JP2022512948A - 表現型特性が向上したｔ細胞組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、いくつかの実施形態において養子免疫療法に好適な単離された細胞組成物、及び細胞組成物を製造する方法、ならびに細胞組成物を用いる治療方法を提供する。組成物は、薬学的に許容される担体中に、標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも約１０６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、Ｔメモリ幹（ＴＳＣＭ）細胞を含む。種々の実施形態において、組成物は、約１％～約１００％がＴメモリ幹細胞であり、頑強で耐久性のある養子療法を提供すると共に、Ｔ細胞操作の進歩を提供する。【選択図】図１

Description

優先権
本出願は、２０１８年１１月８日に出願された米国仮特許出願第６２／７５７，４６７号、２０１９年３月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／８２１，０３１号の利益、及び２０１９年６月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／８６７，４９９号の利益を主張し、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

免疫療法は、増幅された天然で循環するか、または遺伝子操作された細胞障害性リンパ球の養子移入を介して、患者自身の免疫系を開放し、誘導し、強化することを目的とする幅広い数々の戦略を含む、がん療法の基礎となっている。この分野の近年の進歩にもかかわらず、現在の養子免疫療法は、いくつかの課題に直面している。例えば、多くの養子免疫療法は、臨床的もしくは治療的な価値がある操作された細胞障害性リンパ球を末梢血から十分なレベル生成することができず、またはエフェクター細胞を均一に操作することができず、または患者に対して持続的で長期にわたる治療効果を提供することができず、腫瘍の再発及び他の合併症を引き起こす。したがって、白血病またはリンパ腫（急性または慢性の白血病を含む）に罹患している患者、ならびに養子療法から利益を受ける可能性がある他の患者を含め、より効果的であり、耐久性であり、より安全な養子免疫療法の選択肢を提供する細胞組成物の必要性が顕著である。種々の態様および実施形態において、本発明は、これらの必要性に対処するものである。

種々の態様及び実施形態において、本発明は、養子免疫療法及び／またはＴ細胞の遺伝子操作に好適な単離された細胞組成物を提供する。本発明は、細胞組成物を製造する方法、及び細胞組成物を用いた治療方法をさらに提供する。組成物は、薬学的に許容される担体中に、標的ペプチド抗原（複数可）に特異的な少なくとも約１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含む。種々の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも約１％がＴメモリ幹細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、単離され、それによって、実質的にＴメモリ幹細胞を含む（例えば、７０％～１００％のＴ_ＳＣＭ）組成物を調製する。本発明の組成物は、顕著なレベルのＴ_ＳＣＭが存在することによって、頑強で耐久性のある養子療法を提供することができる。細胞組成物は、キメラ抗原受容体または組換えＴＣＲを発現するＴ細胞を含む必要はなく、したがって、種々の実施形態において、より多くの疲弊したＴ細胞表現型を産生し、より耐久性の低い応答及びより大きな毒性を生成することが多いこれらの技術に対する代替を提供する。他の実施形態において、Ｔ_ＳＣＭを使用して、キメラ抗原受容体または異種ＴＣＲを組換え発現し、それによって、高い増殖能力を有し、疲弊した表現型が少ない、操作されたＴ細胞を調製する。

種々の実施形態において、細胞組成物は、少なくとも１％、または少なくとも１５％のＴメモリ幹細胞と、約１０^６個の標的ペプチド抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞、または少なくとも約１０^７、または少なくとも約１０^８、または少なくとも約１０^９、または少なくとも約１０^１０個の標的ペプチド抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、標的細胞の強固な破壊とインビボでの長期持続性を提供する。例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群の治療のために、細胞組成物は、特に、ＷＴ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、及びサイクリンＡ１ペプチド抗原に特異的なＴ細胞を含んでいてもよい。

種々の実施形態において、細胞組成物は、約１％～約５０％のＴメモリ幹細胞、または約５％～約２５％のＴメモリ幹細胞を含む。種々の実施形態において、Ｔ細胞は、少なくとも５％がＴメモリ幹細胞であり、またはＴ細胞は、少なくとも約１０％がＴメモリ幹細胞であり、またはＴ細胞は、少なくとも２０％がＴメモリ幹細胞であり、または少なくとも２５％がＴメモリ幹細胞であり、顕著な増殖能力、ならびに免疫再構成能力及び寿命を有する養子免疫療法組成物を提供する。

種々の実施形態において、組成物中のＣＤ８＋Ｔ細胞の９５％より多くが、メモリ表現型を含む。種々の実施形態において、メモリ表現型は、Ｔ_ＳＣＭに加えて、セントラルメモリＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）、エフェクターメモリＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）、及びエフェクターメモリＲＡ＋Ｔ細胞（Ｔ_ＥＭＲＡ）のうちの１つ以上（または全て）を含む。いくつかの実施形態において、メモリ表現型の少なくとも８０％は、Ｔ_ＳＣＭ、Ｔ_ＣＭ、及びＴ_ＥＭである。

種々の実施形態において、組成物中のＣＤ８＋Ｔ細胞は、Ｔ_ＳＣＭに加えて、セントラルメモリ及びエフェクターメモリＴ細胞を含む。種々の実施形態において、組成物中のＴ細胞（及び／または標的抗原に特異的なＴ細胞）は、少なくとも約３０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも約５０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも約７０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも約８０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも約９０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞である。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも５０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも８０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ_ＳＣＭ及びＴ_ＣＭの組み合わせは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の約４０％～約７０％である。

いくつかの実施形態において、細胞組成物は、約２０％未満、または約１０％未満の最終分化したメモリＴ細胞（例えば、Ｔ_ＥＭＲＡ細胞）と、３０％未満のナイーブ細胞とを含み、またはいくつかの実施形態において、約１５％未満、またはいくつかの実施形態において、約５％未満、またはいくつかの実施形態において、約１．５％未満のナイーブ細胞を含む。本明細書に開示される細胞表現型は、常磁性人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）及び組換えＴ細胞成長因子カクテルを用いた濃縮及び増幅プロセスを使用して、作成及び／または制御することができる。

種々の実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％がＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ８＋またはＣＤ３＋ＣＤ４－細胞）である。例えば、単離された細胞組成物は、約１０％未満、または約５％未満のＣＤ４＋Ｔ細胞を含むことによって特徴付けされ得る。ＣＤ８＋Ｔ細胞をエクスビボで増幅するとき、ＣＤ４＋細胞は、ＣＤ８＋細胞を過剰に成長させ、成長シグナルが競合する傾向があり、外因性ＣＤ４＋細胞は、頑強で耐久性のあるインビボ応答にとって必要ではない。

種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞は、活性化すると多機能表現型を示す。いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも１０％、またはいくつかの実施形態においてＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも２０％、またはいくつかの実施形態においてＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも４０％が、活性化すると多機能表現型を示す。例えば、活性化すると、Ｔ細胞は、ＩＬ－２の細胞内染色、ＩＦＮ－γ産生、ＴＮＦ－αの産生、及びＣＤ１０７Ａのうちの２つ以上について陽性である。種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも２０％は、これらのマーカーのうちの少なくとも２つを示す。種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも２０％は、これらのマーカーのうちの少なくとも３つ、またはいくつかの実施形態において、これらのマーカーのうちの４つ全てを示す。種々の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも５％が、多抗原性であり、このことは、ＣＤ８＋Ｔ細胞が、インビトロまたはインビボで複数の腫瘍またはウイルス抗原に応答することができることを意味している。

種々の実施形態において、細胞組成物は、γδＴ細胞をさらに含む。γδＴ細胞は、それらの表面上に独自のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。γδＴ細胞は、脂質抗原及びホスホ抗原の認識において役割を有する場合があり、ＨＬＡ依存性ではない抗病原体機構及び抗腫瘍機構を提供することができる。さらに、γδＴ細胞は、ＣＤ８＋細胞を援助することができる。造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の観点でγδＴ細胞の臨床的意義が見出されており、特に、移植後のより高頻度のγδＴ細胞は、望ましい転帰と関連していた。

種々の実施形態に従って細胞組成物は、濃縮及び増幅プロセスによって調製することができる。いくつかの実施形態において、標的抗原（複数可）（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルス関連抗原）に特異的なＣＤ８＋細胞が濃縮される。この細胞集合体は、供給源であるリンパ球中の主要なナイーブ細胞である場合であっても、培養物中で迅速に増幅し、本明細書に記載の細胞組成物に到達することができる。濃縮は、常磁性ビーズを使用して行い、細胞集合体を陽性選択することができ、Ｔ細胞表面受容体の強力な磁気クラスタリングに起因して、ナイーブ細胞及び他のＴ細胞集合体を活性化するという追加の利点を有し得る。例えば、常磁性ビーズまたはナノ粒子は、同じまたは異なる粒子上の共刺激シグナル、例えば、ＣＤ２８のアゴニスト（例えば、ＣＤ２８の抗体アゴニスト）と共に、ペプチド抗原を提示する単量体または多量体（例えば、二量体）ＨＬＡリガンドを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８＋細胞も濃縮され、これは、抗原特異的な濃縮と同時であってもよい。

種々の実施形態において、標的ペプチド抗原は、腫瘍由来、腫瘍特異的な抗原、及びネオ抗原を含め、腫瘍またはがん関連抗原である。腫瘍関連抗原に特異的なＴ細胞は、多くは非常に稀であり、多くの場合には、健康な個体の末梢血において検出不可能である。これは、多くは、ウイルス特異的Ｔ細胞と腫瘍抗原特異的Ｔ細胞との間で観察される区別である。

いくつかの実施形態において、標的ペプチド抗原は、病原体、例えば、ウイルス、細菌、真菌、または寄生虫病原体と関連するか、またはこれらに由来する少なくとも１つを含む。例えば、少なくとも１つのペプチド抗原は、ＨＩＶ、肝炎（例えば、Ｂ、Ｃ、またはＤ）ＣＭＶ、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザ、ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ１または２、または水痘帯状疱疹）、及びアデノウイルスと関連し得る。例えば、ＣＭＶは、臓器移植患者にみられる最も一般的なウイルス性病原体であり、骨髄移植または末梢血幹細胞移植を受ける患者における罹患率及び死亡率の主な原因である。ウイルス活性化は、がん生物学に関与することが知られている。

さらに他の実施形態において、細胞組成物は、腫瘍関連抗原に特異的なＴ細胞を含み、病原体関連抗原特異的Ｔ細胞が、バイスタンダー細胞として提供される。他のバイスタンダー細胞としては、γδＴ細胞が挙げられる。具体的には、ＨＬＡ－ペプチド及び抗ＣＤ２８を濃縮することによって、バイスタンダー細胞が濃縮され、特に、抗原特異的な活性化を引き起こすことなく、これらの細胞の非特異的な増幅の一部を引き起こすことが可能なＴ細胞成長因子カクテルを用いる場合に、増幅される。これらの実施形態において、組成物の大部分が、標的ペプチドに特異的なＴ細胞であるが（例えば、５％～７５％）、残りのＴ細胞（約０．２５％～約２５％）は、共通の病原体に対する免疫系のいくつかの再構成を提供し、このことは、特に、移植後に有益であるか、またはウイルス病因を有するがんにおいて有益である。

いくつかの実施形態は、増幅中にＴ細胞成長因子を使用し、このことが、Ｔ細胞の増殖及び／または分化に影響を与える。特に有用なサイトカインとしては、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－２１、及びＩＮＦ－γが挙げられる。これらまたは他の実施形態において、細胞は、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、及びＩＬ－６から選択される１つ、２つ、または３つのサイトカインを含むサイトカインカクテル存在下、培養物中で増幅される。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１０をさらに含む。いくつかの実施形態において、成長因子は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βを含むか、またはこれらから本質的になる。細胞は、１～４週間、例えば、約１０～約２１日間、培養物中で増幅させることができる。

他の態様において、本発明は、本明細書に記載のａＡＰＣを用いた濃縮及び増幅によるものを含め、細胞組成物を製造するための方法を提供する。具体的には、供給源であるリンパ球（例えば、健康なドナー由来、または養子免疫療法を必要とする患者由来）からのＣＤ４＋細胞の枯渇後、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、標的ペプチド抗原に特異的なＴ細胞及びいくつかの実施形態においてＣＤ２８＋細胞が濃縮される。標的細胞は、ナノ粒子またはマイクロ粒子ａＡＰＣ、例えば、磁場によってエクスビボでＴ細胞を活性化させ、細胞表面受容体のクラスタリングを誘発する超常磁性ナノ粒子を使用して濃縮することができる。ラテックスまたは他のポリマー系ナノ粒子を含む他の材料も、（磁場によって誘導されるクラスタリングを引き起こさず）細胞表面受容体をクラスタリングするために使用することができる。次いで、濃縮されたＴ細胞を、再構成されたＴ細胞成長因子（例えば、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γから選択される因子を含む）の使用によるものを含め、エクスビボで急速に増幅させることができる。いくつかの実施形態において、細胞は、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０から選択される１つ、２つ、または３つのサイトカイン存在下、培養物中で増幅される。いくつかの実施形態において、成長因子は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βを含むか、またはこれらから本質的になる。種々の実施形態において、これらのサイトカインは、人工または天然の抗原提示細胞と組み合わせて使用され、抗原特異的Ｔ細胞を増幅させる。

他の態様において、本発明は、がん患者、及び／またはリンパ球除去療法、細胞減少療法、免疫調節療法（細胞療法を行う前）の有無にかかわらず、同種幹細胞移植を受けた患者を治療するための方法を含む、養子細胞療法のための方法を提供する。細胞療法は、サイトカイン補助後治療の有無にかかわらず、さらに提供されてもよい。いくつかの実施形態において、患者は、血液癌を有しており、いくつかの実施形態において、同種幹細胞移植後に再発している。いくつかの実施形態において、患者は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群を有する。例えば、いくつかの実施形態において、細胞組成物は、ＷＴ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、及びサイクリンＡ１ペプチド抗原に特異的なＴ細胞を含む。しかしながら、他の実施形態において、がんは、癌腫、肉腫、及びリンパ腫を含む様々な種類の固形腫瘍を含む。例示的な標的ペプチド抗原は、本明細書に記載されている。

いくつかの実施形態において、患者は、感染症を有するか、または感染症のリスクにさらされている。例えば、ＨＳＣＴを受けた患者は、免疫不全状態を考慮すると、感染症の特別なリスクにさらされる。治療または予防することができる感染症としては、細菌、ウイルス、プリオン、真菌、寄生虫、蠕虫などによって引き起こされる感染症が挙げられる。かかる疾患としては、ＡＩＤＳ、Ｂ／Ｃ型肝炎、ＣＭＶ感染、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）感染、インフルエンザ、ヘルペスウイルス感染（帯状疱疹を含む）、及びアデノウイルス感染が挙げられる。

さらに他の実施形態において、本発明は、γδＴ細胞の集合体を作製するための方法を提供する。本方法は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βのうちの２つ以上の存在下、γδＴ細胞を含む細胞の集合体を増幅することを含む。増幅前に、細胞の集合体は、約２０％未満または約１０％未満または約８％未満のγδＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、細胞の集合体は、ＣＤ２８濃縮される。いくつかの実施形態において、細胞の集合体は、ＣＤ４＋枯渇している。培養物中の細胞の増幅は、本明細書に記載されるように、例えば、１～４週間行うことができる。γδＴ細胞は、細胞選別などの既知の方法を使用して、他の細胞から分離することができ、養子移入または研究使用のための細胞組成物として提供することができ、あるいは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、異種または操作されたＴ細胞受容体（例えば、αβＴＣＲ）などの１つ以上の異種または操作された遺伝子を発現するように改変することができる。

