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JP2022534837A - 治療用インターフェロンアルファ１タンパク質 - Google Patents

治療用インターフェロンアルファ１タンパク質 Download PDF

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Abstract

本発明は、一部には、インターフェロンアルファ１またはそのバリアントを含む、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体、および治療薬としてのそれらの使用に関する。【選択図】図２０

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月２６日に出願された米国特許仮出願第６２／９０６，４３１号、および２０１９年３月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／８２５，５６９号の利益を主張する。これら両仮出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
発明の分野
本発明は、一部は、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）またはそのバリアントを含むキメラタンパク質、またはキメラタンパク質複合体（Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む）およびそれらの治療薬としての使用に関する。
配列表
本明細書と共に電子申請された次記のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式コピー（ファイル名：ＯＲＮ－０５７ＰＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５、記録日付：２０２０年３月２６日、ファイルサイズ：３８５，０２４バイト）。
Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）は、免疫応答および他の生物学的プロセスにおいて重要な役割を果たす多機能性サイトカインファミリーを形成する。ヒトＩ型ＩＦＮは、１３種の別個の非対立性アルファサブタイプ、１種のベータサブタイプ、および１種のオメガサブタイプを含む。Ｉ型インターフェロンは全て、程度は異なるが、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットから構成される共通受容体のＩ型インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）を結合するように見える。Ｉ型ＩＦＮの結合時に、ＩＦＮＡＲは、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路活性化して、種々の生物学的作用を誘発する。ＩＦＮサブタイプの特異的活性が報告されており、したがって、例えば、ウイルス性肝炎（ＩＦＮα２）、多発性硬化症および癌療法（例えば、ＩＦＮ－βまたはＩＦＮα２）を含む種々の疾患および障害の治療のために特異的に臨床的に使用されてきた。ＩＦＮ－ＩＦＮＡＲリガンド－受容体複合体の構築物は、細胞型、ＩＦＮＡＲと結合するＩＦＮサブタイプおよび受容体活性化関連シグナルのタイプ（振幅、継続時間、など）に応じて、細胞分化および／または機能を調節するいくつかのシグナル伝達経路の活性化を開始する。Ｉ型インターフェロンは、ＩＦＮＡＲに結合する性質を共有するが、それらは、様々な程度に結合でき、結果として、非冗長性機能を有し得る。これらは、少なくとも一部には、それらがＩＦＮＡＲに結合する際に誘発するシグナル応答の型および品質における差異に関連する。これは、免疫刺激、抗増殖性、抗ウイルスおよび他の生物学的作用などの、種々のＩ型ＩＦＮの応答に関連する。ＩＦＮα２は、最も強力なＩＦＮＡＲ結合リガンドおよびＩＦＮＡＲシグナル伝達活性化因子である。様々な試みが、潜在的治療用途のために、さらに強力なＩＦＮＡＲ結合物質の生成において報告されてきた。
他のＩ型ＩＦＮとは対照的に、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）は、ＩＦＮＡＲ２受容体に対する極めて低い親和性（ＩＦＮα２と比べて、ＩＦＮＡＲ２に対する２０倍低い結合親和性；Ｊａｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００７；３６６：５２５－５３４）を特徴とするＩ型インターフェロンファミリーのメンバーである。ＩＦＮα１は、Ｉ型ＩＦＮファミリー中で最弱の天然起源ヒトＩＦＮＡＲ結合Ｉ型ＩＦＮリガンドおよびＩＦＮＡＲシグナル伝達活性化因子であると見なされる（Ｍｏｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ２０１１；５３：５２－５９）。特に、これらの特性は、ＩＦＮα１への、および潜在的治療薬としてのその探求への一般的関心の長期にわたる欠如の一因である。臨床診療におけるＩ型ＩＦＮの効力は、インフルエンザ様症候群、うつ、肝毒性、自己免疫疾患、甲状腺機能障害、および体重減少を含む、顕著な全身毒性および副作用に起因する効果的でない投与により制限される。従って、ＩＦＮで治療されるべき（感染臓器または腫瘍塊）またはＩＦＮにより活性化されるべき（例えば、免疫細胞サブセット）細胞集団のみに向けてＩＦＮ活性を局在化し標的化することは、極めて価値のあることであろう。
従って、改善された薬物動態学的および治療特性および最小限の毒性プロファイルを有する安全で効果的なＩＦＮα１ベースの治療薬に対する必要性が残されている。
従って、いくつかの態様では、本発明は、シグナル伝達物質として、野生型ＩＦＮα１またはそのバリアントを含む、キメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含むキメラタンパク質複合体に関する。用語バリアントは、本明細書で使用される場合、ＩＦＮα１変異体を含む。ある実施形態では、ＩＦＮα１は、配列番号１のアミノ酸配列またはそのバリアントを含む。
本開示は、一部には、野生型ＩＦＮα１、およびそのバリアントを含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体が、野生型ＩＦＮα１に比べて実質的に低減されたＩＦＮＡＲ活性化シグナル伝達活性を示すという知見に関する。しかし、この低減されたＩＦＮＡＲ活性化シグナル伝達活性は、ターゲティング部分を介して標的細胞に向けられる場合、このような標的細胞で誘導および／または回復され得る。驚くべきことに、標的細胞で誘導されたＩＦＮα１活性は、ＩＦＮα１、またはそのバリアントを含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の標的化を介して達成され、標的細胞において、野生型ＩＦＮα１のものと類似であるかまたはそれより大きくなり得る。さらに、および同様に驚くべきことに、ＩＦＮα１、またはそのバリアントを含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の標的化ＩＦＮα１活性は、最も効力の高い野生型ＩＦＮα２のものと同等であるあるいはそれより大きくなり得る（例えば、細胞型に応じて、野生型ＩＦＮα１よりも、例えば、約１０～１００倍効力が高い）。重要なことに、本明細書で記載のＩＦＮα１を含むＩＦＮα１キメラタンパク質およびキメラタンパク質複合体は、非標的細胞と比べて標的細胞に対して、例えば、標的化野生型ＩＦＮα２キメラタンパク質で達成されるものよりも大幅に高い、価値のある驚くべき選択性を示す。まとめると、高効力と高度に細胞標的選択的ＩＦＮＡＲシグナル伝達活性化の特有の組み合わせが、本明細書で記載のＩＦＮα１組成物、およびそのバリアントを用いて達成できる。従って、種々の実施形態では、本発明は、癌、感染性疾患、および自己免疫疾患を含む種々の疾患の治療において使用するための、高治療指数、ならびに優れた医薬品特性を有する標的選択的ＩＦＮＡＲ活性化因子に関する。
いくつかの実施形態では、例えば、遺伝子融合または結合（例えば、複合体の形成）などによる、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体への野生型ＩＦＮα１の組み込みが、ＩＦＮα１の生物活性を低減する（「融合による減弱化」と呼ばれることもある）。例えば、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体中に組み込まれた野生型ＩＦＮα１は、治療受容体に対し野生型ＩＦＮα１インターフェロンに比べて、低減された親和性および／または活性を有し得る。ある実施形態では、治療受容体は、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）であり、これは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットから構成される。いくつかの実施形態では、野生型ＩＦＮα１の治療受容体、例えば、ＩＦＮＡＲに対する親和性および／または活性の低下は、ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体のターゲティング部分を介した標的細胞に対する方向付けまたは標的化時に、誘導および回復され得る。いくつかの実施形態では、標的細胞でのＩＦＮα１媒介ＩＦＮＡＲ活性化の誘導および回復は、野生型（非キメラ）ＩＦＮα１で達成されるＩＦＮＡＲ活性化と類似であるかまたはそれより高いレベルに達し得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は、望ましくないジスルフィド対形成を低減してキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の生成物の均一性および医薬品特性を改善し、同時に、ターゲティング部分を介して標的細胞に方向付けるまたは標的化する場合、改変ＩＦＮα１によるＩＦＮＡＲ活性化の回復および誘導を維持するまたはその実質的低下を回避することを含む、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体において野生型ＩＦＮα１に比較して改変ＩＦＮα１のＩＦＮＡＲ活性化を維持するまたはその実質的低下を回避する、１個または複数の変異を含む、バリアントである。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は改変され、すなわち、バリアントであり、ＩＦＮα１中に１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、ＩＦＮα１の生物活性を低減する（「変異による減弱化」と呼ばれることもある）。例えば、１個または複数の変異は、治療受容体に対するＩＦＮα１インターフェロンの親和性および／または活性を低減し得る。ある実施形態では、治療受容体は、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）であり、これは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットから構成される。ある実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲ１に対するその親和性および／または活性を低減する１個または複数の変異を含む。別の実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲ２に対するその親和性および／または活性を低減する１個または複数の変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲ１に対するその親和性および／または活性を低減する１個または複数の変異を含み、ＩＦＮＡＲ２に対するその親和性および／または活性を低減する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα１の治療受容体、例えば、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２および／またはＩＦＮＡＲに対する親和性および／または活性の低下（「変異による減弱化」）は、ターゲティング部分を介した標的細胞への改変ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の方向付けまたは標的化時に、誘導および回復され得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２および／またはＩＦＮＡＲに対するその親和性および／または活性を低減する１個または複数の変異を含む改変ＩＦＮα１バリアント（「変異による減弱化」）は、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の生成物の均一性および医薬品特性を改善するために望ましくないジスルフィド対形成を低減し、同時に、ターゲティング部分を介して標的細胞に方向付けるまたは標的化する場合改変ＩＦＮα１（「変異による減弱化」）によるＩＦＮＡＲ活性化活性の誘導および／または回復を維持するまたはその実質的低下を回避する、１個または複数の変異をさらに含む。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含むキメラタンパク質複合体は、改変されてもよい、１種または複数の追加のシグナル伝達物質、例えば、限定されないが、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子を含む。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む、キメラタンパク質複合体は、非標的化および／または非改変ＩＦＮα１または非改変野生型ＩＦＮα、例えば、ＩＦＮα２またはＩＦＮα２ｂに比べて、改善された安全性および／または治療活性および／または薬物動態プロファイル（例えば、延長された血清半減期）を提供する。
種々の実施形態では、キメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む、キメラタンパク質複合体は、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメイン（例えば、限定されないが、単一ドメイン抗体を含む、種々の抗体フォーマットを含む、抗原認識ドメイン）を有する１個または複数のターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、１個または複数の免疫細胞上で認められるものを含む、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有し、免疫細胞は、限定されないが、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、Ｔ調節細胞（Ｔｒｅｇ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍および腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１およびＭ２マクロファージ）、Ｂ細胞、Ｂ調節性（Ｂｒｅｇ）細胞、好中球、単球、骨髄由来細胞、および樹状細胞を含み得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、腫瘍細胞、内皮細胞、上皮細胞、間葉細胞、間質細胞または疾患に特に関連するものを含む特定の臓器および／または組織に特徴的なおよび／または特有の他の細胞型の１種または複数上で認められるものを含む、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合し、１種または複数の免疫細胞を効果的に動員する。いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、１個または複数の腫瘍細胞上で見つけることができる。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む、キメラタンパク質複合体は、免疫細胞、例えば、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制する、または他の免疫細胞を調節できる免疫細胞を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含むキメラタンパク質複合体は、作用部位で免疫細胞を調節する、または自己免疫疾患、炎症性疾患、感染症、代謝および／または心臓血管疾患に関連する作用部位（非限定的例であるが、疾患微小環境など）に免疫細胞を動員し得る。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、非細胞構造の一部である目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。
種々の実施形態では、キメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含む、本発明のキメラタンパク質複合体は、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、心臓血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝疾患および多くの他の疾患および障害などの種々の疾患または障害の治療に使用され、かつ本発明は、種々の治療方法を包含する。
図１Ａ～Ｆ、２Ａ～Ｈ、３Ａ～Ｈ、４Ａ～Ｄ、５Ａ～Ｆ、６Ａ～Ｊ、７Ａ～Ｄ、８Ａ～Ｆ、９Ａ～Ｊ、１０Ａ～Ｆ、１１Ａ～Ｌ、１２Ａ～Ｌ、１３Ａ～Ｆ、１４Ａ～Ｌ、１５Ａ～Ｌ、１６Ａ～Ｊ、１７Ａ～Ｊ、１８Ａ～Ｆ、および１９Ａ～Ｆは、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体の種々の非限定的概略図の例を示す。いくつかの実施形態では、それぞれの概略図は、本発明の組成物である。図中で該当する場合には、「ＴＭ」は、本明細書に記載の「ターゲティング部分」を意味し、「ＳＡ」は、本明細書に記載の「シグナル伝達物質」を意味し、
Figure 2022534837000002
 は、本明細書に記載の任意選択の「リンカー」であり、２つの長い平行長方形は、任意選択で、同様に本明細書で記載のエフェクターノックアウトおよび／または安定化変異を有し、例えば、本明細書に記載のＩｇＧ１由来の、ＩｇＧ２由来の、またはＩｇＧ４由来のヒトＦｃドメインであり、片方が突出部を有し、他方が陥凹部を有する２つの長い平行長方形は、本明細書で記載のノブインホールおよび／またはイオン対（ａ／ｋ／ａ荷電対、イオン結合、または荷電残基対）変異を有し、および任意選択で、本明細書で記載のエフェクターノックアウトおよび／または安定化変異を有し、例えば、同様に本明細書に記載のＩｇＧ１由来の、ＩｇＧ２由来の、またはＩｇＧ４由来のヒトＦｃドメインである。
ホモダイマー２鎖複合体の例を示す。これらの図は、ホモダイマー２鎖複合体の実例となる構造を示す。 ２個のターゲティング部分（ＴＭ）（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、より多くのターゲティング部分が存在する場合もある）を有するホモダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ボックスで示す構築物（すなわち、図２Ｇおよび２Ｈ）は、ＴＭ１とＴＭ２の間、またはＴＭ１とＦｃの間にシグナル伝達物質（ＳＡ）を有する。 ２種のシグナル伝達物質（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合もある）を有するホモダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ボックスで示す構築物（すなわち、図３Ｇおよび３Ｈ）は、ＳＡ１とＳＡ２の間にＴＭを、またはＮ末端またはＣ末端にＴＭを有する。 分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＴＭおよびＦｃのホール鎖上にＳＡを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。 分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上に両ＴＭおよびＦｃのホール鎖上にＳＡを有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。 分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＴＭおよびＦｃのホール鎖上にＳＡを有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。これらの配向および／または構造では、１種のＳＡはノブ鎖上にあり、１種のＳＡはホール鎖上にある。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。 分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上のＳＡおよびＦｃのホール鎖上のＴＭを有する、実例となるヘテロダイマー２鎖複合体を示す。 分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＦｃのホール鎖上に両ＴＭを有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。 分離したＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＦｃのホール鎖上にＴＭを有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。これらの配向および／または構造では、１種のＳＡはノブ鎖上にあり、１種のＳＡはホール鎖上にある。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。 同じ鎖上のＴＭおよびＳＡ、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上のＳＡおよびＴＭの両方を有する、実例となるヘテロダイマー２鎖複合体を示す。 同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。 同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのノブ鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。 同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ、すなわち、Ｆｃのホール鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有する、実例となるヘテロダイマー２鎖複合体を示す。 同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのホール鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２個のターゲティング部分（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのターゲティング部分が存在する）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２の位置は、交換可能である。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。 同じ鎖上にＴＭおよびＳＡ鎖、すなわち、Ｆｃのホール鎖上にＳＡおよびＴＭの両方を有し、２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合がある）を有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＳＡ１およびＳＡ２の位置は、交換可能である。 ２個のターゲティング部分（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、より多くのターゲティング部分が存在する場合もある）ならびにノブＦｃ上にＳＡおよび各鎖上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。 ２個のターゲティング部分（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、より多くのターゲティング部分が存在する場合もある）ならびにホールＦｃ上にＳＡおよび各鎖上にＴＭを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。いくつかの実施形態では、ＴＭ１およびＴＭ２は同一であり得る。 ２種のシグナル伝達物質（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合もある）を有し、分離したＳＡおよびＴＭ鎖：ノブＦｃ上にＳＡおよびホールＦｃ上にＴＭを有する、実例となるヘテロダイマー２鎖複合体を示す。 ２種のシグナル伝達物質（本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、より多くのシグナル伝達物質が存在する場合もある）を有し、分離したＳＡおよびＴＭ鎖：ノブＦｃ上にＴＭおよびホールＦｃ上にＳＡを有する、ヘテロダイマー２鎖複合体の例を示す。 ＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞に対するＩＦＮα１およびＣｌｅｃ９Ａ ＶＨＨ Ｆｃ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生物活性を示す。親ＨＬ１１６または派生ＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈したＦｃ ＡＦＮで６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）を、プロットする。 標的化時の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮα１（本明細書ではＩＦＮα１としても表される）およびＩＦＮ－α２（本明細書ではＩＦＮα２としても表される）シグナル伝達を示す。健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、ＣＤ２０について染色し、その後、段階希釈のＩＦＮα２（すなわち、ターゲティング部分なし）、ＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα２（ＣＤ２０特異的ＶＨＨターゲティング部分および野生型ＩＦＮα２キメラ）、ＩＦＮα１（すなわち、ターゲティング部分なし）、またはＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα１（ＣＤ２０特異的ＶＨＨターゲティング部分および野生型ＩＦＮα１キメラ）で１５分間刺激した。ＳＴＡＴ１リン酸化を、ＦＡＣＳで定量化し、ＣＤ２０陽性およびＣＤ２０陰性ＰＢＭＣに関しプロットした。ＩＦＮα２のデータは図２１Ａに、ＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα２のデータは図２１Ｂに、ＩＦＮα１のデータは図２１Ｃに、およびＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα１のデータは図２１Ｄに示される。 標的化時のＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈＣＤ２０細胞におけるＩＦＮα１およびＩＦＮα２シグナル伝達を示す。親ＨＬ１１６または由来ＨＬ１１６－ｈｕＣＤ２０細胞を、段階希釈のＩＦＮα２（すなわち、ターゲティング部分なし）、ＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα２（ＣＤ２０特異的ＶＨＨターゲティング部分および野生型ＩＦＮα２キメラ）、ＩＦＮα１（すなわち、ターゲティング部分なし）、またはＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα１で６時間刺激した。３回の繰り返し測定の平均ルシフェラーゼ値（±ＳＴＤＥＶ）を、プロットする。ＩＦＮα２のデータは図２２Ａに、ＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα２のデータは図２２Ｂに、ＩＦＮα１のデータは図２２Ｃに、およびＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα１のデータは図２２Ｄに示される。 緩衝液またはＦｌｔ３Ｌ－ＩＦＮα１で治療後のヒト化マウスにおける腫瘍増殖曲線を示す。時点毎の５または６匹の動物の平均値（ｍｍ３単位）（＋ＳＥＭ）を、プロットする。 ＩＦＮα１ ＡＦＮのＨＬ１１６レポーターに対する生物活性を示す。ＨＬ１１６またはＨＬ１１６－Ｃｌｅｃ９Ａ細胞を、段階希釈した野生型ＩＦＮα２またはＩＦＮα１ ＡＦＮで６時間刺激した。平均ルシフェラーゼ活性（±ＳＴＤＥＶ）を、プロットする。 ＩＦＮα２またはＩＦＮα１ベースＡＦＮによるＣｌｅｃ９Ａ－／ＣＤ１４１－およびＣｌｅｃ９Ａ＋／ＣＤ１４１＋ ＰＢＭＣにおけるｐＳＴＡＴ１活性を示す。 ＨＬ１１６レポーターに対するＰＤ－Ｌ１標的化ＩＦＮα１（図２６Ａ）およびＩＦＮα２（図２６Ｂ）ＡＦＮの生物活性を示す。ＨＬ１１６細胞を、段階希釈した野生型ＩＦＮα２またはＩＦＮα１ ＡＦＮで６時間刺激した。平均ルシフェラーゼ活性（±ＳＴＤＥＶ）を、プロットする。
本発明は、一部には、ＩＦＮα１を含む、標的化キメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体が、非融合の、野生型ＩＦＮα１よりも大幅に優れた活性および／または標的選択性を示し、有益な治療特性および医薬品特性ならびに低減された副作用を示すという発見に基づいている。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体は、高度に標的選択性であり、ＩＦＮＡＲ１／２受容体シグナル伝達の条件付きおよび／または制御された調節を可能にし、高活性でありおよび／または長時間作用活性および／または長時間作用性であると同時に最小オフターゲット効果を示し最小限の副作用を誘発する。
本発明はまた、キメラタンパク質、キメラタンパク質複合体（Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む）、および／またはキメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含むキメラタンパク質複合体をコードする核酸を含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、キメラタンパク質、およびＦｃベースキメラタンパク質複合体を含むキメラタンパク質複合体をコードする核酸を含む、宿主細胞も含む。本発明は、種々の疾患の治療のための本明細書に記載の、キメラタンパク質、キメラタンパク質複合体（Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む）、キメラタンパク質およびキメラタンパク質複合体をコードする核酸（Ｆｃベースキメラタンパク質複合体を含む）、医薬組成物および／または宿主細胞の使用をさらに含む。
インターフェロンアルファ１またはそのバリアント
一態様では、本発明は、遺伝子改変インターフェロンを含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体を提供する。一態様では、本発明は、野生型ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体を提供する。種々の実施形態では、野性型ＩＦＮα１は、次のアミノ酸配列を含む：
ＣＤＬＰＥＴＨＳＬＤＮＲＲＴＬＭＬＬＡＱＭＳＲＩＳＰＳＳＣＬＭＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＰＡＩＳＶＬＨＥＬＩＱＱＩＦＮＬＦＴＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＤＬＬＤＫＦＣＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＭＱＥＥＲＶＧＥＴＰＬＭＮＡＤＳＩＬＡＶＫＫＹＦＲＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲＳＬＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＥ（配列番号１）。
種々の実施形態では、本発明は、１個または複数のターゲッティング部分に融合された野生型ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体を提供する。いくつかの実施形態では、例えば、遺伝子融合または結合などによるキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体への野生型ＩＦＮα１の組み込みが、ＩＦＮα１の生物活性を低減する（「融合ＩＦＮα１による減弱化」）。例えば、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体中に組み込まれた野生型ＩＦＮα１は、治療受容体に対し野生型ＩＦＮα１インターフェロンに比べて、低減された親和性および／または活性を有し得る。ある実施形態では、治療受容体は、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）であり、これは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットから構成される。いくつかの実施形態では、治療受容体、例えば、ＩＦＮＡＲに対する野生型ＩＦＮα１の親和性および／または活性の低下は、ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体のターゲティング部分を介した標的細胞に対する方向付けまたは標的化時に、誘導および回復され得る。いくつかの実施形態では、標的細胞でのＩＦＮα１媒介ＩＦＮＡＲ活性化の誘導および回復は、野生型（非キメラ）ＩＦＮα１で達成されるＩＦＮＡＲ活性化と類似であるかまたはそれより高いレベルに達し得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の生成物の均一性および医薬品特性を改善するために望ましくないジスルフィド対形成を低減し、同時に、ターゲティング部分を介して標的細胞に方向付けるまたは標的化する場合に改変ＩＦＮα１によるＩＦＮＡＲ活性化の回復および誘導を維持するまたはその実質的低下を回避することを含む、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体において野生型ＩＦＮα１に比較して改変ＩＦＮα１のＩＦＮＡＲ活性化を維持するまたはその実質的低下を回避する、１個または複数の変異を含む、バリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は、望ましくないジスルフィド対形成を低減する１個または複数の変異を含むバリアントであり、１個または複数の変異は、例えば、配列番号１を基準にして、アミノ酸位置Ｃ１、Ｃ２９、Ｃ８６、Ｃ９９、またはＣ１３９にある。いくつかの実施形態では、位置Ｃ８６での変異は、例えば、Ｃ８６ＳまたはＣ８６ＡまたはＣ８６Ｙであり得る。ＩＦＮα１のこれらのＣ８６変異体は、還元システインによる凝集変異体（ｒｅｄｕｃｅｄ－ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔ）と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、配列番号１を基準にして位置Ｃ１、Ｃ８６およびＣ９９での変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ１、Ｃ８６およびＣ９９のいずれかは、欠失または置換され得る。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は、改変され、すなわち、バリアントであり、ＩＦＮα１中に１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、ＩＦＮα１の生物活性を低減する（「変異による減弱化」）。例えば、１個または複数の変異は、治療受容体に対するＩＦＮα１インターフェロンの親和性および／または活性を低減し得る。ある実施形態では、治療受容体は、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）であり、これは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットから構成される。ある実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲ１に対するその親和性および／または活性を低減する、１個または複数の変異を含む。別の実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲ２に対するその親和性および／または活性を低減する、１個または複数の変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲ１に対するその親和性および／または活性を低減する、１個または複数の変異を含み、ＩＦＮＡＲ２に対するその親和性および／または活性を低減する、１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα１の治療受容体、例えば、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２および／またはＩＦＮＡＲに対する親和性および／または活性の低下（「変異による減弱化」）は、ターゲティング部分を介した標的細胞への改変ＩＦＮα１を含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の方向付けまたは標的化時に、誘導および回復され得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２および／またはＩＦＮＡＲに対するその親和性および／または活性を低減する１個または複数の変異を含む改変ＩＦＮα１バリアント（「変異による減弱化」）は、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の生成物の均一性および医薬品特性を改善するために望ましくないジスルフィド対形成を低減し、同時に、ターゲティング部分を介して標的細胞に方向付けるまたは標的化する場合、改変ＩＦＮα１（「変異による減弱化」）によるＩＦＮＡＲ活性化活性の誘導および／または回復を維持するまたはその実質的低下を回避する、１個または複数の変異をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体の生成物の均一性および医薬品特性を改善するために望ましくないジスルフィド対形成を低減し、同時に、ターゲティング部分を介して標的細胞に方向付けるまたは標的化する場合、改変ＩＦＮα１によるＩＦＮＡＲ活性化の回復および誘導を維持する、またはその実質的低下を回避することを含む、キメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体において野生型ＩＦＮα１に比較して改変ＩＦＮα１のＩＦＮＡＲ活性化を維持するまたはその実質的低下を回避する、１個または複数の変異を含むバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１は、望ましくないジスルフィド対形成を低減する１個または複数の変異を含むバリアントであり、１個または複数の変異は、例えば、配列番号１を基準にして、アミノ酸位置Ｃ１、Ｃ２９、Ｃ８６、Ｃ９９、またはＣ１３９にある。いくつかの実施形態では、位置Ｃ８６での変異は、例えば、Ｃ８６ＳまたはＣ８６ＡまたはＣ８６Ｙであり得る。ＩＦＮα１のこれらのＣ８６変異体は、還元システインによる凝集変異体（ｒｅｄｕｃｅｄ－ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｍｕｔａｎｔ）と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、配列番号１を基準にして位置Ｃ１、Ｃ８６およびＣ９９に変異を含む。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、シグナル伝達物質として、改変型のＩＦＮα１、すなわち、ＩＦＮα１変異体を含むＩＦＮα１バリアントを含む。種々の実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、インターフェロンの変異体、機能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはフラグメントを包含する。
追加のＩＦＮα１バリアント配列は、当技術分野において既知である。種々の実施形態では、改変ＩＦＮα１は、ＩＦＮα１インターフェロンバリアントのいずれか既知のアミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、本明細書で開示のＩＦＮα１またはＩＦＮα１バリアント配列のいずれか、例えば、配列番号１との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的および／または非保存的置換を含み得る。
「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒特性における類似性に基づいて行われ得る。２０種の天然アミノ酸は、次の６つの標準的アミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；ａｎｄ（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループの同じグループ内に記載の別のアミノ酸による交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕによる交換は、そのように改変されたポリペプチド中で１個の負電荷を保持する。さらに、グリシンおよびプロリンは、それらのαヘリックスを破壊する能力に基づいて相互に置換され得る。
本明細書で使用される場合、「非保存的置換」は、あるアミノ酸の、上記６つの標準的アミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループに記載の別のアミノ酸による交換として定義される。
種々の実施形態では、置換はまた、非古典的アミノ酸（例えば、セレノシステイン、ピロールリジン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡおよびδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、共通アミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、βメチルアミノ酸などのデザイナーアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、および一般的にアミノ酸類似体）も含む。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１は、１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、変異は、ＩＦＮα１バリアントが、非変異型、例えば、野生型のＩＦＮα１（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＦＮα１）に比べて、低減された結合親和性、低減された内因性活性、および低減された特定の生物活性の１種または複数などの１種または複数の減弱化された活性を有することを可能にする。例えば、非変異型、例えば、野生型のＩＦＮα１に比べて、低減された結合親和性、低減された内因性活性、および低減した特定の生物活性などの１種または複数の減弱化された活性は、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するものであり得る。結果として、種々の実施形態では、変異は、ＩＦＮα１バリアントが、非変異型、例えば、野生型のＩＦＮα１に比べて、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１は、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減する変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１により与えられる活性は、治療受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、ＩＦＮα１は、治療受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、治療受容体に対し低減された活性化作用を有するＩＦＮα１バリアントをもたらす。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα１の治療受容体に対する低減された親和性または活性は、ターゲティング部分への結合によりまたはキメラタンパク質もしくはキメラタンパク質複合体、例えば、本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体中へのターゲティング部分の包含時に誘導可能または回復可能である。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１の活性は、いくつかの事例では、本明細書に記載されるターゲティング部分との融合によるなどの、別のタンパク質とのその融合により低減または減弱化される。他の実施形態では、ＩＦＮα１の活性は、ＩＦＮα１を改変することにより、例えば、本明細書に記載の変異の導入により、低減または減弱化される。いくつかの実施形態では、活性の減弱化は、ＩＦＮα１をターゲティング部分に結合することにより、または結合したターゲティング部分の作用により、回復され得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、その結合により、またはその作用によりＩＦＮα１の活性を誘導する。
他の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性または活性は、ターゲティング部分との結合によりまたはキメラタンパク質もしくはキメラタンパク質複合体、例えば、本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体中へのターゲティング部分の包含時に十分に誘導可能または回復可能ではない。種々の実施形態では、本発明の治療用キメラタンパク質、キメラタンパク質複合体、またはＦｃベースキメラタンパク質複合体は、野生型ＩＦＮα１または１個または複数の変異を有するＩＦＮα１バリアントが、野生型ＩＦＮα１（非融合）に比べて治療受容体に対する弱い結合親和性または活性を示すという理由で、オフターゲット効果を低減させる。種々の実施形態では、これは、例えば、野生型ＩＦＮα１または他のＩ型インターフェロンで観察される副作用を低減する。種々の実施形態では、ＩＦＮα１構築物および／またはＩＦＮα１バリアントは、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的細胞型に対しその効果を実質的に有し、これは望ましくない交差反応性および副作用を大きく低減する。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮα１バリアントが、１個または複数の治療受容体に対する減弱化されたまたは低減された親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能な）を有するようにさせる、１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体に対する低減された親和性は、治療受容体からの活性および／またはシグナル伝達の減弱化を可能にする。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異を有する。一実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２サブユニットの両方に対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異を有する。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異、およびＩＦＮＡＲ２に対する結合またはその親和性を実質的に低減または除去する、１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなＩＦＮα１バリアントを有するキメラタンパク質およびＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、標的選択的ＩＦＮＡＲ１活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ１活性は、ターゲティング部分による標的化を介して、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に、誘導可能または回復可能である）。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲ２に対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異、およびＩＦＮＡＲ１に対する結合またはその親和性を実質的に低減または除去する、１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなＩＦＮα１バリアントを有するキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、標的選択的ＩＦＮＡＲ２活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ２活性は、ターゲティング部分による標的化を介して、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に、誘導可能または回復可能である）。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、ＩＦＮＡＲ１に対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異、およびＩＦＮＡＲ２に対するその結合または親和性を低減する、１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、このようなＩＦＮα１バリアントを有するキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、標的選択的ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２活性を提供できる（例えば、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２活性は、ターゲティング部分による標的化を介して、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に、誘導可能または回復可能である）。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、野生型ＩＦＮα１に比較して、治療受容体（例えば、ＩＦＮＡＲまたはそのサブユニットＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２のいずれか１個）に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型ＩＦＮα１に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、受容体に対するＩＦＮα１バリアントの親和性を低減させる、１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントの受容体に対する結合親和性は、ターゲティング部分のその受容体に対する結合親和性より低い。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差は、同じ細胞上のＩＦＮα１バリアント／受容体とターゲティング部分／受容体との間にある。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、ＩＦＮα１バリアントが、局在化されたオンターゲット効果を有し、かつ野生型ＩＦＮα１で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。
受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価され得る。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質複合体は、（ａ）インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１またはそのバリアント）、および（ｂ）１個または複数のターゲティング部分を含み、ターゲティング部分は、目的の抗原または受容体の特異的に結合する認識ドメインを含み；ＩＦＮα１またはそのバリアント、および１個または複数のターゲティング部分は、複合体形成を引き起こすドメイン（例えば、複合体形成ドメイン）と連結される。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質複合体は、例えば、静電相互作用、水素結合、および／または疎水性効果を使って、相互に作用する、１個または複数のタンパク質またはペプチド（例えば、複合体形成ドメイン）をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質複合体は、ホモマーである（例えば、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）またはそのバリアントおよび１個または複数のリンカーで連結された１個または複数のターゲティング部分を含む、２個以上の本明細書に記載のキメラタンパク質を含むもの）。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質複合体は、ヘテロマーである（例えば、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）またはそのバリアントおよび１個または複数のリンカーで連結された１個または複数のターゲティング部分および別のタンパク質を含む、１個のキメラタンパク質を含むもの）。種々のタンパク質相互作用ドメイン（例えば、複合体形成ドメイン）がタンパク質複合体が生成するために用いられてきており、本発明のキメラタンパク質複合体を作製するために使用できる。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質複合体は、ロイシンジッパー、タンパク質のＪｕｎおよびＦｏｓファミリー、ヘリックスターンヘリックス自己二量体化ペプチド、コラーゲンおよびｐ５３の三量体および四量体サブドメインを用いることにより作製できる（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，５０７，２２２号に記載のタンパク質複合体の作製方法を参照されたい）。ヘテロマー複合体を作製する他の方法は、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ １９８４；９１：１１４０８－１１４１２）により記載の電荷ベースヘテロダイマーまたは例えば、Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００８；１５：９０８－９１９）により記載のヘテロダイマー化ロイシンジッパーまたはＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ ２０１９；５６５：１０６－１１１）により記載の設計されたヘテロダイマーを含む。種々の実施形態では、これらのキメラタンパク質複合体は、Ｆｃベースではない。いくつかの実施形態では、種々のタンパク質相互作用ドメインを、本明細書で記載のＦｃドメイン（Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の場合）の代わりに使用してタンパク質複合体を形成できる。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて改善された標的選択性および安全性を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて改善された標的選択活性を有する、野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、条件付き活性を可能にする。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などの、キメラタンパク質複合体は、Ｆｃに融合されないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、向上した安全性、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、向上した安全性は、本発明のＦｃベースキメラタンパク質などのキメラタンパク質複合体が、Ｆｃに融合されないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、野生型シグナル伝達物質のより低い毒性（例えば、全身性毒性および／または組織／器官関連毒性）；および／または低減されたまたは実質的に除去された副作用；および／または高められた耐容性、低減されたまたは実質的に除去された有害事象；および／または低減されたまたは実質的に除去された；および／または拡大された治療濃度域をもたらすことを意味する。
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、本明細書に記載の１個または複数のターゲティング部分との結合により、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体中への包含時に、誘導可能または回復可能である。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、１個または複数のその受容体に対し、低減された、実質的に低減または除去された親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能である）を有する野生型シグナル伝達物質を含む。種々の実施形態では、シグナル伝達物質の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、例えば、Ｆｃに融合されていないシグナル伝達物質、または複合体、例えば、限定されないが、ヘテロダイマー複合体ではないシグナル伝達物質に比べて、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減されたシグナル伝達物質の内因性活性を有する野生型シグナル伝達物質を含む。
いくつかの実施形態では、受容体に対し減弱化された活性、治療受容体に対し弱められた親和性は、ターゲティング部分との結合により、または治療作用部位で抗原に対する高い親和性を有する（例えば、本明細書で記載の抗体または抗体フォーマット）、本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体中への包含時に、誘導可能または回復可能である。標的化は、ターゲティング部分にＩＦＮα１またはそのバリアントを結合することにより、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体中へのその包含時に、実現される。ある実施形態では、ＩＦＮα１またはそのバリアントは、そのアミノ末端を介してターゲティング部分に結合される。別の実施形態では、ＩＦＮα１またはそのバリアントは、そのカルボキシ末端を介してターゲティング部分に結合される。このように、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、いくつかの実施形態では、治療受容体の位置で局在化された、オンターゲットの、および制御された治療作用を提供する。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１インターフェロンは、配列番号１を基準にして、位置Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２３、Ｓ２５、Ｌ３０、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｑ４０、Ｄ１１５、Ｌ１１８、Ｋ１２１、Ｒ１２６、Ｅ１３３、Ｋ１３４、Ｋ１３５、Ｒ１４５、Ａ１４６、Ｍ１４９、Ｒ１５０、Ｓ１５３、Ｌ１５４、およびＮ１５７の１個または複数のアミノ酸に変異を有するように改変される。変異は、任意選択で、疎水性の変異であってよく、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンから選択され得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１インターフェロンは、配列番号１を基準にして、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１５Ｒ、Ｌ１１８Ａ、Ｋ１２１Ａ、Ｋ１２１Ｅ、Ｒ１２６Ａ、Ｒ１２６Ｅ、Ｅ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｋ１３５Ａ、Ｒ１４５Ａ、Ｒ１４５Ｄ、Ｒ１４５Ｅ、Ｒ１４５Ｇ、Ｒ１４５Ｈ、Ｒ１４５Ｉ、Ｒ１４５Ｋ、Ｒ１４５Ｌ、Ｒ１４５Ｎ、Ｒ１４５Ｑ、Ｒ１４５Ｓ、Ｒ１４５Ｔ、Ｒ１４５Ｖ、Ｒ１４５Ｙ、Ａ１４６Ｄ、Ａ１４６Ｅ、Ａ１４６Ｇ、Ａ１４６Ｈ、Ａ１４６Ｉ、Ａ１４６Ｋ、Ａ１４６Ｌ、Ａ１４６Ｍ、Ａ１４６Ｎ、Ａ１４６Ｑ、Ａ１４６Ｒ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ａ１４６Ｙ、Ｍ１４９Ａ、Ｍ１４９Ｖ、Ｒ１５０Ａ、Ｓ１５３Ａ、Ｌ１５４Ａ、およびＮ１５７Ａから選択される１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１変異体は、配列番号１を基準にして、Ｌ３０Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ＿Ｑ６２Ｓ、Ｒ３３Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｍ１４９Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｌ１５４Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｒ１４５Ａ／Ｈ５８Ｙ／Ｅ５９Ｎ／Ｑ６２Ｓ、Ｄ１１５Ａ／Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ／Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ／Ｒ１２１Ａ／Ｋ１２２Ａ、Ｒ１２１Ａ／Ｋ１２２Ａ、およびＲ１２１Ｅ／Ｋ１２２Ｅから選択される１個または複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１インターフェロンまたはそのバリアントは、配列番号１を基準にして、アミノ酸位置Ｃ１、Ｃ２９、Ｃ８６、Ｃ９９、またはＣ１３９で１個または複数の変異を有するように改変される。この場合、Ｂｅｉｌｈａｒｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ６．６（１９８６）：６７７－６８５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、本発明の改変ＩＦＮα１に導入し得るＩＦＮα１の種々の変異を記載している。位置Ｃ８６での変異は、例えば、Ｃ８６ＳまたはＣ８６ＡまたはＣ８６Ｙであり得る。ＩＦＮα１のこれらのＣ８６変異体は、還元システインによる凝集変異体と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１バリアントは、配列番号１を基準にして位置Ｃ１、Ｃ８６およびＣ９９に変異を含む。
インターフェロンまたはそのバリアントを含む治療薬
ターゲティング部分の細胞動員
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有する１個または複数のターゲティング部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個以上のターゲティング部分を含み得る。例示的実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、２個以上のターゲティング部分を含み得る。このような実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、２個の異なる細胞（例えば、シナプスを作るために）または同じ細胞（例えば、より高濃度のシグナル伝達物質効果を得るために）を標的にできる。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＩＦＮα１またはそのバリアント、Ｆｌｔ３Ｌであるターゲティング部分およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識する１個のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＩＦＮα１またはそのバリアント、Ｆｌｔ３Ｌであるターゲティング部分およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識する２個のターゲティング部分を含む。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＩＦＮα２またはそのバリアント、Ｆｌｔ３Ｌであるターゲティング部分およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識する１個のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＩＦＮα２またはそのバリアント、Ｆｌｔ３Ｌであるターゲティング部分およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識する２個のターゲティング部分を含む。
種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、１個または複数の免疫細胞上で認めることができ、免疫細胞は、限定されないが、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍または腫瘍関連マクロファージ（例えば、Ｍ１またはＭ２マクロファージ）、Ｂ細胞、Ｂｒｅｇ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含み得る。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合し、直接または間接的に１個または複数の免疫細胞を効果的に動員する。いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、１個または複数の腫瘍細胞上で見つけられ得る。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に、直接または間接的に免疫細胞を動員し得る。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、免疫細胞、例えば、腫瘍細胞を死滅させるおよび／または抑制できる免疫細胞を、作用部位（非限定的例であるが、腫瘍微小環境など）に直接的にまたは間接的に動員し得る。
種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、非細胞構造の一部である標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する認識ドメインを有するターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、無傷の細胞または細胞構造の不可欠な構成要素ではない。いくつかの実施形態では、抗原または受容体は、細胞外の抗原または受容体である。いくつかの実施形態では、標的は、非タンパク質性の非細胞マーカーであり、これらは、限定されないが、例えば、壊死腫瘍細胞から放出されたＤＮＡ、などのＤＮＡまたはＲＮＡを含む、核酸またはコレステロールなどの細胞外沈着物を含む。
