JP2022510041A

JP2022510041A - Ｍｓｈ３活性に関連するトリヌクレオチドリピート伸長障害の処置のための方法

Info

Publication number: JP2022510041A
Application number: JP2021553755A
Authority: JP
Inventors: ネッサンアンソニーバーミンガム，; ブライアンアール．ベッテンコート，; ピーターエドワードビアレク，
Original assignee: トリプレットセラピューティクス，インコーポレイテッド
Priority date: 2018-12-03
Filing date: 2019-12-02
Publication date: 2022-01-25
Also published as: AU2019394847A1; CA3121779A1; KR20210099090A; WO2020117702A1; US20220072028A1; MX2021006463A; WO2020117703A1

Abstract

本開示は、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置を必要とする対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置するための、有用な組成物および方法を特色とする。一部の態様では、本明細書に記載される組成物および方法は、ＭＳＨ３活性に関連する障害の処置において有用である。本開示の一部の態様は、１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含むオリゴヌクレオチドに関する。

Description

配列表の参照による組み込み
２０１９年１１月２５日に作成された、サイズが５４５，２７１バイトの、名称「４３９８．００８ＰＣ０３＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」のテキストファイルの内容は、その全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる。

背景
トリヌクレオチドリピート伸長障害は、トリヌクレオチドリピート伸長によって引き起こされる遺伝子障害である。トリヌクレオチドリピート伸長は、ある特定の遺伝子またはイントロン中のヌクレオチドリピートがその遺伝子についての正常な安定な閾値を超える、遺伝的突然変異の１つの型である。トリヌクレオチドリピートは、欠損もしくは毒性遺伝子産物を生じ得、ＲＮＡ転写を損ない得、および／または毒性ｍＲＮＡ転写物を形成することによって毒性効果を引き起こし得る。

トリヌクレオチドリピート伸長障害は、リピート伸長の型によって一般にカテゴライズされる。例えば、ハンチントン病などの１型障害は、ポリグルタミン鎖として公知の一連のグルタミン残基を生じるＣＡＧリピートによって引き起こされ、２型障害は、大きさが一般に小さい不均一な伸長によって引き起こされ、脆弱Ｘ症候群などの３型障害は、遺伝子のタンパク質コード領域の外側に一般に位置する大きいリピート伸長によって特徴付けられる。トリヌクレオチドリピート伸長障害は、１型障害に共通する神経細胞の進行性の変性などの広範な種々の症状によって特徴付けられる。

トリヌクレオチドリピート伸長障害を有する対象またはトリヌクレオチドリピート伸長障害を発症するリスクがあるとみなされる対象は、疾患に関連する遺伝子中に構成的ヌクレオチド伸長を有する（即ち、トリヌクレオチドリピート伸長は、胚形成の間に遺伝子中に存在する）。構成的トリヌクレオチドリピート伸長は、胚形成後に伸長（即ち、体細胞トリヌクレオチドリピート伸長）を受け得る。構成的トリヌクレオチドリピート伸長および体細胞トリヌクレオチドリピート伸長の両方が、疾患の存在、疾患の開始年齢および／または疾患の進行の速度に関連し得る。

発明の要旨
本開示は、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置を必要とする対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置するための、有用な組成物および方法を特色とする。一部の態様では、本明細書に記載される組成物および方法は、ＭＳＨ３活性に関連する障害の処置において有用である。

オリゴヌクレオチド
本開示の一部の態様は、１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含むオリゴヌクレオチドに関する。一部の態様では、本開示は、１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、（ａ）連結されたデオキシリボヌクレオシドを含むＤＮＡコア配列；（ｂ）連結されたヌクレオシドを含む５’隣接配列；および（ｃ）連結されたヌクレオシドを含む３’隣接配列を含み；ＤＮＡコアが、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含み、５’隣接配列と３’隣接配列との間に位置付けられ；５’隣接配列および３’隣接配列が各々、少なくとも２つの連結されたヌクレオシドを含み；各隣接配列の少なくとも１つのヌクレオシドが、代替えのヌクレオシドを含む、オリゴヌクレオチドに関する。

一部の態様では、本開示は、細胞におけるヒトＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む、オリゴヌクレオチドに関する。一部の態様では、本開示は、細胞におけるヒトＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、（ａ）連結されたデオキシリボヌクレオシドを含むＤＮＡコア；（ｂ）連結されたヌクレオシドを含む５’隣接配列；および（ｃ）連結されたヌクレオシドを含む３’隣接配列を含み；ＤＮＡコアが、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含み、５’隣接配列と３’隣接配列との間に位置付けられ；５’隣接配列および３’隣接配列が各々、少なくとも２つの連結されたヌクレオシドを含み；各隣接配列の少なくとも１つのヌクレオシドが、代替えのヌクレオシドを含む、オリゴヌクレオチドに関する。

一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも９０％の相補性を有する。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも９５％の相補性を有する。

一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の前記領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５５～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９０３、９１２～９７４、９８４～１０４７、１０５４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１７６８～１８６６、２０２９～２０６３、２０８７～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３３０、２３７１～２４１０、２４３２～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７３、３１３２３２４５、３２６６～３３０６、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７４～４１０１または４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の前記領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５９～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３２９、２３７１～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７２、３１３２～３２４５、３２６６～３３０３、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７６～４１０１または４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の前記領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９６、３５９～３８５、４１３～４６２、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９６、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６５～２２９３、２３７８～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１２、２７２７～２７５３、２７６７～２９１９、２９３４～３０００、３０４６～３０７１、３１４４～３１８３、３２２０～３２４５、３３９７～３４８４、３５３４～３５７５、３５９１～３６１６、３９０１～３９３１または４２８１～４３０６位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の前記領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の４３５～４６２、５５９～５８４、７６３～８０８、８７６～９０２、９３１～９５８、１００１～１０８３、１１１４～１１７９、１２９４～１３３７、１５４４～１５７８、１８３５～１８６３、２０３１～２０５６、２１４４～２１６９、２５４３～２５７７、２５９０～２６１５、２６２１～２６４７、２６８５～２７１１、２７６９～２７９５または２８１６～２８６８位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の前記領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の８７６～９０２、９３０～９５８、１０５６～１０８１、１１１４～１１３９、１１５４～１１７９、１３１０～１３３７、１５４６～１５７１、１８３６～１８６２、２１４１～２１９９、２２６７～２２９２、２５４０～２５８０、２６２０～２６４７、２６８６～２７１１、２７６９～２８６８、２９３９～２９７６、３１４４～３１６９または３３９９～３４２４位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の前記領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の９８４～１０２１、１４６７～１４９３、１７２２～１７４７、１７６７～１８０２、１８３３～１８６１、２３８５～２４１０、２５５４～２５８１、２８１６～２８４５、２８６１～２９２０または３１５１～３１８３位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２または２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０または２４６２～２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０または２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０または１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１または２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５または１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つからなる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２または２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０または２４６２～２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０または２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０または１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１または２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５または１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭにおいて、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す。

細胞アッセイは、哺乳動物細胞、例えば、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３またはＨｅＬａを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してオリゴヌクレオチドでトランスフェクトするステップ、およびモックオリゴヌクレオチドでトランスフェクトされた哺乳動物細胞と比較して、ｍＲＮＡレベルを測定するステップ、を含み得る。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結を含む。一部の態様では、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。一部の態様では、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結は、２’－アルコキシヌクレオシド間連結である。一部の態様では、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結は、アルキルホスフェートヌクレオシド間連結である。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの代替えの核酸塩基を含む。一部の態様では、代替えの核酸塩基は、５’－メチルシトシン、プソイドウリジンまたは５－メトキシウリジンである。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの代替えの糖部分を含む。一部の態様では、代替えの糖部分は、２’－ＯＭｅまたは二環式核酸である。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、一価または分岐鎖二価もしくは三価リンカーを介して前記オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端にコンジュゲートされたリガンドをさらに含む。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１７個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の１９～２３個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の２０個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、約１５～２５ヌクレオシド長である。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、２０ヌクレオシド長である。

医薬組成物およびそれを使用する処置の方法
一部の態様では、本出願は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つまたは複数および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。

一部の態様では、本出願は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つまたは複数および脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子またはリポソームを含む組成物に関する。

一部の態様では、本出願は、細胞においてＭＳＨ３の転写を阻害する方法であって、細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物と接触させて、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法に関する。

一部の態様では、本出願は、トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置、予防またはその進行の遅延を必要とする対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物と接触させて、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法に関する。

一部の態様では、本出願は、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別された対象の細胞においてＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる方法であって、細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物と接触させて、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法に関する。

一部の態様では、本出願は、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物と接触させて、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップ、およびＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、細胞を維持し、それによって、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法に関する。

一部の態様では、本出願は、細胞においてトリヌクレオチドリピート伸長を減少させる方法であって、細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物と接触させて、細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法に関する。

一部の態様では、細胞は、対象中にある。一部の態様では、対象は、ヒトである。一部の態様では、細胞は、中枢神経系の細胞または筋肉細胞である。

一部の態様では、対象は、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別されている。一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、ポリグルタミン病である。一部の態様では、ポリグルタミン病は、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型およびハンチントン病様２からなる群から選択される。一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、ハンチントン病である。

一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、非ポリグルタミン病である。一部の態様では、非ポリグルタミン病は、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される。一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、フリードライヒ運動失調症である。一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、筋強直性ジストロフィー１型である。

一部の態様では、本出願は、トリヌクレオチドリピート伸長障害の予防または処置における使用のための、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物に関する。一部の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物は、くも膜下腔内投与される。

一部の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物は、脳室内投与される。

一部の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物は、筋肉内投与される。

一部の態様では、本出願は、障害の処置、予防またはその進行の遅延を必要とする対象において障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、対象が、トリヌクレオチドリピート伸長障害を患っており、この対象に、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物を投与するステップを含む、方法に関する。一部の態様では、対象において障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法は、さらなる治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の態様では、さらなる治療剤は、ハンチンチン遺伝子をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズする別のオリゴヌクレオチドである。

一部の態様では、対象において障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法は、トリヌクレオチドリピート伸長障害の進行を、予測された進行と比較した場合に、少なくとも１２０日、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年またはそれよりも長く遅延させる。

一部の態様では、本出願は、対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を予防するまたはその進行を遅延させる際の使用のための、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数の医薬組成物、または本明細書に記載される１つもしくは複数のオリゴヌクレオチドおよび脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子もしくはリポソームの組成物に関する。

定義
便宜上、明細書、実施例および添付の特許請求の範囲において使用される一部の用語および語句の意味が、以下に提供される。他に示されない限り、または文脈から暗に示されない限り、以下の用語および語句は、以下に提供される意味を含む。テクノロジーの範囲は特許請求の範囲のみによって限定されるので、定義は、特定の態様を記載するのを助けるために提供されるのであって、特許請求されたテクノロジーを限定することは意図しない。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、このテクノロジーが属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。当該分野での用語の用法と本明細書で提供されるその定義との間に明らかな食い違いがある場合、本明細書内で提供される定義が優先するものとする。

本出願では、文脈から他のように明らかでない限り、（ｉ）用語「１つの（ａ）」は、「少なくとも１つ」を意味すると理解され得る；（ｉｉ）用語「または」は、「および／または」を意味すると理解され得る；（ｉｉｉ）用語「含む（including）」および「含む（comprising）」は、それだけで提示される場合であれ、１つまたは複数のさらなる構成要素またはステップと一緒に提示される場合であれ、挙げられた構成要素またはステップを包含すると理解され得る。

本明細書で使用される場合、用語「約」および「およそ」は、記載されている値の上または下１０％以内である値を指す。例えば、用語「約５ｎＭ」は、４．５～５．５ｎＭの範囲を示す。

数または一連の数の前の「少なくとも」という用語は、用語「少なくとも」に隣接する数、ならびに文脈から明らかなように、論理的に含まれ得る全ての引き続く数および整数を含むと理解される。例えば、核酸分子中のヌクレオチドの数は、整数のはずである。例えば、「２１ヌクレオチドの核酸分子の少なくとも１８個のヌクレオチド」は、１８、１９、２０または２１個のヌクレオチドが、示された特性を有することを意味している。一連の数または範囲の前に少なくともが存在する場合、「少なくとも」は、その一連の数または範囲中の数の各々を修飾し得ると理解される。「少なくとも」はまた、整数に限定されない（例えば、「少なくとも」５％は、有効桁数を考慮せずに、５．０％、５．１％、５．１８％を含む）。

本明細書で使用される場合、「以下」または「未満」は、文脈から論理的に、その語句に隣接する値および理論的下限値または整数からゼロまでとして理解される。例えば、「標的配列との３つ以下のミスマッチ」を有するオリゴヌクレオチドは、標的配列との３、２、１または０個のミスマッチを有する。一連の数または範囲の前に「以下」が存在する場合、「以下」は、その一連の数または範囲中の数の各々を修飾し得ると理解される。

本明細書で使用される場合、用語「投与」は、組成物（例えば、本明細書に記載される化合物または化合物を含む調製物）の、対象または系への投与を指す。動物対象への（例えば、ヒトへの）投与は、本明細書に記載されるものなどの、任意の適切な経路によるものであり得る。

本明細書で使用される場合、「併用療法」または「組み合わせて投与される」は、２つの（またはそれよりも多くの）異なる薬剤または処置が、特定の疾患または状態のための規定された処置レジメンの一部として対象に投与されることを意味する。処置レジメンは、対象に対する別々の薬剤の効果が重複するように、各薬剤の投与の用量および周期性を規定する。一部の態様では、２つまたはそれよりも多くの薬剤の送達は、同時または同時発生的であり、これらの薬剤は、共製剤化され得る。一部の態様では、２つまたはそれよりも多くの薬剤は、共製剤化されず、処方されたレジメンの一部として、順次的な様式で投与される。一部の態様では、組み合わせた２つまたはそれよりも多くの薬剤または処置の投与は、症状における低減、または障害に関連する他のパラメーターが、単独でまたは他の薬剤もしくは処置の非存在下で送達された１つの薬剤または処置で観察されるものよりも大きいような投与である。２つの処置の効果は、部分的に付加的、完全に付加的、または付加的よりも大きい（例えば、相乗的）であり得る。各治療剤の順次的なまたは実質的に同時の投与は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、および粘膜組織を介した直接的吸収が含まれるがこれらに限定されない任意の適切な経路によってもたらされ得る。治療剤は、同じ経路または異なる経路によって投与され得る。例えば、併用の１つの治療剤は静脈内注射によって投与され得るが、併用のさらなる治療剤は、経口投与され得る。

本明細書で使用される場合、用語「ＭＳＨ３」は、他に特定されない限り、ヒト、ウシ、ニワトリ、げっ歯類、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、霊長類、サルおよびモルモットが含まれるがこれらに限定されない任意の脊椎動物または哺乳動物供給源由来のアミノ酸配列を有する、ＭｕｔＳホモログ３、ＤＮＡミスマッチ修復タンパク質を指す。この用語は、ネイティブＭＳＨ３の少なくとも１つのｉｎｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏ活性を維持する、ネイティブＭＳＨ３の断片およびバリアントもまた指す。この用語は、ＭＳＨ３のプロセシングされていない全長前駆体形態、ならびにシグナルペプチドの翻訳後切断から生じる成熟形態を包含する。ＭＳＨ３は、ＭＳＨ３遺伝子によってコードされる。例示的なＨｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）ＭＳＨ３遺伝子の核酸配列は、ＮＣＢＩ参照ＮＭ＿００２４３９．４または配列番号１に示される。用語「ＭＳＨ３」は、野生型ＭＳＨ３タンパク質の天然バリアント、例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００２４３０．３または配列番号２に示される野生型ヒトＭＳＨ３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％またはそれよりも高い同一性）を有するタンパク質もまた指す。例示的なＭｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）ＭＳＨ３遺伝子の核酸配列は、ＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿０１０８２９．２または配列番号３に示される。例示的なＲａｔｔｕｓｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ラット）ＭＳＨ３遺伝子の核酸配列は、ＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿００１１９１９５７．１または配列番号４に示される。例示的なＭａｃａｃａｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）ＭＳＨ３遺伝子の核酸配列は、ＮＣＢＩ参照番号ＸＭ＿００５５５７２８３．２または配列番号５に示される。

用語「ＭＳＨ３」は、本明細書で使用される場合、ＭＳＨ３遺伝子の天然に存在するＤＮＡ配列変形形態、例えば、ＭＳＨ３遺伝子における一塩基多型によって細胞において発現される特定のポリペプチドもまた指す。ＭＳＨ３遺伝子内の多数のＳＮＰが識別されており、例えば、ＮＣＢＩｄｂＳＮＰ（例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｎｐを参照のこと）において見出すことができる。ＭＳＨ３遺伝子内のＳＮＰの非限定的な例は、ＮＣＢＩｄｂＳＮＰアクセッション番号：ｒｓ１６５０６９７、ｒｓ７０９９１１０８、ｒｓ１０１６８、ｒｓ２６２７９、ｒｓ２６２８２、ｒｓ２６７７９、ｒｓ２６７８４、ｒｓ３２９８９、ｒｓ３３００３、ｒｓ３３００８、ｒｓ３３０１３、ｒｓ４０１３９、ｒｓ１８１７４７、ｒｓ１８４９６７、ｒｓ２４５３４６、ｒｓ２４５３９７、ｒｓ２４９６３３、ｒｓ３８０６９１、ｒｓ４０８６２６、ｒｓ４４２７６７、ｒｓ８３６８０２、ｒｓ８３６８０８、ｒｓ８６３２２１、ｒｓ１１０５５２５、ｒｓ１４２８０３０、ｒｓ１４７８８３４、ｒｓ１６５０６９４、ｒｓ１６５０７３７、ｒｓ１６７７６２６、ｒｓ１６７７６５８、ｒｓ１８０５３５５、ｒｓ２８９７２９８、ｒｓ３０４５９８３、ｒｓ３７９７８９７、ｒｓ４７０３８１９、ｒｓ６１５１６２７、ｒｓ６１５１６４０、ｒｓ６１５１６６２、ｒｓ６１５１６７０、ｒｓ６１５１７３５、ｒｓ６１５１８３８、ｒｓ７７０９９０９、ｒｓ７７１２３３２、ｒｓ１００７９６４１、ｒｓ１２５１３５４９およびｒｓ１２５２２１３２において見出すことができる。

本明細書で使用される場合、「標的配列」は、一次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるｍＲＮＡを含む、ＭＳＨ３遺伝子の転写の間に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続する部分を指す。一態様では、配列の標的部分は、ＭＳＨ３遺伝子の転写の間に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列のその部分におけるまたはその近傍でのオリゴヌクレオチド指向性の（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）指向性の）切断の基質として機能するのに少なくとも十分長い。標的配列は、例えば、約９～３６ヌクレオチド長、例えば、約１５～３０ヌクレオチド長であり得る。例えば、標的配列は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０、または約１５～３０ヌクレオチド、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３もしくは２１～２２ヌクレオチド長であり得る。上に列挙された範囲および長さの中間の範囲および長さもまた企図される。

「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」および「Ｕ」は各々、塩基としてそれぞれグアニン、シトシン、アデニン、チミジンおよびウラシルを含む、天然に存在するヌクレオチドを一般に示す。しかし、用語「ヌクレオチド」は、以下にさらに詳述されるような代替えのヌクレオチド、または代用の置き換え部分を指し得ることが理解される。当業者は、グアニン、シトシン、アデニンおよびウラシルが、かかる置き換え部分を保有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対合特性を実質的に変更することなしに、他の部分によって置き換えられ得ることを十分認識している。例えば、限定なしに、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシンまたはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対合することができる。したがって、ウラシル、グアニンまたはアデニンを含むヌクレオチドは、例えば、イノシンを含むヌクレオチドによって、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列中で置き換えられ得る。別の例では、オリゴヌクレオチド中の任意の場所のアデニンおよびシトシンは、それぞれ、グアニンおよびウラシルで置き換えられて、標的ｍＲＮＡと共にＧ－Ｕゆらぎ塩基対合を形成し得る。かかる置き換え部分を含む配列は、本明細書で特色とされる組成物および方法に適切である。

用語「核酸塩基」および「塩基」には、核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する、ヌクレオシドおよびヌクレオチド中に存在するプリン（例えば、アデニンおよびグアニン）およびピリミジン（例えば、ウラシル、チミンおよびシトシン）部分が含まれる。核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーションの間に機能的である、代替えの核酸塩基もまた包含する。この文脈では、「核酸塩基」は、天然に存在する核酸塩基、例えば、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチンおよびヒポキサンチン、ならびに代替えの核酸塩基の両方を指す。かかるバリアントは、例えば、Hirao et al (2012) Accounts of Chemical Research vol 45 page 2055およびBergstrom (2009) Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry Suppl. 37 1.4.1に記載されている。

用語「ヌクレオシド」は、核酸塩基および糖部分を有する、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのモノマー単位を指す。ヌクレオシドには、本明細書に記載されるものなどの、天然に存在するヌクレオシドならびに代替えのヌクレオシドであるヌクレオシドが含まれ得る。ヌクレオシドの核酸塩基は、天然に存在する核酸塩基または代替えの核酸塩基であり得る。同様に、ヌクレオシドの糖部分は、天然に存在する糖または代替えの糖であり得る。

用語「代替えのヌクレオシド」は、本明細書に記載されるものなどの、代替えの糖または代替えの核酸塩基を有するヌクレオシドを指す。

一部の態様では、核酸塩基部分は、プリンまたはピリミジンを、改変されたプリンまたはピリミジン、例えば、置換されたプリンまたは置換されたピリミジン、例えば、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チアゾロ（thiozolo）－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウリジン、５－ブロモウリジン、５－チアゾロ－ウリジン、２－チオ－ウリジン、プソイドウリジン、１－メチルプソイドウリジン、５－メトキシウリジン、２’－チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリンおよび２－クロロ－６－アミノプリンから選択される「代替えの核酸塩基」に変化させることによって、改変される。

核酸塩基部分は、各対応する核酸塩基についての文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵによって示され得、ここで、各文字は、等価な機能の代替えの核酸塩基を含み得る。一部の態様では、例えば、ギャップマーについて、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。

「糖」または「糖部分」には、フラノース環を有する天然に存在する糖が含まれる。糖には、ヌクレオシドのフラノース環を置き換えることが可能な構造として定義される「代替えの糖」もまた含まれる。一部の態様では、代替えの糖は、非フラノース（または４’－置換されたフラノース）環または環系または開放系である。かかる構造には、天然フラノース環と比較して単純な変化、例えば、６員環が含まれ、またはかかる構造は、ペプチド核酸において使用される非環系の場合のように、より複雑であり得る。代替えの糖には、フラノース環が別の環系、例えば、モルホリノまたはヘキシトール環系などで置き換えられた、糖代用物が含まれ得る。モチーフを有するオリゴヌクレオチドの調製において有用な糖部分には、β－Ｄ－リボース、β－Ｄ－２’－デオキシリボース、置換された糖（例えば、２’、５’およびビス置換された糖）、４’－Ｓ－糖（例えば、４’－Ｓ－リボース、４’－Ｓ－２’－デオキシリボースおよび４’－Ｓ－２’－置換されたリボース）、二環式代替えの糖（例えば、２’－Ｏ－ＣＨ_２－４’または２’－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－４’架橋されたリボース由来の二環式糖）および糖代用物（例えば、リボース環が、モルホリノまたはヘキシトール環系で置き換えられている場合）が含まれるがこれらに限定されない。各位置において使用される複素環式塩基およびヌクレオシド間連結の型は、可変性であり、モチーフを決定する際の因子ではない。代替えの糖部分を有するほとんどのヌクレオシドでは、複素環式核酸塩基は、一般に、ハイブリダイゼーションを可能にするために維持される。

「ヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、ヌクレオシドおよびヌクレオシド間連結を含む、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのモノマー単位を指す。ヌクレオシド間連結には、ホスフェート連結が含まれ得る。同様に、「連結されたヌクレオシド」は、ホスフェート連結によって連結され得る。ホスフェート、ホスホロチオエートおよびボロノホスフェート（boronophosphate）連結が含まれるがこれらに限定されない多くの「代替えのヌクレオシド間連結」が、当該分野で公知である。代替えのヌクレオシドには、二環式ヌクレオシド（ＢＮＡ）（例えば、ロックトヌクレオシド（ＬＮＡ）および拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシド）、ペプチドヌクレオシド（ＰＮＡ）、ホスホトリエステル、ホスホロチオネート（phosphorothionate）、ホスホロアミダート（phosphoramidate）、および本明細書に記載されるものが含まれる、ネイティブヌクレオシドのホスフェート骨格の他のバリアントが含まれる。

「代替えのヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、代替えのヌクレオシドまたは代替えの糖、および代替えのヌクレオシド連結が含まれ得るヌクレオシド間連結を有する、ヌクレオチドを指す。

用語「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、２つまたはそれよりも多くの共有結合的に連結されたヌクレオシドを含む分子として、当業者に一般に理解されるように定義される。かかる共有結合的に結合されたヌクレオシドは、核酸分子またはオリゴマーとも称され得る。オリゴヌクレオチドは、一般に、固相化学合成とその後の精製とによって、実験室において作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合、共有結合的に連結されたヌクレオチドまたはヌクレオシドの、核酸塩基部分の配列もしくは順序またはそれらの改変に対して言及がなされる。オリゴヌクレオチドは、人造であり得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、精製または単離され得る。オリゴヌクレオチドはまた、以下を含む意図である：（ｉ）１つまたは複数のフラノース部分が、フラノース誘導体によって、または塩基部分のための共有結合による結合の点として使用され得る環式もしくは非環式の任意の構造によって置き換えられた化合物、（ｉｉ）１つまたは複数のホスホジエステル連結が、ホスホロアミダートもしくはホスホロチオエート連結の場合と同様に改変された、またはホルムアセタール（formacetal）もしくはリボアセタール（riboacetal）連結の場合と同様に適切な連結部分によって完全に置き換えられた化合物、および／あるいは（ｉｉｉ）１つまたは複数の連結されたフラノース－ホスホジエステル連結部分が、塩基部分のための共有結合による結合の点として使用され得る環式または非環式の任意の構造によって置き換えられた化合物。オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の代替えのヌクレオシドまたはヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるものが含まれる）を含み得る。オリゴヌクレオチドが、糖部分または核酸塩基を欠くが、標的配列と対合を形成することまたはハイブリダイズすることがなおも可能な組成物を含むこともまた理解される。

「オリゴヌクレオチド」は、短いポリヌクレオチド（例えば、１００またはそれ未満の連結されたヌクレオシドのもの）を指す。

「キメラ」オリゴヌクレオチドまたは「キメラ」は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つのモノマー単位、即ち、オリゴヌクレオチドの場合にはヌクレオチドまたはヌクレオシドから各々が構成される、２つまたはそれよりも多くの化学的に別個の領域を含むオリゴヌクレオチドである。キメラオリゴヌクレオチドには、「ギャップマー」もまた含まれる。

オリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨ媒介性経路を介した所望の標的ＲＮＡの特異的分解を可能にする任意の長さのものであり得、約１０～３０ヌクレオシド長、例えば、約１５～３０ヌクレオシド長または約１８～２０ヌクレオシド長、例えば、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０ヌクレオシド長、例えば、約１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３もしくは２１～２２ヌクレオシド長の範囲であり得る。上に列挙された範囲および長さの中間の範囲および長さもまた企図される。

本明細書で使用される場合、用語「核酸塩基配列を含むオリゴヌクレオチド」は、標準的なヌクレオチド命名法を使用して言及される配列によって記載されるヌクレオチドまたはヌクレオシドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。

用語「連続する核酸塩基領域」は、標的核酸に対して相補的なオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、用語「連続するヌクレオチド配列」または「連続する核酸塩基配列」と本明細書中で相互交換可能に使用され得る。一部の態様では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが、連続するヌクレオチドまたはヌクレオシド領域中に存在する。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、連続するヌクレオチド領域を含み、ヌクレオチド（単数または複数）またはヌクレオシド（単数または複数）、例えば、連続するヌクレオチド配列に官能基を結合させるために使用され得るヌクレオチドリンカー領域をさらに含み得る。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に対して相補的であり得る。一部の態様では、連続するヌクレオチド領域のヌクレオチド間に存在するヌクレオシド間連結は、全てホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。一部の態様では、連続するヌクレオチド領域は、１つまたは複数の糖改変されたヌクレオシドを含む。

用語「ギャップマー」は、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の親和性増強性の代替えのヌクレオシドを含む領域（ウイングまたは隣接配列）が５’側および３’側に隣接するＲＮａｓｅＨ動員性オリゴヌクレオチドの領域（ギャップまたはＤＮＡコア）を含むオリゴヌクレオチドを指す。種々のギャップマー設計が本明細書に記載される。ヘッドマー（headmer）およびテイルマー（tailmer）は、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能なオリゴヌクレオチドであり、ここで、隣接のうち一方は失われている、即ち、オリゴヌクレオチドの末端の一方のみが、親和性増強性の代替えのヌクレオシドを含む。ヘッドマーについては、３’隣接配列が失われており（即ち、５’隣接配列が、親和性増強性の代替えのヌクレオシドを含む）、テイルマーについては、５’隣接配列が失われている（即ち、３’隣接配列が、親和性増強性の代替えのヌクレオシドを含む）。「混合隣接配列ギャップマー」は、隣接配列が、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド、例えば、少なくとも１つのＤＮＡヌクレオシドまたは少なくとも１つの２’置換された代替えのヌクレオシド、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシド（単数または複数）など、もしくは二環式ヌクレオシド（例えば、ロックトヌクレオシドまたは拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシド）を含む、ギャップマーを指す。一部の態様では、混合隣接配列ギャップマーは、代替えのヌクレオシドを含む一方の隣接配列（例えば、５’または３’）を有し、他方の隣接配列（それぞれ、３’または５’）は、２’置換された代替えのヌクレオシド（単数または複数）を含む。

「リンカー」または「連結基」は、目的の１つの化学基またはセグメントを、１つまたは複数の共有結合による結合を介して、目的の別の化学基またはセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。コンジュゲート部分は、オリゴヌクレオチドに、直接的に、または連結部分（例えば、リンカーまたはテザー）を介して結合され得る。リンカーは、第３の領域、例えば、コンジュゲート部分を、オリゴヌクレオチド（例えば、領域ＡまたはＣの末端）に共有結合的に接続するように機能する。一部の態様では、コンジュゲートまたはオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、オリゴヌクレオチドとコンジュゲート部分との間に位置付けられたリンカー領域を含み得る。一部の態様では、コンジュゲートとオリゴヌクレオチドとの間のリンカーは、生物切断可能である。ホスホジエステルを含む生物切断可能なリンカーは、ＷＯ２０１４／０７６１９５（これにより参照により本明細書に組み込まれる）に、より詳細に記載されている。

本明細書で使用される場合、他に示されない限り、用語「相補的な」は、第２のヌクレオチドまたはヌクレオシド配列に関連して第１のヌクレオチドまたはヌクレオシド配列を記載するために使用される場合、当業者に理解されるように、第１のヌクレオチドまたはヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと、ある特定の条件下でハイブリダイズし、二重鎖構造を形成する能力を指す。かかる条件は、例えば、ストリンジェントな条件であり得、ここで、ストリンジェントな条件は、以下を含み得る：１２～１６時間にわたる、４００ｍＭＮａＣｌ、４０ｍＭＰＩＰＥＳｐＨ６．４、１ｍＭＥＤＴＡ、５０℃または７０℃、その後の洗浄（例えば、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」, Sambrook, et al. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照のこと）。他の条件、例えば、生物の内側で遭遇し得るような生理学的に適切な条件が、使用され得る。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチドまたはヌクレオシドの最終的な適用に従って、２つの配列の相補性の試験に最も適切な条件のセットを決定することができる。

