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JP2022535034A - 抗原結合タンパク質 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ＣＤ９６媒介性疾患を処置するための組成物、及び関連する方法に関する。

Description

本発明は、ＣＤ９６、特にヒトＣＤ９６に特異的に結合する抗原結合タンパク質及びその断片に関する。本発明はまた、その抗原結合断片を用いて疾患又は障害を治療する方法、その抗原結合断片を含む医薬組成物、及び製造方法にも関する。本発明の他の実施態様は、以下の説明から明らかになるであろう。
ＣＤ９６／ＴＡＣＴＩＬＥ（「Ｔ細胞活性化後期発現増加」（T cell activation increased late expression））は、免疫グロブリンスーパーファミリーにおける細胞表面受容体であり、主にＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞上で発現する。ＣＤ９６は、ネクチン及びネクチン様リガンドと相互作用することが知られているＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴ（「Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」）を含む受容体のファミリーに属する。ＣＤ１５５ｎＥＣＬ５（「ネクチン様タンパク質－５」）は、３つ全ての受容体（ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６）の一次リガンドである。ＴＩＧＩＴは、ＣＤ２２６（１１９ｎＭ）よりも高い親和性（３．１５ｎＭ）でＣＤ１５５に結合し、ＣＤ９６結合は中間（３７．６ｎＭ）である（Martinet L. & Smyth M.J. Nat Rev Immunol. 2015 Apr; 15(4): 243-54）。ＣＤ１５５に加えて、ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６は共に、はるかに低い親和性で別のリガンドＣＤ１１２にも結合する。最近、ＣＤ１１２にも結合する新たな受容体ＣＤ１１２Ｒが発見された（Zhu Y., et al. J Exp Med. 2016 Feb 8; 213(2): 167-76）。
この軸における受容体の中で、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）は、ＮＫ細胞の主要な活性化受容体の１つである。ＣＤ２２６は、がん細胞に対するＮＫ細胞の細胞毒性を増強することが報告されており、腫瘍免疫監視に重要である（Lakshmikanth T., et al. J Clin Invest. 2009; 119(5): 1251-63; Chan C.J., et al. J Immunol. 2010; 184(2): 902-11; Gilfillan S., et al. J Exp Med. 2008; 205(13): 2965-73; Iguchi-Manaka A., et al. J Exp Med. 2008; 205(13): 2959-64）。逆に、ＣＤ９６（Chan C.J., et al. Nat Immunol. 2014; 15(5): 431-8）及びＴＩＧＩＴ（Lozano E., et al. J Immunol. 2012; 188(8): 3869-75）は共に、ＮＫ及び／又はＴ細胞機能の阻害を介して免疫応答を弱めることが知られている。ＴＩＧＩＴ発現は、Ｔ細胞消耗（Lozano E., et al. 2012; Kurtulus S., et al. J Clin Invest. 2015; 125(11): 4053-62）及びＮＫ細胞消耗（Zhang Q., et al. Nat Immunol. 2018; 19(7): 723-32）と関連付けられ、いくつかの抗ＴＩＧＩＴ抗体が臨床開発中である。
全体的に、ＣＤ９６と比較してＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴに関してかなり多くの文献及び機構的理解がある。ＣＤ２２６は、他の免疫活性化受容体におけるような古典的なＩＴＡＭモチーフを有さない。リガンド結合及び受容体二量体化の際に、ＰＫＣ及びＶａｖ１タンパク質を含む一連のリン酸化事象を介して正のシグナル伝達を行う。ＴＩＧＩＴの細胞質尾部は、ＩＴＴモチーフ及び古典的阻害性ＩＴＩＭモチーフを含有する。ＣＤ１５５が結合すると、ＩＴＴモチーフのチロシンリン酸化が起こり、免疫阻害性シグナル伝達がＳＨＩＰ１を含む下流に伝達される。対照的に、ＣＤ９６についてのシグナル伝達は未だ解明されていない。ＣＤ９６の細胞質尾部に潜在的に阻害性のＩＴＩＭモチーフ、ならびに複数の免疫活性化受容体（例えば、ＩＣＯＳ及びＣＤ２８）に存在する潜在的に活性化するＹＸＸＭモチーフが存在することが知られている（Georgiev H., et al. Front Immunol. 2018; 9: 1072）。
ＣＤ９６は、２５年以上前に発見されたものの（Wang P.L., et al. J Immunol. 1992; 148(8): 2600-8）、ＣＤ９６の機能についてはリガンドＣＤ１５５をＣＤ２２６及びＴＩＧＩＴと共有する免疫グロブリンファミリーのメンバーであるという事（Fuchs A., et al. J Immunol. 2004; 172(7): 3994-8）以外に、ほとんど知られていなかった。ＣＤ９６を癌に関連付けるその後の刊行物は、白血病幹細胞（ＬＳＣ）マーカーとしてのＣＤ９６に主に集中していた。ＣＤ９６を潜在的な免疫腫瘍学標的として示す最初の論文は、２０１４年にＭａｒｋ Ｓｍｙｔｈ教授の研究室によって公開された；ＣＤ９６は、ＮＫ細胞におけるＣＤ１５５結合についてＣＤ２２６と競合することが示され、ＣＤ９６は、ＬＰＳによる活性化後のマウスにおけるＩＦＮγ（ガンマ）を含む炎症促進性サイトカインの産生を負に調節した（Chan C.J., et al. 2014）。ＣＤ９６ノックアウトマウス及び抗ＣＤ９６抗体で処置したマウスは、ＭＣＡ誘導性肉腫形成に対して感受性が低かった（同上）。同じ研究において、ＣＤ２２６又はＣＤ１５５の遮断は、より悪い結果をもたらし、これは、ＣＤ１５５：ＣＤ２２６活性化経路の喪失に起因すると仮定される（同上）。
その後、がん処置のためのＣＤ９６の阻害を支持するさらなるin vivo研究が公開されている（例えば、Blake S.J., et al. Cancer Discov. 2016; 6(4): 446-59; Brooks J., et al. 2018; 78(2): 475-88; Harjunpaeae H., et al. Oncoimmunology. 2018; 7(7): e1445949を参照のこと）。したがって、疾患の治療に使用するための、ＣＤ９６を標的とする改善された抗原結合タンパク質及びその断片が必要とされている。そのような組成物及び関連する方法を本開示において提供する。
本発明は、第１の態様において、ＣＤ９６結合タンパク質を提供する。本発明はまた、第２の態様において、ＣＤ９６結合タンパク質をコードする核酸構築物を提供する。第３の態様において、本発明は、第２の態様による核酸を含む発現ベクターを提供する。第４の態様において、本発明は、先の態様に記載される核酸又は発現ベクターを含む組換え宿主細胞を提供する。本発明はさらに、第５の態様において、ＣＤ９６結合タンパク質を産生する方法であって、核酸配列又はベクターの発現に適した条件下で、先の態様に記載される宿主細胞を培養することを含む方法であって、それによってＣＤ９６結合タンパク質を含むポリペプチドが産生される、方法を提供する。本開示の第６の態様は、先の態様に記載される産生方法によって産生されるＣＤ９６結合タンパク質である。本発明はまた、第７の態様において、先の態様のいずれか１つに記載されるＣＤ９６結合タンパク質及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本開示の別の態様は、それを必要とする対象における疾患の治療方法であって、その対象に、治療有効量の先の態様のいずれか１つに記載されるＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物を投与することを含む、方法である。本開示のさらなる態様は、その対象がＣＤ９６を発現するかどうかをさらに含む、先の態様に記載される治療方法である。本開示の別の態様は、疾患の治療をするための、又は疾患の治療において使用するための、先の態様のいずれか１つに記載されるようなＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物である。
本発明の好ましい実施態様の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読めばよりよく理解されるであろう。本発明を例示する目的で、現時点で好ましい実施態様が図面に示されている。しかしながら、本発明は、図面に示された実施態様の正確な配置及び手段に限定されないことを理解すべきである。
図１は、ＣＤ９６結合タンパク質のヒトＣＤ３＋Ｔ細胞への結合（Ａ）、及びＣＤ９６結合タンパク質がヒトＣＤ９６を発現するＣＨＯ細胞へのＣＤ１５５の結合を妨げる能力（Ｂ）を示す図である。 図２は、ヒト（ａ）、カニクイザル（ｂ）又はマウス（ｃ）ＣＤ９６へのＣＤ９６結合タンパク質の結合についての溶液平衡滴定（ＳＥＴ）データを示す図である。 図３は、ヒト又はカニクイザルＣＤ９６アイソフォームで一時的にトランスフェクトされたＨＥＫ細胞へのＣＤ９６結合タンパク質の結合を示す図である。 図４は、初代ヒトＴ細胞（全ＣＤ３＋Ｔ細胞対ＣＤ４＋又はＣＤ８＋サブセット）へのＣＤ９６結合タンパク質の結合（アイソタイプ対照に対する）を示す図である。 図５は、活性化された初代カニクイザルＴ細胞へのＣＤ９６結合タンパク質の結合を示す図である。 図６は、イメージングサイトメトリーを用いてヒトＰＢＭＣに結合させた後のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるイメージングサイトメトリーを用いたＣＤ９６内在化；ＣＤ８＋Ｔ細胞の代表的な細胞画像（灰色＝ＣＤ８染色、白色＝ＣＤ９６結合タンパク質－ＰＥ染色）を示す図である。 図７は、初代ヒトＴ細胞において膜ＣＤ９６に予め複合体化させた場合のＣＤ９６結合タンパク質を示し、ＣＤ１５５：ＦｃのＴ細胞への結合を防止することを示す図である。 図８は、ＣＤ９６結合タンパク質によってヒトＴ細胞に予め結合されたＣＤ１５５：Ｆｃの置換を示す図である。 図９は、初代ヒトＴ細胞上のＣＤ９６に対するＣＤ９６結合タンパク質の結合が、Ｆｃγ受容体を介した架橋及び／又はシグナル伝達を誘発しないことを実証する、ヒトＦｃγレポーターアッセイデータを示す図である。 図１０は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるヒトＡＤＣＣ標的細胞死滅アッセイデータを示す図である；ＣＤ９６結合タンパク質の存在下でＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれにおいても細胞死の増加の証拠は観察されなかった。 図１１は、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるヒトＣＤＣ標的細胞死滅アッセイを示す図である；ＣＤ９６結合タンパク質から誘発された相補依存性の細胞毒性の証拠は観察されなかった。 図１２は、混合ＰＭＢＣ－ＭＬＲアッセイにおける（ＣＨＯ又はＨＥＫ細胞から発現された）ＣＤ９６結合タンパク質のＩＦＮγ放出についてのＥＣ５０データを示す図である。 図１３は、ＣＤ４＋（Ａ）又はＣＤ８＋（Ｂ）Ｔ細胞の有無にかかわらず、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおけるＩＦＮγ産生に対する（ＨＥＫ細胞から発現された）ＣＤ９６結合タンパク質の活性を示す図である。 図１４は、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおけるＩＦＮγ及びグランザイムＢの分泌に対するＣＤ９６結合タンパク質の効果を示す図である。 図１５は、ＣＤ９６結合タンパク質及び対照群の存在下での、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおける３日目の異なる細胞集団中のＩＦＮγ＋細胞の頻度を示す図である。 図１６は、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおけるＣＤ９６結合タンパク質及び対照群で治療した上でのＣＤ４＋、ＣＤ８＋及びＮＫ細胞集団中のＣＤ９６＋細胞の頻度を示す図である。 図１７は、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおけるＣＤ９６結合タンパク質及び対照群で治療した上でのＣＤ４＋、ＣＤ８＋及びＮＫ細胞集団中のＣＤ９６細胞の頻度を示す図である。 図１８は、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおけるＣＤ２２６＋単一陽性ＮＫ細胞対ＣＤ２２６＋ＣＤ９６＋二重陽性ＮＫ細胞の比に対するＣＤ９６結合タンパク質の効果を示すＦＡＣｓ特徴付けを示す図である。 図１９は、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおけるＮＫ細胞全集団の中のＩＦＮγ＋ＧｒｚＢ＋二重陽性細胞に対するＣＤ９６結合タンパク質の効果を示すＦＡＣｓ特徴付けを示す図である。 図２０は、ヒトＰＢＭＣアッセイにおけるＩＦＮγ産生に対するプレートに結合したＣＤ１５５－Ｆｃの阻害効果を示す図である。 図２１は、単独又は抗ＰＤ１抗体もしくは抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせた、腎癌ＴＩＬ機能アッセイにおけるＣＤ９６結合タンパク質の活性を示す図である。 図２２は、ＮＫ細胞依存性Ｂ１６Ｆ１０黒色腫肺コロニー形成モデルにおけるＣＤ９６結合タンパク質の生物発光イメージング研究データを示し、Ｂ１６Ｆ１０ ＲＦｌｕｃ黒色腫細胞の注射の約１５分後に取得された代表的な生物発光画像を示す図である。 図２３は、ＣＤ４、ＣＤ８、又はＮＫ細胞の枯渇を伴う、枯渇なしのマウスにおけるＢ１６Ｆ１０細胞注射後１４日目の肺生物発光シグナルを示す図である。 図２４は、様々な群における肺転移に対するＣＤ９６結合タンパク質（対照群に対する）の効果を示す１４日目及び２０日目のｉｎ ｖｉｖｏ生物発光肺シグナルを示す図である。 図２５は、２０日目（試験終了時）のＣＤ９６結合タンパク質で処置したＣＤ４＋／ＣＤ８＋枯渇マウス肺対対照群の画像を示す図である。 図２６は、ＭＳＤによって評価した場合の、ＣＤ９６結合タンパク質の存在下でのＣＤ１５５コーティングＰＢＭＣアッセイ又は抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの存在下でのアイソタイプ対照群におけるＩＦＮγ産生を示す図である。 図２７は、ＭＳＤによって評価した場合の、ＣＤ９６結合タンパク質の存在下でのＣＤ１５５コーティングＰＢＭＣアッセイ又は抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの存在下でのアイソタイプ対照におけるＴＮＦα産生を示す図である。 図２８は、ＭＳＤによって評価した場合の、ＣＤ９６結合タンパク質の存在下でのＣＤ１５５コーティングＰＢＭＣアッセイ又は抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの存在下でのアイソタイプ対照群におけるＩＦＮγ産生を示す図である。
発明の詳細な説明
本開示は、ＣＤ９６結合タンパク質、そのタンパク質をコードする核酸、及び関連する主題を提供する。
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」（and）及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、複数の言及を含む。したがって、例えば、「ペプチド鎖（ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｈａｉｎ）」への言及は、１つ又は複数のペプチド鎖への言及であり、当業者に知られているその等価物を含む。
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、用語「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなってもよく、又は何らかの追加のものを含んでもよい、例えば、Ｘ＋Ｙ。
用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、特徴の範囲を、指定された材料又は工程、及び特許請求される特徴の基本的な特性に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程に限定する。
用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、任意の追加の成分（複数可）の存在を除外する。
特に反対の定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本開示の方法の実施又は試験において、本明細書に記載の組成物及び方法又は同等の任意の組成物及び方法を使用することができるが、例示的な組成物及び方法を本明細書に記載する。また本明細書に記載される本開示の態様及び実施態様のいずれかを組み合わされてもよい。例えば、本明細書に開示される任意の従属項又は独立項の主題は、多重に組み合わせてもよい（例えば、各従属項からの１つ又は複数の記載は、それらが従属する独立項に基づいて単一の請求項に組み合わせてもよい）。
本明細書に提供される範囲は、記載された特定の範囲内の全ての値、及び特定の範囲の終点についての値を含む。本開示の図及び表はまた、本明細書に開示される方法のいずれかの要素を構成し得る範囲及び離散値を記載する。
本明細書に記載される濃度は、周囲温度及び圧力で決定される。これは、例えば、室温での又はプロセス流の特定の部分内の温度及び圧力であってもよい。好ましくは、濃度は２５℃及び１バールの圧力の標準状態で決定される。
用語「約（about）」は、任意の特定の測定値についての平均の２つの標準偏差内の値を意味する。
「親和性（affinity）」は、１つの分子の別の分子への結合の強度である。抗原結合タンパク質のその標的への結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）もしくはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））又は動態（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（ＴＭ）分析）によって決定され得る。
本明細書で使用される「抗原（antigen）」という用語は、抗原結合タンパク質によって選択的に認識される巨大分子の構造を指す。抗原には、タンパク質（多糖を含む又は含まない）又は１つもしくは複数のＴ細胞エピトープを含むタンパク質組成物が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で企図されるように、抗原結合タンパク質の標的結合ドメインは、特定のアミノ酸配列又は巨大分子ではなく、糖タンパク質の糖側鎖を認識し得る。したがって、糖部分又は硫酸化糖部分は、抗原として機能する。
本明細書で使用される「抗原結合タンパク質（antigen binding protein）」という用語は、ＣＤ９６に結合することができるドメイン（例えば、ドメイン抗体など）を含むものなどの、単離されたタンパク質、抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂなど）及び他の抗体由来タンパク質構築物を指す。そのような代替的な抗体形式としては、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、及びミニボディが挙げられる。本開示による任意の分子の１つ以上のＣＤＲが、アフィボディ（affibody）、ＳｐＡ骨格、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（avimer）（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／０１６４３０１号を参照されたい）又はＥＧＦドメインなどの好適な非免疫グロブリンタンパク質骨格（scaffold）又は骨格（skeleton）上に配置され得る代替的な骨格もまた含まれる。ＡＢＰは、そのような抗体又は他の分子の抗原結合断片も含む。さらに、ＡＢＰは、適切な軽鎖と対合させた場合に、全長抗体、（Ｆａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、二重特異性もしくは二パラトープ性分子又はその等価物（例えば、ｓｃＦｖ、バイ－、トリ－、又はテトラ－ボディ、Ｔａｎｄａｂなど）にフォーマットされた本発明のＶＨ領域を含んでもよい。ＡＢＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４；又はＩｇＭ；ＩｇＡ、ＩｇＥもしくはＩｇＤ、又はそれらの修飾変異体である抗体を含んでもよい。抗体重鎖の定常ドメインは、それに応じて選択することができる。軽鎖定常ドメインは、カッパ又はラムダ定常ドメインであってもよい。ＡＢＰはまた、抗原結合領域及び非免疫グロブリン領域を含む、国際公開第８６／０１５３３号パンフレットに記載されている種類のキメラ抗体であってもよい。本開示の抗原結合タンパク質は、薬学的に許容可能な担体（例えば、滅菌水）で再構成することができる抗体及び賦形剤を含有する凍結乾燥粉末として提供することができる。次いで、この再構成された医薬組成物を（例えば、さらに希釈して）皮下又は静脈内のいずれかで投与することができる。本開示の抗原結合タンパク質はまた、抗体、賦形剤及び薬学的に許容可能な担体を含有する液体製剤として提供することもできる。次いで、この液体医薬組成物を（例えば、さらに希釈し
て）皮下又は静脈内のいずれかに投与することができる。「ＡＢＰ」、「抗原結合タンパク質」及び「結合タンパク質（binding protein）」という用語は、本明細書において互換的に使用される。本明細書において使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質又はペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限は課されない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合連結された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書中で使用される場合、この用語は、短鎖（これはまた、当該分野で一般に、例えば、ペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーともいわれる）及びより長鎖（これは一般に、当該分野でタンパク質といわれる）の両方を指し、これらの多くの型が存在する。「ポリペプチド」としては、例えば、とりわけ、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、変性ポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドとしては、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組み合わせが挙げられる。
本明細書で使用される「抗体変異体（antibody variant）」という用語は、親抗体と比較して構造変化（例えば、異なるアミノ酸側鎖、異なる翻訳後修飾又は他の修飾）をもたらす、少なくとも１つの重鎖、軽鎖、又はこれらの組み合わせにおける少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、異なるアミノ酸側鎖を有することによる）、翻訳後修飾又は他の修飾によって親抗体と異なる抗体を意味する。構造変化は、当該分野で周知の種々の方法（例えば、ＬＣ－ＭＳ、直接配列決定）によって直接的に、又は等電点電気泳動などの方法を介して間接的に決定され得る。このような方法は、当業者に周知である。
用語「エピトープ」は、本明細書中で使用される場合、特定の結合ドメインと接触する抗原の部分をいう。エピトープは、直線状又は立体配座的／不連続であり得る。立体配座的又は不連続エピトープは、他の配列によって分離されている（すなわち、抗原の一次配列中の連続配列中にない）アミノ酸残基を含む。残基はペプチド鎖の異なる領域からのものであり得るが、それらは抗原の三次元構造中で近接している。多量体抗原の場合、立体配座的エピトープ又は不連続エピトープは、異なるペプチド鎖からの残基を含み得る。エピトープ内に含まれる特定の残基は、コンピュータモデリングプログラムによって、又はＸ線結晶学などの当技術分野技術分野で公知の方法を通じて得られる三次元構造を介して決定することができる。本明細書で企図されるように、エピトープという用語は、抗原結合タンパク質又はドメイン、例えばグリコシル化タンパク質の糖部分によって認識され得るポリペプチドに対する翻訳後修飾を含む。
本明細書で使用される「単離された」という用語は、天然の状態から変更又は除去されたことを意味する。例えば、生きている動物中に天然に存在する核酸又はペプチドは「単離された」ものではないが、その天然の状態の共存する物質から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは「単離された」ものである。単離された核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することもでき、又は非天然の環境（例えば、宿主細胞など）中に存在することもできる。
ＴＡＣＴＩＬＥとしても知られるＣＤ９６（分化抗原群９６）は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞上に発現する受容体であり、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ０１）と配列類似性を共有し、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する１型膜貫通糖タンパク質である。
ヒトＣＤ９６は、３つのアイソフォーム：２つの膜（Ｖ１；Ｖ２）及び可溶性形態を有する。より長いＶ１アイソフォームは、６５，６３４ＤａのＭＷを有する５８５アミノ酸タンパク質である。より短いアイソフォームＶ２（５６９ａａ）は、６３，８８８ＤａのＭＷを有する。Ｖ２は、第２のドメインのＩｇフォールドの短い欠失を有することによってＶ１とは異なる。ＣＤ９６の第１のドメインは、ＣＤ１５５結合に必要とされるエピトープ（複数可）を含有するが、第２のドメインは、結合の大きさ／強度を調節することが報告されている。ＣＤ９６Ｖ２は、ＣＤ９６Ｖ１よりもはるかに強くＣＤ１５５に結合し、急性骨髄性白血病ＡＭＬ（細胞）を除いて主に発現される形態でもある。ＣＤ９６の可溶性形態（ｓＣＤ９６）についてはほとんど知られていない。ｓＣＤ９６は、健康なドナー血液中で検出され（１～３ｎｇ／ｍｌ）、より高いレベルがＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ＨＢＶ／肝硬変患者において検出されたことが報告されている。
正常なヒト組織のｍＲＮＡ分析に基づいて、ＣＤ９６の最も高い発現（ＣＤ９６のＶ１及びＶ２の両方を検出するプローブ）が、造血細胞において観察される。ＣＤ９６発現はまた、多数のリンパ球を含む組織（例えば、脾臓、肺、甲状腺及び小腸）において観察される。造血細胞の中で、ＣＤ９６は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞において最も豊富であり、いくつかのＢ細胞においてより低い発現である。ＣＤ９６と同様に、ＴＩＧＩＴ及びＣＤ２２６は、造血細胞において最も豊富であり、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の両方において発現される。ＣＤ２２６はまた、従来のＤＣ細胞においても発現される。リガンドＣＤ１５５は、ヒト正常組織において広範な発現パターンを示し、ＤＣ細胞及びマクロファージ（抗原提示細胞）においても発現される。ＣＤ１５５は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞において発現されない。
抗原結合タンパク質－標的抗原相互作用の結合親和性（ＫＤ）は、１ｍＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭ以下又は１ｎＭ以下であり得る。あるいは、ＫＤは、５～１０ｎＭの間；又は１～２ｎＭの間であり得る。ＫＤは、１ｐＭ～５００ｐＭの間；又は５００ｐＭ～１ｎＭの間であり得る。例えば、特定の有用なそのような変異体は、少なくとも約４０ｎＭ又は少なくとも約３５ｎＭ又は少なくとも約３０ｎＭ、例えば約１０ｐＭ～約３０ｎＭである結合親和性（ＫＤ）を有する。
抗原結合タンパク質の結合親和性は、会合定数（Ｋａ）及び解離定数（Ｋｄ）（ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ）によって決定される。結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（ＴＭ）によって、例えば、プロテインＡでコーティングされたセンサー表面上に試験抗体を捕捉し、この表面上に標的抗原を流すことによって測定することができる。あるいは、結合親和性は、ＦＯＲＴＥＢＩＯによって、例えば、プロテインＡでコーティングされた針上に試験抗体受容体を捕捉し、この表面上に標的抗原を流すことによって測定することができる。あるいは、結合親和性（ＫＤ）は、ＭＳＤ－ＳＥＴ分析（ＭＳＤ溶液平衡滴定）を使用することによって、例えば、標準的な結合ＭＳＤプレート上に試験抗体を滴定（titrarated）し、ＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ ＩＭＡＧＥＲを使用して検出することによって測定することができる。ＭＳＤ－ＳＥＴは、溶液相、抗体の平衡親和性を決定する。この公知の方法は、滴定された一連の抗体濃度における平衡状態での遊離抗原の検出に依存する。
Ｋｄは、１×１０－３Ｍｓ－１以下、１×１０－４Ｍｓ－１以下、又は１×１０－５Ｍｓ－１以下であり得る。Ｋｄは、１×１０－５Ｍｓ－１～１×１０－４Ｍｓ－１の間；又は１×１０－４Ｍｓ－１～１×１０－３Ｍｓ－１の間であり得る。遅いＫｄは、抗原結合タンパク質－標的抗原複合体の遅い解離及び標的抗原の改善された中和をもたらし得る。
本明細書で使用される「特異的抗原結合活性」という用語は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される抗原結合活性を意味する。ＣＤ９６特異的結合活性は、例えば結合モードで実施される、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ装置を使用するＳＰＲによって決定することができる。それは、結合活性を試料中の総タンパク質含有量で除算したものである。
「ＶＨ」及び「ＶＬ」という用語は、本明細書において、抗原結合タンパク質の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をそれぞれ指すために使用される。
「ＣＤＲ」は、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、３つの重鎖及び３つの軽鎖ＣＤＲ（又はＣＤＲ領域）が存在する。したがって、本明細書で使用される「ＣＤＲ」は、３つ全ての重鎖ＣＤＲ、３つ全ての軽鎖ＣＤＲ、全ての重鎖及び軽鎖ＣＤＲ、又は少なくとも１つのＣＤＲを指し、少なくとも１つのＣＤＲはＣＤＲＨ３である。フレームワーク領域は、これらのＣＤＲ領域のそれぞれに続く。許容される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域領域のフレームワーク１、フレームワーク２及びフレームワーク３領域は、当業者によって容易に認識される。許容される重鎖定常領域（ヒンジ領域を含む）及び軽鎖定常領域も当業者によって容易に認識される。許容される抗体アイソタイプも同様に、当業者によって容易に認識される。
本明細書全体を通して、可変ドメイン配列及び全長抗体配列中のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔ ナンバリング規則に従ってナンバリングされる。同様に、本明細書中で使用される用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」も、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。
可変ドメイン配列及び完全長抗体配列中のアミノ酸残基について代替的なナンバリング規則が存在することは、当業者には明らかであろう。ＣＤＲ配列についても代替的なナンバリング規則、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング規則に従って記載されるものが存在する。抗体の構造及びタンパク質フォールディングは、他の残基がＣＤＲ配列の一部と考えられ、当業者によってそのように理解されることを意味し得る。
当業者に利用可能なＣＤＲ配列についての他のナンバリング慣例としては、「ＡｂＭ」（University of Bath）及び「ｃｏｎｔａｃｔ」（University College London）法が挙げられる。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ及び接触法のうちの少なくとも２つを使用する最小重複領域は、「最小結合単位」を提供するために決定することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの下位部分であり得る。
以下の表１は、各ＣＤＲ又は結合単位についての各ナンバリング規則を使用する１つの定義を表す。Ｋａｂａｔナンバリングスキームを表１において使用して、可変ドメインアミノ酸配列にナンバリングする。ＣＤＲ定義のいくつかは、使用される個々の刊行物に応じて変動し得ることに留意すべきである。
Figure 2022535034000001
