JP2024084243A - Coated seed, seed coating agent and seed coating method - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、コーティング種子、種子コーティング剤、及び種子のコーティング方法に関する。 The present invention relates to coated seeds, seed coating agents, and seed coating methods.
光合成細菌を植物に投与することによって該植物の成長を促進する効果が得られることは従来から知られている(例えば、非特許文献1~3を参照)。光合成細菌は、病原性がなく、培養も容易であることから、光合成細菌の菌体を主成分とする植物成長促進剤が、農業、園芸、及び造園などの分野で広く利用されている。
It has long been known that administering photosynthetic bacteria to plants can promote the growth of the plants (see, for example, Non-Patent
しかしながら、旧来の植物成長促進剤は、一般的に光合成細菌を生菌(生きた菌)の状態で含んでいるため、保管時や運搬時の管理が難しいという問題があった。更に、旧来の植物成長促進剤の植物への投与方法としては、葉面散布、根元への灌注、水田への流し込み等が一般的であるが、これらの投与方法は圃場で行うために多くの労力を要し、且つ使用する光合成細菌の量も多くなる。例えば水田への流し込みでは1反(10a)当り10リットル程度の光合成細菌培養液が必要となる。 However, traditional plant growth promoters generally contain photosynthetic bacteria in a viable (living) state, which makes them difficult to manage during storage and transportation. Furthermore, traditional methods of administering plant growth promoters to plants generally involve foliar spraying, irrigation at the base of the plants, or pouring into rice paddies, but these administration methods require a lot of labor to be carried out in the field, and also require a large amount of photosynthetic bacteria to be used. For example, pouring into rice paddies requires about 10 liters of photosynthetic bacteria culture solution per 1 tan (10a).
上記の問題を解決するため、本発明者の一部は、特許文献1において光合成細菌を用いた新規の植物の成長促進方法を提案している。この方法は、植物の種子を、播種前に光合成細菌の死菌の懸濁液に浸漬処理することによって発芽後の成長を促進する方法であり、旧来のような圃場で植物に光合成細菌を散布したり、水田に光合成細菌を流し込んだりする方法に比べて、極めて低コストで手間もかからないという利点がある。
To solve the above problems, some of the present inventors have proposed a new method for promoting plant growth using photosynthetic bacteria in
しかしながら、特許文献1に記載の方法では、播種作業を行う農業従事者の手によって上記のような光合成細菌懸濁液の調製及び種子の浸漬処理を行う必要があるため、前記懸濁液中での菌体の濃度、浸漬処理を行うタイミング、及び浸漬時間などが必ずしも一定とはならず、効果のばらつきが大きいという問題があった。また、特許文献1に記載の方法は、旧来の植物成長促進剤の施用に比べると手間は掛からないものの、農業従事者にとっては播種前に一手間余分な作業が生じることになり、このことが普及の妨げになっている。更に、特許文献1に記載の方法は、播種前に種子を水に漬ける工程があるイネ等には適しているが、コムギ等の事前に水に浸けることなく播種される植物には適さないという問題があった。
However, the method described in
本発明は上記の点に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、光合成細菌を利用した植物の成長促進技術において、農業従事者の作業負担を軽減すると共に、様々な植物への適用を可能とし、なお且つ安定した効果を得られるようにすることにある。 The present invention was made in consideration of the above points, and its purpose is to reduce the workload of agricultural workers in a plant growth promotion technology that uses photosynthetic bacteria, make it applicable to a variety of plants, and provide stable effects.
上記課題を解決するために成された本発明に係るコーティング種子は、
植物の種子と、
前記種子の表面に形成された、光合成細菌の菌体とコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するものである。
The coated seed according to the present invention, which has been developed to solve the above problems,
Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing photosynthetic bacteria and a coating base;
It has the following.
上記課題を解決するために成された本発明に係るコーティング種子は、
植物の種子と、
前記種子の表面に形成された、光合成細菌由来のリポポリサッカライドとコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するものであってもよい。
The coated seed according to the present invention, which has been developed to solve the above problems,
Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing a lipopolysaccharide derived from photosynthetic bacteria and a coating base;
The present invention may also have the following structure.
上記課題を解決するために成された本発明に係るコーティング種子は、
植物の種子と、
前記種子の表面に形成された、リピドAとコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するものであってもよい。
The coated seed according to the present invention, which has been developed to solve the above problems,
Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing lipid A and a coating base;
The present invention may also have the following structure.
また、上記課題を解決するために成された本発明に係る種子コーティング剤は、
光合成細菌の菌体とコーティング基剤とを含有するものである。
In addition, the seed coating agent according to the present invention, which has been developed to solve the above problems, is
It contains photosynthetic bacteria cells and a coating base.
上記課題を解決するために成された本発明に係る種子コーティング剤は、
光合成細菌由来のリポポリサッカライドとコーティング基剤とを含有するものであってもよい。
The seed coating agent according to the present invention, which has been developed to solve the above problems, is
It may contain lipopolysaccharide derived from photosynthetic bacteria and a coating base.
