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JP2021500394A - αタンパク質キナーゼ１を活性化することによって免疫応答をモジュレートするための組成物および方法 - Google Patents

αタンパク質キナーゼ１を活性化することによって免疫応答をモジュレートするための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、免疫応答をモジュレートし、がん、感染、炎症ならびに関連疾患および障害を処置または予防し、かつ標的抗原に対する免疫応答を増強するためのα−キナーゼ１（ＡＬＰＫ１）の活性化に関連する組成物および方法を提供する。本開示は、αタンパク質キナーゼ１（ＡＬＰＫ１）のアゴニストとしての式（Ｉ）のヘテロ環化合物（式中、Ａ１、Ａ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１、Ｗ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、本明細書に規定する通りである）、ならびにＡＬＰＫ１の活性化、免疫応答のモジュレーション、およびがんなどの疾患の処置におけるそれらの使用も提供する。

Description

[01]本発明は、αタンパク質キナーゼ１（ＡＬＰＫ１）の活性化による治療のための組成物および方法に関する。
[02]炎症反応の機序に関する研究により、不可欠なシグナル伝達成分として働く様々なタンパク質キナーゼが同定された。タンパク質キナーゼの欠陥が、ヒト炎症性疾患、がんおよび糖尿病の病因に関連していることはよくある。
[03]αキナーゼは、典型的なタンパク質キナーゼに対してほとんど配列類似性を示さない特有のタンパク質キナーゼスーパーファミリーである。α−タンパク質キナーゼ１（ＡＬＰＫ１）、ＡＬＰＫ２、ＡＬＰＫ３、伸長因子−２キナーゼ（ｅＥＦ２Ｋ）、および一過性受容器電位カチオンチャネルＭ６およびＭ７（ＴＲＰＭ６およびＴＲＰＭ７）を含めて合計６つのαキナーゼメンバーが同定された（Ｒｙａｚａｎｏｖ ＡＧら、Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ １９９９ ９（２）：Ｒ４３−４５；Ｒｙａｚａｎｏｖ ＡＧら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９７ ９４（１０）：４８８４−４８８９）。
[04]ＡＬＰＫ１は、上皮細胞におけるラフトを含むスクロース−イソメラーゼ（ＳＩ）小胞の新しい成分であると同定された（Ｈｅｉｎｅｔ Ｍら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２００５ ２８０（２７）：２５６３７−４３）。ＡＬＰＫ１がミオシン１をリン酸化し、頂部形質膜へのエキソサイトーシス輸送において不可欠な役割を果たすことが示された。マウスにおけるＡＬＰＫ１のトランスポゾン挿入型ホモ接合不活性化変異は、全長ＡＬＰＫ１を過剰発現させることによりレスキューされうる協調運動障害をもたらした（Ｃｈｅｎ Ｍら、ＢＭＣ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２０１１ １２：１）。
[05]同定された多型のすべてがすべての個体群で複製したわけではないが、いくつかの遺伝子関連研究から、ＡＬＰＫ１が痛風の危険に関与していることがわかった（Ｗａｎｇ ＳＪら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｍｅｄ． ２０１１ ８９：１２４１−５１；Ｋｏ ＡＭら、Ｊ． Ｉｎｔｌ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ． ２０１３ ４２：４６６−４７４；Ｃｈｉｂａ Ｔら、Ｈｕｍａｎ Ｃｅｌｌ ２０１５ ２８：１−４）。他の遺伝子関連研究は、ＡＬＰＫ１を慢性腎疾患、心筋梗塞、および糖尿病の危険因子として関連付けた（Ｙａｍａｄａ Ｙら、Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ ２０１３ ５０：４１０−４１８；Ｆｕｊｉｍａｋｉ Ｔら、Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｐｏｒｔ ２０１４ ２：１２７−１３１；Ｓｈｉｍｏｔａｋａ Ｓら、Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｐｏｒｔ １ ２０１３ ９４０−４４；Ｙａｍａｄａ Ｙら、Ｂｉｏｍｅｄ． Ｒｅｐｏｒｔ ２０１５ ＤＯＩ：１０．３８９２／ｂｒ．２０１５．４３９）。
[06]マウスにおけるＡＬＰＫ１の過剰発現により、テストステロンのレベルが低下し、炎症性サイトカインＩＬ−１βおよびＴＧＦ−βの産生が増加した。これは、ＡＬＰＫ１とテストステロンのバランスが炎症性サイトカインのテストステロン媒介阻害においてある役割を果たす可能性があることを示唆している（Ｋｕｏ ＴＭら、Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０１５ １５４：１５０−１５８）。
[07]ＡＬＰＫ１活性化は、肺がん、結腸直腸がん、および乳がんを含めて、がんにおいてある役割を果たすものとしてもその関与が示唆された（Ｌｉａｏ ＨＦら、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１６ ６：２７３５０； Ｓｔｒｉｅｔｚ Ｊら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ２０１６ １−１６）。
[08]最近の研究は、ある種の細菌によって活性化された自然免疫応答の重要な調節因子としてのＡＬＰＫ１の関与を示唆した。例えば、ＡＰＬＫ１は、フレクスナー赤痢菌（S. flexneri）、ネズミチフス菌（S. typhimurium）、および髄膜炎菌（Neisseria meningitides）の感染に応答したＴＩＦＡオリゴマー形成の促進およびインターロイキン８（ＩＬ−８）発現による細菌に対する自然免疫の主要な調節因子であると示唆された（Ｍｉｌｉｖｏｊｅｖｉｃ Ｍら、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ ２０１７ １３（２）：ｅ１００６２２４）。Ｚｉｍｍｅｒｍａｎらは、ピロリ菌（Helicobacter pylori）のＩＶ型分泌装置によって引き起こされるＡＬＰＫ１およびＴＩＦＡに依存した自然免疫応答を報告している（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ Ｓら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１７ ２０（１０）：２３８４−９５）。これらの研究は両方とも、細菌代謝産物であるヘプトース−１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）がＴＩＦＡ依存性自然免疫を活性化することを示唆する。
[09]臨床症状が炎症および様々な感染によって生ずる疾患、障害、および病態は多い。そのような疾患、障害、および病態を処置するために標的組織における炎症をモジュレートする新規方法が必要とされている。本開示は、この必要性に取り組むものである。
[10]本発明は、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ヘプトース１，７−ビスホスフェートまたは「ＨＢＰ」）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびに本明細書に記載される式ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表されるそれらの誘導体を含めて、いくつかの細菌代謝産物が、ＩＬ−８やＴＮＦαなどの炎症性サイトカインの発現の増加を含めて、下流シグナル伝達のＡＬＰＫ１依存性活性化を誘導するという発見に部分的に基づいている。ＨＭＰ−１ｂＰ、その下流の産物Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、特にＨ１ｂ−ＡＤＰに生物活性があることは、ＡＬＰＫ１、および細菌代謝産物による自然免疫の活性化におけるその役割について現在知られていることからは予想外であった。本開示は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ誘導体（derviatives）による抗腫瘍活性の証拠も提供し、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと免疫チェックポイントインヒビターおよび免疫モジュレーター（抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、および抗ＣＤ４抗体を含む）との共投与は、相乗的抗腫瘍効果を有することも明らかにする。本開示は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと免疫モジュレーター（インターフェロンα（ＩＮＦα）、インターフェロン遺伝子刺激因子（「ＳＴＩＮＧ」）アゴニスト、およびＴＬＲアゴニスト（レシキモド（resquimod））のそれぞれを含む）との共投与が相乗的抗腫瘍効果を有することも示す。
[11]したがって、本開示は、ＡＬＰＫ１の活性化を通した免疫応答のモジュレーション、がんの処置、標的抗原に対する免疫応答の増強、ＮＦｋＢ、ｐ３８、およびＪＮＫ細胞シグナル伝達経路の活性化による処置に適している疾患または障害の処置、ならびに感染病原体によって引き起こされる疾患または障害の処置または予防に適している（amendable to）組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＡＬＰＫ１活性化は、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ、好ましくはＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ、最も好ましくはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ、または本明細書に記載される式ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストの投与により達成される。一部の実施形態において、本開示は、対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストのいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
[12]本発明は、ＡＬＰＫ１アゴニストとしての新規ヘテロ環化合物を開示する。化合物は、式（Ｉ）で表される
［式中、Ａ１、Ａ２、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１、Ｗ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、本明細書に定義される通りである］。式Ｉの化合物の立体異性体、互変異性体、安定同位体、プロドラッグ、および薬学的に許容される塩も本開示の範囲内に含まれる。
Ａ１およびＡ２は独立して、Ｏ、Ｓおよび−Ｃ（Ｒ８Ｒ９）−から選択され、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、および置換または非置換アラルキルオキシル（任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基である）から選択され、Ａ１またはＡ２の少なくとも一方は、−Ｃ（Ｒ８Ｒ９）であり、Ａ１におけるＲ８またはＲ９は、Ａ２におけるＲ８またはＲ９と環化して、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ならびに３〜９環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキルを形成することができ、それぞれが、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基によって任意選択で置換されており、
Ｌ１およびＬ２は独立して、Ｏ、ＣＨ２、ＣＨＦおよびＣＦ２から選択され、
Ｌ３は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＣＨ（ＯＨ）であり、
Ｚ１およびＺ２は独立して、ＯおよびＳから選択され、
Ｗ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４−ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、アラルキルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択される）から選択される任意選択で置換されている基から選択され、Ｒ１０およびＲ１１の任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
Ｗ２は、Ｈ、またはＤ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルケニルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ１は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、または５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、Ｒ１は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１〜Ｃ４ジアルキルアミンおよび（Ｒ１３Ｒ１４）ＮＣＯ−から選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されており、Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択され、
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、Ｈ、Ｄ、ハロゲンおよび−ＯＨ、Ｒ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、４〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択される）から選択され、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７の隣接基のいずれか２つは環化して、５〜９環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキルを形成することができ、それぞれが、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基によって任意選択で置換されている。
[13]実施形態において、本開示は、免疫応答のモジュレーションを必要とする対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストを含めて、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、免疫応答をモジュレートする方法は、自然免疫の活性化および適応免疫の活性化から選択される。
[14]実施形態において、本開示は、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストを含めて、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、組成物は、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表される化合物から選択される、またはＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ、好ましくはＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ、最も好ましくはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストはＨ１ｂ−ＡＤＰである。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。実施形態において、がんは、軟部組織肉腫、乳がん、頭頸部がん、メラノーマ、子宮頸がん、膀胱がん、血液悪性腫瘍、膠芽腫、膵がん、前立腺がん、結腸がん、乳がん、腎がん、肺がん、メルケル細胞癌、小腸がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、胃がん、消化管間質腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、肝がん、白血病、リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、脳がん、および多発性骨髄腫から選択される。実施形態において、がんは、乳がん、頭頸部がん、メラノーマ、腎がん、肺がん、メルケル細胞癌、およびリンパ腫から選択される。
[15]実施形態において、本開示は、対象における標的抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストを含めて、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを標的抗原に対する免疫応答を増強するように働くワクチンまたは免疫アジュバントとして含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、標的抗原は、アデノウイルス、コクサッキーＢウイルス（Coxsackie B virus）、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus）、東部ウマ脳炎ウイルス（eastern equine encephalitis virus）、エボラウイルス（ebola virus）、エンテロウイルス（enterovirus）７１、エプスタイン−バーウイルス（Epstein-Barr virus）、インフルエンザｂ型菌（Haemophilus influenzae type b）（Ｈｉｂ）、Ｃ型肝炎ウイルス（hepatitis C virus）（ＨＣＶ）、ヘルペスウイルス（herpes virus）、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus）（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（human papillomavirus）（ＨＰＶ）、鉤虫、マールブルグウイルス（Marburg virus）、ノロウイルス（norovirus）、呼吸器多核体ウイルス（respiratory syncytial virus）（ＲＳＶ）、ロタウイルス（rotavirus）、チフス菌（salmonella typhi）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、化膿レンサ球菌（Streptococcus pyogenes）、水痘、ウエストナイルウイルス（West Nile virus）、ペスト菌（Yersinia pestis）、およびジカウイルス（Zika virus）からなる群から選択される感染病原体の抗原である。実施形態において、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストを含めて、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、または前記タンパク質のＡＬＰＫ１タンパク質もしくは構成的活性型変異体は、炭疽病、カリエス、シャガス病、デング熱、ジフテリア、エーリキア症、Ａ型もしくはＢ型肝炎（hepatits）、ヘルペス、季節性インフルエンザ、日本脳炎、ハンセン病、ライム病、マラリア、麻疹、ムンプス、髄膜炎および敗血症を含めて髄膜炎菌性疾患、オンコセルカ症（河川盲目症）、パータシス（百日咳）、肺炎球菌性疾患、ポリオ、狂犬病、風疹、住血吸虫症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、帯状疱疹、天然痘、梅毒、破傷風、結核、野兎病、ダニ媒介性脳炎ウイルス、腸チフス、トリパノソーマ症、黄熱病、または内臓リーシュマニア症の処置または予防におけるワクチンのためのワクチンアジュバントとして働く。
[16]実施形態において、本開示は、対象の細胞におけるＮＦｋＢ、ｐ３８、およびＪＮＫ細胞シグナル伝達経路の活性化による処置に適している（amendable to）疾患または障害を処置する方法であって、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、疾患または障害は、結核、髄膜炎、肺炎、潰瘍、敗血症、鼻炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、関節炎、肥満症、放射線誘発炎症、乾癬、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、全身性狼瘡、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎（グレーブス病）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、水疱性疾患、ならびにＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（hepatitis B virus）（ＨＢＶ）、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる疾患および障害から選択される。
[17]実施形態において、本開示は、細菌、ウイルス、または寄生虫から選択される感染病原体によって引き起こされる疾患または障害の処置または予防を必要とする対象における細菌、ウイルス、または寄生虫から選択される感染病原体によって引き起こされる疾患または障害を処置または予防する方法であって、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストを含めて、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、感染病原体は細菌である。実施形態において、感染病原体はウイルスである。実施形態において、感染病原体は寄生虫である。実施形態において、細菌は、グラム陰性菌またはグラム陽性菌である。実施形態において、グラム陰性菌は、アシネトバクター・バウマンニイ（Acinetobacter baumanii）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatobacter actinomycetemcomitans）、バルトネラ・バシリフォルミス（Bartonella bacilliformis）、バルトネラ・ヘンセラエ（Bartonella henselae）、バルトネラ・クインタナ（Bartonella quintana）、ビフィドバクテリウム属菌（Bifidobacterium）、ボレリア属菌（Borrelia）、百日咳菌（Bortadella pertussis）、ブルセラ属菌種（Brucella sp）、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacis）、類鼻疽菌（Burkholderia psedomallei）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、カーディオバクテリウム・ホミニス（Cardiobacterium hominis）、カンピロバクター・フィタス（Campylobacter fetus）、肺炎クラミジア（Chlamydia pneumonia）、トラコーマクラミジア（Chlymydia trachomatis）、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）、シアノバクテリア（Cyanobacteria）、エイケネラ・コローデンス（Eikennella corrodens）、エンテロバクター属菌（Enterobacter）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faccium）、大腸菌（Escherichia coli）、大腸菌Ｏ１５７（Escherichia coli 0157）、フランシセラ・ツラレンシス（Franceilla tularensis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘモフィルス・アフロフィルス（Haemophilus aphrophilus）、軟性下疳菌（Haemophilus ducreyi）、パラインフルエンザ菌（Haemophilus parainfluenzae）、ピロリ菌、キンゲラ・キンゲ（Kingella kingae）、肺炎桿菌（Klebsiella pneumonia）、レジオネラ菌（Legionella bacteria）、レジオネラ・ニューモフィラ血清群1、レプトスピラ属菌（Leptospria）、モルガネラ・モルガニイ（Morganella morganii）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）、プロテウス・ミラビリス（Proteus mirabilis）、プロテウス・ブルガリス（Proteus vulgaris）、プロテウス・ミクソファシエンス（Proteus myxofaciens）、プロビデンシア・レットゲリ（Providencia rettgeri）、プロビデンシア・アルカリファシエンス（Providencia alcalifaciens）、プロビデンシア・スチュアーティイ（Providencia stuartii）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、シュードモナス・パウシモビリス（Pseudomonas paucimobilis）、プチダ菌（Pseudomonas putida）、蛍光菌（Pseudomonas fluorescens）、シュードモナス・アシドボランス（Pseudomonas acidovorans）、リケッチア属菌（Rickettsiae）、サルモネラ菌（Salmonella enterica）、チフス菌（Salmonella typhi）、パラチフス菌A、B型チフス（Salmonella paratyphi types A, B typhus）、サルモネラ・ダブリン（Salmonella dublin）、アリゾナ菌（Salmonella arizonae）、サルモネラ・コレレスイス（Salmonella choleraesuis）、霊菌（Serratia marcescens）、志賀赤痢菌（Schigella dysenteriae）、フレクスナー赤痢菌（Schigella flexneri）、ボイド赤痢菌（Schigella boydii）、ソンネ菌（Schigella sonnei）、トレポネーマ属菌（Treponema）、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、ビブリオ・ミミカス（Vibrio mimicus）、ビブリオ・アルギノリティカス（Vibrio alginolyticus）、ビブリオ・ホリサエ（Vibrio hollisae）、腸炎ビブリオ（Vibrio parahaemolyticus）、ビブリオ・ブルニフィカス（Vibrio vulnificus）およびペスト菌（Yersinia pestitis）からなる群から選択される。実施形態において、グラム陽性菌は、放線菌属菌（Actinomycetes）、炭疽菌（Bacillus anthracis）、枯草菌（Bacillus subtilis）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ウェルシュ菌（Clostridium perfingens）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、破傷風菌、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、ブタ丹毒菌（Erysipelothrix ruhsiopathiae）、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）、らい菌（Mycobacterium leprae）、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、マイコプラズマ属菌（Mycoplasma）、ノカルディア属菌（Nocardia）、プロピオニバクテリウム属菌（Propionibacerium）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎球菌（Pneumococci）、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（VRSA）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Staphylococcus lugdunensis）、腐性ブドウ球菌（Staphylococcus saprophyticus）、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumonia）、化膿レンサ球菌、およびストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus mutants）からなる群から選択される。実施形態において、ウイルスは、エボラウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス（herpes simplex virus）、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、ヒトパピローマウイルス（HPV-6、HPV-11）、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス（human SARS coronavirus）、インフルエンザＡ型ウイルス（influenza A virus）、インフルエンザＢ型ウイルス（influenza B virus）、インフルエンザＣ型ウイルス（influenza C virus）、麻疹ウイルス（measles virus）、狂犬病ウイルス（rabies virus）、ポリオウイルス（poliovirus）、SARSコロナウイルス（SARS corona virus）、および黄熱病ウイルス（yellow fever virus）からなる群から選択される。実施形態において、寄生虫は、アカントアメーバ属種（Acanthamoeba spp.）、アメリカトリパノソーマ症（American trypanosomiasis）、バラムチア・マンドリルリス（Balamuthia mandnillanis）、多型バベシア（Babesia divergenes）、フタゴバベシア（Babesia bigemina）、小形馬バベシア（Babesia equi）、ネズミバベシア（Babesia microfti）、バベシア・ダンカニ（Babesia duncani）、大腸バランチジウム（Balantidium coli）、ブラストシスチス属種（lastocystis spp.）、クリプトスポリジウム属種（Cryptosporidium spp.）、シクロスポラ・カイエタネンシス（Cyclospora cayetanensis）、二核アメーバ（Dientamoeba fragilis）、広節裂頭条虫（Diphyllobothrium latum）、アマゾンリーシュマニア（Leishmania amazonesis）、フォーラーネグレリア（Naegleria fowderi）、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、プラスモディウム・オバレ・クルティシイ（Plasmodium ovale curtisi）、四日熱マラリア原虫（Plasmodium malariae）、リノスポリジウム・セーベリ（Rhinosporidium seeberi）、サルコシスティス・ボビホミニス（Sarcocystis bovihominis）、豚肉胞子虫（Sarcocystiss suihominis）、トキソプラズマ原虫、膣トリコモナス（Trichmonas vaginalis）、トリパノソーマ・ブルセイ、クルーズトリパノソーマ、および多頭条虫からなる群から選択される。
[18]上述の方法のいずれかの実施形態において、方法は、１種または複数の追加の治療剤または免疫モジュレーター、およびそれらの組合せを対象に投与するステップをさらに含んでもよい。実施形態において、１種または複数の追加の治療剤は、抗細菌剤、抗ウイルス剤もしくは抗寄生虫剤などの抗微生物剤、抗がん剤、または結核、髄膜炎、肺炎、潰瘍、敗血症、鼻炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、関節炎、肥満症、放射線誘発炎症、乾癬、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、全身性狼瘡、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎（グレーブス病）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、および水疱性疾患の処置のための治療剤から選択される。
[19]がんを処置する方法の実施形態において、１種または複数の追加の治療剤は、免疫モジュレーターである。実施形態において、免疫モジュレーターは、免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニスト、免疫刺激分子、および免疫共刺激分子のアゴニストの１種または複数から選択される。実施形態において、免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニストは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターである。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、およびアベルマブからなる群から選択される。実施形態において、免疫モジュレーターは、インターフェロンα（ＩＮＦα）、インターフェロン遺伝子刺激因子（「ＳＴＩＮＧ」）アゴニスト、ＴＬＲアゴニスト（例えば、レシキモド（resquimod））、および抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体から選択される。実施形態において、免疫共刺激分子のアゴニストは、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体である。実施形態において、がんは、進行メラノーマ、非小細胞肺がん、腎細胞癌、膀胱がん、ホジキンリンパ腫、肝がん、胃がん、結腸がん、乳がん、非ホジキンリンパ腫、前立腺がん、頭頸部がん、甲状腺がん、脳がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、多発性骨髄腫、子宮頸がん、および肉腫から選択される。
[20]実施形態において、１種または複数の追加の免疫モジュレーターは、免疫チェックポイント調節因子のインヒビターもしくはアンタゴニスト、または免疫チェックポイント調節因子に対するワクチンである。実施形態において、１種または複数の追加の免疫モジュレーターは、共刺激分子など免疫チェックポイント調節因子のアゴニスト、例えばＯＸ４０（ＣＤ１３４）のアゴニストである。実施形態において、免疫チェックポイント調節因子は、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）受容体（ＣＤ２７９）、ＰＤ−１のリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（あるいはＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ）および４−１ＢＢリガンド、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（あるいはＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０）およびＯＸ４０リガンド、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７（あるいはＴＮＦＲＳＦ７、分化クラスター２７、ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ２５およびＴＮＦ様リガンド１Ａ（ＴＬ１Ａ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５（あるいはＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０）およびＣＤ４０リガンド、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（あるいはＴＮＦＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ）−リンホトキシンα（ＬＴＡ）、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）−ＣＤ１６０（あるいはＴＮＦＳＦ１４）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（ＳＩＧＬＥＣ）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）およびＩＣＯＳリガンド、Ｂ７−Ｈ３（Ｂ７ファミリー、あるいはＣＤ２７６）、Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１（ＶＴＣＮ１、あるいはＢ７−Ｈ４）、Ｔ細胞活性化のＶ型免疫グロブリンドメイン含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ヒト内在性レトロウイルスＨ型長末端反復結合タンパク質２（ＨＨＬＡ２）−膜貫通および免疫グロブリンドメイン含有２（ＴＭＩＧＤ２）、ブチロフィリン、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（あるいはＮＫＲ２Ｂ４、ＣＤ２４４）およびＢ細胞膜タンパク質（ＣＤ４８）、免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインと免疫受容抑制性チロシンモチーフドメインとを含むＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）およびポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）ファミリーメンバー、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）および白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）、ナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）およびナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＡ（ＮＫＧ２Ａ）、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）およびＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ（ＭＩＣＢ）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）、アデノシン−エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＣＤ３９）−５’−ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）およびＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、ホスファチジルセリン、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）およびインテグリン結合タンパク質（ＣＤ４７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ならびにニューロピリンから選択される。
[21]実施形態において、１種または複数の追加の免疫モジュレーターは、ワクチンである。
[22]がんを処置する方法の実施形態において、ワクチンは、腫瘍抗原に対するワクチンである。実施形態において、腫瘍抗原は、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、ムチン１（ＭＵＣ１）、およびメラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥＡ３）から選択される。
[23]実施形態において、１種または複数の追加の免疫モジュレーターは、Ｔ細胞、好ましくはキメラ抗原受容体Ｔ細胞である。実施形態において、１種または複数の追加の免疫モジュレーターは、組換えタンパク質、好ましくは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１から選択される組換えタンパク質である。
[24]上述の方法のいずれかの実施形態において、組成物は、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニスト、またはＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、ならびにそのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含むことができる。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストはＨＢＰである。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。
[25]実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＢＰのプロドラッグである。実施形態において、プロドラッグは、カルボニルオキシメチル、シクロサリゲニル、環式１−アリール−１，３−プロパニルエステル、アリールオキシホスホロアミデートまたはホスホノアミデート、およびメチルアリールハロアルキルアミデート（methylaryl haloalkylamdiate）からなる群から選択される保護基を含む。実施形態において、プロドラッグは、式３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄ、または３ｅの化合物である。実施形態において、プロドラッグは、表１の化合物から選択される。
[26]上述の方法のいずれかの実施形態において、組成物は、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体を含むことができる。実施形態において、組成物は、ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチドまたはその構成的活性型変異体を含む。実施形態において、組成物は、対象へのウイルスまたは非ウイルス遺伝子送達システムを使用した投与に適応される。実施形態において、組成物は、対象へのウイルス遺伝子送達システムを使用した投与に適応される。実施形態において、組成物は、ウイルス粒子をさらに含む。実施形態において、組成物は、対象への非ウイルス遺伝子送達システムを使用した投与に適応される。実施形態において、組成物は、リポソーム粒子、ナノ粒子、ミニサークル、ミニベクター、および高分子担体の１種または複数をさらに含む。実施形態において、非ウイルス遺伝子送達システムは、遺伝子編集技法を含む。実施形態において、遺伝子編集技法は、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ−９を利用する。
[27]実施形態において、本開示は、肝疾患または障害の処置を必要とする対象における肝疾患または障害を処置する方法であって、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはその誘導体の低用量を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、低用量は、体重１キログラム当たり１ナノグラム〜１ミリグラム（１ｎｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ）、好ましくは体重１キログラム当たり１マイクログラム〜１００マイクログラム（１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ）の範囲である。実施形態において、肝疾患または障害は、肝がん、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染によって引き起こされる疾患または障害から選択される。
[28]実施形態において、本開示は、がんを処置する方法であって、そのような処置を必要とする対象に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌを産生する細菌を含む組成物を投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、組成物は、腫瘍内注射により投与される。
[29]上述の方法のいずれかの実施形態において、対象は、脊椎動物とすることができる。実施形態において、対象はヒトである。
[30]本開示は、ＡＬＰＫ１アゴニストを含むワクチン組成物またはワクチンアジュバント組成物、ならびにＡＬＰＫ１アゴニストおよび担体を含む医薬組成物も提供する。これらの組成物の実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、もしくはＩＣで表される化合物、ＨＢＰ、またはそのプロドラッグ、類似体、もしくは誘導体である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＢＰのプロドラッグである。実施形態において、プロドラッグは、カルボニルオキシメチル、シクロサリゲニル、環式１−アリール−１，３−プロパニルエステル、アリールオキシホスホロアミデートまたはホスホノアミデート、およびメチルアリールハロアルキルアミデート（methylaryl haloalkylamdiate）からなる群から選択される保護基を含む。実施形態において、プロドラッグは、式３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄ、または３ｅの化合物である。実施形態において、プロドラッグは、表１の化合物から選択される。
[31]本開示は、哺乳類の対象における免疫応答をモジュレートすることができる化合物を選択する方法であって、ＡＬＰＫ１と被験化合物をＡＴＰの存在下で、およびそれとは別に同時にＡＴＰの非存在下で接触させ、次にＡＬＰＫ１シグナル伝達の１つまたは複数の下流標的のＡＬＰＫ１リン酸化および／または活性化を検出するためのアッセイを行うステップを含む方法も提供する。実施形態において、ＡＬＰＫ１と被験化合物を接触させるステップは、無細胞系または細胞系で行われる。実施形態において、ＡＬＰＫ１シグナル伝達の１つまたは複数の下流標的のＡＬＰＫ１リン酸化および／または活性化を検出するためのアッセイは、ラジオメトリックベースのキナーゼアッセイ、蛍光ベースのキナーゼアッセイ、時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）ベースのアッセイ、アルファ技術ベースのアッセイ、酵素結合性免疫吸着アッセイ、ルミネセンス検出、移動度シフトベースのキナーゼアッセイ、ウェスタンベースのキナーゼアッセイ、およびリガンド−キナーゼ結合アッセイを含む。
[32]本明細書に記載される方法のいずれかによれば、ＡＬＰＫ１アゴニストは、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表される化合物、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−ｂ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−ｂ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびに上述の分子のいずれかのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択される可能性がある。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、および本明細書に記載されるその誘導体である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰである。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。
[33]実施形態において、本開示は、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表される化合物、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含むワクチン組成物またはワクチンアジュバント組成物を提供する。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、および本明細書に記載されるその誘導体である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰである。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表される化合物である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。
[34]実施形態において、本開示は、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表される化合物、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む医薬組成物を提供する。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、および本明細書に記載されるその誘導体である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰである。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表される化合物である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。
[35]実施形態において、本開示は、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、本明細書に記載される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表される化合物、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌからなる群から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、および本明細書に記載されるその誘導体である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰである。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、および２６〜３２のいずれか１つから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは化合物１５である。実施形態において、方法は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターまたは免疫共刺激分子のアゴニストを対象に投与するステップをさらに含む。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストはＨ１ｂ−ＡＤＰであり、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、およびアベルマブからなる群から選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストはＨ１ｂ−ＡＤＰであり、免疫共刺激分子のアゴニストは、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体である。上述の方法によれば、対象は、ヒト対象とすることができ、がんは、本明細書に上述されるがんとすることができる。実施形態において、がんは固形腫瘍である。実施形態において、がんは不応性である。
[36]本開示は、治療で用いる組成物であって、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物；あるいはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物をさらに提供する。
[37]本開示は、免疫応答のモジュレーションを必要とする対象における免疫応答をモジュレートする方法で用いる組成物であって、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物；あるいはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物も提供する。
[38]本開示は、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法で用いる組成物であって、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物；あるいはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物も提供する。
[39]本開示は、免疫応答の増強を必要とする対象における免疫応答を増強する方法で用いる組成物であって、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物；あるいはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物も提供する。
[40]本開示は、対象の細胞におけるＮＦｋＢ、ｐ３８、およびＪＮＫ細胞シグナル伝達経路の活性化による処置に適している（amendable to）疾患または障害の処置を必要とする対象における対象の細胞におけるＮＦｋＢ、ｐ３８、およびＪＮＫ細胞シグナル伝達経路の活性化による処置に適している（amendable to）疾患または障害を処置する方法で用いる組成物であって、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物；あるいはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物も提供する。
[41]本開示は、細菌、ウイルス、または寄生虫から選択される感染病原体によって引き起こされる疾患または障害の処置または予防を必要とする対象における細菌、ウイルス、または寄生虫から選択される感染病原体によって引き起こされる疾患または障害の処置または予防で用いる組成物であって、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物；あるいはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物も提供する。
[42]本開示は、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法で用いる組成物であって、組成物が、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体からなる群から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含み、方法が、ＡＬＰＫ１アゴニストと免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニスト、免疫刺激分子、および免疫共刺激分子のアゴニストの１種または複数から選択される免疫モジュレーターとの併用治療を含む、組成物も提供する。
[43]本開示は、肝疾患または障害の処置を必要とする対象における肝疾患または障害を処置する方法で用いる組成物であって、組成物が、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはその誘導体の低用量を含み、肝疾患または障害が、肝がん、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染によって引き起こされる疾患または障害から任意選択で選択される、組成物も提供する。
[44]本開示は、がんを処置する方法で用いる組成物であって、組成物が、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌを産生する細菌を含み、腫瘍内注射に任意選択で適応される組成物も提供する。
