JP2020072706A

JP2020072706A - ピリジノン化合物およびその用途

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Publication number: JP2020072706A
Application number: JP2019238590A
Authority: JP
Inventors: 宣規福井; Nobunori Fukui; 武人宇留野; Takehito Uruno
Original assignee: Kyushu University NUC
Current assignee: Kyushu University NUC
Priority date: 2015-02-27
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2020-05-14
Anticipated expiration: 2036-02-26
Also published as: EP3692992A1; US20180028515A1; DK3263133T3; EP3263133B1; PL3263133T3; EP3263133A1; US11311523B2; JP6869571B2; JP6665155B2; PT3263133T; JPWO2016136985A1; WO2016136985A1; ES2792989T3; US10406141B2; EP3263133A4; US20200061039A1; EP3263133B8

Abstract

【課題】抗癌剤の有効成分をスクリーニングする方法を提供する。【解決手段】下記の工程１および工程２を含む方法により実施することができるスクリーニング方法を開示する。１）被験物質を細胞に添加する工程１、２）工程１にて添加した被験物質の中から、細胞のＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害する物質を選択する工程２。【選択図】なし

Description

本発明はピリジノン化合物およびその用途に関する。

癌は日本人の死因の第１位であり、抗癌剤の開発が常に進められている。中でも、癌細胞の浸潤、転移などの症状を抑えることができる抗癌剤の開発が進められている。

一般的に、抗癌剤の多くは重篤な副作用を引き起こすものが多く、市場のニーズに答えるには副作用が少ない抗癌剤を開発すべき時代となっている。中でも、抗体医薬などといった分子標的薬が特に着目されているが、製造コストが高く薬価も下落しないことから、患者に対してコスト面で大きな負担を強いることになっている。

特許文献１には、ＤＯＣＫ阻害剤として、ピラゾリジンジオン誘導体が開示されている。当該化合物はＤＯＣＫ−Ａサブファミリーに属するＤＯＣＫ１（ＤＯＣＫ１８０ともいう。）、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５が有するＲａｃ−ＧＤＰからＲａｃ−ＧＴＰへの変換活性（本明細書にてこれをＧＥＦ活性と呼ぶことがある。）に対する阻害作用を示すことが知られている。

当該文献には、ＤＯＣＫ２が免疫細胞にて特異的に発現していることに鑑みて、ピラゾリジンジオン誘導体（例えばＣＰＹＰＰ）がケモカインによって惹起された免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞）の細胞遊走を阻害することを確認し、これを免疫疾患などの有効成分として用いることができると開示されている。また、当該文献にはピラゾリジンジオン誘導体が癌細胞の浸潤および癌細胞の足場非依存的な増殖を抑制する効果を有していることも確認され、これを抗癌剤として用いることができることも開示されている。

一方で、ＤＯＣＫ１およびＤＯＣＫ５については全身にてユビキタスに発現することが知られていたが、特にＤＯＣＫ１に関して、近年、ＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性によって活性化されたＲａｃが、ＨＥＲ２型の乳癌の転移を制御するとのメカニズムが報告された（非特許文献１）。また、当該文献には上述のＣＰＹＰＰが斯かるＲａｃの活性化および癌細胞の遊走を抑制することも報告されている。

また、細胞が遊走する際に形態変化の指標となるラッフルの形成にはＤＯＣＫが関わっていることが知られている。このようなラッフル形成にはペリフェラル・ラッフル（Peripheral Ruffle）とドーサル・ラッフル（Dorsal Ruffle）との２種類のラッフルが存在することが明らかとなっている。前者はＤＯＣＫ１およびＤＯＣＫ５の２者によって制御されるのに対して、後者はＤＯＣＫ１のみによって制御されることも明らかとなっている（非特許文献２）。

国際公開２０１２／１５７３８９

ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２０１３，Ｖｏｌ．１１０，７４３４−７４３９ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１２，Ｖｏｌ．２８８，８０９２−８１０９Ｎａｔｕｒｅ，２０１３，Ｖｏｌ．４９７，６３３−６３８Ｎａｔｕｒｅ，２００１，Ｖｏｌ．４１２，８２６−８３１

上述のようにＣＰＹＰＰなどのピラゾリジンジオン誘導体がＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を阻害するといった知見と、ＤＯＣＫ１の活性化が癌の転移などの進行メカニズムに、関連することに鑑みれば、これを抗癌剤の有効成分として開発を進めていくことが可能かもしれない。

しかしながら、ＣＰＹＰＰはＤＯＣＫーＡサブファミリーに属する他のＤＯＣＫ２、ＤＯＣＫ５などといった他の生体内分子のＧＥＦ活性をも阻害することと、ＤＯＣＫ２が免疫細胞にて特異的に発現することに顧みれば、ＣＰＹＰＰを抗癌剤の有効成分として用いても、免疫系での副作用を生じさせる可能性が高い。

以上、本発明は抗癌剤の有効成分として用いることができる化合物を提供することを課題とする。また、本発明は副作用が少ない抗癌剤を提供することに鑑みて、ＤＯＣＫ１をターゲットとし、これを選択的に阻害できる化合物を提供することを課題とする。

本発明者らは、ＤＯＣＫ２とＲａｃとの複合体の立体構造予測モデルを基にインシリコスクリーニングを行い、さらに癌細胞の浸潤、足場非依存的な癌細胞の増殖、ＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性などといった種々の生理活性を指標としたスクリーニングを行うことによって、特定のピリジノン化合物が抗癌剤の有効成分として用い得ることを見出した。また、本発明者らはこれらのピリジノン化合物が、ＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を選択的に阻害することも見出した。

本発明は、このような知見に基づいて完成されたものであり、以下に示す様々な態様の発明を包含する。

項１下記式（１）で表される化合物またはその塩；
［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なって、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、またはＣ_２−６アルケニル基を示す。あるいは、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、１個以上のヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成してもよい。
Ｒ^３は、下記式（２）〜（６）で示されるいずれかの基を示す、
〔式（２）で示される基において、ｎは０または１を示す。
式（２）で示される基において、Ｒ^４は、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルコキシ基、または水酸基を示す。
式（３）で示される基において、Ｒ^５は、水素原子、フェニル基、またはナフチル基を示す。
ここで、Ｒ^５で示されるフェニル基上には、置換基として、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルキル基、トリハロＣ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、トリハロＣ_１−６アルコキシ基、フェニル基、ビフェニル基、アリールＣ_１−６アルキル基、ナフチル基、ニトロ基、およびシアノ基からなる群から選ばれた基の少なくとも１個を有していてもよい。
式（５）で示されるピロール環上および式（６）で示されるインドール環上には、置換基として少なくとも１個のＣ_１−６アルキル基を有していてもよい。〕。］。

項２式（１）において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、ピロリジン環、ピラゾリジン環、イミダゾリジン環、（イソ）チアゾリジン環、（イソ）オキサゾリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、アゼパン環、チオアゼパン環、またはオキサゼパン環を形成するものである、項１に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項３式（１）において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、１個以上のヘテロ原子を介して、互いに結合して飽和の５員単環を形成するものである、項１または項２に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項４式（１）において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共にピロリジン環を形成するものである、項１〜項３のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項５式（１）において、Ｒ^３は式（２）で示される基である、項１〜項４のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項６式（２）で示される基において、ｎは１である、項１〜項５のいずれかに記載のピリジノン化合物またはその塩。

項７式（２）で示される基において、Ｒ^４はベンゼン環に結合しているー（ＣＨ_２）_ｎーに対してパラ位に配置されるものである、項１〜項６のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項８式（２）で示される基において、Ｒ^４はハロゲン原子である、項１〜項７のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項９式（１）において、Ｒ^３は式（３）で示される基である、項１〜項４のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項１０式（３）で示される基において、Ｒ^５がフェニル基である、項１〜項４または項９のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項１１Ｒ^５で示されるフェニル基上に、置換基として、ハロゲン原子またはトリハロＣ_１−６アルキル基の少なくとも１個を有するものである、項１〜項４、項９、または項１０のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項１２Ｒ^５で示されるフェニル基上の置換基が、ベンゼン環に結合しているカルボニル基に対してメタ位および／またはパラ位に配置されるものである、項１〜項４または項９〜項１１のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項１３式（１）で表されるピリジノン化合物が、
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、
1-(2-オキソ-2-(4'-(トリフルオロメチル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、
1-(2-(4-(ナフタレン-2-イル)フェニル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、
1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、または
1-(2-(3’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン
である、項１〜項４または項９〜項１２のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩。

項１４項１〜項１３のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩の製造方法であって、
下記式（７）
［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、項１にて定義されるＲ^１およびＲ^２とそれぞれ同じ。］
で表される化合物と、下記式（８）
［式中、Ｘは、ハロゲン原子を示す。
Ｒ^３は、項１において定義されるＲ^３と同じ。］
で表される化合物とを、還元剤の存在下で反応させる工程を含む、製造方法。

項１５項１〜項１３のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその塩を含む、ＤＯＣＫ１選択的阻害剤。

項１６ＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を選択的に阻害する、項１５に記載の阻害剤。

項１７項１５または項１６に記載のＤＯＣＫ１選択的阻害剤および薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。

項１８癌の治療および／または予防に使用される、項１６に記載の医薬組成物。

項１９癌が転移性癌である、項１７に記載の医薬組成物。

項２０上記項１〜項１３のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。

項２１癌の治療および／または予防に使用される、項１９に記載の医薬組成物。

項２２癌が転移性癌である、項１７に記載の医薬組成物。

項２３項１〜項１３のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与する工程を含む、疾患の治療および／または予防方法。

項２４前記患者が癌に罹患する患者であり、前記疾患が癌である、項２２に記載の治療および／または予防方法。

項２５癌が転移性癌である、項２３に記載の治療および／または予防方法。

項２６項１〜項１３のいずれか１項に記載のピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩の、疾患の治療および／または予防のために用いられる医薬組成物の製造のための使用。

項２７前記疾患が癌である、項２５に記載の使用。

項２８癌が転移性癌である、項２６に記載の使用。

項２９被験物質の中からＤＯＣＫ１選択的阻害剤、好ましくは抗癌剤の有効成分をスクリーニングする、下記の工程１および工程２を含む方法；
１被験物質を細胞に添加する工程１、
２工程１にて添加した被験物質の中から、細胞内のＤＯＣＫ１の機能を、ＤＯＣＫ２の機能およびＤＯＣＫ５の機能よりも強く阻害する物質を選択する工程２。

項３０工程２において、ＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することが、被験物質を添加した細胞内におけるＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を、ＤＯＣＫ２のＧＥＦ活性およびＤＯＣＫ５のＧＥＦ活性よりも強く阻害することである、項２９に記載の方法。

項３１工程１にて添加される細胞が、浸潤性を有する細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞の浸潤性を阻害することである、項２９または項３０に記載の方法。

項３２工程１にて添加される細胞が非免疫系細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のペリフェラルラッフルの形成には影響せず、且つドーサルラッフルの形成を抑制することである、項２９〜項３１のいずれか１項に記載の方法。

項３３工程１にて添加される細胞が免疫細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のＤＯＣＫファミリーに属するＤＯＣＫ１以外のタンパク質による遊走応答には影響しないことである、項２９〜項３１のいずれか１項に記載の方法。

項３４下記の工程１および工程２を含むＤＯＣＫ１選択的阻害剤、好ましくは抗癌剤の有効成分をスクリーニングする方法；
１ＤＯＣＫ１のＤＨＲ−２ドメイン、ＤＯＣＫ２のＤＨＲ−２ドメイン、およびＤＯＣＫ５のＤＨＲ−２ドメインと、被験物質とを接触させる工程１、
２被験物質の中から、ＤＯＣＫ１のＤＨＲ−２ドメインによるＧＥＦ活性を、ＤＯＣＫ２のＤＨＲ−２ドメインによるＧＥＦ活性、およびＤＯＣＫ５のＤＨＲ−２ドメインによるＧＥＦ活性よりも強く阻害する物質を選択する工程２。

本発明は、さらに以下に示す態様の発明も包含する。

項Ａ−１ＤＯＣＫ１選択的阻害剤を有効成分として含む医薬組成物。

項Ａ−２ＤＯＣＫ１選択的阻害剤が、ＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を選択的に阻害する剤である、項Ａ−１に記載の医薬組成物。

項Ａ−３癌の治療および／または予防に使用される、項Ａ−２に記載の医薬組成物。

項Ａ−４癌が転移性癌である、項Ａ−３に記載の医薬組成物。

項Ａ−５ＤＯＣＫ１選択的阻害剤が、下記式（１）で表されるピリジノン化合物またはその塩である、項Ａ−１〜項Ａー４のいずれかに記載の医薬組成物；
［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なって、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、またはＣ_２−６アルケニル基を示す。あるいは、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、１個以上のヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成してもよい。
Ｒ^３は、下記式（２）〜（６）で示されるいずれかの基を示す、
〔式（２）で示される基において、ｎは０または１を示す。
式（２）で示される基において、Ｒ^４は、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルコキシ基、または水酸基を示す。
式（３）で示される基において、Ｒ^５は、水素原子、フェニル基、またはナフチル基を示す。
ここで、Ｒ^５で示されるフェニル基上には、置換基として、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルキル基、トリハロＣ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、トリハロＣ_１−６アルコキシ基、フェニル基、ビフェニル基、アリールＣ_１−６アルキル基、ナフチル基、ニトロ基、およびシアノ基からなる群から選ばれた基の少なくとも１個を有していてもよい。
式（５）で示されるピロール環上および式（６）で示されるインドール環上には、置換基として、少なくとも１つのＣ_１−６アルキル基を有していてもよい。〕。］。

項Ａ−６式（１）において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、ピロリジン環、ピラゾリジン環、イミダゾリジン環、（イソ）チアゾリジン環、（イソ）オキサゾリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、アゼパン環、チオアゼパン環、またはオキサゼパン環を形成するものである、項Ａ−１〜項Ａ−５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−７式（１）において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、１個以上のヘテロ原子を介して、互いに結合して飽和の５員単環を形成するものである、項Ａー１〜項Ａ−６のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−８式（１）において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共にピロリジン環を形成するものである、項Ａ−１〜項Ａ−７のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−９式（１）において、Ｒ^３は式（２）で示される基である、項Ａ−１〜項Ａ−８のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１０式（２）で示される基において、ｎは１である、項Ａ−１〜項Ａ−９のいずれかに記載の医薬組成物。