他の態様及び実施形態は、以下の詳細な説明から明らかであろう。

ＣＤ８＋抗原特異的Ｔ細胞の生成のための人工免疫調節（ＡＩＭ）プラットフォームを示す画像である。 抗原特異的Ｔ細胞の急速なインビトロでの濃縮及び増幅を可能にするＡＩＭ ＡＣＴ（養子細胞療法）ならびに濃縮及び増幅（Ｅ＋Ｅ）細胞増幅システムを示す画像である。 ＡＩＭ ＡＣＴプラットフォームのための濃縮及び増幅された抗原特異的細胞産物を示す２つのグラフを有する。左のグラフは、ＡＭＬ特異的抗原ＷＴ１_{３７－４５}、_{１２６－１３４}、ＰＲＡＭＥ_４２５、及びサイクリンＡ１_{２２７－２３５}、_{３４１－３５１}について、Ｔ細胞がエクスビボで濃縮及び増幅された後の４人の健康なドナーの新鮮なＰＢＭＣから生成されたＣＤ８＋Ｔ細胞の合計数を示す。右のグラフは、ＣＤ８＋Ｔ細胞がエクスビボで濃縮及び増幅された後の同じ急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）特異的抗原の合計割合を示す。 ＡＩＭ ＡＣＴプラットフォームによって生成されたＣＤ８＋Ｔ細胞がメモリＴ細胞を含むことを示す。濃縮後であるが０日目の増幅前（上側）、及び増幅１４日目（下側）のＡＭＬ抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞集合体を示す。Ｔ_ＣＭ＝セントラルメモリＴ細胞（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ－）、Ｔ_Ｎ＝ナイーブＴ細胞（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋）、Ｔ_ＥＭ＝エフェクターメモリＴ細胞（ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ４５ＲＡ－）、Ｔ_ＥＭＲＡ＝エフェクターメモリＲＡ＋Ｔ細胞（ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ４５ＲＡ＋）、Ｔ_ＳＣＭ＝Ｔメモリ幹細胞（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋）。 ＡＩＭ ＡＣＴプラットフォームによって生成されたＣＤ８＋Ｔ細胞がメモリＴ細胞を含むことを示す。ＡＭＬ特異的抗原ＷＴ１_{３７－４５}、_{１２６－１３４}、ＰＲＡＭＥ_４２５、サイクリンＡ１_{２２７－２３５}、_{３４１－３５１}について、ＡＭＬ特異的濃縮及び増幅の後１４日目のＴ_ＳＣＭ、Ｔ_ＣＭ、Ｔ_ＥＭ、及びＴ_ＥＭＲＡについてのメモリＴ細胞表現型を示す。 エクスビボで濃縮及び増幅されたＡＭＬ特異的Ｔ細胞が、ＩＬ－２の細胞内染色（増殖及び記憶）、ＩＦＮ－γ（他の細胞を活性化する、記憶、ＭＨＣの上方制御）、ＴＮＦ－α（炎症促進性）、及びＣＤ１０７Ａ（グランザイム放出、細胞障害活性）を含む、高度の多機能表現型を有することを示す。ＡＭＬ特異的Ｔ細胞の大部分（すなわち、約６２％）は、非特異的刺激を受けたときに３～４個のエフェクター機能を示した（上側）。（下側）において、グラフは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＣＤ１０７Ａを発現するＴ細胞の割合を示す。Ｔ細胞は、ペプチドパルスしたＴ２細胞の非特異的刺激によって刺激された。 エクスビボで濃縮及び増幅されたＡＭＬ特異的Ｔ細胞が、ＩＬ－２の細胞内染色（増殖及び記憶）、ＩＦＮ－γ（他の細胞を活性化する、記憶、ＭＨＣの上方制御）、ＴＮＦ－α（炎症促進性）、及びＣＤ１０７Ａ（グランザイム放出、細胞障害活性）を含む、高度の多機能表現型を有することを示す。ＡＭＬ特異的抗原ＷＴ１_{３７－４５}、_{１２６－１３４}、ＰＲＡＭＥ_４２５、及びサイクリンＡ１_{２２７－２３５}、_{３４１－３５１}を用いて健康なドナーの新鮮なＰＢＭＣから生成したＣＴＬを用い、２つのエフェクターと標的（Ｅ：Ｔ）の比率１０：１（左側の棒）及び２０：１（右側の棒）でのＡＭＬ細胞株Ｕ２６６のＴ細胞媒介性腫瘍特異的殺傷のグラフが示される。 黒色腫患者由来のＰＢＭＣ（上側）と健康なドナー由来のＰＢＭＣ（下側）との間で、濃縮及び増幅プロセスによって生成されるＭａｒｔ－１特異的Ｔ細胞の特異性を比較する４つのグラフからなる。濃縮及び増幅プロセスは、ドナー供給源にかかわらず、一貫した細胞組成物を産生する。この実験におけるデータは、凍結ＰＢＭＣから生成した。 ＡＩＭ ＡＣＴに基づくＥ＋Ｅプロセスが、天然の免疫応答を模倣するＴＣＲレパートリーを生成し、それによって、自然選択を受けた天然Ｔ細胞レパートリーから頑強な養子療法を提供することを示すグラフである。ポリクローナルＴＣＲレパートリーの広さは、天然で耐久性のある免疫応答を可能にする。 Ｅ＋Ｅプロセスが有意な量の多発性骨髄腫抗原特異的Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞（（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋）を生成したことを示すグラフを有する。このグラフは、健康なドナーのｌｅｕｃｏｐａｋからの増幅の前及び後の多発性骨髄腫特異的抗原Ｔ細胞の表現型を示す。 健康なドナーのｌｅｕｃｏｐａｋからの多発性骨髄腫抗原特異的Ｔ細胞のためのバッチ中、エクスビボで濃縮及び増幅されたＴ細胞の表現型を示す。このグラフは、Ｅ＋Ｅプロセスが、Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、セントラルメモリＴ細胞Ｔ_ＣＭ、及びエフェクターメモリＴ（Ｔ_ＥＭ）細胞を含む有意な量の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（ヒンジ二量体染色に基づき、約１．６×１０^９個のＣＤ８＋Ｔ細胞）を生成したことを示す。 ４人の異なる臨床的な多発性骨髄腫患者に由来する多発性骨髄腫抗原特異的Ｔ細胞のためのバッチ中、エクスビボで濃縮及び増幅されたＴ細胞の表現型を示す。このグラフは、濃縮及び増幅プロセスが、Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、セントラルメモリＴ細胞Ｔ_ＣＭ、及びエフェクターメモリＴ（Ｔ_ＥＭ）細胞を含む有意な量の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を生成したことを示す。 Ｖδ１及びＶδ２ＴＣＲサブタイプを含むγδＴ細胞の産生を示す。 種々の抗原特異的Ｔ細胞（ＡＭＬ、ＭＭ、ＥＢＶ、ＭＡＲＴ－１）について増幅させた後１４日目のγδＴ細胞の割合を示す。１４日目のγδＴ細胞の割合は、０日目のγδＴ細胞の数と広く相関関係にある。

Ｔ細胞の記憶は、刺激を受けると固有の機能応答が可能な表面マーカーの安定し、休止し、表現型が異なるサブセットで構成され、組成物中で不均一である。分化によって関連するサブセットには、セントラルメモリＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）、エフェクターメモリＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）、エフェクターメモリＲＡ＋Ｔ細胞（Ｔ_ＥＭＲＡ）、及びＴメモリ幹細胞（Ｔ_ＳＣＭ）が含まれる。メモリＴ細胞は、抗原特異的なナイーブＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞が抗原曝露して活性化されたときに発達し、その後、増殖増幅及び分化を受ける。したがって、永続的な記憶は、感染及び悪性腫瘍に対する長期的な保護に不可欠である。Ｔメモリ細胞のＴ_ＳＣＭサブセット細胞のみが、セントラルメモリＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）、エフェクターメモリ（Ｔ_ＥＭ）、及びターミナルエフェクターＴ細胞（Ｔ_ＴＥ）へと分化することが示されている。しかしながら、Ｔメモリ幹細胞は、稀であり、循環リンパ球のわずかな割合を表す。例えば、養子免疫療法のために臨床的に関連する量のＴメモリ幹細胞を生成することは、現時点で実行可能ではない。したがって、がん及び感染症抗原に対するＴ_ＳＣＭ細胞を生成し、増幅させ、及びリダイレクションを可能にする技術が必要である。

標的ペプチド抗原（複数可）に特異的な少なくとも約１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、Ｔ_ＳＣＭ細胞を含む、単離された細胞組成物が本明細書に開示される。本開示のＴ_ＳＣＭ細胞は、ナイーブＴ細胞と同様の表面マーカーを発現するが、上昇したレベルのＣＤ９５表面マーカーを発現する。かかるＴ_ＳＣＭ細胞は、分化及び増幅が最も少ないメモリサブセットである。他のメモリサブセットと比較して、本開示のＴ_ＳＣＭ細胞は、巨大な増幅能力を示し、メモリＴ細胞及びエフェクターＴ細胞の完全なレパートリーを再構成することができ、優れた恒常性及び分化能力を与えられた長期間安定した細胞の集合体である。したがって、標的ペプチド抗原（複数可）に特異的な少なくとも約１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、Ｔ_ＳＣＭ細胞を含む、本明細書に開示される組成物は、治療用途のために臨床的に関連する量でがん細胞に対するＴ_ＳＣＭ細胞を生成し、増幅させ、及びリダイレクションを可能にする非常に効果的な抗腫瘍組成物を提供する。

種々の態様及び実施形態において、本発明は、単離された細胞組成物、ならびに細胞組成物を製造する方法、及び細胞組成物を用いた治療方法を提供する。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、養子細胞療法に使用される。組成物は、薬学的に許容される担体中に、標的ペプチド抗原（複数可）に特異的な少なくとも約１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、Ｔ_ＳＣＭ細胞を含む。種々の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも約１％がＴ_ＳＣＭ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ_ＳＣＭ細胞は、単離され、それによって、ほぼ１００％のＴメモリ幹細胞を含む（例えば、少なくとも９０％がＴ_ＳＣＭ細胞）組成物を調製する。いくつかの実施形態において、約７０％～約１００％がＴメモリ幹細胞である組成物が作成される。本発明の組成物は、顕著なレベルのＴメモリ幹細胞が存在することによって、頑強で耐久性のある養子療法を提供する。細胞組成物は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または組換えＴＣＲを発現するＴ細胞を含む必要はなく、したがって、種々の実施形態において、より多くの疲弊したＴ細胞表現型を産生し、より耐久性の低い応答を生成することが多いこれらの技術に対する代替を提供する。他の実施形態において、Ｔ_ＳＣＭを使用して、キメラ抗原受容体または異種ＴＣＲ（例えば、αβＴＣＲまたはγδＴＣＲ）を組換え発現し、それによって、既に記載されたものよりも高い増殖能力を有し、疲弊した表現型が少ない、操作されたＴ細胞を調製する。したがって、Ｔ_ＳＣＭ細胞は、ＣＡＲまたは異種ＴＣＲを用いてＴ細胞を操作するために使用され得る。

本明細書で使用される場合、「標的ペプチド抗原（複数可）」または「標的抗原」という用語は、例えば、人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）またはプロフェッショナル抗原提示細胞（ｐＡＰＣ）プラットフォーム（例えば、樹状細胞）と組み合わせて、所望なＣＤ８＋細胞集合体を濃縮し、及び／または増幅させるためにエクスビボで使用されるペプチド抗原を指す。ａＡＰＣまたはｐＡＰＣを使用して、ドナーまたは患者のリンパ球由来のＣＴＬを活性化し、増幅させる。いくつかの実施形態において、標的ペプチド抗原は、特定のＣＤ８＋Ｔ細胞のエクスビボでの濃縮及び増幅のためにａＡＰＣ上にロードされるペプチドエピトープである。したがって、「標的ペプチド抗原に特異的」という用語は、Ｔ細胞が、標的抗原を経験した抗原であることを意味する。

種々の実施形態において、細胞組成物は、標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも約１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞、または標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも約１０^７個のＣＤ８＋Ｔ細胞、または標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも約１０^８個、少なくとも約１０^９個、または少なくとも約１０^１０個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、標的細胞の強固な破壊を提供する。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、標的抗原に特異的な１×１０^７個～１×１０^９個のＣＤ８＋Ｔ細胞、またはいくつかの実施形態において、標的抗原に特異的な５×１０^７個～５×１０^８個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。例えば、組成物は、５０～２００ｍＬの体積で、１ｍＬあたり約５×１０^５個～約５×１０^６個の細胞を含み得る。特定の実施形態において、組成物の体積は、１００ｍＬ以下（例えば、５０～１００ｍＬ）である。種々の実施形態における組成物の細胞は、少なくとも７０％が生存可能であるか、または少なくとも約８０％または約９０％が生存可能であり、滅菌培地中で提供され、低温保存剤培地（例えば、１０％ＤＭＳＯ）であってもよい。培地は、例えば、静脈内注入に好適な水性媒体であってもよく、例えば、水及び電解質を含む。例示的な培地は、ＰＬＡＳＭＡＬＹＴＥである。

ＣＤ８＋細胞障害性リンパ球（ＣＴＬ）とメモリＴ細胞とを含む細胞組成物が、本明細書に開示される。本開示のＣＴＬは、以下のＴ細胞集合体（ナイーブ、Ｔメモリ幹細胞、セントラルメモリ、エフェクターメモリ、及び最終分化したメモリ細胞）を含む。本発明の実施形態によれば、標的抗原に特異的なＴ細胞は、有意な量のＴ_ＳＣＭ細胞を含む。種々の実施形態において、標的抗原に特異的なＴ細胞は、セントラルメモリＴ細胞及びエフェクターメモリＴ細胞をさらに含む。細胞組成物は、いくつかの実施形態において、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１２ヶ月、または少なくとも約１８ヶ月、または少なくとも約２年の抗原特異的Ｔ細胞のインビボでの持続を含む、耐久性のある応答を提供する。

ナイーブＴ細胞は、骨髄で分化しており、胸腺における中枢選択の正及び負のプロセスを成功させる。ナイーブＴ細胞は、成熟しているとみなされ、活性化Ｔ細胞またはメモリＴ細胞とは異なり、その同種抗原には出会っていない。ナイーブＴ細胞は、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）の表面発現及び活性化表面マーカーの不存在によって特徴付けることができる。ナイーブ状態において、Ｔ細胞は、ほぼ静止しており、分裂していない。本開示によれば、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋及びＣＤ４５ＲＡ＋であると定義される。

メモリＴ細胞には、Ｔメモリ幹細胞（Ｔ_ＳＣＭ）、セントラルメモリ及びエフェクターメモリＴ細胞が含まれる。メモリＴ細胞は、それらの同種抗原に以前に応答している。同種抗原との２回目の出会いにおいて、メモリＴ細胞は、より速く、より強い免疫応答を開始するように再生成し得る。メモリＴ細胞には、少なくとも、Ｔメモリ幹細胞、エフェクターメモリＴ細胞、及びセントラルメモリＴ細胞が含まれる。メモリＴ細胞サブタイプは、長寿命であり、それらの同種抗原に再曝露されると、多数のエフェクターＴ細胞へと迅速に増幅することができる。

Ｔメモリ幹細胞（Ｔ_ｓｃｍ）は、本明細書ではＣＤ４５ＲＡ＋であると定義され、少なくとも以下の表面マーカー（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ９５＋）を有すると定義される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるＴメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋であり、以下の表面マーカー（ＣＤ２８＋、ＣＤ２７＋、ＣＸＣＲ３＋ ＣＤ１１ａ＋、ＩＬ－２Ｒβ＋、ＣＤ５８＋、及びＣＤ５７－）のうちの１つ以上を有していてもよい。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ２７＋、及びＣＤ９５＋である細胞を含む。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋及びＣＸＣＲ３＋である細胞を含む。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋及びＣＤ１１ａ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋及びＩＬ－２Ｒβ＋である細胞を含む。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋及びＣＤ５８＋である細胞を含む。いくつかの実施形態において、Ｔメモリ幹細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋及びＣＤ５７－である細胞を含む。このメモリ部分集合体は、自己複製のための幹細胞様能力、及びメモリ及びエフェクターＴ細胞の部分集合体を再構成するための多能性能力を有する。Ｔ_ＳＣＭ細胞は、典型的には、ほんのわずかな循環Ｔリンパ球を表し（例えば、５％を超える）、抗原再曝露に応答して急速に増殖し、炎症性サイトカインを放出する能力を有する。したがって、Ｔ_ＳＣＭ細胞は、メモリＴ細胞の部分集合体のサブセットである。Ｔ_ＳＣＭ細胞は、本明細書に開示されるように、常磁性人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）及び組換えＴ細胞成長因子カクテルを用いた濃縮及び増幅プロセスを使用して、作成及び／または制御することができる。

本開示によれば、セントラルメモリＴ細胞（Ｔ_ＣＭ細胞）は、本明細書でＣＤ６２Ｌ＋及びＣＤ４５ＲＡ－であると定義される。このメモリ部分集合体は、一般的に、リンパ節及び末梢循環中に見出される。エフェクターメモリＴ細胞（Ｔ_ＥＭ細胞）は、本明細書でＣＤ６２Ｌ－及びＣＤ４５ＲＡ－であると定義される。これらのメモリＴ細胞は、リンパ節ホーミング受容体を欠き、したがって末梢循環及び組織に見られる。ＴＥＭＲＡは、ＣＤ４５ＲＡを再発現する最終分化したエフェクターメモリ細胞（Ｔ_ｅｍｒａ）を表す。これらの細胞は分裂する能力を有しておらず、ＣＤ６２Ｌ－及びＣＤ４５ＲＡ＋である。

