JP2023504271A

JP2023504271A - Ｐｄ－ｌ１に対する抗体およびその使用方法

Info

Publication number: JP2023504271A
Application number: JP2022532766A
Authority: JP
Inventors: ウェインエイ．マラスコ; マシューチャン
Original assignee: デイナファーバーキャンサーインスティチュート，インコーポレイテッド
Priority date: 2019-12-02
Filing date: 2020-12-02
Publication date: 2023-02-02
Also published as: EP4069294A4; AU2020396896A1; CA3159308A1; WO2021113307A3; US20230127123A1; WO2021113307A2; EP4069294A2

Abstract

本発明は、細胞表面受容体ＰＤＬ－１（プログラムデスリガンド１）に結合するヒトモノクローナル抗体を対象とする。この抗体は、がんおよび慢性ウイルス感染症を治療するために使用することができる。TIFF2023504271000049.tif146170

Description

本出願は、２０１９年１２月２日に出願された米国仮特許出願第６２／９４２，４５５号の優先権の利益を主張する国際出願であり、それらの各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書に引用されるすべての特許、特許出願、および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載され特許請求される本発明の日付の当業者に既知の最新技術をより完全に記載するために、これらの刊行物の開示は、参照により本出願に組み込まれる。

本特許開示は、著作権保護の対象となる、材料を含む。著作権所有者は、米国特許商標局の特許ファイルまたは記録に表れているように、特許文書または特許開示のいずれかによってファクシミリ複製に異議はないが、それ以外では、何であれすべての著作権を留保する。

政府の権益
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された助成金番号１Ｒ５６ＡＩ１０９２２３－０１Ａ１に基づく政府の支援を受けて行われた。政府は、本発明に一定の権利を有する。

発明の分野
本発明は、ＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死１リガンド１、またはＢ７Ｈ１としても知られている）に対する抗体およびその使用方法を対象とする。

発明の背景
プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）は、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面膜タンパク質である。このタンパク質はプロＢ細胞で発現し、それらの分化に役割を果たすと考えられている。ＣＤ２８ファミリーのメンバーであるＰＤ－１は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、および単球でアップレギュレーションされる。ＰＤ－１には、Ｂ７ファミリーの２つの同定されたリガンド、すなわちＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死－１リガンド１、分化クラスター２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）としても知られている）およびＰＤ－Ｌ２が存在する。ＰＤ－Ｌ１は、４０ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１またはＢ７．１への結合は、リンパ節でのＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を低減させる抑制性シグナルを伝達する。ＰＤ－Ｌ２の発現はより制限される傾向があり、主に活性化された抗原提示細胞（ＡＰＣ）に見られる一方で、ＰＤ－Ｌ１の発現は、造血系細胞（活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、単球、樹状細胞およびマクロファージを含む）ならびに末梢非リンパ組織（心臓、骨格、筋肉、胎盤、肺、腎臓および肝臓組織を含む）など、広範囲に及ぶ。ＰＤ－Ｌ１の広範な発現は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を介した末梢性免疫寛容の調節におけるその重要な役割を示す。

本発明の一態様は、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に結合する単離されたモノクローナル抗体を対象とする。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に結合するその抗原結合断片であり得る。他の実施形態では、抗体または断片は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含み得る。一実施形態では、重鎖は、Ｇ－（Ｘ１）－Ｔ－（Ｘ２）－ＳＳ－（Ｘ３Ｘ４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、Ｇ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）またはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号２０７）を含むＣＤＲ２、および／またはＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、またはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、軽鎖は、ＳＧＳＩＤＳＮＹ（配列番号１８）、Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）、またはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、ＥＤＮ（配列番号２０）、（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、またはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／またはＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、またはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、完全にヒトの抗体であるか、またはヒト化されている。他の実施形態では、抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性である。さらなる実施形態では、抗体は、単鎖抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも３．３×１０－９Ｍの結合親和性を有する。実施形態において、抗体または断片は、重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、またはそれらの組み合わせをさらに含み得る。実施形態において、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、非極性アミノ酸残基である。他の実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、疎水性アミノ酸残基、例えば、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_３は、親水性極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_３が、ヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_１は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、またはチロシン（Ｙ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_２は、フェニルアラニン（Ｆ）またはロイシン（Ｌ）である。他の実施形態では、Ｘ_３は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。さらに別の実施形態では、Ｘ_４は、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）、またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。他の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、極性親水性アミノ酸残基である。さらに別の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、ヒスチジン（Ｈ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_８は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、またはセリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_９は、チロシン（Ｙ）、セリン（Ｓ）、プロリン（Ｐ）、またはアラニン（Ａ）。一実施形態では、Ｘ_１０は、チロシン（Ｙ）、アスパラギン酸（Ｄ）、イソロイシン（Ｉ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。一実施形態では、Ｘ_１１は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、アスパラギン（Ｎ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。一実施形態では、Ｘ_１２は、イソロイシン（Ｉ）、アルギニン（Ｒ）、スレオニン（Ｔ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_５は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_５は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である。さらなる実施形態において、Ｘ_６は、非極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、チロシン（Ｙ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_７、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１９、Ｘ_２０、またはＸ_２１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１８、Ｘ_１９、またはＸ_２１は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１４、またはＸ_２１は、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１３は、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_１５は、プロリン（Ｐ）である。一実施形態では、Ｘ_１５、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、セリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、スレオニン（Ｔ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、イソロイシン（Ｉ）。一実施形態では、Ｘ_１８は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、グリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、アスパラギン酸（Ｄ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、アラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、グルタミン酸（Ｅ）である。

本発明の一態様は、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合し、かつ（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３、または（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含む単離された抗体またはその断片を対象とする。いくつかの実施形態において、配列番号４８のＸ_５は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_５は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である。さらなる実施形態において、配列番号４９のＸ_６は、非極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、チロシン（Ｙ）である。いくつかの実施形態において、Ｘ_６は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、またはアルギニン（Ｒ）である。いくつかの実施形態において、配列番号５０のＸ_７は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_７は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７は、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である。いくつかの実施形態において、ＶＬＣＤＲ１は、配列番号２６、３３、４０、または４４のアミノ酸配列を含む。実施形態では、ＶＬＣＤＲ２は、配列番号２８、３５、または４５のアミノ酸配列を含む。実施形態において、ＶＬＣＤＲ３は、配列番号３０、または３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の（ｂ）の抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３０を含むＶＬＣＤＲ３を含むか、または配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含むか、または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含むか、または配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含む。

本発明の一態様は、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合し、かつ配列番号１６、５２、５４、５６、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、および８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２４、３１、３８、４２、４６、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、および８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗体またはその断片を対象とする。

本発明の一態様は、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合し、かつ配列番号２、１０、８４、８５、８６、８７、８８、８９、および９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号４、１２、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、および９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および／もしくは配列番号６、１４、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、および１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または配列番号１８、２６、３３、４０、４４、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、および１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号２０、２８、３５、４５、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、および１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、および／もしくは配列番号２２、３０、３７、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、および１３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３を含む単離された抗体またはその断片を対象とする。

本発明の一態様は、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合する、単離された抗体またはその断片であって、この抗体が、（ａ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡ（配列番号２）、ＩＩＰＩＦＧＴＡ（配列番号４）、およびＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＤＳＮＹ（配列番号１８）、ＥＤＮ（配列番号２０）、およびＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｂ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＲ（配列番号２８）、およびＱＶＷＤＳＧＳＤＨＷＶ（配列番号３０）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｃ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＤＫＧ（配列番号３３）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｄ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＮＫＧ（配列番号４０）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｅ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＧＫＧ（配列番号４４）、ＤＤＹ（配列番号４５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｆ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＥＳＲＳ（配列番号１０８）、ＤＤＴ（配列番号１１８）、およびＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｇ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｈ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＳ（配列番号１０９）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｉ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｊ）それぞれアミノ酸配列ＤＦＡＦＳＳＡＷ（配列番号８４）、ＩＫＳＫＴＤＧＥＴＴ（配列番号９１）、およびＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＳＮＩＧＳＮＹ（配列番号１１０）、ＲＮＮ（配列番号１１９）、およびＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｋ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号８５）、ＴＳＰＨＮＧＬＴ（配列番号９２）、およびＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＡＳＮＹ（配列番号１１１）、ＥＤＮ（配列番号２０）、およびＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｌ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＲＹＡ（配列番号８６）、ＩＩＰＩＦＧＲＡ（配列番号９３）、およびＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＡＳＮＹ（配列番号１１１）、ＡＤＮ（配列番号１２０）、およびＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｍ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＳ（配列番号１０９）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｎ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号８５）、ＩＳＡＹＮＧＨＡ（配列番号９４）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＲＳＤＨＷＶ（配列番号１３０）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｏ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡ（配列番号８７）、ＩＩＰＩＦＧＴＡ（配列番号９５）、およびＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＲＳＮＩＧＳＮＹ（配列番号１１２）、ＳＮＮ（配列番号１２１）、およびＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｐ）それぞれアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＡ（配列番号８８）、ＩＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号９６）、およびＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＩＮＶＧＴＹＲ（配列番号１１３）、ＹＫＳＤＳＤＫ（配列番号１２２）、およびＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｑ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＦＳＳＹＧ（配列番号８９）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＧＫＳ（配列番号１１４）、ＤＤＲ（配列番号２８）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｒ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＲ（配列番号２８）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｓ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡ（配列番号８７）、ＩＩＰＩＬＧＩＡ（配列番号９７）、およびＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＧＲＶ（配列番号１１５）、ＤＤＴ（配列番号１２３）、およびＱＶＷＤＳＲＳＤＨＰＶ（配列番号１３３）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、（ｔ）それぞれアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＳ（配列番号９０）、ＩＩＳＤＧＳＡＴ（配列番号９８）、およびＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＬＲＳＹＹ（配列番号１１６）、ＧＫＮ（配列番号１２４）、およびＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、または（ｕ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＲＹＡ（配列番号８６）、ＩＩＰＩＦＧＲＡ（配列番号９３）、およびＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＡＳＨＦ（配列番号１１７）、ＧＤＤ（配列番号１２５）、およびＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、を含む、単離された抗体またはその断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖が、配列番号８と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号２４と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号３１と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号３８と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号４２と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号４６と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖が、配列番号５２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５３と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）重鎖が、配列番号５４と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５５と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）重鎖が、配列番号５６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５７と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号５９と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）重鎖が、配列番号６０と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号６１と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）重鎖が、配列番号６２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号６３と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｇ）重鎖が、配列番号６４と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号６５と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｈ）重鎖が、配列番号６６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号６７と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）重鎖が、配列番号６８と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号６９と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｊ）重鎖が、配列番号７０と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号７１と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｋ）重鎖が、配列番号７２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号７３と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｌ）重鎖が、配列番号７４と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号７５と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｍ）重鎖が、配列番号７６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号７７と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｎ）重鎖が、配列番号７８と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号７９と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｏ）重鎖が、配列番号８０と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号８１と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、または
（ｐ）重鎖が、配列番号８２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号８３と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、
単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の一態様は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、抗体または断片が、
（ａ）配列番号８を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号２４を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号３１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号３８を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号４２を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号４６を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号５２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号５４を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５５を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｈ）配列番号５６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５７を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｉ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５９を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｊ）配列番号６０を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｋ）配列番号６２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｌ）配列番号６４を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６５を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｍ）配列番号６６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６７を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｎ）配列番号６８を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６９を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｏ）配列番号７０を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｐ）配列番号７２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｑ）配列番号７４を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７５を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｒ）配列番号７６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７７を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｓ）配列番号７８を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７９を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｔ）配列番号８０を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号８１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、または
（ｕ）配列番号８２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号８３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の抗体の断片と、免疫細胞上の分子に特異性を有する第２の抗原結合断片とを含む、単離された二重特異性抗体を対象とする。いくつかの実施形態では、免疫細胞上の分子は、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＣＤ１２２、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＬＡＧ－３、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ－４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、およびＫＩＲからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、断片および第２の断片のそれぞれが、独立して、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から選択される。さらなる実施形態において、単離された二重特異性抗体は、Ｆｃ断片をさらに含む。

本発明の態様は、本明細書に記載の抗体をコードする核酸を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の抗体をコードする核酸を含むベクターを対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性抗体をコードする核酸を含むベクターを含む細胞を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性抗体をコードする核酸を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性抗体をコードする核酸を含むベクターを対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の抗体または本明細書に記載の断片、ならびに薬学的に許容される担体または賦形剤を含む薬学的組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、少なくとも１つの追加的な治療用物質をさらに含む。他の実施形態では、治療用物質は、毒素、放射性標識、ｓｉＲＮＡ、小分子、またはサイトカインである。

本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性抗体、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む薬学的組成物を対象とする。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、少なくとも１つの追加的な治療用物質をさらに含む。他の実施形態では、治療用物質は、毒素、放射性標識、ｓｉＲＮＡ、小分子、またはサイトカインである。

本発明の態様は、本明細書に記載の抗体またはその断片をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性抗体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載の少なくとも１つの抗体；組成物対象に少なくとも１つの抗体を投与するための注射器、針、またはアプリケーター；および使用説明書、を含む、キットを対象とする。

本発明の一態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を対象とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、胞細内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であり、モノクローナル抗体またはその断片は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｇ－（Ｘ１）－Ｔ－（Ｘ２）－ＳＳ－（Ｘ３Ｘ４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、Ｇ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）またはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号２０７）を含むＣＤＲ２、および／またはＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、またはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、軽鎖は、ＳＧＳＩＤＳＮＹ（配列番号１８）、Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）、またはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、ＥＤＮ（配列番号２０）、（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、またはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／またはＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、またはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの抗体は、完全にヒトの抗体であるか、またはヒト化されている。他の実施形態では、ＣＡＲの抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性である。さらなる実施形態では、ＣＡＲの抗体は、単鎖抗体である。実施形態において、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、非極性アミノ酸残基である。他の実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、疎水性アミノ酸残基、例えば、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_３は、親水性極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_３が、ヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_１は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、またはチロシン（Ｙ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_２は、フェニルアラニン（Ｆ）またはロイシン（Ｌ）である。他の実施形態では、Ｘ_３は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。さらに別の実施形態では、Ｘ_４は、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）、またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。他の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、極性親水性アミノ酸残基である。さらに別の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、ヒスチジン（Ｈ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_８は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、またはセリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_９は、チロシン（Ｙ）、セリン（Ｓ）、プロリン（Ｐ）、またはアラニン（Ａ）。一実施形態では、Ｘ_１０は、チロシン（Ｙ）、アスパラギン酸（Ｄ）、イソロイシン（Ｉ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。一実施形態では、Ｘ_１１は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、アスパラギン（Ｎ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。一実施形態では、Ｘ_１２は、イソロイシン（Ｉ）、アルギニン（Ｒ）、スレオニン（Ｔ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_５は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_５は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_６は、非極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、チロシン（Ｙ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_６は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１９、Ｘ_２０、またはＸ_２１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１８、Ｘ_１９、またはＸ_２１は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１４、またはＸ_２１は、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１３は、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_１５は、プロリン（Ｐ）である。一実施形態では、Ｘ_１５、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、セリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、スレオニン（Ｔ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、イソロイシン（Ｉ）。一実施形態では、Ｘ_１８は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、グリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、アスパラギン酸（Ｄ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、アラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、グルタミン酸（Ｅ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間に配置されたストーク領域をさらに含む。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に配置された１つ以上の追加の共刺激分子をさらに含む。さらなる実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖を含む。他の実施形態では、ＣＡＲの抗体は、ＦａｂまたはｓｃＦＶである。

本発明の態様は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を対象とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、細胞内シグナル伝達ドメインの後に配置されたポリペプチドをコードする核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、抗体、サイトカインである。他の実施形態では、抗体は、ｓｃＦＶである。

本発明の態様は、ＣＡＲをコードする核酸を対象とする。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインの後に配置されたポリペプチドをコードする核酸をさらに含み、ポリペプチドが、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含み、モノクローナル抗体またはその断片が、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｇ－（Ｘ１）－Ｔ－（Ｘ２）－ＳＳ－（Ｘ３Ｘ４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、Ｇ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）またはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号２０７）を含むＣＤＲ２、および／またはＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、またはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、軽鎖は、ＳＧＳＩＤＳＮＹ（配列番号１８）、Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）、またはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、ＥＤＮ（配列番号２０）、（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、またはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／またはＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、またはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗体は、完全にヒトの抗体であるか、またはヒト化されている。他の実施形態では、ＣＡＲの抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性である。さらなる実施形態では、ＣＡＲの抗体は、単鎖抗体である。実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、非極性アミノ酸残基である。他の実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、疎水性アミノ酸残基、例えば、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_３は、親水性極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_３が、ヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_１は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、またはチロシン（Ｙ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_２は、フェニルアラニン（Ｆ）またはロイシン（Ｌ）である。他の実施形態では、Ｘ_３は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。さらに別の実施形態では、Ｘ_４は、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）、またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。他の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、極性親水性アミノ酸残基である。さらに別の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、ヒスチジン（Ｈ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_８は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、またはセリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_９は、チロシン（Ｙ）、セリン（Ｓ）、プロリン（Ｐ）、またはアラニン（Ａ）。一実施形態では、Ｘ_１０は、チロシン（Ｙ）、アスパラギン酸（Ｄ）、イソロイシン（Ｉ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。一実施形態では、Ｘ_１１は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、アスパラギン（Ｎ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。一実施形態では、Ｘ_１２は、イソロイシン（Ｉ）、アルギニン（Ｒ）、スレオニン（Ｔ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_５は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_５は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_６は、非極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、チロシン（Ｙ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_６は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１９、Ｘ_２０、またはＸ_２１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１８、Ｘ_１９、またはＸ_２１は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１４、またはＸ_２１は、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１３は、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_１５は、プロリン（Ｐ）である。一実施形態では、Ｘ_１５、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、セリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、スレオニン（Ｔ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、イソロイシン（Ｉ）。一実施形態では、Ｘ_１８は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、グリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、アスパラギン酸（Ｄ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、アラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、グルタミン酸（Ｅ）である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間に配置されたストーク領域をさらに含む。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に配置された１つ以上の追加の共刺激分子をさらに含む。さらなる実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖を含む。他の実施形態では、ＣＡＲの抗体は、ＦａｂまたはｓｃＦＶである。

本発明の態様は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターを対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターをホストする細胞を対象とする。

本発明の態様は、本明細書に記載のＣＡＲＳを発現する遺伝子操作された細胞を対象とする。一実施形態では、細胞は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を発現し、かつ細胞表面膜上に保持する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。さらなる実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋である。他の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ＣＤ４^＋およびＣＤ８細胞^＋の混合集団を含む。

本発明の態様は、ポリペプチドを発現および分泌するようにさらに操作された、キメラ抗原受容体を発現しかつ細胞表面膜上に保持する遺伝子操作された細胞であって、ポリペプチドが、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であり、モノクローナル抗体またはその断片が、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、遺伝子操作された細胞を対象とする。いくつかの実施形態では、重鎖は、Ｇ－（Ｘ１）－Ｔ－（Ｘ２）－ＳＳ－（Ｘ３Ｘ４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、Ｇ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）またはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号２０７）を含むＣＤＲ２、および／またはＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、またはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３を含む。別の実施形態では、軽鎖は、ＳＧＳＩＤＳＮＹ（配列番号１８）、Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）、またはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、ＥＤＮ（配列番号２０）、（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、またはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／またはＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、またはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗体は、完全にヒトの抗体であるか、またはヒト化されている。他の実施形態では、ＣＡＲの抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性である。さらなる実施形態では、ＣＡＲの抗体は、単鎖抗体である。実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、非極性アミノ酸残基である。他の実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、疎水性アミノ酸残基、例えば、Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_３は、親水性極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_３が、ヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_１は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、またはチロシン（Ｙ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_２は、フェニルアラニン（Ｆ）またはロイシン（Ｌ）である。他の実施形態では、Ｘ_３は、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である。さらに別の実施形態では、Ｘ_４は、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）、またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１は、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。他の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、極性親水性アミノ酸残基である。さらに別の実施形態では、Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２は、ヒスチジン（Ｈ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_８は、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、またはセリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_９は、チロシン（Ｙ）、セリン（Ｓ）、プロリン（Ｐ）、またはアラニン（Ａ）。一実施形態では、Ｘ_１０は、チロシン（Ｙ）、アスパラギン酸（Ｄ）、イソロイシン（Ｉ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。一実施形態では、Ｘ_１１は、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、アスパラギン（Ｎ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である。一実施形態では、Ｘ_１２は、イソロイシン（Ｉ）、アルギニン（Ｒ）、スレオニン（Ｔ）、またはヒスチジン（Ｈ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_５は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_５は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_５は、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である。さらなる実施形態では、Ｘ_６は、非極性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、チロシン（Ｙ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_６は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_６は、スレオニン（Ｔ）、セリン（Ｓ）、またはアルギニン（Ｒ）である。いくつかの実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１９、Ｘ_２０、またはＸ_２１は、非極性疎水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、グリシン（Ｇ）である。他の実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１８、Ｘ_１９、またはＸ_２１は、極性親水性アミノ酸残基である。一実施形態では、Ｘ_７、Ｘ_１４、またはＸ_２１は、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１３は、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である。一実施形態では、Ｘ_１５は、プロリン（Ｐ）である。一実施形態では、Ｘ_１５、Ｘ_１７、またはＸ_２０は、セリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、スレオニン（Ｔ）またはアルギニン（Ｒ）である。一実施形態では、Ｘ_１６は、イソロイシン（Ｉ）。一実施形態では、Ｘ_１８は、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、グリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_１９は、アスパラギン酸（Ｄ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、アラニン（Ａ）である。一実施形態では、Ｘ_２１は、グルタミン酸（Ｅ）である。

本発明の一態様は、対象におけるがんを治療する方法を対象とする。いくつかの実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗体、本明細書に記載の二重特異性抗体、本明細書に記載の薬学的組成物、または本明細書に記載のＣＡＲ組成物を含む治療有効量の組成物を投与することを含む。さらなる実施形態では、方法は、対象に化学療法剤を投与することをさらに含む。

本発明の他の目的および利点は、その後の記載から容易に明らかになるであろう。

二重特異性ＧＩＴＲ－ＰＤＬ１軽鎖融合の概略図を示す。図２は、ＰＤ－Ｌ１抗体のＦＡＣＳプロットおよび結合曲線を示すグラフである。図２－１の説明を参照のこと。図３は、ＰＤ－Ｌ１を安定して発現している２９３Ｔ細胞のＦＡＣＳ結合曲線を示す。抗体は抗ｈＦｃ二次抗体を介して検出された。図３－１の説明を参照のこと。ａＰＤＬ１抗体の速度論的測定を示す概略図である（上の画像）。以前の一連の競合マトリックスに基づいて、代表的なクローンが最終的なマトリックスで使用された（下の画像）。抗ＰＤＬ１ｓｃＦｖ－Ｆｃｓの２９３Ｔ細胞への負のバックグラウンド結合を示すグラフである。抗ＰＤＬ１クローンの生物活性を試験するための混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイの結果を示すグラフである。ＩＦＮγは、Ｔ細胞活性化の尺度としてＥＬＩＳＡによって検出された。ＥＬＩＳＡプレートの開発は、いくつかのクローンがａｔｅｚに匹敵することを示す。 αＰＤ－Ｌ１抗体を用いたＭＬＲの結果を示す棒グラフである。 αＰＤ－Ｌ１抗体（１５０ｎＭ）を用いたＭＬＲの結果を示す棒グラフである。 αＰＤ－Ｌ１抗体（１５０ｎＭ）を用いたＭＬＲの結果を示す棒グラフである。図１０は、可変領域重鎖生殖細胞系列アラインメント（アミノ酸配列）の概略図である。図１０－１の説明を参照のこと。