いくつかの実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、ストローマもしくは細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の非細胞成分またはそれと関連するマーカーの一部である。本明細書で使用される場合、ストローマは、組織または器官の連結および支持フレームワークを指す。ストローマは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および細胞外分子と共に線維芽細胞／筋線維芽細胞／膠細胞、上皮、脂肪、免疫、血管、平滑筋、および免疫細胞などの細胞の寄せ集めを含み得る。種々の実施形態では、目的の標的（例えば、抗原、受容体）は、細胞外マトリックスおよび細胞外分子などのストローマの非細胞成分の一部である。本明細書で使用される場合、ＥＣＭは、全ての組織および器官内に存在する非細胞成分を指す。ＥＣＭは、限定されないが、タンパク質、糖タンパク質、プロテオグリカン、および多糖類を含む生化学的に別々の成分の多数の集まりからなる。これらのＥＣＭ成分は通常、隣接する細胞により産生され、エキソサイトーシスによりＥＣＭ中に分泌される。分泌されると、ＥＣＭ成分は多くの場合、集合して、巨大分子の複合体ネットワークを形成する。種々の実施形態では、キメラタンパク質または本発明のＦｃベースキメラタンパク質などのキメラタンパク質複合体は、ＥＣＭの任意の成分上に位置する標的（例えば、抗原または受容体または非タンパク質分子）を認識するターゲティング部分を含む。ＥＣＭの成分の例としては、限定されないが、プロテオグリカン、非プロテオグリカン多糖類、繊維および他のＥＣＭタンパク質またはＥＣＭ非タンパク質、例えば、多糖類および／または脂質、またはＥＣＭ関連分子（例えば、タンパク質または非タンパク質、例えば、多糖類、核酸および／または脂質）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭプロテオグリカン上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。プロテオグリカンはグリコシル化タンパク質である。塩基性プロテオグリカン単位は、１個または複数の共有結合グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖を有するコアタンパク質を含む。プロテオグリカンは、正電荷のナトリウムイオン（Ｎａ＋）を引き付ける正味負電荷を有し、これは、浸透を介して水を引き付け、ＥＣＭおよび常在性細胞を水和した状態に保持する。プロテオグリカンはまた、成長因子を捕捉し、ＥＣＭ内に貯蔵し得る。本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体により標的とされ得るプロテオグリカンの例としては、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびケラタン硫酸が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、ターゲティング部分は、ヒアルロン酸などの非プロテオグリカン多糖類上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＣＭ繊維上の標的（例えば、抗原、受容体）を認識する。ＥＣＭ繊維は、コラーゲン繊維およびエラスチン繊維を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、コラーゲンまたはコラーゲン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。コラーゲンは、ＥＣＭ中で最も豊富なタンパク質である。コラーゲンはＥＣＭ中に線維性タンパク質として存在し、常在性細胞に対し構造支持を与える。１つまたは複数の実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、線維性コラーゲン（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＸＩ型）、ＦＡＣＩＴコラーゲン（ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＶ型）、短鎖コラーゲン（ＶＩＩＩ、Ｘ型）、基底膜コラーゲン（ＩＶ型）、および／またはＶＩ、ＶＩＩ、またはＸＩＩＩ型コラーゲンを含む、ＥＣＭ内に存在する様々な種類のコラーゲンを認識し、これに結合する。エラスチン繊維は、組織に弾性を与え、組織が必要に応じ伸縮し、その後、元の状態に戻ることを可能にする。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、エラスチンまたはエラスチン繊維上の１個または複数のエピトープを認識する。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、限定されないが、テネイシン、フィブロネクチン、フィブリン、ラミニン、またはナイドジェン／エンタクチンを含む、１種または複数のＥＣＭタンパク質を認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンを認識し、これに結合する。テネイシン（ＴＮ）ファミリーの糖タンパク質は、少なくとも４種のメンバー：テネイシン－Ｃ、テネイシン－Ｒ、テネイシン－Ｘ、およびテネイシン－Ｗを含む。テネイシンタンパク質の一次構造は、同じ連続配列中に順序づけられたいくつかの共通のモチーフ：アミノ末端７個の反復、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様反復、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン反復、およびカルボキシル末端フィブリノーゲン様球状ドメインを含む。それぞれのタンパク質メンバーは、ＥＧＦ様およびフィブロネクチンＩＩＩ型反復の数および性質における典型的な変動に関連付けられる。アイソフォームバリアントはまた、特にテネイシン－Ｃに対して存在する。２７種を超えるテネイシン－Ｃのスプライスバリアントおよび／またはアイソフォームが知られている。特定の実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシン－ＣＡ１を認識し、これに結合する。同様に、テネイシン－Ｒはまた、種々のスプライスバリアントおよびアイソフォームを有する。テネイシン－Ｒは通常、ダイマーまたはトリマーとして存在する。テネイシン－Ｘは、テネイシンファミリーの最大メンバーであり、トリマーとして存在することが知られている。テネイシン－Ｗは、トリマーとして存在する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、テネイシンタンパク質上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマーおよび／またはトリマーおよび／またはヘキサマー型のテネイシンタンパク質を認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチンを認識し、これに結合する。フィブロネクチンは、細胞をＥＣＭ中のコラーゲン繊維と連結し、細胞がＥＣＭ中を移動することを可能とする糖タンパク質である。インテグリンに結合時には、フィブロネクチンは折り畳みをほどいて機能的ダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーおよび／またはダイマー型のフィブロネクチンを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン上の１個または複数のエピトープを認識する。例示的実施形態では、ターゲティング部分は、フィブロネクチン細胞外ドメインＡ（ＥＤＡ）またはフィブロネクチン細胞外ドメインＢ（ＥＤＢ）を認識する。ＥＤＡレベルの上昇は、乾癬、関節リウマチ、糖尿病、および癌を含む種々の疾患および障害に関連する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＡアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識し、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を癌細胞を含む疾患細胞に向けるのに使用し得る。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＥＤＢアイソフォームを含むフィブロネクチンを認識する。種々の実施形態では、このようなターゲティング部分は、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を腫瘍新生血管を含む腫瘍細胞に向けるのに使用し得る。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリンを認識し、これに結合する。フィブリンは、ＥＣＭのマトリックスネットワーク中に見つかることが多い、もう１種のタンパク質物質である。フィブリンは、フィブリノーゲンに対するプロテアーゼトロンビンの作用により形成され、これにより、フィブリンを重合させる。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマーならびに重合型のフィブリンを認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニンを認識し、これに結合する。ラミニンは、基底膜の主要成分であり、細胞および器官のためのタンパク質ネットワーク基盤である。ラミニンは、α鎖、β鎖、およびγ鎖を含むヘテロトリマータンパク質である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ラミニン上の１個または複数のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマーならびにトリマー型のラミニンを認識する。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェンまたはエンタクチンを認識し、これらに結合する。ナイドジェン／エンタクチンは、高度に保存された硫酸化糖タンパク質ファミリーである。それらは基底膜の主要構造的成分をなし、ラミニンと、基底膜中のコラーゲンＩＶネットワークを連結するように機能する。このファミリーのメンバーは、ナイドジェン－１およびナイドジェン－２を含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ナイドジェン－１および／またはナイドジェン－２上のエピトープを認識する。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的上に存在するエピトープを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の線形エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、線形エピトープは、タンパク質上に存在するアミノ酸の任意の連続配列を指す。別の実施形態では、抗原認識ドメインは、タンパク質上に存在する１個または複数の立体構造エピトープを認識する。本明細書で使用される場合、立体構造エピトープは、抗原認識ドメインにより認識され得る特徴および／または形状および／または三次構造を備えた３次元表面を形成する１個または複数のアミノ酸の部分（これは不連続であってよい）を指す。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかの標的の完全長型および／または成熟型および／またはアイソフォームおよび／またはスプライスバリアントおよび／またはフラグメントおよび／または任意の他の天然または合成の類似体、バリアント、または変異体に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、モノマー、ダイマー、トリマー、テトラマー、ヘテロダイマー、マルチマーおよび会合型を含む、本明細書に記載の任意の型のタンパク質に結合し得る。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、グリコシル化および／またはリン酸化型などの、本明細書に記載の任意の翻訳後修飾型のタンパク質に結合し得る。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡなどの細胞外分子を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＤＮＡを認識する抗原認識ドメインを含む。ある実施形態では、ＤＮＡは、壊死細胞またはアポトーシス腫瘍細胞または他の疾患細胞から細胞外間隙中に脱落する。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、アテローム斑と関連する１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。２つのタイプのアテローム斑が知られている。線維－脂質（線維－脂肪）斑（ｆｉｂｒｏ－ｌｉｐｉｄ（ｆｉｂｒｏ－ｆａｔｔｙ）ｐｌａｑｕｅ）は、動脈の内膜の下の脂質を取り込んだ（ｌｉｐｉｄ－ｌａｄｅｎ）細胞の蓄積を特徴とする。内皮の下には、アテローム性のプラークコアを覆う繊維状キャップが存在する。コアは、増大した組織コレステロールおよびコレステロールエステル含量を有する脂質を取り込んだ細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、ならびに壊死細胞片を含む。進行型プラークでは、プラークの中心コアは通常、細胞外のコレステロール沈着物（死細胞から放出）を含み、これは、空の針状間隙を有するコレステロール結晶の領域を形成する。プラークの周辺部には、より若い泡沫状細胞および毛細血管がある。繊維状プラークはまた、動脈壁内の内膜下にも局在し、壁の肥厚化および増殖、および時には、筋層の若干の萎縮を伴う内腔の飛び飛びに局在化した狭小化をもたらす。繊維状プラークは、コラーゲン繊維（エオシン好性）、カルシウムの沈殿物（ヘマトキシリン好性）および脂質を取り込んだ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、フィブリン、プロテオグリカン、コラーゲン、エラスチン、壊死細胞片、およびカルシウムまたは他の鉱物沈着物または沈殿物などのこれらのプラークの１種または複数の非細胞成分を認識し、これに結合する。いくつかの実施形態では、壊死細胞片は、核酸、例えば、死細胞から放出される ＤＮＡまたはＲＮＡである。
種々の実施形態では、ターゲティング部分は、神経変性疾患と関連する脳プラーク中で見つかる１種または複数の非細胞構造を認識する抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、アルツハイマー病の患者の脳中で見つかるアミロイド斑中に局在する１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。例えば、ターゲティング部分は、ペプチドアミロイドベータを認識し、これに結合する。ペプチドアミロイドベータは、アミロイド斑の主要な成分である。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ハンチントン病の患者で見つかる脳プラーク中にある１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、レヴィー小体認知症および封入体筋炎などの他の神経変性疾患または筋骨格疾病と関連するプラークで見つかる１種または複数の非細胞構造を認識し、これに結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、非細胞構造に結合する２個以上のターゲティング部分を有し得る。いくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分が存在し、１個は細胞を標的にし、一方、もう１個は非細胞構造を標的にする。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、疾患細胞および／またはエフェクター細胞などの細胞を直接にまたは間接的に動員できる。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、腫瘍の免疫攻撃に有利なように免疫細胞を関与させ、免疫細胞のバランスを変化させることができ、またはその方法での用途が見つかる。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、臨床的に重要な部位の免疫細胞の比率を腫瘍を死滅させるおよび／または抑制することができる細胞（例えば、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞またはこれらのサブセット）に有利なように、および腫瘍を保護する細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）；腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、またはこれらのサブセット）に不利なように変化させることができる。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、エフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率を高めることができる。
例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｔ細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、直接または間接的にＴ細胞を動員する。ある実施形態では、認識ドメインは、エフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、エフェクターＴ細胞 を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。エフェクターＴ細胞の例としては、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋）；ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋）；ＣＤ８＋ エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋）；エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌｌｏｗ、ＣＤ４４＋、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋、ＣＣＲ７ｌｏｗ）；セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋；またはＣＣＲ７ｈｉ、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ１５Ｒ＋）；ＣＤ６２Ｌ＋ エフェクターＴ細胞；早期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７＋ ＣＤ６２Ｌ－）および後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７－ ＣＤ６２Ｌ－）（それぞれ、ＴｅｍＥおよびＴｅｍＬ）を含むＣＤ８＋ エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）；ＣＤ１２７（＋）ＣＤ２５（ｌｏｗ／－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ１２７（－）ＣＤ２５（－）エフェクターＴ細胞；ＣＤ８＋ 幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（ｌｏｗ）ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）ＣＤ１２２（ｈｉｇｈ）ｓｃａ（＋））；ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋、ＣＸＣＲ６＋およびＣＣＲ５＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ１２Ｒ＋、ＩＦＮγＲ＋、ＣＸＣＲ３＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３＋、ＣＣＲ４＋およびＣＣＲ８＋；またはαβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ４Ｒ＋、ＩＬ３３Ｒ＋、ＣＣＲ４＋、ＩＬ１７ＲＢ＋、ＣＲＴＨ２＋）；ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）；ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ２３Ｒ＋、ＣＣＲ６＋、ＩＬ１Ｒ＋）；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋ エフェクターＴ細胞、ＩＣＯＳ＋ エフェクターＴ細胞；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７（－）エフェクターＴ細胞；およびＩＬ２、ＩＬ４および／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞が挙げられる。
目的とするＴ細胞抗原の例としては、例えば、下記が挙げられる（該当する場合には、細胞外ドメインも含む）：ＣＤ８、ＣＤ３、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ１３Ｒα１、ＩＬ１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ１Ｒ１およびＴＳＬＰＲ。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示Ｔ細胞抗原を結合する。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上で発現されるチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、Ｃｄ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの１個または複数に対するターゲティング部分を有する。
例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｂ細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、Ｂ細胞 を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的のＢ細胞抗原の例としては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、ＣＤｗ１５０、ＣＳ１、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示Ｂ細胞抗原を結合する。
さらに、例えば、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、ナチュラルキラー細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、ナチュラルキラー細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的のナチュラルキラー細胞抗原の例としては、例えば、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄおよびＵＬＢＰ－３が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示ＮＫ細胞抗原を結合する。
また、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マクロファージ／単球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マクロファージ／単球を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的のマクロファージ／単球抗原の例としては、例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ－ｌ ＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦＲ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦＲ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３およびＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ－１が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示マクロファージ／単球抗原を結合する。
また、いくつかの実施形態では、認識ドメインは、樹状細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、樹状細胞を、例えば、いくつかの実施形態では、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に直接または間接的に動員する。目的の樹状細胞抗原の例としては、例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０、４－Ａｍｉｎｏ－１、８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎα４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４Ｒｌ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、オステオアクチビンＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、ＣＬＥＣ－８、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ／ＣＬＥＣ４Ｃ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、およびバニロイドＲ１が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示ＤＣ抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、限定されないが、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、骨髄細胞、単球、好酸球、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞上の標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、骨髄細胞、単球、好酸球、またはこれらのサブセットを、例えば、いくつかの実施形態では、直接または間接的に、治療部位（例えば、１個または複数の疾患細胞または治療効果を得るために調節されるべき細胞を有する部位）に局在化させる。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、マスト細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、ＮＫＴ細胞、およびＮＫ細胞、またはこれらの誘導体から選択される。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、巨核球および／または血小板に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の巨核球および／または血小板抗原の例としては、例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ、ＧＰＩｂ、ｖＷＦ、ＰＦ４、およびＴＳＰが挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示巨核球および／または血小板抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、赤血球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の赤血球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４１ａ（血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、ＣＤ４１ｂ（ＧＰＩＩｂ）、ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）、ＣＤ１０５、グリコホリンＡ、グリコホリンＣ、ｃ－ｋｉｔ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｈ２（ＭＨＣ－ＩＩ）、およびＲｈ抗原が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの例示赤血球抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、マスト細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的のマスト細胞抗原の例としては、例えば、ＳＣＦＲ／ＣＤ１１７、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ３５、ＣＤ８８、ＣＤ２０３ｃ、Ｃ５Ｒ１、ＣＭＡｌ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＴＰＳＡＢｌが挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらのマスト細胞抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好塩基球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の好塩基球抗原の例としては、例えば、ＦｃεＲＩ、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、およびＣＤ１６４が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの好塩基球抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好中球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の好中球抗原の例としては、例えば、７Ｄ５、ＣＤ１０／ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１３、ＣＤ１６（ＦｃＲＩＩＩ）、ＣＤ１８タンパク質（ＬＦＡ－１、ＣＲ３、およびｐ１５０、９５）、ＣＤ４５、ＣＤ６７、およびＣＤ１７７が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの好中球抗原を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、好酸球に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。目的の好酸球抗原の例としては、例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４４およびＣＤ６９が挙げられる。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの好酸球抗原を結合する。
種々の実施形態では、認識ドメインは、当業者に既知の任意の適切な標的、抗原、受容体または細胞表面マーカーに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗原または細胞表面マーカーは、組織特異的マーカーである。組織特異的マーカーの例としては、ＡＣＥ、ＣＤ１４、ＣＤ３４、ＣＤＨ５、ＥＮＧ、ＩＣＡＭ２、ＭＣＡＭ、ＮＯＳ３、ＰＥＣＡＭｌ、ＰＲＯＣＲ、ＳＥＬＥ、ＳＥＬＰ、ＴＥＫ、ＴＨＢＤ、ＶＣＡＭｌ、ＶＷＦなどの内皮細胞表面マーカー；ＡＣＴＡ２、ＭＹＨｌＯ、ＭＹＨｌ １、ＭＹＨ９、ＭＹＯＣＤなどの平滑筋細胞表面マーカー；ＡＬＣＡＭ、ＣＤ３４、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ３Ａ１、ＦＡＰ、ＰＨ－４などの線維芽細胞（間質）細胞表面マーカー；ＣＤｌＤ、Ｋ６ＩＲＳ２、ＫＲＴｌＯ、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＭＵＣｌ、ＴＡＣＳＴＤｌなどの上皮細胞表面マーカー；ＣＤ１３、ＴＦＮＡ、アルファ－ｖ ベータ－３（αＶβ３）、Ｅ－セレクチンなどの新生血管マーカー；およびＡＤＩＰＯＱ、ＦＡＢＰ４、およびＲＥＴＮなどの脂肪細胞表面マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの抗原を結合する。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１個または複数のこれらの抗原を有する細胞を結合する。
いくつかの実施形態では、認識ドメインは、腫瘍細胞に関連する標的（例えば、抗原、受容体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、認識ドメインは、直接または間接的に腫瘍細胞を動員する。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞の直接または間接的動員は、腫瘍細胞を死滅させることができるおよび／または抑制できる１個または複数のエフェクター細胞（例えば、本明細書に記載の免疫細胞）に対するものである。
腫瘍細胞、または癌細胞は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害する、細胞または組織の無制御な増殖および／または細胞生存の異常な増大および／またはアポトーシスの抑制の異常な増大を指す。例えば、腫瘍細胞には、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移が含まれる。腫瘍細胞の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
腫瘍細胞または癌細胞としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））も挙げられるが、これらに限定されない。
腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＡＳＧＰＲ、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＭＳＡ、およびＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、１種または複数のこれらの腫瘍抗原を結合する。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＨＥＲ２に結合する。別の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ２に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、および（ｉｉ）本明細書で記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、を有する。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞（限定されないが、エフェクターＴ細胞を含む）に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｂ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）ＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ８、ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ２Ｒα、４－１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ２Ｒβ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７－１、ＩＬ４Ｒ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＬ６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ７Ｒα、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬＳＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ１０Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ１０Ｒβ、ＣＣＲＳ、ＩＬ１２Ｒβ１、ＣＣＲ９、ＩＬ１２Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ１３Ｒα１、ＩＬ１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤＳ５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤＳ５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤＳ５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤＳ５ａ、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤＳ、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤＳ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリンβ２／ＣＤｌＳ、ＫＩＲ／ＣＤ１５Ｓ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２Ｓ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦＳ、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５Ｓｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ－３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤＳ３、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤＳ４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ－４、ＣＤ６９、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ２Ｒγ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ－セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰβ１、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＤＮＡＭ－１、サイモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＩＭ－１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ－３、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ－４、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ－６、ＴＮＦＲ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、グラニュライシン、ＴＮＦＲＩＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＲＡＩＬＲｌ／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬＲ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ－γＲ１、ＴＲＡＩＬＲ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ１Ｒ１、またはＴＳＬＰＲへの標的化により媒介される、Ｔ細胞に対するターゲティング部分を有し；および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞上に発現したチェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３、およびＡ２ａＲの内の１個または複数に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質と共に、腫瘍細胞に向けられる。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－１に対する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する、１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体の誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ペムブロリズマブ（別名ＭＫ－３４７５、キイトルーダ）、またはそのフラグメントを含む。ペムブロリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４，ＵＳ ８，３５４，５０９、および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのペムブロリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７）のアミノ酸配列を含む重鎖および／または（配列番号８）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体、ニボルバム（別名ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、オプジーボ）、またはそのフラグメントを含む。ＰＤ－１に特異的に結合するニボルバム（クローン５Ｃ４）およびその他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ニボルバムまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号９）のアミノ酸配列を含む重鎖および／または（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体ピディリズマブ（別名ＣＴ－０１１、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１）、またはそのフラグメントを含む。ピディリズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ－Ｉモノクローナル抗体は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号および国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０の配列番号１５～１８：米国特許出願公開第２００８／００２５９８０の配列番号１５（配列番号１１）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１６（配列番号１２）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１７（配列番号１３）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号１４）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；および／または米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０～２４：米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２０（配列番号１５）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２１（配列番号１６）；米国特許出願公開第２００８号／００２５９８０の配列番号２２（配列番号１７）；米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２３（配列番号１８）および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２４（配列番号１９）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号１８（配列番号１４）を含む軽鎖および米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号の配列番号２２（配列番号１７）を含む重鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ＡＭＰ－５１４（別名ＭＥＤＩ－０６８０）を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ｐｄ－ｌ２－Ｆｃ融合タンパク質ＡＭＰ－２２４を含み、これは、国際公開第２０１０／０２７８２７号および同第２０１１／０６６３４２号に開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号４（配列番号２０）を含むターゲティングドメインおよび／または国際公開第２０１０／０２７８２７号の配列番号８３（配列番号２１）を含むＢ７－ＤＣ融合タンパク質を含み得る。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ペプチドＡＵＮＰ１２または米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号または米国特許第８，９０７，０５３号に開示のいずれかの他のペプチドを含む。例えば、ターゲティング部分は、ＡＵＮＰ１２（すなわち、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号の化合物８または配列番号４９）を含み得、これは、下記配列を有する：
Figure 2022534837000003
 （配列番号２２）。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ３またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号２４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｅ８またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ８またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号２５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号２６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－１抗体１Ｈ３またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｈ３またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号２７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号２８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－１に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７～３５１（米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４７（配列番号２９）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４８（配列番号３０）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３４９（配列番号３１）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５０（配列番号３２）；または米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３５１（配列番号３３））を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のように、抗ＰＤ－１抗体またはそのフラグメントのいずれか１種を含み、これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５～２９（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２５（配列番号３４）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２６（配列番号３５）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２７（配列番号３６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２８（配列番号３７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号２９（配列番号３８））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０～３３（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３０（配列番号３９）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３１（配列番号４０）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３２（配列番号４１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３３（配列番号４２））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）から選択される、ＰＤ－１に向けられた１種または複数の抗体、またはその抗体フラグメントを含む。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ１に対する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体の誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＭＥＤＩ４７３６（別名デュルバルマブ）、またはそのフラグメントを含む。ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ－Ｌ１に対し選択的であり、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１およびＣＤ８０受容体に対する結合を阻止する。本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。ＭＥＤＩ４７３６の配列は、国際公開第２０１６／０６２７２号に開示され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号４３）のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または（配列番号４４）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号４（配列番号４５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１６／０６２７２号の配列番号３（配列番号４６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アテゾリズマブ（別名ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号４７）のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または（配列番号４８）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体アベルマブ（別名ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、またはそのフラグメントを含む。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのアテゾリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、（配列番号４９）のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５）、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのＢＭＳ－９３６５５９またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｇ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための３Ｇ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ａ５、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ａ５またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体５Ｆ８、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための５Ｆ８またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号５８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１０Ｈ１０、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１０Ｈ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｂ１２、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｂ１２またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号６１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号６２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体７Ｈ１、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法での使用のための７Ｈ１またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号６３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号６４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１１Ｅ６、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１１Ｅ６またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号６５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１２Ｂ７、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１２Ｂ７またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５０号および国際公開第２００７／００５８７４号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１３Ｇ４、またはそのフラグメントを含む。これら特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１３Ｇ４またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｅ１２またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための１Ｅ１２またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７１）アミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体１Ｆ４またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で提供される方法で使用するための１Ｆ４またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２Ｇ１１またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２Ｇ１１またはその抗原結合フラグメントは（配列番号７５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｂ６、またはそのフラグメントを含む。この特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｂ６またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号７８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号および国際公開第２０１２／１４５４９３号に開示のように、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３Ｄ１０、またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号７９）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または（配列番号８０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４～３８（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３４（配列番号８１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３５（配列番号８２）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３６（配列番号８３）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３７（配列番号８４）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３８（配列番号８５））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９～４２（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号３９（配列番号８６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４０（配列番号８７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４１（配列番号８８）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４２（配列番号８９））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２（配列番号９０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７（配列番号９１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．９Ｄ１０またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．９Ｄ１０またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１２（配列番号９２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号１７（配列番号９３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２２（配列番号９４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号２７（配列番号９５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．２０Ａ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．２０Ａ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３２（配列番号９６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号３７（配列番号９７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１５Ｇ８またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１５Ｇ８またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４２（配列番号９８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号４７（配列番号９９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体３．１８Ｇ１またはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための３．１８Ｇ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５２（配列番号１００）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号５７（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．７Ａ４ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．７Ａ４ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６２（配列番号１０２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号６７（配列番号１０３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号に開示のように、ターゲティング部分は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはそのフラグメントを含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための２．１４Ｈ９ＯＰＴまたはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７２（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または国際公開第２０１１／０６６３８９号の配列番号７７（配列番号１０５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０６１１４２号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８、３０、３８、４６、５０、５４、６２、７０、および７８（国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号１８（配列番号１０６）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３０（配列番号１０７）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３８（配列番号１０８）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４６（配列番号１０９）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５０（配列番号１１０）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５４（配列番号１１１）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６２（配列番号１１２）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７０（配列番号１１３）および国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７８（配列番号１１４））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または、国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２、２６、３４、４２、５８、６６、７４、８２、および８６（国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２２（配列番号１１５）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号２６（配列番号１１６）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号３４（配列番号１１７）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号４２（配列番号１１８）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号５８（配列番号１１９）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号６６（配列番号１２０）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号７４（配列番号１２１）；国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８２（配列番号１２２）および国際公開第２０１６／０６１１４２号の配列番号８６（配列番号１２３））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１６／０２２６３０号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、４２、および４６（国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２（配列番号１２４）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号６（配列番号１２５）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１０（配列番号１２６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１４（配列番号１２７）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１８（配列番号１２８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２２（配列番号１２９）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２６（配列番号１３０）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３０（配列番号１３１）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３４（配列番号１３２）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３８（配列番号１３３）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４２（配列番号１３４）；および国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４６（配列番号１３５））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または、国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、４４、および４８（国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４（配列番号１３６）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号８（配列番号１３７）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１２（配列番号１３８）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号１６（配列番号１３９）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２０（配列番号１４０）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２４（配列番号１４１）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号２８（配列番号１４２）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３２（配列番号１４３）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号３６（配列番号１４４）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４０（配列番号１４５）；国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４４（配列番号１４６）；および国際公開第２０１６／０２２６３０号の配列番号４８（配列番号１４７））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１５／１１２９００号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８、５０、８２、および８６（国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号３８（配列番号１４８）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５０（配列番号１４９）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８２（配列番号１５０）；および国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号８６（配列番号１５１））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、および７８（国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４２（配列番号１５２）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号４６（配列番号１５３）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５４（配列番号１５４）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号５８（配列番号１５５）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６２（配列番号１５６）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号６６（配列番号１５７）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７０（配列番号１５８）；国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７４（配列番号１５９）；および国際公開第２０１５／１１２９００号の配列番号７８（配列番号１６０））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、国際公開第２０１０／０７７６３４号および米国特許第８，２１７，１４９号に開示されるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＰＤ－Ｌ１またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０（配列番号１６１）のアミノ酸配列を含む重鎖領域；および／または国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２１（配列番号１６２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号に開示されているように、ＣＮＣＭ受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－４１２２、ＣＮＣＭ Ｉ－４０８０およびＣＮＣＭ Ｉ－４０８１により入手可能なハイブリドーマから得ることができるいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ１抗体に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４～３９９（米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９４（配列番号１６３）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９５（配列番号１６４）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９６（配列番号１６５）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９７（配列番号１６６）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９８（配列番号１６７）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号３９９（配列番号１６８））を含む。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ２に対する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＤ－Ｌ２ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体の誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、米国特許第８，９０７，０６５号および国際公開第２００８／０７１４４７号に開示のように、ＰＤ－Ｌ２に向けられたＶＨＨを含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、ＰＤ－Ｌ２に対するＶＨＨは、米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９～４５５（米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４４９（配列番号１６９）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５０（配列番号１７０）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５１（配列番号１７１）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５２（配列番号１７２）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５３（配列番号１７３）；米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５４（配列番号１７４）；および米国特許第８，９０７，０６５号の配列番号４５５（配列番号１７５））を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号および国際公開第２０１０／０３６９５９号に開示のいずれか１種の抗ＰＤ－Ｌ２抗体を含む。これらの特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３～４７（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４３（配列番号１７６）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４４（配列番号１７７）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４５（配列番号１７８）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４６（配列番号１７９）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４７（配列番号１８０））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８～５１（米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４８（配列番号１８１）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号４９（配列番号１８２）；米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５０（配列番号１８３）；および米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号の配列番号５１（配列番号１８４））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする配列を含み得る。
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示のＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、および／またはＰＤ－Ｌ２を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれの組み合わせを含み得る。
ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を選択的に結合するまたは標的にする追加の抗体、抗体誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチドまたは融合タンパク質は、国際公開第２０１１／０６６３８９号、米国特許出願公開第２００８／００２５９８０号、米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３５３号、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／０２８３３０号、米国特許出願公開第２０１２／０１１４６４９号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，９０７，０６５号、国際公開第２０１６／０６２７２２号、国際公開第２００９／１０１６１１号、国際公開第２０１０／０２７８２７号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、国際公開第２００７／００５８７４号、国際公開第２００１／０１４５５６号、米国特許出願公開第２０１１／０２７１３５８号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２０１２／００３９９０６号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１８３７３号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７３８号、国際公開第２００９／０８９１４９号、国際公開第２００７／００５８７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／０２２６３号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、および国際公開第２０１５／１１２９００号で開示されている。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ８に対する標的化により媒介される、Ｔ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＣＤ８に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ４に対する標的化により媒介される、Ｔ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＣＤ４に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ３、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ９、ＣＤ７０、ＣＤ１０３、または１個または複数の免疫チェックポイントマーカーに対する標的化により媒介される、Ｔ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１インターフェロンまたはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＣＤ３に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上で発現されるＣＤ３に対する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ３ポリペプチドを選択的に結合する１個または複数のターゲティング部分を有する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ３ポリペプチドを選択的に結合する、抗体、抗体の誘導体もしくはフォーマット、ペプチドもしくはポリペプチド、または融合タンパク質の１種または複数を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体ムロモナブ－ＣＤ３（別名Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３）、またはそのフラグメントを含む。ムロモナブ－ＣＤ３は、米国特許第４，３６１，５４９号およびＷｉｌｄｅ ｅｔ ａｌ．（１９９６）５１：８６５－８９４で開示されている。これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのムロモナブ－ＣＤ３またはその抗原結合フラグメントは、（配列番号１８５）のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または（配列番号１８６）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体オテリキシズマブ、またはそのフラグメントを含む。オテリキシズマブは、米国特許出願公開第２０１６００００９１６号およびＣｈａｔｅｎｏｕｄ ｅｔ ａｌ．（２０１２）９：３７２－３８１で開示されている。これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのオテリキシズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体テプリズマブ（別名ＭＧＡ０３１およびｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ－Ａｌａ））、またはそのフラグメントを含む。テプリズマブは、Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ ｅｔ ａｌ．（２０１２）９：３７２－３８１で開示されている。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのテプリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体ビジリズマブ（別名Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標）；ＨｕＭ２９１）、またはそのフラグメントを含む。ビジリズマブは、米国特許第５，８３４，５９７号および国際公開第２００４０５２３９７号およびＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（１９９９）６８：５６３－５７１で開示されている。これらの文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するためのビジリズマブまたはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗ＣＤ３抗体フォラルマブ（別名ＮＩ－０４０１）、またはそのフラグメントを含む。種々の実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１４／０１９３３９９号、米国特許第７，７２８，１１４号、米国特許出願公開第２０１０／０１８３５５４号および米国特許第８，５５１，４７８号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。これらの特許の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号２および６（米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号２（配列番号１９３）およびの米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号６（配列番号１９４））のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号４および８（米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号４（配列番号１９５）および米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号８（配列番号１９６））のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および米国特許第７，７２８，１１４号の配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号６～９（米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号６（配列番号１９７）；米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号７（配列番号１９８）；米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号８（配列番号１９９）；米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号９（配列番号２００））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号１０～１２（米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号１０（配列番号２０１）；米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号１１（配列番号２０２）；米国特許出願公開第２０１６／０１６８２４７号の配列番号１２（配列番号２０３））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号の配列番号９（配列番号２０４）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号の配列番号１０（配列番号２０５）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許第８，７８４，８２１号で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８および１１４（米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号２（配列番号２０６）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１８（配列番号２０７）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号３４（配列番号２０８）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号５０（配列番号２０９）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号６６（配列番号２１０）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号８２（配列番号２１１）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号９８（配列番号２１２）；および米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１１４（配列番号２１３））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６および１２２（米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１０（配列番号２１４）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号２６（配列番号２１５）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号４２（配列番号２１６）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号５８（配列番号２１７）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号７４（配列番号２１８）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号９０（配列番号２１９）；米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１０６（配列番号２２０）；および米国特許第８，７８４，８２１号の配列番号１２２（配列番号２２１））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２５２号で開示される抗ＣＤ３結合構築物のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２５２号の配列番号６および８６（米国特許出願公開第２０１５／０１１８２５２号の配列番号６（配列番号２２２）および米国特許出願公開第２０１５／０１１８２５２号の配列番号８６（配列番号２２３））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１５／０１７５６９９号の配列番号３（米国特許出願公開第２０１５／０１１８２５２号の配列番号３（配列番号２２４））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号で開示される抗ＣＤ３結合タンパク質のいずれか１種を含む。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、本明細書で提供される方法で使用するための抗体またはその抗原結合フラグメントは、米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号６～９（米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号６（配列番号２２５）；米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号７（配列番号２２６）；米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号８（配列番号２２７）；および米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号９（配列番号２２８））から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；および／または米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号１～４（米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号１（配列番号２２９）；米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号２（配列番号２３０）；米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号３（配列番号２３１）；および米国特許出願公開第２０１６／００３９９３４号の配列番号４（配列番号２３２））から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示の配列のいずれかに少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一（例えば、本明細書で開示の配列のいずれかと約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、約９９％または約１００％の配列同一性）である、ＣＤ３を標的とする配列を含み得る。
種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、本明細書で開示のＣＤ３を標的とする重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれかの組み合わせを含み得る。種々の実施形態では、本発明のターゲティング部分は、限定されないが、Ｘ３５－３、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆｌ １１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、ＷＴ３１およびＦ１０１．０１を含むＣＤ３特異的抗体の、重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、相補性決定領域（ＣＤＲ）、およびフレームワーク領域配列のいずれかを含み得る。これらのＣＤ３特異的抗体は、当該技術分野において周知であり、特に、Ｔｕｎｎａｃｌｉｆｆｅ（１９８９），Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１，５４６－５５０で記載されている。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
選択的にＣＤ３を結合または標的とする追加の抗体、抗体誘導体またはフォーマット、ペプチドまたはポリペプチド、または融合タンパク質は、米国特許出願公開第２０１６／００００９１６号、米国特許第４，３６１，５４９号、同第５，８３４，５９７号、同第６，４９１，９１６号、同第６，４０６，６９６号、同第６，１４３，２９７号、同第６，７５０，３２５号および国際公開第２００４／０５２３９７号で開示されている。これらの特許の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＰＤ－１に対する標的化により媒介される、Ｔ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８、またはＣＤｗ１５０への標的化により媒介されるＢ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ２０に対するターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ７０に対する標的化により媒介される、Ｂ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＤ２０に対する標的化により媒介される、Ｂ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞上のＣＤ２０に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ターゲティング部分は、次記の配列を有する組換え型の重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）である：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＡＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＦＳＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＡＩＴＹＳＧＧＳＰＹＹＡＳＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＮＰＴＹＧＳＤＷＮＡＥＮＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号２８８）。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＣＤ９４、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ６９、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＤＮＡＭ－１、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、Ｆｃ－イプシロンＲＩＩ、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、Ｆｃ－γＲｌ／ＣＤ６４、ＭＩＣＡ、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＭＩＣＢ、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＭＵＬＴ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、Ｎｅｃｔｉｎ－２／ＣＤ１１２、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ａ、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＮＫＧ２Ｃ、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＮＫＧ２Ｄ、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＮＫｐ３０、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＮＫｐ４４、Ｆｃ－受容体様３／ＣＤ１６－２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、Ｒａｅ－１、Ｒａｅ－１α、Ｒａｅ－１β、Ｒａｅ－１δ、Ｈ６０、Ｒａｅ－１ε、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、Ｒａｅ－１γ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭ－１、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＴＲＥＭ－３、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＵＬＢＰ－１、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＵＬＢＰ－２、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄまたはＵＬＢＰ－３への標的化により媒介されるＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、Ｋｉｒ１アルファ、ＤＮＡＭ－１またはＣＤ６４への標的化により媒介される、ＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＫＩＲ１への標的化により媒介される、ＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞上のＫＩＲ１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＴＩＧＩＴまたはＫＩＲ１への標的化により媒介される、ＮＫ細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞上のＴＩＧＩＴに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＬＥＣ９Ａ、ＸＣＲ１、ＲＡＮＫ、ＣＤ３６／ＳＲＢ３、ＬＯＸ－１／ＳＲ－Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ－Ａ１／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ－１、ＣＬ－Ｐｌ／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ－ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲＢ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４－ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ１２／ＩＬ２３ｐ４０、４－Ａｍｉｎｏ－１、８－ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８－ｏｘｏ－ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、ｌｕｔｅｇｒｉｎ α４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４ Ｒｌ、Ｂ７－Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ－４－ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ－１、ＣＤ６８、ＭＤ－２、ＣＤ８３、ＭＤＬ－１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭＬｌ、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｒｎ２３、ＰＤ－Ｌ２、ＣＬＥＣ－１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ－２、シグレック－２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、シグレック－３／ＣＤ３３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、シグレック－５、ＤＣ－ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、シグレック－６、ＤＣＡＲ、シグレック－７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、シグレック－９、ＤＥＣ－２０５、シグレック－１０、Ｄｅｃｔｉｎ－１／ＣＬＥＣ７Ａ、シグレック－Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ－２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、Ｆｃ－γＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ－２、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ－３、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、またはバニロイドＲ１への標的化により媒介される樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＣＬＥＣ－９Ａ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＣＤ６４、ＣＬＥＣ－４Ａ、またはＤＥＣ２０５への標的化により媒介される、樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、Ｃｌｅｃ９Ａへの標的化により媒介される、樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＸＣＲ１への標的化により媒介される、樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＸＣＲ１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＲＡＮＫへの標的化により媒介される、樹状細胞に対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞上のＲＡＮＫに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
非限定的例であるが、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＳＩＲＰ１ａ、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７－Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、Ｌａｔｅｘｉｎ、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ－１、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ－１、ＥＣＦ－Ｌ、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、オステオポンチン、Ｆｃ－γＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ－Ｌ２、Ｆｃ－γＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－３／ＣＤ３３、Ｆｃ－γＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｃ－γＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ－ＣＳＦＲα、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ－γＲｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γＲ２、ＴＲＥＭ－ｌ、ＩＬ－ｌＲＩＩ、ＴＲＥＭ－２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ－３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ－１０Ｒα、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ－１０Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＣｌｑＲ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、ＣＤ２０６、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンαＭ／ＣＤｌｌｂ、ＣＣＲ８、インテグリンαＸ／ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ－Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４－Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩＩＳＲ－Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ－１、ＣＸＣＲ６、Ｍ－ＣＳＦＲ、ＤＥＰ－１／ＣＤ１４８、ＭＤ－１、ＤＮＡＭ－１、ＭＤ－２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ－Ｌ１、Ｆｃ－γＲＩ／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ－１、Ｆｃ－γＲＩＩＩＩＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ－ＣＳＦＲ、Ｌ－セレクチン、ＧＭ－ＣＳＦＲα、シグレック－３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ－１、ＩＣＡＭ－２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ－１、－６Ｒ、ＴＲＥＭ－２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ－８ＲＡ、ＴＲＥＭ－３、またはＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ－１への標的化により媒介される単球／マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、Ｂ７－Ｈ１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ－１、ＣＤ１６３、ＣＣＲ２、またはマクロファージマンノース受容体ＣＤ２０６への標的化により媒介される、単球／マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）例えば、ＳＩＲＰ１ａへの標的化により媒介される、単球／マクロファージに対するターゲティング部分を有し、および（ｉｉ）ターゲティング部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞に向けられる。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、マクロファージ上のＳＩＲＰ１ａに対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、チェックポイントマーカー、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、ＣＤ２８／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＴＬＡ４／ＣＤ８０またはＣＤ８６、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬまたはＢ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ／ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０／ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３／Ｇａｌ９、ＣＤ４７、ＣＤ７０、およびＡ２ａＲの１個または複数に対する１個または複数のターゲティング部分を有する。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞、例えば、ＰＤ－１上のチェックポイントマーカーに対するターゲティング部分、および（ｉｉ）本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、腫瘍細胞、例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に向けられるターゲティング部分を有する。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１に対する第２のターゲティング部分を有する。別の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に対するターゲティング部分および腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ２に対する第２のターゲティング部分を有する。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、同じまたは異なる免疫細胞に向けられた２個以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、（ｉ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはこれらのサブセットから選択される免疫細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、および（ｉｉ）本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）と共に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、またはこれらのサブセットから選択される同じまたは別の免疫細胞に対する１個または複数のターゲティング部分、を有する。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｔ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。例えば、例示的実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＣｌｅｃ９Ａに対するターゲティング部分を含み得る。別の例示的実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＣＤ３に対するターゲティング部分を含み得る。別の例示的実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８に対するターゲティング部分およびＰＤ－１に対するターゲティング部分を含み得る。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｂ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別の樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、マクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分およびＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および同じまたは別のＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＴ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびＢ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分およびマクロファージに対する１個または複数のターゲティング部分を含む。一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＮＫ細胞に対する１個または複数のターゲティング部分および樹状細胞に対する１個または複数のターゲティング部分を含む。
一実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、腫瘍細胞に対するターゲティング部分および同じまたは異なる腫瘍細胞に対する第２のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、ターゲティング部分は、本明細書で記載のいずれかの腫瘍抗原に結合し得る。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、脂肪細胞（例えば、白色脂肪細胞、褐色脂肪細胞）、肝臓脂質細胞、肝臓細胞、腎臓細胞（例えば、腎臓壁細胞、腎臓唾液腺、乳腺など）、導管細胞（精嚢、前立腺などの）、腸管刷子縁細胞（微絨毛を有する）、外分泌腺線条導管細胞、胆嚢上皮細胞、小遠心路非線毛細胞、精巣上体主部細胞、精巣上体基底細胞、内皮細胞、エナメル芽上皮細胞（歯のエナメル質分泌）、耳の前庭系の半月面上皮細胞（プロテオグリカン分泌）、コルチ器官歯間上皮細胞（有毛細胞を覆う蓋膜分泌）、疎性結合組織線維芽細胞、角膜線維芽細胞（角膜実質細胞）、腱線維芽細胞、骨髄網状組織線維芽細胞、非上皮性線維芽細胞、周皮細胞、椎間板の髄核細胞、セメント芽細胞（ｃｅｍｅｎｔｏｂｌａｓｔ）／セメント芽細胞（ｃｅｍｅｎｔｏｃｙｔｅ）（歯根骨様イワン細胞分泌）、象牙芽細胞／オドントサイト（ｏｄｏｎｔｏｃｙｔｅ）（歯象牙質分泌）、ガラス軟骨細胞、繊維軟骨細胞、弾性軟骨細胞、骨芽細胞／骨細胞、骨前駆体細胞（骨芽細胞の幹細胞）、眼の硝子体の硝子体細胞、耳の外リンパ腔の星状細胞、肝臓星状細胞（Ｉｔｏ細胞）、膵臓星状細胞、骨格筋細胞、衛星細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、虹彩の筋上皮細胞、外分泌腺の筋上皮細胞、外分泌物分泌性上皮細胞（例えば、唾液腺細胞、乳腺細胞、涙腺細胞、汗腺細胞、皮脂腺細胞、前立腺細胞、胃腺細胞、膵腺房細胞、肺細胞）、ホルモン分泌細胞（例えば、下垂体細胞、神経分泌細胞、腸管および気道細胞、甲状腺細胞、副甲状腺細胞、副腎細胞、精巣のライディッヒ細胞、膵島細胞）、角質化上皮細胞、湿性層化バリア上皮細胞、神経細胞（例えば、感覚変換器細胞、自律神経ニューロン細胞、感覚器官および周辺神経支持細胞、および中枢神経系ニューロン、ならびに介在ニューロン、主細胞、星状膠細胞、乏突起膠細胞、および上衣細胞などのグリア細胞）から選択される１個または複数の細胞上に見出されるものを含む目的の標的（例えば、抗原、受容体）に結合する認識ドメインを有する１個または複数のターゲティング部分を含む。
ターゲティング部分フォーマット
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、抗体またはその誘導体などの、特異的結合ができるタンパク質ベースの物質である。ある実施形態では、ターゲティング部分は、抗体を含む。種々の実施形態では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む、完全長マルチマータンパク質である。それぞれの重鎖は、１個の可変領域（例えば、ＶＨ）および少なくとも３つの定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を含み、それぞれの軽鎖は、１個の可変領域（ＶＬ）および１個の定常領域（ＣＬ）を含む。可変領域は、抗体の特異性を決定する。それぞれの可変領域は、４個の比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）により隣接される、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られる、３個の高頻度可変領域を含む。３個のＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の結合特異性に寄与する。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、抗体誘導体またはフォーマットを含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、単一ドメイン抗体、組み換え型の重鎖のみで構成される抗体（重鎖抗体）（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみで構成される抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（システインノットタンパク質、ノッチン）、ＤＡＲＰｉｎ；テトラネクチン；アフィボディ；トランスボディ；アンチカリン；アドネクチン；アフィリン；ミクロボディ；ペプチドアプタマー；ａｌｔｅｒａｓｅ；プラスチック抗体；フィロマー；ストラドボディ；マキシボディ；エビボディ；フィノマー；アルマジロリピートタンパク質（ａｒｍａｄｉｌｌｏ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）；クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペプボディ、ワクシボディ、ユニボディ；アフィマー、デュオボディ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、または合成分子である。これらは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４１７，１３０号、米国特許出願公開第２００４／１３２０９４号、米国特許第５，８３１，０１２号、米国特許出願公開第２００４／０２３３３４号、米国特許第７，２５０，２９７号、米国特許第６，８１８，４１８号、米国特許出願公開第２００４／２０９２４３号、米国特許第７，８３８，６２９号、米国特許第７，１８６，５２４号、米国特許第６，００４，７４６号、米国特許第５，４７５，０９６号、米国特許出願公開第２００４／１４６９３８号、米国特許出願公開第２００４／１５７２０９号、米国特許第６，９９４，９８２号、米国特許第６，７９４，１４４号、米国特許出願公開第２０１０／２３９６３３号、米国特許第７，８０３，９０７号、米国特許出願公開第２０１０／１１９４４６号、および／または米国特許第７，１６６，６９７号に記載されている。Ｓｔｏｒｚ ＭＡｂｓ．２０１１ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；３（３）：３１０－３１７、も参照されたい。
一実施形態では、ターゲティング部分は、例えば、ラクダ類、サメなどのＶＨＨ抗体を産生する生物由来のＶＨＨ、または設計されたＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。ＶＨＨは、天然起源の重鎖抗体の特有の構造および機能特性を含む、抗体由来の治療用タンパク質である。ＶＨＨ技術は、軽鎖を欠くラクダ類由来の完全に機能的な抗体をベースにしている。これらの重鎖抗体は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。ＶＨＨは、ＮＡＮＯＢＯＤＹまたはＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳの登録商標で市販されている。
ある実施形態では、ターゲティング部分は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨＨである。
いくつかの実施形態では、ＶＨＨは、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ヒューマボディ（Ｃｒｅｓｃｅｎｄｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を含む。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ヒューマボディは、一価、二価、または三価である。いくつかの実施形態では、完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ヒューマボディは、単一特異性、二重特異性、または三重特異性などの単一特異性または多重特異性である。例示完全ヒトＶＨドメイン、例えば、ヒューマボディは、例えば、国際公開第２０１６／１１３５５５号および国際公開第２０１６／１１３５５７号に記載されている。これらの全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のターゲティング部分は、細胞受容体のための天然リガンドなどの細胞受容体に特異的に結合できるタンパク質ベース物質である。種々の実施形態では、細胞受容体は、１個または複数の免疫細胞上に見つけることができ、免疫細胞としては、限定されないが、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはこれらのサブセットを含め得る。いくつかの実施形態では、細胞受容体は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはこれらのサブセット上に認められる。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はケモカインなどの天然リガンドである。本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体中に含め得るケモカインの例としては、限定されないが、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＬＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１、ＨＣＣ－４、およびＬＤＧＦ－ＰＢＰが挙げられる。例示的実施形態では、ターゲティング部分は、樹状細胞受容体ＸＣＲ１を認識し、結合するケモカインであるＸＣＬ１であり得る。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ８を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ３またはＣＣＲ４またはＣＣＲ５を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ７である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ２またはＣＣＲ２ＢまたはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ８である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ９である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１０である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ３またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ３またはＣＣＲ５またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１またはＣＣＲ３を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、またはＣＣＲ５、またはＣＣＲ８を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ４を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１７である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ７を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ１９である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ６を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２０である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ７を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ４を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ３を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ９を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ３を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ１０を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２７である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＣＲ３またはＣＣＲ１０を認識し、結合するケモカインであるＣＣＬ２８である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３Ｂを認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ４である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ５である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ１またはＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ８である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ９である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ１０である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ３またはＣＸＣＲ７を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ１１である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ７を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ１２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ５を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ１３である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ６を認識し、結合するケモカインであるＣＸＣＬ１６である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸＣＲ２を認識し、結合するケモカインであるＬＤＧＦ－ＰＢＰである。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＸＣＲ１を認識し、結合するケモカインであるＸＣＬ２である。別の例示的実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＸ３ＣＲ１を認識し、それに結合するケモカインであるＣＸ３ＣＬ１である。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）またはその切り詰められた領域（例えば、Ｆｌｔ３を結合できる領域）などの天然リガンドである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｆｌｔ３Ｌの細胞外ドメインである。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｆｌｔ３Ｌドメインを含み、Ｆｌｔ３Ｌドメインは、単鎖二量体であり、任意選択で、１個のＦｌｔ３Ｌドメインは１個または複数のリンカーを介して他のＦｌｔ３Ｌドメインに連結され、リンカーは、フレキシブルリンカーである。いくつかの実施形態では、本発明のターゲティング部分は、Ｆｌｔ３Ｌドメインを含み、Ｆｌｔ３Ｌドメインは、単鎖二量体およびＦｃドメインであり、Ｆｃドメインは任意選択で、Ｆｃドメインの１個または複数のエフェクター機能を低減または除去する、Ｆｃドメイン中のＦｃ鎖対形成を促進する、および／またはＦｃドメイン中のヒンジ領域を安定化する、１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＣＤ２０を認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ＰＤ－Ｌ１を認識する。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｃｌｅｃ９Ａを認識する。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、種々の組み合わせのターゲティング部分を含む。例示的実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、２個のターゲティング部分を含み得、両方のターゲティング部分は、抗体またはその誘導体である。別の例示的実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、２個のターゲティング部分を含み得、両方のターゲティング部分は、細胞受容体のための天然リガンドである。さらなる例示的実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、２個のターゲティング部分を含み得、ターゲティング部分の１個は、抗体またはこれらの誘導体であり、もう１個は、細胞受容体のための天然リガンドである。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）を機能的に調節する（非限定例であるが、部分的にまたは完全に中和する）、例えば、抗原が有する生物学的作用を実質的に抑制、低減、または中和する。例えば、種々の認識ドメインは、例えば、腫瘍を有する患者の免疫系を積極的に抑制する、または抑制する能力を有する１種または複数の腫瘍抗原に向けられ得る。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、免疫抑制シグナル（例えば、チェックポイント阻害剤）、例えば、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ４、ＧＩＴＲ、ｇａｌｅｃｔｉｎ－９、ＨＶＥＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＳＩＲＰα、ＩＣＯＳ、ＣＤ１７２ａ、およびＴＭＩＧＤ２の１種または複数を機能的に調節する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、免疫抑制シグナルの伝達、非限定的例であるが、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２との結合、および／またはＣＴＬＡ－４とＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数との結合、を妨害、遮断、低減、および／または抑制するように、遺伝子改変される。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、目的の標的（例えば、抗原、受容体）を結合するが、機能的に調節せず、例えば、認識ドメインは、結合抗体であるか、または結合抗体に類似である。例えば、種々の実施形態では、認識ドメインは、抗原または受容体を標的とするのみであり、抗原または受容体が有する生物学的作用を実質的に阻害、低減または機能的に調節しない。例えば、いくつかの上記の抗体フォーマット（例えば、完全抗体に比較して）は、アクセスが困難なエピトープを標的とする能力を有し、より広範囲の特異的結合場面を提供する。種々の実施形態では、認識ドメインは、その生物活性にとって重要な抗原または受容体部位（例えば、抗原の活性部位）から物理的に離れたエピトープに結合する。
このような非中和結合は、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体が直接的にまたは間接的に活性免疫細胞をエフェクター抗原を介して必要な部位に動員するために用いられる方法を含む、本発明の種々の実施形態で使用される。例えば、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、腫瘍を縮小させるまたは除去する方法において、腫瘍細胞にＣＤ８を介して細胞傷害性Ｔ細胞を直接的または間接的に動員するために使われ得る（例えば、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、抗ＣＤ８認識ドメインおよび腫瘍抗原に対する認識ドメインを含み得る）。このような実施形態では、直接的または間接的にＣＤ８発現細胞傷害性Ｔ細胞を動員するが、ＣＤ８活性を機能的に調節しないのが望ましい。これに対して、これらの実施形態では、ＣＤ８シグナル伝達は、腫瘍を低減させるまたは除去する作用の重要な部分である。さらなる例として、種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、Ｃｌｅｃ９Ａを介して、樹状細胞（ＤＣ）を直接的または間接的に動員するために使われる（例えば、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、抗Ｃｌｅｃ９Ａ認識ドメインおよび腫瘍抗原に対する認識ドメインを含み得る）。このような実施形態では、直接的または間接的にＣｌｅｃ９Ａ発現細胞ＤＣを動員するが、Ｃｌｅｃ９Ａ活性を機能的に調節しないのが望ましい。これに対して、これらの実施形態では、Ｃｌｅｃ９Ａシグナル伝達は、腫瘍を低減させるまたは除去する作用の重要な部分である。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、例えば、樹状細胞上のＸＣＲ１に結合する。例えば、認識ドメインは、いくつかの実施形態では、ＸＣＬ１の全部もしくは一部または非中和性の抗ＸＣＲ１物質を含む。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、免疫調節抗原（例えば、免疫刺激性抗原または免疫抑制性抗原）に結合する。種々の実施形態では、免疫調節抗原は、４－１ＢＢ、ＯＸ－４０、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳリガンド；ＯＸ－４０リガンド、ＬＩＧＨＴ（ＣＤ２５８）、ＧＩＴＲリガンド、ＣＤ７０、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＣＤ１３７リガンドおよびＴＬ１Ａの１種または複数である。種々の実施形態では、免疫刺激抗原は、腫瘍細胞上で発現される。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、このような免疫刺激抗原を結合するが、機能的に調節せず、従って、これらの抗原を発現している細胞の動員を、潜在的な腫瘍低減または除去能力の低減または損失なしに可能にする。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の認識ドメインは、中和活性を有する２個の認識ドメインを含む、または非中和（例えば、結合）活性を有する２個の認識ドメイン、または中和活性を有する１個の認識ドメインおよび非中和（例えば、結合）活性を有する１個の認識ドメインを含む、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に関連し得る。
Ｆｃドメイン
断片結晶化可能ドメイン（Ｆｃドメイン）は、免疫系、例えば、Ｂリンパ球、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞に関与する細胞の細胞表面上に位置するＦｃ受容体と相互作用する抗体のテール領域である。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプでは、Ｆｃドメインは、抗体の２個の重鎖の第２および第３の定常ドメイン由来の、２個の同一のタンパク質フラグメントで構成される。ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体アイソタイプでは、Ｆｃドメインは、各ポリペプチド鎖中の３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２～４）を含む。
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥから選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体のＦｃドメインは、ＩｇＧのＣＨ２およびＣＨ３領域を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧはヒトＩｇＧである。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。いくつかの実施形態では、変異Ｆｃドメインは、標的受容体に対する低減された親和性または結合を有する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、ＦｃγＲへのＦｃドメインの結合を低減または除去する。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ；ＦｃγＲＩＩａ、１３１Ｒ／Ｒ；ＦｃγＲＩＩａ，１３１Ｈ／Ｈ、ＦｃγＲＩＩｂ；およびＦｃγＲＩＩＩから選択される、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、例えば、Ｃ１ｑなどの相補体タンパク質への結合を低減または除去する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、ＦｃγＲおよび例えば、Ｃ１ｑなどの相補体タンパク質の両方への結合を低減または除去する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＬＡＬＡ変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＡＬＡ変異は、ヒトＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）中にＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む（ナンバリングは、ＥＵ規則（ＰＮＡＳ，Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９；６３（１）７８－８５））に準拠して、ヒトＩｇＧ１に対しよく使われるＣＨ２残基のナンバリングを基準にする）。
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃドメインは、位置４６に変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ｋ３２２Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３３１Ｇ、およびＰ３３１Ｓから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＦＡＬＡ変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＡＬＡ変異は、ヒトＩｇＧ４中のＦ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインは、Ｆ２３４、Ｌ２３５、Ｋ３２２、Ｄ２６５、およびＰ３２９の内の１個または複数の位置で変異を含み、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する。例えば、いくつかの実施形態では、変異は、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ｋ３２２Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ｇ、およびＰ３２９Ａから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、Ｆｃドメインのヒンジ領域を安定化する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧのＳ２２８の位置に変異を含み、ヒンジ領域を安定化する。いくつかの実施形態では、変異はＳ２２８Ｐである。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインに対する変異は、Ｆｃドメインの鎖対形成を促進する。いくつかの実施形態では、鎖対形成は、イオン対形成（ａ／ｋ／ａ荷電対、イオン結合、または荷電残基対）により促進される。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、イオン対形成を促進するために、次のもう１個のＩｇＧのアミノ酸残基の位置に変異を含む：Ｄ３５６、Ｅ３５７、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｋ３９２、Ｄ３９９、およびＫ４０９。
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、イオン対形成を促進するために、表１中の変異の組み合わせの１個を含む。
Figure 2022534837000004
いくつかの実施形態では、鎖対形成は、ノブインホール変異により促進される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、１個または複数の変異を含み、Ｆｃドメイン中のノブインホール相互作用を可能にする。いくつかの実施形態では、第１のＦｃ鎖は、「ノブ」を発現するように改変され、第２のＦｃ鎖は、相補的「ホール」を発現するように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、表２の変異を含み、ノブインホール相互作用を可能にする。
Figure 2022534837000005
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、上記で開示の変異の任意の組み合わせを含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、イオン対形成および／またはノブインホール相互作用を促進する変異を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、次の特性の内の１個または複数を有する変異を含む：イオン対形成を促進する、ノブインホール相互作用を誘導する、Ｆｃドメインのエフェクター機能を低減または除去する、およびＦｃ安定化（例えば、ヒンジ）をもたらす。
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、表３に開示の変異を含み、それらはＦｃドメイン中のイオン対形成を促進し、および／またはノブインホール相互作用を促進する。
Figure 2022534837000006
Figure 2022534837000007
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、表４に開示の変異を含み、それらはＦｃドメインのイオン対形成を促進し、および／またはノブインホール相互作用を促進し、またはこれらの組み合わせを促進する。いくつかの実施形態では、表４の「鎖１」および「鎖２」は、入れ替え可能である（例えば、鎖１はＹ４０７Ｔを有することができ、鎖２はＴ３６６Ｙを有することができる）。
Figure 2022534837000008
Figure 2022534837000009
Figure 2022534837000010
Figure 2022534837000011
例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、表５に開示の変異を含み、Ｆｃドメイン中のＦｃγＲおよび／または補体結合を低減または除去する。いくつかの実施形態では、表５の変異は両鎖中に存在する。
Figure 2022534837000012
Figure 2022534837000013
Figure 2022534837000014
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、ホモダイマーであり、すなわち、キメラタンパク質複合体中のＦｃ領域は、２個の同一のタンパク質フラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＦｃドメインは、ヘテロダイマーであり、すなわち、Ｆｃドメインは、２個の同一でないタンパク質フラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃドメインは、本明細書で記載のイオン対形成および／またはノブインホール変異を用いて改変される。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、トランス配向／構造を有する。トランス配向／構造では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の同じポリペプチド鎖上には認められない。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域を含むかまたはその領域で始まり、この領域は、配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはまた、上部ヒンジ、またはその一部（例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（国際公開第２００９０５３３６８号参照）、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ、またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（Ｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｖｏｌ．１１ ｎｏ．６ ｐｐ．４９５－５００，１９９８参照））を含む。
Ｆｃベースキメラタンパク質複合体
本技術のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、少なくとも１個の本明細書で開示のＦｃドメイン、少なくとも１種の本明細書で開示のシグナル伝達物質（ＳＡ）、例えば、ＩＦＮα１、および少なくとも１個の本明細書で開示のターゲティング部分（ＴＭ）を含む。
本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体は、それぞれがＦｃドメインを含む２つの融合タンパク質を包含し得ることは理解されている。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、トランス配向／構造を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、シス配向／構造を有する。
いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃドメインは、本明細書で記載のイオン対形成および／またはノブインホール変異を用いて改変される。いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、トランス配向を有する。
トランス配向では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の同じポリペプチド鎖上には認められない。トランス配向では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の別々のポリペプチド鎖上に認められる。シス配向では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は、いくつかの実施形態では、本発明のＦｃベースキメラタンパク質複合体中の同じポリペプチド鎖上に認められる。
２個以上のターゲティング部分が本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に存在するいくつかの実施形態では、１個のターゲティング部分は、トランス配向（シグナル伝達物質に対し）で存在し、一方、別のターゲティング部分はシス配向（シグナル伝達物質に対し）で存在し得る。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインの同じ末端／側（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインの異なる側／末端（Ｎ末端またはＣ末端）上に存在する。
本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に２個以上のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ヘテロダイマータンパク質複合体中の同じＦｃ鎖上または２個の異なるＦｃ鎖上に認められ得る（後者の場合には、ターゲティング部分は、それらが異なるＦｃ鎖上に存在するので、相互に対しトランスになるはずである）。２個以上のターゲティング部分が同じＦｃ鎖上に存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、Ｆｃ鎖の同じまたは異なる側／末端上に存在し得る（Ｎ末端または／Ｃ末端）。
本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に２個以上のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、ヘテロダイマータンパク質複合体中の同じＦｃ鎖上または２個の異なるＦｃ鎖上に認められる（後者の場合には、ターゲティング部分は、それらが異なるＦｃ鎖上に存在するので、相互に対しトランスになるはずである）。２種以上のシグナル伝達物質が同じＦｃ鎖上に存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、Ｆｃ鎖の同じまたは異なる側／末端上に存在し得る（Ｎ末端または／Ｃ末端）。
２種以上のシグナル伝達物質が本明細書で記載のヘテロダイマータンパク質複合体中に存在するいくつかの実施形態では、１種のシグナル伝達物質は、トランス配向（ターゲティング部分に対し）で存在し、一方、別のシグナル伝達物質はシス配向（ターゲティング部分に対し）で存在し得る。
いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、単一ポリペプチド上にシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１、およびターゲティング部分を含まない。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質は、Ｆｃを欠くキメラタンパク質またはヘテロダイマー複合体ではないキメラタンパク質に比べて改善されたインビボ半減期を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質は、Ｆｃを欠くキメラタンパク質またはヘテロダイマー複合体ではないキメラタンパク質に比べて改善された溶解度、安定性およびその他の薬理学的特性を有する。
ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個の異なるポリペプチドから構成される。本明細書で記載のいくつかの実施形態では、ターゲティングドメインは、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１とは異なるポリペプチド上に存在し、従って、１個のみのターゲティングドメインコピー、および同様に１種のみのシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１を含むタンパク質を作製できる（これは、望ましい特性との起こり得る干渉を制御できる）。さらに、いくつかの実施形態では、１個のターゲティングドメイン（例えば、ＶＨＨ）のみにより、細胞表面上の抗原の架橋（これは、望ましくない効果を誘発する場合があり得る）を回避できる。さらに、いくつかの実施形態では、１個のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、分子の「密集」、およびターゲティングドメインに依存して、エフェクター機能のアビディティ媒介誘導または回復との起こり得る干渉を緩和し得る。さらに、いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個のターゲティング部分を有することができ、これらは、２個の異なるポリペプチド上に配置できる。例えば、いくつかの実施形態では、両方のターゲティング部分（例えば、ＶＨＨ）のＣ末端をマスクして、潜在的自己抗体または既存の抗体（例えば、ＶＨＨ自己抗体または既存の抗体）を回避できる。さらに、いくつかの実施形態では、例えば、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１（例えば、野生型シグナル伝達物質、例えば、野生型ＩＦＮα１）とは異なるポリペプチド上にターゲティングドメインを有するヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２つの細胞型（例えば、腫瘍細胞および免疫細胞）の「架橋」を優先し得る。さらに、いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、それぞれ、異なるポリペプチド上に２つのシグナル伝達物質を有し、より複雑なエフェクター反応を可能にする。
さらに、いくつかの実施形態では、例えば、シグナル伝達物、例えば、ＩＦＮα１とは異なるポリペプチド上にターゲティングドメインを有し、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１の組み合わせの多様性を有するヘテロダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体が、実用的な方法で提供される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で記載のいずれかのターゲティング部分を有するポリペプチドは、「既製品として」本明細書で記載のいずれかのシグナル伝達物質を有するポリペプチドと組み合わせて、単一Ｆｃベースキメラタンパク質複合体中のターゲティング部分およびシグナル伝達物質の種々の組み合わせの迅速な生成を可能にする。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、１個または複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメイン、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１およびターゲティング部分を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１およびターゲティング部分をそれぞれ連結する（または２個以上のターゲティング部分の場合、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１をターゲティング部分の１個に連結する）リンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、各シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１をＦｃドメインに連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、各ターゲティング部分をＦｃドメインに連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、ターゲティング部分を別のターゲティング部分に連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体はシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１を別のシグナル伝達物質に連結するリンカーを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のターゲティング部分を含む。このような実施形態では、ターゲティング部分は、同じターゲティング部分であっても、異なるターゲティング部分であってもよい。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のシグナル伝達物質を含む。このような実施形態では、シグナル伝達物質は、同じターゲティング部分であっても、異なるターゲティング部分であってもよい。
例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメイン、少なくとも２種のシグナル伝達物質（ＳＡ）、および少なくとも２個のターゲティング部分（ＴＭ）を含み、Ｆｃドメイン、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分は、本明細書で開示のＦｃドメイン、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分のいずれかから選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図２Ａ～Ｈのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図３Ａ～Ｈのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図４Ａ～Ｄのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図５Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図６Ａ～Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図７Ａ～Ｄのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図８Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図９Ａ～Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１０Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１１Ａ～Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１２Ａ～Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１３Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１４Ａ～Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１５Ａ～Ｌのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１６Ａ～Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１７Ａ～Ｊのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１８Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図１９Ａ～Ｆのいずれかの概略図の形式を取る。
種々の実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、図２０Ａ～Ｅのいずれかの概略図の形式を取る。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質はターゲティング部分に連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図１Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質およびターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質は同じ末端上で連結される（図１Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、シグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図１Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
いくつかの実施形態では、ホモダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のターゲティング部分を含む。いくつかの実施形態では、４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在し、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、シグナル伝達物質は同じ末端上でターゲティング部分に連結される（図２Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、２個のターゲティング部分はシグナル伝達物質に連結され、これらは、同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図２Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分は相互に連結され、各対からの１個のターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、シグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図２Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４個のターゲティング部分および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２個のターゲティング部分は相互に連結され、各対からの１個のターゲティング部分はシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結され、この対の他のターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、Ｆｃドメインに連結されるターゲティング部分は同じ末端上で連結される（図２Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
いくつかの実施形態では、ホモダイマーＦｃベースキメラタンパク質複合体は、２個以上のシグナル伝達物質を含む。４種のシグナル伝達物質および２種のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２種のシグナル伝達物質は相互に連結され、対からの１種のシグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図３Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４種のシグナル伝達物質および２個のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２種のシグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、２種のシグナル伝達物質はそれぞれターゲティング部分に連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図３Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。４種のシグナル伝達物質および２個のシグナル伝達物質が存在するいくつかの実施形態では、２種のシグナル伝達物質は相互に連結され、対の１種のシグナル伝達物質はターゲティング部分に連結され、ターゲティング部分は同じ末端上でＦｃドメインに連結される（図３Ａ～Ｈ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはホモダイマーである。
例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、Ｆｃドメインを含み、Ｆｃドメインはイオン対形成変異および／またはノブインホール変異、少なくとも１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１、および少なくとも１個のターゲティング部分を含み、イオン対形成モチーフおよび／またはノブインホールモチーフ、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１、およびターゲティング部分は、本明細書で開示のいずれかのイオン対形成モチーフおよび／またはノブインホールモチーフ、シグナル伝達物質、およびターゲティング部分から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はターゲティング部分に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結される（図１０Ａ～Ｆおよび１３Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結される（図１０Ａ～Ｆおよび１３Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１およびターゲティング部分は、Ｆｃドメインに連結される（図４Ａ～Ｄ、７Ａ～Ｄ、１０Ａ～Ｆ、および１３Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図４Ａ～Ｄおよび７Ａ～Ｄ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、異なる末端上の異なるＦｃ鎖に連結される（図４Ａ～Ｄおよび７Ａ～Ｄ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、同じＦｃ鎖に連結される（図１０Ａ～Ｆおよび１３Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結され、２個のターゲティング部分は、１）Ｆｃドメインに連結された１個のターゲティング部分を用いて相互に連結され得るか、または２）それぞれＦｃドメインに連結され得る（図５Ａ～Ｆ、８Ａ～Ｆ、１１Ａ～Ｌ、１４Ａ～Ｌ、１６Ａ～Ｊ、および１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は１個のＦｃ鎖に連結され、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はもう一方のＦｃ鎖に連結される（図５Ａ～Ｆおよび８Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、対を形成したターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、同じＦｃ鎖に連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結され、もう一方のターゲティング部分はシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結され、対を形成したターゲティング部分は、Ｆｃドメインに連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ、１６Ａ～Ｊ、および１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成しないターゲティング部分および対形成したターゲティング部分は、同じＦｃ鎖に連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、対形成しないターゲティング部分および対形成したターゲティング部分は、異なるＦｃ鎖に連結される（図１６Ａ～Ｊおよび１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成しないターゲティング部分および対形成したターゲティング部分は、同じ末端上で連結される（図１６Ａ～Ｊおよび１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結され、これは、Ｆｃドメイン連結され、対形成しないターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ、１６Ａ～Ｊ、および１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および対形成しないターゲティング部分は、同じＦｃ鎖に連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および対形成したターゲティング部分は、異なるＦｃ鎖に連結される（図１６Ａ～Ｊおよび１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および対形成しないターゲティング部分は、同じ末端上で連結される（図１６Ａ～Ｊおよび１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は一緒に連結され、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は対形成したターゲティング部分の１個に連結され、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結されないターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は一緒に連結され、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は対形成したターゲティング部分の１個に連結され、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分は両方ともシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結され、ターゲティング部分の１個は、Ｆｃドメインに連結される（図１１Ａ～Ｌおよび１４Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
１種のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および２個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結される（図１６Ａ～Ｊおよび１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分は、末端上で連結される（図１６Ａ～Ｊおよび１７Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は同じ末端上でＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖上でＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分は、もう一方のＦｃ鎖上で連結される（図１８Ａ～Ｆおよび１９Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はターゲティング部分に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結され、もう一方のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ、１２Ａ～Ｌ、および１５Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、異なる末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、ターゲティング部分および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、同じＦｃ鎖に連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、ターゲティング部分はシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１に連結され、これは、Ｆｃドメインに連結され、もう一方のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、同じ末端上の異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１および対形成しないシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、異なる末端上の異なるＦｃ鎖に連結される（図６Ａ～Ｊおよび９Ａ～Ｊ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は一緒に連結され、ターゲティング部分は対形成したシグナル伝達物質の１種に連結され、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は一緒に連結され、シグナル伝達物質の１種はＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ、１８Ａ～Ｆ、および１９Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質およびターゲティング部分は、同じＦｃ鎖に連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質およびターゲティング部分は、異なるＦｃ鎖に連結される（図１８Ａ～Ｆおよび１９Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、対形成したシグナル伝達物質およびシグナル伝達物質は、同じ末端上で異なるＦｃ鎖に連結される（図１８Ａ～Ｆおよび１９Ａ～Ｆ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は両方ともターゲティング部分に連結され、シグナル伝達物質の１種はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのエフェクター機能を低減または除去する変異を含む。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は一緒に連結され、シグナル伝達物質の１種はターゲティング部分に連結され、もう一方のシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。
２種のシグナル伝達物質および１個のターゲティング部分が存在するいくつかの実施形態では、各シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１はＦｃドメインに連結され、ターゲティング部分はシグナル伝達物質の１種に連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、同じＦｃ鎖に連結される（図１２Ａ～Ｌおよび１５Ａ～Ｌ参照）。
いくつかの実施形態では、ターゲティング部分またはシグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの片方または両方、および任意選択でヒンジ領域を含む、Ｆｃドメインに連結される。例えば、単一ヌクレオチド配列としてＦｃドメインに連結されたターゲティング部分、シグナル伝達物質、例えば、ＩＦＮα１、またはこれらの組み合わせをコードするベクターを用いて、このようなポリペプチドを作製できる。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３のいずれか１つと少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３から選択されるアミノ酸配列およびそのアミノ酸配列に対し１０個未満の変異を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３から選択されるアミノ酸配列およびそのアミノ酸配列に対し５個未満の変異を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号２９０と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第１のアミノ酸配列、および配列番号２９１と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号２９３と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第１のアミノ酸配列、および配列番号２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、または２９９のいずれか１つと少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体は、配列番号３００、３０１、３０２、３０３のいずれか１つと少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第１のアミノ酸配列、および配列番号２９４と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第２のアミノ酸配列を含む。
追加のシグナル伝達物質
一態様では、本発明は、本明細書で記載のＩＦＮα１またはそのバリアントに加えて、１種または複数のシグナル伝達物質（例えば、免疫調節薬）を含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を提供する。例示的実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、本明細書で記載のＩＦＮα１またはそのバリアントに加えて、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個のまたはそれより多いシグナル伝達物質を含み得る。種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、その１個または複数の受容体に対する低減された親和性または活性を有するように改変され、これはキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の活性（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）の減弱化を可能にし、および／または非特異的シグナル伝達または望ましくない隔離を防止する。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、野生型の形態ではアンタゴニストであり、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異を有する。種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因してアンタゴニストであり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、そのアンタゴニスト活性を弱める１個または複数の変異も有する（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、サイトカイン、増殖因子、およびホルモンの改変型から選択される。このようなサイトカイン、増殖因子、およびホルモンの例としては、限定されないが、リンホカイン、モノカイン、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの従来のポリペプチドホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などのタンパク質ホルモン；肝臓増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦαなどの神経成長因子；血小板増殖因子；形質転換増殖因子（ＴＧＦ）例えば、ＴＧＦαおよびＴＧＦβ；インスリン様増殖因子－ＩおよびＩＩ；骨誘導因子；例えば、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ（およびインターフェロンＩ、ＩＩおよびＩＩＩ型）などのインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）例えば、マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）、顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；および顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）；インターロイキン(ＩＬs)例えば、ＩＬ１β、ＩＬ１α、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、およびＩＬ１８などのインターロイキン；例えば、ＴＮＦ－αまたはＴＮＦβなどの腫瘍壊死因子；ならびにその他のポリペプチド因子、例えば、ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）が挙げられる。本明細書で使用される場合、サイトカイン、増殖因子、およびホルモンは、天然起源または組換え細菌、真核生物または哺乳動物細胞培養システムからの生成物および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、限定されないが、ＴＧＦ－αおよびＴＧＦβなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様増殖因子－ＩおよびＩＩなどのインスリン様増殖因子、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ヘレグリン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）から選択される増殖因子の改変型である。
ある実施形態では、増殖因子質は、改変型の繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）である。ＦＧＦの例としては、限定されないが、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、マウスＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、およびＦＧＦ２３が挙げられる。
ある実施形態では、増殖因子質は、改変型の血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦの例は、限定されないが、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ならびにＰＧＦおよびこれらのアイソフォームを含み、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、およびＶＥＧＦ２０６などの種々のＶＥＧＦ－Ａのアイソフォームを含む。
ある実施形態では、増殖因子は、改変型の形質転換増殖因子（ＴＧＦ）である。ＴＧＦの例は、限定されないが、ＴＧＦ－αおよびＴＧＦ－βならびにそのサブタイプを含まれ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、およびＴＧＦβ３を含むＴＧＦ－βの種々のサブタイプを含む。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、限定されないが、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、アンドロゲン、エストロゲン、甲状腺刺激ホルモン、濾胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、プロラクチン、成長ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、抗利尿ホルモン、オキシトシン、チロトロピン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、ドーパミン、メラトニン、チロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイド、アドレナリン、ノルアドレナリン、プロゲステロン、インスリン、グルカゴン、アミリン、カルシトリオール、カルシフェロール、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ガストリン、セクレチン、コレシストキニン、神経ペプチドＹ、グレリン、ＰＹＹ３－３６、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、レプチン、トロンボポエチン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、およびアンジオテンシノーゲンから選択されるホルモンの改変型である。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、免疫調節薬、例えば、インターロイキン、インターフェロン、および腫瘍壊死因子の１種または複数である。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、インターロイキンであり、例えば、ＩＬ１β、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２１、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＩＬ３２、ＩＬ３３、ＩＬ３５、ＩＬ３６またはそのフラグメント、バリアント、類似体、またはファミリーメンバーを含む。インターロイキンは、リンパ球、単球、およびマクロファージにより合成される多機能サイトカイン群である。既知の機能は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、好酸球、およびリンパ球）の増殖の刺激、好中球およびＴリンパ球の遊走作用、および／またはインターフェロンの阻害を含む。インターロイキン活性は、当該技術分野において既知のアッセイを使用して測定できる（Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．１９８７，ｐｐ．２２１－２２５；ａｎｄ Ｏｒｅｎｃｏｌｅ ＆ Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８９）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １，１４－２０）。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、インターフェロンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ型などの改変型のインターフェロンである。インターフェロンの例としては、例えば、インターフェロンα－１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、および２１、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、インターフェロンκ、インターフェロンε、およびインターフェロンτが挙げられる。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、Ｉ型インターフェロンである。いくつかの実施形態では、Ｉ型インターフェロンは、ＩＦＮα２、ＩＦＮα１、ＩＦＮ－β、ＩＦＮγ、コンセンサスＩＦＮ、ＩＦＮ－ε、ＩＦＮ－κ、ＩＦＮ－τ、ＩＦＮ－δ、およぎＩＦＮ－νから選択される。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の改変型またはＴＮＦファミリーのタンパク質であり、限定されないが、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴβ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＦＡＳＬ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、およびＴＲＡＩＬを含む。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１個または複数の変異を有する改変型（例えば、変異型）のシグナル伝達物質である。種々の実施形態では、変異は、改変シグナル伝達物質が、非改変型または非変異型、すなわち、野生型形態のシグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変された（例えば、変異の）形態の同じシグナル伝達物質を比較して）、低減された結合親和性、低減された内在性活性、および低減された特定の生物活性の１種または複数などの１種または複数の減弱化された活性を有することを可能にする。種々の実施形態では、変異は、改変シグナル伝達物質が、非改変型または非変異型、すなわち、非変異型ＩＦＮα１に比較して、低減された結合親和性、低減された内因性活性、および低減された特定の生物活性の１種または複数などの１種または複数の減弱化された活性を有することを可能にする。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異を含む。いくつかの実施形態では、結合または親和性を弱めるまたは低減する変異は、結合または活性を実質的に低減または除去する変異とは異なる。結果として、種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型、すなわち、野生型シグナル伝達物質に比べて（例えば、野生型形態と改変された（例えば、変異した）型の同じシグナル伝達物質を比較して）、より安全であること、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。種々の実施形態では、変異は、シグナル伝達物質が、非変異型インターフェロン、例えば、ＩＦＮα１の非変異型配列に比べて、より安全であること、例えば、低減された全身毒性、低減された副作用、および低減されたオフターゲット効果を有することを可能にする。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対する結合親和性または活性を低減する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達物質は、受容体に対する結合親和性または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を有するように改変される。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる活性は、受容体に対するアゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の活性化）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、その受容体を活性化し得る。このような実施形態では、変異は、受容体に対する活性化作用を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された活性化シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または活性化シグナルが除去され得る。いくつかの実施形態では、野生型シグナル伝達物質により与えられる作用は、受容体に対するアンタゴニズム（例えば、治療の部位での細胞効果の遮断または抑制）である。例えば、野生型シグナル伝達物質は、受容体をアンタゴナイズするまたは阻害し得る。これらの実施形態では、変異は、受容体に対するアンタゴナイズ活性を低減または除去するように改変されたシグナル伝達物質をもたらす。例えば、変異は、標的細胞に低減された阻害シグナルを送るように改変されたシグナル伝達物質をもたらし得る、または阻害シグナルが除去され得る。種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、１個または複数の変異に起因してアンタゴニストであり、例えば、アゴニストシグナル伝達物質はアンタゴニストシグナル伝達物質に変換され（例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号に記載のように。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）、このような変換されたシグナル伝達物質は、場合により、１個または複数のその受容体に対し、その結合親和性または活性を低減する、またはその１個または複数の受容体に対し結合親和性または活性を低減または除去する１個または複数の変異も有する。
いくつかの実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１個または複数のターゲティング部分の結合により、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体への包含時に、誘導可能または回復可能である。他の実施形態では、受容体に対し低減された親和性または活性は、１個または複数のターゲティング部分の作用により、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体への包含時に、十分に誘導可能または回復可能ではない。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、標的細胞に対し活性である。理由は、ターゲティング部分（単一または複数）が、実質的な活性化に必要とされる欠損した／不十分な結合（例えば、限定されないが、および／または結合力）を補償するためである。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、治療作用部位へ向かう途上では実質的に不活性であり、特異的に標的とされる細胞型に対してその効果を実質的に有し、これにより望ましくない副作用を大きく低減する。
いくつかの実施形態では、追加のシグナル伝達物質は、１個の受容体（すなわち、治療受容体）に対する結合または親和性を弱めるまたは低減させる１個または複数の変異および第２の受容体に対する結合または活性を実質的に低減または除去する１個または複数の変異を含み得る。このような実施形態では、これらの変異は、同じまたは異なる位置にあってよい（すなわち、同じ変異または複数の変異）。いくつかの実施形態では、１個の受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単一または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単一または複数）とは異なる。いくつかの実施形態では、１個の受容体に対し結合および／または活性を低減する変異（単一または複数）は、別の受容体に対し実質的に低減または除去する変異（単一または複数）と同じである。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、治療受容体に対し結合および／または活性を弱め、したがってより制御されたオンターゲット治療効果（例えば、野生型シグナル伝達物質に比較して）を可能にする変異および、別の受容体に対する結合および／または活性を実質的に低減または除去ししたがって副作用を低減する（例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて）変異の両方を有する改変シグナル伝達物質を有する。
いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分により、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体への包含時に、十分に誘導できないまたは回復できない。いくつかの実施形態では、結合または活性の実質的な低減または除去は、ターゲティング部分により、または本明細書で開示のＦｃベースキメラタンパク質複合体への包含時に、誘導または回復可能である。種々の実施形態では、第２の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、他の受容体により媒介される有害作用も防止し得る。あるいは、または加えて、その他の受容体に対する結合または活性の実質的な低減または除去は、治療キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を治療作用部位から離して隔離するのを低減するまたは無くするので、治療効果を改善させる。例えば、いくつかの実施形態では、これは、他の受容体での損失を補償するための高用量のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の必要性を無くする。このような投与量を低減する能力は、さらに副作用の可能性を低くする。
種々の実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、１個または複数のその受容体に対し、シグナル伝達物質に、親和性、例えば、結合（例えば、ＫＤ）および／または活性化（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアゴニストである場合、例えば、ＫＡおよび／またはＥＣ５０として測定可能である）および／または阻害（例えば、改変シグナル伝達物質がその受容体のアンタゴニストである場合、例えば、ＫＩおよび／またはＩＣ５０として測定可能である）を低減、実質的に低減、または除去する１個または複数の変異を含む。種々の実施形態では、シグナル伝達物質の受容体に対する低減された親和性は、活性の減弱化（アゴニズムまたはアンタゴニズムを含む）を可能にする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、野生型シグナル伝達物質に比較して、受容体に対する約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１０％～２０％、約２０％～４０％、約５０％、約４０％～６０％、約６０％～８０％、約８０％～１００％の親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、野生型シグナル伝達物質に比べて、少なくとも約２倍低い、約３倍低い、約４倍低い、約５倍低い、約６倍低い、約７倍低い、約８倍低い、約９倍低い、少なくとも約１０倍低い、少なくとも約１５倍低い、少なくとも約２０倍低い、少なくとも約２５倍低い、少なくとも約３０倍低い、少なくとも約３５倍低い、少なくとも約４０倍低い、少なくとも約４５倍低い、少なくとも約５０倍低い、少なくとも約１００倍低い、少なくとも約１５０倍低い、または約１０～５０倍低い、約５０～１００倍低い、約１００～１５０倍低い、約１５０～２００倍低い、または２００倍超低い（限定するものではないが、非変異型ＩＦＮα１に対する比較を含む）。
キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体が１個の受容体に対し結合を低減し、第２の受容体に対し結合を実質的に低減または除去する変異を有するいくつかの実施形態では、１個の受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、その他の受容体に対する親和性の実質的低減または除去より小さい。いくつかの実施形態では、１個の受容体に対する改変シグナル伝達物質の結合親和性の減弱または低減は、他の受容体に対する親和性の実質的 低減または除去よりも、約１％、または約３％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％だけ小さい。種々の実施形態では、実質的な低減または除去は、減弱または低減よりも大きい結合親和性および／または活性の低減を指す。
種々の実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、例えば、野生型シグナル伝達物質に比べて、シグナル伝達物質の内因性活性を、約７５％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２５％、または約２０％、または約１０％、または約５％、または約３％、または約１％に低減する１個または複数の変異を含む（限定するものではないが、非変異型ＩＦＮα１に対する比較を含む）。
種々の実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質は、サイトカイン、成長因子、およびホルモンのいずれか１種の受容体に対する低減された親和性および／または活性を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質が、その受容体に対するターゲティング部分の結合親和性より低い、その受容体に対する低減された親和性を有するようにさせる１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、同じ細胞上のシグナル伝達物質／受容体とターゲティング部分／受容体との間に存在する。いくつかの実施形態では、この結合親和性の差異は、シグナル伝達物質、例えば、変異シグナル伝達物質が、局在化されたオンターゲット効果を有し、かつ野生型シグナル伝達物質で観察される副作用の根底にあるオフターゲット効果を最小化するのを可能にする。いくつかの実施形態では、この結合親和性は、少なくとも約２倍、または少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍、または少なくとも約１５倍低い、または少なくとも約２５倍、または少なくとも約５０倍低い、または少なくとも約１００倍、または少なくとも約１５０倍低い。
受容体結合活性は、当該技術分野において既知の方法を使用して測定され得る。例えば、親和性および／または結合活性は、スキャッチャードプロット分析および結合データのコンピューターフィッティング（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，１９４９）またはＢｒｅｃｈｔら（１９９３）により記載のように、フロースルー条件下で反射型干渉分光法により評価し得る。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載の野生型シグナル伝達物質のアミノ酸配列は、当該技術分野において、周知である。したがって、種々の実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、本明細書に記載のシグナル伝達物質の既知の野生型アミノ酸配列との少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、本明細書で開示の配列のいずれかとの少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性（例えば、約６０％、または約６１％、または約６２％、または約６３％、または約６４％、または約６５％、または約６６％、または約６７％、または約６８％、または約６９％、または約７０％、または約７１％、または約７２％、または約７３％、または約７４％、または約７５％、または約７６％、または約７７％、または約７８％、または約７９％、または約８０％、または約８１％、または約８２％、または約８３％、または約８４％、または約８５％、または約８６％、または約８７％、または約８８％、または約８９％、または約９０％、または約９１％、または約９２％、または約９３％、または約９４％、または約９５％、または約９６％、または約９７％、または約９８％、または約９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む。
種々の実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、１個または複数のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数のアミノ酸変異は、置換、挿入、欠失、および切り詰めから独立に選択され得る。
いくつかの実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、本明細書で記載のように、保存的置換および／または非保存的置換を含み得る。
本明細書に記載のように、追加の改変シグナル伝達物質は、１個または複数の受容体に対し親和性および／または活性に影響を与える変異を有する。種々の実施形態では、治療受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介される（例えば、アゴニズムまたはアンタゴニズム）受容体に対する低減された親和性および／または活性が存在する。種々の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、受容体、例えば、それにより目的の治療効果が媒介されない（例えば、結合の混乱状態の結果として）受容体に対する親和性および／または活性が実質的に低減または除去される変異を有する。改変シグナル伝達物質の受容体、例えば、本明細書に記載のサイトカイン、成長因子、およびホルモンの１個の受容体は、当技術分野において既知である。
受容体に対し低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）をもたらす変異の例は、国際公開第２０１３／１０７７９１号（例えば、インターフェロンに関して）、国際公開第２０１５／００７５４２号（例えば、インターロイキンに関して）、および国際公開第２０１５／００７９０３号（例えば、ＴＮＦに関して）で見出され、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。治療受容体に対する親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性）を低減する変異の例は、国際公開第２０１５／００７５２０号で見出され、この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、シグナル伝達物質のＩ型サイトカイン受容体、ＩＩ型サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーの受容体、ＴＧＦベータ受容体、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体、および／またはチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体に対する親和性および／または活性を低減させる１個または複数の変異を含む。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉ型サイトカイン受容体である。Ｉ型サイトカイン受容体は当技術分野において既知であり、限定されないが、ＩＬ２（ベータサブユニット）、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦに対する受容体、およびトロンボポエチン（ＴＰＯ）、プロラクチン、および成長ホルモンに対する受容体も含む。例示Ｉ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、Ｇ－ＣＳＦ受容体、ＬＩＦ受容体、ＣＮＴＦ受容体、ＴＰＯ受容体、およびＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、ＩＩ型サイトカイン受容体である。ＩＩ型サイトカイン受容体は、異種のサブユニットからなる多量体受容体であり、主にインターフェロンに対する受容体である。この受容体ファミリーには、限定されないが、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ、ＩＬ１０、ＩＬ２２、および組織因子に対する受容体が含まれる。例示ＩＩ型サイトカイン受容体としては、限定されないが、ＩＦＮα受容体（例えば、ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２）、ＩＦＮβ受容体、ＩＦＮγ受容体（例えば、ＩＦＮＧＲ１およびＩＦＮＧＲ２）、およびＩＩ型ＩＬ受容体が挙げられる。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、Ｇタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、７回膜貫通型構造を有し、シグナル伝達のためにＧタンパク質に結合されるＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体としては、限定されないが、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、およびＸＣケモカイン受容体（ＸＣＲ１）が挙げられる。ケモカイン受容体の例としては、限定されないが、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＳＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１、およびＣＸ３ＣＲ１が挙げられる。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＮＦＲファミリーメンバーである。腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーメンバーは、細長い分子を作成するＣＸＸＣＸＸＣのコアモチーフを取り囲む３つのジスルフィド結合から形成されるシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を共有する。腫瘍壊死因子受容体ファミリーの例としては、下記が挙げられる：ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、リンホトキシンベータ受容体（ＬＴＢＲ、ＴＮＦＲＳＦ３）、ＣＤ１３４（ＴＮＦＲＳＦ４）、ＣＤ４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５）、ＦＡＳ（ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ）、ＣＤ２７（ＣＤ２７、ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ）、ＲＡＮＫ（ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ）、破骨細胞分化抑制因子（ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ（ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ、ＴＮＦＲＳＦ１６）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＮＦＲＳＦ１９）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＴＮＦＲＳＦ２１）、およびＴＮＦＲＳＦ２５（ＴＮＦＲＳＦ２５）。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、ＴＧＦベータ受容体である。ＴＧＦベータ受容体は、１回膜貫通型セリン／トレオニンキナーゼ受容体である。ＴＧＦベータ受容体には、限定されないが、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、およびＴＧＦＢＲ３が挙げられる。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、Ｉｇスーパーファミリー受容体である。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの受容体は、免疫グロブリンとの構造的相同性を共有する。Ｉｇスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、インターロイキン－１受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＤＧＦＲ（例えば、ＰＤＧＦＲＡおよびＰＤＧＦＲＢ）、およびＳＣＦＲが挙げられる。
種々の実施形態では、追加のシグナル伝達物質に対する受容体は、チロシンキナーゼスーパーファミリー受容体である。チロシンキナーゼチロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体は、当該技術分野において周知である。２０のサブファミリーに分類される約５８個の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が存在する。チロシンキナーゼスーパーファミリーの受容体としては、限定されないが、ＦＧＦ受容体およびそれらの種々のアイソフォーム、例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、およびＦＧＦＲ５が挙げられる。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、インターフェロンαである。このような実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮα物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
変異型のインターフェロンαは、当業者に既知である。ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号２３３のアミノ酸配列を有するアレル型ＩＦＮα２ａである。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号２３４のアミノ酸配列（これはアミノ酸位置２３でＩＦＮα２ａとは異なる）を有するアレル型ＩＦＮα２ｂである：
いくつかの実施形態では、上記ＩＦＮα２変異体（ＩＦＮα２ａまたはＩＦＮα２ｂ）は、位置１４４～１５４、例えば、アミノ酸位置１４８、１４９および／または１５３で、１個または複数のアミノ酸の変異が導入されている。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、Ｌ１５３Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＭ１４８Ａから選択される１個または複数の変異を含む。このような変異体は、例えば、国際公開第２０１３／１０７７９１号およびＰｉｅｈｌｅｒら、（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７５：４０４２５－３３に記載されている。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＩＦＮα２変異体は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｆ６４Ａ、Ｎ６５Ａ、Ｔ６９Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、およびＹ８９Ａから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７５２０号および国際公開第２０１０／０３０６７１号に記載のように、ＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異を含む。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、前記ＩＦＮα２変異体は、野生型ＩＦＮα活性２をアンタゴナイズする。このような実施形態では、上記変異体ＩＦＮα２は、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有するが、ＩＦＮＲ２に対する活性は保持される。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、（１）Ｒ１２０ＥおよびＲ１２０Ｅ／Ｋ１２１Ｅから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらはアンタゴニスト効果を作り出す）、および（２）Ｋ１３３Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異（理論に束縛されることを望むものではないが、これらは、例えば、ＩＦＮＡＲ２に対する減弱化効果を可能とする）を含む。ある実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１２０ＥおよびＬ１５３Ａを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、国際公開第２０１３／０５９８８５号に開示のように、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｍ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、およびＮ１５６Ａから選択される１個または複数の変異を含み、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ３０Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＲ３３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＭ１４８Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ｎ、Ｑ６１Ｓ、および／またはＬ１５３Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、および／またはＹ８９Ａを含む。いくつかの実施形態では、国際公開第２０１３／０５９８８５号で開示のように、ヒトＩＦＮα２変異体は、変異Ｎ６５Ａ、Ｌ８０Ａ、Ｙ８５Ａ、Ｙ８９Ａおよび／またはＤ１１４Ａを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２変異体は、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、およびＲ３３Ａから選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ１は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ２は、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択される。いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮα２は、配列番号２３３または２３４のアミノ酸配列を基準にしてＲ３３Ａ、Ｔ１０６Ｘ３、Ｒ１２０Ｅ、Ｒ１４４Ｘ１、Ａ１４５Ｘ２、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、およびＬ１５３Ａから選択される１個または複数の変異を含み、Ｘ１は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｌ、およびＩから選択され、Ｘ２は、Ｇ、Ｈ、Ｙ、Ｋ、およびＤから選択され、かつＸ３は、ＡおよびＥから選択される。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、インターフェロンβである。このような実施形態では、改変インターフェロンβ物質はまた、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβ物質は、ＩＦＮα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）、すなわち、ＩＦＮＡＲ１および／またはＩＦＮＡＲ２鎖に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある例示的実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質はＩＦＮβである。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、官能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはＩＦＮβのフラグメントを包含する。種々の実施形態では、ＩＦＮβは、任意の種由来のＩＦＮβを包含する。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、改変型のマウスＩＦＮβを含む。別の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、改変型のヒトＩＦＮβを含む。ヒトＩＦＮβは、１６６個のアミノ酸残基を含む約２２ｋＤａの分子量を有するポリペプチドである。ヒトＩＦＮβのアミノ酸配列は、配列番号２７７である。
いくつかの実施形態では、ヒトＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβのグリコシル化型であるＩＦＮβ１ａである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮβは、Ｍｅｔ－１欠失およびＣｙｓ－１７のＳｅｒへの変異を有する非グリコシル化型のヒトＩＦＮβであるＩＦＮβ１ｂである。
種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ１サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｆ６７、Ｒ７１、Ｌ８８、Ｙ９２、Ｉ９５、Ｎ９６、Ｋ１２３、およびＲ１２４に１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、Ｆ６７Ｇ、Ｆ６７Ｓ、Ｒ７１Ａ、Ｌ８８Ｇ、Ｌ８８Ｓ、Ｙ９２Ｇ、Ｙ９２Ｓ、Ｉ９５Ａ、Ｎ９６Ｇ、Ｋ１２３Ｇ、およびＲ１２４Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７ＧおよびＲ７１Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ８８ＧおよびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ９２Ｇ、Ｉ９５Ａ、およびＮ９６Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｋ１２３ＧおよびＲ１２４Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｇ、Ｌ８８Ｇ、およびＹ９２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｆ６７Ｓ、Ｌ８８Ｓ、およびＹ９２Ｓ変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲのＩＦＮＡＲ２サブユニットに対するその結合または親和性を低減する１個または複数の変異を有する。一実施形態では、改変ＩＦＮβは、ＩＦＮＡＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、ヒトＩＦＮβであり、位置Ｗ２２、Ｒ２７、Ｌ３２、Ｒ３５、Ｖ１４８、Ｌ１５１、Ｒ１５２、およびＹ１５５に１個または複数の変異を有する。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、Ｗ２２Ｇ、Ｒ２７Ｇ、Ｌ３２Ａ、Ｌ３２Ｇ、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｇ、Ｖ１４８Ｇ、Ｌ１５１Ｇ、Ｒ１５２Ａ、Ｒ１５２Ｇ、およびＹ１５５Ｇから選択される置換である。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ３５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｒ１５２Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｙ１５５Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｗ２２ＧおよびＲ２７Ｇ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ３２ＡおよびＲ３５Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｌ１５１ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。ある実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ｖ１４８ＧおよびＲ１５２Ａ変異を含む。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１個または複数の次の変異を有する：Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１個または複数の次の変異を有する：Ｃ１７ＳまたはＣ１７Ａと組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。
いくつかの実施形態では、改変ＩＦＮβは、１個または複数の次の変異を有する：本明細書で記載の他のＩＦＮβ変異と組み合わせた、Ｒ３５Ａ、Ｒ３５Ｔ、Ｅ４２Ｋ、Ｍ６２Ｉ、Ｇ７８Ｓ、Ａ１４１Ｙ、Ａ１４２Ｔ、Ｅ１４９Ｋ、およびＲ１５２Ｈ。