本開示の一実施態様は、（ａ）（ｉ）配列番号２，６，１０，１４，１８，２２，２６，３０，３４，３８，４２，４６，５０，５４，５８，６２，６６，７０，７４，７８，８２，８６，９０，及び９４からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３及び／又は配列番号１，５，９，１３，１７，２１，２５，２９，３３，３７，４１，４５，４９，５３，５７，６１，６５，６９，７３，７７，８１，８５，８９及び９３からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つ又は組合せ；又は（ｉｉ）（ｉ）のＣＤＲ変異体であって、１、２又は３個のアミノ酸修飾を有する変異体；あるいは（ｂ）配列番号２，６，１０，１４，１８，２２，２６，３０，３４，３８，４２，４６，５０，５４，５８，６２，６６，７０，７４，７８，８２，８６，９０，又は９４の配列と少なくとも８０％同一（又は少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％同一）の配列を含むＶＨ領域；及び／又は配列番号１，５，９，１３，１７，２１，２５，２９，３３，３７，４１，４５，４９，５３，５７，６１，６５，６９，７３，７７，８１，８５，８９，又は９３の配列と少なくとも８０％同一（又は少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％同一）の配列を含むＶＬ領域 を含むＣＤ９６結合タンパク質である。
別の実施態様では、ＣＤ９６結合タンパク質は、（ａ）（ｉ）配列番号２，６，１０，１４，１８，２２，２６，３０，３４，３８，４２，４６，５０，５４，５８，６２，６６，７０，７４，７８，８２，８６，９０，及び９４からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、及び／又は配列番号１，５，９，１３，１７，２１，２５，２９，３３，３７，４１，４５，４９，５３，５７，６１，６５，６９，７３，７７，８１，８５，８９，及び９３からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＲＤＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つ又は組合せ；又は（ｉｉ）（ｉ）のＣＤＲ変異体であって、１、２又は３個のアミノ酸修飾を有する変異体；あるいは（ｂ）配列番号２，６，１０，１４，１８，２２，２６，３０，３４，３８，４２，４６，５０，５４，５８，６２，６６，７０，７４，７８，８２，８６，９０，又は９４の配列を含むＶＨ領域；及び／又は配列番号１，５，９，１３，１７，２１，２５，２９，３３，３７，４１，４５，４９，５３，５７，６１，６５，６９，７３，７７，８１，８５，８９，又は９３の配列と少なくとも８０％同一（又は少なくとも８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，９９．５％同一）の配列を含むＶＬ領域を含む。
本開示の別の実施態様は、配列番号１０５～１２５から選択されるＣＤＲＨ１；配列番号１２６～１４６から選択されるＣＤＲＨ２；及び／又は配列番号１４７～１５０から選択されるＣＤＲＨ３；配列番号９７～９８から選択されるＣＤＲＬ１；配列番号９９～１００から選択されるＣＤＲＬ２；及び／又は配列番号１０１～１０４から選択されるＣＤＲＬ３を含む、前の態様に記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の実施態様は、配列番号１４７、１４８、１４９、又は１５０と１００％同一であるＣＤＲＨ３を含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の実施態様は、配列番号１０５，１０６，１０７，１０８，１０９，１１０，１１１，１１２，１１３，１１４，１１５，１１６，１１７，１１８，１１９，１２０，１２１，１２２，１２３，１２４又は１２５と１００％同一であるＣＤＲＨ１；配列番号１２６，１２７，１２８，１２９，１３０，１３１，１３２，１３３，１３４，１３５，１３６，１３７，１３８，１３９，１４０，１４１，１４２，１４３，１４４，１４５，又は１４６と１００％同一であるＣＤＲＨ２；及び／又は配列番号１４７，１４８，１４９，又は１５０と１００％同一であるＣＤＲＨ３；配列番号９７又は９８１４８と１００％同一であるＣＤＲL１；配列番号９９又は１００と１００％同一であるＣＤＲL２；及び／又は配列番号１０１，１０２，１０３，又は１０４と１００％同一であるＣＤＲL３を含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の実施態様は、６つ全てのＣＤＲが結合タンパク質中に存在する、先行する態様のいずれか１つに記載されるＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の実施態様は、配列番号１１５のＣＤＲＨ１；配列番号１４５のＣＤＲＨ２；及び配列番号１４７のＣＤＲＨ３；及び／又は配列番号９７のＣＤＲＬ１；配列番号９９のＣＤＲＬ２；及び配列番号１０１のＣＤＲＬ３を含む、先行する態様のいずれか１つに記載されるＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の実施態様は、結合タンパク質が、配列番号８６と７５％同一であるＶＨ領域；及び／又は配列番号８５と７５％同一である（又はこれらの配列と少なくとも８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，９９．５％同一である）ＶＬ領域を含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。本開示の別の態様は、結合タンパク質が、配列番号８６と１００％同一であるＶＨ領域；及び／又は配列番号８５と１００％同一であるＶＬ領域を含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の一実施態様において、本発明は、本明細書に記載のＣＤＲのいずれかを（単独で又は記載の組合せで）含み、Ｆｃガンマ受容体に結合することができ、かつ／又はＩＦＮガンマ放出を促進することができるＦｃ領域も含む、ＣＤ９６結合タンパク質を提供する。そのようなＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１Ｆｃであり得る。
本開示の一実施態様において、本発明は、本明細書に記載されるＶＨ領域のいずれかを（単独で又は記載される組み合わせで）含み、かつＦｃガンマ受容体に結合することができ、かつ／又はＩＦＮガンマ放出を促進することができるＦｃ領域も含むＣＤ９６結合タンパク質を提供する。そのようなＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１Ｆｃであり得る。
本開示の一実施態様において、本発明は、本明細書に記載のＶＬ領域のいずれかを（単独で又は記載の組合せで）含み、かつＦｃガンマ受容体に結合することができ、かつ／又はＩＦＮガンマ放出を促進することができるＦｃ領域も含むＣＤ９６結合タンパク質を提供する。そのようなＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１Ｆｃであり得る。
本開示の別の実施態様は、抗体である先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質であって、結合タンパク質が、配列番号１６５と７５％同一（又は少なくとも８０％，８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，９９．５％同一）である（完全）重鎖；及び／又は配列番号１６６と７５％同一（又は少なくとも８０％，８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，９９．５％同一）である（完全）軽鎖を含む。
本開示の別の態様は、結合タンパク質が、配列番号８６と１００％同一であるＶＨ領域；及び／又は配列番号８５と１００％同一であるＶＬ領域を含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の態様は、抗体であり、結合タンパク質が、配列番号１６５のアミノ酸配列と１００％同一である（完全）重鎖；及び／又は配列番号１６６のアミノ酸配列と１００％同一である（完全）軽鎖（配列番号１６５及び１６６においてＣＤＲに下線が引かれている）を含むか、あるいはＣＤ９６に結合する抗体であって、重鎖が配列番号１６７の核酸配列によってコードされ、及び／又は軽鎖が配列番号１６８の核酸配列によってコードされる抗体である、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の態様は、抗体であり、結合タンパク質が、配列番号１７０のアミノ酸配列と１００％同一である（完全）重鎖；及び／又は配列番号１６９のアミノ酸配列と１００％同一である（完全）軽鎖（ＣＤＲに下線が引かれている）を含むか、あるいはＣＤ９６に結合する抗体であって、重鎖が配列番号１７２の核酸配列によってコードされ、及び／又は軽鎖が配列番号１７１の核酸配列によってコードされる抗体である、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本開示の別の態様は、抗体であり、結合タンパク質が、配列番号１７４のアミノ酸配列と１００％同一である（完全）重鎖；及び／又は配列番号１７３のアミノ酸配列と１００％同一である（完全）軽鎖（ＣＤＲに下線が引かれている）を含むか、あるいはＣＤ９６に結合する抗体であって、重鎖が配列番号１７６の核酸配列によってコードされ、及び／又は軽鎖が配列番号１７５の核酸配列によってコードされる抗体である、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本発明は、本明細書中に記載されるアミノ酸配列のいずれかと１００％同一である結合タンパク質、及び本明細書中に記載されるアミノ酸配列の変異体であるタンパク質（例えば、本明細書中の配列と少なくとも７５％同一又は少なくとも８０％，８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，９９．５同一である配列）を含む。
本発明はまた、本発明の結合タンパク質をコードする核酸（本明細書中に記載される核酸配列のいずれかに対して１００％同一である核酸を含む）、及び本明細書中に記載される配列の変異体である核酸（例えば、本明細書中の配列に対して少なくとも７５％同一又は少なくとも８０％，８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，９９．５％同一である配列）を含む。
本出願において提供されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ及び可変領域は、ＣＤ１５５の結合親和性と同等もしくはそれよりも良好なＣＤ９６に対する結合親和性を有し、かつ／又はＣＤ１５５がＣＤ９６に結合するのを防止もしくは置換することができる可変領域である（これを決定するために使用することができる結合アッセイの例は、本明細書の実施例１及び２に記載されている）。本明細書において記載される配列の有用な変異体は、可変領域がＣＤ１５５の結合親和性と同等もしくはそれよりも良好なＣＤ９６に対する結合親和性を有し、又はＣＤ１５５がＣＤ９６に結合するのを防止もしくは置換することができる変異体である（これを決定するために使用することができる結合アッセイの例は、本明細書の実施例１及び２に記載されている）。例えば、ある特定の有用なそのような変異体は、例えば、結合親和性が本明細書に詳述されるＭＳＤ－ＳＥＴアッセイによって決定される場合、少なくとも約４０ｎＭ又は少なくとも約３５ｎＭ又は少なくとも約３０ｎＭ、例えば、約１０ｐＭ～約３０ｎＭである結合親和性（ＫＤ）を有する。
本発明による有用なＣＤ９６結合タンパク質（抗体など）は、そのような可変領域と、本明細書に記載されるＦｃ領域とを含むことができ、そのＦｃ領域は、Ｆｃガンマ受容体に結合することができ、かつ／又はＩＦＮガンマ放出を促進することができる。本発明によるそのようなＦｃ領域は、野生型ＩｇＧ１Ｆｃ又はその機能的変異体（例えば、Ｆｃガンマ受容体に結合することができ、かつ／又はＩＦＮガンマ放出を促進することができるＦｃ無効化変異体）である。したがって、本発明のＣＤＲ及び／又は可変領域のいずれかを、本発明のＦｃ領域、例えば、野生型ＩｇＧ１Ｆｃ又はその機能的変異体と組み合わせることができる。
本開示の別の実施態様は、結合タンパク質が、合成ポリペプチド、ヒト化配列、又はキメラ配列を含む、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質である。
本明細書で使用される場合、「保存配列改変（conservative sequence modifications）」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体又は抗体断片の結合特性に有意に影響を及ぼさない又はそれを変化させないアミノ酸改変を指すことが意図される。そのような保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、当該分野で公知の標準的な技術（例えば、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発）によって、本発明の抗体又は抗体フラグメントに導入され得る。保存アミノ酸置換（Conservative amino acid substitutions）は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。
「ドメイン」という用語は、タンパク質の残りの部分から独立してその三次構造を保持する折り畳まれたタンパク質構造を指す。一般に、ドメインは、タンパク質の別個の機能特性に関与し、多くの場合、タンパク質及び／又はドメインの残りの部分の機能を喪失することなく、他のタンパク質に付加、除去又は転移され得る。
「核酸」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖又は二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有する天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸を包含し、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝されるものである。他に示されない限り、特定の核酸配列はまた、その保存改変変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補的配列、ならびに明示的に示される配列を暗黙的に包含する。具体的には、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換される配列を生成することによって、縮重コドン置換が達成され得る（Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); and Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)を参照のこと）。
本開示の一実施態様は、先行する実施態様のいずれか１つに記載されるＣＤ９６結合タンパク質をコードする核酸配列である。
本開示のさらなる実施態様は、配列が、重鎖をコードする配列番号４，８，１２，１６，２０，２４，２８，３２，３６，４０，４４，４８，５２，５６，６０，６４，６８，７２，７６，８０，８４，８８，９２，又は９６；及び／又は軽鎖をコードする配列番号３，７，１１，１５，１９，２３，２７，３１，３５，３９，４３，４７，５１，５５，５９，６３，６７，７１，７５，７９，８３，８７，９１，又は９５を含む、先行する実施態様に記載される核酸配列である。本開示の別の実施態様は、先行する実施態様のいずれかに記載される核酸を含む発現ベクターである。
本明細書に記載される組成物は、任意の数の従来の技術によって生成され得る。例えば、組成物は、組換え発現系において発現され得、そして組換え発現系から精製され得る。一実施態様において、組成物は、先行する実施態様のいずれかに記載されるＣＤ９６結合タンパク質の発現に適した条件下で宿主細胞を培養する方法によって産生され、その組成物は、発現され、そして必要に応じて精製され、そして必要に応じて薬学的組成物内に剤型化される。
いくつかの異なる発現系及び精製レジームを使用して、組成物を生成することができる。一般に、宿主細胞は、抗体をコードする組換え発現ベクターで形質転換される。哺乳動物起源の真核細胞株（例えば、ＣＨＯ、Ｐｅｒｃ６、ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａ、ＮＳ０）を含む広範囲の宿主細胞を使用することができる。適切な宿主細胞として、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯＫ１及びＣＨＯ－ＤＧ４４）などの哺乳動物細胞が挙げられる。
宿主細胞は、単離された宿主細胞であってもよい。宿主細胞は、通常、多細胞生物（例えば、植物又は動物）の一部ではない。宿主細胞は、非ヒト宿主細胞であってもよい。
真核生物又は哺乳動物細胞宿主とともに使用するための適切なクローニングベクター及び発現ベクターならびにクローニングの方法は、当該分野で公知である。
細胞は、抗体の発現を促進する条件下で培養され得る。例えば、細胞を培養するためには産生バイオリアクター（production bioreactor）を使用する。産生バイオリアクターの容量は、（ｉ）約２０，０００リットル、約１０，０００リットル；約５，０００リットル；約２，０００リットル；約１，０００リットル；もしくは約５００リットル；又は（ｉｉ）５００～２０，０００リットル；５００～１０，０００リットル；５００～５，０００リットル；１，０００～１０，０００リットル、もしくは２，０００～１０，０００リットルであり得る。例えば、細胞は、約６．７５～ｐＨ ７．００のｐＨで産生バイオリアクター中で培養され得る。あるいは、細胞は、約１２～約１８日間産生バイオリアクター中で培養され得る。あるいは、細胞は、約６．７５～約７．００のｐＨで約１２～約１８日間産生バイオリアクター中で培養され得る。この培養工程は、脱アミド化抗体変異体のレベルを制御する、例えば、脱アミド化抗体変異体のレベルを低下させるのに役立ち得る。
組成物は、従来のタンパク質精製手順によって回収及び精製され得る。例えば、組成物は、培養培地から直接収集され得る。細胞培養培地の収集は、例えば遠心分離及び／又は深層濾過による清澄化を介してもよい。組成物の回収後、適切な純度を確保するために精製を行う。
本開示のさらなる実施態様は、先行する実施態様のいずれかに記載される核酸配列又は発現ベクターを含む組換え宿主細胞である。本開示の別の実施態様は、先行する実施態様に記載される宿主細胞を、前記核酸配列又はベクターの発現に適した条件下で培養することを含み、それによってＣＤ９６結合タンパク質を含むポリペプチドが産生される、ＣＤ９６結合タンパク質を産生するための方法である。本開示のさらなる実施態様は、先行する実施態様に記載される産生方法によって産生されるＣＤ９６結合タンパク質である。本開示の別の実施態様は、先行する実施態様のいずれか１つに記載されるＣＤ９６結合タンパク質を発現するように操作された細胞株である。
クエリー核酸配列と対象核酸配列との間の「パーセント同一性」はパーセンテージとして表される「同一性」値であって、それはペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが行われた後に対象核酸配列がクエリー核酸配列と１００％のクエリーカバレッジを有する場合にＢＬＡＳＴＮアルゴリズムによって計算されるものである。クエリー核酸配列と対象核酸配列との間のそのようなペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントは、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルト設定を使用して、低複雑性領域用のフィルターをオフにして実施される。重要なことに、クエリー核酸配列は、本明細書中の１つ又は複数の請求項において同定される核酸配列によって記載され得る。
クエリーアミノ酸配列と対象アミノ酸配列との間の「パーセント同一性」は、パーセンテージとして表される「同一性」値であって、それは対象アミノ酸配列が、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントが行われた後にクエリーアミノ酸配列と１００％のクエリーカバレッジを有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムによって計算されるものである。そのようなクエリーアミノ酸配列と対象アミノ酸配列との間のペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を使用して、低複雑性領域のためのフィルターをオフにして実施される。重要なことに、クエリーアミノ酸配列は、本明細書の１つ又は複数の請求項において特定されるアミノ酸配列によって記載され得る。
クエリー配列は、対象配列と１００％同一であってもよく、又はそれは、同一性％が１００％未満であるように、対象配列と比較して特定の整数個までのアミノ酸又はヌクレオチド改変を含んでもよい。例えば、クエリー配列は、対象配列と少なくとも５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一である。そのような改変には、少なくとも１つのアミノ酸欠失、置換（保存及び非保存置換を含む）、又は挿入が含まれ、その改変は、クエリー配列のアミノ末端位置もしくはカルボキシ末端位置、又はそれらの末端位置の間のどこかで、クエリー配列中のアミノ酸もしくはヌクレオチドの間に個々に、又はクエリー配列内の１つもしくは複数の連続した群に散在して生じ得る。
本明細書で使用される「配列同一性」は、配列を比較することによって決定される、２つ以上のアミノ酸配列間、又は２つ以上の核酸配列間の関連性の程度である。配列の比較及び配列同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る；当業者は、２つの配列を整列させ、それらの間のパーセント同一性を決定するために利用可能なコンピュータプログラムを知っている。当業者は、異なるアルゴリズムがわずかに異なる結果をもたらし得ることを理解するであろう。
抗体に関して本明細書で使用される「特異的に結合する（specifically binds）」という用語及びその文法的変形は、特定の抗原を認識し、それと結合するが、試料中の他の分子を実質的に認識又は結合しない抗体又は抗体断片を意味する。例えば、１つの種に由来する抗原に特異的に結合する抗体はまた、１つ又は複数の種に由来するその抗原に結合し得る。しかし、そのような異種間の反応性自体は、特異的なものとしての抗体の分類を変更しない。別の例において、抗原に特異的に結合する抗体はまた、抗原の異なる対立遺伝子形態に結合し得る。しかしながら、そのような交差反応性自体は、特異的なものとしての抗体の分類を変化させない。いくつかの例において、「特異的結合（specific binding）」又は「特異的に結合する（specifically binding）」という用語は、抗体、タンパク質、又はペプチドと第２の化学種との相互作用に関して使用され得、相互作用が、化学種上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する；例えば、抗体は、一般にタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」及び抗体を含む反応において、エピトープＡ（又は遊離の非標識Ａ）を含む分子の存在は、抗体に結合した標識されたＡの量を低下させる。
本明細書で使用される「医薬組成物」という用語は、患者への投与に適した組成物を意味する。
本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載されるＣＤ９６結合タンパク質の精製された調製物を含み得る。
例えば、医薬調製物は、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて、本明細書に記載されるＣＤ９６結合タンパク質の精製された調製物を含み得る。
典型的には、そのような医薬組成物は、許容される薬務によって知られ、かつ要求されるような薬学的に許容可能な担体を含む。そのような担体の例としては、場合により適切な緩衝液で５～８の範囲内のｐＨに緩衝されてもよい、生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液などの滅菌担体が挙げられる。
薬学的組成物は、注射又は注入（例えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、筋肉内、又は門脈内）によって投与され得る。そのような組成物は、好適には、目に見える粒子状物質を含まない。薬学的組成物は、１ｍｇ～１０ｇの抗原結合タンパク質、例えば、５Ｍｇ～１ｇの抗原結合タンパク質を含み得る。あるいは、組成物は、５Ｍｇ～５００ｍｇの抗原結合タンパク質、例えば、５Ｍｇ～５０ｍｇを含み得る。
このような医薬組成物の調製方法は、当業者に周知である。医薬組成物は、場合により使用説明書と共に、単位投与形態（unit dosage form）中に１ｍｇ～１０ｇの抗原結合タンパク質を含み得る。医薬組成物は、当業者に周知又は明らかな方法に従って、投与前に再構成するために凍結乾燥（フリーズドライ）され得る。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する場合、このアイソタイプの抗体の銅媒介性分解の程度を低減するために、クエン酸塩（例えば、クエン酸ナトリウム）又はＥＤＴＡ又はヒスチジンなどの銅のキレート剤を医薬組成物に添加してもよい。医薬組成物はまた、アルギニンなどの可溶化剤、ポリソルベート８０などの界面活性剤／抗凝集剤、及びバイアルヘッドスペースの酸素（vial headspace oxygen）を置き換えるための窒素などの不活性ガスを含んでもよい。
本開示の一実施態様は、先行する実施態様のいずれかに記載されるＣＤ９６結合タンパク質と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物である。本開示のさらなる実施態様は、先行する実施態様のいずれか１つに記載される治療有効量のＣＤ９６結合タンパク質を含む医薬組成物である。
「抗腫瘍効果（anti-tumor effect）」という用語は、本明細書で使用される場合、腫瘍増殖速度の低下、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、又は癌状態に関連する様々な生理学的症状の改善によって明らかにされ得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」はまた、第一に腫瘍の発生の予防に対する、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体による能力によっても明らかにされ得る。
本明細書中で使用される場合、用語「癌」、「新生物」及び「腫瘍」は、交換可能に使用され、そして単数形又は複数形のいずれかで使用され、悪性形質転換を経た結果、宿主生物に対して病的な細胞をいう。特定の実施態様において企図される組成物及び方法によって標的化され得る細胞の例示的な例としては、以下の癌が挙げられるが、これらに限定されない：滑膜肉腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、粘液様円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬＳ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）。原発性癌細胞は、十分に確立された技術、特に組織学的検査によって非癌性細胞から容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義には、原発性癌細胞だけでなく、癌細胞祖先に由来する任意の細胞も含まれる。これには、転移した癌細胞、ならびに癌細胞に由来するｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物及び細胞株が含まれる。固形腫瘍として通常現れる癌の種類に言及する場合、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線、超音波又は身体検査での触診などの手順によって、腫瘍塊に基づいて検出可能であり、かつ／又は患者から入手可能な試料中の１つ又は複数の癌特異的抗原の発現により検出可能であるものである。腫瘍は造血性（又は血液に関する（hematologic）（hematological）（blood-related））の癌、例えば血液細胞又は免疫細胞に由来する癌でよく、それらは「液性腫瘍」とも称される。血液腫瘍に基づく臨床状態の具体的な例としては、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病及び急性リンパ性白血病などの白血病；多発性骨髄腫、ＭＧＵＳ及びヴァルデンストレームマクログロブリン血症などの形質細胞悪性腫瘍；非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫などのリンパ腫などが挙げられる。
癌は、異常な数の芽細胞又は望ましくない細胞増殖が存在するか、又はリンパ性悪性疾患及び骨髄性悪性疾患の両方を含む血液癌と診断される任意の癌であり得る。骨髄性悪性疾患としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：急性骨髄性白血病（又は骨髄球性もしくは骨髄性もしくは骨髄芽球性）白血病（未分化もしくは分化）、急性前骨髄球性（又は前骨髄球性もしくは前骨髄性もしくは前骨髄芽球性）白血病、急性骨髄単球性（又は骨髄単芽球性）白血病、急性単球性（又は単芽球性）白血病、赤白血病及び巨核球性（又は巨核芽球性）白血病。これらの白血病は、併せて、急性骨髄性白血病（又は骨髄球性もしくは骨髄性）白血病（ＡＭＬ）と呼ばれ得る。骨髄性悪性腫瘍はまた、慢性骨髄性（又は骨髄性）白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、本態性血小板血症（又は血小板増加症）、及び真性赤血球増加症（ＰＣＶ）を含むがこれらに限定されない骨髄増殖性障害（ＭＰＤ）を含む。骨髄性悪性腫瘍はまた、難治性貧血（ＲＡ）、過剰芽球を伴う難治性貧血（ＲＡＥＢ）、及び形質転換中の過剰芽球を伴う難治性貧血（ＲＡＥＢＴ）と称され得る脊髄形成異常症（又は骨髄異形成症候群もしくはＭＤＳ）；ならびに原因不明の骨髄様化生を伴う又は伴わない骨髄線維症（ＭＦＳ）を含み得る。
造血器癌はまた、リンパ節、脾臓、骨髄、末梢血、及び／又は節外部位に影響を及ぼし得るリンパ系悪性腫瘍を含む。リンパ系癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ－ＮＨＬ）を含むが、これに限定されないＢ細胞悪性腫瘍を含む。Ｂ－ＮＨＬは、無痛性（又は低悪性度）、中悪性度（又は侵攻性）又は高悪性度（非常に侵攻性）であってもよい。無痛性Ｂ細胞リンパ腫には、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）；小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）；節ＭＺＬ、節外ＭＺＬ、脾臓ＭＺＬ及び絨毛リンパ球を有する脾臓ＭＺＬを含む辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ならびに粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ又は節外辺縁帯）リンパ腫が含まれる。中悪性度Ｂ－ＮＨＬには、白血病の関与を伴う又は伴わないマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性大細胞（又は悪性度３もしくは悪性度３Ｂ）リンパ腫、及び原発性縦隔リンパ腫（ＰＭＬ）が含まれる。高悪性度Ｂ－ＮＨＬには、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、バーキット様リンパ腫、小非切断型細胞リンパ腫（ＳＮＣＣＬ）及びリンパ芽球性リンパ腫が含まれる。他のＢ－ＮＨＬには、免疫芽球性リンパ腫（又は免疫細胞腫）、原発性滲出液リンパ腫、ＨＩＶ関連（又はＡＩＤＳ関連）リンパ腫、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）又はリンパ腫が含まれる。Ｂ細胞悪性腫瘍にはまた、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）白血病、急性リンパ性白血病（又はリンパ球もしくはリンパ芽球性白血病）、及びキャッスルマン病が含まれるが、これらに限定されない。ＮＨＬにはまた、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｔ－ＮＨＬ）が含まれてもよく、これには、限定されないが、他に特定されていない（ＮＯＳ）Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性リンパ系障害（ＡＩＬＤ）、鼻ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞／Ｔ細胞リンパ腫、ガンマ／デルタリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、及びセザリー症候群が含まれるが、これらに限定されない。
造血系癌には、古典的ホジキンリンパ腫、結節性硬化型ホジキンリンパ腫、混合細胞型ホジキンリンパ腫、リンパ球優位型（ＬＰ）ホジキンリンパ腫、結節性ＬＰホジキンリンパ腫、及びリンパ球枯渇型ホジキンリンパ腫を含むホジキンリンパ腫（又は疾患）も含まれる。造血系癌には、形質細胞疾患又は癌、例えば、くすぶり型ＭＭを含む多発性骨髄腫（ＭＭ）、意義不明（又は未知もしくは不明瞭）の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、形質細胞腫（骨、髄外）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、形質細胞白血病、及び原発性アミロイドーシス（ＡＬ）も含まれる。造血癌には、多形核白血球（又は好中球）、好塩基球、好酸球、樹状細胞、血小板、赤血球、及びナチュラルキラー細胞を含む、さらなる造血細胞の他の癌も含まれ得る。本明細書中で「造血細胞組織」と呼ばれる造血細胞を含む組織としては、骨髄；末梢血；胸腺；ならびに脾臓、リンパ節、粘膜に関連するリンパ組織（例えば、腸管関連リンパ組織）、扁桃、パイエル板及び虫垂などの末梢リンパ組織、ならびに他の粘膜に関連するリンパ組織（例えば、気管支内膜）が挙げられる。