[45]ＡＬＰＫ１アイソフォーム１のタンパク質配列を示す図（Ａ）である。 アイソフォーム２のタンパク質配列を示す図（Ｂ）である。 [46]図２Ａは、ＩＬ−８ ｍＲＮＡ発現が、（化学的に合成された）ＨＢＰによってＡＬＰＫ１依存的に増加されたことを示す図（Ａ）である。図２Ｂは、ＴＮＦα ｍＲＮＡ発現が、（化学的に合成された）ＨＢＰによってＡＬＰＫ１依存的に増加されたことを示す図（Ｂ）である。 [47]図３Ａは、ＩＬ−８ ｍＲＮＡ発現が、（化学的に合成された）ＨＭＰ−１ｂＰによってＡＬＰＫ１依存的に増加されたことを示す図（Ａ）である。図３Ｂは、ＴＮＦα ｍＲＮＡ発現が、（化学的に合成された）ＨＭＰ−１ｂＰによってＡＬＰＫ１依存的に増加されたことを示す図（Ｂ）である。 [48]図４Ａは、ＩＬ−８ ｍＲＮＡ発現が、（化学的に合成された）Ｈ１ｂ−ＡＤＰによってＡＬＰＫ１依存的に増加されたことを示す図（Ａ）である。図４Ｂは、ＴＮＦα ｍＲＮＡ発現が、（化学的に合成された）Ｈ１ｂ−ＡＤＰによってＡＬＰＫ１依存的に増加されたことを示す図（Ｂ）である。 [49]図５Ａは、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰのそれぞれによって誘導されるＩＬ−８ ｍＲＮＡ発現を示す図（Ａ）である。図５Ｂは、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰのそれぞれによって誘導されるＴＮＦα ｍＲＮＡ発現を示す図（Ｂ）である。 [50]化学的に合成されたＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰの存在下におけるＡＬＰＫ１への結合（Ｈ１ｂ−ＡＤＰのみ結合する）を明らかにするサーマルシフトアッセイを示す図である。 [51]化学的に合成されたＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰの存在下におけるＡＬＰＫ１基質ＴＩＦＡのリン酸化（ＴＩＦＡは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰの存在下でのみリン酸化される）を明らかにする無細胞キナーゼアッセイを示す図である。 [52]（化学的に合成された）Ｈ１ｂ−ＡＤＰの存在下におけるＡＬＰＫ１の自己リン酸化の無細胞キナーゼアッセイを示す図である。 [53]（化学的に合成された）Ｈ１ｂ−ＡＤＰの存在下におけるＩκＢのＡＬＰＫ１依存性リン酸化の無細胞キナーゼアッセイを示す図である。 [54]化学的に合成されたＨ１ｂ−ＡＤＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌの存在下におけるＡＬＰＫ１基質ＴＩＦＡのリン酸化を明らかにする無細胞キナーゼアッセイを示す図である。 [55]マウスＣＴ２６異種移植モデルにおける腫瘍増殖を、Ｈ１ｂ−ＡＤＰの腫瘍内注射は阻害するが、ＨＭＰ−１ｂＰは阻害しないことを示す図である。 [56]Ｈ１ｂ−ＡＤＰの腫瘍内注射によって、サイトカインおよびＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１の発現が増加することを示す図である。 [57]図１３Ａは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＰＤ−１抗体（ＲＭＰ１−１４）の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルの注射腫瘍において腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図（Ａ）である。図１３Ｂは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＰＤ−１抗体（ＲＭＰ１−１４）の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルの遠位腫瘍において腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図（Ｂ）である。 [58]Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＰＤ−１抗体（ＯＸ４０）の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルにおける腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図である。 [59]ＨＩｄＥ変異大腸菌（E. coli）から精製されたＨＢＰ＋ＨＩｄａ（左側）または野生型大腸菌から精製されたＨＢＰ＋ＨＩｄａ（右側）の存在下におけるＡＬＰＫ１依存性ＴＩＦＡリン酸化のインビトロキナーゼ反応後のホスホ−ＴＩＦＡのウェスタン分析を示す図である。 [60]図１６Ａは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の腫瘍内注射が、マウス ＣＴ２６異種移植モデルの注射腫瘍において腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図（Ａ）である。図１６Ｂは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルの遠位腫瘍において腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図（Ｂ）である。 [61]図１７Ａは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＩＦＮ−ａの腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルの注射腫瘍において腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図（Ａ）である。図１７Ｂは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＩＦＮ−ａの腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルの遠位腫瘍において腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図（Ｂ）である。 [62]Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＣＴＬＡ−４抗体の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図である。対応のあるｐ値は、Ｔ検査によって決定されたものであり、右側の縦線＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１で示される。 [63]Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＳＴＩＮＧアゴニストｃ−ｄｉ−ＡＭ（ＰＳ）２の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図である。対応のあるｐ値は、Ｔ検査によって決定されたものであり、右側の縦線＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１で示される。 [64]Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＣＤ４抗体の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図である。 [65]Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＴＬＲアゴニストのレシキモド（resquimod）の腫瘍内注射が、マウスＣＴ２６異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を相乗的に阻害することを示す図である。 [66]ウシ胎仔、ヒト、およびマウス血清が、ＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌を誘導する際にＨ１ｂ−ＡＤＰの活性を減少させることを示す図である。 [67]Ｎａ３ＶＯ４が、Ｈ１ｂ−ＡＤＰをウシ胎仔血清による分解から保護することを示す図である。 [68]Ｎａ３ＶＯ４が、Ｈ１ｂ−ＡＤＰをウシ胎仔血清による分解から保護し、ＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌を誘導するその活性を保持することを示す図である。 [69]ＡＭＰが、Ｈ１ｂ−ＡＤＰをウシ胎仔血清による分解から保護し、ＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌を誘導するその活性を保持することを示す図である。 [70]式Ｉ（１、２、９〜１２）の化合物が、ＡＬＰＫ１を活性化することを通してＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌を活性化することを示す図である。ＨＥＫ２９３細胞は、ＦＢＳなしで培養された。 [71]図２７Ａは、式Ｉ（３、１５、１９、２０）の化合物が、ＡＬＰＫ１を活性化することを通して、ＦＢＳを用いないＨＥＫ２９３におけるＩＬ８分泌を活性化することを示す図（Ａ）である。図２７Ｂは、式Ｉ（３、１５、１９、２０）の化合物が、ＡＬＰＫ１を活性化することを通して、１０％ＦＢＳを用いたＨＥＫ２９３におけるＩＬ８分泌を活性化することを示す図（Ｂ）である。化合物１５は、ＦＢＳ分解に対して抵抗性である。 [72]図２８Ａは、式Ｉ（５、１３、１４、１７、２１、２２）の化合物が、ＦＢＳを用いないＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌の増加により実証されるようにＡＬＰＫ１を活性化することを示す図（Ａ）である。図２８Ｂは、式Ｉ（５、１３、１４、１７、２１、２２）の化合物が、１０％ＦＢＳを用いたＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌の増加により実証されるようにＡＬＰＫ１を活性化することを示す図（Ｂ）である。 [73]図２９Ａは、式Ｉ（１６、２６〜３２）の化合物が、ＦＢＳを用いないＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌の増加により実証されるようにＡＬＰＫ１を活性化することを示す図（Ａ）である。図２９Ｂは、式Ｉ（１６、２６〜３２）の化合物が、１０％ＦＢＳを用いたＨＥＫ２９３細胞におけるＩＬ８分泌の増加により実証されるようにＡＬＰＫ１を活性化することを示す図（Ｂ）である。 [74]式Ｉ（１、２）の化合物が、ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を阻害することを示す図である。 [75]マウス骨髄由来マクロファージが、非常に低濃度のＨ１ｂ−ＡＤＰによって活性化されうることを示す図である。 [76]図３２Ａは、化合物１が、２ｎｍｏｌｅ（１．２μｇ）という低用量で肝組織における炎症反応を活性化することを示す図（Ａ）である。図３２Ｂは、化合物１が、２００ｎｍｏｌｅの用量で肺組織における炎症反応を活性化することを示す図（Ｂ）である。 [77]細菌Ｈ１ｂ−ＡＤＰ生合成経路を示す概略図である。
[78]本開示は、好適なアゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体を用いたＡＬＰＫ１の治療的活性化に関連する組成物および方法を提供する。
定義
[79]本明細書で使用される場合、「ＡＬＰＫ１」という用語は、ヒトＡＬＰＫ１遺伝子の２つのスプライスバリアントであるアイソフォーム１またはアイソフォーム２の１つを指すことができる。各アイソフォームは、同じキナーゼドメインを共有する。参考のために、ヒトＡＬＰＫ１遺伝子は、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ ＩＤ ８０２１６で識別される。
[80]本明細書で使用される場合、「ＡＬＰＫ１の活性化」という用語は、ＡＬＰＫ１キナーゼ活性の活性化を指す。実施形態において、本開示は、例えばＨＢＰ、またはそのプロドラッグ、類似体もしくは誘導体などのＡＬＰＫ１活性化リガンドとすることができるＡＬＰＫ１アゴニストを提供することによって、ＡＬＰＫ１を活性化する方法を提供する。合成ＨＢＰを作製する方法は、例えばＩｎｕｋｉ Ｓら、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒ ２０１７ １９（１２）：３０７９−８２に記載されているように公知である。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、またはそのプロドラッグ、類似体もしくは誘導体である。一部の実施形態において、本開示は、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、またはＩＣで表されるＡＬＰＫ１アゴニストを提供することによって、ＡＬＰＫ１を活性化する方法を提供する。
[81]本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、指示された数の炭素原子を有する直鎖または分枝状飽和脂肪族基を指す。アルキルは、Ｃ１〜２、Ｃ１〜３、Ｃ１〜４、Ｃ１〜５、Ｃ１〜６、Ｃ１〜７、Ｃ１〜８、Ｃ１〜９、Ｃ１〜１０、Ｃ２〜３、Ｃ２〜４、Ｃ２〜５、Ｃ２〜６、Ｃ３〜４、Ｃ３〜５、Ｃ３〜６、Ｃ４〜５、Ｃ４〜６およびＣ５〜６など任意の数の炭素を含むことができる。例えば、Ｃ１〜６アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルは、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなど、２０個までの炭素原子を有するアルキル基も指すことができるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。一部の実施形態において、アルキル基は、１〜２つの置換基で置換されている。非限定的例として、好適な置換基としては、ハロゲンおよびヒドロキシルが挙げられる。
[82]本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有する直鎖または分枝状炭化水素を指す。アルケニルは、Ｃ２、Ｃ２〜３、Ｃ２〜４、Ｃ２〜５、Ｃ２〜６、Ｃ２〜７、Ｃ２〜８、Ｃ２〜９、Ｃ２〜１０、Ｃ３、Ｃ３〜４、Ｃ３〜５、Ｃ３〜６、Ｃ４、Ｃ４〜５、Ｃ４〜６、Ｃ５、Ｃ５〜６、およびＣ６など任意の数の炭素を含むことができる。アルケニル基は、１、２、３、４、５またはそれ以上を含むがこれらに限定されない好適な任意の数の二重結合を有することができる。アルケニル基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。
[83]本明細書で使用される場合、「アルキレン」という用語は、指示された数の炭素原子を有し、少なくとも２つの他の基を連結する直鎖または分枝状飽和脂肪族基、すなわち２価の炭化水素基を指す。アルキレンに連結される２つの部分は、アルキレン基の同じ原子または異なる原子に連結されうる。例えば、直鎖アルキレンは、−（ＣＨ２）ｎ−の２価の基（ｎは１、２、３、４、５または６である）とすることができる。代表的なアルキレン基としては、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ブチレン、イソブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ペンチレンおよびヘキシレンが挙げられるが、これらに限定されない。アルキレン基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。一部の実施形態において、アルキレン基は、１〜２つの置換基で置換されている。非限定的例として、好適な置換基としては、ハロゲンおよびヒドロキシルが挙げられる。
[84]本明細書で使用される場合、「アルコキシ」または「アルコキシル」という用語は、アルキル基を結合点に接続する酸素原子を有するアルキル基：アルキル−Ｏ−を指す。アルキル基に関して、アルコキシル基は、Ｃ１〜６などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。アルコキシル基としては、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｉｓｏ−プロポキシ、ブトキシ、２−ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどが挙げられる。アルコキシ基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。
[85]本明細書で使用される場合、「アルケニルオキシ」または「アルケニルオキシル」という用語は、アルケニル基を結合点に接続させる酸素原子を有する、以上に定義したアルケニル基：アルケニル−Ｏ−を指す。アルケニルオキシル基は、Ｃ１〜６などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。アルケニルオキシル基は、範囲内に記載されている様々な置換基でさらに置換されていることが可能である。アルケニルオキシル基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。
[86]本明細書で使用される場合、「アルキルアミン」または「アルキルアミノ」という用語は、アルキル基を結合点に接続する窒素原子を有するアルキル基：アルキル−Ｎ−を指す。アルキル基に関して、アルコキシル基は、Ｃ１〜６などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。
[87]本明細書で使用される場合、「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。
[88]本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」という用語は、水素原子の一部または全部がハロゲン原子で置き換えられている、以上に定義したアルキルを指す。アルキル基に関して、ハロアルキル基は、Ｃ１〜６などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。例えば、ハロアルキルとしては、トリフルオロメチル、フルオロメチルなどが挙げられる。
[89]本明細書で使用される場合、「ハロアルコキシル」または「ハロアルコキシ」という用語は、水素原子の一部または全部がハロゲン原子で置換されているアルコキシル基を指す。アルキル基に関して、ハロアルコキシ基は、Ｃ１〜６などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。アルコキシ基は、１、２、３個、またはそれ以上のハロゲンで置換されていることが可能である。
[90]本明細書で使用される場合、「アルカノイル」という用語は、アルキル基を結合点に接続するカルボニル基を有するアルキル基：アルキル−Ｃ（Ｏ）−を指す。アルキル基に関しては、アルカノイルオキシル基は、Ｃ１〜４などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。例えば、アルカノイル基としては、アセチル、プロピオニル（propinoyl）、ブチリルなどが挙げられる。
[91]本明細書で使用される場合、「アルカノイルオキシル」という用語は、アルカノイル基を結合点に接続する酸素原子を有するアルカノイル基：アルキル−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を指す。アルキル基に関して、アルカノイルオキシル基は、Ｃ１〜４などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。例示的なアルカノイルオキシル基としては、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ（butryloxy）などが挙げられる。
[92]本明細書で使用される場合、「オキソ」という用語は、二重結合によって結合点に接続されている酸素原子（＝Ｏ）を指す。
[93]本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、好適な任意の数の環原子および好適な任意の数の環を有する芳香族環系を指す。アリール基は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６個の環原子などの好適な任意の数の環原子、および６〜１０、６〜１２、または６〜１４環員を含むことができる。アリール基は、縮合して二環式もしくは三環式基を形成し、または結合によって連結してビアリール基を形成する単環式アリール基とすることができる。代表的なアリール基としては、フェニル、ナフチルおよびビフェニルが挙げられる。他のアリール基としては、メチレン連結基を有するベンジルが挙げられる。いくつかのアリール基は、フェニル、ナフチルまたはビフェニルなど、６〜１２環員を有する。他のアリール基は、フェニルまたはナフチルなど、６〜１０環員を有する。いくつかの他のアリール基は、フェニルなど、６環員を有する。アリール基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。一部の実施形態において、アリール基は、１〜２つの置換基で置換されている。非限定的例として、好適な置換基としては、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＮＯ２、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８アルコキシが挙げられる。
[94]本明細書で使用される場合、「アラルキルオキシル」という用語は、アルキル、およびアリール基を結合点に接続する酸素原子を有する、以上に定義したアリール基：アリール−アルキル−Ｏ−を指す。アルキル基に関して、アラルキルオキシル基は、Ｃ１〜４などの好適な任意の数の炭素原子を有することができる。
[95]本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、５〜１２個の環原子を含み、環原子の１〜５個がＮ、ＯまたはＳなどのヘテロ原子である、単環式芳香族または縮合二環式芳香族環集合を指す。Ｂ、Ａｌ、ＳｉおよびＰを含むがこれらに限定されない追加のヘテロ原子も有用でありうる。−Ｓ（Ｏ）−や−Ｓ（Ｏ）２−などに限定されないが、ヘテロ原子も酸化されうる。ヘテロアリール基は、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、または３〜１２環員など、任意の数の環原子を含むことができる。１、２、３、４、もしくは５個、または１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、２〜３、２〜４、２〜５、３〜４、もしくは３〜５個など好適な任意の数のヘテロ原子がヘテロアリール基に含まれうる。ヘテロアリール基は、５〜９環員および１〜４個のヘテロ原子、または５〜９環員および１〜３個のヘテロ原子、または５〜６環員および１〜４個のヘテロ原子、または５〜６環員および１〜３個のヘテロ原子を有することができる。ヘテロアリール基としては、ピロール、ピリジン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン（１，２，３−、１，２，４−および１，３，５−異性体）、プリンなどの基を挙げることができる。ヘテロアリール基をフェニル環などの芳香族環系に縮合させて、インドールやイソインドールなどのベンゾピロール、キノリンやイソキノリンなどのベンゾピリジン、ベンゾピラジン（キノキサリン）、ベンゾピリミジン（キナゾリン）、フタラジンやシンノリンなどのベンゾピリダジン、ベンゾチオフェン、およびベンゾフランを含むがこれらに限定されないメンバーを形成することもできる。他のヘテロアリール基としては、ビピリジンなど、結合によって連結されるヘテロアリール環が挙げられる。ヘテロアリール基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。
[96]本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」は、３〜８個の環原子または指示された数の原子を含む飽和環集合を指す。シクロアルキルは、Ｃ３〜６、Ｃ４〜６、Ｃ５〜６、Ｃ３〜８、Ｃ４〜８、Ｃ５〜８、Ｃ６〜８など任意の数の炭素を含むことができる。シクロアルキル環としては、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロオクチルが挙げられる。シクロアルキル基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。
[97]本明細書で使用される場合、「シクロヘテロアルキル」は、３〜１２環員および１〜４個のＮ、ＯおよびＳのヘテロ原子を有する飽和環系を指す。Ｂ、Ａｌ、ＳｉおよびＰを含むがこれらに限定されない追加のヘテロ原子も有用でありうる。−Ｓ（Ｏ）−や−Ｓ（Ｏ）２−などに限定されないが、ヘテロ原子も酸化されうる。ヘテロシクロアルキル基は、３〜６、４〜６、５〜６、３〜８、４〜８、５〜８、６〜８、３〜９、３〜１０、３〜１１、または３〜１２環員など、任意の数の環原子を含むことができる。１、２、３、もしくは４個、または１〜２、１〜３、１〜４、２〜３、２〜４、または３〜４個など好適な任意の数のヘテロ原子がヘテロシクロアルキル基に含まれうる。ヘテロシクロアルキル基としては、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、アゼパン、アゾカン、キヌクリジン、ピラゾリジン、イミダゾリジン、ピペラジン（１，２−、１，３−および１，４−異性体）、オキシラン、テトラヒドロフラン、オキサン（テトラヒドロピラン）、オキセパン、チオラン（テトラヒドロチオフェン）、チアン（テトラヒドロチオピラン）、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ジオキソラン、ジチオラン、モルホリンなどの基が挙げられる。ヘテロシクロアルキル基は、置換されていなくても、置換されていてもよい。例えば、ヘテロシクロアルキル基は、とりわけ、Ｃ１〜６アルキルまたはオキソ（＝Ｏ）で置換されていることが可能である。
[98]本発明のいくつかの化合物は、不斉炭素原子（光学的中心）または二重結合を有する。ラセミ体、ジアステレオマー、幾何異性体、位置異性体および個々の異性体（例えば、別個の鏡像異性体）はすべて、本発明の範囲内で包含されるように意図されている。一部の実施形態において、本発明の化合物は、他の形を実質的に含まない特定の鏡像異性体、アノマー、またはジアステレオマーである。
[99]本明細書で使用される場合、「実質的に含まない」という用語は、別の形の１０％以下の量、好ましくは別の形の８％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、またはそれ以下の量を指す。一部の実施形態において、異性体は立体異性体である。
実施形態の詳細な説明
[100]一部の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）で表されるＡＬＰＫ１アゴニスト、および／またはその立体異性体、互変異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩を提供する
［式中、
Ａ１およびＡ２は独立して、Ｏ、Ｓおよび−Ｃ（Ｒ８Ｒ９）−から選択され、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよび置換または非置換アラルキルオキシル（任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基である）から選択され、Ａ１またはＡ２の少なくとも一方は、−Ｃ（Ｒ８Ｒ９）であり、Ａ１におけるＲ８またはＲ９は、Ａ２におけるＲ８またはＲ９と環化して、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ならびに３〜９環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキルを形成することができ、それぞれが、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基によって任意選択で置換されており、
Ｌ１およびＬ２は独立して、Ｏ、ＣＨ２、ＣＨＦおよびＣＦ２から選択され、
Ｌ３は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＣＨ（ＯＨ）であり、
Ｚ１およびＺ２は独立して、ＯおよびＳから選択され、
Ｗ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４−ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、アラルキルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択される）から選択される任意選択で置換されている基から選択され、Ｒ１０およびＲ１１の任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
Ｗ２は、Ｈ、またはＤ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルケニルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ１は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、または５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、Ｒ１は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１〜Ｃ４ジアルキルアミンおよび（Ｒ１３Ｒ１４）ＮＣＯ−から選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されており、Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択され、
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、Ｈ、Ｄ、ハロゲンおよび−ＯＨ、Ｒ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６個の環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択される）から選択され、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７の隣接基のいずれか２つは環化して、５〜９環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキルを形成することができ、それぞれが、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基によって任意選択で置換されている］。
[101]一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、式ＩＡの化合物および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩で表される
［式中、
Ｙ１およびＹ２は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよびアラルキルオキシルから選択される任意選択で置換されている基から選択され、任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、以上に定義された通りである］。
[102]一部の実施形態において、式ＩＡの化合物におけるＹ１およびＹ２は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、およびＣ１〜Ｃ４アルケニルオキシルから選択され、Ｒ１−Ｒ７、Ｌ１−Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、以上に定義した通りである。
[103]一部の実施形態において、式ＩＡの化合物におけるＹ１およびＹ２は独立して、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、およびＣ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルから選択され、Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、以上に定義された通りである。
[104]一部の実施形態において、式Ｉまたは式ＩＡの化合物は、以下に示す化合物であるＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（本明細書においてＨ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−Ｄ−ＡＤＰとも呼ばれる）も、
[105]そのジアステレオマーＬ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（本明細書においてＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬまたはＨ１ｂ−Ｌ−ＡＤＰとも呼ばれる）も含まない。
[106]一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、式ＩＢの化合物および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩で表される
［式中、
ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立して、０〜２からなる群から選択される整数であり、
Ｘ１およびＸ２は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよびアラルキルオキシルから選択される任意選択で置換されている基から選択され、任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、以上に定義された通りである］。
[107]一部の実施形態において、式ＩＢのｎ１およびｎ２はそれぞれ０である。
[108]一部の実施形態において、式ＩＢのＸ１およびＸ２は独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシルおよびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、以上に定義された通りである。
[109]一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、式ＩＣの化合物および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩で表される
［式中、
Ａ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−、ＯまたはＳであり、
Ｒ１〜Ｒ９、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、以上に定義された通りである］。
[110]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれＨである。
[111]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はそれぞれ独立して、−ＯＨ、およびＣ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル−からなる群から選択される。
[112]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｌ３はＯである。
[113]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｌ２はＯである。
[114]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｌ１は、ＯまたはＳである。
[115]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｗ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４−ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｒ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルおよびＣ１〜Ｃ４アルケニルオキシルから選択される）から選択される。
[116]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｗ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルから選択される。
[117]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｗ２は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルケニルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシおよびＣ１〜Ｃ４アルキルアミノである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである。
[118]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｗ２は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである。
[119]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、およびＩＣ中、Ｗ２は、−ＯＨおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２はＣ１〜Ｃ３アルキルである）から選択される１つの置換基で任意選択で置換されているＣ１アルキルである。
[120]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＣ中、Ｒ１は、
である。
[121]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＣ中、Ｒ１は、
である。
[122]一部の実施形態において、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢおよびＩＣ中、Ｒ１は、
である。
[123]一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、
および／またはそれらの立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩である。
[124]一部の実施形態において、式Ｉの化合物は、本出願の実施例に記載されている化合物である。
[125]本開示の化合物は、スキームＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶに記載されている一般プロセスならびに例示的実施形態に記載されている技法を使用して調製されうる。
[126]実施形態において、本開示は、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ヘプトース１，７ビスホスフェートまたは「ＨＢＰ」）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、およびＬ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体などの小さな有機分子の形、またはタンパク質などの大きな生体分子（例えば、ＡＬＰＫ１自体、またはＡＬＰＫ１キナーゼ活性を活性化するＡＬＰＫ１に対する抗体もしくはそのＦｃフラグメント）もしくはポリヌクレオチド（例えば、ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチド）の形態のＡＬＰＫ１アゴニストを提供する。
[127]実施形態において、本開示は、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ、好ましくはＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ、最も好ましくはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを投与することによってがんを処置する方法を提供する。がんを処置する方法のさらなる実施形態において、本開示は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストと、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体などのチェックポイントインヒビターおよび抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体などの免疫共刺激分子のアゴニストから選択される免疫チェックポイントモジュレーターを投与するステップを含む併用治療を提供する。いかなる特定の理論にも拘泥されることなく、本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌなどの同様の分子が、腫瘍浸潤性抗原提示細胞（ＡＰＣ）の抗原提示機能、ならびに腫瘍特異的Ｔ細胞増殖および分化を促進することができることを提唱する。さらに、これらの分子は、腫瘍細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現を増加することによって腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍への動員を増強することもできる。
[128]他の実施形態において、本開示は、組換えタンパク質の形もしくはＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチドの形で、または組換えＡＬＰＫ１タンパク質もしくはそれをコードするポリヌクレオチドを含む組成物の形で、ＡＬＰＫ１を対象に投与することまたはＡＬＰＫ１を細胞、例えば対象の細胞もしくは組織に導入することによって、ＡＬＰＫ１を活性化する方法を提供する。ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチドは、適切な調節配列、例えばプロモーター配列の制御下に置かれるとＡＬＰＫ１タンパク質に転写され、翻訳されるポリヌクレオチドである。そのようなポリヌクレオチドは、原核もしくは真核ＤＮＡに由来する配列、または合成ＤＮＡ配列、および上述のいずれかの組合せを含むことができる。
[129]好ましくは、投与または導入されたＡＬＰＫ１は、常時活性型ＡＬＰＫ１（またはそれをコードするポリヌクレオチド）である。「常時活性型の」という用語は、キナーゼ活性がリガンドの非存在下に活性であるＡＬＰＫ１タンパク質を指す。実施形態において、常時活性型ＡＬＰＫ１は、そのＮ末端ドメインに、リガンド非依存性オリゴマー化およびキナーゼ活性化を促進する活性化突然変異を含む。
[130]ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチドは、生細胞への遺伝子移入に適した核酸ベクターまたは他のビヒクルの形をとることができる。プラスミドは、染色体ＤＮＡとは関わりなく複製することができる染色体外ＤＮＡ分子である一般的なタイプの核酸ベクターである。プラスミドは、一本鎖または二本鎖プラスミドとすることができ、環状であることが多い。他の有用なビヒクルとしては、ＤＮＡまたはＲＮＡミニサークルおよびミニベクターを挙げることができる。ミニサークルは、部位特異的組換えを使用して親プラスミドから細菌ＤＮＡの大部分を除去することによって形成される。得られた環状ＤＮＡ分子は、移入されるべき所望の遺伝子配列、例えばＡＬＰＫ１配列、および少量のみの細菌ＤＮＡを含む。短い組込み配列を含む点以外は、ミニベクターも同様である。遺伝子移入のための上記その他の好適な非ウイルスＤＮＡベクターは、例えばＨａｒｄｅｅら、「Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎｏｎ−Ｖｉｒａｌ ＤＮＡ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｇｅｎｅｓ ２０１７ ８：６５に記載されている。
[131]ＡＬＰＫ１の遺伝子移入のための他の好適な核酸ベクターとしては、例えばアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターなどのウイルスベクターを挙げることができる。
[132]ＡＬＰＫ１をコードする核酸ベクターは、好適な技法、例えばウイルス送達システム、遺伝子銃の使用などの直接注射、または例えばリポソーム、ナノ粒子、ポリマー、電気穿孔、細胞圧搾、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、インペイルフェクション、およびハイドロダイナミック送達を含めて、非ウイルス送達システムを使用して標的細胞に導入されうる。例示的な非ウイルス送達システムおよびそれらの使用は、例えばＪｏｎｅｓら、「Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆｏｒ ｎｏｎｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｄｉｓｃｏｖ． Ｍｅｄ． ２０１５；１９：４４７−４５４に記載されている。
[133]本明細書に記載される方法の実施形態のいずれかによれば、ＡＬＰＫ１は、例えばポリリシン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、プロタミン、スペルミン、スペルミジン、およびプトレシンを含めて、高分子担体との複合体として、例えばウイルス粒子、リポソーム粒子、ナノ粒子の形を含めて、好適な製剤で投与される可能性がある。リポソーム粒子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびプラスミドの形を含めて、様々な形のＡＬＰＫ１を送達するために使用される可能性がある。実施形態において、ＡＬＰＫ１ポリヌクレオチドは、別の粒子または担体の非存在下にプラスミドＤＮＡとして投与される可能性がある。
[134]実施形態において、ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチドまたはその活性変異体は、遺伝子編集技法を使用して細胞に挿入される。遺伝子編集技法としては、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ−９に基づく技法が挙げられる。
[135]実施形態において、本開示は、対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
[136]実施形態において、本開示は、対象における標的抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、標的抗原は、細菌抗原、ウイルス抗原、または寄生虫の抗原など感染病原体の抗原とすることができる。実施形態において、抗原は腫瘍抗原である。これらの実施形態のいずれかによれば、本明細書に記載されるＡＬＰＫ１アゴニスト、ポリヌクレオチド、またはタンパク質は、感染病原体によって引き起こされる疾患もしくは障害の処置または予防、またはがんの処置、または例えばアルツハイマー病を含めて、ワクチン組成物で処置される可能性がある別の疾患もしくは障害の処置のためのワクチン組成物に対するアジュバントとして役立つことができる。実施形態において、抗原は、アルツハイマー病の処置におけるアミロイドタンパク質から選択される。実施形態において、抗原は、がんの処置における糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、ムチン１（ＭＵＣ１）、およびメラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥＡ３）から選択される。実施形態において、がんは、乳がん、卵巣がん、または前立腺がんから選択される。実施形態において、がんは、ＨＴＬＶ−１Ｔリンパ球向性白血病である。
[137]実施形態において、がんは、メラノーマであり、本明細書に記載されるＡＬＰＫ１アゴニスト、ポリヌクレオチド、またはタンパク質は、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）を用いた処置に対するアジュバントとして役立つことができ、またはＴ−ＶＥＣを用いた併用治療レジメンにおいて使用される可能性がある。
[138]感染症の処置または予防のための実施形態において、本明細書に記載されるＡＬＰＫ１アゴニスト、ポリヌクレオチド、またはタンパク質は、炭疽病、カリエス、シャガス病、デング熱、ジフテリア、エーリキア症、Ａ型もしくはＢ型肝炎、ヘルペス、季節性インフルエンザ、日本脳炎、ハンセン病、ライム病、マラリア、麻疹、ムンプス、髄膜炎および敗血症を含めて髄膜炎菌性疾患、オンコセルカ症（河川盲目症）、パータシス（百日咳）、肺炎球菌性疾患、ポリオ、狂犬病、風疹、住血吸虫症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、帯状疱疹、天然痘、梅毒、破傷風、結核、野兎病、ダニ媒介性脳炎ウイルス、腸チフス、トリパノソーマ症、黄熱病、ならびに内臓リーシュマニア症の処置または予防のためのワクチン組成物に対するアジュバントとして役立つことができる。
[139]感染症の処置または予防のための実施形態において、本明細書に記載されるＡＬＰＫ１アゴニスト、ポリヌクレオチド、またはタンパク質は、アデノウイルス、コクサッキーＢウイルス、サイトメガロウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エンテロウイルス７１、エプスタイン−バーウイルス、インフルエンザｂ型菌（Ｈｉｂ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、鉤虫、マールブルグウイルス、ノロウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、ロタウイルス、チフス菌、黄色ブドウ球菌、化膿レンサ球菌、水痘、ウエストナイルウイルス、ペスト菌、およびジカウイルスによって引き起こされる疾患または障害の処置または予防のためのワクチン組成物に対するアジュバントとして役立つことができる。
[140]上述の実施形態のいずれかによれば、方法は、ＡＬＰＫ１アゴニスト、好ましくはＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択される、またはＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニスト、最も好ましくはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含むワクチン組成物またはアジュバントを投与するステップを含むことができる。
[141]実施形態において、本開示は、対象の細胞におけるＮＦκＢ、ｐ３８、およびＪＮＫ細胞シグナル伝達経路の活性化による処置に適している（amendable to）疾患または障害を処置する方法であって、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。実施形態において、疾患または障害は、以下により詳細に記載される細菌、ウイルス、または寄生虫感染によって引き起こされ、例えばＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる疾患および障害が挙げられる。実施形態において、疾患または障害は、結核、髄膜炎、肺炎、潰瘍、および敗血症から選択される。実施形態において、疾患または障害は、鼻炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、関節炎、肥満症、放射線誘発炎症、乾癬、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、全身性狼瘡、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎（グレーブス病）、多発性硬化症、強直性脊椎炎および水疱性疾患から選択される。実施形態において、疾患または障害は、日光角化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、および円形脱毛症から選択される。
[142]実施形態において、本開示は、細菌、ウイルス、または寄生虫感染の処置または予防を必要とする対象における細菌、ウイルス、または寄生虫感染を処置または予防する方法であって、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
[143]実施形態において、方法は、細菌感染を処置または予防する方法である。実施形態において、細菌感染は、グラム陰性菌またはグラム陽性菌によって引き起こされる。実施形態において、細菌は、アシネトバクター・バウマンニイ（Acinetobacter baumanii）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatobacter actinomycetemcomitans）、バルトネラ・バシリフォルミス、バルトネラ・ヘンセラエ、バルトネラ・クインタナ、ビフィドバクテリウム属菌、ボレリア属菌、百日咳菌（Bortadella pertussis）、ブルセラ属菌種、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacis）、類鼻疽菌、カンピロバクター・ジェジュニ、カーディオバクテリウム・ホミニス、カンピロバクター・フィタス、肺炎クラミジア（Chlamydia pneumonia）、トラコーマクラミジア（Chlymydia trachomatis）、クロストリジウム・ディフィシレ、シアノバクテリア、エイケネラ・コローデンス（Eikennella corrodens）、エンテロバクター属菌、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faccium）、大腸菌、大腸菌Ｏ１５７（Escherichia coli 0157）、フランシセラ・ツラレンシス（Franceilla tularensis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘモフィルス・アフロフィルス、軟性下疳菌、パラインフルエンザ菌、ピロリ菌、キンゲラ・キンゲ、肺炎桿菌（Klebsiella pneumonia）、レジオネラ菌、レジオネラ・ニューモフィラ血清群1、レプトスピラ属菌（Leptospria）、モルガネラ・モルガニイ、淋菌、髄膜炎菌、プロテウス・ミラビリス、プロテウス・ブルガリス、プロテウス・ミクソファシエンス、プロビデンシア・レットゲリ、プロビデンシア・アルカリファシエンス、プロビデンシア・スチュアーティイ、緑膿菌、シュードモナス・パウシモビリス、プチダ菌、蛍光菌、シュードモナス・アシドボランス、リケッチア属菌、サルモネラ菌、チフス菌、パラチフス菌Ａ、Ｂ型チフス、サルモネラ・ダブリン、アリゾナ菌、サルモネラ・コレレスイス、霊菌、志賀赤痢菌（Schigella dysenteriae）、フレクスナー赤痢菌（Schigella flexneri）、ボイド赤痢菌（Schigella boydii）、ソンネ菌（Schigella sonnei）、トレポネーマ属菌、ステノトロホモナス・マルトフィリア、コレラ菌、ビブリオ・ミミカス、ビブリオ・アルギノリティカス、ビブリオ・ホリサエ、腸炎ビブリオ、ビブリオ・ブルニフィカスおよびペスト菌（Yersinia pestitis）からなる群から選択されるグラム陰性菌である。
[144]実施形態において、細菌は、放線菌属菌、炭疽菌、枯草菌、破傷風菌、ウェルシュ菌（Clostridium perfingens）、ボツリヌス菌、破傷風菌、ジフテリア菌、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、ブタ丹毒菌（Erysipelothrix ruhsiopathiae）、リステリア・モノサイトゲネス、らい菌、結核菌、マイコプラズマ属菌、ノカルディア属菌、プロピオニバクテリウム属菌（Propionibacerium）、緑膿菌、肺炎球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス、腐性ブドウ球菌、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumonia）、化膿レンサ球菌、およびストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus mutants）からなる群から選択されるグラム陽性菌である。
[145]実施形態において、方法は、ウイルス感染を処置または予防する方法である。実施形態において、ウイルス感染は、アデノ随伴ウイルス（Adeno-associated virus）、アイチウイルス（Aichi virus）、アルファウイルス（Alpha virus）、アレナウイルス（Arena virus）、アルボウイルス（Arobovirus）、オーストラリアコウモリリッサウイルス（Australian bat lyssavirus）、BKポリオーマウイルス（BK polyomavirus）、バンナウイルス（Banna virus）、ビルナウイルス（Birnavirus）、ボルナウイルス（Bornavirus）、ブニヤンベラウイルス（bunyamwera virus）、ブニヤウイルス・ラクロス（Bunyavirus La Crosse）、ブニヤウイルス・カンジキウサギ（Bunyavirus snowshoe hare）、カリシウイルス（Valicivirus）、オナガザルヘルペスウイルス（Cercopithecine herpesvirus）、チャンディプラウイルス（Chandipura virus）、チクングニアウイルス（Chikugunya virus）、コサウイルスA（Cosavirus A）、牛痘ウイルス（Coxpox virus）、コクサッキーウイルス（Coxsakievirus）、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus）、デングウイルス（Dengue virus）、ドーリウイルス（Dhori virus）、ジュグベウイルス（Dugbe virus）、ドゥーベンハーゲウイルス（Devenhage virus）、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス（Echovirus）、脳心筋炎ウイルス（Encephalomyocarditis virus）、エプスタイン-バーウイルス（Epstein-Barr virus）、ヨーロッパコウモリリッサウイルス（European bat lyssavirus）、フラビウイルス（Flavivirus）、ＧＢウイルス（GB virus）／Ｇ型肝炎ウイルス（Hepatitis G virus）、ハンタンウイルス（Hantaan virus）、ヘンドラウイルス（Hendra virus）、ヘパドナウイルス（hepadnavirus）、Ａ型肝炎ウイルス（Hepatitis A virus）、Ｂ型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス（Hepatitis E virus）、Ｄ型肝炎ウイルス（Hepatitis delta virus）、単純ヘルペスウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス（human adenovirus）、ヒトアストロウイルス（human astrovirus）、ヒトコロナウイルス（human coronavirus）、ヒトサイトメガロウイルス（human cytomegalovirus）、ヒトエンテロウイルス（human enterovirus） ６８、７０、ヒトヘルペスウイルス（human herpesvirus）１、ヒトヘルペスウイルス２、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（HPV-6、HPV-11）、ヒトスプマレトロウイルス（human spumaretrovirus）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス（human T-lymphotropic virus）、ヒトトロウイルス（human torovirus）、インフルエンザＡ型ウイルス、インフルエンザＢ型ウイルス、インフルエンザＣ型ウイルス、イスファハンウイルス（Isfaha virus）、ＪＣポリオーマウイルス（JC polyomavirus）、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス（Junin arenavirus）、カポジ肉腫（Kaposi’s sarcoma）（ＨＨＶ−８）、ＫＩポリオーマウイルス（KI polyomavirus）、クンジンウイルス（Kunjin virus）、ラゴスコウモリウイルス（Lagos bat virus）、ビクトリア湖マールブルグウイルス（Lake Vitoria marbugvirus）、ランガットウイルス（Langat virus）、ラッサウイルス（Lassa virus）、LMCウイルス、ロードスデールウイルス（Lordsdale virus）、跳躍病ウイルス（Louping ill virus）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（Lymphocytic choriomeningitis virus）、マチュポウイルス（Machupovirus）、マーマスフォレストウイルス（Marmath forest virus）、マヤロウイルス（Mayaro virus）、ＭＥＲＳコロナウイルス（MERS coronavirusコロナウイルス）、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス（Mengo encephalomycarditis virus）、メルケル細胞ポリオーマウイルス（Merkel cell polyomavirus）、伝染性軟属腫ウイルス（mlluscum contagiosum）、パルボウイルス（parvovirus）Ｂ１９、モコラウイルス（Mokola virus）、おたふく風邪ウイルス（Mumps virus）、マレー渓谷脳炎ウイルス（Murray valley encephalitis virus）、ニューヨークウイルス（New York virus）、ニパウイルス（Nipha virus）、ノーウォークウイルス（Norwalk virus）、オニョンニョンウイルス（O’nyong-hyong virus）、オーフウイルス（Orf virus）、オロプーシェウイルス（Oropouche virus）、オルトミクソウイルス（Orthomyxovirus）、パラインフルエンザウイルス（parainfluenza virus）、パラミクソウイルス（paramyxovaris）、パルボウイルス（parvovirus）、ピチンデウイルス（Phchinde virus）、ピコルナウイルス（picomavirus）、ポリオウイルス（poliovirus）、ポリオーマウイルス、ポックスウイルス（poxvirus）、プンタトロフレボウイルス（Punta toro phleboviris）、プーマラウイルス（Puumala virus）、ラブドウイルス（rabdovirus）、狂犬病ウイルス、レオウイルス（reovirus）、ライノウイルス（rhinovirus）、呼吸器多核体ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロサウイルス（Rosavirus）Ａ、ロスリバーウイルス（Ross river virus）、ロタウイルス（Rotavirus）Ａ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス（Rubella virus）、サギヤマウイルス（Sagiyama virus）、サリウイルス（Salivirus）Ａ、スナバエ熱シチリア型ウイルス（Sandfly fever sicillian virus）、サッポロウイルス（Sapporo virus）、セムリキ森林ウイルス（Semliki forest virus）、ソウルウイルス（Seoul virus）、サル泡沫状ウイルス（Simian foamy virus）、サルウイルス（Simian virus） ５、シンドビスウイルス（Sindbis virus）、サウサンプトンウイルス（Southampton virus）、セントルイス脳炎ウイルス（St. louis encephalitis virus）、ダニ媒介ポワッサンウイルス（Tick-borne powassan virus）、トガウイルス（togavirus）、トルクウイルス（Torque virus）、トスカーナウイルス（Toscana virus）、ウークニエミウイルス（Uukuniemi virus）、ワクシニアウイルス（Vaccina virus）、水痘帯状疱疹ウイルス（Varicella-zoster virus）、痘瘡ウイルス（Variola virus）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（Venezuelan equine encephalitis virus）、水疱性口内炎ウイルス（Vesicular stomatitits virus）、西部ウマ脳炎ウイルス（Western equine encephalitis virus）、UUポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス（Yaba monkey tumor virus）、ヤバ様疾患ウイルス（Yaba-like disease virus）、黄熱ウイルス（Yellow fever virus）、およびジカウイルスからなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。