Ｔセントラルメモリ（Ｔ_ＣＭ）細胞は、自己複製のための能力を示し、本発明の実施形態によれば、長く生存する効果を得るためにも重要である。Ｔ_ＥＭ細胞も、自己複製のための能力をある程度有しており、細胞障害性機能にとって不可欠な遺伝子を強力に発現する。Ｔ_ＥＭＲＡ細胞も、強固な細胞障害性機能を提供するが、自己複製のための能力を示さない。

種々の実施形態における組成物は、悪性腫瘍細胞または他の標的細胞の強力な破壊に対する効果の持続時間を均衡させるために、Ｔ_ＳＣＭ、Ｔ_ＣＭ及びＴ_ＥＭ細胞から実質的に構成されるＣＴＬを含む。例えば、いくつかの実施形態において、これらの細胞は、メモリ表現型の少なくとも約７５％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％までを構成する。

種々の実施形態において、組成物中のＴ細胞は、少なくとも約３０％がセントラル及びエフェクターメモリ細胞であり、または少なくとも約４０％がセントラルもしくはエフェクターメモリ細胞であり、または少なくとも約５０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも約７０％がセントラルもしくはエフェクターメモリ細胞であり、または少なくとも約８０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、または少なくとも約９０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞である。

細胞組成物は、いくつかの実施形態において、約２０％未満の最終分化したメモリＴ細胞（例えば、Ｔ_ＥＭＲＡ細胞）であり、または約１０％未満もしくは約５％未満もしくは約４％未満の最終分化したメモリＴ細胞を含む。種々の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、約３０％以下のナイーブ細胞、またはいくつかの実施形態において、約１５％以下のナイーブ細胞、または約１０％以下のナイーブ細胞、または約５％以下のナイーブ細胞、または約４％以下のナイーブ細胞、または約３％以下のナイーブ細胞、または約２％以下のナイーブ細胞、または約１．５％以下のナイーブ細胞、または約１％以下のナイーブ細胞を含む。

種々の実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、約１％～約１００％のＴメモリ幹細胞、またはいくつかの実施形態において、約１％～約５０％のＴメモリ幹細胞、またはいくつかの実施形態において、約１％～約２５％のＴメモリ幹細胞、または約５％～約２５％のＴメモリ幹細胞、または約５％～約１５％のＴメモリ幹細胞を含む（すなわち、ナイーブ、Ｔ_ＳＣＭ、Ｔ_ＣＭ、Ｔ_ＥＭ Ｔ_ｅｍｒａ細胞の合計を１００％として）。

いくつかの実施形態において、Ｔ_ＳＣＭ及びＴ_ＣＭ細胞は、メモリ表現型の約３０％～約８０％、またはいくつかの実施形態において、メモリ表現型の約４０％～約８０％、またはいくつかの実施形態において、メモリ表現型の約４０％～約７０％を構成する。

種々の実施形態において、標的抗原に特異的なＴ細胞は、少なくとも約３０％がセントラル及びエフェクターメモリ細胞であり、または少なくとも約４０％がセントラルもしくはエフェクターメモリ細胞であり、または少なくとも約５０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、またはいくつかの実施形態において、少なくとも約７０％がセントラルもしくはエフェクターメモリ細胞であり、または少なくとも約８０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞であり、または少なくとも約９０％がセントラルもしくはエフェクターメモリＴ細胞である。いくつかの実施形態において、これらのメモリ細胞は、セントラルとエフェクターメモリ細胞が約１０：９０～約９０：１０である。いくつかの実施形態において、これらのＴ細胞は、セントラルとエフェクターメモリ細胞が約２５：７５～約７５：２５である。いくつかの実施形態において、メモリＴ細胞は、セントラルとエフェクターメモリＴ細胞が約４０：６０～約６０：４０である。標的抗原（複数可）に特異的なＴ細胞は、約２０％未満が最終分化したメモリＴ細胞（例えば、ＴＥＭＲＡ細胞）、または約１０％未満、または約５％未満、または約４％未満が最終分化したメモリＴ細胞である。種々の実施形態において、標的抗原に特異的なＴ細胞は、約３０％以下のナイーブ細胞、またはいくつかの実施形態において、約２０％以下のナイーブ細胞、またはいくつかの実施形態において、約１５％以下のナイーブ細胞、または約１０％以下のナイーブ細胞、または約５％以下のナイーブ細胞、または約２％以下、または１．５％、または１％のナイーブ細胞を含む。種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞は、約１％～約１００％のＴメモリ幹細胞、またはいくつかの実施形態において、約１％～約５０％のＴメモリ幹細胞、またはいくつかの実施形態において、約５％～約２５％のＴメモリ幹細胞、または約５％～約１５％のＴメモリ幹細胞を含む。これらのメモリＴ細胞は、常磁性人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を用いた濃縮及び増幅プロセスによって作成することができる。主にＴ_ＳＣＭ細胞を含有する集合体は、磁気濃縮または細胞選別を含む既知の技術を使用して、Ｔ_ＳＣＭ細胞について作成され、さらに単離または濃縮されてもよい。

種々の実施形態において、細胞組成物は、少なくとも９０％がＴ細胞であり、または少なくとも９５％がＴ細胞であり、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％がＴ細胞である。この開示の目的のために、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋細胞によって特徴付けられる。Ｔ細胞は、ほぼＣＤ８＋またはＣＤ４－である。本明細書で使用される場合、「ＣＤ８＋」及び「ＣＤ４－」という用語は、別途記載されない限り、相互に置き換え可能である。例えば、単離された細胞組成物は、約１０％未満、または約５％未満のＣＤ４＋Ｔ細胞、またはいくつかの実施形態において、約２％未満、約１．５％未満、または約１％未満のＣＤ４＋Ｔ細胞を含むことによって特徴付けされ得る。ＣＤ８＋Ｔ細胞をエクスビボで増幅するとき、ＣＤ４＋細胞は、ＣＤ８＋細胞を過剰に成長させ、成長シグナルが競合する傾向があり、外因性ＣＤ４＋Ｔ細胞は、養子移入時の頑強で耐久性のある応答にとって必要ではない。

多機能ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の存在が、ペプチドネオ抗原を用いたがんワクチン療法に対する応答と相関関係にあることが記載されてきた。Ｏｔｔ ＰＡ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｐｅｒｓｏｎａｌ ｎｅｏａｎｔｉｇｅｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｌａｎｏｍａ，Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２１７－２２１（２０１７）。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍細胞破壊を媒介するのに重要であることがさらに記載されている。Ｔｒａｎ Ｅ，Ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｔｈ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４４，６４１－６４５（２０１４）、Ｓａｈｉｎ Ｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ＲＮＡ ｍｕｔａｎｏｍｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ ｍｏｂｉｌｉｚｅ ｐｏｌｙ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｃａｎｃｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ５４７（７６６２）：２２２－２２６ （２０１７）を参照。本開示に関して、特に、その表現型が、頑強で耐久性のある応答を補助することができる場合、また、特に、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が十分な数で提供される場合、養子細胞組成物が、かなりの数の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のみを提供する必要があると考えられる。

種々の実施形態において、細胞組成物は、実質的にＣＤ２８＋である。例えば、種々の実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約９０％がＣＤ２８＋である。

種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞は、活性化すると多機能表現型を示す。例えば、活性化すると、Ｔ細胞は、増殖及び記憶のマーカーであるＩＬ－２の細胞内染色、他のＴ細胞を活性化し、ＭＨＣの記憶及び上方制御を誘導するＩＦＮ－γ産生、炎症促進性マーカーであるＴＮＦ－αの産生、及びグランザイム放出及び細胞障害活性のマーカーであるＣＤ１０７Ａのうちの２つ以上について陽性である。種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％が、これらのマーカーのうちの少なくとも３つを示す。種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％が、これらのマーカーのうちの４つ全てを示す。いくつかの実施形態において、多機能性は、標的殺傷アッセイを用いて評価または定量化され、標的殺傷アッセイは、ＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞が、ＭＨＣとの複合体中でペプチド抗原を提示する標的細胞を溶解する能力を評価するものである。

種々の実施形態において、細胞組成物は、γδＴ細胞をさらに含む。γδＴ細胞は、それらの表面上に独自のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する。αβＴ細胞とは対照的に、γδＴ細胞は、１つのγ鎖と１つのδ鎖で構成されるＴＣＲを有する。γδＴ細胞は、活性化のために抗原処理及びペプチドエピトープの主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の提示を必要としないと考えられる。γδＴ細胞は、脂質抗原及びホスホ抗原の認識において役割を有する場合があり、抗ウイルス保護及び抗腫瘍保護において役割を果たすことができる。Ｋａｌｙａｎ ａｎｄ Ｋａｂｅｌｉｔｚ，Ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ γδ Ｔ ｃｅｌｌｓ： ａ ｂｉｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｓｋｅｔｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｇｈｌｙ ｅｍｐａｔｈｅｔｉｃ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１３） １０，２１－２９を参照。γδＴ細胞は、サイトカインの放出によってＣＤ８＋細胞に対する補助を提供することができ、例えば、ＣＤ８＋細胞の活性化、増殖、及び分化に寄与する。さらに、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の観点でγδＴ細胞の臨床的意義が見出されており、特に、移植後のより高頻度のγδＴ細胞は、望ましい転帰と関連していた。Ｂｅｒｇｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ Ｇａｍｍａｄｅｌｔａ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ：Ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｖｏｌ．２０１８を参照。

種々の実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約２％のγδＴ細胞、または少なくとも約５％のγδＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約１０％のγδＴ細胞、または少なくとも約２０％のγδＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約２５％のγδＴ細胞、または少なくとも約３０％、または少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％のγδＴ細胞、または少なくとも約４５％のγδＴ細胞を含む。これらの実施形態において、γδＴ細胞は、Ｖδ１及びＶδ２細胞の片方または両方を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞の一部は、ＣＤ８＋である。種々の実施形態において、γδＴ細胞は、主にＣＤ２８＋である。

種々の実施形態に従って細胞組成物は、標的抗原（複数可）（例えば、腫瘍関連抗原またはウイルス関連抗原）に特異的なＣＤ８＋細胞の濃縮によって調製することができる。この細胞集合体は、供給源であるリンパ球中の主要なナイーブ細胞である場合であっても、培養物中で迅速に増幅し、本明細書に記載の細胞組成物に到達することができる。ＣＤ４＋細胞は、ＣＤ４＋細胞枯渇マイクロビーズを使用して、リンパ球から枯渇させることができる（抗原特異的濃縮の前または後）。

ＣＤ８＋細胞の抗原特異的濃縮は、常磁性ビーズを使用して行い、細胞集合体を陽性選択することができ、Ｔ細胞表面受容体の強力な磁気クラスタリングに起因して、ナイーブ細胞を活性化するという追加の利点を有し得る。例えば、常磁性ビーズまたはナノ粒子は、いくつかの実施形態において共刺激シグナル、例えば、ＣＤ２８のアゴニスト（例えば、ＣＤ２８の抗体アゴニスト）と共に、ペプチド抗原を提示する単量体または多量体（例えば、二量体）ＨＬＡリガンドを含んでいてもよい。これらの実施形態による例示的な方法は、ＷＯ２０１６／０４４５３０、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／２２６６３、及びＵＳ１０，９０８，９３９に記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態において、ＣＤ２８＋細胞も濃縮され、これは、抗原特異的な濃縮と同時であってもよい。ＣＤ２８は、Ｔ細胞上で発現され、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要とされる共刺激シグナルである。ＣＤ２８は、ナイーブＴ細胞上で構成的に発現される唯一のＢ７受容体である。ＣＤ２８共刺激を伴わないナイーブＴ細胞のＴＣＲとＭＨＣ抗原複合体との会合によって、免疫不応答性であるＴ細胞を生じる場合がある。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８＋細胞は濃縮されないが、ＣＤ２８アゴニストは、濃縮プロセス中に可溶性形態で添加されるか、または非常磁性ビーズに接合したものとして添加される。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８（接合した形態または接合していない形態で）は、増幅期のために細胞を活性化するために、抗原特異的濃縮の後に細胞に添加される。

種々の実施形態において、標的抗原に特異的なＴ細胞（例えば、ａＡＰＣまたはｐＡＰＣによって示されるペプチドの観点で）は、１～約１００個の標的抗原、または１～約７５個の標的抗原、または１～約５０個の標的抗原、または１～約２５個の標的抗原、または１～約２０個の標的抗原、または１～約１５個の標的抗原、または１～１０個の標的抗原、または１～５個の標的抗原に特異的である。種々の実施形態において、少なくとも３個、または少なくとも４個、または少なくとも５個の標的抗原が存在する。異なる標的抗原は、いくつかの実施形態において、重複するペプチドエピトープを含むことができる。これらのペプチド抗原に特異的なＴ細胞をバッチで濃縮及び増幅することができ、細胞組成物の迅速な並列製造を可能にする。いくつかの実施形態において、組成物は、５～１５個、または５～１０個のペプチド抗原に特異的なＴ細胞を含有する。組成物中の標的ペプチド抗原に対するＴ細胞特異性は、当該技術分野で周知であるように、ＭＨＣ多量体染色（例えば、二量体または四量体染色）によって定義される。

例えば、各ａＡＰＣが異なる別個の標的抗原を提示するナノ－ａＡＰＣのカクテルを使用して、複数の抗原に対してＴ細胞を同時に濃縮することができる。例えば、２～１０個の抗原に特異的なＴ細胞を、リンパ球供給源から同時に濃縮することができる。この実施形態において、各々が異なるＭＨＣ－ペプチドを有するいくつかの異なるナノ－ａＡＰＣバッチを組み合わせ、これを使用して、目的の抗原の各々に対してＴ細胞を同時に濃縮する。得られたＴ細胞プールは、これらの抗原各々に対して活性化され、培養物中で一緒に増幅される。これらの抗原は、単一の治療介入、例えば、単一の腫瘍または悪性細胞に存在する複数の抗原に関連し得る。

標的ペプチド抗原は、一般的に、ＨＬＡ－Ａ、Ｂ、またはＣ分子複合体、及びいくつかの実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２分子複合体による提示に好適である。

種々の実施形態において、標的ペプチド抗原は、腫瘍由来または腫瘍特異的な抗原を含め、腫瘍またはがん関連抗原である。腫瘍関連抗原に特異的なＴ細胞は、多くは非常に稀であり、多くの場合には、健康な個体の末梢血において検出不可能である。さらに、この細胞は、特にドナーＴリンパ球を使用する場合、しばしばナイーブ表現型である。Ｑｕｉｎｔａｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ ｍｅｌａｎｏｍａ（ＰＲＡＭＥ） ｔａｒｇｅｔ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ ２００８；１１２：１８７６－１８８５を参照。これは、多くは、ウイルス特異的Ｔ細胞と腫瘍抗原特異的Ｔ細胞との間で観察される区別である。

「腫瘍関連抗原」または「がん特異的抗原」としては、その由来となる腫瘍または悪性腫瘍細胞によって排他的に発現される独自の腫瘍またはがん抗原、多くの腫瘍で発現されるが、正常な成人組織では発現されない共通の腫瘍抗原（がん胎児抗原）、及びそこから腫瘍が生じた正常組織によっても発現される腫瘍特異的抗原が挙げられる。腫瘍関連抗原は、例えば、胚抗原、異常な翻訳後修飾を有する抗原、分化抗原、変異がん遺伝子もしくは腫瘍抑制因子の産物、融合タンパク質、またはがんウイルスタンパク質であってもよい。

いくつかの実施形態において、標的ペプチド抗原は、血液癌、例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫と関連するか、またはこれらに由来する１つ以上を含む。例えば、血液悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、症二球性白血病、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群、悪性皮膚Ｔ細胞、菌状息肉腫、非ＭＦ皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、及びＴ細胞を豊富に含む皮膚リンパ組織過形成であってもよい。他の実施形態において、標的ペプチド抗原は、黒色腫、結腸癌、十二指腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、腺管癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮内膜癌、精巣癌、胃癌、異形成性口腔粘膜、ポリポーシス、頭頸部癌、浸潤性口腔癌、非小細胞肺癌腫、小細胞肺癌癌、中皮腫、移行性及び扁平上皮細胞尿癌腫、脳癌、神経芽腫、ならびに神経膠腫を含む固形腫瘍に関連するか、またはこれらに由来する１つ以上を含む。