一実施態様では、本発明の結合タンパク質によってされ得る癌は、固形腫瘍（例えば、再発性、転移性又は進行性固形腫瘍）を含み得る。そのような固形腫瘍の例としては、卵巣、肺（例えば、ＮＳＣＬＣ）、胃、膀胱、結腸直腸、肝臓（例えば、ＨＣＣ）、腎臓（例えば、ＲＣＣ）、ならびに頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）が挙げられる。
「治療的（therapeutic）」という用語は、本明細書で使用される場合、処置及び／又は予防を意味する。治療効果は、疾患状態の抑制、寛解、又は根絶によって得られる。
本明細書中で使用される場合、「治療有効量」又は「有効量」は、研究者、獣医、医師又は他の臨床医によって探求されている組織、系、又は対象の生物学的又は医学的応答を誘発するか、又は治療的もしくは予防的利益を提供する量を意味する。治療有効量及び治療レジメンは、一般に経験的に決定され、患者の年齢、体重及び健康状態ならびに治療される疾患又は障害などの因子に依存し得る。そのような因子は、主治医の範囲内である。
本明細書中で使用される場合、用語「処置すること」及びその文法的変形は、治療的治療を意味する。特定の状態に関して、処置するとは：（１）その状態の１つ以上の生物学的発現の状態を改善又は予防すること、（２）（ａ）その状態を導くか又はその状態の原因である生物学的カスケードにおける１つ以上の点、あるいは（ｂ）その状態の１つ以上の生物学的発現を妨害すること、（３）その状態又はその処置に関連する１つ以上の症状、効果又は副作用を緩和すること、（４）その状態又はその状態の１つ以上の生物学的発現の進行を遅らせること、及び／又は（５）その状態又はその状態の１つ以上の生物学的発現を、その発現についての寛解の状態であると考えられる期間にわたってさらなる処置なしに除去するか又は検出不可能なレベルまで減少させることによって治癒することを意味する。当業者は、特定の疾患又は状態について寛解と考えられる期間を理解する。予防的治療もまた、それによって企図される。当業者は、「予防」が絶対的な用語ではないことを理解するであろう。医学において、「予防」は、状態もしくはその生物学的発現の可能性もしくは重症度を実質的に減少させるため、又はそのような状態もしくはその生物学的発現の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を指すと理解される。予防的治療は、例えば、対象が癌を発症するリスクが高いと考えられる場合、例えば、対象が強い癌の家族歴を有する場合、又は対象が発癌物質に曝露されている場合に適切である。
「個体」、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用される。一実施態様において、対象は、霊長類、例えば、マーモセットもしくはサル、又はヒトなどの哺乳動物である。さらなる実施態様において、対象は、ヒトである。
対象に投与される抗原結合タンパク質の投与量は、一般に、対象の体重の１μｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５Ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、１～２５Ｍｇ／ｋｇ、約０．３Ｍｇ／ｋｇ～約３Ｍｇ／ｋｇ又は１～１０ｍｇ／ｋｇである。例えば、用量は、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、又は６０ｍｇ／ｋｇであり得る。用量はまた、１０ｍｇ／ｋｇ～１１０ｍｇ／ｍｇ、１５Ｍｇ／ｋｇ～２５Ｍｇ／ｋｇ、又は１５Ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇであり得る。抗原結合タンパク質は、例えば、非経口的、皮下、静脈内、又は筋肉内に投与され得る。用量はまた、対象当たり約２０ｍｇ～対象当たり約７５０ｍｇ、対象当たり約７５Ｍｇ～対象当たり約７５０ｍｇ、対象当たり約２０ｍｇ～対象当たり約２００ｍｇなどの対象当たりベースで投与され得る。用量は、これらの投与範囲を有する任意の個別の部分範囲であり得る。例えば、用量はまた、約１００ｍｇ／対象（例えば、４週間に１回）、又は３００ｍｇ／対象などの対象ベースで皮下投与されてもよい（又は投与される他の用量は、静脈内投与とほぼ同じ又は同等のバイオアベイラビリティが達成される場合、皮下に投与されてもよい、例えば、対象につき総用量で３００ｍｇの皮下投与を達成するために、対象につき１００ｍｇの用量を三回）。
本明細書に提供される範囲はいかなる類であれ、記載される特定の範囲内の全ての値、及び特定の範囲の終点についての値を含む。
所望に応じて、本開示の抗体又は抗原結合タンパク質の有効１日用量（例えば、医薬組成物として）は、１日を通して適切な間隔で別々に２、３、４、５、６回又はそれ以上の用量として、場合により単位投与形態で投与され得る。
用量の投与は、２～２４時間、例えば２～１２時間、又は２～６時間の期間にわたるゆっくりとした連続注入によるものであり得る。そのような投与は、副作用の低減をもたらし得る。
用量の投与は、必要に応じて１回又は複数回、例えば、１日３回、毎日１回、２日毎に１回、週１回、１４日毎に１回、月１回、３ヶ月毎に１回、４ヶ月毎に１回、６ヶ月毎に１回、又は１２ヶ月毎に１回繰り返すことができる。抗原結合タンパク質は、維持療法によって、例えば、６ヶ月以上の期間にわたって週１回投与されてもよい。抗原結合タンパク質は、断続的療法によって、例えば、３～６ヶ月の期間にわたって投与してもよく、次いで、３～６ヶ月間にわたって投与せず、その後、抗原結合タンパク質を再び３～６ヶ月間にわたって投与する、等のサイクルで投与してもよい。
例えば、用量は、１４又は２８日毎に１回、投与の各日に複数用量の形態で皮下投与されてもよい。一実施態様では、組成物の投与量は、４週間（２８日）毎に１回１００ｍｇである。
抗原結合タンパク質は、特定の部位に治療を標的化するような方法で対象に投与され得る。
本開示の方法におけるＣＤ９６結合タンパク質は、抗体、小分子阻害剤などの１つ以上の他の治療的に活性な薬剤と組み合わせて使用されるか、又は同時投与され得るか、又は細胞療法と組み合わせて使用され得る。本明細書で使用される「同時投与（co-administration）」という用語は、本明細書に記載されるＣＤ９６結合タンパク質と、化学療法及び放射線治療を含む癌の治療に有用であることが知られているさらなる活性薬剤（複数可）との同時投与又は任意の様式の別個の逐次投与のいずれかを意味する。本明細書で使用されるさらなる活性薬剤（複数可）という用語は、癌の治療を必要とする患者に投与された場合に有利な特性を示すことが知られている任意の化合物又は治療薬を含む。好ましくは、投与が同時でない場合、化合物は互いに時間的に近接して投与される。さらに、化合物が同じ投与形態で投与されるかどうかは問題ではなく、例えば、１つの化合物を注射によって投与し、別の化合物を経口投与してもよい。
典型的には、処置されている感受性腫瘍に対して活性を有する任意の抗新生物剤を本発明における癌の処置において同時投与してもよい。そのような薬剤の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita, T.S. Lawrence, and S.A. Rosenberg (editors), 10th edition (December 5, 2014), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出すことができる。当業者は、関与する薬物及び癌の特定の特徴に基づいて、薬剤のどの組み合わせが有用であるかを識別することができるであろう。本発明において有用な典型的な抗新生物剤としては、抗微小管剤又は抗有糸分裂剤；白金配位錯体；アルキル化剤；抗生物質；トポイソメラーゼＩ阻害剤；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；代謝拮抗物質；ホルモン及びホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体チロシンキナーゼ血管新生阻害剤；免疫療法剤；アポトーシス促進剤；細胞周期シグナル伝達阻害剤；プロテアソーム阻害剤；ヒートショックタンパク質阻害剤；癌代謝の阻害剤；ならびに癌遺伝子治療剤が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質と組み合わせて使用するか又は同時投与するためのさらなる活性成分の例は、抗新生物剤である。抗新生物剤の例としては、化学療法剤；免疫調節剤；免疫モジュレーター；及び免疫刺激性アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質はまた、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて使用されてもよい。そのような組み合わせは、ＣＤ１５５／ＣＤ２２６活性化をさらに増強し得る。抗ＴＩＧＩＴ抗体との組み合わせを使用して、腎腫瘍、例えば腎細胞癌（ＲＣＣ）などの固形腫瘍を処置することができる。そのような抗ＴＩＧＩＴ抗体の例はｔｉｒａｇｏｌｕｍａｂである。
抗微小管剤又は抗有糸分裂剤は、細胞周期のＭ期又は有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性な期特異的薬剤である。抗微小管剤の例としては、ジテルペノイド及びビンカアルカロイドが挙げられるが、これらに限定されない。
白金配位錯体は、ＤＮＡと相互作用する非期特異的抗癌剤である。白金錯体は、腫瘍細胞に入り、アクア化を受け、ＤＮＡと鎖内及び鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的効果を引き起こす。白金配位錯体の例としては、シスプラチン及びカルボプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。
アルキル化剤は、非期抗癌特異的薬剤及び強力な求電子剤である。典型的には、アルキル化剤は、アルキル化により、ホスフェート、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシル及びイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。そのようなアルキル化は、核酸機能を破壊して細胞死をもたらす。アルキル化剤の例としては、シクロホスファミド、メルファラン、及びクロラムブシルなどのナイトロジェン・マスタード；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；カルムスチンなどのニトロソ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられるが、これらに限定されない。
抗生物質抗新生物剤は、ＤＮＡと結合又はインターカレートする非期特異的薬剤である。この作用は、核酸の通常の機能を破壊し、細胞死をもたらす。抗生物質抗新生物剤の例としては、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシン及びドキソルビシンなどのアントラサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
トポイソメラーゼＩ阻害剤としては、カンプトテシンが挙げられるが、これらに限定されない。カンプトテシンの細胞毒性活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、エピポドフィロトキシンが挙げられるが、これらに限定されない。エピポドフィロトキシンは、マンドレーク植物に由来する期特異的抗新生物剤である。エピポドフィロトキシンは、典型的には、トポイソメラーゼＩＩ及びＤＮＡと三元複合体を形成してＤＮＡ鎖切断を引き起こすことにより、細胞周期のＳ期及びＧ２期の細胞に影響を及ぼす。鎖切断は蓄積し、細胞死が続く。エピポドフィロトキシンの例としては、エトポシド及びテニポシドが挙げられるが、これらに限定されない。
代謝拮抗新生物剤は、細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）において、ＤＮＡ合成を阻害することによって、又はプリンもしくはピリミジン塩基合成を阻害し、それによってＤＮＡ合成を制限することによって作用する期特異的抗新生物剤である。その結果、Ｓ期は進行せず、細胞死が続く。代謝拮抗性抗新生物剤の例としては、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン及びゲムシタビンが挙げられるが、これらに限定されない。
ホルモン及びホルモン類似体は、ホルモン（複数可）と癌の成長及び／又は成長の欠如との間に関係がある癌を治療するのに有用な化合物である。癌治療に有用なホルモン及びホルモン類似体の例としては、限定されないが、副腎皮質ステロイド、例えばプレドニゾン及びプレドニゾロン；アミノグルテチミド及び他のアロマターゼ阻害剤、例えばアナストロゾール、レトラゾール、ボトラゾール及びエクセメスタン；プロゲステロン（progestrins）、例えば酢酸メゲストロール；エストロゲン、アンドロゲン及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン及び５α－レダクターゼ、例えばフィナステライド及びデュタステリド；抗エストロゲン剤、例えばタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、ならびに選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）；ならびにゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）及びその類似体（黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び／又は卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激する）、ＬＨＲＨアゴニスト、ならびにアンタゴニスト、例えば酢酸ゴセレリン及びロイプロリドが挙げられる。
シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学プロセスを遮断又は阻害する阻害剤である。本明細書で使用される場合、この変化は、細胞増殖又は分化である。本発明において有用なシグナル伝達阻害剤としては、受容体チロシンキナーゼ、非受容体チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメインブロッカー、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール－３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達、及びＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する様々なタンパク質中の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。そのようなタンパク質チロシンキナーゼは、受容体又は非受容体キナーゼとして広く分類することができる。
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン及びチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体チロシンキナーゼは、細胞成長の調節に関与し、一般に成長因子受容体と呼ばれる。例えば、過剰発現又は突然変異による、これらのキナーゼの多くの不適切又は制御されない活性化、すなわち、異常なキナーゼ成長因子受容体活性は、制御されない細胞成長をもたらすことが示されている。したがって、そのようなキナーゼの異常な活性は、悪性組織成長に関連付けられている。結果的に、そのようなキナーゼの阻害剤は、癌治療方法を提供することができる。成長因子受容体としては、例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、免疫グロブリン様及び上皮成長因子相同ドメインを有するチロシンキナーゼ（ＴＩＥ－２）、インスリン成長因子－Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（Ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、及びＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体、ならびにＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。成長受容体のいくつかの阻害剤が開発中であり、リガンドアンタゴニスト、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤及びアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。成長因子受容体及び成長因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath J.C., Exp. Opin. Ther. Patents, 10(6):803-818 (2000); Shawver L.K., et al., Drug Discov. Today, 2(2): 50-63 (1997); 及びLofts, F. J. and Gullick W.J., “Growth factor receptors as targets.” in New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Kerr D.J. and Workman P. (editors), (June 27, 1994), CRC Pressに記載されている。増殖因子受容体阻害剤の非限定的な例としては、パゾパニブ及びソラフェニブが挙げられる。
増殖因子受容体キナーゼではないチロシンキナーゼは、非受容体チロシンキナーゼと呼ばれる。抗癌剤の標的又は潜在的な標的である、本発明において有用な非受容体チロシンキナーゼとしては、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（焦点接着キナーゼ）、ブルトンチロシンキナーゼ、及びＢｃｒ－Ａｂｌが挙げられる。そのような非受容体キナーゼ及び非受容体チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinha S. and Corey S.J., J. Hematother. Stem Cell Res., 8(5): 465-480 (2004)及びBolen, J.B., Brugge, J.S., Annu. Rev. Immunol., 15: 371-404 (1997)に記載されている。
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断薬は、ＰＩ３－Ｋｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）及びＲａｓ－ＧＡＰを含む様々な酵素又はアダプタータンパク質におけるＳＨ２又はＳＨ３ドメイン結合を破壊する薬剤である。抗癌剤の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall T.E., J. Pharmacol. Toxicol. Methods, 34(3): 125-32 (1995)において議論されている。
セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤としては、限定されるものではないが、Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェン又は細胞外調節キナーゼ（ＭＥＫｓ）、及び細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫｓ）のブロッカーを含むＭＡＰキナーゼカスケードブロッカー；ＰＫＣｓ（アルファ、ベータ、ガンマ、イプシロン、ミュー、ラムダ、イオタ、ゼータ）のブロッカーを含むプロテインキナーゼＣファミリーメンバーブロッカー；ＩｋＢキナーゼ（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）；ＰＫＢファミリーキナーゼ；ＡＫＴキナーゼファミリーメンバー；ＴＧＦベータ受容体キナーゼ；ならびにラパマイシン（ＦＫ５０６）及びラパログ、ＲＡＤ００１又はエベロリムス（ＡＦＩＮＩＴＯＲ（商標））、ＣＣＩ－７７９又はテムシロリムスを含むがこれらに限定されないラパマイシン（ｍＴＯＲ）阻害剤の哺乳動物標的、ＡＰ２３５７３、ＡＺＤ８０５５、ＷＹＥ－３５４、ＷＹＥ－６００、ＷＹＥ－６８７及びＰｐ１２１が挙げられる。セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤の例としては、トラメチニブ、ダブラフェニブ、ならびにＡｋｔ阻害剤アフレセルチブ及びＮ－｛（１Ｓ）－２－アミノ－１－［（３，４－ジフルオロフェニル）メチル］エチル｝－５－クロロ－４－（４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－フランカルボキサミドが挙げられるが、これらに限定されない。
ホスファチジルイノシトール３－キナーゼファミリーメンバーの阻害剤（ＰＩ３－キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ－ＰＫ、及びＫｕのブロッカーを含む）もまた、本発明において有用である。そのようなキナーゼは、Abraham R.T., Curr. Opin. Immunol., 8(3): 412-418 (1996); Canman C.E., and Lim D.S., Oncogene, 17(25): 3301-3308 (1998); Jackson S.P., Int. J. Biochem. Cell Biol., 29(7): 935-938 (1997);及び Zhong H., et al., Cancer Res., 60(6): 1541-1545 (2000)を参照されたい。
ホスホリパーゼＣブロッカー及びミオイノシトール類似体などのミオイノシトールシグナル伝達阻害剤も本発明において有用である。そのようなシグナル阻害剤は、Powis G., and Kozikowski A., “Inhibitors of Myo-Inositol Signaling.” in New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Kerr D.J. and Workman P. (editors), (June 27, 1994), CRC Pressに記載されている。
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。そのような阻害剤としては、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニル－ゲラニルトランスフェラーゼ及びＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び他の免疫療法が挙げられる。このような阻害剤は、野生型変異体ｒａｓを含有する細胞においてｒａｓ活性化をブロックし、それによって抗増殖剤として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子阻害は、Scharovsky O.G., et al., J. Biomed. Sci., 7(4): 292-298 (2000); Ashby M.N., Curr. Opin. Lipidol., 9(2): 99-102 (1998); 及びBennett C.F. and Cowsert L.M., Biochem. Biophys. Acta., 1489(1): 19-30 (1999)にて論じられている。
受容体キナーゼリガンド結合に対するアンタゴニストはまた、シグナル伝達阻害剤として作用し得る。シグナル伝達経路阻害剤のこの群は、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体又は他のアンタゴニストの使用を含む。受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体又は他のアンタゴニストの例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））；トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標））；ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（商標））；ラパチニブ、エルロチニブ、及びゲフィチニブを含むＥｒｂＢ阻害剤；ならびに２Ｃ３ ＶＥＧＦＲ２特異的抗体（Brekken R.A., et al., Cancer Res., 60(18): 5117-5124 (2000)を参照のこと）。
非受容体キナーゼ血管形成阻害剤もまた、本発明において使用され得る。血管形成関連ＶＥＧＦＲ及びＴＩＥ２の阻害剤は、シグナル伝達阻害剤に関して上記で考察されている（両方の受容体は受容体チロシンキナーゼである）。ｅｒｂＢ２及びＥＧＦＲの阻害剤は血管形成、主にＶＥＧＦ発現を阻害することが示されているので、血管形成は一般にｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達に関連する。したがって、非受容体チロシンキナーゼ阻害剤を本発明のＥＧＦＲ／ｅｒｂＢ２阻害剤と組み合わせて使用してもよい。例えば、ＶＥＧＦＲ（受容体チロシンキナーゼ）を認識しないがリガンドに結合する抗ＶＥＧＦ抗体；血管新生を阻害するインテグリン（アルファベータ３）の小分子阻害剤；エンドスタチン及びアンジオスタチン（非ＲＴＫ）もまた、開示される化合物と組み合わせて有用であることが判明し得る。（Bruns C.J., et al., Cancer Res., 60(11): 2926-2935 (2000); Schreiber A.B., et al., Science, 232(4755): 1250-1253 (1986); Yen L., et al., Oncogene, 19(31): 3460-3469 (2000)を参照のこと）。
免疫療法レジメンにおいて使用される薬剤もまた、本発明と組み合わせて有用であり得る。ｅｒｂＢ２又はＥＧＦＲに対する免疫応答を生成するための多くの免疫学的戦略が存在する。これらの戦略は、一般的に腫瘍ワクチン接種の領域にある。免疫学的アプローチの有効性は、小分子阻害剤を使用したｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達経路の複合阻害によって大幅に増強され得る。ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲに対する免疫学的／腫瘍ワクチンアプローチの考察は、Reilly R.T., et al., Cancer Res., 60(13): 3569-3576 (2000);及びChen Y., et al., Cancer Res., 58(9): 1965-1971 (1998)に見出される。
アポトーシス促進性レジメンにおいて使用される薬剤（例えば、Ｂｃｌ－２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組み合わせにおいて使用され得る。タンパク質のＢｃｌ－２ファミリーのメンバーは、アポトーシスをブロックする。したがって、Ｂｃｌ－２の上方調節は、化学療法抵抗性に関連付けられている。研究では、上皮増殖因子（ＥＧＦ）がＢｃｌ－２ファミリーの抗アポトーシスメンバー（すなわち、Ｍｃｌ－１）を刺激することが示されている。したがって、腫瘍におけるＢｃｌ－２の発現を下方調節するように設計された戦略は、臨床的有益性を実証している。Ｂｃｌ－２のためのアンチセンスオリゴヌクレオチド戦略を使用するそのようなアポトーシス促進戦略は、Waters J.S., et al., J. Clin. Oncol., 18(9): 1812-1823 (2000);及びKitada S., et al., Antisense Res. Dev., 4(2): 71-79 (1994)において論じられている。
細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるプロテインキナーゼのファミリー、及びサイクリンと呼ばれるタンパク質のファミリーとのそれらの相互作用は、真核細胞周期の進行を制御する。異なるサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調的な活性化及び不活性化は、細胞周期の正常な進行に必要である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発中である。例えば、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、及びＣＤＫ６を含む）及びその阻害剤の例は、例えば、Rosania G.R., and Chang Y.T., Exp. Opin. Ther. Patents, 10(2): 215-230 (2000)に記載されている。さらに、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１は、サイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋｓ）の強力かつ普遍的な阻害剤として記載されている（Ball K.L., Prog. Cell Cycle Res., 3: 125-134 (1997)）。ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１の発現を誘導することが知られている化合物は、細胞増殖の抑制に関与し、腫瘍抑制活性を有するとされており（Richon V.M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(18): 10014-10019 (2000)）、細胞周期シグナル伝達阻害剤として含まれる。ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤は、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１の転写活性化に関与し（Vigushin D.M., and Coombes R.C., Anticancer Drugs, 13(1): 1-13 (2002)）、本明細書において組み合わせて使用するのに適した細胞周期シグナル伝達阻害剤である。そのようなＨＤＡＣ阻害剤の例としては、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、及びモセチノスタットが挙げられるが、これらに限定されない。
プロテアソーム阻害剤は、ｐ５３タンパク質のようなタンパク質を分解する細胞複合体であるプロテアソームの作用を遮断する薬物である。いくつかのプロテアソーム阻害剤が市販されているか、又は癌の治療のために研究されている。本明細書において組み合わせて使用するための好適なプロテアソーム阻害剤としては、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、及びカーフィルゾミブが挙げられるが、これらに限定されない。
７０キロダルトンのヒートショックタンパク質（Ｈｓｐ７０）及び９０キロダルトンのヒートショックタンパク質（Ｈｓｐ９０）は、遍在的に発現されるヒートショックタンパク質のファミリーである。Ｈｓｐ７０及びＨｓｐ９０は、特定の癌型で過剰発現される。いくつかのＨｓｐ７０及びＨｓｐ９０阻害剤が、癌の治療において研究されている。本明細書において組み合わせて使用するためのＨｓｐ７０及びＨｓｐ９０阻害剤の例としては、タネスピマイシン及びラディシコールが挙げられるが、これらに限定されない。
多くの腫瘍細胞は、正常組織とは著しく異なる代謝を示す。例えば、グルコースをピルビン酸に変換する代謝プロセスである解糖の速度が増加し、生成されたピルビン酸は、トリカルボン酸（ＴＣＡ）サイクルを介してミトコンドリア中でさらに酸化されるのではなく、乳酸に還元される。この効果は、好気性条件下でもしばしば見られ、ワールブルグ効果として知られている。
筋肉細胞において発現される乳酸デヒドロゲナーゼのアイソフォームである乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ－Ａ）は、ピルビン酸から乳酸への還元を行うことによって腫瘍細胞代謝において極めて重要な役割を果たし、その後、乳酸は細胞から外に輸送され得る。この酵素は、多くの腫瘍型において上方制御されることが示されている。Ｗａｒｂｕｒｇ効果に記載されるグルコース代謝の変化は、がん細胞の成長及び増殖に重要であり、ＲＮＡ－ｉを使用したＬＤＨ－Ａのノックダウンは、異種移植片モデルにおける細胞増殖及び腫瘍成長の低減をもたらすことが示されている（Tennant D.A., et al., Nat. Rev. Cancer, 10(4): 267-277 (2010); Fantin V.R., et al., Cancer Cell, 9(6): 425-434 (2006)）。
高レベルの脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）が、癌前駆病変において見出されている。ＦＡＳの薬理学的阻害は、癌の発生及び維持の両方に関与する重要な癌遺伝子の発現に影響を及ぼす。Alli P.M., et al., Oncogene, 24(1): 39-46 (2005)。
ＬＤＨ－Ａの阻害剤及び脂肪酸生合成の阻害剤（又はＦＡＳ阻害剤）を含む癌代謝の阻害剤は、本明細書において組み合わせて使用するのに好適である。