上記課題を解決するために成された本発明に係る種子コーティング剤は、
リピドAとコーティング基剤とを含有するものであってもよい。
The seed coating agent according to the present invention, which has been developed to solve the above problems, is
It may contain lipid A and a coating base.
また、上記課題を解決するために成された本発明に係る種子のコーティング方法は、
前記いずれかの種子コーティング剤を液体の状態で植物の種子の表面に付着させた後、該コーティング剤を乾燥させるものである。
In addition, the seed coating method according to the present invention, which has been made to solve the above problems, comprises the steps of:
Any of the above seed coating agents is applied in a liquid state to the surface of a plant seed, and then the coating agent is dried.
上記本発明に係るコーティング種子、種子コーティング剤、及び種子のコーティング方法によれば、光合成細菌を利用した植物の成長促進技術において、農業従事者の作業負担を軽減できると共に、様々な植物への適用が可能となり、なお且つ安定した効果を得ることが可能となる。 The coated seeds, seed coating agent, and seed coating method according to the present invention can reduce the workload of agricultural workers in plant growth promotion technology using photosynthetic bacteria, can be applied to a variety of plants, and can provide stable effects.
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、植物の種子を、播種前に、光合成細菌の菌体、光合成細菌由来のリポポリサッカライド(LPS:Lipopolysaccharide)、又は当該LPS等に由来するリピドAを含むコーティング剤で被覆しておくことによって、特許文献1に記載の方法と同様に、播種後における根の伸長が促進されることを見出した。本発明は、上記知見に基づいて想到されたものである。
As a result of extensive research into solving the above problems, the present inventors have found that by coating plant seeds with a coating agent containing photosynthetic bacteria cells, lipopolysaccharide (LPS) derived from photosynthetic bacteria, or lipid A derived from the LPS before sowing, root elongation after sowing is promoted in the same manner as in the method described in
すなわち、本発明に係るコーティング種子は、植物の種子を、光合成細菌の菌体、光合成細菌由来のLPS、又は当該LPS等に由来するリピドAの少なくともいずれかを有効成分として含有するコーティング剤によって被覆したものである。 In other words, the coated seeds of the present invention are plant seeds coated with a coating agent containing at least one of photosynthetic bacteria cells, LPS derived from photosynthetic bacteria, or lipid A derived from the LPS or the like as an active ingredient.
前記コーティング剤には、上述の有効成分に加えて、種子の表面にコーティング層を形成して光合成細菌を保持するためのコーティング基剤を含有させる。前記コーティング基剤としては、水に溶解又は分散可能であって、その溶液又は懸濁液を乾燥させた際に硬化して被膜を形成する性質を有するものを用いることが望ましい。このようなコーティング基剤としては、例えば、一般的にゲル化剤又は増粘剤として用いられている、デンプン若しくはアガロース等の多糖類、ゼラチン、又は水溶性高分子等を用いることができる。前記水溶性高分子としては、例えば、カルボキシメチルセルロース若しくはその塩、又はポリビニルアルコール等を好適に用いることができる。硬化前の(すなわち液状の)コーティング剤中におけるコーティング基剤の濃度は、特に限定されるものではないが、例えば、0.5%~5%程度(望ましくは1%~2%程度)とする。前記コーティング剤を用いて種子をコーティングする手法としては、例えば、種子をコーティング剤に浸漬したり、コーティング剤を種子の表面に塗布又は噴霧したりした後に該コーティング剤を乾燥させる手法(表面被覆法;Encrusting)を好適に用いることができる。ただし、コーティング手法はこれに限定されるものではなく、例えば、水溶性高分子を用いて種子の表面にごく薄い皮膜を形成させる方法(フィルムコーティング法)、又はタルク、過酸化カルシウム、ベントナイト、又は珪藻土などの無機物粒子と前記コーティング基剤との混合物を用いて種子の表面を厚くコーティングしてペレット状にする手法(ペレット化法)等を用いることもできる。 In addition to the above-mentioned active ingredients, the coating agent contains a coating base for forming a coating layer on the surface of the seeds to retain the photosynthetic bacteria. It is desirable to use a coating base that is soluble or dispersible in water and has the property of hardening to form a coating when the solution or suspension is dried. Examples of such coating bases include polysaccharides such as starch or agarose, gelatin, or water-soluble polymers, which are generally used as gelling agents or thickeners. Examples of the water-soluble polymers that can be used preferably include carboxymethylcellulose or a salt thereof, or polyvinyl alcohol. The concentration of the coating base in the coating agent before hardening (i.e., in a liquid state) is not particularly limited, but is, for example, about 0.5% to 5% (preferably about 1% to 2%). Examples of methods for coating seeds with the coating agent include a method of immersing seeds in the coating agent, or applying or spraying the coating agent on the surface of the seeds and then drying the coating agent (surface coating method; encrusting). However, the coating method is not limited to this, and other methods can be used, such as a method of forming a very thin film on the surface of the seeds using a water-soluble polymer (film coating method), or a method of thickly coating the surface of the seeds with a mixture of inorganic particles such as talc, calcium peroxide, bentonite, or diatomaceous earth and the coating base, and then forming them into pellets (pelletization method).