種々の腫瘍関連抗原が、当該技術分野で既知である。がん胎児抗原及び胚抗原としては、がん胎児性抗原及びアルファ－フェトプロテイン（通常、発生中の胚でのみ高度に発現するが、それぞれ肝臓及び結腸の腫瘍によって頻繁に高度に発現する）、ＭＡＧＥ－１及びＭＡＧＥ－３（黒色腫、乳癌、及び神経膠腫で発現する）、胎盤アルカリホスファターゼシアリル－ルイスＸ（腺癌で発現する）、ＣＡ－１２５及びＣＡ－１９（胃腸、肝臓、及び婦人科の腫瘍で発現する）、ＴＡＧ－７２（大腸腫瘍で発現する）、上皮糖タンパク質２（多くの癌腫で発現する）、膵臓癌胎児抗原、５Ｔ４（胃癌腫で発現する）、アルファフェトプロテイン受容体（複数の腫瘍型、特に、乳腺腫瘍で発現する）、ならびにＭ２Ａ（胚細胞新形成で発現する）が挙げられる。

腫瘍関連分化抗原としては、チロシナーゼ（黒色腫で発現する）及び特定の表面免疫グロブリン（リンパ腫で発現する）が挙げられる。

変異がん遺伝子または腫瘍抑制因子産物としては、両方とも多くの腫瘍型で発現するＲａｓ及びｐ５３、Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ（乳癌及び婦人科のがんで発現する）、ＥＧＦ－Ｒ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、網膜芽細胞腫遺伝子産物、ｍｙｃ（肺癌に関連する）、ｒａｓ、ｐ５３、乳房腫瘍に関連する非変異体、ＭＡＧＥ－１、及びＭＡＧＥ－３（黒色腫、肺癌、及び他のがんに関連する）が挙げられる。融合タンパク質としては、慢性骨髄性白血病で発現するＢＣＲ－ＡＢＬが挙げられる。がんウイルスタンパク質としては、子宮頸癌腫にみられるＨＰＶ１６型、Ｅ６、及びＥ７が挙げられる。

組織特異的抗原としては、メラノトランスフェリン及びＭＵＣ１（膵臓癌及び乳癌で発現する）、ＣＤ１０（以前は一般的な急性リンパ芽球性白血病抗原、またはＣＡＬＬＡとして知られる）、または表面免疫グロブリン（Ｂ細胞白血病及びリンパ腫で発現する）、ＩＬ－２受容体のα鎖、Ｔ細胞受容体、ＣＤ４５Ｒ、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋（Ｔ細胞白血病及びリンパ腫で発現する）、前立腺特異的抗原及び前立腺酸－ホスファターゼ（前立腺癌腫で発現する）、ＧＰ１００、ＭｅｌａｎＡ／Ｍａｒｔ－１、チロシナーゼ、ｇｐ７５／ｂｒｏｗｎ、ＢＡＧＥ、及びＳ－１００（黒色腫で発現する）、サイトケラチン（種々の癌腫で発現する）、ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ３７（リンパ腫で発現する）が挙げられる。

腫瘍関連抗原としては、改変された糖脂質及び糖タンパク質抗原、例えば、ノイラミン酸を含有する糖スフィンゴ脂質（例えば、ＧＭ２及びＧＤ２、黒色腫及びいくつかの脳腫瘍で発現する）、癌腫において以上に発現し得る血液群抗原、特に、Ｔ及びシアル酸化Ｔｎ抗原、及びムチン、例えば、ＣＡ－１２５及びＣＡ－１９－９（卵巣癌腫で発現される）、または不十分なグリコシル化ＭＵＣ－１（乳房及び膵臓癌腫で発現する）も挙げられる。

例えば、いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１０、及びＭＵＣ－１抗原のうちの１つ以上が、膀胱癌に関連している。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が脳癌に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１、サバイビン、及びＣＭＶ抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が乳癌に関連しており、ＭＵＣ－１、スリビン（Ｓｕｒｉｖｉｎ）、ＷＴ－１、ＨＥＲ－２、及びＣＥＡ抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が子宮頸癌に関連しており、ＨＰＶ抗原を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が大腸癌に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１、サバイビン、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、及びＣＥＡ抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が食道癌に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が頭頸部癌に関連していてもよく、ＨＰＶ抗原を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、標的抗原が腎臓癌または肝臓癌に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、標的抗原が肺癌に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１、サバイビン、ＷＴ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１０、及びＭＵＣ－１抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が黒色腫に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１、サバイビン、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＲＴ－１、及びＧＰ－１００のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上のペプチド抗原が卵巣癌に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＷＴ－１、及びメソテリン抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が前立腺癌に関連しており、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＰＳＡ、ＰＡＰ、及びＰＳＭＡ抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、標的抗原が肉腫に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原がリンパ腫に関連しており、ＥＢＶ抗原を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原が多発性骨髄腫に関連しており、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＷＴ－１、ＸＢＰ１－ＵＳ、ＸＢＰ１－ＳＰ、ＣＤ１３８、ＣＳ１（ＳＬＡＭＦ７）、及びＳＯＸ２抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、多発性骨髄腫と関連する標的抗原は、ＵＳ９，０９６，６８１に開示されるペプチド抗原のうちの２個以上（または３個、４個、５個、または６個）であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。抗原エピトープを含む例示的なペプチドとしては、ＸＢＰ１非スプライス（ＵＮ）_{１８５－１９３}、ＸＢＰ１－ＵＳ_{１８４－１９２}、ＸＢＰ１スプライス（ＳＰ）_{２２３－２３１}、ＸＢＰ１－ＳＰ_{３６７－３７５}、ＣＤ１３８_{２６５－２７３}、ＣＤ１３８_{２６０－２６８}、ＣＳ１_{２４０－２４８}、ＣＳ１_{２３９－２４７}、ＮＹ－ＥＳＯ１_{１５７－１６５Ａ}、及びＳＯＸ２_{１１８－１２７}が挙げられる。いくつかの実施形態において、標的抗原は、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＷＴ－１、ＳＯＸ－２、ＣＤ１３８、及びＣＳ１を含む。いくつかの実施形態において、標的抗原は、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＷＴ－１、ＳＯＸ－２、ＣＤ１３８、ＣＳ１、及びＸＢＰ１－ＵＳ及び／またはＸＢＰ１－ＳＰを含む。いくつかの実施形態において、ペプチド抗原は、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＷＴ－１、及びＳＯＸ－２を含む。表２を参照。

いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原は、急性骨髄性白血病または骨髄異形成症候群に関連しており、サバイビン、ＷＴ－１、ＰＲＡＭＥ、ＲＨＡＭＭ、ＰＲ３、及びサイクリンＡ１抗原のうちの１つ以上（そのうち１つ、２つ、３つ、４つ、または５つを含む）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、標的抗原は、以下の表１からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または全ての標的抗原を含む。

いくつかの実施形態において、１つ以上の標的抗原は、ＸＢＰ１－ＵＳ、ＸＢＰ１－ＳＰ、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＮＹ－ＥＳＯ１、ＳＯＸ２、ＥＢＶ、インフルエンザ、ＣＭＶ、ＲＨＡＭＭ、ＰＲ３、Ｍａｒｔ－１／Ｍｅｌａｎ Ａ、ｇｐ１００、ＣＭＶｐｐ６５、及びインフルエンザマトリックスタンパク質Ｍ１抗原のうちの１つ以上を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、標的抗原は、以下の表２からの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の標的抗原を含み、これらは、多発性骨髄腫、黒色腫、または様々なウイルス性疾患もしくは感染症を標的とするのに有用である。

いくつかの実施形態において、１つ以上の標的ペプチド抗原は、ネオ抗原である。例えば、いくつかの実施形態において、患者に特異的なネオ抗原が同定され、ａＡＰＣをローディングするために合成される。いくつかの実施形態において、３～１０個のネオ抗原が、患者の悪性腫瘍の遺伝子解析（例えば、悪性腫瘍細胞の核酸配列決定によって）、次いで予測バイオインフォマティクスによって同定される。いくつかの実施形態において、抗原は、天然の変異していないがん抗原であり、その多くは既知である。

種々の実施形態において、標的ペプチド抗原のうちの少なくとも１つが、低頻度前駆Ｔ細胞によって認識される。これらの実施形態によれば、本発明は、養子療法のためのこれらの細胞の迅速な活性化及び増幅を可能にする。

いくつかの実施形態において、標的ペプチド抗原は、病原体、例えば、ウイルス、細菌、真菌、または寄生虫病原体と関連するか、またはこれらに由来する少なくとも１つを含む。例えば、少なくとも１つのペプチド抗原は、ＨＩＶ、肝炎（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、またはＤ）ＣＭＶ、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザ、ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ１または２、または水痘帯状疱疹）、及びアデノウイルスと関連し得る。例えば、ＣＭＶは、臓器移植患者にみられる最も一般的なウイルス性病原体であり、骨髄移植または末梢血幹細胞移植を受ける患者における罹患率及び死亡率の主な原因である。このことは、これらの患者の免疫不全状態に起因するものであり、血清反応陽性患者における潜在ウイルスの再活性化または血清反応陰性個体における日和見感染を可能にする。これらの実施形態において、患者は、病原体抗原に特異的なＴ細胞を含む養子免疫療法を受けてもよい。この方法は、移植手技の開始前に、患者または適切なドナーに由来するウイルス特異的ＣＴＬの生成を伴い得る。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つの標的抗原は、原虫、細菌、真菌（単細胞及び多細胞の両方）、ウイルス、プリオン、細胞内寄生虫、蠕虫、及び他の感染剤に関連する抗原を含む、病原体関連抗原である。

細菌抗原としては、グラム陽性球菌、グラム陽性桿菌、グラム陰性細菌、嫌気性細菌、例えば、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａｃｅａｅ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｅ、Ｃａｐｔｏｐｈａｇａｃｅａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｃｅａｅ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｎｏｃａｒｄｉａｃｅａｅ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａｃｅａｅ、Ｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅの科の生物、ならびにＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ、Ｅｗｉｎｇｅｌｌａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｖｉｎｅａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＴｒｏｐｈｅｒｙｍａの属の生物の抗原が挙げられる。

原虫感染剤の抗原としては、ｍａｌａｒｉａｌ ｐｌａｓｍｏｄｉａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ種及びＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ種の抗原が挙げられる。

真菌抗原としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｃｉｏｉｄｅｓ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ、Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ目の生物、黒色真菌症及びマイセトーマを誘導する生物、ならびにＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ、及びＭａｌａｓｓｅｚｉａの属の生物の抗原が挙げられる。

ウイルスペプチド抗原としては、限定されないが、アデノウイルス、ヘルペス単純ウイルス、パピローマウイルス、呼吸器多核体ウイルス、ポックスウイルス、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、ＥＢＶ、肝炎、及びＣＭＶの抗原が挙げられる。特に有用なウイルスペプチド抗原としては、ＨＩＶタンパク質、例えば、ＨＩＶ ｇａｇタンパク質（限定されないが、膜アンカー（ＭＡ）タンパク質、コアカプシド（ＣＡ）タンパク質及びヌクレオカプシド（ＮＣ）タンパク質を含む）、ＨＩＶポリメラーゼ、インフルエンザマトリックス（Ｍ１）タンパク質及びインフルエンザウイルスヌクレオカプシド（ＮＰ）タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｂ型肝炎コアタンパク質（ＨＢｃＡｇ）、肝炎タンパク質（ＨＢｅＡｇ）、Ｂ型肝炎ＤＮＡポリメラーゼ、Ｃ型肝炎抗原などが挙げられる。

いくつかの実施形態において、標的ペプチド抗原は、１つ以上の腫瘍関連抗原と、１つ以上のウイルス関連抗原（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、インフルエンザ、またはアデノウイルス）とを含み、ＨＳＣＴ後の回復を複雑にする一般的な病原体から保護しつつ、抗腫瘍応答を提供する。

ＨＳＣＴを受けた患者は、免疫不全状態を考慮すると、感染症の特別なリスクにさらされる。これらの患者の免疫不全状態が、血清反応陽性患者における潜在ウイルスの再活性化または血清反応陰性個体における日和見感染を可能にする。例えば、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）は、移植患者のかなりの割合で発生し、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）感染から生じる。ＥＢＶ感染は、米国において、成人集合の約９０％に存在すると考えられる。活性ウイルス複製及び感染は、免疫系によって抑制されるが、ＣＭＶの場合と同様に、移植療法によって免疫不全状態にされた個体は、制御するＴ細胞集合体を失い、ウイルスの再活性化を可能にしてしまう。このことは、移植プロトコルの深刻な障害を示す。ＥＢＶは、種々の血液癌及び非血液癌における腫瘍促進にも関与し得る。

さらに他の実施形態において、細胞組成物は、腫瘍関連抗原に特異的なＴ細胞を含み、病原体関連Ｔ細胞が、バイスタンダー細胞として提供される。具体的には、ＨＬＡ－ペプチド複合体及び抗ＣＤ２８を両方とも用いた選択に基づいてＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮することによって、バイスタンダー細胞が濃縮され、特に、抗原特異的な活性化を引き起こすことなく、これらの細胞の非特異的な増幅の一部を引き起こすことが可能なＴ細胞成長因子カクテルを用いる場合に、増幅される。これらの実施形態において、組成物の大部分が、標的ペプチドに特異的なＴ細胞であるが（例えば、５％～７５％、または１０～５０％）、残りのＴ細胞は、共通の病原体に対する免疫系のいくつかの再構成を提供し、このことは、特に、移植後に有益である。例えば、組成物は、ＣＭＶ、ＥＢＶ、インフルエンザ、及びアデノウイルスに特異的なＴ細胞を含んでいてもよい。各場合において、病原体特異的Ｔ細胞は、組成物の０．１％～約４％で存在していてもよい。

種々の実施形態において、本発明は、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃縮及び増幅によって調製される組成物を伴う。前駆Ｔ細胞は、患者から、または好適なＨＬＡ適合ドナーから得ることができる。供給源のＴ細胞は、新鮮な試料または凍結した試料のいずれかであってもよい。前駆Ｔ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、脾臓組織、バフィーコート画分、及び腫瘍を含む、ＷＢＣを含むいくつかの供給源から得ることができる。いくつかの実施形態において、前駆Ｔ細胞は、当業者に知られる任意の数の技法を使用して、対象から回収した血液単位から得られる。例えば、個体の循環血液由来の前駆Ｔ細胞は、アフェレシスまたは白血球分離によって得ることができる。アフェレシス産物は、典型的には、Ｔ細胞及び前駆Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球細胞、赤血球細胞、及び血小板を含むリンパ球を含有する。白血球分離は、白血球細胞が血液試料から分離される実験手順である。

アフェレシスにより回収された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、その後の処理工程のために、細胞を適切な緩衝液または培地に入れてもよい。洗浄工程は、当業者に既知の方法によって、例えば、半自動「フロースルー」遠心分離機の使用によって達成することができる。洗浄後、細胞は、種々の生体適合性緩衝液、例えば、Ｃａを含まず、Ｍｇを含まないＰＢＳに再懸濁されてもよい。あるいは、アフェレシス試料の望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁させてもよい。

所望な場合、前駆Ｔ細胞は、赤血球細胞を溶解させ、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）グラジエントによる遠心分離によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離することができる。

特定の実施形態において、白血球は、白血球分離によって回収され、その後、例えば、ＣＤ４＋細胞の試料を枯渇させ、及び／またはＣＤ８＋細胞を陽性濃縮することによって、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮してもよい。いくつかの実施形態において、ＮＫ細胞などの他の細胞型が枯渇している。次いで、ＣＤ８濃縮された細胞を、抗原特異的Ｔ細胞についてさらに濃縮してもよい。

種々の実施形態において、免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を含む試料を、磁気特性を有する人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と接触させる。常磁性材料は、磁場に対して小さな陽性感受性を有する。これらの材料は、磁場によって引き寄せられ、外的な磁場が除去されると、この材料は、磁気特性を保持しない。例示的な常磁性材料としては、限定されないが、マグネシウム、モリブデン、リチウム、タンタル、及び酸化鉄が挙げられる。磁気濃縮に好適な常磁性ビーズは、市販されている（ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標）、ＭＡＣＳ ＭＩＣＲＯＢＥＡＤＳ（商標）、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）。いくつかの実施形態において、ａＡＰＣ粒子は、鉄デキストランビーズ（例えば、デキストランコーティングされた酸化鉄ビーズ）である。