癌遺伝子治療は、ウイルス又は非ウイルス遺伝子送達ベクターを使用する組換えＤＮＡ／ＲＮＡの選択的移入をして治療を目的に癌細胞を改変することを含む。癌遺伝子治療の例としては、自殺遺伝子治療及び腫瘍溶解性遺伝子治療、ならびに養子Ｔ細胞治療が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用される場合、「免疫調節因子」とは、免疫系に影響を及ぼすモノクローナル抗体を含む任意の物質をいう。本発明のＣＤ９６結合タンパク質は、免疫調節因子と考えられ得る。免疫調節因子は、癌の処置のための抗新生物剤として使用され得る。例えば、免疫調節因子としては、ＣＴＬＡ－４に対する抗体又は他のアンタゴニスト（例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（商標））及びＰＤ－１（例えば、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標））及びセミプリマブ（ＬＩＢＴＡＹＯ（商標））が挙げられるが、これらに限定されない。他の免疫調節因子としては、ＰＤ－Ｌ１、ＯＸ－４０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、４１ＢＢ、及びＧＩＴＲに対する抗体又は他のアンタゴニストが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ＰＤ－１アンタゴニスト」は、癌細胞上で発現されるＰＤ－Ｌ１の、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞又はＮＫＴ細胞）上で発現されるＰＤ－１への結合を遮断し、好ましくは癌細胞上で発現されるＰＤ－Ｌ２の免疫細胞発現ＰＤ－１への結合も遮断する任意の化学化合物又は生物学的分子を意味する。ＰＤ－１及びそのリガンドの別名又は同義語には、ＰＤ－１についてＰＤＣＤ１、ＰＤ１、ＣＤ２７９及びＳＬＥＢ２；ＰＤ－Ｌ１についてＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＬ１、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７－４、ＣＤ２７４及びＢ７－Ｈ；ならびにＰＤ－Ｌ２についてＰＤＣＤ１Ｌ２、ＰＤＬ２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂｔｄｃ及びＣＤ２７３が含まれる。ヒトＰＤ－１アミノ酸配列は、ＮＣＢＩ遺伝子座番号：ＮＰ＿００５００９に見出すことができる。ヒトＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２アミノ酸配列は、それぞれ、ＮＣＢＩ遺伝子座番号：ＮＰ＿０５４８６２及びＮＰ＿０７９５１５に見出すことができる。
本発明の態様のいずれかにおいて有用なＰＤ－１アンタゴニストとしては、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、好ましくはヒトＰＤ－１又はヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）又はその抗原結合断片が挙げられる。ｍＡｂは、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体であってもよく、ヒト定常領域を含んでもよい。いくつかの実施態様において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４定常領域からなる群より選択され、好ましい態様において、ヒト定常領域はＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域である。いくつかの実施態様において、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ及びＦｖ断片からなる群より選択される。
ヒトＰＤ－１に結合し、本発明の様々な態様及び実施態様において有用なｍＡｂの例は、米国特許第８５５２１５４号；米国特許第８３５４５０９号；米国特許第８１６８７５７号；米国特許第８００８４４９号；米国特許第７５２１０５１号；米国特許第７４８８８０２号；国際公開第２００４０７２２８６号；国際公開第２００４０５６８７５号；及び国際公開第２００４００４７７１号に記載される。
本発明の態様及び実施態様のいずれかにおいて有用な他のＰＤ－１アンタゴニストとしては、ＰＤ－１に特異的に結合し、好ましくはヒトＰＤ－１に特異的に結合するイムノアドヘシン（immunoadhesin）、例えば、免疫グロブリン分子のＦｃ領域などの定常領域に融合されたＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の細胞外又はＰＤ－１結合部分を含有する融合タンパク質が挙げられる。ＰＤ－１に特異的に結合するイムノアドヘシン分子の例は、国際公開第２０１００２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１０６６３４２号パンフレットに記載されている。本発明の治療方法、医薬及び使用においてＰＤ－１アンタゴニストとして有用な特定の融合タンパク質としては、ＰＤ－Ｌ２－ＦＣ融合タンパク質であり、ヒトＰＤ－１に結合するＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られる）が挙げられる。
ニボルマブは、ＯＰＤＩＶＯ（商標）として市販されているヒト化モノクローナル抗ＰＤ１抗体である。ニボルマブは、いくつかの切除不能又は転移性黒色腫の処置に適応される。ニボルマブは、Ｉｇスーパーファミリー膜貫通タンパク質であるＰＤ－１に結合し、そのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２によるその活性化を遮断し、Ｔ細胞の活性化及び腫瘍細胞又は病原体に対する細胞媒介性免疫応答をもたらす。活性化されたＰＤ－１は、Ｐ１３ｋ／Ａｋｔ経路活性化の抑制を介してＴ細胞活性化及びエフェクター機能を負に調節する。ニボルマブの他の名称には、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６及びＯＮＯ－４５３８が含まれる。ニボルマブのアミノ酸配列ならびに使用及び作製方法は、米国特許第ＵＳ８００８４４９号に開示されている。
ペムブロリズマブは、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標）として市販されているヒト化モノクローナル抗ＰＤ１抗体である。ペムブロリズマブは、いくつかの切除不能又は転移性黒色腫の治療に適応される。ペムブロリズマブのアミノ酸配列及び使用方法は、米国特許第８１６８７５７号に開示されている。
一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、以下のＣＤＲいずれか１つ又は組み合わせを含む：
ＣＤＲＨ１：ＳＹＤＭＳ（配列番号１５１）。
ＣＤＲＨ２：ＴＩＳＧＧＧＳＹＴＹＹＱＤＳＶＫＧ（配列番号１５２）。
ＣＤＲＨ３：ＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号１５３）。
ＣＤＲＬ１：ＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡ（配列番号１５４）
ＣＤＲＬ２：ＷＡＳＴＬＨＴ（配列番号１５５）
ＣＤＲＬ３：ＱＨＹＳＳＹＰＷＴ（配列番号１５６）
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５１に記載されるアミノ酸配列に対して１つ又は２つのアミノ酸変異（複数可）（「ＣＤＲ変異体」）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＨ１」）を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５２に記載されるアミノ酸配列に対して５つ又はそれ未満、例えば４つ又はそれ未満、３つ又はそれ未満、２つ又はそれ未満、又は１つのアミノ酸変異（複数可）（「ＣＤＲ変異体」）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＨ２」）を含む。さらなる実施態様において、ＣＤＲＨ２は、配列番号１５２に記載されるアミノ酸に対して１又は２のアミノ酸変異（複数可）を有するアミノ酸を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５３に記載されるアミノ酸配列に対して１つ又は２つのアミノ酸変異（複数可）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＨ３」）（「ＣＤＲ変異体」）を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５４に記載されるアミノ酸に対して１又は２のアミノ酸変異（複数可）を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＬ１」）（「ＣＤＲ変異体」）を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５５に記載されるアミノ酸配列に対して１つ又は２つのアミノ酸変異（複数可）を有するアミノ酸を配列含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＬ２」）（「ＣＤＲ変異体」）を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５６に記載されるアミノ酸配列に対して３つ又はそれ未満、例えば１つ又は２つのアミノ酸変異（複数可）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＬ３」）（「ＣＤＲ変異体」）を含む。特定の実施態様において、ＣＤＲＬ３は、配列番号１５６に記載されるアミノ酸配列に対して１のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施態様において、変異体ＣＤＲＬ３は、配列番号１５７に記載されるアミノ酸配列を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５１に記載されるアミノ酸配列に対して１つのアミノ酸変異（複数可）を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１；配列番号１５２に記載されるアミノ酸配列に対して最大５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２；配列番号１５３に記載されるアミノ酸配列に対して最大１つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３；配列番号１５４に記載されるアミノ酸配列に対して最大３つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１；配列番号１５５に記載されるアミノ酸配列に対して最大１つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２；及び／又は配列番号１５６に記載されるアミノ酸配列に対して最大３つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
本発明の一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域にＣＤＲＨ１（配列番号１５１）、ＣＤＲＨ２（配列番号１５１）、及びＣＤＲＨ３（配列番号１５３）を含む。いくつかの実施態様において、本発明の抗ＰＤ１抗体は、配列番号１５８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。好適には、本発明のＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８に対して約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％配列同一性を有する重鎖可変領域を含み得る。
ＰＤ－１アンタゴニスト重鎖（ＶＨ）可変領域：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＳＧＧＧＳＹＴＹＹＱＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１５８）
一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）を含む。一実施態様では、ＶＨは、配列番号１５８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異、例えば、１～５つ、例えば、１～３つ、特に最大２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。
本発明の一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５９に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域中にＣＤＲＬ１（配列番号１５４）、ＣＤＲＬ２（配列番号１５５）及びＣＤＲＬ３（配列番号１５６）を含む。一実施態様において、本発明のＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８の重鎖可変領域及び配列番号１５９の軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、本発明のＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。好適には、本発明のＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５９に対して約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含み得る。
ＰＤ－１アンタゴニスト軽鎖（ＶＬ）可変領域：
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＹＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＳＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１５９）
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（「ＶＬ）を含む。一実施態様において、ＶＬは、配列番号１５９に記載のアミノ酸配列に対して１～５つ、１～３つなど、特に最大２つのアミノ酸変異など、配列番号１５９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；及び配列番号１５９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一のＶＨ及び／又は配列番号１５９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一のＶＬを含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１５８に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号１５９に記載されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む。
一実施態様において、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１６０に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含むモノクローナル抗体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＴＩＳＧＧＧＳＹＴＹＹＱＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＰＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１６０）
一実施態様では、ＨＣは、配列番号１６０に示されるアミノ酸配列に対して１～１０個、例えば１～７個、特に最大６個のアミノ酸変異など、配列番号１６０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施態様では、ＨＣは、配列番号１６０に示されるアミノ酸配列に対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又は７つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。
一実施態様では、ＨＣ鎖は、配列番号１６０の位置３８０及び／又は３８５に変異を有する。これらの位置のアスパラギン残基は、例えば脱アミド化（アスパラギン（Ｎ）残基のアスパラギン酸（Ｄ）残基への変換）によって修飾されてもよい。したがって、一実施態様では、ＨＣは、配列番号１６２（Ｎ３８０Ｄ）、配列番号１６３（Ｎ３８５Ｄ）又は配列番号１６４（Ｎ３８０Ｄ及びＮ３８５Ｄ）のアミノ酸配列を含む。
一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１６１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列を含むモノクローナル抗体である。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＹＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＳＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１６１）
一実施態様では、ＬＣは、配列番号１６１に記載のアミノ酸配列に対して１～１０個、例えば１～５個、特に最大３個のアミノ酸変異など、配列番号１６１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも１個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。さらなる実施態様では、ＬＣは、配列番号１６１に記載のアミノ酸配列に対して１個、２個又は３個のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。
一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１６０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号１６１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣとを含む。したがって、抗体は、配列番号１６０の重鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である重鎖及び／又は配列番号１６１の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である軽鎖を有する抗体である。
一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１６０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号１６１のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である軽鎖アミノ酸配列を含む。
一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１６０の重鎖配列及び配列番号１６１の軽鎖配列を含む。一実施態様では、ＰＤ－１アンタゴニストは、配列番号１６０の重鎖配列及び配列番号１６２の軽鎖配列を含むｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂである。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びそれを作製する方法は、当技術分野で公知である。ＰＤ－Ｌ１に対するかかる抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、及び／又は組換え、及び／又はヒト化であり得る。ＰＤ－Ｌ１抗体は、癌の処置のための免疫調節剤として開発中である。
例示的なＰＤ－Ｌ１抗体は、米国特許第９２１２２２４号；米国特許第８７７９１０８号；米国特許第８５５２１５４号；米国特許第８３８３７９６号；米国特許第８２１７１４９号；米国特許出願公開第２０１１０２８０８７７号；国際公開第２０１３０７９１７４号；及び国際公開第２０１３０１９９０６号に開示されている。ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４又はＢ７－Ｈ１とも呼ばれる）に対するさらなる例示的な抗体及び使用方法は、米国特許第８１６８１７９号；米国特許第７９４３７４３号；米国特許第７５９５０４８号；国際公開第２０１４０５５８９７号；国際公開第２０１３０１９９０６号；及び国際公開第２０１００７７６３４号に開示されている。本発明の処置方法、医薬及び使用においてＰＤ－１アンタゴニストとして有用な特異的抗ヒトＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体には、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃが含まれる。
アテゾリズマブは、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）として市販されている完全ヒト化モノクローナル抗ＰＤ－Ｌ １抗体である。アテゾリズマブは、いくつかの局所的に進行した又は転移性の尿路上皮癌の治療に適応される。アテゾリズマブは、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１及びＣＤ８０との相互作用を遮断する。他の例示的なＰＤ－Ｌ１抗体としては、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））が挙げられる。
ＯＸ４０としても知られるＣＤ１３４は、ＣＤ２８とは異なり、休止中のナイーブＴ細胞上で構成的に発現されない受容体のＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーである。ＯＸ４０は、活性化後２４～７２時間後に発現される二次共刺激分子であり、そのリガンドであるＯＸ４０Ｌもまた、休止中の抗原提示細胞上で発現されないが、それらの活性化に続く。ＯＸ４０の発現は、Ｔ細胞の完全な活性化に依存し；ＣＤ２８なしでは、ＯＸ４０の発現は遅延し、４分の１のレベルである。ＯＸ－４０抗体、ＯＸ－４０融合タンパク質及びそれらを使用する方法は、米国特許第７５０４１０１号；同第７７５８８５２号；同第７８５８７６５号；同第７５５０１４０号；同第７９６０５１５号；国際公開第２０１２０２７３２８号；国際公開第２０１３０２８２３１号に開示されている。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質と組み合わせて使用するか又は同時投与するためのさらなる活性成分（抗新生物剤）のさらなる例は、ＣＤ２０に対する抗体もしくは他のアンタゴニスト、レチノイド、又は他のキナーゼ阻害剤である。このような抗体又はアンタゴニストの例としては、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）及びＭＡＢＴＨＥＲＡ（商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（商標））、及びベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（商標））が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質と組み合わせて使用するか又は同時投与されるさらなる活性成分（抗新生物剤）のさらなる例は、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アンタゴニストであり、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）が挙げられるが、これに限定されない。
ＡＧＰは、免疫された動物においてサイトカイン産生を刺激し、マクロファージを活性化し、自然免疫応答を促進し、抗体産生を増強するためのワクチンアジュバント及び免疫刺激剤として有用であることが公知である。ＡＧＰは、ＴＬＲ４の合成リガンドである。ＡＧＰ及びＴＬＲ４を介したそれらの免疫調節効果は、国際公開第２００６０１６９９７号、国際公開第２００１０９０１２９号、及び／又は米国特許第６１１３９１８号などの特許公報に開示されており、文献に報告されている。さらなるＡＧＰ誘導体は、米国特許第７１２９２１９号、米国特許第６９１１４３４号、及び米国特許第６５２５０２８号に開示されている。ある種のＡＧＰはＴＬＲ４のアゴニストとして作用するが、他のものはＴＬＲ４アンタゴニストとして認識されている。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質と組み合わせて使用するか又は同時投与するためのさらなる活性成分（抗新生物剤）のさらなる非限定的な例は、ＩＣＯＳに対する抗体である。
アゴニスト活性を有するヒトＩＣＯＳに対するマウス抗体のＣＤＲは、ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５５７３５（国際公開第２０１２１３１００４号）に示されている。ＩＣＯＳに対する抗体はまた、国際公開第２００８１３７９１５号、国際公開第２０１００５６８０４号、欧州特許第１３７４９０２号、欧州特許第１３７４９０１号及び欧州特許第１１２５５８５号に開示されている。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質と組み合わせて使用するか、又は同時投与するためのさらなる活性成分（抗新生物剤）のさらなる例は、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤である。そのような阻害剤の 非限定的な例としては、ニラパリブ、オラパリブ、ルカパリブ、及びタラゾパリブが挙げられる。
本開示のＣＤ９６結合タンパク質と組み合わせて使用する又は同時投与するためのさらなる活性成分（抗新生物剤）のさらなる非限定的な例は、ＳＴＩＮＧ調節化合物、ＣＤ３９阻害剤、ならびにＡ２ａ及びＡ２ａアデノシンアンタゴニストである。
ＣＤ９６結合タンパク質又はその薬学的に受容可能な塩と組み合わせて使用され得る選択された抗新生物剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アバレリクス、アベマシクリブ、アビラテロン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルドキソルビシン、アレクチニブ、アレムツズマブ、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、ＡＺＤ－９２９１、ベリノスタット、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ブリナツモマブ、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カペシタビン、セリチニブ、クロファラビン、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダラツムマブ、ダサチニブ、デガレリクス、デノスマブ、ディヌツキシマブ、ドセタキセル、エロツヅマブ、エンチノスタット、エンザルタミド、エピルビシン、エリブリン、フィルグラスチム、フルマチニブ、フルベストラント、フルキニチニブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イブリツモマブ、イブルチニブ、イデラリシブ、イマチニブ、イリノテカン、イキサベピロン、イキサゾミブ、レナリドマイド、レンバチニブ、レウコボリン、メクロレタミン、ネシツムマブ、ネララビン、ネツピタント、ニロチニブ、オビヌツヅマブ、オラパリブ、オマセタキシン、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パロノセトロン、パニツムマブ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ－２ｂ、ペメトレキセド、ペリキサホル、ポマリドミド、ポナチニブ、プララトレキサート、キザルチニブ、ラジウム－２２３、ラムシルマブ、レゴラフェニブ、ロラピタント、ルカパリブ、シプロイセル－Ｔ、ソニデギブ、スニチニブ、タリモジンラヘルパレプベク、チピラシル、トポテカン、トラベクテジン、トリフルリジン、トリプトレリン、ウリジン、バンデタニブ、ベラパリブ、ベムラフェニブ、ベネトクラクス、ビンクリスチン、ビスモデギブ及びゾレドロン酸。
処置は、治療的、予防的又は防止的であり得る。対象は、それを必要とするものである。処置を必要とするものは、将来疾患を発症し得るものに加えて、特定の医学的疾患に既に罹患している個体を含み得る。
したがって、本明細書に記載される本開示の方法、抗原結合タンパク質及び組成物は、特定される場合、予防的処置又は防止的処置のために使用され得る。この場合、本開示の方法、抗原結合タンパク質及び組成物は、疾患の１つ又は複数の局面又は症状の発症を予防又は遅延させるために使用され得る。対象は無症候性であり得る。対象は、疾患に対する遺伝的素因を有し得る。予防有効量の抗原結合タンパク質が、そのような個体に投与される。予防有効量は、本明細書に記載される疾患の１つ又は複数の態様又は症状の発症を予防又は遅延させる量である。
本開示の方法、抗原結合タンパク質及び組成物は、完全な治癒に影響を及ぼす必要はなく、又は疾患のあらゆる症状もしくは発現を根絶して、実行可能な治療的処置を構成する必要はない。当技術分野で認識されているように、治療方法において治療剤として使用される薬物は、所与の疾患状態の重症度を低減することができるが、有用な治療剤と見なされる疾患のあらゆる発現を消失させる必要はない。同様に、予防的に投与される処置は、実行可能な予防剤を構成するために疾患の発症を予防するのに完全に有効である必要はない。対象において、単に疾患の影響を低減すること（例えば、その症状の数もしくは重症度を低減することによって、又は別の処置の有効性を増加させることによって、又は別の有益な効果をもたらすことによって）、又は疾患が生じるか悪化する可能性（例えば、疾患の発症を遅延させる事によって）低減させることで十分である
本開示の別の態様は、それを必要とする対象における疾患の治療方法であって、その対象に、先行する態様のいずれか１つに記載の治療有効量のＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物を投与することを含む、方法である。本開示のさらなる態様は、対象がＣＤ９６を発現するかどうかをさらに含む、先行する態様に記載の治療方法である。
本開示の別の態様は、疾患の療法又は治療において使用するための、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物である。
本開示の別の態様は、疾患の治療において使用するための医薬の製造における、先行する態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物の使用である。
本開示の別の態様は、先行する態様のいずれか１つに記載の治療有効量のＣＤ９６結合タンパク質を含む医薬組成物である。
本開示の一実施態様は、それを必要とする対象（ヒト対象など）に先行する態様のいずれか１つに記載の治療有効量のＣＤ９６結合タンパク質又は先行する態様のいずれか１つに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象（ヒト対象など）における疾患を治療するための方法である。
本開示の一実施態様は、それを必要とする対象（ヒト対象など）に先行する態様のいずれか１つに記載の治療有効量のＣＤ９６結合タンパク質又は先行する態様のいずれか１つに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における疾患を治療するための方法である。本開示の更なる実施態様は、その対象がＣＤ９６結合タンパク質を発現するか否か決定することをさらに含む、それを必要とする対象における疾患を治療するための方法である。本開示の更なる実施態様は、療法において使用するための、先行する実施態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物である。本開示の更なる実施態様は、疾患の治療において使用するための、先行する実施態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物である。更なる実施態様は、疾患の治療において使用するための医薬の製造における、先行する実施態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合タンパク質又は医薬組成物の使用である。本開示の追加の実施態様は、治療される疾患が癌である、先行する実施態様のいずれか１つに記載のＣＤ９６結合又は医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、疾患の治療方法又は療法である。さらなる態様において、癌は、固形腫瘍（例えば、再発性、転移性又は進行性固形腫瘍）である。癌は肝臓癌（例えばＨＣＣ）、卵巣癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの肺癌、腎臓癌（例えばＲＣＣ）、結腸癌、胃癌、膀胱癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）であり得るか、又は白血病及び／もしくは任意のＢ細胞悪性腫瘍であり得る。
実施例１
ＣＤ９６結合タンパク質の生成
結合タンパク質生成
ヒトＣＤ９６に特異的な完全ヒト抗体を、細胞選別及びＦＡＣＳベースの選択技術と組み合わせたビオチン化組換えヒト及びカニクイザルＣＤ９６を使用してナイーブ真核生物ライブラリーから単離した。ナイーブ真核生物ライブラリー選択からの重鎖アウトプットを軽鎖ライブラリーに対してシャッフルし、さらなる選択を行って最適な軽鎖対合を同定した。
抗体の親和性／効力を改善するために親和性成熟を行った。これには、抗体４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１のＣＤＲＨ３（配列番号２のＧＡＧＹＹＧＤＫＤＰＭＤＶ）を、ＣＤＲＨ１又はＣＤＲＨ２に多様性を有する予め作製されたライブラリーに組み込むことが含まれていた。この多様化されたライブラリーに対してさらなる選択を行い、リード分子を同定し、配列決定した。リード分子の可変軽鎖及び重鎖のアミノ酸及び核酸配列を配列番号１～９６に示す。ＣＤＲ領域のアミノ酸配列を配列番号９７～１５０に示す。
Ｆｃ選択