発明の詳細な説明
略語および定義
１つ以上の好ましい実施形態の詳細な説明は、本明細書に提供されている。しかしながら、本発明が、様々な形態で具現化され得ることが、理解される。したがって、本明細書に開示される特定の詳細は、限定として解釈されるべきではなく、特許請求の範囲の根拠として、および当業者に本発明を任意の適切な方法で用いるように教示するための代表的な根拠として解釈されるべきである。

単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に他のことを指示しない限り、複数の参照を含む。特許請求の範囲および／または明細書において「含む」という用語とともに使用されるときの「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という単語の使用は、「１つ（ｏｎｅ）」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、および「１つまたは２つ以上」の意味とも一致する。

「例えば」、「など」、「含む」などの句のいずれかが本明細書で使用される場合は常に、他に明確に記載されない限り、「限定することなく」という句が付随することが理解される。同様に、「一例」、「例示的」などは、非限定的であると理解される。

「実質的に」という用語は、意図した目的に悪影響を与えない記述語からの逸脱を可能にする。記述用語は、「実質的に」という語が明確に列挙されていなくても、「実質的に」という用語によって修飾されることが理解される。

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」および「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」（ならびに同様に「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｓ）」、および「含む（ｉｎｖｏｌｖｅｓ）」）などの用語は、交換可能に使用され、同じ意味を有する。具体的には、用語の各々は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の一般的な米国特許法の定義と一致して定義され、したがって、「少なくとも以下（ａｔｌｅａｓｔｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇ）」を意味する非限定用語（ｏｐｅｎｔｅｒｍ）であると解釈され、追加の特徴、限定、態様などを除外しないとも解釈される。よって、例えば、「ステップａ、ｂ、およびｃを含むプロセス」は、プロセスが少なくともステップａ、ｂ、およびｃを含むことを意味する。「１つ（ａ）」または「１つ（ａｎ）」という用語が使用される場合は常に、そのような解釈が文脈において無意味でない限り、「１つ以上」と理解される。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、本明細書では、おおよそ、大まかに、およそ、またはその領域内を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用される場合、それは、記載された数値の上および下の境界を拡張することによってその範囲を変更する。一般に、「約」という用語は、本明細書では、２０パーセント上または下の（高い、または低い）分散によって記載された値を上回る、および下回る数値を修飾するために使用される。

ＰＤ－Ｌ１
プログラムＴ細胞死１（ＰＤ－１）は、Ｔ細胞の表面に存在する膜貫通タンパク質であり、それは、腫瘍細胞上のプログラムＴ細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に結合したとき、Ｔ細胞の活性の抑制およびＴ細胞の媒介による細胞傷害の低減をもたらす。したがって、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１は、免疫ダウンレギュレーターまたは免疫チェックポイントの「ｏｆｆスイッチ」である。

免疫系は、病原体を排除するための効果的な反応と、自己免疫疾患を予防するための耐性の維持との間のバランスを維持しなければならない。Ｔ細胞は、このバランスを維持するための中心的なものであり、それらの適切な調節は、主にＢ７－ＣＤ２８ファミリーの分子によって調整される。リガンドとして機能するＢ７ファミリーのメンバーと、受容体として機能するＣＤ２８ファミリーのメンバーとの間の相互作用は、Ｔ細胞応答を開始、増強、維持する重要な正のシグナルを提供するだけでなく、必要に応じてＴ細胞応答を制限、終了、および／または減衰させる重要な負のシグナルにも寄与する。ＰＤ－１は、ＣＤ２８ファミリーのメンバーである。

ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間の結合は、Ｔ細胞応答の調節に大きな影響を及ぼす。具体的には、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用は、Ｔ細胞の増殖、ならびに、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γなどの、Ｔ細胞活性および免疫応答を媒介するエフェクターサイトカインの産生を阻害する。この負の調節機能は、Ｔ細胞を介した自己免疫および免疫病理を防止するために重要である。しかしながら、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸は、Ｔ細胞の枯渇に関与し、それにより、負の調節機能がＴ細胞の応答を阻害して宿主に悪影響を及ぼすことも示されている。Ｔ細胞の長期的または慢性的な抗原刺激は、負の免疫学的フィードバック機構を誘導し、それにより、抗原特異的応答が阻害され、病原体の免疫回避をもたらす可能性がある。Ｔ細胞の枯渇はまた、抗原特異的Ｔ細胞自体の物理的な欠失を進行させる可能性もある。ＰＤ－１のＴ細胞における発現は、慢性的な抗原刺激に間にアップレギュレートされ、そのＰＤ－Ｌ１への結合により、ＣＤ４＋（Ｔヘルパー細胞）およびＣＤ８＋（細胞傷害性Ｔリンパ球またはＣＴＬ）Ｔ細胞の両方においてエフェクター機能がブロックされ、したがって、Ｔ細胞枯渇の誘導にＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用が関係していることを示す。

最近の研究では、一部の慢性ウイルス感染症およびがんが、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を介したＴ細胞の枯渇を引き起こすことによる、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸を特異的に利用する免疫回避戦術を発達させたことが示された。多くのヒト腫瘍細胞および腫瘍関連抗原提示細胞は、高いレベルでＰＤ－Ｌ１を発現し、それは、腫瘍がＴ細胞の枯渇を誘発して抗腫瘍免疫応答を回避することを示唆する。例えば、慢性的なＨＩＶ感染の間、サイトカインおよびエフェクター分子を産生する能力が低下し、また増殖能力が低減するなど、ＨＩＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞が機能的に損なわれる。研究により、ＰＤ－１がＨＩＶ感染者のＨＩＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞で高発現することが示され、それは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路をブロックすることによる、ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳ患者の治療における治療可能性を示唆するものである。まとめると、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路をブロックする剤は、様々ながん、ＨＩＶ感染、および／またはＴ細胞の枯渇に関連する他の疾患および症状に対する新しい治療アプローチを提供するものである。したがって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用をブロックまたは防止できる剤が緊急に必要とされている。

ＰＤ－Ｌ１の過剰発現は、様々ながんで検出されている。例えば、乳がんでは、ＰＤ－Ｌ１が過剰発現し、高リスクの予後因子と関連している。腎細胞がんでは、ＰＤ－Ｌ１がアップレギュレートされ、腫瘍浸潤性白血球においてもＰＤ－１の発現の増加が見られる。抗ＰＤ－Ｌ１および抗ＰＤ－１抗体は、腎細胞がんのフェーズＩ試験でいくつかの臨床的有効性を示している。ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合できる治療用物質は、腫瘍細胞を特異的に標的化するのに役立ち得る。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用をブロックできる剤は、Ｔ細胞枯渇を誘発して抗腫瘍Ｔ細胞活性を回避したがんの治療にさらに役立ち得る。そのような剤の単独での、または他の抗がん治療剤との組み合わせでの使用は、ＰＤ－Ｌ１を過剰発現する腫瘍細胞を効果的に標的化し、抗腫瘍Ｔ細胞活性を高め、それによって標的腫瘍細胞に対する免疫応答を増強することを可能にする。

ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１はまた、慢性的な抗原刺激の後に、例えば慢性的な感染症によって、Ｔ細胞によってアップレギュレーションされることもできる。慢性的なＨＩＶ感染の間、ＨＩＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞は、サイトカインおよびエフェクター分子を産生する能力が低減し、また増殖能力が低下するなど、機能的に損なわれる。ＰＤ－１は、ＨＩＶ感染者のＨＩＶ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞で高発現する。したがって、この経路をブロックすると、ＨＩＶペプチドによる刺激に応答して増殖しサイトカインを産生する、ＨＩＶ特異的Ｔ細胞の能力が増強され、それによって、ＨＩＶに対する免疫応答が増強され得る。慢性的なウイルス感染症、細菌感染症、寄生虫感染症などの他の慢性的な感染症も、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断薬の使用による利益を受け得る。

本発明の態様は、ＰＤＬ－１に対して特異的な単離されたモノクローナル抗体を提供する。細胞、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸に関して本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、高分子の天然の供給源に存在する他のＤＮＡまたはＲＮＡからそれぞれ分離された状態の分子のことを指す。「単離された」という用語はまた、組換えＤＮＡ技術によって産生される場合には、細胞性物質、ウイルス性物質もしくは培地を、または化学的に合成される場合には、化学前駆体もしくは他の化学物質を、実質的に含まない、核酸またはペプチドを指すこともある。例えば、「単離された核酸」は、断片としては天然には存在せず、天然の状態では見出されないであろう核酸断片を含むことができる。「単離された」はまた、他の細胞タンパク質または組織から単離された細胞またはポリペプチドを指すこともある。単離されたポリペプチドは、精製されたポリペプチドおよび組換えポリペプチドのいずれも包含することができる。単離された抗体は、ライブラリ選抜標的としてＰＤＬ－１を使用することによって、２７０億のヒト一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）ファージディスプレイライブラリの使用を通じて特定された。これらの抗体は、ＰＤ－Ｌ１に対する新しいクラスのモノクローナル抗体を表す。

５種の固有の組換えモノクローナルＰＤ－Ｌ１抗体が本明細書に記載されている。これらには、４０ｍｕｔ、５０－６Ｂ６．１ｍｕｔ、５０－６Ｂ６．２、５０－７Ｂ３、および５０－５Ｂ９が含まれる。ポリペプチド（抗体など）またはポリヌクレオチドに関連する「組換え」とは、天然には存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を指し得、その非限定的な例は、通常では一緒にはならないポリヌクレオチドまたはポリペプチドを組み合わせることによって作製することができる。

モノクローナルＰＤ－Ｌ１抗体の核酸およびアミノ酸配列を以下に提供する；ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列は、以下で

が付されている。

（表１）Ａｂ４０ｍｕｔ可変領域アミノ酸配列

（表２Ｂ）Ａｂ５０－６Ｂ６．１ｍｕｔ可変領域アミノ酸配列

（表３Ｂ）Ａｂ５０－６Ｂ６．２可変領域アミノ酸配列

（表４Ｂ）Ａｂ５０－６Ｂ６．２可変領域アミノ酸配列

（表５Ｂ）Ａｂ５０－５Ｂ９可変領域アミノ酸配列

（表６）Ａｂ１４Ｃ６１可変領域アミノ酸配列

（表７）Ａｂ１Ａ２可変領域アミノ酸配列

（表８）Ａｂ１Ａ３可変領域アミノ酸配列

（表９）Ａｂ１Ａ６可変領域アミノ酸配列

（表１０）Ａｂ１Ｂ４可変領域アミノ酸配列

（表１１）Ａｂ１Ｃ１可変領域アミノ酸配列

（表１２）Ａｂ１Ｃ４可変領域アミノ酸配列

（表１３）Ａｂ１Ｃ６可変領域アミノ酸配列

（表１４）Ａｂ１Ｄ１可変領域アミノ酸配列

（表１５）Ａｂ１Ｄ２可変領域アミノ酸配列

（表１６）Ａｂ１Ｄ４可変領域アミノ酸配列

（表１７）Ａｂ１Ｅ１可変領域アミノ酸配列

（表１８）Ａｂ１Ｆ１可変領域アミノ酸配列

（表１９）Ａｂ１Ｇ１可変領域アミノ酸配列

（表２０）Ａｂ１Ｈ２可変領域アミノ酸配列

（表２１）Ａｂ１Ｈ５可変領域アミノ酸配列

ＰＤＬ－１抗体の重鎖および軽鎖の相補性決定領域のアミノ酸配列を、以下の表６Ａ～Ｂに示す。

（表６Ａ）ＰＤＬ－１抗体の重鎖（Ｖ_Ｈ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）

（表６Ｂ）ＰＤＬ－１抗体の軽鎖（Ｖ_Ｌ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）

ＰＤＬ－１抗体の重鎖および軽鎖のフレームワーク領域のアミノ酸配列を、以下の表７Ａ～Ｂに示す。

（表７Ａ）ＰＤＬ－１抗体の重鎖（Ｖ_Ｈ）のフレームワーク領域（ＦＲ）

（表７Ｂ）ＰＤＬ－１抗体の重鎖（Ｖ_Ｌ）のフレームワーク領域（ＦＲ）

本明細書に記載のＰＤ－Ｌ１抗体はＰＤ－Ｌ１に結合する。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１に対して高い親和性および高い特異性を有する。いくつかの実施形態はまた、本明細書に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体のアミノ酸またはヌクレオチド配列に対して特定のパーセンテージの同一性または類似性を有する抗体を特徴とする。例えば、「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的で整列させてもよい各配列の位置を比較することによって決定することができる。比較される配列の位置が同じ塩基またはアミノ酸で占められている場合、その分子はその位置において相同である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有される一致するまたは相同な位置の数の関数である。例えば、抗体は、本明細書に記載のいずれか１つの抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちの特定の領域または全長と比較した場合に、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高いアミノ酸配列同一性を有することができる。例えば、抗体は、本明細書に記載のいずれか１つの抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちの特定の領域または全長と比較した場合に、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い核酸配列同一性を有することができる。本発明の核酸およびタンパク質に対する配列同一性または類似性は、当技術分野で知られている方法、例えばＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．ｅｄｓ．（２００７）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙに記載されているものなどの当技術分野で知られているソフトウェアプログラムを使用する配列比較および／またはアラインメントにより決定することができる。例えば、配列比較アルゴリズム（すなわち、ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０）、手動アラインメント、または目視検査を利用して、本発明の核酸およびタンパク質の配列同一性または類似性パーセントを決定することができる。

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」は、単一の「ポリペプチド」ならびに複数の「ポリペプチド」を包含することができ、アミド結合（ペプチド結合としても知られる）によって直鎖状に連結された単量体（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の１つ以上の鎖を指し、生成物の特定の長さを指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖を指すために使用される任意の他の用語は、本明細書では「ポリペプチド」を指すことができ、用語「ポリペプチド」は、これらの用語の代わりに、またはこれらの用語のいずれかと交換可能に使用することができる。「ポリペプチド」はまた、限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾などの、ポリペプチドの発現後修飾産物を指すこともできる。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来するか、または組換え技術によって産生されることができ、必ずしも特定の核酸配列から翻訳される必要はない。それは、化学合成を含む任意の方法で生成させ得る。アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸または小さなパーセンテージのアミノ酸を改変、付加、欠失、または置換する核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または付加が、本明細書では集合的に「保存的に修飾されたバリアント」と呼ばれることを容易に認識するであろう。いくつかの実施形態では、改変は、アミノ酸の化学的に類似したアミノ酸での置換をもたらす。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野において周知である。

例えば、「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野では、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）として定義されている。したがって、免疫グロブリンポリペプチドの非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換される。別の実施形態では、アミノ酸鎖は、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似する鎖で置換することができる。

抗体
本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識して結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指すことができる。抗体は、全抗体および任意の抗原結合断片、またはその一本鎖であることができる。例えば、「抗体」は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む、任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含むことができる。非限定的な例としては、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖または軽鎖の可変領域、重鎖または軽鎖の定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはそれらの任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも一部が挙げられる。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、すなわち、抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含有する分子の免疫学的に活性な部分を指すことができる。「特異的に結合する」または「免疫反応する」とは、抗体が所望の抗原の１つ以上の抗原性決定部分と反応して、他のポリペプチドとは反応しないことを意味する。

本明細書で使用される場合、「抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、Ｆ_{（ａｂ’）２}、Ｆ_{（ａｂ）２}、Ｆ_ａｂ’、Ｆ_ａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの、抗体の一部を指す。抗体断片は、構造に関係なく、完全な抗体によって認識されるのと同じ抗原と結合する。「抗体断片」という用語には、アプタマー（シュピーゲルマーなど）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、およびダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）を包含させることができる。「抗体断片」という用語にはまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することにより抗体のように作用する、任意の合成または遺伝子操作されたタンパク質を包含させることができる。本明細書に記載の抗体、抗原結合ポリペプチド、バリアント、または誘導体には、限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、ミニボディ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリによって生成された断片、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体などが包含される。

「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）ポリペプチド分子は、共有結合的に連結されたＶＨ：ＶＬヘテロ二量体であり、これは、ペプチドコードリンカーによって連結されたＶＨおよびＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合体から発現され得る。（Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９８８）ＰｒｏｃＮａｔＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８５（１６）：５８７９－５８８３を参照されたい）。いくつかの態様では、領域は、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで連結される。リンカーは、柔軟性のためにグリシン、ならびに溶解性のためにセリンまたはスレオニンに富むことができ、その際、Ｖ_ＨのＮ末端とＶ_ＬのＣ末端とを連結させることも、またはその逆とすることもできる。このタンパク質は、定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。抗体Ｖ領域からの自然に凝集されるが、化学的に分離された、軽および重ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造と実質的に類似する三次元構造に折り畳まれるであろうｓｃＦｖ分子に変換するための化学構造を識別するための多くの方法が記載されている。例えば、それぞれを参照によりその全体を組み込む米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，８９２，０１９号、同第５，１３２，４０５号および同第４，９４６，７７８号を参照されたい。

非常に大きなナイーブヒトｓｃＦｖライブラリは、多数の標的分子に対して再配置された抗体遺伝子の大きな供給源を提供するために作製されており、および作製することができる。疾患特異的抗体を単離するために、感染性疾患を有する個体からより小さなライブラリを構築することができる。（Ｂａｒｂａｓｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：９３３９－４３（１９９２）、Ｚｅｂｅｄｅｅｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：３１７５－７９（１９９２）を参照されたい）。

ヒトから得られる抗体分子は、分子中に存在する重鎖の性質が互いに異なる、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＤの５つのクラスのイムノグロブリンに分類される。当業者であれば、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として分類され、それらの中にもいくつかのサブクラス（例えば、γ１～γ４）があることを理解するであろう。特定のクラスは、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、およびＩｇＧ_４、ならびに他のものなどの、サブクラスも有する。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＧ_５などは、十分に特徴付けられており、機能的な特異性を与えることが知られている。ＩｇＧに関しては、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量が約２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量が５３，０００～７０，０００の２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。４つの鎖は、典型的には「Ｙ」字型にジスルフィド結合によって結合され、軽鎖は重鎖を囲み、「Ｙ」の口から始まり可変領域まで続く。本明細書に記載の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。

軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖のクラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合することができる。一般に、軽鎖と重鎖は互いに共有結合し、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって生成される場合、２つの重鎖の「尾」（ｔａｉｌ）部は、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合する。重鎖では、アミノ酸配列は、Ｙ字型に分岐した末端のＮ末端から各鎖の下部のＣ末端まで伸びている。

軽鎖と重鎖のいずれも、構造的および機能的な相同性領域に分けられる。「定常」および「可変」という用語が、機能的な意味で使用される。軽鎖部分および重鎖部分の両方の可変ドメイン（ＶＬおよびＶＨ）が、抗原の認識および特異性を決定する。逆に、軽鎖および重鎖の定常ドメイン（ＣＬ、ならびにＣＨ１、ＣＨ２もしくはＣＨ３）は、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指すことができる。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖および軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」と呼ばれる、重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に異なる区間は、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られるより保存された隣接区間の間に挿入される。したがって、「ＦＲ」という用語は、免疫グロブリンの超可変領域の間、およびそれに隣接して天然に見られるアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間で互いに対して配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合する抗原の三次元表面に相補的であり、重鎖および軽鎖の各々３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。ＰＤ－１抗体の、ＣＤＲ、ならびにフレームワーク（ＦＲ）を含むＶＨおよびＶＬ領域を表１Ａ～表１５Ｂに示す。

各抗原結合ドメインに存在する６つのＣＤＲは、アミノ酸の短い非連続配列であり、抗体が水性環境でその三次元構成をとるときに、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置される。抗原結合ドメインの残りのアミノ酸であるＦＲ領域は、少ない分子間変動を示す。フレームワーク領域は、主にβシートのコンフォメーションをとり、ＣＤＲは、ループを形成して連結し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合的な相互作用によって、ＣＤＲを正しい方向に配置するための足場を形成するよう機能する。配置されたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応における抗原上のエピトープに相補的な表面を提供し、同族のエピトープへの抗体の非共有結合を促進する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域をそれぞれ含むアミノ酸は、それらが以前に同定されているため（“ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ，Ｅ．，ｅｔａｌ．，Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）、およびＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照されたい）、当業者によって、重鎖または軽鎖可変領域について容易に同定され得る。

当技術分野で使用および／または許容される用語に２つ以上の定義がある場合、本明細書で使用される用語の定義は、特に反対の意味で明示的に述べられない限り、そのようなすべての意味を包含することを意図する。具体的な例は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語を使用して、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる非隣接抗原結合部位を説明することである。この特定の領域は、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，”ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）およびＣｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）により記載されており、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義には、互いに比較した場合、アミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。それにもかかわらず、いずれの定義を適用して抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すことも、本明細書で定義および使用される用語の範囲内にあることが意図されている。上記の引用文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基を、比較のため、以下の表に記載する。特定のＣＤＲを含む正確な残基番号は、ＣＤＲの配列およびサイズによって異なる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列さえわかれば、どの残基が特定のＣＤＲを構成するかをルーチン的に決定することができる。

Ｋａｂａｔらは、あらゆる抗体に適用可能な可変ドメイン配列の付番システムを定義した。当業者は、配列自体の他の実験データに依存することなく、この「Ｋａｂａｔ付番」システムを、任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔ付番」は、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，”ＳｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）に記載される付番システムを指す。

上記の表に加えて、Ｋａｂａｔ付番システムはＣＤＲ領域を次のように記載する：ＣＤＲ－Ｈ１は、アミノ酸３１付近（すなわち、最初のシステイン残基の後の約９残基）から始まり、約５～７アミノ酸を含み、次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｈ２は、ＣＤＲ－Ｈ１の終わりから１５残基後から始まり、約１６～１９個のアミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリジン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｈ３は、ＣＤＲ－Ｈ２の終わりから約３３アミノ酸残基後から始まり、３～２５個のアミノ酸を含み、Ｗ－Ｇ－Ｘ－Ｇの配列で終わる（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）。ＣＤＲ－Ｌ１は、残基２４付近から始まり（すなわち、システイン残基に続き）、約１０～１７残基を含み、次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ－Ｌ２は、ＣＤＲ－Ｌ１の終わりから約１６残基後から始まり、約７残基を含む。ＣＤＲ－Ｌ３は、ＣＤＲ－Ｌ２の終わりから（すなわち、システイン残基に続き）約３３残基後から始まり、約７～１１残基を含み、配列ＦまたはＷ－Ｇ－Ｘ－Ｇで終わる（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）。

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖ、またはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定因子を含むことができる。可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識し、特異的に結合することを可能にする。例えば、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが組み合わされて、三次元抗原結合部位を定義する可変領域を形成する。この四次抗体構造は、Ｙの各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。エピトープ決定因子は通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グルーピングからなり、通常、特異的な三次元構造特徴、および特異的な電荷特徴を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端ペプチドに対して産生され得る。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＬ鎖の各上の３つのＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３）によって定義される。一実施形態では、抗体は、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＰＤ－Ｌ１（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０５４８６２；２９０アミノ酸残基長）：