「相補的な」配列は、本明細書で使用される場合、ハイブリダイズするそれらの能力に関して上記要件が満たされる限り、非ワトソン－クリック塩基対ならびに／または非天然および代替えのヌクレオチドもしくはヌクレオシドから形成される塩基対を含み得、あるいはそれらから完全に形成され得る。かかる非ワトソン－クリック塩基対には、Ｇ：ＵゆらぎまたはＨｏｏｇｓｔｅｉｎ塩基対合が含まれるがこれらに限定されない。本明細書に記載される、オリゴヌクレオチドと標的配列との間の相補的な配列は、一方または両方のヌクレオチドまたはヌクレオシド配列の長さ全体にわたる、第２のヌクレオチドまたはヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドへの、第１のヌクレオチドまたはヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの塩基対合を含む。かかる配列は、本明細書で、互いに関して「完全に相補的」と称され得る。しかし、第１の配列が、本明細書で、第２の配列に関して「実質的に相補的」と称される場合、それら２つの配列は、完全に相補的であり得るか、またはそれらの最終的な適用、例えば、ＲＮａｓｅＨ媒介性経路を介した遺伝子発現の阻害に最も適切な条件下でハイブリダイズする能力を保持しつつ、最大で３０塩基対の二重鎖について、ハイブリダイゼーションの際に、１つもしくは複数であるが、一般には、５、４、３もしくは２個以下のミスマッチした塩基対を形成し得る。「実質的に相補的な」は、目的のｍＲＮＡ（例えば、ＭＳＨ３をコードするｍＲＮＡ）の連続する部分に対して実質的に相補的なポリヌクレオチドを指し得る。例えば、ポリヌクレオチドは、その配列が、ＭＳＨ３をコードするｍＲＮＡの割り込まれていない部分に対して実質的に相補的である場合、ＭＳＨ３ｍＲＮＡの少なくとも一部分に対して相補的である。

本明細書で使用される場合、用語「相補性の領域」は、内因性遺伝子（例えば、ＭＳＨ３）の発現を妨害するような、遺伝子、一次転写物、配列（例えば、標的配列、例えば、ＭＳＨ３ヌクレオチド配列）またはプロセシングされたｍＲＮＡの全てまたは一部分に対して実質的に相補的な、オリゴヌクレオチド上の領域を指す。相補性の領域が、標的配列に対して完全には相補的でない場合、ミスマッチは、分子の内部または末端領域中にあり得る。一般に、最も許容されるミスマッチは、末端領域中、例えば、オリゴヌクレオチドの５’末端および／または３’末端の５、４、３または２ヌクレオチド以内にある。

本明細書で使用される場合、「ＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤」は、細胞または対象においてＭＳＨ３の発現のレベルを低減させるまたはＭＳＨ３の発現を阻害する、任意のポリヌクレオチド薬剤（例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ＡＳＯ）を指す。語句「ＭＳＨ３の発現を阻害する」は、本明細書で使用される場合、任意のＭＳＨ３遺伝子（例えば、マウスＭＳＨ３遺伝子、ラットＭＳＨ３遺伝子、サルＭＳＨ３遺伝子またはヒトＭＳＨ３遺伝子など）ならびにＭＳＨ３タンパク質をコードするＭＳＨ３遺伝子のバリアントまたは突然変異体の発現の阻害を含む。したがって、ＭＳＨ３遺伝子は、野生型ＭＳＨ３遺伝子、突然変異体ＭＳＨ３遺伝子、または遺伝的に操作された細胞、細胞の群もしくは生物の状況下でのトランスジェニックＭＳＨ３遺伝子であり得る。

「ＭＳＨ３の活性を低減させる」は、（例えば、ＭＳＨ３活性に関連するトリヌクレオチドリピート伸長障害に関連する遺伝子中のトリヌクレオチドリピートの量を低減させることによって）ＭＳＨ３に関連する活性のレベルを減少させることを意味する。ＭＳＨ３の活性レベルは、当該分野で公知の任意の方法を使用して（例えば、トリヌクレオチドリピートのレベルを測定するために、トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連する遺伝子を直接的に配列決定することによって）測定され得る。

「ＭＳＨ３のレベルを低減させる」は、例えば、細胞または対象にオリゴヌクレオチドを投与することによって、細胞または対象においてＭＳＨ３のレベルを減少させることを意味する。ＭＳＨ３のレベルは、当該分野で公知の任意の方法を使用して（例えば、細胞または対象におけるＭＳＨ３ｍＲＮＡのレベルまたはＭＳＨ３タンパク質のレベルを測定することによって）測定され得る。

「ＭＳＨ３を含むＭｕｔＳβヘテロダイマーの活性をモジュレートする」は、ＭｕｔＳβヘテロダイマーに関連する活性、または関連の下流の効果のレベルを変更することを意味する。ＭｕｔＳβヘテロダイマーの活性レベルは、当該分野で公知の任意の方法を使用して測定され得る。

本明細書で使用される場合、用語「阻害剤」は、タンパク質（例えば、ＭＳＨ３）のレベルおよび／または活性を低減させる任意の薬剤を指す。阻害剤の非限定的な例には、ポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド、例えば、ＡＳＯ）が含まれる。用語「阻害する」は、本明細書で使用される場合、「低減させる」、「サイレンシングする」、「下方調節する」、「抑制する」および他の類似の用語と相互交換可能に使用され、任意のレベルの阻害を含む。

語句「細胞をオリゴヌクレオチドと接触させる」、例えば、オリゴヌクレオチドは、本明細書で使用される場合、任意の可能な手段によって細胞を接触させることを含む。細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることは、細胞をｉｎｖｉｔｒｏでオリゴヌクレオチドと接触させることまたは細胞をｉｎｖｉｖｏでオリゴヌクレオチドと接触させることを含む。接触させることは、直接的にまたは間接的に実施され得る。したがって、例えば、オリゴヌクレオチドは、方法を実施する個体によって、細胞と物理的に接触され得、またはあるいは、オリゴヌクレオチド薬剤は、引き続いてそれが細胞と接触するのを可能にする、もしくは引き続いてそれを細胞と接触させる状況に置かれ得る。

細胞をｉｎｖｉｔｒｏで接触させることは、例えば、細胞をオリゴヌクレオチドと共にインキュベートすることによって実施され得る。細胞をｉｎｖｉｖｏで接触させることは、例えば、細胞が位置する組織中もしくはその近傍にオリゴヌクレオチドを注射することによって、または接触される細胞が位置する組織に薬剤が引き続いて到達するように、別の領域、例えば、血流もしくは皮下空間中にオリゴヌクレオチド薬剤を注射することによって、実施され得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを目的の部位、例えば、肝臓に方向付けるリガンド、例えば、ＧａｌＮＡｃ３を含み得るおよび／またはそれにカップリングされ得る。ｉｎｖｉｔｒｏ方法およびｉｎｖｉｖｏ方法の接触の組合せもまた可能である。例えば、細胞は、オリゴヌクレオチドとｉｎｖｉｔｒｏで接触され得、引き続いて対象中に移植され得る。

一態様では、細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることは、細胞中への取り込みまたは吸収を促進するまたはもたらすことによって、「導入する」ことまたは「オリゴヌクレオチドを細胞中に送達する」ことを含む。ＡＳＯの吸収または取り込みは、自発的拡散プロセスもしくは能動的細胞プロセスを介して、または補助剤もしくはデバイスによって、行われ得る。オリゴヌクレオチドを細胞中に導入することは、ｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏであり得る。例えば、ｉｎｖｉｖｏ導入について、オリゴヌクレオチドは、組織部位中に注射され得るまたは全身投与され得る。細胞中へのｉｎｖｉｔｒｏ導入には、電気穿孔およびリポフェクションなどの、当該分野で公知の方法が含まれる。さらなるアプローチは、本明細書の以下に記載されるおよび／または当該分野で公知である。

本明細書で使用される場合、「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」は、薬学的に活性な分子、例えば、核酸分子、例えば、オリゴヌクレオチドを封入する脂質層を含む小胞である。ＬＮＰは、安定な核酸－脂質粒子を指す。ＬＮＰは、典型的には、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、および粒子の凝集を防止する脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート）を含む。ＬＮＰは、例えば、その全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，８５８，２２５号；同第６，８１５，４３２号；同第８，１５８，６０１号；および同第８，０５８，０６９号に記載されている。

本明細書で使用される場合、用語「リポソーム」は、少なくとも１つの二重層、例えば、１つの二重層または複数の二重層で配置された両親媒性脂質から構成される小胞を指す。リポソームには、親油性材料から形成される膜および水性内部を有する単層膜および多重層膜小胞が含まれる。水性部分は、オリゴヌクレオチド組成物を含む。親油性材料は、一部の例ではオリゴヌクレオチド組成物を含み得るが、典型的にはオリゴヌクレオチド組成物を含まない水性外部から、水性内部を隔離する。リポソームには、「立体的に安定化された」リポソームもまた含まれ、この用語は、本明細書で使用される場合、リポソーム中に取り込まれた場合に、かかる特殊な脂質を欠くリポソームと比較して増強された循環寿命を生じる、１つまたは複数の特殊な脂質を含むリポソームを指す。

「ミセル」は、親水性部分を周囲の水相と接触させたままで、分子の全ての疎水性部分が内向きになるように、両親媒性分子が球状構造で配置される特定の型の分子アセンブリとして、本明細書で定義される。環境が疎水性である場合には、逆の配置が存在する。

用語「アンチセンス」は、本明細書で使用される場合、内因性遺伝子（例えば、ＭＳＨ３）の発現を妨害するような、遺伝子、一次転写物またはプロセシングされたｍＲＮＡの全てまたは一部分に対して十分に相補的なオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む核酸を指す。「相補的な」ポリヌクレオチドは、標準的なワトソン－クリック相補性規則に従って塩基対合することが可能なポリヌクレオチドである。具体的には、プリンは、ピリミジンと塩基対合して、シトシンと対になったグアニン（Ｇ：Ｃ）と、ＤＮＡの場合にはチミンと対になったアデニン（Ａ：Ｔ）またはＲＮＡの場合にはウラシルと対になったアデニン（Ａ：Ｕ）との組合せを形成する。２つのポリヌクレオチドは、各々が他方に対して実質的に相補的な少なくとも１つの領域を有するのであれば、それらが互いに対して完全には相補的でない場合であっても、互いにハイブリダイズすることができることが理解される。

本明細書で使用される場合、本明細書に記載される、（例えば、細胞または対象において）ＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤の「有効量」、「治療有効量」、および「十分な量」という用語は、ヒトを含む対象に投与された場合に、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量を指し、したがって、「有効量」またはその同義語は、それが適用されている状況に依存する。例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害を処置する状況下では、これは、ＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤の投与なしに得られる応答と比較して、処置応答を達成するのに十分な、ＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤の量である。かかる量に対応する、本明細書に記載されるＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる所与の薬剤の量は、種々の因子、例えば、所与の薬剤、医薬製剤、投与経路、疾患もしくは障害の型、対象の正体（例えば、年齢、性別および／または体重）または処置されている宿主などに依存して変動するが、それにもかかわらず、当業者によって慣用的に決定され得る。また、本明細書で使用される場合、本開示のＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤の「治療有効量」は、対照と比較して、対象において有益なまたは所望の結果を生じる量である。本明細書で定義されるように、本開示のＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤の治療有効量は、当該分野で公知の慣用的な方法によって、当業者によって容易に決定され得る。投薬量レジメンは、最適な治療応答を提供するために調整され得る。

「予防有効量」は、本明細書で使用される場合、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有する対象またはトリヌクレオチドリピート伸長障害を有する素因がある対象に投与された場合に、疾患または疾患の１つもしくは複数の症状を予防または寛解させるのに十分な、オリゴヌクレオチドの量を含む意図である。疾患を寛解させることは、疾患の過程を緩徐化することまたは後に発症する疾患の重症度を低減させることを含む。「予防有効量」は、オリゴヌクレオチド、薬剤がどのように投与されるか、疾患のリスクの程度、および病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝的構成、存在する場合には先行する処置または随伴する処置の型、ならびに処置される患者の他の個々の特徴に依存して変動し得る。予防有効量は、例えば、本明細書に記載される、（例えば、細胞または対象において）ＭＳＨ３のレベルおよび／もしくは活性を低減させる薬剤の量を指し得、またはヒトを含む対象に投与された場合に、本明細書に記載されるトリヌクレオチドリピート障害のうち１つもしくは複数の開始を、予測された開始と比較した場合に、少なくとも１２０日、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年もしくはそれよりも長く遅延させるのに十分な量を指し得る。

「治療有効量」または「予防有効量」には、任意の処置に適用可能な合理的なベネフィット／リスク比で、いくらかの所望の局所または全身効果を生じる、オリゴヌクレオチドの量（単一の用量または複数の用量のいずれかで投与される）もまた含まれる。本明細書の方法で使用されるオリゴヌクレオチドは、かかる処置に適用可能な合理的なベネフィット／リスク比を生じるのに十分な量で投与され得る。

特定の遺伝子の「トリヌクレオチドリピート伸長を低減させるのに有効な量」は、本明細書に記載される、（例えば、細胞または対象において）ＭＳＨ３のレベルおよび／もしくは活性を低減させる薬剤の量、またはヒトを含む対象に投与された場合に、特定の遺伝子（例えば、本明細書に記載されるトリヌクレオチドリピート伸長障害に関連する遺伝子）のトリヌクレオチドリピート伸長を低減させるのに十分な量を指す。

本明細書で使用される場合、用語「トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別された対象」は、トリヌクレオチドリピート伸長障害もしくはその症状の識別など、トリヌクレオチドリピート伸長障害の、またはそれに関連する分子的もしくは病理学的状態、疾患または状態を有すると識別された対象、あるいは特定の処置レジメンから利益を得うるトリヌクレオチドリピート伸長障害を有するまたは有すると疑われる対象の識別を指す。

本明細書で使用される場合、「トリヌクレオチドリピート伸長障害」は、その遺伝子またはイントロンについての正常な安定な閾値を超える、対象における遺伝子またはイントロン中の過剰なトリヌクレオチドリピート（例えば、ＣＡＧなどのトリヌクレオチドリピート）によって特徴付けられる遺伝性疾患または障害のクラスを指す。ヌクレオチドリピートは、ヒトゲノムに共通しており、通常は疾患には関連しない。しかし、一部の場合には、リピートの数が、安定な閾値を超えて伸長し、疾患をもたらし得、症状の重症度は、一般に、リピートの数と相関する。トリヌクレオチドリピート伸長障害には、「ポリグルタミン」および「非ポリグルタミン」障害が含まれる。

「タンパク質のレベルを決定する」は、直接的にまたは間接的にのいずれかでの、当該分野で公知の方法による、タンパク質、またはタンパク質をコードするｍＲＮＡの検出を意味する。「直接的に決定する」は、物理的な実体または値を得るためにプロセスを実施すること（例えば、試料に対してアッセイもしくは試験を実施すること、または「試料を分析する」ことであり、この用語は、本明細書で定義される）を意味する。「間接的に決定する」は、別の団体または供給源（例えば、物理的な実体または値を直接的に獲得した第三者の実験室）から、物理的な実体または値を受けとることを指す。タンパク質レベルを測定するための方法には、一般に、ウエスタンブロッティング、イムノブロッティング、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、表面プラズモン共鳴、ケミルミネッセンス、蛍光偏光、リン光、免疫組織化学的分析、マトリクス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）－質量分析、マイクロサイトメトリー（microcytometry）、顕微鏡、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）およびフローサイトメトリー、ならびに酵素活性、または他のタンパク質パートナーとの相互作用が含まれるがこれらに限定されない、タンパク質の特性に基づくアッセイが含まれるがこれらに限定されない。ｍＲＮＡレベルを測定するための方法は、当該分野で公知である。

参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に関して、「パーセント（％）配列同一性」は、配列をアラインし、必要に応じて、最大のパーセント配列同一性を達成するためにギャップ（ＤＮＡコア配列）を導入した後に、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列中の核酸またはアミノ酸と同一である、候補配列中の核酸またはアミノ酸のパーセンテージとして定義される。パーセント核酸またはアミノ酸配列同一性を決定することを目的としたアラインメントは、当業者の技術範囲内の種々の方法で、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェアを使用して達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメーターを決定することができる。例えば、パーセント配列同一性値は、配列比較コンピュータープログラムＢＬＡＳＴを使用して生成され得る。例示として、所与の核酸またはアミノ酸配列Ａの、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに対する（「ｔｏ」、「ｗｉｔｈ」または「ａｇａｉｎｓｔ」）パーセント配列同一性（あるいは、これは、所与の核酸またはアミノ酸配列Ｂに対する（「ｔｏ」、「ｗｉｔｈ」または「ａｇａｉｎｓｔ」）ある特定のパーセント配列同一性を有する所与の核酸またはアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される：
１００×（割合Ｘ／Ｙ）
式中、Ｘは、ＡおよびＢのそのプログラムのアラインメント中の、配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）によって同一のマッチとしてスコアされたヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂ中の核酸の総数である。核酸またはアミノ酸配列Ａの長さが、核酸またはアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するパーセント配列同一性は、ＢのＡに対するパーセント配列同一性と等しくならないことが理解される。

「レベル」は、必要に応じて参照と比較される、タンパク質、またはタンパク質（例えば、ＭＳＨ３）をコードするｍＲＮＡのレベルまたは活性を意味する。参照は、本明細書で定義されるような、任意の有用な参照であり得る。タンパク質の「減少したレベル」または「増加したレベル」は、参照と比較した、タンパク質レベルにおける減少または増加（例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％もしくはそれよりも大きい減少もしくは増加；参照と比較した、約１０％、約１５％、約２０％、約５０％、約７５％、約１００％もしくは約２００％よりも大きい減少もしくは増加；約０．０１倍、約０．０２倍、約０．１倍、約０．３倍、約０．５倍、約０．８倍未満、もしくはそれ未満の減少もしくは増加；または約１．２倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．８倍、約２．０倍、約３．０倍、約３．５倍、約４．５倍、約５．０倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約１００倍、約１０００倍よりも大きい、もしくはそれよりも大きい増加）を意味する。タンパク質のレベルは、質量／体積（例えば、ｇ／ｄＬ、ｍｇ／ｍＬ、μｇ／ｍＬもしくはｎｇ／ｍＬ）で、または試料中の総タンパク質もしくはｍＲＮＡと比較したパーセンテージで表現され得る。

用語「医薬組成物」は、本明細書で使用される場合、薬学的に許容される賦形剤を用いて製剤化された本明細書に記載される化合物を含む組成物を示し、哺乳動物における疾患の処置のための治療レジメンの一部として、政府の規制機関の承認によって製造または販売され得る。医薬組成物は、例えば、単位投薬形態での経口投与のために（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ジェルキャップまたはシロップ）；外用投与のために（例えば、クリーム、ゲル、ローションまたは軟膏として）；静脈内投与のために（例えば、粒状塞栓なしの無菌溶液として、および静脈内使用に適切な溶媒系中で）；くも膜下腔内注射のために；側脳室内（intracerebroventricular）注射のために；実質内注射のために；または任意の他の薬学的に許容される製剤で、製剤化され得る。

「薬学的に許容される賦形剤」は、本明細書で使用される場合、患者において実質的に非毒性かつ非炎症性である特性を有する、本明細書に記載される化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解することが可能なビヒクル）を指す。賦形剤には、例えば、抗付着剤、抗酸化剤、バインダー、コーティング、圧縮助剤、崩壊剤、色素（顔料）、皮膚軟化薬、乳化剤、フィラー（希釈剤）、フィルム形成剤またはコーティング、香味料、香料、流動促進剤（流動増強剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、および水和の水が含まれ得る。例示的な賦形剤には、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣおよびキシリトールが含まれるがこれらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩」は、本明細書に記載される化合物のいずれかの化合物の、任意の薬学的に許容される塩を意味する。例えば、本明細書に記載される化合物のいずれかの薬学的に許容される塩には、妥当な医学的判断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー応答を伴わない、ヒトおよび動物の組織と接触した使用に適切な、合理的なベネフィット／リスク比に見合った塩が含まれる。薬学的に許容される塩は、当該分野で周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977およびPharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl and C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008に記載されている。塩は、本明細書に記載される化合物の最終的な単離および精製の間にｉｎｓｉｔｕで調製され得、または遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることによって別々に調製され得る。

本明細書に記載される化合物は、薬学的に許容される塩としての調製が可能なように、イオン化可能な基を有し得る。これらの塩は、無機酸もしくは有機酸が関与する酸付加塩であり得、または塩は、酸性形態の本明細書に記載される化合物の場合には、無機もしくは有機塩基から調製され得る。頻繁に、化合物は、薬学的に許容される酸または塩基の付加産物として調製される薬学的に許容される塩として調製または使用される。適切な薬学的に許容される酸および塩基ならびに適切な塩の調製のための方法は、当該分野で周知である。塩は、無機および有機の酸および塩基を含む薬学的に許容される非毒性の酸および塩基から調製され得る。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩（camphorate）、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（pectinate）、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩および吉草酸塩が含まれる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウム、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミンおよびエチルアミンが含まれるがこれらに限定されない、非毒性アンモニウム、第４級アンモニウムおよびアミンカチオンが含まれる。

「参照」は、タンパク質またはｍＲＮＡのレベルまたは活性を比較するために使用される任意の有用な参照を意味する。参照は、比較目的で使用される任意の試料、標準、標準曲線またはレベルであり得る。参照は、正常参照試料または参照標準もしくはレベルであり得る。「参照試料」は、例えば、対照、例えば、所定の陰性対照値、例えば、「正常対照」もしくは同じ対象から採取した事前の試料；正常健康対象からの試料、例えば、正常細胞もしくは正常組織；疾患を有さない対象からの試料（例えば、細胞もしくは組織）；疾患を有すると診断されたが、本明細書に記載される化合物で未だ処置されていない対象からの試料；本明細書に記載される化合物によって処置された対象からの試料；または公知の正常濃度の精製されたタンパク質（例えば、本明細書に記載される任意のもの）の試料であり得る。「参照標準またはレベル」は、参照試料に由来する値または数を意味する。「正常対照値」は、非疾患状態を示す所定の値、例えば、健康対照対象において予想された値である。典型的には、正常対照値は、範囲（「ＸとＹとの間」）、高い閾値（「Ｘ以下」）または低い閾値（「Ｘ以上」）として表現される。特定のバイオマーカーについての正常対照値内の測定された値を有する対象は、典型的には、そのバイオマーカーについての「正常範囲内」と称される。正常参照標準またはレベルは、疾患または障害（例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害）を有さない正常対象；本明細書に記載される化合物で処置された対象に由来する値または数であり得る。一部の態様では、参照試料、標準またはレベルは、以下の基準のうち少なくとも１つによって、試料対象試料にマッチさせられる：年齢、体重、性別、疾患ステージおよび健康全般。正常参照範囲内の精製されたタンパク質、例えば、本明細書に記載される任意のもののレベルの標準曲線は、参照として使用され得る。

本明細書で使用される場合、用語「対象」は、例えば、実験的、診断的、予防的および／または治療的目的のために組成物が投与され得る、任意の生物を指す。典型的な対象には、任意の動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類およびヒト）が含まれる。対象は、処置を求め得るもしくは処置を必要とし得る、処置を要求し得る、処置を受けていてもよい、将来処置を受けていてもよい、または特定の疾患もしくは状態についての熟練の専門家によるケアを受けているヒトもしくは動物であり得る。

本明細書で使用される場合、用語「処置する（treat）」、「処置された」および「処置する（treating）」は、治療的処置および予防的（prophylactic）または予防的（preventative）手段の両方を意味し、その目的は、所望されない生理学的状態、障害もしくは疾患を予防もしくは鈍化（低下）させること、または有益なもしくは所望の臨床結果を得ることである。有益なまたは所望の臨床結果には、症状の軽減；状態、障害もしくは疾患の程度の減退；状態、障害もしくは疾患の安定化された（即ち、悪化していない）状態；開始の遅延、または状態、障害もしくは疾患進行の緩徐化；検出可能であれ検出不能であれ、状態、障害もしくは疾患状態の寛解、または軽快（部分的であれ完全であれ）；患者によって必ずしも識別可能ではない少なくとも１つの測定可能な物理的パラメーターの寛解；あるいは状態、障害もしくは疾患の増強もしくは改善が含まれるがこれらに限定されない。処置には、過剰なレベルの副作用なしに臨床的に顕著な応答を惹起することが含まれる。処置には、処置を受けていない場合の予想された生存と比較して、生存を延長することもまた含まれる。

本明細書で使用される場合、用語「バリアント」および「誘導体」は、相互交換可能に使用され、化合物、ペプチド、タンパク質、または本明細書に記載される他の物質の、天然に存在する、合成のおよび半合成のアナログを指す。化合物、ペプチド、タンパク質、または本明細書に記載される他の物質のバリアントまたは誘導体は、元の材料の生物活性を保持し得るまたは改善し得る。

１つまたは複数の態様の詳細は、以下の説明に示される。他の特色、目的および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかとなる。

図１は、４、８、１２および１６週齢のＲ６／２マウス（１つの週齢群当たり、４匹の雄性および４匹の雌性）における不安定性指数によって測定される、線条体におけるヒトＨＴＴ導入遺伝子の体細胞伸長を示す分布プロットである。バーは平均値を示し、エラーバーは標準偏差を示す。図２は、４、８、１２および１６週齢のＲ６／２マウス（１つの週齢群当たり、４匹の雄性および４匹の雌性）における不安定性指数によって測定される、小脳におけるヒトＨＴＴ導入遺伝子の体細胞伸長を示す分布プロットである。

詳細な説明
本発明者らは、細胞におけるＭＳＨ３レベルおよび／または活性の阻害または枯渇が、トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置において有効であることを見出した。したがって、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置を必要とする対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置するための有用な組成物および方法が、本明細書で提供される。

Ｉ．トリヌクレオチドリピート伸長障害
トリヌクレオチドリピート伸長障害は、ゲノム領域内のリピート領域の病原性伸長によって特徴付けられる遺伝子障害のファミリーである。かかる障害では、リピートの数は、遺伝子の正常な安定な閾値の数を超え、病的な範囲まで伸長している。

トリヌクレオチドリピート伸長障害は、一般に、「ポリグルタミン」または「非ポリグルタミン」とカテゴライズされ得る。ハンチントン病（ＨＤ）およびいくつかの脊髄小脳失調症を含むポリグルタミン障害は、特定の遺伝子のタンパク質コード領域中のＣＡＧ（グルタミン）リピートによって引き起こされる。非ポリグルタミン障害は、より不均一であり、筋強直性ジストロフィーなどでは、非コード領域中のＣＡＧトリヌクレオチドリピート伸長によって引き起こされ得、または脆弱Ｘ症候群を担うＣＧＧリピート伸長など、コード領域もしくは非コード領域中にあり得るＣＡＧ以外のトリヌクレオチドリピートの伸長によって引き起こされ得る。

トリヌクレオチドリピート伸長障害は、リピートの数が、世代毎に、またはさらには同じ個体において細胞毎に変動し得るという意味で、動的である。リピート伸長は、ＤＮＡ複製の間のポリメラーゼ「スリッピング」によって引き起こされると考えられている。ＤＮＡ配列中のタンデムリピートは、親鎖と娘鎖との間の相補的な塩基対合を維持しつつ、「ループアウト」し得る。ループ構造が娘鎖から形成される場合、リピートの数は増加する。

逆に、ループ構造が親鎖から形成される場合、リピートの数は減少する。伸長は、低減よりも一般的なようである。一般に、リピート伸長の長さは、予後判定と負に相関する；より長いリピートは、より早い開始年齢および悪化した疾患重症度と相関する。したがって、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、「表現促進」を受けやすいが、これは、１つの世代から次の世代への、これらのリピートの伸長に起因する、罹患した家族の代々の世代を通じた、症状の重症度および／または開始年齢の悪化を意味する。

トリヌクレオチドリピート伸長障害は、当該分野で周知である。例示的なトリヌクレオチドリピート伸長障害およびそれに一般に関連する遺伝子のトリヌクレオチドリピートは、表１に含まれる。

トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連するタンパク質は、典型的には、トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連するタンパク質の、トリヌクレオチドリピート伸長障害との実験的関連に基づいて選択される。例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連するタンパク質の産生速度または循環濃度は、トリヌクレオチドリピート伸長障害を欠く集団と比較して、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有する集団において上昇または抑圧され得る。タンパク質レベルにおける差異は、ウエスタンブロット、免疫組織化学的染色、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）および質量分析が含まれるがこれらに限定されないプロテオミクス技術を使用して評価され得る。あるいは、トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連するタンパク質は、ＤＮＡマイクロアレイ分析、遺伝子発現の連続分析（ＳＡＧＥ）および定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）が含まれるがこれらに限定されないゲノム技術を使用して、タンパク質をコードする遺伝子の遺伝子発現プロファイルを得ることによって識別され得る。

ＩＩ．トリヌクレオチドリピート伸長におけるミスマッチ修復経路の関与の証拠
ＤＮＡ修復経路、特にミスマッチ修復（ＭＭＲ）がトリヌクレオチドリピートの伸長に関与するという証拠が増えてきている。最近のゲノムワイド関連（ＧＷＡ）分析は、ハンチントン病（ＨＤ）の神経学的開始年齢を変更する遺伝的変異を保有する遺伝子座の識別をもたらした（GEM-HD Consortium, Cell. 2015 Jul 30;162(3):516-26）。この研究は、Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡミスマッチ修復遺伝子ｍｕｔＬのヒトホモログであるＭＬＨ１を識別した。ポリグルタミン病患者における引き続くＧＷＡ研究は、全てのポリグルタミン病（ＨＤおよびＳＣＡ）をグループにした場合の開始年齢の、群としてのＤＮＡ修復遺伝子との顕著な関連、ならびにＦＡＮ１およびＰＭＳ２中の特定のＳＮＰと疾患との顕著な関連を見出した（Bettencourt et al., (2016) Ann. Neurol., 79: 983-990）。これらの結果は、ＣＡＧ不安定性の新規の重要な改変因子としてＭｌｈ１およびＭｌｈ３を識別した、ハンチントン病の２つの異なるマウスモデルにおけるリピート伸長の差異を比較する初期の研究からの結果と一致した（Pinto et al., (2013) Mismatch Repair Genes Mlh1 and Mlh3 Modify CAG Instability in Huntington's Disease Mice: Genome-Wide and Candidate Approaches. PLoS Genet 9(10): e1003930）。体細胞伸長は、ミスマッチ修復経路の別のメンバーである８－オキソ－グアニングリコシラーゼ（ＯＧＧ１）を欠くトランスジェニックマウスにおいて低減されることが見出されたので、ＯＧＧ１もまた、伸長に関与している（Kovtun I. V. et al. (2007) Nature 447, 447-452）。しかし、別の研究は、ｈＯＧＧ１中に、低減されたＯＧＧ１活性を生じるＳｅｒ３２６Ｃｙｓ多型を含むヒト対象が、増加した突然変異体ハンチンチンを生じることを見出した（Coppede et al., (2009) Toxicol., 278: 199-203）。同様に、マウスＨＤモデルにおける、ＤＮＡ修復経路の別の構成要素であるＦａｎ１の完全な不活性化は、体細胞ＣＡＧ伸長を生じる（Long et al. (2018) J. Hum Genet., 103: 1-9）。ミスマッチ修復経路の別の構成要素であるＭＳＨ３は、体細胞伸長に関連することが報告されている：Ｍｓｈ３中の多型は、筋強直性ジストロフィー１型（ＤＭ１）患者における伸長されたＣＴＧトリヌクレオチドリピートの体細胞不安定性に関連した（Morales et al., (2016) DNA Repair 40: 57-66）。さらに、Ｍｓｈ３およびＭｌｈ１中の天然の多型は、ＣＴＧ・ＣＡＧリピート不安定性におけるマウス株特異的差異のメディエーターということが明らかになった（Pinto et al. (2013) ibid；Tome et al., (2013) PLoS Genet. 9 e1003280）。伸長リピートにおけるＭｓｈ２およびＭｓｈ３の関与のさらなる証拠は、ＭＳＨ２またはＭＳＨ３のいずれかの低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）ノックダウンが、ＭＳＨ２またはＭＳＨ３のいずれかの異所性発現は、ＦＲＤＡ患者に由来する線維芽細胞におけるフリードライヒ運動失調症（ＦＲＤＡ）遺伝子のＧＡＡトリヌクレオチドリピート伸長を緩徐化し、ＭＳＨ２またはＭＳＨ３のいずれかの異所性発現が、ＦＲＤＡ患者に由来する線維芽細胞におけるフリードライヒ運動失調症（ＦＲＤＡ）遺伝子のＧＡＡトリヌクレオチドリピート伸長を誘導した研究において報告された（Halabi et al., (2012) J. Biol. Chem. 287, 29958-29967）。上に提供された一部の一貫性のない結果にもかかわらず、ＭＭＲ経路が、種々の障害におけるトリヌクレオチドリピートの伸長においていくらかの役割を果たすという強い証拠が存在する。さらに、彼らは、ＭＭＲ経路の阻害がこれらのリピート伸長障害の処置または予防を提供するということを認識した最初の者である；しかし、これらのリピート伸長障害を処置または予防することを目的としてＭＭＲをモジュレートする治療は、現在入手可能でも開発中でもない。

