：ヒトＩｇＧ４のＮ末端に縮合したＩＦＮａ２ｂ（ＩＦＮａ２ｂＮｈＧ４）；５アミノ酸リンカーを介してヒトＩｇＧ４のＮ末端に縮合したＩＦＮａ２ｂ（ＩＦＮａ２ｂ５ＡＡＮｈＧ４）；活性化可能サイトカイン構成体ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ｄＬ－ｈＩｇＧ４（ＩＦＮａ２ｂ１２０４ＤＮＩｄＬＮｈＧ４）；ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ｄＬ－ｈＩｇＧ４と同一の構成要素を含むが、成熟サイトカインタンパク質構成成分と開裂可能部分との間に置かれる５アミノ酸リンカーも有する活性化可能サイトカイン構成体（ＩＦＮａ２ｂ５ＡＡ１２０４ＤＮＩｄＬＮｈＧ４）；及び活性化可能サイトカイン構成体ＩＦＮ－α２ｂ－１４９０ＤＮＩ－ｈＩｇＧ４（ＩＦＮａ２ｂ１４９０ＤＮＩＮｈＧ４）のインターフェロン－α２ｂ活性を評価する、ＨＥＫ２９３細胞系レポーターアッセイからの結果を提供する。ＰｒｏＣ２８６の構造と、Ｄａｕｄｉアポトーシスアッセイにおいて、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）の活性と比較したＰｒｏＣ２８６の活性とを示す。ＰｒｏＣ２８６及びＳｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）は、同様レベルの活性を示し、これは、ＰｒｏＣ２８６が、ハムスター試験において、ＩＦＮα－２ｂの忍容性を評価するためのＳｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）対照の代用物として用いられ得ることを示唆していた。ＰｒｏＣ２９１の構造と、Ｄａｕｄｉアポトーシスアッセイにおいて、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）の活性と比較したＰｒｏＣ２９１の活性とを示す。ＰｒｏＣ２９１は、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）及びＰｒｏＣ２８６と比較して、有意に低下した活性を示した。処置期間を通じて、ゴールデンシリアンハムスターに、２ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したときの、動物の体重低下を示す。処置期間を通じて、ゴールデンシリアンハムスターに、１０ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したときの、動物の体重低下を示す。処置期間を通じて、ゴールデンシリアンハムスターに、１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したときの、動物の体重低下を示す。２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したゴールデンシリアンハムスターにおける臨床化学結果（アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ））を示す。２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したゴールデンシリアンハムスターにおける臨床化学結果（アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ））を示す。２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したゴールデンシリアンハムスターにおける臨床化学結果（アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ））を示す。２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したゴールデンシリアンハムスターにおける血液学分析の結果（網状赤血球数）を示す。２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したゴールデンシリアンハムスターにおける血液学分析の結果（好中球数）を示す。２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋの対照ｈＩｇＧ４、ＰｒｏＣ２８６またはＰｒｏＣ４４０を投薬したゴールデンシリアンハムスターにおける血液学分析の結果（白血球細胞（ＷＢＣ）数）を示す。ｕＰａによるＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性化を示す。Ａは、ｕＰａを用いた各種ＩＬ－１５含有ＡＣＣの開裂を、電気泳動によって示す。Ｂは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおける、活性化されていないＩＬ－１５含有ＡＣＣと比較した、プロテアーゼ活性化ＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性を示す。ヒトＰＢＭＣ増殖アッセイにおいて、Ｋｉ６７発現のパーセンテージを基準とした、活性化されていないＩＬ－１５含有ＡＣＣと比較した、プロテアーゼ活性化ＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性を示す。ヒトＰＢＭＣＳＴＡＴ５リン酸化アッセイにおける、活性化されていないＩＬ－１５含有ＡＣＣと比較した、プロテアーゼ活性化ＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性を示す。

本明細書において、対応するサイトカインの少なくとも１つの活性レベルの低下を示すが、活性化条件に曝露後、実質的に回復した活性を有するサイトカイン産物を産生する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）が提供される。本発明の活性化可能サイトカイン構成体は、患部組織への曝露に際して選択的に活性化し、正常組織においては活性化しないように設計され得る。このように、これらの化合物は、特定のサイトカインベースの治療に伴う毒性が潜在的に少ない、サイトカインベースの治療の利点を与える可能性を有する。

本明細書においては、関連する中間体、組成物、キット、核酸及び組み換え細胞、ならびに本明細書に記載の活性化可能サイトカインのいずれかの使用方法及び作製方法をはじめとする関連する方法もまた提供される。

本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に記載される特定の要素及び構造的方向性を有するＡＣＣが、特にがん治療における、サイトカインの安全性及び治療指数を向上させるのに、潜在的に有効であると思われることを見いだした。サイトカインは生来の免疫系及び適応免疫系の調節因子であり、前臨床モデルにおいて幅広い抗腫瘍活性を有する一方で、臨床的な成功は、全身性毒性及び標的組織への乏しい全身曝露によって限定されている。本発明者らは、驚くべきことに、本明細書に記載される特定の要素及び構造的方向性を有するＡＣＣが、サイトカイン治療に伴う全身性毒性を低減させ、標的化及び標的組織への曝露を改善すると思われることを見いだした。このように、本開示は、本明細書に記載される特定の要素及び構造的方向性を有するＡＣＣを、対象に投与することによって、サイトカイン治療の標的介在性の薬物消失（ＴＭＤＤ）を低減させる方法を提供する。このように、本発明は、投与されるサイトカイン投与量の有意な割合が、正常組織によって捕捉されるという問題を解決する。この捕捉は、従来のサイトカイン治療において、体循環中の利用可能な投与量の一部が、標的組織、例えばがん性組織に到達するのを制限するため、問題である。本発明のサイトカイン構成体は、標的結合を腫瘍組織に限局し、それによって力価を維持し、副作用を低減させ、新しい標的機会を可能にし、認可された標的の治療域を改善し、創薬不可能な標的の治療域を作り出し、複数の結合様式を提供する。本開示は安全かつ有効な全身送達を可能にし、それによって従来の全身性サイトカイン療法の用量依存的毒性を回避し、また腫瘍内注入の必要性を回避する。本開示は、局部的な抗ウイルス性活性、免疫調節性活性、抗増殖活性及びプロアポトーシス活性を与えるための手段を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、第１及び第２のモノマー構成体の二量体化は、サイトカイン活性のより大幅な低減を達成すること、特に、単一のサイトカインが二量体化ドメインに取り付けられる場合よりも、より大幅な低減を達成することを見いだした（図４参照）。

さらに、本発明者らは、柔軟なリンカーの長さまたは連結領域の長さを変えることによって、サイトカイン活性の低減の程度を調整することができることを発見した。本発明者らは、驚くべきことに、短いプロテアーゼ開裂可能配列を介して、立体障害を有する二量体化ドメイン（ヒンジ領域の最初のシステイン、例えばＥＵナンバリングによって番号をつけたＣｙｓ２２６でトランケートされたヒトＩｇＧのＦｃドメインなど）に、サイトカインを取り付けることによって、およそ１，０００倍以上の程度のサイトカイン活性の低減を達成できることを見いだした。驚くべきことに、立体化学的拘束にもかかわらずプロテアーゼ開裂は発生し、二量体化ドメインからのサイトカイン開裂に応じて、サイトカイン活性は完全に回復する。

本発明者らは、短いプロテアーゼ開裂可能配列を介して、立体障害を有する二量体化ドメイン（ヒンジ領域の最初のシステイン、例えばＥＵナンバリングによって番号をつけたＣｙｓ２２６でトランケートされたヒトＩｇＧのＦｃドメイン、例えばヒトＩｇＧ４のＦｃドメインなど）に、ＩＬ－１５サイトカインを取り付けることによって、およそ１，０００倍程度、かつ少なくとも２５０倍のＩＬ－１５サイトカイン活性を低減させることができることを発見した。その上、二量体化ドメインからのＩＬ－１５サイトカインの開裂に応じて、ＩＬ－１５サイトカイン活性は、標準的な組み換えＩＬ－１５と同一レベルまたはほとんど同一レベルに回復することができる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインからのＩＬ－１５の開裂に応じて、ＩＬ－１５サイトカイン活性は少なくとも５０倍上昇する。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインからのＩＬ－１５の開裂に応じて、ＩＬ－１５サイトカイン活性は少なくとも６０倍上昇する。

出願人の、２０２０年４月１０日に出願された米国仮出願第６３／００８，５４２号は、特定の活性化可能サイトカイン構成体について記載しているものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。出願人の、いずれも２０２１年３月１６日に出願された米国仮出願第６３／１６１，８８９号及び同第６３／１６１，９１３号、ならびに出願人の、いずれも２０２１年３月２３に出願された米国仮出願第６３／１６４，８２７号及び同第６３／１６４，８４９号は、特定の活性化可能サイトカイン構成体について記載しているものであり、これらの内容全体もまた、参照により本明細書に組み込まれる。

活性化可能サイトカイン構成体
本発明の活性化可能サイトカイン構成体は、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含む二量体複合体である。モノマー構成成分の二量体化は、１対の二量体化ドメインによって促進される。一態様では、各モノマー構成体は、サイトカインタンパク質、開裂可能部分、及び二量体化ドメイン（ＤＤ）を含有する。一態様では、一方のモノマー構成体は、サイトカインタンパク質、開裂可能部分及びＤＤを含有し、もう一方のモノマー構成体は、サイトカインタンパク質及びＤＤを含有するが、開裂可能部分は含有しない。一態様では、一方のモノマー構成体は、サイトカインタンパク質、開裂可能部分及びＤＤを含有し、もう一方のモノマー構成体は、サイトカイン活性を欠くタンパク質またはペプチド、及びＤＤを含有するが、開裂可能部分は含有しない。特定の一実施形態において、本発明は、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含有する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
ＣＭ１がＣＰ１とＤＤ１との間に置かれ、
（ｂ）第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
ＣＭ２がＣＰ２とＤＤ２との間に置かれ、
ＤＤ１及びＤＤ２が互いに結合し、それによって第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性の対照のレベルと比較して、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２の低減した活性レベルを有することを特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）を提供する。

特定の実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２はそれぞれ、インターロイキンポリペプチドを含む。一実施形態では、インターロイキンポリペプチドは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６及びＩＬ－１７からなる群から選択される。本開示の別の実施形態では、インターロイキンポリペプチドはＩＬ－１５であり、それによって活性化可能ＩＬ－１５構成体を構成する。一態様では、活性化可能ＩＬ－１５構成体は、組み換えＩＬ－１５と比較して、低減した活性を有する。

用語「活性化可能」は、サイトカイン構成体に関して用いられる場合、１つ以上の活性の第１のレベルを示し、１個または両方の開裂可能部分の開裂を引き起こす状態への曝露に際して、１つ以上の活性の第２のレベルを示すサイトカイン構成体の産生がもたらされるサイトカイン構成体であって、活性の第２のレベルが活性の第１のレベルよりも大きい、サイトカイン構成体を意味する。活性の非限定例としては、本明細書に記載される、または当該技術分野において既知のサイトカインの例示的な活性のいずれかが挙げられる。

用語「成熟サイトカインタンパク質」は、本明細書において、シグナル配列を欠くサイトカインタンパク質を意味する。サイトカインタンパク質（ＣＰ）は、成熟サイトカインタンパク質、またはシグナルペプチドを有するサイトカインタンパク質であってよい。したがって、いくつかの態様において、本発明に開示のＡＣＣは、成熟サイトカインタンパク質配列を含有してよい。いくつかの態様では、本発明に開示のＡＣＣは、成熟サイトカインタンパク質配列、及び付加的にシグナル配列を含有してよい。いくつかの態様では、本発明に開示のＡＣＣは、本明細書で引用されるシグナル配列を含有する、または欠く、本明細書にて開示される配列を含有してよい。

用語「開裂可能部分」及び「ＣＭ」は、本明細書では交換可能に使用され、アミノ酸配列に配列特異的なプロテアーゼの基質が含まれるペプチドを意味する。ＣＭ１及び／またはＣＭ２として使用するのに好適な開裂可能部分としては、当該技術分野において既知であるプロテアーゼ基質のいずれかが挙げられる。例示的な開裂可能部分は、下記により詳細に記載される。

用語「二量体化ドメイン」及び「ＤＤ」は、本明細書では交換可能に使用され、１対の二量体化ドメインの１つのメンバーを意味し、対の各メンバーは、１個以上の共有または非共有結合的相互作用を介してもう一方に結合できる。第１のＤＤと第２のＤＤは同じでも異なっていてもよい。ＤＤ１及び／またはＤＤ２として使用するために好適な例示的なＤＤは、本明細書の以下に、より詳細に記載されている。

用語「ペプチドマスク」及び「ＰＭ」は、本明細書では交換可能に使用され、サイトカインタンパク質の１つ以上の活性を低減または阻害する、５０個未満のアミノ酸のアミノ酸配列を意味する。ＰＭはサイトカインに結合して、サイトカインがその受容体と相互作用するのを制限し得る。いくつかの実施形態では、ＰＭは、４０個以下の長さのアミノ酸である。好ましい実施形態では、ＰＭは、２０個以下の長さのアミノ酸である。いくつかの実施形態では、ＰＭは、１９、１８、１７、１６または１５個以下の長さのアミノ酸である。

本明細書で使用する場合、用語「マスキング効率」は、対照サイトカインの活性によって分離される、切断されていないＡＣＣの活性（例えば、ＥＣ５０）を意味し、対照サイトカインは、ＡＣＣの切断産物、またはＡＣＣのＣＰとして用いられるサイトカインであってよい。少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性のレベルが低減したＡＣＣは、１０を超えるマスキング効率を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＣＣは、１０を超える、１００を超える、１０００を超える、または５０００を超えるマスキング効率を有する。ＣＰ１及び／またはＣＰ２がＩＬ－１５ポリペプチドである、いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞における、ＡＣＣの切断産物のＥＣ５０に対する、切断されていないＡＣＣのＥＣ５０の比率で測定した、約１０～約１００、または約１０～約２００、または約５０～約１５０、または約５０～約８０のマスキング効率を有してよい。

本明細書で使用される場合、サイトカインまたはＦｃドメインなどのポリペプチドは、野生型ポリペプチド（例えば、天然に存在するポリペプチド）、または野生型ポリペプチドの変異体であってよい。変異体は、変異体が野生型ポリペプチドの基本的な機能または活性を保持するという条件で、野生型ポリペプチドの１個以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失及び／または付加によって変性されたポリペプチドであってよい。一部の例では、変異体は、野生型ポリペプチドと比較して、変更された（例えば、増大または低減した）機能または活性を有してよい。いくつかの態様では、変異体は、野生型ポリペプチドの機能的フラグメントであってよい。用語「機能的フラグメント」は、完全長のポリペプチド配列よりも、より少ないアミノ酸を含有し得るが、活性（例えば、サイトカイン活性）を与えるために十分なポリペプチド鎖の長さを含有するポリペプチド（例えば、サイトカイン）の配列を意味する。

第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は、例えば１個以上のリンカーなど、追加の要素をさらに含んでもよい。追加の要素については、以下でさらに詳細に記載する。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体のそれぞれにおけるＣＰ、ＣＭ、及びＤＤ構成成分の組織は、各モノマー構成体において同一の順序で配置されてよい。ＣＰ１、ＣＭ１、及びＤＤ１構成成分は、対応するＣＰ２、ＣＭ２、及びＤＤ２と比較して、例えば、ＣＰ及びＣＭ構成成分（及びＤＤ構成成分がポリペプチドである実施形態ではＤＤ構成成分）の分子量、大きさ、アミノ酸配列などの観点から同一または異なってもよい。したがって、得られる二量体は、対称または非対称のモノマー構成体構成成分を有してよい。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端に、ＣＰ１、ＣＭ１、及びＣＭ１のＣ末端に直接または間接的（リンカーを介して）に連結されるＤＤ１を含む。その他の実施形態では、第１のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＣ末端からＮ末端に、ＣＰ１、ＣＭ１、及びＣＭ１のＮ末端に直接または間接的（リンカーを介して）に連結されるＤＤ１を含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端に、ＣＰ２、ＣＭ２、及びＣＭ２のＣ末端に直接または間接的（リンカーを介して）に連結されるＤＤ２を含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＣ末端からＮ末端に、ＣＰ２、ＣＭ２、及びＣＭ２のＮ末端に直接または間接的（リンカーを介して）に連結されるＤＤ２を含む。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含有する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、（ａ）第１のモノマー構成体が、第１のペプチドマスク（ＰＭ１）と、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の及び第３の開裂可能部分（ＣＭ１及びＣＭ３）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、ＣＭ１がＣＰ１とＤＤ１との間に置かれ、ＣＭ３がＰＭ１とＣＰ１との間に置かれ、（ｂ）第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、ＣＭ２がＣＰ２とＤＤ２との間に置かれ、ＤＤ１及びＤＤ２が互いに結合し、それによって第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体の二量体を形成し、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性の対照のレベルと比較して、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性レベルが低減していることを特徴とする、活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）が提供される。

ＡＣＣ構造は、成熟サイトカインタンパク質構成成分が、活性化後に実質的にサイトカイン活性が損なわれないように活性を低減させるのに、極めて有効であることが発見された。ＡＣＣ内のＣＰの活性は、ＡＣＣの構造（例えば、二量体構造）及びＡＣＣ内のペプチドマスク（複数可）の両方によって低減されてよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＣＣの活性化条件は、ＤＤ及びＰＭの両方からＣＰを切り離すことができる、１種以上のプロテアーゼに曝露することである。例えば、１種以上のプロテアーゼは、ＣＰとＰＭとの間のＣＭ、及びＣＰとＤＤとの間のＣＭを切断してよい。実施例に示されるように、ＡＣＣの活性化は、サイトカイン活性の実質的な回復をもたらした。これらの結果は、ＡＣＣの状況内で、サイトカイン構成成分のコンフォメーションが、不可逆的には変えられなかったことを示唆している。

いくつかの実施形態では、ＣＰがＰＭに連結され、ＣＰの天然の結合パートナーがある場合、マスク効率アッセイで測定するとき、少なくとも２、４、６、８、１２、２８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、８４、９６時間、または５、１０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０日間、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヵ月間以上、ＣＰの結合パートナーに対する結合は起こらない、または実質的に結合は起こらない、またはＣＰの結合パートナーに対する結合は、ＰＭに連結されていないＣＰの結合と比較して、０．００１％、０．０１％、０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％または５０％以下である。例えば、マスク効率アッセイは、候補ペプチドマスクをディスプレイする細胞表面に結合するＡＣＣの親和性を、例えばＦＡＣＳによって測定することを含んでよい。別の非限定的な例示的アッセイとしては、ＡＣＣがその結合パートナーに結合することを阻害するペプチドマスクの能力を、治療上関連する濃度及び時間で評価することが挙げられる。この第２の方法については、ＵＳ２０２００３０８２４３に記載されているように、プロタンパク質がその結合パートナーに時間依存的に結合することを測定するための免疫吸着アッセイが開発されており、同明細書は参照により本明細書に組み込まれる。ＣＰがＩＬ－１５サイトカインである一実施形態では、マスク効率アッセイは、実施例６にて述べるような、ＩＬ－２／ＩＬ１５反応性ＨＥＫ２９３細胞における分泌型アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）の産生レベルの測定を含んでよい。

特定の実施形態では、第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は、二量体の各メンバーの構成成分が、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端に、同じ順序で構成されるように方向付けられる。例示的なＡＣＣの概略図は、図１Ａで提供される。図１Ａを参照し、ＡＣＣは、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端へ、（１）ＣＰ１１００；ＣＰ１１００に対してＣ末端に置かれるＣＭ１１２０；存在する場合、ＣＰ１１００のＣ末端とＣＭ１１２０のＮ末端との間に置かれる任意選択的リンカー１１０；ＤＤ１１４０；及び、存在する場合、ＣＭ１１２０のＣ末端とＤＤ１１４０との間に置かれる任意選択的リンカー１３０、を有する第１のモノマー構成体と、（２）ＣＰ２１５０；ＣＰ２１５０に対してＣ末端に置かれるＣＭ２１７０；存在する場合、ＣＰ２１５０のＣ末端とＣＭ２１７０のＮ末端との間に置かれる任意選択的リンカー１６０；ＤＤ２１９０；及び、存在する場合、ＣＭ２１７０のＣ末端とＤＤ２１９０との間に置かれる任意選択的リンカー１８０、を有する第２のモノマー構成体と、（３）１つ以上の共有または非共有結合（←→）と、を含む。

ＡＣＣの構成成分を反対の方向で構成した、さらなる例示的なＡＣＣの概略図が、図１Ｂに提供される。図１Ｂを参照し、ＡＣＣは、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端へ、（１）ＤＤ１２００；ＣＭ１２２０；存在する場合、ＤＤ１２００とＣＭ１２２０のＮ末端との間に置かれる任意選択的リンカー２１０；ＣＭ１２２０に対してＣ末端に置かれるＣＰ１２４０；及び、存在する場合、ＣＭ１２２０のＣ末端とＣＰ１２４０のＮ末端との間に置かれる任意選択的リンカー２３０、を有する第１のモノマー構成体と、（２）ＤＤ２２５０；ＣＭ２２７０；存在する場合、ＤＤ２２５０とＣＭ２２７０のＮ末端との間に置かれる任意選択的リンカー２６０；ＣＭ２２７０に対してＣ末端に置かれるＣＰ２２９０；及び、存在する場合、ＣＭ２２９０のＣ末端とＣＰ２２９０のＮ末端との間に置かれる任意選択的リンカー２８０、を有する第２のモノマー構成体と、（３）１つ以上の共有または非共有結合（←→）と、を含む。

図２Ａは、それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１３４０及びＤＤ２３９０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端に、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１３００と、第１の任意選択的リンカー３１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１３２０と、第２の任意選択的リンカー３３０と、第１の二量体化ドメインＤＤ１３４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、Ｎ末端からＣ末端に、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２３５０と、第３の任意選択的リンカー３６０と、第２の開裂可能部分ＣＭ２３７０と、第４の任意選択的リンカー３８０と、第２の二量体化ドメインＤＤ２３９０と、を含む。