前記光合成細菌の種類は特に限定されるものではないが、紅色非硫黄細菌であることが望ましく、その中でも、特にロドバクター属の光合成細菌であることが望ましい。前記ロドバクター属の光合成細菌としては、例えば、ロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)を好適に用いることができる。ロドバクター・スフェロイデスとしては、例えば、土壌改良材又は土壌活性剤等の農業資材として市販されている菌体、具体的には、「PSB凍結菌体」、「オーレスPSB」、「光オーレス」、「NEWパナオーレス」、又は「オーレスみどり」の名称で市販されている菌体(販売元:株式会社松本微生物研究所)等を好適に用いることができる。 The type of the photosynthetic bacteria is not particularly limited, but is preferably a purple non-sulfur bacterium, and particularly preferably a photosynthetic bacterium of the genus Rhodobacter. As the photosynthetic bacterium of the genus Rhodobacter, for example, Rhodobacter sphaeroides can be preferably used. As Rhodobacter sphaeroides, for example, bacterial bodies commercially available as agricultural materials such as soil improvement agents or soil activators, specifically, bacterial bodies commercially available under the names "PSB frozen bacterial bodies", "Aures PSB", "Hikari Aures", "NEW Pana Aures", or "Aures Midori" (sold by Matsumoto Microbiology Laboratory Co., Ltd.), etc. can be preferably used.
前記有効成分として光合成細菌の菌体を用いる場合、コーティング剤中における光合成細菌の濃度は1菌/mL~106菌/mL程度(より望ましくは101 菌/mL~105 菌/mL程度)とすることが望ましいが、これに限定されるものではない。前記菌体は生菌の状態でコーティング剤に含有させてもよいが、保存及び取り扱いの容易性に鑑みると、予め生菌を加熱又は乾燥させて得られた死菌の状態でコーティング剤に含有させることが望ましい。前記生菌を加熱処理する場合の温度の目安は、60℃以上、望ましくは70℃以上、より望ましくは100℃以上であるが、これに限定されるものではない。また、前記光合成細菌の菌体は、細胞破砕のための処理、例えば、超音波処理、ホモジナイザー処理、乳鉢・乳棒による処理、凍結融解処理、又は酵素による細胞の溶解処理などを受けていない(すなわちインタクトな)ものであってもよく、あるいは前記のような細胞破砕のための処理が施されたものであってもよい。 When the photosynthetic bacteria cells are used as the active ingredient, the concentration of the photosynthetic bacteria in the coating agent is preferably about 1 cell/mL to 10 6 cells/mL (more preferably about 10 1 cell/mL to 10 5 cells/mL), but is not limited thereto. The cells may be contained in the coating agent in a live state, but in consideration of ease of storage and handling, it is preferable to contain the live bacteria in a dead state obtained by heating or drying the live bacteria in advance. The temperature for heat-treating the live bacteria is 60°C or higher, preferably 70°C or higher, more preferably 100°C or higher, but is not limited thereto. The photosynthetic bacteria cells may be cells that have not been subjected to a cell-disrupting treatment, such as ultrasonic treatment, homogenizer treatment, treatment with a mortar and pestle, freeze-thawing treatment, or cell lysis treatment with an enzyme (i.e., intact), or may be cells that have been subjected to the above-mentioned cell-disrupting treatment.
また、前記有効成分として光合成細菌由来のLPSを用いる場合、コーティング剤中におけるLPSの濃度は、例えば1 pg/mL~1 μg/mL程度(望ましくは5 pg/mL~50 pg/mL程度)とすることができるが、これに限定されるものではない。なお、光合成細菌由来のLPSは、例えば、光合成細菌の菌体を超音波処理等によって破砕し、得られた菌体破砕液を遠心分離して取り出された不溶性画分から抽出することによって取得することができる。あるいは、市販されている光合成細菌由来のLPSを用いるようにしてもよい。 When LPS derived from photosynthetic bacteria is used as the active ingredient, the concentration of LPS in the coating agent can be, for example, about 1 pg/mL to 1 μg/mL (preferably about 5 pg/mL to 50 pg/mL), but is not limited to this. LPS derived from photosynthetic bacteria can be obtained, for example, by disrupting photosynthetic bacteria cells by ultrasonic treatment or the like, centrifuging the resulting disrupted cell liquid, and extracting it from the insoluble fraction. Alternatively, commercially available LPS derived from photosynthetic bacteria may be used.
