JP2024079052A - 痒みの予防又は改善剤 - Google Patents

Abstract

【課題】Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害することにより、痒みの予防又は改善に有用な新たな素材の提供。
【解決手段】リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とするＣ３ａ受容体拮抗剤。
【選択図】なし

Description

本発明は、Ｃ３ａ受容体拮抗剤、痒みの予防又は改善剤、並びに掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤に関する。

痒みはアトピー性皮膚炎などの皮膚疾患だけでなく、腎不全などの内臓疾患においてもみられる病態である。痒みは皮膚の乾燥、日焼け、皮膚と衣類との擦れなどによっても惹起される。痒みによる掻き動作は皮膚を物理的に侵害し、さらなる症状悪化を引き起こすことから、痒みの解決は皮膚疾患の予防又は改善に寄与する。例えば、後肢の爪を切って、掻破動作による皮膚の物理的損傷を抑制したマウスでは、アトピー性皮膚炎による皮膚症状が予防・改善されることが報告されている（非特許文献１）。

皮膚などの末梢組織における痒みの感覚は，末梢と脊髄後角をつなぐ求心性感覚神経により、脳に伝達される。求心性感覚神経の細胞体は後根神経節（ＤＲＧ）に存在していて、細胞体から末梢組織と脊髄後角へ神経線維を伸長している。求心性感覚神経は、皮膚における感覚を受容し、脊髄後角の二次ニューロンに伝達する役割を持つ。

痒みの起痒物質は対応する受容体との結合により痒みを惹起させる。起痒物質としては、ヒスタミン、セロトニン、クロロキンなど、痒み増強物質（感作物質）としてはＩＬ-４やＩＬ－１３などのＴｈ２サイトカインなどが報告されている。なかでも代表的な化学的起痒物質は主に肥満細胞から分泌されるヒスタミンである。最近では、ヒスタミンは基本的に一部の急性の痒みのみに関連し、多くの慢性的な痒みを伴う疾患におけるヒスタミンの関与は乏しいと考えられている（非特許文献２）。そのため、現在、抗ヒスタミン薬（Ｈ１受容体拮抗薬）が痒みを抑える薬として多用されているが、抗ヒスタミン薬で十分な治療効果が得られる痒みはごく限られており、多くの痒み病態は抗ヒスタミン薬により寛解困難な難治性痒みである。ここでいう抗ヒスタミン薬とは、ジフェンヒドラミンなどのＨ１受容体拮抗薬を指す。例えば、抗ヒスタミン薬によるアトピー性皮膚炎及び乾皮症の治療は効果不十分であることが報告されており（非特許文献３～４）、アトピー性皮膚炎、乾皮症などの多くの皮膚疾患、さらに腎不全などの内科疾患に伴う痒みは難治性痒みといわれている。難治性痒みの多くはメカニズムが解明されていなく、メカニズムの解明と新たな標的となる分子の開発が求められている。

一方、リンチトリプト（Ｌｉｎｔｉｔｒｉｐｔ）は、消化管ホルモンの一つであるコレシストキニン（ＣＣＫ）及びガストリンの受容体拮抗剤である。したがって、リンチトリプトはＣＣＫ受容体拮抗作用により、腸管過敏症候群などの腸管運動異常の処置、急性または慢性膵臓炎または膵臓腫瘍の処置のみならず、食欲の制御、アヘン誘導体と組合わせて疼痛治療に用いることができ、ガストリン受容体拮抗作用により、胃潰瘍の予防及び処置、ゾリンゲ－エリゾン症候群の処置、及び幽門のＧ細胞の過形成又は腸結節、胃又は腸の腫瘍の処置に有効であることが報告されている（特許文献１）。

特許第３０３５２５３号公報

Hashimoto Y et al. Life Sciences. 2004 Dec 31;76(7):783-94 Ikoma A et al. Nature Reviews Neuroscience. 2006 Jul;7(7):535-47 J Am Acad Dermatol. 2014 Jul; 71(1): 116-132 Future Oncol. 2018 Oct;14(24):2531-2541 Lewis JE et al. Front Endocrinol (Lausanne). 2015 Feb 2;6:3 Cero C et al Structure. 2014 Dec 2;22(12):1744-1753