リード分子の選択の過程で、結合タンパク質をヒトＩｇＧ１ ＷＴ分子として、又はＦｃ無効化ヒトＩｇＧ１分子として評価した。Ｆｃ無効化分子を作製するために、２３４位、２３５位、及び２３７位のアミノ酸残基、具体的には、Ｌ２３４及びＬ２３５、又はＬ２３５及びＧ２３７をアラニンに変異させて、ｈＩｇＧ１’ＬＡＬＡ’（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）、及びｈＩｇＧ１’ＬＡＧＡ’（Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）Ｆｃ無効化ヒトＩｇＧ１分子を生成した。これらの結合タンパク質は、ＣＤ９６結合及びＣＤ１５５結合の中和を示した。３つのＣＤ９６結合タンパク質、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（８６Ｆ０８－６６）、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６（８６Ｆ０８－１６）、及び４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３（８６Ｆ０４－２３）をさらなる評価のために選択した。結合タンパク質４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、ＧＳＫ ６０９７６０８（モノクローナル抗体）としても知られている。これらの３つのＣＤ９６結合タンパク質を、異なるＩｇＧ変異体（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４ＰＥ、又はＩｇＧ１ Ｆｃ無効化）を用いて、一次Ｔ細胞結合ならびにＣＤ１５５中和活性について評価した。図１に示されるように、Ｆｃにおける変異は、ＣＤ９６発現細胞への結合、又はＣＤ９６発現細胞へのＣＤ１５５結合の中和に影響を及ぼさなかった。
実施例２
ＣＤ９６結合タンパク質の特徴付け
ヒト又はカニクイザルＣＤ９６を発現するＣＨＯ細胞への結合
ヒトＣＤ９６ｖ２又はカニクイザルＣＤ９６ｖ２を発現するＣＨＯ細胞をＰＢＳ中で調製した。カニクイザルＣＤ９６ｖ２細胞を１μＭバイオレット増殖色素（ＶＰＤ４５０）で染色した。細胞を予め温めた培地（１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ）で希釈し、３７℃でさらに１０分間インキュベートした後、４００ｇで５分間遠心分離し、フロー緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）に再懸濁して１．５×１０６／ｍｌとした。染色されたＣＨＯ－ｃｙＣＤ９６及び染色されていないＣＨＯ－ｈｕＣＤ９６細胞を合わせ、３８４ウェルアッセイプレートのウェルに、試験抗ＣＤ９６結合タンパク質の希釈物と共に４℃で１時間添加した。細胞を抗ＩｇＧ ＡＰＣコンジュゲート抗体と共にさらにインキュベートし、ＣＨＯ－ｃｙＣＤ９６及びＣＨＯ－ｈｕＣＤ９６細胞のそれぞれにおける表面結合抗体の量をフローサイトメトリーによって決定した。中央蛍光強度（ＭＦＩ）値を、４パラメータロジスティックモデルを用いて適合させて、結合のＥＣ５０を計算した。データを表２に要約する。
ヒトＣＤ９６ｖ２を発現するＣＨＯ細胞へのヒトＣＤ１５５結合の中和
ＣＤ９６結合タンパク質を、Ｕ底９６ウェルプレート中のＰＢＳ中で調製した。ヒトＣＤ９６ｖ２を発現するＣＨＯ細胞を添加し、室温で３０分間インキュベートした。遠心分離によって細胞を３回洗浄した後、ヒトＣＤ１５５－Ｆｃ－ＡＦ６４７コンジュゲートを室温でさらに３０分間添加した。３回洗浄した後、細胞を固定し、フローサイトメトリーによってＣＤ１５５－Ｆｃ－ＡＦ６４７染色のレベルについて分析した。中央蛍光強度（ＭＦＩ）値を、４パラメータロジスティックモデルを使用して適合させて、ＩＣ５０値を計算した。データを表２に要約する。
ＣＤ９６結合タンパク質の初代ヒトＴ細胞への結合
ヒトＰＢＭＣを、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７を用いた密度勾配遠心分離を使用して白血球減少フィルターから単離した。その後、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、Ｐａｎ Ｔ ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して製造業者の説明書に従って単離した。試験ＣＤ９６結合タンパク質の段階希釈物をヒトＴ細胞と共に４℃で１時間インキュベートした。緩衝液中で３回洗浄した後、抗ヒトＩｇＧ－ＡＰＣコンジュゲートを４℃で１時間添加した。３回洗浄した後、細胞を固定し、フローサイトメトリーによってＡＰＣ染色について分析した。中央蛍光強度（ＭＦＩ）値を、４パラメータロジスティックモデルを使用して適合させて、結合のＥＣ５０を計算した。データを表２に要約する。
表２．ＣＤ９６結合タンパク質によるｈＣＤ９６ｖ２発現ＣＨＯ細胞へのヒトＣＤ１５５結合の結合データ及び中和
Figure 2022535034000002
さらなる特徴付けのための４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の選択
リード分子の選択を補助するために、抗ＣＤ９６結合タンパク質の生物物理学的特性を評価した。すなわち、免疫原性、脱アミド化、グリコシル化、酸化、アスパラギン酸異性化をインシリコ（in silico）分析によって予測し、凝集、断片化及び化学的分解特性を以下の条件で評価した：１０ｍｇ／ｍｌ又は１ｍｇ／ｍｌのいずれかの５０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．５及び５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．０、ならびにストレスを受けていない条件及びストレスを受けた（４０℃で２週間の熱ストレス）条件。抗ＣＤ９６結合タンパク質をＨＥＫ一過性系で発現させ、タンパク質Ａ親和性及びサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。抗ＣＤ９６結合タンパク質を以下のようにスコア化した。
Figure 2022535034000003
Figure 2022535034000004
Figure 2022535034000005
ＢＩＡｃｏｒｅによる抗原結合：
ストレスを受けていない試料とストレスを受けた試料との間で±１０％以内の抗原結合の変化を許容範囲（低リスク）とみなした。この範囲外の分子は、結合活性の喪失による潜在的リスクを示す可能性がある。
データを表６及び７に要約する。表６において、配列中の予測されるリスクの位置を同定する（Ｋａｂａｔナンバリング）。表７において、以下の略語を、観察されたリスク及びそれらが観察された条件に対して使用する：Ａｇｇ＝凝集；ｉｎｃｒ．％Ｍａｓｓ＝異型遺伝子性の増加；Ｂｉｎｄｉｎｇ ｌｏｓｓ＝アッセイ限界を超える結合損失が観察された。Ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｎｃｒ．＝結合の増加（凝集する偏向の可能性を示す）；ＨＭｗＳ＝高分子量種；ＬｍｗＳ＝低分子量種；Ｒｈ＝流体力学的半径（より大きな半径は可能な凝集を示す）；ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水；Ｕ＝ストレスなし；Ｓ＝ストレスあり；Ａ＝５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）；及びＰ＝５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）。
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６及び４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３は、最小の発生傾向及び最小のインシリコリスクを示した。しかしながら、以下の属性が観察されたため、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６を進行及びさらなる特徴付けのために選択した。
・分析用サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって決定される、許容可能なレベルのパーセンテージの全高分子量種（ＨＭｗＳ；＜５％）、低分子量種（ＬｍｗＳ；＜２．５％）及びモノマー（９５％）。
・動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定される、サイズ分布（ＳＥＣのピーク２において＞９８％）及び流体力学的半径（４．５～７ｎｍ）の期待値；
・毛細管等電点電気泳動（ＣＩｅＦ）によって決定される、ストレスを受けていないものとストレスを受けたものとの間の化学的不均一性の最小の予想外の変化；及び
・抗原結合について、＜１０％の変化が抗原結合アッセイによって決定された。
Figure 2022535034000006
Figure 2022535034000007
Figure 2022535034000008
Figure 2022535034000009
Figure 2022535034000010
ＣＤ９６結合タンパク質の低エピトープビニング
エピトープビニング競合アッセイを実施して、本明細書に提示される抗ＣＤ９６結合タンパク質が結合するＣＤ９６のエピトープを決定した。簡潔に述べると、ＨｕＣＤ９６－Ｈｉｓを第１のＣＤ９６結合タンパク質と共に室温で１時間インキュベートした後、タンパク質Ａセンサー上に捕捉された第２の結合タンパク質の結合をＢＬＩによって測定した。第２のＣＤ９６結合タンパク質の結合が観察された場合、２つの結合タンパク質は非競合的であるとみなし、異なるエピトープビンに割り当てた。第２のＣＤ９６結合タンパク質の結合が観察されなかった場合、２つの結合タンパク質は競合的であるとみなし、同じエピトープビンに割り当てた。第１及び第２の結合タンパク質の両方と同じ結合タンパク質を使用して、各ＣＤ９６結合タンパク質に対してセルフビニング対照を含めた。
４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６を除いて全てのＣＤ９６結合タンパク質間の競合が観察され、４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６を除く全てがＣＤ９６の類似のエピトープに結合することが示された。このデータは、４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６を除いて、本明細書に提示される全てのＣＤ９６結合タンパク質が、ＣＤ９６の同じエピトープ又は空間的に近接したエピトープに結合し、その結果、さらなるＣＤ９６結合タンパク質の結合が阻害される（すなわち、それらは同じエピトープビンに属する）ことを示唆する。しかしながら、４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６が本明細書に提示される他のＣＤ９６結合タンパク質と競合しないという知見は、このクローンがＣＤ９６の別個のエピトープに結合する（したがって、別個のエピトープビンに属する）ことを示唆する。したがって、表２に提示されるデータと合わせて、本明細書に提示されるＣＤ９６結合タンパク質によるｈＣＤ９６ｖ２発現ＣＨＯ細胞へのヒトＣＤ１５５結合の結合及び中和は、ＣＤ９６の任意の特定のエピトープへの結合に限定されないことが理解されるであろう。
ＣＤ９６アイソフォームへのＣＤ９６結合タンパク質のさらなる結合親和性研究
ＣＨＯ細胞から発現及び精製された、野生型Ｆｃを有する完全ヒトＩｇＧ１抗体である４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の組換えＣＤ９６への結合親和性を、溶液平衡滴定（ＭＳＤ－ＳＥＴ）アッセイを使用して決定した。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、２０ｐＭの平均ＫＤで組換えヒトＣＤ９６ｖ２に、及び２７８ｐＭの平均ＫＤで組換えカニクイザルＣＤ９６ｖ２に結合した（図２）。加えて、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、４７９ｐＭの平均ＫＤで組換えマウスＣＤ９６ｖ２に結合したことが実証された。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイにおいて、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、経路中の相同体である組換えヒトＣＤ１５５、ヒトＣＤ２２６、ヒトＴＩＧＩＴ又はヒトネクチン－１に結合しなかった。
ＭＳＤ－ＳＥＴアッセイ手順：
要約：ＭＳＤ－ＳＥＴ（ＭＳＤ溶液平衡滴定）分析を使用して、これらの抗体のヒト及びマウスＣＤ９６タンパク質に対する親和性を２５℃で（解離速度が遅すぎて、この温度でＢＩＡＣＯＲＥによって測定することができなかったため）決定した。ＭＳＤ－ＳＥＴは、抗体の溶液相、平衡親和性を決定する。この方法は、滴定された一連の抗体濃度における平衡状態での遊離抗原の検出に依存する。
手順
ビオチン化ヒトＣＤ９６タンパク質を１．５ｎＭの一定濃度で使用し、カニクイザルビオチン化ＣＤ９６タンパク質を３ｎＭで使用した。５個中１個の抗体試料を、ヒトＣＤ９６及びカニクイザルＣＤ９６について６ｎＭから２２点曲線にわたって滴定した。滴定された抗体及びＣＤ９６タンパク質を室温で２４時間インキュベートした。２４時間後、５ｎＭ抗体を標準的な結合ＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｌ１５ＸＡ）上に室温で３０分間コーティングした。次いで、プレートを７００ｒｐｍで振盪しながらＳＴＡＲＴＩＮＧ ＢＬＯＣＫブロッキング緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３７５４２）で３０分間ブロックし、続いて洗浄緩衝液で３回洗浄した。インキュベートした溶液を７００ｒｐｍで振盪しながら１５０秒間ＭＳＤプレートに添加し、続いて１回洗浄した。プレート上に捕捉された抗原を、ＳＵＬＦＯＴＡＧ標識ストレプトアビジン（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒ３２ＡＤ－１）を用いてプレート上で３分間インキュベートすることによって検出した。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、界面活性剤を含む１×Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒ９２ＴＣ－１）を使用してＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ ＩＭＡＧＥＲ機器で読み取った。遊離抗原パーセントを、ＧＲＡＰＨＰＡＤ ＰＲＩＳＭソフトウェアを使用して滴定した抗体の関数としてプロットし、二次方程式に当てはめた。
ＣＤ９６タンパク質を過剰発現するＨＥＫ細胞に結合するＣＤ９６結合タンパク質
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の既知のヒトまたはカニクイザルの細胞膜上ＣＤ９６のアイソフォームへの結合を、これらの異なるアイソフォームで導入されたＨＥＫ細胞を使用してフローサイトメトリーによって決定した（図３）。発現されたアイソフォームに対する最大結合応答及び実験間の差にもかかわらず（発現効率の変動による可能性が最も高い）、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６のＥＣ５０によって示される同等の結合活性が、これらのＣＤ９６アイソフォームに対して実証された（表８）。まとめると、これらのデータは、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６が、ヒト及びカニクイザルにおいて提示されるＣＤ９６の全ての膜形態を認識することができることを示唆する。
Figure 2022535034000011
ヒト及びカニクイザルＴ細胞上の天然ＣＤ９６に対するＣＤ９６結合タンパク質の結合親和性
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６が初代ヒト及びサル細胞上に発現される天然ＣＤ９６に結合することを確認するために、両方の種におけるＣＤ３＋Ｔ細胞及びサブセット（ＣＤ４＋又はＣＤ８＋）に対する４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の結合をフローサイトメトリーによって決定した。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞に高い親和性で結合した（それぞれ４７ｐＭ及び４５ｐＭのＥＣ５０）（図４及び表９）。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、強力な構成的プロモーター要素の制御下でのＣＤ９６アイソフォームの一過性導入後のＣＤ９６の発現と比較して初代細胞上のＣＤ９６の比較的低い発現の結果として、ＣＤ９６（ｎＭ）を過剰発現するＨＥＫ細胞と比べ、初代ヒトＴ細胞への結合に関してより高い効力（ｐＭ）を有する。
Figure 2022535034000012
カニクイザルにおいて４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６がＣＤ９６に結合することを確認するために、初代サルＴ細胞への結合を決定した。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６と市販の抗ＣＤ９６抗体６Ｆ９との結合に基づいて、カニクイザルＴ細胞は、ヒトＴ細胞と比較してはるかに低いレベルのＣＤ９６を発現することが見出された。同様の観察がアカゲザルＴ細胞についてもなされた。ＣＤ９６標的会合をロバストに定量化するために、精製カニクイザルＣＤ３＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２／３／２８ビーズを使用して１７日間活性化して、ＣＤ９６発現を上方調節した。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６結合を、カニクイザル由来の３つの異なる活性化Ｔ細胞試料について決定し、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６結合をこれらの試料全てにおいて確認した。試料間で差次的最大シグナルが存在したが、ＥＣ５０は非常に類似しており（平均７６．６ｐＭ）、ヒトＴ細胞について観察されたもの（４９．９ｐＭ）の２倍以内であった（図５）。
ヒトＴ細胞及びＮＫ細胞に結合した際のＣＤ９６結合タンパク質の内在化
結合後の４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の運命を、イメージングサイトメトリーを用いてヒトＰＢＭＣ培養物において決定した。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６による高度に点状の染色が、ベースラインで３体のドナー全てからの３つの細胞集団（ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）全てにおいて細胞膜上で観察され、この染色パターンは４５時間の時間経過にわたって維持された（図６）。定義された３つの細胞集団（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）全てにおいて、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６－ＰＥの内部移行は遅く、４５時間の時間経過にわたって完全ではなかった。これらのデータは、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６内部移行が、Ｔ細胞表面受容体を標的とする他の抗体と比較して遅いことを示唆している。
ＣＤ９６結合タンパク質は、ＣＤ９６リガンドＣＤ１５５のＣＤ９６発現細胞への結合を阻害する
初代ヒトＴ細胞において、膜ＣＤ９６への４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の事前複合体化は、後者がそのリガンド（組換えヒトＣＤ１５５：Ｆｃ）に結合するのを阻害することが実証された（ＩＣ５０ ０．１６ｎＭ）（図７）。
ＣＤ９６結合タンパク質による確立されたＣＤ９６：ＣＤ１５５相互作用の破壊
ＣＤ１５５：Ｆｃを初代ヒトＴ細胞に予め結合させた場合、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、用量依存的にＣＤ１５５と競合し得（ＩＣ５０ １．９３ｎＭ）（図８）、これは、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６が、ＣＤ９６の天然リガンドであるＣＤ９６結合ＣＤ１５５を置換し得ることを示す。
ＣＤ９６結合タンパク質によるＦｃ受容体結合
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、ＷＴＦｃを有する完全ヒトＩｇＧ１抗体であるため、関連するＦｃ受容体に結合することが予想される。
活性化ヒトＦｃγ受容体レポーター（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ（Ｒ）、ＦｃγＲＩＩａ（Ｈ）、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ）及びＦｃγＲＩＩＩａ（Ｆ））を発現する組換え細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ）のパネルを使用して、本発明者らは、初代ヒトＴ細胞上のＣＤ９６への４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の結合が、ヒトＦｃγ受容体の活性化をもたらさないことを実証した（図９）。対照的に、対照抗ＣＤ５２抗体（Ｃａｍｐａｔｈ）は、試験したＦｃγ受容体発現細胞の全てでＦｃγＲ活性化シグナルを効率的に誘発した。
初代ヒト細胞を用いた細胞死滅アッセイによってレポーターアッセイの知見を確認することが重要であった。ＮＫ細胞を含有する新鮮なヒトＰＢＭＣ培養物では、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の存在下でＣＤ４又はＣＤ８Ｔ細胞のいずれかの細胞死の増加の証拠はなかった（図１０）。同じ実験において、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方が、抗ＣＤ５２抗体（Ｃａｍｐａｔｈ）の存在下で効果的に枯渇した。
補体活性化の古典的経路の第１のステップは、抗体でオプソニン化された細胞への補体成分Ｃ１ｑの結合によって媒介される。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６に結合するヒト補体成分Ｃ１ｑの親和性は、ＳＰＲを使用して決定され、ＩｇＧ１ ＷＴアイソタイプ対照（ＫＤ ６４３．５ｎＭ）よりも高かった（ＫＤ ９４．４ｎＭ）。標的として初代ヒトＴ細胞を使用して、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６が補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を誘導する可能性を調査した。
補体の供給源としてヒト血清を使用するＣＤＣアッセイにおいて、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６によるＣＤ４又はＣＤ８Ｔ細胞のいずれかの枯渇の証拠はなかったが、対照抗ＣＤ５２抗体は、両方のサブセットの枯渇を効率的に媒介した（図１１）。まとめると、これらのデータは、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６で修飾されたＣＤ９６発現Ｔ細胞のＡＤＣＣ又はＣＤＣ媒介性枯渇のリスクがわずかであることを示唆する。
実施例３
ＣＤ９６結合タンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏ有効性及び機序研究
初代混合ヒトＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおける４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６のｉｎ ｖｉｔｒｏ有効性
ＣＨＯ細胞及びＨＥＫ細胞から発現及び精製された４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の効果を、ＣＤ１５５、抗ＣＤ３又は抗ＴＩＧＩＴを添加せずに初代ＰＢＭＣアッセイで試験した。このアッセイでは、８人の異なるヒトドナーからのＰＢＭＣを一緒に混合し、溶液中の異なる抗体と共にウェルに添加した。３日間インキュベートした後、均質時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）検出法を用いて上清中のＩＦＮγを測定した。このアッセイでは、異なるドナー間のＭＨＣミスマッチによってＰＢＭＣが活性化されたため、抗ＣＤ３は必要とされなかった。効力は、両方のＣＤ９６結合タンパク質（ＣＨＯ又はＨＥＫ細胞において発現された）について同様であった（図１２）。両方とも、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（ＥＣ５０ ４９ｐＭ）よりも強力であるようであった。同じ実験の別個の反復において、ＥＣ５０は、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＨＥＫ）、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＣＨＯ）及びＴｅｃｅｎｔｒｉｑについてそれぞれ２２ｐＭ、１０ｐＭ及び１４０ｐＭであった（図１２）。細胞生存率も３日後に測定したところ、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑのみが細胞生存率のいくらかの低下を示した。抗ＣＤ９６ ｍＡｂ又はアイソタイプ対照はいずれも細胞生存率を低下させず、ＡＤＣＣアッセイにおいて観察された細胞枯渇の欠如と一致した。
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、混合ヒトＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおける４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６誘導性ＩＦＮγの主要な供給源である
どの細胞亜集団が、ＰＢＭＣアッセイにおける４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＨＥＫ）及び４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＣＨＯ）処置の際に上清中に分泌されたＩＦＮγの観察された増加に関与するかという疑問に取り組むために、細胞枯渇研究を行った。４体の異なるドナーからのＰＢＭＣを、リンパ球活性化及び抗体処理のために一緒に混合する前に、別々にＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させた。ヒトＣＤ４又はＣＤ８ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して枯渇を実施し、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇の純度をフローサイトメトリーによって検証した。ＰＢＭＣからＣＤ４＋細胞を９８．５～９９．５％枯渇させ、ＰＢＭＣからＣＤ８＋細胞を９７．２～１００％枯渇させた。非枯渇細胞と比較して、Ｔ細胞枯渇による混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイから得られたデータは、ＣＤ４＋Ｔ細胞が、このアッセイにおいて４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＨＥＫ）によるＩＦＮγの誘導に関与する主要なサブセットであるが、ＣＤ８＋Ｔ細胞はそうではないことを示した（図１３）。
ＣＤ９６結合タンパク質の作用機序を理解するためのフローサイトメトリー研究
抗ＣＤ９６についての作用機序をさらに理解するために、フローサイトメトリー研究を実施して、ヒトＰＢＭＣ中の異なる細胞集団における細胞表面受容体ならびに細胞内サイトカインの発現変化を研究した。同じ混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイ系を使用した。ＭＨＣミスマッチによる細胞活性化のために、８体のドナーからのＰＢＭＣを一緒に混合した。抗ＣＤ９６又はアイソタイプ対照抗体を添加した後、ＰＢＭＣを０日間（ベースライン）又は３日間インキュベートし、続いて細胞を固定し、様々なマーカーをフローサイトメトリーによって定量化した。この実験における４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の活性を確認するために、上清中の分泌されたＩＦＮγ及びグランザイムＢもまた、３日後にＭＳＤ及びＥＬＩＳＡによって測定した。以前に観察されたように、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、ＩＦＮγ及びグランザイムＢ放出を増強した（図１４）。分泌されたＩＦＮγ又はグランザイムＢの増加は、抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂクローン１Ｆ４（Ｒｏｃｈｅ、ｈＩｇＧ１－ＷＴ）では観察されなかった。
どの細胞集団が４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６によるＩＦＮγの増加に寄与したかを理解するために、フローサイトメトリーによって異なる細胞集団におけるＩＦＮγの細胞内染色を測定した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照処理群においてさえ、０日目と比較して３日目にＩＦＮγ＋ＣＤ４＋、ＣＤ８＋及びＮＫ細胞サブセットの発現（データ示さず）ならびに頻度の有意な増加があり、異なるドナー由来のＰＢＭＣを混合することによるリンパ球活性化を示した（図１５）。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６による処理は、３つ全ての免疫サブセット、すなわちＣＤ４＋、ＣＤ８＋及びＮＫ細胞におけるＩＦＮγ＋細胞の頻度をさらに有意に増加させた（図１５）。抗ＴＩＧＩＴ抗体（クローン１Ｆ４）は、ＮＫ細胞集団の中でＩＦＮγ＋細胞の頻度を増加させたのみであった。
さらに、ＣＤ９６発現は、チェックポイントタンパク質について一般的に観察されるプロファイルである０日目と比較して、３日目の細胞活性化の際に３つ全ての細胞集団において有意に増加した。抗ＣＤ９６抗体処置は、対応するアイソタイプ対照群と比較して、３つ全てのサブセット、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋及びＮＫ細胞におけるＣＤ９６ ＭＦＩ及びＣＤ９６＋細胞頻度を有意に減少させた。Ｆｃ無効化８６Ｆ０８－６６－ＬＡＧＡ抗体処置もまた、ＣＤ９６プロファイルの減少をもたらしたが、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処置群におけるＣＤ９６発現の減少ははるかに有意であった（図１６～１７）。抗ＴＩＧＩＴａｂクローン１Ｆ４は効果を示さなかった。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処理によるＣＤ９６発現のこの明らかな減少は、抗ＣＤ９６検出抗体と治療用抗体による受容体占有を示す治療用Ａｂとの間の競合に起因し得るか、又は４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の結合によるＣＤ９６受容体の内在化に起因し得る。分析に使用した検出抗体は、市販のＡｂクローン６Ｆ９（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）である。
ＣＤ２２６は、ＮＫ細胞における主要な活性化受容体の１つであるが、Ｔ細胞におけるその役割は十分に確立されていない。機構をより詳細に理解するために、本発明者らは、ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおいてＮＫ細胞のＣＤ２２６＋集団を特徴付けることに注力した。３日目の細胞活性化の際のＣＤ９６発現の上方調節は、ＣＤ２２６＋ＣＤ９６＋ＮＫ細胞の頻度を増加させた。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６による処置は、アイソタイプ対照（５．９１％／４６．４％＝０．１２７）ならびに８６Ｆ０８－６６ ＩｇＧ１ ＬＡＧＡ Ｆｃ無効化抗体（１３．８％／４７．２％＝０．２９）の両方と比較して、３日目にＣＤ２２６＋単一陽性ＮＫ細胞対ＣＤ２２６＋ＣＤ９６＋二重陽性ＮＫ細胞のより高い比（２６．２％／２５．２％＝１）をもたらした（図１８）。ＣＤ２２６は軸における活性化受容体であり、ＣＤ９６は同じ軸における推定チェックポイント受容体であるので、ＣＤ２２６＋単一陽性細胞は、２２６＋ＣＤ９６＋二重陽性細胞よりも活性化されたＮＫ細胞を表し得る。
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処置は、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処置後３日目にＣＤ２２６＋ＮＫ細胞の中でＩＦＮγ＋細胞及びＧｒｚＢ＋細胞のより高い頻度をもたらした。Ｆｃ無効化ＩｇＧ１－ＬＡＧＡリード抗体（８６Ｆ０８－６６－ＬＡＧＡ）では効果は観察されなかった。
全体として、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処置は、アイソタイプ対照Ａｂ又はＦｃ無効化ＩｇＧ１－ＬＡＧＡリード抗体（８６Ｆ０８－６６－ＬＡＧＡ）と比較して、３日目に全ＮＫ細胞の中でより多くのＩＦＮγ＋ＧｒｚＢ＋二重陽性細胞をもたらした（図１９）。
ＣＤ９６結合タンパク質のスクリーニングのためのＣＤ１５５－ＰＢＭＣアッセイ