を対象とすることができる。

本明細書で使用される場合、「免疫学的結合」および「免疫学的結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的である抗原との間で生じるタイプの非共有相互作用を指すことができる。免疫学的結合相互作用の強度、または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋ_ｄ）として表すことができ、より小さなＫ_ｄは、より大きな親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当技術分野で周知の方法を使用して定量化することができる。１つのそのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度を測定することを伴い、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響する幾何学的パラメータに依存する。したがって、両方の「オン速度定数」（Ｋ_ｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋ_ｏｆｆ）は、濃度ならびに会合および解離の実際の速度の計算によって決定することができる。（Ｎａｔｕｒｅ３６１：１８６－８７（１９９３）を参照されたい）。Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎの比は、親和性に関係のないすべてのパラメータをキャンセルでき、解離定数Ｋ_Ｄに等しい。（一般に、Ｄａｖｉｅｓｅｔａｌ．（１９９０）ＡｎｎｕａｌＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５９：４３９－４７３を参照されたい）。本発明の抗体は、放射性リガンド結合アッセイなどの速度論的アッセイ、またはＢＩＡｃｏｒｅもしくはＯｃｔｅｔ（ＢＬＩ）などの当業者に公知の同様のアッセイによって測定した結果、平衡結合定数（Ｋ_Ｄ）が≦１μＭ、≦１０μＭ、≦１０ｎＭ、≦１０ｐＭ、または≦１００ｐＭ～約１ｐＭであるときに、ＰＤ－１エピトープに特異的に結合することができる。例えば、いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１Ｅ－１２Ｍ～１Ｅ－１１Ｍの間のＫ_Ｄである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１Ｅ－１１Ｍ～１Ｅ－１０Ｍの間のＫ_Ｄである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１Ｅ－１０Ｍ～１Ｅ－９Ｍの間のＫ_Ｄである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－９Ｍ～１Ｅ－８Ｍの間のＫ_Ｄである。くつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１Ｅ－８Ｍ～１Ｅ－７Ｍの間のＫ_Ｄである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、約１Ｅ－７Ｍ～１Ｅ－６Ｍの間のＫ_Ｄである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－１２Ｍであり、他の実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－１１Ｍである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－１０Ｍであり、他の実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－９Ｍである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－８Ｍであり、他の実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－７Ｍである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－６Ｍであり、他の実施形態では、Ｋ_Ｄは約１Ｅ－５Ｍである。いくつかの実施形態では、例えば、Ｋ_Ｄは約３Ｅ－１１Ｍであり、他の実施形態では、Ｋ_Ｄは約３Ｅ－１２Ｍである。いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは約６Ｅ－１１Ｍである。「特異的に結合する」または「～に特異性を有する」とは、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する抗体、および結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を伴うことを指すことができる。例えば、抗体は、ランダムな無関係のエピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介して、そのエピトープに結合する場合に、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。

例えば、ＰＤ－Ｌ１抗体は、一価または二価とすることができ、一本鎖または二本鎖を含む。機能的には、ＰＤ－Ｌ１抗体の結合親和性は、１０^－５Ｍ～１０^－１２Ｍの範囲内である。例えば、ＰＤ－Ｌ１抗体の結合親和性は、１０^－６Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１２Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－１０Ｍ～１０^－１１Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－１０Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－８Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－７Ｍ～１０^－８Ｍ、１０^－５Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－６Ｍ～１０^－７Ｍ、または１０^－５Ｍ～１０^－６Ｍである。

本発明のＰＤ－Ｌ１タンパク質、またはそれらの誘導体、断片、類似体、相同体もしくは相同分子種は、これらのタンパク質成分、例えば、配列番号２０４を含むアミノ酸残基に免疫学的に特異的に結合する抗体の生成における免疫原として利用することができる。プロテオリポソームにカップリングしたＰＤ－Ｌ１タンパク質、またはそれらの誘導体、断片、類似体、相同体もしくは相同分子種は、これらのタンパク質成分に免疫学的に特異的に結合する抗体の生成における免疫原として利用することができる。

当業者であれば、過度の実験なしに、ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体と同じ特異性を有するかを、後者のＰＤ－Ｌ１への結合を前者が防止するか否かにより確認することによって決定できることを認識するであろう。試験されるヒトモノクローナル抗体が、本発明のヒトモノクローナル抗体により結合の減少を示し、本発明のヒトモノクローナル抗体と競合する場合には、これらの２つのモノクローナル抗体は、同じまたは密接に関連するエピトープに結合する可能性が高い。

ヒトモノクローナル抗体が本発明のヒトモノクローナル抗体の特異性を有するかを決定する別の方法は、本発明のヒトモノクローナル抗体を、それと通常反応性を有するＰＤ－Ｌ１タンパク質とプレインキュベートし、次いで、試験されるヒトモノクローナル抗体を添加し、試験されるヒトモノクローナル抗体がＰＤ－Ｌ１に結合するその能力において阻害されるか否かを決定する方法である。試験されるヒトモノクローナル抗体が阻害される場合、おそらく、それは、本発明のモノクローナル抗体と同じ、または機能的に同等のエピトープ特異性を有する。また本発明のヒトモノクローナル抗体のスクリーニングは、ＰＤ－Ｌ１を利用し、試験されるモノクローナル抗体がＰＤ－Ｌ１を中和することができる否かを決定することによって実施できる。

当技術分野内で知られる様々な手順は、本発明のタンパク質に対して、またはそれらの誘導体、断片、類似体、相同体、もしくは相同分子種に対して向けられたポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の産生に使用することができる。（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＨａｒｌｏｗＥ，ａｎｄＬａｎｅＤ，１９８８，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹを参照されたい）。

抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧを使用するアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技法によって精製することができ、これらは主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供する。その後、または代替的に、求められる免疫グロブリンの標的である特異的抗原、またはそのエピトープをカラムに固定化して、イムノアフィニティークロマトグラフィーによって免疫特異的抗体を精製することができる。免疫グロブリンの精製については、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（ＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｙＴｈｅＳｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａＰＡ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（Ａｐｒｉｌ１７，２０００），ｐｐ．２５－２８）によって議論される。

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」または「Ｍａｂ」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、特有の軽鎖遺伝子産物および特有の重鎖遺伝子産物からなる１つの抗体分子の分子種のみを含有する抗体分子の集団を指すことができる。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団のすべての分子で同一である。ＭＡｂは、それに対する特有の結合親和性を特徴とする抗原のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含有する。

モノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒａｎｄＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって記載されるものなどの、ハイブリドーマ法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物は、典型的には、免疫化物質で免疫化して、免疫化物質に特異的に結合するであろう抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を誘導する。代替的に、リンパ球は、インビトロで免疫化することができる。

免疫化物質は、タンパク質抗原、その断片、またはその融合タンパク質を含むことができる。例えば、ヒト起源の細胞が望まれる場合は末梢血リンパ球が使用され、または、非ヒト哺乳動物の供給源が望まれる場合は脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して不死化細胞株と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９－１０３を参照されたい）。不死化細胞株は、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシ、およびヒト起源の骨髄腫細胞とすることができる。例えば、ラットまたはマウスの骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、非融合の、不死化細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培地において培養することができる。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（「ＨＡＴ培地」）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する。

有用な不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの発現を維持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性であるものである。不死化細胞株は、例えば、ＳａｌｋＩｎｓｔｉｔｕｔｅＣｅｌｌＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ（ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）およびＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から入手できるマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒｅｔａｌ，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９８７）ｐｐ．５１－６３）を参照されたい）。

次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。例えば、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定される。そのような技法およびアッセイは、当技術分野で知られている。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ＭｕｎｓｏｎａｎｄＰｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析によって決定することができる。さらに、モノクローナル抗体の治療用途では、標的抗原に対して高度の特異性および高い結合親和性を有する抗体を特定することが重要である。

所望のハイブリドーマ細胞が特定された後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準的な方法によって成長させることができる。（Ｇｏｄｉｎｇ，ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９－１０３を参照されたい）。この目的に適した培養培地には、例えば、ダルベッコの改変イーグル培地およびＲＰＭＩ－１６４０培地が含まれる。代替的に、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物における腹水としてインビボで成長させることができる。

サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または腹水液から単離または精製することができる。

モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，８１６，５６７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるような、組換えＤＮＡ法によって作製することもできる。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定することができる。本発明のハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに入れることができ、これは次いでサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得る。ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ３６８，８１２－１３（１９９４）を参照されたい）または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部または一部を共有結合することによって、修飾することができる。そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインの代わりに使用することができるか、または本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに使用して、キメラ二価抗体を作製することができる。

完全ヒト抗体は、ＣＤＲを含む、軽鎖および重鎖の両方の配列全体がヒト遺伝子から生じる抗体分子である。そのような抗体は、本明細書では「ヒト化抗体」または「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Ｋｏｚｂｏｒ，ｅｔａｌ，１９８３ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ４：７２を参照されたい）、ヒトモノクローナル抗体を産生するＥＢＶハイブリドーマ技法（Ｃｏｌｅ，ｅｔａｌ，１９８５Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６を参照されたい）を使用して調製することができる。ヒトモノクローナル抗体を利用することができ、ヒトハイブリドーマを使用することによって（Ｃｏｔｅ，ｅｔａｌ，１９８３．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８０：２０２６－２０３０を参照されたい）またはインビトロでヒトＢ細胞をエプスタインバーウイルスで形質転換することによって（Ｃｏｌｅ，ｅｔａｌ．，１９８５Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６）産生することができる。

「ヒト化抗体」は、非ヒト種（マウスなど）由来の抗体とすることができるが、その軽鎖および重鎖タンパク質配列は、ヒトで産生される抗体バリアントとの類似性を高めるよう改変されている。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域と、を有する、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体に由来する抗体分子である。多くの場合、ヒトフレームワーク領域のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換され、それにより、抗原結合が変化し、好ましくは改善される。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法によって特定され、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用をモデリングして抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定し、また配列を比較して特定の位置にある異常なフレームワーク残基を特定することによって行われる。（例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｑｕｅｅｎｅｔａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５８５，０８９、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３（１９８８）を参照されたい）。例えば、抗体の非ヒト部分（軽鎖および／または重鎖のＣＤＲなど）は、標的抗原に結合することができる。

抗体は、例えば、ＣＤＲ移植（ＥＰ２３９，４００、ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号明細書）、ベニアリングまたはリサーフェシング（ＥＰ５９２，１０６、ＥＰ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２８（４／５）：４８９－４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５－８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：９６９－９７３（１９９４））、およびチェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号、参照によりその全体が組み込まれる）などの、当技術分野で公知の様々な技術を使用してヒト化することができる。「ヒト化」（リシェイプまたはＣＤＲグラフトとも呼ばれる）は、異種源（通常はげっ歯類）由来のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の免疫原性を低減させ、ヒト免疫系の活性化を改善するための、当業者に周知の確立された技術である（例えば、ＨｏｕＳ，ＬｉＢ，ＷａｎｇＬ，ＱｉａｎＷ，ＺｈａｎｇＤ，ＨｏｎｇＸ，ＷａｎｇＨ，ＧｕｏＹ（Ｊｕｌｙ２００８）”Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉ－ＣＤ３４ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｇｒａｆｔｉｎｇｂａｓｅｄｏｎｃｏｍｐｕｔｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｅｌｉｎｇ”ＪＢｉｏｃｈｅｍ．１４４（１）：１１５－２０を参照されたい）。抗体は、ＣＤＲ移植などの当技術分野で知られている方法によってヒト化することができる。Ｓａｆｄａｒｉｅｔａｌ．，（２０１３）ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＧｅｎｅｔＥｎｇＲｅｖ．；２９：１７５－８６も参照されたい。さらに、ヒト化抗体は、既存の哺乳動物システムに代わる安価な生産手段として、トランスジェニック植物で生産することができる。例えば、トランスジェニック植物は、タバコ植物、すなわち、Ｎｉｃｏｔｉａｎｉａｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ、およびＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｃｕｍであり得る。抗体は植物の葉から精製される。植物の安定した形質転換は、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓまたはパーティクルガン法を使用することで達成できる。例えば、少なくとも重鎖および軽鎖配列を含有する核酸発現ベクターは、細菌培養物、すなわち、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ株ＢＬＡ４４０４において、形質転換を介して発現される。植物の浸透は注射によって達成することができる。可溶性葉抽出物は、乳鉢で葉組織を粉砕し、遠心分離することによって調製することができる。抗体の単離および精製は、当技術分野の当業者に知られている多くの方法によって容易に実施することができる。植物における抗体産生の他の方法は、例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，２００３，２１：８２０－５、およびＫｏｅｔａｌ，ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３３２，２００９，ｐｐ．５５－７８に記載されている。したがって、本発明はさらに、本発明の抗体をコードする、または本発明の抗体を産生するベクターを含む任意の細胞または植物を提供する。

完全ヒトおよびヒト化抗体などのヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ，ｅｔａｌ，１９８３ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ４：７２を参照されたい）、ヒトモノクローナル抗体を産生するＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ，ｅｔａｌ，１９８５Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６を参照されたい）を使用して調製することができる。ヒトモノクローナル抗体を利用することができ、ヒトハイブリドーマを使用することによって（Ｃｏｔｅ，ｅｔａｌ，１９８３．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８０：２０２６－２０３０を参照されたい）またはインビトロでヒトＢ細胞をエプスタインバーウイルスで形質転換することによって（Ｃｏｌｅ，ｅｔａｌ．，１９８５Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ，ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７－９６）産生することができる。

加えて、ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリを含む、他の技法を使用して産生することができる。（ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍａｎｄＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１（１９９１）を参照されたい）。同様に、ヒト抗体は、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されているマウスに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製することができる。チャレンジ後、ヒト抗体産生が観察され、これは、遺伝子再配置、アセンブリ、および抗体レパートリーを含む、すべての態様においてヒトに見られるものと非常によく似ている。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、ならびにＭａｒｋｓｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０，７７９－７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ３６８８５６－８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ３６８，８１２－１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄｅｔａｌ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４，８４５－５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４，８２６（１９９６）およびＬｏｎｂｅｒｇａｎｄＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６５－９３（１９９５）に記載されている。

ヒト抗体は、加えて、抗原によるチャレンジに応答して動物の内因性抗体ではなく完全ヒト抗体を産生するように修飾されるトランスジェニック非ヒト動物を使用して産生することができる。（ＰＣＴ国際公開第９４／０２６０２号および米国特許第６，６７３，９８６号を参照されたい）。非ヒト宿主における重鎖および軽鎖免疫グロブリン鎖をコードする内因性遺伝子は無力化されており、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードする活性遺伝子座は、宿主のゲノムに挿入される。ヒト遺伝子は、例えば、必要なヒトＤＮＡセグメントを含有する酵母人工染色体を使用して、組み込まれる。次いで、すべての所望の改変を提供する動物は、改変の完全な相補体よりも少ない相補体を含む中間トランスジェニック動物を交配することによって子孫として得られる。そのような非ヒト動物の非限定的な例はマウスであり、ＰＣＴ公開第ＷＯ９６／３３７３５号およびＷＯ９６／３４０９６号に開示されているようにＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）と呼ばれる。この動物は、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。抗体は、例えば、ポリクローナル抗体の調製物として、目的の免疫原での免疫化後、直接動物から、または代替的に、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマなどの、動物に由来する不死化Ｂ細胞から得ることができる。加えて、ヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子は、回収および発現されて、抗体を直接得ることができるか、またはさらに修飾されて、例えば、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子などの抗体の類似体を得ることができる。

したがって、そのような技術を使用して、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を産生することができる。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇａｎｄＨｕｓｚａｒＩｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７３：６５－９３（１９９５）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な議論については、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第９６／３３７３５号、米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたい。加えて、ＣｒｅａｔｉｖｅＢｉｏＬａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ）などの企業は、上記と同様の技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体を提供するために業務を提供できる。

内因性免疫グロブリン重鎖の発現を欠く、マウスとして例示される、非ヒト宿主を産生する方法の例は、米国特許第５，９３９，５９８号に開示される。これは、遺伝子座の再配置を防止し、再配置された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の転写物の形成を防止するために、胚性幹細胞における少なくとも１つの内因性重鎖遺伝子座からＪセグメント遺伝子を欠失することであって、欠失が、選択可能なマーカーをコードする遺伝子を含有する標的化ベクターによって行われる、欠失することと、胚性幹細胞からトランスジェニックマウスを産生することであって、その体細胞および生殖細胞が、選択可能なマーカーをコードする遺伝子を含有する、産生することと、を含む、方法によって得ることができる。

ヒト抗体などの、目的の抗体を産生するための１つの方法は、米国特許第５，９１６，７７１号に開示される。この方法は、重鎖をコードするヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを培養中の１つの哺乳動物宿主細胞へ導入し、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを別の哺乳動物宿主細胞へ導入し、２つの細胞を融合してハイブリッド細胞を形成することを含む。ハイブリッド細胞は、重鎖および軽鎖を含有する抗体を発現する。

この手順のさらなる改善において、免疫原上の臨床的に関連するエピトープを特定するための方法、および関連するエピトープに高い親和性で免疫特異的に結合する抗体を選抜するための対応する方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５３０４９号に開示されている。

目的の抗体はまた、本明細書に記載の一本鎖抗体をコードするＤＮＡセグメントを含有するベクターによって発現させることができる。

これらのベクターは、リポソーム、裸のＤＮＡ、アジュバント支援ＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどを含むことができる。ベクターには、標的化部分（例えば、細胞表面受容体に対するリガンド）、および核酸結合部分（例えば、ポリリジン）を有する、ＷＯ９３／６４７０１に記載されるものなどの化学コンジュゲート、ウイルスベクター（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡウイルスベクター）、標的部分（例えば、標的細胞に特異的な抗体）および核酸結合部分（例えば、プロタミン）を含有する融合タンパク質であるＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ９５／２２６１８）に記載されるものなどの融合タンパク質、プラスミド、ファージ、ウイルスベクターなどが含まれ得る。ベクターは、染色体、非染色体、または合成であり得る。レトロウイルスベクターも使用でき、モロニーマウス白血病ウイルスが挙げられる。

ＤＮＡウイルスベクターも使用されてよく、オルソポックスまたはアビポックスベクターなどのポックスベクター、単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ）ベクターなどのヘルペスウイルスベクターが含まれる（Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ｅｔａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，６４：４８７（１９９５）、Ｌｉｍ，Ｆ．，ｅｔａｌ，ｉｎＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇ：ＭａｍｍａｌｉａｎＳｙｓｔｅｍｓ，Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，Ｅｄ．（ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，ＯｘｆｏｒｄＥｎｇｌａｎｄ）（１９９５）、Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ｅｔａｌ，ＰｒｏｃＮａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．：Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：７６０３（１９９３）、Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．，ｅｔａｌ，ＰｒｏｃＮａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ８７：１１４９（１９９０），ＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｓ（ＬｅＧａｌＬａＳａｌｌｅｅｔａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：９８８（１９９３）を参照されたい、Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ｅｔａｌ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ３：２１９（１９９３）、Ｙａｎｇ，ｅｔａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２００４（１９９５）ａｎｄＡｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｓ（Ｋａｐｌｉｔｔ，Ｍ．Ｇ．．ｅｔａｌ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．８：１４８（１９９４）を参照されたい。

ポックスウイルスベクターは、遺伝子を細胞の細胞質に導入する。アビポックスウイルスベクターは、核酸の短期間の発現のみをもたらす。アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターは、核酸を神経細胞に導入するために使用できる。アデノウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（約４ヶ月）よりも短期間の発現（約２ヶ月）をもたらし、ひいてはＨＳＶベクターよりも短い。選択される特定のベクターは、標的細胞および治療される状態に依存するであろう。導入は、標準的な技法、例えば、感染、トランスフェクション、形質導入、または形質転換によることができる。遺伝子導入のモードの例には、例えば、裸のＤＮＡ、ＣａＰ０_４沈殿、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、プロトプラスト融合、リポフェクション、細胞マイクロインジェクション、およびウイルスベクターが含まれる。

ベクターは、本質的に任意の所望の標的細胞を標的化するために使用することができる。例えば、定位的注入を使用して、ベクター（例えば、アデノウイルス、ＨＳＶ）を所望の位置に誘導することができる。加えて、粒子は、ＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄＩｎｆｕｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍなどのミニポンプ注入システムを使用した脳室内（ｉｃｖ）注入によって送達することができる。対流と呼ばれるバルク流に基づく方法は、脳の拡張領域に大きな分子を送達するのに効果的であることも証明されており、ベクターを標的細胞に送達するのに有用であり得る。（Ｂｏｂｏｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：２０７６－２０８０（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎｅｔａｌ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６６：２９２－３０５（１９９４）を参照されたい）。使用することができる他の方法には、カテーテル、静脈内、非経口、腹腔内、および皮下注射、ならびに経口または他の既知の投与経路が含まれる。

これらのベクターは、様々な方法、例えば、試料中のＰＤ－Ｌ１の存在を検出するために使用することができる多量の抗体を発現するために使用することができる。ＰＤ－Ｌ１活性に結合させて破壊させることを試みるために、抗体を使用することもできる。一実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ受容体に結合する野生型Ｆｃ領域と同様のＦｃ領域を含む完全長抗体である。

技法は、本発明の抗原性タンパク質に特異的な一本鎖抗体の産生に適合させることができる（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。加えて、方法は、Ｆ_ａｂ発現ライブラリ（例えば、Ｈｕｓｅ，ｅｔａｌ，１９８９Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５－１２８１を参照されたい）の構築に適合させて、タンパク質、またはその誘導体、断片、類似体、もしくは相同体について所望の特異性を有するモノクローナルＦ_ａｂ断片の迅速かつ効果的な特定を可能にすることができる。タンパク質抗原に対するイディオタイプを含有する抗体断片は、当技術分野で知られている技法によって産生することができ、これらに限定されないが、（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって産生されるＦ_{（ａｂ’）２}断片、（ｉｉ）Ｆ_{（ａｂ’）２}断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成されるＦ_ａｂ断片、（ｉｉｉ）抗体分子のパパインおよび還元剤での処理によって生成されたＦ_ａｂ断片、ならびに（ｉｖ）Ｆ_ｖ断片を含む。

ヘテロコンジュゲート抗体も本発明の範囲内である。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体で構成される。そのような抗体は、例えば、望ましくない細胞への免疫系細胞の標的化を可能にし（米国特許第４，６７６，９８０号を参照されたい）、ＨＩＶ感染の治療を可能にする（ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／００３６０号、同第ＷＯ９２／２０３７３号を参照されたい）。抗体は、架橋剤を用いるものなど、タンパク質合成化学分野における既知の方法を使用してインビトロで調製できることが企図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的に適した試薬の例には、イミノチオレートおよびメチル－４－メルカプトブチリミデート、ならびに、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されるものが含まれる。

本発明の抗体は、例えば、がんの治療における抗体の有効性を高めるように、エフェクター機能に関して改変することができる。例えば、システイン残基は、Ｆｃ領域に導入することができ、それによってこの領域での鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。このように生成されたホモ二量体抗体は、改善された内在化能力ならびに／または増加した補体媒介性細胞殺滅および抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有することができる。（Ｃａｒｏｎｅｔａｌ，Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．，１７６：１１９１－１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８－２９２２（１９９２）を参照されたい）。代替的に、二重Ｆｃ領域を有し、それによって強化された補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有することができる抗体を操作することができる。（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎｅｔａｌ，Ａｎｔｉ－ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ，３：２１９－２３０（１９８９）を参照されたい）。