図２Ｂは、それぞれ第１の及び第２の二量体化ドメインＤＤ１４００及びＤＤ２４５０を介して、非共有結合的手段によって互いに結合する第１の及び第２のモノマー構成体を含む、例示的な活性化可能サイトカイン構成体の概略図である。第１のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端へ、第１の二量体化ドメインＤＤ１４００と、第２の任意選択的リンカー４１０と、第１の開裂可能部分ＣＭ１４２０と、第１の任意選択的リンカー４３０と、第１の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ１４４０と、を含む。第２のモノマー構成体は、ＣＰ及びＣＭ構成成分のＮ末端からＣ末端へ、第２の二量体化ドメインＤＤ２４５０と、第４の任意選択的リンカー４６０と、第２の開裂可能部分ＣＭ２４７０と、第３の任意選択的リンカー４８０と、第２の成熟サイトカインタンパク質ＣＰ２４９０と、を含む。代替的な態様では、ＣＰ１４４０及びＣＰ２４９０として示される２個の部分のいずれかは、サイトカイン活性を欠く、トランケートされたサイトカインタンパク質である。例えば、ＣＰ１またはＣＰ２は、野生型インターフェロンα２ｂの最初の１５１個のアミノ酸を有する、トランケートされたインターフェロンα２ｂであってよい。代替的な態様では、ＣＰ１４４０及びＣＰ２４９０として示される２個の部分のいずれかは、サイトカイン活性を欠く変異サイトカインタンパク質である。例えば、ＣＰ１またはＣＰ２は、Ｌ１３０Ｐの変異を有する、トランケートされたインターフェロンα２ｂであってよい。代替的な態様では、ＣＰ１４４０及びＣＰ２４９０として示される２個の部分のいずれかは、サイトカイン活性を欠くポリペプチド配列、例えばシグナル部分及び／またはスタブ（ｓｔｕｂ）配列である。代替的な態様では、ＣＰ１４４０及びＣＰ２４９０として示される２個の部分の第１の部分は、ＣＰ１４４０及びＣＰ２４９０として示される２個の部分の第２の部分に、高い親和性で結合し、第２の部分の対照レベルと比較して、第２の部分のサイトカイン活性を低減させるポリペプチド配列である。

二量体化ドメインを含有するＡＣＣ構造は、成熟サイトカインタンパク質構成成分が、活性化後に実質的にサイトカイン活性が損なわれないように活性を低減させるのに、極めて有効であることが発見された。本明細書に記載されるＡＣＣの活性化条件は、ＡＣＣ内の開裂可能部分（ＣＭ）の少なくとも１つを切断できるプロテアーゼへの曝露である。実施例に示されるように、ＡＣＣの活性化により、サイトカイン活性の実質的な回復がもたらされた。これらの結果は、ＡＣＣの状況内で、サイトカイン構成成分のコンフォメーションが、不可逆的には変えられなかったことを示唆している。重要なことに、ＡＣＣは、マスキング効果を達成するために、サイトカインタンパク質構成成分への結合親和性を有するペプチドマスクに依存する必要はない。したがって、ＡＣＣは、サイトカインタンパク質構成成分への結合親和性を有するペプチドマスクを含んでも、含まなくてもよい。

ＡＣＣは、各種の成熟サイトカインタンパク質、開裂可能部分、及びＤＤのいずれかを、それぞれＣＰ１、ＣＰ２、ＣＭ１、ＣＭ２、ＤＤ１、及びＤＤ２として用いてよい。例えば、当該技術分野において既知である、各種の成熟サイトカインタンパク質、またはそれらの配列及び／またはトランケート型変異体のいずれかは、ＡＣＣのＣＰ１及びＣＰ２構成成分の一方または両方としての使用に好適であり得る。成熟サイトカインタンパク質、ＣＰ１及びＣＰ２は、同一または異なってもよい。ある特定の実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は同一である。その他の実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は異なる。ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２のＮ末端及び／またはＣ末端の一方または両方で、追加のアミノ酸残基を含んでよい。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、それぞれ独立して、インターフェロン（例えばインターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターフェロンτ及びインターフェロンωなど）、インターロイキン（例えばＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－２１など）、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１２、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＣＤ１５４、ＬＴ－β、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、４－１ＢＢＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、ＣＤ１７８、ＧＩＴＲＬ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＡＬＬ－１、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、ＴＲＡＮＣＥ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β３、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、ＴＰＯ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、Ｍ－ＣＳＦ及びＭＳＰなど、ならびにそれらの配列及び／またはトランケート型変異体からなる群から選択される成熟サイトカインタンパク質を含んでよい。例えば、このようなタンパク質の配列としては、本明細書で例示されるようなものが挙げられ、さらなる配列は、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎから得ることができる。本発明のＡＣＣでの使用に好適なトランケート型変異体としては、サイトカイン活性を保持する、任意の、Ｎ末端またはＣ末端にてトランケートされたサイトカインが挙げられる。本発明にて用いられる例示的なトランケート型変異体としては、当該技術分野において既知であるトランケートされたサイトカインポリペプチドのいずれか（例えば、Ｓｌｕｔｚｋｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６０：１０１９－１０３０，２００６及びＵＳ２００９／００２５１０６参照）、ならびにサイトカイン活性を保持する、１～約４０個のアミノ酸、１～約３５個のアミノ酸、１～約３０個のアミノ酸、１～約２５個のアミノ酸、１～約２０個のアミノ酸、１～約１５個のアミノ酸、１～約１０個のアミノ酸、１～約８個のアミノ酸、１～約６個のアミノ酸、１～約４個のアミノ酸が、Ｎ及び／またはＣ末端にてトランケートされたサイトカインポリペプチドが挙げられる。前述の実施形態のいくつかでは、トランケートされたＣＰは、Ｎ末端にてトランケートされたＣＰである。その他の実施形態では、トランケートされたＣＰは、Ｃ末端にてトランケートされたＣＰである。特定の実施形態は、トランケートされたＣＰは、Ｃ末端及びＮ末端にてトランケートされたＣＰである。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、それぞれ独立して、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号３４７、及び配列番号３４８からなる群から選択されるサイトカイン参照配列と、少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である）であるアミノ酸配列を含む。配列同一性のパーセンテージは、シーケンスアライメントプログラム、例えばインターネット上でＮＣＢＩのウェブサイトに一般公開されているＢＬＡＳＴプログラムセットを用いてアライメントしたときの、２個以上のペプチド配列間におけるアミノ酸配列の同一性レベルを意味する。Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０も参照されたい。いくつかの態様では、ＡＣＣは、インターフェロンα２ｂ変異体、例えばＬ１３０の位置における変異、例えばＬ１３０Ｐ変異を有するインターフェロンα２ｂ分子を、ＣＰ１またはＣＰ２として含有する。いくつかの態様では、ＡＣＣは、Ｉ２４、Ｆ６４、Ｉ６０、Ｉ６３、Ｆ６４、Ｗ７６、Ｉ１１６、Ｌ１１７、Ｆ１２３もしくはＬ１２８、またはこれらの組み合わせの位置における変異を有する、インターフェロンα２ｂ変異体を含有する。例えば、インターフェロンα２ｂ変異体は、Ｉ１１６がＴ、ＮもしくはＲに；Ｌ１２８がＮ、ＨもしくはＲに；Ｉ２４がＰもしくはＱに；Ｌ１１７Ｈ；またはＬ１２８Ｔ、またはこれらの組み合わせの変異を含有してよい。いくつかの態様では、インターフェロンα２ｂ変異体は、Ｉ２４Ｑ、Ｉ６０Ｔ、Ｆ６４Ａ、Ｗ７６Ｈ、Ｉ１１６Ｒ及びＬ１２８Ｎ、またはこれらのサブセットの変異を含有してよい。いくつかの態様では、ＡＣＣは、ＣＰ１及びＣＰ２のいずれかとして、サイトカイン活性を欠くトランケートされたインターフェロンα２ｂ分子を含有する。例えば、トランケートされたインターフェロンα２ｂは、インターフェロンα２ｂの１５１個以下のアミノ酸、例えば野生型インターフェロンα２ｂ配列のＮ末端からＣ末端までの１～１５１個、１～１５０個、１～１４９個、１～１４８個．．．１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、または２～１５１個、３～１５１個、４～１５１個、５～１５０個、６～１４９個、７～１４８個、８～１４７個のいずれか１つのアミノ酸、またはこれらのアミノ酸もしくは変異体の任意の介在配列からなってよい。

ある特定の実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキンを含む。ＣＰ１及び／またはＣＰ２として、本発明の構成体での使用に好適であるインターロイキンは、例えば、ＩＬ－α１、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－２１が挙げられる。いくつかの実施形態では、インターロイキンは、野生型（ＷＴ）または組み換えインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、ＷＴまたは組み換えインターロイキンポリペプチドは、ＩＬ－１５を含む。例示的なＩＬ－１５配列を、配列番号３４７、配列番号３４８、配列番号１２９及び配列番号１３０に提供する。

その他の実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキン活性を示し、配列番号１１１～１３４、１３７～１４０、１４３～１４６、１５１～１６０及び３４７～３４８からなる群から選択される配列に、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％同一である、少なくとも８４％同一である、少なくとも８６％同一である、少なくとも８８％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９２％同一である、少なくとも９４％同一である、少なくとも９６％同一である、少なくとも９８％同一である、または少なくとも９９％同一である、または１００％同一であるアミノ酸配列を含有する。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号１１１～１３４、１３７～１４０、１４３～１４６、１５１～１６０及び３４７～３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号１２９、配列番号３４７及び配列番号３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するインターロイキンを含む。特定の実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、それぞれ独立して、配列番号３４７のアミノ酸配列を含むインターロイキンである。上述の実施形態のいくつかでは、ＣＰ１及びＣＰ２は同一のアミノ酸配列を含む。

その他の実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキン活性を示し、配列番号１２９、配列番号３４７、及び配列番号３４８からなる群から選択されるインターロイキン参照配列に、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％同一である、少なくとも８４％同一である、少なくとも８６％同一である、少なくとも８８％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９２％同一である、少なくとも９４％同一である、少なくとも９６％同一である、少なくとも９８％同一である、または少なくとも９９％同一である、または１００％同一であるアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、インターロイキン参照配列は、配列番号１２９、配列番号３４７及び配列番号３４８からなる群から選択されるヒトインターロイキン参照配列である。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号１２９、配列番号３４７及び配列番号３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する成熟インターロイキンを含む。上述の実施形態のいくつかでは、ＣＰ１及びＣＰ２は同一のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキン活性を示し、配列番号３４７を含むアミノ酸配列に相当するインターロイキン参照配列に、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％同一である、少なくとも８４％同一である、少なくとも８６％同一である、少なくとも８８％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９２％同一である、少なくとも９４％同一である、少なくとも９６％同一である、少なくとも９８％同一である、または少なくとも９９％同一である、または１００％同一であるアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号３４７のアミノ酸配列を含むインターロイキンポリペプチドを含む。上述の実施形態のいくつかでは、ＣＰ１及びＣＰ２は同一のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキン活性を示し、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号３４７、及び配列番号３４８からなる群から選択されるインターロイキン参照配列に、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である、または１００％同一であるアミノ酸配列を含有する。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号３４７，及び配列番号３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する成熟インターロイキンを含む。上述の実施形態のいくつかでは、ＣＰ１及びＣＰ２は同一のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、インターロイキン－１５活性を示し、配列番号１２９（ヒトＩＬ－１５）、配列番号３４７（ヒトＩＬ－１５のアミノ酸４９－１６１）、及び配列番号３４８（ヒトＩＬ－１５のアミノ酸４９－１６２）からなる群から選択されるＩＬ－１５参照配列に、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含有する。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及びＣＰ２は、同一のアミノ酸配列を含み、このような配列は、配列番号１２９（ヒトＩＬ－１５）、配列番号３４７（ヒトＩＬ－１５のアミノ酸４９－１６１）、及び配列番号３４８（ヒトＩＬ－１５のアミノ酸４９－１６２）からなる群から選択される配列に、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。

用いられるサイトカインタンパク質の配列におけるアミノ酸の数は、用いられる特定のサイトカインタンパク質に応じて変動してよい。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、合計、約１０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１１０個のアミノ酸～約１６２個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約１１０個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約１１０個のアミノ酸～約１１５個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約１７０個のアミノ酸、約１６０個のアミノ酸～約１６５個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、または約６５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸をそれぞれ含有する。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２は、成熟野生型ヒトサイトカインタンパク質である。

ＡＣＣの各モノマー構成体は、各種の二量体化ドメインのいずれかを用いてよい。好適なＤＤとしては、高分子型（例えば、合成ポリマー、ポリペプチド、ポリヌクレオチドなど）及び小分子型（約１キロダルトン未満、時には約８００ダルトン未満の分子量を有する非高分子部分）の部分の両方が挙げられる。１対のＤＤは、互いに結合することが当該技術分野において既知である、任意の部分の対であってよい。

例えば、いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、ヒトＩＬ－１５受容体のアルファ鎖（ＩＬ１５Ｒα）及び可溶性ＩＬ－１５からのスシ（ｓｕｓｈｉ）ドメイン；バルナーゼ及びバルスター；ＰＫＡ及びＡＫＡＰ；変異ＲＮａｓｅＩフラグメントベースのアダプタ／ドッキングタグ分子；１対の抗原結合ドメイン（例えば、１対のシングルドメイン抗体）；可溶性Ｎ－エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体（ＳＮＡＲＥ）；タンパク質シンタキシン、シナプトタグミン、シナプトブレビン及びＳＮＡＰ２５の相互作用に基づくモジュール；シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）及び対応するエピトープ；抗原結合ドメイン（例えば、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、シングルドメイン抗体などの１本鎖抗体）及び対応するエピトープ；コイルドコイルポリペプチド構造（例えば、Ｆｏｓ－Ｊｕｎコイルドコイル構造、酸／塩基コイルドコイルヘリックス、Ｇｌｕ－Ｌｙｓコイルドコイルヘリックス、ロイシンジッパー構造）、ビオチン及びアビジンまたはストレプトアビジン、アミン／アルデヒド、レクチン／炭水化物のような小分子が結合した対；互いに結合できる１対のポリマー、例えば１対の硫黄またはチオール含有ポリマー（例えば、１対のＦｃドメイン、１対のチオール化ヒト血清アルブミンポリペプチドなど）；などからなる群から選択される１対のメンバーである。

いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、非ポリペプチドポリマーである。非ポリペプチドポリマーは、互いに共有結合していてよい。いくつかの例では、非ポリペプチドポリマーは、硫黄含有ポリマー、例えば硫黄含有ポリエチレングリコールであってよい。このような場合、ＤＤ１及びＤＤ２は、１個以上のジスルフィド結合を介して、互いに共有結合していてよい。

１対のＤＤ１及びＤＤ２が、１対のエピトープ及び抗原結合ドメインのメンバーである場合、エピトープは、天然または非天然のエピトープであってよい。例示的な非天然のエピトープとしては、例えば、ポリＨｉｓペプチド（例えば、Ｈｉｓタグなど）などの非天然のペプチドが挙げられる。

ある特定の実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、１対のＦｃドメインである。本明細書で使用する場合、「Ｆｃドメイン」は、免疫グロブリンの単一の重鎖の連続するアミノ酸配列を意味する。１対のＦｃドメインが一緒に結合して、免疫グロブリンのＦｃ領域を形成する。

いくつかの実施形態では、１対のＦｃドメインは、１対のヒトＦｃドメイン（例えば、１対の野生型ヒトＦｃドメイン）である。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（例えば、野生型ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン）、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン（例えば、野生型ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン）、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン（例えば、野生型ヒトＩｇＧ３のＦｃドメイン）、またはヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン（例えば、野生型ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン）である。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃドメインは、配列番号３に少なくとも８０％同一である（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である）配列を含む。

いくつかの実施形態では、１対のＦｃドメインは、Ｆｃドメインのノブ変異体及びホール変異体を含む。ノブ及びホール変異体は、互いに相互作用して二量体化を促進してよい。いくつかの実施形態では、ノブ及びホール変異は、２個のＦｃドメイン間の境界面内に（例えば、ＣＨ３ドメインに）、１個以上のアミノ酸修飾を含んでよい。一例では、修飾には、抗体重鎖の一方におけるアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ、及び所望によりアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ、ならびに抗体重鎖のもう一方におけるアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及び所望によりＹ３４９Ｃが含まれる（Ｋａｂａｔ番号付けシステムのＥＵインデックスに準拠して番号付け）。ノブ及びホール変異体の例としては、配列番号３１５及び３１６のＦｃ変異体、ならびに米国特許第５，７３１，１６８号、同第７，６９５，９３６号、及び同第１０，６８３，３６８号に記載されるものが挙げられ、同明細書は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、それぞれ配列番号３１５及び３１６に、少なくとも８０％同一である（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である）配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＤＤ１及び／またはＤＤ２は、血清半減期延長部分（例えば、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）または血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの血清タンパク質に結合するポリペプチド）をさらに含むことができる。半減期延長部分の例としては、ヘキサ－ｈａｔＧＳＴ（グルタチオンＳトランスフェラーゼ）グルタチオンアフィニティー、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰ）、ストレップタグ、セルロース結合ドメイン、マルトース結合タンパク質、Ｓ－ペプチドタグ、キチン結合タグ、免疫反応性エピトープ、エピトープタグ、Ｅ２Ｔａｇ、ＨＡエピトープタグ、Ｍｙｃエピトープ、ＦＬＡＧエピトープ、ＡＵ１及びＡＵ５エピトープ、Ｇｌｕ－Ｇｌｕエピトープ、ＫＴ３エピトープ、ＩＲＳエピトープ、Ｂｔａｇエピトープ、プロテインキナーゼ－Ｃエピトープ、ならびにＶＳＶエピトープが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ＤＤ１及び／またはＤＤ２はそれぞれ、合計、約５個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約６０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約６０個のアミノ酸～約８０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約８０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１２０個のアミノ酸、約１２０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１２０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約１２０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約１２０個のアミノ酸～約１４０個のアミノ酸、約１４０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１４０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１４０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約１４０個のアミノ酸～約１６０個のアミノ酸、約１６０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１６０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１６０個のアミノ酸～約１８０個のアミノ酸、約１８０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１８０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約２１０～約２２０個のアミノ酸、約２１５～約２２５個のアミノ酸、約２１５～約２２０個のアミノ酸、約２１７～約２００個のアミノ酸または約２１８～約２００個のアミノ酸を含有する。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、それぞれ、２個のシステイン残基を含有するヒンジ領域の一部、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含むＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、ＤＤ１及びＤＤ２は、それぞれ、Ｎ末端が、Ｎ末端からＣ末端方向へ読み取るヒンジ領域における最初のシステイン残基（例えば、ＥＵナンバリングを用いて、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４のシステイン２２６）である、Ｆｃドメインである。

いくつかの態様では、ＣＰ構成成分とＤＤ構成成分との間に、直接的にまたは間接的に（例えばリンカーを介して）置かれるのは、プロテアーゼの基質を含む開裂可能部分である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及びＣＭ２は、それぞれ独立して、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＥＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＢＡＣＥ、レニン、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１４、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＧ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＶ／Ｌ２、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、キマーゼ、クルジパイン、ＤＥＳＣ１、ＤＰＰ－４、ＦＡＰ、レグマイン、オツベイン－２（Ｏｔｕｂａｉｎ－２）、エラスターゼ、ＦＶＩＩａ、ＦｉＸＡ、ＦＸａ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾアターゼ、ヘプシン、ＨｔｒＡ１、ヒト好中球エラスターゼ、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ラクトフェリン、マラプシン（Ｍａｒａｐｓｉｎ）、マトリプターゼ－２、メプリン、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、ネプリライシン、ＮＳ３／４Ａ、ＰＡＣＥ４、プラスミン、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＢＭＰ－１、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２７、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ｔＰＡ、トロンビン、トリプターゼ及びｕＰＡからなる群から選択されるプロテアーゼの基質を含んでよい。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかの、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＭのいずれかを切断するプロテアーゼは、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＢＡＣＥ、レニン、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１４、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＶ／Ｌ２、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、クルジパイン、レグマイン、オツベイン－２（Ｏｔｕｂａｉｎ－２）、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、ＢＭＰ－１、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－１６、ＭＭＰ－１７、ＭＭＰ－１９、ＭＭＰ－２０、ＭＭＰ－２３、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－２６、ＭＭＰ－２７、活性化タンパク質Ｃ、カテプシンＡ、カテプシンＧ、キマーゼ、ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ、エラスターゼ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾアターゼ、ＨｔｒＡ１、ヒト好中球リアーゼ、ラクトフェリン、マラプシン（ｍａｒａｐｓｉｎ）、ＮＳ３／４Ａ、ＰＡＣＥ４、プラスミン、ＰＳＡ、ｔＰＡ、トロンビン、トリプターゼ、ｕＰＡ、ＤＥＳＣ１、ＤＰＰ－４、ＦＡＰ、ヘプシン、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＭＰＲＳＳ３及びＴＭＰＲＳＳ４であることができる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、プロテアーゼは、ｕＰＡ、レグマイン、ＭＴ－ＳＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＢＭＰ－１、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、及びＭＭＰ－１４の群から選択される。

既知の基質を有するプロテアーゼのレベルの上昇が、多数のがんにて報告されている。例えば、ＬａＲｏｃａｅｔａｌ．，ＢｒｉｔｉｓｈＪ．Ｃａｎｃｅｒ９０（７）：１４１４－１４２１，２００４を参照されたい。本明細書で用いられるＣＭ１及び／またはＣＭ２構成成分での使用に好適な基質としては、がん細胞及び組織中により広く見いだされる基質が挙げられる。したがって、特定の実施形態において、ＣＭ１及び／またはＣＭ２はそれぞれ独立して、がんに関連する疾患組織中でより広く見いだされるプロテアーゼの基質を含む。いくつかの実施形態では、がんは、胃癌、乳癌、骨肉腫及び食道癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、がんは乳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、ＨＥＲ２陽性癌である。いくつかの実施形態では、がんは、カポジ肉腫、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、腎細胞癌（ＲＣＣ）、黒色腫、神経芽細胞腫、基底細胞癌、悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫、鼻咽頭腺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、ＢＣＧ耐性筋層非浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）、子宮内膜癌、膵臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、大腸癌、食道癌、胆嚢癌、神経膠腫、頭頸部癌、子宮癌、子宮頸癌または精巣癌などである。上述した実施形態のいくつかでは、ＣＭ構成成分は、腫瘍組織中により行き渡っているプロテアーゼ（複数可）の基質を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２は、それぞれ独立して、配列番号５～配列番号１００及び配列番号３４９、ならびにそれらのＣ末端及びＮ末端トランケート型変異体からなる群から選択される配列を含有する。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）、ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号５４）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６８）、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）の群から選択される配列を含有する。