ヒトＩＦＮβの結晶構造は、既知であり、Ｋａｒｐｕｓａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ，９４（２２）：１１８１３－１１８１８に記載されている。特に、ヒトＩＦＮβの構造は、５つのαヘリックス（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）およびこれらのヘリックスを連結する４つのループ領域（すなわち、ＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ）を含むことが示された。種々の実施形態では、改変ＩＦＮβは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅヘリックスおよび／またはＡＢ、ＢＣ、ＣＤ、およびＤＥループ中に、ＩＦＮＡＲなどの治療受容体に対するその結合親和性または活性を低減させる１個または複数の変異を有する。変異の例は、国際公開第２０００／０２３１１４号および米国特許出願公開第２０１５／００１１７３２号に記載されている。これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１５、１６、１８、１９、２２、および／または２３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置２８～３０、３２、および３３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置３６、３７、３９、および４２にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置６４および６７にアラニン置換を含み、位置６８にセリン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置７１～７３にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置９２、９６、９９、および１００にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１２８、１３０、１３１、および１３４にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。例示的実施形態では、改変ＩＦＮβは、アミノ酸位置１４９、１５３、１５６、および１５９にアラニン置換を含むヒトＩＦＮβである。いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｗ２２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｒ２７に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｗ２２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ２７に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｌ３２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｒ３５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｌ３２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ３５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｆ６７に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｒ７１に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｆ６７に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ７１に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｌ８８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｙ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｆ６７に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＬ８８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｌ８８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｉ９５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｎ９６に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＹ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｙ９２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＩ９５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、およびＮ９６に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｋ１２３に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｒ１２４に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｋ１２３に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１２４に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｌ１５１に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｒ１５２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｌ１５１に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｖ１４８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびメチオニン（Ｍ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｖ１４８に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基であり、さらにＲ１５２に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＦＮβは、配列番号２７７を含み、Ｙ１５５に変異を含み、変異は、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）から選択される脂肪族疎水性残基である。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号２７７のアミノ酸配列を含み、位置Ｗ２２に変異を有し、変異は脂肪族疎水性残基および本明細書で開示の改変ＩＬ２または改変ＩＬ２バリアントであり；および（ｂ）１個または複数のターゲティング部分を含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に関し、ターゲティング部分は、目的の抗原または受容体に特異的に結合する認識ドメインを含み、改変ＩＦＮβおよび１個または複数のターゲティング部分は、１個または複数のリンカーと任意に結合されてもよい。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異は、Ｇ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、およびＶから選択される脂肪族疎水性残基である。種々の実施形態では、位置Ｗ２２の変異はＧである。
追加のＩＦＮβ変異体の例は、国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０６１５４４号で提供される。この全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、インターフェロンγである。このような実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インターフェロンγ物質は、インターフェロンガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、すなわち、ＩＦＮＧＲ１および／またはＩＦＮＧＲ２鎖に対し、実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、コンセンサスインターフェロンである。コンセンサスインターフェロンは、いくつかのヒト非アレルＩＦＮαサブタイプの配列を走査し、それぞれ対応する位置で最も高頻度に観察されるアミノ酸を割り当てることにより、生成される。コンセンサスインターフェロンは、１６６個のアミノ酸の内の２０個でＩＦＮα２ｂとは異なり（８８％相同性）、ＩＦＮβとの比較は、３０％を超えるアミノ酸位置で同一性を示す。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、次の配列番号２７８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、配列番号２７９のアミノ酸配列を含み、これは、配列番号２７８のアミノ酸配列とは、１個のアミノ酸だけ異なり、すなわち、配列番号２７９は、配列番号２７８の最初のメチオニン残基を欠いている：
種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンは、改変型のコンセンサスインターフェロン、すなわち、コンセンサスインターフェロンバリアントをシグナル伝達物質として含む。種々の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、機能性誘導体、類似体、前駆物質、アイソフォーム、スプライスバリアント、またはコンセンサスインターフェロンのフラグメントを包含する。
ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、同第５，５４１，２９３号、および同第８，４９６，９２１号で開示されているコンセンサスインターフェロンバリアントから選択される。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。例えば、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第４，６９５，６２３号、同第４，８９７，４７１号、および同第５，５４１，２９３号で開示のような、ＩＦＮ－ＣＯＮ２またはＩＦＮ－ＣＯＮ３のアミノ酸配列を含み得る。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮ－ＣＯＮ２のアミノ酸配列、配列番号２８０を含む。
ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ＩＦＮ－ＣＯＮ３のアミノ酸配列、配列番号２８１を含む。
ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、米国特許第８，４９６，９２１号で開示のバリアントのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例えば、コンセンサスバリアントは、配列番号２８２のアミノ酸配列を含み得る。
別の実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、配列番号２８３のアミノ酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、ペグ化され得、すなわち、ＰＥＧ部分を含む。ある実施形態では、コンセンサスインターフェロンバリアントは、配列番号２８３のＳ１５６Ｃの位置で結合されたＰＥＧ部分を含み得る。
いくつかの実施形態では、改変インターフェロンは、ヒトＩＦＮα２ａのバリアントであり、Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｎ（配列番号２８４）の配列の位置４１の近傍へのＡｓｐの挿入によりＧｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ａｓｎ－Ｇｌｎ（配列番号２８５）が得られ（これはＩＦＮα２ａ配列に対する配列の再番号割当をもたらす）、次の変異Ａｒｇ２３Ｌｙｓ、Ｌｅｕ２６Ｐｒｏ、Ｇｌｕ５３Ｇｌｎ、Ｔｈｒ５４Ａｌａ、Ｐｒｏ５６Ｓｅｒ、Ａｓｐ８６Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１０４Ｔｈｒ、Ｇｌｙ１０６Ｇｌｕ、Ｔｈｒ１１０Ｇｌｕ、Ｌｙｓ１１７Ａｓｎ、Ａｒｇ１２５Ｌｙｓ、およびＬｙｓ１３６Ｔｈｒを有する。コンセンサスインターフェロンについて記載する本明細書の全ての実施形態は、同様に、この遺伝子改変インターフェロンに該当する。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）である。ＶＥＧＦは、生理学的であるが病的でもある血管新生において重要な役割を果たし、血管透過性を調節し、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞に対して成長因子として作用できる、強力な成長因子である。さらなる機能には、特に、マクロファージ系統および内皮細胞の細胞遊走の刺激が含まれる。少なくとも３個の受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３）に加えて、ＶＥＧＦ成長因子ファミリーのいくつかのメンバーが存在する。ＶＥＧＦファミリーのメンバーは、２種以上のＶＥＧＦＲタイプに結合およびこれを活性化できる。例えば、ＶＥＧＦ－Ａは、ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２を結合し、一方、ＶＥＧＦ－Ｃは、ＶＥＧＦＲ２およびＶＥＧＦＲ３を結合できる。ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２活性化は、血管新生を調節し、ＶＥＧＦＲ３活性化は、リンパ脈管新生に関与する。大部分の血管新生促進シグナルは、ＶＥＧＦＲ２の活性化から生成される。ＶＥＧＦＲ１活性化は、血管新生の負の役割と関連する可能性があることが報告された。ＶＥＧＦＲ１シグナル伝達は、腫瘍の骨髄由来ＶＥＧＦＲ１陽性細胞を介したインビボ進行にも重要である（骨中の転移前微小環境の形成の一因となる）ことも報告された。治療抗体に向けられた／治療抗体を中和するＶＥＧＦ－Ａをベースにしたいくつかの治療法が、主に、血管新生に依存する種々のヒト腫瘍の治療での使用のために開発されてきた。しかし、これらは、副作用がないわけではない。これは、これらが一般的な非細胞／組織特異的ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ相互作用阻害剤として作用することを考慮すると驚くべきことではない。従って、特定の標的細胞（例えば、腫瘍血管系内皮細胞）に対するＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ）／ＶＥＧＦＲ２阻害を制限することが望ましいであろう。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはＶＥＧＦ－ＥおよびＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、およびＶＥＧＦ２０６などの種々のＶＥＧＦ－Ａのアイソフォームを含むこれらのアイソフォームである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷治癒方法または虚血関連疾患の治療で使用される（理論に束縛されることを意図するものではないが、内皮細胞機能および血管新生に対するＶＥＧＦＲ２の効果により媒介されて）。種々の実施形態では、癌および炎症促進性活性と関連するＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）への結合が回避される。種々の実施形態では、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）は、デコイ受容体として機能し、そのため、この受容体に対する親和性を実質的に低減または除去し、治療薬の隔離を回避する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ－１（Ｆｌｔ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有し、および／またはＶＥＧＦＲ－２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ－ＣまたはＶＥＧＦ－Ｄである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する低減された親和性および／または活性を有する。あるいは、改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
血管新生促進治療法はまた、種々の疾患（例えば、虚血性心疾患、出血など）において重要であり、ＶＥＧＦベース治療薬を含む。ＶＥＧＦＲ２の活性化は血管新生促進性である（内皮細胞上で作用する）。ＶＥＧＦＲ１は、炎症細胞（例えば、マクロファージを含む）の遊走の刺激を生じ、血管過多透過性に関連する炎症をもたらし得る。ＶＥＧＦＲ１の活性化はまた、腫瘍微小環境形成に関連する骨髄を活性化できる。従って、ＶＥＧＦＲ２活性化に対し選択性があるＶＥＧＦベース治療薬は、この場合には望ましいであろう。さらに、例えば、内皮細胞を特異的に標的とする細胞が望ましいであろう。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。腫瘍内皮細胞マーカー（例えば、ＰＳＭＡなど）に結合するターゲティング部分を介して腫瘍血管系内皮細胞を標的にする場合、このような構築物は、このようなマーカー陽性細胞上に対し特異的にＶＥＧＦＲ２活性化を阻害するが、標的細胞へ向かう途上および標的細胞上では（活性が除去された場合）ＶＥＧＦＲ１を活性化せず、従って、例えば、炎症反応の誘導を無くする。これは、ＶＥＧＦ－Ａ中和療法に比べて、多くの腫瘍型に対するより選択的で安全な抗血管新生薬療法を提供することになろう。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＶＥＧＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有し、および／またはＶＥＧＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。血管内皮細胞への標的化により、いくつかの実施形態では、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ１が関連する炎症反応誘導を生じることなく、血管新生を促進する。従って、このような構築物は、ＶＥＧＦＲ２ならびにＶＥＧＦＲ１の全身性活性化に起因する副作用の実質的に低減されたリスクを有する標的化血管新生促進効果を有するであろう。
ある例示的実施形態では、改変シグナル伝達物質は、配列番号２３５のアミノ酸を有するＶＥＧＦ１６５である。
別の例示的実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、配列番号２３６のアミノ酸配列を有するＶＥＧＦ１６５ｂである。
これらの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸Ｉ８３での変異を有する（例えば、Ｉ８３での置換変異、例えば、Ｉ８３Ｋ、Ｉ８３Ｒ、またはＩ８３Ｈ）。理論に束縛されることを意図するものではないが、このような変異は、低減された受容体結合親和性を生じ得ると考えられている。例えば、米国特許第９，０７８，８６０号を参照されたい。この全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質はインターフェロンαである。ＴＮＦは、細胞増殖、分化、アポトーシス、腫瘍形成、ウイルス複製、自己免疫、免疫細胞機能および輸送、炎症、ならびに敗血性ショックの調節を含む、多くの多様な機能を有する多面的サイトカインである。それは、標的細胞：ＴＮＦＲ１（ｐ５５）およびＴＮＦＲ２（ｐ７５）上の２つの別々の膜受容体に結合する。ＴＮＦＲ１は非常に広範な発現パターンを示すが、ＴＮＦＲ２はリンパ球、Ｔｒｅｇ、内皮細胞、特定のニューロン、ミクログリア、心筋細胞および間葉系幹細胞の特定の集団上で選択的に発現される。受容体活性化に応答して、全く別々の生物学的経路が活性化されるが、若干の重なり合いも存在する。一般原則として、理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＮＦＲ１シグナル伝達はアポトーシス（細胞死）の誘導に関連し、ＴＮＦＲ２シグナル伝達は細胞生存シグナルの活性化に関連する（例えば、ＮＦκＢ経路の活性化）。ＴＮＦの投与は、全身的毒性であり、これは主にＴＮＦＲ１の関与のためである。しかし、ＴＮＦＲ２の活性化もまた、ＴＮＦＲ１と同様に、多様な作用に関連し、ＴＮＦ系治療薬の開発においては、ＴＮＦターゲティングおよび活性に対する制御が重要であることに留意されたい。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＴＮＦＲ１はほとんどの組織で発現され、かつ細胞死シグナル伝達に関与するが、対照的に、ＴＮＦＲ２は細胞生存シグナルに関与する。したがって、癌の治療法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。これらの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、アポトーシスが望ましい細胞、例えば、腫瘍細胞または腫瘍血管内皮細胞を標的にし得る。例えば、神経変性障害の治療のためのニューロン新生における、細胞生存を促進する方法に関する実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。言い方を変えれば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、いくつかの実施形態では、死シグナルまたは生存シグナルのどちらかを優先できる改変ＴＮＦα物質を含む。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、野生型ＴＮＦおよび／またはＴＮＦＲ１に対する低減された親和性および／または活性をもたらす変異のみを有するキメラに比べて、より強力なアポトーシスの誘導因子である。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞死または腫瘍血管内皮細胞死の誘導に使用される（例えば、癌の治療において）。また、いくつかの実施形態では、これらのキメラは、例えば、ＴＮＦＲ２を介してＴｒｅｇ細胞の活性化を回避または低減し、したがってインビボでのＴＮＦＲ１介在性抗腫瘍活性をさらに裏付ける。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦを有する。このようなキメラは、いくつかの実施形態では、いくつかの細胞型での細胞生存のより強力な活性化因子であり、これは種々の疾患における具体的治療目的であり得、限定されないが、ニューロン新生の刺激を含む。さらに、このようなＴＮＦＲ２選択キメラはまた、自己免疫疾患（例えば、クローン病、糖尿病、ＭＳ、大腸炎など、および本明細書に記載の多くの他の疾患）の治療において有用である。いくつかの実施形態では、キメラは自己反応性Ｔ細胞を標的にする。いくつかの実施形態では、キメラは、Ｔｒｅｇ細胞活性化および細胞傷害性Ｔ細胞の間接的抑制を促進する。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、例えば、ＴＮＦＲ２の活性化および／またはＴＮＦＲ１の回避により（例えば、ＴＮＦＲ２に対する低減された親和性および／または活性を有し、および／またはＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する改変ＴＮＦにより）自己反応性Ｔ細胞の死をもたらす。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの自己反応性Ｔ細胞は、例えば、ＮＦκＢ経路活性／シグナル伝達の変化により、変更されたアポトーシス／生存シグナルを有する。
いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲ２ベースキメラは、種々の自己免疫疾患、特に、心臓疾患、脱髄性および神経変性障害、および感染症を含む疾患に対する追加の治療用途を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＮＦαは、配列番号２３７のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＴＮＦα物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置２９、３１、３２、８４、８５、８６、８７、８８、８９、１４５、１４６および１４７に変異を有し、これが、低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦαをもたらす。例えば、米国特許第７，９９３，６３６号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、改変ヒトＴＮＦα部分は、１つまたは複数のアミノ酸位置Ｒ３２、Ｎ３４、Ｑ６７、Ｈ７３、Ｌ７５、Ｔ７７、Ｓ８６、Ｙ８７、Ｖ９１、Ｉ９７、Ｔ１０５、Ｐ１０６、Ａ１０９、Ｐ１１３、Ｙ１１５、Ｅ１２７、Ｎ１３７、Ｄ１４３、およびＡ１４５に変異を有する（ジェンバンク受入番号ＢＡＧ７０３０６、バージョンＢＡＧ７０３０６．１ Ｇｌ：１９７６９２６８５、ヒトＴＮＦ配列に従ってナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＴＮＦα部分は、Ｒ３２Ｇ、Ｎ３４Ｇ、Ｑ６７Ｇ、Ｈ７３Ｇ、Ｌ７５Ｇ、Ｌ７５Ａ、Ｌ７５Ｓ、Ｔ７７Ａ、Ｓ８６Ｇ、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、Ｙ８７Ｆ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ａ、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、Ｉ９７Ｓ、Ｔ１０５Ｇ、Ｐ１０６Ｇ、Ａ１０９Ｙ、Ｐ１１３Ｇ、Ｙ１１５Ｇ、Ｙ１１５Ａ、Ｅ１２７Ｇ、Ｎ１３７Ｇ、Ｄ１４３Ｎ、Ａ１４５ＧおよびＡ１４５Ｔから選択される置換変異を有する。ある実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ８７Ｑ、Ｙ８７Ｌ、Ｙ８７Ａ、およびＹ８７Ｆから選択される変異を有する。別の実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｉ９７Ａ、Ｉ９７Ｑ、およびＩ９７Ｓから選択される変異を有する。さらなる実施形態では、ヒトＴＮＦα部分は、Ｙ１１５ＡおよびＹ１１５Ｇから選択される変異を有する。
いくつかの実施形態では、国際公開第２００８／１２４０８６号に記載のように、改変ＴＮＦα物質は、Ｎ３９Ｙ、Ｓ１４７Ｙ、およびＹ８７Ｈから選択される１個または複数の変異を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦβである。ＴＮＦβは、ＬＴβ（ＬＴα１β２）と、ホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成できる。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＮＦＲ１および／またはＴＮＦＲ２および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＥＶＭ）および／またはＬＴβＲに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＮＦβは、配列番号２３８のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＴＮＦβ物質は、１つまたは複数のアミノ酸位置１０６～１１３に変異を含み得、これが、ＴＮＦＲ２に対する低減された受容体結合親和性を有する改変ＴＮＦβをもたらす。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸位置１０６～１１３に１個または複数の置換変異を有する。例示的実施形態では、置換変異は、Ｑ１０７Ｅ、Ｑ１０７Ｄ、Ｓ１０６Ｅ、Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｒ、Ｑ１０７Ｎ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｅ、Ｑ１０７Ｅ／Ｓ１０６Ｄ、Ｑ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｅ、およびＱ１０７Ｄ／Ｓ１０６Ｄから選択される。別の実施形態では、改変シグナル伝達物質は、位置１０６～１１３に、約１～約３個のアミノ酸の挿入を有する。
いくつかの実施形態では、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、追加の改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、単鎖トリマー型であり得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ１に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これもまた、場合により、ＴＮＦＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これは、ＴＮＦＲ２に対し、低減された親和性および／または活性、すなわちアンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＮＦＲ１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態の構築物は、例えば、細胞特異的な様式でＴＮＦ応答を抑制する方法において使用される。いくつかの実施形態では、アンタゴニストＴＮＦファミリーメンバー（例えば、ＴＮＦα、ＴＮＦβ）は、国際公開第２０１５／００７９０３号に記載のように、単鎖トリマー型である。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＲＡＩＬである。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）および／またはＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）および／またはＤｃＲ１および／またはＤｃＲ２に対して、低減された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＴＲＡＩＬは、配列番号２３９のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＴＲＡＩＬ物質は、アミノ酸位置Ｔ１２７～Ｒ１３２、Ｅ１４４～Ｒ１４９、Ｅ１５５～Ｈ１６１、Ｙ１８９～Ｙ２０９、Ｔ２１４～１２２０、Ｋ２２４～Ａ２２６、Ｗ２３１、Ｅ２３６～Ｌ２３９、Ｅ２４９～Ｋ２５１、Ｔ２６１～Ｈ２６４およびＨ２７０～Ｅ２７１に変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿００３８０１、バージョン１０ＮＰ＿００３８０１．１、ＧＩ：４５０７５９３、ヒト配列に基づいてナンバリング；上記参照）。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦαである。このような実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＴＧＦα物質は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦβである。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、これは、理論に束縛されることを意図するものではないが、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβは、ＴＧＦＢＲ２よりもＴＧＦＢＲ１またはＴＧＦＢＲ１よりもＴＧＦＢＲ２を選択する。同様に、理論に束縛されることを望むものではないが、ＬＡＰは、ＴＧＦベータ受容体に対するリガンドのリザーバーとして作用し得る。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対する低減された親和性および／または活性および／または潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、このようなキメラは、カムラチ・エンゲルマン病、または不適切なＴＧＦβシグナル伝達に関連する他の疾患において使用される。
いくつかの実施形態では、追加の改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の内の１種または複数に対し、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３の内の１種または複数に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
いくつかの実施形態では、追加の改変型物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これは、ＴＧＦＢＲ１および／またはＴＧＦＢＲ２に対して、低減された親和性および／または活性、すなわち、アンタゴニスト活性（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果であるアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。これらの実施形態では、改変物質は、ＴＧＦファミリーメンバー（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ）であり、これも同様に、場合により、ＴＧＦＢＲ３に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＬ１αまたはＩＬ１βである。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ１および／またはＩＬ１ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、本改変型ＩＬ１物質は、ＩＬ１Ｒ２に対する相互作用を回避し、したがって、治療薬に対するデコイおよび／またはシンクとしてのその機能を実質的に低減する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ１βは、配列番号２４０のアミノ酸配列を有する。
ＩＬ１βは、炎症促進性のサイトカインであり、重要な免疫系制御因子である。それは、ＣＤ４ Ｔ細胞応答の強力な活性化因子であり、Ｔｈ１７細胞の比率を高め、ＩＦＮγおよびＩＬ４産生細胞の増殖を増大させる。ＩＬ１βはまた、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の強力な制御因子であり、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖、分化、周辺部への移動および記憶を強化する。ＩＬ１β受容体には、ＩＬ１Ｒ１およびＩＬ１Ｒ２が含まれる。ＩＬ１Ｒ１への結合およびＩＬ１Ｒ１を介したシグナル伝達は、ＩＬ１βが多くのその生物学的（および病理学的）作用を媒介する機序を構成する。ＩＬ１Ｒ２は、デコイ受容体として機能できることにより、ＩＬ１Ｒ１を介した相互作用およびシグナル伝達を行うためのＩＬ１βの利用可能性を減らす。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１βは、ＩＬ１Ｒ１に対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１βは、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、誘導可能または回復可能なＩＬ１β／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達ならびにＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果としての必要なＩＬ１投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を刺激して抗癌応答を開始することを含む、例えば、癌を治療する方法で使用される。
いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１βは、ＩＬ１Ｒ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１βは、ＩＬ１Ｒ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、ＩＬ１β／ＩＬ１Ｒ１シグナル伝達は誘導可能または回復可能ではなく、また、ＩＬＲ２に対する治療用キメラの損失の防止およびその結果としての必要なＩＬ１β投与量の削減（例えば、野生型またはＩＬＲ１に対する減弱化変異のみを有するキメラに比べて）がもたらされる。このような構築物は、例えば、免疫系を抑制することを含む、例えば、自己免疫疾患を治療する方法で使用される。
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５２～５４の欠失を有し、これは、Ｉ型ＩＬ１Ｒに対して、低減された結合親和性および低減された生物活性を有する改変ヒトＩＬ１βが産生する。例えば、国際公開第１９９４／０００４９１号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ａ１１７Ｇ／Ｐ１１８Ｇ、Ｒ１２０Ｘ、Ｌ１２２Ａ、Ｔ１２５Ｇ／Ｌ１２６Ｇ、Ｒ１２７Ｇ、Ｑ１３０Ｘ、Ｑ１３１Ｇ、Ｋ１３２Ａ、Ｓ１３７Ｇ／Ｑ１３８Ｙ、Ｌ１４５Ｇ、Ｈ１４６Ｘ、Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４７Ａ、Ｑ１４８Ｘ、Ｑ１４８Ｇ／Ｑ１５０Ｇ、Ｑ１５０Ｇ／Ｄ１５１Ａ、Ｍ１５２Ｇ、Ｆ１６２Ａ、Ｆ１６２Ａ／Ｑ１６４Ｅ、Ｆ１６６Ａ、Ｑ１６４Ｅ／Ｅ１６７Ｋ、Ｎ１６９Ｇ／Ｄ１７０Ｇ、Ｉ１７２Ａ、Ｖ１７４Ａ、Ｋ２０８Ｅ、Ｋ２０９Ｘ、Ｋ２０９Ａ／Ｋ２１０Ａ、Ｋ２１９Ｘ、Ｅ２２１Ｘ、Ｅ２２１Ｓ／Ｎ２２４Ａ、Ｎ２２４Ｓ／Ｋ２２５Ｓ、Ｅ２４４Ｋ、Ｎ２４５Ｑから選択される１個または複数の置換変異（Ｘはアミノ酸の任意の変化、例えば、非保存的変化であり得る）を有し、これらは、例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号および国際公開第２０１５／００７５３６号に記載のように、ＩＬ１Ｒに対し低減された結合を示す（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿０００５６７、バージョンＮＰ－０００５６７．１、Ｇｌ：１０８３５１４５、ヒトＩＬ１β配列に基づいてナンバリング）。いくつかの実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２０Ｇ、Ｑ１３０Ａ、Ｑ１３０Ｗ、Ｈ１４６Ａ、Ｈ１４６Ｇ、Ｈ１４６Ｅ、Ｈ１４６Ｎ、Ｈ１４６Ｒ、Ｑ１４８Ｅ、Ｑ１４８Ｇ、Ｑ１４８Ｌ、Ｋ２０９Ａ、Ｋ２０９Ｄ、Ｋ２１９Ｓ、Ｋ２１９Ｑ、Ｅ２２１ＳおよびＥ２２１Ｋから選択される１個または複数の変異を有し得る。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１３１ＧおよびＱ１４８Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｑ１４８ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＱ１３１Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＨ１４６Ｇを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０ＧおよびＫ２０８Ｅを含む。ある実施形態では、改変ヒトＩＬ１βは、変異Ｒ１２０Ｇ、Ｆ１６２Ａ、およびＱ１６４Ｅを含む。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαおよび／またはＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ２Ｒαに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、改変ＩＬ２がＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対するアゴニストである場合、癌の治療に適切であり得る。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋ Ｔ細胞（抗腫瘍効果を与えることができる）の減弱化された活性化を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇ（免疫抑制効果、腫瘍促進効果を与えることができる）を優先しない。さらに、いくつかの実施形態では、ＩＬ２ＲαよりもＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する選択性は、肺水腫などのＩＬ２副作用を回避させる。また、ＩＬ２ベースキメラは、例えば、改変ＩＬ２が、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対してアンタゴニスト（例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）である場合、自己免疫疾患の治療に有用である。例えば、本発明の構築物は、ＩＬ２受容体βおよびγを有するＣＤ８＋ Ｔ細胞の抑制の減弱化（したがって、免疫応答を抑制する）を優先し、ＩＬ２受容体α、β、およびγを有するＴｒｅｇを優先しない。あるいは、いくつかの実施形態では、ＩＬ２を有するキメラは、Ｔｒｅｇの活性化、したがって免疫抑制を優先し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化を優先しない。例えば、これらの構築物は、疾患または免疫抑制により恩恵を受けると思われる疾患、例えば、自己免疫障害の治療に使用される。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞に向けられた本明細書に記載のターゲティング部分を有し、改変ＩＬ２物質は、ＩＬ２Ｒβおよび／またはＩＬ２Ｒγに対する低減された親和性および／または活性および／またはＩＬ２Ｒαに対し実質的に低減されたまたは除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、これらの構築物は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞活性を標的とし、通常、Ｔｒｅｇ細胞に対して不活性である（または実質的に低減された活性を有する）。いくつかの実施形態では、このような構築物は、野生型ＩＬ２に比べて、高められた免疫刺激効果を有し（理論に束縛されることを望むものではないが、Ｔｒｅｇを刺激しないことにより）、一方で、ＩＬ２に関連する全身毒性を除去または低減する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ２は、配列番号２４１のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＩＬ２物質は、１個または複数の変異を、アミノ酸Ｌ７２の位置（Ｌ７２Ｇ、Ｌ７２Ａ、Ｌ７２Ｓ、Ｌ７２Ｔ、Ｌ７２Ｑ、Ｌ７２Ｅ、Ｌ７２Ｎ、Ｌ７２Ｄ、Ｌ７２Ｒ、またはＬ７２Ｋ）、Ｆ４２の位置（Ｆ４２Ａ、Ｆ４２Ｇ、Ｆ４２Ｓ、Ｆ４２Ｔ、Ｆ４２Ｑ、Ｆ４２Ｅ、Ｆ４２Ｎ、Ｆ４２Ｄ、Ｆ４２Ｒ、またはＦ４２Ｋ）およびＹ４５の位置（Ｙ４５Ａ、Ｙ４５Ｇ、Ｙ４５Ｓ、Ｙ４５Ｔ、Ｙ４５Ｑ、Ｙ４５Ｅ、Ｙ４５Ｎ、Ｙ４５Ｄ、Ｙ４５ＲまたはＹ４５Ｋ）で有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ２物質は、野性型ＩＬ２と比べて、高親和性ＩＬ２受容体に対して低減された親和性を有し、中間的親和性ＩＬ２受容体に対しては親和性をそのまま維持すると考えられる。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１１２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３である。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ３受容体に対して実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、ＩＬ３受容体は共通のベータ（ベータｃまたはＣＤ１３１）サブユニットと対になった特有のアルファ鎖を有するヘテロダイマーである。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、１型および／または２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。１型ＩＬ４受容体は、共通のγ鎖を有するＩＬ４Ｒαサブユニットから構成され、ＩＬ４を特異的に結合する。２型ＩＬ４受容体は、ＩＬ１３Ｒα１として知られる異なるサブユニットに結合したＩＬ４Ｒαサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、２型ＩＬ４受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ４は、配列番号２４２のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＩＬ４物質は、アミノ酸Ｒ１２１（Ｒ１２１Ａ、Ｒ１２１Ｄ、Ｒ１２１Ｅ、Ｒ１２１Ｆ、Ｒ１２１Ｈ、Ｒ１２１Ｉ、Ｒ１２１Ｋ、Ｒ１２１Ｎ、Ｒ１２１Ｐ、Ｒ１２１Ｔ、Ｒ１２１Ｗ）、Ｅ１２２（Ｅ１２２Ｆ）、Ｙ１２４（Ｙ１２４Ａ、Ｙ１２４Ｑ、Ｙ１２４Ｒ、Ｙ１２４Ｓ、Ｙ１２４Ｔ）およびＳ１２５（Ｓ１２５Ａ）に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ４物質は、Ｉ型受容体により媒介される活性を維持するが、その他の受容体により媒介される生物活性を顕著に低減すると考えられる。例えば、米国特許第６，４３３，１５７号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６である。ＩＬ６は、リガンド結合ＩＬ６Ｒ鎖（ＣＤ１２６）およびシグナル伝達成分ｇｐ１３０を含む細胞表面Ｉ型サイトカイン受容体複合体を介して信号を伝達する。ＩＬ６はまた、可溶性型のＩＬ６Ｒ（ｓＩＬ６Ｒ）にも結合し得、これは、ＩＬ６Ｒの細胞外の部分である。ｓＩＬ６Ｒ／ＩＬ６複合体は、神経突起の成長およびニューロンの生存に関与し、したがって、再ミエリン化による神経再生に重要であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ６Ｒ／ｇｐ１３０および／またはｓＩＬ６Ｒに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ６は、配列番号２４３のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、アミノ酸５８、１６０、１６３、１７１または１７７に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ６物質は、ＩＬ６Ｒαに対し低減された結合親和性および低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第９７／１０３３８号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ１０受容体１およびＩＬ１０受容体２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１１Ｒαおよび／またはＩＬ１１Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変シグナル型伝達物質は、IL-11Ｒαおよび／またはIL-11Ｒβおよび／またはｇｐ１３０に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ１２Ｒβ１および／またはＩＬ１２Ｒβ２に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）およびＩＬ１３Ｒα１に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒα）またはＩＬ１３Ｒα１に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ１３は、配列番号２４４のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＩＬ１３物質は、アミノ酸１３、１６、１７、６６、６９、９９、１０２、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１２、１１３および１１４に１個または複数の変異を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変ＩＬ１３物質は、低減された生物活性を示すと考えられている。例えば、国際公開第２００２／０１８４２２号を参照されたい。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある実施形態では、シグナル伝達物質は、野生型または改変ＩＬ１５である。いくつかの実施形態では、改変ＩＬ１５は、インターロイキン１５受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ１５は、ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＨＥＳＧＤＴＤＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＩＬＳＳＮＧＮ ＩＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２９２）のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、改変ＩＬ１５物質は、配列番号２９２を基準にして、アミノ酸Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ４６、Ｌ４７、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｄ６１、Ｎ６５、Ｌ６６、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７２、Ｑ１０８で１個または複数の変異を有する。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８である。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＬ１８Ｒαおよび／またはＩＬ１８Ｒβに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、シグナル伝達に必要なＴＩＲドメインを欠くＩＬ１８ＲαのアイソフォームであるＩＬ１８Ｒα ＩＩ型に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ－１８は、配列番号２４５のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変ＩＬ１８物質は、Ｙ３７～Ｋ４４、Ｒ４９～Ｑ５４、Ｄ５９～Ｒ６３、Ｅ６７～Ｃ７４、Ｒ８０、Ｍ８７～Ａ９７、Ｎ１２７～Ｋ１２９、Ｑ１３９～Ｍ１４９、Ｋ１６５～Ｋ１７１、Ｒ１８３およびＱ１９０～Ｎ１９１から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＡＡＶ３８６９７、バージョンＡＡＶ３８６９７．１、Ｇｌ：５４６９６６５０、ヒＩＬ１８配列に基づいてナンバリング）。
ある実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＩＬ３３である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体１およびＩＬ１ＲＡｃＰに対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変型シグナル伝達物質は、ＳＴ２受容体およびIL-1ＲＡｃＰに対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。
ある実施形態では、野生型ＩＬ３３は、配列番号２４６のアミノ酸配列を有する。
このような実施形態では、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／００７５４２号に記載のように、改変IL-3３物質は、Ｉ１１３～Ｙ１２２、Ｓ１２７～Ｅ１３９、Ｅ１４４～Ｄ１５７、Ｙ１６３～Ｍ１８３、Ｅ２００、Ｑ２１５、Ｌ２２０～Ｃ２２７およびＴ２６０～Ｅ２６９から選択されるアミノ酸またはアミノ酸領域に１個または複数の変異を含み得る（ジェンバンク受入番号ＮＰ＿２５４２７４、バージョン２５４２７４．１、Ｇｌ：１５５５９２０９、ヒト配列に基づいてナンバリング）。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）である。ＥＧＦは、効力の高い成長因子のファミリーである。メンバーは、ＥＧＦ、ＨＢ－ＥＧＦ、およびＴＧＦα、アンフィレギュリン、ニューレグリン、エピレギュリン、ベータセルリンなどの他のものを含む。ＥＧＦファミリー受容体は、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を含む。これらは、ホモダイマーおよび／またはヘテロダイマー受容体サブタイプとして機能し得る。異なるＥＧＦファミリーメンバーは、種々の受容体サブタイプに対して、他と異なる選択性を示す。例えば、ＥＧＦは、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ２およびいくつかの他のヘテロダイマーサブタイプと結合する。ＨＢ－ＥＧＦは、類似のパターンを有するが、ＥｒｂＢ４／４と結合する。ＥＧＦ（ＥＧＦ様）増殖因子シグナル伝達の正または負方向への調節は、大きな治療上の観点から関心がもたれている。例えば、ＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、ＥＧＦＲシグナル伝達が主要な成長促進シグナルを構成する種々の癌の治療で関心がもたれている。あるいは、ＥＧＦＲシグナル伝達の刺激は、例えば、創傷治癒（急性および慢性）、口腔粘膜炎（限定されないが、放射線療法を含む種々の癌療法の主要な副作用）における治療上の観点から関心が持たれている。
いくつかの実施形態では、追加の改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有する。このような実施形態は、例えば、創傷の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、およびＥｒｂＢ４の内の１種または複数に結合し、その受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、および／またはＥｒｂＢ４に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、その受容体の活性が減弱化される方式でアンタゴナイズされる。このような実施形態は、例えば、癌の治療で使用される。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対する低減された親和性および／または活性を有する。ＥｒｂＢ１は、キナーゼ阻害剤の治療標的であるが－大抵の場合、副作用があり、その理由は、それらがあまり選択的でないためである（例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ブリガチニブおよびイコチニブ）。いくつかの実施形態では、減弱化された拮抗的ＥｒｂＢ１シグナル伝達は、ＥＧＦの受容体を標的とする他の物質より、オンターゲットであり、少ない副作用を有する。
いくつかの実施形態では、追加の改変型シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ１に対し、低減された親和性および／または活性（例えば、アンタゴニスト活性、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）および／またはＥｒｂＢ４またはそれが相互作用し得る他のサブタイプに対し実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ターゲティング部分を介した特異的標的化により、ＥｒｂＢ１／ＥｒｂＢ１受容体活性化の細胞選択的抑制（アンタゴニズム、例えば、天然のアンタゴニスト活性または１個または複数の変異の結果としてのアンタゴニスト活性、例えば、国際公開第２０１５／００７５２０号を参照。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）が達成されるであろう－阻害関連副作用に関連する可能性のある他の受容体サブタイプを関与させずに。従って、身体中の全ての細胞型のＥＧＦＲ活性を阻害するＥＧＦＲキナーゼ阻害剤と対照的に、このような構築物は、副作用の低減された細胞選択的（例えば、受容体の増幅、過剰発現などよる活性化ＥＧＦＲシグナル伝達を有する腫瘍細胞）抗ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）薬物作用を提供するであろう。
いくつかの実施形態では、追加の改変シグナル伝達物質は、ＥｒｂＢ４および／またはそれが相互作用する他のサブタイプに対する低減された親和性および／または活性（例えば、アゴニスト活性）を有する。ターゲティング部分を介した特定の標的細胞に対する標的化により、ＥｒｂＢ１シグナル伝達の選択的活性化が達成される（例えば、上皮細胞）。このような構築物は、いくつかの実施形態では、副作用が低減された創傷の治療（創傷治癒の促進）、特に慢性状態の治療および治療薬局所投与以外の適用（例えば、全身性創傷治癒）のために使用される。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリンまたはインスリン類似体である。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変インスリンまたはインスリン類似体は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体に対する低減または除去された親和性および／または活性を有する。インスリン受容体に対する弱められた応答は、糖尿病、肥満症、代謝障害などの制御を可能とし、同時に、ＩＧＦ１またはＩＧＦ２受容体から離れた方向に向けることにより、癌促進性作用を回避する。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン様増殖因子－Ｉまたはインスリン様増殖因子－ＩＩ（ＩＧＦ１またはＩＧＦ２）である。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質はＩＧＦ１である。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体および／またはＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有する。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に結合し、受容体の活性をアンタゴナイズする。このような実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が減弱化される方式でアンタゴナイズされることを可能にする。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ１受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＩＧＦ２受容体に対する低減された親和性および／または活性を有し、これにより、受容体の活性が減弱化される方式でアンタゴナイズされることを可能にする。ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、インスリン受容体に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有し、したがって、インスリンシグナル伝達を妨げない。種々の実施形態では、これは、癌治療に適用される。種々の実施形態では、本物質は、ＩＲアイソフォームＡが癌治療に対し耐性を生じるのを防止し得る。
ある実施形態では、改変シグナル伝達物質は、ＥＰＯである。種々の実施形態では、改変ＥＰＯ物質は、野生型ＥＰＯまたは本明細書で記載の他のＥＰＯベース物質に比べて、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）および／またはエフリン受容体（ＥｐｈＲ）に対する低減された親和性および／または活性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯ物質は、ＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）および／またはＥｐｈ受容体（ＥｐｈＲ）に対する実質的に低減または除去された親和性および／または活性を有する。ＥＰＯ受容体の例としては、限定されないが、ＥＰＯＲホモダイマーまたはＥＰＯＲ／ＣＤ１３１ヘテロダイマーが挙げられる。また、ベータ共通受容体（βｃＲ）もＥＰＯ受容体に含まれる。Ｅｐｈ受容体の実例としては、限定されないが、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、およびＥＰＨＢ６が挙げられる。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯタンパク質に、１個または複数の異なるＥＰＯ受容体またはＥｐｈ受容体（例えば、限定されないが、ＥＰＯＲ－ＥＰＨＢ４、ＥＰＯＲ－βｃＲ－ＥＰＯＲを含むヘテロダイマー、ヘテロトリマーなど）を含む受容体に対する低減された親和性を持たせる１個または複数の変異を含む。また、限定されないが、ＮＥＰＯＲを含む、ＥＰ特許公報第２４９２３５５号の受容体も提供される（この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
ある実施形態では、ヒトＥＰＯは、配列番号２４７のアミノ酸配列を有する（最初の２７個のアミノ酸はシグナルペプチドである）。
いくつかの実施形態では、ヒトＥＰＯタンパク質は、ＥＰＯの成熟型であり（シグナルペプチドは切断されている）、これは、配列番号２４８の配列を有する１６６個のアミノ酸残基の糖タンパク質である。
ヒトＥＰＯタンパク質の構造は、ヘリックスＡ、Ｂ、ＣおよびＤを含む４ヘリックス束を含むことが予測されている。種々の実施形態では、改変ＥＰＯは、生物活性のために重要なＥＰＯタンパク質の４つの領域、すなわち、アミノ酸残基１０～２０，４４～５１、９６～１０８、および１４２～１５６に位置する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１個または複数の変異は、残基１１～１５、４４～５１、１００～１０８、および１４７～１５１に位置する。これらの残基は、ヘリックスＡ（Ｖａｌ１１、Ａｒｇ１４、およびＴｙｒ１５）、ヘリックスＣ（Ｓｅｒ１００、Ａｒｇ１０３、Ｓｅｒ１０４、およびＬｅｕ１０８）、ヘリックスＤ（Ａｓｎ１４７、Ａｒｇ１５０、Ｇｌｙ１５１、およびＬｅｕ１５５）、およびＡ／Ｂ接続ループ（残基４２～５１）に局在化されている。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、アミノ酸４１～５２の残基ならびにアミノ酸１４７、１５０、１５１、および１５５の残基中に変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合およびインビトロ生物活性の両方に実質的な影響を有すると考えられている。いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基１１、１４、１５、１００、１０３、１０４、および１０８に変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの残基の変異は、受容体結合活性に対し中程度の影響を有し、インビトロ生物活性に対し遙かに大きい影響を有すると考えられている。置換の例としては、限定されないが、Ｖａｌ１１Ｓｅｒ、Ａｒｇ１４Ａｌａ、Ａｒｇ１４Ｇｌｎ、Ｔｙｒ１５ｌｌｅ、Ｐｒｏ４２Ａｓｎ、Ｔｈｒ４４ｌｌｅ、Ｌｙｓ４５Ａｓｐ、Ｖａｌ４６Ａｌａ、Ｔｙｒ５１Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１００Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１００Ｔｈｒ、Ａｒｇ１０３Ａｌａ、Ｓｅｒ１０４ｌｌｅ、Ｓｅｒ１０４Ａｌａ、Ｌｅｕ１０８Ｌｙｓ、Ａｓｎ１４７Ｌｙｓ、Ａｒｇ１５０Ａｌａ、Ｇｌｙ１５１Ａｌａ、およびＬｅｕ１５５Ａｌａの１つまたは複数が挙げられる。
いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、生物活性に影響を与え、結合には影響を与えない変異、例えば、Ｅｌｉｏｔ，ｅｔ ａｌ．Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｓｉｔｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｊａｎｕａｒｙ １５，１９９７；Ｂｌｏｏｄ：８９（２）に記載のものを含む。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体接触に関与するＥＰＯタンパク質の表面残基を含む１個または複数の変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの表面残基の変異は、タンパク質フォールディングの影響が少ない可能性があり、そのため、一部の生物活性を保持すると考えられている。変異導入され得る表面残基の例としては、限定されないが、残基１４７および１５０が挙げられる。例示的実施形態では、変異は、Ｎ１４７Ａ、Ｎ１４７Ｋ、Ｒ１５０ＡおよびＲ１５０Ｅの１個または複数を含む置換である。
いくつかの実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、残基Ｎ５９、Ｅ６２、Ｌ６７およびＬ７０で１個または複数の変異、およびジスルフィド結合形成に影響を与える１個または複数の変異を含む。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの改変は、フォールディングに影響を与える、および／または埋没した位置にあることが予測され、従って、生物活性に間接的に影響を与えると考えられている。
ある実施形態では、改変ＥＰＯタンパク質は、受容体結合が大きく低減されるＫ２０Ｅ置換を含む。例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｂｌｏｏｄ，８９：４９３－５０２を参照されたい。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明のキメラＥＰＯタンパク質に組み込み得る追加のＥＰＯ変異は、例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｂｌｏｏｄ，８９：４９３－５０２およびＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）ＰＥＤＳ，２３（４）：２５１－２６０に開示されている。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
種々の実施形態では、シグナル伝達物質は、毒素または毒性酵素である。いくつかの実施形態では、毒素または毒性酵素は、植物および細菌から誘導される。毒素または毒性酵素の例としては、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素、炭疽病毒素、リシンおよびサポリンなどのリボソーム不活化タンパク質（ＲＩＰ）、モデシン、アブリン、ゲロニン、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。追加の毒素は、Ｍａｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ １００（８）：１３５９－６５、に開示のものを含む。この文献の全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。このような実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、細胞型特異的に細胞死を誘導するのに利用し得る。このような実施形態では、毒素は改変されて、例えば、変異導入されて、本明細書で他のシグナル伝達物質に関し記載のように、効果を弱めるために、毒素の親和性および／または活性を低減させ得る。
リンカーおよび官能基
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は任意選択で、１個または複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ターゲティング部分およびシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）を連結するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、シグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）内にリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の種々の官能基、残基、または部分をキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に連結するのに利用し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合領域および結合タンパク質の安定性、配向、結合、中和、および／または排出特性に影響を与えない、またはそれらを低下させない単一アミノ酸または複数のアミノ酸である。種々の実施形態では、リンカーは、ペプチド、タンパク質、糖、または核酸から選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のリンカーのいずれかに単一ヌクレオチド配列として連結された本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードするベクターが、提供され、このようなキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を調製するために使用され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体の置換物は、ベクター中のヌクレオチド配列として発現される。
いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、ターゲティング部分とシグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）のそれらの受容体への効果的結合を可能にする。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、ターゲティング部分とシグナル伝達物質の１個の、同じ細胞上の受容体への効果的結合を可能にする。
いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、少なくとも、同じ細胞上の１個のターゲティング部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離に等しい。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、同じ細胞上の１個のターゲティング部分およびシグナル伝達物質の受容体への結合部位の間の最短距離の、少なくとも２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または２０倍、または２５倍、または５０倍、または１００倍である、または、それを超える。
本明細書に記載されるように、リンカーの長さは、ターゲティング部分とシグナル伝達物質の１個の、同じ細胞上の受容体への効果的結合を可能にし、結合は、逐次であり、例えば、ターゲティング部分／受容体結合がシグナル伝達物質／受容体結合に先行する。
いくつかの実施形態では、単一キメラ中に２個のリンカーが存在し、それぞれが、シグナル伝達物質をターゲティング部分に連結する。種々の実施形態では、リンカーは、いずれかの細胞の調節を妨害し得る立体障害なしに疾患細胞およびエフェクター細胞を有する部位の形成を可能にする長さを有する。
本発明は、種々のリンカー配列の使用を意図する。種々の実施形態では、リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質から誘導され得るか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されている経験的リンカーである。これらの文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは、リンカー設計データベースおよびＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９ ａｎｄ Ｃｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載のものなどのコンピュータープログラムを用いて設計し得る。種々の実施形態では、リンカーは機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、フォールディングおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の生物活性を改善するように機能し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは約１００アミノ酸長超である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長さ超であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーはフレキシブルである。別の実施形態では、リンカーは剛性である。
２個以上のターゲティング部分を有するキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に関するいくつかの実施形態では、あるリンカーは２個のターゲティング部分を相互に連結し、このリンカーは短い長さを有し、また、あるリンカーはターゲティング部分とシグナル伝達物質を連結し、このリンカーは２個のターゲティング部分を連結するリンカーより長い。例えば、２個のターゲティング部分を連結するリンカーと、ターゲティング部分とシグナル伝達物質とを連結するリンカーとの間のアミノ酸長さの差異は、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長であり得る。
種々の実施形態では、リンカーは、グリシンおよびセリン残基から実質的に構成される（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％のグリシンとセリン）。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、式中、ｎは、約１～約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８（それぞれ、配列番号２４９～２５６）である。ある実施形態では、リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５７）である。追加のリンカーの例としては、限定されないが、次記配列を有するリンカーが挙げられる：ＬＥ、ＧＧＧＧＳ（配列番号２４９）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１～４）（配列番号２４９～２５２）、（Ｇｌｙ）８（配列番号２５８）、（Ｇｌｙ）６（配列番号２５９）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号２６０～２６２）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号２６３～２６６）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号２６３）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号２６７）、ＰＡＰＡＰ（配列番号２６８）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２６９）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２７０）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号２７１）、および（ＸＰ）ｎ、Ｘは、任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。種々の実施形態では、リンカーはＧＧＳである。