項Ａ−１１式（２）で示される基において、Ｒ^４はベンゼン環に結合しているー（ＣＨ_２）_ｎーに対してパラ位に配置されるものである、項Ａ−１〜項Ａ−１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１２式（２）で示される基において、Ｒ^４はハロゲン原子である、項Ａ−１〜項Ａ−１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１３式（１）において、Ｒ^３は式（３）で示される基である、項Ａ−１〜項Ａー１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１４式（３）で示される基において、Ｒ^５がフェニル基である、項Ａ−１〜項Ａ−１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１５Ｒ^５で示されるフェニル基上に、置換基として、ハロゲン原子またはトリハロＣ_１−６アルキル基の少なくとも１個を有するものである、項Ａ−１〜項Ａ−８、項Ａ−１３、または項Ａ−１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１６Ｒ^５で示されるフェニル基上の置換基が、ベンゼン環が結合しているカルボニル基に対してメタ位および／またはパラ位に配置されるものである、項Ａ−１〜項Ａ−８または項Ａ−１３〜項Ａ−１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１７式（１）で表されるピリジノン化合物が、
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、
1-(2-オキソ-2-(4'-(トリフルオロメチル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、
1-(2-(4-(ナフタレン-2-イル)フェニル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、
1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン、または
1-(2-(3’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン
である、項Ａ−１〜項Ａ−８または項Ａ−１３〜項Ａ−１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。

項Ａ−１８被験物質の中からＤＯＣＫ１選択的阻害剤をスクリーニングする、下記の工程１および工程２を含む方法；
１被験物質を細胞に添加する工程１、
２工程１にて添加した被験物質の中から、細胞内のＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害する物質を選択する工程２。

項Ａ−１９工程２において、ＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することが、被験物質を添加した細胞内におけるＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を選択的に阻害することである、項Ａ−１８に記載の方法。

項Ａ−２０工程１にて添加される細胞が、浸潤性を有する細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞の浸潤性を阻害することである、項Ａ−１８または項Ａ−１９に記載の方法。

項Ａ−２１工程１にて添加される細胞が非免疫系細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のペリフェラルラッフルの形成には影響せず、且つドーサルラッフルの形成を抑制することである、項Ａ−１８〜項Ａ−２０のいずれか１項に記載の方法。

項Ａ−２２工程１にて添加される細胞が免疫細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のＤＯＣＫファミリーに属するＤＯＣＫ１以外のタンパク質による遊走応答には影響しないことである、項Ａ−１８〜項Ａ−２０のいずれか１項に記載の方法。

本発明は、さらに以下に示す態様の発明も包含する。

項ＢＤＯＣＫ１選択的阻害剤を患者に投与する工程を含む、疾患の治療および／または予防方法。

項ＣＤＯＣＫ１選択的阻害剤の、疾患の治療および／または予防のために用いられる医薬組成物の製造のための使用。

上記項Ｂおよび項Ｃにて表されるＤＯＣＫ１選択的阻害剤などについては、上述の項Ａ−２〜Ａ−１７を援用することができる。

本発明に係るピリジノン化合物は、ＤＯＣＫ１選択的な阻害活性を発揮する。

本発明に係るピリジノン化合物は、抗癌剤の有効成分として有用である。

本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物の化学構造を示す図。本発明のピリジノン化合物によるがん細胞株３ＬＬの浸潤阻害効果を指標としたスクリーニング結果を示す図。（Ａ）は左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＮＴ−０１、ＮＴ−０２、ＮＴ−０３、ＮＴ−０４、ＮＴ−０５、ＮＴ−０６、ＮＴ−０７、ＮＴ−０８、ＮＴ−０９、ＮＴ−１０、ＮＴ−１１、ＮＴ−１２、ＮＴ−１３、ＴＳ−０３、ＴＳ−０７、ＴＳ−０８、ＴＳ−０９、およびＴＳ−１０の結果を示す。（Ｂ）は、左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＮＴ−０７、ＮＴ−０９、ＮＴ−１２、ＴＳ−０９、ＴＳ−１１、ＴＳ−１２、ＴＳ−１３、ＴＳ−１４、ＴＳ−１５、ＴＳ−１６、ＴＳ−１７、ＴＳ−１８、ＴＳ−２０、ＴＳ−２１、ＴＳ−２２、ＴＳ−２４、ＴＳ−２５、およびＴＳ−２６の結果を示す。（Ｃ）は、左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−２７、ＴＳ−２８、ＴＳ−２９、ＴＳ−３０、ＴＳ−３５、ＴＳ−３６、ＴＳ−３７、ＴＳ−３８、ＴＳ−３９、ＴＳ−４０、ＴＳ−４１、ＴＳ−４２、ＴＳ−４３、ＴＳ−４４、ＴＳ−４５、ＴＳ−４６、ＴＳ−４７、およびＴＳ−４８の結果を示す。（Ｄ）は、左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−４９、ＴＳ−５０、ＴＳ−５１、ＴＳ−５２、ＴＳ−５３、ＴＳ−５４、ＴＳ−５６、ＴＳ−５７、ＴＳ−５８、ＴＳ−５９、ＴＳ−６０、ＴＳ−６１、ＴＳ−６２、ＴＳ−６３、ＴＳ−６４、ＴＳ−６５、ＴＳ−６６、ＴＳ−６７、およびＴＳ−６８の結果を示す。縦軸は、細胞浸潤の阻害率（％）を表す。コントロール群（同濃度のＤＭＳＯ添加のみ）の浸潤細胞数を１００％として、各化合物添加時の浸潤細胞数を％換算し、その値を１００％から差し引いて求めた値を阻害率とした。本発明のピリジノン化合物によるがん細胞株３ＬＬの足場非依存的な増殖の阻害効果を指標としたスクリーニング結果を示す図。（Ａ）は左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＮＴ−０１、ＮＴ−０２、ＮＴ−０３、ＮＴ−０４、ＮＴ−０５、ＮＴ−０６、ＮＴ−０７、ＮＴ−０８、ＮＴ−０９、ＮＴ−１０、ＮＴ−１１、ＮＴ−１２、ＮＴ−１３、ＴＳ−０３、ＴＳ−０７、ＴＳ−０８、ＴＳ−０９、およびＴＳ−１０の結果を示す。（Ｂ）は、左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−１１、ＴＳ−１２、ＴＳ−１３、ＴＳ−１４、ＴＳ−１５、ＴＳ−１６、ＴＳ−１７、ＴＳ−１８、ＴＳ−２０、ＴＳ−２１、ＴＳ−２２、ＴＳ−２４、ＴＳ−２５、ＴＳ−２６、ＴＳ−２７、ＴＳ−２８、ＴＳ−２９、およびＴＳ−３０の結果を示す。（Ｃ）は、左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−３５、ＴＳ−３６、ＴＳ−３７、ＴＳ−３８、ＴＳ−３９、ＴＳ−４０、ＴＳ−４１、ＴＳ−４２、ＴＳ−４３、ＴＳ−４４、ＴＳ−４５、ＴＳ−４６、ＴＳ−４７、ＴＳ−４８、ＴＳ−４９、ＴＳ−５０、ＴＳ−５１、およびＴＳ−５２の結果を示す。（Ｄ）は、左から順にＤＭＳＯ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−５３、ＴＳ−５４、ＴＳ−５６、ＴＳ−５７、ＴＳ−５８、ＴＳ−５９、ＴＳ−６０、ＴＳ−６１、ＴＳ−６２、ＴＳ−６３、ＴＳ−６４、ＴＳ−６５、ＴＳ−６６、ＴＳ−６７、およびＴＳ−６８の結果を示す。縦軸は、足場非依存的な増殖の阻害率（％）を表す。コントロール群（同濃度のＤＭＳＯ添加のみ）のＳｏｆｔａｇａｒ内でのコロニー形成数を１００％として、所定濃度の各化合物添加時のコロニー形成数を％換算し、その値を１００％から差し引いて求めた値を阻害率とした。本発明のピリジノン化合物によるＤＯＣＫ１選択的阻害効果を指標としたスクリーニング結果を示す図。（Ａ）は左から順にＣＰＹＰＰ、Ｔ−０７０４４４、ＮＴ−０１、ＮＴ−０２、ＮＴ−０３、ＮＴ−０４、ＮＴ−０５、ＮＴ−０６、ＮＴ−０７、ＮＴ−０８、ＮＴ−０９、ＮＴ−１０、ＮＴ−１１、ＮＴ−１２、ＮＴ−１３、ＴＳ−０３、ＴＳ−０７、ＴＳ−０８、ＴＳ−０９、およびＴＳ−１０の結果を示す。（Ｂ）は、左から順にＣＰＹＰＰ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−１１、ＴＳ−１２、ＴＳ−１３、ＴＳ−１４、ＴＳ−１５、ＴＳ−１６、ＴＳ−１７、ＴＳ−１８、ＴＳ−２０、ＴＳ−２１、ＴＳ−２２、ＴＳ−２３、ＴＳ−２４、ＴＳ−２５、ＴＳ−２６、ＴＳ−２７、ＴＳ−２８、ＴＳ−２９、およびＴＳ−３０の結果を示す。（Ｃ）は、左から順にＣＰＹＰＰ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−３５、ＴＳ−３６、ＴＳ−３７、ＴＳ−３８、ＴＳ−４０、ＴＳ−４１、ＴＳ−４２、ＴＳ−４４、ＴＳ−４５、ＴＳ−４６、ＴＳ−４８、ＴＳ−４９、ＴＳ−５０、ＴＳ−５１、ＴＳ−５２、ＴＳ−５３、ＴＳ−５４、およびＴＳ−５６の結果を示す。（Ｄ）は、左から順にＣＰＹＰＰ、Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−５７、ＴＳ−５８、ＴＳ−５９、ＴＳ−６０、ＴＳ−６１、ＴＳ−６２、ＴＳ−６３、ＴＳ−６４、ＴＳ−６５、ＴＳ−６６、ＴＳ−６７、およびＴＳ−６８の結果を示す。縦軸は、インビトロＧＥＦアッセイにおける各化合物のＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５に対するＩＣ_５０値を用いて求めた各化合物のＤＯＣＫ２に対するＤＯＣＫ１選択性（■）、およびＤＯＣＫ５に対するＤＯＣＫ１選択性（□）を表す。ＤＯＣＫ２に対するＤＯＣＫ１選択性は、ＤＯＣＫ２に対するＩＣ_５０値をＤＯＣＫ１に対するＩＣ_５０値で割って求めた値で表し、ＤＯＣＫ５に対するＤＯＣＫ１選択性は、ＤＯＣＫ５に対するＩＣ_５０値をＤＯＣＫ１に対するＩＣ_５０値で割って求めた値で表す。本発明のピリジノン化合物によるＤＯＣＫ１選択的阻害効果を確認した結果を示す図。（Ａ）に示すグラフは、実験にて得られた蛍光強度を縦軸にし、横軸に反応開始からの時間を表すものである。蛍光強度は、ＧＴＰ-Ｒａｃの生成量を反映する。各パネル中の反応曲線は、ＲａｃにＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、またはＤＯＣＫ５のＤＨＲ-２ドメインを添加した反応液に同濃度のＤＭＳＯを添加した場合（赤）、所定の濃度の化合物を添加した場合（上から順に、１２.５，２５、５０、１００μＭ；各々、橙、黄、緑、青）、または、Ｒａｃのみの場合の反応曲線を示す。縦軸の単位は、相対蛍光強度（ＲＦＵ：ｒｅｌａｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕｎｉｔ）。（Ｂ）に示すグラフは、（Ａ）に示すグラフからＧＥＦ活性を算出したものである。グラフ内に記載する数値はそれぞれ上から順にＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５に対するＩＣ_５０値を示す。具体的にはＣＰＹＰＰであればＤＯＣＫ１に対するＩＣ_５０値は２０．０μＭ、ＤＯＣＫ２に対するＩＣ_５０値は３９．０μＭ、そしてＤＯＣＫ５に対するＩＣ_５０値は１４．８μＭとなる。その他も同様である。本発明のピリジノン化合物によるがん細胞の浸潤阻害効果を確認した実験結果を示す図。（Ａ）および（Ｂ）に示すグラフは、本発明のピリジノン化合物の存在下におけるマウス肺癌細胞株３ＬＬの浸潤能を数値化したものである。（Ｃ）に示すグラフは、本発明のピリジノン化合物の存在下におけるヒト繊維肉腫癌細胞株ＨＴ-１０８０の浸潤能を数値化したものである。（Ｄ）に示すグラフは、本発明のピリジノン化合物の存在下におけるヒト大腸がん由来細胞株ＤＬＤ−１の浸潤能を数値化したものである。（Ｃ）および（Ｄ）における縦軸は、コントロール条件下（ＤＭＳＯ添加）の浸潤細胞数を１００％とした時の細胞浸潤率（％）を表す。本発明のピリジノン化合物によるがん細胞の足場非依存的な増殖の阻害効果を確認した実験結果を示す図。グラフは、本発明のピリジノン化合物の存在下におけるマウス肺癌細胞株３ＬＬのSoft agar内でのコロニー形成能を数値化したものである。本発明のピリジノン化合物によるラッフル形成阻害実験結果を示す図。（Ａ）は、マウス初代培養繊維芽細胞（ＭＥＦ）を化合物で前処理し、ＰＤＧＦ刺激した時の形態変化を解析した蛍光顕微鏡写真像を示す。矢印はｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅ、矢頭はｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅを示す。（Ｂ）は（Ａ）の顕微鏡写真像を基に本発明のピリジノン化合物の存在下におけるｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅ、ｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅの形成能を数値化したものである。縦軸は、コントロール条件下（ＤＭＳＯ添加時）でのｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅ、およびｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅの形成率を１としたときの、各条件下でのｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅ、およびｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅの形成率を割合で表す。本発明のピリジノン化合物によるマクロピノサイトーシス阻害実験結果を示す図。（Ａ）はマウス肺癌細胞株３ＬＬのマクロピノサイトーシス活性をＴＭＲ-ｄｅｘｔｒａｎ（ＴＭＲ標識したデキストラン、赤色）の取り込みを指標に解析した蛍光顕微鏡写真像を示す。細胞核をＤＡＰＩ染色で示す（青色）。（Ｂ）は（Ａ）の顕微鏡写真像を基に、本発明のピリジノン化合物の存在下におけるマクロピノサイトーシス活性を数値化したものである。（Ｃ）はヒト繊維肉腫細胞株ＨＴ-１０８０のマクロピノサイトーシス活性をＴＭＲ-ｄｅｘｔｒａｎ（ＴＭＲ標識したデキストラン、赤色）の取り込みを指標に解析した蛍光顕微鏡写真像を示す。細胞核をＤＡＰＩ染色で示す（青色）。（Ｄ）は（Ｃ）の顕微鏡写真像を基に、本発明のピリジノン化合物の存在下におけるマクロピノサイトーシス活性を数値化したものである。縦軸は、コントロール条件下（ＤＭＳＯ添加時）での細胞のデキストラン取り込み度を１とした時の、各条件下でのデキストラン取り込み度を表す。リンパ球の遊走性・生存性への影響を確認する実験結果を示す図。（Ａ）はＴ細胞の遊走性に及ぼす影響を解析した結果を示す図である。縦軸は、コントロールの野生型Ｔ細胞（ＤＭＳＯ添加時）が、ＣＣＬ２１に対して遊走した細胞数を１とした時の、各条件下での遊走細胞数を割合で表す。グラフ右側のＷＴ、Ｄ２ＫＯはそれぞれ野生型Ｔ細胞、ＤＯＣＫ２ノックアウトＴ細胞のＣＣＬ２１存在下（ＣＣＬ２１）、および非存在下（-）での遊走細胞数を割合で表す。（Ｂ）はＴ細胞の生存性の結果を示す図である。本発明のピリジノン化合物によるメラノーマ細胞の肺転移の阻害効果を確認した実験結果を示す図。（Ａ）はメラノーマ細胞を移植したマウスから単離した肺の写真である。上段に、コントロールとして溶媒のみを投与した群（ｖｅｈｉｃｌｅ）、下段にＴＳ４５を投与した群（ＴＳ４５；２ｍｇ/マウス）を示す（それぞれ、静脈内投与／ｉｖ計４回）。（Ｂ）は上記実験の各個体におけるメラノーマの腫瘍転移巣の数を計数した結果を示す図である。縦軸は、１つの肺あたりの腫瘍転移巣の数を示す(各群、ｎ＝６)。（Ｃ）はＴＳ４５によるメラノーマ細胞の肺転移への阻害効果の用量作用曲線を示す図である。縦軸は、１つの肺あたりの腫瘍転移巣の数を示す（各群、ｎ＝４）。コントロールとして溶媒のみを投与した群（ｖｅｈｉｃｌｅ）、およびＴＳ４５を投与した群（ＴＳ４５；０．２ｍｇ、０．６ｍｇ、２ｍｇ／マウス）の結果を示す（それぞれ、静脈内投与／ｉｖ計４回）。（Ｄ）は上記実験において、各マウス個体の体重変化を計測した結果を示す図である（各群、ｎ＝４）。