特定の実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２は、ＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号２６３）、ＡＱＮＬＬＧＭＹ（配列番号２６４）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号２６５）、ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６６）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号２６７）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号２６８）、ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号２６９）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号２７０）、ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７１）、ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号２７２）、ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号２７３）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号２７４）、ならびにそれらのＣ末端及びＮ末端トランケート型変異体の群から選択される配列を含有する。ＣＭの例としては、米国特許出願公開第２０１６／０２８９３２４号、同第２０１９／０２８４２８３号、及び公開番号ＷＯ２０１０／０８１１７３、ＷＯ２０１５／０４８３２９、ＷＯ２０１５／１１６９３３、ＷＯ２０１６／１１８６２９及びＷＯ２０２０／１１８１０９に記載されるものもさらに挙げられ、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＣＭ１及び／またはＣＭ２における使用が好適な上述したアミノ酸配列のトランケート型変異体は、対応するプロテアーゼの認識部位を保持する任意のトランケート型変異体である。これらには、プロテアーゼの認識部位を保持する、上述したアミノ酸配列の少なくとも３個の連続したアミノ酸、または前述のアミノ酸配列の少なくとも４個、または少なくとも５個、または少なくとも６個、または少なくとも７個のアミノ酸を含むＣ末端及び／またはＮ末端トランケート型変異体が挙げられる。特定の実施形態では、上述したアミノ酸配列のトランケート型変異体は、上記のいずれかに相当するが、１～約１０個のアミノ酸、１～約９個のアミノ酸、１～約８個のアミノ酸、１～約７個のアミノ酸、１～約６個のアミノ酸、１～約５個のアミノ酸、１～約４個のアミノ酸、または１～約３個のアミノ酸がＣ末端及び／またはＮ末端にてトランケートされたアミノ酸配列であり、（１）少なくとも３個のアミノ酸残基を有し；（２）プロテアーゼの認識部位を保持するものである。前述の実施形態のいくつかでは、トランケートされたＣＭは、Ｎ末端にてトランケートされたＣＭである。いくつかの実施形態では、トランケートされたＣＭは、Ｃ末端にてトランケートされたＣＭである。いくつかの実施形態では、トランケートされたＣは、Ｃ末端及びＮ末端にてトランケートされたＣＭである。

本明細書に記載される、活性化可能サイトカイン構成体のいずれかのいくつかの実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２は、合計約３個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２は、合計、約３個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約３個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約３個のアミノ酸～約５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、または約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸を含む。

いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、異なるプロテアーゼの基質を含む複数のＣＭを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及びＣＭ２は、異なるプロテアーゼの基質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭ１及びＣＭ２は、同一のプロテアーゼの基質を含む。

第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は、１個以上のリンカーなど、１個以上の追加の構成成分を含んでよい。いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、ＣＰ１とＣＭ１との間に配置されるリンカーを含有できる。いくつかの実施形態では、第１のモノマーにおいて、ＣＰ１及びＣＭ１は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、ＣＭ１とＤＤ１との間に配置されるリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸の全長を有する。いくつかの実施形態では、第１のモノマーにおいて、ＣＭ１及びＤＤ１は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、ＣＰ１とＤＤ１との間に配置されるＣＭ及び任意のリンカーは、合わせて３～１５個のアミノ酸、または３～１０個のアミノ酸、または３～７個のアミノ酸の全長を有する。

いくつかの実施形態では、第２のモノマーは、ＣＰ２とＣＭ２との間に配置されるリンカーを含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマーにおいて、ＣＰ２及びＣＭ２は互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、第２のモノマーは、ＣＭ２とＤＤ２との間に配置されるリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸の全長を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｇ、ＧＧ、またはＧＧＧＳ（配列番号２）の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のモノマーにおいて、ＣＭ２（例えば、本明細書に記載される開裂可能部分のいずれか）及びＤＤ２（例えば、本明細書に記載されるＤＤのいずれか）は、互いに直接的に隣接する。いくつかの実施形態では、ＣＰ２とＤＤ２との間に配置されるＣＭ及び任意のリンカーは、合わせて３～１５個のアミノ酸、または３～１０個のアミノ酸、または３～７個のアミノ酸の全長を有する。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー及び／または第２のモノマーは、合計、約５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約１５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約２５０個のアミノ酸～約３００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約３００個のアミノ酸～約３５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約３５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約４５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約４５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約５５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約５５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸～約６５０個のアミノ酸、約６５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約６５０個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸、約６５０個のアミノ酸～約７００個のアミノ酸、約７００個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸、約７００個のアミノ酸～約７５０個のアミノ酸または約７５０個のアミノ酸～約８００個のアミノ酸をそれぞれ含有できる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、１個以上のリンカー（例えば、柔軟なリンカー）を活性化可能サイトカイン構成体に導入して、ドメイン間の、部分間の、部分とドメインとの間の接合点の１個以上において、またはリンカーが有益であろう任意のその他の接合点において、柔軟性を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣが立体構造的に拘束される構成体として提供される場合、柔軟なリンカーを挿入して、切断されていない活性化可能サイトカイン構成体における構造の構成及び維持を促進することができる。本明細書に記載されるリンカーはいずれも、所望の柔軟性を提供して、標的（例えば、サイトカインの受容体）の結合の阻害を促進する、またはプロテアーゼによるＣＭの開裂を促進することができる。いくつかの実施形態では、リンカーが、柔軟なリンカーに加えて、より柔軟でない構造を付与する１個以上の部分を含有して、所望のＡＣＣを提供できるように、ＡＣＣ中に含有されるリンカーは完全にまたは部分的に柔軟である。一部のリンカーはシステイン残基を含有してもよく、このシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成し、構成体の柔軟性を低減させてよい。いくつかの実施形態では、リンカーまたは連結領域の長さを短くすると、ＡＣＣ中の成熟サイトカインタンパク質の活性が低減する（例えば、図７Ａ～図７Ｂ及び図８Ａ～図８Ｂ参照）。ほとんどの場合、リンカーの長さは、アミノ酸の数を、Ｎ末端からＣ末端の方向に、前の構成成分のＣ末端アミノ酸に隣接するリンカーのＮ末端から、次の構成成分のＮ末端アミノ酸と隣接するリンカーのＣ末端まで（すなわち、リンカーの長さが、前の構成成分のＣ末端アミノ酸、または次の構成成分のＮ末端アミノ酸のいずれも含有しない）を数えることによって決定される。リンカーが、Ｆｃドメインを含むＤＤのＮ末端で用いられる実施形態では、リンカーの長さは、前の構成成分のＣ末端アミノ酸に隣接するリンカーのＮ末端から、Ｆｃヒンジ領域の最初のシステインと隣接するリンカーのＣ末端まで（すなわち、リンカーの長さが、前の構成成分のＣ末端アミノ酸、またはＦｃヒンジ領域の最初のシステインを含有しない）のアミノ酸の数を数えることによって決定される。

本開示及び図１４から明らかなように、本開示のＡＣＣは、ＣＰと、二量体化ドメイン間の相互作用の近位点との間のアミノ酸の伸展を含有する。アミノ酸のその伸展は、連結領域（ＬＲ）を指してよい。本明細書で使用する場合、用語「連結領域」または「ＬＲ」とは、サイトカインのＣ末端と、二量体化ドメイン間の相互作用の近位点にＮ末端にて隣接するアミノ酸残基との間のアミノ酸残基の伸展を意味する（すなわち、連結領域は、サイトカインのＣ末端アミノ酸、または対応する第２のモノマーのＤＤとの相互作用の近位点を形成するＤＤのＮ末端アミノ酸を含有しない）。例えば、ＤＤが１対のＦｃドメインである場合、連結領域は、サイトカインのＣ末端と、Ｆｃのジスルフィド結合に参加する最初のＮ末端システイン残基（例えば、ＥＵナンバリングに準拠して、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＦｃドメインのシステイン２２６）との間のアミノ酸残基の伸展である。二量体化ドメインがペプチドでない場合、連結領域は、サイトカインのＣ末端から最後のアミノ酸までのアミノ酸残基の伸展である。例えば、ＤＤがビオチン－ストレプトアビジンの対である場合、ビオチン含有モノマーの連結領域は、サイトカインのＣ末端とビオチン分子との間のアミノ酸残基の伸展であり、ストレプトアビジン含有モノマーの連結領域は、サイトカインのＣ末端とストレプトアビジン分子との間のアミノ酸残基の伸展である。いくつかの態様では、連結領域は、２４個、１８個、１４個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個または４個以下のアミノ酸、例えば５～１４個、７～１２個、７～１１個または８～１１個のアミノ酸を含んでよい。

いくつかの実施形態では、付加的なアミノ酸配列が、いずれかのＡＣＣの、いずれかのドメインのＮ末端側またはＣ末端側に置かれてよい。例としては、標的部位（例えば、標的組織に存在する細胞の受容体のリガンド）、及び血清半減期延長部分（例えば、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）または血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ））などの血清タンパク質に結合するポリペプチド）が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される、活性化可能サイトカイン構成体のいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、合計約１個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸（例えば、約１個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約８個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約６個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約５個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約４個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約３個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約２個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約８個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約６個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約５個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約４個のアミノ酸、約２個のアミノ酸～約３個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約８個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約６個のアミノ酸、約４個のアミノ酸～約５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約８個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約６個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約６個のアミノ酸～約８個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約８個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１２個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸～約１４個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１６個のアミノ酸、約１６個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１６個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１６個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１６個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１６個のアミノ酸～約１８個のアミノ酸、約１８個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１８個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約１８個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約１８個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２２個のアミノ酸、約２２個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２２個のアミノ酸～約２４個のアミノ酸、または約２４個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸）を含有できる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、合計約１個のアミノ酸、約２個のアミノ酸、約３個のアミノ酸、約４個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約６個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約９個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１１個のアミノ酸、約１２個のアミノ酸、約１３個のアミノ酸、約１４個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約１６個のアミノ酸、約１７個のアミノ酸、約１８個のアミノ酸、約１９個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２１個のアミノ酸、約２２個のアミノ酸、約２３個のアミノ酸、約２４個のアミノ酸、または約２５個のアミノ酸を含有する。

驚くべきことに、本発明者らは、ＣＰとＤＤとの間にいかなるリンカーも含まないＡＣＣが、野生型成熟サイトカインに比べてサイトカイン活性の最も著しい低減を示すことを発見した（図７Ａ及び図８Ａ参照）。さらに、ＣＰとＤＤとの間にリンカーがない構成も、依然として、ＣＰとＤＤとの間に置かれるＣＭの有効な開裂を可能にする（図９～図１１参照）。したがって、いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰとＤＤとの間にいかなるリンカーも含まず、ＣＰとＤＤとの間のＣＭは、１０、９、８、７、６、５、４または３個以下のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＬＲにおけるアミノ酸の合計数は、２５個以下のアミノ酸、例えば、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４または３個以下のアミノ酸、または３～１０個のアミノ酸、または５～１５個のアミノ酸、または７～１２個のアミノ酸、または３～２５個のアミノ酸に包含される範囲から選択されるアミノ酸の任意の範囲または特定の数を含む。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）残基が豊富であることができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、セリン（ＳｅｒまたはＳ）残基が豊富であることができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン及びセリン残基が豊富であることができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個以上のグリシン－セリン残基対（ＧＳ）（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上のＧＳ対）を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＳ）配列（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上のＧＧＧＳ配列）を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＧＳ）配列（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上のＧＧＧＧＳ配列）を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、１個以上のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（ＧＧＳＧ）配列（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個以上のＧＧＳＧ配列）を有する。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、Ｇ、ＧＧ、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号２１０）、ＧＧＧＳ（配列番号２）、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２１１）、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２１２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２１６）、ＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１８）、ＧＧＳＬＤＰＫＧＧＧＧＳ（配列番号２１９）、ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号２２０）、ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号２２１）、ＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳ（配列番号２２２）、ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＫＧ（配列番号２２３）、ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＳＧＳＴＫＧ（配列番号２２４）、及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２２５）のいずれか１個、または１個以上の組み合わせを含有する。

リンカーの非限定的例は、ＧＧＧＳ（配列番号２）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号２１０）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）、ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１８）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３５）、ＧＧＳＬＤＰＫＧＧＧＧＳ（配列番号２１９）、及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）に、少なくとも７０％同一である（例えば、少なくとも７２％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７８％、少なくとも８０％、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である）配列を含有できる。

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳＬＤＰＫＧＧＧＧＳ（配列番号２１９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１８）、ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１７）、ＧＳ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２２７）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２８）、ＧＧＳＧ（配列番号２２９）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２３０）、ＧＳＧＳＧ（配列番号２３１）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２３２）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２３３）、ＧＳＳＳＧ（配列番号２３４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３５）、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１６）の群から選択される配列を含有し、ｎは、少なくとも１の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＳＬＤＰＫＧＧＧＧＳ（配列番号２１９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１８）、ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１７）、及びＧＳからなる群から選択される配列を含有する。本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３５）及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）の群から選択される配列を含有する。本明細書に記載される、活性化可能サイトカイン構成体のいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）またはＧＧＧＧＳ（配列番号２１６）の群から選択される配列を含有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳ（配列番号２）の配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、単一のグリシン残基（Ｇ）、または２個のグリシン残基（ＧＧ）の配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のリンカー配列を含有できる（例えば、本明細書に記載される、または当該技術分野において既知の、例示的なリンカー配列のいずれかと同一または異なるリンカー配列）。いくつかの実施形態では、リンカーは、スルホＳＩＡＢ、ＳＭＰＢ及びスルホＳＭＰＢを含み、リンカーは一級アミンスルフヒドリルと反応する。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の低減を特徴とする。いくつかの実施形態では、対照レベルは、組み換えＣＰ１及び／またはＣＰ２（例えば、市販の組み換えＣＰ１及び／またはＣＰ２、組み換え野生型ＣＰ１及び／またはＣＰ２など）の活性レベルであることができる。いくつかの実施形態では、対照レベルは、ＡＣＣの切断（活性化）形態の活性レベルであることができる。特定の実施形態では、対照レベルは、ペグ化ＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性レベルであることができる。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの活性は、表面プラズモン共鳴（例えば、リン酸緩衝食塩水中で、２５℃で行われる）を使用して決定される、その同族受容体に対するＣＰ１及び／またはＣＰ２の結合親和性（Ｋ_Ｄ）である。特定の実施形態では、少なくとも１つの活性は、リンパ腫細胞の増殖レベルである。その他の実施形態では、少なくとも１つの活性は、リンパ腫細胞における、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＩＳＧＦ３経路の活性化レベルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの活性は、リンパ腫細胞における、ＳＥＡＰの産生レベルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの活性は、ＨＥＫ細胞を使用した細胞系アッセイにおける、ＳＥＡＰ産生のレベルである。さらなる実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性は、例えばＲＮＡｓｅｑ解析（例えば、Ｚｉｍｍｅｒｅｒｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１４（１８）：５９００－５９０６，２００８；Ｈｉｌｋｅｎｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：５２５５－５２６３，２００３を参照）を使用した、サイトカインで刺激された遺伝子誘導のレベルである。

いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性の対照レベルと比較して、少なくとも２倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性が、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルと比較して、少なくとも５倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性が、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルと比較して、少なくとも１０倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性が、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルと比較して、少なくとも２０倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性が、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルと比較して、少なくとも３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍低いことを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性が、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルと比較して、少なくとも１～２０倍低い、２００～５００倍低い、３００～５００倍低い、４００～５００倍低い、５００～６００倍低い、６００～７００倍低い、１５０～１０００倍低い、１００～１５００倍低い、２００～１５００倍低い、３００～１５００倍低い、４００～１５００倍低い、５００～１５００倍低い、１０００～１５００倍低い、１００～１０００倍低い、２００～１０００倍低い、３００～１０００倍低い、４００～１０００倍低い、５００～１０００倍低い、１００～５００倍低い、２０～５０倍低い、３０～５０倍低い、４０～５０倍低い、１００～４００倍低い、２００～４００倍低い、または３００～４００倍低い、１００～３００倍低い、２００～３００倍低い、または１００～２００倍低いことを特徴とする。

いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルは、プロテアーゼ（複数可）によるＣＭ１及びＣＭ２の開裂に続いてＡＣＣから放出されるＣＰ１及び／またはＣＰ２の活性である（「切断産物」）。いくつかの実施形態では、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照レベルは、対応する野生型成熟サイトカインの活性（例えば、組み換え野生型成熟サイトカイン）である。

いくつかの実施形態では、プロテアーゼとともにＡＣＣをインキュベートすると、活性化サイトカイン産物（複数可）が産生され、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、無処置のＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも大きい。いくつかの実施形態では、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも、少なくとも１倍大きい。いくつかの実施形態では、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも、少なくとも２倍大きい。いくつかの実施形態では、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも、少なくとも５倍大きい。いくつかの実施形態では、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも、少なくとも１０倍大きい。いくつかの実施形態では、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも、少なくとも２０倍大きい。いくつかの実施形態では、活性化サイトカイン産物（複数可）のＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性は、ＡＣＣのＣＰ１及び／またはＣＰ２の１つ以上の活性よりも、少なくとも１～２０倍大きい、２～２０倍大きい、３～２０倍大きい、４～２０倍大きい、５～２０倍大きい、１０～２０倍大きい、１５～２０倍大きい、１～１５倍大きい、２～１５倍大きい、３～１５倍大きい、４～１５倍大きい、５～１５倍大きい、１０～１５倍大きい、１～１０倍大きい、２～１０倍大きい、３～１０倍大きい、４～１０倍大きい、５～１０倍大きい、１～５倍大きい、２～５倍大きい、３～５倍大きい、４～５倍大きい、１～４倍大きい、２～４倍大きい、３～４倍大きい、１～３倍大きい、２～３倍大きい、または１～２倍大きい。

いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、配列番号３４７または３４８に、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）同一である配列を含有できる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、配列番号３５７に、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）同一である配列を含有する核酸にコードされることができる。いくつかの態様では、ＡＣＣは、このような配列を含有してもよいが、それらの配列のシグナル配列を含む、または含まない場合もある。シグナル配列は、特に限定されない。シグナル配列のいくつかの非限定例としては、例えば、配列番号３０９の残基１－２０及びその他の配列の対応する残基及びヌクレオチド、または別の種もしくは細胞株からのシグナル配列と置換されたものが挙げられる。シグナル配列のその他の例としては、ＭＲＡＷＩＦＦＬＬＣＬＡＧＲＡＬＡ（配列番号３４３）及びＭＡＬＴＦＡＬＬＶＡＬＬＶＬＳＣＫＳＳＣＳＶＧ（配列番号３４４）が挙げられる。

これらの活性化可能サイトカイン構成体のさまざまな例示的な態様を以下に記載する。これらは、本明細書で提供される方法において、制限なく、任意の組み合わせで使用できる。活性化可能サイトカイン構成体及び活性化可能サイトカイン構成体の作製方法の例示的な態様を、以下に記載する。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、特定のプロテアーゼとともに使用するために選択される。プロテアーゼは、腫瘍細胞によって産生されるプロテアーゼであってよい（例えば、腫瘍細胞は、健康な組織よりも、多量のプロテアーゼを発現してよい）。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＤＡＭ１７、ＢＭＰ－１、カテプシンのようなシステインプロテアーゼ、ＨｔｒＡ１、レグマイン、マトリプターゼ（ＭＴ－ＳＰ１）、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、好中球エラスターゼ、ＴＭＰＲＳＳ３またはＴＭＰＲＳＳ４などのＴＭＰＲＳＳ、トロンビン、及びｕ－型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ、ウロキナーゼとも称される）の群から選択される、少なくとも１種のプロテアーゼの基質である。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも１種のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の基質である。ＭＭＰの例としては、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６及びＭＭＰ２７が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１１、及びＭＭＰ１９の基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭはＭＭＰ７の基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭはＭＭＰ９の基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭはＭＭＰ１４の基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは２種以上のＭＭＰの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくともＭＭＰ９及びＭＭＰ１４の基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、同一のＭＭＰの２個以上の基質を含有する。いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも２個以上のＭＭＰ９基質を含有する。いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも２個以上のＭＭＰ１４基質を含有する。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰの基質であり、ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１９）；ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１６）；ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号１５）；ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号１８）；ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号７４）；ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号７５）；ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号４２）；ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号４３）；ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号４４）；ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号４５）；ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号７６）；ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号７７）；ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号７８）；ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号７９）；ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号８０）；ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号８１）；ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号１７）；ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号１４）；ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号８２）；ＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号２０）；及び／またはＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号７３）の配列を含有する。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、トロンビンの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、トロンビンの基質であり、ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号８３）またはＧＰＲＳＦＧ（配列番号８４）の配列を含有する。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号９）；ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号１０）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１１）；ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１２）；ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号２１）；ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号２２）；ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号２３）；ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号２４）；ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号２５）；ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号２６）；及びＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号２７）の群から選択されるアミノ酸配列を含有する。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、好中球エラスターゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、セリンプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ｕＰＡの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、レグマインの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、マトリプターゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、システインプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、カテプシンなどのシステインプロテアーゼの基質である。

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３０）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号２７５）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号２７６）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号２７７）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号２７８）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号７０）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２６６）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号２６７）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号２６８）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号２７９）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号２６９）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号２７０）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２７１）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号２７２）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号２７３）及び／またはＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号２７４）の配列を含有する。

いくつかの実施形態では、ＣＭ１及び／またはＣＭ２は、配列番号５～配列番号１００からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）、ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号３３）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号５４）、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、及びＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６８）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）、及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）の群から選択される配列を含む。

いくつかの態様では、ＡＣＣは、配列番号１１１～１３４、１３７～１４０、１４３～１４６、１５１～１６０及び３４７～３４８から選択されるＣＰ２、配列番号５～１００及び２６３～３０８から選択されるＣＭ２、ならびにＤＤ２、と二量体化される、配列番号１１１～１３４、１３７～１４０、１４３～１４６、１５１～１６０及び３４７～３４８から選択されるＣＰ１、配列番号５～１００及び２６３～３０８から選択されるＣＭ１、ならびにＤＤ１を含有する。いくつかの態様では、ＡＣＣは、ＣＰ１とＣＭ１との間に及び／またはＣＭ１とＤＤ１との間に、配列番号２及び２１０～２３４、２４５または２５０から選択されるリンカーと、ＣＰ２とＣＭ２との間に及び／またはＣＭ２とＤＤ２との間に、配列番号２及び２１０～２３４、２４５または２５０から選択されるリンカーと、を含有してよい。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、配列番号３または配列番号４に、少なくとも８０％同一である（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である）アミノ酸配列を有するＤＤ１及び／またはＤＤ２を含有する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、配列番号３１５または配列番号３１６に、少なくとも８０％同一である（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である）アミノ酸配列を有するＤＤ１を含有する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、配列番号３１５または配列番号３１６に、少なくとも８０％同一である（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である）アミノ酸配列を有するＤＤ２を含有する。