[146]実施形態において、方法は、寄生虫感染を処置または予防する方法である。実施形態において、寄生虫感染は、アカントアメーバ属種、アメリカトリパノソーマ症（American tryppanosomiasis）、バラムチア・マンドリルリス（Balamuthia mandnillanis）、多型バベシア（Babesia divergenes）、フタゴバベシア、小形馬バベシア、ネズミバベシア（Babesia microfti）、バベシア・ダンカニ、大腸バランチジウム、ブラストシスチス属種、クリプトスポリジウム属種、シクロスポラ・カイエタネンシス、ジエントアメーバ・フラギリス、広節裂頭条虫、アマゾンリーシュマニア（Leishmania amazonesis）、フォーラーネグレリア（Naegleria fowderi）、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、プラスモディウム・オバレ・クルティシイ、四日熱マラリア原虫、リノスポリジウム・セーベリ、サルコシスティス・ボビホミニス、豚肉胞子虫（Sarcocystiss suihominis）、トキソプラズマ原虫、膣トリコモナス（Trichmonas vaginalis）、トリパノソーマ・ブルセイ、クルーズトリパノソーマ、および多頭条虫からなる群から選択される寄生虫によって引き起こされる。
[147]実施形態において、本開示は、対象におけるがんを処置する方法であって、ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法を提供する。がんを処置する方法の実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択され、好ましくはＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択され、最も好ましくはＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択される。がんを処置する方法のいくつかの実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬもしくはＨ１ｂ−ＡＤＰ、またはそのプロドラッグ、類似体もしくは誘導体である。がんを処置する方法のさらなる実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬもしくはＨ１ｂ−ＡＤＰ、またはそのプロドラッグ、類似体もしくは誘導体である。実施形態において、がんは、軟部組織肉腫、乳がん、頭頸部がん、メラノーマ、子宮頸がん、膀胱がん、血液悪性腫瘍、膠芽腫、膵がん、前立腺がん、結腸がん、乳がん、腎がん、肺がん、メルケル細胞癌、小腸がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、胃がん、消化管間質腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、肝がん、白血病、リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫から選択される。
[148]本明細書に記載される方法のいずれかの実施形態において、好ましくはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストは、例えばワクチンまたはワクチンアジュバントとの組合せを含めて、１種または複数の追加の治療剤または免疫モジュレーターと組み合わせて投与される可能性がある。実施形態において、１種または複数の追加の治療剤は、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ−１）受容体（ＣＤ２７９）、ＰＤ−１のリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（あるいはＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ）および４−１ＢＢリガンド、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（あるいはＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０）およびＯＸ４０リガンド、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７（あるいはＴＮＦＲＳＦ７、分化クラスター２７、ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ２５およびＴＮＦ様リガンド１Ａ（ＴＬ１Ａ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５（あるいはＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０）およびＣＤ４０リガンド、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（あるいはＴＮＦＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ）−リンホトキシンα（ＬＴＡ）、ヘルペスウイルス侵入媒介因子−（ＨＶＥＭ）−Ｂ−およびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）−ＣＤ１６０（あるいはＴＮＦＳＦ１４）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（ＳＩＧＬＥＣ）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）およびＩＣＯＳリガンド、Ｂ７−Ｈ３（Ｂ７ファミリー、あるいはＣＤ２７６）、Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１（ＶＴＣＮ１、あるいはＢ７−Ｈ４）、Ｔ細胞活性化のＶ型免疫グロブリンドメイン含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ヒト内在性レトロウイルスＨ型長末端反復結合タンパク質２（ＨＨＬＡ２）−膜貫通および免疫グロブリンドメイン含有２（ＴＭＩＧＤ２）、ブチロフィリン、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（あるいはＮＫＲ２Ｂ４、ＣＤ２４４）およびＢ細胞膜タンパク質（ＣＤ４８）、免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインと免疫受容抑制性チロシンモチーフドメインとを含むＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）およびポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）ファミリーメンバー、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）および白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）、ナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）およびナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＡ（ＮＫＧ２Ａ）、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）およびＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ（ＭＩＣＢ）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）、アデノシン−エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＣＤ３９）−５’−ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）およびＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、ホスファチジルセリン、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）およびインテグリン結合タンパク質（ＣＤ４７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ならびにニューロピリンを含めて、免疫チェックポイント分子のインヒビターもしくはアンタゴニスト、または免疫チェックポイント分子に対するワクチンである。
[149]本明細書に記載される方法のいずれかの実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、チェックポイントインヒビターまたは抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体などの免疫共刺激分子のアゴニストと組み合わせて投与される可能性がある。実施形態において、チェックポイントインヒビターは、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターであり、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択される。
[150]実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、１種または複数の免疫モジュレーターと組み合わせて投与される可能性がある。実施形態において、免疫モジュレーターは、ワクチンとすることができる。実施形態において、ワクチンは、上記の感染病原体に対するワクチンである。実施形態において、ワクチンは、がんワクチンである。実施形態において、がんワクチンは、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、ムチン１（ＭＵＣ１）、およびメラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥＡ３）から選択される腫瘍抗原を標的とする。
[151]実施形態において、１種または複数の免疫モジュレーターは、組換えタンパク質、例えば顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、またはＩＬ−２１とすることができる。
[152]がんの処置の実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療などのＴ細胞治療と組み合わせて投与される可能性がある。
[153]がんを処置する方法の実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターまたは抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体などの免疫共刺激分子のアゴニストと組み合わせて投与される可能性がある。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターまたは免疫共刺激分子のアゴニストと組み合わせて投与されるＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬおよびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはそのプロドラッグ、類似体もしくは誘導体である。実施形態において、がんは、進行メラノーマ、非小細胞肺がん、腎細胞癌、膀胱がん、肝がん、胃がん、結腸がん、乳がん、非ホジキンリンパ腫、前立腺がん、頭頸部がん、甲状腺がん、脳がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、多発性骨髄腫、子宮頸がん、および肉腫から選択され、方法は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターまたは免疫共刺激分子のアゴニストを対象に投与するステップをさらに含む。
[154]免疫応答をモジュレートする方法、または細菌、ウイルス、もしくは寄生虫感染を処置もしくは予防する方法の実施形態において、１種または複数の追加の治療剤は、免疫モジュレーター、例えば免疫チェックポイント分子のインヒビターまたはアンタゴニストとすることができる。そのような分子は、一般的に免疫系の主要な調節因子、例えば免疫応答の共刺激因子として働く。
[155]実施形態において、本開示は、ＡＬＰＫ１アゴニストを含むワクチン組成物またはワクチンアジュバントも提供する。本明細書に記載されるワクチン組成物は、１種または複数のアジュバントをさらに含んでもよい。
[156]実施形態において、本開示は、ＡＬＰＫ１アゴニストを含む医薬組成物も提供する。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、以上に論じたように、ＨＢＰなどの小さな有機分子の形、またはタンパク質（例えば、ＡＬＰＫ１自体、またはＡＬＰＫ１キナーゼ活性を活性化するＡＬＰＫ１に対する抗体またはそのＦｃフラグメント）もしくはポリヌクレオチド（例えば、ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチド）などの大きな生体分子の形をとることができる。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、ＨＭＰ−１ｂＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択される。実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、またはそのプロドラッグ、類似体もしくは誘導体である。
[157]実施形態において、本開示は、被験化合物のＡＬＰＫ１自己リン酸化に対する効果および／またはＡＬＰＫ１シグナル伝達の下流標的の活性化を測定することによって、免疫応答をモジュレートすることができる化合物を選択する方法であって、ＡＬＰＫ１と被験化合物をＡＴＰの存在下で、およびそれとは別にＡＴＰの非存在下で接触させ、次にＡＬＰＫ１シグナル伝達の１つまたは複数の下流標的のＡＬＰＫ１自己リン酸化および／または活性化を検出するためのアッセイを行うステップを含む方法も提供する。実施形態において、ＡＬＰＫ１と被験化合物を接触させるステップは、無細胞系または細胞ベースの系で行われる。
[158]本明細書に記載される方法の文脈において、「処置すること」という用語は、処置されている疾患、障害または病態に伴う１つまたは複数の症状の改善または安定化を指すことができる。「処置すること」という用語は、疾患、障害または病態の管理も包含することができ、対象が治療から導き出す有益な効果を指すが、基礎疾患、障害、または病態の治癒をもたらすものではない。本開示の文脈において、「予防」という用語は、疾患、障害、または病態の１つまたは複数の症状の再発、発生、進行または発症を予防することを指す。
[159]化合物または組成物の治療有効量が対象に投与される実施形態において、治療有効量は、所望の治療成績、例えば処置されている疾患、障害もしくは病態の１つもしくは複数の症状の改善もしくは安定化を達成するのに十分な量、または予防の文脈において、疾患、障害、もしくは病態の１つもしくは複数の症状の再発、発生、進行もしくは発症の予防を達成するのに十分な量である。
[160]実施形態において、治療有効量は、標準的治療と比べて少なくとも等価な治療的効果を達成するのに要する量である。標準的治療の例は、同じ疾患、障害または病態の処置に適応されるＦＤＡ承認薬である。
[161]本明細書に記載される方法のいずれかの文脈において、対象は、好ましくはヒトであるが、非ヒト脊椎動物とすることができる。他の実施形態において、非ヒト脊椎動物は、例えばイヌ、ネコ、齧歯類動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ）、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、アヒル、またはいずれか他の非ヒト脊椎動物とすることができる。
[162]実施形態において、ヒト対象は、成人、小児、または老年者から選択され、それらは、例えば米国食品医薬品局によって定義されるように、医師によって理解される用語である。
[163]実施形態において、本開示は、ＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物、またはＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチドを含む組成物、またはＡＬＰＫ１タンパク質を含む組成物、および１種または複数の賦形剤もしくは担体、好ましくは薬学的に許容される賦形剤もしくは担体を提供する。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内で、合理的なベネフィット／リスク比に相応して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしで、ヒトおよび動物の組織と接触させて用いるのに適した化合物、材料、組成物、担体、および／または剤形を指す。医薬組成物を調製するための賦形剤は、一般的にヒトまたは動物体に投与されるとき安全で無毒性であることが知られている賦形剤である。薬学的に許容される賦形剤の例としては、限定されるものではないが、無菌液体、水、緩衝食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）、油、洗浄剤、懸濁化剤、炭水化物（例えば、グルコース、ラクトース、スクロースまたはデキストラン）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸またはグルタチオン）、キレート剤、低分子量タンパク質、および上述のいずれかの好適な混合物が挙げられる。組成物で利用される特定の賦形剤は、製剤化されている化合物の化学安定性および溶解度ならびに所期の投与経路を含めて、様々な要因に依存する。
[164]医薬組成物は、バルクまたは単位剤形として提供されうる。投与の容易さおよび投与量の均一性のために医薬組成物を単位剤形で製剤化することが特に有利である。「単位剤形」という用語は、治療する対象に対して単位用量として適している物理的に不連続な単位を指す。各単位は、所望の治療的効果を生じるように算出された所定の量の活性化合物を、必要とされる医薬用担体と一緒に含む。単位剤形は、アンプル、バイアル、坐剤、糖衣錠、錠剤、カプセル、ＩＶ袋、またはエアロゾル吸入剤の単一ポンプとすることができる。
[165]治療的適用において、用量は、活性化合物の化学的および物理的特性、ならびに例えば年齢、体重、および併存疾患を含めて、対象の臨床的特徴に応じて変わることもある。一般に、用量は、治療有効量であるべきである。医薬組成物の有効量は、臨床医または他の資格のあるオブザーバーによって指摘される客観的に同定可能な改善、例えば障害、疾患または病態の症状の軽減を提供する量である。
[166]医薬組成物は、任意所望の経路（例えば、経肺、吸入、鼻腔内、経口、バッカル、舌下、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸膜内、髄腔内、経皮、経粘膜、直腸など）による投与の適したいずれかの形（例えば、液体、エアロゾル、溶液、吸入剤、ミスト、スプレー；または固体、粉末、軟膏、泥膏、クリーム、ローション、ゲル、パッチなど）をとることができる。実施形態において、医薬組成物は、カプセル、錠剤、バッカルの形、トローチ、ロゼンジ、および乳濁液、水性懸濁液、分散系または溶液の形態の経口液体を含めて、経口投与に許容される剤形の形をとるが、これらに限定されない。カプセルは、デンプン（例えば、トウモロコシ、ジャガイモまたはタピオカデンプン）、糖、人工甘味剤、結晶および微結晶セルロースなどの粉末セルロース、小麦粉、ゼラチン、ゴムなどを含めて、不活性な充填剤および／または希釈剤などの賦形剤を含むことができる。経口使用のための錠剤の場合、よく使用される担体としては、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も添加されうる。
[167]実施形態において、医薬組成物は、錠剤の形をとる。錠剤は、本明細書に記載される化合物の単位用量を、糖または糖アルコール、例えばラクトース、スクロース、ソルビトールまたはマンニトールなどの不活性な希釈剤または担体と一緒に含むことができる。錠剤は、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウムなどの非糖誘導希釈剤、またはセルロースもしくはその誘導体（メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、およびトウモロコシデンプンなどのデンプンをさらに含むことができる。錠剤は、ポリビニルピロリドンなどの結合剤および造粒剤、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロースなどの膨潤性架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアレート）、保存剤（例えば、パラベン）、抗酸化剤（例えば、ブチル化ヒドロキシトルエン）、緩衝剤（例えば、リン酸またはクエン酸緩衝液）、ならびにシトレート／ビカーボネート混合物などの発泡剤をさらに含むことができる。錠剤は、コーティングされた錠剤とすることができる。コーティングは、保護フィルムコーティング（例えば、ワックスまたはワニス）、または活性化合物の放出、例えば時限放出（摂取に続いて所定のラグ時間後に活性物の放出）もしくは消化管の特定の位置における放出を制御するように設計されたコーティングとすることができる。後者は、例えば商品名Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）で販売されるものなどの腸溶性フィルムコーティングを使用して達成されうる。
[168]錠剤製剤は、通常の圧縮、湿式造粒化または乾式造粒化方法により作製される可能性があり、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアゴム、ザンサンガム、クエン酸ナトリウム、複雑シリケート、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロース、ソルビトール、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプンおよび粉糖を含むがこれらに限定されない薬学的に許容される希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、表面改質剤（界面活性剤を含む）、懸濁化剤または安定剤を利用することができる。好ましい表面改質剤としては、非イオンおよびアニオン表面改質剤が挙げられる。表面改質剤の代表例としては、ポロキサマー１８８、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ワックス、ソルビタンエステル、コロイド状二酸化ケイ素、ホスフェート、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、およびトリエタノールアミンが挙げられるが、これらに限定されない。
[169]実施形態において、医薬組成物は、硬または軟ゼラチンカプセルの形をとる。この製剤においては、本発明の化合物は、固体、半固体、または液体の形をとることができる。
[170]実施形態において、医薬組成物は、非経口投与に適した無菌水性溶液または分散系の形をとる。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、病巣内および頭蓋内注射または注入技法を包含する。
[171]実施形態において、医薬組成物は、直接注射による投与、または静脈内注入のための無菌注入流体への添加による投与に適した無菌水性溶液または分散系の形をとり、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物、または１種もしくは複数の植物油を含む溶媒または分散媒を含む。溶液または懸濁液は、共溶媒または界面活性剤を使って水中で調製されうる。好適な界面活性剤の例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂肪酸およびＰＥＧ−脂肪酸モノおよびジエステル、ＰＥＧグリセロールエステル、アルコール−油エステル交換反応生成物、ポリグリセリル脂肪酸、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ステロールおよびステロール誘導体、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、糖およびその誘導体、ポリエチレングリコールアルキルフェノール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン（ＰＯＥ−ＰＯＰ）ブロックコポリマー、ソルビタン脂肪酸エステル、イオン性界面活性剤、脂溶性ビタミンおよびそれらの塩、水溶性ビタミンおよびそれらの両親媒性誘導体、アミノ酸およびそれらの塩、ならびに有機酸およびそれらのエステルと無水物が挙げられる。分散系は、例えば油中グリセロール、液状ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物で調製されることも可能である。
[172]実施形態において、本明細書に記載される化合物または組成物は、単剤治療または補助的治療として投与される可能性がある。実施形態において、本明細書に記載される化合物または組成物は、単独で、あるいは１種もしくは複数の追加の治療剤（すなわち、追加のＡＰＩ）、または治療と、例えばダイエットと運動の側面を含む、例えば治療レジメンの一部分として組み合わせて投与される可能性がある。実施形態において、本明細書に記載される方法は、ＡＬＰＫ１アゴニストの投与を一次治療として含む。他の実施形態において、ＡＬＰＫ１アゴニストの投与は、アジュバント療法である。どちらの場合も、本発明の方法は、１種もしくは複数の追加の治療剤および／または本明細書に記載される疾患、障害、もしくは病態の処置もしくは予防のための治療と組み合わせたＡＬＰＫ１アゴニストの投与を企図する。「治療（therapy）」および「治療（therapies）」という用語は、疾患、障害、または病態、それらの１つまたは複数の症状の予防、処置、管理または改善において使用されうるいずれかの方法、プロトコルおよび／または作用剤を指す。
[173]本開示は、本明細書に記載される方法で用いる医薬組成物を含むパッケージングおよびキットも提供する。キットは、ビン、バイアル、アンプル、ブリスターパック、および注射器からなる群から選択される１つまたは複数の容器を含むことができる。キットは、使用説明書の１つもしくは複数、１本もしくは複数の注射器、１つまたは複数のアプリケーター、または本明細書に記載される化合物もしくは組成物を再構成するのに適した無菌溶液をさらに含むことができる。
式Ｉの化合物および例示化合物の調製
[174]式Ｉの化合物（式中、Ｌ１はＯである）（化合物ＶＩ）は、スキームＩに例示される一般合成法により作製されうる。化合物ＩＩ（「ＰＧ」は保護基を指す）は、化合物Ｉ（ＭがＯＨである場合）と、塩基性条件下で保護ホスホロクロリデートまたは光延反応条件下で適切な保護ホスフェートとによって得られることが可能である。化合物ＩＩは、αおよびβ異性体の混合物として得られることが可能であり、シリカゲルクロマトグラフィーで分別されうる。Ｐｄ／ＣまたはＰｔＯ２によって触媒して、化合物ＩＩのβ異性体を１〜４気圧のＨ２下で脱保護して、化合物ＩＩＩを得る。化合物ＩＶとモルホリンまたは別の好適な塩基を、ｔ−ＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏなどの適切な溶液中ＤＣＣによりカップリングして、化合物Ｖを得る。化合物ＩＩＩと化合物Ｖを、ピリジンなどの適切な溶媒中テトラゾールなどの適切な触媒を用いて室温下で２４〜７２時間カップリングして、化合物ＶＩを得る。
[175]
[176]式Ｉの化合物（式中、Ｚ２はＳである）（Ｌ１はＯである、化合物ＸＩ）は、スキームＩＩに例示されるように合成されうる。化合物ＶＩＩＩ（「ＰＧ」は保護基を指す）は、化合物ＶＩＩと保護ジアルキルホスホロアミダイトをジクロロメタンのような好適な溶媒中−１０〜２５℃の温度で反応させることによって得られることが可能である。ＶＩＩＩとＩＩＩのカップリングをＤＭＦのような好適な溶媒中、不活性ガス系下に２５℃未満の温度で実施して、化合物ＩＸを得ることができ、その化合物を硫黄によって現場で酸化して、化合物Ｘを得る。化合物Ｘの脱保護により、最終化合物ＸＩを得る。
[177]
[178]式Ｉの化合物（式中、Ｚ２はＳである）（Ｌ１はＯである、化合物ＸＶ）は、スキームＩＩＩに例示される代替方法により合成されうる。化合物ＩＩＩは、イミダゾール塩をＤＭＦのような好適な溶媒中１０〜４０℃で不活性ガス系下に形成することによって活性化されうる。化合物ＶＩＩに、フェノキシホスホノイルオキシベンゼンとの反応によりリン酸基が導入される。０〜１０℃で硫黄を用いて酸化した後、化合物ＸＩＶが得られることが可能である。化合物ＸＩＩとＸＩＶを、ＤＭＦのような好適な溶媒中０〜４０℃のような穏やかな条件下で不活性ガス系下にルイス酸の触媒を用いてカップリングして、最終化合物ＸＶを得る。
[179]
[180]式Ｉの化合物（式中、Ｌ１はＣＨ２である）（化合物ＸＶＩＩＩ）は、スキームＩＶに例示される一般合成法により作製されうる。化合物Ｉ（ＭがＯＨである場合）と保護メチルジホスフェートの光延反応を３０〜５０℃で２〜４時間行って、化合物ＸＶＩ（「ＰＧ」は保護基を指す）を得る。化合物ＸＶＩを同様の条件下で化合物ＶＩとの第２の光延反応にかけて、化合物ＸＶＩＩを得る。化合物ＸＶＩＩの脱保護反応により、最終化合物ＸＶＩＩＩを得る。
[181]
[182]式Ｉの化合物（式中、Ｌ１はＣＦ２である）（化合物ＸＸＶ）は、スキームＶに例示される一般合成法により作製されうる。化合物ＸＩＸ（「ＰＧ」は保護基を指す）は、Ｎ−フルオロベンゼンスルホンイミド（ＮＦＳＩ）を好適な溶媒中、塩基性ＮａＨ条件下で−２０℃〜０℃の低反応温度から始めて使用することによって、保護ジフルオロメチルジホスフェート化合物ＸＸに変換される。化合物ＸＸの保護基の１つを選択除去することにより、化合物ＸＸＩを得る。化合物ＶＩＩは、ヒドロキシル基をＯＴｓ、ＯＭｓまたはハロゲンなどの脱離基に変換することによって、化合物ＸＸＩＩに変換される。化合物Ｉ（ＭがＯＨである場合）と化合物ＸＸＩの光延反応を３０〜５０℃で２〜４時間行うことにより、化合物ＸＸＩＩＩを得る。化合物ＸＸＩＩＩの脱保護により、化合物ＸＸＩＶを得る。化合物ＸＸＩＶと化合物ＸＸＩＩのカップリングをＣＨ３ＣＮなどの好適な溶媒中、塩基Ｂｕ４Ｎを用いて行うことにより、最終化合物ＸＸＶを得る。
式ＩＣの化合物（式中、Ａ１はＳである）（化合物ＸＸＸＩＩ）は、スキームＶＩに例示される一般合成法により作製されうる。化合物ＸＸＶＩと２−オキソエチルベンゾエートに似ている保護２−ヒドロキシアセトアルデヒドとの反応を好適な溶媒中で行うことにより、化合物ＸＸＶＩＩ（「ＰＧ」は保護基を指す）を２つの異性体の混合物として得る。あるいは、化合物ＸＸＶＩと２−オキソエチルベンゾエートの反応をＴＨＦなどの好適な溶媒中、有機塩基（例えば、トリエチルアミン）、酢酸フェニル、界面活性剤で処理したサブチリシン（ＳＴＳ）、およびＣａｒｌｓｂｅｒｇの存在下で行うことにより、Ｒ立体配置の化合物ＸＸＶＩＩを得る。ＳＴＳの代わりにＣＡＬ Ｂを使用すれば、Ｓ立体配置の化合物ＸＸＶＩＩを得ることができる（参考文献：Ｈｕ， Ｌら、Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０１３， ４９， １０３７６−１０３７８）。化合物ＸＸＶＩＩとＳｎＣｌ４の反応を好適な溶媒溶液中で行うことにより、化合物ＸＸＶＩＩＩを得る。化合物ＸＸＶＩＩＩの脱保護により、化合物ＸＸＩＸを得る。化合物ＸＸＩＸのホスホリネーションは、好適な溶媒中ＰＯＣｌ３およびピリジンと反応させて、化合物ＸＸＸを得ることによって実施されうる。化合物ＸＸＸを最終化合物ＸＸＸＩＩに変換する残りの反応は、スキームＩに記載されているのと同じ反応手順によって行われうる。
[183]表１に、本明細書に記載される手順に従って調製された例示化合物を記載する。
式（Ｉ）の代表的な化合物の合成：
[184]感湿反応はすべて、Ａｒ下で注射器−セプタムキャップ技法を使用して行った。分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲル６０ Ｆ ２５４プレート（Ｑｉｎｄａｏ、厚さ０．２５ｍｍ）で行った。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを記録し、化学シフトは、内部テトラメチルシランまたは重水素化溶媒の残留プロトンに対する値（ｐｐｍ）として報告した。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを記録し、化学シフトは、内部テトラメチルシランまたは重水素化溶媒の残留プロトンに対するδ値（ｐｐｍ）として報告した。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルを記録し、化学シフトは、外部８５％リン酸に対するδ値（ｐｐｍ）として報告した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、以下の通り要約される：化学シフト、多重度（ｂｒ＝ブロード、ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線）、プロトン数、および結合定数。
化合物１
[185]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[186]ステップ１．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロフラン−３−オールの調製
アデノシン（４０ｇ、１４９．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５００ｍＬ）懸濁液を−５℃に冷却した。ＮａＨ（８．０ｇ、２００．０ｍｍｏｌ、純度６０％）を混合物に添加し、混合物を−５℃で１時間撹拌した。次いで、ＰＭＢ−Ｃｌ（２３．０ｍＬ、１６８．８ｍｍｏｌ）を、そのような温度で１時間の間に混合物に滴下して添加した。添加後に、反応物を１５℃で１２時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）およびＥＡ（１００ｍＬ）を残渣に添加し、有機層を分離した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：２０／１から１０／１）により精製して、所望の化合物と異性体の混合物（27g、収率:46.1%）を白色固体として得た。その混合物をさらに分離することなく次のステップで使用した。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.38 - 8.29 (m, 1H), 8.15 - 8.06 (m, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 7.11 - 6.91 (m, 2H), 6.88 - 6.69 (m, 2H), 6.08 - 5.90 (m, 1H), 5.58 - 5.44 (m, 1H), 5.29 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.71 - 4.50 (m, 2H), 4.40 - 3.99 (m, 3H), 3.76 - 3.68 (m, 3H), 3.68 - 3.63 (m, 1H), 3.60 - 3.47 (m, 1H).
[187]ステップ２．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−オールの調製
上記ステップ１の生成物およびその異性体の混合物（１０ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（２．５ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）およびＴｒｔＣｌ（１６．４ｇ、５９．０ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、反応物を８０℃で４時間撹拌した。ＨＣｌ（１Ｎ、２０ｍＬ）およびＥＡ（５０ｍＬ）を混合物に添加し、有機層を分離した。有機層をＨＣｌ（１Ｎ、２０ｍＬ×３回）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ：２０／１から１／１）により精製して、所望の生成物とその異性体の混合物（合計１８ｇ、収率：７７．２％）を白色固体として得た。その混合物をさらに分離することなく次のステップに使用した。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.40 - 8.27 (m, 1H), 7.86 - 7.77 (m, 1H), 7.57 - 7.46 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 11H), 7.30 - 7.16 (m, 22H), 6.88 - 6.74 (m, 2H), 6.16 - 5.91 (m, 1H), 5.70 - 5.30 (m, 1H), 5.01 - 4.44 (m, 1H), 4.53 - 4.23 (m, 1H), 4.19 - 4.08 (m, 1H), 3.72 - 3.66 (m, 3H), 3.30 - 3.07 (m, 2H).
[188]ステップ３．化合物（２Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（トリチルオキシ）メチル）ジヒドロフラン−３（２Ｈ）−オンの調製
上記ステップ２からの生成物とその異性体の混合物（２．６ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、ＤＭＰ（２．５４ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）およびｔ−ＢｕＯＨ（５０３．９ｍｇ、６．８０ｍｍｏｌ、６５０．１７μＬ）を添加した。混合物を２５℃で４時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３／飽和ＮａＨＣＯ３（１／１、７００ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、水性層をＤＣＭ（１００ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、残渣を得た。所望の生成物および異性体（２．７９ｇ、粗製）を淡黄色固体として得た。それをさらに精製することなく次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８７０．４。
[189]ステップ４．化合物（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−オールの調製
ＮａＢＨ４（５６５．３ｍｇ、１４．９４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＯ２Ｈ（２５ｍＬ）溶液を１５℃で１０分間撹拌し、次いで上記ステップ３の生成物とその異性体の混合物（２ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）に添加した。混合物を２５℃で２０時間撹拌した。ＥｔＯＨ（５０ｍＬ×２回）を用いて、反応混合物を蒸発し、次いでＤＣＭ（４０ｍＬ×３回）とＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で分配し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、残渣を得た。２つの異性体の生成物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から２：１）により分離した。所望の生成物（８２４ｍｇ、収率：４０．８％）を白色固体として得た。さらに異性体（２０３ｍｇ、収率：１０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８７２．４。所望の生成物：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.85 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.44 - 7.09 (m, 32H), 7.03 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.73 (s, 1H), 4.63 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.28 - 4.16 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.56 - 3.44 (m, 2H).
[190]ステップ５．９−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−４−フルオロ−３−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−Ｎ−トリチル−９Ｈ−プリン−６−アミンの調製
上記ステップ４の出発生成物（８２４ｍｇ、９４４．９４μｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、ピリジン（７４７．４ｍｇ、９．４５ｍｍｏｌ、７６２．７０μＬ）およびＤＡＳＴ（９１３．９ｍｇ、５．６７ｍｍｏｌ、７４９．０８μＬ）を添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から２：１）により精製した。所望の生成物（２１８ｍｇ、収率：２３．７％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８７４．４ 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.91 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.42 - 7.15 (m, 30H), 7.09 (br d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.99 - 6.93 (m, 1H), 6.74 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.07 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.18 - 4.89 (m, 2H), 4.60 - 4.48 (m, 2H), 4.48 - 4.36 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.48 (dd, J = 4.6, 10.5 Hz, 1H), 3.30 (dd, J = 4.2, 10.5 Hz, 1H).
[191]ステップ６．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−オールの調製
[192]ＣＨＣｌ３中の上記ステップ５の生成物（１．２ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（０．５１ｍＬ、５当量）を室温で添加した。溶液をこの温度で２時間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮して、所望の生成物を油性残渣（３６０ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）として得た。それをさらに精製することなく次のステップに使用した。
[193]ステップ７．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−４−フルオロテトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[194]ピリジン（１０ｍＬ）中の上記ステップ６の生成物（３６０ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（１６ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。溶液を５０℃に加熱した。この温度で、ＴＢＤＰＳＣｌ（７３４ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をこの温度で終夜撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、ＳＭが残っていないことを示した。溶液をＡｃ２Ｏ（６３３μＬ、６．７ｍｍｏｌ）に滴下して添加した。この温度で５時間撹拌した後、ＬＣ−ＭＳは、所望の化合物が形成されたことを示した。反応物をＤＣＭと水に分配した。抽出液を合わせ、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、所望の生成物を油性残渣（７９２ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）として得た。それをさらに精製することなく次のステップに使用した。
[195]ステップ８．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[196]ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の上記ステップ７の生成物（７９２ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ、２．００ｍＬ、２．００ｍｍｏｌ）を室温で添加した。終夜撹拌した後、反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。反応物をＤＣＭと水に分配した。抽出液を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。それを、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０：１）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（２５４ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を無色油として得た。
[197]ステップ９．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−５−（２−（ビス（ベンジルオキシ）ホスホリル）エチル）−４−フルオロテトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[198]２５ｍＬの丸底フラスコに、窒素雰囲気下で上記ステップ８の生成物（２５４ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）および１Ｈ−イミダゾール−４，５−ジカルボニトリル（１７０ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を投入した。乾燥ＤＣＭおよびＭｅＣＮを添加した（ＤＣＭ：ＭｅＣＮ＝５：１、ｖ／ｖ）。得られた溶液を氷水浴中で冷却し、ジベンジルジイソプロピルホスホロアミダイト（４９７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に温めた後、もう１〜２時間撹拌した。反応物を氷水浴中で再び冷却し、ｍＣＰＢＡ（２９１ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）をそのまま添加した。それを室温に温めた後、飽和ＮａＨＣＯ３（水性）を添加して、反応物をクエンチし、有機相を分離した。水相をＤＣＭで２回抽出した。抽出液を合わせ、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。それを、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（３０：１）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（４４１ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を得た。
[199]ステップ１０．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−５−（（ホスホノオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[200]ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中の上記ステップ９の生成物（４４１ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）とＰｄ／Ｃ（１３２ｍｇ）の混合物を、Ｈ２下に室温で撹拌した。終夜撹拌した後、混合物を、ＭｅＯＨで孔径０．４５μｍのＡｄｖａｎｔｅｃ ＰＴＦＥメンブランフィルターに通して濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、所望の生成物（２３３ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を得た。それを、さらに精製することなく次のステップに使用した。
[201]ステップ１１．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチル水素モルホリノホスホネートのモルヒネＤＣＣ塩の調製
[202]ＤＣＣ（４４５ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）のｔ−ブチルアルコール（５ｍＬ）溶液を、ｔ−ＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏの混合物（１：１、１０ｍＬ）中の上記ステップ１０の生成物（２３３ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）および精製モルホリン（１８８ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の還流溶液に滴下して添加した。添加を約３時間で完了し、混合物をＴＬＣが反応の完了を示すまで終夜還流した。混合物を室温に冷却した。濾液をｔ−ＢｕＯＨの大部分が除去されるまで蒸発させ、残っている水性相をエーテルで３回抽出した。次いで、透明な水性溶液を凍結乾燥により蒸発乾固して、所望の生成物を得た。それを、さらに精製することなく次のステップに使用した。
[203]ステップ１２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（ジフェノキシホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（４００ｍｇ、１当量；Ｓｈｉｎｓｕｋｅ Ｉｎｕｋｉら、Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ． ２０１７， １９：３０７９−３０８２；Ａｌｌａ Ｚａｍｙａｔｉｎａら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２００３， ３３８：２５７１−２５８９）およびＤＭＡＰ（２６５．１ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ、２．２８当量）の溶液に、ジフェニルホスホロクロリデート（６００．７ｍｇ、２．３５当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を注射器で１時間の間に添加した。次いで、反応物を２５℃で２時間撹拌した。出発物質は、ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝２：１、３回）で検出して一部残留させた。ＤＭＡＰ（１．２ｇ）を添加し、次いでジフェニルホスホロクロリデート（０．６ｇ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液を系に滴下して添加し、次いで２５℃で２時間撹拌した。反応物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮して、残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１から１：１）により精製して、異性体（α立体配座、７０ｍｇ、収率：１１．３％）および所望の生成物（β立体配座、４００ｍｇ、収率：６４．４％）を両方とも無色油として得た。β立体配座：1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.12 (m, 10H), 5.70 - 5.61 (m, 1H), 5.44 (br d, J=1.2 Hz, 1H), 5.32 - 5.21 (m, 2H), 5.12 - 5.03 (m, 1H), 4.44 - 4.35 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 2.15 - 1.94 (m, 15H).α立体配座：1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.30 (m, 4H), 7.29 - 7.15 (m, 6H), 5.85 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 5.41 - 5.26 (m, 3H), 5.19 - 5.11 (m, 1H), 4.37 (dd, J=3.7, 12.0 Hz, 1H), 4.29 - 4.17 (m, 2H), 2.23 - 1.96 (m, 15H).
[204]ステップ１３．２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[205]ＥｔＯＡｃ（４ｍＬ）およびＥｔＯＨ（４ｍＬ）中の上記ステップ１２の生成物（４００ｍｇ、１当量）からなる溶液をＰｔＯ２（６９．６０ｍｇ、０．５当量）と混合し、１気圧のＨ２雰囲気下に２５℃で１６時間撹拌した。濾過し、濾液を濃縮して、残渣を得た。所望の生成物（３００ｍｇ、収率９７．８１％）を無色油として得た。生成物は、そのまま次のステップで使用するのに十分な純度を有するものであった。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 5.52 - 5.44 (m, 2H), 5.25 - 5.18 (m, 3H), 4.44 (dd, J=3.4, 12.0 Hz, 1H), 4.27 (dd, J=7.2, 12.1 Hz, 1H), 4.01 - 3.95 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.10 - 2.02 (m, 9H), 1.98 - 1.94 (m, 3H).