ピリジノン化合物またはその塩
本発明に係るピリジノン化合物は、下記一般式（１）にて表される。

式（１）中のＲ^１およびＲ^２は、同一または異なって、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、またはＣ_２−６アルケニル基を示す。あるいは、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合する窒素原子と共に、ヘテロ原子を介してまたは介することなく、互いに結合して飽和の５〜８員単環を形成してもよい。

式（１）中の硫黄原子には、ピリジノン基および２つの「＝Ｏ基」の他に窒素原子が結合するが、斯かる窒素原子は、例えば、ｎープロピルアミン、ジエチレンアミン、またはジアリルアミンを構成していることが好ましい。

前記飽和の５〜８員単環は特に限定はされない。このような単環としては、例えば、ピロリジン環、ピラゾリジン環、イミダゾリジン環、（イソ）チアゾリジン環、（イソ）オキサゾリジン環、ピペリジン環、ピペラジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、アゼパン環、チオアゼパン環、オキサゼパン環などが挙げられる。これらの中でも５員単環が好ましく、ピロリジン環およびアゼパン環がより好ましい。

式（１）中のＲ^３は、下記式（２）〜（６）で示されるいずれかの基である。

これらの基の中でも、式（２）または式（３）で示される基が好ましく、更に好ましくは式（３）で表される基である。

式（２）で示される基において、ｎは０または１を示す。好ましくは、ｎは１である。

式（２）で示される基において、Ｒ^４はＣ_１−６アルキル基、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルコキシ基、または水酸基を示す。好ましくは、Ｒ^４がハロゲン原子である。

式（２）で示される基において、Ｒ^４は、ベンゼン環に結合しているー（ＣＨ_２）_ｎーに対して、オルト位、メタ位、またはパラ位の何れの位置に存在していてもよく、好ましくはパラ位である。

式（３）中のＲ^５は、水素原子、フェニル基、またはナフチル基を示す。これらの中でも、Ｒ^５は、フェニル基が好ましい。

式（３）中のＲ^５は、ベンゼン環に結合しているカルボニル基に対して、オルト位、メタ位、またはパラ位の何れの位置に存在していてもよく、好ましくはパラ位である。

式（３）で示される基においてＲ^５がフェニル基である場合、当該フェニル基上には、置換基として、ハロゲン原子、Ｃ_１−６アルキル基、トリハロＣ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、トリハロＣ_１−６アルコキシ基、フェニル基、ビフェニル基、アリールＣ_１−6アルキル基、ナフチル基、ニトロ基、およびシアノ基からなる群から選ばれた基の、少なくとも１個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個を有していてもよい。これらの置換基の中でも、ハロゲン原子および／またはトリハロＣ_１−６アルキル基であることが好ましい。

前記フェニル基上の上記置換基は、ベンゼン環に結合しているカルボニル基に対して、オルト位、メタ位、またはパラ位の何れの位置に存在していてもよく特に限定はされない。中でもメタ位および／またはパラ位であることが好ましい。

前記フェニル基上に置換されるナフチル基は、１−ナフチル基であっても２ーナフチル基であってもよい。

中でも式（３）で示される基において、Ｒ^５が上記パラ位に置換されるフェニル基であって、当該ナフチル基が当該フェニル基のパラ位に置換される場合、前記フェニル基上に置換されるナフチル基は、１−ナフチル基であることが好ましい。

前記フェニル基上に置換されるビフェニル基は特に限定はされない。例えば、３−ビフェニル基、４−ビフェニル基などが挙げられる。

式（５）および（６）で表される基には、置換基として、Ｃ_１−６アルキル基が少なくとも１個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個を有していてもよい。当該Ｃ_１−６アルキル基が置換するのは、式（５）または式（６）で示される基中の炭素原子に結合する水素原子であっても窒素原子に結合する水素原子であってもよく、特に限定はされない。

本明細書において示される各基は、より具体的にはそれぞれ次の通りである。

Ｃ_１−６アルキル基としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル基などの炭素数_１〜６の直鎖または分岐鎖状アルキル基を挙げることができる。

Ｃ_２−６アルケニル基としては、例えば、ビニル、アリル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−メチルアリル、２−ペンテニル、２−ヘキセニル基などの炭素数２〜６の直鎖または分岐鎖状アルケニル基を挙げることができる。

ハロゲン原子としては、例えば弗素原子、塩素原子、臭素原子および沃素原子が挙げられる。

Ｃ_１−６アルコキシ基としては、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ基などの炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖状アルコキシ基を例示できる。

トリハロＣ_１−６アルキル基としては、例えばトリフルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、３，３，３−トリフルオロプロピル、４，４，４−トリクロロブチル基などの置換基としてハロゲン原子を３個有する炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖状アルキル基を例示できる。

トリハロＣ_１−６アルコキシ基としては、例えば、トリフルオロメトキシ、トリクロロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ、２，２，２−トリクロロエトキシ、３，３，３−トリフルオロプロポキシ、４，４，４−トリクロロブトキシ基などの置換基としてハロゲン原子を３個有する炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖状アルコキシ基を例示できる。

アリールＣ_１−６アルキル基としては、例えばベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチル、５−フェニルペンチル、６−フェニルヘキシル、１，１−ジメチル−２−フェニルエチル、２−メチル−３−フェニルプロピル、ジフェニルメチル、２，２−ジフェニルエチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチル基などのアルキル部分が炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖状アルキル基であり、フェニル基、ナフチル基などのアリール基を１〜２個有するアルキル基を挙げることができる。

上述する本発明に係る式（１）で表されるピリジノン化合物の中でも、
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン〔Ｔ−０７０４４４〕、
1-(2-オキソ-2-(4'-(トリフルオロメチル)-[1,1'-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン〔ＴＳ−１６〕、
1-(2-(4-(ナフタレン-2-イル)フェニル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン〔ＴＳー２８〕、
1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン〔ＴＳ−４５〕、
または1-(2-(3’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン〔ＴＳ−５１〕
などが好適な態様として挙げられる。

上述のピリジノン化合物の塩とは、特に限定はされず、以下に示すような塩の形態をとり得る。

例えば、上述のピリジノン化合物の中でも、酸性基を有する化合物は、塩基性化合物と容易に塩を形成し得る。斯かる塩基性化合物としては、例えば、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化リチウムなどの金属水酸化物、炭酸水素ナトリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、ナトリウムメチラート、カリウムエチラートなどのアルカリ金属アルコラートなどを例示できる。

また、上述のピリジノン化合物の中でも、塩基性基を有する化合物は、容易に塩を形成し得る。斯かる酸としては、例えば、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸などの無機酸、酢酸、メタンスルホン酸、シユウ酸、マレイン酸、フマル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、コハク酸、安息香酸などの有機酸などを例示できる。

これらの塩は遊離形態のピリジノン化合物と同様に用いることができる。

なお、上記のピリジノン化合物には、立体異性体、光学異性体などの異性体が含まれるが、これらの異性体も本発明のピリジノン化合物として包含される。
製造方法
上述の化学式（１）で表されるピリジノン化合物またはその塩の製造方法は、特に限定はされない。ピリジノン化合物の製造方法の一例を挙げると、例えば下記式（７）

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、前記に同じ。]
で表される化合物と、下記式（８）

［式中、ＸおよびＲ^３は、前記に同じ。］
で表される化合物とを、還元剤の存在下で反応させることにより、本発明に係るピリジノン化合物を製造できる。

上記反応の条件などは適宜設定でき、例えば後述の実施例に示す製造例５８などの反応条件を適用することができる。

式（７）および式（８）で表される化合物は、公知の化合物であるが、または入手可能な公知の化合物から容易に製造できる。

また、本発明に係るピリジノン化合物の中でも、式（１）で示されるＲ^３が式（３）〜（６）のいずれかに示される基である場合のピリジノン化合物は、下記実施例に示す製造例１に記載の方法をそのまま、または適宜改変することによっても、製造される。

上述の方法により生成する本発明のピリジノン化合物は、公知の単離および／または精製手段を適用することで、反応混合物から単離、精製される。かかる分離、精製手段としては、例えば、蒸留法、再結晶法、溶媒抽出法、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、親和クロマトグラフィー、プレパラティブ薄層クロマトグラフィーなどを挙げることができる。

ＤＯＣＫ１選択的阻害剤
本発明に係るＤＯＣＫ１選択的阻害剤は、上述の本発明に係るピリジノン化合物またはその塩を含む。

ＤＯＣＫ１を阻害するとは、ＤＯＣＫ１の活性を阻害することであり、斯かる活性については特に限定はされない。このような活性としては、例えば、Ｒａｃ−ＧＤＰからＲａｃＧＴＰへの変換活性（ＧＥＦ活性）を阻害する活性が挙げられる。ＧＥＦ活性は、下記の実施例にて示す方法、またはこれに準ずる公知の方法を用いることで、容易に確認することができる。

ここで、選択的とはＤＯＣＫ１のみを阻害することには限定はされず、ＤＯＣＫ−Ａサブファミリーを構成するＤＯＣＫ２の活性およびＤＯＣＫ５の活性よりもＤＯＣＫ１の活性をより顕著に阻害する範囲に限り、ＤＯＣＫ１と同様にＤＯＣＫ５および／またはＤＯＣＫ２の上述した活性を阻害していてもよい。

本発明に係るＤＯＣＫ１選択的阻害剤は、上述の本発明に係るピリジノン化合物またはその塩のそのものとしてもよいが、当該分野にて通常に用いられる添加剤などの他の成分が含まれていてもよい。具体的な添加剤およびＤＯＣＫ１選択的阻害剤中の含有割合は、特に限定されることは無い。例えば、後述の医薬組成物に示す添加剤および含有割合を参考に適宜選択することができる。

本発明に係るＤＯＣＫ１選択的阻害剤は、後述する本発明に係る被験物質の中からＤＯＣＫ１選択的阻害剤をスクリーニングする方法によって得ることができる。
医薬組成物
本発明に係る医薬組成物は、上述の本発明に係るピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。

薬学的に許容される塩は、上記のピリジノン化合物またはその塩にて詳述したものを参考に、適宜選択することができる。

本発明に係る医薬組成物は、上述の本発明に係るピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩だけからなるものであってもよいし、または、任意の担体や添加剤と組み合わせて、公知の方法で投与経路、投与方法などの所望の用途に適した形態に調製した医薬組成物であってもよい。

具体的な剤形として、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）などが挙げられる。

本発明に係る医薬組成物中に配合される上述の本発明に係るピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩の量は、特に限定はされないが、例えば医薬組成物１００重量％中、０.００１重量％〜９９重量％以下程度、好ましくは０．０１重量％〜５０重量％程度、より好ましくは０．０５重量％〜１０重量％程度の範囲で適宜調製することができる。

本発明に係る医薬組成物の治療対象となる疾患は特に限定はされない。疾患としては、たとえば癌が挙げられる。また、後述する実施例によると、本発明に係るピリジノン化合物は癌細胞の浸潤を抑制する効果を発揮するので、癌の中でも転移性癌であることが好ましい。

また、後述する実施例では癌細胞によるマクロピノサイトーシスを本発明のピリジノン化合物が抑制する効果も確認されている。したがって、本発明に係る医薬組成物は、癌の中でもマクロピノサイトーシス現象が見られるタイプの癌に対して用いられることが好ましい。

本発明に係る医薬組成物の投与対象は、上述する疾患に罹患した患者であっても、罹患する可能性があるヒトであってもよい。

本発明に係る医薬組成物の投与量は、上述の本発明に係るピリジノン化合物またはその薬学的に許容される塩に換算して、１日当たり通常は５ｍｇ〜５００ｍｇ程度、好ましくは５ｍｇ〜２５０ｍｇ程度、より好ましくは５ｍｇ〜１００ｍｇ程度、さらに好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇ程度である。

本発明に係る医薬組成物は、上記のＤＯＣＫ１選択的阻害剤を含むものとすることもできる。このような医薬組成物における、ＤＯＣＫ１選択的阻害剤の含有量、治療対象となる疾患、剤形、投与対象、投与量などは、上記の通りとすることができる。

スクリーニング方法
本発明に係るスクリーニング方法は、被験物質の中からＤＯＣＫ１選択的阻害剤をスクリーニングする方法であり、下記の工程１および工程２を含む。
１被験物質を細胞に添加する工程１、
２工程１にて添加した細胞内のＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害する物質を、被験物質の中から選択する工程２。

被験物質とは、特に限定はされない。例えば、ケミカルライブラリー、ハイブリドーマが産生する抗体ライブラリー、種々の天然由来の抽出物、またはこれらを組み合わせた組成物を挙げることができる。

なお、工程１における細胞は特に限定はされない。例えば、細胞として、浸潤性を有する細胞とすることができる。このとき、工程２におけるＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することを、被験物質を添加した細胞の浸潤性を阻害することとすることができる。上記の浸潤性を有する細胞には、例えば、癌細胞株などが包含される。

また、工程１における細胞として、例えば、非免疫細胞とすることもできる。このとき、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することを、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のペリフェラルラッフルの形成には影響せず、且つドーサルラッフルの形成を抑制することとすることができる。上記の非免疫細胞には、例えば、上皮細胞などが包含される。