抗原提示複合体は、抗原結合溝を含み、一般的にＭＨＣクラスＩであり、連結されるか、またはつながれ、二量体または多量体のＭＨＣを提供することができる。いくつかの実施形態において、ＭＨＣは単量体であるが、ナノ粒子上でのそれらの密接な会合は、アビディティ及び活性化に十分である。いくつかの実施形態において、ＭＨＣは二量体である。二量体ＭＨＣクラスＩリガンドは、免疫グロブリン重鎖配列への融合によって構築することができ、次いで、（会合する軽鎖の有無にかかわらず）１つ以上のジスルフィド結合によって会合する。ＭＨＣ多量体は、ペプチドまたは化学リンカーを介した直接的な連結によって作製することができ、またはビオチン部分を介したストレプトアビジンとの会合による多量体であってもよい。いくつかの実施形態において、抗原提示複合体は、免疫グロブリン配列との融合を伴うＭＨＣクラスＩ複合体である。

免疫グロブリン配列を有するＭＨＣクラスＩ分子複合体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，２６８，４１１号に記載される。これらのＭＨＣクラスＩ分子複合体は、免疫グロブリン重鎖の末端で構造的にインタクトな様式で形成され得る。抗原ペプチドが結合しているＭＨＣクラスＩ分子複合体は、抗原特異的リンパ球受容体（例えば、Ｔ細胞受容体）に安定して結合することができる。種々の実施形態において、免疫グロブリン重鎖配列は、全長ではないが、Ｉｇヒンジ領域と、ＣＨ１、ＣＨ２、及び／またはＣＨ３ドメインのうちの１つ以上とを含む。Ｉｇ配列は、可変領域を含んでいてもよく、または含んでいなくてもよいが、可変領域配列が存在する場合、可変領域は、完全であってもよく、または部分的であってもよい。複合体は、免疫グロブリン軽鎖をさらに含んでいてもよい。可変鎖配列を欠く（及び任意の軽鎖を欠く）ＭＨＣクラスＩリガンド（例えば、ＨＬＡ－Ｉｇ）を、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１０５５４２に記載されるように、粒子への部位特異的接合と共に使用してもよい。

例示的なＭＨＣクラスＩ分子複合体は、少なくとも２つの融合タンパク質を含む。第１の融合タンパク質は、第１のＭＨＣクラスＩα鎖と、第１の免疫グロブリン重鎖（またはヒンジ領域を含むその一部）とを含み、第２の融合タンパク質は、第２のＭＨＣクラスＩα鎖と、第２の免疫グロブリン重鎖（またはヒンジ領域を含むその一部）とを含む。第１及び第２の免疫グロブリン重鎖が会合し、ＭＨＣクラスＩ分子複合体を形成し、これは２つのＭＨＣクラスＩペプチド結合溝を含む。免疫グロブリン重鎖は、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＧ２β、ＩｇＧ２α、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、またはＩｇＡの重鎖であってもよい。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ重鎖を使用して、ＭＨＣクラスＩ分子複合体を形成する。多価ＭＨＣクラスＩ分子複合体が望ましい場合、ＩｇＭまたはＩｇＡ重鎖を使用して、それぞれ五価分子または四価分子を提供することができる。

例示的なクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅを含み、これらは、個別に、または任意の組み合わせで使用され得る。いくつかの実施形態において、抗原提示複合体は、ＨＬＡ－Ａ２リガンドである。本明細書で使用される場合、ＭＨＣという用語は、各事例においてＨＬＡによって置き換えることができる。

いくつかの実施形態において、免疫グロブリン配列は、ヒト化モノクローナル抗体配列である。

ａＡＰＣは、抗ＣＤ２８リガンドなどの「シグナル２」を含有し得る。シグナル２は、一般的に、Ｔ細胞に影響を与える分子であり、すなわち、前駆Ｔ細胞または抗原特異的Ｔ細胞に対して生物学的効果を有する分子である。特定の実施形態において、シグナル２は、Ｔ細胞共刺激分子である。Ｔ細胞共刺激分子は、抗原特異的Ｔ細胞の活性化に寄与する。かかる分子としては、限定されないが、ＣＤ２８（抗体を含む）、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８６（Ｂ７－２）、Ｂ７－Ｈ３、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０Ｌ）、Ｂ７ｈ（Ｂ７ＲＰ－１）、ＣＤ４０に特異的に結合する分子、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭに特異的に結合する抗体、ＣＤ４０Ｌに特異的に結合する抗体、及びＯＸ４０に特異的に結合する抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、共刺激分子（シグナル２）は、抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその一部、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、または一本鎖抗体、または他の抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体、もしくは抗原結合活性を有するその一部であるか、または完全ヒト抗体、もしくは抗原結合活性を有するその一部である。

（同じまたは別個のナノ粒子上で）用いられ得る共刺激リガンドの組み合わせとしては、抗ＣＤ２８／抗ＣＤ２７及び抗ＣＤ２８／抗４１ＢＢが挙げられる。これらの共刺激リガンドの比は、増幅をもたらすように変化させることができる。

例示的なシグナル１及びシグナル２リガンドは、ＷＯ２０１４／２０９８６８に記載されており、遊離スルフヒドリル（例えば、対形成していないシステイン）を有し、その結果、定常領域が、適切な化学官能性を有するナノ粒子支持体と連結し得るリガンドを記載している。

ナノａＡＰＣに有用な接着分子を使用して、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆体へのナノａＡＰＣの接着を媒介することができる。有用な接着分子として、例えば、ＩＣＡＭ－１及びＬＦＡ－３が挙げられる。

いくつかの実施形態において、シグナル１は、ペプチド－ＨＬＡ－Ａ２複合体によって提供され、シグナル２は、Ｂ７．１－Ｉｇまたは抗ＣＤ２８によって提供される。例示的な抗ＣＤ２８モノクローナル抗体は、９．３ｍＡｂであり（Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９３ １７７：１６５）、特定の実施形態においてヒト化されていてもよく、及び／または完全なインタクト抗体またはその抗原結合断片としてビーズに接合されてもよい。

磁気活性化は、いくつかの実施形態において、２分間～５時間、または５分間～２時間行われ、その後、少なくとも５日間、２週間まで、または３週間まで、培養物中で増幅させてもよい。いくつかの実施形態において、磁気活性化は、少なくとも２分間であるが、３０分未満、または１５分未満（例えば、約５または１０分間）起こる。得られるＣＤ８＋Ｔ細胞は、表現型が特性決定され、Ｔメモリ幹細胞（Ｔ_ｓｃｍ）の存在、及び高いセントラル及びエフェクターメモリ表現型を確認してもよい。

いくつかの実施形態は、増幅中にＴ細胞成長因子を使用し、このことが、Ｔ細胞の増殖及び／または分化に影響を与える。Ｔ細胞成長因子の例としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、インターフェロン）及びスーパー抗原が挙げられる。所望な場合、サイトカインは、融合タンパク質を含む分子複合体中に存在していてもよく、またはａＡＰＣによってカプセル化されていてもよく、または可溶性形態で提供されてもよい。特に有用なサイトカインとしては、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－γ、及びＣＸＣＬ１０が挙げられる。いくつかの実施形態において、成長因子は、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＮＦ－γからの３個、４個、５個、または６個を含む。これらまたは他の実施形態において、細胞は、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０から選択される１つ、２つ、または３つのサイトカインを含むサイトカイン存在下、培養物中で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－７及び／またはＩＬ－２１及び／またはＩＬ－１５の存在下で培養されない。細胞は、培養物中で１～４週間、例えば、約２週間（約１４日）、または約３週間、増幅させることができる。

いくつかの実施形態において、細胞は、４～８個のサイトカインの存在下、培養物中で増幅され、Ｔ細胞増幅（抗原特異的Ｔ細胞増幅を含む）、活性化、及びメモリ表現型の間での均衡を達成する。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－４存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－４及びＩＬ－１β存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－４、ＩＬ－６、及びＩＬ－１β存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１β存在下、培養物中で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－１０存在下でさらに増幅される。種々の実施形態において、これらのサイトカインは、人工または天然の抗原提示細胞と組み合わせて使用され、抗原特異的Ｔ細胞を増幅させる。

いくつかの実施形態において、成長因子は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、ＩＬ－１βと、任意選択でＩＬ－１０からなるか、またはこれらから本質的になる。

いくつかの実施形態において、ＩＬ－２は、培養開始時に、１ｍＬあたり１０～２００国際単位（ＩＵ）、例えば、約２０～約１００ＩＵ／ｍＬ、または約２０～約６０ＩＵ／ｍＬで存在する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２は、培養開始時に、約３０～約５０ＩＵ／ｍｌ（例えば、約４０ＩＵ／ｍｌ）で存在する。ＩＬ－２のＩＵ（８６／５００ＮＩＢＳＣ）は、例えば、Ｇｅａｒｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｒｄ（１９８７）のＬｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｃｌｅｍｅｎｓ，ＭＪ ｅｔ ａｌ．（編集）：ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ．２９５によって記載されるように、増殖アッセイを用いて（例えば、ＣＴＬＬ－２細胞株を用いて）決定することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２は、培養開始時に、約２～約２５ｎｇ／ｍｌで、または約２～約１５ｎｇ／ｍｌ、例えば、約５～約１５ｎｇ／ｍｌで存在する。

これらまたは独立した実施形態において、ＩＬ－４は、培養開始時に、１ｍＬあたり０．２～２５国際単位（ＩＵ）、例えば、約０．５～約１０ＩＵ／ｍＬ、または約０．５～約５ＩＵ／ｍＬで存在する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－４は、培養開始時に、約１ＩＵ／ｍｌで存在する。ＩＬ－４のＩＵ（８８／６５６ ＮＩＢＳＣ）は、例えば、Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，（１９９１）ＩＬ－１ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ａ ｆａｃｔｏｒ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ，ＴＦ－１．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：５７１－５７７によって記載されるように、増殖アッセイを用いて（例えば、ＴＦ－１細胞株を用いて）決定することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－４は、培養開始時に、約０．２～約２ｎｇ／ｍｌ、例えば、約０．２～約１ｎｇ／ｍｌ（例えば、約０．５ｎｇ／ｍｌ）で存在する。

これらまたは独立した実施形態において、ＩＬ－６は、培養開始時に、１ｍＬあたり１０～２００国際単位（ＩＵ）、例えば、約２５～約１００ＩＵ／ｍＬ、例えば、２５～７５ＩＵ／ｍＬで存在してもよい。いくつかの実施形態において、ＩＬ－６は、培養開始時に、約４０～約６０ＩＵ／ｍｌ（例えば、約５０ＩＵ／ｍｌ）で存在する。ＩＬ－６のＩＵ（８９／５４８ＮＩＢＳＣ）は、例えば、Ｇａｉｎｅｓ－Ｄａｓ ＲＥ ａｎｄ Ｐｏｏｌｅ Ｓ．（１９９３） Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １６０：１４７－１５３に記載されるように、増殖アッセイを使用して（例えば、Ｂ９細胞株を使用して）定義することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－６は、培養開始時に、約０．２～約１０ｎｇ／ｍｌ、例えば、約０．２～約５ｎｇ／ｍｌ（例えば、約０．２～１ｎｇ／ｍｌ、または約０．５～２ｎｇ／ｍｌ）で存在する。

これらまたは独立した実施形態において、インターフェロンガンマ（ＩＮＦ－γ）は、培養開始時に、１ｍＬあたり１０～２００国際単位（ＩＵ）、例えば、約２０～約１００ＩＵ／ｍＬ、例えば、２０～６０ＩＵ／ｍＬで存在してもよい。いくつかの実施形態において、ＩＮＦ－γは、培養開始時に、約３０～約５０ＩＵ／ｍｌ（例えば、約４０ＩＵ／ｍｌ）で存在する。ＩＮＦ－γのＩＵ（８７／５８６ ＮＩＢＳＣ）は、例えば、Ｍｅａｇｅｒ Ａ．（１９８７）のＬｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ，ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｃｌｅｍｅｎｓ，ＭＪ，ｅｔ ａｌ．（編集）：ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ．１２９によって記載されるように、抗ウイルスアッセイを用いて（例えば、ＥＭＣで感染したＨｅｌａ細胞を用いて）定義することができる。いくつかの実施形態において、ＩＮＦ－γは、培養開始時に、約０．５～約２０ｎｇ／ｍｌ、例えば、約０．５～約１０ｎｇ／ｍｌ、または約０．５～約５ｎｇ／ｍｌ、または約１～約１０ｎｇ／ｍｌ（例えば、１～５ｎｇ／ｍｌ）で存在する。

ＩＬ－１βは、培養開始時に、１ｍＬあたり５～１００国際単位（ＩＵ）、例えば、約１０～約５０ＩＵ／ｍＬ、例えば、約１０～３０ＩＵ／ｍＬで存在してもよい。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１βは、培養開始時に、約１０～約２０ＩＵ／ｍｌ（例えば、約１５ＩＵ／ｍｌ）で存在する。ＩＬ－１βのＩＵ（８６／６８０ ＮＩＢＳＣ）は、例えば、Ｐｏｏｌｅ，Ｓ．ａｎｄ Ｇａｉｎｅｓ－Ｄａｓ，ＲＥ （１９９１）Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ａｌｐｈａ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ ｂｅｔａ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４２：１－１３に記載されるように、増殖アッセイを使用して（例えば、Ｄ．１０．Ｇ４．１細胞株を使用して）定義することができる。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１βは、培養開始時に、約０．１～５ｎｇ／ｍｌで、または約０．２～約５ｎｇ／ｍｌ、例えば、約０．２～約２ｎｇ／ｍｌ、または約０．２～約１ｎｇ／ｍｌで存在する。

種々の実施形態において、細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βを含むか、またはこれらからなる成長因子カクテルの存在下で培養される。いくつかの実施形態において、ＩＬ－２及びＩＮＦ－γの相対活性（それぞれのＩＵによって定義される）は、約０．５：１～約１：０．５（例えば、約１：１）である。これらまたは独立した実施形態において、ＩＬ－２及びＩＬ－６の相対活性（それぞれのＩＵによって定義される）は、約０．５：１～約１：０．５である。これらまたは独立した実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－６、及び／またはＩＦＮ－γに対するＩＬ－１βの相対活性（それぞれのＩＵによって定義される）は、１：４～１：２（例えば、約１：３）である。これらまたは独立した実施形態において、ＩＬ－２、ＩＬ－６、及び／またはＩＦＮ－γに対するＩＬ－４の相対活性（それぞれのＩＵによって定義される）は、１：３０～１：６０である。これらまたは独立した実施形態において、ＩＬ－１βに対するＩＬ－４の相対活性（それぞれのＩＵによって定義される）は、約１：５～約１：２５、例えば、約１：１０～約１：２０である。

いくつかの実施形態において、培養開始時の各成長因子（ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１β）の特異的活性（単位ＩＵ）は、培養物中の全ての成長因子の合計ＩＵが１００％とみなされるときの割合として示すことができる。例えば、いくつかの実施形態において、培養物中の各成長因子の割合は、以下の通りであってもよい。
２０％～４０％のＩＬ－２（例えば、２０～３０％のＩＬ－２）、
０．５％～５％のＩＬ－４（例えば、１～３％のＩＬ－４）、
２５％～５０％のＩＬ－６（例えば、３０～４０％のＩＬ－６）、
２０％～４０％のＩＦＮ－γ（例えば、２０～３０％のＩＦＮ－γ）、及び
５％～２０％のＩＬ－１β（例えば、５～１５％のＩＬ－１β）。

ａＡＰＣナノ粒子は、任意の材料から作製することができ、材料は、所望の磁気特性について適切に選択することができ、例えば、鉄、ニッケル、コバルト、または希土類金属の合金などの金属を含んでいてもよい。常磁性材料には、マグネシウム、モリブデン、リチウム、タンタル、及び酸化鉄も含まれる。材料（細胞を含む）の濃縮に好適な常磁性ビーズは、市販されており、鉄デキストランビーズ、例えば、デキストランコーティングされた酸化鉄ビーズが含まれる。磁気特性が必要とされない本発明の態様において、ナノ粒子は、セルロース、セラミック、ガラス、ナイロン、ポリスチレン、ゴム、プラスチック、またはラテックスなどの非金属または有機（例えば、ポリマー）材料から作製することもできる。ナノ粒子の調製のための例示的な材料において、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）またはＰＬＡ、及びこれらのコポリマーであり、これらの実施形態と関連して使用され得る。使用され得るポリマー及びコポリマーを含む他の材料としては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ２０１４／２５８８９に記載されるものが挙げられる。