ヒトＰＢＭＣにおけるＩＦＮγ産生に対するプレート結合ＣＤ１５５－Ｆｃの阻害効果を決定するために、丸底９６ウェル非ＴＣプレート（＃３５１１７７）を、４℃で一晩、異なる用量のｒｈＣＤ１５５－Ｆｃ（カタログ番号９１７４－ＣＤ－０５０、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングし、室温で３０分間、５％ＢＳＡ（カタログ番号９５７６、Ｓｉｇｍａ）を含有するＡＩＭ－Ｖ培地（カタログ番号１２０５５－０９１、Ｔｈｅｒｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）でブロッキングした。ＰＢＭＣ（カタログ番号７００２５、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＣＤ９６結合タンパク質、抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂ（カタログ番号ＭＡＢ７８９８、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）又はアイソタイプ対照で室温にて１０分間前処理し、０．０１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３ ＭＡｂを含有するＡＩＭ－Ｖ培地中２×１０５個の細胞／ウェルでウェルに添加し、３日間培養した。上清を回収し、ＭＳＤ又はＥＬＩＳＡによるＩＦＮγ及びグランザイムＢの測定のために－２０℃で保存した。ヒトＰＭＢＣにおけるＩＦＮγ産生に対するプレート結合ＣＤ１５５－Ｆｃの阻害効果を図２０に示す。ＣＤ９６結合タンパク質は、（ＩｇＧ１－ＷＴアイソタイプ対照抗体に対して）ＣＤ１５５－Ｆｃ媒介性ＩＦＮγ阻害を軽減するようである（図２６）。ＣＤ９６結合タンパク質が、（抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの存在下で）ＣＤ１５５－Ｆｃ媒介性ＴＮＦα抑制を軽減する能力を決定するさらなるアッセイを行った（図２７）。抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂを用いて（そして用いずに）行われたさらなるアッセイは、ＣＤ９６結合タンパク質が、ＩＦＮγ産生に対するＣＤ１５５－Ｆｃ阻害を軽減する能力が、抗ＴＩＧＩＴ ｍＡｂの存在下及び非存在下の両方で明らかであることを示す（図２８）。
ヒト腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）アッセイにおけるＣＤ９６結合タンパク質の活性
腫瘍微小環境（ＴＭＥ）は免疫抑制性であり、腫瘍中に見出される腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、多くの場合、免疫機能不全であるか、又は「疲弊している」。初代ヒトＴＩＬアッセイを開発して、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の潜在的な治療効果を評価した。新鮮な一次切除腫瘍を機械的及び酵素的に解離させて、腫瘍細胞及びＴＩＬの両方を含有する単一細胞懸濁液にした。細胞懸濁液中のＴＩＬを準最適用量の可溶性抗ＣＤ３（クローンＨＩＴ３ａ）で穏やかに活性化し、９６ウェル超低接着丸底回転楕円体形成プレートに３連で播種した。次いで、抗体をウェルに添加し、６日後に上清中のＩＦＮγを測定した。４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６を、単独で、又は抗ＰＤ－１（Ｋｅｙｔｒｕｄａ／ペンブロリズマブ）（１０μｇ／ｍＬ）もしくは抗ＴＩＧＩＴ（１００μｇ／ｍＬ）のいずれかと組み合わせて、３つの濃度（１０、２、及び０．５μｇ／ｍＬ）でこのアッセイにおいて評価した。抗ＰＤ－１単独もまた、抗ＣＤ３単独を上回るＩＦＮγの誘導についての陽性対照として試験した。適切なアイソタイプ対照も含めた。
合計６個の腫瘍（子宮内膜４個及び腎臓２個）をこのアッセイで試験した。４個の子宮内膜腫瘍について、抗ＰＤ－１を抗ＣＤ３処置と一緒にすると、抗ＣＤ３単独と同等のＩＦＮγレベルが誘導され、これは、抗ＣＤ３刺激が高すぎる可能性があり、さらなる技術開発が必要であり得ることを示している。２個の腎腫瘍のうちの１個（試料５００１０６３）において、抗ＰＤ－１処置は抗ＣＤ３処置単独よりも高いＩＦＮγレベルを増大させた（一元Ａｎｏｖａによりｐ＜０．０５）。さらに、抗ＰＤ－１＋４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（１０μｇ／ｍＬ）組み合わせ処置は、１０μｇ／ｍＬの４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６単独（５９９ｐｇ／ｍＬ）、抗ＰＤ－１単独（２６９２ｐｇ／ｍＬ）、又は２つの単純な相加効果よりも高い７７６４ｐｇ／ｍＬに有意に（一元Ａｎｏｖａによりｐ＜０．００１）増強した（図２１）。第２の腎腫瘍（試料１００２２７３）については、抗ＰＤ－１処置は、抗ＣＤ３刺激単独よりもＩＦＮγ産生を増強しなかった。これらの腫瘍は、ＰＤ－１軸発現又はＣＤ９６軸発現について事前スクリーニングされなかった。これらのＴＩＬアッセイの複雑性は広く認識されており、患者腫瘍間での抗ＰＤ－１処置に対する応答の変動が観察されている。これは、スクリーニングされていない患者における抗ＰＤ－１（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）への応答率が２５％未満であることを考慮すると、驚くべきことではない。
実施例４
ｉｎ ｖｉｖｏでの有効性及び機序研究
ＮＫ細胞依存性Ｂ１６Ｆ１０黒色腫肺コロニー形成モデルにおけるＣＤ９６結合タンパク質の生物発光イメージング研究
ＮＫ細胞は、自然リンパ球ファミリーの一部であり、細胞毒性活性及び炎症性サイトカインの放出を介して初期腫瘍増殖及び転移の広がりを制御する際に顕著な役割を果たす。ＮＫ細胞依存性抗癌活性を研究するために頻繁に使用されるｉｎ ｖｉｖｏモデルは、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫肺コロニー形成モデルである。このモデルは、ＣＤ９６癌関連刊行物（Blake S.J., et al. 2016）にも記載されている。本発明者らは、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＨＥＫ細胞において産生される）活性をｉｎ ｖｉｖｏで研究するために同じモデルを使用することを決定した。肺転移の制御における抗ＣＤ９６ ｍＡｂの有効性をリアルタイムで、より定量的な方法で測定するために、通常のＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を使用する代わりに、赤色ホタルルシフェラーゼ（ＲＦｌｕｃ）をコードするＢ１６Ｆ１０細胞を使用して、腫瘍負荷を示す肺からのルシフェラーゼシグナルのｉｎ ｖｉｖｏイメージングを可能にした。
最大５０００００個のＢ１６Ｆ１０ ＲＦｌｕｃ転移性黒色腫細胞を尾静脈投与した後、０日目（細胞の注射後最大１５分以内）、７日目、１０日目、１４日目、１７日目、及び２０日目にｉｎ ｖｉｖｏ生物発光イメージングを行った。（初期細胞コロニー形成は、以前のモデル開発研究から、注射後１５分ほどの早さで肺において生じる）。投与頻度は、週２回であった（図２２）。２０日目のｉｎ ｖｉｖｏイメージング後、マウス肺のエクスビボ生物発光イメージングのためにマウスを採取した。
この系における特定の免疫細胞型（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、及びＮＫ細胞）の役割をさらに評価するために、確立された抗体処理方法を用いて、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＮＫ細胞又はＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞の両方を枯渇させた。その後のフローサイトメトリー分析により、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋枯渇群におけるＮＫ細胞及びＴ細胞の枯渇が確認された。
１４日目の生物発光イメージングにより、ＮＫ細胞枯渇群の肺においてシグナルが有意に増加したことが明らかになった（図２３）。より低い肺シグナル（ｐ／ｓ）が存在する場合、転移はより少ない。実際に、２０個体のマウスのうち１９個体は、おそらく重度の肺腫瘍負荷に起因して、研究の終わりまで生存しなかった。このデータは、このモデルにおける肺転移の抑制に主に関与するものとしてのＮＫ細胞の重要な役割を明らかに支持する。
ＮＫ枯渇マウスがまだ生存していた１４日目に実施したｉｎ ｖｉｖｏ生物発光イメージングは、ＮＫ枯渇群について、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６（ＨＥＫ細胞において産生された）処置が、アイソタイプ対照処置と比較して肺転移を有意に減少させた（＊Ｐ＜０．０５）ことを示した（図２４、Ａ）。非枯渇群についても傾向が観察されたが、統計的に有意ではなかった。２０日目に、非枯渇群について、肺シグナルは４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処置群において減少したが、統計的に有意ではなかった（ｎｓ）。Ｔ細胞枯渇群について、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、アイソタイプ対照と比較して肺シグナルを有意に減少させた（＊＊Ｐ＜０．０１）（図２４、Ｂ）。より低い肺シグナル（ｐ／ｓ）が存在する場合、転移はより少ない。２０日目にマウスを屠殺した後の肺のデジタル写真により、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の効果が確認された（図２５）。
実施例５
有効性データ及び機序の概要
Ｔ細胞に対する４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６の活性のエビデンス
ヒト：ＣＤ９６は、ＰＢＭＣ中ならびに腫瘍微小環境中のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方において容易に検出可能なレベルで発現される。ＴＩＬでは、ＮＫ細胞に加えて、ＣＤ９６がＣＤ８、ＣＤ４Ｔｅｆｆ細胞ならびにＴｒｅｇ上に見出された。その発現パターンと一致して、フローサイトメトリー分析は、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処理が、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおいてＩＦＮγ＋ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを増加させることを示した。枯渇研究は、ＣＤ４Ｔ細胞が枯渇した場合に、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおいて４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６によるＩＦＮγ放出の劇的な損失を示した。しかしながら、ＣＤ８枯渇は、この特定のアッセイにおいてあまり影響を与えなかった。
マウス：ｉｎ ｖｉｖｏ設定において、Ｂ１６Ｆ１０肺コロニー形成（colorization）アッセイについて、腫瘍細胞注射後１４日目に、ＮＫ枯渇マウスがなお生存していたとき、ＮＫ細胞が枯渇したとき、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処置は、おそらくＴ細胞を活性化したことによって、アイソタイプ対照と比較して肺転移の統計的に有意な減少をなお示した。
ＮＫ細胞活性のエビデンス
ヒト：ＣＤ９６は、ＰＢＭＣ中及び腫瘍微小環境中のＮＫ細胞上で容易に検出可能なレベルで発現される。実際に、ＴＩＬ亜集団の中で、最高レベルのＣＤ９６発現がＮＫ細胞上で見出された。ＣＤ２２６は、ＮＫ細胞の主要な活性化受容体の１つであり、ＣＤ９６についての強力なＮＫ活性標的検証データも文献に報告されている。ｉｎ ｖｉｔｒｏ設定において、フローサイトメトリーを使用した細胞内サイトカイン染色研究は、混合ＰＢＭＣ－ＭＬＲアッセイにおいて４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６処理時にＩＦＮγ＋ＧｒｚＢ＋ＮＫ細胞の増加を示した。
マウス：ｉｎ ｖｉｖｏ設定において、十分に認識された高度にＮＫ細胞依存性のモデルであるＢ１６Ｆ１０肺コロニー形成モデルを使用して、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６は、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方が枯渇した場合に肺転移を有意に抑制することができ、ＮＫ活性を介していたことが強く示唆した。
実施例６：抗ＣＤ９６ ｍＡｂ－非臨床毒性研究
ＧＳＫ６０９７６０８Ｂ（以下、ＧＳＫ６０９７６０８と称され、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６と同じである）は、癌の治療のために開発されている分化クラスター（ＣＤ）９６を標的とするモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。抗ＣＤ９６ ｍＡｂを用いた静脈内（ＩＶ）用量範囲及び４週間反復用量毒性試験を、カニクイザル及びＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて行った。さらに、単回用量ＰＫ及びＰＤ試験をサルにおいて行った。ヒト血液試料におけるｉｎ ｖｉｔｒｏＣＲＡ及びｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂとの組み合わせＣＲＡ（抗ＰＤ－１ｍＡｂ）を行った。結合プロファイルの評価を、ヒトマイクロアレイを使用して、追跡確認結合アッセイを用いて実施した。予備免疫組織化学（ＩＨＣ）研究を、選択されたヒト及びカニクイザル組織を使用して実施した。
ＢＡＬＢ／ｃマウス及びカニクイザルを、抗ＣＤ９６ ｍＡｂの安全性プロファイルを評価するための非臨床種として選択した。抗ＣＤ９６ ｍＡｂはヒト及びサルのＣＤ９６受容体に対して同様の親和性で交差反応するので、サルは、抗ＣＤ９６ ｍＡｂの潜在的な毒性を評価するための適切な非臨床種であると考えられた。最初のＰＫ及び有効性試験結果、ならびにマウス脾細胞への抗ＣＤ９６ ｍＡｂのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合及びＣＤ３／ＣＤ２８で予め刺激し、抗ＣＤ９６ ｍＡｂと共にインキュベートしたマウス脾細胞によるサイトカイン産生に基づいて、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてさらなる非臨床安全性試験を行った。
抗ＣＤ９６ ｍＡｂは、１００ｍｇ／ｋｇ／週までの週１回の４回投与後のサル毒性試験において良好な忍容性を示した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞上でのＣＤ９６受容体占有率（ＲＯ）又は標的結合は、全ての試験を通して維持された。受容体結合又は全身曝露に影響を及ぼさなかった低力価抗薬物抗体（ＡＤＡ）の低い発生率が観察された。ＣＤ９６を発現する循環細胞の数に変化はなく、一次及び二次免疫組織を含む組織における組織病理学所見もなく、ＣＤ９６発現エフェクター細胞の結晶化可能断片（Ｆｃ）依存性枯渇のリスクが低いことが示唆された。抗ＣＤ９６ ｍＡｂは、マウスにおいて１００ｍｇ／ｋｇ／週で４週間忍容された；しかしながら、１０ｍｇ／ｋｇ／週のより低い用量は、３回目の週用量投与後にＡＤＡ又は循環免疫複合体による免疫媒介性アナフィラキシーを引き起こした。
５人の男性及び５人の女性の健康なドナーから単離されたＰＢＭＣを使用して、抗ＣＤ９６ ｍＡｂ単独、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ単独、及び抗ＣＤ９６ ｍＡｂとｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂとの組み合わせを評価するｉｎ ｖｉｔｒｏＣＲＡを行った。培地対照と比較して、抗ＣＤ９６ ｍＡｂ単独及びｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ単独条件のそれぞれにおいて、各抗体処置を受けたほとんどのドナーにおいて、免疫調節抗炎症性サイトカインであるインターロイキン（ＩＬ）－１０の最小限の増加、ならびに１人のドナーについて、ＩＬ－６及び／又は腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）の軽度から中等度の処置関連の増加があった。これらのレベルは、汎サイトカイン応答を誘導した抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８陽性対照より低かった。全体的に、併用処置によるサイトカイン応答の増強はなかった；しかし、抗ＣＤ９６ ｍＡｂ単独条件において増加したＩＬ－６及びＴＮＦ－αを有する１人のドナーもまた、組み合わせ処置に対してより感受性であった。結果は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の全体的に低いリスクを示すが、サイトカインの誘導に対する個々の参加者の応答が存在し得る。
忍容性及び関連する有害な知見の非存在に基づいて、副作用非観察レベル（ＮＯＡＥＬ）は、サル（性別平均４週平均曲線下面積［ＡＵＣ］０～１６８ｈ：５８０ｍｇ・ｈ／ｍＬ［範囲：４８３～６４７ｍｇ・ｈ／ｍＬ］及びＣｍａｘ：５．５４Ｍｇ／ｍＬ［範囲：５．１０～６．５４Ｍｇ／ｍＬ］）及びマウス（性別平均４週平均ＡＵＣ ０～１６８ｈ：３１９ｍｇ・ｈ／ｍＬ及びＣｍａｘ：２．９８ｍｇ／ｍＬ）の両方において１００ｍｇ／ｋｇ／週（試験した最高用量）であると決定した。
実施例７：単一療法としての、及びｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ（ＴＳＲ０４２としても知られる）と組み合わせた抗ＣＤ９６ ｍＡｂの初回のヒト研究（First time in human study）
ＧＳＫ６０９７６０８Ｂ（以下、ＧＳＫ６０９７６０８と称され、４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６と同じである）は、癌の治療のために開発されている分化抗原群（ＣＤ）９６（抗ＣＤ９６ ｍＡｂ）を標的とするモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。関連受容体であるＣＤ１５５によるＣＤ９６の結合は、「オフスイッチ」又は免疫チェックポイントとして機能し、免疫応答を下方調節する。このＣＤ９６アンタゴニスト抗体はＣＤ９６：ＣＤ１５５阻害軸を遮断し、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の抗腫瘍活性を増加させるために開発された。この初回のヒト（ＦＴＩＨ）研究では、単一療法として、及びｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂと組み合わせて与えられたＧＳＫ６０９７６０８の安全、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、及び予備臨床活性を評価される。Ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ（ＴＳＲ－０４２としても知られる）は、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ４（ＩｇＧ４）アイソタイプの研究用ヒト化ｍＡｂであり、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）への結合に高い親和性を有し、その結果、プログラム細胞死リガンド（ＰＤ－Ｌ）１及びＰＤ－Ｌ２への結合が阻害される。同じクラスにおける他の抗体の観察された抗癌活性に基づいて、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂは、広範囲の癌において臨床活性を示すことが予想される。
経路間の分子相互作用及び多様な免疫集団に対処することの有用性を支持する証拠に基づいて、ＧＳＫ６０９７６０８は、ＰＤ－（Ｌ）１（プログラム細胞死タンパク質１及び／又はプログラム細胞死リガンド１）阻害と協調して作用するだけでなく、現在のＴ細胞ベースの治療に対して難治性であるか、又は耐性を発達させた患者にも利益を与え得る。
抗ＰＤ１との組み合わせについての科学的理論的根拠
複数の腫瘍型にわたって免疫チェックポイント経路ＰＤ－（Ｌ）１及びＣＴＬＡ－４を遮断する治療的利益にもかかわらず、ほとんどの患者は、チェックポイント阻害剤での単剤療法に応答せず、組み合わせアプローチによってそれらの活性を増加させるための戦略が活発に探索されている。抗ＣＤ９６ ｍＡｂ（ＧＳＫ６０９７６０８）を、ＰＤ－（Ｌ）１経路を遮断するように設計された薬剤（ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ、抗ＰＤ－１ｍＡｂ）と組み合わせる理論的根拠は、経路間の分子相互作用、多様な免疫集団に対処する有用性、及び介入戦略間の治療相補性を支持する証拠に基づく。
機序レベルでは、ＰＤ－１シグナル伝達はＣＤ２２６の細胞内ドメインを脱リン酸化し、ＣＤ９６媒介性ＣＤ１５５再指向後の共刺激の可能性を減弱することが示されている。特に、ＣＤ９６の発現は、ニボルマブ（抗ＰＤ－１）処置後に黒色腫腫瘍組織において上方調節され、ＰＤ１遮断に対する可能性のある適応的抵抗性機序としてＣＤ９６阻害軸が関与している。インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）のＧＳＫ６０９７６０８介在誘導は、ＰＤ－Ｌ１発現を上方調節する可能性があるため、経路成分の相互上方調節もＣＤ９６遮断で観察され得る。まとめると、これらの観察は、ＣＤ９６及びＰＤ－（Ｌ）１の同時遮断が、有効な抗腫瘍免疫応答を可能にするために必要であり得ることを示唆する。
Ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂによる臨床経験
Ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂは、現在、子宮内膜がん（ミクロサテライト安定及びミクロサテライト不安定性－高［ＭＳＩ－Ｈ］腫瘍）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、ならびに非子宮内膜ＭＳＩ－Ｈ固形腫瘍及びポリメラーゼε変異がんを含む再発性又は進行性の固形腫瘍を有する患者のための単一療法として開発されている。加えて、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂは、進行性固形腫瘍（メラノーマ、ＮＳＣＬＣ、及び結腸直腸がんを含む）又は進行性もしくは転移性がん（内皮卵巣がん、トリプルネガティブ乳がん、及び尿路上皮がんを含む）を有する患者のための他の治療剤との組合せ療法として開発されている。
２０１９年１月２１日の時点で、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂを用いた４つの進行中の第１フェーズ試験、２つの進行中の第２フェーズ試験、及び１つの進行中の第３フェーズ試験があった。
ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂの安全及び忍容性は、少なくとも１用量のｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂを受けた進行性癌を有する６２７人を超える参加者において評価されている。ＦＴＩＨ研究４０１０－０１－００１（ＧＡＲＮＥＴ）においてｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ単一療法で処置された３３５人の参加者のうち、９３．７％が、少なくとも１つの処置下発現有害事象（ＴＥＡＥ）を報告し、疲労、悪心、及び下痢の事象が最も頻繁に報告された。研究介入関連ＴＥＡＥ≧グレード３が３６人の参加者（１０．７％）において報告された。研究介入関連ＴＥＡＥ≧グレード３の大部分は、疲労（６人の参加者）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の増加（４人の参加者）、貧血（４人の参加者）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の増加（３人の参加者）、及びリパーゼの増加（３人の参加者）を除いて、それぞれ２人の参加者のみにおいて生じた。重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、１０６人の参加者（３１．６％）において生じた；これらの参加者のうちの２１人において、これらのＳＡＥは、研究介入関連とみなされた。全ての研究介入関連ＳＡＥは、肺炎（４人の参加者）、呼吸困難（２人の参加者）、発熱（２人の参加者）及び発疹黄斑丘疹（２人の参加者）を除いて、それぞれ１人の参加者において生じた。ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ単独治療を受けた２３人の参加者（６．９％）は、≧グレード３の重篤度を有する少なくとも１つの免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を経験した；≧グレード３ ｉｒＡＥを有する２３人の参加者のうちの１８人について、有害事象（ＡＥ）を研究者による研究介入関連として評価した。≧グレード３ ｉｒＡＥの大部分は、それぞれ≦２人の参加者において報告された。＞２人の参加者において報告されたｉｒＡＥ≧グレード３は、ＡＳＴが増加し（４人の参加者）、ＡＬＴが増加し（４人の参加者）、リパーゼが増加し（４人の参加者）、発疹（３人の参加者）があった。
他の治療剤と組み合わせてｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂで処置された２９２人の参加者のうち、９４．５％が少なくとも１つのＴＥＡＥを報告し、疲労、悪心、及び呼吸困難の事象が最も頻繁に報告された。ＳＡＥは、１０８人の参加者（３７．０％）において生じた；これらの１０８人の参加者のうち２０人において、ＳＡＥは研究介入に関連していた。
ヒト経験からの安全データならびに利用可能な非臨床薬理及び毒性情報に基づいて、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂは、承認されたｍＡｂ ＰＤ－１阻害剤、ペンブロリズマブ及びニボルマブの安全経験と一致すると思われる許容される臨床及び非臨床安全プロファイルを実証した。
同じクラスにおける他の抗体の観察された抗腫瘍活性に基づいて、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂは、広範囲の癌において臨床活性を示すことが予想される。少なくとも１つの腫瘍評価を有した、ＭＳＩ－Ｈ子宮内膜がんを有する１５人の参加者及びＮＳＣＬＣを有する２４人の参加者からの予備的効力データを、米国癌学会の２０１８年４月の年次会議で提示した。応答は、固形腫瘍における免疫関連応答評価基準（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）を使用して研究者によって評価された。ＭＳＩ－Ｈ子宮内膜がんを有する１５人の参加者のうち、全体的な応答率は４７％であり、全ての部分応答（ＰＲ）からなっていた；２０％は安定疾患（ＳＤ）を有し、３３％は疾患進行を有していた。ＮＳＣＬＣを有する２４人の参加者のうち、ＯＲＲは２９％であり、全ての部分応答（ＰＲ）からなっていた；４２％はＳＤを有し、１７％は疾患進行を有していた。したがって、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂで処置されたＮＳＣＬＣを有する参加者からの予備的効力データは、進行性及び再発性の癌を有する参加者において、ペンブロリズマブなどの他のＰＤ（Ｌ）１阻害剤の報告された効力に匹敵するようである（ＯＲＲ：１９％）［Ｈｅｒｂｓｔ，２０１６］。
目的及びエンドポイント
このＦＴＩＨ非盲検用量漸増試験は、単一療法（ArmＡ）として、又はｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ（ArmＢ）と組み合わせて、局所進行性、再発性、又は転移性の固形腫瘍を有する参加者におけるＧＳＫ６０９７６０８の安全、忍容性、ＰＫ、ＰＤ、及び予備的臨床活性を評価する；この試験を使用して、推奨される第２フェーズ用量（ＲＰ２Ｄ）を定義する。
Figure 2022535034000013
Figure 2022535034000014
略語：ＡＤＡ＝抗薬物抗体；ＡＥ＝有害事象；ＡＵＣ＝曲線下面積；Ｃｍａｘ＝最大濃度；Ｃｍｉｎ＝最小濃度；ＤＣＲ＝疾患制御率；ＤＬＴ＝用量制限毒性；ＤＮＡ＝デオキシリボ核酸；ＤｏＲ＝応答期間；ＩＨＣ＝免疫組織化学；ｉＲＥＣＩＳＴ＝免疫療法のための改変された固形腫瘍中の応答評価基準、バージョン１．１（modified Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, version 1.1 for immune-based therapeutics）；ＩＶ＝静脈内（ｌｙ）；ＯＲＲ＝全応答率；P D＝薬効；ＰＫ＝薬物動態；ＲＮＡ＝リボ核酸；ＲＥＣＩＳＴ １．１＝固形腫瘍中の応答評価基準、バージョン１．１（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, version 1.1）；ＲＰ２Ｄ＝推奨第２相用量；ＳＡＥ＝重篤な有害事象；ｔ１／２＝半減期；ＴＴＰ＝進行までの時間；ＴＴＲ＝応答までの時間。
全体的な設計
これは、局所進行性、再発性、又は転移性の固形腫瘍を有する参加者に、単一療法（Arm Ａ）として、又はｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂ（Arm Ｂ）と組み合わせてＩＶ投与される漸増用量のＧＳＫ６０９７６０８の安全、忍容性、ＰＫ、ＰＤ、及び予備的臨床活性を調査するように設計された、ＦＴＩＨ、非盲検、非無作為化、多施設研究である。
３週間毎にＩＶ投与されるＧＳＫ６０９７６０８（Ｑ３Ｗ）を、用量漸増委員会（Dose Escalation Committee）（ＤＥＣ）の指導の下で、漸増用量（アームＡ）における単一療法として評価する。ＰＫ及びＰＤをさらに評価するために、さらなる参加者を、以下の腫瘍型：非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、又は出現する非臨床及び／もしくは臨床データに基づいて定義される他の腫瘍型において、ＲＰ２ＤにおけるＰＫ／ＰＤコホートに登録する（最大１５人の参加者）。追加の参加者はまた、用量探索のために、以前にクリアされた用量レベルでＰＫ／ＰＤコホートに登録されてもよい（コホート当たり最大１５人の参加者）。これらの追加の参加者は、安全性及び予備的な抗癌活性、ならびに全体的なＰＫ／ＰＤデータプロファイルの評価に寄与する。
忍容性であり、かつＰＫデータに基づいて適切な薬物曝露を有するＧＳＫ６０９７６０８の用量が同定されると、組合せアーム（Arm Ｂ）への登録が開始され得る。Arm Ｂにおいて、漸増用量のＧＳＫ６０９７６０８が、ｄｏｓｔａｒｌｉｍａｂの固定投与レジメンを用いて評価される。ＰＫ及びＰＤをさらに評価するために、さらなる参加者を、以下の腫瘍型：ＮＳＣＬＣ、ＨＮＳＣＣ、又は新たな非臨床データ及び／もしくは臨床データに基づいて定義される他の腫瘍型において、ＲＰ２ＤでＰＫ／ＰＤコホートに登録する（最大１５人の参加者）。ＲＰ２Ｄで処置されるコホートに加えて、参加者はまた、用量探索のために、以前にクリアされた用量レベル（コホート当たり最大１５人の参加者）でＰＫ／ＰＤコホートに登録されてもよい。
これらのさらなる参加者は、安全性及び予備的な抗癌活性、ならびに全体的なＰＫ／ＰＤデータプロファイルの評価に寄与する。
スクリーニング時及び試験介入訪問中の病状の評価は、固形腫瘍中の応答評価基準、バージョン１．１（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, version 1.1）及び免疫療法のための改変ＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）に従って、研究者によって行われる。病気の進行に起因して治療を中止する決定は、ｉＲＥＣＩＳＴに基づくが、いくつかの二次及び探索的抗癌活性分析は、ＲＥＣＩＳＴ １．１に基づく。スキャンは、一点中心的に収集し、保存することで中心的な検討の選択肢が可能である。
分析
各投与コホートの後、ノイエンシュワンダー連続再評価方法（ＮＣＲＭ）を使用して、単一療法及び組み合わせ療法の用量漸増を導く。用量漸増の決定は、主に用量制限毒性（ＤＬＴ）に基づくが、臨床安全性評価、ＰＫ、及びＰＤデータの全体が考慮される。正式な統計的仮説は試験されず、分析は記述的である。
これは、２アーム非盲検介入研究である。
参加者の数
約１００人の参加者が、研究介入を受けるために登録される。登録される参加者の総数は推定値であり、ＤＬＴプロファイルを適切に特徴付け、ＲＰ２Ｄを決定するために必要とされる数に依存する。
介入のグループ及び期間
Arm Ａ（単一療法）において、ＧＳＫ６０９７６０８を、研究者又は適切に資格を与えられた被指名人の医学的監督下で参加者に約３０分間かけてＩＶ投与する。
Arm Ｂ（組み合わせ療法）において、ＧＳＫ６０９７６０８を最初にＩＶ投与する。次いで、ＤｏｓｔａｒｌｉｍａｂをＧＳＫ６０９７６０８注入の終了後３０分間にわたってＩＶ投与する。両方の研究介入は、研究者又は被指名者の医学的監督下で行われる。
研究は、３つの期間を含む：スクリーニング（初回投与の２８日前までの評価）、処置（疾患の進行、許容できない毒性、死亡、又は同意の撤回まで）、ならびに処置の中止及び経過観察（９０日間）。研究参加の全期間は、インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）の署名から開始し、最終のプロトコルで定義された経過観察評価期間を通して継続する。研究参加の最大期間は、参加者の研究介入の期間に依存し、およそ２年までの期間である。
腫瘍の画像化及び疾患の評価
病変の評価方法及びタイミング、疾患の評価、疾患の進行、ならびに応答基準は、固形腫瘍中の応答評価基準、バージョン１．１（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, version 1.1）（ＲＥＣＩＳＴ １．１）に従って行われる。ＲＥＣＩＳＴ １．１は、スクリーニング時の疾患負荷の評価（標的及び非標的病変の決定）において、及び腫瘍応答エンドポイントの主要な尺度として使用される。ｉＲＥＣＩＳＴは、腫瘍応答及び進行を評価し、処置決定を行うために研究者によって使用される。
［配列表］
Ｋａｂａｔにより定義されたＣＤＲに下線を付す。
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号１
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１可変重鎖アミノ酸配列
配列番号２
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１ 可変軽鎖核酸配列