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号２７２）、ＧＳＥＳＧ（配列番号２７３）、ＧＳＥＧＳ（配列番号２７４）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号２７５）、および４個のアミノ酸間隔毎にランダムに配置されたＧ、Ｓ、およびＥのリンカー、の１種または複数である。
いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。種々の実施形態では、リンカーは、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）のヒンジ部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥクラス抗体で見つかるヒンジ部は、フレキシブルスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部が空間中で自由に動くことを可能にする。定常領域と対照的に、ヒンジドメインは、構造上多様であり、免疫グロブリンクラスおよびサブクラス中の配列および長さの両方で変動する。例えば、ヒンジ部の長さおよび可撓性は、ＩｇＧサブクラス内で変動する。ＩｇＧ１のヒンジ部は、アミノ酸２１６～２３１を包含し、それが自由にフレキシブルであるために、Ｆａｂフラグメントは、それらの対称軸の周りで回転でき、最初の２つの重鎖間ジスルフィド架橋を中心とする球内で移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１より短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基と４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ部は、グリシン残基を欠き、比較的短く、また、追加の重鎖間ジスルフィド架橋により安定化された剛性ポリプロリン二重らせん体を含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の可撓性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸を含む（２１個のプロリンと１１個のシステインを含む）その特有の延長されたヒンジ部（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）により、他のサブクラスとは異なり、柔軟性を欠くポリプロリン二重らせん体を形成する。ＩｇＧ３では、Ｆａｂフラグメントは、Ｆｃフラグメントから比較的遠くに離れており、より大きな可撓性を分子に与える。ＩｇＧ３の伸びたヒンジは、他のサブクラスに比べて、そのより高分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ部は、ＩｇＧ１より短く、その可撓性は、ＩｇＧ１とＩｇＧ２との中間である。ヒンジ部の可撓性は、次の順に低下すると報告されている：ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２。
結晶学的調査によれば、免疫グロブリンヒンジ部は、機能的に次の３つの領域にさらに細分できる：上部ヒンジ部、コア部、および下部ヒンジ部。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ部は、ＣＨ１のカルボキシル末端から運動を制限するヒンジ中の最初の残基、通常は２つの重鎖間の鎖間ジスルフィド結合を形成する最初のシステイン残基のアミノ酸を含む。上部ヒンジ部の長さは、抗体のセグメントの可撓性と相関する。コアヒンジ部は重鎖間ジスルフィド架橋を含み、下部ヒンジ部はＣＨ２ドメインのアミノ末端に繋がり、かつＣＨ２中の残基を含む（同上文献）。野性型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ部は、配列Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号２７６）を含み、これは、ジスルフィド結合形成により二量体化されると、環状オクタペプチドを生成し、これが旋回軸として機能することにより、可撓性を付与すると考えられている。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、任意の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４、およびＩｇＡ１およびＩｇＡ２）を含む）の１、または２、または３個の上部ヒンジ部、コア部および下部ヒンジ部を含む。ヒンジ部はまた、１つまたは複数のグリコシル化部位も含み得、これは、多くの構造上異なるタイプの炭水化物付着部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ部の１７アミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸内プロテアーゼに対するヒンジ部ポリペプチドの耐性を付与し、これは、分泌性免疫グロブリンにとって、有利な性質であると考えられる。種々の実施形態では、本発明のリンカーは、１つまたは複数のグリコシル化部位を含む。種々の実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４抗体のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインである。
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＥＧなどの合成リンカーである。
種々の実施形態では、リンカーは、機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、フォールディングおよび／または安定性を改善するように、発現を改善するように、薬物動態学を改善するように、および／または本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を特定の細胞型または部位に向けるように機能し得る。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、１個または複数の官能基、残基、または部分を含み得る。種々の実施形態では、１個または複数の官能基、残基、または部分は、本明細書に記載のいずれかのシグナル伝達物質またはターゲティング部分に結合されるか、または遺伝的に融合される。いくつかの実施形態では、このような官能基、残基または部分は、１つまたは複数の望ましい特性または官能基を本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に付与する。このような官能基およびそれらをキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に導入する技術の例は、当技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）を参照されたい。
種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のそれぞれは、別の物質と複合化および／または融合して、半減期を延長するか、または別の方法で薬力学的および薬物動態学的特性を改善し得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリンなどの１種または複数と融合または複合化され得る。種々の実施形態では、それぞれ個々のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９に記載の１種または複数の物質に融合される。この文献の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、好適な薬学的に許容可能なポリマー、例えばポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）またはその誘導体（例えば、メトキシポリ（エチレングリコール）またはｍＰＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分の結合は、半減期を伸ばし、および／またはキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の免疫原性を低減する。例えば、抗体および抗体フラグメント（限定されないが、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む）に対し当該技術分野で用いられるペグ化などの任意の好適な形態のペグ化が通常用いられる；例えば、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，５３１－５４５（２００２）；ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＨａｒｒｉｓによる、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４，４５３－４５６（２００３），ＨａｒｒｉｓおよびＣｈｅｓｓによる、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．，２，（２００３）ならびに国際公開第０４／０６０９６５号を参照されたい。これらの文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。タンパク質のペグ化のための種々の試薬も、例えば、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＵＳＡから市販されている。いくつかの実施形態では、特に、システイン残基を介した部位特異的なペグ化が使用される（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１６，１０，７６１－７７０（２００３）を参照されたい。この文献の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を適切に導入するように改変されるか、またはＰＥＧの結合のための１個または複数のシステイン残基を含むアミノ酸配列が、当該技術分野において既知の技術を使用してキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のアミノ末端および／またはカルボキシ末端に融合され得る。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ結合型またはＯ結合型グリコシル化は、翻訳時修飾および／または翻訳後修飾の一部として導入される。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、１つまたは複数の検出可能なラベルまたはその他のシグナル生成基または部分を含む。好適なラベルおよびそれらの結合、使用および検出のための技術は、当技術分野において、既知であり、限定されないが、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、イソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、ならびにフルオレサミンおよび蛍光金属、例えば、Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属）、リン光標識、化学発光ラベルまたは生物発光ラベル（例えば、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウム・エステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、オキサレートエステル、ジオキセタンまたはＧＦＰおよびその類似体）、放射性同位体、金属、金属キレートもしくは金属カチオンまたはインビボ、インビトロまたはインサイツ診断および画像処理での使用に特に適している他の金属もしくは金属カチオン、ならびに発色団および酵素（例えば、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－Ｖ－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファグリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、ビオチンアビジンペルオキシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－ＶＩ－リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ）を含む。他の好適なラベルとしては、ＮＭＲまたはＥＳＲ分光法を用いて検出できる部分が挙げられる。このように標識した本発明のＶＨＨおよびポリペプチドは、特定の標識の選択により、例えば、インビトロ、インビボまたはインサイツアッセイ（これ自体ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびＥＩＡおよびその他の「サンドイッチ法」などとして知られるイムノアッセイ）ならびにインビボ診断および画像処理の目的に使用し得る。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に結合または遺伝的に融合されたタグを含む。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、単一タグまたは複数タグを含み得る。例えば、タグは、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体のその標的または腫瘍抗原などのいずれか他の目的抗原に対する結合を阻害または妨害しない、ペプチド、糖、またはＤＮＡ分子である。種々の実施形態では、タグは、少なくとも約：３～５アミノ酸長、５～８アミノ酸長、８～１２アミノ酸長、１２～１５アミノ酸長、または１５～２０アミノ酸長である。タグの例は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００５８９６２号に記載されている。いくつかの実施形態では、タグは、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジン（Ｈｉｓ）タグなどの親和性タグである。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ヒスチジンタグを含む。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、例えば、１種の金属または金属カチオンをキレートするためのキレート化基を含む。好適なキレート化基は、例えば、限定されないが、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、官能基、残基、または部分は、ビオチン－（ストレプト）アビジン結合対などの、特異的結合対の片方の部分である官能基を含む。このような官能基を使って、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を、結合対のもう一方の半分に結合された別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に、すなわち、結合対の形成を介して、連結し得る。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をビオチンに複合化させ、アビジンまたはストレプトアビジンに複合化させた別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結し得る。例えば、検出可能なシグナル生成物質がアビジンまたはストレプトアビジンに複合化されている診断システムにおいて、このような結合キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を、例えば、レポーターとして用い得る。例えば、このような結合対を使用して、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を、医薬品目的に好適な担体を含む、担体に結合し得る。１つの非限定的例は、Ｃａｏ ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，８，４，２５７（２０００）に記載されたリポソーム製剤である。また、このような結合対を使用して、治療活性薬剤を、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に連結し得る。
キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の産生
本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の産生方法が、本明細書で記載される。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードするＤＮＡ配列（例えば、シグナル伝達物質（例えば、ＩＦＮα１またはそのバリアント）およびターゲティング部分およびリンカーをコードするＤＮＡ配列）は、当該技術分野において既知の方法を使用して化学的に合成できる。合成ＤＮＡ配列は、例えば、発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結し、目的のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする遺伝子発現構築物を産生できる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸を提供する。
本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする核酸は、発現ベクター中に組み込まれ（連結され）てよく、このベクターは、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術により宿主細胞中に導入できる。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする核酸は、レトロウイルス形質導入により宿主細胞中に導入できる。宿主細胞の例は、大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ヒーラ細胞、仔ハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎培養細胞（ＣＯＳ）、またはヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞に、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする遺伝子を発現させるのを可能にする条件下で増殖させることができる。したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする核酸を含む発現ベクターを提供する。種々の実施形態では、本発明は、このような発現ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
特定の発現および精製条件は、用いた発現系に応じて変化する。例えば、遺伝子が大腸菌中で発現される場合、遺伝子は最初に、操作された遺伝子を細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、および原核生物シグナル配列の下流に配置することにより発現ベクター中に挿入される。別の例では、操作された遺伝子が真核生物宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞中で発現される場合、遺伝子は最初に、例えば、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、転写促進因子、および種々のイントロンを含む発現ベクター中に挿入される。遺伝子構築物は、遺伝子導入、形質転換、または形質導入技術を用いて宿主細胞中に導入できる。
本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、タンパク質の発現を許容する条件下で、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする発現ベクターを遺伝子導入した宿主細胞を増殖させることにより産生できる。発現後、タンパク質を収集し、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびヒスチジンタグなどの親和性タグまたはクロマトグラフィーにより、当該技術分野において周知の技術を用いて精製できる。
したがって、種々の実施形態では、本発明は、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする核酸を提供する。種々の実施形態では、本発明は、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
種々の実施形態では、ＩＦＮα１、そのバリアント、またはＩＦＮα１またはそのバリアントを含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、例えば、患者中でインビボ発現され得る。例えば、種々の実施形態では、ＩＦＮα１、そのバリアント、またはＩＦＮα１またはそのバリアントを含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＩＦＮα１またはそのバリアント、またはＩＦＮα１またはそのバリアントを含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする核酸の形で投与され得る。種々の実施形態では、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＩＦＮα１、そのバリアント、またはＩＦＮα１またはそのバリアントを含むキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、修飾ｍＲＮＡ、すなわち、１種または複数の修飾ヌクレオチドを含むｍＲＮＡによりコードされる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、米国特許第８，２７８，０３６号で見出される１つまたは複数の修飾を含む。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ψ、および２’－Ｏ－メチル－Ｕの内の１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、１個または複数の本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をコードする修飾ｍＲＮＡの投与に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、修飾ｍＲＮＡを含む遺伝子治療ベクターに関する。種々の実施形態では、核酸は、腫瘍溶解性ウイルス、例えば、アデノウイルス、レオウイルス、はしか、単純ヘルペス、ニューカッスル病ウイルスまたはワクシニアの形態である。
種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＶＨＨであるターゲティング部分を含む。種々の実施形態では、ＶＨＨは、特定の生物源または特定の産生法に限定されない。例えば、ＶＨＨは通常、次記により得ることができる：（１）天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインを単離することにより；（２）天然のＶＨＨドメインをコードするヌクレオチド配列の発現により；（３）天然のＶＨＨドメインの「ヒト化」により、またはこのようなヒト化ＶＨＨドメインをコードする核酸の発現により；（４）ヒト由来などの哺乳動物種由来などの任意の動物種由来の天然のＶＨドメインの「ラクダ化」、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（５）当該技術分野で記載の「ドメイン抗体」または「Ｄａｂ」の「ラクダ化」により、またはこのようなラクダ化ＶＨドメインをコードする核酸の発現により；（６）当該技術分野において既知のタンパク質、ポリペプチドまたはその他のアミノ酸配列のための合成または半合成技術を用いることにより；（７）当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いてＶＨＨをコードする核酸を調製し、続けて、こうして得られた拡散を発現させることにより；および／または（８）前述の１種または複数の任意の組み合わせにより。
ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、目的の標的に対する天然の重鎖抗体のＶＨＨドメインに対応するＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このようなＶＨＨ配列は通常、ラクダ科の動物種を目的の標的（例えば、ＸＣＲ１、Ｃｌｅｃ９ａ、ＣＤ８、ＳＩＲＰ１α、ＦＡＰなど）に基づく分子で適切に免疫化する（すなわち、目的の標的に対する免疫応答を生じさせる、および／または目的の標的に対する重鎖抗体を産生させるように）ことにより、ラクダ科の動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得ることにより、および任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、目的の標的に対するＶＨＨ配列を生成することにより、生成または得ることができる。いくつかの実施形態では、目的の標的に対する天然のＶＨＨドメインは、ラクダ科の動物ＶＨＨ配列の未処理ライブラリーから、例えば、当技術分野で既知の１種または複数のスクリーニング技術を使って、目的の標的、またはその少なくとも１個の部分、フラグメント、抗原決定基またはエピトープを用いてこのようなライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。このようなライブラリーおよび技術は、例えば、国際公開第９９／３７６８１号、国際公開第０１／９０１９０号、国際公開第０３／０２５０２０号、および国際公開第０３／０３５６９４号に記載されている。これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、例えば、国際公開第００／４３５０７号に記載のランダム変異誘発および／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により未処理ＶＨＨライブラリーから得られたＶＨＨライブラリーなどの未処理ＶＨＨライブラリー由来の改善された合成または半合成ライブラリーを使用し得る。この特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、目的の標的に対するＶＨＨ配列を得る別の技術は、重鎖抗体を発現できる遺伝子導入哺乳動物を適切に免疫化し（すなわち、目的の標的に対する免疫応答を生じさせる、および／または目的の標的に対する重鎖抗体を産生させるように免疫化し）、遺伝子導入哺乳動物から好適な生物試料（例えば、血液試料、またはＢ細胞の任意の試料）を得て、その後、任意の好適な既知の技術を用いて、試料から出発して、ＸＣＲ１に対するＶＨＨ配列を生成することを含む。例えば、このために、国際公開第０２／０８５９４５号および国際公開第０４／０４９７９４号（これらの特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の重鎖抗体発現マウスおよびさらなる方法および技術を使用できる。
ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、「ヒト化」、すなわち、天然のＶＨＨ配列（および特に、フレームワーク配列中の）のアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ヒトの従来の４鎖抗体由来のＶＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。これは、当該技術分野において既知のヒト化技術を使用して実施できる。いくつかの実施形態では、可能なヒト化置換またはヒト化置換の組み合わせは、当該技術分野において既知の方法、例えば、ＶＨＨの配列と天然のヒトＶＨドメインの配列との間の比較により決定し得る。いくつかの実施形態では、ヒト化置換は、得られたヒト化ＶＨＨが置換後の時点でも有利な機能特性を保持しているように選択される。通常、ヒト化の結果として、本発明のＶＨＨは、より「ヒト様」になり得るが、対応する天然のＶＨＨドメインと比較して、低減された免疫原性などの好ましい特性を依然として保持している。種々の実施形態では、本発明のヒト化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ、したがって、出発材料として天然のＶＨＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、「ラクダ化」、すなわち、従来の４鎖抗体由来の天然のＶＨドメインのアミノ酸配列の１個または複数のアミノ酸残基を、ラクダ科の動物の重鎖抗体のＶＨＨドメイン中の対応する位置（単一または複数）にある１個または複数のアミノ酸残基で置換しているＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、このような「ラクダ化」置換は、ＶＨ－ＶＬインターフェースを形成するおよび／または、そこに存在するアミノ酸位置に、および／またはいわゆるラクダ科の顕著な特徴残基（例えば、国際公開第９４／０４６７８号を参照されたい。この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる）の位置に挿入されるいくつかの実施形態では、ラクダ化ＶＨＨを生成するまたは設計するための出発材料または出発点として用いられるＶＨ配列は、哺乳動物由来のＶＨ配列、例えば、ＶＨ３配列などの、ヒトのＶＨ配列である。種々の実施形態では、ラクダ化ＶＨＨは、当該技術分野において既知の任意の好適な方法で得ることができ（すなわち、上記（１）～（８）で示したような）、したがって、出発材料として天然のＶＨドメインを含むポリペプチドを用いて得たポリペプチドに厳密に限定されない。
種々の実施形態では、「ヒト化」および「ラクダ化」の両方は、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ用意し、次に、当該技術分野において既知の方法で、ヌクレオチド配列中の１個または複数のコドンを新規ヌクレオチド配列がそれぞれ「ヒト化」または「ラクダ化」ＶＨＨをコードするような方法で変更することにより実施することができる。この核酸は、その後、本発明の目的のＶＨＨを得るように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。あるいは、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列に基づいて、目的の本発明のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれのアミノ酸配列を設計し、その後、当該技術分野において既知のペプチド合成技術を用いて、新規に合成できる。また、天然のＶＨＨドメインまたはＶＨドメインそれぞれのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列に基づいて、目的のヒト化またはラクダ化ＶＨＨのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を設計し、次に当該技術分野において既知の核酸合成技術を用いて新規に合成でき、その後、こうして得られた核酸を、本発明の目的のＶＨＨが得られるように、当該技術分野において既知の方法で発現させることができる。天然のＶＨ配列またはＶＨＨ配列から出発して、本発明のＶＨＨおよび／またはそれをコードする核酸を得るその他の好適な方法および技術は、当技術分野において既知であり、例えば、１つまたは複数の天然のＶＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列および／またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、１つまたは複数の天然のＶＨＨ配列（１つまたは複数のＦＲ配列またはＣＤＲ配列など）の１個または複数の部分、および／または１つまたは複数の合成または半合成配列を、本発明のＶＨＨまたはそれをコードするヌクレオチド配列もしくは核酸を得るように、好適な方法で組み合わせることを含み得る。
薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書で記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、充分に塩基性の官能基を有することができ、これは無機もしくは有機酸またはカルボキシル基と反応することができ、またこれは、無機または有機塩基と反応することができ、薬学的に許容可能な塩を形成することができる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、当該技術分野でよく知られているように、薬学的に許容可能な酸から形成される。このような塩には、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７）およびＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２、に挙げられた薬学的に許容可能な塩を含む。これらの文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
薬学的に許容可能な塩としては、非限定的例であるが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、ホスフェート、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸塩、ブチン－１，４－ジカルボキシレート、ヘキシン－１，４－ジカルボキシレート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、ヒプル酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テラフタル酸塩、プロピオール酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の組成物の塩を指す。適切な塩基としては、限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換のモノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸などが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載の組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。
医薬組成物および製剤
種々の実施形態では、本発明は、本明細書で記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。本明細書で記載のいずれの医薬組成物も、薬学的に許容可能な担体またはビークルを含む組成物の成分として、対象に投与することができる。このような組成物は、適切な投与用の形態を与えるように、適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を任意に含み得る。
種々の実施形態では、医薬賦形剤は、ピーナッツオイル、大豆油、ミネラルオイル、ゴマ油などの石油、動物、植物、または人工起源のものを含む、水および油などの液体であり得る。医薬賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素なであってよい。さらに、助剤、安定化剤、増粘化剤、潤滑剤、および着色料を使用することができる。一実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、対象に投与される場合、無菌である。本明細書で記載のいずれかの薬剤が静脈内に投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水および水性デキストロースならびにグリセリン溶液はまた、液体賦形剤として、特に注射可能溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアレート、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書で記載のいずれの薬剤も、必要に応じ、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含んでよい。適切な医薬賦形剤のそのほかの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されている。この文献は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、種々の製剤中に記載医薬組成物（および／または追加の治療薬）を含む。本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の治療薬）も、液剤、懸濁剤、乳濁液、点滴剤、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアロゾル、噴霧剤、懸濁剤、凍結乾燥散剤、凍結懸濁剤、乾燥散剤、または使用に適するその他の任意の形態をとることができる。一実施形態では、組成物はカプセルの形態である。別の実施形態では、組成物は錠剤の形態である。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、軟質ゲルカプセルの形態に処方される。さらなる実施形態では、医薬組成物は、ゼラチンカプセルの形態に処方される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、液剤として処方される。
必要に応じて、本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）は、可溶化剤も含み得る。また、薬剤は当技術分野において既知の適切なビークルまたは送達装置を使って送達することができる。本明細書で概要を述べた併用療法剤は、単一の送達ビークルまたは送達担体で同時送達できる。
本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）を含む製剤は単位剤形として好都合に提供でき、薬学の分野でよく知られたいずれかの方法により調製され得る。このような方法は通常、治療薬を担体と混合するステップを含み、担体は１種または複数の補助成分を構成する。通常、製剤は、治療薬と、液体担体、微粉化固相担体、または両方とを均一に、完全に混合すること、その後、必要に応じ、生成物を所望の製剤の剤形に成形すること（例えば、湿式または乾式造粒、散剤ブレンド、など、それに続く、当該技術分野で既知の従来の方法を使って錠剤化すること）により調製される。
種々の実施形態では、本明細書で記載のいずれの医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、本明細書で記載の投与方法に適合された組成物として、ルーチン手順に従って処方される。
投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入、または局所を含む。投与は局所的または全身性であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、経口により行われる。別の実施形態では、投与は非経口の注射による。投与方法は、開業医の自由裁量に任すことができ、一部には、病状の部位に依存する。大抵の場合、投与は本明細書で記載のいずれかの薬剤の血流中への放出をもたらす。
一実施形態では、本明細書で記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、経口投与に適合された組成物として、常法に従って処方される。経口送達用の組成物は、錠剤、トローチ剤、水性または油性懸濁剤、粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ剤、またはエリキシル剤の形態であってよい。経口投与される組成物は、薬学的に口当たりの良い製剤を提供するために、１種または複数の薬剤、例えば、ラクトース、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味料、ペパーミント、冬緑油またはチェリー油などの調味料、着色料および保存剤を含み得る。さらに、錠剤または丸薬形態では、組成物をコートして、消化管での崩壊および吸収を遅らせることにより長期間にわたり持続作用を可能とすることができる。本明細書に記載のいずれかの浸透活性駆動性キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を取り囲む選択的透過性膜も、経口投与組成物として好適である。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルの周りの環境からの液体が運搬化合物により吸収され、この化合物は膨潤し、開口部を介して薬剤または薬剤組成物を追い出す。これらの送達プラットフォームは、即時放出製剤の急上昇プロファイルとは対照的に、基本的に０次の送達プロファイルを提供することができる。グリセロールモノステアレートまたはグリセロールステアレートなどの時間遅延物質も使用することができる。経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、および炭酸マグネシウムを含んでよい。一実施形態は、賦形剤は医薬品グレードである。活性化合物に加えて、懸濁剤は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天、トラガント、など、およびこれらの混合物などの沈殿防止剤を含んでよい。
非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下および関節内注射および注入）に好適な剤形は、例えば、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、などを含む。それらは、無菌の固相組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造されてよく、これは、使用直前に、無菌の注入可能媒体中に溶解または懸濁され得る。それらは、例えば、当該技術分野において、既知の懸濁剤または分散剤を含み得る。非経口的投与に好適な製剤成分としては、注射用の水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、またはその他の合成溶媒などの無菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。
静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌性水、クレモフォアＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。
本明細書にて提供される組成物は、単独でまたは他の好適な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエーロゾル製剤（すなわち、「噴霧化」製剤）を作製することができる。エーロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容され得る加圧化噴射剤中に入れることができる。
本明細書で記載のいずれの本発明の医薬組成物（および／または追加の薬剤）も、当業者に既知の制御放出によりまたは徐放手段または送達装置により投与可能である。例としては、米国特許第３，８４５，７７０号；同第３，９１６，８９９号；同第３，５３６，８０９号；同第３，５９８，１２３号；同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、および同第５，７３３，５５６号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの特許のそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このような剤形は、例えば、ヒドロプロピルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、その他のポリマーマトリクス、ゲル、浸透膜、浸透系、多層被膜、微粒子、リポソーム、マイクロスフェア、またはこれらの組み合わせを用いて、１種または複数の有効成分の制御放出または徐放を可能にするために有用であり、様々な割合での所望の放出プロファイルを提供することができる。本明細書に記載されたものを含む当業者に既知の適切な制御放出または徐放製剤は、本明細書で記載の薬剤の有効成分と共に使用する上で容易に選択することができる。本発明はこのように、限定されないが、制御放出または徐放に適合された錠剤、カプセル、ジェルカプセルおよびカプレットなどの経口投与に好適な単位剤形を提供する。
有効成分の制御放出または徐放は、限定されないが、ｐＨ変化、温度変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度または利用可能性、または他の生理学的条件または化合物を含む、種々の条件により刺激できる。
別の実施形態では、徐放系を、治療される標的領域の近傍に配置でき、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、中の概説で考察されている他の放出制御系を使用し得る。
医薬製剤は好ましくは無菌である。無菌化は、例えば、無菌濾過膜で濾過することにより達成される。組成物が凍結乾燥される場合、凍結乾燥および再構成の前またはその後でフィルター滅菌を行うことができる。
投与および投与量
本発明により投与されるキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の実際の用量は、特定の剤形および投与方法に応じて変わるであろうということは理解されよう。当業者なら、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の作用を変える多くの要因（例えば、体重、性別、食事、投与時期、投与経路、排出速度、対象の状態、薬剤の組み合わせ、遺伝的素因および反応感度）を考慮に入れることができる。投与は、最大耐量の範囲内で連続的にまたは１種または複数の別々の投与量で実施できる。与えられた一連の条件に対する最適投与速度は、従来の用量投与試験を使って、当業者により確認できる。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の好適な投与量は、約０．０１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの対象の体重、約０．０１μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの対象の体重、または約０．０１μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの対象の体重の範囲であり、例えば、約０．０１μｇ／ｋｇ、約０．０２μｇ／ｋｇ、約０．０３μｇ／ｋｇ、約０．０４μｇ／ｋｇ、約０．０５μｇ／ｋｇ、約０．０６μｇ／ｋｇ、約０．０７μｇ／ｋｇ、約０．０８μｇ／ｋｇ、約０．０９μｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１００ｍｇ／ｋｇ体重（これらの間の全ての値および範囲を含む）である。
キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の個々の用量は、例えば、単位剤形（例えば、錠剤、カプセル、または液体製剤）あたり、約１μｇ～約１００ｍｇ、約１μｇ～約９０ｍｇ、約１μｇ～約８０ｍｇ、約１μｇ～約７０ｍｇ、約１μｇ～約６０ｍｇ、約１μｇ～約５０ｍｇ、約１μｇ～約４０ｍｇ、約１μｇ～約３０ｍｇ、約１μｇ～約２０ｍｇ、約１μｇ～約１０ｍｇ、約１μｇ～約５ｍｇ、約１μｇ～約３ｍｇ、約１μｇ～約１ｍｇ、または約１μｇ～約５０μｇを含む単位剤形として投与できる。例えば、単位剤形は、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１１μｇ、約１２μｇ、約１３μｇ、約１４μｇ、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９、約３０μｇ、約３５μｇ、約４０μｇ、約４５μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、または約１００ｍｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）であり得る。
一実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、毎日約１μｇ～約１００ｍｇ、毎日約１μｇ～約９０ｍｇ、毎日約１μｇ～約８０ｍｇ、毎日約１μｇ～約７０ｍｇ、毎日約１μｇ～約６０ｍｇ、毎日約１μｇ～約５０ｍｇ、毎日約１μｇ～約４０ｍｇ、毎日約１μｇ～約３０ｍｇ、毎日約１μｇ～約２０ｍｇ、毎日約０１μｇ～約１０ｍｇ、毎日約１μｇ～約５ｍｇ、毎日約１μｇ～約３ｍｇ、または毎日約１μｇ～約１ｍｇの量で投与される。種々の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１１μｇ、約１２μｇ、約１３μｇ、約１４μｇ、約１５μｇ、約１６μｇ、約１７μｇ、約１８μｇ、約１９μｇ、約２０μｇ、約２１μｇ、約２２μｇ、約２３μｇ、約２４μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約29、約３０μｇ、約３５μｇ、約４０μｇ、約４５μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、約０．１ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．９ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、または約１００ｍｇ（これらの間の全ての値および範囲を含む）の１日量で投与される。
本発明の特定の実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を含む医薬組成物は、例えば、１日２回以上（例えば、毎日約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、または約１０回）、１日約１回、約１日おき、約３日おき、週約１回、２週毎に約１回、毎月約１回、２か月毎に約１回、３か月毎に約１回、６か月毎に約１回、または毎年約１回投与され得る。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を含む医薬組成物は、週約３回投与される。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、長期間にわたり投与され得る。例えば、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、本明細書に記載のように、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約５週間、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間、少なくとも約８週間、少なくとも約９週間、少なくとも約１０週間、少なくとも約１１週間、または少なくとも約１２週間にわたり投与され得る。例えば、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、１２週間、２４週間、３６週間または４８週間にわたり投与され得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、少なくとも約１か月間、少なくとも約２か月間、少なくとも約３か月間、少なくとも約４か月間、少なくとも約５か月間、少なくとも約６か月間、少なくとも約７か月間、少なくとも約８か月間、少なくとも約９か月間、少なくとも約１０か月間、少なくとも約１１か月間、または少なくとも約１２か月間にわたり投与される。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間にわたり投与され得る。
併用療法および追加の治療薬
種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、追加の治療薬と共に同時投与される。同時投与は、同時または順次であってよい。
一実施形態では、追加の治療薬および本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、対象に同時に投与される。本明細書で使用される場合、用語「同時に」は、追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体が、約６０分以下、例えば、約３０分以下、約２０分以下、約１０分以下、約５分以下、または約１分以下の時間間隔で投与されることを意味する。追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の投与は、単一製剤（例えば、追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を含む製剤）または別々の製剤（例えば、追加の治療薬を含む第１の製剤およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体を含む第２の製剤）の同時投与により行うことが可能である。
同時投与は、それらの投与のタイミングが、追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の薬理学的活性が時間経過と共に重なりあい、それにより組み合わされた治療効果が発揮されるような場合には、治療薬が同時に投与される必要はない。例えば、追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、順次に投与できる。本明細書で使用される場合、用語「順次に」は、追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体が、約６０分を超える時間間隔で投与されることを意味する。例えば、追加の治療薬とキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体との逐次投与の間の時間は、約６０分を超えて、約２時間を超えて、約５時間を超えて、約１０時間を超えて、約１日を超えて、約２日を超えて、約３日を超えて、約１週間を超えて間隔を開ける、約２週間を超えて間隔を開ける、または約１か月を越えて間隔を開けることができる。最適投与時間は、投与される追加の治療薬およびキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の代謝、排泄速度、および／または薬力学的活性に依存するであろう。追加の治療薬またはキメラタンパク質もしくはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、最初に投与してよい。
同時投与はまた、治療薬が同じ投与経路により対象に投与される必要はない。むしろ、それぞれの治療薬は、任意の適切な経路、例えば、非経口または経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）で投与できる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、別の治療薬と同時投与されると、相乗的に作用する。このような実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体および追加の治療薬は、その治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての化学療法剤に関する。例えば、限定されないが、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体と化学療法剤とのこのような組み合わせは、本明細書の別の場所で記載のように、癌の治療に使用される。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパ、ＣＹＴＯＸＡＮ（シクロホスファミド）、スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドーパ，カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ、エチレンイミン、メチラメラミン例えば、アルトレタミン、トリエチルエネメラミン、トリエチレンネフォスフォラミド、トリエチレンチオフォスフォラミドおよび、トリメチロールメラミン、アセトゲニン（例えば、ブラタシン、ブラタチノン）、カントテシン（合成類似剤トポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙ ｓｔａｔｉｎ）、ＣＣ－１０６５（アドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８など）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似薬ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコディクチン、スポンギスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（カリチアマイシン、特にカリチアマイシンガンマＩＩとカリチアマイシンオメガＩＩ（Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照）、ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む、ビスフォスフォネート、例えば、クロドロネート、エスペラマイシン、ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）（モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チュベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗薬、例えば、メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、葉酸の類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド（ｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン、トリロスタン、葉酸補充液、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デメコルチン、ジアジクオン、エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）、エリプチニウムアセテート、エポチロン、エトグルシド、ガリウムニトレート、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサマイトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（例えば、Ｔ２毒、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイディン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（アラ－Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えば、タキソールパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、アブラキサンクレモフォアフリー、アルブミン処理ナノ粒子形成パクリタキセル（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、タキソテールドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロランブシル、ジェムザール（ゲムシタビン）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ナベルビン（ビノレルビン）、ノバントロン、テニポシド、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（キャンプトサー，ＣＰＴ－１１）（イリノテカンと５－ＦＵおよびロイコボリンの治療法を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ヂルルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド、例えば、レチノイン酸、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン、オキサリプラチン治療法（ＦＯＬＦＯＸ）を含む、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）、ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）および細胞増殖を抑制するＶＥＧＦ－Ａならびに上述のいずれかの薬剤の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体、が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、治療の方法は、放射線の使用をさらに含み得る。さらに、治療の方法は、光線力学的治療の使用をさらに含み得る。
限定されないが、感染症適用を含む、いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての抗感染薬に関する。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗ウイルス薬であり、これは、限定されないが、アバカビル、アシクロビル、アデホビル、アンプレナビル、アタザナビル、シドフォヴィル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンフビルチド、エトラビリン、ファムシクロビル、およびホスカルネットを含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は抗菌剤であり、これは、限定されないが、セファロスポリン系抗生物質（セファレキシン、セフロキシム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロール、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、およびセフトビプロール）；フルオロキノロン系抗生物質（シプロ、レヴァキン、フロキシン、テクイン、アベロックスおよびノルフロックス）；テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、およびドキシサイクリン）；ペニシリン系抗生物質（アモキシシリン、アンピシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バンコマイシン、およびメチシリン）；モノバクタム系抗生物質（アズトレオナム）；およびカルバペネム系抗生物質（エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネム）を含む。いくつかの実施形態では、抗感染薬は、抗マラリア薬（例えば、クロロキン、キニーネ、メフロキン、プリマキン、ドキシサイクリン、アーテメータ／ルメファントリン、アトバクオン／プログアニルおよびスルファドキシン／ピリメタミン）、メトロニダゾール、チニダゾール、イベルメクチン、パモ酸ピランテル、およびアルベンダゾールを含む。
例示的実施形態では、本発明は、追加の治療薬としての肝炎治療薬の使用に関する。種々の実施形態では、肝炎治療薬としては、限定されないが、イントロンＡなどのＩＦＮαまたはペガシスまたはペグイントロンなどのペグ化ＩＦＮα、ボセプレビル、シメプレビル、ソホスブビル、シメプレビル、ダクラタスビル、レジパスビル／ソホスブビル（ハーボニー）、オムビタスビル／パリタプレビル／リトナビル（テクニヴィ）、オムビタスビル／パリタプレビル／リトナビル／ダサブビル（ヴィキラ・パック）、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、エンテカビル、テノホビル、ベルパタスビル、エルバスビル、グラゾプレビル、ダサブビル、およびこれらの組み合わせが挙げられる。ある実施形態では、追加の治療薬は、ＩＦＮα（例えば、イントロンＡ）またはペグ化ＩＦＮα（例えば、ペガシスまたはペグイントロン）である。別の実施形態では、追加の治療薬は、リバビリンである。
いくつかの実施形態では、本発明は、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体および免疫抑制剤を用いる併用療法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫抑制剤を用いる治療を受けている患者に対するＣｌｅｃ９Ａ結合物質の投与に関する。
ある実施形態では、免疫抑制剤は、ＴＮＦである。例示的実施形態では、本明細書に記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＴＮＦと共投与されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、腫瘍または癌の治療での使用において、ＴＮＦと共投与されると相乗的に作用する。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体とＴＮＦとの共投与は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し得、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体とＴＮＦの組み合わせは、単剤療法の場合に単独で使用される薬剤に比べて、改善された安全性プロファイルを示し得る。このような実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体およびＴＮＦは、その治療薬が単剤療法で使用される場合に採用される用量よりも低い用量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、限定されないが、自己免疫適用を含む、追加の治療薬は、ステロイド性抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である、免疫抑制剤である。ステロイド、特に副腎皮質ホルモン剤およびそれらの合成類似体は当該技術分野においてよく知られている。本発明で有用な副腎皮質ステロイドの例としては、ヒドロキシルトリアムシノロン、α－メチルデキサメタゾン、β－メチルβ－メタゾン、ベクロメタゾンジプロピオネート、β－メタゾンベンゾエート、β－メタゾンジプロピオネート、β－メタゾンバレレート、クロベタゾールバレレート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラソンジアセテート、ジフルコルトロンバレレート、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルメタゾンピバレート、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）アセテート、フルランドレノロン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンブチレート、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾンジアセテート、フルラドレノロンアセトニド、メドリゾン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾンおよびその残りのエステル、クロロプレドニソン、クロコルテロン、クレシノロン、ジクロリゾン、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾンジプロピオネートが挙げられるが、これらに限定されない。本発明で使用してよい（ＮＳＡＩＤＳ）としては、限定されないが、サリチル酸、アセチルサリチル酸、サリチル酸メチル、グリコールサリチレート、サリチルアミド、ベンジル－２，５－ジアセトキシ安息香酸、イブプロフェン、スリンダク（ｆｕｌｉｎｄａｃ）、ナプロキセン、ケトプロフェン、エトフェナメート、フェニルブタゾン、およびインドメタシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫抑制剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質（例えば、アザチオプリン、メトトレキセート）、細胞傷害性抗生物質、抗体（バシリキシマブ、ダクリズマブ、およびムロモナブ）、抗イムノフィリン剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス）、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小分子生物学的製剤（例えば、フィンゴリモド、ミリオシン）などの細胞分裂阻害薬であってよい。追加の抗炎症剤は、例えば、米国特許第４，５３７，７７６号に記載され、この特許の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬として肥満症を治療するために使用される種々の薬剤に関する。肥満症の治療に使用するための薬剤の例としては、限定されないが、オルリスタット（例えば、ＡＬＬ１、ゼニカル）、ロルカセリン（ｌｏｒａｃａｓｅｒｉｎ）（例えば、ＢＥＬＶＩＱ）、フェンテルミントピラメート（例えば、キューシミア）、シブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｍｅ）（例えば、ＲＥＤＵＣＴＩＬまたはＭＥＲＪＤＩＡ）、リモナバン（アコンプリア（ＡＣＯＭＰＬＬＡ））、エキセナチド（例えば、バイエッタ）、プラムリンチド（例えば、シムリン）、フェンテルミン、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン（ｐｈｅｎｄｉｍｅｔｒａｚｍｅ）、ブプロピオン、およびメトホルミンが挙げられる。食物中の特定の栄養素を吸収する身体の能力を妨げる薬剤は、追加の薬剤であり、例えば、オルリスタット（例えば、ＡＬＵ、ゼニカル）グルコマンナン、およびグアーガムである。食欲を抑える薬剤も追加の薬剤であり、例えば、カテコールアミンならびにこれらの誘導体（例えば、フェンテルミン（ｐｈｅｎｔｅｉｍｉｎｅ）および他のアンフェタミン系薬物）、種々の抗うつ剤および気分安定剤（例えば、ブプロピオンおよびトピラマート）、食欲抑制薬（例えば、デキセドリン、ジゴキシン）である。身体の代謝を高める薬剤もまた、追加の薬剤である。
いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、食欲抑制薬、神経伝達物質再取り込み阻害剤、ドパミン作動薬、セロトニン作動薬、ＧＡＢＡ作動性シグナル伝達調節薬、抗けいれん薬、抗うつ剤、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、物質Ｐ（ＮＫ１）受容体アンタゴニスト、メラノコルチン受容体アゴニストおよびアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、脂肪吸収抑制剤、エネルギー摂取または代謝調節薬、カンナビノイド受容体調節薬、中毒治療剤、代謝症候群治療剤、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）調節薬；ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ－４）アンタゴニスト、心臓血管疾患治療剤、高トリグリセリド値治療剤、低ＨＤＬ治療剤、高コレステロール血症治療剤、および高血圧治療剤から選択される。心臓血管疾患のためのいくつかの薬剤としては、スタチン系薬剤（例えば、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンおよびプラバスタチン）およびオメガ－３薬剤（例えば、ロバザ、エパノバ（ＥＰＡＮＱＶＡ）、バシーパ、エステル化オメガ３系、通常、魚油、オキアミ油、藻油）が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、アンフェタミン、ベンゾジアゼピン、スルホニル尿素（ｓｕｉｆｏｎｙｌ ｕｒｅａ）、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ビグアニド、β遮断薬、ＸＣＥ阻害剤、利尿薬、ニトレート、カルシウムチャネル遮断薬、フェンテルミン（ｐｈｅｎｌｅｒｍｉｎｅ）、シブトラミン、ロルカセリン（ｉｏｒｃａｓｅｒｉｎ）、セチリスタット、リモナバン、タラナバント、トピラメート、ガバペンチン、バルプロ酸、ビガバトリン、ブプロピオン、チアガビン、セルトラリン、フルオキセチン、トラゾドン、ゾニサミド、メチルフェニデート、バレニクリン、ナルトレキソン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、レパグリニド（ｒｃｐａｇｌｉｎｉ．ｄｅ）、ナテグリニド、グリメピリド、メトホルミン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｌａｚｏｎｅ）から選択され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、追加の治療薬として糖尿病を治療するために使用される薬剤に関する。抗糖尿病約の例としては、限定されないが、スルホニルウレア（例えば、ＤＹＭＥＬＯＲ（アセトヘキサミド））、ジアビネーゼ（クロルプロパミド）、オリナーゼ（トルブタミド）、およびトリナーゼ（トラザミド）、グルコトロール（グリピジド）、グルコトロールＸＬ（持続放出）、ダイアベータ（グリブリド）、ミクロナーゼ（グリブリド）、グリナーゼプレスタブ（グリブリド）、およびアマリール（グリメピリド））；ビグアニド（例えば、メトホルミン（グルコファージ、グルコファージＸＲ、リオメット、フォルタメット、およびグルメツア））；チアゾリジンジオン（例えば、アクトス（ピオグリタゾン）およびアバンディア（ロシグリタゾン）；アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えば、プレコース（アカルボース）およびグリセット（ミグリトール）；メグリチニド（例えば、プランジン（レパグリニ）およびスターリックス（ナテグリニド））；ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）阻害剤（例えば、ジャヌビア（シタグリプチン）、ネシーナ（アログリプチン）、オングリザ（サキサグリプチン）、およびトラゼンタ（リナグリプチン））；ナトリウム・グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、インヴォカナ（カナグリフロジン（ｃａｎａｇｌｉｆｏｚｉｎ）））；および合剤型ピル（例えば、グリブリド（スルホニルウレア）とメトホルミンを組み合わせたグルコバンス；グリピジド（スルホニルウレア）とメトホルミンを組み合わせたメタグリップ；およびメトホルミンとロシグリタゾン（アバンディア）の両方を１つのピルに入れて使用するアバンダメット、カザノ（アログリプチンとメトホルミン）、オセニ（アログリプチン＋ピオグリタゾン）、メトホルミン経口、アクトス経口、バイエッタ皮下、ジャヌビア経口、ウェルコール経口、ジャヌメット経口、グリピジド経口、グリメピリド経口、ルコファージ経口、ランタス皮下、グリブリド経口、オングリザ経口、アマリール経口、ランタスソロスター皮下、ビデュリオン皮下、レベミルフレックスペン皮下、アクトプラスメット経口、グルメツア経口、トラゼンタ経口、ブロモクリプチン経口、コンビグライゼＸＲ経口、インヴォカナ経口、プランジン経口、レベミル皮下、パーロデル経口、ピオグリタゾン経口、ノボログ皮下、ノボログフレックスペン皮下、ビクトーザ２－ＰＡＫ皮下、ヒューマログ皮下、スターリックス経口、フォルタメット経口、グルコバンス経口、ルコファージＸＲ経口、ノボログミックス７０－３０フレックスペン皮下、グリブリド－メトホルミン経口、アカルボース経口、シムリンペン６０皮下、グルコトロールＸＬ経口、ノボリンＲ注射、グルコトロール経口、デュエタクト経口、シタグリプチン経口、シムリンペン１２０皮下、ヒューマログクイックペン皮下、ジャヌメットＸＲ経口、グリピジド－メトホルミン経口、シクロセット経口、ヒューマログミックス７５－２５皮下、ナテグリニド経口、ヒューマログミックス７５－２５クイックペン皮下、ヒューマリン７０／３０皮下、プレコース経口、アピドラ皮下、ヒューマリンＲ注射、Ｊｅｎｔａｄｕｅｔｏ経口、ビクトーザ３－Ｐａｋ皮下、ノボリン７０／３０皮下、ノボリンＮ皮下、インスリンデテミル皮下、微粒子化グリブリド経口、グリナーゼ経口、ヒューマリンＮ皮下、インスリングラルギン皮下、リオメット経口、ピオグリタゾン－メトホルミン経口、アピドラソロスター皮下、インスリンリスプロ皮下、グリセット経口、ヒューマリン７０／３０ＰＥＮ皮下、コレセベラム経口、シタグリプチン－メトホルミン経口、ダイアベータ経口、インスリン通常ヒト注射、ヒューマリンＮ ＰＥＮ皮下、エキセナチド皮下、ヒューマログミックス５０－５０クイックペン皮下、リラグルチド皮下、カザノ経口、レパグリニ経口、クロルプロパミド経口、インスリンアスパルト皮下、ノボログミックス７０－３０皮下、ヒューマログミックス５０－５０皮下、サキサグリプチン経口、アクトプラスメットＸＲ経口、ミグリトール経口、ＮＰＨインスリンヒト組換え皮下、インスリンＮＰＨおよび通常ヒト皮下、トラザミド経口、ミフェプリストン経口、インスリンアスパルトプロタミン－インスリンアスパルト皮下、レパグリニ－メトホルミン経口、サキサグリプチン－メトホルミン経口、リナグリプチン－メトホルミン経口、ネシーナ経口、オセニ経口、トルブタミド経口、インスリンリスプロプロタミンおよびリスプロ皮下、プラムリンチド皮下、インスリングルリジン皮下、ピオグリタゾン－グリメピリド経口、プランディメット経口、ノボログペンフィル皮下、リナグリプチン経口、エキセナチドマイクロスフェア皮下、ＫＯＲＬＹＭ経口、アログリプチン経口、アログリプチン－ピオグリタゾン経口、アログリプチン－メトホルミン経口、カナグリフロジン経口、リスプロ（ヒューマログ）；アスパルト（ノボログ）；グルリジン（アピドラ）；標準（ノボリンＲまたはヒューマリンＲ）；ＮＰＨ（ノボリンＮまたはヒューマリンＮ）；グラルギン（ランタス）；デテミル（レベミル）；ヒューマリンまたはノボリン７０／３０；およびノボログミックス７０／３０ヒューマログミックス７５／２５または５０／５０が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると、相乗的に作用する。例示的実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、腫瘍または癌の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体薬剤は、血液系腫瘍の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、固形腫瘍の治療において、ＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせて使用されると相乗的に作用する。例えば、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体およびＣＡＲ Ｔ細胞の使用は、相乗的に作用して、腫瘍または癌を低減または除去し、または腫瘍または癌の増殖および／または進行および／または転移を遅らせ得る。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＡＲ Ｔ細胞分裂を誘導する。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を誘導する。種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＣＡＲ Ｔ細胞のアネルギーを防止する。
種々の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、抗原（例えば、腫瘍抗原）、例えば、限定されないが、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、５Ｔ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４７、ＣＳ１、ＣＤ１３８、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ、Ｌ１－ＣＡＭ、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ－１、ＩＬ１３Ｒα２、ｇｐ１００、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒトパピローマタイプ１６ Ｅ６（ＨＰＶ－１６ Ｅ６）、ＣＤ１７１、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）、ＧＤ２、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、および血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ならびに当該技術分野において周知のその他の腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ Ｔ細胞を含む。追加の腫瘍抗原の例としては、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連性抗原（ＣＲＣ）－００１７－１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２、およびＰＳＡ－３、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫症タンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ－１、ＮＡ、ＥＢＶ－コード化核内抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１ ＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ１９、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＡＧＳ１６、ＭＵＣ１、ＧＰＮＭＢ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２が挙げられるが、これらに限定されない。
ＣＡＲ Ｔ細胞療法の例としては、ＪＣＡＲ０１４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１５（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１７（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０１８（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２０（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２３（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＪＣＡＲ０２４（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＫＴＥ－Ｃ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ）、ＢＰＸ－４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ－５０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＰＸ－６０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ｂｂ２１２１（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ Ｂｉｏ）、ＣＤ－１９ Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ ｃｅｌｌｓ（眠れる森の美女細胞）（Ｚｉｏｐｈａｒｍ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ１２３（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴ３８（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＵＣＡＲＴＣＳ１（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）、ＯＸＢ－３０２（Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａ、ＭＢ－１０１（Ｍｕｓｔａｎｇ Ｂｉｏ）およびＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＣＡＲ Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、限定されないが、３－インターフェロン、酢酸グラチラマー、Ｔ－インターフェロン、ＩＦＮβ２（米国特許出願公開第２００２／００２５３０４号）、スピロゲルマニウム（例えば、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジメチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジエチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジプロピル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン、およびＮ－（３－ジメチルアミノプロピル－２－アザ－８，８－ジブチル－８－ゲルマスピロ［４：５］デカン）、ビタミンＤ類似体（例えば、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、（例えば、米国特許第５，７１６，９４６号を参照））、プロスタグランジン（例えば、ラタノプロスト、ブリモニジン、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３、例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５２５号を参照）、テトラサイクリンと誘導体（例えば、ミノサイクリンおよびドキシサイクリン、例えば、米国特許出願公開第２００２／００２２６０８号を参照）、ＶＬＡ－４結合抗体（例えば、米国特許出願公開第２００９／０２０２５２７号を参照）、副腎皮質刺激ホルモン、副腎皮質ステロイド、プレドニゾン、メチルプレドニソン、２－クロロデオキシアデノシン、ミトキサントロン、スルファサラジン、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、フマレート、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、および チザニジン塩酸塩を含む多発性硬化症（ＭＳ）治療薬の１種または複数と組み合わせてＭＳの治療方法で使用される。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ＭＳの１種または複数の症状または副作用を治療する１種または複数の治療薬と組み合わせて使用される。このような薬剤としては、アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドクセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン（ｐｈｅｎｙｌｏｉｎ）、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファキシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、プロパンテリンブロミド、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリンが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、１種または複数の本明細書に記載の疾患修飾治療薬（ＤＭＴ）（例えば、表６の薬剤）と組み合わせて多発性硬化症の治療方法で使用される。いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の開示結合物質を含まない場合の、１個または複数の本明細書に記載のＤＭＴ（例えば、下表６に挙げた物質）と比べて、改善された治療効果を提供する。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体と１種または複数のＤＭＴの組み合わせは、相乗的治療効果をもたらす。
疾患修飾治療薬の例としては、下記が挙げられるが、これらに限定されない：
Figure 2022534837000015
Figure 2022534837000016
Figure 2022534837000017
Figure 2022534837000018
Figure 2022534837000019
Figure 2022534837000020
いくつかの実施形態では、本発明は、輸血との併用療法に関する。例えば、本組成物は、輸血を補充し得る。いくつかの実施形態では、本発明は、鉄分補充保健薬との併用療法に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数のＥＰＯ系薬剤との併用療法に関する。例えば、本組成物は、他のＥＰＯ系薬剤に対する補助剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、他のＥＰＯ系薬剤に対する維持療法として使用される。他のＥＰＯ系薬剤としては以下のもの：ダルベポエチン（ＡＲＡＮＥＳＰ）、エポセプト（ＬＵＰＩＮ ＰＨＡＲＭＡ）、ナノカイン（ＮＡＮＯＧＥＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ）、エポフィット（ＩＮＴＡＳ ＰＨＡＲＭＡ）、エポジェン（ＡＭＧＥＮ）、エポジン、エプレックス、（ＪＡＮＳＳＥＮ－ＣＩＬＡＧ）、ビノクリット７（ＳＡＮＤＯＺ）、プロクリットを含むがこれらに限定されないエポエチンα；ネオレコルモン（ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ）、レコルモン、メトキシポリエチレングリコール－エポエチンβ（ＭＩＲＣＥＲＡ、ＲＯＣＨＥ）を含むがこれらに限定されないエポエチンβ；ダイネポ（赤血球生成刺激タンパク質、ＳＨＩＲＥ ＰＬＣ）を含むがこれに限定されないエポエチンδ；ＥＰＯＭＡＸを含むがこれに限定されないエポエチンω；サイラポ（ＳＴＡＤＡ）およびレタクリット（ＨＯＳＰＩＲＡ）を含むがこれらに限定されないエポエチンζ、およびエポセプト（ＬＵＰＩＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ）、エポトラスト（ＰＡＮＡＣＥＡ ＢＩＯＴＥＣ ＬＴＤ）、エリプロセーフ（ＢＩＯＣＯＮ ＬＴＤ．）、レポイチン（ＳＥＲＵＭ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＩＮＤＩＡ ＬＩＭＩＴＥＤ）、ヴィントール（ＥＭＣＵＲＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ）、エポフィット（ＩＮＴＡＳ ＰＨＡＲＭＡ）、エリカイン（ＩＮＴＡＳ ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡ）、ウェポックス（ＷＯＣＫＨＡＲＤＴ ＢＩＯＴＥＣＨ）、エスポゲン（ＬＧ ＬＩＦＥ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）、レリポエチン（ＲＥＬＩＡＮＣＥ ＬＩＦＥ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）、シャンポエチン（ＳＨＡＮＴＨＡ ＢＩＯＴＥＣＨＮＩＣＳ ＬＴＤ）、ジロップ（ＣＡＤＩＬＡ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ ＬＴＤ．）、エピアオ（ 遺伝子組み換えヒトエリスロポエチン（ＲＨＵＥＰＯ））（ＳＨＥＮＹＡＮＧ ＳＵＮＳＨＩＮＥ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．ＬＴＤ）、ＣＩＮＮＡＰＯＩＥＴＩＮ（ＣＩＮＮＡＧＥＮ）を含むがこれらに限定されない他のＥＰＯが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の免疫調節薬、例えば、限定されないが、免疫チェックポイントを調節する物質を用いる併用療法に関する。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の１種または複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１阻害剤である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、およびＰＤ－Ｌ２の１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ニボルバム（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、オプジーボ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの内の１個または複数を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ１３７またはＣＤ１３７Ｌの１個または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３および抗４－１ＢＢ抗体としても知られる）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、固形腫瘍および／またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫および／または頭頸部癌および／または多発性骨髄腫の治療のために、ウレルマブと組み合わされる（任意選択で、ニボルバム、リリルマブ、およびウレルマブの１種または複数と組み合わされる）。いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数を標的とする物質である。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＴＬＡ－４、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ－２、およびＰＰＰ２Ｒ５Ａの１種または複数に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、ヤーボイ、ＢＭＳ）および／またはトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの抗体である。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、黒色腫、前立腺癌、および肺癌の１種または複数の治療のために、イピリムマブと組み合わされる（必要に応じ、バビツキシマブと組み合わされる）。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０を標的とする。種々の実施形態では、免疫調節薬は、ＣＤ２０に特異的な抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、免疫調節薬は、限定されないが、オファツムマブ（ＧＥＮＭＡＢ）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ）、ＡＭＥ－１３３ｖ（ＡＰＰＬＩＥＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＥＶＯＬＵＴＩＯＮ）、オクレリズマブ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、ＴＲＵ－０１５（ＴＲＵＢＩＯＮ／ＥＭＥＲＧＥＮＴ）、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ－１０６）などの抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明は、国際公開第２０１３／１０７７９号、国際公開第２０１５／００７５３６号、国際公開第２０１５／００７５２０号、国際公開第２０１５／００７５４２号、および国際公開第２０１５／００７９０３号に記載の１種または複数のキメラ物質との併用療法に関する。これらの特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、修飾されている誘導体、すなわち、共有結合が組成物の活性を妨げないような任意のタイプの分子の組成物への共有結合により修飾されている誘導体を含む。例えば、限定するものではないが、誘導体は、特に、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたはその他のタンパク質への結合、などにより修飾されている組成物を含む。多くの化学修飾のいずれかを既知の技術、例えば、限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成、などを使って行うことができる。
さらにその他の実施形態では、本明細書に記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、例示的実施形態では、毒素、化学療法剤、放射性同位元素、およびアポトーシスまたは細胞死を引き起こす物質を含む細胞傷害薬をさらに含む。このような物質は、本明細書に記載の組成物に複合化され得る。
本明細書で記載のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体をこのように翻訳後修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば、蛍光染料、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光部分などの検出可能な部分、または、例えば、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒、細胞傷害性薬、および放射性物質などの機能的部分を付加し得る。
細胞傷害薬の例としては、メトトレキセート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン））；アントラサイクリン（ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含む）；抗生物質（ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む）；有糸分裂阻害薬（ａｎｔｉｍｙｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）（例えば、ビンカアルカロイドビンカアルカロイド、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。その他の細胞傷害薬には、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン，１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、副腎皮質ステロイド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害薬の混合物が挙げられる。
さらなる細胞傷害薬としては、化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリチアマイシン、ドキソルビシン、５－フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、プラチン、タキソール、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｙｔａｂｉｎｅ）、ロイコボリン、ステロイド類、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）、ムスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線療法、性ホルモン拮抗薬、選択的アンドロゲン受容体調節薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ１アンタゴニスト、インターロイキン（例えば、ＩＬ１２またはＩＬ２）、ＩＬ１２Ｒアンタゴニスト、毒素複合化モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、アービタックス、アバスチン、ペルツズマブ、抗ＣＤ２０抗体、リツキサン、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、ハーセプチン（登録商標）、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素およびシュードモナス毒素などの植物および細菌由来の毒性酵素は、治療薬（例えば、抗体）と複合体形成して、細胞型特異的殺作用剤を生成し得る（Ｙｏｕｌｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：５４１９（１９８０））。
他の細胞傷害薬としては、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇによる米国特許第６．６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが挙げられる。本発明の実施形態はまた、放射性免疫複合体に関し、複合体形成剤を使用してまたは使用せずに、アルファまたはベータ粒子を放出する放射性核種がキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体に安定に結合される。このような放射性核種としては、例えば、リン－３２、スカンジウム－４７、銅－６７、ガリウム－６７、イットリウム－８８、イットリウム－９０、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、サマリウム－１５３、ルテチウム－１７７、レニウム－１８６またはレニウム－１８８などのβ放射体、およびアスタチン－２１１、鉛－２１２、ビスマス－２１２、ビスマス－２１３またはアクチニウム－２２５などのα放射体が挙げられる。
検出可能な部分の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータガラクトシダーゼおよびルシフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。蛍光材料のさらなる例としては、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリンおよびダンシルクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。化学発光部分のさらなる例としては、ルミノールが挙げられるが、これに限定されない。生物発光材料のさらなる例としては、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられるが、これらに限定されない。放射性材料のさらなる例としては、ヨウ素－１２５、炭素－１４、硫黄－３５、トリチウムおよびリン－３２が挙げられるが、これらに限定されない。
治療方法
本明細書に記載の方法および組成物は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、貧血、自己免疫疾患、心臓血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および多くの他の疾患および障害を含む、種々の疾患および障害を治療する用途がある。
さらに、本発明の物質は、限定されないが、癌、感染症、免疫異常、炎症性疾患または状態、および自己免疫疾患を含む、種々の疾患および障害の治療、または治療用の薬物の製造に使用し得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、癌、心不全、自己免疫疾患、鎌状赤血球症、地中海貧血症、失血、輸血反応、糖尿病、ビタミンＢ１２欠乏症、膠原病性脈管疾患、シュワックマン症候群、血小板減少性紫斑病、セリアック病、甲状腺機能低下症またはアジソン病などの内分泌欠損状態、クローン病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチまたは若年性関節リウマチなどの自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、好酸球性筋膜炎、低免疫グロブリン血症、または胸腺腫／胸腺癌などの免疫異常、移植片対宿主病、前白血病状態、非血液学的症候群（例えば、ダウン、デュボヴィッツ、ゼッケル症候群）、フェルティ症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、夜間発作性血色素尿症、骨髄線維症、汎血球減少症、赤芽球ろう、シェーンライン－ヘノッホ紫斑病、マラリア、タンパク質欠乏、月経過多、全身性硬化症、肝硬変、代謝低下状態、およびうっ血性心不全の１種または複数の治療、またはこれらの１種または複数を有する患者の治療に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、癌を治療する方法に関し、方法は、ｉ）それを必要としている患者にキメラタンパク質、キメラタンパク質複合体および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体；ｉｉ）それを必要としている患者にキメラタンパク質、キメラタンパク質複合体および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする組換え核酸；またはｉｉｉ）それを必要としている患者にキメラタンパク質、キメラタンパク質複合体および／またはＦｃベースキメラタンパク質複合体をコードする組換え核酸を含む宿主細胞の有効量を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、慢性肉芽腫性疾患、大理石骨病、特発性肺線維症、フリードライヒ失調症、アトピー性皮膚炎、シャーガス病、マイコバクテリア感染症、癌、強皮症、肝炎、Ｃ型肝炎、敗血性ショック、および関節リウマチの１種または複数の治療、またはこれらの１種または複数を有する患者の治療に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、癌の治療、または癌の患者に関する。本明細書で使用される場合、癌は、身体の器官およびシステムの正常な機能動作を妨害し得る任意の制御されない細胞増殖に関し、原発性および転移性の腫瘍の両方を含む。元の位置から移動し、重要な器官に播種される原発性腫瘍または癌は、罹患した器官の機能劣化により対象の死を最終的にもたらす場合がある。転移は、原発腫瘍部位のものとは異なる癌細胞または一群の癌細胞であり、原発腫瘍から身体の他の部位への癌細胞の播種から生ずる。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、癌は、良性および悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含み得る。
治療し得る癌の例としては、癌腫、例えば、種々のサブタイプ（例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、および移行性上皮癌を含む）、肉腫（例えば、骨および軟組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ球性、およびヘアリー細胞を含む）、リンパ腫および骨髄腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、軽鎖型、非分泌型ＭＧＵＳ、および形質細胞腫を含む）、および中枢神経系癌（例えば、脳腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起細胞腫および上衣腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、および神経腫）、および脊髄腫瘍（例えば、髄膜腫および神経線維腫））が挙げられるが、これらに限定されない。
治療され得る癌の例としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系癌、乳癌、腹膜の癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部の癌、胃癌（胃腸癌を含む）、神経膠芽腫、肝癌、ヘパトーマ、上皮内腫瘍、腎臓癌または腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、唾液腺癌腫、肉腫（例えば、カポジ肉腫）；皮膚癌、扁平上皮細胞癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮または子宮内膜癌、泌尿器系の癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、毛様細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、ならびに他の癌腫および肉腫、および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメグズ症候群が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、本発明は、毛様細胞性白血病を含む白血病の治療に関する。別の実施形態では、本発明は、悪性黒色腫を含む黒色腫の治療に関する。さらなる実施形態では、本発明は、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫を含むカポジ肉腫の治療に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、微生物感染症および／または慢性感染症の治療、またはそれらの感染症を罹患している患者に関する。感染症の例としては、シャーガス病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン・バールウイルスまたはパルボウイルス感染症、Ｔ細胞白血病ウイルス感染症、細菌過剰症候群、真菌または寄生虫感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明は、肝炎の治療に関する。治療され得る肝炎の例としては、限定されないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、自己免疫性肝炎、アルコール性肝炎、急性肝炎、および慢性肝炎が挙げられる。
例示的実施形態では、本発明は、慢性Ｃ型肝炎の治療に関する。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、遺伝子型１（ｅ．ｇ．、１ａ、１ｂ）、遺伝子型２（例えば、２ａ、２ｂ、２ｃおよび２ｄ）、遺伝子型３（例えば、３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄ、３ｅ、および３ｆ）、遺伝子型４（例えば、４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ、４ｅ、４ｆ、４ｇ、４ｈ、４ｉおよび４ｊ）、遺伝子型５ａ、および遺伝子型６ａを含むＣ型肝炎遺伝子型のいずれか１種に感染した患者を治療するために利用され得る。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、標準治療抗ウイルス療法に不十分な応答または非応答性である患者、または他の方法では、標準治療のＣ型肝炎治療による治療が困難である患者を治療するために利用され得る。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、リバビリンを用いたまたはそれを用いないＩＦＮα療法（例えば、ＩＦＮα２ａまたはＩＦＮα２ｂまたはペグ化ＩＦＮα）に低い応答または非応答性である患者を治療するために利用され得る。ある実施形態では、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、ペグ化インターフェロンとリバビリンとの併用療法に低い応答または非応答性である患者を治療するために利用され得る。ある実施形態では、本発明は、以前のＩＦＮα療法に応答しなかったＣ型肝炎遺伝子型１またはいずれか他のＣ型肝炎遺伝子型に感染した患者の治療に関する。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、高いベースラインウイルス量（例えば、８００，０００ＩＵ／ｍＬ）を有する患者を治療するために利用され得る。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、進行型肝線維症および／または肝硬変の患者を含む重度肝損傷がある患者を治療するために利用され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗ウイルス療法を受けたことがない患者の治療に関する。他の実施形態では、本発明は、以前の抗ウイルス療法に応答しなかった患者の治療に関する。いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、再発患者を治療するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、白人、アフリカ系アメリカ人、ヒスパニックの人およびアジア人を含む全ての民族の肝炎感染症の治療において効果的であり得る。ある実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、他の場合には、リバビリンを用いる、またはそれを用いないＩＦＮα療法に対し不十分な応答であるアフリカ系アメリカ人の治療において特に効果的であり得る。
種々の実施形態では、本発明の標的化キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、例えば、非標的化ＩＦＮα１または非改変野生型ＩＦＮα１または改変ＩＦＮα１（例えば、ペグ化ＩＦＮα１）に比べて、改善された安全性改善された安全性を提供する。例示的実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の投与は、非標的化ＩＦＮα１または非改変野生型ＩＦＮαまたは改変ＩＦＮαの使用に関連する副作用などの最小限の副作用（例えば、インフルエンザ様症状、筋肉痛、白血球減少症、血小板減少症、好中球減少症、うつ、および体重減）に関連する。
いくつかの実施形態では、本発明の標的化キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、非標的化ＩＦＮα１または非改変野生型ＩＦＮα１または改変ＩＦＮα１（例えば、ペグ化ＩＦＮα１）に比べて、改善された治療作用を示す。いくつかの実施形態では、本発明の標的化キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、非標的化ＩＦＮα１または非改変野生型ＩＦＮα１または改変ＩＦＮα１（例えば、ペグ化ＩＦＮα１）に比べて、改善された薬物動態プロファイル（例えば、より長い血清半減期および安定性）を示す。
理論に束縛されることを意図するものではないが、このような有利な安全性および薬物動態学的および治療プロファイルに起因して、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、高い投与量でおよび／または長期間にわたり患者を治療するために使用され得る。例えば、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、慢性Ｃ型肝炎感染症に対する初回寛解導入療法のために高投与量で使用され得る。別の例では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、疾患再発を防ぐ長期維持療法のために使用され得る。
種々の実施形態では、本発明の組成物は、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、痛み、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性遺伝性脊髄小脳変性症、炎症性喉頭疾患、結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症および他の塵肺症などの１種または複数の炎症性疾患または状態を治療するまたは予防するために使用される。
種々の実施形態では、本組成物は、多発性硬化症、糖尿病、ループス、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギラン・バレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性硬化性胆管炎、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群（Ｍｅｎｉｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、移植拒絶反応（例えば、移植片拒絶の防止）、悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、およびその他の自己免疫疾患などの１種または複数の自己免疫疾患または状態の治療または予防に使用される。
種々の実施形態では、本発明の組成物は、限定されないが、冠状動脈性心疾患（ＣＨＤ）、脳血管疾患（ＣＶＤ）、大動脈弁狭窄症、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、心筋梗塞（心臓発作）、脳血管疾患（脳卒中）、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、狭心症（安定および不安定）、心房細動、不整脈、弁膜症（ｖａｖｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、および／またはうっ血性心不全を含む心臓および脈管構造に影響を与える疾患または状態などの心臓血管疾患の治療、制御または予防のために使用される。
種々の実施形態では、本発明の組成物は、１種または複数の代謝関連障害の治療または予防のために使用される。種々の実施形態では、本発明は、１型および２型糖尿病および肥満症関連糖尿病を含む糖尿病の治療、制御または予防のために有用である。本発明の前記組成物および方法は、限定されないが、糖尿病性腎症、高血糖症、耐糖能異常、インスリン抵抗性、肥満症、脂質異常、脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、低ＨＤＬレベル、高いＬＤＬレベル、アテローム性動脈硬化症およびその後遺症、血管再狭窄、過敏性腸症候群、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、他の炎症状態、膵炎、腹部肥満症、神経変性疾患、網膜症、腫瘍状態、脂肪細胞腫瘍、脂肪肉腫などの脂肪細胞腫、前立腺癌および胃、乳、膀胱および結腸癌を含む他の癌、血管新生、アルツハイマー病、乾癬、高血圧、代謝症候群（例えば、３種以上の次の障害を有する人：腹部肥満症、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール、高血圧、および高空腹時血糖値）、卵巣アンドロゲン過剰症（多嚢胞性卵巣症候群）、およびインスリン抵抗性が要素である睡眠時無呼吸などの他の障害を含む糖尿病関連障害の治療または予防のために有用である。本発明の組成物および方法は、遺伝的または環境的、および肥満症関連障害を含む肥満症の治療、制御、または予防のために有用である。本明細書の肥満症関連障害は、肥満症に関連する、それにより引き起こされる、またはそれに由来する。肥満症関連障害の例としては、肥満症、糖尿病、過食、過食症、および大食症、高血圧、高血漿インスリン濃度およびインスリン抵抗性、脂質異常症、高脂血症；子宮内膜、乳、前立腺、腎臓および結腸癌；変形性関節症、閉塞性睡眠時無呼吸、胆石、心臓疾患、心拍異常および不整脈、心筋梗塞、うっ血性心不全、冠状動脈性心疾患、突然死、脳卒中、多嚢胞性卵巣疾患、頭蓋咽頭腫、プラダー・ウィリー症候群、フレーリッヒ症候群、ＧＨ欠乏、正常変異型低身長、ターナー症候群、および総除脂肪体重のパーセンテージとして低下した代謝活性または安息時エネルギー消費の低下（例えば、急性リンパ性白血病の子供）を示す他の病的状態が挙げられる。肥満症関連障害のさらなる例は、代謝症候群、インスリン抵抗性症候群、生殖ホルモン異常；生殖障害、不妊症、男性の性腺機能低下症および女性の多毛症などの性機能障害および生殖機能障害；母体肥満症に関連する胎児欠陥；肥満症関連胃食道還流などの消化管運動障害、肥満低換気症候群（ピックウィック症候群）などの呼吸障害、息切れ、心血管障害、脈管構造の全身性炎症などの炎症、動脈硬化、高コレステロール血症、腰痛、胆嚢疾患、高尿酸血症、痛風、および腎臓癌、および増大した麻酔剤リスクである。本発明の組成物および方法は、アルツハイマー病を治療するためにも有用である。
種々の実施形態では、本発明の組成物は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、肺血管収縮、炎症、アレルギー、呼吸障害、呼吸促迫症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧症、肺血管収縮、肺気腫、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、レフレル症候群、グッドパスチャー症候群、胸膜炎、間質性肺炎、肺水腫、肺線維症、サルコイドーシス、呼吸器多核体ウイルス感染症に関連する合併症、および他の呼吸器疾患などの１種または複数の呼吸器疾患の治療または予防のために使用される。
いくつかの実施形態では、本発明は、１種または複数の神経変性疾患を治療または予防するために使用される。神経変性疾患の例としては、限定されないが、フリードライヒ失調症、多発性硬化症（限定されないが、良性多発性硬化症；再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）；二次性進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）；進行性再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）；および一次性進行型多発性硬化症（ＰＰＭＳ）を含む）、アルツハイマー病（限定されないが、早期発症型アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、および家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）を含む）、パーキンソン病およびパーキンソニズム（限定されないが、特発性パーキンソン病、脳血管性パーキンソニズム、薬剤誘発性パーキンソニズム、レヴィー小体型痴呆、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病を含む）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、限定されないが、突発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、平山病（Ｈｉｒａｍａｙａ ｄｉｓｅａｓｅ）を含む）が挙げられる。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、創傷、例えば、非治癒創傷、潰瘍、火傷、または凍傷、慢性または急性創傷、開放創または閉鎖創、内部または外側創傷（外側創傷の例は、透過性および非浸透性創傷である）などの治療で使用される。
種々の実施形態では、本発明のキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体は、非限定例として次に示す虚血の治療に使用される：急性冠症候群、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、動脈閉塞症、動脈硬化症、関節軟骨損傷、無菌性全身性炎症、アテローム動脈硬化性心血管疾患、自己免疫疾患、骨折、骨折、脳浮腫、脳低灌流、バージャー病、火傷、癌、心臓血管疾患、軟骨傷害、脳梗塞、脳虚血、脳卒中、脳血管疾患、化学療法誘導神経障害、慢性感染症、慢性腸間膜虚血、跛行、うっ血性心不全、結合組織損傷、挫傷、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、重症虚血肢（ＣＬＩ）、クローン病、深部静脈血栓症、深創傷、遅延性潰瘍治癒、遅延性創傷治癒、糖尿病（Ｉ型とＩＩ型）、糖尿病性神経障害、糖尿病誘発虚血、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、塞栓性脳虚血、凍傷、移植片対宿主病、遺伝性出血性毛細血管拡張性虚血性血管疾患、高酸素傷害、低酸素、炎症、炎症性腸疾患、炎症性疾患、損傷腱、間欠性跛行、腸管虚血、虚血、虚血性脳疾患、虚血性心疾患、虚血性末梢血管疾患、虚血性胎盤、虚血性腎疾患、虚血性血管疾患、虚血再灌流障害、裂傷、左主冠状動脈疾患、虚血肢、下肢虚血、心筋梗塞、心筋虚血、臓器虚血、変形性関節症、骨粗鬆症、骨肉腫、パーキンソン病、末梢血行障害（ＰＡＤ）、末梢動脈疾患、末梢性虚血、末梢神経障害、末梢血管疾患、前癌、肺水腫、肺塞栓症、再構築障害、腎虚血、網膜虚血、網膜症、敗血症、皮膚潰瘍、臓器移植、脊髄損傷、脳卒中、軟骨下骨嚢胞、血栓症、血栓性脳虚血、組織虚血、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、外傷性脳損傷、潰瘍性大腸炎、腎臓血管疾患、血管炎症性疾患、フォンヒッペル・リンダウ症候群、または組織もしくは臓器への創傷、に関連する虚血。
種々の実施形態では、本発明は、慢性腎疾患（例えば、透析からの）および／または抗癌剤（例えば、化学療法および／またはＨＩＶ治療（例えば、ジドブジン（ＩＮＮ）またはアジドチミジン（ＡＺＴ））、炎症性腸疾患（例えば、クローン病および潰瘍大腸炎）から生じた貧血、炎症状態（例えば、関節炎、ループス、ＩＢＤ）に関連する貧血、糖尿病、統合失調症、脳マラリアに関連する再生不良性貧血としての貧血、および癌治療（化学療法および／または放射線）に由来する脊髄形成異常症、および種々の骨髄異形成症候群疾患（例えば、鎌状赤血球貧血、ヘモグロビンＳＣ疾患、ヘモグロビンＣ疾患、アルファおよびベータ地中海貧血症、早産後の新生児の貧血、および同等の状態に由来する貧血を含む、１種または複数の貧血の治療に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、貧血の治療、または貧血の患者の治療、すなわち、赤血球の数および／または赤血球中で認められるヘモグロビンの量が正常未満である状態の治療に関する。種々の実施形態では、貧血は、急性または慢性であり得る。例えば、本発明の貧血としては、限定されないが、鉄欠乏性貧血、腎性貧血、慢性疾患／炎症の貧血、大球性胃酸欠乏性貧血、若年性悪性貧血および先天性悪性貧血などの悪性貧血、癌関連貧血、抗癌関連貧血（例えば、化学療法関連貧血、放射線治療関連貧血）、赤芽球癆、過剰芽球を伴う難治性貧血、再生不良性貧血、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球貧血、ＥＳＡの機能不全産生に起因する貧血、骨髄異形成症候群、低色素性貧血、小球性貧血、鉄芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、クーリー貧血、例えば、地中海貧血症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコニ貧血および薬剤誘発性免疫溶血性貧血が挙げられる。貧血は、低酸素症、慢性疲労、集中力欠如、青白い肌、低血圧、眩暈および心不全を含む、重篤な症状を引き起こす場合がある。
いくつかの実施形態では、本発明は、慢性腎不全由来の貧血の治療に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、透析、血液透析、腹膜透析、血液濾過法、血液濾過透析、および腎臓移植を含む腎代替療法の１種または複数の使用に由来する貧血の治療に関する。
いくつかの実施形態では、本発明は、透析を導入していない慢性腎疾患の患者の貧血の治療に関する。例えば、本発明は、ステージ１ ＣＫＤ、またはステージ２ ＣＫＤ、またはステージ３ ＣＫＤ、またはステージ４ ＣＫＤ、またはステージ５ ＣＫＤの患者に関する。いくつかの実施形態では、本発明の患者は、ステージ４ ＣＫＤ、またはステージ５ ＣＫＤである。いくつかの実施形態では、本発明の患者は、腎移植を受けている。いくつかの実施形態では、本発明は、急性腎損傷（ＡＫＩ）の患者の貧血の治療に関する。
いくつかの実施形態では、貧血は、化学療法により誘発される。例えば、化学療法は、いずれかの骨髄抑制性化学療法であり得る。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、レブラミド、サロミド、デキサメタゾン、アドリアマイシンおよびドキシルの１種または複数である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、シスプラチン（例えば、プラチノール）およびカルボプラチン（例えば、パラプラチン）を含む白金系薬物の１種または複数である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、本明細書で記載の化学療法剤のいずれか１種である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、Ｇｒｏｏｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ（１９９９）９１（１９）：１６１６－１６３４に記載のいずれかの薬剤である。この文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、後期癌患者（例えば、ステージＩＶ、またはステージＩＩＩ、またはステージＩＩ癌）の化学療法関連貧血の治療で使用される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、投与集中化学療法または他の積極的化学療法計画を受けている癌患者の化学療法関連貧血の治療で使用される。
いくつかの実施形態では、本発明は、白血病、リンパ腫、および多発性骨髄腫などの血液系癌の１種または複数を有する患者の貧血の治療に関する。このような癌は、骨髄に直接的に影響を与え得る。さらに、本発明は、骨または骨髄まで広がった転移性癌に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、放射線療法を受けている患者の貧血の治療に関する。このような放射線療法は、骨髄に損傷を与え、その赤血球を作る能力を低下させる。さらなる実施形態では、本発明は、鉄、ビタミンＢ１２、および葉酸の１種または複数が低減または欠損している患者の貧血の治療に関する。さらなる実施形態では、本発明は、限定されないが、手術後の、または内部出血を生じさせる腫瘍由来を含む過剰出血のある患者の貧血の治療に関する。さらなる実施形態では、本発明は、慢性疾患の貧血を有する患者の貧血の治療に関する。
いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、赤血球産生を刺激する。いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、骨髄中の細胞分化拘束性赤血球前駆細胞の細胞分裂および分化を刺激する。
本発明の特定の実施形態は、癌患者における化学療法剤誘導貧血の治療に特に有用である。いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、癌患者の化学療法の完了後に、キメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体の継続投与を可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、非癌患者に比べて、投与量の低減なしに、癌患者の治療を可能にする。いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、化学療法を受けており治癒可能と考えられる癌患者の治療を可能にする。種々の実施形態では、癌患者は、血餅、最近の手術、長期間の床上安静または制限された活動性、および化学療法剤による治療の１種または複数の病歴を有する。
キット
本発明はまた、本明細書に記載のいずれかの薬剤（例えば、種々の追加の治療薬を含む、または含まないキメラタンパク質またはＦｃベースキメラタンパク質複合体などのキメラタンパク質複合体）の投与のためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の本発明の医薬組成物を含む、材料または成分の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の少なくとも１種の医薬組成物を含む。
キットを構成する成分の明確な性質は、その意図される目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象を治療する目的のために構成される。
使用説明書をキット中に含めてもよい。使用説明書は、通常、癌の治療などの望まれる結果を達成するために、キットの成分を使用する際に採用すべき技術を説明する明確な表現を含む。必要に応じ、キットは、他の有用な成分、例えば、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペット操作または測定用ツール、包帯材料または当業者なら容易に気付くような他の有用な備品一式も含む。
キットに組込まれる材料および成分は、それらの操作性および有用性を維持する任意の便利で適切な方法で保管され開業医に提供され得る。例えば、成分は、室温、冷蔵温度、または凍結温度で提供できる。成分は通常、適切な梱包材料に収容される。種々の実施形態では、梱包材料は、よく知られた方法、好ましくは、無菌の、混入物のない環境を与える方法で構築される。梱包材料は、内容物および／またはキットの目的および／またはその成分を表示する外部ラベルを有してよい。
定義
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つ（１種）または１つ（１種）を超える、を意味し得る。
特に記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「または（ｏｒ）」という用語は、「または（ｏｒ）」および「および（ａｎｄ）」の両方を含み、対象とする。
さらに、参照数値表示に関連して使われる用語「約」は、参照数値表示±参照数値表示の最大で１０％、例えば、示した値の（±）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内の値を意味する。例えば、用語の「約５０」は、４５から５５の範囲を対象とする。
「有効量」という用語は、医学的使用に関連して使用される場合、目的の疾患の、測定できる治療、予防、または発病速度の低下をもたらすのに効果的である量である。
本明細書で使用される場合、物質または刺激の存在下で、このような調節の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、少なくとも最大約１００％（約１００％を含む）低減されるとき、何かが「低減されている」。当業者により理解されるように、いくつかの実施形態では、活性は低下し、かついくつかの下流の出力値は低下するが、他のものは増加し得る。
逆に、物質または刺激の存在下で、このような物質または刺激の非存在下に比べて、活性および／または効果の出力値がかなりの量、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、またはそれを超えて、最大少なくとも約１００％（約１００％を含む）またはそれを超えて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍増加する場合、活性は「高く」なる。
本明細書において、参照される場合、全ての組成物に関するパーセンテージは、特に指定がない限り、総組成物の重量による。本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語とその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、リスト中の項目の記載は、この技術の組成物および方法に有用である可能性を同様に有する他の類似項目の除外を意図するものではない。同様に、用語の「ｃａｎ」および「ｍａｙ」およびその変形物は、非限定であることを意図し、それにより、ある実施形態が特定の要素または特徴を含むことが「できる（ｃａｎ）」または含んでも「よい（ｍａｙ）」という記載は、これらの要素または特徴を含まない本発明の技術のその他の実施形態を排除するものではない。
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ、またはｈａｖｉｎｇなどの用語の同義語としてのオープンエンド用語の「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を本明細書で使用して本発明を記載および請求するが、本発明、またはその実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの代替用語を使って、代わりに記載することができる。
本明細書で使用される場合、用語の「好ましい」および「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらす本技術の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の環境下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つまたは複数の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、また、本技術の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
治療効果の達成に必要な本明細書で記載の組成物の量は、特定目的のための従来の手順に従って経験的に決定されてよい。一般に、治療目的のために治療薬を投与する場合、治療薬は薬理学的有効量で投与される。「薬理学的有効量」、「薬理学的有効用量」、「治療有効量」、または「有効量」は、特に障害または疾患を治療するために、目的の生理的な効果を生み出すのに十分な量または目的の結果を達成することができる量を意味する。本明細書で使用される場合、有効量は、例えば、障害または疾患の症状の進展を遅らせる、障害または疾患の症状の経過を変える（例えば、疾患の症状の進展を遅らせる）、障害または疾患の１つまたは複数の症状または発症を減らすまたはなくする、および障害または疾患の症状を回復させるのに十分な量を含んでよい。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
有効量、毒性、および治療効果は、例えば、細胞培養または実験動物によりＬＤ５０（集団の約５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の約５０％での治療的有効量）を測定するための標準的薬学的手順により決定できる。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて変化し得る。毒性と治療効果との間の用量比率は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０で表すことができる。いくつかの実施形態では、大きな治療指数を示す組成物および方法が好ましい。治療有効量は、最初は、例えば、細胞培養アッセイを含むインビトロアッセイから推測することができる。また、用量は、細胞培養または適切な動物モデルで決定したＩＣ５０などの循環血漿中濃度範囲を達成するように動物モデルで処方することができる。記載の組成物の血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。いずれかの特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによりモニターすることができる。投与量は医師により決定されてよく、必要に応じて、観察された治療の効果に適合するように調節できる。
特定の実施形態では、効果は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約９０％の定量可能な変化をもたらすであろう。いくつかの実施形態では、効果は、約１０％、約２０％、約３０％、約５０％、約７０％、またはさらに約９０％以上の定量化可能な変化をもたらすであろう。治療効果はまた、改善が実現されるかどうかにかかわらず、根底にある疾患または障害の進行を止めるまたは遅らせることも含む。
本明細書で使用される場合、「治療方法」は、本明細書に記載の疾患または障害の治療のための組成物および／または本明細書に記載の疾患または障害の治療のための薬剤の製造での使用および／または複数使用のための組成物に等しく適用可能である。 本発明は、次の非限定的な実施例によりさらに説明される。
実施例
用語「ＡｃＴａｆｅｒｏｎ」または「ＡＦＮ」は場合によっては、本明細書で記載のＩＮＦα１ベースキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体に言及するために本明細書で使用される（詳細は、上記のように、場合によりＩＮＦα２ベースキメラタンパク質またはキメラタンパク質複合体が記載される、キメラタンパク質のフォーマットに関する実施例で提供される）。
「ＩＦＮα１」および「ＩＦＮａ１」は、インターフェロンアルファ１を指すために同じ意味で用いられ得る。
「ＩＦＮα２」および「ＩＦＮａ２」は、インターフェロンアルファ２を指すために同じ意味で用いられ得る。
実施例１：ＩＦＮα１ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生成、産生および精製
ＩＦＮα１融合タンパク質をベースにしたＡＦＮを生成するために、ＩＦＮα１をコードする核酸配列を、細菌発現のためのｐＨＥＮ６ｃベクター中（ＰｅｌＢシグナルペプチドの制御下）でヒトＣＤ２０を標的にするＶＨＨをコードする核酸配列に、柔軟な２０＊ＧＧＳフレキシブルリンカーをコードする核酸配列を介して、連結した。Ｈｉｓ６タグを、精製のために末端に付加した。
ＡＦＮ発現を、１ｍＭのＩＰＴＧで一晩誘導し、細胞を、ペレット化し、ペリプラズム抽出物を、ＴＥＳ（０．２ＭトリスｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍスクロース）およびＴＥＳ／４緩衝液を用いて調製した。タンパク質を、製造業者のガイドラインに従って、ＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂を用いて抽出物から精製し、イミダゾールを、ＰＤ１０カラム（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）を用いて試料から除去した。
類似の工程を使用してＡＦＮをベースにしたＩＦＮα２を生成した。
ＩＦＮα１ ＡＦＮの構造および配列
ＩＦＮα１ ＡＦＮの構造を以下に示す：
Figure 2022534837000021
 ＩＦＮα１ ＡＦＮのアミノ酸配列を以下に示す（ＣＤ２０ ＶＨＨの配列は太字で示され、（ＧＧＳ）２０の配列はイタリック文字で示され、ｈＩＦＮα１の配列は下線付き文字で示される）：
Figure 2022534837000022
ＩＦＮα２ ＡＦＮの構造および配列
ＩＦＮα２ ＡＦＮの構造を以下に示す：
Figure 2022534837000023
 ＩＦＮα２ ＡＦＮのアミノ酸配列を以下に示す（ＣＤ２０ ＶＨＨの配列は太字で示され、（ＧＧＳ）２０の配列はイタリック文字で示され、ｈＩＦＮα２の配列は下線付き文字で示される）：
Figure 2022534837000024
実施例２：末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のＳＴＡＴ１リン酸化方法およびＨＬ１１６細胞中のＩＦＮ応答性レポーター活性
健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、Ｌｉｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ）を用いた密度勾配遠心分離により単離した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、抗ヒトＣＤ２０ ＦＩＴＣ（ＳＩＮＯＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＳ）を用いて４℃で２０分間染色した。２回の洗浄後、細胞を、系列希釈した野生型ＩＦＮα２、ＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα２、ＩＦＮα１およびＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα１を用いて３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）、透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ）および洗浄の後、細胞を、抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により染色した。試料を、Ｍａｃｓｑｕａｎｔ Ｘ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＭＩＬＴＥＮＹＩ ＢＩＯＴＥＣ）で取得し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（ＭＩＬＴＥＮＹＩ ＢＩＯＴＥＣ）を用いて分析した。ｐＳＴＡＴ１の誘導は、インターフェロンによるＩＦＮＡＲの活性化を反映する。ＨＬ１１６クローンを、ヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６－１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。従って、ルシフェラーゼレポーター発現の誘導は、インターフェロンによるＩＦＮＡＲの活性化を反映する。親ＨＬ１１６細胞に、ヒトＣＤ２０配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンを、Ｇ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈｕＣＤ２０細胞を、２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種した後、段階希釈ＩＦＮａ２およびＩＦＮα１バリアントで６時間刺激した。細胞ライセート中のルシフェラーゼ活性を、ＥｎＳｉｇｈｔ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。
実施例３：末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のＳＴＡＴ１リン酸化およびＨＬ１１６細胞中のＩＦＮ応答性レポーター活性
図２１Ａ～Ｄ、図２２Ａ～Ｄおよび表７中のデータは、ＩＦＮα１の抗ＣＤ２０ ＶＨＨへの連結によりここで例示される、野生型ＩＦＮα１のキメラ融合タンパク質中への組み込みが、野生型ＩＦＮα１野生型ＩＦＮα１に比べて、低減されたＩＦＮα１のＩＦＮＡＲ刺激活性を生ずることを明確に示す（ここで、ＣＤ２０陰性細胞について、ＰＢＭＣおよびＨＬ１１６の両方について、示されるように）。しかし、ＩＦＮα１活性は、標的細胞上で特異的に誘導／回復された（ＣＤ２０陽性、ＰＢＭＣおよびＨＬ１１６－ｈｕＣＤ２０の両方について）。重要なのことに、ＩＦＮＡＲシグナル伝達の活性化は、非標的化（ＣＤ２０陰性）細胞に比較して標的化（ＣＤ２０陽性）細胞に対し高い選択性があり、約２００～６００倍の標的選択性であった。その代わり、ＩＦＮα２の場合には、わずかに２０～６０倍の標的選択性が、ＣＤ２０陰性ＰＢＭＣおよびＨＬ１１６細胞と比較したＣＤ２０陽性で観察され、従って、同等のＩＦＮα１構築物で観察されるより、目的の標的（ＣＤ２０陽性細胞）に対して約１０倍程度好適性が小さい。さらに、標的化ＩＦＮα１キメラ融合タンパク質は、標的細胞（ＣＤ２０陽性）中のＩＦＮＡＲシグナル伝達活性化において、野生型ＩＦＮα１自体より大幅により効力があったことは注目すべきである。実際に、また注目すべきことに、ＩＦＮα１キメラタンパク質は、標的細胞に対し野生型ＩＦＮα１より３０～１５０倍高い効力があった（細胞型に応じて）。驚くべきことにまた、ＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα１およびＣＤ２０ ＶＨＨ－ＩＦＮα２キメラタンパク質の両方は、ＣＤ２０陽性標的細胞に対し類似の効力を有し、一方、融合のないＩＦＮα１は、ＩＦＮα２に比べて、かなり効力が低い。言い方を変えれば、野生型ＩＦＮα１は、ＩＦＮα２より遙かに効力が低いが、意外にも、ＶＨＨなどのターゲティング部分に結合されると、そのオンターゲット活性は、標的化ＩＦＮα２のオンターゲット活性と類似であり、一方でオフターゲット活性は、標的化ＩＦＮα２に対しより高い。従って、高い効力および高い選択性を組み合わせるＩＦＮＡＲ活性化因子が、標的化キメラ融合タンパク質中に野生型ＩＦＮα１を組み込むことにより、野生型ＩＦＮα２の使用では達成されない効力／選択性指数を備える方法で、新たに作成され得る。