本発明者は、先ずアセトン・エーテル混合物及び水処理で乾皮症様の皮膚症状を示すモデルマウス（以下、ＡＥＷモデルマウス）より後根神経節（ＤＲＧ）を採取し、網羅的な遺伝子発現解析を実施したところ、発現変動を示す遺伝子としてＶｇｆを同定した。さらにＡＥＷモデルマウス及びアトピー性皮膚炎モデルマウス（以下、ＡＤモデルマウス）のＤＲＧにおけるＶｇｆ遺伝子の定量的発現解析を実施したところ、コントロールマウスと比較して両モデルマウスにおいて、ＤＲＧ組織のＶｇｆ発現は有意に増加していた（参考例１）。Ｖｇｆは神経分泌因子ＶＧＦ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ（以下、ＶＧＦ）をコードする遺伝子である。ＶＧＦは生体内のプロテアーゼなどで分解を受け、いくつかの生理活性ペプチドを生じることが知られている（非特許文献５）。その一つであるＴＬＱＰ－２１を健常マウスの後頚部皮膚内に注射すると、マウスにおいて掻破行動が惹起され、ＴＬＱＰ－２１は痒みを誘発することを見出した（参考例２）。このＴＬＱＰ－２１皮内投与による掻破行動は、肥満細胞欠損マウスにおいてもみられ、ＴＬＱＰ－２１の痒みの誘発は肥満細胞非依存的な応答であることが示唆された（参考例３）。
ＴＬＱＰ－２１は細胞膜上に存在するＧＰＣＲ型受容体である補体因子Ｃ３ａ受容体に結合し、シグナルを惹起することが知られている（非特許文献６）。そこで、ＡＤモデルマウス及びＡＥＷモデルマウスの作製過程において、並行してＣ３ａ受容体に拮抗する化合物をマウスに継続的に投与すると掻破行動が有意に減少することを確認した。これによりＣ３ａ受容体は痒み抑制の標的となり、ＴＬＱＰ－２１のＣ３ａ受容体への結合を阻害することによって痒みの抑制が可能であることが判明した（参考例４、５）。このＣ３ａ受容体シグナル伝達経路の阻害に基づく痒みの抑制は、従来の方法で有効でなかった痒み病態の解消へ向けた新技術として有用と考えられる。

従って、本発明は、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害することにより、痒みの予防又は改善に有用な新たな素材を提供することに関する。

本発明者は、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害する有効な素材について探索したところ、リンチトリプトにＣ３ａ受容体拮抗作用があることを見出した。
これまでに、リンチトリプトのＣ３ａ受容体及び痒みに対する作用は何ら報告されていない。

すなわち、本発明は、以下の１）～３）に係るものである。
１）リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とするＣ３ａ受容体拮抗剤。
２）リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とする痒みの予防又は改善剤。
３）リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とする掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤。

本発明によれば、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害することで、痒み、及び掻痒性皮膚疾患を予防又は改善することができる。

リンチトリプトのＣ３ａ受容体拮抗作用を示す。 ＡＥＷモデルＤＲＧ組織のＲＮＡ－ｓｅｑ解析結果を示す。 ＡＥＷモデルにおけるＶｇｆ発現量のリアルタイムＰＣＲ解析結果を示す。 ＡＤモデルにおけるＶｇｆ発現量のリアルタイムＰＣＲ解析結果を示す。 ＴＬＱＰ－２１投与後のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの掻痒回数を示す。 ＴＬＱＰ－２１投与後の肥満細胞欠損マウスの掻痒回数を示す。 Ｃ３ａ受容体拮抗剤投与によるＡＤモデルマウスにおける掻痒の改善効果を示す。 Ｃ３ａ受容体拮抗剤投与によるＡＥＷモデルマウスにおける掻痒の改善効果を示す。

本発明において用いられるリンチトリプトは、下記式で表される（２－｛［４－（２－Ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）－１，３－ｔｈｉａｚｏｌ－２－ｙｌ］ｃａｒｂａｍｏｙｌ｝－１Ｈ－ｉｎｄｏｌ－１－ｙｌ）ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＣＡＳ レジストリ―番号：１３６３８１－８５－６）である。

リンチトリプトの薬学的に許容される塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；マグネシウム塩；アルミニウム塩；アンモニウム塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、プロカイン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、コリン塩、エチレンジアミン塩、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）塩、ベネタミン（Ｎ－ベンジルフェネチルアミン）塩、ジエチルアミン塩、ピペラジン塩、トロメタミン（２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－1,3－プロパンジオール）塩などの有機アミン塩、あるいは塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、酸性硫酸塩、燐酸塩、酸性燐酸塩、二水素燐酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、ｐ－トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）などの酸付加塩が挙げられる。

また、リンチトリプトは、プロドラッグにしてもよい。プロドラッグは、生体に投与された後、酵素の作用や代謝的加水分解などにより、医薬的に活性な化合物になる。プロドラッグは、当業者に周知の酸誘導体であればよく、例えば、リンチトリプトと適当なアルコールとの反応によって製造されるエステルや、リンチトリプトと適当なアミンとの反応によって製造されるアミドなどが挙げられるが特に限定されない。

斯かるリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグは、溶媒和物（例えば、水和物など）であっても、無溶媒和物であってもよい。

リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグは、公知の化合物であり、周知の方法により製造すること（前記特許文献１）或いは市販品（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を購入することにより入手することが可能である。