また、前記有効成分としてリピドAを用いる場合、コーティング剤中におけるリピドAの濃度は、例えば、0.01 pg/mL~1 μg/mL程度(望ましくは1 pg/mL~1 ng/mL程度)とすることができるが、これに限定されるものではない。なお、リピドAとしては、例えば、光合成細菌から抽出されたLPSを酸加水分解(例えば、0.1N塩酸中において100℃で1時間程度加熱)することによって得られたものを用いることができる。またエリトラン(Eritoran, E5564, CAS番号:185954-98-7)のような化学合成されたリピドAを用いることもできる。 When lipid A is used as the active ingredient, the concentration of lipid A in the coating agent can be, for example, about 0.01 pg/mL to 1 μg/mL (preferably about 1 pg/mL to 1 ng/mL), but is not limited thereto. For example, lipid A obtained by acid hydrolysis (for example, heating at 100°C for about 1 hour in 0.1N hydrochloric acid) of LPS extracted from photosynthetic bacteria can be used. Chemically synthesized lipid A such as eritoran (E5564, CAS number: 185954-98-7) can also be used.
本発明は、例えばイネ又はコムギ等のイネ科の植物に好適に用いることができるが、本発明の適用対象とする植物の種類はこれに限定されるものではない。 The present invention can be suitably used for plants of the Gramineae family, such as rice or wheat, but the types of plants to which the present invention can be applied are not limited to these.
図1に、本発明の一実施形態に係る種子のコーティング方法の概略を示す。この方法では、まず、水11に所定量のコーティング基剤(例えばデンプン)12を添加して溶解又は分散させることにより、コーティング基剤の水溶液又は懸濁液(以下、コーティング基剤液13とよぶ)を作成する。なお、コーティング基剤の溶解又は分散を促進するため、必要に応じて、コーティング基剤12の添加前又は添加後に水11を加熱するようにしてもよい。
Figure 1 shows an outline of a seed coating method according to one embodiment of the present invention. In this method, a predetermined amount of coating base (e.g., starch) 12 is first added to
続いて、コーティング基剤液13に光合成細菌の死菌の懸濁液(以下、菌体懸濁液14とよぶ)を添加して混合することによってコーティング剤15を調製する。前記の菌体懸濁液14は、予め光合成細菌の生菌を含む培養液を遠心分離して上清を除去し、残った沈殿物(菌体)を乾燥させ、その後、該沈殿物に水を添加して懸濁することによって調製される。なお、乾燥させた菌体に水を添加した後、超音波処理等によって菌体を破砕するようにしてもよい。また、前記の「光合成細菌の生菌を含む培養液」としては、純粋培養した光合成細菌の培養液を用いてもよく、焼酎粕等を利用して培養した純粋培養でない光合成細菌を主たる構成微生物とする培養液を用いてもよい。
Then, a suspension of dead photosynthetic bacteria (hereinafter referred to as bacterial cell suspension 14) is added to the
なお、菌体懸濁液14に代えて、光合成細菌から抽出したLPS又は該LPSから取り出されたリピドA又は化学合成されたリピドAをコーティング基剤液13に添加することによってコーティング剤15を調製するようにしてもよい。
In addition, instead of the
その後、上記で調製したコーティング剤15に植物の種子(例えばイネの種籾)16を投入し、所定の時間亘って浸漬した後、種子16をコーティング剤15から取り出して乾燥させる。なお、種子16をコーティング剤に浸漬する時間の目安は、1分~30分、望ましくは10分~20分程度であるが、これに限定されるものではない。以上により、光合成細菌の死菌を含むコーティング層によって被覆された種子であるコーティング種子17が得られる。
Then, plant seeds (e.g., rice seeds) 16 are placed in the
以上により得られたコーティング種子17は、直ちに又は所定期間に亘って保存された後、農業地に運ばれて通常通りに播種される。なお、必要に応じてコーティング種子17を水に浸漬してから播種するようにしてもよい。コーティング種子17が水に濡れても、コーティング層に含まれるコーティング基剤12の作用によって有効成分(すなわち光合成細菌の菌体、LPS、又はリピドA)が種子16の表面に留められるため、播種前にコーティング種子17に浸水処理を施したり、コーティング種子17を播種した土壌に灌水したりしても、これらの有効成分が種子16の表面から直ちに失われることはない。
The coated
本実施形態に係る種子のコーティング方法により、播種後における植物の根の成長が促進され、その結果、栄養や水分の吸収効率が向上して植物体全体の成長を促すことができる。また、本実施形態に係る方法では、種子の段階で光合成細菌(又はLPS若しくはリピドA)の投与を行うため、旧来の葉面散布、根元への灌注、水田への流し込み等のように圃場での投与を行う場合に比べて手間が掛からず、光合成細菌の使用量も極めて僅かで済む。また、上述の特許文献1に記載の方法では種子への光合成細菌の投与を農業現場で行う必要があったが、本実施形態に係る方法では、種子への光合成細菌の投与(すなわち前記コーティング剤によるコーティング)を予め農業現場以外の場所、例えば、種苗メーカー等で工業的に行うことができる。そのため、本実施形態に係る種子のコーティング方法は、種子の播種作業を行う農業従事者の手を煩わせることなく実現することができる。また、本実施形態に係る種子のコーティング方法は、特許文献1に記載の方法のように播種前の浸水処理時に光合成細菌を投与するものではないため、コムギ等の一般的に予め水に浸けることなく播種される植物にも好適に適用することが可能である。
The seed coating method according to the present embodiment promotes the growth of plant roots after sowing, which improves the efficiency of nutrient and water absorption and promotes the growth of the entire plant. In addition, in the method according to the present embodiment, photosynthetic bacteria (or LPS or lipid A) are administered at the seed stage, which is less time-consuming than traditional field administration such as foliar spraying, irrigation to the roots, or pouring into paddy fields, and the amount of photosynthetic bacteria used is extremely small. In addition, while the method described in the above-mentioned
以下、本発明の効果を確認するために行った実施例について説明する。本実施例では、種々のコーティング基剤の水溶液(又は懸濁液)に光合成細菌Rhodobacter sp. Turu3の菌体を添加することによってコーティング剤を作成し、各コーティング剤で被覆したイネの種籾を播種して根の成長度合いを評価した。 Below, we explain examples that were carried out to confirm the effects of the present invention. In these examples, coating agents were created by adding cells of the photosynthetic bacterium Rhodobacter sp. Turu3 to aqueous solutions (or suspensions) of various coating bases, and rice seeds coated with each coating agent were sown to evaluate the degree of root growth.