特定の実施形態では、本発明の抗体は、抗体の抗原非依存性エフェクター機能、特に抗体の循環半減期を改変するアミノ酸置換を含むＦｃバリアントを含むことができる。そのような抗体は、これらの置換を欠く抗体と比較される場合、ＦｃＲｎへの増加または減少した結合のいずれかを示し、したがって、それぞれ、増加または減少した血清中の半減期を有する。ＦｃＲｎについての改善された親和性を有するＦｃバリアントは、より長い血清半減期を有すると予想され、そのような分子は、例えば、慢性疾患または障害を治療するために、投与された抗体の長い半減期が望まれる哺乳動物を治療する方法において有用な用途を有する。対照的に、低下したＦｃＲｎ結合親和性を有するＦｃバリアントは、より短い半減期を有することが予想され、そのような分子はまた、例えば、短縮された循環時間が有利であり得る哺乳動物に投与するために、例えば、インビボ診断画像化のために、または出発抗体が、長期間にわたって循環中に存在する場合、毒性の副作用を有する状況において、有用である。低下したＦｃＲｎ結合親和性を有するＦｃバリアントは、胎盤を横切る可能性も低く、よって妊婦における疾患または障害の治療においても有用である。加えて、低減したＦｃＲｎ結合親和性が望ましい場合がある他の用途には、脳、腎臓、および／または肝臓への局在化が望ましい用途が含まれる。一実施形態では、Ｆｃバリアント含有抗体は、血管系から腎糸球体の上皮を横切る輸送の低減を示すことができる。別の実施形態では、Ｆｃバリアント含有抗体は、脳から血液脳関門（ＢＢＢ）を横切り血管空間への輸送の低減を示すことができる。一実施形態では、改変されたＦｃＲｎ結合を有する抗体は、Ｆｃドメインの「ＦｃＲｎ結合ループ」内に１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃドメインを含む。ＦｃＲｎ結合ループは、アミノ酸残基２８０～２９９（ＥＵ付番による）で構成される。ＦｃＲｎ結合活性を改変する例示的なアミノ酸置換は、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開第ＷＯ０５／０４７３２７号に開示されている。特定の例示的な実施形態では、本発明の抗体、またはその断片は、以下の置換：Ｖ２８４Ｅ、Ｈ２８５Ｅ、Ｎ２８６Ｄ、Ｋ２９０Ｅ、およびＳ３０４Ｄ（ＥＵ付番）のうちの１つ以上を有するＦｃドメインを含む。

いくつかの実施形態では、変異は、ｍＡｂの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が改変されるように、ｍＡｂの定常領域に導入される。例えば、変異は、ＣＨ２ドメインにおけるＬＡＬＡ変異である。一実施形態では、抗体（例えば、ヒトｍＡｂ、または二重特異性Ａｂ）は、ＡＤＣＣ活性を低減させるヘテロ二量体ｍＡｂの１つのｓｃＦｖユニット上に変異を含む。別の実施形態では、ｍＡｂは、ＡＤＣＣ活性を完全に除去する、ヘテロ二量体ｍＡｂの両方の鎖上に変異を含む。例えば、ｍＡｂの一方または両方のｓｃＦｖユニットに導入された変異は、ＣＨ２ドメインのＬＡＬＡ変異である。可変ＡＤＣＣ活性を有するこれらのｍＡｂは、ｍＡｂがｍＡｂによって認識される１つの抗原を発現する細胞に向かって最大の選択的殺滅を示すが、ｍＡｂによって認識される第２の抗原に向かって最小の殺滅を示すように、最適化することができる。

他の実施形態では、本明細書に記載の診断および治療方法での使用のための抗体は、例えばＩｇＧ_１またはＩｇＧ_４の重鎖定常領域などの定常領域を有し、それはグリコシル化を低減または排除するように変更される。例えば、本発明の抗体はまた、抗体のグリコシル化を変更するアミノ酸置換を含むＦｃバリアントを含み得る。例えば、Ｆｃバリアントでは、グリコシル化（例えば、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化）を低減させることができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、アミノ酸位置２９７（ＥＵ付番）に通常見られるＮ結合型グリカンのグリコシル化が低減されている。別の実施形態では、抗体は、グリコシル化モチーフ、例えばアミノ酸配列ＮＸＴまたはＮＸＳを含むＮ結合型グリコシル化モチーフ、の付近または内部にアミノ酸置換を有する。具体的な実施形態では、抗体は、アミノ酸位置２２８または２９９（ＥＵ付番）にアミノ酸置換を有するＦｃバリアントを含む。より具体的なの実施形態では、抗体は、Ｓ２２８ＰおよびＴ２９９Ａ変異（ＥＵ付番）を含むＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域を含む。

グリコシル化を低減または変更する例示的なアミノ酸置換は、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開第ＷＯ０５／０１８５７２号に開示されている。いくつかの実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、グリコシル化を排除するように修飾される。そのような抗体、またはその断片は、「アグリ（ａｇｌｙ）」抗体、またはその断片（例えば、「アグリ」抗体）と呼ばれ得る。理論に拘束されないが、「アグリ」抗体、またはその断片は、インビボで改善された安全性および安定性プロファイルを有することができる。例示的なアグリ抗体、またはその断片は、Ｆｃエフェクター機能を欠き、それによりＰＤ－Ｌ１を発現する正常な生組織および細胞に対するＦｃ媒介性毒性の可能性を排除する、ＩｇＧ_４抗体の脱グリコシル化Ｆｃ領域を含む。さらに他の実施形態では、本発明の抗体、またはその断片は、変更されたグリカンを含む。例えば、抗体は、Ｆｃ領域のＡｓｎ２９７におけるＮ－グリカン上に低減した数のフコース残基を有することができ、すなわち、脱フコシル化される。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域のＡｓｎ２９７におけるＮ－グリカン上に改変された数のシアル酸残基を有することができる。

本発明はまた、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片）などの細胞傷害剤、または放射性同位体にコンジュゲートされた抗体を含むイムノコンジュゲート（後者はラジオコンジュゲート）を対象とする。

使用することができる酵素的に活性な毒素およびその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、リストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが含まれる。ラジオコンジュゲートされた抗体の産生には、様々な放射性核種が利用可能である。非限定的な例としては、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙ、および^１８６Ｒｅが挙げられる。

抗体および細胞傷害剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタレルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）など）、ジイソシアネート（トリエン２，６－ジイソシアネートなど）、およびビス活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質結合剤を使用して作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａｅｔａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素１４標識された１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。（ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１１０２６号および米国特許第５，７３６，１３７号を参照されたい）。

当業者であれば、多種多様な可能な部分が、得られる抗体または本発明の他の分子に結合され得ることを認識する。（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、“ＣｏｎｊｕｇａｔｅＶａｃｃｉｎｅｓ”，ＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓｔｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅａｎｄＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（ｅｄｓ），ＣａｒｇｅｒＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。

結合は、抗体および他の部分がそれらのそれぞれの活性を保持する限り、２つの分子を結合するであろう任意の化学反応によって達成することができる。この結合は、多くの化学メカニズム、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成を含むことができる。一実施形態では、結合は、共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合によって、または外部架橋分子の組み込みによって達成することができる。多くの二価または多価結合剤は、本発明の抗体などのタンパク質分子を他の分子に結合するのに有用である。例えば、代表的な結合剤は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を含むことができる。このリストは、当技術分野で知られている様々なクラスの結合剤を網羅することを意図するものではなく、むしろ、より一般的な結合剤の例示である。（ＫｉｌｌｅｎａｎｄＬｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）、Ｊａｎｓｅｎｅｔａｌ．，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ６２：１８５－２１６（１９８２）、およびＶｉｔｅｔｔａｅｔａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３８：１０９８（１９８７）を参照されたい）。リンカーの非限定的な例は、文献に記載されている。（例えば、ＭＢＳ（Ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルの使用について記載するＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）を参照されたい）。オリゴペプチドリンカーによって抗体に結合したハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用について記載する、米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。本発明の抗体とともに使用できる有用なリンカーの非限定的な例としては、以下が含まれる：（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノ－プロピル）カルボジイミド塩酸塩、（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－プリジル－ジチオ）－トルエン（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）、（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２１６５１Ｇ）、（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２１６５－Ｇ）、および（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートされたスルホ－ＮＨＳ（－ヒドロキシスルホ－スクシンイミド：ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２４５１０）が挙げられる。

本明細書に記載されるリンカーは、異なる属性を有する成分を含有し、よって異なる物理化学的特性を有するコンジュゲートをもたらす。例えば、カルボン酸アルキルのスルホ－ＮＨＳエステルは、芳香族カルボン酸塩のスルホ－ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳ－エステル含有リンカーは、スルホ－ＮＨＳエステルよりも溶解性が低い。さらに、リンカーＳＭＰＴは、立体障害ジスルフィド結合を含有し、向上した安定性を有するコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド結合は、一般に、他の結合よりも安定性が低く、これはジスルフィド結合がインビトロで切断され、利用可能なコンジュゲートが少なくなるためである。特に、スルホ－ＮＨＳは、カルボジミド結合の安定性を高めることができる。カルボジミド結合（ＥＤＣなど）は、スルホ－ＮＨＳと組み合わせて使用されると、カルボジミド結合反応単独よりも加水分解に対してより耐性のあるエステルを形成する。

本明細書に開示される抗体はまた、免疫リポソームとして製剤化することができる。抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）、Ｈｗａｎｇｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されるような当技術分野で知られる方法によって調製される。拡張された循環時間を有するリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。

非限定的に例示される有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物による逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、定義された孔径のフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームを生成する。本発明の抗体のＦａｂ’断片は、Ｍａｒｔｉｎｅｔａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６－２８８（１９８２）に記載されるように、ジスルフィド交換反応を介してリポソームにコンジュゲートすることができる。

多重特異性抗体
多重特異性抗体は、２つ以上の異なる抗原を認識することができる抗体である。例えば、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、得られる抗体が２つの異なる抗原を認識するように２つの可変ドメインまたはｓｃＦｖユニットを含む抗体である。例えば、三重特異性抗体（ｔｓＡｂ）は、得られる抗体が３つの異なる抗原を認識するように２つの可変ドメインまたはｓｃＦｖユニットを含む抗体である。本発明は、ＰＤ－Ｌ１および第２の抗原を認識する二重特異性抗体などの多重特異性抗体を提供する。例えば、ＰＤ－Ｌ１は免疫チェックポイント分子であり、腫瘍抗原でもある。腫瘍抗原標的化分子として、ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体または抗原結合断片を免疫細胞に特異的な第２の抗原結合断片と組み合わせて、二重特異性抗体を生成することができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞からなる群から選択される。標的とすることできる免疫細胞上の分子には、例えば、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８、およびＣＤ６４が含まれるが、これらに限定されない。他の非限定的な例には、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３（ＣＤ２２３としても知られている）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られている）、ＴＩＭ３、ＯＸ－４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、およびＣＤ４７が含まれる。例示的な第２の抗原には、腫瘍関連抗原（例えば、ＬＩＮＧＯ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ－７２、ＣＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン、αＶβ３、α５β１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、およびテネイシン）、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴ、およびＧＩＴＲＬ）、および細胞表面受容体が含まれる。様々なフォーマットの二重特異性抗体も、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１断片および第２の断片のそれぞれは、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体からそれぞれ独立して選択される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆｃ断片をさらに含む。本発明の二重特異性抗体は、本明細書に開示される、ＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖および軽鎖の組み合わせ、またはｓｃＦｖを含む。

例えば、本明細書で提供されるＶＨおよびＶＬ配列と組み合わせて有用である例示的な定常領域に加えて、二重特異性ＰＤ－Ｌ１抗体（ＧＩＴＲ－ＰＤ－１Ｌ－融合など）の核酸およびアミノ酸配列が以下に提供される。

（表１１Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７可変領域核酸配列

（表１１Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７可変領域アミノ酸配列

（表１２Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域核酸配列－野生型ＩｇＧ１モノマー

（表１２Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域アミノ酸配列－野生型ＩｇＧ１モノマー

（表１３Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域核酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤＬ－１４０ｍｕｔ

（表１３Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域アミノ酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤＬ－１４０ｍｕｔ

（表１４Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域核酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－６Ｂ６．１ｍｕｔ

（表１４Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域アミノ酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－６Ｂ６．１ｍｕｔ

（表１５Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域核酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－６Ｂ６．２

（表１５Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域アミノ酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－６Ｂ６．２

（表１６Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域核酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－７Ｂ３

（表１６Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域アミノ酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－７Ｂ３

（表１７Ａ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域核酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－５Ｂ９

（表１７Ｂ）Ａｂ＃Ｅ１－３Ｈ７定常領域アミノ酸配列－ＩｇＧ１ＬＡＬＡ－ａＰＤ－Ｌ１５０－５Ｂ９

本発明の多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および三重特異性抗体）は、当技術分野で既知の方法を使用して構築することができる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、２つのｓｃＦｖユニット間の分子内会合が抗体を形成することを可能にするのに十分な長さの長いリンカーポリペプチドによって２つのｓｃＦｖ断片が結合される、単一ポリペプチドである。他の実施形態では、二重特異性抗体は、共有結合または非共有結合によって連結された２つ以上のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｃＦｖ融合構築物とともに使用され得るアミノ酸リンカー（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ；「（Ｇ４Ｓ）２」）は、柔軟性を改善するためにより長いＧ４Ｓリンカーで生成され得る。例えば、リンカーは「（Ｇ４Ｓ）３」（例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）、「（Ｇ４Ｓ）４」（例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）、「（Ｇ４Ｓ）５」（例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）、「（Ｇ４Ｓ）６」（例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）、「（Ｇ４Ｓ）７」（例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）などとすることもできる。例えば、（Ｇ４Ｓ）５リンカーの使用は、より高い柔軟性および発現の改善を提供し得る。いくつかの実施形態では、リンカーはまた、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＧＳ）_ｎ、（ＧＧＧＳ）_ｎ、（ＧＧＳＧ）_ｎ、（ＧＧＳＧＧ）_ｎ、または（ＧＧＧＧＳ）_ｎであり得、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。使用できる当業者に公知のリンカーの非限定的な例は、米国特許第９，７０８，４１２号、米国特許出願公開第２０１８／０１３４７８９号および同第２０２０／０１４８７７１号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１９／０５１１２２号に記載されている（これらの各々の全内容を参照により組み込む）。

別の実施形態では、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および三重特異性抗体）は、「ノブ・イントゥ・ホール」法（Ｒｉｄｇｗａｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ７：６１７－６２１（１９９６））を使用して構築され得る。この方法では、２つの異なる可変ドメインのＩｇ重鎖は、還元されて、重－軽鎖ペアリングを保持しながら、重鎖ペアリングを選択的に切断する。２つの異なる抗原を認識する２つの重－軽鎖ヘテロ二量体は、混合されて、ＣＨ３ドメインの操作された「ノブイントゥホール」を通して媒介される、ヘテロライゲーションペアリングを促進する。

別の実施形態では、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および三重特異性抗体）は、２つ以上の異なる抗体から重鎖－軽鎖二量体を交換してハイブリッド抗体を生成することによって構築することができ、第１の重－軽鎖二量体はＰＤ－Ｌ１を認識し、第２の重－軽鎖二量体は第２の抗原を認識する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、２つ以上の異なる抗体から重鎖－軽鎖二量体を交換してハイブリッド抗体を生成することによって構築することができ、第１の重－軽鎖二量体は第２の抗原を認識し、第２の重－軽鎖二量体はＰＤ－Ｌ１を認識する。重－軽鎖二量体のメカニズムは、二重特異性分子としても機能するヒトＩｇＧ_４の形成に類似している。ＩｇＧ重鎖の二量体化は、各重鎖のＣＨ３ドメインとジスルフィド架橋とのペアリングなどの分子内力によって駆動される。ＣＨ３ドメインにおける特定のアミノ酸の存在（Ｒ４０９）は、二量体交換およびＩｇＧ_４分子の構築を促進することが示されている。重鎖ペアリングはまた、抗体のヒンジ領域における重鎖間ジスルフィド架橋によってさらに安定化される。具体的には、ＩｇＧ_４において、ヒンジ領域は、アミノ酸２２６～２３０で（配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓを含有する安定なＩｇＧ１ヒンジ領域と比較して）アミノ酸配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓを含有する。２２９位のセリンのこの配列の違いは、ＩｇＧ_４がヒンジ領域において鎖内ジスルフィドを形成する傾向に関連している（ＶａｎｄｅｒＮｅｕｔＫｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ，Ｍ．ｅｔａｌ，２００７，Ｓｃｉｅｎｃｅ３１７：１５５４－１５５７およびＬａｂｒｉｊｎ，Ａ．Ｆ．ｅｔａｌ，２０１１，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌ１８７：３２３８－３２４６）。

したがって、本発明の二重特異性抗体は、ＣＨ３ドメインにおけるＲ４０９残基およびＰＤ－Ｌ１または第２の抗原を認識する抗体のヒンジ領域におけるＣｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ配列の導入を通して作製することができ、その結果、重－軽鎖二量体は、交換して、ＰＤ－Ｌ１を認識する１つの重－軽鎖二量体および第２の抗原を認識する第２の重－軽鎖二量体を有する抗体分子を産生し、第２の抗原は、本明細書に開示される任意の抗原である。既知のＩｇＧ_４分子はまた、本明細書に開示されるように、重鎖および軽鎖がＰＤ－Ｌ１または第２の抗原を認識するように改変することもできる。本発明の二重特異性抗体を構築するためのこの方法の使用は、ある特定の白血球によって発現される補体およびＦｃ受容体などの免疫応答のエフェクターシステムとの相互作用が不十分であるという点でＦｃ領域が他のＩｇＧサブタイプとは異なる、ＩｇＧ_４分子の固有の特徴のために有益であり得る。この特異的な特性によって、これらのＩｇＧ_４ベースの二重特異性抗体は、抗体が標的に結合して標的に関連するシグナル伝達経路を機能的に変化させる必要があるがエフェクター活性を誘導しない治療用途に魅力的となる。

いくつかの実施形態では、変異は、ｂｓＡｂの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が改変されるように、ｂｓＡｂの定常領域に導入される。例えば、変異は、ＣＨ２ドメインにおけるＬＡＬＡ変異である。一態様では、ｂｓＡｂは、ＡＤＣＣ活性を低減する、ヘテロ二量体ｂｓＡｂの１つのｓｃＦｖユニット上の変異を含有する。別の態様では、ｂｓＡｂは、ＡＤＣＣ活性を完全に除去する、ヘテロ二量体ｂｓＡｂの両方の鎖上の変異を含有する。例えば、ｂｓＡｂの一方または両方のｓｃＦｖユニットに導入された変異は、ＣＨ２ドメインのＬＡＬＡ変異である。可変ＡＤＣＣ活性を有するこれらのｂｓＡｂは、ｂｓＡｂがｂｓＡｂによって認識される１つの抗原を発現する細胞に向かって最大の選択的殺滅を示すが、ｂｓＡｂによって認識される第２の抗原に向かって最小の殺滅を示すように、最適化することができる。

本明細書に開示される二重特異性抗体は、慢性感染症、疾患、または医学的症状、例えばがんの治療に有効利用できる。

ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の使用
ＰＤ－Ｌ１タンパク質またはその断片に特異的に結合する本発明の抗体は、ＰＤ－Ｌ１関連疾患または障害の治療のために投与することができる。「ＰＤ－Ｌ１関連疾患または障害」には、ＰＤ－Ｌ１のレベルの上昇および／またはＰＤ－Ｌ１が関与する細胞シグナル伝達経路の活性化が見られる、病状および／または病状に関連する徴候が含まれる。例示的なＰＤ－Ｌ１関連疾患または障害には、がんおよび自己免疫疾患が含まれるが、これらに限定されない。

二重特異性、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化および完全ヒト抗体などの、本発明の抗体は、治療用物質として使用することができる。そのような剤は、一般に、対象におけるがんを治療もしくは予防するため、ワクチン効率を向上するため、または自然な免疫応答を増強するために使用されるであろう。抗体調製物、例えば、その標的抗原に対して高い特異性および高い親和性を有するものが対象に投与され、一般に、標的との結合に起因する効果をもたらすと考えられる。抗体の投与は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の活性を無効にするか、阻害するか、または妨害することができる。

本発明のＰＤ－Ｌ１タンパク質またはその断片に特異的に結合する抗体は、薬学的組成物の形態で、がんの治療のために投与することができる。抗体を含む治療用の薬学的組成物の調製に関与する原理および注意事項、ならびに成分の選択におけるガイダンスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅＡｎｄＰｒａｃｔｉｃｅＯｆＰｈａｒｍａｃｙ２０ｔｈｅｄ．（ＡｌｆｏｎｓｏＲ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｔａｌ，ｅｄｉｔｏｒｓ）ＭａｃｋＰｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，２０００、ＤｒｕｇＡｂｓｏｒｐｔｉｏｎＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，ＡｎｄＴｒｅｎｄｓ，ＨａｒｗｏｏｄＡｃａｄｅｍｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４、およびＰｅｐｔｉｄｅＡｎｄＰｒｏｔｅｉｎＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ（ＡｄｖａｎｃｅｓＩｎＰａｒｅｎｔｅｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．４），１９９１，Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋに提供される。

特定の患者に対する特定の投与量および治療計画は、使用される具体的な抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、および食事、および投与時間、排泄頻度、薬物の併用、および治療を受けている特定の疾患の重症度など、様々な要因に依存する。医療従事者によるそのような要因の判断は、当業者の技量の範囲内である。その量はまた、治療される個々の患者、投与経路、製剤のタイプ、使用される化合物の特性、疾患の重症度、および所望の効果にも依存すると考えられる。使用される量は、当技術分野で周知の薬学的および薬物動態学的原理によって決定することができる。

本発明の抗体の治療有効量は、治療目的を達成するために必要な量とすることができる。上記のように、前記治療目的は、特定の場合には標的の機能を妨害する、抗体とその標的抗原との間の結合相互作用であり得る。投与する必要のある量はさらに、その特異的な抗原についての抗体の結合親和性に依存し、また、投与された抗体が、それが投与される他の対象の自由体積から枯渇する速度にも依存する。対象（例えば、患者）に投与される本明細書に記載の抗原結合ポリペプチドの投与量は、典型的には、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ患者体重、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ患者体重、または１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ患者体重である。ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫応答のため、他の種由来の抗体よりもヒト体内での半減期が長い。したがって、より少ない投与量およびより少ない頻度でのヒト抗体の投与が可能であることが多い。さらに、本開示の抗体の投与量および投与頻度は、例えば、脂質化などの修飾によって抗体の取り込みおよび組織への（例えば脳への）浸透を増強することによって低減され得る。本発明の抗体または抗体断片の治療上有効な投与のための一般的な範囲は、非限定的な例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。一般的な投与頻度は、例えば、１日２回～１週間に１回の範囲であり得る。

抗体断片が使用される場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の阻害性断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。そのようなペプチドは、化学的に合成することができ、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。（例えば、Ｍａｒａｓｃｏｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）を参照されたい）。製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な２つ以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有することができる。代替的に、または追加的に、組成物は、例えば、細胞傷害剤、サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５）、化学療法剤、または増殖阻害剤などの、その機能を増強する剤を含むことができる。そのような分子は、意図された目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。

活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）における、またはマクロエマルジョンにおける、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに封入することができる。

インビボ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。

徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸およびγエチル－Ｌ－グルタミン酸塩のコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよび酢酸リュープロリドからなる注射可能ミクロスフェア）などの分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、ならびにポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン－酢酸ビニルおよび乳酸－グリコール酸などのポリマーは、１００日超にわたる分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲルは、より短い時間にわたってタンパク質を放出する。

本発明による抗体は、試料中のＰＤ－Ｌ１（またはそのタンパク質断片）の存在を検出するための剤として使用することができる。例えば、抗体は検出可能な標識を含むことができる。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。無傷抗体、またはその断片（例えば、Ｆ_ａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ_{（ａｂ）２}）を使用することができる。プローブまたは抗体に関して、「標識された」という用語は、検出可能物質をプローブまたは抗体に結合（すなわち、物理的に連結）することによるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識される別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含することができる。間接標識の例には、蛍光標識された二次抗体を使用した一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出することができるようにビオチンでＤＮＡプローブを末端標識することが含まれる。「生物学的試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞、および生体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞、および生体液を含み得る。したがって、「生物学的試料」という用語の使用には、血液、および血清、血漿、またはリンパ液を含む、血液の画分または成分が含まれる。すなわち、本発明の検出方法を使用して、インビトロおよびインビボで生物学的試料中の分析物ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出することができる。例えば、分析物ｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技法には、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが含まれる。分析物タンパク質の検出のためのインビトロ技法には、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光が含まれる。分析物ゲノムＤＮＡの検出のためのインビトロ技法には、サザンハイブリダイゼーションが含まれる。