薬剤へのコンジュゲート
本開示は、付加的な要素、例えば対象である細胞または組織への送達を促進する標的部位、薬剤（例えば、治療薬、抗腫瘍薬）、毒素、またはこれらのフラグメントなど、を本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかに含有する方法及び材料も提供する。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、細胞毒性剤、例えば限定されないが、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、もしくはこれらのフラグメント）または放射性同位体など、にコンジュゲートすることができる。本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、活性化可能サイトカイン構成体は、細胞毒性剤、例えば限定されないが、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、もしくはこれらのフラグメント）または放射性同位体など、にコンジュゲートすることができる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な例示的細胞毒性剤としては、ドラスタチン及びそれらの誘導体（例えば、アウリスタチンＥ、ＡＦＰ、モノメチルアウリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、デスメチルアウリスタチンＥ（ＤＭＡＥ）、アウリスタチンＦ、デスメチルアウリスタチンＦ（ＤＭＡＦ）、ドラスタチン１６（ＤｍＪ）、ドラスタチン１６（Ｄｐｖ）、アウリスタチン誘導体（例えば、アウリスタチンチラミン、アウリスタチンキノロン）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ－１、ＤＭ－４）、メイタンシノイド誘導体、デュオカルマイシン、α－アマニチン、ツルボスタチン、フェンスタチン、ヒドロキシフェンスタチン、スポンギスタチン５、スポンギスタチン７、ハリスタチン１、ハリスタチン２、ハリスタチン３、ハロコンプスタチン、ピロロベンズイミダゾール（ＰＢＩ）、シブロスタチン６、ドクサリフォーム（ｄｏｘａｌｉｆｏｒｍ）、セマドチン類似体（ＣｅｍＣＨ２－ＳＨ）、シュードモナス毒素Ａ（ＰＥＳ８）変異体、シュードモナス毒素Ａ（ＺＺ－ＰＥ３８）変異体、ＺＪ－１０１、アンスラサイクリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ブリオスタチン、カンプトセシン、７－置換カンプトテシン、１０，１１－ジフルオロメチレンジオキシカンプトセシン、コンブレタスタチン、デブロモアプリシアトキシン、ＫａｈａＭｉｄｅ－Ｆ、ディスコデルモライド、及びエクテイナシジンが挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な酵素的に活性な毒素としては、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａからの外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、α－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｉｅｓｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｆｈｉｎ）タンパク質、ＰｈｙｔｏｉａｃａＡｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（例えば、ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－８）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロティーズ（ｃｒｏｔｉｒｓ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲイオニン（ｇｅｉｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｉｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン、ネオマイシン、及びトリコテセンが挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な抗悪性腫瘍薬としては、アドリアマイシン、セルビジン、ブレオマイシン、アルケラン、ベルバン、オンコビン、フルオロウラシル、メトトレキサート、チオテパ、ビサントレン、ノバントロン、チオグアニン、プロカルバジン及びシタラビンが挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な抗ウイルス薬としては、アシクロビル、ヴィラＡ及びシンメトレルが挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な抗真菌薬としては、ナイスタチンが挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的なコンジュゲート可能な検出試薬としては、フルオレセイン及びその誘導体、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）が挙げられる。

本明細書に記載される活性化可能サイトカイン構成体のいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な抗菌薬としては、アミノグリコシド、ストレプトマイシン、ネオマイシン、カナマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン及びトブラマイシンが挙げられる。

本明細書に記載される活性化可能サイトカイン構成体のいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な、３β，１６β，１７α－トリヒドロキシコレスタ－５－エン－２２－オン１６－Ｏ－（２－Ｏ－４－メトキシベンゾイル－β－Ｄ－キシロピラノシル）－（１－－＞３）－（２－Ｏ－アセチル－α－Ｌ－アラビノピラノシド）（ＯＳＷ－１）としては、Ｏ６－ベンジルグアニンのｓ－ニトロベンジロキシカルボニル誘導体、トポイソメラーゼ阻害剤、ヘミアステルリン、セファロタキシン、ホモハリントニン（ｈｏｍｏｈａｒｒｉｎｇｉｏｎｉｎｅ）、ピロロベンゾジアゼピンダイマー（ＰＢＤ）、官能化ピロロベンゾジアゼピン、カリケアミシン（ｃａｌｃｉｃｈｅａｍｉｃｉｎｓ）、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｉｉｔｏｘｉｎｓ）、タキサン、及びビンカアルカロイドが挙げられる。

本明細書に記載される活性化可能サイトカイン構成体のいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な、例示的な放射性医薬品としては、^１２３Ｉ、^８９Ｚｒ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^９９ｍＴｃ、^２０１Ｔ１、^６２Ｃｕ、^１８Ｆ、^６８Ｇａ、^１３Ｎ、^１５Ｏ、^３８Ｋ、^８２Ｒｂ、^１１１Ｉｎ、^１３３Ｘｅ、^１１Ｃ及び^９９ｍＴｃ（テクネチウム）が挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な例示的な重金属としては、バリウム、金及び白金が挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかにコンジュゲートすることができる、非限定的な例示的な抗マイコプラズマ剤としては、タイロシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシンＢ、アンピシリン、スルファニルアミド、ポリミキシン及びクロラムフェニコールが挙げられる。

当業者は、多種多様な可能性がある部分を、本明細書に記載の活性化可能サイトカイン構成体のいずれかにコンジュゲートできることを理解するであろう。コンジュゲートには、ＡＣＣ及びその他の部分がそれぞれの活性を保持する限り、２個の分子を結合することになる、任意の化学反応が含まれ得る。コンジュゲートには、多くの化学的反応機構、例えば共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合及び錯化が含まれ得る。いくつかの実施形態では、好ましい結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接的な縮合によって、または外部の架橋分子の組み込みによってのいずれかで達成できる。多くの二価または多価の結合剤が、本明細書に記載の活性化可能サイトカイン構成体のいずれかのコンジュゲートに有用である。例えば、コンジュゲートは、有機化合物、例えばチオエステル、カルボジイミド、琥珀酸イミドエステル、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン及びヘキサメチレンジアミンを含有できる。いくつかの実施形態では、活性化可能サイトカイン構成体は、１個以上の非天然アミノ酸残基を含有して、またはそれ以外の場合には導入して、コンジュゲートに好適な部位を提供することができる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、薬剤及び／またはコンジュゲートは、ジスルフィド結合（例えば、システイン分子上のジスルフィド結合）によって、抗原結合ドメインに付着される。多くのがんは高レベルのグルタチオン、すなわち還元剤を自然に放出するため、がん組織微小環境に存在するグルタチオンはジスルフィド結合を還元することができ、その後に、送達部位で薬剤及び／またはコンジュゲートが放出される。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、コンジュゲートが、標的部位内（例えば、疾患組織（例えば、がん組織））で、補体の存在下で標的に結合すると、リンカーにコンジュゲート及び／または薬剤を付着しているアミドまたはエステル結合は切断され、活性化状態でのコンジュゲート及び／または薬剤の放出が得られる。これらのコンジュゲート及び／または薬剤は、対象に投与されると、コンジュゲート及び／または薬剤の標的部位（例えば、疾患組織（例えば、がん組織））での送達及び放出を達成することになる。これらのコンジュゲート及び／または薬剤は、本明細書に記載されるコンジュゲート及び／または薬剤のいずれかのインビボ送達のために特に有効である。

いくつかの実施形態では、リンカーは、補体系の酵素によって開裂可能ではない。例えば、コンジュゲート及び／または薬剤は、補体活性化によって標的細胞が最終的に溶解されるため、補体活性化なしで放出される。そのような実施形態では、コンジュゲート及び／または薬剤は、標的細胞に送達されることになる（例えば、ホルモン、酵素、コルチコステロイド、神経伝達物質または遺伝子）。さらに、リンカーは血清プロテアーゼによって穏やかに開裂しやすくなり、コンジュゲート及び／または薬剤は、標的部位でゆっくりと放出される。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、コンジュゲート及び／または薬剤は、コンジュゲート及び／または薬剤が標的部位（例えば、疾患組織（例えば、がん組織））に送達されるが、コンジュゲート及び／または薬剤は放出されないように設計される。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、コンジュゲート及び／または薬剤は、直接または開裂不可リンカーを介してのいずれかで、抗原結合ドメインに付着される。例示的な開裂不可リンカーとしては、アミノ酸（例えば、Ｄ－アミノ酸）、ペプチド、または、後に抗原結合ドメインへの付着に利用できる官能基を含有するように本明細書に記載される方法によって修飾されてよい、その他の有機化合物が挙げられる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、薬剤の少なくとも１個のコンジュゲート点を含有する。いくつかの実施形態では、全ての使用可能なコンジュゲート点が、薬剤へのコンジュゲートに利用できる。いくつかの実施形態では、１個以上のコンジュゲート点としては、ジスルフィド結合に関与する硫黄原子、鎖間ジスルフィド結合に関与する硫黄原子、鎖間スルフィド結合に関与する硫黄原子であるが鎖内ジスルフィド結合に関与する硫黄原子ではない硫黄原子、及び／またはシステイン、もしくは硫黄原子を含有するその他のアミノ酸残基の硫黄原子が挙げられるが、これらに限定されない。このような場合、残基は、タンパク質構成体構造中に天然に存在してよく、または限定されることなく、部位特異的変異誘発、化学変換、もしくは非天然のアミノ酸の誤取込などの方法を用いて、タンパク質構成体に組み込まれてもよい。

本開示は、コンジュゲート用のＡＣＣを調製する方法及び材料も提供する。本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、１個以上の鎖間ジスルフィド結合を含有するように修飾される。例えば、ＡＣＣ内のジスルフィド結合は、還元剤、例えば限定されることなく、ＴＣＥＰ、ＤＴＴまたはβ－メルカプトエタノールなどへの曝露後に、還元されることができる。場合によっては、ジスルフィド結合の還元は、部分的な還元のみである。本明細書で使用する場合、部分的還元という用語「は、ＡＣＣが還元剤と接触し、全ての利用可能なコンジュゲート部位の一部が還元される状況を意味する（例えば、全てのジスルフィド結合が還元されるわけではない）。いくつかの実施形態では、活性化可能サイトカイン構成体は、還元剤との接触後に、全ての利用可能なコンジュゲート部位の９９％未満（例えば、９８％未満、９７％未満、９６％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満または５％未満）が還元される場合、部分的に還元される。いくつかの実施形態では、１個以上の鎖間ジスルフィド結合における還元を有するＡＣＣが、遊離チオールと反応性である薬剤にコンジュゲートされる。

本開示は、また、治療薬をＡＣＣの特定の位置にコンジュゲートする方法及び材料を提供する。本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、治療薬がＡＣＣに、ＡＣＣ上の特定の位置でコンジュゲートすることができるように、ＡＣＣは修飾される。例えば、ＡＣＣは、ＡＣＣへのコンジュゲートを促進するように、部分的に還元され得る。このような場合、ＡＣＣの部分的還元は、ＡＣＣのコンジュゲート部位が還元されないように生じる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ上のコンジュゲート部位（複数可）は、タンパク質構成体上の特定の位置における薬剤のコンジュゲートを促進するように選択される。還元剤を用いた処置に際し、さまざまな要因がＡＣＣの「還元レベル」に影響し得る。例えば、本明細書に記載される方法及び材料を用いてＡＣＣの部分的還元を達成するためには、限定されないが、ＡＣＣに対する還元剤の比、インキュベートの長さ、インキュベート温度、及び／または還元反応溶液のｐＨの最適化が必要となり得る。任意の適切な要因の組み合わせ（例えば、ＡＣＣに対する還元剤の比、還元剤とのインキュベートの長さ及び温度、及び／または還元剤のｐＨ）を用いて、ＡＣＣの部分的還元を達成できる（例えば、利用可能なコンジュゲート部位の全体的な還元、または特定のコンジュゲート部位の還元）。

ＡＣＣに対する還元剤の有効な比率は、薬剤へのコンジュゲートを可能にする様式で、ＡＣＣを少なくとも部分的に還元する（例えば、利用可能なコンジュゲート部位の全体的な還元、または特定のコンジュゲート部位の還元）、任意の比率であることができる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣに対する還元剤の比は、約２０：１～１：１、約１０：１～１：１、約９：１～１：１、約８：１～１：１、約７：１～１：１、約６：１～１：１、約５：１～１：１、約４：１～１：１、約３：１～１：１、約２：１～１：１、約２０：１～１：１．５、約１０：１～１：１．５、約９：１～１：１．５、約８：１～１：１．５、約７：１～１：１．５、約６：１～１：１．５、約５：１～１：１．５、約４：１～１：１．５、約３：１～１：１．５、約２：１～１：１．５、約１．５：１～１：１．５、または約１：１～１：１．５の範囲であることになる。いくつかの実施形態では、比率は、約５：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比率は、約５：１～１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比率は、約４：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比率は、約４：１～１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比率は、約８：１～約１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比率は、約２．５：１～１：１の範囲である。

還元剤でＡＣＣを処置するための有効なインキュベート時間及び温度は、薬剤のＡＣＣへのコンジュゲートを可能にする様式で、ＡＣＣを少なくとも部分的に還元する（例えば、利用可能なコンジュゲート部位の全体的な還元、または特定のコンジュゲート部位の還元）、任意の時間及び温度であることができる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣを処置するためのインキュベート時間及び温度は、３７℃で約１時間～３７℃で約１２時間（または、その任意の部分的な範囲）の範囲であることになる。

還元剤でＡＣＣを処置するための還元反応の有効なｐＨは、ＡＣＣの薬剤へのコンジュゲートを可能にする様式で、ＡＣＣを少なくとも部分的に還元する（例えば、利用可能なコンジュゲート部位の全体的な還元、または特定のコンジュゲート部位の還元）、任意のｐＨであることができる。

部分的に還元されたＡＣＣがチオール含有薬剤と接触すると、その薬剤は、ＡＣＣ内の鎖間のチオールにコンジュゲートすることができる。薬剤は、チオール含有試薬（例えば、システインまたはＮ－アセチルシステイン）を用いて、チオールを含有するように修飾できる。例えば、ＡＣＣは、約３７℃で約１時間、ＡＣＣに対する還元剤の所望の比率における、還元剤（例えば、ＴＥＰＣ）とのインキュベート後に、部分的に還元され得る。ＡＣＣに対する還元剤の有効な比率は、チオール含有薬剤のコンジュゲートを可能にする様式で、ＡＣＣ内に位置する少なくとも２個の鎖間ジスルフィド結合を部分的に還元する（例えば、利用可能なコンジュゲート部位の全体的な還元、または特定のコンジュゲート部位の還元）、任意の比率であることができる。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、いかなる鎖内ジスルフィド結合の還元も回避する様式で、還元剤によって還元される。本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、いかなる鎖内ジスルフィド結合の還元も回避し、少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合を還元する様式で、還元剤によって還元される。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣはまた、ＡＣＣにコンジュゲートした薬剤を含有できる。いくつかの実施形態では、コンジュゲートされる薬剤は、治療薬である。

いくつかの実施形態では、薬剤（例えば、活性化可能サイトカイン構成体にコンジュゲートされる薬剤）は、検出可能部分、例えば標識またはその他のマーカーなどである。例えば、薬剤は、放射性標識したアミノ酸、標識したアビジン（例えば、光学的または熱量測定法によって検出され得る、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得る１種以上のビオチニル部分、１種以上の放射性同位元素もしくは放射性核種、１種以上の蛍光標識、１種以上の酵素標識、及び／または１種以上の化学発光剤である、または、これらを含有する。いくつかの実施形態では、検出可能部分は、スペーサー分子によって付着される。

いくつかの実施形態では、薬剤（例えば、活性化可能サイトカイン構成体にコンジュゲートされる細胞毒性剤）は、炭水化物部分、スルフヒドリル基、アミノ基またはカルボキシレート基を用いて、ＡＣＣに連結される。

薬剤にコンジュゲートした、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、薬剤（例えば、活性化可能サイトカイン構成体にコンジュゲートされる細胞毒性剤）は、リンカー及び／またはＣＭ（開裂可能配列とも称される）を介して、ＡＣＣにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤（例えば、活性化可能サイトカイン構成体にコンジュゲートされる細胞毒性剤）は、ＡＣＣ内のシステインまたはリシンにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤（例えば、活性化可能サイトカイン構成体にコンジュゲートされる細胞毒性剤）は、ＡＣＣの別の残基、例えば本明細書にて開示した残基にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、リンカーは、チオール含有リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、開裂不可リンカーである。開裂可能部分及び／またはリンカーの、いくつかの非限定例を表１に示す。

当業者は、多種多様な可能性がある部分を、本開示のＡＣＣに連結できることを理解するであろう。（例えば、“ＣｏｎｊｕｇａｔｅＶａｃｃｉｎｅｓ”，ＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｔｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅａｎｄＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（ｅｄｓ），ＣａｒｇｅｒＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９８９）参照。これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。）一般に、薬剤（例えば、細胞毒性剤）の、ＡＣＣへの有効なコンジュゲートは、ＡＣＣに薬剤をコンジュゲートし、一方で薬剤及びＡＣＣが機能性を保持することも可能にする、任意の化学反応によって達成できる。

薬剤にコンジュゲートした、ＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、各種の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて、ＡＣＣに薬剤をコンジュゲートすることができ、限定されることなく、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トリエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などが挙げられる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。いくつかの実施形態では、炭素－１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）キレート剤を用いて、ＡＣＣに放射性ヌクレオチドをコンジュゲートできる。（例えば、ＷＯ９４／１１０２６参照）。

好適なリンカー及びＣＭは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用について記載している、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）参照）。オリゴペプチドリンカーを経由してＡＣＣに結合されたハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用について記載している、米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。いくつかの実施形態では、好適なリンカーとしては、（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジル－ジチオ）－トルエン（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ＃２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２１６５－Ｇ）；及び（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートしたスルホ－ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド：ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．＃２４５１０）が挙げられる。追加のリンカーとしては、ＳＭＣＣ、スルホＳＭＣＣ、ＳＰＤＢまたはスルホＳＰＤＢが挙げられるが、これらに限定されない。

上記のＣＭ及びリンカーは、異なる属性を有する構成成分を含有し、したがって、異なる生理化学的特性を有するコンジュゲートがもたらされる。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホＮＨＳエステルよりも、より安定している。ＮＨＳエステル含有のリンカーは、スルホＮＨＳエステルよりも可溶性が低い。さらに、リンカーＳＭＰＴは、立体障害型のジスルフィド結合を含有し、安定性の高いコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド結合は、ジスルフィド結合がインビトロで切断されるため、一般的にその他の結合より安定性が低く、利用可能なコンジュゲートが得られることが少ない。スルホＮＨＳは、特に、カルボジイミドカップリングの安定性を高めることができる。カルボイミジドカップリング（例えば、ＥＤＣ）をスルホＮＨＳと結合させて用いる場合、カルボイミジドカップリング反応単独よりも、加水分解により抵抗性のあるエステルを形成する。

ＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、薬剤を、ＡＣＣのアミノ酸配列に包含される修飾されたアミノ酸配列を用いて、ＡＣＣにコンジュゲートすることができる。ＡＣＣのアミノ酸配列内の特定の位置で、コンジュゲート可能なアミノ酸を挿入することによって、コンジュゲートした薬剤（例えば、細胞毒性剤）の配置及び／または投薬量が制御されるように、タンパク質構成体が設計され得る。例えば、ＡＣＣは、反応性チオール基を提供し、タンパク質の折り畳み及び／またはアセンブリに負の影響を及ぼさず、抗原結合特性を変えない、第１のモノマー、第２のモノマー、第３のモノマー及び／または第４のモノマー上の位置で、システインアミノ酸残基を含有するように修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＡＣＣのアミノ酸配列内に、１個以上の非天然アミノ酸残基を含有するように修飾され、コンジュゲートに好適な部位を提供することができる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣは、ＡＣＣのアミノ酸配列内に、酵素的に活性化可能なペプチド配列を含有するように修飾され得る。

核酸
本明細書において、本明細書に記載のＡＣＣのいずれかの、第１のモノマー構成体（または、第１のモノマー構成体のタンパク質の部分）（例えば、本明細書に記載される第１のモノマー構成体のいずれか）、及び第２のモノマー構成体（または、第２のモノマー構成体のタンパク質の部分）（例えば、本明細書に記載される第２のモノマー構成体のいずれか）をコードする配列を含有する核酸が提供される。いくつかの実施形態では、１対の核酸は、第１のモノマー構成体（または、第１のモノマー構成体のタンパク質の部分）及び第２のモノマー構成体（または、第２のモノマー構成体のタンパク質の部分）を一緒になってコードする。いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体（または、第１のモノマー構成体のタンパク質の部分）をコードする核酸配列は、第２のモノマー構成体（または、第２のモノマー構成体のタンパク質の部分）をコードする核酸配列と、少なくとも７０％同一である（例えば、少なくとも７２％同一である、少なくとも７４％同一である、少なくとも７６％同一である、少なくとも７８％同一である、少なくとも８０％同一である、少なくとも８２％同一である、少なくとも８４％同一である、少なくとも８６％同一である、少なくとも８８％同一である、少なくとも９０％同一である、少なくとも９２％同一である、少なくとも９４％同一である、少なくとも９６％同一である、少なくとも９８％同一である、少なくとも９９％同一である、または１００％同一である）。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体のタンパク質の部分をコードする核酸は、ＣＰ１及びＣＭ１部分を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第２のモノマーのタンパク質の部分をコードする核酸は、ＣＰ２及びＣＭ２部分を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、１対の核酸は、第１のモノマー構成体のタンパク質の部分及び第２のモノマー構成体のタンパク質の部分を一緒になってコードし、タンパク質の部分は、続いて、それぞれＤＤ１及びＤＤ２部分にコンジュゲートされる（後続のコンジュゲートステップにおいて）。

いくつかの実施形態では、第１のモノマー構成体をコードする核酸は、ＤＤ１部分を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、第２のモノマー構成体をコードする核酸は、ＤＤ２部分を含むポリペプチドをコードする。

ベクター
本明細書において、本明細書に記載の核酸のいずれかを含有するベクター及びベクターのセットが提供される。当業者は、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを作製するために、好適なベクターまたはベクターのセット（例えば、発現ベクター）を選択すること、及びベクターまたはベクターのセットを使用して、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを発現させることができるであろう。例えば、ベクターまたはベクターのセットの選択では、ベクター（複数可）は、細胞の染色体に組み込まれ、及び／またはそこで複製できる必要があり得るため、細胞は考慮されなければならない。ＡＣＣを生成するために使用可能な例示的なベクターを、以下にも記載する。

本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、細胞内（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）で、組み換えタンパク質（例えば、第１のまたは第２のモノマー）の発現を誘導できるポリヌクレオチドを意味する。「ベクター」は、宿主細胞内に核酸及びそれらのフラグメントを送達することができ、制御配列（例えば、プロモータ、エンハンサ、ポリ（Ａ）シグナル）を含有する。外因性ポリヌクレオチドは、発現されるために、発現ベクターに挿入されてよい。用語「ベクター」はまた、人工染色体、プラスミド、レトロウイルス及びバキュロウイルスベクターも包含する。

本明細書に記載される核酸のいずれか１つを含有し、細胞（例えば、哺乳動物細胞）を形質転換するのに好適なベクターを作成する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，Ｅｄｓ．“ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，”２^ｎｄＥｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，１９８９及びＡｕｓｕｂｅｌｅｔ．，Ｅｄｓ．“ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，”ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，１９９３を参照されたい。