後記実施例に示すように、リンチトリプトは、Ｃ３ａ受容体拮抗作用を示す（図１）。Ｃ３ａ受容体は、補体系活性化に伴い産生されるＣ３ａ及びＴＬＱＰ－２１の受容体である。Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路の阻害により、脳卒中による脳水腫、脳出血を抑制すること（PLoS One. 2017 Jul 10;12(7):e0180822）、ＩｇＧ誘導性の関節炎を軽減すること（J Pharmacol Sci. 2010;112(1):56-63）が報告されている。
さらに、参考例２に示すように、ＶＧＦの分解により生じるＴＬＱＰ－２１を健常マウスの後頚部皮膚内に注射すると、マウスにおいて掻破行動が惹起された（図５）。この結果から、ＴＬＱＰ－２１は痒みを誘発することが明らかになった。ＴＬＱＰ－２１皮内投与による掻破行動は、肥満細胞欠損マウスにおいてもみられたことから（図６）、ＴＬＱＰ－２１の痒みの誘発は肥満細胞非依存的な応答であることが示唆された。
前述したとおり、ＴＬＱＰ－２１はＣ３ａ受容体に結合し、シグナルを惹起することが知られている。そして、Ｃ３ａの受容体に拮抗することが公知の化合物１を、ＡＤモデルマウス及びＡＥＷモデルマウスの作製過程においてマウスに継続的に投与したところ、化合物１を投与したモデルマウスでは掻破行動の有意な減少が認められた（図７及び図８）。この掻破行動の減少は、痒みの鎮静を表わす。このことから、Ｃ３ａ受容体は痒み、特に難治性痒み抑制の標的となることが明らかになった。
従って、リンチトリプトにより、ＴＬＱＰ－２１のＣ３ａ受容体への結合を拮抗的に阻害することによって、痒みの予防又は改善、並びに掻痒性皮膚疾患の予防又は改善が可能となる。
すなわち、リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグ（以下、「本発明の化合物」とも称する）は、Ｃ３ａ受容体拮抗剤、痒みの予防又は改善剤、掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤（以下、「Ｃ３ａ受容体拮抗剤など」とも称す）となり得、またこれらを製造するために使用することができる。また、本発明の化合物は、ヒトを含む動物に適用して、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路の阻害、痒みの予防又は改善、掻痒性皮膚疾患の予防又は改善のために使用することができる。

ここで「使用」は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。

本明細書において、「Ｃ３ａ受容体拮抗作用」とは、ＴＬＱＰ－２１のＣ３ａ受容体を介した作用を阻害することを意味し、例えばＣ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害することが包含される。
「痒み」は、主観的な感覚であり、その原因は特に限定されない。痒みの部位は、例えば、全身、頭皮、顔、背中、腕、手の甲、指、脚などの広い範囲又は特定の部位が挙げられる。
本発明においては、難治性痒みの予防又は改善に適する。
「難治性痒み」とは、抗ヒスタミン薬（Ｈ１受容体拮抗薬）で痒みが解決されない痒みを意味する。難治性痒みとしては、例えば、アトピー性皮膚炎、乾皮症（老人性乾皮症、皮脂欠乏性皮膚炎、皮脂欠乏性湿疹を含む）、接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、貨幣状湿疹、乾癬、痒疹、結節性痒疹、慢性痒疹、類天疱瘡、皮膚筋炎、掻痒症（例えば、慢性肝障害に伴う掻痒症、胆汁うっ滞に伴う掻痒症、慢性腎障害及びその透析治療〔血液透析又は腹膜透析〕に伴う掻痒症、老人性皮膚掻痒症、冬季掻痒症など）、悪性新生物などの疾患における痒みが挙げられる。なかでも、好ましくはアトピー性皮膚炎における痒み、乾皮症における痒み、結節性痒疹における痒み、又は胆汁うっ滞に伴う掻痒症である。

「掻痒性皮膚疾患」とは、痒みを伴う皮膚疾患を意味する。例えば、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、乾皮症（老人性乾皮症、皮脂欠乏性皮膚炎、皮脂欠乏性湿疹を含む）、接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、貨幣状湿疹、乾癬、痒疹、結節性痒疹、慢性痒疹、類天疱瘡、皮膚筋炎などが挙げられる。これらのうち、蕁麻疹を除く皮膚疾患は、難治性痒みを伴う皮膚疾患に該当する皮膚疾患である。本発明においては、前記難治性痒みを伴う皮膚疾患に適する。掻痒性皮膚疾患は、好ましくはアトピー性皮膚炎、乾皮症又は結節性痒疹である。

また、本明細書において「予防」とは、個体における症状の発症の防止又は遅延、あるいは個体の症状の発症の危険性を低下させることをいう。
「改善」とは、症状又は状態の重症化の進行の逆転、防止又は遅延をいう。

本発明のＣ３ａ受容体拮抗剤などは、それ自体、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害するため、痒みを予防又は改善するため、掻痒性皮膚疾患を予防又は改善するための医薬品、医薬部外品、化粧品、食品又は飼料であってもよく、或いは当該医薬品、医薬部外品、化粧品、食品又は飼料に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。

当該医薬品（医薬部外品を含む、以下同じ）は、本発明の化合物を、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害するため、痒みを予防又は改善するため、掻痒性皮膚疾患を予防又は改善するための有効成分として含有する。さらに、該医薬品は、該有効成分の機能が失われない限りにおいて、必要に応じて薬学的に許容される担体、又は他の有効成分、薬効成分などを含有していてもよい。
本発明の化合物を含む医薬品の投与形態は任意であり、経口投与又は非経口投与が挙げられる。経口投与の剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などが挙げられる。非経口投与のための剤形としては、皮膚外用、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、注射、坐剤、吸入、貼付などの各製剤が挙げられる。非経口投与の場合、好適な製剤形態は皮膚外用剤であり、具体的には、軟膏、乳化液、クリーム、乳液、ローション、ジェル、エアゾールなどの形態が挙げられる。