まず、熊本県八代市坂本町鶴喰の水田土壌から単離した光合成細菌であるRhodobacter sp. Turu3を、非特許文献4に記載の球磨焼酎粕を原料に作成した培地で培養した。その後、前記光合成細菌の菌体を含む前記培地を遠心分離して沈殿(菌体)を回収し、該沈殿を60 ℃で6時間乾燥することによって乾燥菌体(死菌)を得た。そして、前記乾燥菌体に水を添加し、超音波処理による菌体の破砕を行うことによって菌体破砕液を得た。 First, Rhodobacter sp. Turu3, a photosynthetic bacterium isolated from paddy field soil in Tsurukui, Sakamoto-cho, Yatsushiro-shi, Kumamoto Prefecture, was cultured in a medium prepared using Kuma shochu lees as a raw material, as described in Non-Patent Document 4. The medium containing the photosynthetic bacterium cells was then centrifuged to collect the precipitate (cells), which was then dried at 60°C for 6 hours to obtain dried cells (dead cells). Water was then added to the dried cells, and the cells were disrupted by ultrasonic treatment to obtain a disrupted cell solution.
次に、コーティング基剤として、デンプン(コムギ由来のもの)、カルボキシメチルセルロースナトリウム(ナカライテスク株式会社)、及びポリビニルアルコール(富士フイルム和光純薬株式会社)の3種類のゲル化剤を用意し、各ゲル化剤を水に添加した後、80℃に加熱して該ゲル化剤を水に溶解(又は分散)させることよって、各ゲル化剤を2%の濃度で含む水溶液(又は懸濁液)をそれぞれ調製した。そして、各ゲル化剤の水溶液(又は懸濁液)を冷ました後に、所定量の前記菌体破砕液を添加することによって、前記光合成細菌の菌体を103 菌/mLの濃度で含むコーティング剤と、前記菌体を105 菌/mLの濃度で含むコーティング剤とをそれぞれ調製した。前記コーティング剤の調製に際しては、波長450 nmでカロテン類の吸収を測定し、OD450 = 2が109 菌/mLであるものとして菌濃度を計算した。 Next, three types of gelling agents were prepared as coating bases: starch (derived from wheat), sodium carboxymethylcellulose (Nacalai Tesque, Inc.), and polyvinyl alcohol (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Each gelling agent was added to water, and then heated to 80°C to dissolve (or disperse) the gelling agent in water, thereby preparing an aqueous solution (or suspension) containing each gelling agent at a concentration of 2%. Then, after cooling the aqueous solution (or suspension) of each gelling agent, a predetermined amount of the cell disruption liquid was added to prepare a coating agent containing the photosynthetic bacteria at a concentration of 10 3 bacteria/mL and a coating agent containing the photosynthetic bacteria at a concentration of 10 5 bacteria/mL. In preparing the coating agents, the absorption of carotenes was measured at a wavelength of 450 nm, and the bacterial concentration was calculated assuming that OD 450 = 2 was 10 9 bacteria/mL.
次に、乾燥状態のイネ(品種:あきたこまち、生産年:2021年)の種籾を、上記の各コーティング剤に15分間浸漬し、その後取り出して1時間自然乾燥させることによってコーティング種子を作成した。また、対照として、光合成細菌の菌体を含有しないコーティング剤(すなわち上述の各ゲル化剤を2%の濃度で含む水溶液又は懸濁液)による種籾のコーティングを行った。 Next, dried rice seeds (variety: Akitakomachi, production year: 2021) were immersed in each of the above coating agents for 15 minutes, then removed and naturally dried for 1 hour to create coated seeds. As a control, rice seeds were coated with a coating agent that did not contain photosynthetic bacterial cells (i.e., an aqueous solution or suspension containing each of the above gelling agents at a concentration of 2%).