イムノアッセイを実施するための手順は、例えば、“ＥＬＩＳＡ：ＴｈｅｏｒｙａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ：ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌ．４２，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（Ｅｄ．）ＨｕｍａｎＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９５、“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，Ｅ．ＤｉａｍａｎｄｉｓａｎｄＴ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６、および“ＰｒａｃｔｉｃｅａｎｄＴｈｅｏｒｙｏｆＥｎｚｙｍｅＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。さらに、分析物タンパク質の検出のためのインビボ技法は、対象に標識された抗分析物タンパク質抗体を導入することを含む。例えば、抗体は、対象におけるその存在および位置が標準的な画像化技法によって検出され得る放射性マーカーで標識され得る。

ＰＤ－Ｌ１タンパク質（またはその断片）に対する抗体は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の局在化および／または定量化に関連する当技術分野で公知の方法で使用する（例えば、適切な生理学的試料内のＰＤ－Ｌ１タンパク質のレベルの測定における使用、診断法における使用、タンパク質のイメージングにおいて使用する）ことができる。所定の実施形態では、抗体由来の抗原結合ドメインを含有する、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、またはその誘導体、断片、類似体、もしくは相同体に特異的な抗体は、薬学的に活性な化合物（以下、「治療薬」と称する）として利用される。

本発明のＰＤ－Ｌ１タンパク質に特異的な抗体を使用して、免疫親和性、クロマトグラフィー、または免疫沈降などの標準的な技法によってＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを単離することができる。ＰＤ－Ｌ１タンパク質（またはその断片）に対する抗体は、臨床試験手順の一部として組織中のタンパク質レベルをモニターするために、例えば、所定の治療レジメンの有効性を決定するために、診断的に使用することができる。

検出は、抗体を検出可能物質に結合（すなわち、物理的に連結）することによって促進することができる。検出可能物質の例としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、および放射性材料が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれ、好適な蛍光材料の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリンが挙げられ、発光材料の例としては、ルミノールが挙げられ、生物発光材料の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられ、好適な放射性材料の例としては、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３２Ｐまたは^３Ｈが挙げられる。

本発明の抗体または作用物質（本明細書では「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにそれらの誘導体、断片、類似体、および相同体は、投与に適した薬学的組成物に組み込むことができる。そのような組成物は、典型的には、抗体または作用物質と、薬学的に許容される担体とを含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与に適合する、任意のすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことができる。好適な担体は、当該分野の標準的な参照テキストであり、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。そのような担体または希釈剤の好ましい例としては、限定されないが、水、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソームおよび固定油などの非水性ビヒクルも使用され得る。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および剤の使用は、当技術分野において周知である。いずれかの従来の媒体または剤が活性化合物と不適合性である限りを除いて、組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性化合物も、組成物中に組み込むことができる。

本発明の薬学的組成物は、その意図された投与経路と適合性であるように製剤化される。投与経路の例は、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（すなわち、局所）、経粘膜、および直腸投与を含む。非経口、皮内、または皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含むことができる：注射用水、食塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などのバッファー、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性の調整のための剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整することができる。非経口調製物は、アンプル、使い捨て注射器、またはガラスもしくはプラスチック製の複数用量バイアルに封入することができる。

注射可能な使用に適した薬学的組成物は、無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および無菌注射可能溶液または分散液の即時調製のための無菌粉末を含むことができる。静脈内投与について、好適な担体は、生理食塩水、静菌水、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。実施形態では、組成物は、無菌であり、容易な注射針通過性が存在する程度に流動性である。製造および貯蔵の条件下で安定であり得、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合における必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合、組成物において等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含めることが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続的吸収は、組成物において、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによって達成することができる。

無菌注射可能溶液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて、上記に列挙される成分の１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒に組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。例えば、基本的な分散溶媒および上記に列挙される必要な他の成分を含有する無菌のビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって、分散液を調製する。無菌注射可能溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製方法は、活性成分およびその以前に無菌濾過した溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末を生じる真空乾燥および凍結乾燥である。

経口組成物は、不活性な希釈剤または可食性の担体を含む。それらはゼラチンカプセルに封入するか、または錠剤に圧縮することができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用され得る。経口組成物はまた、洗口剤としての使用のための流体担体を使用して調製することができ、流体担体中の化合物は、経口的に適用され、口の中で回され、吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の成分、または同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる：微結晶性セルロース、トラガカンスガム、もしくはゼラチンなどの結合剤；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、もしくはトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはステロートなどの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ風味などの着香剤。

吸入による投与について、化合物は、好適な推進剤、例えば、二酸化炭素などのガス、またはネブライザーを含有する加圧容器またはディスペンサーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。

全身投与はまた、経粘膜的または経皮的手段によるものであり得る。経粘膜または経皮投与について、浸透させる障壁に適した浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、当技術分野で一般に知られており、例えば、経粘膜投与について、洗浄剤、胆汁塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻腔スプレーまたは坐剤の使用を通して達成することができる。経皮投与について、活性化合物は、当技術分野で一般に知られる軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに製剤化される。

化合物はまた、坐剤（例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐剤ベースを有する）または直腸送達のための停留浣腸の形態で調製することができる。

一実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤などの、体からの急速な排除に対して化合物を保護するであろう担体で調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製方法は、当業者には明らかであろう。材料はまた、ＡｌｚａＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから商業的に入手することができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染した細胞を標的とするリポソームを含む）はまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるように、当業者に公知の方法に従って調製することができる。

投与の簡便性および投与量の均一性のために、投与量単位形態で経口または非経口組成物を製剤化することができる。本明細書で使用される投与量単位形態は、治療される対象のための単一投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投与量単位形態の仕様は、活性化合物の特有の特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体の治療のためにそのような活性化合物を配合する技術に固有の制限によって決定付けられ、これらに直接依存する。

薬学的組成物は、投与の指示とともに、容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。

治療方法
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」という用語は、治療的処置および予防的もしくは防御的手段の両方を指し、その目的は、がんの進行などの望ましくない生理学的変化または障害を予防または減速（軽減）することである。有益なまたは望ましい臨床結果には、限定されないが、症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延または遅延、病状の改善または緩和、寛解（部分的または全体的）が包含され、検出可能か否かを問わない。「治療」とは、治療を受けていない場合に予想される生存率と比較して、生存期間を延長することを指す。治療を必要とする者には、すでに病状または障害を患っている者、ならびに病状または障害を患いやすい者、または病状または障害を予防する必要がある者が包含される。

本発明は、がん、または他の細胞増殖関連疾患もしくは障害のリスクがある（または感受性がある）対象を治療する予防的および治療的方法の両方を提供する。そのような疾患または障害としては、限定されないが、例えば、ＰＤ－Ｌ１の異常発現に関連する疾患または障害が挙げられる。例えば、方法は、がんの徴候を治療、予防、または軽減するために使用される。１つの実施形態では、本方法は、固形腫瘍の症状を治療、予防、または緩和するために使用される。本明細書の実施形態によって治療することができる他の腫瘍の非限定的な例としては、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、結腸がん、子宮頸がん、脳がん、皮膚がん、肝臓がん、膵臓がんまたは胃がんが挙げられる。さらに、本発明の方法は、白血病およびリンパ腫などの血液がんを治療するために使用することができる。代替的に、方法を使用して、転移したがんの症状を治療、予防、または緩和することができる。

したがって、一態様では、本発明は、患者に本発明のモノクローナル抗体、ｓｃＦｖ抗体、または二重特異性抗体を投与することによって、患者における症候性がんまたは細胞増殖疾患もしくは障害を予防、治療、または緩和するための方法を提供する。例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、治療有効量で投与することができる。

がんまたは細胞増殖関連疾患もしくは障害のリスクがある対象には、がんの家族歴を有する患者、またはがんを引き起こすことが知られるかもしくは疑われる物質に曝露された対象が含まれ得る。予防剤の投与は、疾患が予防されるか、または代替的に、その進行が遅延されるようにがんの徴候の前に行うことができる。

別の態様では、腫瘍細胞成長は、細胞を本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と接触させることによって阻害される。細胞は、ＰＤ－Ｌ１を発現する任意の細胞とすることができる。

本発明は、慢性のウイルス感染、細菌感染または寄生虫感染のリスクがある（または感受性がある）対象を治療する、予防的および治療的方法の両方をさらに提供する。本発明はまた、Ｔ細胞枯渇に関連する疾患または障害または症状のリスク、またはＴ細胞枯渇を発症するリスクのある対象を治療する、予防的および治療的方法の両方のための治療方法を提供する。本発明はまた、Ｔ細胞枯渇に関連する疾患または障害または症状のリスク、またはＴ細胞枯渇を発症するリスクのある対象を治療する、予防的および治療的方法の両方のための治療方法を提供する。そのような疾患または障害としては、限定されないが、ＨＩＶ、ＡＩＤＳ、および慢性の細菌、ウイルス、または寄生虫の感染症が挙げられる。他のそのような慢性感染症としては、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ－１）、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、またはＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉによって引き起こされるものが挙げられる。

抗原に対する免疫応答を増加または増強する方法も本発明に含まれる。免疫応答は、対象に本発明のモノクローナル抗体、ｓｃＦｖ抗体、または二重特異性抗体を投与することによって増加または増強される。免疫応答は、例えば、抗原特異的Ｔエフェクター機能を増強することによって増強される。抗原は、ウイルス（例えば、ＨＩＶ）、細菌、寄生虫、または腫瘍抗原である。免疫応答は、自然な免疫応答である。自然な免疫応答とは、感染症の結果である免疫応答を意味する。感染症は、慢性感染症である。抗原に対する免疫応答の増加または増強は、当技術分野で知られている多くの方法によって測定することができる。例えば、免疫応答は、以下：Ｔ細胞活性、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞活性化、エフェクターサイトカインの産生、およびＴ細胞転写プロファイルのうちのいずれか１つを測定することによって測定することができる。代替的に、免疫応答は、ワクチン接種によって誘導される応答である。

したがって、別の態様では、本発明は、対象に本発明のモノクローナル抗体またはｓｃＦｖ抗体およびワクチンを投与することによってワクチン効率を増加させる方法を提供する。抗体およびワクチンは、順次または同時に投与される。ワクチンは、腫瘍ワクチン、細菌ワクチン、またはウイルスワクチンである。

組み合わせ方法
本明細書に記載の本発明の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与することができる。本明細書に記載の組成物とともに投与することができる化学療法剤としては、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノマイシン）；抗エストロゲン薬（例えば、タモキシフェン）；代謝拮抗剤（例えば、フルオロウラシル、５－ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンアルファ－２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、および６－チオグアニン）；細胞傷害性剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、および硫酸ビンクリスチン）；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロール二リン酸、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メファレン、コランブシル、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイドおよび組み合わせ（例えば、ベタメタゾンリン酸ナトリウム）；ならびにその他（例えば、ジカルバジン、アスパラギナーゼ、ミトタン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、およびエトポシド）が挙げられるが、これらに限定されない。

追加の実施形態では、本明細書に記載の本発明の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与することができる。ともに組成物と投与され得るサイトカインとしては、限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αが挙げられる。

追加の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、例えば、放射線療法などの他の治療または予防レジメンと組み合わせて投与することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、他の免疫療法剤と組み合わせて投与することができる。免疫療法剤の非限定的な例としては、シムツズマブ、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベクトモマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カンツズマブ、カツマクソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、シクスツムマブ、クリバツズマブ、コナツムマブ、ダラツムマブ、ドロジツマブ、ヅリゴツマブ、ヅシジツマブ、デツモマブ、デセツズマブ、ダロツズマブ、エクロメキシマブ、エロツズマブ、エンシツキシマブ、エルツマクソマブ、エタラシズマブ、ファルレツズマブ、フィクラツズマブ、フィジツムマブ、フランボツマブ、フツキシマブ、ガニツマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、イマガツズマブ、インダツキシマブ、イノツズマブ、インテツムマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、ラベツズマブ、レクサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モキセツモマブ、ナルナツマブ、ナプツモマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、ノフェツモマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、パニツムマブ、パルサツズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペルツズマブ、ピンツモマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、サツモマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ、ソリトマブ、タカツズマブ、タプリツモマブ、テナツモマブ、テプロツムマブ、チガツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブ、ウブリツキシマブ、ベルツズマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ＣＣ４９、および３Ｆ８が挙げられる。

本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の同じエピトープ、代替的に、ＰＤ－１タンパク質の２つの異なるエピトープに結合する２つの抗体を投与することによる、患者におけるがんを治療する方法を提供する。代替的に、がんは、ＰＤ－Ｌ１に結合する第１の抗体およびＰＤ－Ｌ１以外のタンパク質に結合する第２の抗体を投与することによって治療することができる。他の実施形態では、がんは、ＰＤ－Ｌ１に結合し、またＰＤ－Ｌ１以外のタンパク質に結合する、二重特異性抗体を投与することによって治療することができる。例えば、ＰＤ－Ｌ１以外の他のタンパク質には、ＧＩＴＲが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ＰＤ－Ｌ１以外の他のタンパク質は、腫瘍関連抗原であり、また、ＰＤ－Ｌ１以外の他のタンパク質を、サイトカインとすることもできる。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を単独で、またはＰＤ－Ｌ１以外の別のタンパク質を認識する追加の抗体とともに、免疫応答を達成または増強することができる細胞とともに、投与することを提供する。例えば、これらの細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、またはＰＢＭＣに見られる任意の細胞型、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。

さらに、本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合する抗体および抗新生物剤、例えば、小分子、成長因子、サイトカインまたはペプチド、ペプチド模倣体、ペプトイド、ポリヌクレオチド、脂質由来メディエーター、低分子生体アミン、ホルモン、神経ペプチドおよびプロテアーゼなどの生体分子を含む他の治療剤の投与を提供する。小分子には、無機分子および小有機分子が含まれるが、これらに限定されない。好適な成長因子またはサイトカインには、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１２、およびＴＮＦ－アルファが含まれる。小分子ライブラリは、当技術分野で知られている。（Ｌａｍ，ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓ．，１２：１４５，１９９７を参照されたい）。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法などの細胞療法もまた、本明細書で提供される。ＣＡＲＴ細胞療法は、ＣＡＲの外因性発現によって患者のＴ細胞を、腫瘍細胞を殺滅するように向け直す。ＣＡＲは、抗体の抗原認識ドメインをＴ細胞受容体および共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインに連結する、膜貫通型融合タンパク質であり得る。本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体と接触させられる（あるいは、本明細書に記載されるように抗ＰＤ－Ｌ１抗体を発現するように操作される）好適な細胞を使用することができる。固形腫瘍は、ＣＡＲ－Ｔ療法に特有の課題を提供する。血液がんとは異なり、腫瘍関連標的タンパク質は、腫瘍と健康な組織との間で過剰発現され、その結果、健康な組織のオンターゲット／オフ腫瘍のＴ細胞殺滅が起こる。さらに、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における免疫抑制は、腫瘍の殺傷に向けたＣＡＲ－Ｔ細胞の活性化を制限する。そのような接触または操作により、次いで、細胞は、治療を必要とするがん患者に導入され得る。がん患者は、本明細書中に開示されるようなタイプのいずれかのがんを有し得る。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、例えば、腫瘍浸潤性Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせであり得るが、これらに限定されない。本発明の態様において有用な例示的なＣＡＲＳには、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０６７２２５およびＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２２２７２に開示されるものが含まれ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

１つの実施形態では、本明細書で論じられるＰＤ－Ｌ１抗体は、多重特異性抗体の構築において、またはＣＡＲ－Ｔ細胞のペイロードとして使用することができる。例えば、１つの実施形態では、本明細書で論じられる抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＣＡＲＳの標的化のために（すなわち、標的化部分として）使用することができる。別の実施形態では、本明細書で論じられる抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、標的化部分として使用することができ、異なるエピトープを標的とする異なるＰＤ－Ｌ１抗体をペイロードとして使用することができる。別の実施形態では、ペイロードは、免疫調節抗体ペイロードとすることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＰＤ－Ｌ１抗体は、ＣＡＲにおける標的化部分として（例えば、ＰＤＬ－１^＋腫瘍細胞を殺傷）、またはＴ細胞枯渇を逆転させるための分泌チェックポイント遮断抗体として使用され得る。

例えば、本発明の実施形態は、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。例えば、モノクローナル抗体またはその断片は、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含み、重鎖は、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－ＳＳ－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、Ｇ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）、もしくはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号２０７）を含むＣＤＲ２、および／またはＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）もしくはＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、もしくはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖は、Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）もしくはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、もしくはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／またはＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、もしくはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３を含む。

本発明によるＣＡＲは、ポリペプチドが一緒に集合してキメラ抗原受容体を形成するように、少なくとも１つの細胞外リガンド結合ドメインを含む少なくとも１つの膜貫通ポリペプチドと、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む１つの膜貫通ポリペプチドを含み得る。

本明細書で使用される場合、「細胞外リガンド結合ドメイン」という用語は、リガンドに結合することができるオリゴまたはポリペプチドとして定義される。例えば、ドメインは、細胞表面分子と相互作用することができるであろう。例えば、細胞外リガンド結合ドメインは、特定の疾患状態に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして作用するリガンドを認識するように選択され得る。

一実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、標的の抗原に対する抗体に由来する抗原結合ドメインを含むことができる。例えば、標的はＰＤ－Ｌ１であり得る。したがって、ＣＡＲはＰＤ－Ｌ１に特異的であり得る。一実施形態では、当該細胞外リガンド結合ドメインは、柔軟性リンカーによって接合された標的抗原特異性モノクローナル抗体の軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）可変断片を含む一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）である。例えば、当該ｓｃＦｖ抗体は、ＰＤ－Ｌ１に特異的である。しかしながら、例えば、非限定的な例として、ラクダ科の単一ドメイン抗体断片もしくは受容体リガンド、抗体結合ドメイン、抗体超可変ループ、またはＣＤＲなど、ｓｃＦｖ以外の結合ドメインもリンパ球の事前定義された標的化に使用することができると理解されている。

実施形態では、当該膜貫通ドメインは、当該細胞外リガンド結合ドメインと当該膜貫通ドメインとの間にストーク領域を含む。「ストーク領域」という用語は、膜貫通ドメインを細胞外リガンド結合ドメインに連結するように機能する任意のオリゴまたはポリペプチドを意味することができる。特に、ストーク領域は、細胞外リガンド結合ドメインにより高い柔軟性およびアクセス性を提供するために使用される。ストーク領域は、１０～１００個のアミノ酸など、最大３００個のアミノ酸を含むことができる。実施形態では、ストーク領域は、２５～５０個のアミノ酸を含む。ストーク領域は、ＣＤ８、ＣＤ４、もしくはＣＤ２８の細胞外領域の全部もしくは一部などの天然に存在する分子の全部もしくは一部、または抗体定常領域の全部もしくは一部に由来し得る。あるいは、ストーク領域は、天然に存在するストーク配列に対応する合成配列であってもよく、または完全に合成のストーク配列であってもよい。好ましい実施形態では、当該ストーク領域は、ヒトＣＤ８アルファ鎖の一部である。

実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８を含み得る。

本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞外リガンド結合ドメインの標的への結合後の細胞内シグナル伝達に関与し、免疫細胞および免疫応答の活性化をもたらす。換言すれば、シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが発現する免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与している。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、「シグナル変換ドメイン」という用語は、エフェクターシグナル機能シグナルを変換し、細胞に特定の機能を実行するように指示するタンパク質の部分を指すことができる。

シグナル変換ドメインは、抗原依存性の一次活性化を開始するものと、抗原非依存的に作用して二次または共刺激シグナルを提供するものとの、細胞質シグナル伝達配列の２つの異なるクラスを含むことができる。一次細胞質シグナル伝達配列は、ＩＴＡＭである免疫受容体活性化チロシンモチーフとして知られているシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭは、ｓｙｋ／ｚａｐ７０クラスのチロシンキナーゼの結合部位として機能する様々な受容体の細胞質内尾部に見られる明確に定義されたシグナル伝達モチーフである。本発明で使用されるＩＴＡＭの例には、非限定的な例として、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＦｃＲイプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄに由来するものが含まれ得る。好ましい実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン、またはＦｃイプシロンＲＩベータまたはガンマ鎖の細胞質内ドメインを含むことができる。別の好ましい実施形態では、シグナル伝達は、ＣＤ２８および例えば、４－１ＢＢまたはＯＸ４０などの）腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦｒ）によって提供される共刺激とともに、ＣＤ３ゼータによって提供される。

実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル分子を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、タンデムに２、３、４、またはそれ以上の共刺激分子を含有する。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。

「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族の共刺激分子に特異的に結合し、それにより、例えば、ペプチドが搭載されたＭＨＣ分子とＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって提供される一次シグナルに加えて、増殖活性化、分化などを含むがこれらに限定されないＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する、抗原提示細胞上の分子を指すことができる。共刺激リガンドには、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、Ｍ１ＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、Ｔｏｌｌリガンド受容体および特にＢ７－Ｈ３と特異的に結合するリガンドを結合するアゴニストまたは抗体が含まれ得るが、これらに限定されない。共刺激リガンドは、とりわけ、Ｔ細胞上に存在する共刺激分子、例えば、これらに限定されないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドと特異的に結合する抗体も包含する。

「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、増殖などの、しかしそれに限定されない細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指すことができる。共刺激分子には、ＭＨＣクラス１分子、ＢＴＬＡおよびトールリガンド受容体（Ｔｏｌｌｌｉｇａｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒ）が含まれるが、これらに限定されない。共刺激分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが含まれる。

実施形態では、ＣＡＲの共刺激ドメインとしてのＣＤ２８の選択は、ＣＤ２８ＣＡＲが能動的な増殖応答を導き、エフェクター機能を増強するのに対し、４－１ＢＢベースのＣＡＲは、より低い即時的な有効性を相殺する可能性がある、より進行性のＴ細胞蓄積を誘導するという事実に基づき得る。一実施形態では、ＣＤ２８は、ＣＡＲ構築物において４１ＢＢによって置き換えられる。

別の特定の実施形態では、当該シグナル伝達ドメインは、共刺激性ＴＮＦＲメンバーファミリーの細胞質内尾部であるＴＮＦＲ関連因子２（ＴＲＡＦ２）結合モチーフである。共刺激性ＴＮＦＲファミリーメンバーの細胞質尾部は、メジャー保存モチーフ（Ｐ／Ｓ／Ａ）Ｘ（Ｑ／Ｅ）Ｅ）またはマイナーモチーフ（ＰＸＱＸＸＤ）からなるＴＲＡＦ２結合モチーフを含有し、Ｘは任意のアミノ酸である。ＴＲＡＦタンパク質は、受容体三量体化に応答して、多くのＴＮＦＲの細胞内尾部に動員される。

適切な複数の膜貫通ポリペプチドの際立った特徴は、免疫細胞、特にリンパ球細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面で発現して、予め定義された標的細胞に対する免疫細胞の細胞応答を誘導するために一緒に相互作用する能力を含む。細胞外リガンド結合ドメインおよび／またはシグナル伝達ドメインを含む本発明のＣＡＲの異なる膜貫通ポリペプチドは、一緒に相互作用して、標的リガンドとの結合後のシグナル伝達に関与し、免疫応答を誘導する。膜貫通ドメインは、天然由来または合成由来のいずれかに由来し得る。膜貫通ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。