ＩＩＩ．オリゴヌクレオチド薬剤
細胞においてＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる本明細書に記載される薬剤は、例えば、ポリヌクレオチド、例えば、オリゴヌクレオチドであり得る。これらの薬剤は、ＭＳＨ３に関連する活性、もしくは関連の下流の効果のレベルを低減させ、または細胞もしくは対象においてＭＳＨ３のレベルを低減させる。

一部の態様では、ＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤は、ポリヌクレオチドである。一部の態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮａｓｅＨ媒介性経路によって作用する、一本鎖オリゴヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドには、標的配列（例えば、ＭＳＨ３）のヌクレオチド塩基との水素結合相互作用を介してポリヌクレオチド標的配列または配列部分を認識する、典型的には約１０～３０ヌクレオチド長のＤＮＡおよびＤＮＡ／ＲＮＡキメラ分子が含まれる。オリゴヌクレオチド分子は、ＭＳＨ３の発現レベル（例えば、タンパク質レベルまたはｍＲＮＡレベル）を減少させ得る。例えば、オリゴヌクレオチドには、全長ＭＳＨ３を標的化するオリゴヌクレオチドが含まれる。一部の態様では、オリゴヌクレオチド分子は、ＲＮａｓｅＨ酵素を動員し、標的ｍＲＮＡ分解をもたらす。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、機能の正の制御因子のレベルおよび／または活性を減少させる。他の態様では、オリゴヌクレオチドは、機能の正の制御因子の阻害剤のレベルおよび／または活性を増加させる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、機能の負の制御因子のレベルおよび／または活性を増加させる。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３のレベルおよび／もしくは活性または機能を減少させる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３の発現を阻害する。他の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３の分解を増加させるおよび／またはＭＳＨ３の安定性（即ち、半減期）を減少させる。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得る。

オリゴヌクレオチドには、ＭＳＨ３遺伝子の発現において形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部分に対して相補的な相補性の領域（例えば、連続する核酸塩基領域）を有するオリゴヌクレオチドが含まれる。相補性の領域は、約３０ヌクレオチド長またはそれ未満（例えば、約３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９もしくは１８ヌクレオチド長またはそれ未満）であり得る。ＭＳＨ３遺伝子を発現する細胞との接触の際に、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子（例えば、ヒト、霊長類、非霊長類または鳥類ＭＳＨ３遺伝子）の発現を、例えば、ＰＣＲもしくは分岐鎖ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）に基づく方法によって、またはタンパク質に基づく方法によって、例えば、ウエスタンブロッティングもしくはフローサイトメトリー技術などを使用する免疫蛍光分析によってアッセイした場合、少なくとも約１０％阻害し得る。

同様に、標的配列に対する相補性の領域は、１０と３０との間の連結されたヌクレオシド長、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０、または１０～２９、１０～２８、１０～２７、１０～２６、１０～２５、１０～２４、１０～２３、１０～２２、１０～２１、１０～２０、１０～１９、１０～１８、１０～１７、１０～１６、１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３もしくは２１～２２の間の連結されたヌクレオシド長であり得る。上に列挙された範囲および長さの中間の範囲および長さもまた企図される。

オリゴヌクレオチドは、例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．などから市販されているような自動化ＤＮＡ合成機の使用によって、以下にさらに議論されるように、当該分野で公知の標準的な方法によって合成され得る。

オリゴヌクレオチド化合物は、溶液相もしくは固相有機合成またはその両方を使用して調製され得る。有機合成は、非天然のまたは代替えのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドが容易に調製され得るという利点を提供する。一本鎖オリゴヌクレオチドは、溶液相もしくは固相有機合成またはその両方を使用して調製され得る。

一態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１０個の連続するヌクレオチドに対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％）の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１７個の連続するヌクレオチド、１９～２３個の連続するヌクレオチド、１９個の連続するヌクレオチドまたは２０個の連続するヌクレオチドに対して相補的な配列を含む。オリゴヌクレオチド配列は、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つに提供される配列の群から選択され得る。

一態様では、配列は、ＭＳＨ３遺伝子の発現において生成されるｍＲＮＡの配列に対して実質的に相補的である。一部の態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５５～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９０３、９１２～９７４、９８４～１０４７、１０５４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１７６８～１８６６、２０２９～２０６３、２０８７～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３３０、２３７１～２４１０、２４３２～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７３、３１３２～３２４５、３２６６～３３０６、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７４～４１０１および４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５９～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３２９、２３７１～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７２、３１３２～３２４５、３２６６～３３０３、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７６～４１０１および４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９６、３５９～３８５、４１３～４６２、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９６、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６５～２２９３、２３７８～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１２、２７２７～２７５３、２７６７～２９１９、２９３４～３０００、３０４６～３０７１、３１４４～３１８３、３２２０～３２４５、３３９７～３４８４、３５３４～３５７５、３５９１～３６１６、３９０１～３９３１および４２８１～４３０６位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、ＭＳＨ３遺伝子の４３５～４６２、５５９～５８４、７６３～８０８、８７６～９０２、９３１～９５８、１００１～１０８３、１１１４～１１７９、１２９４～１３３７、１５４４～１５７８、１８３５～１８６３、２０３１～２０５６、２１４４～２１６９、２５４３～２５７７、２５９０～２６１５、２６２１～２６４７、２６８５～２７１１、２７６９～２７９５および２８１６～２８６８位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の８７６～９０２、９３０～９５８、１０５６～１０８１、１１１４～１１３９、１１５４～１１７９、１３１０～１３３７、１５４６～１５７１、１８３６～１８６２、２１４１～２１９９、２２６７～２２９２、２５４０～２５８０、２６２０～２６４７、２６８６～２７１１、２７６９～２８６８、２９３９～２９７６、３１４４～３１６９および３３９９～３４２４位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。一態様では、少なくとも１０核酸塩基の領域は、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、ＭＳＨ３遺伝子の９８４～１０２１、１４６７～１４９３、１７２２～１７４７、１７６７～１８０２、１８３３～１８６１、２３８５～２４１０、２５５４～２５８１、２８１６～２８４５、２８６１～２９２０および３１５１～３１８３位のうち１つまたは複数の位置において相補的である。

一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２および２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０および２４６２および２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０および２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０および１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１および２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５および１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つからなる。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２および２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０および２４６２および２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０および２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０および１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１および２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。一態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５および１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる。

一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭにおいて、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭにおいて、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す。一態様では、オリゴヌクレオチドは、細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す。

細胞アッセイは、哺乳動物細胞、例えば、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３またはＨｅＬａ細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して所望の濃度のオリゴヌクレオチド（例えば、２ｎＭまたは２０ｎＭ）でトランスフェクトするステップ、およびトランスフェクトされた細胞のＭＳＨ３ｍＲＮＡレベルを、対照細胞のＭＳＨ３レベルと比較するステップ、を含み得る。対照細胞は、ＭＳＨ３に対して特異的でないオリゴヌクレオチドでトランスフェクトされ得る、またはモックトランスフェクトされ得る。ｍＲＮＡレベルは、ＲＴ－ｑＰＣＲを使用して決定され得、ＭＳＨ３ｍＲＮＡレベルは、ＧＡＰＤＨｍＲＮＡレベルに対して標準化され得る。パーセント阻害は、対照細胞のＭＳＨ３濃度と比較したＭＳＨ３ｍＲＮＡ濃度のパーセントとして計算され得る。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドまたはその連続するヌクレオチド領域は、本明細書で単に「ギャップマー」とも称される、ギャップマー設計または構造を有する。ギャップマー構造では、オリゴヌクレオチドは、「５－＞３」の配向で、少なくとも３つの別個の構造的領域を含む：５’隣接配列（５’ウイングとしても公知）、ＤＮＡコア配列（ギャップとしても公知）および３’隣接配列（３’ウイングとしても公知）。この設計では、５’および３’隣接配列は、ＤＮＡコア配列に隣接する少なくとも１つの代替えのヌクレオシドを含み、一部の態様では、２～７の代替えのヌクレオシドの連続するストレッチ、または代替えのヌクレオシドおよびＤＮＡヌクレオシドの連続するストレッチ（代替えのヌクレオシドおよびＤＮＡヌクレオシドの両方を含む混合隣接配列）を含み得る。

５’隣接配列領域の長さは、少なくとも２ヌクレオシド長（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５またはそれよりも多くのヌクレオシド長）であり得る。３’隣接配列領域の長さは、少なくとも２ヌクレオシド長（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも少なくとも４、少なくとも５またはそれよりも多くのヌクレオシド長）であり得る。５’および３’隣接配列は、それらが含むヌクレオシドの数に関して、対称または非対称であり得る。一部の態様では、ＤＮＡコア配列は、５－１０－５ギャップマーとも称される、各々が約５ヌクレオシドを含む５’および３’隣接配列が隣接した約１０ヌクレオシドを含む。

結果として、ＤＮＡコア配列に隣接する５’隣接配列および３’隣接配列のヌクレオシドは、代替えのヌクレオシド、例えば、２’代替えのヌクレオシドである。ＤＮＡコア配列は、オリゴヌクレオチドがＭＳＨ３標的核酸との二重鎖中にある場合に、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能なヌクレオチドの連続するストレッチを含む。一部の態様では、ＤＮＡコア配列は、５～１６個のＤＮＡヌクレオシドの連続するストレッチを含む。他の態様では、ＤＮＡコア配列は、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％）の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む。一部の態様では、ギャップマーは、ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１７個の連続するヌクレオチド、１９～２３個の連続するヌクレオチドまたは１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む。ギャップマーは、ＭＳＨ３標的核酸に対して相補的であり、したがって、オリゴヌクレオチドの連続するヌクレオシド領域であり得る。

ＤＮＡコア配列の５’および３’末端に隣接する５’および３’隣接配列は、１つまたは複数の親和性増強性代替えのヌクレオシドを含み得る。一部の態様では、５’および／または３’隣接配列は、少なくとも１つの２’－Ｏ－メトキシエチル（ＭＯＥ）ヌクレオシドを含む。一部の態様では、５’および／または３’隣接配列は、少なくとも２つのＭＯＥヌクレオシドを含む。一部の態様では、５’隣接配列は、少なくとも１つのＭＯＥヌクレオシドを含む。一部の態様では、５’隣接配列および３’隣接配列は共に、１つのＭＯＥヌクレオシドを含む。一部の態様では、隣接配列中の全てのヌクレオシドが、ＭＯＥヌクレオシドである。他の態様では、隣接配列は、ＭＯＥヌクレオシドならびに他のヌクレオシド、例えば、ＤＮＡヌクレオシドおよび／または非ＭＯＥ代替えのヌクレオシド、例えば、二環式ヌクレオシド（ＢＮＡ）（例えば、ＬＮＡヌクレオシドまたはｃＥＴヌクレオシド）もしくは他の２’置換されたヌクレオシドの両方を含み得る（混合隣接配列）。この場合、ＤＮＡコア配列は、親和性増強性代替えのヌクレオシド、例えば、ＭＯＥヌクレオシドが５’および３’末端に隣接する少なくとも５個のＲＮａｓｅＨ動員性ヌクレオシド（例えば、５～１６個のＤＮＡヌクレオシド）の連続する配列として定義される。

他の態様では、５’および／または３’隣接配列は、少なくとも１つのＢＮＡ（例えば、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドまたはｃＥＴヌクレオシド）を含む。一部の態様では、５’および／または３’隣接配列は、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドを含む。一部の態様では、５’隣接配列は、少なくとも１つのＢＮＡを含む。一部の態様では、５’隣接配列および３’隣接配列は共に、ＢＮＡを含む。一部の態様では、隣接配列中の全てのヌクレオシドがＢＮＡである。他の態様では、隣接配列は、ＢＮＡならびに他のヌクレオシド、例えば、ＤＮＡヌクレオシドおよび／または非ＢＮＡ代替えのヌクレオシド、例えば、２’置換されたヌクレオシドの両方を含み得る（混合隣接配列）。この場合、ＤＮＡコア配列は、親和性増強性代替えのヌクレオシド、例えば、ＢＮＡ、例えば、ＬＮＡ、例えば、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡが５’および３’末端に隣接する少なくとも５個のＲＮａｓｅＨ動員性ヌクレオシド（例えば、５～１６個のＤＮＡヌクレオシド）の連続する配列として定義される。

ＤＮＡコア配列の５’末端に結合された５’隣接は、少なくとも１つの代替えの糖部分（例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７つまたはそれよりも多くの代替えの糖部分）を含む（comprise）、含む（contain）またはそれからなる。一部の態様では、隣接配列は、１～７つの代替えの核酸塩基、例えば、２～６つの代替えの核酸塩基、例えば、２～５つの代替えの核酸塩基、例えば、２～４つの代替えの核酸塩基、例えば、１～３つの代替えの核酸塩基、例えば、１、２、３または４つの代替えの核酸塩基を含むまたはそれからなる。一部の態様では、隣接配列は、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結（例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７つまたはそれよりも多くの代替えのヌクレオシド間連結）を含むまたはそれからなる。

ＤＮＡコア配列の３’末端に結合された３’隣接は、少なくとも１つの代替えの糖部分（例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７つまたはそれよりも多くの代替えの糖部分）を含む（comprise）、含む（contain）またはそれからなる。一部の態様では、隣接配列は、１～７つの代替えの核酸塩基、例えば、２～６つの代替えの核酸塩基、例えば、２～５つの代替えの核酸塩基、例えば、２～４つの代替えの核酸塩基、例えば、１～３つの代替えの核酸塩基、例えば、１、２、３または４つの代替えの核酸塩基を含むまたはそれからなる。一部の態様では、隣接配列は、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結（例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７つまたはそれよりも多くの代替えのヌクレオシド間連結）を含むまたはそれからなる。

ある態様では、隣接配列中の代替えの糖部分のうち１つもしくは複数または全てが、２’代替えの糖部分である。

さらなる態様では、ウイング領域中の２’代替えの糖部分うち１つまたは複数は、２’－Ｏ－アルキル－糖部分、２’－Ｏ－メチル－糖部分、２’－アミノ－糖部分、２’－フルオロ－糖部分、２’－アルコキシ－糖部分、ＭＯＥ糖部分、ＬＮＡ糖部分、アラビノ核酸（ＡＮＡ）糖部分および２’－フルオロ－ＡＮＡ糖部分から選択される。

一態様では、隣接配列中の全ての代替えのヌクレオシドが、二環式ヌクレオシドである。さらなる態様では、隣接配列中の二環式ヌクレオシドは、ベータ－Ｄもしくはアルファ－Ｌ立体配置のいずれかまたはそれらの組合せでの、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、アミノ－ＬＮＡ、ｃＥＴおよび／またはＥＮＡからなる群から独立して選択される。

一部の態様では、隣接配列中の１つまたは複数の代替えのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。一部の態様では、ホスホロチオエート連結は、立体化学的に純粋なホスホロチオエート連結である。一部の態様では、ホスホロチオエート連結は、Ｓｐホスホロチオエート連結である。他の態様では、ホスホロチオエート連結は、Ｒｐホスホロチオエート連結である。一部の態様では、代替えのヌクレオシド間連結は、２’－アルコキシヌクレオシド間連結である。他の態様では、代替えのヌクレオシド間連結は、アルキルホスフェートヌクレオシド間連結である。

ＤＮＡコア配列は、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能な少なくとも５～１６個の連続したＤＮＡヌクレオシドを含み得る（comprise）、含み得る（contain）またはそれからなり得る。一部の態様では、ＤＮＡコア配列中のヌクレオシドの全てが、ＤＮＡ単位である。さらなる態様では、ＤＮＡコア領域は、ＲＮａｓｅＨ切断を媒介することが可能な、ＤＮＡおよび他のヌクレオシドの混合物からなり得る。一部の態様では、ＤＮＡコア配列のヌクレオシドのうち少なくとも５０％は、ＤＮＡである、例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％もしくは少なくとも８０％または少なくとも９０％は、ＤＮＡである。一部の態様では、ＤＮＡコア配列のヌクレオシド（nuceloside）の全てが、ＲＮＡ単位である。

オリゴヌクレオチドは、標的核酸に対して相補的な連続する領域を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、５’および３’隣接配列のいずれかに対して５’および／または３’側に位置付けられたさらなる連結されたヌクレオシドをさらに含み得る。これらのさらなる連結されたヌクレオシドは、それぞれ、５’隣接配列の５’末端または３’隣接配列の３’末端に結合され得る。さらなるヌクレオシドは、一部の態様では、標的核酸に対して相補的な連続する配列の一部を形成し得、または他の態様では、標的核酸に対して非相補的であり得る。

５’および３’隣接配列のいずれかまたは両方においてさらなるヌクレオシドを含むことは、標的核酸に対して相補的または非相補的であり得る１、２、３、４または５つのさらなるヌクレオチドを独立して含み得る。この態様では、オリゴヌクレオチドは、一部の態様では、さらなるヌクレオチドが５’および／または３’末端に隣接する標的をモジュレートすることが可能な連続する配列を含み得る。かかるさらなるヌクレオシドは、ヌクレアーゼ感受性の生物切断可能なリンカーとして機能し得、したがって、オリゴヌクレオチドにコンジュゲート部分などの官能基を結合させるために使用され得る。一部の態様では、さらなる５’および／または３’末端ヌクレオシドは、ホスホジエステル連結で連結され、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。別の態様では、さらなる５’および／または３’末端ヌクレオシドは、例えば、ヌクレアーゼ安定性を増強するためまたは合成の容易さのために含められ得る代替えのヌクレオシドである。

他の態様では、オリゴヌクレオチドは、「アルチマー（altimer）」設計を利用し、３ヌクレオシド毎に交互にされる交互の２’－フルオロ－ＡＮＡおよびＤＮＡ領域を含む。アルチマーオリゴヌクレオチドは、Min, et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2002, 12(18): 2651-2654およびKalota, et al., Nuc. Acid Res. 2006, 34(2): 451-61（これにより参照により本明細書に組み込まれる）でより詳細に議論されている。

他の態様では、オリゴヌクレオチドは、「ヘミマー（hemimer）」設計を利用し、ＤＮＡコア配列に（ＤＮＡコア配列の５’側または３’側のいずれかの側で）隣接した単一の２’－改変された隣接配列を含む。ヘミマーオリゴヌクレオチドは、Geary et al., 2001, J. Pharm. Exp. Therap., 296: 898-904（これにより参照により本明細書に組み込まれる）でより詳細に議論されている。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つの核酸配列に対して少なくとも５０％（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）の配列同一性を有する核酸配列を有する。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つの核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列を有する。

配列番号６～２５４５中の配列は、未改変のおよび／またはコンジュゲートされていない配列として記載されているが、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド、例えば、オリゴヌクレオチドは、以下に詳細に記載されるような代替えのヌクレオシドであるおよび／またはコンジュゲートされた、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つに示される配列のうちいずれか１つを含み得ることが理解されよう。

当業者は、約１８～２０塩基対の間の構造を有するオリゴヌクレオチドが、ＲＮａｓｅＨ媒介性分解を誘導する際に特に有効であり得ることを十分に認識している。しかし、より短いまたはより長いオリゴヌクレオチドが有効であり得ることが理解され得る。上記態様では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド配列の性質のおかげで、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、より短いまたはより長いオリゴヌクレオチド配列を含み得る。より短いオリゴヌクレオチドマイナス一方または両方の末端上のいくつかの連結されたヌクレオシドのみは、上記オリゴヌクレオチドと比較して同様に有効であり得ることが、合理的に予想され得る。したがって、本明細書で提供される配列のうち１つに由来する少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれよりも多く連続する連結されたヌクレオシドの配列を有するが、ＭＳＨ３遺伝子の発現を、完全配列を含むオリゴヌクレオチドから、約５、１０、１５、２０、２５または３０％以下の阻害分阻害するそれらの能力が異なるオリゴヌクレオチドは、範囲内であることが企図される。

本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、標的核酸のヌクレアーゼ媒介性分解を介して機能し得、ここで、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ、例えば、エンドヌクレアーゼ様エンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）（例えば、ＲＮａｓｅＨ）を動員することが可能である。ヌクレアーゼ媒介性機構を介して動作するオリゴヌクレオチド設計の例は、少なくとも５または６つのＤＮＡヌクレオシドの領域を典型的には含み、親和性増強性代替えのヌクレオシドが一方の側または両方の側に隣接するオリゴヌクレオチド、例えば、ギャップマー、ヘッドマーおよびテイルマーである。

オリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性は、相補的なＲＮＡ分子との二重鎖中にある場合に、ＲＮａｓｅＨを動員するその能力を指す。ＷＯ０１／２３６１３は、ＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定するために使用され得る、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのｉｎｖｉｔｒｏ方法を提供する。典型的には、相補的な標的核酸配列が提供された場合に、試験されている改変されたオリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチド中の全てのモノマー間にホスホロチオエート連結を有するＤＮＡモノマーのみを含むオリゴヌクレオチドを使用し、ＷＯ０１／２３６１３（これにより参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５によって提供される方法論を使用した場合に決定される初期速度の、少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％の、または２０％よりも大きい、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定される初期速度をオリゴヌクレオチドが有する場合、このオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能であるとみなされる。

さらに、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨ媒介性切断に対して感受性の、ＭＳＨ３転写物中の部位（単数または複数）を識別する。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドは、そのオリゴヌクレオチドがその特定の部位内の任意の場所での転写物の切断を促進する場合、ＲＮＡ転写物の特定の部位内を標的化すると言われる。かかるオリゴヌクレオチドは、一般に、ＭＳＨ３遺伝子中の選択された配列と連続する領域から取られたさらなる連結されたヌクレオシド配列にカップリングされた、本明細書で提供される配列のうち１つ由来の少なくとも約５～１０個の連続する連結されたヌクレオシドを含む。

阻害性オリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の方法によって設計され得る。標的配列は、一般に、約１０～３０の連結されたヌクレオシド長であるが、任意の所与の標的ＲＮＡの切断を指示するために、この範囲にある特定の配列の適切性には、広い変形形態が存在する。
任意のＲＮＡを独自に分解するために必要な配列特異性を提供するのに十分な相同性を有するオリゴヌクレオチドは、当該分野で公知のプログラムを使用して設計され得る。

阻害性オリゴヌクレオチド配列の最適化のために設計されたいくつかの種の体系的試験は、本明細書で提供される教示に従って行われ得る。干渉オリゴヌクレオチドを設計する場合の考慮事項には、生物物理的、熱力学的および構造的考慮事項、特定の位置における塩基優先性、ならびに相同性が含まれるがこれらに限定されない。非コードオリゴヌクレオチドに基づく阻害性治療剤の作製および使用もまた、当該分野で公知である。

本明細書に示される種々のソフトウェアパッケージおよびガイドラインは、任意の所与の遺伝子標的に最適な標的配列の識別のためのガイダンスを提供するが、所与のサイズ（非限定的な例としては、２１ヌクレオチド）の「ウインドウ」または「マスク」が、標的配列として機能し得るサイズ範囲にある配列を識別するために、標的ＲＮＡ配列上に文字どおりまたは比喩的に（例えば、ｉｎｓｉｌｉｃｏを含む）存在する、経験的アプローチが取られ得る。選択された任意の所与の標的サイズについて可能な配列の完全なセットが識別されるまで、初期標的配列位置の１ヌクレオチド上流または下流に配列「ウインドウ」を漸進的に動かすことによって、次の潜在的標的配列が識別され得る。最適に機能する配列を識別するための、識別された配列の体系的合成および試験（本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のアッセイを使用する）とカップリングされたこのプロセスは、オリゴヌクレオチド薬剤を用いて標的化した場合に標的遺伝子発現の最良の阻害を媒介するＲＮＡ配列を識別することができる。したがって、本明細書で識別された配列は、有効な標的配列を示すが、阻害効率のさらなる最適化が、等しいまたはより良い阻害特徴を有する配列を識別するために、所与の配列の１ヌクレオチド上流または下流に漸進的に「ウインドウをウォーキング」させることによって達成され得ることが企図される。

さらに、本明細書で識別された任意の配列について、さらなる最適化は、連結されたヌクレオシドを体系的に付加または除去して、より長いまたはより短い配列を生成すること、およびそのポイントから標的ＲＮＡの上または下に、より長いまたはより短いサイズのウインドウをウォーキングさせることによって、生成された配列を試験することによって、達成され得ることが企図される。また、新たな候補標的を生成するためのこのアプローチを、当該分野で公知のおよび／または本明細書に記載される阻害アッセイにおいて標的配列に基づいてオリゴヌクレオチドの有効性について試験することとカップリングさせることは、阻害の効率におけるさらなる改善をもたらし得る。

さらになお、かかる最適化された配列は、発現阻害剤として分子をさらに最適化する（例えば、血清安定性または循環半減期を増加させる、熱安定性を増加させる、膜貫通送達を増強する、特定の位置または細胞型に標的化する、サイレンシング経路酵素との相互作用を増加させる、エンドソームからの放出を増加させる）ために、例えば、当該分野で公知および／または本明細書で議論される代替えのヌクレオシド、代替えの糖部分および／または代替えのヌクレオシド間連結を含む、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の代替えのヌクレオシド、代替えの糖部分および／または代替えのヌクレオシド間連結の導入によって、調整され得る。本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド薬剤は、標的配列との１つまたは複数のミスマッチを含み得る。一態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、３つ以下のミスマッチを含む。オリゴヌクレオチドが標的配列とのミスマッチを含む場合、一部の態様では、ミスマッチの領域は、相補性の領域の中央には位置しない。オリゴヌクレオチドが標的配列とのミスマッチを含む場合、一部の態様では、ミスマッチは、相補性の領域の５’末端または３’末端のいずれから最後の５ヌクレオチド以内に制限されるべきである。例えば、３０連結されたヌクレオシドのオリゴヌクレオチド薬剤について、ＭＳＨ３遺伝子の領域に対して相補的な連続する核酸塩基領域は、一般に、中央の５～１０の連結されたヌクレオシド内には、いずれのミスマッチも含まない。本明細書に記載される方法または当該分野で公知の方法は、標的配列とのミスマッチを含むオリゴヌクレオチドがＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害する際に有効であるかどうかを決定するために使用され得る。ＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害する際の、ミスマッチを有するオリゴヌクレオチドの有効性の考慮は、ＭＳＨ３遺伝子中の相補性の特定の領域が、集団内で多型配列変形形態を有することが公知である場合には特に、重要である。

ポリヌクレオチドの発現のためのベクターの構築は、当業者にとって詳細な説明を必要としない従来の技術を使用して達成され得る。効率的な発現ベクターの生成のためには、ポリヌクレオチドの発現を制御する調節配列を有することが必要である。これらの調節配列には、プロモーターおよびエンハンサー配列が含まれ、これらの調節配列は、これらの配列と相互作用する特定の細胞因子によって影響され、当該分野で周知である。

Ａ．代替えのオリゴヌクレオシド
一態様では、オリゴヌクレオチドの連結されたヌクレオシドまたはヌクレオシド間連結のうち１つまたは複数は、天然に存在し、例えば、当該分野で公知のおよび本明細書に記載される化学的改変および／またはコンジュゲーションを含まない。別の態様では、オリゴヌクレオチドの連結されたヌクレオシドまたはヌクレオシド間連結のうち１つまたは複数は、安定性または他の有益な特徴を増強するために化学的に改変される。理論に束縛されないが、ある特定の改変は、ヌクレアーゼ耐性および／もしくは血清安定性を増加させ得る、または免疫原性を減少させ得ると考えられている。例えば、オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡもしくはＲＮＡ中に天然に存在することが見出されたヌクレオチド（例えば、アデニン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジンまたはイノシン）を含み得、またはヌクレオチドの１つもしくは複数の構成要素（例えば、核酸塩基、糖またはホスホ－リンカー部分）に対する１つもしくは複数の化学的改変を有する代替えのヌクレオシドまたはヌクレオシド間連結を含み得る。オリゴヌクレオチドは、天然に存在するホスホジエステル結合を介して互いに連結され得、または代替えの連結（例えば、ホスホロチオエート（例えば、ＳｐホスホロチオエートまたはＲｐホスホロチオエート）、３’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネート、３’－ホスホロアミダート（phosphoamidate）、２’－５’ホスホジエステル、グアニジウム、Ｓ－メチルチオウレア、２’－アルコキシ、アルキルホスフェートまたはペプチド結合を介して共有結合的に連結された）を含み得る。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドまたはヌクレオシド間連結の実質的に全てが、代替えのヌクレオシドである。他の態様では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドまたはヌクレオシド間連結の全てが、代替えのヌクレオシドである。「ヌクレオシドの実質的に全てが代替えのヌクレオシドである」オリゴヌクレオチドは、完全にではないものの大部分が改変され、５、４、３、２または１つ以下の天然に存在するヌクレオシドを含み得る。なお他の態様では、オリゴヌクレオチドは、５、４、３、２または１つ以下の代替えのヌクレオシドを含み得る。