種々の実施形態において、粒子は、約１０～約５００ｎｍ以内、または約４０～約４００ｎｍ以内、または約４０ｎｍ～２００ｎｍ以内のサイズ（例えば、平均直径）を有する。磁気クラスタリングの場合、ナノ粒子が、いくつかの実施形態において、１０～２５０ｎｍ、または５０～２００ｎｍ、または８０～２００ｎｍ、または２０～１００ｎｍの範囲のサイズ（平均直径）を有することが好ましい。細胞－ナノ粒子界面における受容体－リガンド相互作用は、十分に理解されていない。しかしながら、ナノ粒子結合及び細胞活性化は膜空間組織に対して感受性であり、これはＴ細胞活性化中に特に重要であり、磁場を使用してクラスター結合したナノ粒子を操作して活性化を増強することができる。例えば、Ｔ細胞活性化は、持続的に増強されたナノスケールＴＣＲクラスタリングの状態を誘導し、ナノ粒子は、より大きな粒子がそうでない方法でこのクラスタリングに感受性を有する。

さらに、ＴＣＲクラスターとのナノ粒子相互作用が、受容体トリガーを強化するために利用され得る。Ｔ細胞活性化は、シグナル伝達タンパク質の凝集によって媒介され、数百ナノメートルにわたって「シグナル伝達クラスター」が存在し、最初はＴ細胞－ＡＰＣ接触部位の周辺に形成され、内側に移動する。本明細書に記載されるように、外部磁場を使用して、抗原特異的Ｔ細胞（稀少なナイーブ細胞を含む）を濃縮し、ＴＣＲに結合した磁気ナノａＡＰＣの凝集を促進することができ、ＴＣＲクラスターの凝集が生じ、ナイーブＴ細胞の活性化が増強された。磁場は、常磁性粒子に対して適切に強い力を発揮することができるが、それ以外は生物学的に不活性であり、粒子挙動を制御するための強力なツールとなる。常磁性ナノ－ａＡＰＣに結合したＴ細胞は、外部から適用される磁場の存在下で活性化される。ナノ－ａＡＰＣ自体が磁化され、磁場源及び磁場内の近くのナノ粒子に引き寄せられ、ビーズ、したがってＴＣＲ凝集が誘導され、ａＡＰＣ媒介性活性化を促進する。

活性化化学を使用して、ナノ粒子の表面に対する分子の特異的かつ安定な接続を可能にすることができる。タンパク質を官能基に接続するために使用することができる多くの方法がある。例えば、一般的な架橋剤であるグルタルアルデヒドを使用して、２工程プロセスでタンパク質アミン基をアミノ化ナノ粒子表面に接続することができる。得られた結合は、加水分解に安定である。他の方法としては、タンパク質上のアミンと反応するｎ－ヒドロスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを含む架橋剤、アミン、スルフヒドリル、またはヒスチジンを含有するタンパク質と反応する活性ハロゲンを含有する架橋剤、アミンまたはスルフヒドリル基と反応するエポキシドを含有する架橋剤、マレイミド基とスルフヒドリル基との間の接合、及びペンダント糖部分の過ヨウ素酸酸化、次いで、還元的アミノ化による、タンパク質アルデヒド基の形成の使用を含む。

同じまたは異なる粒子上で同時に使用される場合の特定のリガンドの比率を変更して、抗原中のナノ粒子または共刺激リガンド提示の有効性を増加させることができる。例えば、ナノ粒子は、ＨＬＡ－Ａ２－Ｉｇ及び抗ＣＤ２８（または他のシグナル２リガンド）と、約３０：１、約２５：１、約２０：１、約１５：１、約１０：１、約５：１、約３：１、約２：１、約１：１、約０．５：１、約０．３：１、約０．２：１、約０．１：１、または約０．０３：１などの種々の比率で結合することができる。いくつかの実施形態において、この比率は、２：１～１：２である。支持体に結合するタンパク質の合計量は、例えば、約２５０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、または約５０ｍｇ／ｍｌの粒子であってもよい。サイトカイン放出及び成長などのエフェクター機能は、Ｔ細胞活性化及び分化よりも、シグナル２に対するシグナル１について、異なる要求を有する場合があるため、これらの機能を別個に決定することができる。

特定の実施形態において、ａＡＰＣは、５０～１５０ｎｍの範囲の常磁性粒子であり、ＰＤＩ（サイズ分布）は、０．２未満、またはいくつかの実施形態において、０．１未満である。ａＡＰＣは、０～－１０ｍＶ、例えば、約－２～－６ｍＶの表面電荷を有していてもよい。ａＡＰＣは、粒子あたり１０～１２０個のリガンド、例えば、粒子あたり約２５～約１００個のリガンドを有していてもよく、リガンドは、免疫グロブリン配列のＦｃ領域に導入された遊離システインを介して粒子に接合している。粒子は、約１：１の比率のＨＬＡ二量体：抗ＣＤ２８を含有していてもよく、これは、粒子の同じまたは異なる集合体に存在していてもよい。ナノ粒子は、ペプチド抗原の受動的ローディングが有する場合であっても、同種Ｔ細胞の強力な増幅を提供しつつ、非同種ＴＣＲの刺激を示さない。粒子は、少なくとも２または３年間、凍結乾燥形態で安定である。

濃縮及び増幅の後、試料の抗原特異的Ｔ細胞成分は、少なくとも約５％、または少なくとも約１０％、または少なくとも約１５％、または少なくとも約２０％、または少なくとも約２５％が抗原特異的Ｔ細胞であろう。さらに、これらのＴ細胞は、Ｔメモリ幹細胞を含み、セントラル及びエフェクターメモリＴ細胞も含んでいてもよい。患者またはドナーから単離された元の試料から、種々の実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞は、約１００倍～約１０，０００倍、例えば、少なくとも約１００倍、または少なくとも約２００倍増幅される（約７日間で）。２週間後、抗原特異的Ｔ細胞は、種々の実施形態において、少なくとも１０００倍、または少なくとも約２０００倍、少なくとも約３，０００倍、少なくとも約４，０００倍、または少なくとも約５，０００倍増幅される。いくつかの実施形態において、抗原特異的Ｔ細胞は、２週間後に、５０００倍より多く、または１０，０００倍より多く増幅される。１週間または２週間の増幅後、少なくとも約１０^６個、または少なくとも約１０^７個、または少なくとも約１０^８個、または少なくとも約１０^９個の抗原特異的Ｔ細胞が得られる。

好適なインキュベーション条件（培養培地、温度など）としては、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆体を培養するために使用されるもの、ならびにＤＣまたは人工抗原提示細胞を使用して抗原特異的Ｔ細胞の形成を誘導するための当該技術分野で既知のものが挙げられる。

細胞組成物は、静脈内注入、動脈内投与、リンパ内投与、及び腫瘍内投与を含む任意の適切な経路によって患者に投与することができる。

いくつかの実施形態において、患者は、養子移入によって細胞組成物を受ける前に（または任意選択でその後に）、１つ以上のチェックポイント阻害剤を用いた免疫療法を受けるか、または開始する。種々の実施形態において、チェックポイント阻害剤（複数可）は、ＣＴＬＡ－４またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のうちの１つ以上を標的とし、このような標的に対する抗体、例えば、モノクローナル抗体、またはその一部、またはそのヒト化もしくは完全ヒト態様を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤療法は、イピリムマブもしくはＫｅｙｔｒｕｄａ（ペンブロリズマブ）、または同等のモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態において、患者は、以前ＰＤ１遮断療法を受けており、その治療に対して難治性であったか、または部分的にしか応答性ではなかった。このような実施形態において、本明細書に記載の細胞組成物は、任意選択で第２ラウンドの免疫療法（例えば、抗ＣＴＬＡ４またはＰＤ－１遮断療法）と組み合わせて、頑強なＴ細胞応答を復活させることができる。

いくつかの実施形態において、患者は、約１～５ラウンドの養子免疫療法（例えば、１回、２回、３回、４回、または５回のラウンド）を受ける。いくつかの実施形態において、養子免疫療法の各投与は、１ラウンドのチェックポイント阻害剤療法と同時に、またはその後（例えば、約１日または約１週間後）に行われる。いくつかの実施形態において、養子免疫療法は、チェックポイント阻害剤投与から約１日後、約２日後、約３日後、約４日後、約５日後、約６日後、または約１週間後に提供される。いくつかの実施形態において、患者は、細胞組成物の単回投与のみを受ける。

いくつかの態様において、本発明は、個別化されたがん免疫療法のための方法を提供する。本方法は、ａＡＰＣを使用して達成され、患者が応答する抗原を特定し、その後に適切なペプチドローディングされたａＡＰＣを患者に投与するか、またはその後に抗原特異的Ｔ細胞をエクスビボで濃縮及び増幅する。

ゲノム全体の配列決定は、がん生物学の理解を劇的に変化させた。がんの配列決定は、多くのヒトのがんの発達に関与する分子プロセスに関する重要なデータをもたらした。引き起こされる変異は、（１）細胞運命、（２）細胞生存及び（３）ゲノム維持の３つの主な細胞プロセスを調節する経路に関与する主要な遺伝子において同定されている。Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９，１５４６－５８（２０１３）。

ゲノム全体の配列決定はまた、がん免疫療法に対する本願発明者らのアプローチに革命をもたらす可能性を有する。配列決定データは、がん免疫療法のための共有標的及び個別化された標的の両方に関する情報を提供することができる。原則として、変異体タンパク質は、免疫系にとって異物であり、推定腫瘍特異的抗原である。実際に、配列決定の努力は、数千ではないにしても数百の潜在的に関連する免疫標的を定義している。限定された研究により、これらのネオエピトープに対するＴ細胞応答が、がん患者において見出され得るか、またはがんワクチンによって誘導され得ることが示された。しかしながら、特定のがんに対するこのような応答の頻度及びこのような応答が患者間で共有される程度は、よく知られていない。腫瘍特異的免疫応答の理解が限られている主な理由の１つは、潜在的な免疫学的に関連する標的を検証するための現在のアプローチが煩雑で時間がかかることである。

中枢性トレランスは、自己タンパク質に対するＴ細胞応答を無効化するが、がん原性変異は、Ｔ細胞応答を形成し得るネオエピトープを誘導する。全エクソーム配列決定に由来する変異カタログは、かかるネオエピトープを同定するための開始点を提供する。ＨＬＡ結合予測アルゴリズム（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ４，ｅ６０９４（２００９）を使用して、各がんが、７～１０個までのネオエピトープを有し得ることが予測されている。同様のアプローチによって、数百個の腫瘍ネオエピトープを推定した。しかしながら、かかるアルゴリズムは、Ｔ細胞応答の予測において低い精度を有する場合があり、予測されたＨＬＡ結合エピトープの１０％のみが、ＨＬＡの観点で結合すると予測される（Ｌｕｎｄｅｇａａｒｄ Ｃ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３０，３０９－１８（２０１０））。したがって、予測されるエピトープは、それらの潜在的なネオエピトープに対するＴ細胞応答の存在について検証されなければならない。

特定の実施形態において、ナノ－ａＡＰＣ系を使用して、種々のがんにおいて、または特定の患者のがんにおいて、Ｔ細胞応答を誘導するネオエピトープについてスクリーニングする。がんは、例えば、全エクソーム配列決定によって、遺伝子解析され得る。

候補ペプチドのリストは、変異タンパク質中の９個のアミノ酸ウィンドウを重ね合わせることから生成することができる。変異したアミノ酸を含有する９個の全てのＡＡウィンドウと、各タンパク質からの２つの変異していない「対照」を選択する。これらの候補ペプチドは、Ｎｅｔ ＭＨＣ及び安定化マトリックス法（ＳＭＭ）を含むＭＨＣ結合予測アルゴリズムのコンセンサスを使用して、ＭＨＣ結合について計算によって評価される。主にＨＬＡ－Ａ２対立遺伝子のためにナノ－ａＡＰＣ及びＭＨＣ結合アルゴリズムが開発されてきた。コンセンサス予測の感度カットオフは、扱うことが可能な数の変異を含有するペプチド（約５００）及び変異していない対照ペプチド（約５０）が同定されるまで、調整することができる。

例示的な実施形態において、細胞組成物は、薬学的に許容される担体中に、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％のＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞と、５％未満のＣＤ４＋Ｔ細胞と、少なくとも５％のＴ_ＳＣＭ細胞とを含み、ＣＤ８＋細胞は、１～１０個の標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも１０^６個のＴ細胞を含む。任意選択で、ＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞は、細菌、ウイルス、真菌及び／または寄生虫病原体に特異的なＴ細胞を含んでいてもよい。種々の実施形態において、ＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞の少なくとも３０％が、Ｔ_ＳＣＭ、セントラル、及びエフェクターメモリＴ細胞であり、ＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞の１０％未満が、最終分化したＴ細胞であり、ＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞の１０％未満が、ナイーブ細胞である。種々の実施形態において、標的ペプチド抗原に特異的なＣＤ８＋またはＣＤ４－Ｔ細胞の少なくとも５０％が、Ｔ_ＳＣＭ、セントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、約５％～約２５％のＴメモリ幹細胞（Ｔ_ｓｃｍ）、または約５％～約２０％のＴメモリ幹細胞を含む。

種々の実施形態において、細胞組成物は、γδＴ細胞をさらに含む。例えば、細胞組成物は、少なくとも約２％のγδＴ細胞、または少なくとも約５％のγδＴ細胞を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約１０％のγδＴ細胞、または少なくとも約２０％のγδＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、細胞組成物は、少なくとも約２５％のγδＴ細胞、または少なくとも約３０％、または少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％のγδＴ細胞を含む。これらの実施形態において、γδＴ細胞は、Ｖδ１及びＶδ２細胞の片方または両方を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞は、主にＶδ２（例えば、少なくとも約６０％、または少なくとも約７５％）である。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞の一部は、ＣＤ８＋である。種々の実施形態において、γδＴ細胞は、主にＣＤ２８＋である。

いくつかの実施形態において、細胞組成物は、静脈内注入に好適であり、凍結保護剤として好適であり得る薬学的に許容される担体をさらに含む。例示的な担体は、ＤＭＳＯ（例えば、約１０％）である。細胞組成物は、単位バイアルまたはバッグの状態で提供され、使用まで凍結して保管されてもよい。単位用量は、５０～２００ｍＬの体積で、１ｍＬあたり約５×１０^５個～約５×１０^６個の細胞を含み得る。特定の実施形態において、組成物の体積は、１００ｍＬ以下（例えば、５０～１００ｍＬ）である。

いくつかの態様において、本発明は、本明細書に記載の細胞組成物を、必要とする患者に投与することを含む、がん患者を治療するための方法を提供する。

いくつかの実施形態において、患者は、血液癌を有しており、いくつかの実施形態において、同種幹細胞移植後に再発している。いくつかの実施形態において、患者は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群を有する。

本開示に従って治療され得る他のがんとしては、歴史的に不正な免疫応答不良であるか、または高い再発率を有するがんが挙げられる。例示的ながんとしては、癌腫、肉腫、及びリンパ腫を含む様々な種類の固形腫瘍が挙げられる。種々の実施形態において、がんは、黒色腫（転移性黒色腫を含む）、結腸癌、十二指腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、腺管癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮内膜癌、精巣癌、胃癌、異形成性口腔粘膜、ポリポーシス、頭頸部癌、浸潤性口腔癌、非小細胞肺癌腫、小細胞肺癌癌、中皮腫、移行性及び扁平上皮細胞尿癌腫、脳癌、神経芽腫、ならびに神経膠腫である。種々の実施形態において、がんは、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶである。いくつかの実施形態において、がんは、転移性及び／または再発性であり、及び／または切除不可能である。

いくつかの実施形態において、患者は、化学療法及び／またはチェックポイント阻害剤療法に対して難治性である。

いくつかの実施形態において、患者は、持続性及びインビボ応答を改善し得る低用量サイトカイン療法をさらに受ける。

いくつかの実施形態において、がんは、血液悪性腫瘍であり、白血病、リンパ腫、または骨髄腫を含む。例えば、血液悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、症二球性白血病、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄異形成症候群、悪性皮膚Ｔ細胞、菌状息肉腫、非ＭＦ皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、及びＴ細胞を豊富に含む皮膚リンパ組織過形成であってもよい。例示的な実施形態において、患者は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群などの血液癌を有しており、いくつかの実施形態において、患者は、同種幹細胞移植後に再発している。いくつかの実施形態において、この療法は、ＧＶＨＤを誘導しない。

いくつかの実施形態において、患者は、同種幹細胞移植に加えて、リンパ球除去療法、細胞減少療法、または免疫調節療法も受けている（細胞療法を行う前に）。いくつかの実施形態において、細胞療法は、サイトカイン補助後治療の有無にかかわらず、さらに提供されてもよい。