ベクターの非限定例としては、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、ならびにウイルスベクター（例えば、任意のアデノウイルスベクター（例えば、ｐＳＶまたはｐＣＭＶベクター）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター及びレトロウイルスベクター）、ならびに任意のＧａｔｅｗａｙ（登録商標）ベクターが挙げられる。ベクターは、例えば、発現のための十分なシス活性エレメントを含有でき、発現のための他のエレメントは、宿主哺乳動物細胞によって、またはインビトロの発現系において供給され得る。当業者は、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを作製するために好適なベクター及び哺乳動物細胞を選択できるであろう。

本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＣＣは、組み換えＤＮＡ技術及び真核生物または原核生物の種における発現を使用して、生合成的に作られてよい。

いくつかの実施形態では、ベクターは、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかの、第１のモノマー及び第２のモノマーをコードする核酸を含有する。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。

いくつかの実施形態では、１対のベクターは、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかの、第１のモノマー及び第２のモノマーを一緒になってコードする１対の核酸を一緒になって含有する。いくつかの実施形態では、ベクターの対は、発現ベクターの対である。

細胞
本明細書においては、本明細書に記載される核酸のいずれかを含有する、本明細書に記載されるベクターまたはベクターのセットのいずれかを含有する宿主細胞もまた提供される。

本明細書に記載されるいずれかのＡＣＣは、任意の細胞（例えば、哺乳動物細胞）によって生成できる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）、げっ歯動物細胞（例えば、マウス細胞、ラット細胞、ハムスター細胞もしくはモルモット細胞）、またはヒト以外の霊長類細胞である。

核酸及びベクター（例えば、本明細書に記載されるベクターのいずれかまたはベクターのセットのいずれか）を、細胞内に導入する方法は、当該技術分野において既知である。細胞内に核酸を導入するために使用可能な方法の非限定例としては、リポフェクション、形質移入、リン酸カルシウム形質移入、カチオン性ポリマー形質移入、ウイルス性形質導入（例えば、アデノウイルス形質導入、レンチウイルス形質導入）、ナノ粒子形質移入及びエレクトロポレーションが挙げられる。

いくつかの実施形態では、導入ステップは、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを構成するモノマーをコードする核酸を含有するベクター（例えば、本明細書に記載されるベクターまたはベクターのセットのいずれか）を細胞内に導入することを含む。

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞は、真核細胞であることができる。本明細書で使用する場合、用語「真核細胞」は、異なる、膜結合性の核を有する細胞を意味する。このような細胞としては、例えば、哺乳動物（例えば、げっ歯動物、ヒト以外の霊長類もしくはヒト）、昆虫、真菌または植物の細胞が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、真核細胞は、酵母細胞、例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである。いくつかの実施形態では、真核細胞は、より高等な真核細胞、例えば哺乳動物、トリ、植物または昆虫の細胞である。哺乳動物細胞の非限定例としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びヒト胎児腎細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか１つの、第１のモノマー及び第２のモノマーをコードする核酸を含有する。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかの、第１のモノマー及び第２のモノマーを一緒になってコードする、１対の核酸を含有する。

活性化可能サイトカイン構成体の作製方法
本明細書において、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを作製する方法であって、（ａ）本明細書に記載される組み換え宿主細胞のいずれかを、液体培地中で、ＡＣＣを作製するのに十分な条件下にて培養することと、（ｂ）宿主細胞及び／または液体培地からＡＣＣを回収することと、を含む、方法が提供される。

細胞を培養する方法は、当該技術分野において周知である。細胞は、インビトロで、細胞増殖、細胞分化及び細胞成長に好都合である条件下にて維持できる。例えば、細胞は、細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を、必要な成長因子及び、細胞生存力及び成長を支援するのに十分な補助剤を含有する細胞培地に接触させることによって培養できる。

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、回収したＡＣＣを単離することをさらに含む。単離方法の非限定例としては、硫安沈殿、ポリエチレングリコール沈殿、サイズ排除クロマトグラフィ、リガンド－親和性クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ（例えば、アニオンまたはカチオン）、及び疎水性相互作用クロマトグラフィが挙げられる。

いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＰ１、ＣＭ１、ＰＭ２及びＣＭ３を含有する第１のモノマー構成体のタンパク質の部分と、ＣＰ２及びＣＭ２、所望によりＰＭ２及びＣＭ４を含有する第２のモノマー構成体のタンパク質の部分と、を生成でき、タンパク質の部分は、続いて、それぞれＤＤ１及びＤＤ２部分にコンジュゲートされる。

本明細書に記載される組成物及び方法は、二量体化ドメイン間のジスルフィド結合の形成を可能にし、ＡＣＣの二量体化を形成及び維持する、非還元または部分的な還元条件の使用を伴ってよい。

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、単離したＡＣＣを薬学的組成物に調製することをさらに含む。さまざまな製剤が、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載される。本明細書に記載される単離したＡＣＣのいずれかは、任意の投与経路用（例えば、静脈内、腫瘍内、皮下、皮内、経口（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所用）、経粘膜、または筋肉内）に調製できる。

本明細書において、本明細書に記載の方法のいずれかで作製したＡＣＣも提供される。本明細書に記載の方法のいずれかによって作製したＡＣＣのいずれかを含有する組成物（例えば、薬学的組成物）もまた提供される。本明細書においては、本明細書に記載される組成物（例えば、薬学的組成物）のいずれかの、少なくとも１回の用量を含有するキットもまた提供される。

治療方法
本明細書において、対象の疾患（例えば、がん（例えば、本明細書に記載されるがんのいずれか））を治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを、対象に投与することを含む方法が提供される。

本明細書で使用する場合、用語「対象」は、任意の哺乳動物を意味する。いくつかの実施形態では、対象は、ネコ科動物（例えば、ネコ）、イヌ科動物（例えば、イヌ）、ウマ科動物（例えば、ウマ）、ウサギ、ブタ、げっ歯動物（例えば、マウス、ラット、ハムスターもしくはモルモット）、ヒト以外の霊長類（例えば、シミアン（例えば、サル（例えば、ヒヒ、マーモセット）、もしくは類人猿（例えば、チンパンジー、ゴリラ、オランウータンもしくはテナガザル））、またはヒトである。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

いくつかの実施形態では、対象は、疾患（例えば、がん（例えば、本明細書に記載のがんのいずれか））を有すると、予め特定または診断されている。

本明細書で使用する場合、用語「治療する」は、対象（例えば、本明細書に記載される対象のいずれか）において、疾患（例えば、がん（例えば、本明細書に記載されるがんのいずれか））の重症度、頻度または、１つ以上（例えば、１、２、３、４または５つ）の症状もしくは兆候の数を低減することを含む。疾患ががんであるいくつかの実施形態では、治療によって、がんを有する対象における、がん増殖の低減、がん進行の阻害、がん転移の阻害、またはがん再発のリスク低減がもたらされる。

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、疾患は、がんである。本明細書においては、治療を必要とする対象（例えば、本明細書に記載される、または当該技術分野において既知の、例示的な対象のいずれか）の治療方法であって、対象に、治療有効量の、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか、または本明細書に記載される組成物のいずれか（例えば、薬学的組成物）を投与することを含む、方法もまた提供される。

これらの方法のいくつかの実施形態では、対象はがんを有すると特定または診断されている。がんの非限定的例としては、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、グリア芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫）、白血病（例えば、毛様細胞性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ））、脊髄形成異常性症候群（ＭＤＳ）、カポジ肉腫、網膜芽細胞腫、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、腎細胞癌、胃及び食道癌、膵臓癌、前立腺癌、脳の癌、大腸癌、骨癌、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、鼻咽頭腺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮細胞頭頸部癌、子宮体癌、膀胱癌、子宮頸癌、肝臓癌、及び肝細胞癌が挙げられる。いくつかの実施形態では、がんはリンパ腫である。いくつかの実施形態では、リンパ腫はバーキットリンパ腫である。いくつかの態様では、対象は、家族性癌症候群、例えばリフラウメニ症候群、家族性乳癌・卵巣癌（ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２の変異）症候群などを有すると特定または診断されている。開示される方法は、非固形癌の治療にも有用である。例示的な固形腫瘍としては、各種の臓器系、例えば肺、乳房、リンパ系、消化管（例えば、結腸）、泌尿生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮、または精巣の腫瘍）、咽頭、前立腺及び卵巣などの悪性腫瘍（例えば、肉腫、腺癌及び癌腫）が挙げられる。例示的な腺癌としては、結腸直腸癌、腎細胞腫、肝臓癌、肺の非小細胞癌、及び小腸の癌が挙げられる。

ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅによって記載される例示的ながんとしては、成人急性リンパ球性白血病；小児急性リンパ球性白血病；成人急性骨髄性白血病；副腎皮質癌；小児副腎皮質癌；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍；肛門癌；星細胞腫（小児、小脳）；星細胞腫（大脳、小児）；肝外胆管癌；膀胱癌；小児膀胱癌；骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫；小児脳幹部グリオーマ；脳腫瘍（成人）；脳腫瘍、小児脳幹部グリオーマ；小脳星細胞腫（小児）；脳腫瘍、大脳星細胞腫／小児悪性神経膠腫；脳腫瘍、小児上衣細胞腫；脳腫瘍、髄芽腫（小児）；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児）；脳腫瘍、視覚路及び視床下部グリオーマ（小児）；脳腫瘍、（小児、その他）；乳癌；乳癌及び妊娠；小児乳癌；男性乳癌；小児気管支腺腫／カルチノイド；小児カルチノイド腫瘍；消化管カルチノイド腫瘍；副腎皮質癌；膵島細胞癌；原発不明癌；原発性中枢神経系リンパ腫；小脳星細胞腫（小児）；大脳星細胞腫／悪性神経膠腫（小児）；子宮頸癌；小児がん；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性疾患；腱鞘の明細胞肉腫；大腸癌；小児結腸直腸癌；悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫；子宮内膜癌；上衣細胞腫（小児）；上皮性卵巣癌；食道癌；小児食道癌；ユーイング肉腫ファミリー腫瘍；小児頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；眼の癌、眼内の黒色腫；眼の癌、網膜芽細胞腫；胆嚢癌；胃部（胃）癌；小児胃部（胃）癌；消化管カルチノイド腫瘍；小児頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；妊娠性絨毛性腫瘍；小児脳幹グリオーマ；視覚路及び視床下部グリオーマ（小児）；毛様細胞性白血病；頭頸部癌；成人原発性肝細胞性（肝臓）癌；小児原発性肝細胞性（肝臓）癌；成人ホジキンリンパ腫；小児ホジキンリンパ腫；妊娠中のホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部及び視覚路グリオーマ（小児）；眼内の黒色腫；膵島細胞癌（内分泌膵）；カポジ肉腫；腎臓癌；喉頭癌；小児喉頭癌；成人急性リンパ芽球性白血病；小児急性リンパ芽球性白血病；成人急性骨髄性白血病；小児急性骨髄性白血病；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；毛様細胞性白血病；口唇及び口腔癌；成人原発性肝癌；小児原発性肝癌；非小細胞肺癌；小細胞肺癌；成人急性リンパ球性白血病；小児急性リンパ球性白血病；慢性リンパ性白血病；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；原発性中枢神経系リンパ腫；悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫；成人ホジキンリンパ腫；小児ホジキンリンパ腫；妊娠中のホジキンリンパ腫；成人非ホジキンリンパ腫；小児非ホジキンリンパ腫；妊娠中の非ホジキンリンパ腫；原発性中枢神経系リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；男性乳癌；悪性中皮腫（成人）；悪性中皮腫（小児）；悪性胸腺腫；髄芽腫（小児）；黒色腫；眼内の黒色腫；メルケル細胞癌；悪性中皮腫；原発不明の転移性頸部扁平上皮癌；多発性内分泌腺腹（小児）；多発性骨髄腫／形質細胞新生物；菌状息肉腫；脊髄形成異常性症候群；慢性骨髄性白血病；小児急性骨髄性白血病；多発性骨髄腫；骨髄増殖性疾患（慢性）；鼻腔及び副鼻腔癌；鼻咽頭癌；小児鼻咽頭癌；神経芽細胞腫；成人非ホジキンリンパ腫；小児非ホジキンリンパ腫；妊娠中の非ホジキンリンパ腫；非小細胞肺癌；口腔癌（小児）；口腔及び口唇癌；口腔咽頭癌；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；小児卵巣癌；上皮性卵巣癌；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣の低悪性度腫瘍；膵臓癌；小児膵臓癌；膵臓癌、膵島細胞；副鼻腔及び鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；褐色細胞腫；松果体及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児）；下垂体腫瘍；形質細胞新生物／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；妊娠及び乳癌；妊娠及びホジキンリンパ腫；妊娠及び非ホジキンリンパ腫；原発性中枢神経原発悪性リンパ腫；成人原発性肝癌；小児原発性肝癌；前立腺癌；直腸癌；腎細胞（腎臓）癌；小児腎細胞癌；腎盂及び尿管、移行細胞癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫（小児）；唾液腺癌；小児唾液腺癌；肉腫、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍；カポジ肉腫；肉腫（骨肉腫）／骨の悪性線維性組織球腫；肉腫、小児横紋筋肉腫；成人軟部肉腫；小児軟部肉腫；セーザリー症候群；皮膚癌；皮膚癌（小児）；皮膚癌（黒色腫）；皮膚癌、メルケル細胞；小細胞肺癌；小腸癌；成人軟部肉腫；小児軟部肉腫；原発不明の転移性頸部扁平上皮癌；胃（胃部）癌；小児胃（胃部）癌；テント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児）；悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫；精巣癌；小児胸腺腫；悪性胸腺腫；甲状腺癌；小児甲状腺癌；腎盂及び尿管、移行細胞癌；妊娠性絨毛性腫瘍；原発不明癌（小児）；小児の普通でない癌；尿管及び腎盂、移行細胞癌；尿道癌；子宮肉腫；膣癌；視覚路及び視床下部グリオーマ（小児）；外陰癌；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。

さらなる例示的ながんとしては、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及びマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）が挙げられる。

上記のがんの転移もまた、本明細書に記載される方法に従って、治療または予防できる。

いくつかの実施形態では、これらの方法は、対象におけるがんの１つ以上の症状の数、重症度、または頻度の低減をもたらすことができる（例えば、治療前の対象における、がんの１つ以上の症状の数、重症度または頻度と比較して）。

本明細書に記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、対象に、追加の治療薬（例えば、表２に列挙される１種以上の治療薬）を投与することをさらに含む。

組成物／キット
本明細書においては、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか、及び１種以上（例えば、１、２、３、４または５種）の薬学的に許容される担体（例えば、本明細書に記載の、薬学的に許容される担体のいずれか）、希釈剤または賦形剤を含む、組成物（例えば、薬学的組成物）もまた提供される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを含有する組成物（例えば、薬学的組成物）は、無菌バイアルまたは予め充填したシリンジ中に配置できる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを含有する組成物（例えば、薬学的組成物）は、異なる投与経路（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または腫瘍内）用に調製できる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される薬学的組成物のいずれかは、１種以上の緩衝剤（例えば、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、アミノ酸（例えば、グリシン）、１種以上の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、デキストランもしくはマンニトール）、１種以上の酸化防止剤、１種以上のキレート剤（例えば、ＥＤＴＡもしくはグルタチオン）、１種以上の防腐剤、及び／または薬学的に許容される担体（例えば、静菌水、ＰＢＳまたは生理食塩水）を含有できる。

本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される担体」とは、医薬品の投与と適合する、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌性剤、抗菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを意味する。このような担体の例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、及び約５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される薬学的組成物のいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかは、身体からの急速な排除に対して保護する担体、例えばインプラント及びマイクロカプセル化送達システムなどの徐放性製剤及び制御放出製剤とともに調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような薬学的組成物及び製剤の調製方法は、当業者にとって明らかである。

本明細書においては、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれか、本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを含有する組成物のいずれか、または本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを含有する薬学的組成物のいずれか、を含有するキットもまた提供される。本明細書に記載されるＡＣＣに加えて、表２から選択される１種以上の第２の治療薬を含有するキットもまた提供される。第２の治療薬（複数可）は、ＡＣＣとは別の投与形態で提供されてよい。あるいは、第２の治療薬（複数可）は、ＡＣＣと一緒に調製されてよい。いくつかの実施形態では、キットは、（１）配列番号１２９及び配列番号３４７～３５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＡＣＣと、（２）表２から選択される第２の治療薬と、を含む。

本明細書に記載されるキットのいずれかも、組成物（例えば、薬学的組成物）のいずれか、及び／または本明細書に記載されるＡＣＣのいずれかを使用するための説明書を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明書を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される組成物（例えば、薬学的組成物）のいずれかの、少なくとも１回の用量を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される薬学的組成物のいずれかを投与するためのシリンジを提供できる。

本開示は、以下の非限定的な態様を包含する。

１．第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含有する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、前記ＣＭ１は前記ＣＰ１と前記ＤＤ１との間に置かれ、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、前記ＣＭ２は前記ＣＰ２と前記ＤＤ２との間に置かれる、または
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、開裂可能部分（ＣＭ）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、前記ＣＭは前記ＣＰ２と前記ＤＤ２との間に置かれ、前記ＣＭはプロテアーゼの基質として機能する、または
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、開裂可能部分（ＣＭ）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、前記ＣＭは前記ＣＰ１と前記ＤＤ１との間に置かれ、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、前記ＣＭはプロテアーゼの基質として機能する、または
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、前記ＣＰ１、前記ＣＰ２、または前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２の両方は、プロテアーゼの基質として機能するアミノ酸配列を含有し、
さらに、
（ｃ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が互いに結合し、それによって前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
（ｄ）前記ＡＣＣが、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性の対照のレベルと比較して、ＣＰ１及び／またはＣＰ２の少なくとも１つの活性レベルが低減していることを特徴とする、
前記活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）。

２．前記第１のモノマー構成体が、前記ＣＰ１、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１を含む第１のポリペプチドを含む、態様１に記載のＡＣＣ。

３．前記第２のモノマー構成体が、前記ＣＰ２、前記ＣＭ２及び前記ＤＤ２を含む第２のポリペプチドを含む、態様１もしくは２のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

４．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、１対のＦｃドメイン；ヒトＩＬ－１５受容体のアルファ鎖（ＩＬ１５Ｒα）及び可溶性ＩＬ－１５からのスシ（ｓｕｓｈｉ）ドメイン；バルナーゼ及びバルスター；ＰＫＡ及びＡＫＡＰ；変異ＲＮａｓｅＩフラグメントベースのアダプタ／ドッキングタグモジュール；エピトープ及びｓｄＡｂ；エピトープ及びｓｃＦｖ；タンパク質シンタキシン、シナプトタグミン、シナプトブレビン及びＳＮＡＰ２５の相互作用に基づくＳＮＡＲＥモジュール；抗原結合ドメイン及びエピトープからなる群から選択される対である、態様１～３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が１対のＦｃドメインである、態様４に記載のＡＣＣ。

６．前記１対のＦｃドメインが、１対のヒトＦｃドメインである、態様５に記載のＡＣＣ。

７．前記ヒトＦｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、態様６に記載のＡＣＣ。

８．前記ヒトＦｃドメインが、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、態様７に記載のＡＣＣ。

９．前記ヒトＦｃドメインが、配列番号３、配列番号３１５または配列番号３１６と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である配列を含む、態様８に記載のＡＣＣ。

１０．前記ヒトＦｃドメインが、配列番号３、配列番号３１５または配列番号３１６と少なくとも９０％同一である配列を含む、態様９に記載のＡＣＣ。

１１．前記ヒトＦｃドメインが、配列番号３、配列番号３１５または配列番号３１６を含む、態様１０に記載のＡＣＣ。

１２．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が同一である、態様１～３及び５～１１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３．前記ＤＤ１が抗原結合ドメインを含み、前記ＤＤ２が対応するエピトープを含む、態様４に記載のＡＣＣ。

１４．前記抗原結合ドメインが抗Ｈｉｓタグ抗原結合ドメインであり、前記ＤＤ２がＨｉｓタグを含む、態様１３に記載のＡＣＣ。

１５．前記抗原結合ドメインが、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）である、態様１３に記載のＡＣＣ。

１６．前記抗原結合ドメインが、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である、態様１３に記載のＡＣＣ。

１７．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２の少なくとも一方が、非ポリペプチドポリマー及び小分子からなる群から選択される二量体化ドメイン置換基を含む、態様１に記載のＡＣＣ。

１８．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、互いに共有結合されている非ポリペプチドポリマーを含む、態様１７に記載のＡＣＣ。

１９．前記非ポリペプチドポリマーが、硫黄含有ポリエチレングリコールであり、前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、１個以上のジスルフィド結合を介して互いに共有結合されている、態様１８に記載のＡＣＣ。

２０．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２の少なくとも一方が小分子を含む、態様１７に記載のＡＣＣ。

２１．前記小分子がビオチンである、態様２０に記載のＡＣＣ。

２２．前記ＤＤ１がビオチンを含み、前記ＤＤ２がアビジンを含む、態様２０に記載のＡＣＣ。

２３．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２が、それぞれ独立してインターロイキンである、態様１～２２のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

２４．前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２が同一である、態様１～２３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

２５．前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２が異なる、態様１～２３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

２６．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２が、それぞれ独立して、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６及びＩＬ－１７からなる群から選択される、態様１～２３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

２７．前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２が、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１からなる群から選択される、態様２６に記載のＡＣＣ。

２８．前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２が異なるインターロイキンである、態様２６に記載のＡＣＣ。

２９．前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２が同一のインターロイキンである、態様２６に記載のＡＣＣ。

３０．前記ＣＰ１または前記ＣＰ２がインターロイキンである、態様２６に記載のＡＣＣ。

３１．前記インターロイキン（複数可）が、ヒト野生型成熟インターロイキンである、態様２６～３０のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

３２．前記インターロイキンが、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２またはＩＬ－１５である、態様２６～３１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

３３．前記インターロイキンが、ＩＬ－２、ＩＬ－１２及びＩＬ－１５である、態様３２に記載のＡＣＣ。

３４．前記インターロイキンが、ＩＬ－２及びＩＬ－１５の少なくともいずれかである、態様３３に記載のＡＣＣ。

３５．前記インターロイキンがＩＬ－１５である、態様３４に記載のＡＣＣ。

３６．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２が、配列番号１２９、３４７及び３４８からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一である配列を含む、態様３５に記載のＡＣＣ。

３７．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２が、配列番号１２９、３４７及び３４８からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一である配列を含む、態様３６に記載のＡＣＣ。

３８．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２が、配列番号３４７の配列を含む、態様３７に記載のＡＣＣ。

３９．前記インターロイキンがＩＬ－１５である、態様３２に記載のＡＣＣ。

４０．前記インターロイキンが、配列番号３４７及び配列番号３４８からなる群から選択される配列を有する、態様３８に記載のＡＣＣ。

４１．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２が、インターロイキンドメインを含む、態様１～４０のいずれか１項に記載のＡＣＣ。