当該化粧品は、本発明の化合物を、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害するため、痒みを予防又は改善するため、掻痒性皮膚疾患を予防又は改善するための有効成分として含有する。さらに、該化粧品は、該有効成分の機能が失われない限りにおいて、必要に応じて化粧料に許容される担体、又は他の有効成分、化粧成分などを含有していてもよい。
本発明の化合物を含む化粧品の好ましい例としては、顔、ボディ用の化粧料（例えば、ローション、ゲル、クリーム、パックなど）、メークアップ用化粧料、顔又はボディ用の洗浄料などが挙げられる。

斯かる医薬品や化粧品の各製剤は、本発明の化合物を、必要に応じて薬学的に又は化粧料に許容される担体、上述した他の有効成分、薬効成分、化粧成分などと組み合わせて、常法に従って製造することができる。
当該薬学的に又は化粧料に許容される担体としては、例えば、賦形剤、希釈剤、結合剤、崩壊剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、ｐＨ緩衝剤、等張化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、分散剤、キレート剤、増粘剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、色素、香料などが挙げられる。
当該他の有効成分、薬効成分、化粧成分としては、例えば、植物抽出物、殺菌剤、保湿剤、抗炎症剤、抗菌剤、角質溶解剤、紫外線吸収剤、清涼剤、抗脂漏剤、洗浄剤、メークアップ成分などが挙げられる。

当該食品は、本発明の化合物を、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害するため、痒みを予防又は改善するため、掻痒性皮膚疾患を予防又は改善するための有効成分として含有する。
食品には、痒みの予防又は改善、或いは掻痒性皮膚疾患の予防又は改善を訴求とし、必要に応じてその旨の表示が許可又は届出された食品（特定保健用食品、機能性表示食品、特別用途食品など）が含まれる。表示の例としては、「肌の不快感（ムズムズ感）を改善する」などがある。機能表示が許可又は届出された食品は、一般の食品と区別することができる。
食品の形態は、固形、半固形又は液状（例えば飲料）であり得る。例としては、各種食品組成物（パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、冷凍食品、アイスクリーム類、あめ類、ふりかけ類、スープ類、乳製品、シェイク、飲料、調味料など）、更には、上述した経口投与製剤と同様の形態（顆粒剤、粉剤、錠剤、カプセル剤、マイクロカプセル剤、トローチ剤などの固形製剤）の栄養補給用組成物が挙げられる。
種々の形態の食品は、本発明の化合物を、任意の食品材料、若しくは他の有効成分、又は食品に許容される添加物（例えば、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、酸味料、甘味料、苦味料、ｐＨ調整剤、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、流動性改善剤、湿潤剤、香科、調味料、風味調整剤）などと適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。

当該飼料は、本発明の化合物を、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路を阻害するため、痒みを予防又は改善するため、掻痒性皮膚疾患を予防又は改善するための有効成分として含有する。
飼料の形態としては、好ましくはペレット状、フレーク状、マッシュ状又はリキッド状であり、例えば、牛、豚、鶏、羊、馬などに用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウスなどに用いる小動物用飼料、犬、猫、小鳥などに用いるペットフードなどが挙げられる。
飼料は、本発明の化合物を、他の飼料材料、例えば、肉類、蛋白質、穀物類、ぬか類、粕類、糖類、野菜、ビタミン類、ミネラル類、ゲル化剤、保型剤、ｐＨ調整剤、調味料、防腐剤、栄養補強剤などと適宜組み合わせて、定法に従って調製することができる。

上記製剤中の本発明の化合物の含有量は、製剤の形態などに応じて異なるため一概には言えないが、例えば製剤の総量を基準として、リンチトリプト換算で、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．００５質量％以上であり、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下である。また、０．００１～８０質量％が好ましく、０．００５～４０量％がより好ましい。

本発明の化合物の投与量又は使用量は、本発明の効果を達成できる量であり得る。当該投与量又は使用量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態、又はその他の要因に従って変動し得るが、錠剤やカプセル剤などの経口の場合には、成人（６０ｋｇ）１人当たり１回、リンチトリプトとして、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上であり、また、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは１００ｍｇ以下である。また、０．１ｍｇ～１０００ｍｇが好ましく、１ｍｇ～１００ｍｇがより好ましい。本発明では斯かる量を１日に１回～複数回に分けて、１日間以上、好ましくは７日間以上、より好ましくは１４日間以上、よりさらに好ましくは４２日間以上、反復・継続して投与又は使用し得る。

本発明のＣ３ａ受容体拮抗剤などを投与又は使用する対象としては、Ｃ３ａ受容体シグナル伝達経路の阻害、痒みの予防又は改善、掻痒性皮膚疾患の予防又は改善を必要とする又は所望するヒトや非ヒト動物が挙げられる。具体的には、難治性痒みを有する又は掻痒性皮膚疾患を患っているヒトや非ヒト動物が挙げられる。非ヒト動物としては、類人猿、その他霊長類、ネコ目動物などの非ヒト哺乳動物などが挙げられる。
また、本発明のＣ３ａ受容体拮抗剤などを投与又は使用する部位としては、皮膚外用剤などの非経口の場合には、痒みを感じる部位であれば特に限定されない。