[206]ステップ１４．２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートトリエチルアンモニウム塩の調製
[207]ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の上記ステップ１３の生成物（３００ｍｇ、１当量）およびＥｔ３Ｎ（０．２ｍＬ、２．４０当量）の溶液を２５℃で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、トリエチルアンモニウム塩の所望の生成物（３４０ｍｇ、収率：８０．６９％、２Ｅｔ３Ｎを含む）を白色固体として得た。生成物をそのまま次のステップで使用した。
[208]ステップ１５．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[209]上記ステップ１４の生成物（２００ｍｇ、１当量）と上記ステップ９の生成物の化合物のモルヒネＤＣＣ塩（３５７．１７ｍｇ、３当量、ＤＣＣ−モルホリン）の混合物を、乾燥ピリジン（５ｍＬ×３回）で乾燥した。次いで、残渣をピリジン（３ｍＬ）に溶解し、１Ｈ−テトラゾール（９９．６８ｍｇ、５当量）を添加し、２５℃で３２時間撹拌した。反応物を濃縮して、残渣を得た。それを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ：Ｈ２Ｏ＝１：０：０：０から５０：５０：１：１）により精製して、粗生成物（３００ｍｇ）を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ、条件：水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ、３％から３３％）により精製して、所望の生成物の純度の低い方の部分（１５ｍｇ、収率：３．９％、純度６１．６％）を白色固体として、また所望の生成物の純度の高い方の部分（１８ｍｇ、収率：７．１６％、純度９４．１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３２．４。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 8.71 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 6.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.61 - 5.56 (br. s, 2H), 5.34 (br d, J=4.2 Hz, 0.5H ), 5.25 - 5.15 (m, 3.5H), 4.61 - 4.50 (m, 1H), 4.45 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.21 (m, 3H), 3.95 - 3.90 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.08 - 2.02 (m, 6H), 1.99 (s, 3H), 1.91 (s, 3H).
化合物２
[210]アデノシン−３’−フルオロ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェート
[211]ステップ１．アデノシン−３’−フルオロ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[212]上記の化合物１の調製におけるステップ１５の生成物の化合物（１５．０ｍｇ、１当量）を（ＴＥＡＢ（０．１Ｍ）：ＭｅＯＨ：Ｅｔ３Ｎ＝４：３：０．０５）からなる溶媒３ｍＬに溶解し、−２８℃で４２時間撹拌した。次いで、反応物を凍結乾燥器により凍結乾燥して、白色固体を得た。得られた固体を、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ−Ｃ１８、トリエチルアンモニウムアセテート緩衝液（ｐＨ６．８）／２％アセトニトリルを用いた定組成溶離）および蒸留Ｈ２Ｏで溶離するＧ２５ Ｓｅｐｈａｄｅｘクロマトグラフィーにより順次精製して、所望の化合物（６．１ｍｇ、収率：５４．４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：６１９．８。
化合物３
[213]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[214]ステップ１．化合物１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２−（トリチルオキシ）エタン−１−オールの調製
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の化合物１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エタン−１，２−ジオール（１７．４ｇ、３５．２ｍｍｏｌ；Ｔｉｅｈａｉ Ｌｉら、（２０１４） Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２２：１１３９−１１４７；Ｓｈｉｎｓｕｋｅ Ｉｎｕｋｉら、Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ．（２０１７）， １９：３０７９−３０８２）、ＴＥＡ（７．１ｇ、７０．４ｍｍｏｌ、９．８ｍＬ）およびＤＭＡＰ（２．２ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴｒｔＣｌ（１９．６ｇ、７０．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５０℃で２０時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）でクエンチし、次いで分離した。水性層をＤＣＭ（６０ｍＬ×２回）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製した。所望の化合物（２４．６ｇ、収率：９５％、純度９３％）を淡黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７８２．４。
[215]ステップ２．化合物１−（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２−（トリチルオキシ）エタン−１−オンの調製
ＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の上記ステップ１から得られた生成物（２４．６ｇ、３３．４ｍｍｏｌ）、ＮＭＯ（１９．６ｇ、１６６．９ｍｍｏｌ、１７．６ｍＬ）および４Ａモレキュラーシーブ（２４ｇ、３３．４ｍｍｏｌ）の混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。次いで、ＴＰＡＰ（１．１７ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を２５℃で４時間撹拌した。混合物を濾過し、ＤＣＭ（５０ｍＬ×３回）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から４：１）により精製した。所望の生成物（２１．７ｇ、収率：８５．６％）を明黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７５７．３。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ7.45-7.25 (m, 30H), 4.72-4.52 (m, 6H), 4.20-4.07 (m, 4H), 3.99 (s, 2H), 3.68-3.67 (m, 1H), 3.22 (s, 3H).
[216]ステップ３．（Ｒ）−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−２−（トリチルオキシ）エタン−１−オールの調製
上記ステップ２から得られた生成物（２１．７ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、Ｚｎ（ＢＨ４）２（０．５Ｍ、６６．７ｍＬ）を０℃で０．５時間滴下して添加した。反応物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で注意深くクエンチした。有機層を酢酸エチル（１５０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から７：１）により精製した。所望の化合物（１９．５ｇ、収率：８８．２７％、純度９８．５％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７５９．３。
[217]ステップ４．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−２−（（Ｓ）−１−フルオロ−２−（トリチルオキシ）エチル）−６−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピランの調製
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の上記ステップ３の生成物の化合物（９．５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＡＳＴ（１０．４ｇ、６４．５ｍｍｏｌ、８．５ｍＬ）およびピリジン（１０．２ｇ、１２８．９ｍｍｏｌ、１０．４ｍＬ）を０℃で添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）で注意深くクエンチした。混合物をＤＣＭ（１００ｍｌ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、２Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１２：１）により精製した。所望の生成物（４．２ｇ、収率：４４．１％）を明黄色油として得た。1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.38-7.18 (m, 30H), 4.92-4.61 (m, 2H), 4.53-4.51 (m, 6H), 4.06-4.02 (m, 1H), 3.77-3.75 (m, 1H), 3.65-3.51 (m, 3H), 3.14-3.06 (m, 1H), 2.96 (s, 3H).
[218]ステップ５．化合物（Ｓ）−２−フルオロ−２−（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）−６−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エタン−１−オールの調製
上記ステップ４の生成物の化合物（５．８ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１３．９ｇ、１２１．６ｍｍｏｌ、９ｍＬ）を添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。混合物に、飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）を添加した。混合物をＤＣＭ（１００ｍｌ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：０から１：１）により精製した。所望の化合物（３．２ｇ、収率：７９．７％、純度９６．２％）を無色油として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５１９．１。1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.35-7.28 (m, 15H), 4.99-4.96 (m, 2H), 4.73-4.65 (m, 4H), 4.60 (s, 2H), 4.14-4.10 (m, 3H), 3.77-3.76 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.60-3.57 (m, 1H), 3.27 (s, 3H). 19F NMR δ -207.84.
[219]ステップ６．化合物（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−３，４，５−トリス（ベンジルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルアセテートの調製
ＨＯＡｃ（１５ｍＬ）およびＡｃ２Ｏ（１５ｍＬ）中の上記ステップ５の生成物の化合物（３．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈ２ＳＯ４（２．８ｇ、２７．６ｍｍｏｌ、１．５ｍＬ、純度９８％）を添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応物を０℃にてメタノール（１５ｍＬ）でクエンチした。溶媒の大部分を真空下で除去した。３０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を添加し、混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。所望の化合物（３．９ｇ、粗製）を明黄色油として得た。それを、そのまま次のステップに使用した。
[220]ステップ７．化合物（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルアセテートの調製
メタノール（２０ｍＬ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）およびＨＯＡｃ（０．５ｍＬ）中の上記ステップ６の生成物の化合物（３．９ｇ、６．９ｍｍｏｌ）の混合物に、２５℃でＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（０．６ｇ、純度２０％）を添加した。混合物を、水素（５０ｐｓｉ）下に２５℃で３２時間撹拌した。混合物をセライトに通して濾過し、メタノール（５０ｍＬ×３回）で洗浄した。濾液を回収し、真空下で濃縮した。所望の化合物（２．５ｇ、粗製）を明黄色油として得た。それを、そのまま次のステップに使用した。
[221]ステップ８．化合物（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテートの調製
上記ステップ７の生成物の化合物（２．５ｇ、８．４ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、Ａｃ２Ｏ（４．３ｇ、４２．２ｍｍｏｌ、４．０ｍＬ）およびＤＭＡＰ（５１５．５ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。反応物をメタノール（１５ｍＬ）でクエンチした。ピリジンの大部分を真空下で除去した。１Ｎ ＨＣｌ（２０ｍＬ）を残渣に添加した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、２Ｎ ＨＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１から３：２）により精製した。所望の化合物（１．６ｇ、収率：４４．６％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：４４５．０。1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 6.07 (s, 1H), 5.54-5.49 (m, 1H), 5.34-5.31 (m, 1H), 5.24-5.22 (m, 1H), 4.70-4.56 (m, 1H), 4.38-4.24 (m, 2H), 3.98-3.89 (m, 1H), 2.16 (d, J = 6.4Hz, 6H), 2.06 (d, J = 6.0Hz, 6H), 1.99 (s, 3H).
[222]ステップ９．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
ステップ８の生成物の化合物（１．６ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に、ヒドラジン酢酸（５２０．１ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で２０分撹拌した。反応物をＨ２Ｏ（１５ｍＬ）でクエンチした。混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ×３回）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１から１：１）により精製した。所望の化合物（８６０ｍｇ、収率：６０．１％）を無色油として得た。
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 5.52-5.47 (m, 1H), 5.42-5.39 (m, 1H), 5.26-5.25 (m, 2H), 4.75-4.60 (m, 1H), 4.39-4.31 (m, 2H), 4.14-4.05 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).
[223]ステップ１０．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（ジフェノキシホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の［クロロ（フェノキシ）ホスホリル］オキシベンゼン（２．１ｇ、７．７ｍｍｏｌ、１．６ｍＬ）を、２５℃でＤＣＭ（５０ｍＬ）中の上記ステップ９の生成物の化合物（９７０ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１．６ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液に３．５時間以内で滴下して添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）でクエンチした。混合物をＤＣＭ（８０ｍｌ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１から３：２）により精製した。所望の化合物（１．２１ｇ、収率：７７．５％、純度１００％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６５８．１。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.35-7.13 (m, 10H), 5.54 (d, J = 6.8Hz, 1H), 5.50-5.46 (m, 2H), 5.07-5.04 (m, 1H), 4.72-4.57 (m, 1H), 4.30-4.26 (m, 1H), 4.23-4.19 (m, 1H), 3.74-3.65 (m, 1H), 2.10(s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.98 (s, 3H). 19F NMR δ-205.5.
[224]ステップ１１．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
エタノール（１０ｍＬ）および酢酸エチル（１０ｍＬ）中の上記ステップ１０の生成物の化合物（６００ｍｇ、９７９．６μｍｏｌ）の混合物に、ＰｔＯ２（１５０ｍｇ）を添加した。混合物を、水素（１５ｐｓｉ）下に２５℃で２０時間撹拌した。反応混合物をセライトに通して濾過し、メタノール（２０ｍＬ×４回）で洗浄した。濾液を回収し、真空下で濃縮した。所望の化合物（４５０ｍｇ、粗製）を白色固体として得た。化合物をそのまま次のステップに使用した。
[225]ステップ１２．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートトリエチルアミン塩の調製
ステップ１１の生成物の化合物（９８０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解した。ＴＥＡ（６４６．３ｍｇ、６．４ｍｍｏｌ、８８９μＬ）を混合物に添加し、混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。所望の塩（９５０ｍｇ、収率：９６．９％）を明黄色フォームとして得た。化合物をそのまま次のステップに使用した。
[226]ステップ１３．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
上記ステップ１２の生成物の化合物（３００ｍｇ、６５１．８μｍｏｌ、ＴＥＡ塩）および化合物ＡＭＰ−モルホリデート（４’−モルホリン−Ｎ’Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボキサミジニウム塩）（６９３．９ｍｇ、９７７．６μｍｏｌ）をピリジン（４ｍＬ）で２回脱水した。次いで、１Ｈ−テトラゾール（２２８．３ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ、２８９．０μＬ）を添加し、残渣をピリジン（５ｍＬ）に溶解した。混合物を窒素下に２５℃で４０時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。残渣をメタノール（３０ｍＬ）に溶解した。混合物を濾過し、固体を廃棄した。濾液を真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ：メタノール：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ＝２０：１：０．０５から１：１：０．０５）により精製して、２４０ｍｇの粗生成物を無色油として得た。粗製化合物を分取ＨＰＬＣにより精製した（中性条件、カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１０分）。所望の化合物（７５．１ｍｇ、収率：１４．５％、純度９９．２％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７９０．１。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.60 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.08 (d, J = 6.8Hz, 1H), 5.57 - 5.55 (m, 2H), 5.36 - 5.21 (m, 2H), 4.74 - 4.72 (m, 1H), 4.64 - 4.37 (m, 4H), 4.23 - 4.22 (m, 3H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.91 (s, 3H).
化合物４
アデノシン−５’−（Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−６−フルオロ−ヘプトピラノシル）ジホスフェート
[227]ステップ１．化合物アデノシン−５’−（Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−６−フルオロ−ヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
上記の化合物３の調製におけるステップ１３の生成物の化合物（２４ｍｇ、３０．４μｍｏｌ、１当量）をＴＥＡＢ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（０．３ｍＬ、ｖ／ｖ／ｖ＝１／１／１）に溶解した。混合物を−２８℃で４８時間撹拌した。反応物をＣＨ３ＣＮ（２ｍＬ）で希釈し、凍結乾燥した。所望の化合物（１５．３ｍｇ、収率：６１．１％、２Ｅｔ３Ｎ）を白色固体として得た。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.34 (s, 1H), 8.08-8.07 (m, 1H), 5.97-5.96 (m, 1H), 5.05 (d, J = 9.6Hz, 1H), 4.61-4.58 (m, 2H), 4.37-4.35 (m, 1H), 4.23-4.22 (m, 1H), 4.07-4.04 (m, 2H), 3.92-3.91(m, 1H), 3.83-3.60 (m, 3H), 3.53-3.50 (m, 1H), 3.25 (dd, J = 10.4Hz, 26.8Hz, 1H), 3.05-3.00 (m, 12H), 1.09 (t, J= 7.6Hz, 18H).
化合物５
[228]（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[229]ステップ１．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
ＡｃＯＨ（６．９２ｇ、１１５．２８ｍｍｏｌ、６．５９ｍＬ、１．５当量）を、０℃でＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（５．６０ｍＬ、１１５．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）溶液に添加し、０．５時間撹拌した。（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテート（３０ｇ、７６．８６ｍｍｏｌ）を系に添加し、２５℃で１．５時間撹拌した。反応物をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで（１５０ｍＬ×３回）抽出した。有機層を合わせ、ブライン（１５０ｍＬ×３回）で洗浄し、濃縮して、残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製して、所望の化合物（２６ｇ、収率：９７．１％）を無色油として得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.45 - 5.20 (m, 3H), 4.30 - 4.10 (m, 4H), 2.20 - 2.00 (m, 12H).
[230]ステップ２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（ジフェノキシホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の上記ステップ１の生成物（８６４．４ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．０３ｇ、２４．８２ｍｍｏｌ）の混合物に、ジフェニルホスホロクロリデート（５ｇ、１８．６１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液を滴下して添加し、２５℃で１６時間撹拌した。反応物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して、残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製して、α立体配置化合物（７５０ｍｇ、収率：５２．１％）および所望のβ立体配置化合物（３８０ｍｇ、収率：２６．４％）を得た。両方とも黄色油として得られた。α立体配置化合物：1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.11 (m, 10H), 5.59 (dd, J = 1.1, 7.2 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 5.25 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 5.07 (dd, J = 3.4, 9.8 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 5.6, 12.2 Hz, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 1H), 2.16 - 1.95 (m, 12H).β立体配置化合物：1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.43 - 7.14 (m, 11H), 5.87 (dd, J = 1.6, 6.7 Hz, 1H), 5.42 - 5.26 (m, 3H), 4.25 - 4.02 (m, 3H), 3.92 (dd, J = 2.1, 12.3 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.08 - 1.94 (m, 9H).
[231]ステップ３．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
ＥｔＯＡｃ（４ｍＬ）およびＥｔＯＨ（４ｍＬ）中の上記ステップ２の生成物の化合物の混合物（４００ｍｇ、６８９．０９μｍｏｌ）およびＰｔＯ２（１５．６５ｍｇ、６８．９１μｍｏｌ）をＨ２雰囲気（１気圧）下に２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ（５ｍＬ／５ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮して、標的化合物（３００ｍｇ、粗製）を無色油として得た。粗生成物をそのまま次のステップで使用した。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 5.54 - 5.48 (m, 2H), 5.27 - 5.22 (m, 2H), 4.38 - 4.31 (m, 1H), 4.17 (dd, J = 2.5, 12.5 Hz, 1H), 3.97 - 3.90 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.07 - 2.05 (m, 3H), 1.98 (s, 3H).
[232]ステップ４．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートジトリエチルアンモニウム塩の調製
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の上記の生成物３の化合物の混合物（３００ｍｇ、７００．４７μｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．２ｍＬ、１．４０ｍｍｏｌ）を２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去して、トリエチルアンモニウム塩（４５０ｍｇ、粗製、２Ｅｔ３Ｎを含む）を無色油として得た。粗生成物をそのまま次のステップで使用した。
[233]ステップ５．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[234]上記ステップ４の生成物（５６．４４ｍｇ、１３５．５７μｍｏｌ）および化合物ＡＭＰ−モルホリデート（４’−モルホリン−Ｎ’Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボキサミジニウム塩）（５０ｍｇ、７０．４μｍｏｌ）の混合物を乾燥ピリジン（５ｍＬ×３回）で乾燥した。次いで、混合物をピリジン（１ｍＬ）で溶解し、１Ｈ−テトラゾール（１６．６６ｍｇ、２３７．８４μｍｏｌ）を添加し、２５℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去して、残渣を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ、移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＣＡＮ、Ｂ％：５％から２５％、グラジエント時間（分）：７、１００％Ｂホールド時間（分）：０．５、流速（ｍＬ／分）：２５）により精製して、所望の化合物（５．５ｍｇ、収率：２．７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７５８．２。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.43 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 6.05 (d, J=5.8 Hz, 1H), 5.43 (d, J=2.5 Hz, 1H), 5.37 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.06 - 4.96 (m, 2H), 4.64 - 4.58 (m, 2H), 4.42 - 4.37 (m, 1H), 4.31 - 4.25 (m, 1H), 4.19 (dd, J=3.1, 12.7 Hz, 1H), 4.14 - 4.07 (m, 2H), 3.94 (dd, J=2.0, 12.5 Hz, 1H), 3.58 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.96 (d, J=10.3 Hz, 6H), 1.88 (s, 3H).
化合物６
[235]アデノシン５’−（β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトピラノシル）ジホスフェート
[236]ステップ１．アデノシン５’−（β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[237]上記の化合物５の調製におけるステップ５の生成物の化合物（２．５ｍｇ、３．３０μｍｏｌ）を０．３ｍＬの溶液（ＴＥＡＢ（０．１Ｍ）／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ（１３／１４／１）からなる）に溶解し、−２０℃で４日間撹拌した。反応物を凍結乾燥して、所望の化合物（０．９ｍｇ、収率：１７．５％、Ｅｔ３Ｎ塩）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：５８７．８。
化合物７
[238]（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル水素（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネート
[239]ステップ１．テトラベンジルメチレンビス（ホスホネート）の調製
乾燥フェニルメタノール（６．２ｇ、５７．３ｍｍｏｌ、６．０ｍＬ）および乾燥ピリジン（４．２ｇ、５２．５ｍｍｏｌ、４．２ｍＬ）の混合物を、シリンジポンプによって、０℃でメチレンビス（ホスホン酸ジクロリド）（３．４５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（１０ｍＬ）の懸濁液に３０分かけて添加した。添加が完了した後、反応物を２０℃に到達させ、さらに３時間撹拌した。反応が完了した後、固体を濾過により除去し、トルエン（２回×２０ｍＬ）で２回洗浄した。濾液を２Ｍ ＮａＯＨ（２回×１５ｍＬ）および水（１５ｍＬ）で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製して、所望の化合物（３ｇ、収率：４０．５％、純度９９．９％）を無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.31 (s, 20H), 4.96 - 5.09 (m, 8H), 2.44 - 2.59 (m, 2H).
[240]ステップ２．ベンジル水素（（ビス（ベンジルオキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネートの調製
[241]ＤＡＢＣＯ（６２７ｍｇ、５．５９ｍｍｏｌ、６１５μＬ）を、テトラベンジルメチレンビス（ホスホネート）（上記ステップ１の生成物）（３ｇ、５．５９ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を１１０℃で３時間撹拌した。揮発性物質を真空下で除去し、残渣を、水性ＨＣｌ（３７％、１．２ｍＬ）を滴下して処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で蒸発させて、所望の化合物（２．２ｇ、粗製）を黄色油として得た。生成物をそのまま次のステップで使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.27 - 7.36 (m, 15H), 4.99 - 5.10 (m, 6H), 2.51 - 2.64 (m, 2H)
[242]ステップ３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（ベンジルオキシ）（（ビス（ベンジルオキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[243]ＰＰｈ３（３６０．０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびＤＥＡＤ（２３９．５ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、２５０μＬ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の上記ステップ２の生成物（２００ｍｇ、４４８．１μｍｏｌ）および（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２２５ｍｇ、５７４．９μｍｏｌ）の溶液に順次添加した。得られた混合物を４０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％−７５％、９分）により精製して、所望の化合物（１３０ｍｇ、収率：３６．６％、純度９８．０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）＋：７９９．１。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.20 - 7.33 (m, 15H), 4.86 - 5.76 (m, 10H), 3.50 - 4.29 (m, 3H), 2.40 - 2.62 (m, 2H), 1.88 - 2.09 (m, 12H)
[244]ステップ４．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（ベンジルオキシ）（（（ベンジルオキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[245]ＤＡＢＣＯ（４０．０ｍｇ、３５６．６μｍｏｌ、３９．２μＬ）を、上記ステップ３の生成物（２５０ｍｇ、３２１．９μｍｏｌ）のトルエン（６ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を１２０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、溶媒を真空下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ 水性ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。水性相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で蒸発させて、所望の化合物（２２０ｍｇ、粗製）を黄色シロップとして得た。生成物をそのまま次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６８６．９
[246]ステップ５．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−５−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオールの調製
[247]アデニンのピリジン（１００ｍＬ）溶液に、ＴｒｔＣｌ（３８．５ｇ、１３８．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５．９ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から０：１、ＥＡ：ＭｅＯＨ＝１：０から２０：１）により精製して、所望の化合物（２５．９ｇ、収率：５３．５％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）−：７５２．３。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.08 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.44 - 7.03 (m, 30H), 6.67 (br s, 1H), 5.89 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.78 (br t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.44 (br s, 1H), 4.30 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.49 (dd, J = 3.4, 10.5 Hz, 1H), 3.18 (dd, J = 2.9, 10.8 Hz, 1H).
[248]ステップ６．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−５−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテートの調製
[249]Ａｃ２Ｏ（５４５．０ｍｇ、５．３４ｍｍｏｌ、５００μＬ）およびＤＭＡＰ（５２ｍｇ、４２５．６μｍｏｌ）を、上記ステップ５の生成物（１．６ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）のピリジン（５ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を１５〜２０℃で２４時間撹拌した。反応が完了した後、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加することによって反応物をクエンチした。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ 水性ＨＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製して、所望の化合物（１．４３ｇ、収率：７７．０％、純度９５．８％）を白色フォームとして得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３６．４。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.21 - 7.35 (m, 30H), 6.22 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.12 - 6.17 (m, 1H), 5.68 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.26 (q, J = 4.4 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.03 (s, 3H).
[250]ステップ７．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテートの調製
[251]上記ステップ６の生成物（１．９ｇ、２．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（７６．５ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、８．５０ｍＬ）を添加し、反応混合物を１５℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、Ｅｔ３Ｎを用いて、ｐＨを７に調整し、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製して、所望の化合物（７３５ｍｇ、収率：４９．６％、純度９１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５９４．１。1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 8.50 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.39 - 7.16 (m, 9H), 6.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.02 - 5.88 (m, 1H), 5.65 - 5.34 (m, 2H), 4.26 - 4.12 (m, 1H), 3.76 - 3.50 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).
[252]ステップ８．２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（ベンジルオキシ）（（（ベンジルオキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[253]ＰＰｈ３（２２１．７ｍｇ、８４５．１μｍｏｌ）およびＤＥＡＤ（１４５．６ｍｇ、８３６．１μｍｏｌ、１５２．０μＬ）を、ＴＨＦ（３ｍＬ）中の上記ステップ４の生成物（１９０ｍｇ、２７６．７μｍｏｌ）および上記ステップ７の生成物（１７１．０ｍｇ、２８８．１μｍｏｌ）の溶液に順次添加した。得られた混合物を４０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：７０％−８０％、９分）により精製して、所望の化合物（１２０ｍｇ、収率：２８．２％、純度８２．０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１２６２．３。
[254]ステップ９．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（ベンジルオキシ）（（（ベンジルオキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[255]ＴＦＡ（６１６．０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ、４００．０μＬ）を、上記ステップ８の生成物（１２０ｍｇ、９５．１μｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１．６ｍＬ）溶液に添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、混合物をＥＡ（３０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ×２回）で洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の化合物（１１０ｍｇ、粗製）を黄色シロップとして得た。それをそのまま次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１０２０．５
[256]ステップ１０．ベンジル（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ベンジルオキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネートの調製
[257]ＭｅＯＨ（１．４ｍＬ）、Ｅｔ３Ｎ（０．６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．２ｍＬ）中の上記ステップ９の生成物（３０ｍｇ、２９．４μｍｏｌ）の溶液を２５℃で１時間撹拌した。反応が完了した後、反応物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２４％−４４％、９分）により精製して、所望の化合物（８ｍｇ、収率：３５．４％、純度９９．９％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：５１７．１／６０４．２。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 8.71 (br s, 1H), 8.24 (br s, 1H), 7.27 - 7.32 (m, 10H), 6.04 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.26 - 5.31 (m, 1H), 4.99 - 5.16 (m, 6H), 4.91 - 4.92 (m, 1H), 4.49 - 4.64 (m, 1H), 4.37 - 4.44 (m, 1H), 4.26 - 4.36 (m, 1H), 4.16 - 4.26 (m, 2H), 3.60 - 3.94 (m, 3H), 2.56 - 2.76 (m, 2H).
[258]ステップ１１．（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル水素（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネートの調製
[259]上記ステップ１０のベンジル生成物（６ｍｇ、７．８μｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液に、Ｎ２下で乾燥Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ、純度１０％）を添加した。懸濁液を真空下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。混合物を、水素（１５ｐｓｉ）下に２５℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、所望の化合物（４ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：３３７．０１２０／４２４．０４６０；ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）−：４２６．０５９１。1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.38 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 5.97 (d, J = 5.87 Hz, 1H), 5.14 (d, J = 1.00 Hz, 1H), 4.79 - 4.91 (m, 1H), 4.38 - 4.44 (m, 1H), 4.17 - 4.28 (m, 2H), 3.97 - 4.05 (m, 2H), 3.60 - 3.74 (m, 5H), 1.99 - 2.04 (m, 2H).
化合物８
[260]（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル水素（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネート
[261]ステップ１．（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（ベンジルオキシ）（（ビス（ベンジルオキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[262]ＰＰｈ３（５４０．０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）およびＤＥＡＤ（３６７．９ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、３８４．０μＬ）を、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の上記の化合物７の調製におけるステップ２の生成物（３００ｍｇ、６７２．１μｍｏｌ）および（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−ヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（３００．０ｍｇ、７１３．７μｍｏｌ）の溶液に順次添加した。得られた混合物を４０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５８％−７４％、８分）により精製して、所望の化合物（１８８ｍｇ、収率：２８．６％、純度８７．０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｎａ）＋：８７１．５
[263]ステップ２．（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（ベンジルオキシ）（（（ベンジルオキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[264]ＤＡＢＣＯ（３６．４ｍｇ、３２４．０μｍｏｌ）を、上記ステップ１の生成物（２５０ｍｇ、２９４．６μｍｏｌ）のトルエン（６ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を１２０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、溶媒を真空下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、１Ｎ 水性ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。水性相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で蒸発させて、所望の化合物（２２０ｍｇ、粗製）を黄色シロップとして得た。粗生成物をそのまま次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７５９．５
[265]ステップ３．３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（ベンジルオキシ）（（（ベンジルオキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[266]ＰＰｈ３（２１０．０ｍｇ、８００．６μｍｏｌ）およびＤＥＡＤ（１４３．７ｍｇ、８２５．１μｍｏｌ、１５０．０μＬ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の上記の化合物７の調製におけるステップ７の生成物（１７２．２ｍｇ、２９０．０μｍｏｌ）および上記ステップ２の生成物（２００ｍｇ、２６３．６μｍｏｌ）の溶液に順次添加した。得られた混合物を４０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：７１％−８５％、９分）により精製して、所望の化合物（１１７ｍｇ、収率：２９．９％、純度９０．０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１３３４．３
[267]ステップ４．（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（ベンジルオキシ）（（（ベンジルオキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[268]ＴＦＡ（１．２３ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、８００μＬ）を、上記ステップ３の生成物（１１３ｍｇ、８４．７μｍｏｌ）のジオキサン（１．２ｍＬ）溶液に添加した。混合物を４０℃で１．５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物をＥＡ（３０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ×２回）で洗浄し、有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の化合物（１１０ｍｇ、粗製）を白色固体として得た。粗生成物をそのまま次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１０９２．２
[269]ステップ５．ベンジル（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ベンジルオキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネートの調製
[270]ＭｅＯＨ（３．５ｍＬ）、Ｅｔ３Ｎ（０．５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）中の上記ステップ４の生成物（１０５ｍｇ、９６．２μｍｏｌ）の溶液を２５℃で１時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％−５０％、７．５分）により精製して、所望の化合物（１６ｍｇ、２０．０μｍｏｌ、収率：２０．７％、純度９９．４％）を白色固体（white colid）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：５４７．１／６０４．１
[271]ステップ６．（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル水素（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）メチル）ホスホネートの調製
[272]上記ステップ５の生成物（１４ｍｇ、１７．６μｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）溶液に、Ｎ２下で乾燥Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ、純度１０％）を添加した。懸濁液を真空下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。混合物を、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下に２５℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、所望の化合物（１０ｍｇ、１６．２μｍｏｌ）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：３６６．４／４２３．８
化合物９
[273]２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[274]ステップ１．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−４−フルオロテトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[275]ピリジン（３ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−オール）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−オール（３８９ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（１８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を室温に添加した。溶液を５０℃に加熱した。この温度で、ＴＢＤＰＳＣｌ（５９４ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をこの温度で終夜撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、ＳＭが残っていないことを示した。溶液をＡｃ２Ｏ（６４２μＬ、６．８５ｍｍｏｌ）に滴下して添加した。この温度で５時間撹拌した後、ＬＣ−ＭＳは、所望の化合物が形成されたことを示した。反応物をＤＣＭと水に分配した。抽出液を合わせ、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、所望の化合物（５３１ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を白色フォームとして得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５９２。
[276]ステップ２．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[277]ＴＨＦ（４ｍＬ）中の上記ステップ１の生成物の化合物（５３１ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温でＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ、１．４ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ）を添加した。終夜撹拌した後、反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。反応物をＤＣＭと水に分配した。抽出液を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。それを、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０：１）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の化合物を白色フォームとして得た（９６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：３５４。
[278]ステップ３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（（ビス（ベンジルオキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−４−フルオロテトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[279]２５ｍＬの丸底フラスコに、窒素雰囲気下で上記ステップ２の生成物の化合物（９６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）および１Ｈ−イミダゾール−４，５−ジカルボニトリル（６４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を投入した。乾燥ＤＣＭおよびＭｅＣＮを添加した（ＤＣＭ：ＭｅＣＮ＝５：１、ｖ／ｖ）。得られた溶液を氷水浴中で冷却し、ジベンジルジイソプロピルホスホロアミダイト（１８８ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に温めた後、もう２時間撹拌した。反応物を氷水浴中で再び冷却し、ｍＣＰＢＡ（１１０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）をそのまま添加した。それを室温に温めた後、ＬＣ−ＭＳは、所望の化合物が主生成物として形成されたことを示した。飽和ＮａＨＣＯ３（水性）を添加して、反応物をクエンチし、有機相を分離した。水相をＤＣＭで２回抽出した。抽出液を合わせ、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油を得た。それを、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の化合物（１２６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６１２。
[280]ステップ４．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アセトアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２−（（ホスホノオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−イルアセテートの調製
[281]ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中の上記ステップ３の生成物の化合物（１２６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１３２ｍｇ）の混合物を、Ｈ２下に室温で撹拌した。終夜撹拌した後、混合物を、ＭｅＯＨで孔径０．４５μｍのＡｄｖａｎｔｅｃ ＰＴＦＥメンブランフィルターに通して濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、所望の化合物（９０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：４３４。
[282]ステップ５．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２−（（（ヒドロキシ（モルホリノ）ホスホリル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−イルアセテートのモルヒネＤＣＣ塩の調製
[283]ＤＣＣ（１７３ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のｔ−ブチルアルコール（５ｍＬ）溶液を、ｔ−ＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）（１０ｍＬ）および精製モルホリン（１１３ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）の混合物中の上記ステップ４の生成物の化合物（９０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の還流溶液に滴下して添加した。添加を３時間で完了し、混合物をＴＬＣが反応の完了を示すまで終夜還流した。混合物を室温に冷却した。濾液をｔ−ＢｕＯＨの大部分が除去されるまで蒸発させ、残っている水性相をエーテルで３回抽出した。次いで、透明な水性溶液を凍結乾燥により蒸発乾固して、所望の化合物をＤＣＣ塩（１３３ｍｇ、収率９０％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：４１９。
[284]ステップ６．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
上記ステップ５の生成物の化合物（１５２ｍｇ、２１３μｍｏｌ）および上記の化合物１の調製におけるステップ１４の生成物の化合物（１００ｍｇ、１４２μｍｏｌ）の混合物を、無水ピリジン（３ｍＬ×３回）を用いて共沸脱水した。次いで、溶媒をピリジン（２ｍＬ）に溶解し、２Ｈ−テトラゾール（４９．８４ｍｇ、７１１．５２μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で３日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ＝１：０：０：０から５０：５０：１）により精製して、粗生成物（２００ｍｇ）を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ、水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ、０％から３０％）により精製して、表題化合物（３５ｍｇ、収率２８．２％、純度９５．２％）を明黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３２．２。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 8.60 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 6.36 - 6.26 (m, 1H), 5.62 - 5.52 (m, 2H), 5.38 - 5.33 (m, 0.5H), 5.24 - 5.21 (m, 0.5H), 5.20 - 5.15 (m, 3H), 4.72 - 4.63 (m, 1H), 4.46 - 4.38 (m, 2H), 4.32 - 4.20 (m, 3H), 3.94 - 3.89 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.90 (s, 3H).
化合物１０
[285]アデノシン−２’−フルオロ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェート
[286]ステップ１．アデノシン−２’−フルオロ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[287]３ｍＬの（ＴＥＡＢ（０．１Ｍ、１６．００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１２ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（１４５ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、２００μＬからなる）溶媒中の上記の化合物９の調製におけるステップ６の生成物の化合物（１０ｍｇ、１２．０μｍｏｌ）を−２８℃で４０時間撹拌した。反応が完了した後、混合物をそのまま凍結乾燥器で凍結乾燥して、所望の化合物（７ｍｇ、収率：３８．５％、純度５４．５％、２Ｅｔ３Ｎ塩）を明黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：６１９．８。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.28 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 6.30 - 6.24 (m, 1H), 5.36 - 5.30 (m, 1H), 5.23 - 5.17 (m, 1H), 5.06 - 5.00 (m, 1H), 4.56 - 4.51 (m, 3H), 4.47 - 4.42 (m, 1H), 4.2- 4.18 (m, 2H), 4.14 - 4.04 (m, 3H), 3.85 - 3.80 (m, 1H).