Figure 2022534837000025
ＨＬ１１６細胞中のルシフェラーゼ活性の誘導に関する図２２Ａ～Ｄおよび表７のデータは、図２１Ａ～ＤのＰＢＭＣデータにおけるｐＳＴＡＴ１誘導に対するデータと定性的に同等である。すなわち、ＩＦＮα１のＣＤ２０標的化は、ＣＤ２０標的化野生型ＩＦＮα２に比べて、ＩＦＮＡＲシグナル伝達のより顕著な相対的増大をもたらす（ＨＬ１１６細胞中でそれぞれ５８６倍対６２倍、およびＰＢＭＣ中でそれぞれ２１５倍対２０倍）。驚くべきことに、ＣＤ２０－ＩＦＮα１およびＣＤ２０－ＩＦＮα２の両方は、それぞれのＣＤ２０陽性ＰＢＭＣおよびＨＬ１１６標的細胞に対して類似の効力を有し、一方、融合のないＩＦＮα１は、ＣＤ２０陽性細胞（ならびにＣＤ２０陰性細胞）中で、ＩＦＮα２に比べて、かなり効力が低い。
驚くべきことに、限定されないが、データは、ＩＦＮα１ベース融合／キメラタンパク質が、非融合の非キメラタンパク質設定におけるＩＦＮα２に比べて、ＩＦＮα１の低減された活性にも関わらず、ＷＴ ＩＦＮα２をベースにした同等の融合／キメラタンパク質と同様の効力であることを示す。さらに、限定されないが、データは、ＩＦＮα１融合が、非標的細胞に対する目的の標的細胞の選択性の程度に関して、ＩＦＮα２融合より優れていることを示す。
実施例４：変異体ＩＦＮα１ ＡｃＴａｆｅｒｏｎ（ＡＦＮ）の生成、産生、精製およびキャラクタリゼーション
変異体ＩＦＮα１をベースにしたキメラタンパク質は、次のプロトコルを用いて生成される。変異体ＩＦＮα１をコードする核酸配列を、細菌発現のために、ｐＨＥＮ６ｃベクター中（ＰｅｌＢシグナルペプチドの制御下）で、柔軟な２０＊ＧＧＳフレキシブルリンカーをコードする核酸配列を介して、ヒトＣＤ２０を標的にするＶＨＨをコードする核酸配列に融合／連結した。ヒスチジンタグをコードする配列を、精製のために末端に付加した。
ＡＦＮ発現を、１ｍＭのＩＰＴＧで一晩誘導し、細胞を、ペレット化し、ペリプラズム抽出物を、ＴＥＳ（０．２ＭトリスｐＨ８．０、０．５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５Ｍスクロース）およびＴＥＳ／４緩衝液を用いて調製した。タンパク質を、製造業者のガイドラインに従いＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂を用いて抽出物から精製し、イミダゾールを、ＰＤ１０カラム（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）を用いて試料から除去する。調製されるＩＦＮα１の変異体を下表８に示す。
Figure 2022534837000026
表８で明らかにされる、キメラの場合のこれらの変異体のそれぞれに対するＰＢＭＣ中のＳＴＡＴ１リン酸化は、実施例２で指定されるプロトコルを用いて評価される。同様に、表８で明らかにされるＨＬ１１６ウェル中のレポーター活性は、実施例２で指定されるプロトコルを用いて、それぞれの変異体について特性評価される。
実施例５：さらなる変異体ＩＦＮα１ ＡＦＮの生成、産生、精製およびキャラクタリゼーション
この実施例では、我々は、非抗体型ターゲティング部分－具体的には、ＦＬＴ３Ｌに融合されたＩＦＮα１の活性を評価した。ＦＬＴ３Ｌは、ＦＬＴ３Ｌの受容体であるＦＬＴ３に対する既知のリガンドである。得られたキメラ分子は、従って、２個のエフェクタードメイン（ＩＦＮα１およびＦＬＴ３Ｌ）を含むという意味で、二官能性ＩＦＮα１キメラ融合タンパク質の例でもある。２個のドメインの１個（ＦＬＴ３Ｌ）は、ターゲティング部分としても機能する。ＦＬＴ３は、ｃＤＣ１樹状細胞などのヒト樹状細胞上で発現される。ｃＤＣ１細胞は、Ｔ細胞の強力な活性化因子であり、免疫系媒介抗腫瘍応答の促進に重要である。ヒト化マウス（ヒト免疫系を有するマウス）におけるＦｌｔ３標的化ＩＦＮα１のインビボ有効性を評価するために、Ｆｌｔ３Ｌ＿リンカー＿ヒトＩＦＮα１＿ＧＧＳ－ｈｉｓ９融合タンパク質を、ＨＥＫＴ細胞中で発現させ、金属親和性クロマトグラフィーにより精製した。
融合タンパク質の配列は、Ｆｌｔ３Ｌの細胞外ドメインの配列を含む（下記の太字；太字残基の最後２１個の残基は、細胞外領域の一部であり、受容体結合ドメインの一部ではない）：
成熟配列Ｆｌｔ３Ｌ（太字）＿リンカー＿（下線）ヒトＩＦＮα１＿（太字および下線）ＬＥＧＧＳ＿ｈｉｓ９
Figure 2022534837000027
精製タンパク質をその後、ヒト化マウスにおける腫瘍モデルで評価した。簡単に説明すると、新生児ＮＳＧマウス（１～２日齢）を、１００ｃＧｙで亜致死量照射し、その後、１ｘ１０５個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＨＬＡ－Ａ２陽性臍帯血由来）を肝内に送達した。１３週後、幹細胞移入マウスに２５ｘ１０５個のヒトＲＬ濾胞性リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２２６１；ＩＦＮの直接抗増殖作用に感受性がない）を皮下に接種した。マウスを、腫瘍接種後８日目～１８日目に、３０μｇのヒトＦｌｔ３Ｌタンパク質で毎日腹腔内治療した。触知できる腫瘍が認められると、緩衝液またはＦｌｔ３Ｌ－ＩＦＮα１（３０μｇ）での毎日の静脈内注射を、腫瘍接種後の１０日目に開始した（群当たりｎ＝５または６匹のマウス）。腫瘍サイズ（ノギス測定値）、体重および体温を、毎日評価した。
図２３のデータは、最後の治療の２日後までの腫瘍増殖を示し、標的化ＩＦＮα１が強力に腫瘍増殖を抑制することを実証する。体重および体温のデータは、緩衝液治療およびＩＦＮα１治療間で何ら大きな差異を示さず、ＩＦＮα１治療が耐容性良好であったことを裏付けた。
実施例６：インターフェロンアルファ１とのＦｃベースキメラタンパク質複合体
この実施例は、野生型インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）をベースにしヒトＣｌｅｃ９Ａ特異的ＶＨＨ（クローンＲ１ＣＨＣＬ５０）を介して標的化されるキメラタンパク質複合体を、評価し生成する。このために、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ技術をベースにしたヘテロダイマーＦｃタンパク質を、設計した。
構築物:
Figure 2022534837000028
ＩＦＮα１ ＡＦＮの産生および精製
構築物Ｒ１ＣＨＣＬ５０－２０＊ＧＧＳ－ＦｃおよびＦｃ－２０＊ＧＧＳ－ＩＦＮα１を結合し、図７Ｂに概要を示した構造を有するＡＦＮを得て、製造業者の説明書に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させた。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、細胞を、遠心分離により取り出した。組換えタンパク質を、Ｐｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて上清から精製した。
ＨＬ１１６レポーター細胞株に対する生物活性
ＨＬ１１６クローンを、ヒトＨＴ１０８０細胞株（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１２１）から誘導する。これは、ＩＦＮ誘導性６－１６プロモーターにより制御されるホタルルシフェラーゼ遺伝子を含む。親ＨＬ１１６細胞に、ヒトＣｌｅｃ９Ａ配列をコードする発現ベクターを遺伝子導入した。安定に遺伝子導入されたクローンを、Ｇ４１８含有培地中で選択した。親ＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ（標的）細胞を、」２０，０００細胞／９６ウェルで一晩播種し、続いて、段階希釈の野生型ヒトＩＦＮα１またはＦｃベースＣｌｅｃ９Ａ標的化ＩＦＮα１構築物で６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を、細胞ライセート中で測定した。図２０のデータは、両細胞株が、野生型ＩＦＮα１に対し同程度に感受性であることを示す。標的細胞中のＩＦＮα１ベースＦｃ ＡＦＮシグナル伝達のＥＣ５０は、０．３ｎｇ／ｍｌであり、一方、親ＨＬ１１６細胞中では、ルシフェラーゼ誘導は測定できなかった。
理論に束縛されることを意図するものではないが、図２０に示されるデータから複数の意外な観察を得ることができる。野生型ＩＦＮα１は、両細胞株（ＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞）に対し同等に活性であるが、ＩＦＮα１ベースＦｃ ＡＦＮは、比較すると、ＨＬ１１６親細胞中で実質的に不活性である（１００ｎｇ／ｍｌで検出可能なシグナルがなく、一方で、これらの細胞に対する野生型ＩＦＮα１のＥＣ５０は約２ｎｇ／ｍｌである）。これは、特に、野生型ＩＦＮα１のＦｃポリペプチドへの融合または連結およびＦｃベースキメラタンパク質複合体中のＩＦＮα１の組み込みは、ＩＦＮＡＲ活性化におけるＩＦＮα１効力のかなりの損失に繋がることを示す。これは、実施例２および実施例３で示されるように、他の型のＩＦＮα１融合体／キメラタンパク質に対してなされた観察に似ている。しかし、他の型のＩＦＮα１融合体およびキメラタンパク質について同様に観察されたように、ＩＦＮα１活性は、標的細胞（ＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ細胞）上で誘導および／または回復される。さらに、および驚くべきことに、固有のＩＦＮα１活性が極めて低減される（ＨＬ１１６細胞に対し試験された用量範囲で検出不能レベルまで）ＦｃベースＩＦＮα１は、標的細胞上で野生型ＩＦＮαよりもなおさら効力が高い（野生型ＩＦＮα１はＨＬ１１６－Ｃｌｅｃ９Ａ細胞上で約１．６ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を有するが、これは、融合タンパク質の場合、０．３ｎｇ／ｍｌに、またはそれぞれ８４および３．３ｐＭに改善される）。まとめると、高い効力および高い選択性を組み合わせたＩＦＮＡＲ活性化因子が、標的化（Ｆｃベースキメラ）融合タンパク複合体質中に野生型ＩＦＮα１を組み込むことにより、野生型ＩＦＮα２の使用では達成されない効力／選択性指数を備える方法で、新たに作成され得る。
実施例７：インターフェロンアルファ１バリアントを有するＦｃベースキメラタンパク質複合体
この実施例は、改変され活性が減弱化されたそのバリアントを含み、かつヒトＣｌｅｃ９Ａ抗原特異的ＶＨＨ抗体（クローンＲ１ＣＨＣＬ５０）を介してＣｌｅｃ９Ａ陽性細胞に標的化される、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）をベースにしたキメラタンパク質およびキメラタンパク質複合体を、評価し生成する。このために、ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ技術をベースにした例示的ヘテロダイマーＦｃタンパク質を、設計し、作製し、生物活性特性について評価した。これは、生成物の均一性およびキメラタンパク質およびキメラタンパク質複合体の医薬品特性を改善するために、システイン残基（Ｃ８６）の変化を生じさせて望ましくないジスルフィド対形成を低減する種々の変異の１種を含む、ＩＦＮα１バリアントを含む。目的はまた、このような改変が標的細胞に対するＩＦＮＡＲ活性化の誘導と実質的に干渉しないかどうか、またはその誘導の実質的低下を維持または回避可能にするかどうか（融合単独による減弱化ＩＦＮα１、および追加の変異による活性減弱化ＩＦＮα１の両方に対し）を評価することであった。結果は、高効力と高度に細胞標的選択的ＩＦＮＡＲシグナル伝達活性化の特有の組み合わせが、本明細書で記載のＩＦＮα１組成物、およびそのバリアントを用いて達成できることを示している。
構築物:
Figure 2022534837000029
Figure 2022534837000030
Figure 2022534837000031
構築物Ｒ１ＣＨＣＬ５０－５＊ＧＧＳ－Ｆｃを、それぞれのＦｃ－１０＊ＧＧＳ－ＩＦＮα１バリアントと組み合わせ、図７Ｂに概要を示した構造を有する６種の異なるＡＦＮを得て、製造業者の説明書に従いＥｘｐｉＣＨＯ発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で一過的に発現させる。遺伝子導入の１週間後、上清を集め、細胞を、遠心分離により取り出す。組換えタンパク質を、Ｐｉｅｒｃｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａスピンプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて上清から精製し、実施例６に記載のように効力を試験する。
図２４Ａ～Ｇおよび表８のデータは、特に、次記を示す：
（ｉ）親ＨＬ１１６および由来ＨＬ１１６－Ｃｌｅｃ９Ａ細胞（ヒトＣｌｅｃ９Ａを発現する）は、野生型ＩＦＮα２に対し同等に応答性／感受性であり、ＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ中で観察されたレポーター誘導に対し、それぞれ、８ｐＭおよび６ｐＭのＥＣ５０である。同じことがＩＦＮα１について以前に観察され（実施例６、図２０に示すように）、ＩＦＮα１は、ＩＦＮα２に比べて約１０～１５倍効力が低い（ＩＦＮα１の場合、ＨＬ１１６およびＨＬ１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａ中のレポーター誘導に対し、それぞれ１０５ｐＭおよび８５ｐＭのＥＣ５０）。
（ｉｉ）全ての試験したＩＦＮα１構築物バリアントは、非標的細胞（ＨＬ１１６）に対し、野生型ＩＦＮα２（および実施例６、図２０に比べた場合のＩＦＮα１）に比べて、かなり活性が低い。
（ｉｉｉ）全ての試験したＩＦＮα１タンパク質バリアントの活性は、標的細胞（Ｃｌｅｃ９Ａ陽性）で誘導および／または回復され得、非標的細胞に比べて、標的（すなわち、Ｃｌｅｃ９Ａ発現）細胞に対し顕著により活性である（すなわち、標的細胞に対し高い選択性を示す）。
（ｉｖ）注目すべきことに、遊離Ｃ８６（ＣからＳへ、またはＣからＹへ）の変異を含み、それ以外は野生型であるＩＦＮα１による標的細胞におけるＩＦＮＡＲ活性化の誘導は、野生型ＩＦＮα１（非融合、非改変ＩＦＮα１）で得られる誘導よりはるかに優れている。さらに驚くべきことに、標的細胞に対する活性は、最も効力の高いＩ型インターフェロンであるＩＦＮα２について観察されたものと類似である。同様の観察は、Ｃ８６での変異を含まない野生型ＩＦＮα１を組み込んだＦｃベースＩＦＮα１構築物について得られ（図２０参照）、また、ＩＦＮα１を組み込む非Ｆｃキメラタンパク質についても観察された（例えば、表７参照）。
（ｖ）全てのＦｃ－ＩＦＮα１構築物は、標的細胞に対する顕著な選択性を示す（これは、非融合、非改変野生型ＩＦＮα１またはＩＦＮα２については観察されない）。
（ｖｉ）ＳまたはＹへの遊離Ｃ８６の変異（１個のアミノ酸変化は保存的であり、もう１個は非保存的である）を有するＩＦＮα１構築物は、類似の生物活性を有し、Ｃ８６の変異のない、対応する構築物のものに類似である（図２０参照）。
（ｖｉｉ）ＩＦＮα１中の変異Ａ１４６ＧまたはＭ１４９Ｖを有するＩＦＮα１構築物の活性は、これらの変異のない融合対に比べて、ＩＦＮＡＲ活性化がさらに減弱化されているが、標的細胞（Ｃｌｅｃ９陽性細胞）において誘導され、および／または回復可能である。注目すべきは、ＩＦＮＡＲ活性化の効力は、標的細胞における野生型ＩＦＮα１の効力と類似であるかまたはそれより大きいことである。
（ｖｉｉｉ）遊離Ｃ８６のＳまたはＹへの変異を組み込んだＩＦＮα１キメラ構築物は、追加の変異Ａ１４６ＧまたはＭ１４９Ｖを含む構築物を含む、標的細胞において極めて誘導性であり活性である。
Figure 2022534837000032
第２系列の実験では、ＩＦＮα１ ＡＦＮを、他のＰＢＭＣ集団（Ｃｌｅｃ９Ａ陰性細胞）と比較して初代ヒトｃＤＣ１細胞（ＩＦＮα１キメラ構築物の標的であるＣｌｅｃ９Ａを天然に発現する）中で、ＳＴＡＴ１リン酸化を促進する能力について試験した。簡単に説明すると、健康なドナーのバフィーコート由来のＰＢＭＣを、Ｌｉｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いた密度勾配遠心分離により単離した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ、ＰＢＳ中１ｍＭのＥＤＴＡ）で２回洗浄し、４℃で２０分間ｃＤＣ１集団を特定するために抗Ｃｌｅｃ９Ａおよび抗ＣＤ１４１ Ａｂ（両方Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で染色した。２回の洗浄後、細胞を、段階希釈の野生型ＩＦＮα２またはＩＦＮα１ ＡＦＮを用いて、３７℃で１５分間刺激した。固定（１０分間、３７℃、Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、透過処理（３０分、氷上、Ｐｅｒｍ ＩＩＩ Ｂｕｆｆｅｒ Ｉ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および洗浄後、細胞を、抗ＳＴＡＴ１ ｐＹ７０１ Ａｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。試料を、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ Ｘ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で取得し、ＦｌｏｗＬｏｇｉｃソフトウェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて分析した。図２５Ａ～Ｅのデータは、ＨＬ－１１６／ＨＬ－１１６－ｈＣｌｅｃ９Ａレポーター細胞株で得られた結果と定性的に同等であり（図２４Ａ～Ｇ参照）、これらのデータから類似の総体的結論を得ることができる。例えば、限定されないが、データは、（ｉ）Ｃｌｅｃ９Ａ－／ＣＤ１４１－およびＣｌｅｃ９Ａ＋／ＣＤ１４１＋細胞は、野生型ＩＦＮに対し同等に応答性／感受性である、（ｉｉ）全ての試験した標的化ＩＦＮα１バリアントはその代わり、標的化されていない（Ｃｌｅｃ９Ａ－／ＣＤ１４１－）細胞に比べて、標的化Ｃｌｅｃ９Ａ＋／ＣＤ１４１－細胞に対し明らかにより活性である、すなわち、高い標的化および選択性指数が観察される、（ｉｉｉ）遊離Ｃ８６（ＣからＳへ、またはＣからＹへ）の変異を含む以外はＩＦＮα１の野生型である、ＩＦＮα１タンパク質による標的細胞におけるＩＦＮＡＲ活性化の誘導は、野生型、非融合、非改変ＩＦＮα２で得られる誘導よりはるかに優れている、ことを示す。さらに驚くべきことに、標的細胞に対する活性は、最も効力の高いＩ型インターフェロンである、ＩＦＮα２に対して観察されたものと類似であり、（ｉｖ）変異Ａ１４６Ｇを含むＩＦＮ１ａキメラ構築物に対するＩＦＮα１活性は、本質的に減弱化されているが、標的細胞中で誘導および／または回復される。ｖ）遊離Ｃ８６のＳまたはＹへの変異を組み込んだＩＦＮα１キメラ構築物は、Ａ１４６Ｇなどの追加の変異を含む構築物を含み、標的細胞において極めて誘導性であり活性である。
まとめると、両方のデータセットは、特に、初代ヒト細胞を含むＣｌｅｃ９Ａ発現標的細胞にＩＦＮα１活性を選択的に向け、同等用量／濃度の非標的細胞における検出可能なＩＦＮＡＲ活性化およびシグナル伝達なしに、ＩＦＮＡＲ活性化の高い効力を達成することが可能であることを示している。Ｃ８６ＳおよびＣ８６Ｙの両変異は、ＩＦＮα１配列中の遊離システイン残基を除去し、従って、望ましくないジスルフィド対形成を除去し、さらに最大のシグナル伝達回復を達成することを可能にする。驚くべきことに、Ｃｌｅｃ９Ａ標的化構築物にとって重要な標的細胞である初代ｃＤＣ１に対し、Ｃ８６Ｙ ＩＦＮα１バリアント構築物の効力は、野生型ＩＦＮα２の効力に匹敵し（Ｐ－１４７９／Ｐ－２２１６では３５０ｐＭのＥＣ５０であり、これに対しＩＦＮα２では２４０ｐＭである）、同時に、非ｃＤＣ１細胞に対するＣ８６Ｙ ＩＦＮα１構築物の選択性ウインドウは、１００倍超であった。
またさらに驚くべきことは、初代ｃＤＣ１に対し、Ｃ８６Ｓ ＩＦＮα１バリアント構築物の効力は、野生型ＩＦＮα２の効力を越え（Ｐ－１４７９／Ｐ－２２１３では２０ｐＭのＥＣ５０であり、これに対しＩＦＮα２では２４０ｐＭである）、同時に、非ｃＤＣ１細胞に対するＣ８６Ｓ ＩＦＮα１構築物の選択性ウインドウは、約３００倍超であった。
まとめると、結果は、高効力と高細胞標的選択的ＩＦＮＡＲシグナル伝達活性化の特有の組み合わせが、ＩＦＮα１キメラタンパク質およびタンパク質複合体組成物、ならびにそれらのバリアントにより達成できることを示している。
実施例８：ＰＤ－Ｌ１標的化ＩＦＮα１およびそのバリアント
この実施例では、ＦｃベースＩＦＮα１およびそのバリアントのための構築物、およびＰＤ－Ｌ１発現細胞に対するそれらの標的化を、評価した。これは、Ｃ８６Ｓ変異を有する野生型ＩＦＮα１（以前の実施例７中の一部の構築物のように）およびＰＤ－Ｌ１指向ＶＨＨ抗体を組み込んだ構築物を含む。２ＬＩＧ９９および２ＬＩＧ１８９と命名された２種のＰＤ－Ｌ１特異的ＶＨＨを、異なる構築物で使用した。活性が減弱化されおよび標的特異的に回復可能な変異体ＩＦＮα２をベースにした同等の構築物も、比較のために含めた。ヘテロダイマー「ノブインホール」ＦｃベースＡＦＮフォーマットをベースにした例示的キメラタンパク質およびタンパク質複合体を、生成した。ｐｃＣＮＡ３．４発現ベクター中で、１種または２種のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨをコードする配列を、柔軟な５＊ＧＧＳ－リンカーを介して、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｋ３２２Ｑエフェクター変異および「ホール」改変Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列に融合／連結した（下記の配列参照）。キメラＦｃベースタンパク質複合体の一部であり、かつこれに組み込まれる第２のポリペプチドもまた、ｐｃＤＮＡ３．４ベクター中にクローン化され、およびＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｋ３２２Ｑエフェクター変異および「ノブ」改変Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６ＷヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列と、ＩＦＮα１のＣ８６Ｓバリアントの間の融合／連結から構成される。
ヘテロダイマー「ノブインホール」Ｆｃベースキメラタンパク質およびタンパク質複合体を産生するために、次の「ホール」および「ノブ」プラスミド両方の組み合わせを、製造業者の説明書に従いＥｘｐｉＣＨＯ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で遺伝子導入した：
Figure 2022534837000033

（注意：この構築物では、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ２ＬＩＧＧ９９は、直列に反復される）
加えて、ＩＦＮα２変異体に対する同等の構築物を生成した：
Figure 2022534837000034
（注意：この構築物では、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ２ＬＩＧＧ９９は、直列に反復される）
遺伝子導入の７日後に、組換えタンパク質複合体を、ＡＫＴＡ ｐｕｒｅ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムおよびスーパーデックス２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００カラム（両方ともＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により順次精製した。タンパク質を定量し、純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで調査した。Ｆｃベース構築物の生物活性を、ＰＤ－Ｌ１を発現するＨＬ１１６細胞（ＩＦＮ誘導可能ｐ６－１６ルシフェラーゼレポーター遺伝子で安定に遺伝導入されたＩＦＮ応答性細胞株）で試験した。細胞を、一晩播種し、段階希釈の種々のタンパク質構築物配合物で６時間刺激した。ルシフェラーゼ活性を、ＥｎＳｉｇｈｔ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。
図２６Ａのデータは、ＦｃベースＰＤ－Ｌ１標的化ＩＦＮα１構築物が、実質的に不活性である非標的化バリアントよりも、また野生型ＩＦＮα１（表７および８ならびに図２０および２２Ｃに示すように、非融合であり、非改変である）と比較しても、遙かにより活性であることを明確に示す。従って、ＰＤ－Ｌ１標的化は、ＩＦＮα１媒介ＩＦＮＡＲ活性化を誘導および／または回復する。この挙動は、キメラタンパク質またはタンパク質、およびそのバリアント中に組み込まれるＩＦＮα１の他の標的抗原（例えば、Ｃｌｅｃ９ＡおよびＣＤ２０：例２、３、７および表７および８を参照）の標的化で観察されたものに類似であり、標的化は抑制または減弱化されたＩＦＮα１活性を標的細胞で選択的に誘導するための汎用手法であることを示している。最も驚くべきことに、活性の誘導は、野生型ＩＦＮα１の活性に到達できる、または野生型ＩＦＮα１の活性を大幅に超えることができる。興味深いことに、ＩＦＮＡＲ活性化に対する野生型ヒトＩＦＮα２の効力に到達できる、（２ＬＩＧ９９）２－Ｆｃ３＋Ｆｃ４－ＩＦＮα１構築物（ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨ ２ＬＩＧ９９の２つのコピーを含む）で示されるように、活性は、ターゲティング部分の２個以上のコピーを組み込む構築物を作ることによりさらに強化され得る（一方、非標的化Ｆｃ－ＩＦＮα１構築物は、広い濃度範囲にわたり、有意な検出可能な活性を有しない）。
図２６Ｂは、ＩＦＮα１の代わりに変異型のＩＦＮα２を組み込む構築物についての類似の分析を示す。変異体ＩＦＮα２は、非標的化ＦｃベースＩＦＮα２変異体のＩＦＮＡＲ活性化およびシグナル伝達活性の低下により示されるように、ＩＦＮＡＲ結合および活性が大きく減弱化されているＩＦＮα２のバリアントである（例えば、野生型ＩＦＮα２または他の構築物と比較して）。ＰＤ－Ｌ１に標的化される場合、ＩＦＮα２活性は、誘導および／または回復される。これは、ＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨの２つのコピーを構築物中に組み込むことにより強化される。驚くべきことに、全ての同等のＩＦＮα１ Ｆｃベース構築物は、変異体ＩＦＮα２を組み込むそれぞれの構築物より高い効力であり、それぞれのＩＦＮα２＿変異体構築物に対する値より平均で６倍低いＥＣ５０値を有した。
これらの知見は、種々のＩＦＮα１キメラタンパク質およびキメラタンパク質複合体構築物それらのバリアントに対する類似の知見と併せて、ＩＦＮα１およびそのバリアントをキメラタンパク質およびタンパク質複合体中に組み込む場合、標的細胞で達成され得るＩＦＮＡＲ活性化のための、異例で予想外でかつ特有の効力と選択性の組み合わせをさらに実証した。
配列：
Figure 2022534837000035
Figure 2022534837000036
等価物
本発明をその特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、その実施形態はさらに修正が可能であり、本出願は、一般的に、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または改変を包含することが意図され、本発明が属する技術内の既知のまたは日常的な実施の範囲に入る、および上に示されるおよび以下の添付の請求項の範囲に入る本質的な特徴に該当し得る本開示からの乖離を含むものと理解されよう。
当業者は、本明細書で具体的に記載された特定の実施形態に対する多数の等価物を、ルーチン実験のみを用いて認識し、確認できるであろう。このような等価物は、次の請求項の範囲内に包含されることが意図されている。
参照による組み込み
本明細書で引用されている全ての特許および刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で考察された出版物は、単に本出願の出願日に先行してそれらが開示されているという理由で提供されている。本明細書のいずれも、本発明が、先行発明の理由でこのような出版物に先行する権利がないことを容認すると解釈されるべきではない。
本明細書で使用されている全ての見出しは、単に構成上の理由によるものであり、どんな形にせよ、本開示を限定することを意図するものではない。任意の個別のセクションの内容は、等しく全てのセクションに適用できる。

Claims (134)

  1. キメラタンパク質であって、
    （ａ）インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）またはそのバリアント、および
    （ｂ）目的の抗原または受容体に特異的に結合する認識ドメインを含む、１個または複数のターゲティング部分
    を含み、
    前記ＩＦＮα１またはそのバリアント、および前記１個または複数のターゲティング部分が任意選択で、１個または複数のリンカーと連結される、キメラタンパク質。
  2. 前記ＩＦＮα１が、配列番号１と少なくとも約９０％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のキメラタンパク質。
  3. 前記ＩＦＮα１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、任意選択で前記ＩＦＮα１が、ペグ化され、１個または複数のターゲティング部分が、ペグ化され、またはリンカーが、ペグ化される、請求項１または２に記載のキメラタンパク質。
  4. 前記バリアントＩＦＮα１が、１個または複数の変異を含む、請求項１または２に記載のキメラタンパク質。
  5. 前記バリアントＩＦＮα１の１個または複数の変異が、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）に対し低減された親和性を付与する、請求項４に記載のキメラタンパク質。
  6. 前記ＩＦＮα１が、ＩＦＮＡＲ１に対し低減された親和性を示す、請求項５に記載のキメラタンパク質。
  7. 前記ＩＦＮα１が、ＩＦＮＡＲ２に対し低減された親和性を示す、請求項５に記載のキメラタンパク質。
  8. 前記バリアントＩＦＮα１の１個または複数の変異のアミノ酸位置が、Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２３、Ｓ２５、Ｌ３０、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｑ４０、Ｄ１１５、Ｌ１１８、Ｋ１２１、Ｒ１２６、Ｅ１３３、Ｋ１３４、Ｋ１３５、Ｒ１４５、Ａ１４６、Ｍ１４９、Ｒ１５０、Ｓ１５３、Ｌ１５４、およびＮ１５７またはこれらの組み合わせからなる群より選択され、前記位置が、配列番号１を基準にして、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１５Ｒ、Ｌ１１８Ａ、Ｋ１２１Ａ、Ｋ１２１Ｅ、Ｒ１２６Ａ、Ｒ１２６Ｅ、Ｅ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｋ１３５Ａ、Ｒ１４５Ａ、Ｒ１４５Ｄ、Ｒ１４５Ｅ、Ｒ１４５Ｇ、Ｒ１４５Ｈ、Ｒ１４５Ｉ、Ｒ１４５Ｋ、Ｒ１４５Ｌ、Ｒ１４５Ｎ、Ｒ１４５Ｑ、Ｒ１４５Ｓ、Ｒ１４５Ｔ、Ｒ１４５Ｖ、Ｒ１４５Ｙ、Ａ１４６Ｄ、Ａ１４６Ｅ、Ａ１４６Ｇ、Ａ１４６Ｈ、Ａ１４６Ｉ、Ａ１４６Ｋ、Ａ１４６Ｌ、Ａ１４６Ｍ、Ａ１４６Ｎ、Ａ１４６Ｑ、Ａ１４６Ｒ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ａ１４６Ｙ、Ｍ１４９Ａ、Ｍ１４９Ｖ、Ｒ１５０Ａ、Ｓ１５３Ａ、Ｌ１５４Ａ、Ｎ１５７Ａ、Ｌ３０Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｒ３３Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｍ１４９Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｌ１５４Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｒ１４５Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｄ１１５Ａ－Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ－Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ－Ｒ１２１Ａ－Ｋ１２２Ａ、Ｒ１２１Ａ－Ｋ１２２Ａ、およびＲ１２１Ｅ－Ｋ１２２Ｅからなる群より任意に選択される、請求項５に記載のキメラタンパク質。
  9. 配列番号１を基準にして位置Ｃ１、Ｃ２９、Ｃ８６、Ｃ９９、Ｃ１３９で、Ｃ８６Ｓ、Ｃ８６Ａ、およびＣ８６Ｙからなる群より任意に選択される変異をさらに含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  10. 前記１個または複数の変異が、１個または複数のターゲティング部分への結合によりまたは前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に回復可能である低減された親和性を付与する、請求項５～９のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  11. 前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞に向けられる、請求項１～１０のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  12. 前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞、内皮細胞、上皮細胞、間葉細胞、腫瘍間質または間質細胞、ＥＣＭおよび／または免疫細胞、臓器細胞、および／または組織細胞上の抗原または受容体を認識するおよび／または結合する認識ドメインを含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  13. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、マスト細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、ＮＫＴ細胞、およびＮＫ細胞、またはこれらの誘導体から選択される、請求項１２に記載のキメラタンパク質。
  14. 前記ターゲティング部分が、完全長抗体またはそのフラグメント、単一ドメイン抗体、組換えの重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒューマボディ、サメの重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（例えば、システインノットタンパク質、ノッチン）、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である認識ドメインを含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  15. 前記認識ドメインが、ｉ）天然リガンドであり、Ｆｌｔ３Ｌまたはその切り詰め型、任意選択でＦｌｔ３Ｌの細胞外ドメイン、任意選択で単鎖Ｆｌｔ３Ｌを任意選択で含み；ｉｉ）ＣＤ２０を認識し；ｉｉｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識し；またはｉｖ）Ｃｌｅｃ９Ａを認識する、請求項１～１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  16. 前記認識ドメインが、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、任意選択でＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨである、請求項１～１５のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  17. 前記認識ドメインが、目的の前記抗原または受容体を機能的に調節する、請求項１～１６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  18. 前記認識ドメインが、目的の前記抗原または受容体を結合するが機能的に調節しない、請求項１～１７のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  19. ２個以上のターゲティング部分を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  20. １個または複数の追加の改変シグナル伝達物質をさらに含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  21. 前記キメラタンパク質が、２個のシグナル伝達物質または２個のターゲティング部分または両方の２個を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  22. 前記キメラタンパク質が、３個のシグナル伝達物質または３個のターゲティング部分または両方の３個を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  23. 前記改変シグナル伝達物質が、非変異シグナル伝達物質に比べて受容体に対し低減された親和性または活性を付与する１個または複数の変異を含む、請求項２０に記載のキメラタンパク質。
  24. 前記１個または複数の変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項２３に記載のキメラタンパク質。
  25. アゴニストまたはアンタゴニスト活性が、減弱化される、請求項２４に記載のキメラタンパク質。
  26. 前記改変シグナル伝達物質が、その活性をアゴニスト活性からアンタゴニスト活性に変換する１個または複数の変異を含む、請求項２４または２５に記載のキメラタンパク質。
  27. 前記１個または複数の変異が、１個または複数のターゲティング部分への結合によりまたは前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に回復可能である低減された親和性または活性を付与する、請求項２３に記載のキメラタンパク質。
  28. 前記キメラタンパク質が、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、心臓血管疾患、創傷、虚血関連疾患、神経変性疾患、および／または代謝疾患の１種または複数を有する患者における使用のために好適である、請求項１～２７のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  29. 請求項１～２８のいずれか１項に記載の１個または複数のキメラタンパク質をコードする組換え核酸組成物。
  30. 請求項２９に記載の核酸を含む宿主細胞。
  31. ｉ）それを必要としている患者に請求項１～２８のいずれか１項に記載のキメラタンパク質；ｉｉ）それを必要としている患者に請求項２９に記載の組換え核酸；またはｉｉｉ）それを必要としている患者に請求項３０に記載の宿主細胞の有効量を投与することを含む、癌を治療するための方法。
  32. 前記癌が、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫（例えば、カポジ肉腫）；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫；ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）；ならびに母斑症に関連する異常血管増殖；浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）；およびメグズ症候群の１種または複数から選択される、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記癌が、毛様細胞性白血病である、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記癌が、黒色腫である、請求項３２に記載の方法。
  35. 前記癌が、カポジ肉腫である、請求項３２に記載の方法。
  36. 薬物としての使用のための請求項１～２８のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  37. 癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝疾患、心臓血管疾患、感染性疾患、変性疾患および神経変性疾患の治療における使用のための請求項１～２８のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  38. 薬物の製造における請求項１～２８のいずれか１項に記載のキメラタンパク質の使用。
  39. Ｆｃベースキメラタンパク質複合体であって、
    （ａ）インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）またはそのバリアント、および
    （ｂ）目的の抗原または受容体に特異的に結合する認識ドメインを含む、１個または複数のターゲティング部分、および
    （ｃ）Ｆｃドメインの１種または複数のエフェクター機能を低減するまたは除去する、前記Ｆｃドメイン中のＦｃ鎖対形成を促進する、および／または前記Ｆｃドメイン中のヒンジ領域を安定化する１個または複数の変異を任意選択で有する、Ｆｃドメイン、
    を含む、Ｆｃベースキメラタンパク質複合体。
  40. 前記ＩＦＮα１が、配列番号１と少なくとも約９０％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  41. 前記ＩＦＮα１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、任意選択で前記ＩＦＮα１が、ペグ化され、１個または複数のターゲティング部分が、ペグ化され、および／または前記Ｆｃドメインが、ペグ化される、請求項３９または４０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  42. 前記バリアントＩＦＮα１が、１個または複数の変異を含む、請求項３９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  43. 前記バリアントＩＦＮα１の１個または複数の変異が、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）に対し低減された親和性を付与する、請求項４２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  44. 前記ＩＦＮα１が、ＩＦＮＡＲ１に対し低減された親和性を示す、請求項４３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  45. 前記ＩＦＮα１が、ＩＦＮＡＲ２に対し低減された親和性を示す、請求項４３に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  46. 前記バリアントＩＦＮα１の１個または複数の変異のアミノ酸位置が、Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２３、Ｓ２５、Ｌ３０、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｑ４０、Ｄ１１５、Ｌ１１８、Ｋ１２１、Ｒ１２６、Ｅ１３３、Ｋ１３４、Ｋ１３５、Ｒ１４５、Ａ１４６、Ｍ１４９、Ｒ１５０、Ｓ１５３、Ｌ１５４、およびＮ１５７またはこれらの組み合わせからなる群より選択され、前記位置が、配列番号１を基準にして、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１５Ｒ、Ｌ１１８Ａ、Ｋ１２１Ａ、Ｋ１２１Ｅ、Ｒ１２６Ａ、Ｒ１２６Ｅ、Ｅ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｋ１３５Ａ、Ｒ１４５Ａ、Ｒ１４５Ｄ、Ｒ１４５Ｅ、Ｒ１４５Ｇ、Ｒ１４５Ｈ、Ｒ１４５Ｉ、Ｒ１４５Ｋ、Ｒ１４５Ｌ、Ｒ１４５Ｎ、Ｒ１４５Ｑ、Ｒ１４５Ｓ、Ｒ１４５Ｔ、Ｒ１４５Ｖ、Ｒ１４５Ｙ、Ａ１４６Ｄ、Ａ１４６Ｅ、Ａ１４６Ｇ、Ａ１４６Ｈ、Ａ１４６Ｉ、Ａ１４６Ｋ、Ａ１４６Ｌ、Ａ１４６Ｍ、Ａ１４６Ｎ、Ａ１４６Ｑ、Ａ１４６Ｒ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ａ１４６Ｙ、Ｍ１４９Ａ、Ｍ１４９Ｖ、Ｒ１５０Ａ、Ｓ１５３Ａ、Ｌ１５４Ａ、Ｎ１５７Ａ、Ｌ３０Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｒ３３Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｍ１４９Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｌ１５４Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｒ１４５Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｄ１１５Ａ－Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ－Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ－Ｒ１２１Ａ－Ｋ１２２Ａ、Ｒ１２１Ａ－Ｋ１２２Ａ、およびＲ１２１Ｅ－Ｋ１２２Ｅからなる群より任意に選択される、請求項４２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  47. 配列番号１を基準にして位置Ｃ１、Ｃ２９、Ｃ８６、Ｃ９９、Ｃ１３９で、Ｃ８６Ｓ、Ｃ８６Ａ、およびＣ８６Ｙからなる群より任意に選択される変異をさらに含む、請求項３９～４６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  48. 前記１個または複数の変異が、１個または複数のターゲティング部分への結合によりまたは前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に回復可能である低減された親和性を付与する、請求項３９～４７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  49. 前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞に向けられる、請求項３９～４８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  50. 前記ターゲティング部分が、免疫細胞に向けられる、請求項３９～４９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  51. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、マスト細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、ＮＫＴ細胞、およびＮＫ細胞、またはこれらの誘導体から選択される、請求項５０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  52. 前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体、組換えの重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（例えば、システインノットタンパク質、ノッチン）、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である認識ドメインを含む、請求項３９～５１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  53. 前記認識ドメインが、ｉ）天然リガンドであり、Ｆｌｔ３Ｌまたはその切り詰め型、任意選択でＦｌｔ３Ｌの細胞外ドメインを任意選択で含み；ｉｉ）ＣＤ２０を認識し；ｉｉｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識し；またはｉｖ）Ｃｌｅｃ９Ａを認識する、請求項３９～５２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  54. 前記認識ドメインが、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、任意選択でＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨである、請求項３９～５３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  55. 前記認識ドメインが、目的の前記抗原または受容体を機能的に調節する、請求項３９～５４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  56. 前記認識ドメインが、目的の前記抗原または受容体を結合するが機能的に調節しない、請求項３９～５５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  57. ２個以上のターゲティング部分を含む、請求項３９～５６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  58. １個または複数の追加の改変シグナル伝達物質をさらに含む、請求項３９～５７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  59. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、２個のシグナル伝達物質または２個のターゲティング部分または両方の２個を含む、請求項３９～５８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  60. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、３個のシグナル伝達物質または３個のターゲティング部分または両方の３個を含む、請求項３９～５９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  61. 前記改変シグナル伝達物質が、非変異シグナル伝達物質に比べて受容体に対し低減された親和性または活性を付与する１個または複数の変異を含む、請求項５８に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  62. 前記１個または複数の変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項６１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  63. アゴニストまたはアンタゴニスト活性が、減弱化される、請求項６２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  64. 前記改変シグナル伝達物質が、その活性をアゴニスト活性からアンタゴニスト活性に変換する１個または複数の変異を含む、請求項６１または６２に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  65. 前記１個または複数の変異が、１個または複数のターゲティング部分への結合によりまたは前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体中への包含時に回復可能である低減された親和性または活性を付与する、請求項３９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  66. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、心臓血管疾患、創傷、虚血関連疾患、神経変性疾患、および／または代謝疾患の１種または複数を有する患者における使用のために好適である、請求項３９～６５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  67. 請求項３９～６６のいずれか１項に記載の１個または複数のＦｃベースキメラタンパク質複合体、またはその成分のポリペプチドをコードする組換え核酸組成物。
  68. 請求項６７に記載の核酸を含む宿主細胞。
  69. ｉ）それを必要としている患者に請求項３９～６６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質；ｉｉ）それを必要としている患者に請求項６７に記載の組換え核酸；またはｉｉｉ）それを必要としている患者に請求項６８に記載の宿主細胞の有効量を投与することを含む、癌を治療するための方法。
  70. 前記癌が、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫（例えば、カポジ肉腫）；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫；ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）；ならびに母斑症に関連する異常血管増殖；浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）；およびメグズ症候群の１種または複数から選択される、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記癌が、毛様細胞性白血病である、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記癌が、黒色腫である、請求項７０に記載の方法。
  73. 前記癌が、カポジ肉腫である、請求項７０に記載の方法。
  74. 薬物としての使用のための請求項３９～６６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  75. 癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝疾患、心臓血管疾患、感染性疾患、変性疾患および神経変性疾患の治療における使用のための請求項３９～６６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  76. 薬物の製造における請求項３９～６６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体の使用。
  77. 前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥ由来である、請求項３９～６６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  78. 前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項７７に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  79. 前記Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭまたはＩｇＥ由来である、請求項３９～６６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  80. 前記ヒトＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、請求項７９に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  81. 前記Ｆｃ鎖対形成が、イオン対形成および／またはノブインホール対形成により促進される、請求項３９～６６および７４～８０のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  82. 前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、Ｆｃドメイン中のＦｃ鎖間のイオン対形成をもたらす、請求項３９～６６および７４～８１のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  83. 前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメイン中のノブインホール対形成をもたらす、請求項３９～６６および７４～８２のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  84. 前記Ｆｃドメインに対する前記１個または複数の変異が、前記Ｆｃドメインのエフェクター機能の低減または除去をもたらす、請求項３９～６６および７４～８３のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  85. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、ヘテロダイマーでありかつ互いに対し、任意のターゲティング部分およびシグナル伝達物質、または互いに対し任意のターゲティング部分、または互いに対し任意のシグナル伝達物質に関して、トランス配向／構造を有する、請求項３９～６６または７４～８４のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  86. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、ヘテロダイマーでありかつ互いに対し、任意のターゲティング部分およびシグナル伝達物質、または互いに対し任意のターゲティング部分、または互いに対し任意のシグナル伝達物質に関して、シス配向を有する、請求項３９～６６または７４～８５のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  87. 前記Ｆｃが、ヒトＩｇＧ１中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＫ３２２Ｑ置換（ＥＵナンバリングに準拠）を含む、請求項３９～６６および７４～８６のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  88. 前記Ｆｃが、ヒトＩｇＧ１であり、かつ任意選択で、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｋ３２２、Ｄ２６５、Ｐ３２９、およびＰ３３１（ＥＵナンバリングに準拠）の１個または複数の変異を含む、請求項３９～６６および７４～８７のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  89. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、図１Ａ～Ｆ、２Ａ～Ｈ、３Ａ～Ｈ、４Ａ～Ｄ、５Ａ～Ｆ、６Ａ～Ｊ、７Ａ～Ｄ、８Ａ～Ｆ、９Ａ～Ｊ、１０Ａ～Ｆ、１１Ａ～Ｌ、１２Ａ～Ｌ、１３Ａ～Ｆ、１４Ａ～Ｌ、１５Ａ～Ｌ、１６Ａ～Ｊ、１７Ａ～Ｊ、１８Ａ～Ｆ、および１９Ａ～Ｆのいずれか１つの配向および／または構造を有する、請求項３９～６６および７４～８８のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  90. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３のいずれか１つと少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項３９～６６および７４～８９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  91. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３から選択されるアミノ酸配列および前記アミノ酸配列に対し１０個未満の変異を有するポリペプチドを含む、請求項３９～６６および７４～８９のいずれか１項に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  92. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３から選択されるアミノ酸配列、および前記アミノ酸配列に対し５個未満の変異を有するポリペプチドを含む、請求項９１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  93. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号２９０、２９１、２９３～３０３から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項９１に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  94. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号２９０と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第１のアミノ酸配列および配列番号２９１と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第２のアミノ酸配列を含む、請求項９０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  95. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号２９３と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第１のアミノ酸配列および配列番号２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、または２９９のいずれか１つと少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第２のアミノ酸配列を含む、請求項９０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  96. 前記Ｆｃベースキメラタンパク質複合体が、配列番号３００、３０１、３０２、３０３のいずれか１つと少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第１のアミノ酸配列および配列番号２９４と少なくとも９５％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する第２のアミノ酸配列を含む、請求項９０に記載のＦｃベースキメラタンパク質複合体。
  97. キメラタンパク質複合体であって、
    （ａ）インターフェロンアルファ１（ＩＦＮα１）またはそのバリアント、
    （ｂ）目的の抗原または受容体に特異的に結合する認識ドメインを含む、１個または複数のターゲティング部分、および
    （ｃ）複合体形成ドメイン、
    を含む、キメラタンパク質複合体。
  98. 前記複合体形成ドメインが、ロイシンジッパーを含む、請求項９７に記載のキメラタンパク質複合体。
  99. 前記ＩＦＮα１が、配列番号１と少なくとも約９０％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、任意選択で前記ＩＦＮα１が、ペグ化され、１個または複数のターゲティング部分が、ペグ化され、またはリンカーが、ペグ化される、請求項９７または９８に記載のキメラタンパク質複合体。
  100. 前記バリアントＩＦＮα１が、１個または複数の変異を含む、請求項９７～９９のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  101. 前記バリアントＩＦＮα１の１個または複数の変異が、インターフェロンα／β受容体（ＩＦＮＡＲ）に対し低減された親和性を付与する、請求項１００に記載のキメラタンパク質複合体。
  102. 前記ＩＦＮα１が、ＩＦＮＡＲ１に対し低減された親和性を示す、請求項１０１に記載のキメラタンパク質複合体。
  103. 前記ＩＦＮα１が、ＩＦＮＡＲ２に対し低減された親和性を示す、請求項１０１に記載のキメラタンパク質複合体。
  104. 前記バリアントＩＦＮα１の１個または複数の変異のアミノ酸位置が、Ｌ１５、Ａ１９、Ｒ２３、Ｓ２５、Ｌ３０、Ｄ３２、Ｒ３３、Ｈ３４、Ｑ４０、Ｄ１１５、Ｌ１１８、Ｋ１２１、Ｒ１２６、Ｅ１３３、Ｋ１３４、Ｋ１３５、Ｒ１４５、Ａ１４６、Ｍ１４９、Ｒ１５０、Ｓ１５３、Ｌ１５４、およびＮ１５７またはこれらの組み合わせからなる群より選択され、前記位置が、配列番号１を基準にして、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｑ４０Ａ、Ｄ１１５Ｒ、Ｌ１１８Ａ、Ｋ１２１Ａ、Ｋ１２１Ｅ、Ｒ１２６Ａ、Ｒ１２６Ｅ、Ｅ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｋ１３５Ａ、Ｒ１４５Ａ、Ｒ１４５Ｄ、Ｒ１４５Ｅ、Ｒ１４５Ｇ、Ｒ１４５Ｈ、Ｒ１４５Ｉ、Ｒ１４５Ｋ、Ｒ１４５Ｌ、Ｒ１４５Ｎ、Ｒ１４５Ｑ、Ｒ１４５Ｓ、Ｒ１４５Ｔ、Ｒ１４５Ｖ、Ｒ１４５Ｙ、Ａ１４６Ｄ、Ａ１４６Ｅ、Ａ１４６Ｇ、Ａ１４６Ｈ、Ａ１４６Ｉ、Ａ１４６Ｋ、Ａ１４６Ｌ、Ａ１４６Ｍ、Ａ１４６Ｎ、Ａ１４６Ｑ、Ａ１４６Ｒ、Ａ１４６Ｓ、Ａ１４６Ｔ、Ａ１４６Ｖ、Ａ１４６Ｙ、Ｍ１４９Ａ、Ｍ１４９Ｖ、Ｒ１５０Ａ、Ｓ１５３Ａ、Ｌ１５４Ａ、Ｎ１５７Ａ、Ｌ３０Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｒ３３Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｍ１４９Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｌ１５４Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｒ１４５Ａ－Ｈ５８Ｙ－Ｅ５９Ｎ－Ｑ６２Ｓ、Ｄ１１５Ａ－Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ－Ｒ１２１Ａ、Ｌ１１８Ａ－Ｒ１２１Ａ－Ｋ１２２Ａ、Ｒ１２１Ａ－Ｋ１２２Ａ、およびＲ１２１Ｅ－Ｋ１２２Ｅからなる群より任意に選択される、請求項１００に記載のキメラタンパク質複合体。
  105. 配列番号１を基準にして位置Ｃ１、Ｃ２９、Ｃ８６、Ｃ９９、Ｃ１３９で、Ｃ８６Ｓ、Ｃ８６Ａ、およびＣ８６Ｙからなる群より任意に選択される変異をさらに含む、請求項９７～１０４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質。
  106. 前記１個または複数の変異が、１個または複数のターゲティング部分への結合によりまたは前記キメラタンパク質複合体中への包含時に回復可能である低減された親和性を付与する、請求項９７～１０５のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  107. 前記ターゲティング部分が、腫瘍細胞、内皮細胞、上皮細胞、間葉細胞、腫瘍間質または間質細胞、ＥＣＭおよび／または免疫細胞、臓器細胞、および／または組織細胞に向けられる、請求項９７～１０６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  108. 前記ターゲティング部分が、免疫細胞に向けられる、請求項９７～１０７のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  109. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、好中球、マスト細胞、単球、赤血球、骨髄細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、ＮＫＴ細胞、およびＮＫ細胞、またはこれらの誘導体から選択される、請求項１０８に記載のキメラタンパク質複合体。
  110. 前記ターゲティング部分が、単一ドメイン抗体、組換えの重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、サメの重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、マイクロタンパク質（例えば、システインノットタンパク質、ノッチン）、ｄａｒｐｉｎ、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ペプチド模倣分子、受容体に対する天然リガンド、または合成分子である認識ドメインを含む、請求項９７～１０９のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  111. 前記認識ドメインが、ｉ）天然リガンドであり、Ｆｌｔ３Ｌまたはその切り詰め型、任意選択でＦｌｔ３Ｌの細胞外ドメイン、任意選択で単鎖Ｆｌｔ３Ｌを任意選択で含み；ｉｉ）ＣＤ２０を認識し；ｉｉｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を認識し；またはｉｖ）Ｃｌｅｃ９Ａを認識する、請求項９７～１１０のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  112. 前記認識ドメインが、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、任意選択でＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、またはラクダ化ＶＨＨである、請求項９７～１１１のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  113. 前記認識ドメインが、目的の前記抗原または受容体を機能的に調節する、請求項９７～１１２のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  114. 前記認識ドメインが、目的の前記抗原または受容体を結合するが機能的に調節しない、請求項９７～１１３のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  115. ２個以上のターゲティング部分を含む、請求項９７～１１４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  116. １個または複数の追加の改変シグナル伝達物質をさらに含む、請求項９７～１１５のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  117. 前記キメラタンパク質複合体が、２個のシグナル伝達物質または２個のターゲティング部分または両方の２個を含む、請求項９７～１１６のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  118. 前記キメラタンパク質複合体が、３個のシグナル伝達物質または３個のターゲティング部分または両方の３個を含む、請求項９７～１１７のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  119. 前記改変シグナル伝達物質が、非変異シグナル伝達物質に比べて受容体に対し低減された親和性または活性を付与する１個または複数の変異を含む、請求項１１６に記載のキメラタンパク質複合体。
  120. 前記１個または複数の変異が、活性の減弱化を可能にする、請求項１１９に記載のキメラタンパク質複合体。
  121. アゴニストまたはアンタゴニスト活性が、減弱化される、請求項１２０に記載のキメラタンパク質複合体。
  122. 前記改変シグナル伝達物質が、その活性をアゴニスト活性からアンタゴニスト活性に変換する１個または複数の変異を含む、請求項１１９または１２０に記載のキメラタンパク質複合体。
  123. 前記１個または複数の変異が、１個または複数のターゲティング部分への結合によりまたは前記キメラタンパク質複合体中への包含時に回復可能である低減された親和性または活性を付与する、請求項９７に記載のキメラタンパク質複合体。
  124. 前記キメラタンパク質複合体が、癌、感染症、免疫異常、自己免疫疾患、心臓血管疾患、創傷、虚血関連疾患、神経変性疾患、および／または代謝疾患の１種または複数を有する患者における使用のために好適である、請求項９７～１２３のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  125. 請求項９７～１２４のいずれか１項に記載の１個または複数のキメラタンパク質複合体、またはその成分のポリペプチドをコードする組換え核酸組成物。
  126. 請求項１２５に記載の核酸を含む宿主細胞。
  127. ｉ）それを必要としている患者に請求項９７～１２４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質；ｉｉ）それを必要としている患者に請求項１２５に記載の組換え核酸；またはｉｉｉ）それを必要としている患者に請求項１２６に記載の宿主細胞の有効量を投与することを含む、癌を治療するための方法。
  128. 前記癌が、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；神経膠芽腫；肝癌；ヘパトーマ；上皮内腫瘍；腎臓癌または腎性癌（ｋｉｄｎｅｙ ｏｒ ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔癌（唇、舌状、舌、口内、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌腫；肉腫（例えば、カポジ肉腫）；皮膚癌；扁平上皮細胞癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫；ならびにＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）；ならびに母斑症に関連する異常血管増殖；浮腫（例えば脳腫瘍に関連するもの）；およびメグズ症候群の１種または複数から選択される、請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記癌が、毛様細胞性白血病である、請求項１２８に記載の方法。
  130. 前記癌が、黒色腫である、請求項１２８に記載の方法。
  131. 前記癌が、カポジ肉腫である、請求項１２８に記載の方法。
  132. 薬物としての使用のための請求項９７～１２４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  133. 癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、代謝疾患、心臓血管疾患、感染性疾患、変性疾患および神経変性疾患の治療における使用のための請求項９７～１２４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体。
  134. 薬物の製造における請求項９７～１２４のいずれか１項に記載のキメラタンパク質複合体の使用。

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