核酸は、当該分野で十分確立された方法、例えば、これにより参照により本明細書に組み込まれる「Current protocols in nucleic acid chemistry」, Beaucage, S. L. et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., USAに記載される方法によって、合成および／または改変され得る。代替えのヌクレオチドおよびヌクレオシドには、例えば、末端改変、例えば、５’末端改変（リン酸化、コンジュゲーション、逆連結）または３’末端改変（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆連結など）；塩基改変、例えば、安定化塩基、不安定化塩基、もしくはパートナーの伸長されたレパートリーと塩基対合する塩基による置き換え、塩基の除去（脱塩基ヌクレオチド）、またはコンジュゲートされた塩基；糖改変（例えば、２’位または４’位における）または糖の置き換え；および／あるいはホスホジエステル連結の改変または置き換えを含む骨格改変を含む改変を有するものが含まれる。核酸塩基は、核酸塩基が糖部分のＣ１位から異なる位置（例えば、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４またはＣ５）に移動されたイソヌクレオシドであり得る。本明細書に記載される態様において有用なオリゴヌクレオチド化合物の具体的な例には、改変された骨格を含むまたは天然ヌクレオシド間連結を含まない代替えのヌクレオシドが含まれるがこれに限定されない。改変された骨格を有するヌクレオチドおよびヌクレオシドには、とりわけ、骨格中にリン原子を有さないものが含まれる。本明細書の目的のために、かつ当該分野でときおり言及されるように、それらのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有さない代替えのＲＮＡは、オリゴヌクレオシドであるとみなされ得る。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、そのヌクレオシド間骨格中にリン原子を有する。

代替えのヌクレオシド間連結には、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’－アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびに通常の３’－５’連結を有するボロノホスフェート、これらの２’－５’連結されたアナログ、ならびにヌクレオシド単位の隣接対が３’－５’から５’－３’にまたは２’－５’から５’－２’に連結された逆の極性を有するものが含まれる。種々の塩、混合塩および遊離酸形態もまた含まれる。

上記リン含有連結の調製を教示する代表的な米国特許には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，４６９，８６３号；同第４，４７６，３０１号；同第５，０２３，２４３号；同第５，１７７，１９５号；同第５，１８８，８９７号；同第５，２６４，４２３号；同第５，２７６，０１９号；同第５，２７８，３０２号；同第５，２８６，７１７号；同第５，３２１，１３１号；同第５，３９９，６７６号；同第５，４０５，９３９号；同第５，４５３，４９６号；同第５，４５５，２３３号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７６，９２５号；同第５，５１９，１２６号；同第５，５３６，８２１号；同第５，５４１，３１６号；同第５，５５０，１１１号；同第５，５６３，２５３号；同第５，５７１，７９９号；同第５，５８７，３６１号；同第５，６２５，０５０号；同第６，０２８，１８８号；同第６，１２４，４４５号；同第６，１６０，１０９号；同第６，１６９，１７０号；同第６，１７２，２０９号；同第６，２３９，２６５号；同第６，２７７，６０３号；同第６，３２６，１９９号；同第６，３４６，６１４号；同第６，４４４，４２３号；同第６，５３１，５９０号；同第６，５３４，６３９号；同第６，６０８，０３５号；同第６，６８３，１６７号；同第６，８５８，７１５号；同第６，８６７，２９４号；同第６，８７８，８０５号；同第７，０１５，３１５号；同第７，０４１，８１６号；同第７，２７３，９３３号；同第７，３２１，０２９号；および米国再発行特許第３９４６４号が含まれるがこれらに限定されない。

その中にリン原子を含まない代替えのヌクレオシド間連結は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式ヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらには、モルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分から一部形成される）を有するもの；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチル（formacetyl）およびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホネートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ_２構成要素部分を有する他のものが含まれる。

上記オリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，０３４，５０６号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；同第５，２１４，１３４号；同第５，２１６，１４１号；同第５，２３５，０３３号；同第５，６４，５６２号；同第５，２６４，５６４号；同第５，４０５，９３８号；同第５，４３４，２５７号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７０，９６７号；同第５，４８９，６７７号；同第５，５４１，３０７号；同第５，５６１，２２５号；同第５，５９６，０８６号；同第５，６０２，２４０号；同第５，６０８，０４６号；同第５，６１０，２８９号；同第５，６１８，７０４号；同第５，６２３，０７０号；同第５，６６３，３１２号；同第５，６３３，３６０号；同第５，６７７，４３７号；および同第５，６７７，４３９号が含まれるがこれらに限定されない。

他の態様では、適切なオリゴヌクレオチドには、ヌクレオチド単位の糖およびヌクレオシド間連結の両方、即ち骨格が置きかえられたオリゴヌクレオチドが含まれる。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。１つのかかるオリゴマー化合物である、優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されている模倣物は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と称される。ＰＮＡ化合物では、ヌクレオシドの糖は、アミド含有骨格、特に、アミノエチルグリシン骨格で置き換えられる。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接的にまたは間接的に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第５，７１９，２６２号が含まれるがこれらに限定されない。オリゴヌクレオチドでの使用に適切なさらなるＰＮＡ化合物は、例えば、Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500に記載されている。

一部の態様は、ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチド、ならびにヘテロ原子骨格、特に、上で言及した米国特許第５，４８９，６７７号の－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｏ－ＣＨ_２－［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格としても公知］、－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－および－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－ＣＨ_２－［ここで、ネイティブホスホジエステル骨格は、－Ｏ－Ｐ－Ｏ－ＣＨ_２－として示される］ならびに上で言及した米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格を有するオリゴヌクレオチドを含む。一部の態様では、本明細書で特色とされるオリゴヌクレオチドは、上で言及した米国特許第５，０３４，５０６号のモルホリノ骨格構造を有する。他の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドには、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）が含まれ、ここで、Summerton, et al., Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997, 7:63-70に記載されるように、デオキシリボース部分は、モルホリン環によって置き換えられ、荷電したホスホジエステルサブユニット間連結は、非荷電のホスホロジアミデート（phophorodiamidate）連結によって置き換えられる。

代替えのヌクレオシドおよびヌクレオチドは、１つまたは複数の置換された糖部分を含み得る。オリゴヌクレオチド、例えば、本明細書で特色とされるオリゴヌクレオチドは、２’位において、以下のうち１つを含み得る：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキル、式中、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または未置換のＣ_１～Ｃ_１０アルキルまたはＣ_２～Ｃ_１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。例示的な適切な改変には、－Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＣＨ_３、－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ－ＮＨ_２、－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＮＨ_２および－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎ－ＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３］_２が含まれ、式中、ｎおよびｍは、１～約１０である。他の態様では、オリゴヌクレオチドは、２’位において、以下のうち１つを含む：Ｃ_１～Ｃ_１０低級アルキル、置換された低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルもしくはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ_３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換されたシリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善するための基、および類似の特性を有する他の置換基。一部の態様では、改変には、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても公知の２’－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３）（Martin et al., Helv. Chin. Acta, 1995, 78:486-504）、即ち、アルコキシ－アルコキシ基が含まれる。ＭＯＥヌクレオシドは、未改変のオリゴヌクレオチドと比較して、増加したヌクレアーゼ耐性、改善された薬物動態学特性、低減された非特異的タンパク質結合、低減された毒性、低減された免疫刺激特性および増強された標的親和性が含まれるがこれらに限定されないいくつかの有益な特性を、オリゴヌクレオチドに付与する。

別の例示的な代替物は、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、即ち、本明細書の以下の実施例に記載される、２’－ＤＭＡＯＥとしても公知の－Ｏ（ＣＨ_２）_２ＯＮ（ＣＨ_３）_２基、および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（当該分野で２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても公知）、即ち、２’－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｎ（ＣＨ_３）_２を含む。さらなる例示的な代替物には、５’－Ｍｅ－２’－Ｆヌクレオチド、５’－Ｍｅ－２’－ＯＭｅヌクレオチド、５’－Ｍｅ－２’－デオキシヌクレオチド（これら３つのファミリー中のＲ異性体およびＳ異性体の両方）；２’－アルコキシアルキル；および２’－ＮＭＡ（Ｎ－メチルアセトアミド）が含まれる。

他の代替物には、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ_３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２）および２’－フルオロ（２’－Ｆ）が含まれる。類似の改変は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドおよびヌクレオチド上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオチド上または２’－５’連結されたオリゴヌクレオチド中の糖の３’位、および５’末端ヌクレオチドの５’位においてなされ得る。オリゴヌクレオチドは、ペントフラノシル糖の代わりに、シクロブチル部分などの糖模倣物を有し得る。かかる改変された糖構造の調製を教示する代表的な米国特許には、米国特許第４，９８１，９５７号；同第５，１１８，８００号；同第５，３１９，０８０号；同第５，３５９，０４４号；同第５，３９３，８７８号；同第５，４４６，１３７号；同第５，４６６，７８６号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５１９，１３４号；同第５，５６７，８１１号；同第５，５７６，４２７号；同第５，５９１，７２２号；同第５，５９７，９０９号；同第５，６１０，３００号；同第５，６２７，０５３号；同第５，６３９，８７３号；同第５，６４６，２６５号；同第５，６５８，８７３号；同第５，６７０，６３３号；および同第５，７００，９２０号が含まれるがこれらに限定されず、これらのうち特定のものは、本出願と共有に係る。上述の各々の全内容は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。

オリゴヌクレオチドは、核酸塩基（当該分野では単に「塩基」と称されることが多い）代替物（例えば、改変または置換）を含み得る。未改変または天然の核酸塩基には、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）が含まれる。代替えの核酸塩基には、他の合成および天然核酸塩基、例えば、５－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、５－ホルミルシチジン、５－カルボキシシチジン、ピロロシチジン、ジデオキシシチジン、ウリジン、５－メトキシウリジン、５－ヒドロキシデオキシウリジン、ジヒドロウリジン、４－チオウリジン（thiourdine）、プソイドウリジン、１－メチル－プソイドウリジン、デオキシウリジン、５－ヒドロキシブチル（hydroxybutynl）－２’－デオキシウリジン、キサンチン、ヒポキサンチン、７－デアザ－キサンチン、チエノグアニン、８－アザ－７－デアザグアノシン、７－メチルグアノシン、７－デアザグアノシン、６－アミノメチル－７－デアザグアノシン、８－アミノグアニン、２，２，７－トリメチルグアノシン、８－メチルアデニン、８－アジドアデニン、７－メチルアデニン、７－デアザアデニン、３－デアザアデニン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノプリン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、８－アミノ－アデニン、チミン、ジデオキシチミン、５－ニトロインドール、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウリジン、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウリジンおよびシチジン、６－アゾウリジン、シチジンおよびチミン、４－チオウリジン、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび他の８－置換されたアデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に、５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換されたウリジンおよびシチジン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、ならびに３－デアザグアニンが含まれる。さらなる核酸塩基には、米国特許第３，６８７，８０８号に開示されるもの、Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008に開示されるもの；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons, 1990に開示されるもの、Englisch et al., (1991) Angewandte Chemie, International Edition, 30:613によって開示されるものおよびSanghvi, Y S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press, 1993によって開示されるものが含まれる。これらの核酸塩基の特定のものは、オリゴヌクレオチドの結合親和性を増加させるために特に有用である。これらには、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシンが含まれる、５－置換されたピリミジン、６－アザピリミジン、ならびにＮ－２、Ｎ－６および０－６置換されたプリンが含まれる。５－メチルシトシン置換は、核酸二重鎖安定性を０．６～１．２℃増加させることが示されており（Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278）、さらにいっそう特に、２’－Ｏ－メトキシエチル糖改変と組み合わせる場合には、例示的な塩基置換である。

上述の代替えの核酸塩基の特定のものならびに他の代替えの核酸塩基の調製を教示する代表的な米国特許には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、上述の米国特許第３，６８７，８０８号，同第４，８４５，２０５号；同第５，１３０，３０号；同第５，１３４，０６６号；同第５，１７５，２７３号；同第５，３６７，０６６号；同第５，４３２，２７２号；同第５，４５７，１８７号；同第５，４５９，２５５号；同第５，４８４，９０８号；同第５，５０２，１７７号；同第５，５２５，７１１号；同第５，５５２，５４０号；同第５，５８７，４６９号；同第５，５９４，１２１号、同第５，５９６，０９１号；同第５，６１４，６１７号；同第５，６８１，９４１号；同第５，７５０，６９２号；同第６，０１５，８８６号；同第６，１４７，２００号；同第６，１６６，１９７号；同第６，２２２，０２５号；同第６，２３５，８８７号；同第６，３８０，３６８号；同第６，５２８，６４０号；同第６，６３９，０６２号；同第６，６１７，４３８号；同第７，０４５，６１０号；同第７，４２７，６７２号；および同第７，４９５，０８８号が含まれるがこれらに限定されない。

他の態様では、ヌクレオチド中の糖部分は、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－ＭＯＥ、２’－Ｆ、２’－アミノ、２’－Ｏ－プロピル、２’－アミノプロピルまたは２’－ＯＨ改変を必要に応じて有する、リボース分子であり得る。

オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の二環式糖部分を含み得る。「二環式糖」は、２つの原子の架橋によって改変されたフラノシル環である。「二環式ヌクレオシド」（「ＢＮＡ」）は、糖環の２つの炭素原子を接続し、それによって、二環式環系を形成する架橋を含む糖部分を有するヌクレオシドである。一部の態様では、架橋は、糖環の４’－炭素および２’－炭素を接続する。したがって、一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のロックトヌクレオシドを含み得る。ロックトヌクレオシドは、リボース部分が２’および４’炭素を接続する余分の架橋を含む改変されたリボース部分を有するヌクレオシドである。言い換えると、ロックトヌクレオシドは、４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドである。この構造は、３’末端の構造的コンフォメーション中のリボースを効率的に「ロックする」。オリゴヌクレオチドへのロックトヌクレオシドの付加は、血清中のオリゴヌクレオチド安定性を増加させること、およびオフターゲット効果を低減させることが示されている（Grunweller, A. et al., (2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185-3193）。ポリヌクレオチドにおける使用のための二環式ヌクレオシドの例には、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子との間の架橋を含むヌクレオシドが含まれるがこれに限定されない。一部の態様では、ポリヌクレオチド薬剤は、４’から２’への架橋を含む１つまたは複数の二環式ヌクレオシドを含む。かかる４’から２’に架橋された二環式ヌクレオシドの例には、４’－（ＣＨ_２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ_２）－Ｓ－２’；４’－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）；４’－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ－２’（「拘束エチル」または「ｃＥｔ」とも称される）および４’－ＣＨ（ＣＨ_２ＯＣＨ_３）－Ｏ－２’（およびそのアナログ；例えば、米国特許第７，３９９，８４５号を参照のこと）；４’－Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_３）－Ｏ－２’（およびそのアナログ；例えば、米国特許第８，２７８，２８３号を参照のこと）；４’－ＣＨ_２－Ｎ（ＯＣＨ_３）－２’（およびそのアナログ；例えば、米国特許第８，２７８，４２５号を参照のこと）；４’－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ_３）_２－２’（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号を参照のこと）；４’－ＣＨ_２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’、式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルまたは保護基である（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号を参照のこと）；４’－ＣＨ_２－Ｃ（Ｈ）（ＣＨ_３）－２’（例えば、Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134を参照のこと）；および４’－ＣＨ_２－Ｃ（＝ＣＨ_２）－２’（およびそのアナログ；例えば、米国特許第８，２７８，４２６号を参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない。上述の各々の全内容は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。

ロックト核酸ヌクレオチドの調製を教示するさらなる代表的な米国特許および米国特許出願公開には、以下が含まれるがこれらに限定されない：その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２６８，４９０号；同第６，５２５，１９１号；同第６，６７０，４６１号；同第６，７７０，７４８号；同第６，７９４，４９９号；同第６，９９８，４８４号；同第７，０５３，２０７号；同第７，０３４，１３３号；同第７，０８４，１２５号；同第７，３９９，８４５号；同第７，４２７，６７２号；同第７，５６９，６８６号；同第７，７４１，４５７号；同第８，０２２，１９３号；同第８，０３０，４６７号；同第８，２７８，４２５号；同第８，２７８，４２６号；同第８，２７８，２８３号；米国特許出願公開第２００８／００３９６１８号；および同第２００９／００１２２８１号。

例えば、α－Ｌ－リボフラノースおよびβ－Ｄ－リボフラノースを含む１つまたは複数の立体化学的糖立体配置を有する上述の二環式ヌクレオシドのいずれかが、調製され得る（ＷＯ９９／１４２２６を参照のこと）。

オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の拘束エチルヌクレオシドを含むように改変され得る。本明細書で使用される場合、「拘束エチルヌクレオシド」または「ｃＥｔ」は、４’－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むロックトヌクレオシドである。一態様では、拘束エチルヌクレオシドは、本明細書で「Ｓ－ｃＥｔ」と称されるＳコンフォメーションにある。

オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の「コンフォメーション的に制限されたヌクレオシド」（「ＣＲＮ」）を含み得る。ＣＲＮは、リボースのＣ２’およびＣ４’炭素またはリボースのＣ３および－Ｃ５’炭素を接続するリンカーを有するヌクレオシドアナログである。ＣＲＮは、リボース環を安定なコンフォメーションにロックし、ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーション親和性を増加させる。リンカーは、安定性および親和性のための最適な位置に酸素を配置するのに十分な長さのものであり、より少ないリボース環パッカリングを生じる。

上述のＣＲＮの特定のものの調製を教示する代表的な公報には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８３号；およびＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１３／０３６８６８が含まれるがこれらに限定されない。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、ＵＮＡ（アンロックトヌクレオシド）ヌクレオシドである１つまたは複数のモノマーを含む。ＵＮＡは、アンロックト非環式ヌクレオシドであり、ここで、糖の結合のうちいずれかが除去されており、アンロックト「糖」残基を形成する。一例では、ＵＮＡは、Ｃ１’－Ｃ４’間の結合（即ち、Ｃ１’炭素とＣ４’炭素との間の共有結合的炭素－酸素－炭素結合）が除去されたモノマーもまた包含する。別の例では、糖のＣ２’－Ｃ３’結合（即ち、Ｃ２’炭素とＣ３’炭素との間の共有結合的炭素－炭素結合）が除去されている（これにより参照により本明細書に組み込まれる、Nuc. Acids Symp. Series, 52, 133-134 (2008)およびFluiter et al., Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039を参照のこと）。

ＵＮＡの調製を教示する代表的な米国公報には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，３１４，２２７号；ならびに米国特許出願公開第２０１３／００９６２８９号；同第２０１３／００１１９２２号；および同第２０１１／０３１３０２０号が含まれるがこれらに限定されない。

リボース分子は、トリシクロデオキシ核酸（トリシクロＤＮＡ）を産生するように、シクロプロパン環で改変され得る。リボース部分は、別の糖、例えば、１，５，－アンヒドロヘキシトール、トレオースヌクレオシド（ＴＮＡ）を産生するためのトレオース、またはアラビノヌクレオシドを産生するためのアラビノースに置換され得る。リボース分子は、非糖で、例えば、シクロヘキセンヌクレオシドを産生するためにシクロヘキセンで、またはグリコールヌクレオシドを産生するためにグリコールで、置き換えられ得る。

ヌクレオシド分子の末端に対する潜在的に安定化性の改変には、Ｎ－（アセチルアミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－ＮＨＡｃ）、Ｎ－（カプロイル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６）、Ｎ－（アセチル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－ＮＨＡｃ）、チミジン－２’－Ｏ－デオキシチミジン（エーテル）、Ｎ－（アミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－アミノ）、２－ドコサノイル－ウリジン－３’’－リン酸、逆塩基ｄＴ（ｉｄＴ）などが含まれ得る。この改変の開示は、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１１／００５８６１に見出すことができる。

オリゴヌクレオチドの他の代替物化学には、５’ホスフェートまたは５’ホスフェート模倣物、例えば、オリゴヌクレオチドの５’末端ホスフェートまたはホスフェート模倣物が含まれる。適切なホスフェート模倣物は、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０１５７５１１号に開示されている。

例示的なオリゴヌクレオチドは、代替えの糖部分を有するヌクレオシドを含み、ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオシドを含み得る。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、代替えの糖部分を含むヌクレオシドおよびＤＮＡヌクレオシドを含む。オリゴヌクレオチド中への代替えのヌクレオシドの取り込みは、標的核酸に対するオリゴヌクレオチドの親和性を増強し得る。その場合、代替えのヌクレオシドは、親和性増強性代替えのヌクレオチドと称され得る。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド、例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５または少なくとも１６個の代替えのヌクレオシドを含む。他の態様では、オリゴヌクレオチドは、１～１０個の代替えのヌクレオシド、例えば、２～９個の代替えのヌクレオシド、例えば、３～８個の代替えのヌクレオシド、例えば、４～７個の代替えのヌクレオシド、例えば、６または７個の代替えのヌクレオシドを含む。ある態様では、オリゴヌクレオチドは、これら３つの型の代替物（代替えの糖部分、代替えの核酸塩基および代替えのヌクレオシド間連結）、またはそれらの組合せから独立して選択される代替物を含み得る。一態様では、オリゴヌクレオチドは、代替えの糖部分を含む１つまたは複数のヌクレオシド、例えば、２’糖代替えのヌクレオシドを含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡおよびＢＮＡ（例えば、ＬＮＡ）ヌクレオシドからなる群から独立して選択される１つまたは複数の２’糖代替えのヌクレオシドを含む。一部の態様では、１つまたは複数の代替えのヌクレオシドが、ＢＮＡである。

一部の態様では、代替えのヌクレオシドのうち少なくとも１つが、ＢＮＡ（例えば、ＬＮＡ）である、例えば、代替えのヌクレオシドのうち少なくとも２、例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７または少なくとも８つが、ＢＮＡである。なおさらなる態様では、全ての代替えのヌクレオシドが、ＢＮＡである。

さらなる態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結を含む。一部の態様では、連続するヌクレオチド配列内のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートまたはボロノホスフェートヌクレオシド間連結である。一部の態様では、オリゴヌクレオチドの連続する配列中の全てのヌクレオチド間連結が、ホスホロチオエート連結である。一部の態様では、ホスホロチオエート連結は、立体化学的に純粋なホスホロチオエート連結である。一部の態様では、ホスホロチオエート連結は、Ｓｐホスホロチオエート連結である。他の態様では、ホスホロチオエート連結は、Ｒｐホスホロチオエート連結である。

一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、２’－ＭＯＥ－ＲＮＡである少なくとも１つの代替えのヌクレオシド、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の２’－ＭＯＥ－ＲＮＡヌクレオシド単位を含む。一部の態様では、２’－ＭＯＥ－ＲＮＡヌクレオシド単位は、ホスホロチオエート連結によって接続される。一部の態様では、この代替えのヌクレオシドのうち少なくとも１つは、２’－フルオロＤＮＡ、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の２’－フルオロ－ＤＮＡヌクレオシド単位である。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＢＮＡ単位および少なくとも１つの２’置換された改変されたヌクレオシドを含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、２’糖改変されたヌクレオシドおよびＤＮＡ単位の両方を含む。一部の態様では、オリゴヌクレオチドまたはその連続するヌクレオチド領域は、ギャップマーオリゴヌクレオチドである。

Ｂ．リガンドにコンジュゲートされたオリゴヌクレオチド
オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強する１つまたは複数のリガンド、部分またはコンジュゲートに化学的に連結され得る。かかる部分には、脂質部分、例えば、コレステロール部分（Letsinger et al., (1989) Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 86: 6553-6556）、コール酸（Manoharan et al., (1994) Biorg. Med. Chem. Let., 4:1053-1060）、チオエーテル、例えば、ベリル（beryl）－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., (1992) Ann. N.Y. Acad. Sci., 660:306-309；Manoharan et al., (1993) Biorg. Med. Chem. Let., 3:2765-2770）、チオコレステロール（Oberhauser et al., (1992) Nucl. Acids Res., 20:533-538）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオール（dodecandiol）もしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., (1991) EMBO J, 10:1111-1118；Kabanov et al., (1990) FEBS Lett., 259:327-330；Svinarchuk et al., (1993) Biochimie, 75:49-54）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホネート（Manoharan et al., (1995) Tetrahedron Lett., 36:3651-3654；Shea et al., (1990) Nucl. Acids Res., 18:3777-3783）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., (1995) Nucleosides & Nucleotides, 14:969-973）、またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., (1995) Tetrahedron Lett., 36:3651-3654）、パルミチル部分（Mishra et al., (1995) Biochim. Biophys. Acta, 1264:229-237）、あるいはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニルオキシコレステロール部分（Crooke et al., (1996) J. Pharmacol. Exp. Ther., 277:923-937）が含まれるがこれらに限定されない。

一態様では、リガンドは、取り込まれたオリゴヌクレオチド薬剤の分布、標的化または寿命を変更する。一部の態様では、リガンドは、例えば、かかるリガンドの非存在下での種と比較して、選択された標的、例えば、分子、細胞もしくは細胞型、区画、例えば、細胞もしくは臓器区画、組織、臓器または身体の領域に対する増強された親和性を提供する。

リガンドには、天然に存在する物質、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）またはグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミンまたはヒアルロン酸）；または脂質が含まれ得る。リガンドは、組換えまたは合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸であり得る。ポリアミノ酸の例には、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸であるポリアミノ酸、スチレン－無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド（glycolied））コポリマー、ジビニルエーテル－無水マレイン酸コポリマー、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸（ethylacryllic acid））、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホスファジン（polyphosphazine）が含まれる。ポリアミンの例には、ポリエチレンイミン、ポリリシン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、プソイドペプチド－ポリアミン、ペプチド模倣性ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第４級塩、またはアルファらせんペプチドが含まれる。

リガンドは、例えば、細胞または組織標的化剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質またはタンパク質、例えば、腎臓細胞などの特定の細胞型に結合する抗体など、標的化基を含み得る。標的化基は、サイロトロピン、メラニン細胞刺激ホルモン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン（gulucosamine）多価マンノース、多価フコース、グリコシル化されたポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、フォレート、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ビオチン、またはＲＧＤペプチドもしくはＲＧＤペプチド模倣物であり得る。

リガンドの他の例には、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、クロスリンカー（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン（texaphyrin）、サフィリン（Sapphyrin））、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸（cholenic acid）、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、ホスフェート、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換されたアルキル、放射能標識されたマーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進因子（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、テトラアザ大員環のＥｕ３＋錯体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰまたはＡＰが含まれる。

リガンドは、タンパク質、例えば、糖タンパク質またはペプチド、例えば、コリガンドに対する特異的親和性を有する分子、または抗体、例えば、肝細胞などの特定の細胞型に結合する抗体であり得る。リガンドには、ホルモンおよびホルモン受容体が含まれ得る。これらには、非ペプチド性の種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノースまたは多価フコースが含まれ得る。

リガンドは、例えば、細胞の細胞骨格を破壊することによって、例えば、細胞の微小管、マイクロフィラメントおよび／または中間径フィラメントを破壊することによって、細胞中へのオリゴヌクレオチド薬剤の取り込みを増加させ得る、薬物などの物質であり得る。薬物は、例えば、タキサン（taxon）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャスプラキノリド（japlakinolide）、ラトランクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシン（indanocine）またはミオセルビン（ｍｙｏｓｅｒｖｉｎ）であり得る。

一部の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドに結合されたリガンドは、薬物動態学的モジュレーター（ＰＫモジュレーター）として作用する。ＰＫモジュレーターには、脂溶性薬、胆汁酸、ステロイド、リン脂質アナログ、ペプチド、タンパク質結合剤、ＰＥＧ、ビタミンなどが含まれる。例示的なＰＫモジュレーターには、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチンなどが含まれるがこれらに限定されない。いくつかのホスホロチオエート連結を含むオリゴヌクレオチドもまた、血清タンパク質に結合することが公知であり、したがって、骨格中に複数のホスホロチオエート連結を含む短いオリゴヌクレオチド、例えば、約５塩基、１０塩基、１５塩基または２０塩基のオリゴヌクレオチドもまた、リガンドとして（例えば、ＰＫモジュレート性リガンドとして）適している。さらに、血清構成要素（例えば、血清タンパク質）に結合するアプタマーもまた、本明細書に記載される態様におけるＰＫモジュレート性リガンドとしての使用に適切である。

リガンド－コンジュゲートされたオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドへの連結分子の結合に由来するものなどの、ペンダント反応性官能性を保有するオリゴヌクレオチドの使用によって合成され得る（以下に記載される）。この反応性オリゴヌクレオチドは、市販のリガンド、種々の保護基のいずれかを保有する合成されたリガンド、または連結部分がそれに結合したリガンドと、直接的に反応され得る。

コンジュゲートにおいて使用されるオリゴヌクレオチドは、固相合成の周知の技術を介して簡便かつ慣用的に作製され得る。かかる合成のための装置は、例えば、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．）を含むいくつかの供給業者によって販売されている。当該分野で公知のかかる合成のための任意の他の手段が、さらにまたは代替えのに使用され得る。他のオリゴヌクレオチド、例えば、ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体を調製するために類似の技術を使用することも公知である。

リガンド－コンジュゲートされたオリゴヌクレオチド、例えば、リガンド分子を保有する配列特異的な連結されたヌクレオシドでは、オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシドは、標準的なヌクレオチドもしくはヌクレオシド前駆体、または連結部分を既に保有しているヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体、リガンド分子を既に保有しているリガンド－ヌクレオチドもしくはヌクレオシド－コンジュゲート前駆体、または非ヌクレオシドリガンド保有構成単位を利用して、適切なＤＮＡ合成機上でアセンブルされ得る。

連結部分を既に保有しているコンジュゲート前駆体を使用する場合、配列特異的な連結されたヌクレオシドの合成が、典型的には完了され、次いで、リガンド分子が、リガンド－コンジュゲートされたオリゴヌクレオチドを形成するために、連結部分と反応される。一部の態様では、オリゴヌクレオチドまたは連結されたヌクレオシドは、市販のおよびオリゴヌクレオチド合成において慣用的に使用される標準的なホスホラミダイトおよび非標準的なホスホラミダイトに加えて、リガンド－ヌクレオシドコンジュゲートに由来するホスホラミダイトを使用して、自動化合成機によって合成される。

ｉ．脂質コンジュゲート
一態様では、リガンドまたはコンジュゲートは、脂質または脂質に基づく分子である。かかる脂質または脂質に基づく分子は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合することができる。ＨＳＡ結合リガンドは、標的組織、例えば、身体の非腎臓標的組織へのコンジュゲートの分布を可能にする。脂質または脂質に基づくリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解に対する耐性を増加させることができる、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜中への標的化もしくは輸送を増加させることができる、および／または（ｃ）血清タンパク質、例えば、ＨＳＡへの結合を調整するために使用することができる。

別の態様では、リガンドは、標的細胞、例えば、増殖中の細胞によって取り込まれる部分、例えば、ビタミンである。例示的なビタミンには、ビタミンＡ、ＥおよびＫが含まれる。

ｉｉ．細胞浸透剤
別の態様では、リガンドは、細胞浸透剤、例えば、らせん細胞浸透剤である。一態様では、薬剤は、両親媒性である。例示的な薬剤は、ペプチド、例えば、ｔａｔまたはアンテナペディア（antennopedia）である。薬剤がペプチドである場合、これは、ペプチジル模倣物、インバートマー（invertomer）、非ペプチドまたはプソイド－ペプチド連結、およびＤ－アミノ酸の使用を含め、改変され得る。一態様では、らせん薬剤は、親油性相および疎油性相を有し得るアルファ－らせん薬剤である。

リガンドは、ペプチドまたはペプチド模倣薬であり得る。ペプチド模倣薬（本明細書でオリゴペプチド模倣薬とも称される）は、天然ペプチドと類似の規定された三次元構造へとフォールディングすることが可能な分子である。オリゴヌクレオチド薬剤へのペプチドおよびペプチド模倣薬の結合は、例えば、細胞認識および吸収を増強することによって、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的分布に影響を与え得る。ペプチドまたはペプチド模倣薬部分は、約５～５０アミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０アミノ酸長であり得る。