以上で得られた各コーティング種子を、培土としてPromix BX(Premier Tech Horticulture Ltd, QC, Canada)を収容した49穴(7穴×7穴)の育苗セルボックス(外寸285mm×285mm×35mm、セル穴の内寸36.7mm×36.7mm×7mm )の中央部分の25穴(5穴×5穴)に、1セルあたり一粒播種し、25℃、12時間明・12時間暗条件で14日間栽培した後に根の成長を評価した。 Each of the coated seeds obtained above was sown one seed per cell in 25 central holes (5 x 5) of a 49-hole (7 x 7) seedling cell box (external dimensions 285 mm x 285 mm x 35 mm, internal dimensions of cell hole 36.7 mm x 36.7 mm x 7 mm) containing Promix BX (Premier Tech Horticulture Ltd, QC, Canada) as culture medium. The seeds were cultivated at 25°C for 14 days under 12 hours of light and 12 hours of darkness, after which root growth was evaluated.
根の成長の評価には、画像解析システムWinRHIZO(Regent Instruments Inc.)を使用した。具体的には、まず、WinRHIZO専用トレイに水を張り、前記種籾から伸びた根から土を落とした上で、当該根を広げ、A4フラットベッドスキャナー(EPSON GT-X980)を用いて根の画像を取り込んだ。以上で取り込んだ根の画像をWinRHIZOで解析し、総根長 、根の表面積、根端数(根の総数)、及び根の分岐数を評価した。なお、評価に用いる種籾の数は各区とも3とした。 The image analysis system WinRHIZO (Regent Instruments Inc.) was used to evaluate root growth. Specifically, water was first poured into a WinRHIZO tray, the soil was removed from the roots growing from the seed rice, the roots were spread out, and an A4 flatbed scanner (EPSON GT-X980) was used to capture an image of the roots. The captured root images were then analyzed with WinRHIZO to evaluate the total root length, root surface area, number of root tips (total number of roots), and number of root branches. Three seeds were used for the evaluation in each section.
上記試験の結果を図2~図4に示す。図2はコーティング基剤としてデンプンを用いたもの、図3はコーティング基剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウムを用いたもの、図4はコーティング基剤としてポリビニルアルコールを用いたものである。これらの図から明らかなように、上記いずれのコーティング基剤を用いた場合でも、光合成細菌の濃度が103 菌/mL及び105 菌/mLの双方において、対照と比べて総根長、根の表面積、根端数、及び根の分岐数が概ね増大しており、根の成長が促進されていることが確かめられた。 The results of the above test are shown in Figures 2 to 4. Figure 2 shows the results when starch was used as the coating base, Figure 3 shows the results when sodium carboxymethylcellulose was used as the coating base, and Figure 4 shows the results when polyvinyl alcohol was used as the coating base. As is clear from these figures, when any of the above coating bases was used, the total root length, root surface area, number of root tips, and number of root branches generally increased compared to the control at both the photosynthetic bacteria concentrations of 103 bacteria/mL and 105 bacteria/mL, confirming that root growth was promoted.
本実施例では、光合成細菌Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203Tの菌体を含有するコーティング剤と、前記光合成細菌由来のLPSを含有するコーティング剤とを調製し、各コーティング剤で被覆したイネの種籾の根の成長度合いを評価した。 In this example, a coating agent containing cells of the photosynthetic bacterium Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T and a coating agent containing LPS derived from the photosynthetic bacterium were prepared, and the degree of root growth of rice seeds coated with each coating agent was evaluated.
光合成細菌Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203Tは、独立行政法人製品評価技術基盤機構より入手し、同機構が指定するSA Medium (NBRC Medium No.360)を用いて純粋培養した。その後、前記光合成細菌の菌体を含む培地を遠心分離して沈殿(菌体)を回収し、該沈殿を60 ℃で6時間乾燥することによって乾燥菌体(死菌)を得た。そして、前記乾燥菌体に水を添加し、超音波処理による菌体の破砕を行うことによって菌体破砕液を得た。なお、後述するコーティング剤の調製に際しては、波長660 nmにおける濁度OD660を測定し、OD660 = 1が、109 菌/mLであるとして菌濃度を計算した。また、LPSとしては、市販されているRhodobacter sphaeroides NBRC 12203T由来のLPS(LPS-RS, 販売元:Invivogen)を使用した。 The photosynthetic bacteria Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T was obtained from the National Institute of Technology and Evaluation, and pure cultured using SA Medium (NBRC Medium No. 360) designated by the same organization. The medium containing the photosynthetic bacteria was then centrifuged to collect the precipitate (bacteria), which was then dried at 60 ° C for 6 hours to obtain dried bacteria (dead bacteria). Water was then added to the dried bacteria, and the bacteria were disrupted by ultrasonic treatment to obtain a cell disruption solution. In addition, when preparing the coating agent described below, the turbidity OD 660 at a wavelength of 660 nm was measured, and the bacterial concentration was calculated assuming that OD 660 = 1 is 10 9 bacteria/mL. In addition, the commercially available LPS derived from Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T (LPS-RS, sold by Invivogen) was used as the LPS.