ペリフェラルラッフルの形成には影響せずとは、被験物質の添加前後において、当該細胞におけるラッフルの形成の程度が同じであるという意味には解釈されないのは言うまでもない。

逆に、工程１における細胞として、例えば、免疫細胞とすることもできる。このとき、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することを、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のＤＯＣＫファミリーに属するＤＯＣＫ１以外のタンパク質による遊走応答には影響しないこととすることができる。上記の免疫細胞には、例えば、リンパ球などが包含される。

ＤＯＣＫファミリーに属するＤＯＣＫ１以外のタンパク質とは、特に限定はされないが、例えば、ＤＯＣＫ−Ａサブファミリーに属するタンパク質、ＤＯＣＫ−Ｂサブファミリーに属するタンパク質、ＤＯＣＫ−Ｃサブファミリーに属するタンパク質、ＤＯＣＫ−Ｄサブファミリーに属するタンパク質などを挙げることができる。

これらの中でも、ＤＯＣＫ−Ａサブファミリーに属するタンパク質である、ＤＯＣＫ２および／またはＤＯＣＫ５が好ましく、ＤＯＣＫ２はより好ましい。

なお、工程１の細胞の種類には関係なく、工程２において、ＤＯＣＫ１の機能を選択的に阻害することを、被験物質を添加した細胞内におけるＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を選択的に阻害することとすることができる。

これらのスクリーニング方法は、下記の実施例にて示す方法、またはこれに準ずる公知の方法を用いることで、容易に実施することができる。

以下に、本発明に係るピリジノン化合物の製造例およびこれによる試験例を挙げて、本発明を一層明らかにする。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。

まず、図１〜７に示す化学式を有するピリジノン化合物を作製した。これらのピリジノン化合物の化学式名は以下のとおりである。
T070444 1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-01 1-(2-(1-benzyl-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-02 1-(2-(2,5-dimethyl-1-(4-methylbenzyl)-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-03 1-(2-(1-(4-chlorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-04 1-(2-(1-(4-bromobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-05 1-(2-(1-(4-methoxybenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-06 1-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-phenylethanone
NT-07 1-(2-(1-benzyl-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)pyridin-2(1H)-one
NT-08 1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(piperidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-09 5-(azepan-1-ylsulfonyl)-1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)pyridin-2(1H)-one
NT-10 1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(thiomorpholinosulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-11 1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(morpholinosulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-12 N,N-diethyl-1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-6-oxo-1,6-dihydropyridine-3-sulfonamide
NT-13 1-(2-(1-(4-hydroxybenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
NT-15 1-(2-oxo-2-phenylethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-01 1-(2-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-02 1-(2-(1,2-dimethyl-1H-indol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-03 1-(2-oxo-2-(1,2,5-trimethyl-1H-pyrrol-3-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-07 1-(2-(1-(4-fluorophenyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-08 1-(2-(1-(4-methoxyphenyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-09 1-(2-([1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-10 N,N-diallyl-1-(2-(1-(4-fluorobenzyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-oxoethyl)-6-oxo-1,6-dihydropyridine-3-sulfonamide
TS-11 1-(2-(2',6'-dimethyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-12 1-(2-(2'-methyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-13 1-(2-([1,1'-biphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-14 1-(2-(2'-methyl-[1,1'-biphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-15 1-(2-(2',6'-dimethyl-[1,1'-biphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-16 1-(2-oxo-2-(4'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-17 1-(2-(4'-methoxy-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-18 1-(2-oxo-2-(4'-(trifluoromethoxy)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-19 1-(2-(4'-nitro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-20 4'-(2-(2-oxo-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-1(2H)-yl)acetyl)-[1,1'-biphenyl]-4-carbonitrile
TS-21 1-(2-(9,10-dihydrophenanthren-2-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-22 1-(2-([1,1':4',1''-terphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-23 1-(2-(4'-(dimethylamino)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-24 1-(2-(4'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-25 1-(2-(4'-(tert-butyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-26 1-(2-(4'-methyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-27 1-(2-(4'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-28 1-(2-(4-(naphthalen-2-yl)phenyl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-29 1-(2-(4-(naphthalen-1-yl)phenyl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-30 1-(2-([1,1':4',1''-terphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-31 1-(2-([1,1':4',1'':4'',1'''-quaterphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-32 1-(2-([1,1':4',1'':4'',1'''-quaterphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-34 1-(2-([1,1':3',1''-terphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-35 1-(2-([1,1':3',1''-terphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-36 1-(2-oxo-2-(5'-phenyl-[1,1':3',1''-terphenyl]-4-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-37 1-(2-oxo-2-(5'-phenyl-[1,1':3',1''-terphenyl]-3-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-38 1-(2-(4'-(naphthalen-2-yl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-39 1-(2-(4'-(naphthalen-1-yl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-40 1-(2-(4'-benzyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-41 1-(2-(4'-(naphthalen-1-yl)-[1,1'-biphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-42 1-(2-(4'-(naphthalen-2-yl)-[1,1'-biphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-43 1-(2-(4'-benzyl-[1,1'-biphenyl]-3-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-44 1-(2-oxo-2-(2'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-45 1-(2-oxo-2-(3'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-46 1-(2-(2'-methoxy-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-47 1-(2-(3'-methoxy-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-48 1-(2-(2'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-49 1-(2-(3'-fluoro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-50 1-(2-(2'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-51 1-(2-(3'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-52 1-(2-(4'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-53 1-(2-(4'-chloro-2'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-54 1-(2-(4'-chloro-3'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-55 1-(2-(4-(4-chlorophenyl)piperazin-1-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-56 1-(2-(4'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-6-oxo-N-propyl-1,6-dihydropyridine-3-sulfonamide
TS-57 1-(2-(3',5'-bis(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-58 1-(2-(4'-chloro-2'-methyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-59 1-(2-(4'-methoxy-2'-methyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-60 1-(2-(2'-chloro-4'-methoxy-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
TS-61 5-(azepan-1-ylsulfonyl)-1-(2-oxo-2-(3'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)pyridin-2(1H)-one
TS-62 5-(azepan-1-ylsulfonyl)-1-(2-oxo-2-(4'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)pyridin-2(1H)-one
TS-63 5-(azepan-1-ylsulfonyl)-1-(2-(4'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)pyridin-2(1H)-one
TS-64 5-(azepan-1-ylsulfonyl)-1-(2-(4'-chloro-2'-methyl-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)pyridin-2(1H)-one
TS-65 N,N-diethyl-6-oxo-1-(2-oxo-2-(3'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)-1,6-dihydropyridine-3-sulfonamide
TS-66 N,N-diethyl-6-oxo-1-(2-oxo-2-(4'-(trifluoromethyl)-[1,1'-biphenyl]-4-yl)ethyl)-1,6-dihydropyridine-3-sulfonamide
TS-67 1-(2-(4'-chloro-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-N,N-diethyl-6-oxo-1,6-dihydropyridine-3-sulfonamide
TS-68 1-(2-(2'-chloro-4'-methoxy-[1,1'-biphenyl]-4-yl)-2-oxoethyl)-5-(pyrrolidin-1-ylsulfonyl)pyridin-2(1H)-one
上記ピリジノン化合物の製造例を以下に示す。残りの化合物は、製造例２〜７４に従って製造した。

製造例１
1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-45)の製造

（１）1-(2-(4-ブロモフェニル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物ＩＩ)の合成
5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物Ｉ：2.28g、10mmol)を100ｍＬのテトラヒドロフラン（THF）に溶解させ、水素化ナトリウム(純度60%、11mmol)を室温にて加えた後、60℃にて60分撹拌した。この混合物に対して、2,4’-ジブロモアセトフェノンのTHF溶液(50ｍＬ、12mmol)を添加し、60℃にて90分撹拌した。反応液を室温まで冷却後、水を注意深く入れて反応を停止し、得られた生成物をCH₂Cl₂で抽出した。次いで回収した有機相を、水および塩水で順次洗浄した。MgSO₄を用いて有機相を脱水し、溶媒を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CH₂Cl₂/酢酸エチル=1:1)で精製し、標記化合物ＩＩを淡黄色の固形物として得た(4.13g、収率97%)。得られた化合物ＩＩの理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, Acetone-d₆) δ 8.27 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.03‐8.06 (m, 2H), 7.80‐7.82 (m, 2H), 7.77 (dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.69 (s, 2H), 3.22‐3.27(m, 4H), 1.82‐1.87(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, Acetone-d₆) δ 197.4, 166.9, 149.0, 143.1, 139.9, 138.1, 135.8, 134.3, 125.6, 121.4 , 60.7, 53.9, 31.0。

（２）1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-45)の製造
（１）で製造した化合物ＩＩ(1.00g、2.35mmol)、酢酸パラジウム(52.8mg、0.235mmol)、および1,1’-ビス（ジフェニルホスフィノフェロセン）(dppf、130mg、0.235mmol)をトルエン(23.5ｍＬ)に溶解させた。混合物を100℃で５分間撹拌した後、脱気した蒸留水(2.35ｍＬ)に溶かしたK₃PO₄(2.00mg、9.40mmol)を添加した。反応混合物を100℃で５分間撹拌した後、[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸(892mg、4.70mmol)を添加し、100℃で8時間撹拌した。その後、生成物をCH₂Cl₂で２回抽出した。回収した有機相を、水と塩水で洗浄し、MgSO₄を用いて脱水した。溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CH₂Cl₂/酢酸エチル=5:1)で精製し、標記化合物TS-45を黄色ワックス状の固形物として製造した(953mg、収率83%)。得られた化合物TS-45の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.09‐8.14 (m, 2H), 7.93(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.88(s, 1H), 7.82(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.74‐7.79(m, 2H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 7.62(dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 6.66(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.29‐3.34(m, 4H), 1.88‐1.94(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.1, 161.6, 145.5, 142.2, 140.4, 137.0, 133.7, 131.6(q, J = 32.4 Hz), 130.7, 129.7, 129.0, 127.8, 125.3(q, J = 3.6 Hz) 124.2 (q, J = 3.6 Hz), 124.1(q, J = 272.3 Hz), 120.7, 116.4, 54.4, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₁F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 513.1072 found 513.1078。

製造例２
1-(2-(3’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-51)の製造
化合物ＩＩと(3-クロロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率71％で淡茶油状の化合物TS-51を製造した。得られた化合物TS-51の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.09(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.92(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.73(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.68(dd, J = 9.8, 2.0 Hz, 1H), 7.63(d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.50‐7.56(m, 1H), 7.38‐7.46(m, 2H), 6.66(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.25(m, 4H), 1.85‐2.00(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 91.0, 161.6, 145.9, 142.1, 141.4, 137.1, 135.2, 133.6, 130.5, 129.0, 128.8, 127.9, 127.6, 125.6, 120.8, 116.6, 54.3, 48.3, 25.6；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₁ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 479.0808. found 479.0814。

製造例３
1-(2-(4-(ナフタレン-2-イル)フェニル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-28)の製造
化合物ＩＩと(ナフタレン-2-イル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率69％で黄色ワックス状の化合物TS-28を製造した。得られた化合物TS-28の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.13(s, 1H), 8.12(s, 2H), 7.84‐8.00(m, 6H), 7.77(d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.6, 1.9 Hz, 1H), 7.50‐7.58(m, 2H), 6.66(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.49(s, 2H), 3.26‐3.36(m, 4H), 1.86‐1.96(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃, CDCl₃) δ 191.3, 161.8, 147.5, 142.4, 137.3, 137.1, 133.9, 133.6, 133.3, 129.3, 129.2, 128.8, 128.3, 128.1, 127.1, 127.1, 127.0, 125.4, 121.0, 116.8, 54.6, 48.5, 25.8;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₇H₂₄N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 495.1354. found 495.1339。

製造例４
1-(2-(4’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-27)の製造
化合物ＩＩと(4-クロロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率71％で無色固体の化合物TS-27を製造した。得られた化合物TS-27の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.08(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.92(1H, d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.72(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 1H), 7.58(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.47(d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.66(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.25‐3.36(m, 4H), 1.85‐1.96(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.0, 161.6, 146.1, 142.1, 138.0, 137.0, 135.1, 133.3, 129.4, 129.0, 128.7, 127.7, 120.8, 116.6, 54.3, 48.3, 25.6;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₁ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 479.0808 found 479.0911。

製造例５
1-(2-オキソ-2-(2’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-44)の製造
化合物ＩＩと[2-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率99％で無色固体の化合物TS-44を製造した。得られた化合物TS-44の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.04‐8.08(m, 2H), 7.93(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.79(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 7.61(dd, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48‐7.56(m, 3H), 7.33(d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.66(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.48(s, 2H), 3.27‐3.34(m, 4H), 1.86‐1.95(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.2, 161.6, 164.3, 142.1, 139.8(q, J = 1.8 Hz), 137.1, 133.6, 131.7, 131.6, 130.0(q, J = 1.6 Hz), 128.5(q, J = 30.4 Hz), 128.4, 127.9, 126.5(q, J = 5.2 Hz), 124.1(q, J = 273.7 Hz), 120.8, 116.6, 54.4, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₁F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 513.1072 found 513.1049。

製造例６
1-(2-(2’-メチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル) 2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-12)の製造
化合物ＩＩと(2-メチルフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率32％で無色油状の化合物TS-12を製造した。得られた化合物TS-12の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, Acetone-d₆) δ 8.32(d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.19‐8.20(m, 2H), 7.79(dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 7.59‐7.60(m, 2H), 7.20‐7.35(m, 4H), 6.57(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.75(s, 2H), 3.20‐3.30(m, 4H), 2.28(s, 3H), 1.80‐1.89(m, 4H)；
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 191.1, 161.6, 148.7, 142.2, 140.5, 137.0, 135.3, 132.8, 130.8, 130.1, 129.6, 128.3, 128.2, 126.2, 120.8, 116.5, 54.3, 48.3, 25.6, 20.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₄N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 459.1354 found 459.1367。

製造例７
1-(2-(2’, 6’-ジメチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-11)の製造
化合物ＩＩと(2,6-ジメチルフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率32％で無色固体の化合物TS-11を製造した。得られた化合物TS-11の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.09(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.94(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 7.34(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18‐7.23(m, 1H), 7.13(d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.66(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.49(s, 2H), 3.26‐3.37(4H, m), 2.02(6H, s), 1.86‐1.96(4H, m)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃): δ191.2, 161.6, 148.2, 142.2, 140.4, 137.0, 135.6, 132.9, 130.1, 128.6, 127.9, 127.7, 120.8, 116.5, 54.4, 48.2, 25.5, 20.9；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 473.1511 found 473.1501。