配列番号３
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１可変重鎖核酸配列
配列番号４
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCAGCTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTTTCGGCACCGCCAGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号５
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３可変重鎖アミノ酸配列
配列番号６
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSYNAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIMGTARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３可変軽鎖核酸配列
配列番号７
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３可変重鎖核酸配列
配列番号８
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCTACAACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTATGGGCACCGCCAGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－４可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号９
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－４可変重鎖アミノ酸配列
配列番号１０
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFESEAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGRARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－４可変軽鎖核酸配列
配列番号１１
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－４可変重鎖核酸配列
配列番号１２
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCGAGAGCGAGGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTTTCGGCAGGGCCAGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－５可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号１３
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－５可変重鎖アミノ酸配列
配列番号１４
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSHAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGRGKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－５可変軽鎖核酸配列
配列番号１５
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－５可変重鎖核酸配列
配列番号１６
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCAGCCACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTTTCGGCAGGGGCAAGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－６可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号１７
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－６可変重鎖アミノ酸配列
配列番号１８
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGHAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGRARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－６可変軽鎖核酸配列
配列番号１９
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－６可変重鎖核酸配列
配列番号２０
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCGGCCACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTTTCGGCAGGGCCAGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－１８可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号２１
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－１８可変重鎖アミノ酸配列
配列番号２２
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSRAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIMGTARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－１８可変軽鎖核酸配列
配列番号２３
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－１８可変重鎖核酸配列
配列番号２４
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCAGCAGGGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTATGGGCACCGCCAGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３３可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号２５
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３３可変重鎖アミノ酸配列
配列番号２６
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGILPIFGRANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３３可変軽鎖核酸配列
配列番号２７
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－３３可変重鎖核酸配列
配列番号２８
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCAGCTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCCTGCCCATTTTCGGCAGGGCCAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－８８可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号２９
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－８８可変重鎖アミノ酸配列
配列番号３０
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSSAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGRANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－８８可変軽鎖核酸配列
配列番号３１
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－８８可変重鎖核酸配列
配列番号３２
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCAGCAGCGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTTTCGGCAGGGCCAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－３可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号３３
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－３可変重鎖アミノ酸配列
配列番号３４
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFVNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPALGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－３可変軽鎖核酸配列
配列番号３５
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－３可変重鎖核酸配列
配列番号３６
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCGTGAACTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCGCCCTGGGCACCGCCAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号３７
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４可変重鎖アミノ酸配列
配列番号３８
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSEYAIHWVRQAPGQGLEWMGNIIPIFGTAGYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４可変軽鎖核酸配列
配列番号３９
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４可変重鎖核酸配列
配列番号４０
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCGAGTACGCCATCCACTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCAACATCATCCCCATTTTCGGCACCGCCGGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－８可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号４１
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－８可変重鎖アミノ酸配列
配列番号４２
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFWLYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPQLGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－８可変軽鎖核酸配列
配列番号４３
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－８可変重鎖核酸配列
配列番号４４
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCTGGCTGTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCCAGCTGGGCACCGCCAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１７可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号４５
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１７可変重鎖アミノ酸配列
配列番号４６
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFREYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPVFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１７可変軽鎖核酸配列
配列番号４７
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１７可変重鎖核酸配列
配列番号４８
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGGGAGTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCGTGTTCGGCACCGCCAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－２２可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号４９
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－２２可変重鎖アミノ酸配列
配列番号５０
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFDSYAMHWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAWYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－２２可変軽鎖核酸配列
配列番号５１
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－２２可変重鎖核酸配列
配列番号５２
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCGACAGCTACGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTTTCGGCACCGCCTGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４７可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号５３
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４７可変重鎖アミノ酸配列
配列番号５４
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSQYAIHWVRQAPGQGLEWMGVIIPIFGKANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４７可変軽鎖核酸配列
配列番号５５
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－４７可変重鎖核酸配列
配列番号５６
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCCAGTACGCCATCCACTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGTGATCATCCCCATTTTCGGCAAGGCCAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号５７
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASKRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQLDNWPITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６可変重鎖アミノ酸配列
配列番号５８
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFRRYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDGWGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGSVDFWSGSDYYYYMDVWGKGATVTVSS
４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６可変軽鎖核酸配列
配列番号５９
GAGATCGTGCTGACCCAGAGCCCCGCAACCCTGTCCCTGAGCCCCGGCGAAAGGGCCACTCTGAGCTGCAGGGCCAGCCAGAGCGTGAGCAGCTACCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCTAGGCTGCTGATCTACGACGCCAGCAAGAGGGCCACCGGCATTCCCGCCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTCTACTACTGCCAGCAGCTGGACAACTGGCCC
ATCACCTTCGGGGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
４２Ｙ０７３－２Ｂ０４－４６可変重鎖核酸配列
配列番号６０
CAGGTGCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCCGGACTGCTGAAGCCCAGCGAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGTACGGCGGGTCCTTCAGGAGGTACTACTGGAGCTGGATCAGGCAGCCCCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGATCGGCGAGATCGACGGCTGGGGCAGCACCAACTACAACCCCAGCCTCAAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCGCCGCCGACACCGCCGTGTACTATTGC
GCCAGGGGCGGCAGCGTGGACTTCTGGAGCGGCAGCGACTACTACTACTACATGGACGTGTGGGGCAAGGGCGCCACCGTCACCGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－８５可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号６１
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLYPPRTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－８５可変重鎖アミノ酸配列
配列番号６２
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYPMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGFTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARETAYYTTKGNWFDPWGQGTLVTVSA
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－８５可変軽鎖核酸配列
配列番号６３
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCCTGTACCCCCCC
AGGACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－８５可変重鎖核酸配列
配列番号６４
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCTCCGGGTACACCTTCACCAGCTACCCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTCGAGTGGATGGGCATCATCAACCCCAGCGGAGGCTTCACCAGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATGACAAGGGACACCAGCACCAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCAAGGGAGACCGCCTACTACACCACCAAGGGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCC
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－９７可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号６５
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLYPPRTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－９７可変重鎖アミノ酸配列
配列番号６６
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRAAMHWVRQAPGQGLEWMGIINPAGGYTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARETAYYTTKGNWFDPWGQGTLVTVSS
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－９７可変軽鎖核酸配列
配列番号６７
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCCTGTACCCCCCCAGGACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－９７可変重鎖核酸配列
配列番号６８
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCTCCGGGTACACCTTCACCAGGGCCGCCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTCGAGTGGATGGGCATCATCAACCCCGCCGGAGGCTACACCAGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATGACAAGGGACACCAGCACCAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTATTAC
TGCGCAAGGGAGACCGCCTACTACACCACCAAGGGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCT
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１００可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号６９
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLYPPRTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１００可変重鎖アミノ酸配列
配列番号７０
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYRMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGLTQYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARETAYYTTKGNWFDPWGQGTLVTVSS
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１００可変軽鎖核酸配列
配列番号７１
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCCTGTACCCCCCC
AGGACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１００可変重鎖核酸配列
配列番号７２
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCTCCGGGTACACCTTCACCACCTACAGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTCGAGTGGATGGGCATCATCAACCCCAGCGGAGGCCTGACCCAGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATGACAAGGGACACCAGCACCAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTATTAC
TGCGCAAGGGAGACCGCCTACTACACCACCAAGGGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCT
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１０３可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号７３
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLYPPRTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１０３可変重鎖アミノ酸配列
配列番号７４
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTAYQMHWVRQAPGQGLEWMGIINPAGGWTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARETAYYTTKGNWFDPWGQGTLVTVSS
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１０３可変軽鎖核酸配列
配列番号７５
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCCTGTACCCCCCCAGGACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１０３可変重鎖核酸配列
配列番号７６
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCTCCGGGTACACCTTCACCGCCTACCAGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTCGAGTGGATGGGCATCATCAACCCCGCCGGAGGCTGGACCAGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATGACAAGGGACACCAGCACCAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCAAGGGAGACCGCCTACTACACCACCAAGGGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCTCT
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１２６可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号７７
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLYPPRTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１２６可変重鎖アミノ酸配列
配列番号７８
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRYNMHWVRQAPGQGLEWMGWINPAGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARETAYYTTKGNWFDPWGQGTLVTVSA
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１２６可変軽鎖核酸配列
配列番号７９
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCCTGTACCCCCCCAGGACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１２６可変重鎖核酸配列
配列番号８０
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCTCCGGGTACACCTTCACCAGGTACAACATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTCGAGTGGATGGGCTGGATCAACCCCGCCGGAGGCAGCACCAGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATGACAAGGGACACCAGCACCAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCAAGGGAGACCGCCTACTACACCACCAAGGGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCC
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１９１可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号８１
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLYPPRTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１９１可変重鎖アミノ酸配列
配列番号８２
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTKYRMHWVRQAPGQGLEWMGIINPQGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARETAYYTTKGNWFDPWGQGTLVTVSA
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１９１可変軽鎖核酸配列
配列番号８３
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCCTGTACCCCCCCAGGACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－１Ａ０１－１９１可変重鎖核酸配列
配列番号８４
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCCTCCGGGTACACCTTCACCAAGTACAGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTCGAGTGGATGGGCATCATCAACCCCCAGGGAGGCAGCACCAGCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATGACAAGGGACACCAGCACCAGCACCGTGTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTATTAC
TGCGCAAGGGAGACCGCCTACTACACCACCAAGGGCAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号８５
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６可変重鎖アミノ酸配列
配列番号８６
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFVEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPAFGTAQYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６可変軽鎖核酸配列
配列番号８７
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCA GGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCT GATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGAC TTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６可変重鎖核酸配列
配列番号８８