いくつかの実施形態において、患者は、感染症を有するか、または感染症のリスクにさらされている。例えば、ＨＳＣＴを受けた患者は、免疫不全状態を考慮すると、感染症の特別なリスクにさらされる。治療または予防することができる感染症としては、細菌、ウイルス、プリオン、真菌、寄生虫、蠕虫などによって引き起こされる感染症が挙げられる。かかる疾患としては、ＡＩＤＳ、Ｂ／Ｃ型肝炎、ＣＭＶ感染、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）感染、インフルエンザ、ヘルペスウイルス感染（帯状疱疹を含む）、及びアデノウイルス感染が挙げられる。例えば、ＣＭＶは、臓器移植患者にみられる最も一般的なウイルス性病原体であり、骨髄移植または末梢血幹細胞移植を受ける患者における罹患率及び死亡率の主な原因である。このことは、これらの患者の免疫不全状態に起因するものであり、血清反応陽性患者における潜在ウイルスの再活性化または血清反応陰性個体における日和見感染を可能にする。これらの実施形態において、患者は、病原体抗原に特異的なＴ細胞を含む養子免疫療法を受けてもよい。この方法は、移植手技の開始前に、患者または適切なドナーに由来するウイルス特異的ＣＴＬの生成を伴い得る。

ＰＴＬＤは、移植患者のかなりの割合で発生し、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）感染から生じる。ＥＢＶ感染は、米国において、成人集合の約９０％に存在すると考えられる。活性ウイルス複製及び感染は、免疫系によって抑制されるが、ＣＭＶの場合と同様に、移植療法によって免疫不全状態にされた個体は、制御するＴ細胞集合体を失い、ウイルスの再活性化を可能にしてしまう。このことは、移植プロトコルの深刻な障害を示す。ＥＢＶは、種々の血液癌及び非血液癌における腫瘍促進にも関与し得る。

さらに他の実施形態において、本発明は、γδＴ細胞の集合体を作製するための方法を提供する。本方法は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βのうちの２つ以上の存在下、Ｔ細胞の集合体を増幅することを含む。Ｔ細胞の集合体は、ＣＤ２８＋濃縮された細胞を濃縮してもよく、例えば、本明細書に記載のａＡＰＣを含め、抗ＣＤ２８含有ビーズまたは粒子を用いて陽性選択されてもよい。いくつかの実施形態において、細胞の集合体は、ＣＤ４＋枯渇しているか、またはＣＤ８＋選択されている。種々の実施形態において、開始組成物は、約２０％未満または約１０％未満または約８％未満、または約５％未満のγδＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、供給源細胞は、末梢血由来である。

種々の実施形態において、Ｔ細胞の集合体は、ＩＬ－４の存在下で増幅されるか、またはＩＬ－４及びＩＬ－６の存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－４及びＩＬ－１β存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－４、ＩＬ－６、及びＩＬ－１β存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１β存在下、培養物中で増幅される。培養物中の細胞の増幅は、本明細書に記載のように、例えば１～４週間行われ得る。増幅期の後、γδである細胞の割合は、約５％～約６０％、例えば、約１０％～約６０％、または約１５％～約６０％であってもよく、この数のγδＴ細胞が、細胞の開始時の集合体と比較して、少なくとも約１００または少なくとも約１０００、または少なくとも約１０，０００まで増幅される。

γδＴ細胞は、既知の方法、例えば、ＦＡＣＳまたは磁気細胞選別を使用して、他の細胞から分離することができる。γδＴ細胞は、養子移入または研究用途のための細胞組成物として提供されてもよく、あるいは、１つ以上の異種遺伝子（例えば、Ｔ細胞受容体、任意選択でαβＴＣＲである）を発現するように操作されていてもよい。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を異種発現するように操作される。

本発明の他の態様及び実施形態は、当業者には明白であろう。

抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を生成するため、図２に概略的に示されるように、新鮮なＰＢＭＣをドナーから白血球分離によって得た。細胞を、抗ＣＤ４マイクロビーズで陰性選択することによって、ＣＤ４＋細胞を枯渇させた。得られた細胞を、常磁性ナノ粒子（すなわち、デキストランコーティングされた酸化鉄ナノ粒子またはＰＬＧＡ－ＰＥＧナノ粒子、直径が約８０～２００ｎｍの範囲）と共にインキュベートすることによって、抗原特異的Ｔ細胞を濃縮した。図１に示されるように、ナノ粒子は、複数の腫瘍特異的抗原ペプチドを組み込むことができる表面（標的ペプチド抗原を提示する）に接合された二量体ＨＬＡリガンドを有する。二量体ＨＬＡリガンドは、２つのＨＬＡ－Ａ２ドメインを含有し、ペプチド結合溝を含み、それぞれがＩｇヒンジ領域のアームに融合している。二量体ＨＬＡ－Ｉｇは、β_２ミクログロブリンと共に発現される。ＨＬＡ－ＩｇＧ４ヒンジ二量体などの二量体ＨＬＡリガンドは、複数のＨＬＡサブタイプに対して容易に改変され、標的Ｔ細胞との直接的な係合を提供することができる。図１に示すように、抗ＣＤ２８モノクローナル抗体などの共刺激リガンドまたは阻害リガンドもナノ粒子に接合している。共刺激リガンドまたは阻害リガンドは、治療目的に対して、Ｔ細胞（すなわち、ナイーブＴ細胞またはメモリＴ細胞）を標的とするための特定の命令（例えば、活性化、抑制）を提供する。リガンド及びａＡＰＣ構築物は、ＷＯ２０１６／０４４５３０及びＷＯ２０１６／１０５５４２に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

細胞を、常磁性ａＡＰＣの存在下で、次いで、磁場の存在下で約５分間インキュベートした。次いで、粒子と会合した細胞を回収し、様々な長さの時間（一般に１～２週間）、エクスビボで増幅させた。増幅は、成長因子存在下で実施した。２週間の培養期間について、成長因子を１日目及び７日目に添加した。細胞を、７日目にナノａＡＰＣを用いて再刺激した。治療レベルの腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞になるまでの増幅を、ドナー細胞単離から２週間以内で観察した。いくつかの実施形態において、濃縮及び増幅プロセスは、閉じられた自動化細胞増幅システム中で行うことができる。かかるシステムは、単純であり、スケール変更可能であり、費用対効果の高い製造を提供することができ、かつ、異なる抗原ペプチドカクテル（すなわち、患者またはドナーのＰＢＭＣを由来とする）抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の一貫した迅速な生成を提供することができる。

増幅に使用されるサイトカインの組成を表３に示す。

増幅期のサイトカインを含め、濃縮及び増幅プロセスを使用する細胞表現型は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５１９７１（表題ＣＥＬＬ ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ ＣＯＭＰＲＩＳＩＮＧ ＡＮＴＩＧＥＮ－ＳＰＥＣＩＦＩＣ Ｔ ＣＥＬＬＳ ＦＯＲ ＡＤＯＰＴＩＶＥ ＴＨＥＲＡＰＹ）に開示されている。ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５１９７１は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本開示の方法を使用した急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）特異的Ｔ細胞の濃縮及び増幅を図３に示す。図３の左のグラフは、ＡＭＬ特異的抗原ＷＴ１_{３７－４５}、ＷＴＩ_{１２６－１３４}、ＰＲＡＭＥ_４２５、サイクリンＡ１_{２２７－２３５}、及びサイクリンＡ１_{３４１－３５１}について、Ｔ細胞がエクスビボで濃縮及び増幅された後の４人の健康なドナーの新鮮なＰＢＭＣから生成されたＣＤ８＋Ｔ細胞の合計数を示す。図３の右のグラフは、ＣＤ８＋Ｔ細胞がエクスビボで濃縮及び増幅された後の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）特異的抗原の合計割合を示す。図３の結果は、他の内因性Ｔ細胞療法由来の細胞組成物と比較して、有意に高い割合のＡＭＬ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が本開示の方法によって生成されることを示す。

次いで、細胞を、図４Ａ及び図４Ｂにおいて、それらの表現型、ナイーブＴ細胞（Ｔ_Ｎ）（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋）、セントラルメモリＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ－）、エフェクターメモリＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）（ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ４５ＲＡ－）、エフェクターメモリＲＡ＋Ｔ細胞（Ｔ_ＥＭＲＡ）（ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ４５ＲＡ＋）、及びＴメモリ幹細胞（Ｔ_ＳＣＭ）（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋）のいずれかについて特性決定した。ドナーリンパ球からエクスビボで濃縮及び増幅されたＡＭＬ特異的Ｔ細胞の９５％より多くが、メモリＴ細胞表現型を有していた。Ｅ＋Ｅによって生成したＴ細胞の６０％より多くが、Ｔメモリ幹細胞表現型及びセントラルメモリＴ細胞表現型を有していた。また、図４Ｂに示されるように、Ｅ＋Ｅ系は、全てのドナーにわたって一貫したメモリＴ細胞表現型を生成した。Ｅ＋Ｅプロセスは、有意な量の２人の異なる健康なドナーｌｅｕｃｏｐａｋからの多発性骨髄腫特異的Ｔメモリ幹細胞も生成した。（図８及び図９Ａを参照。）図９Ａ及び図９Ｂにおいて、多発性骨髄腫特異的抗原Ｔ細胞が、ヒンジ二量体染色に基づき、バッチ中で、濃縮され、約１．６×１０^９個のＣＤ８＋Ｔ細胞へと増幅された。

図５Ａ及び図５Ｂは、エクスビボで濃縮及び増幅されたＡＭＬ特異的Ｔ細胞が、ＩＬ－２の細胞内染色（増殖及び記憶）、ＩＦＮ－γ（他の細胞を活性化する、記憶、ＭＨＣの上方制御）、ＴＮＦ－α（炎症促進性）、及びＣＤ１０７Ａ（グランザイム放出、細胞障害活性）を含む、高度の多機能表現型を有することを示す。ＡＭＬ特異的Ｔ細胞の大部分（すなわち、約６２％）は、非特異的刺激を受けたときに３～４個のエフェクター機能を示した（図５Ａ、上側）。図５Ａ（下側）において、グラフは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＣＤ１０７Ａを発現するＴ細胞の割合を示す。図５Ａにおいて、Ｔ細胞は、ペプチドパルスしたＴ２細胞の非特異的刺激によって生成した。この実験の結果は、Ｅ＋Ｅによって生成したＡＭＬ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の大部分について、少なくとも３つまたは４つのサイトカインエフェクター機能が観察されたことを示す。図５Ｂにおいて、ＡＭＬ細胞株Ｕ２６６のＴ細胞媒介性腫瘍特異的殺傷が、２つのエフェクターと標的（Ｅ：Ｔ）の比率１０：１（左側の棒）及び２０：１（右側の棒）で、ＡＭＬ特異的抗原について健康なドナーの新鮮なＰＢＭＣから示される。この実験の結果は、健康なドナーからＥ＋Ｅによって生成したＣＤ８＋Ｔ細胞組成物が、複数のＥ：Ｔ比にわたって頑強な殺傷活性を有することを示す。

図６は、黒色腫患者由来のＰＢＭＣ（上側）と健康なドナー由来のＰＢＭＣ（下側）との間で、本明細書に開示される濃縮及び増幅プロセスによって生成されるＭａｒｔ－１特異的Ｔ細胞の特異性を比較する４つのグラフからなる。濃縮及び増幅プロセスは、ドナー供給源にかかわらず、一貫した細胞組成物を産生する。この実験におけるデータは、凍結ＰＢＭＣから生成した。

図７は、ＡＩＭ ＡＣＴに基づくＥ＋Ｅプロセスが、天然の免疫応答を模倣するＴＣＲレパートリーを生成し、それによって、自然選択を受けた天然Ｔ細胞レパートリーから頑強な養子療法を提供することを示すグラフである。ポリクローナルＴＣＲレパートリーの広さは、天然で耐久性のある免疫応答を可能にする。

図８は、Ｅ＋Ｅプロセスが有意な量の多発性骨髄腫抗原特異的Ｔメモリ幹（ＴＳＣＭ）細胞（（ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋）を生成したことを示す。このグラフは、健康なドナーのｌｅｕｃｏｐａｋからの増幅の前及び後の多発性骨髄腫特異的抗原Ｔ細胞の表現型を示す。図９Ａは、健康なドナーのｌｅｕｃｏｐａｋからの多発性骨髄腫抗原特異的Ｔ細胞のためのバッチ中、エクスビボで濃縮及び増幅されたＴ細胞の表現型を示す。このグラフは、Ｅ＋Ｅプロセスが、Ｔメモリ幹（ＴＳＣＭ）細胞、セントラルメモリＴ細胞ＴＣＭ、及びエフェクターメモリＴ（ＴＥＭ）細胞を含む有意な量の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（ヒンジ二量体染色に基づき、約１．６×１０^９個のＣＤ８＋Ｔ細胞）を生成したことを示す。図９Ｂは、４人の異なる臨床的な多発性骨髄腫患者に由来する多発性骨髄腫抗原特異的Ｔ細胞のためのバッチ中、エクスビボで濃縮及び増幅されたＴ細胞の表現型を示す。このグラフは、Ｅ＋Ｅプロセスが、Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、セントラルメモリＴ細胞Ｔ_ＣＭ、及びエフェクターメモリＴ（Ｔ_ＥＭ）細胞を含む有意な量の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を生成したことを示す。このデータは、臨床患者由来のＰＢＭＣが、ドナー由来のＰＢＭＣと同じ表現型特徴を有し、顕著なことに、Ｅ＋Ｅプロセスが、Ｔメモリ細胞（例えば、Ｔメモリ幹（ＴＳＣＭ）細胞、セントラルメモリＴ細胞ＴＣＭ、及びエフェクターメモリＴ（ＴＥＭ）細胞）を含む有意な量の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を生成するのに有効であることを示す。

図１０は、Ｅ＋Ｅプロセスを使用したγδＴ細胞の産生を示す。Ｖδ１及びＶδ２ＴＣＲサブタイプが両方とも観察された。造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の観点でγδＴ細胞の臨床的意義が報告されており、特に、移植後のより高頻度のγδＴ細胞は、望ましい転帰と関連している。Ｂｅｒｇｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ Ｇａｍｍａｄｅｌｔａ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ：Ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｖｏｌ．２０１８を参照。図１１に示されるように、１４日目の％γδＴ細胞は様々であり、その平均は、約１５％～約５０％のγδＴ細胞である。１４日目のγδＴ細胞の数は、０日目のγδＴ細胞の数と広く相関関係にある。

以下の実験では、増幅されたＴ細胞の特徴を、同一性、純度、表現型、及び特異性の観点から評価する。抗多発性骨髄腫（ＭＭ）抗原ペプチドが濃縮されたロット及び抗白血病抗原ペプチドが濃縮されたロットについての特徴のまとめを以下に示す。

以下の実験において、表現型は、ＣＤ３＋細胞に対するメモリＴ細胞の合計％の尺度である。特性決定されるメモリＴ細胞集合体は、両方とも増殖及び自己複製する能力を保持しているＴ幹細胞メモリ（Ｔｓｃｍ）及びＴセントラルメモリ（Ｔｃｍ）集合体と、Ｔエフェクターメモリ（Ｔｅｍ）細胞を含む。特性決定される残りの集合体は、Ｔｅｍｒａ及びＴナイーブ細胞を含む。

上述の実験によって示されるように、本明細書に開示されるＣＤ８＋Ｔ細胞組成物は、ナイーブ及びメモリＴ細胞上のＴ細胞受容体と直接係合して、所望な免疫応答のトリガーとなる。濃縮及び増幅プロセスによって生成されたＣＤ８＋Ｔ細胞組成物は、内因性レパートリーに由来する多抗原特異的なＣＤ８＋制限されたＴ細胞から構成される。抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞組成物は、Ｔメモリ幹細胞を含む。Ｔメモリ幹細胞及びセントラルメモリＴ細胞は、初期及び長期間の臨床応答の両方にとって有用であり、重要である。抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞組成物は、エフェクターサイトカイン産生及び標的細胞殺傷によって評価されるように、多機能表現型を有する。Ｅ＋Ｅプロセスは、多様なＴＣＲレパートリーによって引き起こされる天然の免疫応答も生成した。αβＴ細胞の頑強な集合体に加えて、γδＴ細胞の有意な集合体が、増幅された集合体中にも存在し、Ｖδ１及びＶδ２細胞の両方を含んでいた。γδＴ細胞は、病原体またはがん細胞殺傷のさらなる機構を提供すると考えられ、これはＨＬＡ依存性ではない。

Claims (127)