製造例８
1-(2-( [1,1’-ビフェニル]-3-イル) 2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-13)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体とフェニルボロン酸とを反応させることで、収率14％で淡黄色油状の化合物TS-13を製造した。得られた化合物TS-13の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.21(t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.98(ddd, J = 7.8, 1.7, 1.1 Hz, 1H), 7.92(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.89(ddd, J = 7.8, 1.7, 1.1 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 7.59‐7.64(m, 3H), 7.46‐7.52(m, 2H), 7.39‐7.44(m, 1H), 6.66(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.49(s, 2H), 3.28‐3.33(m, 4H), 1.89‐1.94(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, , CDCl₃) δ191.8, 161.9, 142.8, 142.4, 140.1, 137.3, 135.2, 133.6, 130.0, 129.5, 128.5, 127.6, 127.3, 127.3, 121.1, 116.8, 54.7, 48.5, 25.8;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₂N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 445.1198 found 445.1196。

製造例９
1-(2-(2’-メチル- [1,1’-ビフェニル]-3-イル) 2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-14)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と(2-メチルフェニル)ボロン酸とを反応させることで、収率13％で淡黄色油状の化合物TS-14を製造した。得られた化合物TS-14の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ7.98‐8.02(m, 1H), 7.94‐7.97(m, 1H), 7.90(d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 7.62‐7.65(m, 1H), 7.59(dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.25‐7.32(m, 3H), 7.23(d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.24‐3.34(m, 4H), 2.27(s, 3H), 1.88‐1.91(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.4, 161.6, 143.2, 142.1, 140.5, 137.0, 135.4, 134.4, 130.7, 129.8, 129.1, 129.0, 128.2, 126.7, 126.2, 120.8, 116.5, 54.4, 48.3, 25.5, 20.6;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₄N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 459.1354 found 459.1363。

製造例１０
1-(2-(2’,6’-ジメチル- [1,1’-ビフェニル]-3-イル) 2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-15)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と(2,6-ジメチルフェニル)ボロン酸とを反応させることで、収率23％で淡黄色固体の化合物TS-15を製造した。得られた化合物TS-15の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.00(d, J = 7.7 Hz、1H), 7.89(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.80‐7.82(m, 1H), 7.67(dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 7.62(dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.48(d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.19‐7.23(m, 1H), 7.14(d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.65(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.45(s, 2H), 3.28‐3.34(m, 4H), 2.03(s, 6H), 1.87‐1.91(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.3, 161.6, 142.4, 142.1, 140.3, 137.0, 136.0, 135.5, 134.7, 129.5, 128.9, 127.9, 127.7, 126.8, 120.8, 116.5, 54.4, 48.3, 25.5, 21.0;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 473.1511 found 473.1501。

製造例１１
1-(2-オキソ-2-(4’-トリフルオロメチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-16)の製造
化合物ＩＩと(4-(トリフルオロメチル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率71％で淡茶色固体の化合物TS-16を製造した。得られた化合物TS-16の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.11(d, J = 0.7 Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 7.95(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.72‐7.76(m, 6H), 7.66(ddd, J = 9.6, 2.5, 0.9 Hz, 1H), 6.63(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.48(s, 2H), 3.24‐3.35(m, 4H), 1.85‐1.94(m, 4H)；
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ191.1, 161.6, 145.6, 143.1, 142.2, 137.0, 133.8, 130.7(q, J = 33.2 Hz), 129.0, 128.0, 127.8, 126.1(q, J = 3.6 Hz), 124.2 (q, J = 276.2 Hz), 120.7, 116.5, 54.4, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₁F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 513.1072 found 513.1071。

製造例１２
1-(2-(4’-メトキシ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-17)の製造
化合物ＩＩと(4-メトキシフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率63％で淡茶色固体の化合物TS-17を製造した。得られた化合物TS-17の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.02‐8.08(m, 2H), 7.92(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.69‐7.73(m, 2H), 7.67(dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.57‐7.63(m, 2H), 6.96‐7.04(m, 2H), 6.65(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.88(s, 3H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.82‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 190.9, 161.6, 160.4, 146.9, 142.2, 137.0, 132.4, 131.9, 128.9, 128.6, 127.1, 120.8, 116.4, 114.7, 55.6, 54.2, 48.3, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₄N₂NaO₅S⁺[M+Na⁺] 475.1304 found 475.1288。

製造例１３
1-(2-オキソ-2-(4’-トリフルオロメトキシ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-18)の製造
化合物ＩＩおよび(4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)ボロン酸を用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率35％で無色固体の化合物TS-18を製造した。得られた化合物TS-18の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.08(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.94(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.60‐7.75(m, 5H), 7.34(d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.63(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.23‐3.37(m, 4H), 1.84‐1.96(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.3, 161.8, 150.0 (q, J = 1.8 Hz), 146.0, 142.5, 138.5, 137.2, 133.7, 129.3, 129.2, 128.0, 121.8, 121.0, 120.8 (q, J = 257.7 Hz), 116.7, 54.6, 48.5, 25.8；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₁F₃N₂NaO₅S⁺[M+Na⁺] 529.1021 found 529.1014。

製造例１４
1-(2-(4’-ニトロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-19)の製造
化合物ＩＩと(4-ニトロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率31％で淡茶色固体の化合物TS-19を製造した。得られた化合物TS-19の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.36(d, J = 8.6 Hz, 2H), 8.14(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.93(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.75‐7.85(m, 4H), 7.69(dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 6.67(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.24‐3.40(m, 4H), 1.87‐2.00(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 148.1, 145.9, 144.7, 142.0, 137.1, 134.4, 129.2, 128.4, 128.2, 124.5, 120.9, 116.8, 54.4, 48.3, 25.6；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₁N₃NaO₆S⁺[M+Na⁺] 490.1049 found 490.1035。

製造例１５
1-(2-オキソ-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-イル)アセチル-[1,1’-ビフェニル]-4-カルボニトリル(化合物TS-20)の製造
化合物ＩＩと(4-シアノフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率60％で淡黄色固体の化合物TS-20を製造した。得られた化合物TS-20の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.11‐8.16(m, 2H), 7.93(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.73‐7.82(m, 6H), 7.69(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 6.66(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.26‐3.37(m, 4H), 1.87‐1.97(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.2, 161.8, 145.4, 144.2, 142.3, 137.3, 134.4, 133.3, 129.4, 128.4, 128.3, 121.1, 118.9, 117.0, 112.7, 54.6, 48.5, 25.8；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₁N₃NaO₄S⁺[M+Na⁺] 470.1150 found 470.1145。

製造例１６
1-(2-(9,10-ジヒドロフェナンスレン-2-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-21)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-(9,10-ジヒドロフェナンスレン-2-イル)エタノンとを用いて、製造例１の（１）の方法と同様にして収率34％で無色ワックス状の化合物TS-21を製造した。得られた化合物TS-21の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.90‐7.97(m, 2H), 7.85‐7.89(m, 2H), 7.78‐7.83(m, 1H), 7.67(dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.26‐7.39(m, 3H), 6.64(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.26‐3.35(m, 4H), 2.89‐2.99(m, 4H), 1.87‐1.94(m, 4H);
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 142.3, 140.8, 138.3, 138.2, 137.0, 133.2, 132.9, 129.2, 128.6, 128.1, 127.4, 127.2, 124.7, 124.3, 120.7, 116.4, 54.2, 48.2, 29.0, 28.8, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₄N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 471.1354 found 471.1335。

製造例１７
1-(2-( [1,1’:4’,1’’-ターフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-22)の製造
化合物ＩＩと[1,1’-ビフェニル]-4-イルボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率36％で無色ワックス状の化合物TS-22を製造した。得られた化合物TS-22の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.09 (d, J = 8.3 Hz、2H), 7.94(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.80(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.73(s, 4H), 7.60‐7.70(m, 3H), 7.48(dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 2H), 7.39(dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.22‐3.37(m, 4H), 1.83‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.0, 161.6, 146.7, 142.2, 141.6, 140.4, 138.3, 137.0, 137.0, 133.1, 129.1, 129.0, 127.9, 128.2, 127.6, 127.2, 120.7, 116.4, 54.3, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₉H₂₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 521.1511 found 521.1502。

製造例１８
1-(2-(4’-(ジメチルアミノ)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-23)の製造
化合物ＩＩと(4-(ジメチルアミノ)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率73％で淡黄緑色固体の化合物TS-23を製造した。得られた化合物TS-23の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.01(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.92(d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.70(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.66(dd, J = 9.5, 2.3 Hz, 1H), 7.58(d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.81(d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.63(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.44(s, 2H), 3.25‐3.34(m, 4H), 3.04(s, 6H), 1.87‐1.92(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.9, 151.2, 147.5, 142.6, 137.2, 131.9, 129.2, 128.4, 127.0, 126.5, 120.9, 116.5, 112.9, 54.4, 48.5, 40.7, 25.8；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₇N₃NaO₄S⁺[M+Na⁺] 488.1620 found 488.1633。

製造例１９
1-(2-(4’-フルオロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-24)の製造
化合物ＩＩと(4-フルオロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率70％で淡茶色固体の化合物TS-24を製造した。得られた化合物TS-24の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.08(d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.92(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.71(d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.61(dd, J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.18(dd, J = 8.6, 8.6 Hz, 2H), 6.65(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.86‐1.96(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.2, 163.6(d, J = 249.0 Hz), 161.9, 146.6, 142.4, 137.3, 136.0(d, J = 3.0 Hz), 133.3, 129.4(d, J = 8.4 Hz), 129.2, 127.9, 121.0, 116.8, 116.5(d, J = 21.5 Hz), 54.5, 48.5, 25.8；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₁N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 463.1104. found 463.1093。

製造例２０
1-(2-(4’-(ターシャリーブチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-25)の製造
化合物ＩＩと(4-(ターシャリーブチル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率84％で淡茶色固体の化合物TS-25を製造した。得られた化合物TS-25の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ8.04‐8.09(m, 2H), 7.92(d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.72‐7.78(m, 2H), 7.68(dd, J = 9.5, 2.7 Hz, 1H), 7.57‐7.63(m, 2H), 7.49‐7.55(m, 2H), 6.65(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.26‐3.36(m, 4H), 1.86‐1.91(m, 4H), 1.38(s, 9H);
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ191.0, 161.6, 152.1, 147.2, 142.2, 137.0, 136.6, 132.8, 128.9, 127.5, 127.1, 126.2, 120.8, 116.4, 54.3, 48.2, 34.8, 31.4, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₇H₃₀N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 501.1824. found 501.1829。

製造例２１
1-(2-(4’-メチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-26)の製造
化合物ＩＩと(4-メチルフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率88％で淡茶色固体の化合物TS-26を製造した。得られた化合物TS-26の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.06(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.92(d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.74(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.67(dd, J = 9.8, 2.9 Hz, 1H), 7.55(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.30(d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.65(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.25‐3.40(m, 4H), 2.42(s, 3H), 1.85‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 147.3, 142.2, 138.9, 137.0, 136.6, 132.8, 129.9, 128.9, 127.5, 127.3, 120.8, 116.4, 54.3, 48.2, 25.5, 21.4；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₄N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 459.1354. found 459.1346。

製造例２２
1-(2-(4-(ナフタレン-1-イル)フェニル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-29)の製造
化合物ＩＩとナフタレン-1-イルボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率69％で無色ワックス状の化合物TS-29を製造した。得られた化合物TS-29の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, Acetone-d₆) δ 8.34(d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.28(d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.02(dd, J = 9.8, 9.8 Hz, 2H), 7.86(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.80(dd, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 7.74(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.51‐7.65(m, 4H), 6.58(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.80(s, 2H), 3.26‐3.34(m, 4H), 1.86‐1.94(4H, m);
¹³C NMR (125 MHz, Acetone-d₆) δ 192.8, 162.0, 147.4, 144.2, 139.8, 138.2, 135.0, 134.9, 132.1, 131.5, 129.5, 129.5, 129.2, 128.0, 127.6, 127.1, 126.5, 126.2, 120.6, 116.4, 55.9, 49.0, 26.0;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₇H₂₄N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 495.1354. found 495.1339。

製造例２３
1-(2-( [1,1’:4’,1’’-ターフェニル]-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-30)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と[1,1’-ビフェニル]-4-イルボロン酸とを反応させることで、収率80％で無色固体の化合物TS-30を製造した。得られた化合物TS-30の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.26(s, 1H), 7.99(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90‐7.96(m, 2H), 7.70‐7.73(m, 4H), 7.60‐7.69(m, 4H), 7.48(dd, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38(dd, J = 7.4 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.51(s, 2H), 3.26‐3.34(m, 4H), 1.85‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ191.6, 161.6, 142.2, 141.9, 141.1, 140.5, 138.6, 137.0, 135.0, 133.0, 129.7, 129.0, 127.9, 127.7, 127.7, 127.2, 127.1, 126.8, 120.7, 116.4, 54.5, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₉H₂₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 521.1511. found 521.1537。

製造例２４
1-(2-( [1,1’:4’,1’’:4’’,1’’’-クアターフェニル]-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-31)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンと用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と[1,1’:4’,1’’-ターフェニル]-4-イルボロン酸とを反応させることで、収率80％で淡茶色固体の化合物TS-31を製造した。得られた化合物TS-31の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.28(dd, J = 1.7, 1.7 Hz, 1H), 7.98‐8.03(m, 1H), 7.92‐7.97(m, 2H), 7.63 - 7.79(m, 12H), 7.45‐7.50(m, 2H), 7.36‐7.40(m, 1H), 6.67(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.50(s, 2H), 3.28‐3.36(m, 4H), 1.88 -1.96(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.3, 161.4, 141.9, 141.7, 140.5, 140.4, 139.1, 138.5, 136.8, 134.8, 132.9, 129.5, 128.8, 127.5, 127.4, 127.3, 127.3, 127.0, 127.0, 126.8, 126.6, 120.6, 116.3, 54.2, 48.0, 25.3;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₅H₃₀N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 597.1824. found 597.1846。

製造例２５
1-(2-( [1,1’:4’,1’’:4’’,1’’’-クアターフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-32)の製造
化合物ＩＩと[1,1’:4’,1’’-ターフェニル]-4-イルボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率33％で無色ワックス状の化合物TS-32を製造した。得られた化合物TS-32の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.11(d, J = 8.3 Hz、2H), 7.93(d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.82(d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.64‐7.80(m, 11H), 7.45‐7.50(m, 2H), 7.38(dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 6.67(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.48(s, 2H), 3.30‐3.37(m, 4H), 1.88‐1.98(4H, m)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 146.8, 142.2, 141.2, 140.8, 140.7, 139.3, 138.4, 137.0, 133.1, 129.0, 129.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.6, 127.2, 120.8, 116.5, 54.3, 48.3, 25.6。