ペプチドまたはペプチド模倣薬は、例えば、細胞浸透ペプチド、カチオン性ペプチド、両親媒性ペプチドまたは疎水性ペプチド（例えば、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＰｈｅから主になる）であり得る。ペプチド部分は、デンドリマーペプチド、拘束されたペプチドまたは架橋ペプチドであり得る。別の代替法では、ペプチド部分は、疎水性膜輸送配列（ＭＴＳ）を含み得る。例示的な疎水性ＭＴＳ含有ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰを有するＲＦＧＦである。疎水性ＭＴＳを含むＲＦＧＦアナログ（例えば、アミノ酸配列ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ）は、標的化部分であり得る。ペプチド部分は、細胞膜を横断して、ペプチド、オリゴヌクレオチドおよびタンパク質が含まれる大きい極性分子を運搬することができる、「送達」ペプチドであり得る。例えば、ＨＩＶＴａｔタンパク質由来の配列（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ）およびＤｒｏｓｏｐｈｉｌａアンテナペディアタンパク質（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ）は、送達ペプチドとして機能することが可能であることが見出されている。ペプチドまたはペプチド模倣薬は、ファージディスプレイライブラリー、または１ビーズ１化合物（ＯＢＯＣ）コンビナトリアルライブラリーから識別されたペプチドなど、ＤＮＡのランダム配列によってコードされ得る（Lam et al., Nature, 354:82-84, 1991）。細胞標的化目的のために、取り込まれたモノマー単位を介してオリゴヌクレオチド薬剤にテザーされたペプチドまたはペプチド模倣薬の例は、アルギニン－グリシン－アスパラギン酸（ＲＧＤ）ペプチドまたはＲＧＤ模倣物である。ペプチド部分は、長さが約５アミノ酸～約４０アミノ酸の範囲であり得る。ペプチド部分は、例えば、安定性を増加させるためまたはコンフォメーション特性を方向付けるための、構造的改変を有し得る。以下に記載される構造的改変のいずれかが利用され得る。

組成物および方法における使用のためのＲＧＤペプチドは、直鎖または環式であり得、特定の組織（単数または複数）への標的化を促進するために、改変、例えば、グリコシル化またはメチル化され得る。ＲＧＤ含有ペプチドおよびペプチド模倣薬には、Ｄ－アミノ酸、ならびに合成ＲＧＤ模倣物が含まれ得る。ＲＧＤに加えて、インテグリンリガンドを標的化する他の部分を使用することができる。このリガンドの一部のコンジュゲートは、ＰＥＣＡＭ－１またはＶＥＧＦを標的化する。

細胞浸透ペプチドは、細胞、例えば、微生物細胞、例えば、細菌もしくは真菌細胞、または哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞に浸透することが可能である。微生物細胞浸透性のペプチドは、例えば、α－らせん直鎖ペプチド（例えば、ＬＬ－３７またはＣｅｒｏｐｉｎＰ１）、ジスルフィド結合含有ペプチド（例えば、α－デフェンシン、β－デフェンシンまたはバクテネシン（bactenecin））、または１種もしくは２種のみの支配的アミノ酸を含むペプチド（例えば、ＰＲ－３９またはインドリシジン）であり得る。細胞浸透ペプチドは、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含み得る。例えば、細胞浸透ペプチドは、二分両親媒性ペプチド、例えば、ＨＩＶ－１ｇｐ４１の融合ペプチドドメインに由来するＭＰＧ、およびＳＶ４０ラージＴ抗原のＮＬＳであり得る（Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 31:2717-2724, 2003）。

ｉｉｉ．炭水化物コンジュゲート
本明細書に記載される組成物および方法の一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、炭水化物をさらに含む。炭水化物コンジュゲートされたオリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される、核酸のｉｎｖｉｖｏ送達、ならびにｉｎｖｉｖｏの治療的使用に適切な組成物にとって有利である。本明細書で使用される場合、「炭水化物」は、各炭素原子に酸素、窒素もしくは硫黄原子が結合した少なくとも６つの炭素原子を有する１つもしくは複数の単糖単位からそれ自体構成される炭水化物（直鎖、分岐鎖または環式であり得る）である化合物；または各炭素原子に酸素、窒素もしくは硫黄原子が結合した少なくとも６つの炭素原子を各々が有する１つもしくは複数の単糖単位から構成される炭水化物部分（直鎖、分岐鎖または環式であり得る）をその一部分として有する化合物を指す。代表的な炭水化物には、糖（単糖、二糖、三糖、および約４、５、６、７、８または９つの単糖単位を含むオリゴ糖）、ならびに多糖、例えば、デンプン、グリコーゲン、セルロースおよび多糖ガムが含まれる。特定の単糖には、Ｃ５およびそれを超える（例えば、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８）糖が含まれる；二糖および三糖には、２つまたは３つの単糖単位（例えば、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７またはＣ８）を有する糖が含まれる。

一態様では、本明細書に記載される組成物および方法における使用のための炭水化物コンジュゲートは、単糖である。

一部の態様では、炭水化物コンジュゲートは、例えば、ＰＫモジュレーターおよび／または細胞浸透ペプチドであるがこれらに限定されない、上記のような１つまたは複数のさらなるリガンドをさらに含む。

使用に適切なさらなる炭水化物コンジュゲート（およびリンカー）には、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１４／１７９６２０およびＷＯ２０１４／１７９６２７に記載されるものが含まれる。

ｉｖ．リンカー
一部の態様では、本明細書に記載されるコンジュゲートまたはリガンドは、切断可能または切断不能であり得る種々のリンカーを用いて、オリゴヌクレオチドに結合され得る。

リンカーは、典型的には、直接的結合または原子、例えば、酸素もしくは硫黄、単位、例えば、ＮＲ^８、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＳＯ_２ＮＨ、あるいは、例えば、置換もしくは未置換のアルキル、置換もしくは未置換のアルケニル、置換または未置換のアルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルアリールアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル（alkylhererocyclylalkynyl）、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、アルキニルヘテロシクリルアルキル、アルキニルヘテロシクリルアルケニル、アルキニルヘテロシクリルアルキニル、アルキルアリール、アルケニルアリール、アルキニルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルヘテロアリール、アルキニルヘテロアリール（alkynylhereroaryl）であるがこれらに限定されない原子の鎖を含み、ここで、１つまたは複数のメチレンは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ_２、Ｎ（Ｒ^８）、Ｃ（Ｏ）、置換もしくは未置換のアリール、置換もしくは未置換のヘテロアリール、置換もしくは未置換の複素環式によって割り込まれ得、またはそれによって終結され得る；式中、Ｒ^８は、水素、アシル、脂肪族または置換された脂肪族である。一態様では、リンカーは、約１～２４、２～２４、３～２４、４～２４、５～２４、６～２４、６～１８、７～１８、８～１８、７～１７、８～１７、６～１６、７～１７、８～１６個の間の原子、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２１、２２、２３もしくは２４個の原子である。

切断可能な連結基は、細胞の外側で十分に安定であるが、標的細胞中への進入の際に切断されて、リンカーが一緒に保持している２つの部分を放出する基である。一部の態様では、切断可能な連結基は、対象の血液中または第２の参照条件（これは、例えば、血液または血清中に見出される条件を模倣または代表するように選択され得る）下よりも、標的細胞中または第１の参照条件（これは、例えば、細胞内条件を模倣または代表するように選択され得る）下で、少なくとも約１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍もしくはそれよりも速く、または少なくとも約１００倍速く切断される。

切断可能な連結基は、切断剤、例えば、ｐＨ、酸化還元電位、または分解性分子の存在に対して感受性である。一般に、切断剤は、血清または血液中よりも、細胞の内側で、より普及している、またはより高いレベルもしくは活性で見出される。かかる分解性薬剤の例には、以下が含まれる：例えば、還元によって酸化還元切断可能な連結基を分解することができる、細胞中に存在する酸化もしくは還元酵素または還元剤、例えば、メルカプタンが含まれる、特定の基質に対して選択的であるまたは基質特異性を有さない酸化還元剤；エステラーゼ；エンドソーム、または酸性環境を創出し得る薬剤、例えば、５またはそれ未満のｐＨを生じるもの；一般酸として作用することによって、酸切断可能な連結基を加水分解または分解することができる酵素、ペプチダーゼ（これは、基質特異的であり得る）およびホスファターゼ。

切断可能な連結基、例えば、ジスルフィド結合は、ｐＨに対して感受性であり得る。ヒト血清のｐＨは７．４であるが、平均細胞内ｐＨはわずかに低く、約７．１～７．３の範囲である。エンドソームは、５．５～６．０の範囲の、より酸性のｐＨを有し、リソソームは、おおよそ５．０の、さらにいっそう酸性のｐＨを有する。一部のリンカーは、好ましいｐＨで切断される切断可能な連結基を有し、それによって、細胞の内側のリガンドから、または細胞の所望の区画中に、カチオン性脂質を放出する。

リンカーは、特定の酵素によって切断可能な切断可能な連結基を含み得る。リンカー中に取り込まれる切断可能な連結基の型は、標的化される細胞に依存し得る。例えば、肝臓標的化リガンドは、エステル基を含むリンカーを介してカチオン性脂質に連結され得る。肝臓細胞は、エステラーゼに富んでおり、したがって、リンカーは、エステラーゼに富んでいない細胞型中よりも、肝臓細胞中で、より効率的に切断される。エステラーゼに富んだ他の細胞型には、肺、腎皮質および精巣の細胞が含まれる。

ペプチド結合を含むリンカーは、ペプチダーゼに富んだ細胞型、例えば、肝臓細胞および滑膜細胞を標的化する場合に使用され得る。

一般に、候補の切断可能な連結基の適切性は、候補連結基を切断する分解性薬剤（または条件）の能力を試験することによって評価され得る。血液中でのまたは他の非標的組織と接触した場合の切断に抵抗する能力について、候補の切断可能な連結基を試験することが望ましいこともある。したがって、少なくとも２つの条件間で切断に対する相対的感受性を決定することができ、ここで、少なくとも１つの条件は、標的細胞における切断を示すように選択され、別の条件は、他の組織または生物学的流体、例えば、血液もしくは血清における切断を示すように選択される。評価は、無細胞系中、細胞中、細胞培養物中、臓器もしくは組織培養物中、または動物全体中で実施され得る。無細胞または培養条件で初期評価を行い、動物全体中でさらなる評価によって確認することが、有用であり得る。一部の態様では、有用な候補化合物は、血液もしくは血清（または細胞外条件を模倣するように選択されたｉｎｖｉｔｒｏ条件下）と比較して、細胞中で（または細胞内条件を模倣するように選択されたｉｎｖｉｔｒｏ条件下で）少なくとも約２、４、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００倍速く切断される。

ａ．酸化還元切断可能な連結基
一態様では、切断可能な連結基は、還元または酸化の際に切断される、酸化還元切断可能な連結基である。還元的に切断可能な連結基の例は、ジスルフィド連結基（－Ｓ－Ｓ－）である。候補の切断可能な連結基が適切な「還元的に切断可能な連結基」であるかどうか、または例えば、特定のオリゴヌクレオチド部分および特定の標的化剤との使用に適切かどうかを決定するために、本明細書に記載される方法に注目することができる。例えば、候補は、細胞、例えば、標的細胞において観察される切断の速度を模倣する、当該分野で公知の試薬を使用した、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）または他の還元剤とのインキュベーションによって評価され得る。候補は、血液または血清条件を模倣するように選択された条件下で評価され得る。一態様では、候補化合物は、血液中で多くても約１０％切断される。他の態様では、有用な候補化合物は、血液（または細胞外条件を模倣するように選択されたｉｎｖｉｔｒｏ条件下）と比較して、細胞中で（または細胞内条件を模倣するように選択されたｉｎｖｉｔｒｏ条件下で）少なくとも約２、４、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００倍速く分解される。候補化合物の切断の速度は、細胞内媒体を模倣するように選択された条件下で、細胞外媒体を模倣するように選択された条件と比較して、標準的な酵素速度論アッセイを使用して決定され得る。

ｂ．ホスフェートに基づく切断可能な連結基
別の態様では、切断可能なリンカーは、ホスフェートに基づく切断可能な連結基を含む。ホスフェートに基づく切断可能な連結基は、ホスフェート基を分解または加水分解する薬剤によって切断される。細胞中のホスフェート基を切断する薬剤の例は、細胞中のホスファターゼなどの酵素である。ホスフェートに基づく連結基の例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ^ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲ^ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲ^ｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ^ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ^ｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ^ｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲ^ｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲ^ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｒ^ｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒ^ｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒ^ｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｒ^ｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒ^ｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒ^ｋ）－Ｓ－である。これらの候補は、上記の方法と類似の方法を使用して評価され得る。

ｃ．酸切断可能な連結基
別の態様では、切断可能なリンカーは、酸切断可能な連結基を含む。酸切断可能な連結基は、酸性条件下で切断される連結基である。一部の態様では、酸切断可能な連結基は、約６．５もしくはそれよりも低い（例えば、約６．０、５．７５、５．５、５．２５、５．０もしくはそれよりも低い）ｐＨを有する酸性環境中で、または一般酸として作用し得る酵素などの薬剤によって、切断される。細胞中では、特定の低ｐＨオルガネラ、例えば、エンドソームおよびリソソームが、酸切断可能な連結基に切断環境を提供し得る。酸切断可能な連結基の例には、ヒドラゾン、エステル、およびアミノ酸のエステルが含まれるがこれらに限定されない。酸切断可能な基は、一般式－Ｃ＝ＮＮ－、Ｃ（Ｏ）Ｏまたは－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。一態様では、炭素は、エステル（アルコキシ基）の酸素、アリール基、置換されたアルキル基または三級アルキル基、例えば、ジメチルペンチルもしくはｔ－ブチルに結合される。これらの候補は、上記の方法と類似の方法を使用して評価され得る。

ｄ．エステルに基づく連結基
別の態様では、切断可能なリンカーは、エステルに基づく切断可能な連結基を含む。エステルに基づく切断可能な連結基は、細胞中のエステラーゼおよびアミダーゼなどの酵素によって切断される。エステルに基づく切断可能な連結基の例には、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基のエステルが含まれるがこれらに限定されない。切断可能なエステル連結基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。これらの候補は、上記の方法と類似の方法を使用して評価され得る。

ｅ．ペプチドに基づく切断基
さらに別の態様では、切断可能なリンカーは、ペプチドに基づく切断可能な連結基を含む。ペプチドに基づく切断可能な連結基は、細胞中のペプチダーゼおよびプロテアーゼなどの酵素によって切断される。ペプチドに基づく切断可能な連結基は、アミノ酸間に形成されてオリゴペプチド（例えば、ジペプチド、トリペプチドなど）およびポリペプチドを生じるペプチド結合である。ペプチドに基づく切断可能な基は、アミド基（－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）を含まない。アミド基は、任意のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン（alkynelene）の間に形成され得る。ペプチド結合は、アミノ酸間に形成されてペプチドおよびタンパク質を生じる特別な型のアミド結合である。ペプチドに基づく切断基は、一般に、アミノ酸間に形成されてペプチドおよびタンパク質を生じるペプチド結合（即ち、アミド結合）に限定され、アミド官能基全体を含むわけではない。ペプチドに基づく切断可能な連結基は、一般式－ＮＨＣＨＲ^ＡＣ（Ｏ）ＮＨＣＨＲ^ＢＣ（Ｏ）－を有し、式中、Ｒ^ＡおよびＲ^Ｂは、２つの隣接するアミノ酸のＲ基である。これらの候補は、上記の方法と類似の方法を使用して評価され得る。

一態様では、オリゴヌクレオチドは、リンカーを介して炭水化物にコンジュゲートされる。リンカーには、二価および三価の分岐鎖リンカー基が含まれる。オリゴヌクレオチド炭水化物コンジュゲートのためのリンカーには、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１８／１９５１６５の式２４～３５に記載されるものが含まれるがこれらに限定されない。

オリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許には、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，８２８，９７９号；同第４，９４８，８８２号；同第５，２１８，１０５号；同第５，５２５，４６５号；同第５，５４１，３１３号；同第５，５４５，７３０号；同第５，５５２，５３８号；同第５，５７８，７１７号、同第５，５８０，７３１号；同第５，５９１，５８４号；同第５，１０９，１２４号；同第５，１１８，８０２号；同第５，１３８，０４５号；同第５，４１４，０７７号；同第５，４８６，６０３号；同第５，５１２，４３９号；同第５，５７８，７１８号；同第５，６０８，０４６号；同第４，５８７，０４４号；同第４，６０５，７３５号；同第４，６６７，０２５号；同第４，７６２，７７９号；同第４，７８９，７３７号；同第４，８２４，９４１号；同第４，８３５，２６３号；同第４，８７６，３３５号；同第４，９０４，５８２号；同第４，９５８，０１３号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，２４５，０２２号；同第５，２５４，４６９号；同第５，２５８，５０６号；同第５，２６２，５３６号；同第５，２７２，２５０号；同第５，２９２，８７３号；同第５，３１７，０９８号；同第５，３７１，２４１号、同第５，３９１，７２３号；同第５，４１６，２０３号、同第５，４５１，４６３号；同第５，５１０，４７５号；同第５，５１２，６６７号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５６５，５５２号；同第５，５６７，８１０号；同第５，５７４，１４２号；同第５，５８５，４８１号；同第５，５８７，３７１号；同第５，５９５，７２６号；同第５，５９７，６９６号；同第５，５９９，９２３号；同第５，５９９，９２８および同第５，６８８，９４１号；同第６，２９４，６６４号；同第６，３２０，０１７号；同第６，５７６，７５２号；同第６，７８３，９３１号；同第６，９００，２９７号；同第７，０３７，６４６号；同第８，１０６，０２２号が含まれるがこれらに限定されない。

所与の化合物中の全ての位置が均一に改変される必要はなく、実際、上述の改変のうち１つよりも多くが、単一の化合物中に、またはさらにはオリゴヌクレオチド内の単一のヌクレオシドにおいて、取り込まれ得る。キメラ化合物であるオリゴヌクレオチド化合物もまた企図される。キメラオリゴヌクレオチドは、典型的には、オリゴヌクレオチドに、ヌクレアーゼ分解に対する増加した耐性、増加した細胞取り込み、および／または標的核酸に対する増加した結合親和性を付与するようにＲＮＡが改変された、少なくとも１つの領域を含む。オリゴヌクレオチドのさらなる領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡを切断することが可能な酵素の基質として機能し得る。例として、ＲＮａｓｅＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。したがって、ＲＮａｓｅＨの活性化は、ＲＮＡ標的の切断を生じ、それによって、遺伝子発現のオリゴヌクレオチド阻害の効率を大いに増強する。結果として、比較可能な結果が、同じ標的領域にハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシオリゴヌクレオチドと比較して、キメラオリゴヌクレオチドが使用される場合、より短いオリゴヌクレオチドによって得られ得る場合が多い。ＲＮＡ標的の切断は、ゲル電気泳動、および必要に応じて、当該分野で公知の関連の核酸ハイブリダイゼーション技術によって、慣用的に検出され得る。

ある特定の場合には、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドは、非リガンド基によって改変され得る。いくつかの非リガンド分子は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強するためにオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされており、かかるコンジュゲーションを実施するための手順は、科学文献において入手可能である。かかる非リガンド部分には、脂質部分、例えば、コレステロール（Kubo, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm, 2007, 365(1):54-61；Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553)、コール酸（Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306；Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765）、チオコレステロール（Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111；Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327；Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651；Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969）、またはアダマンタン酢酸（Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651）、パルミチル部分（Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229）、あるいはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923）が含まれている。かかるオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許は、上に列挙されている。典型的なコンジュゲーションプロトコールには、配列の１つまたは複数の位置においてアミノリンカーを保有するオリゴヌクレオチドの合成が関与する。次いで、アミノ基が、適切なカップリング試薬または活性化試薬を使用して、コンジュゲートされている分子と反応される。コンジュゲーション反応は、固体支持体になおも結合したオリゴヌクレオチドを用いて、または溶液相中でオリゴヌクレオチドの切断後に、実施され得る。ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチドコンジュゲートの精製は、典型的には、純粋なコンジュゲートを生じる。

ＩＶ．医薬的使用
本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド組成物は、本明細書に記載される方法において有用であり、理論に束縛されないが、例えば、哺乳動物中の細胞におけるＭＳＨ３タンパク質の活性またはレベルを阻害することによって、ＭＳＨ３を含むＭｕｔＳβヘテロダイマーのレベル、状態および／または活性をモジュレートするそれらの能力を介して、それらの望ましい効果を発揮すると考えられる。

ある態様は、ＤＮＡミスマッチ修復に関連する障害、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置を必要とする対象においてＤＮＡミスマッチ修復に関連する障害、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害を処置する方法に関する。別の態様は、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別された対象の細胞においてＭＳＨ３のレベルを減少させることを含む。なお別の態様は、対象中の細胞においてＭＳＨ３の発現を阻害する方法を含む。さらなる態様は、細胞においてトリヌクレオチドリピート伸長を減少させる方法を含む。これらの方法は、細胞を、細胞においてＭＳＨ３の発現を阻害するのに有効な量のオリゴヌクレオチドと接触させ、それによって、細胞においてＭＳＨ３の発現を阻害するステップを含む。

上記方法に基づいて、治療における使用のため、または医薬としての使用のため、またはＤＮＡミスマッチ修復に関連する障害、例えば、リピート伸長障害の処置を必要とする対象においてＤＮＡミスマッチ修復に関連する障害、例えばリピート伸長障害を処置する際の使用のため、またはトリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別された対象の細胞においてＭＳＨ３のレベルを低減させる際の使用のため、または対象中の細胞においてＭＳＨ３の発現を阻害する際の使用のため、または細胞においてトリヌクレオチドリピート伸長を減少させる際の使用のための、オリゴヌクレオチド、またはかかるオリゴヌクレオチドを含む組成物が、企図される。これらの使用は、細胞を、細胞においてＭＳＨ３の発現を阻害するのに有効な量のオリゴヌクレオチドと接触させ、それによって、細胞においてＭＳＨ３の発現を阻害するステップを含む。本明細書に記載される方法に関連して、以下に記載される態様は、これらのさらなる態様にも適用可能である。

細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることは、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏで実施され得る。細胞をｉｎｖｉｖｏでオリゴヌクレオチドと接触させることは、対象、例えば、ヒト対象内の細胞または細胞の群を、オリゴヌクレオチドと接触させることを含む。細胞を接触させるｉｎｖｉｔｒｏ方法およびｉｎｖｉｖｏ方法の組合せもまた可能である。細胞を接触させることは、上で議論したように、直接的または間接的であり得る。さらに、細胞を接触させることは、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の任意のリガンドを含む標的化リガンドを介して達成され得る。一部の態様では、標的化リガンドは、炭水化物部分、例えば、ＧａｌＮＡｃ_３リガンド、または目的の部位にオリゴヌクレオチドを方向付ける任意の他のリガンドである。細胞には、中枢神経系の細胞または筋肉細胞が含まれ得る。

ＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害することは、ＭＳＨ３遺伝子の任意のレベルの阻害、例えば、ＭＳＨ３遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制、例えば、少なくとも約２０％の阻害を含む。一部の態様では、阻害は、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％の阻害である。

ＭＳＨ３遺伝子の発現は、ＭＳＨ３遺伝子発現に関連する任意の変数のレベル、例えば、ＭＳＨ３ｍＲＮＡレベルまたはＭＳＨ３タンパク質レベルに基づいて評価され得る。

阻害は、対照レベルと比較した、これらの変数のうち１つまたは複数の絶対的または相対的レベルにおける減少によって評価され得る。対照レベルは、当該分野で利用される任意の型の対照レベル、例えば、投薬前のベースラインレベル、または未処置のもしくは対照（例えば、例えば、緩衝剤のみの対照または不活性薬剤対照）で処置された類似の対象、細胞もしくは試料から決定されたレベルであり得る。

一部の態様では、代用マーカーが、ＭＳＨ３の阻害を検出するために使用され得る。例えば、許容される診断基準およびモニタリング基準によって実証されるように、ＭＳＨ３発現を低減させる薬剤によるトリヌクレオチドリピート伸長障害の有効な処置は、ＭＳＨ３における臨床的に適切な低減を実証すると理解され得る。

方法の一部の態様では、ＭＳＨ３遺伝子の発現は、少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％、またはアッセイの検出のレベルを下回るまで、阻害される。一部の態様では、方法は、例えば、ＭＳＨ３の発現を低減させる薬剤による対象の処置後の臨床的に適切な転帰によって実証されるような、ＭＳＨ３の発現の臨床的に適切な阻害を含む。

ＭＳＨ３遺伝子の発現の阻害は、第１の細胞または細胞の群と実質的に同一であるが、そのように処置されていない第２の細胞または細胞の群（オリゴヌクレオチドで処置されていないまたは目的の遺伝子に標的化されたオリゴヌクレオチドで処置されていない対照細胞）と比較してＭＳＨ３遺伝子の発現が阻害されるような、ＭＳＨ３遺伝子がその中で転写される、（例えば、細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることによって、または細胞が存在しているもしくは存在していた対象にオリゴヌクレオチドを投与することによって）処置された第１の細胞または細胞の群（かかる細胞は、例えば、対象に由来する試料中に存在し得る）によって発現されるｍＲＮＡの量の低減によって明示され得る。阻害の程度は、以下に関して表現され得る：

他の態様では、ＭＳＨ３遺伝子の発現の阻害は、ＭＳＨ３遺伝子発現に機能的に関連付けられたパラメーター、例えば、ＭＳＨ３タンパク質発現またはＭＳＨ３シグナル伝達経路の低減に関して評価され得る。ＭＳＨ３遺伝子のサイレンシングは、内因性のＭＳＨ３または発現構築物からの異種のＭＳＨ３を発現する任意の細胞において、当該分野で公知の任意のアッセイによって決定され得る。

ＭＳＨ３タンパク質の発現の阻害は、細胞または細胞の群によって発現されるＭＳＨ３タンパク質のレベル（例えば、対象に由来する試料において発現されるタンパク質のレベル）における低減によって明示され得る。上で説明したように、ｍＲＮＡ抑制の評価について、処置された細胞または細胞の群におけるタンパク質発現レベルの阻害は、対照細胞または細胞の群におけるタンパク質のレベルのパーセンテージとして同様に表現され得る。

ＭＳＨ３遺伝子の発現の阻害を評価するために使用され得る対照細胞または細胞の群には、オリゴヌクレオチドといまだ接触されていない細胞または細胞の群が含まれる。例えば、対照細胞または細胞の群は、オリゴヌクレオチドによる対象の処置の前に、個々の対象（例えば、ヒトまたは動物対象）から引き出され得る。

細胞または細胞の群によって表現されるＭＳＨ３ｍＲＮＡのレベルは、ｍＲＮＡ発現を評価するための当該分野で公知の任意の方法を使用して決定され得る。一態様では、試料中のＭＳＨ３の発現のレベルは、ＭＳＨ３遺伝子の転写されたポリヌクレオチドまたはその部分、例えば、ｍＲＮＡを検出することによって決定される。ＲＮＡは、例えば、酸性フェノール／チオシアン酸グアニジン抽出（ＲＮＡｚｏｌＢ；Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮＥＡＳＹ（商標）ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ）またはＰＡＸｇｅｎｅ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用することを含めて、ＲＮＡ抽出技術を使用して、細胞から抽出され得る。リボ核酸ハイブリダイゼーションを利用する典型的なアッセイ形式には、核ランオンアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護アッセイ、ノザンブロッティグ、ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよびマイクロアレイ分析が含まれる。循環するＭＳＨ３ｍＲＮＡは、その全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１２／１７７９０６に記載される方法を使用して検出され得る。一部の態様では、ＭＳＨ３の発現のレベルは、核酸プローブを使用して決定される。用語「プローブ」は、本明細書で使用される場合、特異的ＭＳＨ３配列、例えば、ｍＲＮＡまたはポリペプチドに選択的に結合することが可能な任意の分子を指す。プローブは、当業者によって合成され得、または適切な生物学的調製物から引き出され得る。プローブは、標識されるように特異的に設計され得る。プローブとして利用され得る分子の例には、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、抗体および有機分子が含まれるがこれらに限定されない。

単離されたｍＲＮＡは、サザンもしくはノザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析、およびプローブアレイが含まれるがこれらに限定されない、ハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイにおいて使用され得る。ｍＲＮＡレベルの決定のための１つの方法には、単離されたｍＲＮＡを、ＭＳＨ３ｍＲＮＡにハイブリダイズすることができる核酸分子（プローブ）と接触させることが関与する。一態様では、ｍＲＮＡは、例えば、単離されたｍＲＮＡをアガロースゲル上で泳動し、ｍＲＮＡをゲルからメンブレン、例えばニトロセルロースに移すことによって、固体表面上に固定化され、プローブと接触される。代替えのな態様では、プローブ（単数または複数）が固体表面上に固定化され、ｍＲＮＡは、例えば、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ遺伝子チップアレイにおいて、プローブ（単数または複数）と接触される。当業者は、ＭＳＨ３ｍＲＮＡのレベルを決定する際の使用のために、公知のｍＲＮＡ検出方法を容易に適応させることができる。

試料中のＭＳＨ３の発現のレベルを決定するための代替えの方法には、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ、１９８７、米国特許第４，６８３，２０２号に示される実験態様）、リガーゼ連鎖反応（Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189-193）、自家持続配列複製（Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874-1878）、転写増幅系（Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177）、Ｑ－ベータレプリカーゼ（Lizardi et al. (1988) Bio/Technology 6:1197）、ローリングサークル複製（Ｌｉｚａｒｄｉら、米国特許第５，８５４，０３３号）または任意の他の核酸増幅方法と、その後の、当業者に周知の技術を使用する増幅された分子の検出とによる、例えば、試料中のｍＲＮＡの核酸増幅および／または逆転写酵素（ｃＤＮＡを調製するため）のプロセスが関与する。これらの検出スキームは、かかる分子が非常に低い数で存在する場合の核酸分子の検出のために特に有用である。一部の態様では、ＭＳＨ３の発現のレベルは、定量的蛍光発生ＲＴ－ＰＣＲ（即ち、ＴＡＱＭＡＮ（商標）Ｓｙｓｔｅｍ）またはＤＵＡＬ－ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅアッセイによって決定される。

ＭＳＨ３ｍＲＮＡの発現レベルは、メンブレンブロット（例えば、ハイブリダイゼーション分析、例えば、ノザン、サザン、ドットなどにおいて使用される）、あるいはマイクロウェル、試料チューブ、ゲル、ビーズもしくは繊維（または結合した核酸を含む任意の固体支持体）を使用してモニタリングされ得る。参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７７０，７２２号；同第５，８７４，２１９号；同第５，７４４，３０５号；同第５，６７７，１９５号；および同第５，４４５，９３４号を参照のこと。ＭＳＨ３発現レベルの決定は、溶液中で核酸プローブを使用することを含み得る。

一部の態様では、ｍＲＮＡ発現のレベルは、分岐鎖ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）アッセイまたはリアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を使用して評価される。このＰＣＲ方法の使用は、本明細書に提示される実施例において記載および例示される。かかる方法は、ＭＳＨ３核酸の検出のために使用され得る。

ＭＳＨ３タンパク質発現のレベルは、タンパク質レベルの測定のための当該分野で公知の任意の方法を使用して決定され得る。かかる方法には、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体もしくはゲル沈降素反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度的アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（単一または二重）、免疫電気泳動、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、エレクトロケミルミネッセンスアッセイなどが含まれる。かかるアッセイは、ＭＳＨ３タンパク質の存在または複製を示すタンパク質の検出のために使用され得る。