４２．前記ＣＰ１及び前記ＣＰ２がそれぞれ、インターロイキンを含む、態様４１に記載のＡＣＣ。

４３．前記インターロイキンが、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６及びＩＬ－１７からなる群から選択される、態様４２に記載のＡＣＣ。

４４．前記ＣＭ１及び／または前記ＣＭ２が、合計約３個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸を含む、態様１～４３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

４５．前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２が、異なるプロテアーゼの基質を含む、態様１～４４のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

４６．前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２が、同一のプロテアーゼの基質を含む、態様１～４４のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

４７．前記プロテアーゼ（複数可）が、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、ＢＡＣＥ、レニン、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１４、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＶ／Ｌ２、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、クルジパイン、レグマイン、オツベイン－２（Ｏｔｕｂａｉｎ－２）、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、ＢＭＰ－１、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－１６、ＭＭＰ－１７、ＭＭＰ－１９、ＭＭＰ－２０、ＭＭＰ－２３、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－２６、ＭＭＰ－２７、活性化タンパク質Ｃ、カテプシンＡ、カテプシンＧ、キマーゼ、ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ、エラスターゼ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾアターゼ、ＨｔｒＡ１、ヒト好中球リアーゼ、ラクトフェリン、マラプシン（ｍａｒａｐｓｉｎ）、ＮＳ３／４Ａ、ＰＡＣＥ４、プラスミン、ＰＳＡ、ｔＰＡ、トロンビン、トリプターゼ、ｕＰＡ、ＤＥＳＣ１、ＤＰＰ－４、ＦＡＰ、ヘプシン、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＭＰＲＳＳ３及びＴＭＰＲＳＳ４からなる群から選択される、態様１～４６のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

４８．前記プロテアーゼ（複数可）が、ｕＰＡ、レグマイン、ＭＴ－ＳＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＢＭＰ－１、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、及びＭＭＰ－１４からなる群から選択される、態様４７に記載のＡＣＣ。

４９．前記ＣＭ１及び／または前記ＣＭ２が、ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号５）、ＴＧＲＧＰＳＷＶ（配列番号６）、ＰＬＴＧＲＳＧＧ（配列番号７）、ＴＡＲＧＰＳＦＫ（配列番号８）、ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号９）、ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号１０）、ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号１１）、ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号１２）、ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号１３）、ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号１４）、ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号１５）、ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号１６）、ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号１７）、ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号１８）、ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号１９）、ＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号２０）、ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号２１）、ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号２２）、ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号２３）、ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号２４）、ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号２５）、ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号２６）、ＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号２７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２９）、ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３０）、ＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号３１）、ＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号３２）、ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号３４）、ＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号３５）、ＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号３６）、ＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号３７）、ＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号３８）、ＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号３９）、ＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号４０）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）、ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号４２）、ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号４３）、ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号４４）、ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号４５）、ＩＳＳＧＬ（配列番号４６）、ＩＳＳＧＬＬＳ（配列番号４７）、ＩＳＳＧＬＬ（配列番号４８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号４９）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号５０）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号５１）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号５２）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号５３）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号５４）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号５５）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号５６）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号５７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号５８）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号５９）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６０）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６１）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６２）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６３）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号６４）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６５）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６６）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６７）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６８）、ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６９）、ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号７０）、ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号７１）、ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号７２）、ＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号７３）、ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号７４）、ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号７５）、ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号７６）、ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号７７）、ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号７８）、ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号７９）、ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号８０）、ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号８１）、ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号８２）、ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号８３）、ＧＰＲＳＦＧ（配列番号８４）、ＳＡＲＧＰＳＲＷ（配列番号８５）、ＧＧＷＨＴＧＲＮ（配列番号８６）、ＨＴＧＲＳＧＡＬ（配列番号８７）、ＡＡＲＧＰＡＩＨ（配列番号８８）、ＲＧＰＡＦＮＰＭ（配列番号８９）、ＳＳＲＧＰＡＹＬ（配列番号９０）、ＲＧＰＡＴＰＩＭ（配列番号９１）、ＲＧＰＡ（配列番号９２）、ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ（配列番号９３）、ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ（配列番号９４）、ＳＰＬＴＧＲＳＧ（配列番号９５）、ＳＡＧＦＳＬＰＡ（配列番号９６）、ＬＡＰＬＧＬＱＲＲ（配列番号９７）、ＳＧＧＰＬＧＶＲ（配列番号９８）、ＰＬＧＬ（配列番号９９）、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）からなる群から選択される配列を含む、態様４７に記載のＡＣＣ。

５０．前記ＣＭ１及び／または前記ＣＭ２が、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号２８）、ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号３３）、ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号４１）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号５４）、ＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号１００）、ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号６８）、及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）からなる群から選択される配列を含む、態様４７に記載のＡＣＣ。

５１．前記プロテアーゼ（複数可）が、対象の腫瘍によって産生される、態様１～５０のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５２．前記対象が、がんを有すると診断または特定されている、態様５１に記載のＡＣＣ。

５３．前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１が、前記第１のモノマー構成体において、互いに直接的に隣接する、態様１～５２のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５４．前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１が、前記第１のモノマー構成体において、互いに直接的に隣接する、態様１～５３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５５．前記ＣＰ２及び前記ＣＭ２が、前記第２のモノマー構成体において、互いに直接的に隣接する、態様１～５４のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５６．前記ＣＭ２及び前記ＤＤ２が、前記第２のモノマー構成体において、互いに直接的に隣接する、態様１～５５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５７．前記第１のモノマー構成体が、少なくとも１個のリンカーを含む、態様１～５６のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

５８．前記少なくとも１個のリンカーが、前記ＣＰ１と前記ＣＭ１との間に配置されたリンカーＬ１及び／または前記ＣＭ１と前記ＤＤ１との間に配置されたリンカーＬ２である、態様５７に記載のＡＣＣ。

５９．前記第２のモノマー構成体が、少なくとも１個のリンカーを含む、態様５８に記載のＡＣＣ。

６０．前記少なくとも１個のリンカーが、前記ＣＰ２と前記ＣＭ２との間に配置されたリンカーＬ３及び／または前記ＣＭ２と前記ＤＤ２との間に配置されたリンカーＬ４である、態様５９に記載のＡＣＣ。

６１．前記第１のモノマー構成体がリンカーＬ１を含み、前記第２のモノマー構成体がリンカーＬ３を含む、態様６０に記載のＡＣＣ。

６２．Ｌ１及びＬ３が同一である、態様６１に記載のＡＣＣ。

６３．前記第１のモノマー構成体がリンカーＬ２を含み、前記第２のモノマー構成体がリンカーＬ４を含む、態様６２に記載のＡＣＣ。

６４．Ｌ２及びＬ４が同一である、態様６３に記載のＡＣＣ。

６５．各リンカーが、１個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸の全長を有する、態様６４に記載のＡＣＣ。

６６．各リンカーが、少なくとも５個のアミノ酸の全長を有する、態様６５に記載のＡＣＣ。

６７．前記第１のモノマー構成体が、少なくとも１個のリンカーを含み、各リンカーが、独立して、Ｇ；ＧＧ；ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号２１０）；ＧＧＧＳ（配列番号２）；ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２１１）；ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号２１２）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１４）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１５）；ＧＧＧＧＳ（配列番号２１６）；ＧＳ；ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１７）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号２１８）；ＧＧＳＬＤＰＫＧＧＧＧＳ（配列番号２１９）；ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ（配列番号２２０）；ＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧ（配列番号２２１）；ＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳ（配列番号２２２）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＫＧ（配列番号２２３）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＳＳＥＧＳＧＳＴＫＧ（配列番号２２４）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２２５）；ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）；（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２２７）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２８）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１６）、各ｎは少なくとも１である整数である；ＧＧＳＧ（配列番号２２９）；ＧＧＳＧＧ（配列番号２３０）；ＧＳＧＳＧ（配列番号２３１；ＧＳＧＧＧ（配列番号２３２）；ＧＧＧＳＧ（配列番号２３３）；ＧＳＳＳＧ（配列番号２３４）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１３）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２３５）；及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＳＥＧＳＴ（配列番号２２６）からなる群から選択される、態様１～６６のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

６８．前記リンカーが、Ｇ、ＧＧ及びＧＧＧＳ（配列番号２）からなる群から選択される配列を含む、態様６７に記載のＡＣＣ。

６９．前記第１のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端方向で、前記ＣＰ１、前記ＣＭ１、及び前記ＣＭ１のＣ末端に直接または間接的に連結された前記ＤＤ１を含む、態様１～６８のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７０．前記第１のポリペプチドが、Ｃ末端からＮ末端方向で、前記ＣＰ１、前記ＣＭ１、及び前記ＣＭ１のＮ末端に直接または間接的に連結された前記ＤＤ１を含む、態様１～６９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７１．前記第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端方向で、前記ＣＰ２、前記ＣＭ２、及び前記ＣＭ２のＣ末端に直接または間接的に連結された前記ＤＤ２を含む、態様１～７０のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７２．前記第２のポリペプチドが、Ｃ末端からＮ末端方向で、前記ＣＰ２、前記ＣＭ２、及び前記ＣＭ２に直接または間接的に連結された前記ＤＤ２を含む、態様１～７１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７３．前記第１のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端方向で、前記ＣＰ１、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１を含み、前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１が互いに直接的に隣接し、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１が互いに直接的に隣接し、前記ＣＭ１が１０個以下のアミノ酸のペプチドであり、前記第２のモノマー構成体が前記第１のモノマー構成体と同一であり、前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも２個のジスルフィド結合を介して、互いに共有結合されている、態様６９に記載のＡＣＣ。

７４．前記ＣＰ１がインターロイキンである、態様７３に記載のＡＣＣ。

７５．前記ＣＰ１がＩＬ－１５である、態様７４に記載のＡＣＣ。

７６．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、表面プラズモン共鳴を使用して決定される、その同族の受容体に対する前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２の結合親和性（Ｋ_Ｄ）である、態様１～７５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７７．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、リンパ腫細胞の増殖レベルである、態様１～７５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７８．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、リンパ腫細胞における、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＩＳＧＦ３経路の活性化レベルである、態様１～７５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

７９．前記少なくとも１つの活性が、ＨＥＫ細胞における、ＳＥＡＰの産生レベルである、態様１～７５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

８０．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、対照のレベルと比較して、少なくとも２０倍低いことを特徴とする、態様１～７９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

８１．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、前記対照のレベルと比較して、少なくとも５０倍低いことを特徴とする、態様８０に記載のＡＣＣ。

８２．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２の少なくとも１つの活性が、前記対照のレベルと比較して、少なくとも１００倍低いことを特徴とする、態様８１に記載のＡＣＣ。

８３．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２活性が、前記対照のレベルと比較して、少なくとも５００倍低いことを特徴とする、態様８２に記載のＡＣＣ。

８４．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２の前記少なくとも１つの活性の前記対照のレベルが、前記ＡＣＣを前記プロテアーゼ（複数可）に曝露した後の、前記ＡＣＣの前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２の活性である、態様１～８３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

８５．前記少なくとも１つのＣＰ１及び／またはＣＰ２の前記対照のレベルが、対応する野生型成熟サイトカインの、対応するＣＰ１及び／またはＣＰ２活性である、態様１～８３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

８６．前記ＡＣＣが、前記プロテアーゼ（複数可）への曝露後に切断産物を生成することを特徴とし、前記切断産物が、前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２の前記少なくとも１つの活性を含む、態様１～８５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

８７．前記ＣＰ１及び／または前記ＣＰ２の前記少なくとも１つの活性が、抗増殖活性である、態様８６に記載のＡＣＣ。

８８．前記対照のレベルがＥＣ５０値であり、ＥＣ５０（対照のレベル）に対するＥＣ５０（切断産物）の比率が、約１０未満、または約９未満、または約８未満、または約７未満、または約６未満、または約５未満、または約４未満、または約３未満、または約２未満、または約１．５未満である、態様８７に記載のＡＣＣ。

８９．態様１～８８のいずれか１項またはいずれかの組み合わせに記載のＡＣＣを含む、組成物。

９０．薬学的組成物である、態様８９に記載の組成物。

９１．態様８９または９０に記載の組成物の、少なくとも１回の用量を含む、容器、バイアル、シリンジ、注射ペンまたはキット。

９２．治療を必要とする対象の治療方法であって、治療有効量の、態様１～８８のいずれか１項もしくは組み合わせに記載のＡＣＣ、または態様８９もしくは９０に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。

９３．前記対象が、がんを有すると特定または診断されている、態様９２に記載の方法。

９４．前記がんが、リンパ腫、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫、骨肉腫、グリア芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、Ｂ細胞新生物、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、脊髄形成異常性症候群（ＭＤＳ）、悪性皮膚Ｔ細胞リンパ腫、網膜芽細胞腫、膀胱癌、胃癌、尿路上皮癌、肺癌、大腸癌、腎細胞癌、胃及び食道癌、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、扁平上皮細胞頭頸部癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、肝癌、または肝細胞癌である、態様９３に記載の方法。

９５．前記リンパ腫が、バーキットリンパ腫である、態様９４に記載の方法。

９６．態様１～８８のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣの、前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１を含むポリペプチドをコードする核酸。

９７．前記ポリペプチドが、態様１～１６または態様２３～８８のいずれか１項または組み合わせに記載のＤＤ１をさらに含む、態様９６に記載の核酸。

９８．態様１～８８のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣの、前記ＣＰ２及び前記ＣＭ２を含むポリペプチドをコードする核酸。

９９．前記ポリペプチドが、態様１～１６または態様２３～８８のいずれか１項または組み合わせに記載のＤＤ２をさらに含む、態様９８に記載の核酸。

１００．態様９６～９９のいずれか１項または組み合わせに記載の核酸を含む、ベクター。

１０１．発現ベクターである、態様１００に記載のベクター。

１０２．態様９６～９９のいずれか１項もしくは組み合わせに記載の核酸、または態様１００もしくは１０１に記載のベクターを含む、細胞。

１０３．態様１～８８のいずれか１項または組み合わせに記載の、前記第１のモノマー構成体の前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１を含むポリペプチドと、前記第２のモノマー構成体の前記ＣＰ２及び前記ＣＭ２を含むポリペプチドと、を一緒になってコードする１対の核酸。

１０４．態様１０３に記載の１対の核酸を一緒になって含む、１対のベクター。

１０５．１対の発現ベクターである、態様１０４に記載の１対のベクター。

１０６．態様１０３に記載の１対の核酸、または態様１０４もしくは１０５に記載の１対のベクターを含む、細胞。

１０７．ＡＣＣを作製する方法であって、
態様１０２または１０６の細胞を、液体培地中で、前記ＡＣＣを作製するのに十分な条件下にて培養することと、
前記細胞または前記液体培地から前記ＡＣＣを回収することと、
を含む、前記方法。

１０８．前記細胞または前記液体培地から回収した前記ＡＣＣを単離することをさらに含む、態様１０７に記載の方法。

１０９．単離した前記ＡＣＣを薬学的組成物に調製することをさらに含む、態様１０８に記載の方法。

１１０．態様１０７に記載の方法によって作製されるＡＣＣ。

１１１．態様１１０に記載のＡＣＣを含む組成物。

１１２．薬学的組成物である、態様１１１に記載の組成物。

１１３．態様１１１または１１２に記載の組成物の、少なくとも１回の用量を含む、容器、バイアル、シリンジ、注射ペンまたはキット。

１１４．第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含む活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
（ｃ）前記第１のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、前記ＣＰ１、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１を含むポリペプチドであり、さらに、
（ｉ）前記第１のモノマー及び前記第２のモノマーのそれぞれが、２４個以下のアミノ酸を含む連結領域を含み、
（ｉｉ）前記ＣＰ１は成熟インターロイキンであり、
（ｄ）さらに、
（ｉ）前記第２のモノマー構成体は、前記第１のモノマー構成体と同一であり、
（ｉｉ）前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも１個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合され、
（ｉｉｉ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２は、１対のヒトＩｇＧのＦｃドメインであり、
（ｅ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が互いに結合し、それによって前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
（ｆ）前記ＡＣＣが、対応する対照インターロイキンと比較して、インターロイキン活性のレベルが低減していることを特徴とする、
前記活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）。

１１５．前記ＣＰ１が成熟ヒトインターロイキンである、態様１１４に記載のＡＣＣ。

１１６．前記成熟インターロイキンが、成熟ＩＬ－１５である、態様１１４～１１５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１１７．前記成熟インターロイキンが、ＩＬ－１５のトランケート形態である、態様１１４～１１６のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１１８．前記成熟インターロイキンが、配列番号１２９、配列番号３４７及び配列番号３４８からなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一である配列を含む、態様１１４～１１６のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１１９．前記成熟インターロイキンが、配列番号３４７の配列を含む、態様１１４～１１６のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２０．前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１が互いに直接的に隣接し、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１が互いに直接的に隣接し、前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２がそれぞれ１０個以下のアミノ酸、所望により７個以下のアミノ酸を含む、態様１１４～１１９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２１．前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２が、それぞれ独立して、ウロキナーゼ（ｕＰａ）及び／またはマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の基質として機能する、態様１１４～１２０のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２２．前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２が、それぞれ独立して、ウロキナーゼ（ｕＰａ）及び／またはＭＭＰ－１４の基質として機能する、態様１１４～１２１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２３．前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２がそれぞれ、配列番号１００と少なくとも８５％同一である配列を含む、態様１１４～１２２のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２４．前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２がそれぞれ、配列番号４１、配列番号６８、配列番号１００及びＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号３４９）からなる群から選択される配列を含む、態様１１４～１２３のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２５．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、１対のヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、または１対のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、態様１１４～１２４のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２６．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、ＥＵナンバリングによって番号をつけたとき、システイン２２６のＮ末端側でトランケートされた、１対のヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである、またはＥＵナンバリングによって番号をつけたとき、システイン２２６のＮ末端側でトランケートされた、１対のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、態様１２５に記載のＡＣＣ。

１２７．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、ＥＵナンバリングによって番号を付けたとき、Ｓ２２８Ｐの変異を含む、１対のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、態様１２５または１２６に記載のＡＣＣ。

１２８．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２がそれぞれ、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、態様１１４～１２７のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１２９．前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２がそれぞれ、配列番号３の配列を含む、態様１１４～１２８のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３０．前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも２個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合している、態様１１４～１２９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３１．前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも３個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合している、態様１１４～１３０のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３２．前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも４個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合している、態様１１４～１３１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３３．前記第１のモノマー構成体が、前記ＣＭ１のＮ末端に直接的に隣接するシグナル配列をさらに含む、態様１１４～１３２のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３４．前記シグナル配列が、配列番号３４５と少なくとも９５％同一である配列を含む、態様１３３に記載のＡＣＣ。

１３５．前記シグナル配列が、配列番号３４５の配列を含む、態様１３３に記載のＡＣＣ。

１３６．１８個以下のアミノ酸、または１２個以下のアミノ酸を含む連結領域を含む、態様１１４～１３５のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１３７．前記連結領域が、７～１２個のアミノ酸を含む、態様１３６に記載のＡＣＣ。

１３８．前記連結領域が、７個のアミノ酸を含む、態様１３６に記載のＡＣＣ。

１３９．インターロイキン活性が、対応する対照インターロイキンと比較して、少なくとも５００倍低いことを特徴とする、態様１１４～１３８のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１４０．前記ＣＰ１がインターロイキンであり、前記対照インターロイキンが組み換えインターロイキンである、態様１１４～１３９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１４１．前記ＣＰ１のＮ末端に位置付けられる、ペプチドマスク（ＰＭ１）及び開裂可能部分（ＣＭ３）をさらに含む、態様１１４～１３９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１４２．前記インターロイキン活性が、リンパ腫細胞における抗増殖活性である、態様１１４～１４１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１４３．前記インターロイキン活性が、インターロイキン反応性ＨＥＫ２９３細胞における分泌型胚性アルカリフォスファターゼ産生の誘発である、態様１１４～１４１のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１４４．前記ＣＭ１が基質として機能する前記プロテアーゼへの曝露後に、切断産物を生成することをさらに特徴とし、前記切断産物に対する前記対照インターロイキンのインターロイキン活性の比率が約２未満であり、前記対照インターロイキンが対応する組み換え野生型インターロイキンである、態様１１４～１４３のいずれかに記載のＡＣＣ。

１４５．前記切断産物のＥＣ５０が、前記対応する組み換え野生型インターロイキンのＥＣ５０とほぼ同一である、態様１４４に記載のＡＣＣ。

１４６．前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体がそれぞれ、配列番号３５０のアミノ酸２１－３５９及び配列番号３５１～３５６からなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一である配列を含む、態様１１４に記載のＡＣＣ。

１４７．前記ＡＣＣが、野生型インターロイキンと比較して、少なくとも２００倍低いインターロイキン活性を特徴とし、前記ＡＣＣがｕＰＡへの曝露後に切断産物を生成し、前記切断産物が、未処置ＡＣＣよりも少なくとも５０倍高いインターロイキン活性を有し、インターロイキン活性が、リンパ腫細胞中の抗増殖アッセイにおいて、またはインターロイキン反応性ＨＥＫ２９３細胞中の分泌型胚性アルカリフォスファターゼ産生誘発アッセイにおいて測定されることをさらに特徴とする、態様１４６に記載のＡＣＣ。

１４８．前記ＡＣＣが、組み換えヒトＩＬ－１５と比較して、インビボでより低い毒性を示す、態様１４６または１４７に記載のＡＣＣ。

１４９．第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含む活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ１）と、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２の成熟サイトカインタンパク質（ＣＰ２）と、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
（ｃ）前記第１のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、前記ＣＰ１、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１を含むポリペプチドであり、さらに、
（ｉ）前記ＡＣＣは、７～１０個のアミノ酸の連結領域（ＬＲ）を含み、
（ｉｉ）前記ＣＰ１は配列番号３４７と少なくとも８５％同一である配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＣＭ１は配列番号３４９と少なくとも８５％同一である配列を含み、
（ｄ）さらに、
（ｉ）前記第２のモノマー構成体は、前記第１のモノマー構成体と同一であり、
（ｉｉ）前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも１個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合され、
（ｉｉｉ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２は、１対のヒトＩｇＧのＦｃドメインであり、
（ｅ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が互いに結合し、それによって前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
（ｆ）前記ＡＣＣが、組み換えヒトＩＬ－１５のＩＬ－１５活性と比較して、ＩＬ－１５活性のレベルが低減していることを特徴とする、
前記活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）。

１５０．態様１１４～１４９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣを含む、組成物。

１５１．薬学的組成物である、態様１５０に記載の組成物。

１５２．態様１５０または１５１に記載の組成物の、少なくとも１回の用量を含む、容器、バイアル、シリンジ、注射ペンまたはキット。

１５３．治療を必要とする対象の治療方法であって、治療有効量の、態様１１４～１４９のいずれか１項もしくは組み合わせに記載のＡＣＣ、または態様１５０もしくは１５１に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。

１５４．前記対象が、がんを有すると特定または診断されている、態様１５３に記載の方法。

１５５．態様１１４～１４９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣの、前記第１のモノマーを含むポリペプチドをコードする核酸。