製造例２６
1-(2-( [1,1’:3’,1’’-ターフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-34)の製造
化合物ＩＩと[1,1’-ビフェニル]-3-イルボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率95％で無色ワックス状の化合物TS-34を製造した。得られた化合物TS-34の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 8.10(d, J = 8.6 Hz、2H), 7.94(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.83‐7.85(m, 1H), 7.80(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.60‐7.70(m, 5H), 7.56(dd, J = 7.7, 7.7 Hz, 1H), 7.54‐7.59(m, 2H), 7.37‐7.42(m, 1H), 6.65(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.49(s, 2H), 3.28‐3.34(m, 4H), 1.86‐1.94(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ191.1, 161.6, 147.2, 142.3, 142.2, 140.9, 140.1, 137.0, 133.2, 129.6, 129.0, 128.9, 127.9, 127.8, 127.6, 127.4, 126.4, 126.3, 120.7, 116.4, 54.3, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₉H₂₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 521.1511. found 521.1499。

製造例２７
1-(2-( [1,1’:3’,1’’-ターフェニル]-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-35)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にし、て、化合物ＩＩのBr位置異性体と[1,1’-ビフェニル]-3-イルボロン酸とを反応させることで、収率97％で淡黄色油状の化合物TS-35を製造した。得られた化合物TS-35の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 8.26(s, 1H), 8.00(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.90‐7.97(m, 2H), 7.82(s, 1H), 7.52‐7.74(m, 7H), 7.48(dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 2H), 7.37(d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.50(s, 2H), 3.22‐3.36(m, 4H), 1.84‐1.95(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ191.5, 161.6, 142.4, 142.3, 142.2, 140.9, 140.4, 137.0, 135.0, 133.3, 129.7, 129.6, 129.0, 127.8, 127.4, 127.2, 127.1, 127.0, 126.3, 126.3, 120.8, 116.4, 54.5, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₉H₂₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 521.1511. found 521.1507。

製造例２８
1-(2-オキソ-2-(5’-フェニル- [1,1’:3’,1’’-ターフェニル]-4-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-36)の製造
化合物ＩＩと[1,1’:3’,1’’-ターフェニル]-5’-イルボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率80％で淡黄色ワックス状の化合物TS-36を製造した。得られた化合物TS-36の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ8.12(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.94(d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.84‐7.90(m, 3H), 7.82(s, 2H), 7.65‐7.74(m, 5H), 7.50(dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 4H), 7.42(dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 2H), 6.66(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.48(s, 2H), 3.26‐3.37(m, 4H), 1.86‐1.96(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ191.1, 161.6, 147.3,142.9, 142.2, 140.9, 140.7, 137.0, 133.3, 129.1, 129.0, 128.0, 128.0, 127.5, 126.6, 125.3, 120.8, 116.5, 54.3, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₅H₃₀N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 597.1824. found 597.1846。

製造例２９
1-(2-オキソ-2-(5’-フェニル- [1,1’:3’,1’’-ターフェニル]-3-イル)エチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-37)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と[1,1’:3’,1’’-ターフェニル]-5’-イルボロン酸とを反応させることで、収率95％で淡黄色油状の化合物TS-37を製造した。得られた化合物TS-37の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 8.31(s, 1H), 8.02(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.99(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.94(d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.83‐7.86(m, 1H), 7.78‐7.81(m, 2H), 7.69‐7.75(m, 4H), 7.62‐7.69(m, 2H), 7.50(dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 4H), 7.41(dd, J = 7.5, 7.5Hz, 2H), 6.65(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.51(s, 2H), 3.24‐3.36(m, 4H), 1.85‐1.96(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)δ191.5, 161.6, 142.8, 142.4, 142.2, 141.0, 140.9, 137.0, 135.0, 133.4, 129.7, 129.1, 127.9, 127.5, 127.3, 127.1, 126.1, 125.2, 120.8, 116.5, 54.5, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₅H₃₀N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 597.1824 found 597.1846。

製造例３０
1-(2-(4’-(ナフタレン-2-イル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-38)の製造
化合物ＩＩと(4-(ナフタレン-2-イル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率83％で淡茶色固体の化合物TS-38を製造した。得られた化合物TS-38の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, Acetone-d₆) δ 8.31(d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.28(s, 1H), 8.20‐8.24(m, 2H), 7.90‐8.06(m, 10H), 7.79(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.50‐7.58(m, 2H), 6.57(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.75(s, 2H), 3.22‐3.30(m, 4H), 1.80‐1.90(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, Acetone-d₆) δ192.6, 162.1, 146.7, 144.2, 141.9, 139.4, 138.5, 138.1, 134.9, 134.8, 134.0, 129.8, 129.7, 129.3, 128.8, 128.8, 128.6, 128.2, 127.5, 127.2, 126.6, 126.1, 120.7, 116.5, 55.8, 49.0, 26.1;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₃H₂₈N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 571.1667. found 571.1645。

製造例３１
1-(2-(4’-(ナフタレン-1-イル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-39)の製造
化合物ＩＩと(4-(ナフタレン-1-イル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法同様にして収率84％で無色固体の化合物TS-39を製造した。得られた化合物TS-39の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.10‐8.16(m, 2H), 7.84‐7.98(m, 6H), 7.76‐7.81(m, 2H), 7.69(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.62‐7.66(m, 2H), 7.44‐7.58(m, 4H), 6.66(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.49(s, 2H), 5.46(s, 2H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.85‐2.00(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.3, 191.3, 161.9, 147.2, 142.5, 142.4, 141.6, 139.8, 138.7, 137.3, 134.3, 133.4, 131.9, 131.2, 129.3, 128.8, 128.4, 128.0, 127.6, 127.4, 126.6, 126.3, 126.2, 125.8, 121.0, 116.8, 54.6, 48.5, 25.8；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₃H₂₈N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 571.1667. found 571.1645。

製造例３２
1-(2-(4’-ベンジル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-40)の製造
化合物ＩＩと(4-ベンジルフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率61％で無色固体の化合物TS-40を製造した。得られた化合物TS-40の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.04‐8.08(m, 2H), 7.92(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.71‐7.75(m, 2H), 7.67(dd, J = 9.7, 2.5 Hz, 1H), 7.55‐7.59(m, 2H), 7.28‐7.34(m, 4H), 7.18 -7.25(m, 3H), 6.65(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.45(s, 2H), 4.05(s, 2H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.85‐1.91(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 147.1, 142.2, 142.1, 140.8, 137.4, 137.0, 132.9, 129.8, 129.1, 128.9, 128.7, 127.6, 127.5, 126.4, 120.8, 116.5, 54.3, 48.2, 41.8, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₀H₂₈N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 535.1667. found 535.1656。

製造例３３
1-(2-(4’-(ナフタレン-1-イル)-[1,1’-ビフェニル]-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-41)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と(4-(ナフタレン-1-イル)フェニル)ボロン酸とを反応させることで、収率95％で無色ワックス状の化合物TS-41を製造した。得られた化合物TS-41の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.31‐8.33(s, 1H), 7.88‐8.02(m, 6H), 7.74‐7.78(m, 2H), 7.62‐7.71(m, 4H), 7.45‐7.58(m, 4H), 6.67(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.52(s, 2H), 3.30‐3.36(m, 4H), 1.88‐1.96(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.3, 161.4, 141.9, 141.9, 140.6, 139.4, 138.5, 136.8, 134.8, 133.8, 133.0, 131.4, 130.7, 129.5, 128.3, 127.8, 127.0, 127.0, 126.9, 126.7, 126.1, 125.8, 125.8, 125.3, 120.6, 116.4, 54.2, 48.0, 25.3；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₀H₂₈N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 535.1667. found 535.1645。

製造例３４
1-(2-(4’-(ナフタレン-2-イル)-[1,1’-ビフェニル]-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-42)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と(4-(ナフタレン-2-イル)フェニル)ボロン酸とを反応させることで、収率86％で淡茶色ワックス状の化合物TS-42を製造した。得られた化合物TS-42の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.28(dd, J = 1.7 Hz, 1H), 8.11(s, 1H), 8.00(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.82‐7.98(m, 7H), 7.80(dd, J = 8.3, 1.9 Hz, 1H), 7.75(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.68(dd, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 7.64(dd, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 7.48‐7.56(m, 2H), 6.66(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.50(s, 2H), 3.27‐3.36(m, 4H), 1.85‐1.95(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.6, 161.6, 142.2, 142.0, 141.0, 138.7, 137.8, 137.0, 135.0, 133.8, 133.1, 132.9, 129.8, 128.7, 128.4, 128.1, 127.8, 127.8, 127.1, 126.8, 126.6, 126.3, 126.0, 125.5, 120.8, 116.6, 54.5, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₃H₂₈N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 571.1667. found 571.1645。

製造例３５
1-(2-(4’-ベンジル-[1,1’-ビフェニル]-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-43)の製造
化合物Ｉと2,3’-ジブロモアセトフェノンとを用いて、製造例１の（１）の方法を改良して化合物ＩＩのBr位置異性体を合成した。さらに製造例１の（２）の方法と同様にして、化合物ＩＩのBr位置異性体と(4-ベンジルフェニル)ボロン酸とを反応させることで、収率37％で淡茶色固体の化合物TS-43を製造した。得られた化合物TS-43の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.33(dd, J = 1.7, 1.7 Hz, 1H), 8.29(d, J = 2.9 Hz, 1H), 8.06(ddd, J = 7.3, 1.7, 1.2 Hz, 1H), 7.97(ddd, J = 8.6, 1.7, 1.2 Hz, 1H), 7.77(dd, J = 9.7, 2.9, 1H), 7.64‐7.69(m, 3H), 7.38(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.27‐7.33(m, 4H), 7.18‐7.23(m, 1H), 6.56(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.77(s, 2H), 4.05(s, 2H), 3.22‐3.28(m, 4H), 1.81‐1.88(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.6, 161.6, 142.3, 142.2, 141.4, 140.9, 137.6, 137.0, 134.9, 133.1, 129.8, 129.6, 129.1, 128.7, 127.4, 126.8, 126.8, 126.4, 120.8, 116.5, 54.4, 48.2, 41.7, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₃₀H₂₈N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 535.1667. found 535.1668。

製造例３６
1-(2-(2’-メトキシ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-46)の製造
化合物ＩＩと(2-メトキシフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率94％で淡黄色油状の化合物TS-46を製造した。得られた化合物TS-46の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.04(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.92(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.60‐7.75(m, 3H), 7.30‐7.40(m, 2H), 7.03‐7.09(m, 1H), 7.02(d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.64(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.84(s, 3H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.85‐1.93(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.2, 161.6, 156.6, 145.3, 142.2, 137.0, 132.7, 130.8, 130.3, 130.0, 129.2, 128.0, 121.2, 120.7, 116.4, 111.6, 55.7, 54.3, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₄N₂NaO₅S⁺[M+Na⁺] 475.1304 found 475.1281。

製造例３７
1-(2-(3’-メトキシ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-47)の製造
化合物ＩＩと(3-メトキシフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率79％で無色ワックス状の化合物TS-47を製造した。得られた化合物TS-47の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.05‐8.08(m, 2H), 7.93(d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.73‐7.90(m, 2H), 7.67(dd, J = 9.6, 2.7 Hz, 1H), 7.41(dd. J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 7.23(ddd, J = 7.9, 2.1, 0.8 Hz, 1H), 7.16(dd, J = 2.1 Hz, 1H), 6.97(ddd, J = 7.9, 2.1, 0.8 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.89(s, 3H), 3.26‐3.34(m, 4H), 1.88‐1.94(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.1, 161.4, 160.0, 147.0, 141.9, 140.8, 136.7, 132.9, 130.0, 128.6, 127.6, 120.5, 119.7, 116.2, 113.8, 113.0, 55.3, 54.1, 48.0, 25.3；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₄N₂NaO₅S⁺[M+Na⁺] 475.1304 found 475.1282。

製造例３８
1-(2-(2’-フルオロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-48)の製造
化合物ＩＩと(2-フルオロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率27％で無色ワックス状の化合物TS-48を製造した。得られた化合物TS-48の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.06‐8.11(m, 2H), 7.93(d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.70‐7.75(m, 2H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 7.48(ddd, J = 7.8, 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.36‐7.43(m, 1H), 7.25 -7.28(m, 1H), 7.17‐7.23(m, 1H), 6.65(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.85‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.4, 161.9, 160.2(d, J = 248.9 Hz), 142.5(d, J = 1.1 Hz), 142.4, 137.3, 133.6, 131.0(d, J = 3.0 Hz), 130.7(d, J = 8.3 Hz), 130.0(d, J = 3.5 Hz), 128.7, 127.9(d, J = 13.2 Hz), 125.1(d, J = 3.6 Hz), 121.0, 116.8(d, J = 22.1 Hz), 116.7, 54.6, 48.5, 25.8。

製造例３９
1-(2-(3’-フルオロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-49)の製造
化合物ＩＩと(3-フルオロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率97％で淡茶色固体の化合物TS-49を製造した。得られた化合物TS-49の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.93(d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.74(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.68(dd, J = 9.6, 2.7 Hz, 1H), 7.40‐7.50(m, 2H), 7.30‐7.40(m, 1H), 7.10‐7.15(m, 1H), 6.66(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.25‐3.35(m, 4H), 1.85‐1.95(m, 4H);
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ191.3, 164.6(d, J = 246.5 Hz), 161.9, 146.2, 142.4, 142.1(d, J = 7.8 Hz), 137.3, 133.8, 131.0(d, J = 8.4 Hz), 129.3, 128.1, 123.4(d, J = 3.0 Hz), 121.0, 116.8, 115.9(d, J = 21.0 Hz), 114.7(d, J = 22.1 Hz), 54.6, 48.5, 25.8;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₁FN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 463.1104 found 475.1096。

製造例４０
1-(2-(2’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-50)の製造
化合物ＩＩと(2-クロロフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率75％で淡茶色ワックス状の化合物TS-50を製造した。得られた化合物TS-50の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.05‐8.10(m, 2H), 7.93(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.59‐7.62(m, 2H), 7.48‐7.53(m, 1H), 7.32‐7.38(m, 3H), 6.65(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.48(s, 2H), 3.29‐3.34(m, 4H), 1.86‐1.94(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.2, 161.6, 145.7, 142.1, 139.2, 137.0, 133.4, 132.4, 131.2, 130.4, 130.4, 129.6, 128.2, 127.2, 1280.8, 116.6, 54.4, 48.3, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₁ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 479.0808. found 479.0788。

製造例４１
1-(2-(4’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物TS-52)の製造
製造例１の方法と同様にして、（１）では化合物Ｉの代わりにN,N-ビス（４-メトキシベンジル）-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミドを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに(4-クロロフェニル)ボロン酸を使用することで、TS-52の４-メトキシベンジル保護体を得た後、トリフルオロ酢酸で後処理することで収率12％で淡黄色ワックス状の化合物TS-52を製造した。得られた化合物TS-52の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, Acetone-d₆)δ 8.24(d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.21(d, J = 8.3 Hz,2H), 7.90(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.79‐7.81(m, 3H), 7.56(d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.56(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.69(s, 2H)；
¹³C NMR (125 MHz, Acetone-d₆)δ 192.5, 161.9, 145.7, 141.9, 139.2, 137.5, 135.0, 134.9, 130.0, 129.8, 129.7, 128.2, 123.1, 120.7, 55.9；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₁₉H₁₅ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 425.0339. found 425.0321。