上述した実施形態に関し、本発明は以下の態様をさらに開示する。

＜１＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とするＣ３ａ受容体拮抗剤。

＜２＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とする痒みの予防又は改善剤。

＜３＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とする掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤。

＜４＞痒みが、好ましくは難治性痒みであり、より好ましくはアトピー性皮膚炎、乾皮症（老人性乾皮症、皮脂欠乏性皮膚炎、皮脂欠乏性湿疹を含む）、接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、貨幣状湿疹、乾癬、痒疹、結節性痒疹、慢性痒疹、類天疱瘡、皮膚筋炎、掻痒症（例えば、慢性肝障害に伴う掻痒症、胆汁うっ滞に伴う掻痒症、慢性腎障害及びその透析治療〔血液透析又は腹膜透析〕に伴う掻痒症、老人性皮膚掻痒症、冬季掻痒症など）、悪性新生物などの疾患における痒みであり、更に好ましくはアトピー性皮膚炎における痒み、乾皮症における痒み、結節性痒疹における痒み、又は胆汁うっ滞に伴う掻痒症である＜２＞記載の痒みの予防又は改善剤。
＜５＞掻痒性皮膚疾患が、好ましくは蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、乾皮症（老人性乾皮症、皮脂欠乏性皮膚炎、皮脂欠乏性湿疹を含む）、接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、貨幣状湿疹、乾癬、痒疹、結節性痒疹、慢性痒疹、類天疱瘡、皮膚筋炎であり、より好ましくはアトピー性皮膚炎又は乾皮症又は結節性痒疹である＜３＞記載の掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤。
＜６＞製剤中のリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの含有量が、製剤の総量を基準として、リンチトリプト換算で、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．００５質量％以上であり、また、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下であり、また、好ましくは０．００１～８０質量％、より好ましくは０．００５～４０質量％である＜１＞～＜５＞のいずれかに記載の剤。
＜７＞医薬品製剤である＜１＞～＜６＞のいずれかに記載の剤。
＜８＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの投与量又は使用量が、経口の場合には、成人（６０ｋｇ）１人当たり１回、リンチトリプトとして、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１ｍｇ以上であり、また、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは１００ｍｇ以下であり、また、好ましくは０．１ｍｇ～１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ～１００ｍｇである＜１＞～＜７＞のいずれかに記載の剤。

＜９＞Ｃ３ａ受容体拮抗剤を製造するためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの使用。
＜１０＞Ｃ３ａ受容体拮抗に使用するためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグ。
＜１１＞Ｃ３ａ受容体拮抗のためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの非治療的使用。
＜１２＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを対象に投与又は適用する、Ｃ３ａ受容体拮抗方法。

＜１３＞痒みの予防又は改善剤を製造するためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの使用。
＜１４＞痒みの予防又は改善に使用するためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグ。
＜１５＞痒みの予防又は改善のためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの非治療的使用。
＜１６＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを対象に投与又は適用する、痒みの予防又は改善方法。
＜１７＞痒みが、好ましくは難治性痒みであり、より好ましくはアトピー性皮膚炎、乾皮症（老人性乾皮症、皮脂欠乏性皮膚炎、皮脂欠乏性湿疹を含む）、接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、貨幣状湿疹、乾癬、痒疹、結節性痒疹、慢性痒疹、類天疱瘡、皮膚筋炎、掻痒症（例えば、慢性肝障害に伴う掻痒症、胆汁うっ滞に伴う掻痒症、慢性腎障害及びその透析治療〔血液透析又は腹膜透析〕に伴う掻痒症、老人性皮膚掻痒症、冬季掻痒症など）、悪性新生物などの疾患における痒みであり、更に好ましくはアトピー性皮膚炎における痒み、乾皮症における痒み、結節性痒疹における痒み、又は胆汁うっ滞に伴う掻痒症である＜１３＞記載の使用、＜１４＞記載のリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグ、＜１５＞記載の非治療的使用、あるいは＜１６＞記載の方法。

＜１８＞掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤を製造するためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの使用。
＜１９＞掻痒性皮膚疾患の予防又は改善に使用するためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグ。
＜２０＞掻痒性皮膚疾患の予防又は改善のためのリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグの非治療的使用。
＜２１＞リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを対象に投与又は適用する、掻痒性皮膚疾患の予防又は改善方法。
＜２２＞掻痒性皮膚疾患が、好ましくは蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、乾皮症（老人性乾皮症、皮脂欠乏性皮膚炎、皮脂欠乏性湿疹を含む）、接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、貨幣状湿疹、乾癬、痒疹、結節性痒疹、慢性痒疹、類天疱瘡、皮膚筋炎であり、より好ましくはアトピー性皮膚炎、乾皮症又は結節性痒疹である＜１８＞記載の使用、＜１９＞記載のリンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグ、＜２０＞記載の非治療的使用、＜２１＞記載の方法。