実施例1と同様にして調製したデンプンの2%懸濁液に、前記Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203Tの乾燥菌体又は前記LPSを添加して本実施例に係るコーティング剤を調製した。なお、コーティング剤中における前記菌体の濃度は1 菌/mL又は102 菌/mLとし、コーティング剤中におけるLPSの濃度は5 pg/mL又は50 pg/mLとした。 The coating agent according to this example was prepared by adding the dried cells of Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T or the LPS to a 2% suspension of starch prepared in the same manner as in Example 1. The concentration of the cells in the coating agent was 1 cell/mL or 102 cells/mL, and the concentration of LPS in the coating agent was 5 pg/mL or 50 pg/mL.
以上で得られたコーティング剤を用いて、実施例1と同様にイネの種籾をコーティングした。また、対照として、光合成細菌を含有しないコーティング剤(すなわち上述のデンプンの2%懸濁液)を用いて同様に種籾のコーティングを行った。そして、得られた各コーティング種子を、実施例1と同様に播種及び栽培し、播種後14日目における根の成長度合いを評価した。なお、評価に用いる種籾の数は各区とも4とした。
Rice seeds were coated with the coating agent obtained above in the same manner as in Example 1. As a control, seeds were coated in the same manner using a coating agent that did not contain photosynthetic bacteria (i.e., the above-mentioned 2% suspension of starch). Each of the resulting coated seeds was then sown and cultivated in the same manner as in Example 1, and the degree of
上記試験の結果を図5及び図6に示す。図5はRhodobacter sphaeroides NBRC 12203Tの菌体を含有するコーティング剤を用いて種籾をコーティングした場合の結果を示し、図6は同菌株に由来するLPSを含有するコーティング剤によって種籾をコーティングした場合の結果を示している。これらの図から明らかなように、上記Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203Tの菌体を1 菌/mL又は102 菌/mLの濃度で含むコーティング剤、及び同菌株由来のLPSを5 pg/mL又は50 pg/mLの濃度で含むコーティング剤のいずれを用いた場合でも、対照と比べて総根長、根の表面積、根端数、及び根の分岐数が増大しており、根の成長が促進されていることが確かめられた。 The results of the above test are shown in Figures 5 and 6. Figure 5 shows the results when seed rice was coated with a coating agent containing Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T cells, and Figure 6 shows the results when seed rice was coated with a coating agent containing LPS derived from the same strain. As is clear from these figures, when the coating agent containing Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T cells at a concentration of 1 cell/mL or 102 cells/mL was used, and when the coating agent containing LPS derived from the same strain at a concentration of 5 pg/mL or 50 pg/mL was used, the total root length, root surface area, number of root tips, and number of root branches were increased compared to the control, confirming that root growth was promoted.
本実施例では、光合成細菌のLPSに由来するリピドAを含んだコーティング剤を調製し、該コーティング剤で被覆したイネの種籾の根の成長度合いを評価した。 In this example, a coating agent containing lipid A derived from the LPS of photosynthetic bacteria was prepared, and the degree of root growth of rice seeds coated with the coating agent was evaluated.
まず、実施例2と同じRhodobacter sphaeroides NBRC 12203T由来のLPSを酸加水分解することによってリピドAを取得した。なお、酸加水分解は、前記LPSを、0.1N 塩酸中において100℃で1時間程度加熱することによって行った。 First, lipid A was obtained by acid hydrolysis of LPS derived from the same Rhodobacter sphaeroides NBRC 12203 T as in Example 2. The acid hydrolysis was carried out by heating the LPS in 0.1 N hydrochloric acid at 100° C. for about 1 hour.
続いて、実施例1と同様にしてデンプンの懸濁液を調製し(ただし、懸濁液中におけるデンプンの濃度は1%とした)、該懸濁液に前記リピドAを添加することによって本実施例に係るコーティング剤を調製した。なお、コーティング剤中におけるリピドAの濃度は1 pg/mL又は1 ng/mLとした。 Next, a starch suspension was prepared in the same manner as in Example 1 (except that the concentration of starch in the suspension was 1%), and the lipid A was added to the suspension to prepare the coating agent of this example. The concentration of lipid A in the coating agent was 1 pg/mL or 1 ng/mL.