１５６．態様１５５に記載の核酸を含むベクター。

１５７．発現ベクターである、態様１５６に記載のベクター。

１５８．態様１５５に記載の核酸、または態様１５６もしくは１５７に記載のベクターを含む、哺乳動物細胞。

１５９．ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞である、態様１５８に記載の哺乳動物細胞。

１６０．ＡＣＣを製造する方法であって、
ａ．態様１５８または１５９に記載の哺乳動物細胞中に前記ＡＣＣを発現させることと、
ｂ．前記発現されたＡＣＣを精製することと、
を含む、前記方法。

１６１．前記ＣＭ１が、腫瘍組織中に過剰発現するプロテアーゼの基質として機能する、態様１１４～１４９のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。

１６２．前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体がそれぞれ、配列番号３５６と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である配列を含む、態様１１４に記載のＡＣＣ。

１６３．前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が同一であり、配列番号３５６をそれぞれ含む、態様１６２に記載のＡＣＣ。

１６４．態様１６２または１６３に記載のＡＣＣを含む、組成物。

１６５．薬学的組成物である、態様１６４に記載の組成物。

１６６．態様１６５に記載の組成物の、少なくとも１回の用量を含む、容器、バイアル、シリンジ、注射ペンまたはキット。

１６７．治療を必要とする対象の治療方法であって、治療有効量の、態様１６２に記載のＡＣＣまたは態様１６５に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。

１６８．前記対象が、がんを有すると特定または診断されている、態様１６７に記載の方法。

１６９．態様１６２または１６３に記載のＡＣＣの、前記第１のモノマーを含むポリペプチドをコードする核酸。

１７０．態様１６９に記載の核酸を含む、ベクター。

１７１．発現ベクターである、態様１７０に記載のベクター。

１７２．態様１６９に記載の核酸、または態様１７０もしくは１７１に記載のベクターを含む、哺乳動物細胞。

１７３．ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞である、態様１７２に記載の哺乳動物細胞。

１７４．ＡＣＣを製造する方法であって、
ａ）態様１７２または１７３に記載の哺乳動物細胞中に前記ＡＣＣを発現させることと、
ｂ）前記発現されたＡＣＣを精製することと、
を含む、前記方法。

本発明を以下の実施例においてさらに説明するが、これらは特許請求の範囲に記載された本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１：活性化可能サイトカイン構成体の製造
活性化可能サイトカイン構成体ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４を、組み換え法によって調製した。このＡＣＣの第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は同一であり、それぞれ配列番号３０９に従うアミノ酸配列を有するポリペプチドであった。第１の及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端に、マウスＩｇＧカッパシグナル配列からのシグナル配列（配列番号３０９の残基１－２０）と、ヒトインターフェロンα－２ｂ（配列番号１）に相当する成熟サイトカインタンパク質と、配列番号９９のアミノ酸配列を有する開裂可能部分と、アミノ酸配列ＧＧＧＳ（配列番号２）を有するリンカーと、ヒトＩｇＧＦｃ（配列番号４）に相当するＤＤと、を含む。宿主細胞を、配列番号３１０の配列を有するポリヌクレオチドで形質転換し、その後、得られた組み換え宿主細胞を培養することによって、上記ポリペプチドを調製した。得られた発現ポリペプチドの二量体化によって、活性化可能サイトカイン構成体ＩＦＮ－α２ｂ１２０４ＤＮＩｄｌｈＩｇＧ４を得た。

また活性化可能サイトカイン構成体ＩＦＮ－α－２ｂ１４９０ＤＮＩ－ｈＩｇＧ４も、組み換え法によって調製した。このＡＣＣの第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体も同一であり、それぞれ配列番号３１１に従うアミノ酸配列を有するポリペプチドであった。このＡＣＣの第１の及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端に、マウスＩｇＧカッパシグナル配列からのシグナル配列（配列番号３０９の残基１－２０）と、ヒトインターフェロンα－２ｂ（配列番号１）に相当する成熟サイトカインタンパク質と、配列番号６８のアミノ酸配列を有する開裂可能部分と、アミノ酸配列ＧＧＧＳ（配列番号２）を有するリンカーと、ヒトＩｇＧＦｃ（配列番号４）に相当するＤＤと、を含む。宿主細胞を、配列番号３１２の配列を有するポリヌクレオチドで形質転換し、その後、得られた組み換え宿主細胞を培養することによって、上記ポリペプチドを調製した。得られた発現ポリペプチドの二量体化によって、活性化可能サイトカイン構成体ＩＦＮ－α－２ｂ１４９０ＤＮＩ－ｈＩｇＧ４を得た。

さらなる活性化可能サイトカイン構成体を調製し、これはリンカーに追加の５個のアミノ酸残基を含有した。

活性化可能サイトカイン構成体及びプロテアーゼ処置活性化可能サイトカイン構成体に、電気泳動を実施した。図１５は、電気泳動のゲルを示し、これは、（１）ＡＣＣＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４（「１２０４」）；（２）ＭＴ－ＳＰ１処置ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４（「１２０４ＭＴ－ＳＰ１」）；（３）ｕＰＡ処置ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４（「１２０４ｕＰＡ」）；（４）リンカーに５個のアミノ酸残基が追加されたＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４（「１２０４＋１」）；（５）ＭＴ－ＳＰ１処置ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４（「１２０４＋１ＭＴ－ＳＰ１」）；（６）ｕＰＡ処置ＩＦＮ－α２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４（「１２０４＋１ｕＰＡ」）；（７）ＩＦＮ－α－２ｂ１４９０ＤＮＩ－ｈＩｇＧ４（「１４９０」）；（８）ＭＴ－ＳＰ１処置ＩＦＮ－α－２ｂ１４９０ＤＮＩ－ｈＩｇＧ４（「１４９０ＭＴ－ＳＰ１」）；及び（９）ｕＰＡ処置ＩＦＮ－α－２ｂ１４９０ＤＮＩ－ｈＩｇＧ４（「１４９０ｕＰＡ」）の結果（左から右に）を示す。結果は、プロテアーゼが、活性化可能サイトカイン構成体内の開裂可能部分の切断に有効であったことを示唆している。

実施例２：活性化可能サイトカイン構成体のＩＦＮ－α－２ｂ活性
ヒトＩ型インターフェロンの細胞系レポーターアッセイを用いて、実施例１に記載されるＡＣＣの活性を試験した。

ＩＦＮ反応性ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトＳＴＡＴ２遺伝子及びＩＲＦ９遺伝子を用いた安定な形質移入によって作製し、完全に活性なＩ型ＩＦＮシグナル伝達経路を得た。この細胞は、ＩＦＮα／β誘発性ＩＳＧ５４プロモータの制御下での誘発性ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリフォスファターゼ）レポーター遺伝子も特徴である。導入遺伝子発現を維持するために、細胞を、１０％のＦＢＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、３０μｇ／ｍＬのブラストサイジン、１００μｇ／ｍｌのゼオシン（ｚｅｏｃｉｎ）及び１００μｇ／ｍＬのノルモシン（ｎｏｒｍｏｃｉｎ）を補充したＤＭＥＭＧｌｕｔａＭａｘ培地において培養した。これらの細胞にＩ型ＩＦＮを添加すると、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＩＳＧＦ３経路が活性化され、その後に、上清中で、アルカリフォスファターゼ活性の比色検出法であるＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅ溶液を使用してすぐに評価できるＳＥＡＰ産生が誘発される。このレポーターアッセイを用いて、ＩＦＮα－２ｂ含有ＡＣＣの活性を、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）（ペグインターフェロンα－２ｂ）の活性と比較した。図１６のデータは、ＡＣＣのＩＦＮα－２ｂ活性が、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）（ペグインターフェロンα－２ｂ）のＩＦＮα－２ｂ活性と比較して、有意に低下したことを示す。

さらに、図７Ａ及び図７Ｂのデータは、リンカーまたは連結領域の長さを変化させることによって、（切断されていない）ＡＣＣの活性が調節され得ることを示している。図７Ａ～図７Ｂのデータは、ＨＥＫ２９３レポーターアッセイで試験した、ＩＦＮａ－２ｂとｈＩｇＧ４Ｆｃとの間に、さまざまなリンカーの長さを有する、またはリンカーを持たないＩＦＮａ－２ｂ－ｈＩｇＧ４Ｆｃ融合構成体の結果を示す。この実験で試験した融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端の方向で、成熟ＩＦＮα－２ｂサイトカイン配列、任意選択的リンカー及び／または開裂可能部分、ならびに配列番号４のヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン（Ｆｃ配列のＮ末端がアミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ…から開始するように、完全なヒンジ領域を含む）を含有する。第１の構成体（連結領域＝７）は、リンカーまたは開裂可能部分を有せず、その配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１、それが縮合する配列番号４からなる。第２の構成体（連結領域＝１２）は、５アミノ酸リンカーＳＧＧＧＧ（配列番号３３５）を有し、その配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１、それが縮合する配列番号３３５、それが縮合する配列番号４からなる。第３の構成体（連結領域＝１８）は、７アミノ酸ＣＭ（ＳＧＲＳＤＮＩ）及び４アミノ酸リンカーＧＧＧＳを含有し、その配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１、それが縮合する配列番号１００、それが縮合する配列番号２、それが縮合する配列番号４からなる。第４の構成体（連結領域＝２３）は、５アミノ酸リンカー、７アミノ酸ＣＭ及び４アミノ酸リンカーを含有し、その配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１、それが縮合する配列番号３３５、それが縮合する配列番号１００、それが縮合する配列番号２、それが縮合する配列番号４からなる。第５の構成体（連結領域＝２４）は、１３アミノ酸ＣＭ（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ）及び４アミノ酸リンカーを含有し、その配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１、それが縮合する配列番号６８、それが縮合する配列番号２、それが縮合する配列番号４からなる。

実施例３：プロテアーゼ処置ＡＣＣの活性
プロテアーゼ処置ＩＦＮα－２ｂ含有ＡＣＣを、Ｄａｕｄｉリンパ球細胞において、及び細胞系レポーターアッセイにおいて、抗増殖反応について試験し、活性が回復し得るかを決定した。

二量体化しているドメインを切断するために、ＩＦＮα－２ｂ含有ＡＣＣを、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ（ｕＰＡ）またはマトリプターゼ（ＭＴ－ＳＰ１）などの組み換えヒトプロテアーゼによって、３７℃で一晩処置した。実施例２及び実施例３に記載されている活性の試験前に、プロテアーゼ阻害剤カクテルを添加して、プロテアーゼを中和した。これらのアッセイからの結果は、ＩＦＮα－２ｂ含有ＡＣＣをプロテアーゼで処置することにより、活性が、組み換えサイトカインと同等のレベルに回復し得ることを示している。ＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４、ＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４＋ｕＰＡ、及び幹細胞ＩＦＮα－２ｂ（ヒト組み換えＩＦＮ－α２ｂ、ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃７８０７７．１から入手可能）のＥＣ５０値をＤａｕｄｉアポトーシスアッセイの結果から算出し、以下の表３に提供する。

ＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４、ＡＣＣＩＦＮα－２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４＋ｕＰＡ、及び幹細胞ＩＦＮα－２ｂのＥＣ５０値をＩＦＮα／βアッセイの結果から算出し、以下の表４に提供する。

これらの結果は、活性化プロテアーゼの存在なしでは、ＩＦＮα－２ｂ－１２０４ＤＮＩｄｌ－ｈＩｇＧ４の活性は、ＩＦＮα－２ｂ対照と比較して有意に低いことを示している。

実施例４：ＡＣＣの活性のインビボ忍容性
ヒトＩＦＮα－２ｂはハムスターＩＦＮα受容体と交差反応し、ハムスターにおいて活性であることが以前から示されている（Ａｌｔｒｏｃｋｅｔａｌ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８６）。ＩＦＮα－２ｂ含有ＡＣＣＰｒｏＣ４４０の忍容性を評価するために、０．４ｍｇ／ｋｇの開始用量で、ゴールデンシリアンハムスターに投薬した。動物は、１回分の用量の試験物質を与えられ、許容されない毒性（ＤＬＴは用量制限毒性を意味する）が確認されない限り、投薬後最大７日まで試験を継続した。開始用量（０．４ｍｇ／ｋｇ（「ｍｐｋ」））は、ＩＦＮα対照（組み換えインターフェロンα、すなわちＡｍｇｅｎによって、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）の名称で製造される天然に存在しないＩ型インターフェロン）が、ハムスター（１２５ｇ）において、体重低下、食物消費量の低下、及び骨髄抑制を誘発すると予想される用量と等しい用量を示す。（カニクイザル（ｃｙｎｏ）では、０．１ｍｇ／ｋｇ／日のＩＦＮα対照が、体重低下、食物消費量の低下、及び骨髄抑制と関連付けられた（１２５ｇのハムスターの、１．２５～２．５×１０＾７Ｕに等しい））。開始用量が許容された場合、動物は、２ｍｇ／ｋｇの「中用量」に移され、許容される限り、３回分の用量の試験物質を与えられた。許容された場合、動物は、１０ｍｇ／ｋｇの「高用量」に移され、許容される限り、３回分の用量の試験物質を与えられた。許容された場合、動物は、１５ｍｇ／ｋｇの「より高用量」に移された。各段階で試験用量が許容されなかった場合は、動物は、一段階低い用量に移された。開始用量が許容されなかった場合は、動物は、０．０８ｍｇ／ｋｇの「より低用量」に移された。動物に、Ｎ末端からＣ末端にＤＤ－ＣＭ－ＣＰ二量体の構造を有するＡＣＣ（ＰｒｏＣ２８６）を投薬した。陰性対照として、動物にヒトＩｇＧ４を投与した。予想通り、陰性対照は、動物にいかなる毒性も誘発しなかった。

ＰｒｏＣ２８６（ＣｈＩｇＧ４５ＡＡ１２０４ＤＮＩｄＬＩＦＮａ２ｂ）も、組み換え法によって調製した。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は同一であり、それぞれが配列番号３２０のアミノ酸配列、及びそのＮ末端におけるシグナル配列を有するポリペプチドであった。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端で、シグナル配列、ヒトＩｇＧＦｃ（配列番号３）に相当する二量体化ドメイン、リンカー（配列番号３２１）、配列番号１００のアミノ酸配列を有する開裂可能部分、リンカー（配列番号２）、及びヒトインターフェロンα－２ｂ（配列番号１）に相当する成熟サイトカインタンパク質を含む。

ＰｒｏＣ２９１（ＮｈＩｇＧ４５ＡＡ１２０４ＤＮＩｄＬＩＦＮａ２ｂ）も、組み換え法によって調製した。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は、同一であった。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端で、ヒトインターフェロンα－２ｂ（配列番号１）に相当する成熟サイトカインタンパク質、リンカー（配列番号３２１）、ＣＭ（配列番号１００）、リンカー（ＧＧＧＳ）（配列番号２）、及び完全なヒンジ配列を含有するヒトＩｇＧ４のＦｃ領域（配列番号４）を含む。

ＰｒｏＣ２８６及びＰｒｏＣ２９１の活性を、Ｄａｕｄｉアポトーシスアッセイにおいて、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）（ＰＥＧ－ＩＦＮ－α２ｂ）の活性と比較した（図１７Ａ～図１７Ｂ）。このアッセイでは、ＰｒｏＣ２８６及びＳｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）は、図１７Ａに示すように、同様レベルの活性を示した。これは、ＰｒｏＣ２８６が、購入可能なペグ化ＩＦＮ－α２ｂと同様の活性を有し、ハムスター試験においてＩＦＮα－２ｂの忍容性を評価するための、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）対照の代用物として用いられ得ることを示している。ＰｒｏＣ２９１は、ＰｒｏＣ２８６及びＳｙｌａｔｒｏｎ（登録商標）と比較して活性の低下を示し、これは、ＦｃのＮ末端側のＩＦＮの構造的方向性が、活性の低減のために重要であったことを示している。つまり、ＤＤが１対のＦｃドメインである場合、サイトカインをＤＤのＮ末端側へ置くこと（ＰｒｏＣ２９１における様な）で、サイトカインがＤＤのＣ末端側へ置かれる（ＰｒｏＣ２８６における様な）よりも、サイトカイン活性のより大きな低減が提供され得る。

１日目に、動物に０．４ｍｇ／ｋｇの開始用量を投与した。非許容用量（ＤＬＴ）に達しない限り、動物での試験を１週間継続した。投与前、及び投与後６時間、２４時間、７２時間、及び７日目に、動物ごとに臨床的観察、体重及び体温測定を行った。血液学分析及び化学分析のための血液試料を、投与後７２時間、７日目に、動物ごとに収集した。血液学分析及び化学分析は、試料採取の直後に行った。血液学分析として、血液塗抹標本、白血球百分率、ヘマトクリット、ヘモグロビン、平均赤血球ヘモグロビン量、平均赤血球容積、血小板数、赤血球数、赤血球分配幅、網状赤血球数及び白血球数を評価した。臨床的化学パネルには、アラニンアミノ基転移酵素、アルブミン、アルブミン／グロブリン比、アルカリフォスファターゼ、アスパラギン酸アミノ基転移酵素、カルシウム、塩化物、コレステロール、クレアチンキナーゼ、クレアチン、γ‐グルタミルトランスフェラーゼ、グロブリン、グルコース、無機リン、カリウム、ナトリウム、総ビリルビン、総タンパク質、トリグリセリド、尿素、窒素及びＣ反応性タンパク質の測定が含まれた。忍容性試験における毒性の根拠を、図１８～図２０にまとめる。

全体として、マスクされていないＰｒｏＣ２８６構成体を投薬した動物は、２ｍｐｋで投薬したときは、平均５％の体重低下、及び１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋで投薬したときは、１５％の体重低下を示した（図１８）。ＰｒｏＣ２８６を１５ｍｐｋで投薬した１匹の動物は、投与７日後（試験終了時）に２０％の体重低下を示した。これは、許容できない用量とみなされる。これに対して、ＰｒｏＣ４４０を２ｍｐｋ及び１０ｍｐｋで投薬した動物は、体重低下を示さなかった。

ＰｒｏＣ４４０を１５ｍｐｋで投薬した動物は、平均５％の体重低下を示した（図１８）。これは、Ｎ末端から開始する、ＣＰ－ＣＭ－ＤＤの二量体化構造を有する本開示のＡＣＣが、ＩＦＮα－２ｂに媒介される体重低下を予想外に制限することを示している。理論に拘束されることを望むものではないが、ＤＤのＮ末端にインターフェロンを置くこと、及び比較的短いＬＲを用いることが、ＰｒｏＣ４４０に関してサイトカイン活性を阻害し、ペグ化ＩＦＮα－２ｂ（Ｓｙｌａｔｒｏｎ（登録商標））またはＰｒｏＣ２８６と比較して、インターフェロンの毒性を低下させると考えられる。

臨床的化学に関しては、ＰｒｏＣ２８６を投薬した動物は、全ての用量（０．４ｍｐｋ、２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋ）で、投与７日後（試験終了時）に、アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）の有意な上昇を示した（図１９）。動物に、１０ｍｐｋまたは１５ｍｐｋのＰｒｏＣ４４０を投薬したときは、ＡＬＰの有意な上昇は測定されなかった（図１９）。ＡＬＴの上昇は、肝臓毒性のマーカーである。ＩＦＮα－２ｂは、肝臓毒性を生じさせることが示されている。これは、Ｎ末端から開始する、ＣＰ－ＣＭ－ＤＤの二量体化構造を有する本開示のＡＣＣが、ＩＦＮａ－２ｂに媒介される肝臓毒性を予想外に制限することを示している。

血液学に関しては、投与３日後及び投与７日後（試験終了時）、ＰｒｏＣ２８６を２ｍｐｋ、１０ｍｐｋ及び１５ｍｐｋで投薬した動物は、網状赤血球数、好中球数及び白血球細胞（ＷＢＣ）数の有意な低下を示した（図２０）。これらの低下は、ＩＦＮａ－２ｂに媒介される骨髄毒性を連想させる。投与３日後、ＰｒｏＣ４４０を投薬した動物は、網状赤血球数、好中球数及び白血球細胞（ＷＢＣ）数の低下を示した（図２０）。全体として、ＰｒｏＣ４４０を投薬した動物で観察された造血細胞の低下レベルは、ＰｒｏＣ２８６を投薬した動物で観察される低下レベルほど重大ではない。投与７日後（試験終了時）に、ＰｒｏＣ４４０を投薬した動物では、網状赤血球数、好中球数及び白血球細胞（ＷＢＣ）数の全体的なレベルは、正常レベル、または陰性対照ＩｇＧ４を投薬した動物で観察されたものと同様のレベルに戻っている（図２０）。ＰｒｏＣ２８６を投薬した動物では、網状赤血球数、好中球数及び白血球細胞（ＷＢＣ）数のレベルは低いままである。これは、Ｎ末端から開始する、ＣＰ－ＣＭ－ＤＤの二量体化構造を有する本開示のＡＣＣが、ＩＦＮａ－２ｂに媒介される骨髄毒性を予想外に制限することを示している。

実施例５：さらなるＩＦＮａ－２ｂサイトカイン構成体のインビトロ特性評価
ＩＦＮａ－２ｂを含む、さらなる活性化可能サイトカイン構成体も、組み換え法によって調製した。これらのＡＣＣの第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は、同一であった。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端で、マウスＩｇＧカッパシグナル配列からのシグナル配列（配列番号３０９の残基１－２０）、ヒトインターフェロンα－２ｂ（配列番号１）に相当する成熟サイトカインタンパク質、配列番号１００のアミノ酸配列を有する開裂可能部分（ＣＭ）、及びヒトＩｇＧ４Ｓ２２８ＰＦｃ（配列番号３を含む）に相当する二量体化ドメインを含む。さらに、これらのＡＣＣは、ＣＰとＣＭとの間に、アミノ酸配列ＳＧＧＧＧ（配列番号３３５）を有するリンカーを含有する、または含有しない。これらのＡＣＣは、ＣＭとＤＤとの間に、アミノ酸配列ＧＧＧＳ（配列番号２）を有するリンカーを含有する、または含有しない。これらのＡＣＣはまた、システイン２２６のＮ末端側である、ＤＤのヒンジの一部を含有する、または含有しない。これらのさらなる活性化可能サイトカイン構成体を表６に記載する（配列番号３３６～３４２及び配列番号３１３を参照）。

柔軟なリンカーがなく、Ｃｙｓ２２６までトランケートされたＦｃ領域を有するＡＣＣである、ＰｒｏＣ４４０の活性と、さまざまなリンカー及びＦｃ領域配列を含有するさらなるＡＣＣの活性とを、上述したように、ＩＦＮ反応性ＨＥＫ２９３細胞及びＤａｕｄｉ細胞を使用して、インビトロで試験した。両方のアッセイにおいて、ＰｒｏＣ４４０の活性（例えば、抗増殖作用）は、サイトカインと、対応する第２のモノマーにＤＤを結合させる最初のアミノ酸（すなわち、Ｃｙｓ２２６）との間に、各種の追加の配列を含有する、他の全てのＡＣＣと比較して低下した。ＡＣＣのＥＣ５０値を、ＩＦＮα／βアッセイの結果から計算し、以下の表７に提供する。