本明細書に記載される方法の一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドが対象内の特定の部位に送達されるように、対象に投与される。ＭＳＨ３の発現の阻害は、対象内の特定の部位に由来する試料中のＭＳＨ３ｍＲＮＡまたはＭＳＨ３タンパク質のレベルまたはレベルにおける変化の測定を使用して評価され得る。一部の態様では、方法は、例えば、ＭＳＨ３の発現を低減させる薬剤による対象の処置後の臨床的に適切な転帰によって実証されるような、ＭＳＨ３の発現の臨床的に適切な阻害を含む。

他の態様では、オリゴヌクレオチドは、以下のうち１つ（または複数、例えば、２つまたはそれよりも多く、３つまたはそれよりも多く、４つまたはそれよりも多く）を生じるのに有効な量でおよびそのような時間にわたって投与される：（ａ）リピートの数を減少させる、（ｂ）ポリグルタミンのレベルを減少させる、（ｃ）細胞死（例えば、ＣＮＳ細胞死および／または筋肉細胞死）の減少、（ｄ）障害の開始の遅延、（ｅ）対象の生存の増加、ならびに（ｆ）対象の無進行生存の増加。

トリヌクレオチドリピート伸長障害を処置することは、未処置の対象の集団と比較した、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドで処置した個体または対象の集団の平均生存時間における増加を生じ得る。例えば、個体の生存時間または集団の平均生存時間は、３０日よりも長く（６０日、９０日または１２０日よりも長く）増加される。個体の生存時間または集団の平均生存時間における増加は、任意の再現性のある手段によって測定され得る。個体の生存時間における増加は、例えば、本明細書に記載される化合物による処置の開始後の生存時間の長さを個体について計算することによって測定され得る。集団の平均生存時間における増加は、例えば、本明細書に記載される化合物による処置の開始後の生存時間の平均長さをについて計算することによって測定され得る。個体の生存時間における増加は、例えば、本明細書に記載される化合物または化合物の薬学的に許容される塩による第１ラウンドの処置の完了後の生存時間の長さを個体について計算することによって測定され得る。集団の平均生存時間における増加は、例えば、本明細書に記載される化合物または化合物の薬学的に許容される塩による第１ラウンドの処置の完了後の生存時間の平均長さを集団について計算することによって測定され得る。

トリヌクレオチドリピート伸長障害を処置することは、未処置の集団と比較した、処置された対象の集団の死亡率における減少を生じ得る。例えば、死亡率は、２％よりも大きく（例えば、５％、１０％または２５％よりも大きく）減少される。処置された対象の集団の死亡率における減少は、任意の再現性のある手段によって、例えば、本明細書に記載される化合物または化合物の薬学的に許容される塩による処置の開始後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を集団について計算することによって測定され得る。集団の死亡率における減少は、例えば、本明細書に記載される化合物または化合物の薬学的に許容される塩による第１ラウンドの処置の完了後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を集団について計算することによって測定され得る。

Ａ．抗ＭＳＨ３剤の送達
細胞、例えば、対象、例えば、ヒト対象、例えば、オリゴヌクレオチドの送達を必要とする対象、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有する対象内の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達は、いくつかの異なる方法で達成され得る。例えば、送達は、細胞をｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏのいずれかでオリゴヌクレオチドと接触させることによって実施され得る。ｉｎｖｉｖｏ送達は、オリゴヌクレオチドを含む組成物を対象に投与することによって、直接的に実施され得る。これらの代替法は、以下でさらに議論される。

一般に、核酸分子を（ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏで）送達する任意の方法が、オリゴヌクレオチドとの使用のために適応され得る（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Akhtar S. and Julian R L., (1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139-144およびＷＯ９４／０２５９５を参照のこと）。ｉｎｖｉｖｏ送達のために、オリゴヌクレオチド分子を送達するために考慮する因子には、例えば、送達される分子の生物学的安定性、非特異的効果の防止、および標的組織における送達された分子の蓄積が含まれる。オリゴヌクレオチドの非特異的効果は、局所投与によって、例えば、組織中への直接的注射もしくはインプランテーションによって、または調製物を外用投与することによって、最小化され得る。処置部位への局所投与は、薬剤の局所濃度を最大化し、薬剤によってさもなくば害され得るまたは薬剤を分解し得る全身組織への薬剤の曝露を制限し、オリゴヌクレオチドのより低い総用量が投与されるのを可能にする。

疾患の処置のためにオリゴヌクレオチドを全身投与するために、オリゴヌクレオチドは、代替えの核酸塩基、代替えの糖部分および／もしくは代替えのヌクレオシド間連結を含み得、またはあるいは、薬物送達系を使用して送達され得る；両方の方法が、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼによるｉｎｖｉｖｏでのオリゴヌクレオチドの迅速な分解を防止するように作用する。オリゴヌクレオチドまたは医薬担体の改変は、オリゴヌクレオチド組成物の標的組織への標的化を可能にし得、望ましくないオフターゲット効果を回避し得る。オリゴヌクレオチド分子は、細胞取り込みを増強し、分解を防止するために、親油性基、例えば、コレステロールへの化学的コンジュゲーションによって改変され得る。代替えのな態様では、オリゴヌクレオチドは、薬物送達系、例えば、ナノ粒子、脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソームまたはカチオン性送達系を使用して送達され得る。正に荷電したカチオン性送達系は、オリゴヌクレオチド分子（負に荷電した）の結合を促進し、また、細胞によるオリゴヌクレオチドの効率的な取り込みを可能にするように、負に荷電した細胞膜における相互作用を増強する。カチオン性脂質、デンドリマーまたはポリマーは、オリゴヌクレオチドに結合され得るか、またはオリゴヌクレオチドを包む小胞もしくはミセルを形成するように誘導され得る。小胞またはミセルの形成は、全身投与された場合のオリゴヌクレオチドの分解をさらに防止する。一般に、当該分野で公知の核酸の送達の任意の方法が、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドの送達のために適応可能であり得る。カチオン性オリゴヌクレオチド複合体を作製するためおよび投与するための方法は、当業者の技術範囲内に十分に入る（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Sorensen, D R., et al. (2003) J. Mol. Biol 327:761-766；Verma, U N. et al., (2003) Clin. Cancer Res. 9:1291-1300；Arnold, A S et al., (2007) J. Hypertens. 25:197-205を参照のこと）。オリゴヌクレオチドの全身送達のために有用な薬物送達系の一部の非限定的な例には、ＤＯＴＡＰ（Sorensen, D R., et al (2003), 上記；Verma, U N. et al., (2003), 上記）、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ、「固体核酸脂質粒子」（Zimmermann, T S. et al., (2006) Nature 441:111-114）、カルジオリピン（Chien, P Y. et al., (2005) Cancer Gene Ther. 12:321-328；Pal, A. et al., (2005) Int J. Oncol. 26:1087-1091）、ポリエチレンイミン（Bonnet M E. et al., (2008) Pharm. Res. Aug 16 Epub ahead of print；Aigner, A. (2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659）、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド（Liu, S. (2006) Mol. Pharm. 3:472-487）およびポリアミドアミン（Tomalia, D A. et al., (2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61-67；Yoo, H. et al., (1999) Pharm. Res. 16:1799-1804）が含まれる。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、全身投与のために、シクロデキストリンと複合体を形成する。オリゴヌクレオチドおよびシクロデキストリンの投与のための方法および医薬組成物は、その全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，４２７，６０５号中に見出すことができる。一部の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、ポリプレックスまたはリポプレックスナノ粒子によって送達される。オリゴヌクレオチドならびにポリプレックスナノ粒子およびリポプレックスナノ粒子の投与のための方法ならびに医薬組成物は、これによりそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願第２０１７／０１２１４５４号；同第２０１６／０３６９２６９号；同第２０１６／０２７９２５６号；同第２０１６／０２５１４７８号；同第２０１６／０２３０１８９号；同第２０１５／０３３５７６４号；同第２０１５／０３０７５５４号；同第２０１５／０１７４５４９号；同第２０１４／０３４２００３号；同第２０１４／０１３５３７６号；および同第２０１３／０３１７０８６号中に見出すことができる。

ｉ．膜性分子アセンブリ送達方法
オリゴヌクレオチドは、当該分野で公知のポリマー性生分解性マイクロ粒子またはマイクロカプセル送達デバイスを含む種々の膜性分子アセンブリ送達方法を使用して送達され得る。例えば、コロイド分散系が、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド薬剤の標的化された送達のために使用され得る。コロイド分散系には、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームが含まれる、脂質に基づく系が含まれる。リポソームは、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでの送達ビヒクルとして有用な人工膜小胞である。サイズが０．２～４．０μｍの範囲の大型単層膜小胞（ＬＵＶ）は、大きい高分子を含む水性緩衝剤の実質的なパーセンテージを封入することができることが示されている。リポソームは、作用部位への活性成分の移行および送達に有用である。リポソーム膜は、生物学的膜と構造的に類似しているので、リポソームが組織に適用されると、リポソーム二重層は、細胞膜の二重層と融合する。リポソームと細胞との統合が進行するにつれて、オリゴヌクレオチドを含む内部水性内容物は、細胞中に送達され、その場所で、オリゴヌクレオチドは標的ＲＮＡに特異的に結合でき、ＲＮａｓｅＨ媒介性遺伝子サイレンシングを媒介できる。一部の場合には、リポソームはまた、例えば、オリゴヌクレオチドを特定の細胞型へと方向付けるために、特異的に標的化される。リポソームの組成は、通常、ステロイド、特にコレステロールと通常は組み合わせた、リン脂質の組合せである。他のリン脂質または他の脂質が使用され得る。リポソームの物理的特徴は、ｐＨ、イオン強度、および二価カチオンの存在に依存する。

オリゴヌクレオチドを含むリポソームは、種々の方法によって調製され得る。一例では、リポソームの脂質構成要素は、脂質構成要素と共にミセルが形成されるように、洗剤中に溶解される。例えば、脂質構成要素は、両親媒性カチオン性脂質または脂質コンジュゲートであり得る。洗剤は、高い臨界ミセル濃度を有し得、非イオン性であり得る。例示的な洗剤には、コレート、ＣＨＡＰＳ、オクチルグルコシド、デオキシコレートおよびラウロイルサルコシンが含まれる。次いで、オリゴヌクレオチド調製が、脂質構成要素を含むミセルに添加される。脂質上のカチオン性基は、オリゴヌクレオチドと相互作用し、オリゴヌクレオチドの周囲に凝結して、リポソームを形成する。凝結後、洗剤は、例えば、透析によって除去されて、オリゴヌクレオチドのリポソーム調製物が得られる。

必要に応じて、凝結を助ける担体化合物が、例えば、制御された添加によって、凝結反応の間に添加され得る。例えば、担体化合物は、核酸以外のポリマー（例えば、スペルミンまたはスペルミジン）であり得る。ｐＨは、凝結に有利なように調整され得る。

送達ビヒクルの構造的構成要素としてポリヌクレオチド／カチオン性脂質複合体を取り込む安定なポリヌクレオチド送達ビヒクルを産生するための方法は、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ９６／３７１９４にさらに記載されている。リポソーム形成は、Feigner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417；米国特許第４，８９７，３５５号；米国特許第５，１７１，６７８号；Bangham et al., (1965) M. Mol. Biol. 23:238；Olson et al., (1979) Biochim. Biophys. Acta 557:9；Szoka et al., (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. 75: 4194；Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169；Kim et al., (1983) Biochim. Biophys. Acta 728:339；およびFukunaga et al., (1984) Endocrinol. 115:757に記載される例示的な方法の１つまたは複数の態様を含み得る。送達ビヒクルとしての使用に適切なサイズの脂質凝集物を調製するための一般に使用される技術には、超音波処理および凍結－解凍プラス押し出しが含まれる（例えば、Mayer et al., (1986) Biochim. Biophys. Acta 858:161を参照のこと）。一貫して小さく（５０～２００ｎｍ）比較的均一な凝集物が所望される場合、微流動化（microfluidization）が使用され得る（Mayhew et al., (1984) Biochim. Biophys. Acta 775:169）。これらの方法は、オリゴヌクレオチド調製物をリポソームへとパッケージングするために容易に適応される。

リポソームは、２つの広いクラスに入る。カチオン性リポソームは、負に荷電した核酸分子と相互作用して安定な複合体を形成する、正に荷電したリポソームである。正に荷電した核酸／リポソーム複合体は、負に荷電した細胞表面に結合し、エンドソーム中に内在化される。エンドソーム内の酸性ｐＨに起因して、リポソームは破裂し、それらの内容物を細胞原形質中に放出する（Wang et al. (1987) Biochem. Biophys. Res. Commun., 147:980-985）。

ｐＨ感受性のまたは負に荷電したリポソームは、核酸と複合体化するのではなく核酸を封入する。核酸および脂質は共に同様に荷電しているので、複合体形成ではなく反発が生じる。それにもかかわらず、一部の核酸は、これらのリポソームの水性内部内に封入される。ｐＨ感受性リポソームは、チミジンキナーゼ遺伝子をコードする核酸を、培養物中の細胞単層に送達するために使用されてきた。外因性遺伝子の発現が、標的細胞において検出された（Zhou et al. (1992) Journal of Controlled Release, 19:269-274）。

１つの主要な型のリポソーム組成物は、天然由来のホスファチジルコリン以外のリン脂質を含む。中性リポソーム組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から形成され得る。アニオン性リポソーム組成物は、一般に、ジミリストイルホスファチジルグリセロールから形成されるが、アニオン性融合性リポソームは、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）から主に形成される。別の型のリポソーム組成物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、例えば、ダイズＰＣおよび卵ＰＣなどから形成される。別の型は、リン脂質および／またはホスファチジルコリンおよび／またはコレステロールの混合物から形成される。

リポソームを細胞中にｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで導入する他の方法の例には、米国特許第５，２８３，１８５号；米国特許第５，１７１，６７８号；ＷＯ９４／００５６９；ＷＯ９３／２４６４０；ＷＯ９１／１６０２４；Feigner, (1994) J. Biol. Chem. 269:2550；Nabel, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:11307；Nabel, (1992) Human Gene Ther. 3:649；Gershon, (1993) Biochem. 32:7143；およびStrauss, (1992) EMBO J. 11:417が含まれる。

非イオン性リポソーム系、特に、非イオン性界面活性剤およびコレステロールを含む系もまた、皮膚への薬物の送達におけるそれらの有用性を決定するために試験されている。ＮＯＶＡＳＯＭＥ（商標）Ｉ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）およびＮＯＶＡＳＯＭＥ（商標）ＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤は、マウス皮膚の真皮中にシクロスポリン－Ａを送達するために使用された。結果は、かかる非イオン性リポソーム系が、皮膚の異なる層中へのシクロスポリンＡの沈着を促進するのに有効であったことを示した（Hu et al., (1994) S.T.P.Pharma. Sci., 4(6):466）。

リポソームは、かかる特殊な脂質を欠くリポソームと比較して増強された循環寿命を生じる１つまたは複数の特殊な脂質を含む立体的に安定化されたリポソームであり得る。立体的に安定化されたリポソームの例は、リポソームの小胞形成性脂質部分の一部が、（Ａ）１つもしくは複数の糖脂質、例えば、モノシアロガングリオシドＧ_Ｍ１を含む、または（Ｂ）１つもしくは複数の親水性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分で誘導体化されている、リポソームである。いずれの特定の理論に束縛されることも望まないが、当該分野では、ガングリオシド、スフィンゴミエリンまたはＰＥＧ誘導体化脂質を含む立体的に安定化されたリポソームについては少なくとも、これらの立体的に安定化されたリポソームの増強された循環半減期は、細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞中への低減された取り込みに由来すると考えられている（Allen et al., (1987) FEBS Letters, 223:42；Wu et al., (1993) Cancer Research, 53:3765）。

１つまたは複数の糖脂質を含む種々のリポソームが、当該分野で公知である。Papahadjopoulos et al. (Ann. N.Y. Acad. Sci., (1987), 507:64)は、モノシアロガングリオシドＧ^Ｍ１、硫酸ガラクトセレブロシドおよびホスファチジルイノシトールの、リポソームの血中半減期を改善する能力を報告した。これらの知見は、Gabizon et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1988), 85:6949)によって説明された。共にＡｌｌｅｎらに対する米国特許第４，８３７，０２８号およびＷＯ８８／０４９２４は、（１）スフィンゴミエリンおよび（２）ガングリオシドＧ_Ｍ１またはガラクトセレブロシド硫酸エステルを含むリポソームを開示している。米国特許第５，５４３，１５２号（Ｗｅｂｂら）は、スフィンゴミエリンを含むリポソームを開示している。１，２－ｓｎ－ジミリストイルホスファチジルコリンを含むリポソームは、ＷＯ９７／１３４９９（Ｌｉｍら）に開示されている。

一態様では、カチオン性リポソームが使用される。カチオン性リポソームは、細胞膜に融合することができるという利点を有している。非カチオン性リポソームは、原形質膜と効率的には融合できないが、マクロファージによってｉｎｖｉｖｏで取り込まれ、オリゴヌクレオチドをマクロファージに送達するために使用され得る。

リポソームのさらなる利点には、以下が含まれる：天然リン脂質から得られたリポソームは、生体適合性かつ生分解性である；リポソームは、広範な水可溶性および脂質可溶性薬物を取り込むことができる；リポソームは、代謝および分解から、それらの内部区画中に封入されたオリゴヌクレオチドを保護することができる（Rosoff, 「Pharmaceutical Dosage Forms」, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), 1988, volume 1, p. 245）。リポソーム製剤の調製における重要な考慮事項は、リポソームの脂質表面電荷、小胞サイズおよび水性体積である。

正に荷電した合成カチオン性脂質、Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）は、核酸と自発的に相互作用して組織培養細胞の細胞膜の負に荷電した脂質と融合してオリゴヌクレオチドの送達を生じることが可能な脂質－核酸複合体を形成する小さいリポソームを形成するために使用され得る（例えば、ＤＯＴＭＡおよびＤＮＡとのその使用の記載については、Feigner, P. L. et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:7413-7417および米国特許第４，８９７，３５５号を参照のこと）。

ＤＯＴＭＡアナログ、１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３－（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＯＴＡＰ）は、ＤＮＡ複合体化性の小胞を形成するために、リン脂質と組み合わせて使用され得る。ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）（ＢｅｔｈｅｓｄａＲｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍｄ．）は、負に荷電したポリヌクレオチドと自発的に相互作用して複合体を形成する正に荷電したＤＯＴＭＡリポソームを構成する、生きた組織培養細胞中への高度にアニオン性の核酸の送達のための有効な薬剤である。十分に正に荷電したリポソームが使用される場合、得られた複合体上の正味電荷もまた正である。この方法で調製された正に荷電した複合体は、負に荷電した細胞表面に自発的に結合し、原形質膜と融合し、機能的核酸を、例えば組織培養細胞中に効率的に送達する。別の市販のカチオン性脂質、１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３，３－（トリメチルアンモニア）プロパン（「ＤＯＴＡＰ」）（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）は、オレオイル部分がエーテル連結ではなくエステルによって連結されているという点で、ＤＯＴＭＡとは異なる。

他の報告されたカチオン性脂質化合物には、例えば、２つの型の脂質の一方にコンジュゲートされた、５－カルボキシスペルミルグリシンジオクタオレオイルアミド（「ＤＯＧＳ」）（ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン５－カルボキシスペルミル－アミド（「ＤＰＰＥＳ」）などの化合物が含まれるカルボキシスペルミンが含まれる、種々の部分にコンジュゲートされた化合物が含まれる（例えば、米国特許第５，１７１，６７８号を参照のこと）。

別のカチオン性脂質コンジュゲートには、ＤＯＰＥと組み合わせてリポソームへと製剤化されたコレステロールによる脂質の誘導体化（「ＤＣ－Ｃｈｏｌ」）が含まれる（Gao, X. and Huang, L., (1991) Biochim. Biophys. Res. Commun. 179:280を参照のこと）。ポリリシンをＤＯＰＥにコンジュゲートすることによって作製されるリポポリリシンは、血清の存在下でのトランスフェクションに有効であることが報告されている（Zhou, X. et al., (1991) Biochim. Biophys. Acta 1065:8）。ある特定の細胞系について、コンジュゲートされたカチオン性脂質を含むこれらのリポソームは、より低い毒性を示すと言われ、ＤＯＴＭＡ含有組成物よりも効率的なトランスフェクションを提供する。他の市販のカチオン性脂質製品には、ＤＭＲＩＥおよびＤＭＲＩＥ－ＨＰ（Ｖｉｃａｌ、ＬａＪｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）ならびにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（ＤＯＳＰＡ）（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍｄ．）が含まれる。オリゴヌクレオチドの送達に適切な他のカチオン性脂質は、ＷＯ９８／３９３５９およびＷＯ９６／３７１９４に記載されている。

リポソーム製剤は、外用投与に特に適しており、リポソームは、他の製剤を超えるいくつかの利点を示す。かかる利点には、投与された薬物の高い全身吸収に関連する副作用の低減、所望の標的における投与された薬物の蓄積の増加、およびオリゴヌクレオチドを皮膚に投与する能力が含まれる。一部のインプリメンテーションでは、リポソームは、オリゴヌクレオチドを上皮細胞に送達するため、およびまた、真皮組織中、例えば、皮膚中へのオリゴヌクレオチドの穿通を増強するために使用される。例えば、リポソームは、外用適用され得る。リポソームとして製剤化された薬物の皮膚への外用送達は、報告されている（例えば、Weiner et al., (1992) Journal of Drug Targeting, vol. 2,405-410およびdu Plessis et al., (1992) Antiviral Research, 18:259-265；Mannino, R. J. and Fould-Fogerite, S., (1998) Biotechniques 6:682-690；Itani, T. et al., (1987) Gene 56:267-276；Nicolau, C. et al. (1987) Meth. Enzymol. 149:157-176；Straubinger, R. M. and Papahadjopoulos, D. (1983) Meth. Enzymol. 101:512-527；Wang, C. Y. and Huang, L., (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7851-7855を参照のこと）。

非イオン性リポソーム系、特に、非イオン性界面活性剤およびコレステロールを含む系もまた、皮膚への薬物の送達におけるそれらの有用性を決定するために試験されている。ＮＯＶＡＳＯＭＥＩ（ジラウリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）およびＮＯＶＡＳＯＭＥＩＩ（ジステアリン酸グリセリル／コレステロール／ポリオキシエチレン－１０－ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤は、マウス皮膚の真皮中に薬物を送達するために使用された。オリゴヌクレオチドを有するかかる製剤は、皮膚科学的障害を処置するために有用である。

リポソームの標的化は、例えば、臓器特異性、細胞特異性およびオルガネラ特異性に基づいても可能であり、当該分野で公知である。リポソーム標的化送達系の場合、脂質基が、標的化リガンドをリポソーム二重層と安定に関連して維持するために、リポソームの脂質二重層中に取り込まれ得る。種々の連結基が、脂質鎖を標的化リガンドに接合するために使用され得る。さらなる方法は、当該分野で公知であり、例えば、その連結基がこれにより参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６００５８２５５号に記載されている。

オリゴヌクレオチドを含むリポソームは、高度に変形可能にされ得る。かかる変形可能性は、リポソームの平均半径よりも小さい孔を介してリポソームが穿通することを可能にし得る。例えば、トランスファーソームは、なお別の型のリポソームであり、薬物送達ビヒクルとしての魅力的な候補である、高度に変形可能な脂質凝集物である。トランスファーソームは、液滴よりも小さい孔を介して容易に穿通することが可能なほどに高度に変形可能な脂質液滴として記載され得る。トランスファーソームは、表面縁活性化因子（surface edge activator）、通常は界面活性剤を、標準的なリポソーム組成物に添加することによって作製され得る。オリゴヌクレオチドを含むトランスファーソームは、例えば、皮膚中のケラチノサイトにオリゴヌクレオチドを送達するために感染によって、皮下送達され得る。インタクトな哺乳動物皮膚を横断するために、脂質小胞は、適切な経皮勾配の影響下で、５０ｎｍ未満の直径を各々が有する一連の微細な孔を通過しなければならない。さらに、脂質特性に起因して、これらのトランスファーソームは、自己最適化性（例えば皮膚中の孔の形状に適応する）、自己修復性であり得、断片化することなしにそれらの標的に頻繁に到達でき、しばしば自己充填性であり得る。トランスファーソームは、血清アルブミンを皮膚に送達するために使用されてきた。血清アルブミンのトランスファーソーム媒介性送達は、血清アルブミンを含む溶液の皮下注射と同様に有効であることが示されている。

他の適切な製剤は、２００８年１月２日出願の米国仮特許出願第６１／０１８，６１６号；２００８年１月２日出願の同第６１／０１８，６１１号；２００８年３月２６日出願の同第６１／０３９，７４８号；２００８年４月２２日出願の同第６１／０４７，０８７号および２００８年５月８日出願の同第６１／０５１，５２８号に記載されている。２００７年１０月３日出願のＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８０３３１もまた、適切なものを記載している。界面活性剤は、製剤、例えば、エマルジョン（マイクロエマルジョンが含まれる）およびリポソームにおいて、広い適用を見出す。天然および合成の両方の多くの異なる型の界面活性剤の特性を分類およびランク付けする最も一般的な方法は、親水性／脂溶性バランス（ＨＬＢ）の使用によるものである。親水性基（「ヘッド」としても公知）の性質は、製剤において使用される異なる界面活性剤をカテゴライズするための最も有用な手段を提供する（Rieger, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285）。

界面活性剤分子は、イオン化されない場合、非イオン性界面活性剤と分類される。非イオン性界面活性剤は、医薬製品および化粧品において広い適用を見出し、広範なｐＨ値にわたって使用可能である。一般に、それらのＨＬＢ値は、それらの構造に依存して、２～約１８の範囲である。非イオン性界面活性剤には、非イオン性エステル、例えば、エチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、グリセリルエステル、ポリグリセリルエステル、ソルビタンエステル、スクロースエステルおよびエトキシ化エステルが含まれる。非イオン性アルカノールアミドおよびエーテル、例えば、脂肪アルコールエトキシレート、プロポキシ化アルコールおよびエトキシ化／プロポキシ化ブロックポリマーもまた、このクラスに含まれる。ポリオキシエチレン界面活性剤は、非イオン性界面活性剤のクラスの最も一般的なメンバーである。

水中に溶解または分散された場合に界面活性剤分子が負の電荷を保有する場合、この界面活性剤は、アニオン性と分類される。アニオン性界面活性剤には、カルボキシレート、例えば、セッケン、アシルラクチレート、アミノ酸のアシルアミド、硫酸のエステル、例えば、アルキル硫酸塩およびエトキシ化アルキル硫酸塩、スルホン酸塩、例えば、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アシルイセチオネート、アシルタウレート（acyl taurate）およびスルホサクシネート、ならびにホスフェートが含まれる。アニオン性界面活性剤のクラスの最も重要なメンバーは、アルキル硫酸塩およびセッケンである。

水中に溶解または分散された場合に界面活性剤分子が正の電荷を保有する場合、この界面活性剤は、カチオン性と分類される。カチオン性界面活性剤には、第４級アンモニウム塩およびエトキシ化アミンが含まれる。第４級アンモニウム塩は、このクラスの最も使用されるメンバーである。

界面活性剤分子が、正または負のいずれかの電荷を保有する能力を有する場合、この界面活性剤は、両性と分類される。両性界面活性剤には、アクリル酸誘導体、置換されたアルキルアミド、Ｎ－アルキルベタインおよびホスファチドが含まれる。

薬物製品、製剤およびエマルジョンにおける界面活性剤の使用は、概説されている（Rieger, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, p. 285で）。

方法における使用のためのオリゴヌクレオチドは、ミセル製剤として提供され得る。ミセルは、親水性部分を周囲の水相と接触させたままで、分子の全ての疎水性部分が内向きになるように、両親媒性分子が球状構造で配置される特定の型の分子アセンブリである。環境が疎水性である場合には、逆の配置が存在する。

ｉｉ．脂質ナノ粒子に基づく送達方法
オリゴヌクレオチドは、脂質製剤、例えば、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、または他の核酸－脂質粒子中に完全に封入され得る。ＬＮＰは、静脈内（ｉ．ｖ．）注射後に延長された循環寿命を示し、遠位部位（例えば、投与部位から物理的に離れた部位）に蓄積するので、全身適用のために極めて有用である。ＬＮＰには、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ００／０３６８３に示される、封入された凝結剤－核酸複合体を含む「ｐＳＰＬＰ」が含まれる。粒子は、典型的には、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、より典型的には約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、より典型的には約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、最も典型的には約７０ｎｍ～約９０ｎｍの平均直径を有し、実質的に非毒性である。さらに、核酸は、核酸－脂質粒子中に存在する場合、水性溶液中で、ヌクレアーゼによる分解に対して耐性である。核酸－脂質粒子およびそれらの調製の方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号；同第５，９８１，５０１号；同第６，５３４，４８４号；同第６，５８６，４１０号；同第６，８１５，４３２号；米国特許出願公開第２０１０／０３２４１２０号およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９６／４０９６４に開示されている。

一態様では、脂質の薬物に対する比（質量／質量比）（例えば、脂質のオリゴヌクレオチドに対する比）は、約１：１～約５０：１、約１：１～約２５：１、約３：１～約１５：１、約４：１～約１０：１、約５：１～約９：１または約６：１～約９：１の範囲にある。上に列挙された範囲の中間の範囲もまた企図される。

カチオン性脂質の非限定的な例には、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ－（Ｉ－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ－（Ｉ－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ（Dilinolenyloxy）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ（Dilinoleyoxy）－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、もしくは３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（propanedio）（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）もしくはそのアナログ、（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニルテトラヒドロ（dienyetetrahydro）－３ａＨ－シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－アミン（ＡＬＮ１００）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＭＣ３）、１，１’－（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イルエチルアザンジイルジドデカン（yeethylazanediyedidodecan）－２－オール（ＴｅｃｈＧ１）、またはそれらの混合物が含まれる。カチオン性脂質は、例えば、粒子中に存在する総脂質の約２０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％を構成し得る。

イオン化可能な／非カチオン性脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、コレステロール、またはそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されないアニオン性脂質または中性脂質であり得る。非カチオン性脂質は、例えば、コレステロールが含まれる場合、粒子中に存在する総脂質の、約５ｍｏｌ％～約９０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、または約６０ｍｏｌ％であり得る。

粒子の凝集を阻害するコンジュゲートされた脂質は、例えば、ＰＥＧ－ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ－リン脂質、ＰＥＧ－セラミド（Ｃｅｒ）、またはそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されないポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－脂質であり得る。ＰＥＧ－ＤＡＡコンジュゲートは、例えば、ＰＥＧ－ジラウリルオキシプロピル（Ｃ_１２）、ＰＥＧ－ジミリスチルオキシプロピル（Ｃ_１４）、ＰＥＧ－ジパルミチルオキシプロピル（Ｃ_１６）またはＰＥＧ－ジステアリルオキシプロピル（Ｃ_１８）であり得る。粒子の凝集を防止るコンジュゲートされた脂質は、例えば、粒子中に存在する総脂質の０ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％、または約２ｍｏｌ％であり得る。

一部の態様では、核酸－脂質粒子は、例えば、粒子中に存在する総脂質の約１０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％、または約５０ｍｏｌ％のコレステロールをさらに含む。