1. 養子免疫療法に好適な単離された細胞組成物であって、前記組成物が、薬学的に許容される担体中に、１つ以上の標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含む、前記単離された細胞組成物。
2. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞が、１～１００個の標的ペプチド抗原に特異的である、請求項１に記載の単離された細胞組成物。
3. 前記組成物中の標的ペプチド抗原に対するＴ細胞特異性は、ＭＨＣ多量体染色によって定義される、請求項１に記載の単離された細胞組成物。
4. 前記標的ペプチド抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項１に記載の単離された細胞組成物。
5. １つ以上の標的ペプチド抗原が、腫瘍由来ネオ抗原または腫瘍特異的ネオ抗原である、請求項４に記載の単離された細胞組成物。
6. １つ以上の標的ペプチド抗原が、細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫抗原である、請求項１に記載の単離された細胞組成物。
7. 少なくとも５個の標的ペプチド抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
8. 前記標的ペプチド抗原のうちの少なくとも１つが、低頻度前駆Ｔ細胞によって認識される、請求項７に記載の単離された細胞組成物。
9. 前記細胞組成物は、少なくとも９０％がＴ細胞である、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
10. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも５％が、標的ペプチド抗原に特異的である、請求項９に記載の単離された細胞組成物。
11. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも１０％が、標的ペプチド抗原に特異的である、請求項１０に記載の単離された細胞組成物。
12. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも１５％が、標的ペプチド抗原に特異的である、請求項１１に記載の単離された細胞組成物。
13. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも３０％が、標的ペプチド抗原に特異的である、請求項１２に記載の単離された細胞組成物。
14. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも５０％が、標的ペプチド抗原に特異的である、請求項１３に記載の単離された細胞組成物。
15. 前記細胞組成物が、細菌、ウイルス、及び／または真菌病原体に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞をさらに含む、請求項４または５のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
16. 細菌、ウイルス、及び／または真菌病原体に特異的な前記ＣＤ８＋Ｔ細胞が、インフルエンザ、ＣＭＶ、ＥＢＶ、及び／またはアデノウイルスの抗原に特異的なＴ細胞を含む、請求項１５に記載の単離された細胞組成物。
17. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、約１％～約１００％がＴメモリ幹細胞である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
18. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、約１％～約５０％がＴメモリ幹細胞である、請求項１７に記載の単離された細胞組成物。
19. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、約５％～約２５％がＴメモリ幹細胞である、請求項１８に記載の単離された細胞組成物。
20. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも５％がＴメモリ幹細胞である、請求項１８に記載の単離された細胞組成物。
21. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも２０％がＴメモリ幹細胞である、請求項１８に記載の単離された細胞組成物。
22. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも２５％がＴメモリ幹細胞である、請求項１８に記載の単離された細胞組成物。
23. 前記１つ以上の標的抗原に特異的な前記Ｔ細胞は、少なくとも１５％がＴメモリ幹細胞である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
24. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の９５％より多くが、メモリ表現型を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
25. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞が、セントラルメモリ及びエフェクターメモリＴ細胞を含む、請求項２４に記載の単離された細胞組成物。
26. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも３０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項２５に記載の単離された細胞組成物。
27. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも５０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項２５に記載の単離された細胞組成物。
28. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも７０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項２５に記載の単離された細胞組成物。
29. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも８０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項２５に記載の単離された細胞組成物。
30. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも９０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項２５に記載の単離された細胞組成物。
31. 前記１つ以上の標的抗原に特異的な前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも５０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項２５に記載の単離された細胞組成物。
32. 前記１つ以上の標的抗原に特異的な前記Ｔ細胞は、少なくとも８０％がセントラル及びエフェクターメモリＴ細胞である、請求項３１に記載の単離された細胞組成物。
33. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、２０％未満が最終分化している、請求項１～３２のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
34. 前記Ｔ細胞は、１０％未満が最終分化している、請求項３３に記載の単離された細胞組成物。
35. 前記組成物が、３０％未満のナイーブＴ細胞（Ｔ_Ｎ）を含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
36. 前記組成物が、１５％未満のナイーブ細胞を含む、請求項３５に記載の単離された細胞組成物。
37. 前記組成物が、５％未満のナイーブ細胞を含む、請求項３５に記載の単離された細胞組成物。
38. 前記組成物が、１．５％未満のナイーブ細胞を含む、請求項３５に記載の単離された細胞組成物。
39. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも１０％が、活性化すると多機能表現型を示す、請求項１～３８のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
40. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも２０％が、活性化すると多機能表現型を示す、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
41. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも４０％が、活性化すると多機能表現型を示す、請求項４０に記載の単離された細胞組成物。
42. 前記細胞組成物は、１０％未満がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項１～４１のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
43. 前記細胞組成物は、５％未満がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項４２に記載の単離された細胞組成物。
44. 前記細胞組成物は、２％未満がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項４２に記載の単離された細胞組成物。
45. 前記細胞組成物は、１．５％未満がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項４２に記載の単離された細胞組成物。
46. 前記細胞組成物は、１％未満がＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項４２に記載の単離された細胞組成物。
47. 前記組成物が、γδＴ細胞をさらに含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
48. 少なくとも約２％のγδＴ細胞を含む、請求項４７に記載の単離された細胞組成物。
49. 少なくとも約５％のγδＴ細胞を含む、請求項４７に記載の単離された細胞組成物。
50. 少なくとも約１０％のγδＴ細胞を含む、請求項４７に記載の単離された細胞組成物。
51. 少なくとも約２０％のγδＴ細胞を含む、請求項４７に記載の単離された細胞組成物。
52. 少なくとも約２５％のγδＴ細胞を含む、請求項４７に記載の単離された細胞組成物。
53. 前記γδＴ細胞が、Ｖδ１及びＶδ２細胞を含む、請求項４７～５２のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
54. 前記組成物が、実質的にＴメモリ幹細胞から構成され、前記細胞が、キメラ抗原受容体または組換えＴＣＲを発現するように操作される、請求項１７に記載の単離された細胞組成物。
55. 前記組成物が、供給源細胞由来の標的ペプチド抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞の濃縮、及び／または供給源細胞由来の標的ペプチド抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞の増幅によって産生される、請求項１～５４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
56. 供給源細胞が、患者またはＨＬＡ適合ドナー由来である、請求項５５に記載の単離された細胞組成物。
57. ドナー細胞が、白血球分離によって単離される、請求項５６に記載の単離された細胞組成物。
58. 前記供給源細胞が、患者の腫瘍から単離される、請求項５５に記載の単離された細胞組成物。
59. 前記供給源細胞が、バフィーコート画分である、請求項５５に記載の単離された細胞組成物。
60. 細胞供給源が、濃縮前または増幅前に、ＣＤ４＋Ｔ細胞が枯渇している、請求項５５～５９のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
61. 前記供給源細胞は、ＣＤ８＋が濃縮されている、請求項５５～５９のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
62. 前記細胞供給源は、ＮＫ細胞が枯渇している、請求項５５～５９のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
63. 前記抗原特異的Ｔ細胞が、ＭＨＣクラスＩリガンドと任意選択で共刺激リガンドを有するａＡＰＣによって濃縮されている、請求項５５～６２のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
64. 前記ａＡＰＣが、ＣＤ２８に結合するリガンドである共刺激リガンドを含む、請求項６３に記載の単離された細胞組成物。
65. 前記共刺激リガンドが、ＣＤ２８のアゴニストであるモノクローナル抗体、またはその一部である、請求項６４に記載の単離された細胞組成物。
66. 前記濃縮が、常磁性ａＡＰＣを用いた磁気濃縮であり、前記細胞及びａＡＰＣが、任意選択で、磁場存在下で少なくとも１分間インキュベートされる、請求項１～６５のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
67. 前記細胞及びａＡＰＣが、磁場存在下で約５時間以下インキュベートされる、請求項６６に記載の単離された細胞組成物。
68. 前記濃縮された抗原特異的Ｔ細胞が、磁場を使用することなく増幅される、請求項６７に記載の単離された細胞組成物。
69. 前記濃縮された前記細胞が、培養物中で１～４週間増幅される、請求項６６～６８のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
70. 前記細胞が、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＮＦ－γから選択される１つ以上のサイトカインまたは成長因子存在下、培養物中で増幅される、請求項６９に記載の単離された細胞組成物。
71. ＩＬ－１５が、培養物中の前記細胞の増幅のために含まれない、請求項７０に記載の単離された細胞組成物。
72. 前記細胞が、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＮＦ－γから選択されるサイトカインまたは成長因子のうちの２つ、３つ、４つ、または５つの存在下、培養物中で増幅される、請求項７０に記載の単離された細胞組成物。
73. ＩＬ－１５が、培養物中の前記細胞の増幅のために含まれない、請求項７２に記載の単離された細胞組成物。
74. 前記細胞が、ＭＩＰ－１β、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０から選択される少なくとも１つのサイトカインまたは成長因子存在下、培養物中で増幅される、請求項７０～７３のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
75. 前記細胞が、ＩＬ－４存在下で増幅される、請求項７０～７４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
76. 前記細胞が、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される、請求項７０～７４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
77. 前記細胞が、ＩＬ－４及びＩＬ－１β存在下で増幅される、請求項７０～７４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
78. 前記細胞が、ＩＬ－４、ＩＬ－６、及びＩＬ－１β存在下で増幅される、請求項７０～７４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
79. 前記細胞が、Ｉｌ－２、ＩＬ－４、及びＩＬ－６存在下で増幅される、請求項７０～７４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
80. 前記細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１β存在下、培養物中で増幅される、請求項７０～７４のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
81. １つ以上の標的ペプチド抗原が、サバイビン、ＷＴ－１、ＰＲＡＭＥ、及びサイクリンＡ１のペプチドエピトープから選択される、請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
82. １つ以上の標的ペプチド抗原が、ＰＲ３、ＸＢＰ１－ＵＳ、ＸＢＰ１－ＳＰ、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＮＹ－ＥＳＯ１、ＳＯＸ２、ＥＢＶ、インフルエンザ、ＣＭＶ、ＲＨＡＭＭ、Ｍａｒｔ－１／Ｍｅｌａｎ Ａ、ｇｐ１００、ＣＭＶｐｐ６５、及びインフルエンザマトリックスタンパク質Ｍ１のペプチドエピトープから選択される、請求項１～８１のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
83. 養子免疫療法に好適な単離された細胞組成物であって、前記組成物が、薬学的に許容される担体中に、
    少なくとも７０％のＣＤ８＋Ｔ細胞及び５％未満のＣＤ４＋Ｔ細胞を含み、
    前記ＣＤ８＋細胞の少なくとも５％が、Ｔメモリ幹（Ｔ_ＳＣＭ）細胞であり、
    前記ＣＤ８＋細胞の少なくとも３０％が、セントラル及びエフェクターメモリＴ細胞であり、
    前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の１０％未満が、最終分化したＴ細胞であり、
    前記ＣＤ８＋細胞の１０％未満が、ナイーブ細胞である、前記単離された細胞組成物。
84. 少なくとも１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞が、標的ペプチド抗原に特異的である、請求項８３に記載の単離された細胞組成物。
85. 少なくとも１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞が、１～２０個または１～１０個の標的ペプチド抗原に特異的である、請求項８４に記載の単離された細胞組成物。
86. 前記標的ペプチド抗原に特異的な少なくとも１０^７または１０^８個のＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
87. ５％～２５％のＴメモリ幹細胞を含む、請求項８３～８６のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
88. ５％未満の最終分化Ｔ細胞、及び／または５％未満のナイーブ細胞を含む、請求項８３～８７のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
89. 前記標的ペプチド抗原が、腫瘍またはがん関連抗原であり、任意選択で、血液悪性腫瘍に関連している、請求項８３～８８のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
90. 前記標的ペプチド抗原が、血液悪性腫瘍に関連している、請求項８９に記載の単離された細胞組成物。
91. １つ以上の標的ペプチド抗原が、サバイビン、ＷＴ－１、ＰＲＡＭＥ、サイクリンＡ１、及びＰＲ３のペプチドエピトープから選択され、前記ペプチドエピトープが、任意選択で、表１から選択される１つ以上を含む、請求項８９または９０に記載の単離された細胞組成物。
92. １つ以上の標的ペプチド抗原が、ＸＢＰ１－ＵＳ、ＸＢＰ１－ＳＰ、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＮＹ－ＥＳＯ１、及びＳＯＸ２のペプチドエピトープから選択され、前記ペプチドエピトープが、任意選択で、表２から選択される１つ以上を含む、請求項８９または９０に記載の単離された細胞組成物。
93. 前記組成物が、γδＴ細胞をさらに含む、請求項８３～９２のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
94. 少なくとも約５％のγδＴ細胞を含む、請求項９３に記載の単離された細胞組成物。
95. 少なくとも約１０％のγδＴ細胞を含む、請求項９３に記載の単離された細胞組成物。
96. 少なくとも約２５％のγδＴ細胞を含む、請求項９３に記載の単離された細胞組成物。
97. 前記γδＴ細胞が、Ｖδ１及びＶδ２細胞を含む、請求項９３～９６のいずれか一項に記載の単離された細胞組成物。
98. がん患者を治療するための方法であって、請求項１～９７のいずれか一項に記載の細胞組成物を、必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
99. 前記患者は、血液癌を有する、請求項９８に記載の方法。
100. 前記血液癌が、同種幹細胞移植後に再発した、請求項９９に記載の方法。
101. 前記患者が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群を有する、請求項９９または１００に記載の方法。
102. 前記患者が、細胞療法を行う前に、リンパ球除去療法、または細胞減少療法、または免疫調節療法も受けている、請求項９８～１０１のいずれか一項に記載の方法。
103. 前記細胞療法が、サイトカイン補助後治療を行うか、または行わずにさらに提供されてもよい、請求項９８～１０２のいずれか一項に記載の方法。
104. 前記患者において、抗原特異的Ｔ細胞が少なくとも６ヶ月持続する、請求項９８～１０３のいずれか一項に記載の方法。
105. ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βのうちの２つ以上の存在下、ＣＤ４＋枯渇Ｔ細胞の集合体を増幅することを含む、請求項１～９７のいずれか一項に記載の細胞組成物を産生するための方法。
106. 前記Ｔ細胞は、ＣＤ２８＋細胞が濃縮されている、請求項１０５に記載の方法。
107. 前記細胞が、ＩＬ－４存在下で増幅される、請求項１０５または１０６に記載の方法。
108. 前記細胞が、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される、請求項１０７に記載の方法。
109. 前記細胞が、ＩＬ－４及びＩＬ－１β存在下で増幅される、請求項１０７に記載の方法。
110. 前記細胞が、ＩＬ－４、ＩＬ－６、及びＩＬ－１β存在下で増幅される、請求項１０７に記載の方法。
111. 前記細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される、請求項１０７に記載の方法。
112. 前記細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１β存在下、培養物中で増幅される、請求項１０７に記載の方法。
113. 前記細胞が、培養物中で１～４週間増幅される、請求項９３～１１２のいずれか一項に記載の方法。
114. γδＴ細胞の集合体を作製するための方法であって、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１βのうちの２つ以上の存在下、Ｔ細胞の集合体を増幅することを含む、方法。
115. 前記Ｔ細胞の集合体は、ＣＤ２８＋が濃縮されている、請求項１１４に記載の方法。
116. ＣＤ２８＋細胞の前記集合体は、抗ＣＤ２８ビーズまたは粒子を用い、陽性選択される、請求項１１５に記載の方法。
117. 前記Ｔ細胞の集合体は、ＣＤ４＋枯渇している、請求項１１４～１１６のいずれか一項に記載の方法。
118. 前記細胞が、ＩＬ－４存在下で増幅される、請求項１１４～１１７のいずれか一項に記載の方法。
119. 前記細胞が、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される、請求項１１８に記載の方法。
120. 前記細胞が、ＩＬ－４及びＩＬ－１β存在下で増幅される、請求項１１８に記載の方法。
121. 前記細胞が、ＩＬ－４、ＩＬ－６、及びＩＬ－１β存在下で増幅される、請求項１１８に記載の方法。
122. 前記細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－４及びＩＬ－６存在下で増幅される、請求項１１８に記載の方法。
123. 前記細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＮＦ－γ、及びＩＬ－１β存在下、培養物中で増幅される、請求項１１８に記載の方法。
124. 前記細胞が、培養物中で１～４週間増幅される、請求項１１７～１２３のいずれか一項に記載の方法。
125. 細胞の前記γδ＋集合体をγδ細胞から単離することをさらに含む、請求項１１４～１２４のいずれか一項に記載の方法。
126. 任意選択でαβＴＣＲであるＴ細胞受容体を異種発現することをさらに含む、請求項１２５に記載の方法。
127. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を異種発現することをさらに含む、請求項１２５に記載の方法。

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