ＡＣＣのＥＣ５０値を、Ｄａｕｄｉアポトーシスアッセイの結果から計算し、以下の表８に提供する。

表７～表８のデータはまた、サイトカインとＤＤのＣｙｓ２２６との間のアミノ酸配列の長さを変化させることによって、（切断されていない）ＡＣＣの活性を調節できることを示している。

理論に拘束されることを望むものではないが、本明細書で提示された結果に基づいて、本発明者らは、ＤＤのＮ末端側にサイトカインを置くこと及び比較的短いＬＲを使用することで、前述の特定の実施例において例示されたインターフェロン－αサイトカインに加えて、サイトカインのサイトカイン活性を阻害すると想定している。

実施例６：ＩＬ－１５サイトカイン構成体例のインビトロ特性評価
ヒトＩＬ－１５含有活性化可能サイトカイン構成体（ＰｒｏＣ１４７１）を、組み換え法によって作製した。ＰｒｏＣ１４７１の第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は同一であり、それぞれが配列番号３５０のアミノ酸配列、及びそのＮ末端におけるシグナル配列を有するポリペプチドであった。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端で、マウスＩｇＧカッパシグナル配列からのシグナル配列（配列番号３０９の残基１－２０）、ヒトＩＬ－１５アミノ酸残基４９－１６１（配列番号３４７）に相当する成熟サイトカインタンパク質、配列番号１００のアミノ酸配列を有する開裂可能部分、及びＣｙｓ２２６（ＥＵナンバリングに準拠する）でトランケートされ、Ｓ２２８Ｐの変異を含有するヒトＩｇＧ４のＦｃ（配列番号３）に相当する二量体化ドメインを含む（図３）。シグナル配列を含有する、ＰｒｏＣ１４７１の完全なモノマー構成体配列を、配列番号３５０に示す。このモノマー構成体の連結領域（ＬＲ）は、７アミノ酸の長さである。

宿主細胞を、配列番号３５７の配列を有するポリヌクレオチドで形質転換し、その後、得られた組み換え宿主細胞を培養することによって、上記ポリペプチドを調製した。得られた発現ポリペプチドの二量体化によって、サイトカイン構成体ＰｒｏＣ１４７１が産生された。

ＰｒｏＣ１４７１の活性を、ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞を使用して、インビトロで試験した（図４及び図６参照）。ヒトＪＡＫ３及びＳＴＡＴ５遺伝子とともに、ヒトＣＤ２５（ＩＬ－２Ｒα）、ＣＤ１２２（ＩＬ－２Ｒβ）及びＣＤ１３２（ＩＬ－２Ｒγ）遺伝子を用いて、安定な形質移入によってＩＬ－２／ＩＬ１５反応性ＨＥＫ２９３細胞を作製し、完全に機能的なＩＬ－２／ＩＬ－１５シグナル伝達経路を得た。この細胞は、ＳＴＡＴ５誘発性ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリフォスファターゼ）レポーター遺伝子も特徴である。導入遺伝子発現を維持するために、細胞を、１０％のＦＢＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、１０ｕｇ／ｍｌのピューロマイシン及び１００μｇ／ｍＬのＮｏｒｍｏｃｉｎを補充したＤＭＥＭＧｌｕｔａＭａｘ培地において培養した。これらの細胞にＩＬ－２及びＩＬ－１５を添加すると、ＳＴＡＴ５が活性化され、その後に、上清中で、アルカリフォスファターゼ活性の比色検出法であるＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ溶液を使用してすぐに評価できるＳＥＡＰ産生が誘発される。

ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞を、２８０，０００細胞／ｍＬの濃度で、１０％のＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地において調製し、１８０μＬのアリコートを、ピペットで白色の平底９６穴プレートのウェル（５０，０００細胞／ウェル）へと取った。試験するサイトカインを、１０％のＦＢＳを補充したＤＭＥＭ培地において希釈した。２検体の３倍段階希釈を調製し、そこから２０μＬを各ウェルに添加した。３７℃での２０～２４時間のインキュベーション後、誘発されたレポーター細胞の上清２０μｌを、平底９６穴プレートのウェルに移した。ウェル当たり１８０μｌの再懸濁ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ溶液を添加した。３７℃のインキュベータでプレートを１～３時間インキュベーションした後、６２０ｎｍで分光光度計を使用して、ＳＥＡＰレベルを測定した。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いたＳ字状フィットの非線形回帰によって、用量反応曲線を作成し、ＥＣ５０値を得た。

レポーターアッセイにおいて、ＰｒｏＣ１４７１の活性は、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈＩＬ－１５（組み換えヒトＩＬ－１５、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、カタログ＃２００－１５から入手可能）と比較して、少なくとも２５０倍低減した（図４）。これは、ヒトＩｇＧのＦｃに相当する、開裂可能な二量体化ドメインの融合が、ＡＣＣ構成体のＩＬ－１５に対する立体化学的マスキングを提供したことを示している。

実施例７：プロテアーゼ処置ＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性
プロテアーゼ処置ＩＬ－１５含有ＡＣＣを、レポーターアッセイで試験して、インターロイキン活性が回復し得るかを決定した。二量体化しているドメインを切断するために、ＩＬ－１５含有ＡＣＣを、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ（ｕＰＡ）またはマトリプターゼ（ＭＴ－ＳＰ１）などの組み換えヒトプロテアーゼによって、３７℃で一晩処置した。ｕＰａを用いた、開裂可能部分における予想される部位での開裂を、電気泳動によって確認した（図５）。結果は、ｕＰａプロテアーゼが、ＰｒｏＣ１４７１の開裂可能部分（ＣＭ）を切断し得ることを示唆している。ｕＰａを用いたプロテアーゼ活性化によって、ＰｒｏＣ１４７１の活性が、組み換えＩＬ－１５に近いが、組み換えＩＬ－１５よりも低いレベルまで、部分的に回復した（図６）。ＰｒｏＣ１４７１、ＰｒｏＣ１４７１＋ｕＰＡ及びＰｅｐｒｏＴｅｃｈＩＬ－１５のＥＣ５０値を、ＩＬ－１５レポーターアッセイの結果から計算し、以下の表９に提供する。したがって、ｕＰａプロテアーゼによるＡＣＣの活性化は、無処置ＡＣＣよりも約６４倍高いＩＬ－１５活性となった。ＥＣ５０（野生型対照レベル）に対する、ｕＰａによって活性化されたときのＰｒｏＣ１４７１のＥＣ５０（切断産物）の比率は、約６（９．０４６／１．４８＝６．１１）であり、これは、プロテアーゼ活性化後のＩＬ－１５活性の良好な回復を示している。

実施例８：さらなるＩＬ－１５サイトカイン構成体の設計
さらなる活性化可能サイトカイン構成体、ＰｒｏＣ１８７４、ＰｒｏＣ１８７５、ＰｒｏＣ１８７６、ＰｒｏＣ１８７７、ＰｒｏＣ１８７８及びＰｒｏＣ１８７９も、組み換え法によって調製した。これらのＡＣＣの第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体は同一であった。第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体のそれぞれは、Ｎ末端からＣ末端で、マウスＩｇＧカッパシグナル配列からのシグナル配列（配列番号３０９の残基１－２０）、ヒトＩＬ－１５アミノ酸残基４９－１６２（配列番号３４８）に相当する成熟サイトカインタンパク質、開裂可能部分（ＣＭ）、及びＣｙｓ２２６（ＥＵナンバリングに準拠する）でトランケートされ、Ｓ２２８Ｐの変異を含有するヒトＩｇＧ４のＦｃ（配列番号３）に相当する二量体化ドメインを含む。さらに、これらのＡＣＣは、サイトカインとＣＭとの間に、下記の表１０に示すアミノ酸配列を有するリンカーを含有する、または含有しない。これらのさらなる活性化可能サイトカイン構成体について表１０に記載し、これらの構成体の完全なアミノ酸配列を表１４に提供する（配列番号３５１～３５６参照）。

実施例９：さらなるＩＬ－１５含有ＡＣＣの特性評価
ＩＬ－１５含有ＡＣＣである、ＰｒｏＣ１４７１、ＰｒｏＣ１８７６及びＰｒｏＣ１８７９を、組み換えｕＰＡによって、３７℃で一晩処置した。ｕＰａを用いた、開裂可能部分における予想される部位での開裂を、電気泳動によって確認した（図２１Ａ）。ＨＥＫ２９３レポーターアッセイでは、無処置の及びプロテアーゼ処置したＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性を特性評価する（図２１Ｂ）。表１１は、複数の実験（ｎ＞３）からの、ＩＬ－１５含有ＡＣＣの平均ＥＣ５０値を示す。ｕＰａプロテアーゼによるＡＣＣの活性化は、無処置ＡＣＣよりも約４９倍～１０４倍高いＩＬ－１５活性となった。

実施例１０：ヒトＰＢＭＣ増殖へのＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性
細胞増殖アッセイにおいて、ヒトＰＢＭＣを、組み換えＩＬ－１５またはＩＬ－１５－ＡＣＣ（事前のプロテアーゼ活性化とともに、またはそれなしで）とともに、３日間インキュベートした。インキュベーション後に、ＰＢＭＣを、固定可能生存率解析色素ｅＦｌｕｒ（商標）７８０、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＵＣＨＴＩ）抗体、抗ＣＤ４－ＢＶ６０８（ＲＰＡ－Ｔ４）抗体、抗ＣＤ８－ＢＶ４８０（ＲＰＡ－Ｔ８）抗体、抗ＣＤ５６－ＢＶ４２１（ＨＣＤ５６）抗体、及び抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ６７）抗体で染色した。図２２に示すように、ＣＤ３－、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞を含む各種の細胞集団を分析し、Ｋｉ６７発現のパーセンテージを基準として、各種の細胞集団の増殖を決定した。プロテアーゼ処置したＩＬ－１５－ＡＣＣは、対応する無処置ＩＬ－１５含有ＡＣＣよりも、より高い増殖活性を示す。表１２は、ＰＢＭＣ増殖アッセイにおける、各種のＩＬ－１５含有ＡＣＣのＥＣ５０を示す。

実施例１１：ヒトＰＢＭＣＳＴＡＴ５リン酸化へのＩＬ－１５含有ＡＣＣの活性
ＩＬ－１５がＩＬ－１５Ｒに結合すると、ＳＴＡＴ５のリン酸化と、後続のＮＫ細胞及びＴ細胞の増殖とが駆動される。ＳＴＡＴ５リン酸化アッセイでは、最初に、ヒトＰＢＭＣを、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＵＣＨＴＩ）抗体、抗ＣＤ４－ＢＶ６０８（ＲＰＡ－Ｔ４）抗体、抗ＣＤ８－ＢＶ４８０（ＲＰＡ－Ｔ８）抗体、抗ＣＤ５６－ＢＶ４２１（ＨＣＤ５６）抗体によって、室温で３０分間染色した。表面染色の後、細胞を、１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地中で、３７℃で２０分間、各種のＩＬ－１５試験物質によって刺激した。直ちに細胞を、予め温めた固定液によって、３７℃で１０～１２分間固定し、洗浄し、予め冷却した（－２０℃）９０％のメタノールとともに、４℃で３０分間インキュベートした。固定及び透過化処理後、細胞を再び洗浄し、抗ｐＳＴＡＴ５－Ａｌｅｘａ６４７（ｐＹ６８７）によって染色した。ＣＤ３－、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞を含む各種の細胞集団を分析し、各種の細胞集団におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を、ｐＳＴＡＴ５陽性細胞のパーセンテージとして決定した（図２３）。各種の細胞集団への、ＩＬ１５－ＡＣＣのＳＴＡＴ５リン酸化のＥＣ５０を表１３にまとめた。

上述のように、本明細書に記載される発明は、本明細書で議論されるさまざまなサイトカインタンパク質を含む活性化可能サイトカイン構成体を包含する。非限定例として、本発明のＡＣＣに用いられるＣＰは、配列番号１１１～１４０、１４３～１４６、１５１～１６０、及び３４７～３４８に列挙されるうちのいずれか、及びそれらの変異体であってよい。特に、単量体サイトカインは、本明細書に記載されるＡＣＣにおける使用に好適である。本明細書において提供される結果に基づいて、本発明のＡＣＣは、対応する野生型サイトカインと比較して、サイトカイン活性の低下を示すこととなり、関連したプロテアーゼ（複数可）によるＡＣＣの開裂に際し、切断産物は、対応する野生型サイトカインのサイトカイン活性に類似したサイトカイン活性を取り戻すことになると考えられる。

他の実施形態
本発明を上記の発明を実施するための形態に関連して説明してきたが、前述の説明は例示を意図しており、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されることを理解されたい。他の態様、利点及び修正は、以下の特許請求の範囲に含まれる。

Claims

第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含む活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１のインターロイキンポリペプチドと、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２のインターロイキンポリペプチドと、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
（ｃ）前記第１のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、前記インターロイキンポリペプチド、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１を含むポリペプチドであり、さらに、
（ｉ）前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体のそれぞれが、１８個以下のアミノ酸を含む連結領域を含み、
（ｉｉ）前記インターロイキンポリペプチドがＩＬ－１５であり、
（ｄ）さらに、
（ｉ）前記第２のモノマー構成体は、前記第１のモノマー構成体と同一であり、
（ｉｉ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２は、１対のヒトＩｇＧのＦｃドメインであり、
（ｅ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、少なくとも１個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合し、それによって前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
（ｆ）前記ＡＣＣが、ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞において、ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリフォスファターゼ）産生のレベルで測定されるように、ＩＬ－１５活性のレベルが組み換えヒトＩＬ－１５と比較して低減していることを特徴とする、
前記活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）。
前記インターロイキンポリペプチドが、配列番号３４７と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２がそれぞれ、８個以下のアミノ酸を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２のそれぞれが、独立して、ウロキナーゼ（ｕＰａ）及び／またはマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）によって開裂可能である、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２がそれぞれ、配列番号３４９と少なくとも８５％同一である配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＣＭ１及び前記ＣＭ２がそれぞれ、配列番号４１、配列番号６８、配列番号１００及び配列番号３４９からなる群から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、１対のヒトＩｇＧ４Ｆｃドメインである、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、ＥＵナンバリングによって番号を付けたとき、システイン２２６のＮ末端側でトランケートされた、１対のヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＦｃドメインである、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインが、ＥＵナンバリングによって番号を付けたとき、Ｓ２２８Ｐの変異を含む、請求項７に記載のＡＣＣ。
前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２がそれぞれ、配列番号３と少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２がそれぞれ、配列番号３の配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも２個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合している、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも３個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合している、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、少なくとも４個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合している、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体がそれぞれ、配列番号３５０のアミノ酸２１－３５９と少なくとも９５％同一であるポリペプチド配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体のそれぞれが、配列番号３５０～３５６からなる群から選択されるポリペプチド配列を含む、請求項１に記載のＡＣＣ。
第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含む活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１のインターロイキンポリペプチドと、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２のインターロイキンポリペプチドと、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
（ｃ）前記第１のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、前記インターロイキンポリペプチド、前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１を含むポリペプチドであり、さらに、
（ｉ）前記インターロイキンポリペプチド及び前記ＣＭ１は互いに直接的に隣接し、
（ｉｉ）前記ＣＭ１及び前記ＤＤ１は互いに直接的に隣接し、
（ｉｉｉ）前記インターロイキンポリペプチドは配列番号３４７と少なくとも８５％同一である配列を含み、
（ｉｖ）前記ＣＭ１は配列番号３４９と少なくとも８５％同一である配列を含み、
（ｄ）さらに、
（ｉ）前記第２のモノマー構成体は、前記第１のモノマー構成体と同一であり、
（ｉｉ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２は、１対のヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＦｃドメインであり、
（ｅ）前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が、少なくとも１個のジスルフィド結合を介して互いに共有結合し、それによって前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
（ｆ）前記ＡＣＣが、組み換えヒトＩＬ－１５の活性と比較して、ＩＬ－１５活性のレベルが低減していることを特徴とする、
前記活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）。
第１のモノマー構成体及び第２のモノマー構成体を含有する活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）であって、
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１のインターロイキンポリペプチドと、第１の開裂可能部分（ＣＭ１）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
前記ＣＭ１が前記インターロイキンポリペプチドと前記ＤＤ１との間に置かれ、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２のインターロイキンポリペプチドと、第２の開裂可能部分（ＣＭ２）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
前記ＣＭ２が前記第２のインターロイキンポリペプチドと前記ＤＤ２との間に置かれる、または
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１のインターロイキンポリペプチドと、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２のインターロイキンポリペプチドと、開裂可能部分（ＣＭ）と、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、前記ＣＭが前記第２のインターロイキンポリペプチドと前記ＤＤ２との間に置かれ、前記ＣＭがプロテアーゼの基質として機能する、または
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１のインターロイキンポリペプチドと、開裂可能部分（ＣＭ）と、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、前記ＣＭが前記インターロイキンポリペプチドと前記ＤＤ１との間に置かれ、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２のインターロイキンポリペプチドと、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、
前記ＣＭがプロテアーゼの基質として機能する、または
（ａ）前記第１のモノマー構成体が、第１のインターロイキンポリペプチドと、第１の二量体化ドメイン（ＤＤ１）と、を含み、
（ｂ）前記第２のモノマー構成体が、第２のインターロイキンポリペプチドと、第２の二量体化ドメイン（ＤＤ２）と、を含み、前記第１のインターロイキンポリペプチド、前記第２のインターロイキンポリペプチド、または前記第１のインターロイキンポリペプチド及び前記第２のインターロイキンポリペプチドの両方が、プロテアーゼの基質として機能するアミノ酸配列を含有し、
前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が互いに結合し、それによって前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体の二量体を形成し、
前記ＡＣＣが、インターロイキン活性の対照レベルと比較して、インターロイキン活性のレベルが低減していることを特徴とする、
前記活性化可能サイトカイン構成体（ＡＣＣ）。
前記ＤＤ１及び前記ＤＤ２が１対のＦｃドメインである、請求項１８に記載のＡＣＣ。
前記１対のＦｃドメインが、１対のヒトＦｃドメインである、請求項１９に記載のＡＣＣ。
前記ヒトＦｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ２のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ３のＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、請求項２０に記載のＡＣＣ。
前記ヒトＦｃドメインが、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである、請求項２１に記載のＡＣＣ。
前記ヒトＦｃドメインが、配列番号３、配列番号３１５または配列番号３１６と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項２２に記載のＡＣＣ。
前記ヒトＦｃドメインが、配列番号３、配列番号３１５または配列番号３１６を含む、請求項２２に記載のＡＣＣ。
前記第１のインターロイキンポリペプチド及び／または前記第２のインターロイキンポリペプチドが、配列番号３４７と少なくとも９０％同一である配列を含む、請求項１８に記載のＡＣＣ。
前記第１のモノマー構成体及び前記第２のモノマー構成体が、Ｎ末端からＣ末端の方向で、それぞれ、第１のインターロイキンポリペプチド－ＣＭ１－ＤＤ１、及び第２のインターロイキンポリペプチド－ＣＭ２－ＤＤ１の構造を有する、請求項１８に記載のＡＣＣ。
前記第１のインターロイキンポリペプチド及び／または前記第２のインターロイキンポリペプチドが、配列番号３４７の配列を含む、請求項１８に記載のＡＣＣ。
ＩＬ－２／ＩＬ－１５反応性ＨＥＫ２９３細胞において、ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリフォスファターゼ）産生のレベルで測定されるように、ＩＬ－１５活性のレベルが、組み換えヒトＩＬ－１５と比較して、約１００～約５００倍低減していることを特徴とする、請求項１～２７のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。
ＩＬ－１５活性のレベルが、組み換えヒトＩＬ－１５と比較して、少なくとも２００倍低減していることを特徴とする、請求項２８に記載のＡＣＣ。
ＩＬ－１５活性のレベルが、組み換えヒトＩＬ－１５と比較して、約２５０倍低減していることを特徴とする、請求項２８に記載のＡＣＣ。
ｕＰＡプロテアーゼによる前記ＡＣＣの開裂後に、ＩＬ－２／ＩＬ１５反応性ＨＥＫ２９３細胞において測定されるように、野生型組み換えＩＬ－１５のＥＣ５０の約１～約１０倍であるＥＣ５０を有することを特徴とする、請求項１～２７のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。
ｕＰＡプロテアーゼによる前記ＡＣＣの開裂後に、ＩＬ－２／ＩＬ１５反応性ＨＥＫ２９３細胞において測定されるように、野生型組み換えＩＬ－１５のＥＣ５０の約３～約７倍であるＥＣ５０を有することを特徴とする、請求項１～２７のいずれか１項または組み合わせに記載のＡＣＣ。
請求項１～３２のいずれか１項に記載のＡＣＣの前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
前記ポリペプチドが、請求項１～３３のいずれか１項に記載のＤＤ１をさらに含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
請求項３３または３４に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
発現ベクターである、請求項３５に記載のベクター。
請求項３３もしくは３４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項３５もしくは３６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
請求項１～３２のいずれか１項または組み合わせに記載の、前記第１のモノマー構成体の前記ＣＰ１及び前記ＣＭ１を含むポリペプチドと、前記第２のモノマー構成体の前記ＣＰ２及び前記ＣＭ２を含むポリペプチドと、を一緒になってコードする１対の核酸。
請求項３８に記載の１対の核酸を含む、宿主細胞。
哺乳動物細胞である、請求項３７または３９に記載の宿主細胞。
ＡＣＣを作製する方法であって、
請求項３７、３９または４０のいずれかに記載の細胞を、液体培地中で、前記ＡＣＣを作製するのに十分な条件下にて培養することと、
前記細胞または前記液体培地から前記ＡＣＣを回収することと、
を含む、前記方法。
前記細胞または前記液体培地から回収した前記ＡＣＣを単離することをさらに含む、請求項４１に記載の方法。
単離した前記ＡＣＣを薬学的組成物に調製することをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
請求項４１または４２に記載の方法によって作製されるＡＣＣ。
請求項１～３２のいずれか１項または請求項４４に記載のＡＣＣを含む、組成物。
薬学的組成物である、請求項４５に記載の組成物。
請求項４５または４６に記載の組成物の、少なくとも１回の用量を含む、容器、バイアル、シリンジ、注射ペンまたはキット。
治療を必要とする対象の治療方法であって、治療有効量の、請求項１～３２のいずれか１項もしくは組み合わせに記載のＡＣＣ、または請求項４５もしくは４６に記載の組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
前記対象が、がんを有すると特定または診断されている、請求項４８に記載の方法。
前記がんが、白血病、リンパ腫または固形腫瘍である、請求項４９に記載の方法。