Ｂ．併用療法
オリゴヌクレオチドは、単独で、あるいは、少なくとも１つのさらなる治療剤、例えば、トリヌクレオチドリピート伸長障害もしくはそれに関連する症状を処置する他の薬剤と組み合わせて、またはトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置する他の型の治療と組み合わせて、使用され得る。併用処置では、治療化合物のうち１つまたは複数の投薬量は、単独で投与された場合の標準的な投薬量から低減され得る。例えば、用量は、薬物組合せおよび順列から経験的に決定され得る、またはアイソボログラフィック（isobolographic）分析によって推定され得る（例えば、Black et al., Neurology 65:S3-S6 (2005)）。この場合、組み合わせた場合の化合物の投薬量が、治療効果を提供すべきである。

一部の態様では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド薬剤は、トリヌクレオチドリピートを有する遺伝子に関連するトリヌクレオチドリピート伸長障害（例えば、表１に列挙されるトリヌクレオチドリピート伸長障害およびヌクレオチドリピートを有する関連の遺伝子のいずれか）を処置するために、少なくとも１つのさらなる治療剤と組み合わせて使用され得る。一部の態様では、さらなる治療剤のうち少なくとも１つは、トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連する遺伝子（例えば、表１に列挙される遺伝子のいずれか）のｍＲＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＳＯ）であり得る。一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害は、ハンチントン病（ＨＤ）である。一部の態様では、トリヌクレオチドリピート伸長障害に関連する遺伝子は、ハンチンチン（ＨＴＴ）である。ハンチンチン遺伝子のいくつかの対立遺伝子バリアントが、ハンチントン病の原因に関連している。一部の場合には、これらのバリアントは、独自のＨＤ関連一塩基多型（ＳＮＰ）を有することに基づいて識別される。一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、当該分野で公知のＨＤ関連ＳＮＰのいずれか（例えば、Skotte et al., PLoS One 2014, 9(9): e107434、Carroll et al., Mol. Ther. 2011, 19(12): 2178-85、Warby et al., Am. J. Hum. Gen. 2009, 84(3): 351-66（これにより参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるＨＤ関連ＳＮＰのいずれか）を含むハンチンチン遺伝子のｍＲＮＡにハイブリダイズする。一部の態様では、さらなる治療剤であるオリゴヌクレオチドは、いずれのＨＤ関連ＳＮＰも欠くハンチンチン遺伝子のｍＲＮＡにハイブリダイズする。態様の一部では、さらなる治療剤であるオリゴヌクレオチドは、ｒｓ３６２３０７およびｒｓ３６５３３１からなる群から選択されるＳＮＰのいずれかを有するハンチンチン遺伝子のｍＲＮＡにハイブリダイズする。一部の態様では、さらなる治療剤であるオリゴヌクレオチドは、改変されたオリゴヌクレオチド（例えば、本明細書に記載される改変のいずれかを含むオリゴヌクレオチド）であり得る。一部の態様では、さらなる治療剤である改変されたオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。一部の態様では、改変されたオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の２’－ＭＯＥ部分を含む。一部の態様では、ハンチンチン遺伝子のｍＲＮＡにハイブリダイズするさらなる治療剤であるオリゴヌクレオチドは、米国特許第９，００６，１９８号の配列番号６～２８５；米国特許出願公開第２０１７／００４４５３９号の配列番号６～８；米国特許出願公開第２０１８／０２１６１０８号の配列番号１～１５６５；およびＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１７／１９２６７９の配列番号１～２４３２から選択される配列を有し、これらの配列は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。

一部の態様では、さらなる治療剤のうち少なくとも１つは、化学療法剤（例えば、細胞傷害剤またはトリヌクレオチドリピート伸長障害の処置において有用な他の化学化合物）である。

一部の態様では、さらなる治療剤のうち少なくとも１つは、非薬物処置である治療剤であり得る。例えば、さらなる治療剤のうち少なくとも１つは、理学療法である。

本明細書に記載される組合せ態様のいずれかでは、２つまたはそれよりも多くの治療剤が、同時に、またはいずれかの順序で順次的に投与される。例えば、第１の治療剤は、さらなる治療剤のうち１つまたは複数の直前または直後に、あるいはさらなる治療剤のうち１つまたは複数の前または後、最大で１時間まで、最大で２時間まで、最大で３時間まで、最大で４時間まで、最大で５時間まで、最大で６時間まで、最大で７時間まで、最大で８時間まで、最大で９時間まで、最大で１０時間まで、最大で１１時間まで、最大で１２時間まで、最大で１３時間まで、最大で１４時間まで、最大で１６時間まで、最大で１７時間まで、最大で１８時間まで、最大で１９時間まで、最大で２０時間まで、最大で２１時間まで、最大で２２時間まで、最大で２３時間まで、最大で２４時間まで、または最大で１～７、１～１４、１～２１もしくは１～３０日までに、投与され得る。

Ｖ．医薬組成物
本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、ｉｎｖｉｖｏ投与に適切な生物学的に適合性の形態の、ヒト対象への投与のための医薬組成物へと製剤化される。

本明細書に記載される化合物は、遊離塩基の形態で、塩、溶媒和物の形態で、プロドラッグとして、使用され得る。全ての形態が、本明細書に記載される方法の範囲内である。本明細書に記載される方法によれば、記載されるオリゴヌクレオチドまたはその塩、溶媒和物もしくはプロドラッグは、当業者に理解されるように、選択された投与経路に依存して、種々の形態で患者に投与され得る。本明細書に記載される化合物は、例えば、経口、非経口、くも膜下腔内、側脳室内、実質内、頬側、舌下、経鼻、直腸、パッチ、ポンプまたは経皮投与、およびしかるべく製剤化された医薬組成物によって、投与され得る。非経口投与には、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経上皮、経鼻、肺内、くも膜下腔内、側脳室内、実質内、直腸および外用様式の投与が含まれる。非経口投与は、選択された期間にわたる持続注入によるものであり得る。

本明細書に記載される化合物は、例えば、不活性な希釈剤もしくは吸収可能な食用担体と共に経口投与され得、または硬質もしくは軟質シェルのゼラチンカプセル中に封入され得、または錠剤へと圧縮され得、または食品もしくは食餌と共に直接的に取り込まれ得る。経口治療投与のために、本明細書に記載される化合物は、賦形剤と共に取り込まれ得、摂取可能な錠剤、頬側錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁物、シロップおよびウエハの形態で使用され得る。本明細書に記載される化合物は、非経口投与され得る。本明細書に記載される化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中で調製され得る。分散物は、アルコールありまたはなしの、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯ、およびそれらの混合物中で、ならびに油中で調製され得る。貯蔵および使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための防腐剤を含み得る。適切な製剤の選択および調製のための従来の手順および成分は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences (2012, 22nd ed.)およびThe United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 41 NF 36), published in 2018に記載されている。注射可能な使用に適切な医薬形態には、無菌の水性溶液または分散物、および無菌の注射可能な溶液もしくは分散物の即座の調製のための無菌粉末が含まれる。全ての場合において、形態は、無菌でなければならず、シリンジを介して容易に投与され得る程度まで流動的でなければならない。経鼻投与のための組成物は、エアロゾル、ドロップ、ゲルおよび粉末として簡便に製剤化され得る。エアロゾル製剤には、典型的には、生理学的に許容される水性または非水性溶媒中の活性物質の溶液または微細な懸濁物が含まれ、微粒化デバイスとの使用のためのカートリッジまたはリフィルの形態を取り得る密封容器中に、無菌形態の単一用量または複数用量で通常は提示される。あるいは、密封容器は、使用後の処分のために意図された、計測弁が装着された単一用量経鼻インヘラーまたはエアロゾルディスペンサーなどの単位分配デバイスであり得る。投薬形態が、エアロゾルディスペンサーを含む場合、それは、圧縮ガス、例えば圧縮空気、または有機噴霧剤、例えばフルオロクロロ炭化水素であり得る噴霧剤を含む。エアロゾル投薬形態は、ポンプ－アトマイザーの形態を取り得る。頬側または舌下投与に適切な組成物には、錠剤、ロゼンジおよびトローチ剤（pastille）が含まれ、ここで、活性成分は、糖、アカシア、トラガント、ゼラチンおよびグリセリンなどの担体を用いて製剤化される。直腸投与のための組成物は、簡便には、ココアバターなどの従来の坐剤基剤を含む坐剤の形態である。

本明細書に記載される化合物は、本明細書で留意されるように、動物、例えば、ヒトに、単独でまたは薬学的に許容される担体と組み合わせて投与され得、その割合は、化合物の溶解度および化学的性質、選択された投与経路、ならびに標準的な医薬実務によって決定される。

ＶＩ．投薬量
本明細書に記載される組成物（例えば、オリゴヌクレオチドを含む組成物）の投薬量は、多くの因子、例えば、化合物の薬力学的特性；投与様式；レシピエントの年齢、健康状態および体重；症状の性質および程度；処置の頻度、および存在する場合には同時発生的処置の型；ならびに処置される動物における化合物のクリアランス速度に依存して変動し得る。本明細書に記載される組成物は、臨床応答に依存して、必要に応じて調整され得る適切な投薬量で最初に投与され得る。一部の態様では、組成物（例えば、オリゴヌクレオチドを含む組成物）の投薬量は、予防有効量または治療有効量である。

ＶＩＩ．キット
（ａ）本明細書に記載される細胞または対象におけるＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させるオリゴヌクレオチド薬剤を含む医薬組成物、ならびに（ｂ）本明細書に記載される方法のいずれかを実施するための使用説明書を伴う添付文書、を含むキットが企図される。一部の態様では、キットは、（ａ）本明細書に記載される細胞または対象におけるＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させるオリゴヌクレオチド薬剤を含む医薬組成物、（ｂ）さらなる治療剤、ならびに（ｃ）本明細書に記載される方法のいずれかを実施するための使用説明書を伴う添付文書、を含む。

（実施例１）
アンチセンスオリゴヌクレオチドの設計および選択
標的転写物の識別および選択：標的転写物選択およびオフターゲットスコアリング（以下）は、２０１８年１１月２１日にＮＣＢＩからダウンロードしたＮＣＢＩＲｅｆＳｅｑ配列を利用した。遺伝子の大多数について「ＸＭ」予測されたモデルのみを有するカニクイザルを除き、実験的に検証された「ＮＭ」転写物モデルを使用した。完全にマッピングされた内部エクソンを含む最も長いヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルのＭＳＨ３転写物を選択した（ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルについて、それぞれ配列番号１、３、４および５、配列番号２は、タンパク質配列である）。

２０マーオリゴヌクレオチド配列の選択：転写物につき、全てアンチセンスの２０マーサブ配列を生成した。本発明者らが決定した以下の熱力学的および物理的特徴を満たす候補アンチセンスオリゴヌクレオチド（「ＡＳＯ」）を選択した：３０～６５℃の、ＡＳＯ：標的二重鎖の予測された融解温度（「Ｔ_ｍ」）、ヘアピンの予測された融解温度（「Ｔ_ヘアピン」）＜３５℃、ホモポリマー形成の予測された融解温度（「Ｔ_ホモ」）＜２５℃、２０～６０％のＧＣ含量、４またはそれよりも長いＧホモポリマーなし、および６またはそれよりも長いＡ、ＴまたはＣホモポリマーなし。これらの選択されたまたは「好ましい」オリゴヌクレオチドを、特異性についてさらに評価した（オフターゲットスコアリング、以下）。

オフターゲットスコアリング：好ましいＡＳＯの特異性を、１０００のＥ値カットオフと共にＦＡＳＴＡアルゴリズムを使用して、全てのスプライシングされていないＲｅｆＳｅｑ転写物（ヒト、マウスおよびラットについては「ＮＭ」モデル；カニクイザルについては「ＮＭ」および「ＸＭ」モデル）に対するアラインメントを介して評価した。各ＡＳＯと各転写物との間のミスマッチの数（種による）を集計した。各種における各ＡＳＯについての「オフターゲットスコア」を、ＭＳＨ３遺伝子によってコードされる転写物以外の任意の転写物へのミスマッチの最小の数として計算した。

スクリーニングのためのＡＳＯの選択：４８０個の好ましいＡＳＯのセットを、以下のように、特異性およびＡＳＯ：ｍＲＮＡ（標的）ハイブリダイゼーションエネルギー最大化情報の両方に従って、スクリーニングのために選択した。全ての候補ＡＳＯを、Xu and Mathews (Methods Mol Biol. 1490:15-34 (2016))に従って、予測された標的ｍＲＮＡ二次構造とのハイブリダイゼーションのデルタＧ（ΔＧ^全体）について評価した。次に、ＡＳＯの２つのサブセットを選択した：第１に、ヒト、カニクイザルおよびマウス標的転写物とマッチした６９個のＡＳＯは、３つの種において少なくとも１のオフターゲットスコアを有し、負のΔＧ^{ｏｖｅｒａｌｌ}を有した；第２に、ヒトおよびカニクイザル標的転写物とマッチした４１１個のＡＳＯは、両方の種において少なくとも２のオフターゲットスコアを有し、ΔＧ^全体は、－９．５℃未満であった。

各ＡＳＯの配列、ヒト転写物中の位置、他の種および種特異的オフターゲットスコアにおける保存は、表２に与えられる。「ＮＣ」と示される場合、ＡＳＯは、その種においてＭＳＨ３遺伝子とマッチせず、したがって、オフターゲットスコアは生成しなかった。

ＡＳＯを、１～５および１６～２０位のリボヌクレオチドならびに６～１５位のデオキシリボヌクレオチドを有し、以下の一般構造を有する５－１０－５「隣接配列－ＤＮＡコア配列－隣接配列」アンチセンスオリゴヌクレオチドとして合成した：
５’－ＮｍｓＮｍｓＮｍｓＮｍｓＮｍｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｓＮｍｓＮｍｓＮｍｓＮｍｓＮｍ－３’
式中、
・Ｎｍ：２’－ＭＯＥ残基（５メチル－２’－ＭＯＥ－Ｃおよび５メチル－２’－ＭＯＥ－Ｕが含まれる）
・Ｎ：ＤＮＡ／ＲＮＡ残基
・ｓ：ホスホロチオエート（骨格は、完全にホスホロチオエート改変されている）
・ＤＮＡコア（６～１５位）内の全ての「Ｃ」は、５’－メチル－２’－ＭＯＥ－ｄＣである
・１～５または１６～２０位の全ての「Ｔ」は、５’－メチル－２’－ＭＯＥ－Ｕである。
２ｎＭおよび２０ｎＭにおける一次スクリーニングのために、脱塩オリゴヌクレオチドを使用した。オリゴヌクレオチドのサブセットの詳細な特徴付けのために、オリゴヌクレオチドを、ＨＰＬＣによってさらに精製した。

（実施例２）
ＭＳＨ３のアンチセンス阻害
ＭＳＨ３の阻害またはノックダウンは、細胞に基づくアッセイを使用して実施することができる。例えば、製造業者の使用説明書に従ってｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などのトランスフェクション試薬を使用して、少なくとも５つの異なる用量レベルを使用する、上記実施例１において識別されたＭＳＨ３を標的化するオリゴヌクレオチドによる、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３もしくはＨｅｌａまたは別の入手可能な哺乳動物細胞系。細胞を、ｍＲＮＡまたはタンパク質分析のいずれかのために、トランスフェクションの７日後まで、複数の時点で回収する。ｍＲＮＡおよびタンパク質のノックダウンを、以前に記載された標準的な分子生物学技術（例えば、Drouet et al., 2014, PLOS One 9(6): e99341に記載されるものを参照のこと）を使用して、それぞれ、ＲＴ－ｑＰＣＲまたはウエスタンブロット分析によって決定する。異なるオリゴヌクレオチドレベルにおけるＭＳＨ３ｍＲＮＡおよびタンパク質の相対的レベルを、モックオリゴヌクレオチド対照と比較する。最も強力なオリゴヌクレオチド（例えば、対照と比較した場合に、タンパク質レベルにおける少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％またはそれよりも大きい低下が可能なもの）は、例えば、以下の実施例に記載される引き続く研究のために選択する。
ヒト細胞系
ＨｅＬａ細胞を、ＡＴＣＣ（ＬＧＣＳｔａｎｄａｒｄｓ、Ｗｅｓｅｌ、Ｇｅｒｍａｎｙと連携したＡＴＣＣ、ｃａｔ．＃ＡＴＣＣ－ＣＲＭ－ＣＣＬ－２）から得、加湿インキュベーター中５％ＣＯ_２を有する雰囲気中で３７℃で、１０％胎仔ウシ血清（１２４８Ｄ、ＢｉｏｃｈｒｏｍＧｍｂＨ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）および１００Ｕ／ｍｌペニシリン／１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ａ２２１３、ＢｉｏｃｈｒｏｍＧｍｂＨ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むように補充したＨＡＭ’ｓＦ１２（＃ＦＧ０８１５、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中で培養した。ＡＳＯによるＨｅＬａ細胞のトランスフェクションのために、細胞を、９６ウェル組織培養プレート（＃６５５１８０、ＧＢＯ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中に１５，０００細胞／ウェル
の密度で播種した。
トランスフェクション
ＨｅＬａ細胞では、ＡＳＯのトランスフェクションを、１ウェル当たり０．２５μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００を用いた逆トランスフェクションについての製造業者の使用説明書に従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施した。
二重用量スクリーニングを、非特異的対照およびモックトランスフェクションとして、ＡＨＳＡ１を標的化する２つのＡＳＯ（１つのＭＯＥ－ＡＳＯおよび１つの２’ｏＭｅ－ＡＳＯ）を用いて、それぞれ２０ｎＭおよび２ｎＭで四連でＡＳＯを用いて実施した。用量－応答実験を、２０ｎＭで始めて５～６回の希釈ステップで約１５～３２ｐＭまで、四連でトランスフェクトした５つの濃度でＡＳＯを用いて実施した。モックトランスフェクトされた細胞は、用量－応答曲線（ＤＲＣ）実験において対照として機能した。
分析および定量化
ＡＳＯとの２４時間のインキュベーション後、培地を除去し、細胞を、１５０μｌのＭｅｄｉｕｍ－ＬｙｓｉｓＭｉｘｔｕｒｅ（１体積の溶解混合物、２体積の細胞培養培地）中で溶解させ、次いで、５３℃で３０分間インキュベートした。ｂＤＮＡアッセイを、製造業者の使用説明書に従って実施した。ルミネッセンスを、ＲＴで暗中３０分間のインキュベーション後に、１４２０ＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅＣｏｕｎｔｅｒ（ＷＡＬＬＡＣＶＩＣＴＯＲＬｉｇｈｔ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｒｏｄｇａｕ－Ｊｕｇｅｓｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して読み取った。
２つのＡｈｓａ１－ＡＳＯ（１つの２’－ＯＭｅおよび１つのＭＯＥ改変）は、それぞれの標的ｍＲＮＡ発現についての非特異的対照として、かつＡｈｓａ１ｍＲＮＡレベルに関するトランスフェクション効率を分析するための陽性対照として、同時に機能した。Ａｈｓａ１プローブセットとのハイブリダイゼーションによって、モックトランスフェクトされたウェルは、Ａｈｓａ１ｍＲＮＡレベルについての対照として機能した。二重用量スクリーニングにおける各９６ウェルプレートおよび両方の用量についてのトランスフェクション効率を、Ａｈｓａ１－ＡＳＯを用いたＡｈｓａ１レベル（ＧａｐＤＨに対して標準化した）を、モック対照を用いて得たＡｈｓａ１レベルに関連付けることによって計算した。
各ウェルについて、標的ｍＲＮＡレベルを、それぞれのＧＡＰＤＨｍＲＮＡレベルに対して標準化した。所与のＡＳＯの活性を、対照ウェルにわたって平均した標的ｍＲＮＡ濃度（ＧＡＰＤＨｍＲＮＡに対して標準化した）と比較した、処置細胞におけるそれぞれの標的のパーセントｍＲＮＡ濃度（ＧＡＰＤＨｍＲＮＡに対して標準化した）として表現した。
ＭＳＨ３を標的化する約４８０個のＡＳＯの二重用量スクリーニングの結果、ならびに二重用量スクリーニングからのおよそ４２個の陽性ＡＳＯのＩＣ_２０、ＩＣ_５０およびＩＣ_８０値は、以下の表３に示される。

（実施例３）
低減された伸長についてのｉｎｖｉｔｒｏスクリーニング
ＤＮＡトリプレットリピートの伸長は、患者由来の細胞系およびＤＮＡ損傷剤を使用してｉｎｖｉｔｒｏで再現することができる。ハンチントン（ＧＭ０４２８１、ＧＭ０４６８７およびＧＭ０４２１２）またはフリードライヒ運動失調症患者（ＧＭ０３８１６およびＧＭ０２１５３）または筋強直性ジストロフィー１（ＧＭ０４６０２、ＧＭ０３９８７およびＧＭ０３９８９）由来のヒト線維芽細胞を、ＣｏｒｉｅｌｌＣｅｌｌＲｅｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓから購入し、製造業者の使用説明書に従って培地中で維持する（Kovtum et al., 2007 Nature, 447(7143): 447-452：Li et al., 2016 Biopreservation and Biobanking 14(4):324-29；Zhang et al., 2013 Mol Ther 22(2): 312-320）。ＣＡＧ－リピート伸長をｉｎｖｉｔｒｏで誘導するために、線維芽細胞を、酸化剤、例えば、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２）、クロム酸カリウム（Ｋ_２ＣｒＯ_４）または臭素酸カリウム（ＫＢｒＯ_３）で、最大で２時間にわたって処置する（Kovtum et al., ibid）。細胞を洗浄し、培地を交換して、細胞を３日間回復させる。処置を最大でもう２回反復し、その後、細胞を回収し、ＤＮＡを単離する。ＣＡＧリピート長さを、以下に記載される方法を使用して決定する。

ＤＮＡトリプレットリピートの伸長は、患者由来の細胞系を使用してｉｎｖｉｔｒｏで再現することができる。ハンチントン患者由来のヒト線維芽細胞（ＣＳ０９ｉＨＤ－１０９ｎ１）に由来する誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を、Ｃｅｄａｒｓ－ＳｉｎａｉＲＭＩＩｎｄｕｃｅｄＰｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔＳｔｅｍＣｅｌｌＣｏｒｅから購入し、製造業者の推奨に従って維持する（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｅｄａｒｓ－ｓｉｎａｉ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｄａｍ／ｃｅｄａｒｓ－ｓｉｎａｉ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｂｉｏｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ／ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ－ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ－ｆｏｒ－ｈａｎｄｌｉｎｇ－ｉｐｓｃｓｖ１．ｐｄｆ）。１０９個のＣＡＧを有するｉＰＳＣ系からのＣＡＧリピートは、分裂中のｉＰＳ細胞において、７０日間にわたって４つのＣＡＧリピートの平均伸長で、ＣＡＧリピートサイズにおける増加を経時的に示す（Goold et al., 2019 Human Molecular Genetics Feb 15; 28(4): 650-661）。

ＣＳ０９ｉＨＤ－１０９ｎ１ｉＰＳＣを、標的ｍＲＮＡの持続的ノックダウンのためにＬＮＰ製剤化ｓｉＲＮＡまたはＡＳＯのいずれかで処置し、ＣＡＧリピート伸長を、以下に記載されるＤＮＡ断片分析によって決定する。ｓｉＲＮＡまたはＡＳＯを、３～１５日毎に変動する濃度で細胞に添加し、ｍＲＮＡのノックダウンを、標準的な分子生物学技術を使用するＲＴ－ｑＰＣＲによって決定する。ＤＮＡおよびｍＲＮＡを、ｔ＝０、１４日、２８日、４２日、５６日および８０日において、標準的な技術に従って細胞から単離する。線は、線形回帰ベストフィットを示す。処置と対照との間での伸長における差異を、線形反復測定モデルに従い、Ｔｕｋｅｙの事後検定に従って各時点において比較する。

（実施例４）
ゲノムＤＮＡ抽出およびＳｍａｌｌＰｏｏｌ－ＰＣＲ（ｓｐ－ＰＣＲ）分析によるＣＡＧリピート長さの定量化

ゲノムＤＮＡを、標準的なプロテイナーゼＫ消化を使用して精製し、製造業者の使用説明書に従ってＤＮＡｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して抽出する。ＣＡＧリピート長さを、以前に記載されたｓｍａｌｌｐｏｏｌ－ＰＣＲ分析によって決定する（Mario Gomes-Pereira and Darren Monckton, 2017, Front Cell Neuro 11:153）。簡潔に述べると、ＤＮＡをＨｉｎｄＩＩＩで消化し、１～６ｐｇ／μｌの間の最終濃度に希釈し、およそ１０ｐｇを、引き続くＰＣＲ反応において使用した。ヒトＨＴＴのエクソン１に隣接するプライマーを使用して、ＣＡＧ対立遺伝子を増幅し、ＰＣＲ産物を電気泳動によって分解する。引き続いて、サザンブロットハイブリダイゼーションを実施し、ＣＡＧ対立遺伝子を、オートラジオグラフィーによって観察する、またはエチジウムブロマイド染色によって可視化する。ＣＡＧ長さは、ＭｉＳｅＱまたは適切な機械で配列決定することによって直接的に測定することができる。対照と比較した種々の処置群におけるＣＡＧリピート数の変化を、単純な記述統計学（例えば、平均±標準偏差）を使用して計算する。

ゲノムＤＮＡ抽出およびＤＮＡ断片分析によるＣＡＧリピート長さの定量化
ゲノムＤＮＡを、製造業者の使用説明書に従ってＤＮＡｅａｓｙＢｌｏｏｄａｎｄＴｉｓｓｕｅＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製する。ＤＮＡを、ＱｕｂｉｔｄｓＤＮＡアッセイ（ＴｈｅｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって定量化し、ＣＡＧリピート長さを、Ｌａｒａｇｅｎ（ＣｕｌｖｅｒＣｉｔｙ、ＣＡ）による断片分析によって決定する。

（実施例５）
マウス研究
ＨＤマウスモデルにおける自然経過研究：
ＨＤマウスＲ６／２系は、およそ１２０個のＣＡＧリピート伸長を保有するヒトＨＤ遺伝子（ＨＴＴ）の５’末端についてトランスジェニックである。ＨＴＴは、普遍的に発現される。トランスジェニックマウスは、舞踏病様運動、不随意常同運動、振戦およびてんかん様発作、ならびに異常な発声を含む非運動障害構成要素を含むＨＤの病理学的特色の多くを模倣する、進行性の神経学的表現型を示す。彼らは頻繁に排尿し、疾患の過程を通じて、体重および筋肉量の喪失を示す。神経学的に、これらのマウスは、ハンチンチンタンパク質およびユビキチンタンパク質の両方を含む神経核内封入体（ＮＩＩ）を発達させる。以前には未知であったこれらのＮＩＩは、ＨＤ患者において引き続いて識別された。Ｒ６／２マウスにおけるＨＤ症状の発症の開始齢は、９週と１１週との間にあることが報告されている（Mangiarini et al., 1996 Cell 87: 493-506）。

体細胞伸長は、Ｒ６／２マウスの線条体、皮質および肝臓において報告された。体細胞不安定性は、構成的長さが長くなるにつれて増加した（Larson et al, Neurobiology of Disease 76 (2015) 98-111）。１２０個のＣＡＧリピートを有するＲ６／２マウスにおける自然経過研究を実施した。彼らの遺伝子型およびＣＡＧ伸長の長さを決定した。４、８、１２および１６週齢のＲ６／２マウス（１つの週齢群当たり、４匹の雄性マウスおよび４匹の雌性マウス）を屠殺した。線条体、小脳、皮質、肝臓、腎臓、心臓、脾臓、肺、十二指腸、結腸、四頭筋、ＣＳＦおよび血漿を収集し、液体窒素中で瞬間凍結した。ゲノムＤＮＡを抽出し、ＣＡＧリピートの長さを測定し、不安定性指数を、Lee et al. BMC Systems Biology 2010, 4:29に従って、線条体、小脳、皮質、肝臓および腎臓から計算した。１２および１６週齢において、線条体は、不安定性指数によって測定した場合、体細胞伸長の有意な増加を示した（^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、一元配置ＡＮＯＶＡ）（図１）。Ｒ６／２マウス小脳では、全ての齢にわたって、体細胞伸長における変化は観察されなかった（図２）。

ＨＤ、ＦＡおよびＤＭ１を含むトリヌクレオチドリピート伸長疾患の特色の多くを再現するマウスモデルは、供給業者および学術機関から容易に入手可能である（Polyglutamine Disorders, Advances in Experimental Medicine and Biology, Vol 1049, 2018: Editors Clevio Nobrega and Lois Pereira de Almeida, Springer）。全てのマウス実験を、地域のＩＡＣＵＣガイドラインに従って実施する。異なる罹患マウスモデルの３つの例、および体細胞伸長についてＭＳＨ３に対する薬理学的介入の有用性を調査するためにそれらがどのように使用できるかは、以下に含まれる。

ハンチントン研究では、疾患に関与する根底にある病理学的機構を調査するために、いくつかのトランスジェニックおよびノックインマウスモデルが生成された。例えば、Ｒ６／２トランスジェニックマウスは、１４４コピーのＣＡＧリピートを含むヒトＨＴＴの約１．９ｋｂの導入遺伝子を含むが（Mangiarini et al., 1996 Cell 87: 493-506）、ＨｄｈＱ１１１モデルは、マウスＨＴＴエクソン１を、１１１コピーのＣＡＧリピートを含むヒトエクソン１で置き換えることによって生成された（Wheeler et al., 2000 Hum Mol Genet 9:503-513）。Ｒ６／２モデルおよびＨｄｈＱ１１１モデルは共に、運動機能障害および行動機能障害、神経喪失、ならびに線条体におけるＣＡＧリピートの伸長を含む、ヒトＨＤの特色の多くを再現する（Pouladi et al., 2013, Nature Reviews Neuroscience 14: 708-721；Mangiarini et al., 1997 Nature Genet 15: 197-200；Wheeler et al., Hum Mol Genet 8: 115-122）。

Ｒ６／２マウスを、離乳時の尾部小片に由来するＤＮＡを使用して遺伝子型決定し、ＣＡＧリピートサイズを決定する。マウスを、離乳時に４週齢において群（ｎ＝１２／群）へとランダム化し、ＰＢＳ（対照）または最大で５００μｇ用量のＭＳＨ３を標的化するオリゴのいずれかの月１回の（４週目および８週目の）ＩＣＶ注射で投薬する。ＭＳＨ３の異なる領域を標的化する一連のオリゴを試験して、最も有効なオリゴ配列をｉｎｖｉｖｏで識別することができる。１２週齢の時点で、マウスを安楽死させ、分析のために組織を抽出する。組織のリストは、線条体、皮質、小脳および肝臓を含むがこれらに限定されない。ゲノムＤＮＡを抽出し、ＣＡＧリピートの長さを、以下に記載されるように測定する。ＣＳＦおよび血漿を、バイオマーカー分析のために収集する。ＨＤのさらなる適切なマウスモデルを考慮することができる。