製造例４２
1-(2-(4’-クロロ-2’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-53)の製造
化合物ＩＩと(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率81％で淡黄色固体の化合物TS-53を製造した。得られた化合物TS-53の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.05(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.93(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.77(s, 1H), 7.67(dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.55‐7.60(m, 1H), 7.47(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.26‐7.29(m, 1H), 6.64(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.26‐3.31(m, 4H), 1.82‐1.94(m, 4H);
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 191.1, 161.6, 144.9, 142.1, 138.3(q, J = 2.0 Hz), 137.1, 134.7, 133.9, 133.0, 131.8, 130.0(q, J = 31.0 Hz), 129.9(q, J = 1.6 Hz), 128.0, 126.8(q, J = 5.5 Hz), 123.2(q, J = 274.4 Hz), 120.8, 116.6, 54.4, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₀ClF₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 547.0682. found 547.0661。

製造例４３
1-(2-(4’-クロロ-3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-54)の製造
化合物ＩＩと(4-クロロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率88％で淡黄色固体の化合物TS-54を製造した。得られた化合物TS-54の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.11(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.92‐7.95(m, 2H), 7.70‐7.75(m, 3H), 7.67(dd, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 7.63(d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.64(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.24‐3.32(m, 4H), 1.81‐1.91(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 144.5, 142.1, 138.5, 137.0, 133.9, 132.8(q, J = 1.6 Hz), 132.4, 131.5, 129.3(q, J = 31.6 Hz), 129.2, 127.8, 126.5(q, J = 5.4 Hz), 122.8(q, J = 273.1 Hz), 120.8, 116.6, 54.4, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₀ClF₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 547.0682. found 547.0673。

製造例４４
1-(2-(4’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-6-オキソ-N-プロピル-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物TS-56)の製造
製造例１の方法と同様にして、化合物Ｉの代わりに6-オキソ-N-プロピル-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミドを使用し、収率12％で無色固体の化合物TS-56を製造した。得られた化合物TS-56の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.08(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.95(d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.72(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.66(dd, J = 9.6, 2.8 Hz, 1H), 7.58(d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.47(d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.67(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 4.44(brs, 1H), 3.03(dt, J = 6.9, 6.7 Hz, 2H), 1.55‐1.61(m, 2H), 0.95(t, J = 7.5 Hz, 3H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 190.9, 161.6, 146.0, 142.0, 138.0, 136.6, 135.0, 133.3, 129.4, 129.0, 128.7, 127.6, 121.1, 119.0, 54.6, 45.1, 23.1, 11.3；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₂H₂₁ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 467.0808. found 467.0810。

製造例４５
1-(2-(3’,5’-ビス(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-57)の製造
化合物ＩＩと(3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率94％で淡黄色固体の化合物TS-57を製造した。得られた化合物TS-57の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.14(d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.06(s, 2H), 7.97(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.76(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.66(dd, J = 9.7, 2.5 Hz, 1H), 6.63(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 3.20‐3.33(m, 4H), 1.82‐1.93(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 143.9, 142.2, 141.8, 137.0, 134.4, 132.7(q, J = 33.4 Hz), 129.3, 128.0, 127.5, 123.3(q, J = 272.7 Hz), 122.2, 120.7, 116.6, 54.5, 48.2, 25.5;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₀F₆N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 581.0946. found 581.0942。

製造例４６
1-(2-(4’-クロロ-2’-メチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-58)の製造
化合物ＩＩと(4-クロロ-2-メチルフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率76％で茶色固体の化合物TS-58製造得した。得られた化合物TS-58の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.06 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.94(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.67(dd, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 7.45(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.20‐7.31(m, 2H), 7.16(d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.64(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.25‐3.35(m, 4H), 2.25(s, 3H), 1.80‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.1, 161.6, 147.3, 142.2, 138.9, 137.2, 137.0, 134.0, 133.1, 130.8, 130.6, 130.0, 128.3, 126.3, 120.7, 116.5, 54.4, 48.2, 25.5, 20.4；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₃ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 493.0965. found 493.0945。

製造例４７
1-(2-(4’-メトキシ-2’-メチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-59)の製造
化合物ＩＩと(4-メトキシ-2-メチルフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率90％で淡茶色固体の化合物TS-59を製造した。得られた化合物TS-59の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ8.04 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.94(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.67(dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 7.47(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.17(d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.78‐6.82(m, 2H), 6.64(d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.85(s, 3H), 3.23‐3.34(m, 4H), 2.28(s, 3H), 1.83‐1.96(m, 4H)；
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ191.1, 161.6, 159.6, 148.4, 142.2, 137.0, 136.8, 133.1, 132.5, 130.8, 130.2, 128.2, 120.7, 116.4, 116.2, 111.6, 55.4, 54.3, 48.2, 25.5, 20.9；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₆N₂NaO₅S⁺[M+Na⁺] 489.1460. found 489.1450。

製造例４８
1-(2-(2’-クロロ-4’-メトキシ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-60)の製造
化合物ＩＩと(2-クロロ-4-メトキシフェニル)ボロン酸とを用いて、製造例１の（２）の方法と同様にして収率93％で淡黄色固体の化合物TS-60を製造した。得られた化合部TS-60の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.07(d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.97(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.68(dd, J = 9.6 2.5 Hz, 1H), 7.61(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.29(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.07(d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.94(dd, J = 8.6, 2.6 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.50(s, 2H), 3.86(s, 3H), 3.22‐3.37(m, 4H), 1.85‐1.87(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.2, 161.6, 160.2, 145.5, 142.2, 136.9, 133.0, 133.0, 131.8, 131.5, 130.4, 128.1, 120.7, 116.4, 115.6, 113.5, 55.8, 54.4, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₃ClN₂NaO₅S⁺[M+Na⁺] 509.0914. found 509.0894。

製造例４９
5-(アゼパン-1-イルスルホニル)-1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-61)の製造
製造例１の方法と同様にして、化合物Ｉの代わりに5-(アゼパン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンを使用し、収率74％で橙色ワックス状の化合物TS-61を製造した。得られた化合物TS-61の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.11(d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.57‐7.96(m, 8H), 6.64(d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 3.36(t, J = 5.4 Hz, 4H), 1.76(brs, 4H), 1.63(brs, 4H)；
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 145.6, 141.6, 140.4, 136.6, 133.7, 131.7(q, J = 32.5 Hz), 130.7, 129.7, 129.1, 127.9, 125.3(q, J = 3.8 Hz), 124.2(q, J = 3.7 Hz), 124.1(q, J = 272.5 Hz), 121.0, 118.8, 54.5, 48.3, 29.3, 27.0；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₆H₂₅F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 541.1385. found 541.1397。

製造例５０
5-(アゼパン-1-イルスルホニル)-1-(2-オキソ-2-(4’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-62)の製造
製造例１の方法と同様にして、（１）では化合物Ｉの代わりに5-(アゼパン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸を使用することで、収率79％で淡黄色ワックス状の化合物TS-62を製造した。得られた化合物TS-62の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.11(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.91(d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.74‐7.78(m, 6H), 7.61(dd, J = 9.7, 2.7 Hz, 1H), 6.64(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.44(s, 2H), 3.34(t, J = 6.0 Hz, 4H), 1.76(brs, 4H), 1.61‐1.67(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.2, 161.8, 145.9, 143.4(q, J = 3.8 Hz), 141.8, 136.9, 134.2, 131.0(q, J = 32.7 Hz), 129.3, 128.3, 128.1, 126.4(q, J = 3.8 Hz), 124.5(q, J = 271.5 Hz), 121.2, 119.1, 54.8, 48.6, 30.0, 27.3;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₆H₂₅F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 541.1385. found 541.1397。

製造例５１
5-(アゼパン-1-イルスルホニル)-1-(2-(4’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-63)の製造
製造例１の方法と同様にして（１）では化合物Ｉの代わりに5-(アゼパン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに(4-クロロフェニル)ボロン酸を使用することで、収率86％で淡黄色ワックス状の化合物TS-63を製造した。得られた化合物TS-63の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.08(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.90(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.71(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.61(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.57(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.46(d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.64(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 3.34(t, J = 5.9 Hz, 4H), 1.76(brs, 4H), 1.60‐1.67(m, 4H).
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ190.9, 161.6, 146.0, 141.5, 138.0, 136.6, 135.0, 133.4, 129.4, 129.0, 128.7, 127.6, 121.0, 118.8, 54.4, 48.4, 29.3, 27.1.
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₅H₂₅ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 484.9950. found 507.1141。

製造例５２
5-(アゼパン-1-イルスルホニル)-1-(2-(4’-クロロ-2‘-メチル[1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-64)の製造
製造例１の方法と同様にして、（１）では化合物Ｉの代わりに5-(アゼパン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに(4-クロロ-2-メチルフェニル)ボロン酸を使用することで、収率52％で無色固体の化合物TS-64を製造した。得られた化合物TS-64の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.04‐8.08(m, 2H), 7.90(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.61(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.44‐7.47(m, 2H), 7.30(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.24‐7.28(m, 1H), 7.16(d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.44(s, 2H), 3.35(t, J = 6.0 Hz, 4H), 2.25(s, 3H), 1.77(brs, 4H), 1.60‐1.67(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 147.3, 141.5, 138.9, 137.2, 136.6, 134.1, 133.2, 130.8, 130.6, 130.0, 128.3, 126.3, 121.0, 118.9, 54.5, 48.4, 29.3, 27.1, 20.4；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₆H₂₇ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 521.1278. found 521.1262。

製造例５３
N,N-ジエチル-６-オキソ-1-(2-オキソ-2-(3’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物TS-65)の製造
製造例１の方法と同様にして、化合物Ｉの代わりにN,N-ジエチル-６-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミドを使用し、収率79％で淡黄色油状の化合物TS-65を製造した。得られた化合物TS-65の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ8.11(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.93(d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.87(s, 1H), 7.82(d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.76(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.69(d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.58‐7.65(m, 2H), 6.64(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.45(s, 2H), 3.30(q, J = 7.1 Hz, 4H), 1.21(t, J = 7.1 Hz, 6H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.2, 161.8, 145.9, 141.9, 140.7, 136.9, 134.0, 132.0(q, J = 32.6 Hz), 131.0(q, J = 1.0 Hz), 130.0, 129.3, 128.2, 125.6(q, J = 3.8 Hz), 124.5(q, J = 3.8 Hz), 124.4(q, J = 272.3 Hz), 121.2, 119.7, 54.8, 42.4, 14.6；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₃F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 515.1228. found 515.1240。

製造例５４
N,N-ジエチル-６-オキソ-1-(2-オキソ-2-(4’-(トリフルオロメチル)-[1,1’-ビフェニル]-4-イル)エチル)-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物TS-66)の製造
製造例１の方法と同様にして、（１）では化合物Ｉの代わりにN,N-ジエチル-６-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミドを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸を使用することで、収率90％で無色固体の化合物TS-66を製造した。得られた化合物TS-66の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.11(d, J = 8.0 Hz,2H), 7.93(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.72‐7.78(m, 6H), 7.60(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 6.64(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.45(s, 2H), 3.29(q, J = 7.2 Hz, 4H), 1.20(t, J = 7.2 Hz, 6H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ191.0, 161.5, 145.6, 143.1, 141.7, 136.6, 133.9, 130.7(q, J = 32.8 Hz), 129.0, 128.0, 127.8, 126.1(q, J = 3.8 Hz), 124.2(q, J = 272.5 Hz), 120.9, 119.5, 54.5, 42.1, 14.3；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₃F₃N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 515.1228. found 515.1240。

製造例５５
1-(2-(4’-クロロ-[1,1’-ビフェニル]-4-イル) -2-オキソエチル)-N,N-ジエチル-６-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物TS-67)の製造
製造例１の方法と同様にして、（１）では化合物Ｉの代わりにN,N-ジエチル-６-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミドを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに(4-クロロフェニル)ボロン酸を使用することで、収率97％で淡黄色ワックス状の化合物TS-67を製造した。得られた化合物TS-67の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.07(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.91(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.71(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.60(dd, J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 7.57(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.46(d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.63(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 3.30(q, J = 7.2 Hz, 4H), 1.21(t, J = 7.2 Hz, 6H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 190.9, 161.5, 146.0, 141.7, 138.0, 136.6, 135.0, 133.4, 129.4, 129.0, 128.7, 127.6, 121.0, 119.4, 54.4, 42.1, 14.3；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₃ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 481.0965. found 481.0986.

製造例５６
1-(2-(4’-クロロ-2’-メチル-[1,1’-ビフェニル]-4-イル) -2-オキソエチル)-N,N-ジエチル-６-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物TS-68)の製造
製造例１の方法と同様にして、（１）では化合物Ｉの代わりにN,N-ジエチル-６-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミドを使用し、（２）では[3-(トリフルオロメチル)フェニル]ボロン酸の代わりに(4-クロロ-2-メチルフェニル)ボロン酸を使用することで、収率97％で淡黄色ワックス状の化合物TS-68を製造した。得られた化合物TS-68の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.06(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.92(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.61(dd, J = 9.7, 2.5 Hz, 1H), 7.45(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.30(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.25(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.16(d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.64(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.44(s, 2H), 3.30(q, J = 7.2 Hz, 4H), 2.27(s, 3H), 1.21(t, J = 7.2 Hz, 6H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.0, 161.6, 147.3, 141.7, 138.9, 137.2, 136.6, 134.0, 133.2, 130.8, 130.6, 130.0, 128.3, 126.3, 121.0, 119.4, 54.5, 42.1, 20.4, 14.3；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₅ClN₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 495.1121. found 495.1145.