実施例１ リンチトリプトのＣ３ａ受容体拮抗作用
１．Ｃ３ａ受容体リガンド
マウスＴＬＱＰ－２１（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、配列：ＴＬＱＰＰＡＳＳＲＲＲＨＦＨＨＡＬＰＰＡＲ、以下同じ）及びヒトＣ３ａリコンビナントタンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社）を使用した。溶媒はＨＢＳＳ（Ｇｉｂｃｏ社）とした。

２．評価サンプル
Ｃ３ａ受容体拮抗剤（アンタゴニスト）として、既報（Rowley, J. A. et al. Journal of Medicinal Chemistry, 2020;63(2):529-541）に基づいて合成した化合物１（Ｌ－アルギニン, Ｎ２－［［５－（ジフェニルメチル）－２－チエニル]カルボニル]）とリンチトリプト（Ｌｉｎｔｉｔｒｉｐｔ；Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を使用した。下記の評価に際して、化合物１及びリンチトリプトはＤＭＳＯで溶解し、適宜ＨＢＳＳで希釈した。

３．Ｃ３ａ受容体応答評価用細胞
以下に従って評価に必要な発現ベクターを導入した、ヒト胎児腎細胞２９３（Ｈｕｍａｎ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｋｉｄｎｅｙ ｃｅｌｌｓ ２９３：ＨＥＫ２９３）を使用した。無血清ＤＭＥＭ培地に対し、ヒトＣ３ａ受容体発現ベクター（ＯｒｉＧｅｎｅ社）、ＧＮＡ１６発現ベクター、ＰＥＩ－ＭＡＸ（ＰｏｌｙＳｃｉｅｎｃｅ社）溶液を順次添加して良く混和させた後に室温で２０分間放置し、トランスフェクション溶液を調製した。６ウェル細胞培養プレートに播種したＨＥＫ２９３に、調製したトランスフェクション溶液を添加し、２４時間以上培養してＨＥＫ２９３に発現ベクターを導入した。培養後、培地を除去し、ＰＢＳで１回洗浄し、０.０５％Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ社）で細胞を剥離し、以下のＣａ^２＋－ｆｌｕｘ ａｓｓａｙに供した。なお、ヒトＧＮＡ１６発現ベクターは、米国生物工学情報センターが提供する塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ）によって参照されるヒトＧＮＡ１６のｃＤＮＡ配列（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ６３９０４．１）と相同な配列を、プラスミドベクターｐＩＲＥＳｎｅｏ３（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）に挿入することで作製した。

４．Ｃａ^２＋－ｆｌｕｘ ａｓｓａｙ
ＢｉｏＣｏａｔ(登録商標) Ｐｏｌｙ－Ｄ－Ｌｙｓｉｎｅ ９６－ｗｅｌｌ Ｂｌａｃｋ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ（ＣＯＲＮＩＮＧ社）に、前記のＣ３ａ受容体応答評価用細胞を播種した。Ｃ３ａ受容体刺激時の細胞内Ｃａ^２＋濃度の測定は、Ｃａｌｃｉｕｍ Ｋｉｔ－Ｆｌｕｏ４（ＤＯＪＩＮＤＯ社）を用いた。キットのマニュアルに従って調製したＬｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを添加し、３７℃で１時間静置することでＣａ^２＋蛍光指示薬Ｆｌｕｏ－４を細胞内へ取り込ませた。ＨＢＳＳで１回洗浄後、Ｃ３ａ受容体アンタゴニストである化合物１又はリンチトリプトを溶解したＲｅｃｏｒｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを添加した。尚、コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）にはＲｅｃｏｒｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを添加した。１５分経過後にＣ３ａ受容体リガンド溶液（マウスＴＬＱＰ－２１溶液又はヒトＣ３ａリコンビナントタンパク質溶液）を添加してＣ３ａ受容体刺激を行い、刺激に伴うＣａ^２＋の流入を細胞内蛍光強度（Ｅｘ：４８０ｎｍ、Ｅｍ：５４０ｎｍ）として経時的に測定し、Ｃ３ａ受容体リガンド溶液に代えてＨＢＳＳを添加した測定値（ブランク）を減算した値を測定値とした。尚、化合物１溶液及びリンチトリプト、マウスＴＬＱＰ－２１、ヒトＣ３ａリコンビナントタンパク質溶液は、蛍光強度測定時の終濃度が、それぞれ１μＭ及び１０μＭ、 １μＭ、３００ｎＭとなるように適宜希釈して濃度を調整して添加した。Ｃ３ａ受容体応答評価用細胞へのＣ３ａ受容体アンタゴニスト溶液及びＣ３ａ受容体リガンド溶液の添加、並びに蛍光強度の測定は、自動分注機能を備えた蛍光プレートリーダー（ＦＤＳＳ／μＣＥＬＬ、浜松ホトニクス社）を用いて、Ｃ３ａ受容体リガンド溶液添加後３分間経時的に実施した。コントロールにおいて測定された蛍光強度の積分値を１００％とした際、リンチトリプトにおける蛍光強度の積算値（％）を算出した結果を図１に示す。
図１に示すように、コントロールで測定されたＣ３ａ受容体リガンドによるＣ３ａ受容体刺激による蛍光強度が、化合物１又はリンチトリプトの添加により抑制されており、リンチトリプトがＣ３ａ受容体拮抗剤としての作用を有することが示された。