化合物１１
[288]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[289]ステップ１．（（３ａＳ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノールの調製
[290]アデノシン（２．５ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）を、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（８ｇ、４２．１ｍｍｏｌ）を含む乾燥したアセトン（１００ｍＬ）に懸濁した。次いで、激しく撹拌して、オルトギ酸トリメチル（６．６ｍＬ、６０．８ｍｍｏｌ）を周囲温度で１時間かけて添加して、透明な溶液を得て、次いでしばらくして白色固体が形成した。混合物を終夜撹拌した。水性飽和炭酸カリウムを用いて、混合物をｐＨ＝８に調整した。沈澱物を濾過により除去し、濾液を蒸発させ、残渣をＥＡで抽出した。有機相を合わせ、水性飽和炭酸カリウムおよび水で洗浄し、乾燥し、濃縮した。粗製物を粉末にして（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）、所望の化合物（２．６ｇ、８．４７ｍｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：３０８。
[291]ステップ２．（Ｚ）−Ｎ’−（９−（（３ａＳ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリン−６−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミドの調製
[292]ＤＭＦ（２ｍＬ）中の上記ステップ１の生成物の化合物（１ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、室温でＤＭＦ−ＤＭＡ（１．６４ｍＬ、１２．０４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を４５℃に１時間加熱した。ＬＣ−ＭＳは、所望の化合物が形成されたことを示した。次いで、溶媒を真空除去し、残渣をＤＣＭで溶解し、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発乾固した。乾燥した生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の化合物（７５０ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：３６３。
[293]ステップ３．ジベンジル（（（３ａＳ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−（６−（（（Ｚ）−（ジメチルアミノ）メチレン）アミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル）ホスフェートの調製
[294]ＤＣＭ／ＭｅＣＮ（６ｍＬ）中の上記ステップ２の生成物の化合物（４００ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、０℃でＤＣＩ（２６０ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）、ｍＣＰＢＡ（４４７ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）およびジベンジルジイソプロピルホスホロアミダイト（７６０ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、反応物を室温で終夜撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、反応が完了したことを示した。反応混合物を濃縮し、残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（３０：１）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の化合物を無色ゴム（６０９ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６２３。
[295]ステップ４．（（３ａＳ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル二水素ホスフェートの調製
[296]ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）中の上記ステップ３の生成物の化合物（６０９ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＯＨ）２（２００ｍｇ）の混合物を、Ｈ２下に室温で撹拌した。終夜撹拌した後、混合物を、ＭｅＯＨで孔径０．４５μｍのＡｄｖａｎｔｅｃ ＰＴＦＥメンブランフィルターに通して濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、所望の化合物（３８３ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：３８８。
[297]ステップ５．（（３ａＳ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル二水素ホスフェートのモルヒネＤＣＣ塩の調製
[298]ＤＣＣ（８２５ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）のｔ−ブチルアルコール（２０ｍＬ）溶液を、ｔ−ＢｕＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）（２０ｍＬ）および精製モルホリン（３８４ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）の混合物中の上記ステップ４の生成物の化合物（３８３ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）の還流溶液に滴下して添加した。添加を約３時間で完了し、混合物をＴＬＣが反応の完了を示すまで終夜還流した。混合物を室温に冷却した。濾液をｔ−ＢｕＯＨの大部分が除去されるまで蒸発させ、残っている水性相をエーテルで３回抽出した。次いで、透明な水性溶液を凍結乾燥により蒸発乾固して、所望の生成物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：４５７。
[299]ステップ６．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[300]上記の化合物１の調製におけるステップ１４の生成物の化合物（２００ｍｇ、２８４．６１μｍｏｌ、２Ｅｔ３Ｎ）および上記ステップ５の生成物の化合物（３８９．６８ｍｇ、８５３．８２μｍｏｌ）の混合物を、乾燥ピリジン（「Ｐｙ」）（５ｍＬ×３回）で乾燥した。次いで、残渣をピリジン（５ｍＬ）に溶解し、１Ｈ−テトラゾール（９９．６９ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）と混合し、２５℃で７２時間撹拌した。溶媒を除去して、残渣を得た。それを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ １：０：０から３０：５０：１）により精製して、不純生成物（２００ｍｇ）を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ、条件：水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ、３％から３３％）により精製して、所望の化合物（５０ｍｇ、収率：１９．６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８７０．３。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 8.59 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 6.22 (d, J=3.4 Hz, 1H), 5.58 - 5.52 (m, 2H), 5.27 (dd, J=3.3, 6.0 Hz, 1H), 5.22 - 5.14 (m, 4H), 4.53 (br s, 1H), 4.41 (dd, J=3.4, 12.0 Hz, 1H), 4.27 - 4.13 (m, 3H), 3.91 (dd, J=2.9, 9.8 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.03 (d, J=3.7 Hz, 6H), 1.99 (s, 3H), 1.91 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
化合物１２
[301]（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェート
[302]ステップ１．（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[303]上記の化合物１１の調製におけるステップ６の生成物の化合物（１０ｍｇ、１１．５０μｍｏｌ）を、ＴＥＡＢ（８ｍＬ）、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（０．１ｍＬ）からなる混合溶媒２ｍＬに溶解した。得られた溶液を、−２８℃で４６時間撹拌した。反応物を凍結乾燥器で凍結乾燥した。所望の化合物（９ｍｇ、収率：７０．８４％、２．６Ｅｔ３Ｎ塩）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：６５７．９。1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.28 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 6.13 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.23 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 5.13 - 4.97 (m, 2H), 4.01 (br s, 2H), 3.92 - 3.78 (m, 1H), 3.66 - 3.42 (m, 4H), 3.33 - 3.23 (m, 1H), 1.52 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
化合物１３
[304]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[305]ステップ１．９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジメトキシ−５−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−Ｎ−トリチル−９Ｈ−プリン−６−アミンの調製
[306]上記の化合物７の調製におけるステップ５の生成物（２０ｇ、１８．６２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（１．７１ｇ、４２．８３ｍｍｏｌ、６０％）を添加し、０℃で３０分間撹拌した後、０℃でＣＨ３Ｉ（７．８５ｇ、５５．３１ｍｍｏｌ、３．４４ｍＬ）を添加した。混合物を２５℃で４時間撹拌した。反応混合物を、０℃にてＨ２Ｏ（２００ｍＬ）でクエンチし、ＥＡ（１００ｍＬ×３回）で抽出し、有機層を合わせ、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から２：１）により精製した。所望の化合物（７．３ｇ、収率：３９．５７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７８０．３。
[307]ステップ２．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジメトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メタノールの調製
[308]上記ステップ１の生成物（３．８１ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１２６ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１４ｍＬ）を添加した。反応混合物を２０℃で０．５時間撹拌した。Ｅｔ３Ｎ（５ｍＬ）を用いて、ｐＨを７に調整し、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ×３回）およびブライン（２０ｍＬ×２回）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１，次いでＰＥ：ＥＡ＝０：１）により精製して、所望の化合物（１．２３ｇ、２．２５ｍｍｏｌ、収率５８．６２％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５３８．３。
[309]ステップ３．ジベンジル（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジメトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）ホスフェートの調製
[310]ＤＣＭ（４０ｍＬ）およびＣＨ３ＣＮ（８ｍＬ）中の上記ステップ２の生成物（２．０３ｇ、３．７８ｍｍｏｌ）および１Ｈ−イミダゾール−４，５−ジカルボニトリル（８９２ｍｇ、７．５５ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に、窒素下に０℃でジベンジルジイソプロピルホスホロアミダイト（２．６１ｇ、７．５５ｍｍｏｌ、２．５３ｍＬ）を添加した。混合物を０℃で５分間撹拌し、次いで、２５℃に温め、２５℃で１時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、０℃でｍ−ＣＰＢＡ（１．６３ｇ、７．５５ｍｍｏｌ、純度８０％）を分割添加した。添加後、混合物を２５℃で０．２５時間撹拌した。３５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を添加し、混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２００〜３００メッシュ、溶離液：２０〜５５％ 酢酸エチル／石油エーテルのグラジエント）により精製した。所望の化合物（２．５４ｇ、収率：７９．９２％）を無色ゴムとして得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７９８．２。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.00-7.98 (m, 2H), 7.33-7.25 (m, 25H), 6.97 (s, 1H), 6.03-6.02 (m, 1H), 5.07-5.01 (m, 4H), 4.51(t, J = 4.4Hz, 1H), 4.31-4.24 (m, 3H), 4.00-3.97 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.35 (s, 3H).
[311]ステップ４．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチルジベンジルホスフェートの調製
[312]上記ステップ３の生成物（２．５４ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）をジオキサン（１５ｍＬ）に溶解した。ＴＦＡ（５ｍＬ、６７．５３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４０℃で６時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（約５０ｍＬ）を、ｐＨ＝８になるまで混合物に添加した。混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ×４回）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）、４ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、溶離液：０〜１０％ メタノール／酢酸エチルのグラジエント、３５ｍＬ／分）により精製した。所望の化合物（１．７５、収率：９８．９５％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５５６．１。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.34-7.31 (m, 10H), 6.08-6.02 (m, 2H), 5.07-5.02 (m, 4H), 4.48-4.20 (m, 5H), 4.00-3.97 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.38 (s, 3H).
[313]ステップ５．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチル二水素ホスフェートの調製
[314]上記ステップ４の生成物（５００ｍｇ、９００．０μｍｏｌ）の混合物をｔ−ＢｕＯＨ（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ、純度１０％）およびＰｄ（ＯＨ）２（１２６ｍｇ、８９．７２μｍｏｌ、純度１０％）を添加し、混合物をＨ２雰囲気（５０ｐｓｉ）下に２５℃で１６時間撹拌した。濾過し、濾液を濃縮して、所望の化合物（４００ｍｇ、粗製）を無色油として得た。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.56 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.14 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.60 - 4.50 (m, 1H), 4.35 - 4.25 (m, 1H), 4.20 - 4.10 (m, 1H), 4.09 - 3.95 (m, 2H), 3.49 (s, 3H), 3.39 (s, 3H).
[315]ステップ６．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチル水素モルホリノホスホネートの調製
[316]ｔ−ＢｕＯＨ（１２ｍＬ）中のＤＣＣ（８３６ｍｇ、４．０５ｍｍｏｌ）を、Ｈ２Ｏ（１２ｍＬ）およびｔ−ＢｕＯＨ（１２ｍＬ）中の上記ステップ５の生成物（３８０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）およびモルホリン（３５３ｍｇ、４．０５ｍｍｏｌ）の還流溶液（１１０℃）に滴下して添加した。混合物を１１０℃で１２時間撹拌した。混合物を室温に冷却した。固体を濾過により除去した。濾液を回収し、有機溶媒を真空除去した。残っている水性相を回収し、ＭＴＢＥ（１０ｍＬ×３回）で洗浄した。水性相を回収し、真空濃縮して、所望の化合物（４４０ｍｇ、粗製）を明黄色粘着性油として得た。それを、さらに精製することなくそのまま次のステップに使用した。
[317]ステップ７．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[318]上記の化合物１の調製におけるステップ１４の生成物（１３０ｍｇ、３０９．３μｍｏｌ）および上記ステップ６の生成物（３９０ｍｇ、８７８．３μｍｏｌ）を別々にピリジン（４ｍＬ×３回）で乾燥した。残渣をピリジン（４ｍＬ）に再溶解し、１Ｈ−テトラゾール（１０８ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３０℃で１２時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に再溶解した。溶液を濾過した。濾液を回収し、濃縮した。残渣をカラム（ＤＣＭ：（ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ＝５０：１）＝１：１）により精製して、粗生成物（８０ｍｇ）を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１０分）により再精製して、所望の化合物（３０ｍｇ、収率１１．２１％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８５８．４。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.65 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 6.15 - 6.12 (m, 1H), 5.60 - 5.56 (m, 2H), 5.22 - 5.17 (m, 3H), 4.55 - 4.12 (m, 7H), 3.92 - 3.89 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.88 (s, 3H).
化合物１４
[319]アデノシン−２’３’−ジメトキシ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェート
[320]ステップ１．アデノシン−２’３’−ジメトキシ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[321]４ｍＬの緩衝液（ＴＥＡＢ（１２ｍＬ）：ＭｅＯＨ（９ｍＬ）：ＴＥＡ（０．１５ｍＬ））中の上記の化合物１３の調製におけるステップ７の生成物（８．４ｍｇ、９．７９μｍｏｌ）の溶液を−２０℃で２４時間維持した。溶液を凍結乾燥下で乾燥して、所望の化合物（８ｍｇ、収率：６５．８５％）を白色粘着性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）＋：６４５．９。
化合物１５
[322]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[323]ステップ１．化合物（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチル−６−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノールの調製
[324]アセトン（１００ｍＬ）中の上記の化合物７の調製におけるステップ５の生成物（３７．４ｇ、４９．８ｍｍｏｌ）および２，２−ジメトキシプロパン（５１．８ｇ、４９７ｍｍｏｌ、６１．０ｍＬ）の溶液に、ｐ−ＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（１１．４ｇ、５９．７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を０℃に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）でクエンチした。反応混合物をＥＡ（２００ｍＬ×３回）で抽出し、有機層を合わせ、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、残渣を得た。それを、シリカゲルカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から２：３）により精製して、所望の化合物（９．９６ｇ、収率：３５．５７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５５０．１。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.44 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.34 - 7.18 (m, 15H), 6.12 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 5.34 (dd, J = 2.8, 6.2 Hz, 1H), 5.14 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 2.7, 6.1 Hz, 1H), 4.25 - 4.15 (m, 1H), 3.60 - 3.42 (m, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.30 (s, 3H).
[325]ステップ２．化合物（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチル−６−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル水素ホスホネートトリエチルアミン塩の調製
[326]フェノキシホスホノイルオキシベンゼン（３．４１ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）を、上記ステップ１の生成物（２ｇ、３．６４ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で２時間撹拌した。次いで、Ｅｔ３Ｎ（２．２１ｇ、２１．８ｍｍｏｌ、３．０４ｍＬ）およびＨ２Ｏ（７８６．９ｍｇ、４３．７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物をそのまま減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０から１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ、収率７０．０％、純度７８％）を黄色シロップとして得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６１４．１
[327]ステップ３．Ｏ−（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチル−６−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル）ホスホロチオエートトリエチルアミン塩の調製
[328]ピリジン（６ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（６ｍＬ）中の上記ステップ２の生成物（１．５ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２雰囲気下でＴＭＳＣｌ（２．４ｍＬ、１９．１ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下して添加した。混合物を０℃で１時間撹拌し、次いでＳ（７３０ｍｇ、２２．７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃でもう４５分間撹拌した。反応が完了した後、反応物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチし、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１から１０：１）および分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｐｒｉｍｅ Ｃ１８ １５０＊３０ｍｍ ５μｍ；移動相：［水（０．０５％水酸化アンモニウム（ｖ／ｖ））−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％−４５％、９分）により精製して、所望の化合物（７００ｍｇ、収率４４．４％、純度８６％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６４６．１。1H NMR (400MHz, DMSO) δ 8.71 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.39 - 7.12 (m, 15H), 6.12 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.28 (dd, J = 3.3, 5.8 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.39 (br s, 1H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.73 (td, J = 5.6, 10.9 Hz, 1H), 1.56 - 1.48 (s, 3H), 1.31 (s, 3H)
[329]ステップ４．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（ヒドロキシ（１Ｈ−イミダゾル−１−イル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[330]ＣＤＩ（９４５ｍｇ、５．８３ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下に上記の化合物１の調製におけるステップ１４の生成物の化合物（３５０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、ＭｅＯＨ（０．２ｍＬ）を添加して、反応物をクエンチし、混合物を減圧下で濃縮して、粗製の所望の生成物（１ｇ、粗製）を得た。それをそのまま次のステップで使用した。
[331]ステップ５．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（（（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチル−６−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[332]ＺｎＣｌ２（１ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下で無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の上記ステップ４からの生成物（３２０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）および上記ステップ３からの生成物（５００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（６００ｍｇ、ｃｒｕｄｅ）を明黄色固体として得た。それを、さらに精製することなくそのまま次のステップで使用した。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１１２８．６。
[333]ステップ６．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[334]ＴＦＡ（０．３ｍＬ、４．０５ｍｍｏｌ）を、上記ステップ５の生成物の化合物（２００ｍｇ、粗製）のＨ２Ｏ（２ｍＬ）溶液に添加した。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。反応が完了した後、Ｅｔ３Ｎを添加することによって、反応物をｐＨ＝７に調整した。混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１０分）により精製して、所望の化合物（１８．６ｍｇ、純度９９％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８４６．３。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ = 8.78 (s, 0.5H), 8.71 (s, 0.5H), 8.21 (s, 1H), 6.13 (dd, J = 2.0, 6.0 Hz, 1H), 5.76 - 5.60 (m, 2H), 5.26 - 5.16 (m, 3H), 4.74 - 4.68 (m, 1H), 4.53 - 4.42 (m, 2H), 4.37 - 4.21 (m, 4H), 4.01 - 3.89 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.10 - 2.06 (m, 6H), 2.04 (s, 1.5H), 2.02 (s, 1.5H), 1.96 (s, 3H)
化合物１６
[335]アデノシン−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−６−フルオロ−ヘプトピラノシル）ホスホロチオイルオキシホスフェート
[336]ステップ１．アデノシン−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−６−フルオロ−ヘプトピラノシル）（ヒドロキシル）ホスホロチオイルオキシホスフェートの調製
[337]上記化合物１５の調製におけるステップ６の生成物の化合物（４ｍｇ、４．７３μｍｏｌ）のＭｅＯＨ／水／Ｅｔ３Ｎ（７：３：１比）（２ｍＬ）溶液を２５℃で５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濃縮し、水から凍結乾燥して、所望の化合物（３．２ｍｇ、収率：８０．６％、２Ｅｔ３Ｎ塩）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）＋：６３４．１。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.46 (s, 0.5H), 8.43 (s, 0.5 H), 8.08 (s, 0.5 H), 8.06 (s, 0.5H), 5.96 (dd, J = 5.9, 10.0 Hz, 1H), 5.38 - 5.28 (m, 0.5H), 5.13 - 5.03 (m, 0.5H), 4.45 - 4.31 (m, 2H), 4.23 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.14 - 4.03 (m, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 2H), 3.85 - 3.76 (m, 1H), 3.66 - 3.47 (m, 4H), 3.34 - 3.24 (m, 1H), 3.02 (q, J = 7.3 Hz, 12H), 1.09 (t, J = 7.3 Hz, 18H)
化合物１７
[338]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[339]ステップ１．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロフラン−３−オールおよび（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−５−（ヒドロキシメチル）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロフラン−３−オールの調製
[340]アデノシン（２５ｇ、９３．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（９００ｍＬ）懸濁液を−５℃まで冷却した。ＮａＨ（４．８６ｇ、１２１．６１ｍｍｏｌ、純度６０％）を溶液に添加した。混合物を−５℃でさらに１時間撹拌した。ＰＭＢＣｌ（１７．５８ｇ、１１２．２６ｍｍｏｌ、１５．２９ｍＬ）を懸濁液に１時間の間に滴下して添加した。添加が完了した後、反応物を２５℃に到達させ、１６時間撹拌した。４０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を０℃で混合物に添加し、室温で１０分間撹拌した。固体を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（flesh chromatography column）（ＤＣＭ中０−２％ＭｅＯＨで溶離）により精製した。化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（ヒドロキシメチル）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロフラン−３−オール（２２ｇ、５９．７０ｍｍｏｌ、収率６３．８％、純度９６．３７％）を白色固体として得た。所望の２つの異性体の混合物（１２ｇ）を白色固体として得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.29 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.70 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.01 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.47 (dd, J = 4.4, 7.2 Hz, 1H), 5.29 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.65 - 4.42 (m, 2H), 4.39 - 4.20 (m, 2H), 4.00 (q, J = 2.8 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H) , 3.71-3.61 (m, 1H), 3.58 - 3.47 (m, 1H).
[341]ステップ２．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−オールの調製
[342]上記ステップ１の生成物の化合物（１５．００ｇ、３８．７２ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ×２回）と２回共蒸発させ、ピリジン（３００ｍＬ）に溶解した。ＴｒｔＣｌ（２６．９９ｇ、９６．８０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３．７８ｇ、３０．９８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下に８０℃で１５時間撹拌した。混合物をＥＡ（８００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ×２回）およびブライン（２００ｍＬ×２回）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中０−４０％ＥＡで溶離）により精製した。所望の化合物（２２．６ｍｇ、収率：６６．９％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８７２．４
[343]ステップ３．化合物９−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−４−フルオロ−３−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（（トリチルオキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−Ｎ−トリチル−９Ｈ−プリン−６−アミンの調製
[344]上記ステップ２の生成物の化合物（５ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、ＤＡＳＴ（３．８５ｍＬ、２９．１ｍｍｏｌ）およびピリジン（４．６ｍＬ、５７．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０℃で１２時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）でクエンチし、有機層を分離した。水性層をＤＣＭ（５０ｍＬ×２回）で抽出し、有機層を合わせ、ＨＣｌ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ：２０／１から２／１）により精製して、所望の化合物（２．１ｇ、収率４２．０％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８７４．４ 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.44 - 7.18(m, 32H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.16 - 6.10 (m, 1H), 5.50 - 5.28 (m, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.57 - 4.43 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.42 - 3.37 (m, 1H), 3.31 - 3.24 (m, 1H).
[345]ステップ４．化合物（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メタノールの調製
[346]上記ステップ３の生成物の化合物（２．７ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）のＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍＬ）溶液を２８℃で４時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨ＝７まで中和し、次いでＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３回）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。それを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１から３：１）により精製した。所望の化合物（３ｇ、収率：７６．９％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝６３１．２、６３２．２。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (s, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 7.37 - 7.18 (m, 17 H), 6.90 - 6.83 (m, 2 H), 6.12 - 6.05 (m, 1 H), 5.41 - 5.25 (m, 1 H) 5.10 - 5.05 (m, 1 H), 4.81 - 4.74 (m, 1 H), 4.70 - 4.62 (m, 2 H), 4.34 - 4.22 (m, 1 H) 3.81 - 3.73 (m, 1 H) 3.72 (s, 3 H).
[347]ステップ５．化合物ジベンジル（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）ホスフェートの調製
[348]ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）およびＣＨ３ＣＮ（４ｍＬ）中の上記ステップ４の生成物の化合物（１．５ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）および１Ｈ−イミダゾール−４，５−ジカルボニトリル（５６０ｍｇ、４．７５ｍｍｏｌ）溶液に、０℃で（ＢｎＯ）２Ｐ−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２（１．６４ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、２５℃に温めた。得られた混合物をもう１時間撹拌し、０℃に再び冷却した。ｍ−ＣＰＢＡ（１．０２ｇ、４．７５ｍｍｏｌ、純度８０％）をそのまま添加し、次いで、反応物を２５℃に温め、２５℃で１６時間撹拌した。反応物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ×２回）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製した。所望の化合物（２．２ｇ、収率：８１．０％、純度７８％）を黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８９２．３。
[349]ステップ６．化合物（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチルジベンジルホスフェートおよび（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）テトラヒドロフラン−２−イル）メチルジベンジルホスフェートの調製
[350]ＤＣＭ（１８ｍＬ）中の上記ステップ５の生成物の化合物（２．２ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（５６２ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ、３６５μＬ）の溶液を２５〜３０℃で４時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）を用いて、反応物をｐＨ約８〜９に調整し、ＤＣＭ（５０ｍＬ×２回）で抽出した。有機相を合わせ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から０：１）により精製した。２つの化合物の混合物（１．１ｇ、収率：７６．７％）を黄色油として得た。それを、精製することなくさらなるステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５３０．１、６５０．１。
[351]ステップ７．化合物（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチル二水素ホスフェートの調製
[352]ｔ−ＢｕＯＨ（１５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１５ｍＬ）中の上記ステップ６の生成物の化合物（１．１ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｐｄ／Ｃ（０．２ｇ）およびＰｄ（ＯＨ）２（０．２ｇ）を添加した。混合物を、水素雰囲気（５０ｐｓｉ）下に２５℃で３６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗製物を得た。粗製物をさらに精製することなく次のステップに使用した。所望の化合物（０．４５ｇ、粗製）を灰色固体として得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 5.96 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.34 - 4.95 (m, 1H), 4.76 (br d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.63 - 4.42 (m, 1H), 4.20 - 3.93 (m, 2H).
[353]ステップ８．（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチル水素モルホリノホスホネート（４’−モルホリン−Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボキサミジニウム塩）
[354]ｔ−ＢｕＯＨ（４ｍＬ）中のＤＣＣ（３５４．５０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ、３４７．５μＬ）を、Ｈ２Ｏ（４ｍＬ）およびｔ−ＢｕＯＨ（４ｍＬ）中の上記ステップ７の生成物の化合物（１５０ｍｇ、４３０μｍｏｌ）およびモルホリン（１５０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の還流溶液（１１０℃）に１５分かけて滴下して添加した。混合物をＮ２下に１００℃で１２時間撹拌した。溶液を濾過した。濾液を回収し、濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＴＢＭＥ（２０ｍＬ×２回）で洗浄した。水性相を回収し、真空濃縮した。所望の化合物（２９０ｍｇ、粗製）を黄色油として得た。それを、さらに精製することなくそのまま次のステップに使用した。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.11 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.01 - 5.98 (m, 1H), 5.22 - 5.07 (m, 1H), , 4.80 - 4.73 (m, 1H), 4.55 - 4.48 (m, 1H), 4.09 - 4.02 (m, 1H), 4.00 - 3.92 (m, 1H), 3.44 - 3.39 (m, 4H), 2.85 - 2.80 (m, 4H).31P NMR δ 7.5.
[355]ステップ９．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[356]上記ステップ８の生成物の化合物（１５０ｍｇ、２９９．７９μｍｏｌ）および上記の化合物１の調製におけるステップ１４の生成物の化合物（２９０ｍｇ、６９３．２５μｍｏｌ）をピリジン（３ｍＬ×３回）で乾燥した。残渣をピリジン（５ｍＬ）に再溶解し、１Ｈ−テトラゾール（１０５．０１ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１３２．９２μＬ）を添加した。溶液を３０℃で２０時間撹拌した。揮発性物質を真空除去した。残渣をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、濾過した。濾液を回収した。溶液をカラム（ＤＣＭ：（ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ＝５０：１）＝１．２：１）により精製して、粗生成物（１２０ｍｇ）を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１２分）により精製して、所望の化合物（４６．９ｍｇ、純度：９０．６％、収率１８％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３２．２。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.25 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.60 - 5.50 (m, 2H), 5.25 - 5.09 (m, 4H), 4.80 - 4.71 (m, 1H), 4.69 - 4.62 (m, 1H), 4.47 - 4.31 (m, 3H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 3.92 - 3.88 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.92 (s, 3H).ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝８３２．２。
化合物１８
[357]３’−（ｓ）−フルオロ−アデノシン−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトピラノシル）ジホスフェート
[358]ステップ１．化合物３’−（ｓ）−フルオロ−アデノシン−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[359]４ｍＬの溶液（ＭｅＯＨ（９ｍＬ）、ＴＥＡ（０．１５ｍＬ）およびＴＥＡＢ（１２ｍＬ）からなる）中の上記の化合物１７の調製におけるステップ９の生成物の化合物（６ｍｇ、７．２２μｍｏｌ）の溶液を−２０℃で３６時間維持した。溶液を凍結乾燥した。所望の化合物（４ｍｇ、６．４４μｍｏｌ）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）＋：６２０．２。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.13 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 6.03 - 5.99 (m, 1H), 5.22 - 5.21 (m, 1H), 5.08 - 4.96 (m, 3H), 4.27 - 4.10 (m, 2H), 4.00 - 3.95 (m, 1H), 3.90 - 3.85 (m, 1H), 3.82 - 3.75 (m, 1H), 3.56 - 3.38 (m, 3H), 3.26 - 3.17 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 15H), 1.12 - 0.97 (m, 23H).
化合物１９
[360]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（３ａＳ，４Ｓ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[361]ステップ１．Ｎ−（９−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリン−６−イル）ベンズアミドの調製
[362]Ｎ−（９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−９Ｈ−プリン−６−イル）ベンズアミド（２３．０ｇ、６１．９ｍｍｏｌ）および２，２−ジメトキシプロパン（６４．５ｇ、６１９．３ｍｍｏｌ）をアセトン（４００ｍＬ）に溶解した。次いで、ｐ−ＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（１２．８ｇ、７４．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で４時間撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を０℃に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）でクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、乳状水性層を酢酸エチル（２５０ｍＬ×２回）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、真空濃縮して、所望の化合物（２５．０ｇ、粗製）を明黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.19 (br, 1H), 8.74 (s, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.03 - 7.99 (m, 2H), 7.64 - 7.60 (m, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 2H), 6.25 - 6.24 (m, 1H), 5.41 (dd, J = 6.4Hz, 2.4 Hz, 1 H), 5.11 (t, J = 5.2 Hz,1 H), 4.99 - 4.97 (m, 1H), 4.26 - 4.23 (m, 1H), 3.56 - 3.50 (m, 2H), 1.54 (s, 3 H), 1.32 (s, 3 H).
[363]ステップ２．（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル４−メチルベンゼンスルホネートの調製
[364]ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のＴｏｓＣｌ（１５．０ｇ、７９．０ｍｍｏｌ）を、０℃でＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）中の上記ステップ１で得られた化合物（２５．０ｇ、６０．７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．４ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１２．３ｇ、１２１．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を２５℃で６時間撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を０℃に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）でクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、乳状水性層を酢酸エチル（２００ｍＬ×２回）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、真空濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０から０：１）により精製して、所望の化合物（３５．０ｇ、収率：７６．７％、純度７５．３％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５６６．０
[365]ステップ３．Ｎ−（９−（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＳ）−２，２−ジメチル−６−メチレンテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリン−６−イル）ベンズアミドの調製
[366]ｔ−ＢｕＯＫ（１５．７ｇ、１３９ｍｍｏｌ）を、上記ステップ２の生成物の化合物（３５．０ｇ、４６．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４００ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で２時間撹拌した。反応混合物を水性ＮＨ４Ｃｌ（２００ｍＬ）に添加し、酢酸エチル（２００ｍＬ×２回）で抽出した。有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０から０：１）により精製して、所望の化合物（９．７ｇ、収率５２．９％）を明黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.24 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 8.02 - 8.00 (m, 2H), 7.64 - 7.60 (m, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 2H), 6.58 (s, 1H), 5.63 - 5.61 (m, 1H), 5.43 - 5.41 (m, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.38 - 4.37 (m, 1H), 1.47 (s, 3 H), 1.35 (s, 3 H).
[367]ステップ４．化合物Ｎ−（９−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＳ）−６−フルオロ−６−（ヨードメチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリン−６−イル）ベンズアミドの２つの異性体の調製
引き続いて、Ｉ２（１８．０ｇ、７１．１ｍｍｏｌ）を、−２０℃で上記ステップ３の生成物の化合物（７ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（３００ｍＬ）溶液に添加した。次いで、ＡｇＦ（２．２６ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（３００ｍＬ）溶液を添加した。混合物を−２０℃〜−２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、次いで酢酸エチル（３００ｍＬ）を添加し、水性炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）で洗浄し、有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０から０：１）により精製して、所望の化合物の２つの異性体の混合物（４．００ｇ、収率：４０．４％、純度９７．１％）を明黄色固体して得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５４０．０。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.25 (br, 1 H), 8.78 - 8.75 (m, 1H), 8.64 - 8.52 (m, 1H), 8.03 - 8.01 (m, 2H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.55 - 7.51 (m, 2H), 6.66 - 6.53 (m, 1H), 5.88 - 5.86 (m, 0.5H), 5.44 - 5.37 (m, 1H), 5.29 - 5.26 (m, 0.5H), 3.65 - 3.48 (m, 2H), 1.55 (s, 1.5H), 1.52 (s, 1.5H)，1.37 (s, 1.5H), 1.32 (s, 1.5H).
[368]ステップ５．Ｎ−（９−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｓ，６ａＳ）−６−フルオロ−６−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−９Ｈ−プリン−６−イル）ベンズアミドの２つの異性体の調製
[369]ＴＦＡ（３．８０ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）および水酸化テトラ（ｎ−ブチル）アンモニウム（５．１９ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）を、上記ステップ４から得られた２つの異性体の混合物（３．７０ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）溶液に添加し、次に２５℃でｍ−ＣＰＢＡ（６．７６ｇ、３３．３ｍｍｏｌ、純度８５％）を添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和Ｎａ２ＳＯ３溶液（２０ｍＬ）および水性ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、低圧力で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０から０：１）により精製して、所望の２つの異性体の混合物（１．２０ｇ、収率：３９．８％、純度９４．９％）を明黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：４３０．０。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.23 (br. s, 1H), 8.79 - 8.73 (m, 1H), 8.62 (s, 0.3H), 8.54 - 8.48 (m, 0.7H), 8.05 - 7.98 (m, 2H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 6.63 (s, 0.3H), 6.48 (s, 0.7H), 5.81 - 5.75 (m, 1H), 5.41 - 5.32 (m, 1H), 5.21 - 5.14 (m, 1H), 3.80 - 3.54 (m, 2H), 1.52 (s, 1H), 1.50 (s, 2H), 1.36 (s, 2H), 1.32 (s, 1H).
[370]ステップ６．（（３ａＳ，４Ｓ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルジベンジルホスフェートの２つの異性体の調製
[371]ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）およびＣＨ３ＣＮ（１７ｍＬ）中の上記ステップ５から得られた２つの異性体（８５０ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）および１Ｈ−イミダゾール−４，５−ジカルボニトリル（４６７ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃でＮ−ジベンジルオキシホスファニル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン（１．３７ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１０分間撹拌し、次いで、２５℃に温めた。得られた混合物をもう２時間撹拌し、０℃に再び冷却した。ｍ−ＣＰＢＡ（８０３ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ、純度８５％）をそのまま添加し、反応物を２５℃にゆっくり温め、２時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）でクエンチし、有機相を分離した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ×２回）で抽出した。有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０〜０：１）により精製して、所望の２つの異性体（１．１０ｇ、収率：７３．２％、純度９０．８％）を明黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６９０．１。H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.25 (br. s, 1H), 8.75 (s, 0.7H), 8.64 (s, 0.3H), 8.61 (s, 0.3H), 8.54 (s, 0.7H), 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.66 - 7.58 (m, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.36 - 7.24 (m, 10H), 6.73 (s, 0.3H), 6.57 (s, 0.7H), 5.85 (d, J = 5.6 Hz, 0.7H), 5.51 - 5.42 (m, 0.3H), 5.41 - 5.37 (m, 0.3H), 5.30 (t, J = 6.0 Hz, 0.7H), 5.05 - 4.94 (m, 4H), 4.37 - 4.14 (m, 2H), 1.51 (s, 1H), 1.46 (s, 2H), 1.34 (s, 2H), 1.32 (s, 1H).
[372]ステップ７．（（３ａＳ，４Ｓ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチルジベンジルホスフェートの２つの異性体の調製
[373]上記ステップ６から得られた２つの異性体（１．１０ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）をＮＨ３／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ、７Ｍ）に溶解した。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０から０：１、次いでＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝１０：２）により精製して、所望の異性体（７１０ｍｇ、収率：７７．５％、純度９２．７％）を明黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋＝５８６．１。
[374]ステップ８．（（３ａＳ，４Ｓ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル二水素ホスフェートの２つの異性体の調製
[375]ｔ−ＢｕＯＨ（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中の上記ステップ７から得られた２つの異性体の混合物（６００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）をＰｄ（ＯＨ）２（３００ｍｇ、４２７．２３μｍｏｌ、２０％）およびＰｄ／Ｃ（５０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１０％）と混合し、次いで、反応混合物をＮ２雰囲気（４５ｐｓｉ）下に２５℃で１６時間撹拌した。濾過し、濾液を濃縮して、所望の異性体（２００ｍｇ、粗製）を明黄色固体として得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.26 - 8.17 (m, 2H), 6.59 - 6.46 (m, 1H), 5.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.57 - 5.45 (m, J = 11.7 Hz, 1H), 5.37 - 5.30 (m, 1H), 4.21 - 4.06 (m, 2H), 1.80 - 1.52 (m, 3H), 1.49 - 1.35 (m, 3H).
[376]ステップ９．（（３ａＳ，４Ｓ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メチル水素モルホリノホスホネートＤＣＣモルホリン塩の調製
[377]ＤＣＣ（４０７ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）溶液を、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）およびｔ−ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）中の上記ステップ８から得られた２つの異性体（２００ｍｇ、４９３μｍｏｌ）およびモルホリン（１７１ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）の溶液に８０〜９０℃下で滴下して添加した。溶液をＮ２下に８０〜９０℃で１６時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、溶媒を除去して、残渣を得た。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、ＴＢＭＥ（１０ｍＬ×２回）で抽出し、水性相を減圧下で濃縮して、所望の異性体（３１０ｍｇ、粗製）を明黄色固体として得た。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.41 - 8.17 (m, 2H), 6.70 - 6.50 (m, 1H), 5.81 - 5.68 (m, 1H), 5.62 - 5.46 (m, 1H), 5.42 - 5.28 (m, 1H), 4.34 - 4.09 (m, 1H), 4.07 - 4.00 (m, 1H), 3.88 - 3.74 (m, 5H), 3.73 - 3.55 (m, 2H), 3.51 - 3.22 (m, 8H), 3.07 - 3.02 (m, 1H), 2.96 - 2.91 (m, 1H), 2.87 - 2.78 (m, 2H), 1.90 (br s, 4H), 1.81 - 1.70 (m, 4H), 1.68 - 1.57 (m, 5H), 1.51 - 1.44 (m, 3H), 1.39 - 1.26 (m, 8H), 1.19 - 1.08 (m, 2H).