以上で得られたコーティング剤を用いて、実施例1と同様にイネの種籾をコーティングした。また、対照として、リピドAを含有しないコーティング剤(すなわち上述のデンプンの1%懸濁液)を用いて同様に種籾のコーティングを行った。そして、得られた各コーティング種子を、実施例1と同様に播種及び栽培し、播種後14日目における根の成長度合いを評価した。なお、評価に用いる種籾の数は各区とも5とした。
Rice seeds were coated with the coating agent obtained above in the same manner as in Example 1. As a control, rice seeds were coated in the same manner using a coating agent that did not contain lipid A (i.e., the above-mentioned 1% suspension of starch). Each of the resulting coated seeds was then sown and cultivated in the same manner as in Example 1, and the degree of
上記試験の結果を図7に示す。同図から明らかなように、リピドAを1 pg/mL又は1 ng/mLの濃度で含むコーティング剤のいずれを用いた場合でも、対照と比べて総根長、根の表面積、根端数、及び根の分岐数が増大しており、根の成長が促進されていることが確かめられた。 The results of the above test are shown in Figure 7. As is clear from the figure, when either the coating agent containing lipid A at a concentration of 1 pg/mL or 1 ng/mL was used, the total root length, root surface area, number of root tips, and number of root branches increased compared to the control, confirming that root growth was promoted.
[態様]
上述した例示的な実施形態が以下の態様の具体例であることは、当業者には明らかである。
[Aspects]
It will be apparent to those skilled in the art that the above-described exemplary embodiments are illustrative of the following aspects.
(第1項)第1項に係るコーティング種子は、
植物の種子と、
前記種子の表面に形成された、光合成細菌の菌体とコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するものである。
(1) The coated seed according to
Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing photosynthetic bacteria and a coating base;
It has the following.
(第2項)第2項に係るコーティング種子は、
植物の種子と、
前記種子の表面に形成された、光合成細菌由来のリポポリサッカライドとコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するものである。
(2) The coated seeds according to the 2nd paragraph are
Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing a lipopolysaccharide derived from photosynthetic bacteria and a coating base;
It has the following.
(第3項)第3項に係るコーティング種子は、
植物の種子と、
前記種子の表面に形成された、リピドAとコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するものである。
(Clause 3) The coated seeds according to clause 3 are
Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing lipid A and a coating base;
It has the following.
(第4項)第4項に係るコーティング種子は、第1項~第3項のいずれか1項に係るコーティング種子において、
前記光合成細菌が紅色非硫黄細菌であることを特徴とするものである。
(4) The coated seed according to paragraph 4 is a coated seed according to any one of
The photosynthetic bacteria are characterized in that they are purple non-sulfur bacteria.
(第5項)第5項に係るコーティング種子は、第4項に係るコーティング種子において、
前記紅色非硫黄細菌がロドバクター属の細菌であることを特徴とするものである。
(5) The coated seed according to the 5th paragraph is the coated seed according to the 4th paragraph,
The purple non-sulfur bacterium is characterized in that it is a bacterium of the genus Rhodobacter.
(第6項)第6項に係るコーティング種子は、第5項に係るコーティング種子において、
前記ロドバクター属の細菌がロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)であることを特徴とするものである。
(6) The coated seed according to paragraph 6 is the coated seed according to
The bacterium of the genus Rhodobacter is characterized in that it is Rhodobacter sphaeroides.
(第7項)第7項に係るコーティング種子は、第1項~第6項のいずれか1項に係るコーティング種子において、前記コーティング基剤が、ゲル化剤であることを特徴とするものである。
(Clause 7) The coated seed according to clause 7 is the coated seed according to any one of
(第8項)第8項に係る種子コーティング剤は、
光合成細菌の菌体とコーティング基剤とを含有することを特徴とするものである。
(Item 8) The seed coating agent according to item 8 is
The coating composition is characterized by containing photosynthetic bacteria cells and a coating base.
(第9項)第9項に係る種子コーティング剤は、
光合成細菌由来のリポポリサッカライドとコーティング基剤とを含有することを特徴とするものである。
(Item 9) The seed coating agent according to item 9 is
It is characterized by containing lipopolysaccharide derived from photosynthetic bacteria and a coating base.
(第10項)第10項に係る種子コーティング剤は、
リピドAとコーティング基剤とを含有することを特徴とするものである。
(Item 10) The seed coating agent according to
It is characterized by containing lipid A and a coating base.
(第11項)第11項に係る種子のコーティング方法は、
第8項~第10項のいずれか1項に係る種子コーティング剤を液体の状態で植物の種子の表面に付着させた後、該コーティング剤を乾燥させることを特徴とするものである。
(Item 11) The seed coating method according to
The seed coating agent according to any one of claims 8 to 10 is applied in a liquid state to the surface of a plant seed, and then the coating agent is dried.
11…水
12…コーティング基剤
13…コーティング基剤液
14…菌体懸濁液
15…コーティング剤
16…種子
17…コーティング種子
11...
Claims (11)
前記種子の表面に形成された、光合成細菌の菌体とコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するコーティング種子。 Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing photosynthetic bacteria and a coating base;
The coated seeds have
前記種子の表面に形成された、光合成細菌由来のリポポリサッカライドとコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するコーティング種子。 Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing a lipopolysaccharide derived from photosynthetic bacteria and a coating base;
The coated seeds have
前記種子の表面に形成された、リピドAとコーティング基剤とを含有するコーティング層と、
を有するコーティング種子。 Plant seeds and
a coating layer formed on the surface of the seed, the coating layer containing lipid A and a coating base;
The coated seeds have
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