参考例１ 網羅的遺伝子発現解析
１．実験動物
動物は雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスおよび雄性ＮＣ／Ｎｇａマウスを使用した。
乾皮症モデル（ＡＥＷモデル）：毛刈りしたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス皮膚にアセトンおよびジエチルエーテルの１：１（ｖ／ｖ）混合液を浸み込ませた脱脂綿を当て、１５秒間静置した。その後直ちに水を浸み込ませた脱脂綿を３０秒間当てた。この処置を２回／日（朝・夕）で７日間繰り返し実施することでＡＥＷモデルマウスを作製した。対照として、水を浸み込ませた脱脂綿のみを３０秒当てたコントロールマウスを作製した。各群ｎ＝７を本解析に使用した。

アトピー性皮膚炎モデル（ＡＤモデル）：ＮＣ／Ｎｇａマウスにハツカネズミケモチダニ（M. musculi）を寄生させ、自然発症的に皮膚炎を生じさせることでＡＤモデルとした。コントロールマウスとして、ダニ寄生のないＳＰＦで飼育された同系統のマウスを使用した。各群ｎ＝８を本解析に使用した。

２．ｔｏｔａｌ ＲＮＡの精製
マウス頸椎より後根神経節を摘出した。摘出した組織はポリトロンホモジナイザーによりホモジナイズし、ＱＩＡＧＥＮ社のＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔを用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを精製した。

３．遺伝子発現解析
ＲＮＡ－ｓｅｑ：ＡＥＷモデルマウス及びそのコントロールマウスから精製したｔｏｔａｌＲＮＡを用いた。逆転写にはＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ（Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用し、以降の処理は、Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社のＩｏｎ ＡｍｐｌｉＳｅｑ標準プロトコルに則った。シーケンスはＩｏｎ Ｓ５ ｓｙｓｔｅｍを使用した。結果を図２に示す。図２に示すように、ＡＥＷモデルにおいて、一定シーケンス量当たりのＶｇｆ発現は、コントロールマウスと比較してＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔによりｐ＜０．０５で、有意に増加していた。

リアルタイムＰＣＲ：ＡＥＷモデルマウス、ＡＤモデルマウス及びそれらのコントロールマウスから精製したｔｏｔａｌ ＲＮＡを用い、Ｖｇｆを目的遺伝子として特異的なＴａｑＭａｎ ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓを用いたＲｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ ＳｙｓｔｅｍによりＶｇｆ遺伝子の定量的ＰＣＲ解析を行った。内部標準として、Ｒｐｌｐ０を使用した。図３及び図４に、コントロールマウスのＶｇｆ遺伝子発現量を１としたＶｇｆ遺伝子の相対的発現量を示す。

図３に示すように、ＡＥＷモデルマウスにおいてＤＲＧ組織のＶｇｆ発現量は、コントロールマウスと比較して有意に増加していた。また、図４に示すように、ＡＤモデルマウスにおいてもＤＲＧ組織のＶｇｆ発現量は、コントロールマウスと比較して有意に増加していた。

参考例２ ＴＬＱＰ－２１による掻痒発現
１．実験動物
マウスは雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用した。

２．メディエーター候補分子の投与
マウスＴＬＱＰ－２１（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）は１５ｎｍｏｌ/２０μＬ、３０ｎｍｏｌ/２０μＬとなるように調製した。溶媒は生理食塩水とした。これを毛刈りしたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの後頚部皮内に２０μＬ投与した。注射後のマウスは直ちに掻破行動測定を開始し、開始後３０分間の測定値を解析した。

３．掻破行動の測定
ＴＬＱＰ－２１投与後の掻破行動の測定にはＭｉｃｒｏＡｃｔ（ニューロサイエンス社）を使用した。結果を図５に示す。連続した一回の掻き動作の合計値をＥｖｅｎｔｓと表記し、その中の掻き動作回数の合計値をＢｅａｔｓとして表記した。

図５に示すように、ＴＬＱＰ－２１投与後にマウスの掻破行動の増加が、ＥｖｅｎｔｓとＢｅａｔｓの有意な増加として観察された。掻破行動の発現は３０分以内の即時的反応であった。

参考例３ 肥満細胞欠損マウスにおけるＴＬＱＰ－２１依存的掻痒発現
１．実験動物
マウスは肥満細胞欠損マウスとしてＷＢＢ６Ｆ１／Ｋｉｔ－Ｋｉｔ ^Ｗ ／Ｋｉｔ ^Ｗ－ｖ 系統、野生型対照マウスとしてＷＢＢ６Ｆ１＋／＋系統を使用した。いずれも雄性マウスを使用した。

２．メディエーター分子の投与
マウスＴＬＱＰ－２１（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）は２０ｎｍｏｌ／２０μＬとなるように調製した。溶媒は生理食塩水とした。これを毛刈りしたＷＢＢ６Ｆ１／Ｋｉｔ－Ｋｉｔ ^Ｗ ／Ｋｉｔ ^Ｗ－ｖ 系統およびＷＢＢ６Ｆ１＋／＋系統の後頚部皮内に２０μＬ投与した。注射後のマウスは直ちに掻破行動測定を開始し、開始後３０分間の測定値を解析した。