[378]ステップ１０．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの２つの異性体の調製
[379]上記ステップ９から得られた２つの異性体（３１０ｍｇ、４０３μｍｏｌ）および上記の化合物１の調製におけるステップ１４からの生成物（２２６ｍｇ、３２２μｍｏｌ）を乾燥ピリジン（１０ｍＬ×３回）で脱水した。混合物をピリジン（１５ｍＬ）で溶解した。１Ｈ−テトラゾール（９４．２ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を添加し、２５℃で７２時間撹拌した。溶媒を除去して、残渣を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（２％ＮＨ３．Ｈ２Ｏを含む）＝１：０から１：１）により精製して、粗製の所望の生成物（１７０ｍｇ、粗製）を白色固体として得た。粗生成物（６０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３５％、１０分）により精製して、異性体１（１７ｍｇ）および異性体２（７ｍｇ）を得た。
異性体１：1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.24 - 8.11 (m, 2 H), 6.46 (s, 1 H) ,5.41 (dd, J = 11.7, 6.6 Hz, 1 H), 5.35 - 5.23 (m, 2 H) ,5.19 (d, J = 6.4 Hz, 1 H), 5.09 - 4.85 (m, 3 H), 4.26 - 3.97 (m, 3 H), 3.91 (dd, J = 12.1, 7.2 Hz, 1 H) ,3.77 (br d, J = 9.8 Hz, 1 H) , 1.98 (s, 3 H), 1.91 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.82 (s, 3 H), 1.78(s, 3 H), 1.47 (s, 3 H), 1.25 (s, 3 H)
異性体２：1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.24 - 8.07 (m, 2 H), 6.50 - 6.36 (m, 1 H), 5.57 (d, J = 5.6 Hz, 1 H) ,5.47 - 5.24 (m, 2 H), 5.23 - 5.13 (m, 1 H), 5.09 - 4.85 (m, 4 H), 4.24 - 4.10 (m, 2 H), 4.03 (dd, J = 12.0, 7.1 Hz, 1 H), 3.80 (dd, J = 10.0, 2.7 Hz, 1 H), 1.98 (s, 3 H), 1.95 (s, 3 H), 1.93 (s, 3 H), 1.84 (s, 3 H), 1.77(s, 3 H), 1.44 (s, 3 H), 1.27 (s, 3 H)
化合物２０
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−フルオロ−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[380]ステップ１．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−フルオロ−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[381]ＴＦＡ（０．６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．４ｍＬ）中の上記の化合物１９の調製におけるステップ１０から得られた２つの異性体（８０．０ｍｇ、９０．１μｍｏｌ）の溶液を２５℃で０．５時間撹拌した。Ｅｔ３Ｎを用いて、混合物をｐＨ＝７に調整し、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３５％、９分）により精製して、１つの異性体（１０ｍｇ、１１．８μｍｏｌ、収率１３．１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８４８．２ 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 8.37 (s, 1 H), 8.13 (s, 1 H) ,6.26 (br s, 1 H), 5.55 - 5.37 (m, 2 H), 5.08 (br s, 3 H), 4.86 - 4.70 (m, 1H), 4.44 (d, J = 5.8 Hz, 1 H) ,4.32 (br d, J = 12.0 Hz, 1 H), 4.23 - 4.04 (m, 3 H), 3.84 (br s, 1 H), 3.22 - 3.16 (m, 7 H), 2.01 (s, 3 H), 1.93 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.80 (s, 3 H), 1.72(s, 3 H). 19Fδ-123.7, 31P δ -13.22および-15.21.
化合物２１
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｓ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
ステップ１．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｓ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[382]化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（ホスホノオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートトリメチルアミン塩（２００ｍｇ、３９９．７２μｍｏｌ；Ｉｎｕｋｉら、Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ． ２０１７， １９， ３０７９−３０８２；Ｚａｍｙａｔｉｎａら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）， ３３８：２５７１−２５８９）および化合物ＡＭＰ−モルホリデート（４’−モルホリン−Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボキサミジニウム塩）（３６０ｍｇ、８６４．７１μｍｏｌ）の混合物をピリジン（５ｍＬ×３回）で乾燥した。次いで、残渣をピリジン（５ｍＬ）に再溶解した。１Ｈ−テトラゾール（１００ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３０℃で２４時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解した。固体を濾過により除去した。濾液を回収し、濃縮した。残渣をカラム（ＤＣＭ：（ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ ５０：１）＝１：０〜１：１．２）により精製して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３５％、１０分）により再精製して、所望の化合物（６８ｍｇ、収率：２０．２４％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３０．２。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.59 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.08 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.62 - 5.57 (m, 1H), 5.55 - 5.47 (m, 1H), 5.28 - 5.22 (m, 1H), 5.19 - 5.12 (m, 2H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 2H), 4.33 - 4.15 (m, 4H), 3.94 - 3.84 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.89 (s, 3H).
化合物２２
[383]アデノシン−５’−（Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェート
[384]ステップ１．アデノシン−５’−（Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[385]２ｍＬの溶媒（０．１Ｍ ＴＥＡＢ（８ｍＬ）、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）およびＴＥＡ（０．１ｍＬ）からなる）中の上記の化合物２１の調製におけるステップ１の生成物の化合物（１４．４ｍｇ、１７．３６μｍｏｌ）を−２０℃で５６時間撹拌した。溶液を真空凍結乾燥して、所望の化合物のトリメチルアミン塩（８ｍｇ、収率：３０．５１％）を白色粘着性固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）＋：６１７．９。1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8.30 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 6.00 - 5.92 (m, 1H), 5.04 - 4.99 (m, 1H), 4.58 - 4.54 (m, 1H), 4.25 - 4.33 (m, 1H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 4.09 - 3.97 (m, 3H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.76 - 3.67 (m, 1H), 3.55 - 3.42 (m, 3H), 3.17 - 3.10 (m, 1H), 3.00 - 2.94 (m, 14H), 1.08 - 1.03 (m, 22H).
化合物２３
[386]（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[387]ステップ１．（（２−シアノエトキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスファニル）ジプロピルアミンの調製
[388]ＣＨ３ＣＮ（１．５ｍＬ）中の１Ｈ−テトラゾール（７１ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下に０℃でＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の上記の化合物７の調製におけるステップ７の化合物（３００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）および３−ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスファニルオキシプロパンニトリル（３０４ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、３２０μＬ）の溶液に滴下して添加した。得られた混合物を２５℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１：０〜１：１）により精製して、所望の化合物（８０ｍｇ、収率：１９．０％、純度８９％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７１１．１（加水分解された質量）。
[389]ステップ２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（（（２−シアノエトキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[390]４，５−ジシアノイミダゾール（２４ｍｇ、２０３μｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下にＤＭＦ（３ｍＬ）中の上記ステップ１の生成物の化合物（８０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）および化合物５の調製におけるステップ４の生成物の化合物（１２１ｍｇ、１５１μｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で１時間撹拌した。次いで、硫黄（５ｍｇ、１５１μｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２５℃でもう０．５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物をそのまま分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３８％−６４．２５％、７分）により精製して、所望の化合物（２３ｍｇ、収率：１５．８％、純度８０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１１５３．５。
[391]ステップ３．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（（（２−シアノエトキシ）（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[392]ＴＦＡ（６１６ｍｇ、５．４０ｍｍｏｌ、０．４ｍＬ）を、上記ステップ２の生成物の化合物（５ｍｇ、４．３４μｍｏｌ）のジオキサン（０．６ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を４０℃で２時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物Ｇ−３（６ｍｇ、粗製）を明淡黄色シロップとして得た。それをそのまま次のステップで使用した。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：９０９．９。
[393]ステップ４．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジアセトキシ−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[394]ＤＢＵ（３．３０ｍｇ、２１．７μｍｏｌ、３．３μＬ）を、上記ステップ３の化合物（５ｍｇ、４．３４μｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（０．５ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物（reluting mixture）を２５℃で０．５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、所望の粗化合物（７ｍｇ）を明黄色シロップとして得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ ５μ；移動相：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％−５０％、７．５分）により精製して、所望の化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８５８．５。
化合物２４
[395]アデノシン−（５’−（マンノース−ピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェート
[396]ステップ１．アデノシン−（５’−（マンノース−ピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェートの調製
[397]７：３：１比のＭｅＯＨ／水／Ｅｔ３Ｎ溶液に溶解した上記化合物２３の調製におけるステップ４の生成物の化合物の溶液を２５℃で１０時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濃縮し、水から凍結乾燥して、所望の化合物を得た。
化合物２５
[398]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[399]ステップ１．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[400]上記の化合物１の調製におけるステップ１４の生成物の化合物（２２０ｍｇ、４３９．７０μｍｏｌ）およびＡＭＰ−モルホリデート（４’−モルホリン−Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボキサミジニウム塩）（５４９．２ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）の混合物をピリジン（５ｍＬ×３回）で乾燥した。次いで、残渣をピリジン（５ｍＬ）に再溶解し、１Ｈ−テトラゾール（１５４．０１ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３０℃で４８時間撹拌した。溶媒を真空除去した。残渣をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した。固体を濾過により除去した。濾液を回収し、濃縮した。残渣をカラム（ＤＣＭ：（ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ＝５０：１）＝１：０〜１．２：１）により精製して、粗生成物（１４０ｍｇ）を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３５％、１０分）により再精製して、所望の化合物（５０ｍｇ、収率１３．６％）を白色固体として得た。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ 8.58 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 6.07 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.53 - 5.56 (br. s, 2H), 5.16-5.22 (m, 3H), 4.60 - 4.63 (m, 1H), 4.40 - 4.46 (m, 2H), 4.19 - 4.24 (m, 4H), 3.87 -3.89 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.04 2.03 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.92 (s, 3H).ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３０．４。
化合物２６
[401]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[402]ステップ１．化合物（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メタノールの調製
[403]ジオキサン（１００ｍＬ）中の実施例１におけるステップ５の生成物の化合物の混合物（４．１ｇ、４．６ｍｍｏｌ）に、ＨＣｌ−ジオキサン（４Ｍ、１０ｍＬ）を滴下して添加した。混合物を２６℃で３０分撹拌した。反応が完了した後、混合物をＥＡ（５００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ×３回）およびブライン（１００ｍＬ×３回）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１：０から１：１）により精製して、所望の化合物（１．８ｇ、収率：６０．７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６４６．１。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.42 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.34 - 7.19 (m, 15H), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.74 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.58 - 5.52 (m, 1H), 5.46 - 5.22 (m, 1H), 4.98 - 4.89 (m, 1H), 4.57 - 4.26 (m, 4H), 3.70 (s, 3H), 3.63 - 3.60 (m, 2H).
[404]ステップ２．化合物（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル水素ホスホネートの調製
[405]上記ステップ１の生成物の化合物（１．８ｇ、２．８ｍｍｏｌ）のピリジン（６ｍＬ）溶液に、フェノキシホスホノイルオキシベンゼン（１．６５ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌した。次いで、ＴＥＡ（１．４５ｇ、１４．３７ｍｍｏｌ、２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５１５μＬ、２８．５ｍｍｏｌ）を混合物に添加した。混合物を２５℃でもう０．５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１から１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（２ｇ、収率：９０％）を明黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６９６．２。
[406]ステップ３．化合物Ｏ−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）Ｏ，Ｏ−二水素ホスホロチオエートトリエチルアミン塩の調製
[407]ピリジン（５ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（５ｍＬ）中の上記ステップ２の生成物の化合物（２ｇ、２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２雰囲気下にＴＭＳＣｌ（１．８２ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下して添加した。混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで硫黄（５５５ｍｇ、１７．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃でもう４５分間撹拌した。反応が完了した後、反応物をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチし、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１から１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（９００ｍｇ、収率４３％）を黄色シロップとして得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：７２８．３。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.37 - 7.23 (m, 15H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.75 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.60 - 5.35 (m, 1H), 5.14 - 4.96 (m, 1H), 4.63 - 4.34 (m, 3H), 4.11 - 3.82 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.12 - 2.89 (m, 12H), 1.19 (t, J=7.3 Hz, 18H).
[408]ステップ４．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（ヒドロキシ（１Ｈ−イミダゾル−１−イル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[409]ＣＤＩ（９４３ｍｇ、５．８ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下に実施例１におけるステップ１４の生成物の化合物（３５０ｍｇ、５８１．８μｍｏｌ、Ｅｔ３Ｎ）の無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、ＭｅＯＨ（０．２８ｍＬ）を添加して、反応物をクエンチし、混合物を減圧下で濃縮して、所望の化合物（１ｇ、粗製）を得た。それをそのまま次のステップで使用した。
[410]ステップ５．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[411]ＺｎＣｌ２（１．１ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下に無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の上記ステップ４の生成物の化合物（３８０ｍｇ、６９０．４μｍｏｌ）および上記ステップ３の生成物の化合物（５８０ｍｇ、６９９．７μｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（３５０ｍｇ、収率：４０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１２１０．５
[412]ステップ６．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３−フルオロ−４−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[413]ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＴＦＡ（０．２ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ）中の上記ステップ５の生成物の化合物（３５０ｍｇ、２８９μｍｏｌ）の溶液を２５℃で３時間撹拌した。反応が完了した後、Ｅｔ３Ｎを添加することによって、混合物をｐＨ＝７に調整した。反応物を減圧下で濃縮した。生成物を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１０分）により精製して、所望の化合物（７０ｍｇ、収率３９．９％）を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８４８．２ 1H NMR (400MHz, MeOD) δ 8.83 (s, 0.5H), 8.75 (s, 0.5H), 8.20 (s, 1H), 6.27 - 6.06 (m, 1H), 5.76 - 5.61 (m, 2H), 5.30 - 5.16 (m, 3H), 5.09 - 4.93 (m, 2H), 4.60 - 4.12 (m, 5H), 3.97 - 3.95 (m, 1H), 2.15 (s, 1.5H), 2.14 (s, 1.5H), 2.08 - 2.04 (m, 6H), 2.02 (s, 1.5H), 2.00 (s, 1.5H), 1.95 (s, 1.5H), 1.94 (s, 1.5H).
化合物２７
[414]アデノシン−３’−フルオロ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェート
[415]ステップ１．アデノシン−３’−フルオロ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェート
ＭｅＯＨ／水／Ｅｔ３Ｎ（７：３：１、１．１ｍＬ）溶液中の実施例２６におけるステップ６の生成物の化合物（１０ｍｇ、１１．８μｍｏｌ）を２０℃で５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濃縮し、水から凍結乾燥して、トリメチルアミン塩としての所望の化合物（８ｍｇ、収率９１．８％）を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−：６３６．０。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.67 - 8.49 (m, 1H), 8.15 (s, 1H), 6.16 - 6.02 (m, 1H), 5.45 - 5.18 (m, 1H), 4.97 - 4.82 (m, 1H), 4.32 - 4.18 (m, 1H), 4.15 - 3.87 (m, 4H), 3.75 - 3.53 (m, 5H), 3.44 - 3.35 (m, 1H), 2.97 (q, J = 7.2 Hz, 12H), 1.12 (t, J=7.2 Hz, 18H).
化合物２８
[416]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[417]ステップ１．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（ヒドロキシ（１Ｈ−イミダゾル−１−イル）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[418]ＤＭＦ（８ｍＬ）中の実施例３におけるステップ１２の生成物の化合物の混合物（４２０ｍｇ、７４８．０１μｍｏｌ、Ｅｔ３Ｎ）に、ＣＤＩ（１．２ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で４時間撹拌した。反応が完了した後、ＭｅＯＨ（０．３ｍＬ）を添加して、反応物をクエンチし、混合物を減圧下で濃縮して、所望の化合物（１．３ｇ、粗製）を得た。それをそのまま次のステップで使用した。
[419]ステップ２．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（（（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−２，２−ジメチル−６−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[420]ＺｎＣｌ２（１．２ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下に無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の上記ステップ１の生成物の化合物（１．３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）および実施例２６におけるステップ３の生成物の化合物（５３０ｍｇ、７０９μｍｏｌ、Ｅｔ３Ｎ）の溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１、１％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（３８０ｍｇ、収率：４７．５％）を白色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１０８８．７。
[421]ステップ３．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトキシ−１−フルオロエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[422]ＴＦＡ（０．６ｍＬ、８．１０ｍｍｏｌ）を、上記ステップ２において得られた化合物（３７０ｍｇ、３４０．１μｍｏｌ）のＨ２Ｏ（０．４ｍＬ）溶液に添加した。混合物を２５℃で１．５時間撹拌した。反応が完了した後、Ｅｔ３Ｎを添加することによって、反応物をｐＨ＝７に調整した。混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１０分）により精製して、所望の化合物（４４．５ｍｇ、収率：１６．０％、純度９８．５％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８０６．１。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.68 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.11 - 6.09 (m, 1H), 5.72 - 5.57 (m, 2H), 5.37 - 5.32 (m, 1H), 5.22 - 5.20 (m, 1H), 4.77 - 4.73 (m, 1H), 4.69 - 4.60 (m, 2H), 4.52 - 4.45 (m, 2H), 4.26 - 4.24 (m, 3H), 3.91-3.83 (m, 1H), 2.13(s, 3H), 2.03(s, 3H), 2.02(s, 3H), 1.92(s, 3H).
化合物２９
[423]アデノシン−５’−（Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−６−フルオロ−ヘプトピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェート
[424]ステップ１．化合物アデノシン−５’−（Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−６−フルオロ−ヘプトピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェートの調製
[425]ＭｅＯＨ／水／Ｅｔ３Ｎ（７：３：１、２ｍＬ）溶液中の実施例２８におけるステップ３の生成物の化合物（１６．１ｍｇ、１０．０μｍｏｌ）の溶液を２５℃で３．５時間撹拌した。反応が完了した後、混合物を濃縮し、水から凍結乾燥して、所望の化合物（１４．３ｍｇ、収率：８５．２％、２Ｅｔ３Ｎ）を白色非晶質固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）＋：６３６．１。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.47 (s, 0.3H), 8.43 (s, 0.7H), 8.07 (s, 0.7H), 8.06 (s, 0.3H), 5.98 - 5.95 (m, 1H), 5.41 - 5.11(m, 1H), 4.86 - 4.73 (m, 1H), 4.39 - 4.37 (m, 1H), 4.26 - 4.24 (m, 1H), 4.12 - 4.10 (m, 2H), 4.00 - 3.94(m, 1H), 3.83 - 3.64 (m, 4H), 3.54 - 3.51(m, 1H), 3.33 - 3.21(m, 1H), 3.02 (q, J = 7.2Hz, 12H), 1.10 (t, J = 7.2Hz, 18H).
化合物３０
[426]（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[427]ステップ１．化合物（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジメトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル水素ホスホネートの調製
[428]ＰＨ（ＯＰｈ）２（１．３５ｇ、５．７５ｍｍｏｌ）を、実施例１３におけるステップ２の生成物の化合物（１ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液に添加した。得られた混合物を２５℃で２時間撹拌した。次いで、Ｅｔ３Ｎ（１．３３ｍＬ、９．５２ｍｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（０．３７ｍＬ、２０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。溶媒を除去して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０から１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製して、所望の化合物（１．５ｇ、収率：９４．７％、Ｅｔ３Ｎ）を明黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６０２．１。
ステップ２．化合物Ｏ−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジメトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル）Ｏ，Ｓ−二水素ホスホロチオエートの調製
[429]ＴＭＳＣｌ（２．００ｍＬ、１５．７ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１５ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（１５ｍＬ）中の上記ステップ１の生成物の化合物（１．３ｇ、１．８５ｍｍｏｌ、Ｅｔ３Ｎ）の溶液に添加した。混合物を２５℃で０．５時間撹拌し、次いで硫黄（７５８ｍｇ、２３．６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をもう１時間撹拌した。次いで、Ｈ２Ｏ（３．７９ｍＬ、２１０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をもう０．５時間撹拌した。反応物を濾過し、濾液を濃縮して、粗生成物を得た。それを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０から１０：１、０．５％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製した。所望の化合物（４００ｍｇ、収率：３３．１％、２Ｅｔ３Ｎ）を黄色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６３４．１。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.40 - 7.35 (m, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 8H), 7.23 - 7.15 (m, 5H), 6.14 - 6.05 (m, 1H), 4.49 - 4.42 (m, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 2H), 4.24 - 4.10 (m, 2H), 3.45 - 3.41 (m, 6H), 3.03 (q, J = 7.2 Hz, 12H), 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 18H).
[430]ステップ３．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジメトキシ−５−（６−（トリチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[431]ＺｎＣｌ２（５１６ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の実施例２６におけるステップ４の生成物の化合物（１９１ｍｇ、２９３μｍｏｌ、Ｅｔ３Ｎ）および上記ステップ２の生成物の化合物（４００ｍｇ、３１５μｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物をＡｒ雰囲気下に２５℃で２４時間撹拌した。溶媒を除去して、粗生成物を得た。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１：０から１０：１、１％Ｅｔ３Ｎを添加）により精製した。所望の化合物（４００ｍｇ、収率：９５．４％）を無色油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：１１１６．５。
[432]ステップ４．化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（（（（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−３，４−ジメトキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホロチオイル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）−６−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[433]ＤＣＭ（５ｍＬ）中の上記ステップ３の生成物の化合物（４００ｍｇ、３５８μｍｏｌ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）の混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応が完了した後、Ｅｔ３Ｎを用いて、混合物をｐＨ＝７に調整し、溶媒を除去し、残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ、水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＣＨ３ＣＮ、０〜３０％）により精製して、所望の化合物（２０ｍｇ、収率：６．４％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８７４．２。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.77 (s, 0.4H), 8.71 (s, 0.6H), 8.17 (s, 1H), 6.18 - 6.12 (m, 1H), 5.76 - 5.59 (m, 2H), 5.21 - 5.13 (m, 3H), 4.61 - 4.53 (m, 2H), 4.45 - 4.32 (m, 3H), 4.27 - 4.20 (m, 2H), 3.95 - 3.90 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.42 (s, 1.4H), 3.41 (s, 1.6H), 2.11(s, 3H), 2.06 - 2.02 (m, 6H), 1.99 (s, 1.6H), 1.97 (s, 1.4H), 1.91 (s, 3H).
化合物３１
[434]アデノシン−２’３’−ジメトキシ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェート
[435]ステップ１．化合物アデノシン−２’３’−ジメトキシ−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）（ヒドロキシ）ホスホロチオイルオキシホスフェートの調製
[436]ＭｅＯＨ（０．７ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（０．３ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ（０．１ｍＬ）中の実施例３０におけるステップ４の生成物の化合物の混合物（８ｍｇ、９．１６μｍｏｌ）を１５〜２０℃で３時間撹拌した。次いで、溶液を凍結乾燥器で凍結乾燥した。所望の化合物（６ｍｇ、収率：７６％、２Ｅｔ３Ｎ）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−＝６６２．１。1H NMR (400MHz, D2O) δ 8.47 (s, 0.4H), 8.45 (s, 0.6H), 8.10 (s, 1H), 6.02 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.13 - 5.05 (m, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 2H), 4.40 - 4.36 (m, 1H), 4.28 - 4.19 (m, 1H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 4.00 - 3.92 (m, 1H), 3.85 - 3.80 (m, 1H), 3.59 - 3.55 (m, 2H), 3.52 - 3.41 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 3.02 (q, J = 7.3 Hz, 12H), 1.10 (t, J = 7.3 Hz, 18H).
化合物３２
[437]（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（６−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
[438]ステップ１．化合物（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（６−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル水素モルホリノホスホネートの調製
[439]ｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ）中のＤＣＣ（１．１９ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下にｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ）およびＨ２Ｏ（６ｍＬ）中の化合物（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（６−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチル二水素ホスフェート（５００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびモルホリン（５００ｍｇ、５．７４ｍｍｏｌ）の還流溶液（１１０℃）に添加した。溶液をＮ２下に１１０℃で１２時間撹拌した。混合が完了した後、溶液を２０℃に冷却し、固体を濾過により除去した。濾液を回収し、有機溶媒を真空除去した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＴＢＭＥ（２０ｍＬ×３回）で洗浄した。水性相を回収し、真空中で濃縮して、所望の化合物をＤＣＣ塩（８１０ｍｇ、粗製）として明黄色油を得た。それを、さらに精製することなくそのまま次のステップに使用した。
[440]ステップ２．化合物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジアセトキシエチル）−６−（（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（６−ヒドロキシ−９Ｈ−プリン−９−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートの調製
[441]上記ステップ１の生成物の化合物（２５０ｍｇ、５００μｍｏｌ）および実施例１４におけるステップ１４の生成物の化合物（８１０ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）をピリジン（５ｍＬ×３回）で乾燥した。残渣を無水ピリジン（５ｍＬ）に溶解し、１Ｈ−テトラゾール（１７５ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を２０℃で１２時間撹拌した。次いで、溶液を３０℃まで温め、撹拌を１２時間続けた。溶媒を真空除去した。残渣をＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解した。固体を濾過により除去した。濾液を回収し、真空濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（ＤＣＭ：（ＭｅＯＨ：ＮＨ３．Ｈ２Ｏ＝５０：１）＝１：０から１：１．２）により精製して、粗生成物（８０ｍｇ）を得た。それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ １５０＊２５ ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％−３０％、１０分）により再精製して、所望の化合物（２０ｍｇ、収率：４．８２％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：８３１．４。1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.53 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.07 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.48 - 5.47 (m, 1H), 5.34 - 5.32 (m, 1H), 5.22 - 5.19 (m, 3H), 4.66 - 4.58 (m, 1H), 4.47 - 4.43 (m, 2H), 4.25 - 4.19 (m, 4H), 3.89 - 3.88 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.92 - 1.90 (m, 3H).
化合物３３
[442]イノシン−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェート
[443]ステップ１．化合物イノシン−５’−（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）ジホスフェートの調製
[444]２ｍＬの溶媒（０．１Ｍ ＴＥＡＢ（８ｍＬ）、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）およびＴＥＡ（０．１ｍＬ）からなる）中の上記の実施例３２におけるステップ２の生成物の化合物を−２０℃で２日間撹拌した。溶液を真空凍結乾燥して、所望の化合物をトリメチルアミン塩として得た。
ＨＢＰのプロドラッグ
[445]以下に式１ｂで示すＨＢＰは、非常に親水性であり、したがって、この分子が細胞膜を透過して、細胞質タンパク質であるＡＬＰＫ１に到達することは困難である。
[446]したがって、本開示は、原形質膜の透過を可能にするように適合されたＨＢＰの様々なプロドラッグを提供する。実施形態において、プロドラッグは、ＨＢＰのホスフェート部分の１つまたは複数において１つまたは複数の生体不安定保護基を含む。実施形態において、１つまたは複数の生体不安定保護基は、エステル連結を介してＨＢＰの１つまたは複数のホスフェート部分に連結されている。このように結合される可能性がある例示的な保護基としては、例えばカルボニルオキシメチル（例えば、ＰＯＭ、ＰＯＣ）、シクロサリゲニル（例えば、ｃｙｃｌｏＳａｌ）、環式１−アリール−１，３−プロパニルエステル（例えば、ＨｅｐＤｉｒｅｃｔ）、アリールオキシアミノ酸ホスホロアミデートまたはホスホノアミデート（例えば、ＰｒｏＴｉｄｅ）、およびメチルアリールハロアルキルアミデートが挙げられる。さらなる例としては、Ｓ−アシル−２−チオエチル（ＳＡＴＥ）、Ｓ−［（２−ヒドロキシエチル）スルフィジル］−２−チオエチル（ＤＴＥ）、アルキルオキシアルキル（例えば、ＨＤＰ、ＯＤＥ）、アミノ酸ホスホロアミデートまたはホスホノアミデートモノエステル、ビス（アミノ酸）ホスホロアミデートまたはホスホノアミデート、およびジ−またはトリ−ホスホネートが挙げられる。
Ｉ型：カルボニルオキシメチル
[447]カルボニルオキシメチルは、ホスフェート保護基の１クラスである。一部の実施形態において、カルボニルオキシメチル保護基は、一般式２ａを有する
［式中、Ｒ１ａおよびＲ１ｂはそれぞれ独立して、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ１〜１２アルコキシであり、波線は、分子の残りへの結合点を示す］。一部の実施形態において、Ｒ１ａおよびＲ１ｂはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキルまたはＣ１〜８アルコキシである。
[448]いかなる特定の理論にも拘束されることなく、カルボニルオキシメチル部分によって保護されているホスフェート基は、以下のスキームＩに記載されている一連の化学変換によりインビボで脱保護されると考えられる。
[449]一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは式３ａを有する
［式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄはそれぞれ独立して、Ｃ１〜１２アルキルまたはＣ１〜１２アルコキシである］。一部の実施形態において、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、およびＲ１ｄはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキルまたはＣ１〜８アルコキシである。
[450]ＨＢＰのカルボニルオキシメチルプロドラッグは、Ｈｗａｎｇ， Ｙ． およびＣｏｌｅ， Ｐ． Ａ． Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２００４， ６， １５５５； Ｉｎｕｋｉ， Ｓ．ら、Ｆｕｊｉｍｏｔｏ， Ｙ． Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１７， １９， ３０７９、または類似のものに記載されている方法を使用して調製されうる。
ＩＩ型：シクロサリゲニル（ｃｙｃｌｏＳａｌ）
[451]シクロサリゲニル（ｃｙｃｌｏＳａｌ）は、ホスフェート保護基の１クラスである。一部の実施形態において、ｃｙｃｌｏＳａｌ保護基は、一般式２ｂを有する
［式中、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、またはハロゲンであり、Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、またはハロゲンであり、下付き文字ｎは、１〜３の整数であり、波線は、分子の残りへの結合点を示す］。一部の実施形態において、Ｒ２は、ＨまたはＣ１〜８アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ３は、Ｃ１〜８アルキルである。一部の実施形態において、下付き文字ｎは１である。
[452]いかなる特定の理論にも拘束されることなく、１つまたは複数のｃｙｃｌｏＳａｌ部分によって保護されているホスフェート基は、以下のスキームＩＩに記載されている１つまたは複数の経路を介してインビボで脱保護されると考えられる。
[453]一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは、式３ｂを有する
［式中、Ｒ２ａおよびＲ２ｂはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、またはハロゲンであり、Ｒ３ａおよびＲ３ｂはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、またはハロゲンであり、下付き文字ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立して、１〜３の整数である］。一部の実施形態において、Ｒ２ａおよびＲ２ｂはそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１〜８アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ３ａおよびＲ３ｂはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキルである。一部の実施形態において、下付き文字ｎ１およびｎ２はそれぞれ、１である。
[454]ＨＢＰのＣｙｃｌｏＳａｌプロドラッグは、Ｓｐａｃｉｌｏｖａ， Ｐ．ら、ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ ２０１０、５、１３８６； Ｉｎｕｋｉ， Ｓ．ら、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１７、１９、３０７９、または類似のものに記載されている方法を使用して調製されうる。
ＩＩＩ型：環式１−アリール−１，３−プロパニルエステル（ＨｅｐＤｉｒｅｃｔ）
[455]環式１−アリール−１，３−プロパニルエステル（ＨｅｐＤｉｒｅｃｔｓ）は、ホスフェート保護基の１クラスである。一部の実施形態において、ＨｅｐＤｉｒｅｃｔ保護基は、一般式２ｃを有する
［式中、Ｒ４は、アリールまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、ヘテロアリール基は、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子環頂点を有し、波線は、分子の残りへの結合点を示す］。一部の実施形態において、Ｒ４は、アリールまたは６員ヘテロアリールである。一部の実施形態において、Ｒ４は、フェニルまたはピリジルである。
[456]いかなる特定の理論にも拘束されることなく、ＨｅｐＤｉｒｅｃｔ部分によって保護されるホスフェート基は、以下のスキームＩＩＩに記載されている経路を介してインビボで脱保護されると考えられる。
[457]一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは、式３ｃを有する
［式中、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ独立して、アリールまたは５−または６員ヘテロアリールであり、ヘテロアリール基は、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子環頂点を有する］。一部の実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ独立して、アリールまたは６員ヘテロアリールである。一部の実施形態において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ独立して、フェニルまたはピリジルである。
[458]ＨＢＰのＨｅｐＤｉｒｅｃｔプロドラッグは、Ｒｅｄｄｙ， Ｋ． Ｒ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２００５， ４６， ４３２１； Ｉｎｕｋｉ， Ｓ．ら、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１７， １９， ３０７９、または類似のものに記載されている方法を使用して調製されうる。
ＩＶ型：アリールオキシアミノ酸アミデート（Ｐｒｏｔｉｄｅ）
[459]アリールオキシアミノ酸アミデート（Ｐｒｏｔｉｄｅ）は、ホスフェート保護基の１クラスである。一部の実施形態において、ｐｒｏｔｉｄｅ保護基は、一般式２ｄを有する
［式中、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１〜８アルキルであり、Ｒ７は、Ｃ１〜８アルキルであり、Ｒ８は、アリールであり、波線は、分子の残りへの結合点を示す］。一部の実施形態において、Ｒ７は、メチルまたはイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ８は、フェニルである。
[460]いかなる特定の理論にも拘束されることなく、Ｐｒｏｔｉｄｅ部分によって保護されているホスフェート基は、以下のスキームＩＶに記載されている経路を介してインビボで脱保護されると考えられる。
[461]一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは、式３ｄを有する
［式中、Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ６ａ、およびＲ６はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１〜８アルキルであり、Ｒ７ａおよびＲ７ｂはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキルであり、Ｒ８ａおよびＲ８ｂはそれぞれ独立して、アリールである］。一部の実施形態において、Ｒ７ａおよびＲ７ｂはそれぞれ独立して、メチルまたはイソプロピルである。一部の実施形態において、Ｒ８ａおよびＲ８ｂはそれぞれ、フェニルである。
[462]ＨＢＰのＰｒｏｔｉｄｅプロドラッグは、ｖａｎ Ｂｏｏｍ， Ｊ． Ｈ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９７５， ３１， ２９５３； Ｉｎｏｕｅ， Ｊ．−ｉ．およびＦｕｊｉｍｏｔｏ， Ｙ．、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１７， １９， ３０７９、または類似のものに記載されている方法を使用して調製されうる。
Ｖ型：メチルアリールハロアルキルアミデート
[463]メチルアリールハロアルキルアミデートは、ホスフェート保護基の１クラスである。一部の実施形態において、メチルアリールハロアルキルアミデート（methylaryl haloalkylamdiate）保護基は、一般式２ｅを有する
［式中、Ｒ９は、Ｃ１〜８アルキルであり、Ｘ１は、Ｃ３〜５アルキレンであり、Ｒ１０は、アリール、ヘテロアリール、アリールＣ１〜４アルキレン、またはヘテロアリールＣ１〜４アルキレンであり、ヘテロアリール基は、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子環頂点を有する５または６員環である］。一部の実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１〜４アルキルである。一部の実施形態において、Ｘ１は、Ｃ４アルキレンである。一部の実施形態において、Ｒ１０は、アリールまたはアリールＣ１〜４アルキレンである。一部の実施形態において、Ｒ１０は、フェニルである。一部の実施形態において、Ｒ１０は、ベンジルである。
[464]いかなる特定の理論にも拘束されることなく、メチルアリールハロアルキルアミデート（methylaryl haloalkylamdiate）部分によって保護されているホスフェート基は、以下のスキームＶに記載されている一連の化学変換を経てインビボで脱保護されると考えられる。Ｒ９およびＲ１０に対して定義された基は、例示であって、限定することを意図したものではないことが理解されよう。
[465]一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは、式３ｅを有する
［式中、Ｒ９ａおよびＲ９ｂはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキルであり、Ｘ１ａおよびＸ１ｂはそれぞれ独立して、Ｃ３〜５アルキレンであり、Ｒ１０ａおよびＲ１０ｂはそれぞれ独立して、アリール、ヘテロアリール、アリールＣ１〜４アルキレン、またはヘテロアリールＣ１〜４アルキレンであり、ヘテロアリール基は、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１〜３個のヘテロ原子環頂点を有する５または６員環である］。一部の実施形態において、Ｒ９ａおよびＲ９ｂはそれぞれ独立して、Ｃ１〜４アルキルである。一部の実施形態において、Ｘ１ａおよびＸ１ｂはそれぞれ独立して、Ｃ４アルキレンである。一部の実施形態において、Ｒ１０ａおよびＲ１０ｂはそれぞれ独立して、アリールまたはアリールＣ１〜４アルキレンである。一部の実施形態において、Ｒ１０ａおよびＲ１０ｂはそれぞれ独立して、フェニルである。一部の実施形態において、Ｒ１０ａおよびＲ１０ｂはそれぞれ独立して、ベンジルである。
[466]ＨＢＰのメチルアリールハロアルキルアミデート（methylaryl haloalkylamdiate）プロドラッグは、Ｗｕ， Ｗ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００７， ５０， ３７４３； Ｉｎｏｕｅ， Ｊ．−ｉ．およびＦｕｊｉｍｏｔｏ， Ｙ．、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２０１７， １９， ３０７９、または類似のものに記載されている方法を使用して調製されうる。
[467]当業者は、ＨＢＰの２つのホスフェート部分のそれぞれが独立して、上記の方法を使用してＩ型〜Ｖ型保護基のいずれかで保護されうるであることを認識するであろう。したがって、一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは、式３で表される
［式中、Ｙ１およびＹ２はそれぞれ独立して、ホスフェート、式２ａ、式２ｂ、式２ｃ、式２ｄ、または式２ｅである。ただし、Ｙ１およびＹ２が共にホスフェートではないことを条件とする］。
[468]一部の実施形態において、ＨＢＰのプロドラッグは、表１の化合物である。
Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＨＭＰ−１ｂＰの合成
[469]Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（「Ｈ１ｂ−ＡＤＰ」、化合物ＩＸ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−Ｐ（ＨＭＰ−１ｂＰ、化合物ＶＩＩＩ）
[470]Ｈ１ｂ−ＡＤＰの合成は、Ｉｎｕｋｉら、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０１７）， １９：３０７９−３０８２に従って合成した化合物Ｉから進行した。以下の化合物ＩＸは、Ｚａｍｙａｔｉｎａら、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ， Ｉｎｔ’ｌ Ｅｄ．（２０００）， ３９（２２）：４１５０−４１５３に従って合成した。
合成スキーム
[471]感湿反応はすべて、Ａｒ下で注射器−セプタムキャップ技法を使用して行った。分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲル６０ Ｆ ２５４プレート（Ｑｉｎｄａｏ、厚さ０．２５ｍｍ）で行った。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを記録し、化学シフトは、内部テトラメチルシランまたは重水素化溶媒の残留プロトンに対する値（ｐｐｍ）として報告した。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを記録し、化学シフトは、内部テトラメチルシランまたは重水素化溶媒の残留プロトンに対するδ値（ｐｐｍ）として報告した。Ｖａｒｉａｎ−４００分光計を用いて、３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルを記録し、化学シフトは、外部８５％リン酸に対するδ値（ｐｐｍ）として報告した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、以下の通り要約される：化学シフト、多重度（ｂｒ＝ブロード、ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線）、プロトン数、および結合定数。
[472]ステップ１．化合物ＩＩの合成：
[473]ＤＭＦ（２７０ｍＬ）中の化合物Ｉ（１７．９３ｇ、２３．６５ｍｍｏｌ）、ＴＢＡＩ（０．９ｇ、２．３６５ｍｍｏｌ）およびＢｎＢｒ（７．１ｍＬ、５９．１４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、０℃でＮａＨ（６０％オイルディスパージョン、２．４ｇ、５９．１４ｍｍｏｌ）を添加した。終夜撹拌した後、反応物をＨ２Ｏでクエンチした。混合物全体をＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：９）で抽出した。抽出液をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。それを、それを、ＰＥ−ＥｔＯＡｃ（５：１）を用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＩＩＩ（６．３４０７ｇ、収率３２％）を無色油として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm): 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) 1.04 (s,9H); 3.75〜3.77(m,1H); 3.84〜3.96(m,5H); 2.44〜2.47(d,1H); 4.05〜4.14(m, 3H); 4.56〜4.86 (m,8H); 5.10〜5.21(m,2H); 5.79〜5.84(m,1H); 7.02〜7.05(m,2H), 7.16〜7.38(m, 24H); 7.60〜7.67 (m,4H)
[474]ステップ２．化合物ＩＩＩの合成:
[475]Ｉｒ［（ｃｏｄ）（ＭｅＰｈ２Ｐ）２］ＰＦ６（２１０ｍｇ、２５３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３５ｍＬ）溶液を、１気圧のＨ２雰囲気下に室温で明黄色溶液が生成されるまで撹拌し、次いで溶液にＮ２を通気して、少しの残存水素ガスも除去した。Ｉｒ触媒の得られた溶液を、室温でＴＨＦ（３５ｍＬ）中の化合物ＩＩ（１．０７４１ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この温度で６時間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（２２ｍＬ）およびＩ２（６５０ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を、室温で撹拌混合物に添加した。この温度で１時間撹拌した後、反応物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３でクエンチした。混合物全体をＥｔＯＡｃで抽出した。抽出液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。それを、ＰＥ−ＥｔＯＡｃ（１：１）を用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＩＩＩ（０．６８ｇ、収率６６．３％）を無色油として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm): 1.03 (s, 9H), 3.72 (s, 1H); 3.93〜4.05 (m, 6H); 4.23〜4.45 (m, 1H); 4.55〜4.80 (m, 7H); 5.13 (br, 1H); 7.02〜7.07 (m, 2H); 7.21〜7.37 (m, 24H); 7.62〜7.68 (m, 4H).