本明細書で使用される「の一部」という用語は、分子の任意のサブセット、すなわちより短いペプチドを指すことができる。あるいは、ポリペプチドのアミノ酸配列機能的バリアントは、ポリペプチドをコードするＤＮＡの変異によって調製することができる。そのようなバリアントまたは機能的バリアントには、例えば、アミノ酸配列内の残基からの欠失、または挿入または置換が含まれる。最終構築物が所望の活性を有し、特に特異的な抗標的細胞性免疫活性を示すことを条件として、削除、挿入、および置換の任意の組み合わせを行って、最終構築物に到達してもよい。宿主細胞内の本発明のＣＡＲの機能性は、特定の標的が結合すると、当該ＣＡＲのシグナル伝達能力を実証するのに適したアッセイで検出可能である。そのようなアッセイは、当業者に利用可能である。例えば、このアッセイは、カルシウムイオン放出の増加、細胞内チロシンリン酸化、イノシトールリン酸代謝回転、またはこのようにしてもたらされるインターロイキン（ＩＬ）２、インターフェロンγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－４の産生、の測定を含むアッセイなど、標的の結合時にトリガーされるシグナル伝達経路の検出を可能にする。

ＣＡＲを発現する細胞
本発明の実施形態は、ＣＡＲを発現する細胞（すなわち、ＣＡＲＴ）を含む。細胞は、がん治療のためにＣＡＲを発現することができる免疫細胞、またはＣＡＲをコードする発現ベクターを保有する細菌細胞などの細胞を含む、任意の種類のものであり得る。本明細書中で使用される場合、用語「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養」は、交換可能に使用され得る。これらのすべての用語には、それらの子孫も含まれ、これは、あらゆる後続世代である。計画的または偶発性の突然変異のために、すべての子孫が同一ではない可能性があることが理解されている。異種核酸配列を発現する状況において、「宿主細胞」は、ベクターを複製し、および／またはベクターによってコードされる異種遺伝子を発現することができる真核細胞を指す。宿主細胞はベクターのレシピエントとして使用でき、使用されてきた。宿主細胞は、「トランスフェクト」または「形質転換」されてもよく、これは、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。形質転換された細胞は、初代対象細胞（ｐｒｉｍａｒｙｓｕｂｊｅｃｔｃｅｌｌ）およびその子孫を含む。本明細書中で使用される場合、用語「操作された」および「組換え」細胞または宿主細胞は、例えば、ベクターなどの外因性核酸配列が導入された細胞を指すことが意図される。したがって、組換え細胞は、組換えによって導入された核酸を含まない天然に存在する細胞と区別できる。本発明の実施形態では、宿主細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはキラーＴ細胞としても知られる）を含むＴ細胞であり、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞もまた本発明に含まれる。

いくつかのベクターは、原核細胞および真核細胞の両方において複製および／または発現されることを可能にする制御配列を使用し得る。当業者は、上記の宿主細胞のすべてをインキュベートしてそれらを維持し、ベクターの複製を可能にする条件をさらに理解するであろう。また、ベクターの大規模生産、ならびにベクターによってコードされる核酸およびそれらの同族のポリペプチド、タンパク質、またはペプチドの生産を可能にする技術および条件も理解され、知られている。

細胞は、自家細胞、同系細胞、同種細胞、さらにいくつかの場合では、異種細胞であり得る。

多くの状況では、治療終了が望まれる場合、細胞が腫瘍性化した場合、細胞存在後の細胞の不在が関心対象である研究において、または他の事象において、改変されたＣＴＬを殺すことができることが望まれ得る。この目的のために、誘導性自殺遺伝子などの、制御された条件下で改変細胞を殺傷することができる特定の遺伝子産物の発現を提供することができる。

武装化ＣＡＲＴ
本発明はさらに、１つ以上のポリペプチドを分泌するように改変されたＣＡＲＴを含む。武装化ＣＡＲＴには、標的部位、例えば腫瘍部位でポリペプチドを同時に分泌するという利点がある。ポリペプチドは、例えば、抗体またはサイトカインであり得る。例えば、抗体は、本明細書に記載の抗体および断片などのＰＤ－Ｌ１に特異的である。他の実施形態では、分泌された抗体は、ＣＡＩＸ、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、またはＣＣＲ４に特異的な抗体であり得る（例えば、出願全体が参照により組み込まれているＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／１００９０８５に記載されている配列を参照されたい）。

武装化ＣＡＲＴは、細胞内シグナル伝達ドメインの後に目的の分泌されるポリペプチドをコードする核酸を含めることで構築できる。実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインと目的のポリペプチドとの間に配置された内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）が存在する。当業者は、複数のＩＲＥＳ配列をタンデムで使用することにより、２つ以上のポリペプチドを発現できることを理解することができる。

実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２１などのサイトカインを使用して維持することができる。

ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１などのγｃ受容体を共有するサイトカインは、メモリーＴ細胞の発達および維持に重要である。それらの中で、ＩＬ－２１は、腫瘍特異的ＣＤ８Ｔ細胞の濃縮に関連する、分化度の低い表現型を促進し、ＩＬ－２またはＩＬ－１５と比較した場合にマウスメラノーマモデルで抗腫瘍効果が増加する。

特定の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、ＩＬ－２１で維持される。

ＣＴＬへの構築物の導入
ＣＡＲをコードする発現ベクターは、１つ以上のＤＮＡ分子または構築物として導入され得、そこに構築物を含む宿主細胞の選択を可能にする少なくとも１つのマーカーが存在してもよい。

構築物は従来の方法で調製でき、遺伝子および調節領域を適宜、単離し、ライゲーションし、適切なクローニング宿主にクローニングし、制限もしくは配列決定または他の便利な手段で分析することができる。特に、ＰＣＲを使用すると、機能単位の全部または一部を含む個々の断片を分離でき、「プライマー修復」、ライゲーション、インビトロ変異誘発などを適宜使用して、１つ以上の変異を導入することができる。一旦完成し、適切な配列を有することが実証された構築物は、次いで、任意の好都合な手段によってＣＴＬに導入され得る。構築物は、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）などの非複製型の欠陥のあるウイルスゲノム、またはレトロウイルスベクターやレンチウイルスベクターなど、細胞への感染や形質導入のために組み込まれおよびパッケージ化してもよい。構築物は、必要に応じて、トランスフェクションのためのウイルス配列を含み得る。あるいは、構築物は、融合、エレクトロポレーション、バイオリスティック法、トランスフェクション、リポフェクションなどによって導入されてもよい。宿主細胞は、構築物を導入する前に培養物中で成長および増大（ｅｘｐａｎｄ）させ、その後、構築物を導入し、構築物を組み込むための適切な処理を行うことができる。次に、細胞を増大させ、構築物中に存在するマーカーによってスクリーニングする。首尾良く使用できる様々なマーカーには、ｈｐｒｔ、ネオマイシン耐性、チミジンキナーゼ、ハイグロマイシン耐性などがある。

いくつかの例では、構築物が特定の遺伝子座に組み込まれることが望まれる場合、相同組換えのための標的部位を有し得る。例えば、）は、内因性遺伝子をノックアウトし、相同組換えについて当技術分野で知られている材料および方法を使用して、それを（同じ遺伝子座または他の場所で）構築物によってコードされる遺伝子で置き換えることができる。相同組換えのために、．ＯＭＥＧＡ．またはＯ－ベクターのいずれかを使用することができる。例えば、ＴｈｏｍａｓａｎｄＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ（１９８７）５１，５０３－５１２；Ｍａｎｓｏｕｒ，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８８）３３６，３４８－３５２、およびＪｏｙｎｅｒ，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）３３８，１５３－１５６を参照されたい。

構築物は、少なくともＣＡＲおよび任意選択で別の遺伝子をコードする単一のＤＮＡ分子、または１つ以上の遺伝子を有する異なるＤＮＡ分子として導入することができる。他の遺伝子には、例えば、治療分子または自殺遺伝子をコードする遺伝子が含まれる。構築物は、同時にまたは連続的に導入され得、それぞれが同じまたは異なるマーカーを有する。

構築物ＤＮＡのストックの調製やトランスフェクションの実施に使用できる、細菌または酵母の複製起点、選択可能および／または増幅可能なマーカー、原核生物または真核生物での発現用のプロモーター／エンハンサー要素などの有用な要素を含むベクターは、当技術分野でよく知られており、多くは市販されている。

ＣＡＲを発現する細胞の使用方法
本明細書に記載の細胞は、がん、または他の細胞増殖関連の疾患もしくは障害を治療するために使用することができる。そのような疾患または障害としては、限定されないが、例えば、ＰＤ－Ｌ１の異常発現に関連する疾患または障害が挙げられる。別の実施形態では、本発明による当該単離された細胞は、がん、または他の細胞増殖関連の疾患もしくは障害を治療するための医薬の製造に使用することができる。そのような疾患または障害としては、限定されないが、例えば、ＰＤ－Ｌ１の異常発現に関連する疾患または障害が挙げられる。

本明細書に記載の実施形態は、治療を必要とする患者を治療するための方法に依存し、当該方法は、（ａ）本発明によるキメラ抗原受容体細胞を提供するステップ、および（ｂ）当該患者に細胞を投与するステップのうちの少なくとも１つを含む。

当該治療は、寛解、治癒または予防であり得る。それは、自己免疫療法の一部または同種異系免疫療法治療の一部であり得る。自己とは、患者を治療するために使用される細胞、細胞株または細胞集団が、当該患者に由来またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合ドナーに由来することを意味する。同種異系とは、患者を治療するために使用される細胞または細胞集団が、当該患者に由来するのではなく、ドナーに由来することを意味する。

本発明は、典型的にはドナーから得られるＴ細胞の非アロ反応性細胞への形質転換を可能にする限り、同種異系免疫療法に特に適している。これは、標準プロトコルの下で実行され得、必要な回数だけ複製され得る。得られた改変Ｔ細胞をプールして、１人または数人の患者に投与し、「既製の」治療用製品として利用可能にすることができる。

本明細書に記載の抗体またはＣＡＲ組成物を使用して治療され得るがんには、血管新生されていない、またはまだ実質的に血管新生されていない腫瘍、ならびに血管新生腫瘍が含まれる。がんは、非固形腫瘍（例えば、血液腫瘍、例えば、白血病およびリンパ腫）を含んでよく、または固形腫瘍を含んでよい。本発明のＣＡＲで治療されるがんのタイプには、がん腫、芽細胞腫、および肉腫、ならびに特定の白血病またはリンパ性悪性腫瘍、良性および悪性腫瘍、および悪性腫瘍、例えば、肉腫、がん腫、および黒色腫が含まれるが、これらに限定されない。成人腫瘍／がんおよび小児腫瘍／がんも含まれる。例えば、チェックポイント阻害が複数の悪性腫瘍の標準的な治療法であるがん（本明細書では「チェックポイント阻害がん」と呼ばれる）は、本明細書に記載の抗体および／またはＣＡＲ組成物で治療することができる。チェックポイント阻害がんには、黒色腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、腎細胞がん（ＲＣＣ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；Ｂ細胞ＣＬＬまたはＴ細胞ＣＬＬなど）、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、胃がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＬＢＣＬ）、膀胱がん、尿路上皮がん、子宮内膜がん、頸部がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、メルケル細胞がん（ＭＣＣ）、およびマイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ－Ｈ）またはＤＮＡミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）成人および小児固形腫瘍（ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｓｂｊ．２０１９．０３．００６）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載される治療はまた、チェックポイント阻害療法について調査中である他のがんを含み得る。理論に縛られることを望まないが、ＲＣＣおよびＢ－ＣＬＬマウスモデルは、ヒトの疾患に関連するモデルであるＣＡＲＴファクトリーでの治療に使用することができる。

例えば、治療は、抗体療法、化学療法、サイトカイン療法、樹状細胞療法、遺伝子療法、ホルモン療法、レーザー光線療法および放射線療法の群から選択されるがんに対する１つ以上の療法と組み合わせた抗体および／またはＣＡＲ－Ｔ治療であり得る。

本発明の実施形態によれば、当該治療は、免疫抑制治療を受けている患者に投与することができる。実際、本発明は、そのような免疫抑制剤の受容体をコードする遺伝子の不活性化のために少なくとも１つの免疫抑制剤に対して耐性にされた細胞または細胞集団に依存し得る。この態様では、免疫抑制治療は、患者内で本発明によるＴ細胞の選択および増大を助けるはずである。

さらなる実施形態では、本発明の細胞組成物は、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはＯＫＴ３やＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体のいずれかを使用するＴ細胞除去療法（Ｔｃｅｌｌａｂｌａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｙ）と組み合わせて（例えば、前に、同時にまたは後に）患者に投与される。別の実施形態では、本発明の細胞組成物は、ＣＤ２０と反応する剤、例えばリツキサンなどのＢ細胞除去療法（Ｂ－ｃｅｌｌａｂｌａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｙ）後に投与される。例えば、一実施形態では、対象は、大量化学療法による標準治療を受け、その後末梢血幹細胞移植を受けることができる。特定の実施形態では、移植後、対象は、本発明の増大された免疫細胞の注入を受ける。さらなる実施形態では、増大された細胞は、手術の前または後に投与される。本明細書に記載される方法のうちのいずれかによって得られる当該改変細胞は、宿主対移植片（ＨｖＧ）拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対して治療を必要とする患者を治療するための本発明の特定の態様において使用でき、したがって、本発明の範囲には、宿主対移植片（ＨｖＧ）拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対して治療を必要とする患者を治療する方法であって、不活化されたＴＣＲアルファおよび／またはＴＣＲベータ遺伝子を含む改変細胞の有効量を当該患者に投与することにより当該患者を治療することを含む、方法がある。

細胞の投与
本発明は、典型的にはドナーから得られるＴ細胞の非アロ反応性細胞への形質転換を可能にする限り、同種異系免疫療法に適している。これは、標準プロトコルの下で実行され得、必要な回数だけ複製され得る。得られた改変Ｔ細胞をプールして、１人または数人の患者に投与し、「既製の」治療用製品として利用可能にすることができる。

細胞の性質に応じて、細胞は多種多様な方法で宿主生物、例えば哺乳動物に導入することができる。特定の実施形態では、細胞は腫瘍の部位に導入することができるが、代替の実施形態では、細胞はがんにホーミングするか、またはがんにホーミングするように改変される。使用される細胞の数は、様々な状況、導入の目的、細胞の寿命、使用されるプロトコル、例えば、投与回数、細胞が増殖する能力、組換え構築物の安定性などに依存する。細胞は、分散液として適用されてもよく、通常、目的の部位またはその近くに注入される。細胞は、生理学的に許容される媒体中にあってよい。

いくつかの実施形態では、細胞はカプセル化されて免疫認識を阻害し、腫瘍の部位に配置される。

細胞は所望により投与できる。所望の応答、投与方法、細胞の寿命、存在する細胞の数に応じて、様々なプロトコルを使用することができる。投与回数は、少なくとも部分的に上記の要因に依存する。

本発明による細胞または細胞集団の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、インプラント術または移植を含む、任意の都合のよい方法で行うことができる。本明細書に記載の組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内またはリンパ内注射、または腹腔内で患者に投与することができる。一実施形態では、本発明の細胞組成物は、好ましくは、静脈内注射によって投与される。

細胞または細胞集団の投与は、体重ｋｇ当たり１０^４～１０^９個の細胞、例えば、１０^５～１０^６個の細胞／ｋｇ体重の投与からなることができ、これらの範囲内の細胞数のすべての整数値を含む。細胞または細胞集団は、１回以上の用量で投与することができる。別の実施形態では、当該有効量の細胞は、単回用量として投与される。別の実施形態では、当該有効量の細胞は、ある期間にわたって２回以上の用量として投与される。投与のタイミングは、主治医の判断の範囲内であり、患者の臨床状態に依存する。細胞または細胞集団は、血液バンクまたはドナーなどの任意の供給源から得ることができる。個々の必要性は変化するが、特定の疾患または状態に対する所与の細胞型の有効量の最適範囲の決定は当技術の範囲内である。有効量は、治療的または予防的利益を提供する量を意味する。投与される投与量は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、もしあれば同時治療の種類、治療の頻度および所望の効果の性質に依存するであろう。

系は、リガンドに対する細胞応答、発現効率、および適切な場合には分泌レベル、発現産物の活性、患者の特定の必要性など、時間および状況、細胞の損失または個々の細胞の発現活性の結果としての細胞活性の損失率などによって変化し得る多くの変数に影響されることを理解されたい。したがって、個々の患者ごとに、集団全体に投与できる万能細胞があったとしても、各患者はその個人の適切な投与量について監視されることが期待され、患者を監視するそのような慣行は当技術分野では日常的に行われている。

核酸ベースの発現系
本発明のＣＡＲは、発現ベクターから発現させることができる。そのような発現ベクターを作製するための組換え技術は、当技術分野でよく知られている。

「ベクター」という用語は、核酸配列が、それが複製され得る細胞への導入のために、挿入され得る担体核酸分子を指すことができる。核酸配列は「外因性」であり得、これは、ベクターが導入される細胞にとって外来であるか、または配列が細胞内の配列と相同であるが、配列が通常見出されない宿主細胞核酸内の位置にあることを意味する。ベクターには、プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、および植物ウイルス）、人工染色体（ＹＡＣなど）が含まれる。当業者であれば、標準的な組換え技術を用いてベクターを構築するために十分な設備を有しているであろう（例えば、ともに参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｎｉａｔｉｓｅｔａｌ．，１９８８およびＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，１９９４を参照されたい）。

「発現ベクター」という用語は、転写され得るＲＮＡをコードする核酸を含む任意のタイプの遺伝子構築物を指し得る。いくつかの場合では、次に、ＲＮＡ分子はタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドに翻訳される。他の場合では、これらの配列は、例えばアンチセンス分子またはリボザイムの産生において翻訳されない。発現ベクターは、特定の宿主細胞における作動可能に連結されたコード配列の転写およびおそらくは翻訳に必要な核酸配列を指す、様々な「制御配列」を含むことができる。転写および翻訳を支配する制御配列に加えて、ベクターおよび発現ベクターは、他の機能も果たす核酸配列を含み得、以下に記載される。

「プロモーター」は、転写の開始および速度が制御される核酸配列の領域である制御配列を指し得る。それは、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などの調節タンパク質および分子が結合して核酸配列の特定の転写を開始できる遺伝的要素を含み得る。「作動可能に配置された」、「作動可能に連結された」、「制御下」、および「転写制御下」という語句は、プロモーターが、その配列の転写開始および／または発現を制御するために、核酸配列に関して正しい機能的位置および／または方向にあることを意味する。

プロモーターは、ＲＮＡ合成のための開始部位を配置するように機能する配列を含み得る。これの最もよく知られている例はＴＡＴＡボックスであるが、例えば哺乳動物のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーターやＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターなど、ＴＡＴＡボックスのない一部のプロモーターでは、開始部位自体を覆う個別の要素自体が、開始場所を固定するのを助けている。追加のプロモーター要素は、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは開始部位の上流３０１１０ｂｐの領域に位置するが、いくつかのプロモーターは開始部位の下流にも機能的要素を含むことが示されている。コード配列をプロモーターの「制御下」に置くために、転写リーディングフレームの転写開始部位の５’末端を選択されたプロモーターの「下流」（すなわち、３’）に配置する。「上流」プロモーターがＤＮＡの転写を刺激し、コードされたＲＮＡの発現を促進する。

多くの場合、プロモーター要素間の間隔は柔軟であり、そのため、要素が互いに反転したり移動したりしても、プロモーターの機能は維持される。ｔｋプロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーター要素間の間隔を５０ｂｐまで広げることができる。プロモーターに応じて、個々の要素が協調的にまたは独立して機能して転写を活性化することができると思われる。プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を指す「エンハンサー」と組み合わせて使用してもしなくてもよい。

プロモーターは、コードセグメントおよび／またはエキソンの上流に位置する５プライム’非コード配列を単離することにより得ることができるように、核酸配列と自然に関連するものであってもよい。このようなプロモーターは、「内因性」と呼ばれ得る。同様に、エンハンサーは、その配列の下流または上流のいずれかに位置する、核酸配列と自然に関連するものであってもよい。あるいは、コード化核酸セグメントを組換えまたは異種プロモーターの制御下に配置することによって特定の利点が得られるが、これは、その自然環境において核酸配列と通常関連しないプロモーターを指す。組換えまたは異種エンハンサーはまた、その自然環境において核酸配列と通常関連しないエンハンサーも指す。そのようなプロモーターまたはエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、および他のウイルス、または原核細胞または真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハンサー、および「天然に存在しない」、すなわち異なる転写調節領域の異なる要素、および／または発現を変化させる突然変異を含むプロモーターまたはエンハンサーを含み得る。例えば、組換えＤＮＡ構築で最も一般的に使用されるプロモーターには、ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系が含まれる。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列を合成的に生成することに加えて、配列は、本明細書に開示される組成物に関連して、ＰＣＲ．ＴＭ．を含む組換えクローニングおよび／または核酸増幅技術を使用して生成され得る（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，６８３，２０２号および第５，９２８，９０６号を参照されたい）。さらに、ミトコンドリア、葉緑体などの非核オルガネラ内の配列の転写および／または発現を指示する制御配列も同様に使用できると考えられる。

当然のことながら、発現のために選択された細胞小器官、細胞型、組織、器官、または生物におけるＤＮＡセグメントの発現を効果的に導くプロモーターおよび／またはエンハンサーを使用することが重要であろう。分子生物学の当業者は、タンパク質発現のためのプロモーター、エンハンサー、および細胞型の組み合わせの使用を一般に知っている（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．１９８９を参照されたい）。使用されるプロモーターは、構成的、組織特異的、誘導可能な、および／または組換えタンパク質および／またはペプチドの大規模生産に有利であるような、導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指示する適切な条件下で有用であり得る。プロモーターは、異種または内因性であり得る。

さらに、プロモーター／エンハンサーの任意の組み合わせを使用して発現を促進することもできる。Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用は、別の可能な実施形態である。真核細胞は、適切な細菌ポリメラーゼが送達複合体の一部として、または追加の遺伝子発現構築物として提供される場合、特定の細菌プロモーターからの細胞質転写をサポートできる。

組織特異的プロモーターまたは要素の同一性、ならびにそれらの活性を特徴付けるアッセイは、当業者に周知である。

コード配列の効率的な翻訳には、特定の開始シグナルも必要になる場合がある。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接する配列が含まれる。ＡＴＧ開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルが提供されることが必要であり得る。当業者であれば、これを容易に決定し、必要なシグナルを提供することができるであろう。

本発明の特定の実施形態では、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）要素の使用は、多重遺伝子、またはポリシストロニック、メッセージを作製するために使用され、これらは、本発明において使用され得る。

ベクターには、複数の制限酵素部位を含む核酸領域であるマルチクローニングサイト（ＭＣＳ）を含めることができ、これらのいずれも、標準的な組換え技術と組み合わせてベクターを消化するために使用できる。「制限酵素消化」は、核酸分子の特定の位置でのみ機能する酵素による核酸分子の触媒的切断を指す。これらの制限酵素の多くは市販されている。そのような酵素の使用は、当業者によって広く理解されている。多くの場合、ＭＣＳ内で切断する制限酵素を使用してベクターを線形化または断片化し、外来配列をベクターにライゲーションできるようにする。「ライゲーション」とは、２つの核酸断片間にホスホジエステル結合を形成するプロセスを指し、これは互いに隣接していてもいなくてもよい。制限酵素およびライゲーション反応を含む技術は、組換え技術の当業者によく知られている。

スプライシング部位、終結シグナル、複製起点、および選択可能なマーカーも使用することができる。

特定の実施形態では、プラスミドベクターは、宿主細胞を形質転換するために使用することができる。宿主細胞と適合性のある種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターは、これらの宿主に関連して使用され得る。ベクターは通常、複製部位、ならびに形質転換細胞において表現型選択を提供することができるマーキング配列を保有する。非限定的な例では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、大腸菌種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２の誘導体を使用してしばしば形質転換される。ｐＢＲ３２２にはアンピシリンおよびテトラサイクリン耐性の遺伝子が含まれているため、形質転換された細胞を簡単に同定できる。ｐＢＲプラスミド、または他の微生物プラスミドもしくはファージはまた、例えば、微生物がそれ自体のタンパク質の発現のために使用することができるプロモーターを含むか、または含むように改変されなければならない。