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGG CCTCCGGCGGGACCTTCGTGGAGTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTG GATGGGCGGCATCATCCCCGCCTTCGGCACCGCCCAGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATC ACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGT ACTATTGCGCCAGGGGAGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCAC CGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号８９
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６可変重鎖アミノ酸配列
配列番号９０
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIVPVFGTAKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６可変軽鎖核酸配列
配列番号９１
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６可変重鎖核酸配列
配列番号９２
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAACGAGTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCGTGCCCGTGTTCGGCACCGCCAAGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３可変軽鎖アミノ酸配列
配列番号９３
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３可変重鎖アミノ酸配列
配列番号９４
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGYPISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIMGTARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSS
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３可変軽鎖核酸配列
配列番号９５
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３可変重鎖核酸配列
配列番号９６
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCGGCTACCCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTATGGGCACCGCCAGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
ＣＤＲＬ１アミノ酸配列１
配列番号：９７
RASQSISSYLN
ＣＤＲＬ１アミノ酸配列２
配列番号：９８
RASQSVSSYLA
ＣＤＲＬ２アミノ酸配列１
配列番号：９９
ＡＡＳＳＬＱＳ
ＣＤＲＬ２アミノ酸配列２
配列番号：１００
DASKRAT
ＣＤＲＬ３アミノ酸配列１
配列番号：１０１
ＱＱＶＬＨＴＩＴ
ＣＤＲＬ３アミノ酸配列２
配列番号：１０２
ＱＱＰＹＦＳＰＰＴ
ＣＤＲＬ３アミノ酸配列３
配列番号：１０３
ＱＱＬＤＮＷＰＩＴ
ＣＤＲＬ３アミノ酸配列４
配列番号：１０４
ＱＱＳＬＹＰＰＲＴ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１
配列番号：１０５
ＳＹＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列２
配列番号：１０６
ＹＮＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列３
配列番号：１０７
ＳＥＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列４
配列番号：１０８
ＳＨＡＩS
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列５
配列番号：１０９
ＧＨＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列６
配列番号：１１０
ＳＲＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列７
配列番号：１１１
ＳＳＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列８
配列番号：１１２
ＮＹＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列９
配列番号：１１３
ＥＹＡＩＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１０
配列番号：１１４
ＬＹＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１１
配列番号：１１５
ＥＹＡＩＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１２
配列番号：１１６
ＳＹＡＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１３
配列番号：１１７
ＱＹＡＩＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１４
配列番号：１１８
ＲＹＹＷＳ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１５
配列番号：１１９
ＳＹＰＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１６
配列番号：１２０
ＲＡＡＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１７
配列番号：１２１
ＴＹＲＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１８
配列番号：１２２
ＡＹＱＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列１９
配列番号：１２３
ＲＹＮＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列２０
配列番号：１２４
ＫＹＲＭＨ
ＣＤＲＨ１アミノ酸配列２１
配列番号：１２５
ＧＹＰＩＳ
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１
配列番号：１２６
GIIPIFGTASYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列２
配列番号：１２７
GIIPIMGTARYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列３
配列番号：１２８
GIIPIFGRARYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列４
配列番号：１２９
GIIPIFGRGKYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列５
配列番号：１３０
GILPIFGRANYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列６
配列番号：１３１
GIIPIFGRANYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列７
配列番号：１３２
GIIPALGTANYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列８
配列番号：１３３
NIIPIFGTAGYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列９
配列番号：１３４
GIIPQLGTANYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列
１０配列番号：１３５
GIIPVFGTANYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１１
配列番号：１３６
GIIPIFGTAWYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１２
配列番号：１３７
VIIPIFGKANYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１３
配列番号：１３８
EIDGWGSTNYNPSLKS
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１４
配列番号：１３９
IINPSGGFTSYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１５
配列番号：１４０
IINPAGGYTSYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１６
配列番号：１４１
IINPSGGLTQYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１７
配列番号：１４２
IINPAGGWTSYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１８
配列番号：１４３
WINPAGGSTSYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列１９
配列番号：１４４
IINPQGGSTSYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列２０
配列番号：１４５
GIIPAFGTAQYAQKFQG
ＣＤＲＨ２アミノ酸配列２１
配列番号：１４６
GIVPVFGTAKYAQKFQG
ＣＤＲＨ３アミノ酸配列１
配列番号：１４７
GAGYYGDKDPMDV
ＣＤＲＨ３アミノ酸配列２
配列番号：１４８
LLGESGMDV
ＣＤＲＨ３アミノ酸配列３
配列番号：１４９
GGSVDFWSGSDYYYYMDV
ＣＤＲＨ３アミノ酸配列４
配列番号：１５０
ETAYYTTKGNWFDP
ＰＤ－１アンタゴニストＣＤＲＨ１
配列番号：１５１
ＳＹＤＭＳ
ＰＤ－１アンタゴニストＣＤＲＨ２
配列番号：１５２
TISGGGSYTYYQDSVKG
ＰＤ－１アンタゴニストＣＤＲＨ３
配列番号：１５３
ＰＹＹＡＭＤＹ
ＰＤ－１アンタゴニストＣＤＲＬ１
配列番号：１５４
KASQDVGTAVA
ＰＤ－１アンタゴニストＣＤＲＬ２
配列番号：１５５
ＷＡＳＴＬＨＴ
ＰＤ－１アンタゴニストＣＤＲＨ３
配列番号：１５６
QHYSSYPWT
ＰＤ－１アンタゴニスト代替ＣＤＲＬ３
配列番号：１５７
QHYNSYPWT
ＰＤ－１アンタゴニスト重鎖可変領域
配列番号：１５８
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSYTYYQDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYYAMDYWGQGTTVTVSS
ＰＤ－１アンタゴニスト軽鎖可変領域
配列番号：１５９
DIQLTQSPSFLSAYVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTLHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQHYSSYPWTFGQGTKLEIK
ＰＤ－１アンタゴニストモノクローナル抗体重鎖
配列番号：１６０
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSYTYYQDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
ＰＤ－１アンタゴニストモノクローナル抗体軽鎖
配列番号：１６１
DIQLTQSPSFLSAYVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTLHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQHYSSYPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｎ３８０Ｄ修飾を有するＰＤ－１アンタゴニスト重鎖配列
配列番号：１６２
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSYTYYQDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Ｎ３８５Ｄ修飾を有するＰＤ－１アンタゴニスト軽鎖配列
配列番号：１６３
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSYTYYQDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEDNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Ｎ３８０Ｄ及びＮ３８５Ｄ修飾を有するＰＤ－１アンタゴニスト重鎖配列
配列番号：１６４
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSYTYYQDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESDGQPEDNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６完全長重鎖アミノ酸配列
配列番号：１６５
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFVEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPAFGTAQY
AQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTV
SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ
SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL
GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR
DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS
RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６完全長軽鎖アミノ酸配列
配列番号：１６６
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS
DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL
SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６完全長重鎖ＤＮＡ配列
配列番号：１６７
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCGTGGAGTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCGCCTTCGGCACCGCCCAGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGAGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACC
ATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－６６完全長軽鎖ＤＮＡ配列
配列番号：１６８
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６完全長軽鎖アミノ酸配列
配列番号：１６９
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVLHTITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６完全長重鎖アミノ酸配列
配列番号：１７０
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNEYAISWVRQAPGQGLEWMGGIVPVFGTAKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYYGDKDPMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６完全長軽鎖ＤＮＡ配列
配列番号：１７１
GACATCCAGCTGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGTGCTGCACACCATCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAG
CGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０８－１６完全長重鎖ＤＮＡ配列
配列番号：１７２
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAACGAGTACGCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCGTGCCCGTGTTCGGCACCGCCAAGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGGCGCCGGCTACTACGGCGACAAGGACCCCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGC
GCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３完全長軽鎖アミノ酸配列
配列番号：１７３
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQPYFSPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３完全長重鎖アミノ酸配列
配列番号：１７４
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGYPISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIMGTARYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLGESGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３完全長軽鎖ＤＮＡ配列
配列番号：１７５
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGAGACAGGGTGACCATCACCTGCAGGGCCAGCCAGTCCATCAGCAGCTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGCCGCAAGCTCACTGCAGAGCGGCGTGCCCTCTAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATC
AGCAGCCTCCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGCCCTACTTCAGCCCCCCCACTTTCGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
４２Ｙ０７３－８６Ｆ０４－２３完全長重鎖ＤＮＡ配列
配列番号：１７６
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCGGGACCTTCAGCGGCTACCCCATCAGCTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGACAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGGCATCATCCCCATTATGGGCACCGCCAGGTACGCCCAGAAGTTCCAGGGAAGGGTCACCATCACCGCCGACGAGAGC
ACCAGCACCGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGCTGCTGGGCGAGAGCGGCATGGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACTGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
実施例で使用したＣＤ１５５－ｆｃアミノ酸配列（太字の配列はリーダー配列を有さない成熟ＣＤ１５５ ＥＣＤ（細胞外ドメイン）であり、残りはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である）。
配列番号１７７
Figure 2022535034000015
ＣＤ１５５アミノ酸配列（天然のリーダー配列を下線で示し、膜貫通部分及び細胞質部分を太字で示す）。
配列番号１７８
Figure 2022535034000016
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域アミノ酸配列
配列番号：１７９
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域核酸配列
配列番号：１８０
GCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG

Claims (41)

  1. ＣＤ９６結合タンパク質であって、
    （ａ）（ｉ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、及び９４からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ならびに／又は配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９，及び９３からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＲＤＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つもしくは組合せ；又は（ｉｉ）（ｉ）のＣＤＲ変異体であって、１、２もしくは３個のアミノ酸修飾を有する変異体；あるいは
    （ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、４６、５０、５４、５８、６２、６６、７０、７４、７８、８２、８６、９０、もしくは９４の配列と少なくとも８０％同一である配列を含むＶＨ領域；及び／又は配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７７、８１、８５、８９、もしくは９３の配列と少なくとも８０％同一である配列を含むＶＬ領域
    を含んでなるＣＤ９６結合タンパク質。
  2. 前記（ａ）（ｉ）のＣＤＲが、
    （１）配列番号：１０５～１２５から選択されるＣＤＲＨ１；配列番号：１２６～１４６から選択されるＣＤＲＨ２；及び／又は配列番号：１４７～１５０から選択されるＣＤＲＨ３；配列番号：９７～９８から選択されるＣＤＲＬ１；配列番号：９９～１００から選択されるＣＤＲＬ２；及び／又は配列番号：１０１～１０４から選択されるＣＤＲＬ３である、請求項１に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  3. 前記結合タンパク質が、配列番号：１４７、１４８、１４９、又は１５０と１００％同一であるＣＤＲＨ３を含んでなる、請求項１又は２に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  4. 前記結合タンパク質が、配列番号：１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４又は１２５と１００％同一であるＣＤＲＨ１；配列番号：１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、又は１４６と１００％同一であるＣＤＲＨ２；及び／又は配列番号１４７、１４８、１４９、又は１５０と１００％同一であるＣＤＲＨ３；配列番号：９７又は９８と１００％同一であるＣＤＲＬ１；配列番号：９９又は１００と１００％同一であるＣＤＲＬ２；配列番号：１０１、１０２、１０３又は１０４と１００％同一であるＣＤＲＬ３を含んでなる、請求項１～３のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  5. ６つ全てのＣＤＲが結合タンパク質中に存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  6. 以下の６つのＣＤＲを含んでなるＣＤ９６結合タンパク質：
    配列番号：１１５のＣＤＲＨ１；
    配列番号：１４５のＣＤＲＨ２；及び
    配列番号：１４７のＣＤＲＨ３；及び
    配列番号：９７のＣＤＲＬ１；
    配列番号：９９のＣＤＲＬ２；及び
    配列番号：１０１のＣＤＲＬ３。
  7. 前記結合タンパク質が、
    配列番号：８６と７５％同一であるＶＨ領域；及び／又は
    配列番号：８５と７５％同一であるＶＬ領域を含んでなる、請求項６に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  8. 前記結合タンパク質が、
    配列番号：８６と１００％同一であるＶＨ領域；及び／又は
    配列番号：８５と１００％同一であるＶＬ領域を含んでなる、請求項１～７のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  9. 前記結合タンパク質が、合成ポリペプチド、ヒト化配列、又はキメラ配列を含んでなる、請求項１～９のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  10. 前記タンパク質が、ＣＤ１５５の結合親和性（ＫＤ）と等しいかもしくはそれよりも良好な結合親和性（ＫＤ）でＣＤ９６に結合するか、又はＣＤ１５５がＣＤ９６に結合するのを妨ぐことができるかもしくは置き換えることができる、請求項１～９のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  11. 少なくとも約３０ｎＭの結合親和性（ＫＤ）でＣＤ９６に結合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  12. 抗体であり、Ｆｃガンマ受容体に結合することができ、かつ／又はＩＦＮガンマ放出を促進することができる抗体Ｆｃ領域を含んでなる、請求項１～１１のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  13. 前記Ｆｃ領域が、野生型ＩｇＧ１Ｆｃ又はその機能的変異体である、請求項１２に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  14. 抗体であって、前記結合タンパク質が、配列番号：１６５のアミノ酸配列と１００％同一である重鎖；及び／又は配列番号：１６６のアミノ酸配列と１００％同一である軽鎖を含んでなる、ＣＤ９６結合タンパク質。
  15. 抗体であって、前記結合タンパク質が、配列番号１７０のアミノ酸配列と１００％同一である重鎖；及び／又は配列番号１６９のアミノ酸配列と１００％同一である軽鎖を含んでなる、ＣＤ９６結合タンパク質。
  16. 抗体であって、前記結合タンパク質が、配列番号：１７４のアミノ酸配列と１００％同一である重鎖；及び／又は配列番号：１７３のアミノ酸配列と１００％同一である軽鎖を含んでなる、ＣＤ９６結合タンパク質。
  17. 請求項１～１６のいずれか一項において定義されるＣＤ９６結合タンパク質をコードする核酸配列。
  18. 前記配列が、重鎖をコードする配列番号：４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０、６４、６８、７２、７６、８０、８４、８８、９２、９６、１６７、１７２、もしくは１７６；及び／又は軽鎖をコードする配列番号：３、７、１１、１５、１９、２３、２７、３１、３５、３９、４３、４７、５１、５５、５９、６３、６７、７１、７５、７９、８３、８７、９１、９５、１６８、１７１、もしくは１７５を含んでなる、請求項１７に記載の核酸配列。
  19. 請求項１７又は１８に記載の核酸配列を含んでなる発現ベクター。
  20. 以下：（ｉ）配列番号：１６７の重鎖及び配列番号：１６８の軽鎖の核酸配列をコードするベクター、（ｉｉ）配列番号：１７２の重鎖及び配列番号：１７１の軽鎖の核酸配列をコードするベクター、ならびに（ｉｉｉ）配列番号：１７６の重鎖及び配列番号：１７５の軽鎖の核酸配列をコードするベクターから選択される、請求項１９に記載の発現ベクター。
  21. 請求項１７又は１８に記載の核酸配列、あるいは請求項１９又は２０に記載の発現ベクターを含んでなる、組換え宿主細胞。
  22. 請求項２１に記載の宿主細胞を、前記核酸配列又はベクターの発現に適した条件下で培養することを含んでなる方法であって、それによってＣＤ９６結合タンパク質を含んでなるポリペプチドが産生される、Ｃ９６結合タンパク質を産生する方法。
  23. 請求項２２に記載の方法によって産生されたＣＤ９６結合タンパク質。
  24. 請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質を発現するように操作された細胞株。
  25. 請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質及び薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物。
  26. 請求項６、８又は１４～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質及び薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. それを必要とする対象における疾患の治療方法であって、該対象に、治療有効量の、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質又は請求項２５～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
  28. それを必要とする対象における疾患の治療方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項６、８又は１４～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質を投与することを含んでなる、方法。
  29. 前記対象がＣＤ９６を発現するか否かを決定することをさらに含んでなる、請求項２７又は２８に記載の方法。
  30. 療法において使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質、又は請求項２５～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  31. 対象における疾患の処置において使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質、又は請求項２５～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  32. 前記患者がヒト対象である、請求項３１に記載の使用のためのＣＤ９６結合タンパク質。
  33. 固形腫瘍を処置することにおいて使用するための、請求項３１～３２に記載のＣＤ９６結合タンパク質。
  34. 前記タンパク質が、請求項１４～１６に記載の抗体であり、前記固形腫瘍が、卵巣、肺（例えば、ＮＳＣＬＣ）、胃、膀胱、結腸直腸、肝臓（例えば、ＨＣＣ）、腎臓（例えば、ＲＣＣ）、及び頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）から選択される、請求項３１又は３２に記載の使用のためのＣＤ９６結合タンパク質。
  35. 疾患の処置において使用するための医薬品の製造における、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＤ９６結合タンパク質、又は請求項２５又は２６に記載の医薬組成物の使用。
  36. ＰＤ－１アンタゴニスト及び／又は抗ＴＩＧＩＴ抗体をさらに含んでなる、請求項２５又は２６に記載の医薬組成物。
  37. 前記ＰＤ－１アンタゴニストが、配列番号：１６０の重鎖配列及び配列番号：１６２の軽鎖配列を含んでなる抗体である、請求項３６に記載の医薬組成物。
  38. ＰＤ－１アンタゴニスト及び／又は抗ＴＩＧＩＴ抗体を投与することをさらに含んでなる、請求項２７又は２８に記載の方法。
  39. 前記疾患が癌であり、前記ＣＤ９６結合タンパク質及び前記ＰＤ－１アンタゴニスト及び／又は抗ＴＩＧＩＴ抗体が、ヒト患者などの患者に、同時に又は任意の順序で逐次的に投与される経路で投与される、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記癌が固形腫瘍であり、前記ＰＤ１アンタゴニストが、配列番号：１６０の重鎖配列及び配列番号：１６２の軽鎖配列を含んでなる抗体である、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記固形腫瘍が、卵巣、肺（例えば、ＮＳＣＬＣ）、胃、膀胱、結腸直腸、肝臓（例えば、ＨＣＣ）、腎臓（例えば、ＲＣＣ）、及び頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）から選択される、請求項４０に記載の方法。
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