[476]ステップ３．化合物ＩＶおよびＶの合成：
[477]ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の化合物ＩＩＩ（６８０ｍｇ、０．８４２ｍｍｏｌ）、リン酸ジベンジル（７０２ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）、ｎ−Ｂｕ３Ｐ（０．５１ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）およびＭＳ ５Å（５００ｍｇ）の撹拌混合物に、室温でＥｔ３Ｎ（０．７１ｍＬ、５．０６ｍｍｏｌ）を添加した。この温度で３０分間撹拌した後、室温でＤＩＡＤ（０．５１ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）を添加した。終夜撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。粗生成物をＰＥ−ＥｔＯＡｃ（７：３）を用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＩＶおよびＶの混合物（０．９６６ｇ、１００％）を得た。それを、そのまま次のステップで使用した。
[478]ステップ４．化合物ＶＩおよびＶＩＩの合成：
[479]ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物ＩＶおよびＶの混合物（０．９６６ｇ、０．９０４ｍｍｏｌの撹拌溶液に、室温でＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ、１．４ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を添加した。終夜撹拌した後、反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。混合物全体をＥｔＯＡｃで抽出した。抽出液を飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。濾液を減圧下で濃縮して、油性残渣を得た。それを、石油／ＥｔＯＡｃ（３：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＶＩ（１６９．７ｍｇ、２２．６％）および化合物ＶＩＩ（２２５ｍｇ、３０％）を無色油として得た。
化合物ＶＩ：1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ (ppm): 3.52〜3.54 (m, 1H); 3.67〜3.73 (m, 2H), 3.84〜3.87 (dd, 1H); 3.97〜3.99(m, 1H); 4.04〜4.07 (m, 1H); 4.47〜4.50 (m, 1H); 4.58〜4.60 (m, 1H); 4.71〜4.74 (m, 1H); 4.87〜4.89 (m, 1H); 4.93〜5.03 (m, 9H); 5.70〜5.72 (dd, 1H); 7.19〜7.33 (m, 30H). 31P NMR (CDCl3, 400 MHz) δ -2.60.化合物ＶＩＩ：1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ3.56〜3.59 (dd, 1H); 3.65〜3.68 (m, 2H); 3.81〜3.84 (m, 2H); 4.02〜4.07 (m, 1H); 4.52〜4.56 (m, 1H); 4.59〜4.61 (m, 1H); 4.68〜4.78 (m, 3H); 4.86〜4.88 (m, 1H); 4.95〜5.11 (m, 7H); 5.24〜5.26 (d, 1H); 7.18〜7.39 (m, 30H). 31P NMR (CDCl3, 400 MHz) δ -2.50
[480]ステップ５．化合物ＶＩＩＩ（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−Ｐ）の合成：
[481]１，４−ジオキサン／Ｈ２Ｏ（５ｍＬ、４：１）中の化合物ＶＩ（１０５ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）および２０％（ｗ／ｗ）Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｈ２（１気圧）下に室温で２日間撹拌した。混合物を、Ｈ２Ｏで孔径０．５ｍのＡｄｖａｎｔｅｃ ＰＴＦＥメンブランフィルターに通して濾過した。濾液を０℃に冷却し、ＴＥＡ（５３μＬ、０．３７８ｍｍｏｌ）を添加し、この温度で３時間撹拌した。得られた混合物を凍結乾燥して、化合物ＶＩＩＩ・２Ｅｔ３Ｎ（７４．３ｍｇ、定量的）を白色固体として得た。
[482]ステップ６．化合物ＩＸ（Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ）の合成：
[483]化合物ＶＩＩＩ（２８．６ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を無水ピリジンに溶解し、真空下で濃縮した。この共沸を３回繰り返して、残存水を除去した。乾燥した化合物ＶＩＩＩに、ＡＭＰ−モルホリデート（９７ｍｇ、０．２３３ｍｍｏｌ）および１Ｈ−テトラゾール（３２ｍｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）を添加した。無水ピリジン（２ｍＬ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下に７８時間撹拌した。濃縮した後、残渣を沈澱させ、酢酸エチルで洗浄した。得られた固体を、移動相として水（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）中１０Ｍｍ ＮＨ４ＣＯＯＣＨ３を使用し、溶離グラジエントとして流速０．４ｍｌ／分で３分間かけて５％−８５％（溶媒Ｂ）、次に０．５分間かけて８５％−９５％（溶媒 Ｂ）にし、９５％で１分間保持する分取ＨＰＬＣ（ＲＰ−Ｃ１８）（カラム：ＨＳＳ Ｔ３ １．８μｍ、２．１＊１００ｍｍ、カラム４０Ｃ）により精製して、化合物ＩＸおよび化合物ＶＩＩＩの混合物を得た。混合物をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５カラムで再び精製して、化合物ＩＸ（３．５ｍｇ、１０％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲおよび３１Ｐ ＮＭＲデータは、文献に報告されているデータと一致した。
[484]本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに説明され、例証される。
[485]ＨＢＰは、細菌ＡＤＰヘプトース生合成経路における代謝中間体である。ＨＢＰは、細菌株に応じてＨＩｄＡ酵素またはＨＩｄＥ酵素のキナーゼドメインによりＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−７−ホスフェートから生成され、細菌酵素ＧｍｈＢによりＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）に変換される。ＨＭＰ−１ｂＰは、細菌酵素ＨＩｄＣにより、または一部の細菌細胞においてはＨＩｄＥのＡＤＰトランスフェラーゼドメインによりＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）に変換される。次いで、Ｈ１ｂ−ＡＤＰは、ＨＩｄＤ（ＧｍｈＤ）によりＬ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）に変換される。経路および関連酵素の概略図については、図１６を参照のこと。
[486]他の研究者らは、この生合成経路においてＨＢＰの上流と下流と両方に位置する様々な酵素をノックアウトする遺伝学的手法を使用して、自然免疫応答を誘導する上でのＨＢＰの役割を明らかにした。特に、ＨＢＰはＡＬＰＫ１−ＴＩＦＡ−ＴＲＡＦ６を介した感染誘導性ＮＦκＢ活性化に関係するからである。例えば、Ｇａｕｄｅｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８：１２５１ ２０１５； Ｍｉｌｉｖｏｊｅｖｉｃら、ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ １３（２） ｅ１００６２２４ ２０１７；およびＺｉｍｍｅｒｍａｎｎら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０：２３８４ ２０１７を参照のこと。Ｇｕａｄｅｔは、「大腸菌（Escherichia coli）または髄膜炎菌（N. meningitidis）においてＨＢＰの上流に位置するＡＤＰ−ヘプトース経路の破壊がＮＦ−κＢ活性化を抑制した」ので、ＮＦκＢ活性化は「ＨＢＰの存在が直接的な原因である」と結論付けた（Ｇｕａｄｅｔの文献、１２５２頁）。Ｍｉｌｉｖｏｊｅｖｉｃは、ＨＩｄＥ遺伝子の欠損したネズミチフス菌（S. typhimurium）細胞を利用し、ＨＢＰを合成することができないこれらの細胞は、感染細胞でもバイスタンダー細胞でもＩＬ−８産生を誘導することができないが、ＨＢＰ、ＧｍｈＢまたはＷａａＣの下流で作用する酵素の欠損した細胞は、強力なＩＬ−８発現を誘導することを示した（Ｍｉｌｉｖｏｊｅｖｉｃの文献、１２頁）。
[487]自然免疫を誘導するのに重要な分子としてＨＢＰを指すこの先行する研究に鑑みて、本発明者らは、ＨＢＰに加えて、ＨＭＰ−１ｂＰやＨ１ｂ−ＡＤＰなどの分子も、化学的に合成されたＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰを使用してＡＬＰＫ１依存的に細胞におけるＩＬ−８およびＴＮＦα ｍＲＮＡ発現を誘導することができることを見出して驚いた（実施例１）。その上、さらに驚いたことに、本発明者らは、このアッセイにおけるサイトカイン発現を誘導する上で、Ｈ１ｂ−ＡＤＰがＨＢＰよりもＨＭＰ−１ｂＰよりもはるかに強力であることを見出した。本発明者らは、予想外なことに、化学的に合成されたＨＢＰが、サーマルシフトアッセイにおいてＡＬＰＫ１に結合することができず（実施例２）、さらにＡＬＰＫ１自己リン酸化を誘導することもできない（実施例３）ことも見出した。代わりに、本発明者らは、予想外なことに、これらのアッセイにおいて、Ｈ１ｂ−ＡＤＰのみ、ＡＬＰＫ１と結合し、その自己リン酸化を誘導することができることを見出した。さらなる実験において、本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰが、ＩκＢのリン酸化（phosphoporylation）を介してＡＬＰＫ１依存性ＮＦκＢ経路シグナル伝達を活性化することができる（実施例４）ことを見出した。さらに、本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌも、その下流の基質ＴＩＦＡのＡＬＰＫ１依存性リン酸化（phosphoporylation）を活性化することができる（実施例５）ことを見出した。最後に、本発明者らは、マウス腫瘍モデルにおいて、Ｈ１ｂ−ＡＤＰは強力な抗腫瘍活性を有するが、ＨＢＰもＨＭＰ−１ｂＰも強力な抗腫瘍活性を有さない（実施例７および実施例８）こと、この活性はチェックポイントインヒビター（抗ＰＤ−１抗体）と免疫共刺激分子のアゴニスト（抗ＯＸ４０アゴニスト抗体）の両方の抗腫瘍活性を相乗的に向上させることを見出した。
[488]全体的に、本明細書に記載されるデータは、ＨＢＰに加えて細菌代謝産物、すなわちＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌが、自然免疫の誘導に関連しているＡＬＰＫ１依存性シグナル伝達を誘導することができること、これらの分子の少なくとも１つであるＨ１ｂ−ＡＤＰが、驚くべきかつ予想外の抗腫瘍活性を単独でも、他の免疫モジュレーターと組み合わせてもさらに有することを示す。この分子は、ＴＬＲ−９アゴニスト（ＵＳ ２０１０００１６２５０、Ｎａｇａｔａら、Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｉｒｉｎ Ｃｏ．社）として認識されており、その根拠に基づいて、一般にアレルギー、腫瘍、感染症を処置するのに有用であり、また免疫刺激剤として有用であると提唱されていたが、本結果は、ＡＬＰＫ１依存性シグナル伝達におけるその活性を実証する最初の結果であり、動物モデルにおいて抗腫瘍活性を実証する最初の結果である。
実施例１：化学的に合成されたＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰはそれぞれ、２９３ＨＥＫ細胞におけるＩＬ−８およびＴＮＦα ｍＲＮＡ発現をＡＬＰＫ１依存的に誘導する
[489]ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰがサイトカイン発現をＡＬＰＫ１依存的に誘導することができるかどうかを試験するために、本発明者らは、ＡＬＰＫ１に対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用して、ＨＥＫ２９３細胞におけるＡＬＰＫ１発現を停止させた。細胞（１×１０４細胞／ウェル）を９６−ウェルプレートに蒔き、製造業者のプロトコルに従って対照ｓｉＲＮＡまたはＡＬＰK1に対するｓｉＲＮＡをトランスフェクトした（リポフェクタミン（商標）ＲＮＡｉＭａｘ（商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １３７７８０７５）。２日間培養した後、（１）ＨＢＰ（５００μＭ、１００μＭ、２０μＭ、図２Ａ〜２Ｂ）、（２）ＨＭＰ−１ｂＰ（５００μＭ、１００μＭ、図３Ａ〜３Ｂ）、（３）Ｈ１ｂ−ＡＤＰ（１００ｎＭ、２０ｎＭ、４ｎＭ、０．８ｎＭ、図４Ａ〜４Ｂ）のいずれかを培地に添加し、４時間後に細胞を回収した。全ＲＮＡを単離し（ＴＲＩｚｏｌ（商標）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）、ｃＤＮＡを合成し（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ試薬キット（Ｔａｋａｒａ社）、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ（商標）７ Ｆｌｅｘ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用して、製造業者のプロトコルに従って増幅した（ＡｃｅＱ（商標）ｑＰＣＲ ＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、Ｖａｚｙｍｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）。ＩＬ−８およびＴＮＦα ｍＲＮＡ発現は両方とも、ＡＬＰＫ１に対するｓｉＲＮＡの存在下における両サイトカインの発現の減少によって明らかなようにＡＬＰＫ１依存的に増加した。これらの結果は、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰのそれぞれは、ＩＬ−８およびＴＮＦａ遺伝子発現をＡＬＰＫ１を介して活性化することを示唆する。
[490]驚くべきことに、Ｈ１ｂ−ＡＤＰは、このアッセイにおいて他の分子より有意に強力であった。図５に示したように、ＩＬ−８およびＴＮＦα ｍＲＮＡ発現は両方とも、ナノモル濃度（１０ｎＭ）のＨ１ｂ−ＡＤＰによって誘導され、１００μＭのＨＢＰかＨＭＰ−１ｂＰのどちらかが必要とされた。これは驚きであった。というのは、以上に論じたように、２つのグループの以前の報告によれば、ＨＢＰはＡＬＰＫ１−ＴＩＦＡ経路を介したＩＬ−８誘導を担うが、ＨＭＰ−１ｂＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰを含めて、その下流の代謝産物はＡＬＰＫ１−ＴＩＦＡ経路を介したＩＬ−８誘導を担わないことが示されたからである（Ｇａｕｄｅｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８：１２５１ ２０１５；Ｍｉｌｉｖｏｊｅｖｉｃら、ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ １３（２） ｅ１００６２２４ ２０１７）。
実施例２：Ｈ１ｂ−ＡＤＰはＡＬＰＫ１に結合するが、ＨＢＰもＨＭＰ−１ｂＰもＡＬＰＫ１に結合しない
[491]サーマルシフトアッセイは、分子と目的のタンパク質との結合を決定するのに広く使用されている。アッセイは、別の分子がタンパク質に結合している場合にそのタンパク質の変性のために必要とされる熱エネルギーが増加することに基づいている。ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅは、サーマルシフトの検出において使用される蛍光化合物である。ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅは、タンパク質の疎水性表面に結合し、水は、その蛍光を強力に消光する。タンパク質がアンフォールドされると、曝露された疎水性表面が色素と結合し、蛍光が増加する。別の分子がタンパク質に結合されると、タンパク質をアンフォールドするために必要とされる温度の上昇が認められる。
[492]このアッセイ系を使用して、化学的に合成されたＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰがＡＬＰＫ１に直接結合するか否かを決定した。図６は、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰのそれぞれの１μＭ、５μＭ、２５μＭ、または１２５μＭの非存在または存在下においてインキュベートしたＡＬＰＫ１（７μＭ １０００×ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅと混合して）のサーマルシフトを示す。ＨＢＰもＨＭＰ−１ｂＰもサーマルシフトを誘導することができなかった。Ｈ１ｂ−ＡＤＰのみ、最も高い３つの濃度５μＭ、２５μＭ、および１２５μＭのそれぞれにおいて１度より大きいシフトを誘導した。これらの結果から、Ｈ１ｂ−ＡＤＰはＡＬＰＫ１に直接結合することができるが、ＨＢＰもＨＭＰ−１ｂＰも直接結合することができないことが示される。
[493]本発明者らは以前に、このアッセイにおいて、酵素的触媒作用によりその前駆体Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−７−Ｐ（ＨＭＰ）からインビトロで産生されたＨＢＰを使用して、ＨＢＰがＡＬＰＫ１と結合することを見出した。そのような研究において、ＨＢＰのインビトロ産生に使用された酵素は、野生型大腸菌細胞から精製された糖キナーゼＨＩｄａであった。以下の実施例９において後述するように、本発明者らは、今回、精製ＨＩｄａ酵素が、先のアッセイでＨＢＰの少なくとも一部をＨ１ｂ−ＡＤＰに変換する追加の酵素、おそらくＧｍｈｂおよびＨ１ｄＥで汚染されていたと考えている。
実施例３：Ｈ１ｂ−ＡＤＰはＡＬＰＫ１自己リン酸化を誘導するが、ＨＢＰもＨＭＰ−１ｂＰもＡＬＰＫ１自己リン酸化を誘導しない
[494]ＡＬＰＫ１活性化によって、その自己リン酸化が起こる。したがって、本発明者らは、次にＨ１ｂ−ＡＤＰとＡＬＰＫ１との結合がＡＬＰＫ１自己リン酸化を誘導するのに十分な程度であるかどうかを求めた。リン酸化アッセイを標準プロトコルに従って行った。簡潔に述べれば、ＡＬＰＫ１をアッセイ緩衝液（２０μｌ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５０ｍＭ ＫＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ ＥＧＴＡ、２ｍＭ ＤＴＴ、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２）中、ＡＴＰおよび化学的に合成されたＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、またはＨ１ｂ−ＡＤＰとともにインキュベート（２ｎＭ、２５℃、１時間）し、次にディネイチャリングゲル電気泳動および抗ホスホ−トレオニン抗体（ＣＳＴ）を用いたウェスタン分析を行って、ＡＬＰＫ１の自己リン酸化を検出した。図７に示すように、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ（１０ｎＭ、１ｎＭ、および０．２ｎＭ）の存在下でのみ、ＡＬＰＫ１のリン酸化が検出され、Ｈ１ｂ−ＡＤＰはＡＴＰ依存性自己リン酸化およびＡＬＰＫ１の活性化を誘導するが、ＨＢＰもＨＭＰ−１ｂＰもＡＴＰ依存性自己リン酸化およびＡＬＰＫ１の活性化を誘導しないことを示す。このアッセイにおいて使用されるＨＢＰおよびＨＭＰ−１ｂＰの濃度範囲（１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ）は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰに対して使用されるのより１０倍高い濃度範囲であった。
[495]本発明者らは以前に、このアッセイにおいて、酵素的触媒作用によりその前駆体Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−７−Ｐ（ＨＭＰ）からインビトロ産生ＨＢＰを使用して、ＨＢＰがＡＬＰＫ１自己リン酸化を誘導することができることを見出した。そのような研究において、ＨＢＰのインビトロ産生に使用された酵素は、野生型大腸菌細胞から精製された糖キナーゼＨＩｄａであった。実施例９において後述するように、本発明者らは、今回、精製ＨＩｄａ酵素が追加の酵素で汚染されていて、その酵素が、先のアッセイでＨＢＰの少なくとも一部をＨ１ｂ−ＡＤＰに変換したと考えている。
実施例４：Ｈ１ｂ−ＡＤＰはＩκＢのＡＬＰＫ１依存性リン酸化を誘導する
[496]ＮＦκＢ ＲｅｌＡ（ｐ６５）は、細胞質から核に移行しなければならない転写因子であり、その核において、多数の標的遺伝子のプロモーター領域と相互作用して、それらの転写を調節する。ＮＦκＢ ＲｅｌＡの標的遺伝子としては、例えばＩＬ−８、ＴＮＦα、ＣＸＣＬ１、およびＣＸＣＬ３などの炎症性サイトカインが挙げられる。ｐ６５の核移行が行われるには、ｐ６５が含まれる細胞質複合体が、まず分解されなければならない。このプロセスは、リン酸化に伴うＩκＢの活性化によって惹起される。したがって、ＩκＢリン酸化は、ＮＦκＢ活性化のマーカーとして使用されうる。
[497]本発明者らは、次に、ＡＬＰＫ１のＨ１ｂ−ＡＤＰ誘導性自己リン酸化がＮＦκＢを活性化するのに有効であるかどうかを、この活性のマーカーとしてＩκＢのリン酸化を使用して試験した。リン酸化アッセイを標準プロトコルに従って行い、リン酸化タンパク質を、ゲル電気泳動およびリン酸化ＩκＢを検出する抗体を使用するウェスタンブロッティングで検出した。簡潔に述べれば、アッセイを、２０μｌの容積にて２５℃で、２ｎＭ ＡＬＰＫ１およびＨ１ｂ−ＡＤＰ（いくらか）をＡＴＰと共にもしくはＡＴＰなしに含む、またはＡＬＰＫ１単独もしくはＨ１ｂ−ＡＤＰ単独を、いずれもＡＴＰの存在下に含むアッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．５、５０ｍＭ ＫＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ ＥＧＴＡ、２ｍＭ ＤＴＴ、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２）中で行った。１時間インキュベートした後、反応物をタンパク質電気泳動用のディネイチャリングゲルにロードし、ｐ−ＩκＢ抗体（Ａｂｃａｍ社）を使用してウェスタン分析を行って、ＩκＢのリン酸化を検出した。
[498]図９に示すように、ＩκＢリン酸化は、ＡＴＰの存在下にＡＬＰＫ１とＨ１ｂ−ＡＤＰとの存在下でのみ検出された。これらの結果は、ＡＬＰＫ１のＨＢＰ誘導性自己リン酸化がＮＦκＢ経路を活性化することを示している。
実施例５：Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬはＴＩＦＡのＡＬＰＫ１依存性リン酸化を誘導する
Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）は、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰと同じ生合成経路における別の細菌代謝産物である。それは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰから細菌ＨＩｄＤ（ＧｍｈＤ）酵素の作用により形成される。本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰに構造的に非常に似ているこの分子がＡＬＰＫ１生物活性を有しているかどうかを求めた。
[499]本発明者らは、５０μＭ ＡＴＰを含有するキナーゼ緩衝液中でＨ１ｂ−ＡＤＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６ＬをＡＬＰＫ１タンパク質（２ｎＭ）およびＴＩＦＡタンパク質（１．６μＭ）と一緒に用いて、インビトロキナーゼアッセイを行った。ＴＩＦＡリン酸化は、ディネイチャリングゲル電気泳動、次に抗ホスホトレオニン抗体を使用するウェスタンブロッティングを行うことによって分析した。Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌを２ｎＭ、０．４ｎＭ、８０ｐＭ、１６ｐＭ、および３ｐＭで添加した。図１０に示すように、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌは、ＡＬＰＫ１依存性シグナル伝達をＨ１ｂ−ＡＤＰに似ている様式で活性化した。
実施例６：Ｈ１ｂ−ＡＤＰ腫瘍内注射は腫瘍増殖の遅延、腫瘍組織における炎症遺伝子過剰発現の誘導を行うが、ＨＭＰ−１ｂＰは行わない
[500]本発明者らは、ＣＴ２６腫瘍異種移植モデルを使用して、Ｈ１ｂ−ＡＤＰの抗がん活性を試験した。腫瘍細胞（１００μＬ当たり２×１０５ＣＴ２６細胞）をＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部に皮下接種した。６日目に、腫瘍の直径が３〜５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、対照、ＨＭＰ−１ｂＰ（５８０μｇ）、およびＨ１ｂ−ＡＤＰ（１．２μｇ）の３群（各群ｎ＝８）に分けた。接種後６、８、１０、１２、および１４日目に、注射を全容積２０μＬで行った。式（Ｌ×Ｗ２）／２（式中、Ｌは、長い方の測定値である）を用いて、腫瘍径のカリパス測定値から腫瘍容積を２日ごとに算出した。図１１に示すように、このモデル系において、Ｈ１ｂ−ＡＤＰは腫瘍増殖を低減したが、ＨＭＰ−１ｂＰは低減せず、Ｈ１ｂ−ＡＤＰが腫瘍増殖を抑制するのに有効な抗腫瘍免疫応答を誘発することができたことを示す。
[501]本発明者らは、次に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰが腫瘍内で炎症性サイトカインの増加を引き起こしたかどうかを求めた。腫瘍細胞（１００μＬ当たり２×１０５ＣＴ２６細胞）をＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部に皮下接種した。接種後７日目に、２．５μｇ（ｎ＝２）、２５０ｎｇ（ｎ＝２）、５０ｎｇ（ｎ＝２）のＨ１ｂ−ＡＤＰまたは対照（ｎ＝２）を腫瘍内注射（２０μＬ）した。注射後４時間目に、腫瘍組織（tumor issue）を解剖し、回収した。全ＲＮＡを単離し（ＴＲＩｚｏｌ（商標）、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）、ｃＤＮＡを合成し（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ試薬キット（Ｔａｋａｒａ社）、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ（商標） ７ Ｆｌｅｘ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）を使用して、製造業者のプロトコルに従って増幅した（ＡｃｅＱ（商標） ｑＰＣＲ ＳＹＢＲ（商標） Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、Ｖａｚｙｍｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）。
[502]結果を図１２に示す。この実験において、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ注射すると、炎症性サイトカインＩＬ−１ｂ、Ｔｎｆａ、Ｉｆｎγ、およびＩＬ−６、ならびにケモカインＣｘｃｌ１のｍＲＮＡ発現が増加し、炎症が腫瘍において活性化されたことを示す。Ｈ１ｂ−ＡＤＰ注射すると、細胞傷害性Ｔ細胞マーカーＣＤ８、ヘルパーＴ細胞マーカーＣＤ４、調節性Ｔ細胞マーカーＦｏｘｐ３およびＴｈ１細胞マーカーＴ−ｂｅｔのｍＲＮＡ発現が増加し、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ注射された腫瘍における細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、調節性Ｔ細胞およびＴｈ１細胞の数の増加を示す。Ｈ１ｂ−ＡＤＰ注射された腫瘍において、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１発現が増加し、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１治療とＨ１ｂ−ＡＤＰ注射を組み合わせると、腫瘍増殖を遅延させる際に相乗効果がある可能性があることを示唆する。
実施例７：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＰＤ−１抗体は腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[503]Ｂ７免疫グロブリンスーパーファミリー分子（ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、およびＰＤ−Ｌ１）を標的とするアンタゴニスト抗体は、様々なタイプのがんにおいて抗腫瘍免疫および臨床効果をもたらした免疫チェックポイント阻害手法を表す。しかし、多くの患者は、これらの抗体に基づく単剤療法に応答せず、他の多くの患者は、治療後に再燃する。したがって、免疫チェックポイントインヒビター治療に対する一次および二次耐性に対処する共治療が必要とされている。
[504]Ｈ１ｂ−ＡＤＰがチェックポイントインヒビターによる抗腫瘍応答を増強することができるかどうかを試験するために、本発明者らは、抗ＰＤ１抗体を用いた共投与の効果を試験した。腫瘍細胞（１００μＬ当たり２×１０５ＣＴ２６細胞）をＢＡＬＢ／ｃマウスの左右の腹部に皮下接種した。７日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群（各群ｎ＝８）：抗ＰＤ１抗体；ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋抗ＰＤ１抗体に分けた。本発明者らは、ＲＭＰ１−１４を抗ＰＤ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）として、ラットＩｇＧ ２ａ（２Ａ３）を対照ＩｇＧとして利用した。接種後６、１０、１２、および１７日目に、抗ＰＤ−１抗体および対照ＩｇＧのそれぞれを２００μＬの容積で腹腔内投与した。６、８、１０、１２、および１５日目に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）を２０μＬの容積で腫瘍内注射した。式（Ｌ×Ｗ２）／２（式中、Ｌは、長い方の測定値である）を用いて、腫瘍径のカリパス測定値から腫瘍容積を２日ごとに算出した。注射された腫瘍の結果を図１３Ａに示し、遠位腫瘍の結果を図１３Ｂに示す。この実験において、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたは抗ＰＤ１抗体の単独投与は、腫瘍増殖を同程度に顕著に抑制した。Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＰＤ１抗体の組合せは、腫瘍増殖を阻害しただけでなく、いくつかの腫瘍の消失を導いた。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＰＤ１抗体などのチェックポイント−インヒビターとの組合せが増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。
実施例８：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[505]本発明者らは、次に、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体を使用する同様の実験を実施した。ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、活性化免疫細胞によって発現される腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー共刺激受容体分子である。以上で指摘したように、チェックポイントインヒビター治療に対する一次および二次耐性に対処する共治療が必要とされ、一手法は、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体などの免疫共刺激因子を投与することである。
[506]実験は、以下の変形を除いて上記のように実施した。７日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：抗ＯＸ４０抗体；ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋抗ＯＸ４０抗体に分けた。本発明者らは、ＢＥ００３１を抗ＯＸ４０抗体として、ラットＩｇＧ ２ａ（２Ａ３）を対照ＩｇＧとして利用した。接種後７、９、および１１日目に、ＢＥ００３１（２μｇ）、ラットＩｇＧ（２μｇ）、および／またはＨ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）を２０μＬの容積で腫瘍内投与した。結果を図１４に示す。
実施例９：野生型大腸菌から精製されたＨＩｄａ酵素は他の細菌酵素で汚染されていたように見受けられる
[507]本発明者らは以前に、サーマルシフトアッセイにおいて、酵素的触媒作用によりその前駆体Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−７−ホスフェートからインビトロ産生ＨＢＰを使用して、ＨＢＰがＡＬＰＫ１に結合することができることを見出した。そのような研究において、ＨＢＰのインビトロ産生に使用された酵素は、ＨＩｄＡ発現プラスミドをトランスフェクトされた野生型大腸菌細胞から精製された糖キナーゼＨＩｄＡであった。大腸菌細胞は、ＨＩｄＡ酵素もＨＩｄＣ酵素も発現せず、代わりにキナーゼドメインおよびＡＤＰトランスフェラーゼドメインを含む融合タンパク質であるＨＩｄＥを発現する。ＨＩｄＥのこれら２つのドメインは、それぞれＨＩｄＡのキナーゼドメインおよびＨＩｄＣのＡＤＰトランスフェラーゼドメインと相同である。同じインビトロ産生ＨＢＰを使用した関連研究において、本発明者らは、ＡＬＰＫ１自己リン酸化およびＡＬＰＫ１の下流に位置するＩκＢのリン酸化のＨＢＰ活性化を示した。
[508]本発明者らは、今回、そのような実験において使用された精製ＨＩｄＡ酵素が、ＨＢＰの少なくとも一部をＨ１ｂ−ＡＤＰに変換するＨＩｄＥなどの大腸菌酵素で汚染されていたと考えている。ＨＩｄＡ酵素の構造−機能活性に関する以前の報告は、ＨＩｄＡおよびＨＩｄＥ酵素のキナーゼドメインが二量化し、それらの共精製をもたらすことができることを示唆する。Ｌｅｅ Ｔ．Ｗ．ら、Ｊ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ． ２０１３ ５６：１４０５−１７。したがって、いくらかの大腸菌ＨＩｄＥが、本発明者らの以前の研究において使用された組換えＨＩｄＡと共精製された可能性がある。本発明者らはさらに、ＧｍｈＢとＨＩｄＡが、ＧｍｈＢも組換えＨＩｄＡと共精製されるように複合体も形成すると推測する。大腸菌ＧｍｈＢおよびＨＩｄＥによるそのような汚染があれば、先の研究においてインビトロ産生ＨＢＰがＨ１ｂ−ＡＤＰに少なくとも一部変換されたはずである。
[509]これを試験するために、本発明者らは、ＡＬＰＫ１依存性ＴＩＦＡリン酸化のためのインビトロキナーゼ反応を、不活性化されたＨＩｄＥを含む大腸菌から精製されたＨＢＰもしくはＨＩｄＡの存在下で、または以前の実験において使用された同じＨＩｄＥ野生型大腸菌から精製されたＨＢＰおよびＨＩｄＡの存在下で行った。結果を図１５に示す。リン酸化ＴＩＦＡ（３つの濃度、１％、０．２％および０．４％）を、上記のようにディネイチャリングゲル電気泳動、次にウェスタン分析に行うことによって検出した。リン酸化ＴＩＦＡは、野生型大腸菌から精製されたＨＩｄＡを使用したアッセイにおいてのみ検出され、ＨｌｄＥ変異大腸菌細胞から精製されたＨＩｄＡを使用したアッセイにおいては検出されなかった。
[510]汚染細菌酵素のためにインビトロ産生ＨＢＰを用いて得られる異常な結果を避けるために、本発明者らは、上記の実施例１〜８および下記の実施例１０〜１８において化学的に合成された糖分子を利用した。
実施例１０：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体は腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[511]実験は、以下の変形を除いて抗ＰＤ−１のコンボ実験として実施した。７日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：抗ＰＤ−Ｌ１抗体；ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋抗ＰＤ−Ｌ１抗体に分けた。本発明者らは、ＢＰ０１０１（ＢｉｏｘＣｅｌｌ社）を抗ＰＤ−Ｌ１抗体として、ラットＩｇＧ ２ａ（２Ａ３）を対照ＩｇＧとして利用した。接種後７、９、１１、および１５日目に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（２００μｇ）および対照ＩｇＧ（２００μｇ）のそれぞれを２００μＬの容積で腹腔内投与した。接種後７、９、１１、１３、１５日目に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）を２０μＬの容積で腫瘍内投与した。注射された腫瘍の結果を図１６Ａに示し、遠位腫瘍の結果を図１６Ｂに示す。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのチェックポイント−インヒビターとの組合せが、増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。
実施例１１：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＩＦＮαは腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[512]実験は、以下の変形を除いて抗ＰＤ−１のコンボ実験として実施した。８日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：ＩＮＦα（７５２８０３、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）；ＰＢＳ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ＩＮＦαに分けた。接種後８、１０、および１２日目に、ＩＦＮα（０．１μｇ）およびＨ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）のそれぞれを２０μＬの容積で腫瘍内投与した。注射された腫瘍の結果を図１７Ａに示し、遠位腫瘍の結果を図１７Ｂに示す。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＩＦＮαなどのインターフェロン経路またはＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路活性化因子との組合せが、増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。
実施例１２：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＣＴＬＡ−４抗体は腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[513]実験は、以下の変形を除いて抗ＰＤ１のコンボ実験として実施した。６日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：抗ＣＴＬＡ−４抗体；ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋抗ＣＴＬＡ−４抗体に分けた。本発明者らは、９Ｄ９（ＢｉｏｘＣｅｌｌ社）を抗ＣＴＬＡ−４抗体として、ラットＩｇＧ ２ｂアイソタイプ（ＭＰＣ−１１クローン、ＢＥ００８６、ＢｉｏＸＣｅｌｌ社）を対照ＩｇＧとして利用した。接種後６および９日目に、抗ＣＴＬＡ−４抗体（２５μｇ）および対照ＩｇＧ（２５μｇ）のそれぞれを２００μＬの容積で腹腔内投与した。接種後６、７、９、１１日目に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）を２０μＬの容積で腫瘍内投与した。結果を図１８に示す。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰと抗ＣＴＬＡ−４抗体などのチェックポイントインヒビターまたは欠失調節性Ｔ細胞との組合せが、増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。
実施例１３：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＳＴＩＮＧアゴニストは腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[514]実験は、以下の変形を除いて抗ＰＤ１のコンボ実験として実施した。６日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：ｃ−ｄｉ−ＡＭ（ＰＳ）２；ＰＢＳ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ｃ−ｄｉ−ＡＭ（ＰＳ）２に分けた。本発明者らは、ｃ−ｄｉ−ＡＭ（ＰＳ）２をＳＴＩＮＧアゴニストとして利用した。接種後６、７、および９日目に、ｃ−ｄｉ−ＡＭ（ＰＳ）２（１μｇ）およびＨ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）のそれぞれを２０μＬの容積で腫瘍内投与した。結果を図１９に示す。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとｃ−ｄｉ−ＡＭ（ＰＳ）２などのＳＴＩＮＧアゴニストおよび自然免疫アゴニストとの組合せが、増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。
実施例１４：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよび抗ＣＤ４抗体は腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[515]実験は、以下の変形を除いて抗ＰＤ−１のコンボ実験として実施した。６日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：抗ＣＤ４抗体（ＧＫ１．５クローン、ＢＥ０００３−１、ＢｉｏＸＣｅｌｌ社）；ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋ラットＩｇＧ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ＋抗ＣＤ４抗体に分けた。接種後３、４、８日目に、抗ＣＤ４抗体（２００μｇ）および対照ＩｇＧ（２００μｇ）のそれぞれを２００μＬの容積で腹腔内投与した。接種後６、８、１０、１２、１４日目に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）を２０μＬの容積で腫瘍内投与した。結果を図２０に示す。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＣＤ４または調節性Ｔ細胞欠失抗体との組合せが、増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。
実施例１５：Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＴＬＲアゴニストは腫瘍増殖を阻害するように相乗的に働く
[516]実験は、以下の変形を除いて抗ＰＤ−１のコンボ実験として実施した。６日目に、腫瘍の直径が５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、次の４群：Ｒｅｓｑｕｉｍｏｄ；ＰＢＳ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ；Ｈ１ｂ−ＡＤＰ Ｒｅｓｑｕｉｍｏｄに分けた。接種後６、８、１１日目に、Ｒｅｓｑｕｉｍｏｄ（１０μｇ）およびＨ１ｂ−ＡＤＰ（６．２μｇ）を２０μＬの容積で腫瘍内投与した。結果を図２１に示す。これらの結果は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとＴＬＲアゴニストとの組合せが、増殖を抑制し、さらにはインビボにおける腫瘍細胞の生存能を阻害するのに有効であることを示す。結果を図２１に示す。
実施例１６：Ｈ１ｂ−ＡＤＰは血清中のホスファターゼによって分解され、ホスファターゼインヒビターおよびＡＭＰによって保護されうる
[517]ＨＥＫ２９３細胞におけるＡＬＰＫ１を活性化するＨ１ｂ−ＡＤＰの活性は、細胞をウシ胎仔、ヒトまたはマウス血清と共に培養すると大幅に低下し（図２２）、動物血清中の成分がＨ１ｂ−ＡＤＰの活性を中和することができることを示唆している。Ｈ１ｂ−ＡＤＰが不活性な形に化学的に変換されるかどうかを試験するために、本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰをＦＢＳと共にインキュベートし、ＬＣ−ＭＳを使用して産物を分析した。本発明者らは、インキュベーション時間を増加させていくと、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ量は低下し、ＵＶ・２５４ｎｍにおいて同様の吸収強度を有する新しい物質が増加したことを見出した。その物質は、標準物質を使用してＡＭＰであると判断され、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ中のＰ−Ｏ−Ｐホスフェート無水物結合が血清中の酵素によって加水分解されることを示唆している。ＦＢＳは、１１０〜３５２μＵ／ｍｌのアルカリホスファターゼを含有する。アルカリホスファターゼは、アルコール、アミン、ピロホスフェート、およびフェノールを含めて、様々な分子においてリン酸エステルを加水分解することができる広く使用されている脱リン酸化試薬である。アルカリホスファターゼなどのホスファターゼは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ加水分解を担うことがある。本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰとホスファターゼインヒビターであるオルトバナジン酸ナトリウム（Ｎａ３ＶＯ４）を予め混合した後、ＦＢＳとインキュベートした。１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４処置は、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ加水分解を効果的に阻害し（図２３）、その分解には血清中のホスファターゼ活性が必要とされることを示す。ホスファターゼ単独でＨ１ｂ−ＡＤＰを加水分解するのに十分であるかどうかを決定するために、本発明者らは、Ｈ１ｂ−ＡＤＰをウシのアルカリホスファターゼと共にインキュベートし、Ｎａ３ＶＯ４を増量することによってホスファターゼ活性がブロックされることを見出した。本発明者らは、インキュベーション時間が経過するにつれて、血清中のＨ１ｂ−ＡＤＰ加水分解が減速し、ホスファターゼ活性が次第に下方調節されたことを示すことに気づいた。本発明者らは、加水分解産物ＡＭＰの蓄積がホスファターゼ活性を阻害することができると仮定した。血清インキュベーションを行う前にＨ１ｂ−ＡＤＰをＡＭＰで前処置して、ホスファターゼ活性を阻害した。その阻害は、ＡＭＰ用量依存的であった。したがって、Ｎａ３ＶＯ４（図２４）またはＡＭＰ（図２５）をＦＢＳ含有培地に添加すると、細胞ベースアッセイにおいてＨ１ｂ−ＡＤＰの活性を回復することができ、ＦＢＳ中のホスファターゼがＨ１ｂ−ＡＤＰの活性の減衰を担うことが確認された。
実施例１７：Ｈ１ｂ−ＡＤＰ誘導体化合物はインビトロでＡＬＰＫ１を活性化する
[518]いくつかのＨ１ｂ−ＡＤＰ誘導体化合物を本明細書に記載されるように作製し、インビトロでのＡＬＰＫ１アゴニストとしての生物活性について試験した。これらの実験において、図に示すように、１０％ＦＢＳを含む（図２７Ｂ、図２８Ｂ、図２９Ｂ）または１０％ＦＢＳを含まない（図２６、図２７Ａ、図２８Ａ、図２９Ａ）ＨＥＫ２９３細胞の組織培養培地に、化合物の段階希釈液を添加した。４時間後、細胞上清を回収し、ＩＬ８ ＥＬＩＳＡ（ＢＤ）をＡＬＰＫ１活性化の指標として使用して、ＩＬ８濃度を分析した。
[519]Ｈ１ｂ−ＡＤＰ誘導体化合物１〜３、９〜１７、１９、２０〜２２、２６〜３２は、ＡＬＰＫ１活性化活性を実証した。被験化合物のうち、化合物１５は、血清分解に対して予想外の耐性も示した（図２７Ａおよび図２７Ｂを比較）。
実施例１８：Ｈ１ｂ−ＡＤＰ誘導体化合物は腫瘍増殖を阻害する
[520]本発明者らは、ＣＴ２６腫瘍異種移植モデルを使用して、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ誘導体化合物１および２の抗がん活性を試験した。腫瘍細胞（１００μＬ当たり２×１０５ＣＴ２６細胞）をＢＡＬＢ／ｃマウスの右側腹部に皮下接種した。７日目に、腫瘍が直径３〜５ｍｍに到達したマウスを無作為化し、対照、化合物１（５０ｎｍｏｌ）、および化合物２（５０ｎｍｏｌ）の３群（各群ｎ＝９）に分けた。注射を、接種後７、９、および１１日目に全容積２０μＬで行った。式（Ｌ×Ｗ２）／２（式中、Ｌは、長い方の測定値である）を用いて、腫瘍径のカリパス測定値から腫瘍容積を２日ごとに算出した。図３０に示すように、このモデル系において、化合物１および２は腫瘍増殖を低減し、Ｈ１ｂ−ＡＤＰの誘導体が腫瘍増殖を抑制するのに有効な抗腫瘍免疫応答を誘発することができたことを示す。
実施例１９：Ｈ１ｂ−ＡＤＰは極めて低い濃度でマクロファージを活性化することができる
[521]これらの実験において、マウス骨髄由来マクロファージを０．４ｎＭまたは２ｎＭ Ｈ１ｂ−ＡＤＰで２．５時間処置し、回収して、ｑＰＣＲによるＣｘｃｌ１のｍＲＮＡ発現分析した。Ｃｘｃｌ１ ｍＲＮＡ発現は、非処置対照に対する変化（倍数）として提示され、用量依存的応答を示した（図３１）。これらの結果は、組織在住マクロファージが細胞外Ｈ１ｂ−ＡＤＰを利用して、局所感染を監視する可能性があることを示唆する。したがって、非常に低い用量のＨ１ｂ−ＡＤＰまたはそのアゴニストを使用して、局所組織における免疫応答を向上または増強する可能性がある。