さらに、宿主微生物と適合性のあるレプリコンおよび制御配列を含むファージベクターは、これらの宿主と関連して形質転換ベクターとして使用され得る。例えば、ファージラムダＧＥＭＴＭ．１１は、例えば、大腸菌ＬＥ３９２などの宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えファージベクターを作製する際に利用することができる。

さらに有用なプラスミドベクターには、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅｅｔａｌ．，１９８５）、およびｐＧＥＸベクターが含まれ、後で精製および分離または切断するためのグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）可溶性融合タンパク質の生成に使用するためのものである。他の好適な融合タンパク質は、ガラクトシダーゼ、ユビキチンなどを有するものである。

発現ベクターを含む細菌宿主細胞、例えば、大腸菌は、任意の多くの好適な培地、例えば、ＬＢで増殖される。当業者に理解されるように、特定のプロモーターに特異的な作用物質と宿主細胞を接触させることにより、例えば培地にＩＰＴＧを添加することにより、またはインキュベーションを高温に切り替えることにより、特定のベクターにおける組換えタンパク質の発現を誘導することができる。細菌をさらに２～２４時間培養した後、遠心分離により細胞を回収し、洗浄して残留培地を除去する。

受容体を介したエンドサイトーシスを介して細胞に感染する、細胞に侵入する、宿主細胞のゲノムに組み込む、ウイルス遺伝子を安定かつ効率的に発現する特定のウイルスの能力は、外来核酸の細胞（例、哺乳動物細胞）への導入のための魅力的な候補となっている。本発明の構成要素は、本発明の１つ以上のＣＡＲをコードするウイルスベクターであり得る。本発明の核酸を送達するために使用され得るウイルスベクターの非限定的な例は、本明細書に記載される。

核酸の送達のための方法は、アデノウイルス発現ベクターの使用を含む。アデノウイルスベクターはゲノムＤＮＡへの組み込み能力が低いことが知られているが、この機能は、これらのベクターによって得られる高い遺伝子導入効率によって相殺される。「アデノウイルス発現ベクター」は、（ａ）構築物のパッケージングをサポートするのに十分な、（ｂ）その中にクローニングされた組織または細胞特異的構築物を最終的に発現するのに十分なアデノウイルス配列を含む構築物を含むことを意味する。遺伝的構成またはアデノウイルスが、３６ｋｂ、線形、二本鎖ＤＮＡウイルスである知識により、アデノウイルスＤＮＡの大きな断片を最大７ｋｂの外来配列で置換することができる（ＧｒｕｎｈａｕｓａｎｄＨｏｒｗｉｔｚ，１９９２）。

アデノウイルス支援トランスフェクションを使用して、核酸を細胞に導入することができる。アデノウイルス共役系（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｃｏｕｐｌｅｄｓｙｓｔｅｍ）を使用した細胞系でトランスフェクション効率の増加が報告されている（ＫｅｌｌｅｈｅｒａｎｄＶｏｓ，１９９４；Ｃｏｔｔｅｎｅｔａｌ．，１９９２；Ｃｕｒｉｅｌ，１９９４）。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、組み込みの頻度が高く、非分裂細胞に感染することができるため、本発明の細胞で使用するための魅力的なベクター系であり、したがって、例えば、組織培養（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，１９９２）またはインビボで、哺乳動物細胞への遺伝子の送達に有用である。ＡＡＶは感染性の宿主範囲が広い（Ｔｒａｔｓｃｈｉｎｅｔａｌ．，１９８４；Ｌａｕｇｈｌｉｎｅｔａｌ．，１９８６；Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉｅｔａｌ．，１９８８；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎｅｔａｌ．，１９８８）。ｒＡＡＶベクターの生成および使用に関する詳細は、米国特許第５，１３９，９４１号および第４，７９７，３６８号に記載されており、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。

レトロウイルスは、それらの遺伝子を宿主ゲノムに組み込むそれらの能力、大量の外来遺伝物質を導入すること、広範囲の種および細胞型に感染すること、および、特別な細胞株にパッケージ化されることにより、送達ベクターとして有用である（Ｍｉｌｌｅｒ，１９９２）。

レトロウイルスベクターを構築するために、核酸（例えば、所望の配列をコードするもの）が、特定のウイルス配列の代わりにウイルスゲノムに挿入されて、複製欠損のあるウイルスを産生する。ビリオンを生成するためには、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ遺伝子を含むが、ＬＴＲおよびパッケージング構成要素を含まないパッケージング細胞株を構築する（Ｍａｎｎｅｔａｌ．，１９８３）。レトロウイルスのＬＴＲおよびパッケージング配列とともに、ｃＤＮＡを含む組換えプラスミドが特別な細胞株に導入されると（例えば、リン酸カルシウム沈殿などにより）、パッケージング配列により、組換えプラスミドのＲＮＡ転写物をウイルス粒子にパッケージ化でき、次にそれは培養培地に分泌される（ＮｉｃｏｌａｓａｎｄＲｕｂｅｎｓｔｅｉｎ，１９８８；Ｔｅｍｉｎ，１９８６；Ｍａｎｎｅｔａｌ．，１９８３）。次に、組換えレトロウイルスを含む培地を収集し、任意で濃縮し、遺伝子導入に使用する。レトロウイルスベクターは様々な種類の細胞に感染することができる。しかしながら、組み込みおよび安定した発現には、宿主細胞の分裂が必要である（Ｐａｓｋｉｎｄｅｔａｌ．，１９７５）。

レンチウイルスは複雑なレトロウイルスであり、一般的なレトロウイルス遺伝子であるｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖに加えて、調節または構造機能を持つ他の遺伝子を含有する。レンチウイルスベクターは当技術分野でよく知られている（例えば、Ｎａｌｄｉｎｉｅｔａｌ．，１９９６；Ｚｕｆｆｅｒｅｙｅｔａｌ．，１９９７；Ｂｌｏｍｅｒｅｔａｌ．，１９９７、米国特許第６，０１３，５１６号および第５，９９４，１３６号を参照されたい）。レンチウイルスのいくつかの例には、ヒト免疫不全ウイルス：ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２およびサル免疫不全ウイルス：ＳＩＶが含まれる。レンチウイルスベクターは、ＨＩＶ病原性遺伝子を多重弱毒化することによって生成され、例えば、遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕおよびｎｅｆは削除されており、生物学的に安全なベクターになっている。

組換えレンチウイルスベクターは非分裂細胞に感染することができ、インビボとエクスビボの両方で遺伝子導入と核酸配列の発現に使用できる。例えば、好適な宿主細胞がパッケージング機能、すなわちｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、ならびにｒｅｖおよびｔａｔを保有する２つ以上のベクターでトランスフェクトされている非分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルスは、米国特許第５，９９４，１３６号に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。特定の細胞型の受容体を標的化するために、エンベロープタンパク質と抗体または特定のリガンドとの結合によって組換えウイルスを標的にすることができる。例えば、特定の標的細胞上の受容体に対するリガンドをコードする別の遺伝子とともに、関心のある配列（調節領域を含む）をウイルスベクターに挿入することにより、ベクターは今や標的特異的である。

本発明では、他のウイルスベクターをワクチン構築物として使用することができる。ワクシニアウイルス（Ｒｉｄｇｅｗａｙ，１９８８；ＢａｉｃｈｗａｌａｎｄＳｕｇｄｅｎ，１９８６；Ｃｏｕｐａｒｅｔａｌ．，１９８８）、シンドビスウイルス、サイトメガロウイルスおよび単純ヘルペスウイルスなどのウイルスに由来するベクターを使用することができる。これらは、様々な哺乳動物細胞にいくつかの魅力的な特徴を提供する（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ，１９８９；Ｒｉｄｇｅｗａｙ，１９８８；ＢａｉｃｈｗａｌａｎｄＳｕｇｄｅｎ，１９８６；Ｃｏｕｐａｒｅｔａｌ．，１９８８；Ｈｏｒｗｉｃｈｅｔａｌ．，１９９０）。

実施形態では、送達される核酸は、特異的結合リガンドを発現するように操作された感染性ウイルス内に収容されてもよい。したがって、ウイルス粒子は標的細胞の同族受容体に特異的に結合し、内容物を細胞に送達する。レトロウイルスベクターの特異的標的化を可能にするために設計された新しいアプローチは、ウイルスエンベロープへのラクトース残基の化学的付加によるレトロウイルスの化学修飾に基づいて開発された。この修飾により、シアロ糖タンパク質受容体を介した肝細胞の特異的感染が可能になる。

組換えレトロウイルスを標的とする別のアプローチが設計され、レトロウイルスエンベロープタンパク質および特異的な細胞受容体に対するビオチン化抗体が使用された。抗体は、ストレプトアビジンを使用することにより、ビオチン成分を介して結合された（Ｒｏｕｘｅｔａｌ．，１９８９）。主要組織適合性複合体クラスＩおよびクラスＩＩ抗原に対する抗体を使用して、彼らは、インビトロでエコトロピックウイルスによるこれらの表面抗原を保有する様々なヒト細胞の感染を示した（Ｒｏｕｘｅｔａｌ．，１９８９）。

細胞のトランスフェクションまたは形質転換のための核酸送達に適した方法は、当業者に知られている。そのような方法には、エクスビボトランスフェクション、注射などによるＤＮＡの直接送達が含まれるが、これらに限定されない。当技術分野で既知の技術の適用により、細胞は安定的にまたは一時的に形質転換され得る。

エクスビボ形質転換
生体外で生体から取り出された真核細胞および組織をトランスフェクトする方法は、当業者に知られている。したがって、本発明の核酸を使用して、細胞または組織をエクスビボで取り出しおよびトランスフェクトすることができると考えられる。特定の態様では、移植された細胞または組織は、生物に配置され得る。好ましい面では、核酸は移植された細胞で発現される。

本発明のキット
本明細書に記載される組成物のいずれもキットに含まれ得る。

キットの一部の構成要素は、水性媒体または凍結乾燥された形態のいずれかで包装され得る。キットの容器手段は、一般に、構成成分が入れられ、好ましくは適切に分注され得る、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の容器手段を含む。キットに２つ以上の構成成分が存在する場合、キットには通常、追加の構成要素を個別に配置できる第２の、第３の、またはその他の追加の容器も含まれる。しかしながら、構成要素の様々な組み合わせがバイアルに含まれてもよい。本発明のキットはまた、典型的には、商業的販売のために構成要素を厳重に封じ込めて含むための手段を含む。そのような容器は、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形プラスチック容器を含み得る。

キットの構成要素が１つおよび／または複数の液体溶液で提供される場合、液体溶液は、水溶液であり、無菌水溶液が特に有用である。場合によっては、容器手段自体がシリンジ、ピペット、および／または他の同様の装置であってもよく、そこから製剤を身体の感染領域に適用し、動物に注射し、および／またはキットの他の構成要素に適用および／または他の構成要素と混合することもできる。

しかしながら、キットの構成要素は、乾燥粉末として提供されてもよい。試薬および／または成分が乾燥粉末として提供される場合、粉末は、好適な溶媒の添加により再構成され得る。溶媒はまた、別の容器手段で提供され得ることが想定される。キットはまた、無菌の薬学的に許容される緩衝液および／または他の希釈剤を含むための第２の容器手段を含み得る。

本発明の実施形態では、細胞療法に使用される細胞はキットで提供され、場合によっては、細胞は本質的にキットの唯一の構成要素である。キットは、所望の細胞を作製するための試薬および材料を含み得る。特定の実施形態では、試薬および材料は、所望の配列を増幅するためのプライマー、ヌクレオチド、好適な緩衝液または緩衝液試薬、塩などを含み、場合によっては、試薬は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクターおよび／またはＤＮＡを含み、および／またはそのための調節エレメントを含む。

特定の実施形態では、キット内に、個体から１つ以上の試料を抽出するのに適した１つ以上の器具が存在する。器具は、注射器、メスなどであり得る。

本発明のいくつかの場合において、キットは、細胞療法の実施形態に加えて、例えば、化学療法、ホルモン療法、および／または免疫療法などの第２のがん療法も含む。キットは、個体の特定のがんに合わせて調整することができ、個体のそれぞれの第２のがん療法を含むことができる。

診断アッセイ
抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、例えば、所与の治療および／または予防レジメンの有効性を決定するための臨床試験手順の一部として、例えば、がんの発生または進行をモニターするために診断的に使用することができる。

いくつかの態様では、診断目的のために、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、例えば、がんのリスクがあるかまたはがんに罹患している対象における、がん細胞を検出するための方法を提供するために、検出可能部分に連結される。

検出可能部分は、抗体もしくは断片に直接的に、または例えば、蛍光二次抗体を使用することによって間接的に、コンジュゲートすることができる。直接コンジュゲーションは、例えば、抗体もしくは抗体断片へのフルオロフォアの標準的な化学的結合によって、または遺伝子操作を通して達成することができる。キメラ、または蛍光もしくは生物発光タンパク質に結合した抗体もしくは抗体断片を含有する融合タンパク質を構築することができる。例えば、Ｃａｓａｄｅｉ，ｅｔａｌ，（ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．１９９０Ｍａｒ；８７（６）：２０４７－５１）は、哺乳動物細胞においてエクオリンおよび抗体の融合タンパク質遺伝子を発現できるベクター構築物を作製する方法を記載する。

本明細書で使用される場合、プローブまたは抗体に関して、「標識された」という用語は、検出可能物質をプローブまたは抗体に結合（すなわち、物理的に連結）することによるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識される別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含することができる。間接標識の例には、蛍光標識された二次抗体を使用した一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出することができるようにビオチンでＤＮＡプローブを末端標識することが含まれる。「生物学的試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞、および生体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞、および生体液を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法を使用して、インビトロおよびインビボで生物学的試料においてＰＤ－Ｌ１を発現する細胞を検出することができる。例えば、ＰＤ－Ｌ１の検出のためのインビトロ技法としては、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）法、ウエスタンブロット法、免疫沈降法、および免疫蛍光法が挙げられる。さらに、ＰＤ－Ｌ１の検出のためのインビボ技法としては、標識された抗ＰＤ－Ｌ１抗体を対象に導入することが挙げられる。例えば、抗体は、対象におけるその存在および位置が標準的な画像化技法によって検出され得る放射性マーカーで標識され得る。

「標的化された」コンジュゲート、すなわち、特定の部位（複数可）で対象または動物内にコンジュゲートを局在化するように設計された分子または特徴である標的化部分を含有するコンジュゲートの場合、局在化は、対象内の結合した「局在化」実体と、結合していない「遊離」実体との間の平衡が本質的に達成されている場合の状態を指すことができる。そのような平衡が達成される速度は、投与経路に依存する。例えば、静脈内注射によって投与されるコンジュゲートは、注射の数分以内に局在化を達成することができる。一方、経口投与されたコンジュゲートは、局在化を達成するのに数時間かかり得る。代替的に、局在化は、実体が投与された後の選択された期間での対象または動物内の実体の位置を単に指すことができる。別の例として、局在化は、投与後に部分が分布されるようになる場合に達成される。

局在化を達成するための時間の合理的な推定は、当業者によって行われ得ることが理解される。さらに、時間の関数としての局在化の状態は、光検出器デバイスでなど、本発明の方法に従って、検出可能部分（例えば、発光コンジュゲート）を画像化することによって追跡することができる。使用される「光検出器デバイス」は、哺乳動物内からの微弱な光を妥当な時間で画像化することを可能にし、そのようなデバイスからのシグナルを使用して画像を構築するのに十分高い感度を有するべきである。

極めて明るい光生成部分を使用すること、および／または画像化される対象もしくは動物の表面近くに局在化された光生成融合タンパク質を検出することが可能な場合、「暗視」ゴーグルまたはＳｉｌｉｃｏｎＩｎｔｅｎｓｉｆｉｅｄＴｕｂｅ（ＳＩＴ）カメラ（例えば、ＨａｍｍａｍａｔｓｕＰｈｏｔｏｎｉｃＳｙｓｔｅｍｓ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、Ｎ．Ｊ．からの）などの標準的な高感度ビデオカメラを使用することができる。しかしながら、より典型には、より高感度の光検出方法が必要である。

極めて低い光レベルでは、単位面積当たりの光子束は、画像化されているシーンが連続して見えなくなるほど低くなる。代わりに、それは、時間的および空間的の両方で互いに異なる個々の光子によって表される。モニターで見ると、そのような画像は、各々が単一の検出された光子を表す、きらめく光の点として現れる。これらの検出された光子を時間の経過とともにデジタル画像プロセッサに蓄積することによって、画像を取得し、構築することができる。各画像点でのシグナルに強度値が割り当てられる従来のカメラとは対照的に、光子計数画像化では、シグナルの振幅に重要性はない。目的は、シグナル（光子）の存在を単純に検出し、時間の経過とともにその位置に対してシグナルの発生を数えることである。

以下に記載される、少なくとも２つのタイプの光検出器デバイスは、個々の光子を検出し、画像プロセッサによって分析することができるシグナルを生成することができる。ノイズ低減光検出デバイスは、光子シグナルを増幅するのではなく、光子検出器のバックグラウンドノイズを低減することによって、感度を達成する。ノイズは、主に、検出器アレイを冷却することによって低減される。デバイスには、「背面薄型化」冷却ＣＣＤカメラと呼ばれる電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラが含まれる。より高感度の機器では、冷却は、例えば、ＣＣＤアレイの温度を約－１２０℃にする、液体窒素を使用して達成される。「背面薄型化」とは、検出されるまで光子が辿る経路長を低減し、それによって量子効率を増加させる超薄型バックプレートを指す。特に高感度の背面薄型化極低温ＣＣＤカメラは、Ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．（Ｔｕｃｓｏｎ，Ａｒｉｚ．）から入手可能なシリーズ２００カメラ、「ＴＥＣＨ５１２」である。

「光子増幅デバイス」は、光子を、それらが検出スクリーンに当たる前に増幅する。このクラスには、マイクロチャネル増強管などの増強管を備えたＣＣＤカメラが含まれる。マイクロチャネル増強管は、典型的には、カメラの検出スクリーンに垂直かつこれと同延のチャネルの金属アレイを含有する。マイクロチャネルアレイは、画像化される試料、対象、または動物と、カメラとの間に配置される。アレイのチャネルに入る光子のほとんどは、出る前にチャネルの側面に接触する。アレイにわたって印加される電圧は、各光子衝突からの多くの電子の放出をもたらす。そのような衝突からの電子は、「ショットガン」パターンでそれらの起源のチャネルを出て、カメラによって検出される。

増強マイクロチャネルアレイを直列に配置することによって、さらにより高い感度を達成することができ、その結果、第１の段階で生成された電子は、ひいては第２の段階で電子の増幅されたシグナルをもたらす。しかしながら、感度の増加は、増幅の各追加段階とともに減少する、空間分解能を犠牲にして達成される。例示的なマイクロチャネル増強管ベースの単一光子検出デバイスは、Ｈａｍａｍａｔｓｕから入手可能なＣ２４００シリーズである。

画像プロセッサは、例えば、モニターに表示するか、またはビデオプリンターで印刷することができる画像を構築するために光子を数える光検出器デバイスによって生成されたシグナルを処理する。そのような画像プロセッサは、典型的には、上記の高感度光子計数カメラを含むシステムの一部として販売されており、したがって、同じ供給源から入手可能である。画像プロセッサは、通常、ＩＢＭ互換ＰＣまたはＡｐｐｌｅＭａｃｉｎｔｏｓｈ（ＡｐｐｌｅＣｏｍｐｕｔｅｒ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、Ｃａｌｉｆ）などのパーソナルコンピュータに接続されており、これは購入された画像化システムの一部として含まれる場合も含まれない場合もある。画像がデジタルファイルの形態になると、それらは様々な画像処理プログラム（「ＡＤＯＢＥＰＨＯＴＯＳＨＯＰ」、ＡｄｏｂｅＳｙｓｔｅｍｓ、ＡｄｏｂｅＳｙｓｔｅｍｓ，Ｍｔ．Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆ．など）によって操作し、印刷することができる。

一実施形態では、生物学的試料は、試験対象からのタンパク質分子を含有する。１つの好まれる生物学的試料は、従来の手段によって対象から単離された末梢血白血球試料である。

本発明にはまた、生物学的試料中のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ１発現細胞の存在を検出するためのキットも包含される。例えば、キットは、生物学的試料中のがんまたは腫瘍細胞を検出することができる標識された化合物または作用物質（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１ｓｃＦｖまたはモノクローナル抗体）と、試料中のＰＤ－Ｌ１の量を決定するための手段と、試料中のＰＤ－Ｌ１の量を標準と比較するための手段と、を含むことができる。標準は、いくつかの実施形態では、非がん細胞またはその細胞抽出物である。化合物または作用物質は、好適な容器に包装することができる。キットは、キットを使用して試料中のがんを検出するための指示をさらに含むことができる。

他の実施形態
本発明は、その詳細な説明とともに記載されたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示することを意図しており、限定することを意図していない。他の態様、利点、および変更は、以下の特許請求の範囲内である。

本発明は、特許請求の範囲に記載された本発明の範囲を限定しない以下の例にさらに記載される。

実施例は、本発明のより完全な理解を促進するために以下に提供される。以下の実施例は、本発明を作製および実施する例示的な様式を例示する。しかしながら、本発明の範囲は、これらの実施例に開示されている特定の実施形態に限定されず、代わりの方法を使用して同様の結果を得ることができるため、例示のみを目的としている。

実施例１－抗体のパニング
本発明のＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＭＰＬパニングを介して見出した。簡単に説明すると、ＰＤ－Ｌ１への親和性を高めるために、抗ＰＤ－Ｌ１抗体＃４２および＃５０の重鎖可変領域をそれぞれｐＦａｒｂｅｒラムダおよびカッパ軽鎖ディスプレイライブラリにクローニングして、＃４２－軽鎖シャッフリング（ＬＣＳ）ライブラリおよび＃５２ＬＣＳライブラリを作製した。次に、各ライブラリをＰＤ－Ｌ１－マウスＦｃ可溶性抗原に対して４ラウンド、低下させた抗原濃度でパニングした（１ｕｇ／ｍｌＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃで３ラウンド、第４ラウンド目はそれぞれ０．５および０．１ｕｇ／ｍｌであった；１ｍｌでチューブがコーティングされる）。単一コロニーをＥＬＩＳＡで可溶性ＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃに対してスクリーニングした。陽性クローンは、２回目のパニング後に濃縮され、親和性が増加した。必要に応じて、３回目のパニング後に溶出されたファージも酵母ディスプレイライブラリにクローン化され、フローサイトメトリーを介して高親和性バインダーについてスクリーニングされる。Ｍａｒａｓｃｏ博士の研究室で以前に発見された抗ＰＤ－Ｌ１＃４２および＃５０は、ベンチマークの市販抗体と比較した場合、ＰＤ－Ｌ１との親和性が低い。＃４２および＃５０の重鎖がＰＤ－Ｌ１結合特異性に主に寄与することを知り、新しい単鎖Ｆｖファージディスプレイライブラリを軽鎖シャッフリング技法を使用して作製した。この技法では、＃４２または＃５０重鎖可変領域のいずれかがランダムなカッパおよびラムダ軽鎖可変領域と融合され、結果として生じる＃４２ＬＣＳおよび＃５０ＬＣＳライブラリが、それぞれ約２×１０Ｅ８の多様性を有する。低下させた抗原濃度で新しい＃４２および＃５２ＬＣＳライブラリをパニングすると、元の＃４２または＃５０重鎖および新規軽鎖配列を含む高親和性抗ＰＤ－Ｌ１抗体が発見された。他の抗体は、ナイーブファージライブラリを用いたパニングによって発見された。