フリードライヒ運動失調症では、病理を理解するために、ＹＧ８ＦＲＤＡトランスジェニックマウスモデルが一般に使用される（Al-Mahdawi et al., 2006 Genomics 88(5)580-590；Bourn et al., 2012 PLOS One 7(10); e47085）。このモデルは、ヌルＦＲＤＡマウスの背景におけるヒトＹＡＣトランスジェニック含有の挿入を介して生成された。ＹＧ８モデルは、軽度の運動欠損のみを伴った、神経組織におけるＧＡＡトリプレットリピート伸長の体細胞伸長を実証する。ＹＧ８ＦＲＤＡマウスを、離乳時の尾部小片に由来するＤＮＡを使用して遺伝子型決定し、方法を使用してＣＡＧリピートサイズを決定する。ＭＳＨ３が疾患対立遺伝子の体細胞伸長において役割を果たすかどうかを決定するために、ヘミ接合性ＹＧ８ＦＲＤＡ動物に、上で識別したＭＳＨ３のノックダウンを標的化するオリゴをＩＣＶ投与する。

およそ２ヶ月後、動物を安楽死させ、分子分析のために組織を収集する。適切な組織は、心臓、四頭筋、後根神経節（ＤＲＧ）、小脳、腎臓および肝臓である。ゲノムＤＮＡを抽出し、ＣＡＧリピートの長さを、実施例４に上記したように測定する。

筋強直性ジストロフィーでは、ＤＭ３００－３２８トランスジェニックマウスモデルが、ＤＭ１の背後の病理を調査するために適切である。このマウスモデルは、３００個を超えるＣＴＧリピートを含む大きいヒトゲノム配列（約４５ｋｂ）を有し、ヒトＤＭ１において観察される体細胞伸長および変性性筋肉変化の両方を示す（Seznec et al., 2000；Tome et al., 2009 PLOS Genetics 5(5): e1000482；Pandey et al., 2015 J Pharmacol Exp Ther 355:329-340）。ＤＭ３００－３２８マウスを、離乳時の尾部小片に由来するＤＮＡを使用して遺伝子型決定し、ＣＡＧリピートサイズを決定する。ＭＳＨ３が筋強直性ジストロフィーにおける疾患対立遺伝子の体細胞伸長において役割を果たすかどうかを決定するために、ＤＭ３００－３２８トランスジェニック動物に、皮下注射（ｓｃ）、腹腔内（ｉｐ）または静脈内尾注射（ｉｖ）のいずれかによって、ＭＳＨ３のノックダウンを標的化するＡＳＯを投与する。マウスに、最大８週間の処置にわたって、週に最大で２回、ＡＳＯを投与する。動物を複数の時点で安楽死させ、分子分析のために組織を収集する。適切な組織は、四頭筋、心臓、横隔膜、皮質、小脳、精子、腎臓および肝臓である。ゲノムＤＮＡを抽出し、ＣＡＧリピートの長さを測定し、並行対照と比較する。

ハンチントン病についてのＨｄｈＱ１１１マウスモデルは、ヘテロ接合性ノックイン系であり、この系では、ハンチンチン遺伝子（即ち、ＨＴＴまたはハンチントン病遺伝子）の１つの対立遺伝子上のエクソン１の大部分およびイントロン１の一部は、約１１１個のＣＡＧリピートを含むヒトＤＮＡで置き換えられている。この実施例では、ＭＳＨ３活性またはレベルをノックダウンするＡＳＯを投与する。処置期間の後、処置されたまたは未処置のマウス由来の脳組織を単離し（例えば、線条体組織）、以前に記載されたようにｑＲＴ－ＰＣＲを使用して分析して、ＭＳＨ３のＲＮＡレベルを決定する。ハンチンチン遺伝子リピート分析を、ノックイン対立遺伝子からのＨＴＴＣＡＧリピートは増幅するが、マウス配列（即ち、野生型対立遺伝子）は増幅しないヒト特異的ＰＣＲアッセイを使用して、処置期間後のマウス組織（例えば、線条体組織）を使用して実施する。このプロトコールでは、フォワードプライマーは、（例えば、Pinto RM, Dragileva E, Kirby A, et al. Mismatch repair genes MLH1 and MSH3 modify CAG instability in Huntington's disease mice: genome-wide and candidate approaches. PLoS Genet. 2013;9(10):e1003930.などに以前に記載されたように６－ＦＡＭで）蛍光標識され、産物は、ＣＡＧリピートサイズ分布トレースを生成するために、内部サイズ標準に対する比較を用いて分析器を使用して分解され得る。リピートサイズを、対照組織（例えば、マウスの尾組織）からおよび影響を受けた組織（例えば、脳線条体組織または脳皮質組織）からの、最大の強度を有するピークから決定する。免疫組織化学を、パラフィン包埋されたまたは他の方法で調製された脳組織の切片に対してポリクローナル抗ハンチンチン抗体（例えば、ＥＭ４８）を用いて実施し、標準化染色指数を使用して定量化して、核染色強度および染色された核の数の両方を捕捉することができる。影響を受けた組織におけるリピートサイズの減少は、ＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる薬剤が、ハンチントン病における毒性および／または欠損遺伝子産物の原因となるリピートを減少させることが可能であることを示している。

他の態様
本明細書で言及される全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が具体的かつ個々にその全体が参照により本明細書に組み込まれると示されるのと同じ程度まで、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。本出願中の用語が参照により本明細書に組み込まれる文書において異なって定義されていることが見出される場合、本明細書で提供される定義が、その用語の定義として機能する。

本発明は、その具体的な態様と併せて記載されてきたが、本発明がさらなる改変が可能であり、本出願が、本発明の原理に一般に従う、本発明が属する分野内で公知のまたは慣習的な実務の範囲内に入りかつ本明細書で上で示される本質的な特色に適用され得る本開示のかかる逸脱を含む、本発明の全ての変形形態、使用または適応をカバーする意図であり、特許請求の範囲の範囲に従うことが理解される。

本明細書に記載される種々の態様に加えて、本開示は、Ｅ１からＥ９０までの番号を振った以下の態様を含む。態様のこのリストは、例示的なリストとして提示されるのであって、本出願は、これらの特定の態様に限定されない。

Ｅ１．１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む、オリゴヌクレオチド。

Ｅ２．前記オリゴヌクレオチドが、
（ａ）連結されたデオキシリボヌクレオシドを含むＤＮＡコア配列；
（ｂ）連結されたヌクレオシドを含む５’隣接配列；および
（ｃ）連結されたヌクレオシドを含む３’隣接配列
を含み、
前記ＤＮＡコアが、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含み、前記５’隣接配列と前記３’隣接配列との間に位置付けられ；前記５’隣接配列および前記３’隣接配列が各々、少なくとも２つの連結されたヌクレオシドを含み；各隣接配列の少なくとも１つのヌクレオシドが、代替えのヌクレオシドを含む、Ｅ１に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３．細胞におけるヒトＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む、オリゴヌクレオチド。

Ｅ４．前記オリゴヌクレオチドが、
（ａ）連結されたデオキシリボヌクレオシドを含むＤＮＡコア；
（ｂ）連結されたヌクレオシドを含む５’隣接配列；および
（ｃ）連結されたヌクレオシドを含む３’隣接配列
を含み、
前記ＤＮＡコアが、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含み、前記５’隣接配列と前記３’隣接配列との間に位置付けられ；前記５’隣接配列および前記３’隣接配列が各々、少なくとも２つの連結されたヌクレオシドを含み；各隣接配列の少なくとも１つのヌクレオシドが、代替えのヌクレオシドを含む、Ｅ３に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ５．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも９０％の相補性を有する、Ｅ１からＥ４のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ６．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも９５％の相補性を有する、Ｅ１からＥ５のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ７．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５５～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９０３、９１２～９７４、９８４～１０４７、１０５４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１７６８～１８６６、２０２９～２０６３、２０８７～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３３０、２３７１～２４１０、２４３２～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７３、３１３２３２４５、３２６６～３３０６、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７４～４１０１または４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ８．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５９～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３２９、２３７１～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７２、３１３２～３２４５、３２６６～３３０３、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７６～４１０１または４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、Ｅ１からＥ７のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ９．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９６、３５９～３８５、４１３～４６２、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９６、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６５～２２９３、２３７８～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１２、２７２７～２７５３、２７６７～２９１９、２９３４～３０００、３０４６～３０７１、３１４４～３１８３、３２２０～３２４５、３３９７～３４８４、３５３４～３５７５、３５９１～３６１６、３９０１～３９３１または４２８１～４３０６位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１０．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の４３５～４６２、５５９～５８４、７６３～８０８、８７６～９０２、９３１～９５８、１００１～１０８３、１１１４～１１７９、１２９４～１３３７、１５４４～１５７８、１８３５～１８６３、２０３１～２０５６、２１４４～２１６９、２５４３～２５７７、２５９０～２６１５、２６２１～２６４７、２６８５～２７１１、２７６９～２７９５または２８１６～２８６８位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１１．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の８７６～９０２、９３０～９５８、１０５６～１０８１、１１１４～１１３９、１１５４～１１７９、１３１０～１３３７、１５４６～１５７１、１８３６～１８６２、２１４１～２１９９、２２６７～２２９２、２５４０～２５８０、２６２０～２６４７、２６８６～２７１１、２７６９～２８６８、２９３９～２９７６、３１４４～３１６９または３３９９～３４２４位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１２．少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の９８４～１０２１、１４６７～１４９３、１７２２～１７４７、１７６７～１８０２、１８３３～１８６１、２３８５～２４１０、２５５４～２５８１、２８１６～２８４５、２８６１～２９２０または３１５１～３１８３位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１３．配列番号６～２５４５のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１４．配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２または２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１５．配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０または２４６２～２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１６．配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０または２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１７．配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０または１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１８．配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１または２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ１９．配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５または１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２０．前記オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つからなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２１．配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２または２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２２．配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０または２４６２～２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２３．配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０または２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２４．配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０または１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２５．配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１または２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２６．配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５または１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、Ｅ１からＥ６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２７．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２８．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ２９．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３０．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３１．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭにおいて、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３２．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３３．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３４．細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す、Ｅ１からＥ２６のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３５．少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結を含む、Ｅ１からＥ３４のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３６．前記少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である、Ｅ３５に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３７．前記少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結が、２’－アルコキシヌクレオシド間連結である、Ｅ３５に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３８．前記少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結が、アルキルホスフェートヌクレオシド間連結である、Ｅ３５に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ３９．少なくとも１つの代替えの核酸塩基を含む、Ｅ１からＥ３８のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４０．前記代替えの核酸塩基が、５’－メチルシトシン、プソイドウリジンまたは５－メトキシウリジンである、Ｅ３９に記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４１．少なくとも１つの代替えの糖部分を含む、Ｅ１からＥ４０のいずれか一つに記載の改変されたオリゴヌクレオチド。

Ｅ４２．前記代替えの糖部分が、２’－ＯＭｅまたは二環式核酸である、Ｅ４１に記載の改変されたオリゴヌクレオチド。

Ｅ４３．一価または分岐鎖二価もしくは三価リンカーを介して前記オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端にコンジュゲートされたリガンドをさらに含む、Ｅ１からＥ４２のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４４．ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１７個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４５．ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４６．ＭＳＨ３遺伝子の１９～２３個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４７．ＭＳＨ３遺伝子の１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４８．ＭＳＨ３遺伝子の２０個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ４９．約１５～２５ヌクレオシド長である、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ５０．２０ヌクレオシド長である、Ｅ１からＥ４３のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド。

Ｅ５１．Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つまたは複数および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。

Ｅ５２．Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つまたは複数および脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子またはリポソームを含む組成物。

Ｅ５３．細胞においてＭＳＨ３の転写を阻害する方法であって、前記細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物と接触させて、前記細胞において前記ＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法。

Ｅ５４．トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置、予防またはその進行の遅延を必要とする対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、前記対象に、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。

Ｅ５５．トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別された対象の細胞においてＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる方法であって、前記細胞を、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。

Ｅ５６．細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、前記細胞を、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物と接触させるステップ、およびＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、前記細胞を維持し、それによって、前記細胞において前記ＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法。

Ｅ５７．細胞においてトリヌクレオチドリピート伸長を減少させる方法であって、前記細胞を、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。

Ｅ５８．前記細胞が対象中にある、Ｅ５６またはＥ５７に記載の方法。

Ｅ５９．前記対象がヒトである、Ｅ５４、Ｅ５５およびＥ５８のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ６０．前記細胞が、中枢神経系の細胞または筋肉細胞である、Ｅ５４からＥ５８のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ６１．前記対象が、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別されている、Ｅ５４、Ｅ５５およびＥ５８から６０のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ６２．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ポリグルタミン病である、Ｅ５４、Ｅ５５およびＥ５７から６１のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ６３．前記ポリグルタミン病が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型およびハンチントン病様２からなる群から選択される、Ｅ６２に記載の方法。

Ｅ６４．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、非ポリグルタミン病である、Ｅ５４からＥ６１のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ６５．前記非ポリグルタミン病が、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、Ｅ６４に記載の方法。

Ｅ６６．トリヌクレオチドリピート伸長障害の予防または処置における使用のための、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載の１つもしくは複数のオリゴヌクレオチド、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物。

Ｅ６７．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型、ハンチントン病様２、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、Ｅ６５に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ６８．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ハンチントン病である、Ｅ６６またはＥ６７に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ６９．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、フリードライヒ運動失調症である、Ｅ６６またはＥ６７に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ７０．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、筋強直性ジストロフィー１型である、Ｅ６６またはＥ６７に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ７１．前記改変されたオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物が、くも膜下腔内投与される、Ｅ６６からＥ７０のいずれか一つに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ７２．前記改変されたオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物が、脳室内投与される、Ｅ６６からＥ７０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ７３．筋肉内投与される、Ｅ６６からＥ７０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ７４．障害の処置、予防またはその進行の遅延を必要とする対象において障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、前記対象が、トリヌクレオチドリピート伸長障害を患っており、前記対象に、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。

Ｅ７５．さらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、Ｅ７４に記載の方法。

Ｅ７６．前記さらなる治療剤が、ハンチンチン遺伝子をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズする別のオリゴヌクレオチドである、Ｅ７５に記載の方法。

Ｅ７７．対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、前記対象に、前記対象のトリヌクレオチドリピート伸長障害の進行を遅延させるのに有効な量で、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。

Ｅ７８．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型、ハンチントン病様２、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、Ｅ７７に記載の方法。

Ｅ７９．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ハンチントン病である、Ｅ７７またはＥ７８に記載の方法。

Ｅ８０．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、フリードライヒ運動失調症である、Ｅ７７またはＥ７８に記載の方法。

Ｅ８１．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、筋強直性ジストロフィー１型である、Ｅ７７またはＥ７８に記載の方法。

Ｅ８２．さらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、Ｅ７７またはＥ７８に記載の方法。

Ｅ８３．前記さらなる治療剤が、ハンチンチン遺伝子をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズする別のオリゴヌクレオチドである、Ｅ８２に記載の方法。

Ｅ８４．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害の進行が、予測された進行と比較した場合に、少なくとも１２０日、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年またはそれよりも長く遅延される、Ｅ７７からE８３のいずれか一つに記載の方法。

Ｅ８５．対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を予防するまたはその進行を遅延させる際の使用のための、Ｅ１からＥ５０のいずれか一つに記載の１つもしくは複数のオリゴヌクレオチド、Ｅ５１に記載の医薬組成物またはＥ５２に記載の組成物。

Ｅ８６．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型、ハンチントン病様２、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、Ｅ８５に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ８７．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ハンチントン病である、Ｅ８５またはＥ８６に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ８８．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、フリードライヒ運動失調症である、Ｅ８５またはＥ８６に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ８９．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、筋強直性ジストロフィー１型である、Ｅ８５またはＥ８６に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Ｅ９０．前記トリヌクレオチドリピート伸長障害の進行が、予測された進行と比較した場合に、少なくとも１２０日、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年またはそれよりも長く遅延される、Ｅ８５からＥ８９のいずれか一つに記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。

Claims

１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む、オリゴヌクレオチド。
前記オリゴヌクレオチドが、
（ａ）連結されたデオキシリボヌクレオシドを含むＤＮＡコア配列；
（ｂ）連結されたヌクレオシドを含む５’隣接配列；および
（ｃ）連結されたヌクレオシドを含む３’隣接配列
を含み、
前記ＤＮＡコアが、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含み、前記５’隣接配列と前記３’隣接配列との間に位置付けられ；前記５’隣接配列および前記３’隣接配列が各々、少なくとも２つの連結されたヌクレオシドを含み；各隣接配列の少なくとも１つのヌクレオシドが、代替えのヌクレオシドを含む、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞におけるヒトＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための１０～３０の連結されたヌクレオシド長の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含む、オリゴヌクレオチド。
前記オリゴヌクレオチドが、
（ａ）連結されたデオキシリボヌクレオシドを含むＤＮＡコア；
（ｂ）連結されたヌクレオシドを含む５’隣接配列；および
（ｃ）連結されたヌクレオシドを含む３’隣接配列
を含み、
前記ＤＮＡコアが、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも８０％の相補性を有する少なくとも１０個の連続する核酸塩基の領域を含み、前記５’隣接配列と前記３’隣接配列との間に位置付けられ；前記５’隣接配列および前記３’隣接配列が各々、少なくとも２つの連結されたヌクレオシドを含み；各隣接配列の少なくとも１つのヌクレオシドが、代替えのヌクレオシドを含む、請求項３に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも９０％の相補性を有する、請求項１から４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、ＭＳＨ３遺伝子に対して少なくとも９５％の相補性を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５５～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９０３、９１２～９７４、９８４～１０４７、１０５４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１７６８～１８６６、２０２９～２０６３、２０８７～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３３０、２３７１～２４１０、２４３２～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７３、３１３２３２４５、３２６６～３３０６、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７４～４１０１または４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９９、３５９～３８５、３９８～４９６、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９８、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１３９２～１４１７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６２～２２９３、２３０４～２３２９、２３７１～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１３、２７２７～２７５３、２７６７～２９２０、２９３３～３０００、３０４６～３０７２、３１３２～３２４５、３２６６～３３０３、３３９７～３４８４、３５２８～３５７５、３５９１～３６１７、３７５３～３７９２、３９０１～３９３６、４０７６～４１０１または４２８１～４３１９位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の１５５～１９６、３５９～３８５、４１３～４６２、５５９～５８９、６７６～７２４、７６２～８１０、８７６～９７４、９８４～１０９６、１１１４～１１７９、１２００～１２２７、１２９４～１３３７、１４６７～１４９３、１５１７～１６３０、１６６５～１７４７、１８３４～１８６６、２０２９～２０５６、２０９３～２１９９、２２６５～２２９３、２３７８～２４１０、２４３３～２４５８、２４９４～２５２１、２５３９～２６４７、２６７９～２７１２、２７２７～２７５３、２７６７～２９１９、２９３４～３０００、３０４６～３０７１、３１４４～３１８３、３２２０～３２４５、３３９７～３４８４、３５３４～３５７５、３５９１～３６１６、３９０１～３９３１または４２８１～４３０６位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の４３５～４６２、５５９～５８４、７６３～８０８、８７６～９０２、９３１～９５８、１００１～１０８３、１１１４～１１７９、１２９４～１３３７、１５４４～１５７８、１８３５～１８６３、２０３１～２０５６、２１４４～２１６９、２５４３～２５７７、２５９０～２６１５、２６２１～２６４７、２６８５～２７１１、２７６９～２７９５または２８１６～２８６８位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の８７６～９０２、９３０～９５８、１０５６～１０８１、１１１４～１１３９、１１５４～１１７９、１３１０～１３３７、１５４６～１５７１、１８３６～１８６２、２１４１～２１９９、２２６７～２２９２、２５４０～２５８０、２６２０～２６４７、２６８６～２７１１、２７６９～２８６８、２９３９～２９７６、３１４４～３１６９または３３９９～３４２４位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１０核酸塩基の前記領域が、参照ｍＲＮＡＮＭ＿００２４３９．４の配列に対応するＭＳＨ３遺伝子に対して、前記ＭＳＨ３遺伝子の９８４～１０２１、１４６７～１４９３、１７２２～１７４７、１７６７～１８０２、１８３３～１８６１、２３８５～２４１０、２５５４～２５８１、２８１６～２８４５、２８６１～２９２０または３１５１～３１８３位のうち１つまたは複数の位置において相補的である、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号６～２５４５のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２または２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０または２４６２～２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０または２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０または１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１または２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５または１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
前記オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号６～２５４５のうちいずれか１つからなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号２０、２２～２９、３１～３２、７７～７８、８１～８２、１１５、１１７、１３０、１３２～１３４、１４４～１４５、１４７、１６７～１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８８～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４～７２５、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、９９９、１００７、１０１６～１０１７、１０１９、１０２１～１０２２、１０３６、１０４０～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２～１１７３、１２１１、１２１６、１２２２、１２３５、１２４０～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３２２、１３２８～１３２９、１３７３～１３７５、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０７～１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８９、１５９１、１６００～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３９、１６４３、１６５０～１６６０、１６６３～１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２４、１７２７～１７３１、１７４１、１７４５～１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８０１、１８５９～１８６６、１８６８～１８６９、１８９４～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１９６４～１９６６、１９６９、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４３～２１４７、２１５７～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９～２３００、２３１２～２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９５、２４１６～２４１８、２４６０、２４６２または２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号２０、２２、２５～２９、３１～３２、８１～８２、１１５、１３０、１３２～１３４、１４４、１４５、１４７、１６８、２１０、２１２～２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０５、３０９、３５１～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４５９～４６０、４７９、４８２～４９３、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４３～５５０、５５２～５６０、５６２、５８２～５８５、５８９～５９１、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７２４、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５２、８５６、８８３～８８５、８８９、８９３～８９７、９３６、９４０～９４１、９４５、９４８、９５０、９５５、９５９～９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４１～１２４２、１２４４～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５９、１２６８、１３１６、１３１８～１３１９、１３２１～１３２２、１３２８、１３７３、１３７９～１３８３、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４１、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５０～１６５５、１６５９、１６６５、１６６８～１６７５、１７１３～１７１４、１７１６～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７４７、１７５１～１７５５、１７９９～１８００、１８５９、１８６１～１８６２、１８６５～１８６６、１８６８～１８６９、１８９５～１８９６、１９０５～１９０８、１９５４、１６９４～１９６６、２０６６～２０７０、２０７５～２０７９、２１０８、２１３８、２１４４～２１４６、２１５８～２１６０、２１９３～２１９４、２２９９、２３００、２３１３、２３８５、２３８８、２３９０～２３９２、２３９４～２３９５、２４１８、２４６０または２４６２～２４６３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号２０、２５～２９、３２、８１～８２、１３０、１３３～１３４、１４４～１４５、１４７、２１０、２１２～２１３、２１５、２９０～２９３、２９５～２９６、２９９～３０４、３０９、３５１、３５２～３５９、３６１～３６２、３６５～３６６、３６８、４０７～４０９、４３２、４３７～４４２、４４４、４６０、４７９、４８２～４８６、４８８～４９２、４９７～４９８、５００～５０１、５０３～５０６、５０８～５１２、５４４～５５０、５５３～５５８、５６０、５８２～５８５、５８９、６０３～６０４、６１１、６１３～６１６、６５９、６６１、６９９～７００、７０２、７０５～７０７、７７０～７７１、８１２～８１６、８３８～８４２、８４５～８５１、８５６、８８３、８８５、８８９、８９３、８９５～８９７、９３６、９４０、９４５、９６１、９６５～９６８、９７２～９７３、１０４１～１０４５、１０４７、１１７０、１１７２、１２１６、１２２２、１２３５、１２４４、１２４６～１２４９、１２５１～１２５２、１２５４～１２５５、１２５７～１２５９、１２６８、１３１９、１３２１～１３２２、１３８０～１３８１、１３８６～１３８７、１４０８、１４３３～１４３５、１４５０～１４５１、１４５４～１４６１、１４７６～１４７７、１４９６～１４９９、１５３２、１５３８～１５４０、１５６５～１５６６、１５７９、１５８１～１５８２、１５８４～１５８９、１５９１、１６０１～１６０４、１６０６～１６０７、１６１０、１６２５、１６２７～１６２９、１６３１～１６３８、１６５１～１６５４、１６６８、１６７０～１６７４、１７１４、１７１７～１７２２、１７２７～１７３１、１７４５、１７５１～１７５５、１７９９、１８６１、１８６９、１９０８、１９６４、１９６６、２０６６～２０６９、２０７５～２０７６、２０７８～２０７９、２１０８、２１４４～２１４５、２１５８～２１６０、２１９３、２３８５、２３９０または２４６０のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号１４５、１４７、２１０、３５２、３６５、３６６、４０７、４０８、４３９～４４２、４４４、４９２、５００、５０４、５１１、５１２、５４４～５４７、５８２、６０４、６１６、６９９、７００、７０２、７０５～７０７、８３９～８４２、８４８、１０４２～１０４５、１１７２、１２５５、１４５４～１４５７、１４７７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１６０６、１６０７、１６１０または１６３１～１６３３のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号４０７、４０８、４４１、４４２、４４４、５４５、５８２、６１６、７０５～７０７、８４１、１０４３、１０４４、１２５２、１２５５、１２６８、１３２１、１４５１、１４５４～１４６０、１４９７～１４９９、１５３８、１５３９、１５８１、１５８２、１５８７、１６０１、１６０２、１６０６、１６０７、１６１０、１６３１～１６３３、１７１９、１７２１、１７３０、１７３１、１８６１または２０６８のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
配列番号４７９、４８２～４９１、７７０、７７１、９７３、９９８～１０００、１００７、１００８、１０４０～１０４３、１３８７、１４５４、１４５６、１４５９～１４６１、１５３８、１５３９、１６０６、１６０７、１６１０、１６４３～１６６５、１６６８～１６７５または１８６２～１８６９のうちいずれか１つの核酸塩基配列からなる、請求項１から６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２０ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭにおいて、少なくとも５０％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも６０％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも７０％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
細胞アッセイを使用して決定した場合、対照細胞と比較した場合に、２ｎＭのオリゴヌクレオチド濃度において、少なくとも８５％のｍＲＮＡ阻害を示す、請求項１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結を含む、請求項１から３４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
前記少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
前記少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結が、２’－アルコキシヌクレオシド間連結である、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
前記少なくとも１つの代替えのヌクレオシド間連結が、アルキルホスフェートヌクレオシド間連結である、請求項３５に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１つの代替えの核酸塩基を含む、請求項１から３８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
前記代替えの核酸塩基が、５’－メチルシトシン、プソイドウリジンまたは５－メトキシウリジンである、請求項３９に記載のオリゴヌクレオチド。
少なくとも１つの代替えの糖部分を含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の改変されたオリゴヌクレオチド。
前記代替えの糖部分が、２’－ＯＭｅまたは二環式核酸である、請求項４１に記載の改変されたオリゴヌクレオチド。
一価または分岐鎖二価もしくは三価リンカーを介して前記オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端にコンジュゲートされたリガンドをさらに含む、請求項１から４２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１７個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
ＭＳＨ３遺伝子の少なくとも１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
ＭＳＨ３遺伝子の１９～２３個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
ＭＳＨ３遺伝子の１９個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
ＭＳＨ３遺伝子の２０個の連続するヌクレオチドに対して相補的な領域を含む、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
約１５～２５ヌクレオシド長である、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
２０ヌクレオシド長である、請求項１から４３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つまたは複数および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つまたは複数および脂質ナノ粒子、ポリプレックスナノ粒子、リポプレックスナノ粒子またはリポソームを含む組成物。
細胞においてＭＳＨ３の転写を阻害する方法であって、前記細胞を、ＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物と接触させて、前記細胞において前記ＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法。
トリヌクレオチドリピート伸長障害の処置、予防またはその進行の遅延を必要とする対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、前記対象に、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別された対象の細胞においてＭＳＨ３のレベルおよび／または活性を低減させる方法であって、前記細胞を、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。
細胞においてＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、前記細胞を、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物と接触させるステップ、およびＭＳＨ３遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るために十分な時間にわたって、前記細胞を維持し、それによって、前記細胞において前記ＭＳＨ３遺伝子の発現を阻害するステップを含む、方法。
細胞においてトリヌクレオチドリピート伸長を減少させる方法であって、前記細胞を、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。
前記細胞が対象中にある、請求項５６または５７に記載の方法。
前記対象がヒトである、請求項５４、５５および５８のいずれか一項に記載の方法。
前記細胞が、中枢神経系の細胞または筋肉細胞である、請求項５４から５８のいずれか一項に記載の方法。
前記対象が、トリヌクレオチドリピート伸長障害を有すると識別されている、請求項５４、５５および５８から６０のいずれか一項に記載の方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ポリグルタミン病である、請求項５４、５５および５７から６１のいずれか一項に記載の方法。
前記ポリグルタミン病が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型およびハンチントン病様２からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、非ポリグルタミン病である、請求項５４から６１のいずれか一項に記載の方法。
前記非ポリグルタミン病が、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
トリヌクレオチドリピート伸長障害の予防または処置における使用のための、請求項１から５０のいずれか一項に記載の１つもしくは複数のオリゴヌクレオチド、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型、ハンチントン病様２、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、請求項６８に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ハンチントン病である、請求項６６または６７に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、フリードライヒ運動失調症である、請求項６６または６７に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、筋強直性ジストロフィー１型である、請求項６６または６７に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記改変されたオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物が、くも膜下腔内投与される、請求項６６から７０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記改変されたオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物が、脳室内投与される、請求項６６から７０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
筋肉内投与される、請求項６６から７０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
障害の処置、予防またはその進行の遅延を必要とする対象において障害を処置、予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、前記対象が、トリヌクレオチドリピート伸長障害を患っており、前記対象に、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
さらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項７４に記載の方法。
前記さらなる治療剤が、ハンチンチン遺伝子をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズする別のオリゴヌクレオチドである、請求項７５に記載の方法。
対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を予防するまたはその進行を遅延させる方法であって、前記対象に、前記対象のトリヌクレオチドリピート伸長障害の進行を遅延させるのに有効な量で、請求項１から５０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドのうち１つもしくは複数、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型、ハンチントン病様２、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ハンチントン病である、請求項７７または７８に記載の方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、フリードライヒ運動失調症である、請求項７７または７８に記載の方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、筋強直性ジストロフィー１型である、請求項７７または７８に記載の方法。
さらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項７７または７８に記載の方法。
前記さらなる治療剤が、ハンチンチン遺伝子をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドである、請求項８２に記載の方法。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害の進行が、予測された進行と比較した場合に、少なくとも１２０日、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年またはそれよりも長く遅延される、請求項７７から８３のいずれか一項に記載の方法。
対象においてトリヌクレオチドリピート伸長障害を予防するまたはその進行を遅延させる際の使用のための、請求項１から５０のいずれか一項に記載の１つもしくは複数のオリゴヌクレオチド、請求項５１に記載の医薬組成物または請求項５２に記載の組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症１型、脊髄小脳失調症２型、脊髄小脳失調症３型、脊髄小脳失調症６型、脊髄小脳失調症７型、脊髄小脳失調症１７型、ハンチントン病様２、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ関連振戦／失調症候群、脆弱ＸＥ精神遅滞、フリードライヒ運動失調症、筋強直性ジストロフィー１型、脊髄小脳失調症８型、脊髄小脳失調症１２型、眼咽頭型筋ジストロフィー、脆弱Ｘ関連早期卵巣機能不全、ＦＲＡ２Ａ症候群、ＦＲＡ７Ａ症候群および早期乳児てんかん性脳症からなる群から選択される、請求項８５に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、ハンチントン病である、請求項８５または８６に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、フリードライヒ運動失調症である、請求項８５または８６に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害が、筋強直性ジストロフィー１型である、請求項８５または８６に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。
前記トリヌクレオチドリピート伸長障害の進行が、予測された進行と比較した場合に、少なくとも１２０日、例えば、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、少なくとも５年、少なくとも１０年またはそれよりも長く遅延される、請求項８５から８９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または組成物。