[522]追加の実験において、７週齢のＣ５７マウスに化合物１を２、１０、５０、および２００ｎｍｏｌの濃度で皮下注射した。組織を３時間後に回収し、ＲＮＡを抽出した。定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を行って、マウス肝臓（図３２Ａ）および肺（図３２Ｂ）組織における組織発現レベルＣｘｃｌ１、Ｃｘｃｌ１１、ＩＬ１ｂ、およびＩＬ６を決定した。追加のケモカインおよびサイトカインを肺組織においてアッセイした。データは、肝組織が、このＨ１ｂ−ＡＤＰ誘導体による炎症性のケモカインおよびサイトカインの活性化に高い感受性があることを示す。これらの結果は、肝疾患および障害の本明細書に記載されるＡＬＰＫ１アゴニストによる処置を、化合物１などの非常に低い用量のＨ１ｂ−ＡＤＰおよびその誘導体で成し遂げることができるということをさらに示唆する。例えば、これらのデータから、体重１キログラム当たり１ナノグラム〜１ミリグラム（１ｎｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ）、好ましくは体重１キログラム当たり１マイクログラム〜１００マイクログラム（１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ）の範囲の用量を使用して、肝疾患および障害を処置することができると予想される。
[523]大腸菌Ｈ１ｂ−ＡＤＰ生合成経路を図３３に示す。
[524]当業者は、ルーチンにすぎない実験方法を用いて、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多数の等価形態を認識し、または確認することができる。そのような等価形態は、以下の特許請求の範囲により包含されるものとする。
[525]本明細書に引用されるすべての参考文献は、あらゆる目的においてそれらの全体が参照により、個々の刊行物または特許もしくは特許出願がそれぞれ、あらゆる目的においてその全体が参照により組み込まれていると具体的にかつ個別に示される場合と同じ程度に本明細書に組み込まれる。
[526]本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書に記載される修正形態に加えて、本発明の様々な修正形態は、前述の説明および添付図面から当業者に明らかとなる。そのような修正形態は、添付の特許請求の範囲内に包含されることを意図するものである。

Claims (91)

  1. 式（Ｉ）で表される化合物、および／またはその立体異性体、互変異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩
    ［式中、
    Ａ１およびＡ２は独立して、Ｏ、Ｓおよび−Ｃ（Ｒ８Ｒ９）−から選択され、Ｒ８およびＲ９は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよび置換または非置換アラルキルオキシル（任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基である）から選択され、Ａ１またはＡ２の少なくとも一方は、−Ｃ（Ｒ８Ｒ９）であり、Ａ１におけるＲ８またはＲ９は、Ａ２におけるＲ８またはＲ９と環化して、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ならびに３〜９環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキルを形成することができ、それぞれが、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基によって任意選択で置換されており、
    Ｌ１およびＬ２は独立して、Ｏ、ＣＨ２、ＣＨＦおよびＣＦ２から選択され、
    Ｌ３は、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、
    Ｚ１およびＺ２は独立して、ＯおよびＳから選択され、
    Ｗ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４−ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、アラルキルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択される）から選択される任意選択で置換されている基から選択され、Ｒ１０およびＲ１１の任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
    Ｗ２は、Ｈ、またはＤ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルケニルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
    Ｒ１は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、または５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有するヘテロアリールであり、Ｒ１は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、ＣＮ、ＮＨ２、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミン、Ｃ１〜Ｃ４ジアルキルアミンおよび（Ｒ１３Ｒ１４）ＮＣＯ−から選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されており、Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択され、
    Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択され、
    Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、Ｈ、Ｄ、ハロゲンおよび−ＯＨ、Ｒ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、３〜６環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、ならびに５〜１０個の環原子を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するヘテロアリールから選択される）から選択され、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７の隣接基のいずれか２つは環化して、５〜９環員を含み、環員としてＮ、ＯおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有するシクロヘテロアルキルを形成することができ、それぞれが、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基によって任意選択で置換されている］。
  2. 式ＩＡの化合物、および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩
    ［式中、
    Ｙ１およびＹ２は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよびアラルキルオキシルから選択される任意選択で置換されている基から選択され、任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
    Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、請求項１に記載の通りである］
    である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｙ１およびＹ２が独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルおよびＣ１〜Ｃ４アルケニルオキシルから選択され、
    Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、請求項１に記載の通りである、請求項２に記載の化合物。
  4. Ｙ１およびＹ２が独立して、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルから選択され、
    Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、請求項１に記載の通りである、請求項２に記載の化合物。
  5. 式ＩＢの化合物、および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩
    ［式中、
    ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立して、０〜２からなる群から選択される整数（ｉｎｔｅｇｒｅｒ）であり、
    Ｘ１およびＸ２は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、Ｎ３、−ＣＮ、ハロゲン、ならびにＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよびアラルキルオキシルから選択される任意選択で置換されている基から選択され、任意選択の置換基は、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシから独立して選択される１〜３つの置換基であり、
    Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、請求項１に記載の通りである］
    である、請求項１に記載の化合物。
  6. ｎ１およびｎ２がそれぞれ０である、請求項５に記載の化合物。
  7. Ｘ１およびＸ２が独立して、Ｈ、Ｄ、およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され、
    Ｒ１〜Ｒ７、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、請求項１に記載の通りである、請求項５または６に記載の化合物。
  8. 式ＩＣの化合物、および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩
    ［式中、
    Ａ１は、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−、ＯまたはＳであり、
    Ｒ１〜Ｒ９、Ｌ１〜Ｌ３、Ｚ１、Ｚ２、Ｗ１およびＷ２は、式Ｉにおいて記載の通りである］
    である、請求項１に記載の化合物。
  9. Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がそれぞれＨである、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
  10. Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７がそれぞれ独立して、−ＯＨおよびＣ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルからなる群から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
  11. Ｌ３がＯである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
  12. Ｌ２がＯである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
  13. Ｌ１が、ＯまたはＳである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物。
  14. Ｗ１が、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４−ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルケニルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルおよびＣ１〜Ｃ４アルケニルオキシルから選択される）から選択される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物。
  15. Ｗ１が、−Ｃ（Ｒ１０Ｒ１１）−であり、Ｒ１０およびＲ１１は独立して、Ｈ、Ｄ、−ＯＨ、ハロゲンおよびＣ１〜Ｃ４アルカノイルオキシルから選択される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物。
  16. Ｗ２が、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨ、＝ＯおよびＣ１〜Ｃ３アルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルケニルオキシルおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシおよびＣ１〜Ｃ４アルキルアミノである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
  17. Ｗ２が、Ｄ、ハロゲン、−ＯＨおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである）から独立して選択される１〜３つの置換基で任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
  18. Ｗ２が、−ＯＨおよびＲ１２ＣＯ２−（Ｒ１２は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである）から選択される１つの置換基で任意選択で置換されているＣ１アルキルである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物。
  19. Ｒ１が、
    から選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物。
  20. Ｒ１が、
    から選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物。
  21. Ｒ１が、
    である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物。
  22. から選択される、請求項１に記載の化合物、および／またはその立体異性体、安定同位体、プロドラッグもしくは薬学的に許容される塩。
  23. 請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  24. ＡＬＰＫ１を活性化する方法であって、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の有効量を投与するステップを含む方法。
  25. 免疫応答のモジュレーションを必要とする対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与するステップ、あるいはＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  26. がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与するステップ、あるいはＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  27. 対象における標的抗原に対する免疫応答を増強する方法であって、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与するステップ、あるいはＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  28. 対象の細胞におけるＮＦｋＢ、ｐ３８、およびＪＮＫ細胞シグナル伝達経路の活性化による処置に適している（amendable to）疾患または障害を処置する方法であって、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与するステップ、あるいはＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  29. 細菌、ウイルス、または寄生虫から選択される感染病原体によって引き起こされる疾患または障害の処置または予防を必要とする対象における細菌、ウイルス、または寄生虫から選択される感染病原体によって引き起こされる疾患または障害を処置または予防する方法であって、請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩の有効量を対象に投与するステップ、あるいはＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体のいずれか１つを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  30. 免疫応答のモジュレーションが、自然免疫の活性化および適応免疫の活性化から選択される、請求項２５に記載の方法。
  31. がんが、軟部組織肉腫、乳がん、頭頸部がん、メラノーマ、子宮頸がん、膀胱がん、血液悪性腫瘍、膠芽腫、膵がん、前立腺がん、結腸がん、乳がん、腎がん、肺がん、メルケル細胞癌、小腸がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、胃がん、消化管間質腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、肝がん、白血病、リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、脳がん、および多発性骨髄腫から選択される、請求項２６に記載の方法。
  32. 標的抗原が、アデノウイルス、コクサッキーBウイルス、サイトメガロウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エンテロウイルス71、エプスタイン-バーウイルス、インフルエンザｂ型菌(Hib)、C型肝炎ウイルス(HCV)、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、ヒトパピローマウイルス(HPV)、鉤虫、マールブルグウイルス、ノロウイルス、呼吸器多核体ウイルス(RSV)、ロタウイルス、チフス菌、黄色ブドウ球菌、化膿レンサ球菌、水痘、ウエストナイルウイルス、ペスト菌、およびジカウイルスからなる群から選択される感染病原体の抗原である、請求項２７に記載の方法。
  33. ＡＬＰＫ１アゴニスト、ＡＬＰＫ１もしくはその構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、またはＡＬＰＫ１タンパク質もしくは前記タンパク質の構成的活性型変異体が、炭疽病、カリエス、シャガス病、デング熱、ジフテリア、エーリキア症、Ａ型もしくはＢ型肝炎（hepatits）、ヘルペス、季節性インフルエンザ、日本脳炎、ハンセン病、ライム病、マラリア、麻疹、ムンプス、髄膜炎および敗血症を含めて髄膜炎菌性疾患、オンコセルカ症（河川盲目症）、パータシス（百日咳）、肺炎球菌性疾患、ポリオ、狂犬病、風疹、住血吸虫症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、帯状疱疹、天然痘、梅毒、破傷風、結核、野兎病、ダニ媒介性脳炎ウイルス、腸チフス、トリパノソーマ症、黄熱病、または内臓リーシュマニア症の処置または予防におけるワクチンのワクチンアジュバントとして働く、請求項２７に記載の方法。
  34. 疾患または障害が、結核、髄膜炎、肺炎、潰瘍、敗血症、鼻炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、関節炎、肥満症、放射線誘発炎症、乾癬、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、全身性狼瘡、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎（グレーブス病）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、水疱性疾患、日光角化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、円形脱毛症、ならびにＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされる疾患および障害から選択される、請求項２８に記載の方法。
  35. 感染病原体が、細菌である、請求項２９に記載の方法。
  36. 感染病原体が、ウイルスである、請求項２９に記載の方法。
  37. 感染病原体が、寄生虫である、請求項２９に記載の方法。
  38. 細菌が、グラム陰性菌またはグラム陽性菌である、請求項３５に記載の方法。
  39. グラム陰性菌が、アシネトバクター・バウマンニイ（Acinetobacter baumanii）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatobacter actinomycetemcomitans）、バルトネラ・バシリフォルミス、バルトネラ・ヘンセラエ、バルトネラ・クインタナ、ビフィドバクテリウム属菌、ボレリア属菌、百日咳菌（Bortadella pertussis）、ブルセラ属菌種、バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacis）、類鼻疽菌、カンピロバクター・ジェジュニ、カーディオバクテリウム・ホミニス、カンピロバクター・フィタス、肺炎クラミジア（Chlamydia pneumonia）、トラコーマクラミジア（Chlymydia trachomatis）、クロストリジウム・ディフィシレ、シアノバクテリア、エイケネラ・コローデンス（Eikennella corrodens）、エンテロバクター属菌、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faccium）、大腸菌、大腸菌Ｏ１５７（Escherichia coli 0157）、フランシセラ・ツラレンシス（Franceilla tularensis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘモフィルス・アフロフィルス、軟性下疳菌、パラインフルエンザ菌、ピロリ菌、キンゲラ・キンゲ、肺炎桿菌（Klebsiella pneumonia）、レジオネラ菌、レジオネラ・ニューモフィラ血清群１、レプトスピラ属菌（Leptospria）、モルガネラ・モルガニイ、淋菌、髄膜炎菌、プロテウス・ミラビリス、プロテウス・ブルガリス、プロテウス・ミクソファシエンス、プロビデンシア・レットゲリ、プロビデンシア・アルカリファシエンス、プロビデンシア・スチュアーティイ、緑膿菌、シュードモナス・パウシモビリス、プチダ菌、蛍光菌、シュードモナス・アシドボランス、リケッチア属菌、サルモネラ菌、チフス菌、パラチフス菌Ａ、Ｂ型チフス、サルモネラ・ダブリン、アリゾナ菌、サルモネラ・コレレスイス、霊菌、志賀赤痢菌（Schigella dysenteriae）、フレクスナー赤痢菌（Schigella flexneri）、ボイド赤痢菌（Schigella boydii）、ソンネ菌（Schigella sonnei）、トレポネーマ属菌、ステノトロホモナス・マルトフィリア、コレラ菌、ビブリオ・ミミカス、ビブリオ・アルギノリティカス、ビブリオ・ホリサエ、腸炎ビブリオ、ビブリオ・ブルニフィカスおよびペスト菌（Yersinia pestitis）からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。,
  40. グラム陽性菌が、放線菌属菌、炭疽菌、枯草菌、破傷風菌、ウェルシュ菌（Clostridium perfingens）、ボツリヌス菌、破傷風菌、ジフテリア菌、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、ブタ丹毒菌（Erysipelothrix ruhsiopathiae）、リステリア・モノサイトゲネス、らい菌、結核菌、マイコプラズマ属菌、ノカルディア属菌、プロピオニバクテリウム属菌（Propionibacerium）、緑膿菌、肺炎球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（VRSA）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス、腐性ブドウ球菌、肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumonia）、化膿レンサ球菌、およびストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus mutants）からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
  41. ウイルスが、エボラウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス（herpes simplex virus）、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ−６、ＨＰＶ−１１）、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス（human SARS coronavirus）、インフルエンザＡ型ウイルス（influenza A virus）、インフルエンザＢ型ウイルス（influenza B virus）、インフルエンザＣ型ウイルス（influenza C virus）、麻疹ウイルス（measles virus）、狂犬病ウイルス（rabies virus）、ポリオウイルス（poliovirus）、ＳＡＲＳコロナウイルス（SARS corona virus）、および黄熱病ウイルス（yellow fever virus）からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
  42. 寄生虫が、アカントアメーバ属種、アメリカトリパノソーマ症（American tryppanosomiasis）、バラムチア・マンドリルリス（Balamuthia mandnillanis）、多型バベシア（Babesia divergenes）、フタゴバベシア、小形馬バベシア、ネズミバベシア（Babesia microfti）、バベシア・ダンカニ、大腸バランチジウム、ブラストシスチス属種、クリプトスポリジウム属種、シクロスポラ・カイエタネンシス、ジエントアメーバ・フラギリス、広節裂頭条虫、アマゾンリーシュマニア（Leishmania amazonesis）、フォーラーネグレリア（Naegleria fowderi）、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、プラスモディウム・オバレ・クルティシイ、四日熱マラリア原虫、リノスポリジウム・セーベリ、サルコシスティス・ボビホミニス、豚肉胞子虫（Sarcocystiss suihominis）、トキソプラズマ原虫、膣トリコモナス（Trichmonas vaginalis）、トリパノソーマ・ブルセイ、クルーズトリパノソーマ、および多頭条虫からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
  43. １種または複数の追加の治療剤または免疫モジュレーター、およびそれらの組合せを対象に投与するステップをさらに含む、請求項２５から４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. １種または複数の追加の治療剤が、抗細菌剤、抗ウイルス剤もしくは抗寄生虫剤などの抗微生物剤、抗がん剤、または結核、髄膜炎、肺炎、潰瘍、敗血症、鼻炎、喘息、アレルギー、ＣＯＰＤ、炎症性腸疾患、関節炎、肥満症、放射線誘発炎症、乾癬、アトピー性皮膚炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、全身性狼瘡、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎（グレーブス病）、多発性硬化症、強直性脊椎炎、および水疱性疾患の処置のための治療剤から選択される、請求項４３に記載の方法。
  45. １種または複数の追加の免疫モジュレーターが、免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニスト、ワクチン、好ましくは免疫チェックポイント調節因子に対するワクチン、免疫刺激分子、免疫共刺激分子のアゴニスト、組換えタンパク質、およびＴ細胞、好ましくはキメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲ−Ｔ）細胞からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
  46. 免疫チェックポイント調節因子が、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）受容体（ＣＤ２７９）、ＰＤ−１（例えば、ＰＤ−Ｌ１）のリガンド、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（あるいはＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ）および４−１ＢＢリガンド、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（あるいはＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０）およびＯＸ４０リガンド、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７（あるいはＴＮＦＲＳＦ７、分化クラスター２７、ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ２５およびＴＮＦ様リガンド１Ａ（ＴＬ１Ａ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５（あるいはＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０）およびＣＤ４０リガンド、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（あるいはＴＮＦＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ）−リンホトキシンα（ＬＴＡ）、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）−ＣＤ１６０（あるいはＴＮＦＳＦ１４）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（ＳＩＧＬＥＣ）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）およびＩＣＯＳリガンド、Ｂ７−Ｈ３（Ｂ７ファミリー、あるいはＣＤ２７６）、Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１（ＶＴＣＮ１、あるいはＢ７−Ｈ４）、Ｔ細胞活性化のＶ型免疫グロブリンドメイン含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ヒト内在性レトロウイルスＨ型長末端反復結合タンパク質２（ＨＨＬＡ２）−膜貫通および免疫グロブリンドメイン含有２（ＴＭＩＧＤ２）、ブチロフィリン、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（あるいはＮＫＲ２Ｂ４、ＣＤ２４４）およびＢ細胞膜タンパク質（ＣＤ４８）、免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインと免疫受容抑制性チロシンモチーフドメインとを含むＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）およびポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）ファミリーメンバー、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）および白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）、ナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）およびナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＡ（ＮＫＧ２Ａ）、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）およびＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ（ＭＩＣＢ）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）、アデノシン−エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＣＤ３９）−５’−ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）およびＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、ホスファチジルセリン、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）およびインテグリン結合タンパク質（ＣＤ４７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ならびにニューロピリンから選択される、請求項４５に記載の方法。
  47. １種または複数の追加の免疫モジュレーターが、ワクチンである、請求項４５に記載の方法。
  48. がんを処置する方法において、ワクチンが、腫瘍抗原に対するワクチンである、請求項４７に記載の方法。
  49. 腫瘍抗原が、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、ムチン１（ＭＵＣ１）、およびメラノーマ関連抗原３（ＭＡＧＥＡ３）から選択される、請求項４８に記載の方法。
  50. １種または複数の追加の免疫モジュレーターが、Ｔ細胞、好ましくはキメラ抗原受容体Ｔ細胞である、請求項４５に記載の方法。
  51. １種または複数の追加の免疫モジュレーターが、組換えタンパク質、好ましくは顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１から選択される組換えタンパク質である、請求項４５に記載の方法。
  52. 組成物が、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース１，７−ビスホスフェート（ＨＢＰ）、Ｄ−ｇｌｙｃｅｒｏ−β−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１−ホスフェート（ＨＭＰ−１ｂＰ）、Ｌ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ）およびＤ−ｇｌｙｃｅｒｏ−Ｄ−ｍａｎｎｏ−ヘプトース−１β−ＡＤＰ（Ｈ１ｂ−ＡＤＰ）、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む、請求項２５から５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. ＡＬＰＫ１アゴニストが、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択される、請求項５２に記載の方法。
  54. ＡＬＰＫ１アゴニストが、ＨＭＰ−１ｂＰである、請求項５２に記載の方法。
  55. 組成物が、（ｉ）哺乳類細胞において細胞質Ｄ−セドヘプツロース−７−ＰをＨ１ｂ−ＡＤＰに変換するのに十分なほど発現されるような、ＧｍｈＡ、ＧｍｈＢ、およびＨＩｄＥのそれぞれをコードする１種または複数のポリヌクレオチド、（ｉｉ）ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ＡＬＰＫ１の構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチド、（ｉｖ）ＡＬＰＫ１タンパク質、または（ｖ）ＡＬＰＫ１タンパク質の構成的活性型変異体を含む、請求項２５から５１のいずれか一項に記載の方法。
  56. 組成物が、（ｉ）哺乳類細胞において細胞質Ｄ−セドヘプツロース−７−ＰをＨ１ｂ−ＡＤＰに変換するのに十分なほど発現される、ＧｍｈＡ、ＧｍｈＢ、およびＨＩｄＥのそれぞれをコードする１種または複数のポリヌクレオチド、（ｉｉ）ＡＬＰＫ１をコードするポリヌクレオチド、または（ｉｉｉ）ＡＬＰＫ１の構成的活性型変異体をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項５５に記載の方法。
  57. 組成物が、対象へのウイルスまたは非ウイルス遺伝子送達システムを使用した投与に適応される、請求項５６に記載の方法。
  58. 組成物が、対象へのウイルス遺伝子送達システムを使用した投与に適応される、請求項５７に記載の方法。
  59. 組成物が、ウイルス粒子をさらに含む、請求項５８に記載の方法。
  60. 組成物が、対象への非ウイルス遺伝子送達システムを使用した投与に適応される、請求項５７に記載の方法。
  61. 組成物が、リポソーム粒子、ナノ粒子、ミニサークル、ミニベクター、および高分子担体の１種または複数をさらに含む、請求項６０に記載の方法。
  62. 非ウイルス遺伝子送達システムが、遺伝子編集技法を含む、請求項６０に記載の方法。
  63. 遺伝子編集技法が、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ−９を利用する、請求項６２に記載の方法。
  64. がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰおよびＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、ならびにそれらのプロドラッグ、類似体および誘導体からなる群から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  65. ＡＬＰＫ１アゴニストが、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択される、請求項６４に記載の方法。
  66. １種または複数の追加の治療剤または免疫モジュレーター、およびそれらの組合せを対象に投与するステップをさらに含む、請求項６４または６５に記載の方法。
  67. １種または複数の追加の治療剤または免疫モジュレーターが、免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニスト、ワクチン、好ましくは免疫チェックポイント調節因子に対するワクチン、免疫刺激分子、免疫共刺激分子のアゴニスト、組換えタンパク質、およびＴ細胞、好ましくはキメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲ−Ｔ）細胞からなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
  68. 免疫チェックポイント調節因子が、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）受容体（ＣＤ２７９）、ＰＤ−１のリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（あるいはＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ）および４−１ＢＢリガンド、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（あるいはＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０）およびＯＸ４０リガンド、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７（あるいはＴＮＦＲＳＦ７、分化クラスター２７、ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ２５およびＴＮＦ様リガンド１Ａ（ＴＬ１Ａ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５（あるいはＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０）およびＣＤ４０リガンド、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４（あるいはＴＮＦＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ）−リンホトキシンα（ＬＴＡ）、ヘルペスウイルス侵入媒介因子（ＨＶＥＭ）−ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）−ＣＤ１６０（あるいはＴＮＦＳＦ１４）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有３（ＴＩＭ３）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（ＳＩＧＬＥＣ）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）およびＩＣＯＳリガンド、Ｂ７−Ｈ３（Ｂ７ファミリー、あるいはＣＤ２７６）、Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１（ＶＴＣＮ１、あるいはＢ７−Ｈ４）、Ｔ細胞活性化のＶ型免疫グロブリンドメイン含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ヒト内在性レトロウイルスＨ型長末端反復結合タンパク質２（ＨＨＬＡ２）−膜貫通および免疫グロブリンドメイン含有２（ＴＭＩＧＤ２）、ブチロフィリン、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（あるいはＮＫＲ２Ｂ４、ＣＤ２４４）およびＢ細胞膜タンパク質（ＣＤ４８）、免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインと免疫受容抑制性チロシンモチーフドメインとを含むＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）およびポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）ファミリーメンバー、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）および白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）、ナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）およびナチュラルキラー群タンパク質２のメンバーＡ（ＮＫＧ２Ａ）、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩポリペプチド関連配列Ａ（ＭＩＣＡ）およびＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ｂ（ＭＩＣＢ）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）、アデノシン−エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＣＤ３９）−５’−ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）およびＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、ホスファチジルセリン、シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）およびインテグリン結合タンパク質（ＣＤ４７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ならびにニューロピリンから選択される、請求項６７に記載の方法。
  69. １種または複数の追加の治療剤または免疫モジュレーターが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターである、請求項６８に記載の方法。
  70. ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、およびアベルマブからなる群から選択される、請求項６９に記載の方法。
  71. がんが、進行メラノーマ、非小細胞肺がん、腎細胞癌、膀胱がん、ホジキンリンパ腫、肝がん、胃がん、結腸がん、乳がん、非ホジキンリンパ腫、前立腺がん、頭頸部がん、甲状腺がん、脳がん、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、多発性骨髄腫、子宮頸がん、および肉腫から選択される、請求項６４から７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体からなる群から選択されるＡＬＰＫ１アゴニスト、ならびに免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニスト、免疫刺激分子、および免疫共刺激分子のアゴニストの１種または複数から選択される免疫モジュレーターを含む組成物を対象に投与するステップを含む方法。
  73. 免疫チェックポイント調節因子のインヒビターまたはアンタゴニストが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターである、請求項７２に記載の方法。
  74. ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、およびアベルマブからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
  75. 免疫モジュレーターが、インターフェロンα（ＩＮＦα）、インターフェロン遺伝子刺激因子（「ＳＴＩＮＧ」）アゴニスト、ＴＬＲアゴニスト（例えば、レシキモド（ｒｅｓｑｕｉｍｏｄ））、および抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体から選択される、請求項７２に記載の方法。
  76. 免疫モジュレーターが、免疫共刺激分子のアゴニストである、請求項７５に記載の方法。
  77. 免疫共刺激分子のアゴニストが、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト抗体である、請求項７６に記載の方法。
  78. ＡＬＰＫ１アゴニストが、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはその誘導体である、請求項７２から７７のいずれか一項に記載の方法。
  79. 肝疾患または障害の処置を必要とする対象における肝疾患または障害を処置する方法であって、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはその誘導体の低用量を対象に投与するステップを含む方法。
  80. 肝疾患または障害が、肝がん、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染によって引き起こされる疾患または障害から選択される、請求項７９に記載の方法。
  81. がんを処置する方法であって、がんの処置を必要とする対象に、Ｈ１ｂ−ＡＤＰまたはＨ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌを産生する細菌を含む組成物を投与するステップを含む方法。
  82. 組成物が、腫瘍内注射により投与される、請求項８１に記載の方法。
  83. ＡＬＰＫ１アゴニストが、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体からなる群から選択され、方法が、ＡＬＰＫ１アゴニストの細胞内分解を阻害するのに有効なホスファターゼインヒビターを投与するステップをさらに含む、請求項２５から８２のいずれか一項に記載の方法。
  84. 対象が、脊椎動物である、請求項２５から８３のいずれか一項に記載の方法。
  85. 対象が、ヒトである、請求項２５から８３のいずれか一項に記載の方法。
  86. 請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容される塩を含むワクチン組成物またはワクチンアジュバント組成物。
  87. ＨＢＰ、ＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択される、またはＨＭＰ−１ｂＰ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、およびＨ１ｂ−ＡＤＰから選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む医薬組成物、ワクチン組成物、またはワクチンアジュバント組成物。
  88. Ｈ１ｂ−ＡＤＰ−６Ｌ、Ｈ１ｂ−ＡＤＰ、または請求項１から２２のいずれか一項に記載の化合物および表１の化合物１〜３３のいずれか１つから選択されるそれらの誘導体から選択されるＡＬＰＫ１アゴニストを含む医薬組成物、ワクチン組成物、またはワクチンアジュバント組成物。
  89. 哺乳類の対象における免疫応答をモジュレートすることができる化合物を選択する方法であって、ＡＬＰＫ１と被験化合物をＡＴＰの存在下で、およびそれとは別に同時にＡＴＰの非存在下で接触させ、次にＡＬＰＫ１シグナル伝達の１つまたは複数の下流標的のＡＬＰＫ１リン酸化および／または活性化を検出するためのアッセイを行うステップを含む方法。
  90. ＡＬＰＫ１と被験化合物を接触させるステップが、無細胞系または細胞系で行われる、請求項８９に記載の方法。
  91. ＡＬＰＫ１シグナル伝達の１つまたは複数の下流標的のＡＬＰＫ１リン酸化および／または活性化を検出するためのアッセイが、ラジオメトリックベースのキナーゼアッセイ、蛍光ベースのキナーゼアッセイ、時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）ベースのアッセイ、アルファ技術ベースのアッセイ、酵素結合性免疫吸着アッセイ、ルミネセンス検出、移動度シフトベースのキナーゼアッセイ、ウェスタンベースのキナーゼアッセイ、およびリガンド−キナーゼ結合アッセイを含む、請求項８９に記載の方法。
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