３．掻破行動の測定
ＴＬＱＰ－２１投与後の掻破行動の測定にはＭｉｃｒｏＡｃｔ（ニューロサイエン社ス）を使用した。結果を図６に示す。連続した一回の掻き動作の合計値をＥｖｅｎｔｓと表記した。

図６に示すように、肥満細胞欠損マウス、野生型対照マウスのいずれの系統においてもＴＬＱＰ－２１投与によるマウスの掻破行動の増加が観察された。

参考例４ Ｃ３ａ受容体拮抗剤によるＡＤモデルマウスの痒み改善
１．実験動物
７週齢の雌性ＮＣ／Ｎｇａマウスを使用した。
ＡＤモデルマウスの作製：頸背部の剃毛を行い、イソフルラン麻酔下でダニアレルゲン配合軟膏：ビオスタＡＤ（ビオスタ社）を頸背部及び耳介部に１００ｍｇ塗布し、初回感作を行った。１回目のダニアレルゲン配合軟膏塗布から４日後、イソフルラン麻酔下で頸背部及び耳介部に１５０μＬの４％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ水溶液及びダニアレルゲン配合軟膏を１００ｍｇ塗布した。以後、３～４日に１回の頻度で同様の作業を４回行い、ＡＤ様皮膚炎を誘導した。

２．サンプル調製及び投与方法
Ｃ３ａ受容体拮抗剤（アンタゴニスト）として、前記実施例１でＣ３ａ受容体拮抗作用が確認された化合物１を使用した。化合物１を２０％ポリエチレングリコール４００を含む生理食塩水で溶解し、２００μＬを頸背部に皮下投与した。コントロール群には前記溶媒のみを同量投与した。Ｃ３ａ受容体拮抗剤（アンタゴニスト）溶液の濃度は、０．５ｍｇ/ｍＬと設定した。サンプル投与は２回目のダニアレルゲン配合軟膏塗布日から開始し、週３回実施した。

３．掻破行動の測定
最後のダニアレルゲン配合軟膏塗布から４日後、サンプルの最終投与後に３時間の掻破行動測定を行った。掻破行動の測定にはＭｉｃｒｏＡｃｔ（ニューロサイエンス社）を使用した。結果を図７に示す。

図７に示すように、Ｃ３ａ受容体拮抗作用が確認された化合物１をダニアレルゲンの塗布と並行して投与したＡＤモデルマウスでは、溶媒のみを投与したＡＤモデルマウスと比較して掻破行動の有意な減少が認められた。

参考例５ Ｃ３ａ受容体拮抗剤によるＡＥＷモデルマウスの痒み改善
１．実験動物
動物は雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用した。
ＡＥＷモデルの作製：頸背部の剃毛を行い、アセトンおよびジエチルエーテルの１：１（ｖ／ｖ）混合液を浸み込ませた脱脂綿を当て、１５秒間静置した。その後直ちに水を浸み込ませた脱脂綿を３０秒間当てた。この処置を２回／日（朝・夕）で７日間繰り返し実施した。

２．サンプル調製及び投与方法
Ｃ３ａ受容体拮抗剤（アンタゴニスト）として、前記実施例１でＣ３ａ受容体拮抗作用が確認された化合物１を使用した。化合物１を２０％ポリエチレングリコール４００を含む生理食塩水で溶解し、２００μＬを頸背部に皮下投与した。コントロール群には前記溶媒のみを同量投与した。Ｃ３ａ受容体拮抗剤（アンタゴニスト）溶液の濃度は０．５ｍｇ/ｍＬと設定した。サンプル投与は１回目のＡＥＷ処置後から開始し、１日１回の頻度で８日間実施した。

３．掻破行動の測定
最後のＡＥＷ処置から１６時間後、サンプルの最終投与後に３時間の掻破行動測定を行った。掻破行動の測定にはＭｉｃｒｏＡｃｔ（ニューロサイエンス社）を使用した。結果を図８に示す。

図８に示すように、Ｃ３ａ受容体拮抗作用が確認された化合物１をＡＥＷ処置と並行して投与したＡＥＷモデルマウスでは、溶媒のみを投与したＡＥＷモデルマウスと比較して掻破行動の有意な減少が認められた。

Claims (6)

1. リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とするＣ３ａ受容体拮抗剤。
2. リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とする痒みの予防又は改善剤。
3. 痒みが難治性痒みである請求項２記載の痒みの予防又は改善剤。
4. 痒みがアトピー性皮膚炎における痒み、乾皮症における痒み、結節性痒疹における痒み、又は胆汁うっ滞に伴う掻痒症である請求項２又は３記載の痒みの予防又は改善剤。
5. リンチトリプト、その薬学的に許容される塩、又はそのプロドラッグを有効成分とする掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤。
6. 掻痒性皮膚疾患がアトピー性皮膚炎、乾皮症又は結節性痒疹である請求項５記載の掻痒性皮膚疾患の予防又は改善剤。