実施例２－二重結合アッセイ
９６ウェルプレートの各ウェルについて、２Ｅ５ＣＨＯ－ＧＩＴＲ細胞をＭＡＣＳバッファーで洗浄し、１００ｕｌのＭＡＣＳバッファーに再懸濁した。二重特異性ＧＩＴＲ－ＰＤＬ１Ｌｃ融合体の３倍段階希釈液を、開始濃度９ｕｇ／ｍｌで、別の９６ウェルプレートで作製した。細胞を含む１００ｕｌのバッファーに５０ｕｌのＡｂ希釈液を加え、最終開始濃度３ｕｇ／ｍｌを得た。Ａｂ希釈率は、３、１、０．３３、０．１１１、０．０３７、０．０１２、０．００４、０．００１４であった。細胞をＡｂとともに４℃で３０分間インキュベートし、スピンダウンし、２５０ｕｌのＭＡＣＳバッファーで２回洗浄した。最終洗浄後、細胞を１０ｕｇ／ｍｌＰＤ－Ｌ１－ｒｂＦｃ融合（ＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメイン）を含むＭＡＣＳバッファーに再懸濁し、４℃で３０分間インキュベートした。細胞を２５０ｕｌのＭＡＣＳバッファーで２回洗浄し、２ｕｇ／ｍｌのＦＩＴＣロバ抗ウサギＩｇＧ（最小ｘ反応性）抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号４０６４０３）を含む１００ｕｌのＭＡＣＳバッファーに再懸濁した。細胞を４℃で２０分間インキュベートした。細胞を２５０ｕｌのＭＡＣＳバッファーで２回洗浄し、２００ｕｌのＭＡＣＳバッファーに再懸濁した。次に、プレートをＦｏｒｔｅｓｓａＨＴＳＦＡＣＳプレートリーダーで読み取った。

ＧＩＴＲＬＣ融合抗体は、ＧＩＴＲ（膜結合）およびＰＤ－Ｌ１（可溶性タンパク質）の両方に同時に結合することができる（図２）。ＰＤ－Ｌ１抗体（４２ｍｕｔおよび５０－６Ｂ６．１ｍｕｔ）は、軽鎖融合体として、５０－６Ｂ６．２、５０－７Ｂ５、および５０－５Ｂ９抗体よりも良好に可溶性ＰＤ－Ｌ１に結合することができる。

実施例３－混合リンパ球反応（ＭＬＲ）プロトコル
ＭｉｌｔｅｎｙｉＣＤ１４＋マイクロビーズを使用してＣＤ１４＋単球を単離した。細胞をＭｉｌｔｅｎｙｉＭｏ－ＤＣ培地（ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ４を含む事前調製した培地）で培養した。細胞を５日間培養した後、ＴＮＦ－α（１０００Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－１β（５ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－６（１０ｎｇ／ｍｌ）、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）（１μＭ）を添加し、細胞を２日間培養してＤＣを成熟させた。Ｔ細胞をＭＬＲ実験の日に単離した（ＣＤ４＋ネガティブセレクションキットＳｔｅｍＣｅｌｌ）。ＭＬＲにはウェル当たり１００，０００個のＴ細胞と１０，０００個のＭｏＤＣ細胞を使用した。抗体を様々な濃度で添加し、培養液を５日間インキュベートした。

ＥＬＩＳＡスクリーニングのために上清を保存した（例えば、ＩＦＮγ）。

ＭＬＲアテゾリズマブ対抗ＰＤＬ１ａｂ。１つのＴ細胞ドナーおよび１つのＤＣドナーを使用した。

ｓｃＦｖ－Ｆｃ形式の抗ＰＤＬ１ａｂは、アテゾリズマブの市販製剤、抗ＰＤＬ１＃４２ｓｃＦｖ－Ｆｃ、および非特異的Ａｂ対照に対して試験された。図６～９に示すように、アテゾリズマブおよび抗ＰＤＬ１＃４２などの特定の抗ＰＤＬ１ａｂを添加すると、非特異的対照と比較してサイトカイン産生が増加する。

同等物
当業者であれば、ルーチンの実験以上のものを使用せずに、本明細書に具体的に記載された特定の物質および手順に対する多数の同等物を認識する、または確認できるであろう。そのような同等物は、本発明の範囲内であると考えられ、添付の特許請求の範囲によってカバーされる。

Claims

重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記重鎖が、
Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－ＳＳ－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、もしくはＧ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、
Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）、もしくはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号ＮＯ：２０７）を含むＣＤＲ２、および／または
ＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、もしくはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３
を含み、
前記軽鎖が、
Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）もしくはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、
（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、もしくはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／または
ＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、もしくはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３
を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
完全にヒトの抗体であるか、またはヒト化されている、請求項１に記載の抗体。
単一特異性、二重特異性、または多重特異性である、請求項１に記載の抗体。
一本鎖抗体である、請求項１に記載の抗体。
少なくとも３．３×１０^－９Ｍの結合親和性を有する、請求項１に記載の抗体。
重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１に記載の抗体または断片。
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４が、非極性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、またはＸ_４が、グリシン（Ｇ）、チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である、請求項７に記載の抗体。
Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４が、疎水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_１、Ｘ_２、またはＸ_４が、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、またはアラニン（Ａ）である、請求項９に記載の抗体。
Ｘ_３が、親水性極性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_３が、ヒスチジン（Ｈ）である、請求項１１に記載の抗体。
Ｘ_１が、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、またはチロシン（Ｙ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_２が、フェニルアラニン（Ｆ）またはロイシン（Ｌ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_３が、ヒスチジン（Ｈ）またはチロシン（Ｙ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_４が、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）、またはアラニン（Ａ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１が、非極性疎水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_１０、またはＸ_１１が、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である、請求項１７に記載の抗体。
Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_８、Ｘ_１０、またはＸ_１２が、ヒスチジン（Ｈ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはスレオニン（Ｔ）である、請求項１９に記載の抗体。
Ｘ_８が、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、またはセリン（Ｓ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_９が、プロリン（Ｐ）、チロシン（Ｙ）、セリン（Ｓ）、またはアラニン（Ａ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_１０が、チロシン（Ｙ）、アスパラギン酸（Ｄ）、イソロイシン（Ｉ）、またはヒスチジン（Ｈ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_１１が、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、アスパラギン（Ｎ）、またはフェニルアラニン（Ｆ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_１２が、イソロイシン（Ｉ）、アルギニン（Ｒ）、スレオニン（Ｔ）、またはヒスチジン（Ｈ）である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_５が、非極性疎水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_５が、グリシン（Ｇ）である、請求項２６に記載の抗体。
Ｘ_５が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_５が、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である、請求項２８に記載の抗体。
Ｘ_６が、非極性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_６が、チロシン（Ｙ）である、請求項３０に記載の抗体。
Ｘ_６が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_６が、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、またはアルギニン（Ｒ）である、請求項３２に記載の抗体。
Ｘ_７、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１９、Ｘ_２０、またはＸ_２１が、非極性疎水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_７、Ｘ_１７、またはＸ_２０が、グリシン（Ｇ）である、請求項３４に記載の抗体。
Ｘ_７、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７、Ｘ_１８、Ｘ_１９、またはＸ_２１が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項１に記載の抗体。
Ｘ_７、Ｘ_１４、またはＸ_２１が、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である、請求項３６に記載の抗体。
Ｘ_１３が、セリン（Ｓ）またはスレオニン（Ｔ）である、請求項３６に記載の抗体。
Ｘ_１５が、プロリン（Ｐ）である、請求項３４に記載の抗体。
Ｘ_１５、Ｘ_１７、またはＸ_２０が、セリン（Ｓ）である、請求項３６に記載の抗体。
Ｘ_１６が、スレオニン（Ｔ）またはアルギニン（Ｒ）である、請求項３６に記載の抗体。
Ｘ_１６が、イソロイシン（Ｉ）である、請求項３４に記載の抗体。
Ｘ_１８が、セリン（Ｓ）またはアスパラギン（Ｎ）である、請求項３６に記載の抗体。
Ｘ_１９が、グリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）である、請求項３４に記載の抗体。
Ｘ_１９が、アスパラギン酸（Ｄ）である、請求項３６に記載の抗体。
Ｘ_２１が、アラニン（Ａ）である、請求項３４に記載の抗体。
Ｘ_２１が、グルタミン酸（Ｅ）である、請求項３６に記載の抗体。
ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合し、かつ
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３、または
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨＣＤＲ３、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３
を含む、単離された抗体またはその断片。
配列番号４８のＸ_５が、非極性疎水性アミノ酸残基である、請求項４８に記載の抗体。
Ｘ_５が、グリシン（Ｇ）である、請求項４９に記載の抗体。
Ｘ_５が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項４８に記載の抗体。
Ｘ_５が、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）、またはアスパラギン酸（Ｄ）である、請求項５１に記載の抗体。
配列番号４９のＸ_６が、非極性アミノ酸残基である、請求項４８に記載の抗体。
Ｘ_６が、チロシン（Ｙ）である、請求項５３に記載の抗体。
Ｘ_６が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項４８に記載の抗体。
Ｘ_６が、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、またはアルギニン（Ｒ）である、請求項５５に記載の抗体。
配列番号５０のＸ_７が、非極性疎水性アミノ酸残基である、請求項４８に記載の抗体。
Ｘ_７が、グリシン（Ｇ）である、請求項５７に記載の抗体。
Ｘ_７が、極性親水性アミノ酸残基である、請求項３８に記載の抗体。
Ｘ_７が、セリン（Ｓ）またはアルギニン（Ｒ）である、請求項５９に記載の抗体。
ＶＬＣＤＲ１が、配列番号２６、３３、４０、または４４のアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の抗体。
ＶＬＣＤＲ２が、配列番号２８、３５、または４５のアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の抗体。
ＶＬＣＤＲ３が、配列番号３０または３７のアミノ酸配列を含む、請求項４８に記載の抗体。
（ｂ）の前記抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３０を含むＶＬＣＤＲ３を含むか、または配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含むか、または配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含むか、または配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬＣＤＲ３を含む、請求項４８に記載の抗体。
ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合し、かつ
配列番号８、１６、５２、５４、５６、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、および８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
配列番号２４、３１、３８、４２、４６、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、および８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と
を含む、単離された抗体またはその断片。
ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合し、かつ
配列番号２、１０、８４、８５、８６、８７、８８、８９、および９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ１、
配列番号４、１２、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、および９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ２、および／もしくは
配列番号６、１４、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、および１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ－ＣＤＲ３
を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
配列番号１８、２６、３３、４０、４４、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、および１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ１、
配列番号２０、２８、３５、４５、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、および１２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ２、および／もしくは
配列番号２２、３０、３７、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、および１３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ－ＣＤＲ３
を含む、軽鎖可変領域
を含む、単離された抗体またはその断片。
ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質に結合する、単離された抗体またはその断片であって、前記抗体が、
（ａ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡ（配列番号２）、ＩＩＰＩＦＧＴＡ（配列番号４）、およびＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＤＳＮＹ（配列番号１８）、ＥＤＮ（配列番号２０）、およびＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｂ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＲ（配列番号２８）、およびＱＶＷＤＳＧＳＤＨＷＶ（配列番号３０）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｃ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＤＫＧ（配列番号３３）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｄ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＮＫＧ（配列番号４０）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｅ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＧＫＧ（配列番号４４）、ＤＤＹ（配列番号４５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｆ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＥＳＲＳ（配列番号１０８）、ＤＤＴ（配列番号１１８）、およびＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｇ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｈ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＳ（配列番号１０９）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｉ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｊ）それぞれアミノ酸配列ＤＦＡＦＳＳＡＷ（配列番号８４）、ＩＫＳＫＴＤＧＥＴＴ（配列番号９１）、およびＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＳＮＩＧＳＮＹ（配列番号１１０）、ＲＮＮ（配列番号１１９）、およびＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｋ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号８５）、ＴＳＰＨＮＧＬＴ（配列番号９２）、およびＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＡＳＮＹ（配列番号１１１）、ＥＤＮ（配列番号２０）、およびＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｌ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＲＹＡ（配列番号８６）、ＩＩＰＩＦＧＲＡ（配列番号９３）、およびＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＡＳＮＹ（配列番号１１１）、ＡＤＮ（配列番号１２０）、およびＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｍ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＳ（配列番号１０９）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｎ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号８５）、ＩＳＡＹＮＧＨＡ（配列番号９４）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＳ（配列番号３５）、およびＱＶＷＤＳＲＳＤＨＷＶ（配列番号１３０）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｏ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡ（配列番号８７）、ＩＩＰＩＦＧＴＡ（配列番号９５）、およびＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＲＳＮＩＧＳＮＹ（配列番号１１２）、ＳＮＮ（配列番号１２１）、およびＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｐ）それぞれアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＡ（配列番号８８）、ＩＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号９６）、およびＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＩＮＶＧＴＹＲ（配列番号１１３）、ＹＫＳＤＳＤＫ（配列番号１２２）、およびＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｑ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＦＳＳＹＧ（配列番号８９）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＧＫＳ（配列番号１１４）、ＤＤＲ（配列番号２８）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｒ）それぞれアミノ酸配列ＧＹＴＬＳＳＨＧ（配列番号１０）、ＩＳＡＨＮＧＨＡ（配列番号１２）、およびＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＳＫＧ（配列番号２６）、ＤＤＲ（配列番号２８）、およびＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶ（配列番号３７）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｓ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡ（配列番号８７）、ＩＩＰＩＬＧＩＡ（配列番号９７）、およびＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＮＩＧＧＲＶ（配列番号１１５）、ＤＤＴ（配列番号１２３）、およびＱＶＷＤＳＲＳＤＨＰＶ（配列番号１３３）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、
（ｔ）それぞれアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＳ（配列番号９０）、ＩＩＳＤＧＳＡＴ（配列番号９８）、およびＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＬＲＳＹＹ（配列番号１１６）、ＧＫＮ（配列番号１２４）、およびＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域、または
（ｕ）それぞれアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＲＹＡ（配列番号８６）、ＩＩＰＩＦＧＲＡ（配列番号９３）、およびＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含む３つのＣＤＲを有する重鎖可変領域、ならびに／もしくはそれぞれアミノ酸配列ＳＧＳＩＡＳＨＦ（配列番号１１７）、ＧＤＤ（配列番号１２５）、およびＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖可変領域
を含む、前記単離された抗体またはその断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖が、配列番号８と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２４と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３１と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３８と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号４２と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号４６と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）前記重鎖が、配列番号５２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５３と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記重鎖が、配列番号５４と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５５と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）前記重鎖が、配列番号５６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５７と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）前記重鎖が、配列番号１６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５９と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）前記重鎖が、配列番号６０と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６１と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）前記重鎖が、配列番号６２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６３と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｇ）前記重鎖が、配列番号６４と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６５と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｈ）前記重鎖が、配列番号６６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６７と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）前記重鎖が、配列番号６８と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６９と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｊ）前記重鎖が、配列番号７０と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７１と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｋ）前記重鎖が、配列番号７２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７３と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｌ）前記重鎖が、配列番号７４と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７５と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｍ）前記重鎖が、配列番号７６と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７７と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｎ）前記重鎖が、配列番号７８と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号７９と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｏ）前記重鎖が、配列番号８０と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号８１と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、または
（ｐ）前記重鎖が、配列番号８２と約９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号８３と約９５％同一のアミノ酸配列を含む、
前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含む、ＰＤ－Ｌ１に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または断片が、
（ａ）配列番号８を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号２４を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号３１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号３８を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号４２を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号４６を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号５２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号５４を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５５を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｈ）配列番号５６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５７を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｉ）配列番号１６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号５９を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｊ）配列番号６０を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｋ）配列番号６２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｌ）配列番号６４を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６５を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｍ）配列番号６６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６７を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｎ）配列番号６８を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号６９を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｏ）配列番号７０を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｐ）配列番号７２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｑ）配列番号７４を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７５を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｒ）配列番号７６を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７７を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｓ）配列番号７８を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号７９を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、
（ｔ）配列番号８０を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号８１を有するＶ_Ｌアミノ酸配列、または
（ｕ）配列番号８２を有するＶ_Ｈアミノ酸配列および配列番号８３を有するＶ_Ｌアミノ酸配列
を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
請求項１、４８、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、または７４に記載の断片、および免疫細胞上の分子に対する特異性を有する第２の抗原結合断片を含む、単離された二重特異性抗体。
前記分子が、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４７、ＣＤ１２２、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＬＡＧ－３、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ－４０、ＯＸ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、４－１ＢＢ、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＨＥＶＭ、ＢＴＬＡ、およびＫＩＲからなる群から選択される、請求項７５に記載の二重特異性抗体。
前記断片および前記第２の断片の各々が、独立して、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から選択される、請求項７５に記載の二重特異性抗体。
Ｆｃ断片をさらに含む、請求項７５に記載の二重特異性抗体。
請求項１～７４のいずれか一項に記載の抗体をコードする、核酸。
請求項７５～７８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードする、核酸。
請求項１～７４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、薬学的組成物。
少なくとも１つの追加の治療用物質をさらに含む、請求項８１に記載の薬学的組成物。
前記治療用物質が、毒素、放射性標識、ｓｉＲＮＡ、小分子、またはサイトカインである、請求項８２に記載の薬学的組成物。
請求項７５～７８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、薬学的組成物。
少なくとも１つの追加の治療用物質をさらに含む、請求項８４に記載の薬学的組成物。
前記治療用物質が、毒素、放射性標識、ｓｉＲＮＡ、小分子、またはサイトカインである、請求項８５に記載の薬学的組成物。
請求項１～７４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞。
請求項７５～７８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその断片をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞。
請求項７９または８０に記載の核酸を含む、ベクター。
請求項８９に記載のベクターを含む、細胞。
請求項８１または８４に記載の少なくとも１つの抗体組成物；対象に前記少なくとも１つの抗体を投与するための注射器、針、またはアプリケーター；および使用説明書を含む、キット。
対象におけるがんを治療する方法であって、その治療を必要とする対象に、請求項１～７４のいずれか一項に記載の抗体、請求項７５～７８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または請求項８１もしくは８４に記載の薬学的組成物、または請求項９５～１０１のいずれか一項に記載のＣＡＲの組成物を含む治療有効量の組成物を投与することを含む、前記方法。
前記対象に化学療法剤を投与することをさらに含む、請求項９２に記載の方法。
前記がんが、チェックポイント阻害がんである、請求項９２に記載の方法。
胞細内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外ドメインが、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であり、前記モノクローナル抗体またはその断片が、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含み、
前記重鎖が、
Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－ＳＳ－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、もしくはＧ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、
Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）、もしくはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号ＮＯ：２０７）を含むＣＤＲ２、および／または
ＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、もしくはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３
を含み、
前記軽鎖が、
Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）もしくはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、
（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、もしくはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／または
ＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、もしくはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３
を含む、
前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
前記膜貫通ドメインが、前記細胞外ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に配置されたストーク領域をさらに含む、請求項９５に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８を含む、請求項９５に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインと前記細胞内シグナル伝達ドメインとの間に配置された１つ以上の追加の共刺激分子をさらに含む、請求項９５に記載のＣＡＲ。
前記共刺激分子が、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＯＸ４０である、請求項９８に記載のＣＡＲ。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ鎖を含む、請求項９５に記載のＣＡＲ。
前記抗体が、ＦａｂまたはｓｃＦＶである、請求項９５に記載のＣＡＲ。
先行請求項のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする、核酸。
前記細胞内シグナル伝達ドメインの後に配置されたポリペプチドをコードする核酸をさらに含む、請求項１０２に記載の核酸。
前記ポリペプチドが、抗体、サイトカインである、請求項１０３に記載の核酸。
前記抗体が、ｓｃＦＶである、請求項１０４に記載の核酸。
ＣＡＲをコードする核酸であって、前記ＣＡＲが、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞外ドメインを含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインの後に配置されたポリペプチドをコードする核酸をさらに含み、前記ポリペプチドが、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含み、前記モノクローナル抗体またはその断片が、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含み、
前記重鎖が、
Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－ＳＳ－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、もしくはＧ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、
Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）、もしくはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号ＮＯ：２０７）を含むＣＤＲ２、および／または
ＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、もしくはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３
を含み、
前記軽鎖が、
Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）もしくはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、
（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、もしくはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／または
ＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、もしくはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３
を含む、
前記ＣＡＲをコードする核酸。
請求項１０２～１０６のいずれか一項に記載の核酸を含む、ベクター。
請求項１０７に記載のベクターを含む、細胞。
請求項９５～１０１のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体を発現し、かつ細胞表面膜上に保持する、遺伝子操作された細胞。
Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項１０８または１０９に記載の遺伝子操作された細胞。
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋である、請求項１１０に記載の遺伝子操作された細胞。
ＣＤ４^＋およびＣＤ８細胞^＋の混合集団を含む、請求項１１１に記載の遺伝子操作された細胞。
ポリペプチドを発現および分泌するようにさらに操作された、キメラ抗原受容体を発現しかつ細胞表面膜上に保持する遺伝子操作された細胞であって、ポリペプチドが、ヒトプログラムデスリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であり、前記モノクローナル抗体またはその断片が、重鎖、軽鎖、またはそれらの組み合わせを含み、
前記重鎖が、
Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－ＳＳ－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号４７）、Ｇ－（Ｘ_１）－Ｔ－（Ｘ_２）－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－（Ｘ_３Ｘ_４）（配列番号２０５）、もしくはＧ－（Ｘ_１）－ＴＦ－（Ｘ_１３Ｘ_１４）－Ｙ－（Ｘ_４）（配列番号２０６）を含むＣＤＲ１、
Ｉ－（Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１）－Ｇ－（Ｘ_１２）－Ａ（配列番号５１）、もしくはＩＩ－（Ｘ_１５）－ＩＦＧ－（Ｘ_１６）－Ａ（配列番号ＮＯ：２０７）を含むＣＤＲ２、および／または
ＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦ（配列番号６）、ＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１４）、ＴＴＧＧＬＧＬＶＹＰＹＹＮＹＩＤＶ（配列番号９９）、ＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶ（配列番号１００）、ＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０１）、ＡＲＤＧＳＧＹＤＳＡＧＭＤＤ（配列番号１０２）、ＡＲＧＦＧＧＰＤＹ（配列番号１０３）、ＡＲＶＨＧＡＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０４）、ＡＳＧＳＩＶＧＡＡＹＡＦＤＩ（配列番号１０５）、ＡＲＤＲＳＥＧＧＦＤＰ（配列番号１０６）、もしくはＡＥＥＧＡＦＮＳＬＡＩ（配列番号１０７）を含むＣＤＲ３
を含み、
前記軽鎖が、
Ｓ－（Ｘ_１７Ｘ_１８）Ｉ－（Ｘ_１９）－ＳＮＹ（配列番号２０８）もしくはＮＩＧ－（Ｘ_５）－Ｋ－（Ｘ_２０）（配列番号４８）を含むＣＤＲ１、
（Ｘ_２１）－ＤＮ（配列番号２０９）、（Ｘ_２２）－ＮＮ（配列番号２１０）、もしくはＤＤ－Ｘ_６（配列番号４９）を含むＣＤＲ２、および／または
ＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩ（配列番号２２）、ＱＶＷＤＳ－（Ｘ_７）－ＳＤＨＷＶ（配列番号５０）、ＱＶＷＤＳＳＧＤＬＷＶ（配列番号１２６）、ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＬＶ（配列番号１２７）、ＱＳＹＤＧＩＴＶＩ（配列番号１２８）、ＱＳＹＤＳＳＮＨＷＶ（配列番号１２９）、ＡＶＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号１３１）、ＭＩＷＨＳＳＡＹＶ（配列番号１３２）、ＮＳＲＤＩＳＤＮＱＷＱＷＩ（配列番号１３４）、もしくはＱＳＹＤＳＳＮＨＶＶ（配列番号１３５）を含むＣＤＲ３
を含む、
前記遺伝子操作された細胞。