製造例５７
1-(2-([1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-09)の製造
化合物Ｉと1-([1,1’-ビフェニル]-4-イル)-2-ブロモエタノンとを用いて、製造例１の（１）の方法と同様にして収率81％で淡黄色固体の化合物TS-09を製造した。得られた化合物TS-09の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.07(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.95(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.74(d, J = 8.2 Hz, 7.74), 7.62‐7.68(m, 3H), 7.49(dd, J = 7.4, 7.4 Hz, 2H), 7.43(dd, J = 7.4, 7.4 Hz, 1H), 6.63(d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.47(s, 2H), 3.22‐3.35(m, 4H), 1.82‐1.95(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 191.1, 161.6, 147.2, 142.3, 139.6, 137.0, 136.9, 133.1, 129.2, 128.9, 127.7, 127.4, 120.7, 116.4, 54.3, 48.2, 25.5；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₂N₂NaO₄S⁺[M+Na⁺] 445.1189 found 445.1189。

製造例５８
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物T-070444)の製造

5-(ピロリジン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン（化合物Ｉ；228g、1.0mmol)をTHF(7.5ｍＬ)に溶解し、水素化ナトリウム(純度60%、1.0mmol)を室温にて加えた後、60℃にて60分撹拌した。この混合物に対して、2-ブロモ-1-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノン(化合物ＩＩＩ)のTHF溶液(5ｍＬ、1.0mmol)を添加し、60℃にて60分撹拌した。反応液を室温まで冷却後、水を注意深く入れて反応を停止し、得られた生成物をCH₂Cl₂で抽出した。次いで回収した有機相を、水および塩水で順次洗浄した。MgSO₄を用いて有機相を脱水し、溶媒を減圧下で蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル)で精製し、標記化合物(T-070444)を淡黄色の固形物として得た(収率49%)。得られたT-070444の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ7.89(d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.63(dd, J = 9.4, 2.7 Hz, 1H), 6.98-7.07(m, 2H), 6.83(m, 2H), 6.62(d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.39(s, 1H), 5.19(s, 2H), 5.03(s, 2H), 3.27-3.34(m, 4H), 2.45(s, 3H), 2.15(s, 3H), 1.85-1.91(m, 4H)。

製造例５９
1-(2-(1-(4-フルオロフェニル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-１-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-07)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-(1-(4-フルオロフェニル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率64％で淡茶固体の化合物TS-07を製造した。得られた化合物TS-07の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ7.91 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 7.11‐7.25 (m, 4H), 6.62 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.19(s, 2H), 3.22‐3.40 (m, 4H), 2.29 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.82‐1.95(m, 4H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 186.8, 162.7 (d, J = 249.5 Hz), 161.8, 142.6, 137.9, 136.7, 133.1, 133.0, 130.0, 129.9 (d, J = 8.4 Hz), 120.6, 116.8 (d, J = 22.8 Hz), 115.9, 106.7, 55.2, 48.2, 25.5, 13.1, 12.8;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₃H₂₄FN₃NaO₄S⁺[M+Na⁺] 480.1369 found 480.1385。

製造例６０
1-(2-(1-(4-メトキシフェニル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-08)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-(1-(4-メトキシフェニル)-2,5-ジメチル-１H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率64％で淡黄色油状の化合物TS-08を製造した。得られた化合物TS-08の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.91(d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.64(dd, J = 9.8, 2.5 Hz, 1H), 7.06‐7.11(m, 2H), 6.98‐7.03(m, 2H), 6.62(d, J = 9.8 Hz, 1H), 6.40(s, 1H), 5.19(s, 2H), 3.88(s, 3H), 3.23‐3.35(m, 4H), 2.29(s, 3H), 2.00(s, 3H), 1.82‐1.93(m, 4H)；
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ187.0, 162.0, 160.2, 142.9, 138.5, 137.0, 130.6, 130.0, 129.3, 120.9, 117.4, 116.1, 115.1, 106.6, 56.0, 55.4, 48.5, 25.7, 13.4, 13.1；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₄H₂₇N₃NaO₅S⁺[M+Na⁺] 492.1569 found 492.1555。

製造例６１
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-07)の製造
ピリジン-2(1H)-オンと2-ブロモ-1-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノン(化合物ＩＩＩ)とを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率52％で淡茶色固体の化合物NT-07を製造した。得られた化合物NT-07の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ7.36(ddd, J = 9.1, 7.0, 2.0 Hz, 1H), 7.22(dd, J = 7.0, 2.0 Hz, 1H), 7.00(dd, J = 8.5, 8.5 Hz, 2H), 6.85(dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 2H), 6.60(d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.42(s, 1H), 6.19(ddd, J = 7.0, 7.0, 1.5 Hz, 1H), 5.16(s, 2H), 5.01(s, 2H), 2.46(s, 3H), 2.14(s, 3H);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ188.1, 162.7, 162.3(d, J = 246.5 Hz), 139.9, 138.8, 136.9, 132.2(d, J = 3.0 Hz), 128.7, 127.3(d, J = 8.4 Hz), 120.9, 117.5, 116.1(d, J = 21.6 Hz), 107.3, 105.7, 54.9, 46.2, 12.3, 11.9;
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₀H₁₉FN₂NaO₂ ⁺[M+Na⁺] 361.1328 found 361.1330。

製造例６２
N,N-ジアリル-1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン3-スルホンアミド(化合物TS-10)の製造
N,N-ジアリル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン3-スルホンアミドと2-ブロモ-1-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノン(化合物III)とを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率46％で淡茶色固体の化合物TS-10を製造した。得られた化合物TS-10の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.89(d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.57(dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.02(dd, J = 8.3 Hz, 2H), 6.86(dd, J = 8.3, 5.5 Hz, 2H), 6.61(d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.38(s, 1H), 5.66‐5.83(m, 2H), 5.12‐5.29(m, 6H), 5.03(s, 2H), 3.84(d, J = 6.3 Hz, 4H), 2.46(s, 3H), 2.15(s, 3H)；
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 186.5, 162.3(d, J = 246.6 Hz), 161.7, 142.5, 137.1, 136.3, 132.6, 132.1(d, J = 3.3 Hz), 129.1, 127.3(d, J = 8.0 Hz), 120.8, 120.0, 118.6, 117.1, 116.1(d, J = 21.9 Hz), 107.1, 55.2, 49.5, 46.2, 12.4, 12.0；
HRMS(ESI-MS) calcd for C₂₆H₂₈F₁N₃NaO₄S⁺[M+Na⁺] 520.1682 found 520.1703。

製造例６３
1-(2-(1-ベンジル-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-01)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-(1-ベンジル-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率84％で淡茶色固体の化合物NT-01を製造した。得られた化合物NT-01の理化学的性質は以下の通りである。

TLC（シリカゲル）のRf値(展開溶媒；酢酸エチル100%)は0.62であった。

製造例６４
1-(2-(2,5-ジメチル-1-(4-メチルベンジル)-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-02)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-(2,5-ジメチル-1-(4-メチルベンジル)-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率63％で淡茶色固体の化合物NT-02を製造した。得られた化合物NT-02の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.90 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.11‐7.16 (m, 2H), 6.74‐6.81 (m, 2H), 6.61 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.19(s, 2H), 5.02(s, 2H), 3.26‐3.32 (m, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.85‐1.92(m, 4H)。

製造例６５
1-(2-(1-(4-クロロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-03)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-((4-クロロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率14％で淡茶色固体の化合物NT-03を製造した。得られた化合物NT-03の理化学的性質は以下の通りである。

TLC（シリカゲル）のRf値(展開溶媒；ヘキサン33%、酢酸エチル67%)は0.18であった。

製造例６６
1-(2-(1-(4-ブロモベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-04)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-((4-ブロモベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率50％で淡茶色固体の化合物NT-04を製造した。得られた化合物NT-04の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.89 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.42‐7.47 (m, 2H), 6.73‐6.79 (m, 2H), 6.62 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.18(s, 2H), 5.00(s, 2H), 3.26‐3.33 (m, 4H), 2.45 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.85‐1.92(m, 4H)。

製造例６７
1-(2-(1-(4-メトキシベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-05)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-((4-メトキシベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率41％で無色固体の化合物NT-05を製造した。得られた化合物NT-05の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.89 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 6.80‐6.90 (m, 4H), 6.62 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 6.37 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.19(s, 2H), 5.00(s, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.26‐3.35 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.85‐1.93(m, 4H)。

製造例６８
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピペリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-08)の製造
5-(ピペリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンと化合物ＩＩＩとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率30％で淡橙色固体の化合物NT-08を製造した。得られた化合物NT-08の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.83 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 6.98‐7.05 (m, 2H), 6.84‐6.90 (m, 2H), 6.60 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 6.39 (s, 1H), 5.18(s, 2H), 5.03(s, 2H), 3.07‐3.15 (m, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.63‐1.70(m, 4H), 1.46‐1.54 (m, 2H)。

製造例６９
5-(アゼパン-1-イルスルホニル)-1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-09)の製造
5-(アゼパン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンと化合物ＩＩＩとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率47％で淡黄色固体の化合物NT-09を製造した。得られた化合物NT-09の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.86 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 6.99‐7.05 (m, 2H), 6.84‐6.90 (m, 2H), 6.61 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.17(s, 2H), 5.03(s, 2H), 3.31‐3.36 (m, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.70‐1.79(m, 4H), 1.59‐1.64 (m, 4H)。

製造例７０
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)- 5-(チオモルホリノスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-10)の製造
5-(チオモルホリノスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンと化合物ＩＩＩとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率16％で淡茶色固体の化合物NT-10を製造した。得られた化合物NT-10の理化学的性質は以下の通りである。

TLC（シリカゲル）のRf値(展開溶媒；ヘキサン50%、酢酸エチル50%)は0.1であった。

製造例７１
1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(モルホリノスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-11)の製造
5-(モルホリノスルホニル)ピリジン-2(1H)-オンと化合物ＩＩＩとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率45％で無色固体の化合物NT-11を製造した。得られた化合物NT-11の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.85 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 6.99‐7.05 (m, 2H), 6.84‐6.90 (m, 2H), 6.63 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.19(s, 2H), 5.03(s, 2H), 3.75‐3.82 (m, 4H), 3.11‐3.18 (m, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.15 (s, 3H)。

製造例７２
N,N-ジエチル-1-(2-(1-(4-フルオロベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン-3-スルホンアミド(化合物NT-12)の製造
N,N-ジエチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロピリジン3-スルホンアミドと化合物ＩＩＩとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率32％で淡茶色固体の化合物NT-12を製造した。得られたNT-12の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ7.88 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 9.7, 2.6 Hz, 1H), 6.99‐7.05 (m, 2H), 6.84‐6.89 (m, 2H), 6.61 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.17(s, 2H), 5.03(s, 2H), 3.28 (q, J = 7.2 Hz, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 6H)。

製造例７３
1-(2-(1-(4-ヒドロキシベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物NT-13)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-((4-ヒドロキシベンジル)-2,5-ジメチル-1H-ピロール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率12％で淡茶色固体の化合物NT-13を製造した。得られた化合物NT-13の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ 7.89 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 6.99‐7.05 (m, 2H), 6.74‐6.82 (m, 4H), 6.62 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 6.37 (brs, 1H), 5.19(s, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.27-3.33 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.86-1.91 (m, 4H)。

製造例７４
1-(2-(1,2-ジメチル-１H-インドール-3-イル)-2-オキソエチル)-5-(ピロリジン-1-イルスルホニル)ピリジン-2(1H)-オン(化合物TS-02)の製造
化合物Ｉと2-ブロモ-1-(1,2-ジメチル-１H-インドール-3-イル)-エタノンとを用いて、製造例５８の方法と同様にして収率65％で淡茶色固体の化合物TS-02を製造した。得られた化合物TS-02の理化学的性質は以下の通りである。

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ7.94(d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.86-7.90(m, 1H), 7.65(dd, J = 9.5, 2.6 Hz, 1H), 7.35-7.40(m, 1H), 7.27-7.32(m, 2H), 6.98-7.07(m, 2H), 6.62(d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.42(s, 1H), 3.74(s, 3H), 2.78(s, 3H), 3.25-3.32(m, 4H), 1.85-1.92(m, 4H)。

上記の方法にて得た、ピリジノン化合物を以下に示す方法の種々の薬理試験に供した。

薬理試験１〔インビトロＧＥＦアッセイ〕
ＤＯＣＫ−Ａサブファミリーに属するＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５はＤＨＲ−２ドメインを介してＲａｃのＧＴＰ−ＧＤＰ交換反応を促進することでＲａｃを活性化する。

本明細書において説明するインビトロＧＥＦアッセイでは、Ｒａｃに結合すると蛍光強度が増大する性質を持つ標識ＧＴＰ（Ｂｏｄｉｐｙ−ＦＬ−ＧＴＰ：インビトロジェン）を利用した。

ＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５の各ＤＨＲ−２ドメインに相当するポリペプチド断片を、Ｎ末端にＨｉｓｔｉｄｉｎｅ−ＳＵＭＯタグを融合したリコンビナントタンパク質として大腸菌株（ＡｒｃｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓＤＥ３）にて発現させ、Ｎｉ−ＮＴＡカラムを用いたアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製し、これらを準備した。

Ｒａｃは、そのＮ末端にＧＳＴタグを融合したリコンビナントタンパク質として大腸菌株（ＢＬ２１ＤＥ３）にて発現させ、グルタチオンＳｅｐｈａｒｏｓｅカラムを用いたアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製し、これらを準備した。

次いで、２０ｍＭのＭＥＳ−ＮａＯＨ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、および２０μＭのＧＤＰを含むｐＨ７．０に調製した反応液Ａ中で、上記調製の各ポリペプチド断片（ＤＨＲ−２ドメイン）と、ＤＭＳＯに溶解させた所定濃度の各種ピリジノン化合物、ＣＰＹＰＰ、またはＤＭＳＯ単独（コントロール）の存在下で遮光しながら室温で３０分間インキュベートしてＧＥＦの前処理物を準備した。なお、全てのサンプルにおいてＤＭＳＯの最終濃度が３％になるように調整した。

そして、上記調製の１５μＭのＲａｃを反応液Ａに添加し、そのまま氷上３０分間静置することによりＧＤＰ−Ｒａｃ複合体を形成させた。

このようにして調製した１００μＬのＧＤＰ−Ｒａｃ複合体を含む反応液Ａに、３．６μＭとなるようにＢｏｄｉｐｙ−ＦＬ−ＧＴＰを加え、３０℃で２分間平衡化させた。平衡化後、前処理した５０μＬのＧＥＦを添加し３０℃で反応させた。

反応中のＢｏｄｉｐｙ−ＦＬ−ＧＴＰ蛍光強度の変化を、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓＸＳ−ＮもしくはＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｓｐｉｒｅ蛍光光度分光機を用いてモニターした（励起波長：４８８ｎｍ、発光波長：５１４ｎｍ）。得られた測定値について、反応開始時（０秒）での蛍光強度が０となるよう補正した値を算出した。

そして、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５（ＧｒａｐｈＰａｄｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、算出した補正値をｙ軸に、時間（ｔ）をｘ軸にとってプロットした際の近似曲線（双曲線）を求め、ｔ＝０〜１０秒における傾きをグアニンヌクレオチド交換反応の初速度とした。ＩＣ_５０値は、溶媒（ＤＭＳＯ）のみを加えたコントロールの反応初速度を１００％として計算した。

薬理試験２〔細胞浸潤の阻害アッセイ〕
ＤＭＥＭ（無血清）で１２０分間平衡化させたマトリゲル（ＢＤバイオサイエンス社）の上部チャンバーに、ＤＭＥＭ（無血清）に懸濁したマウス肺癌由来細胞株（３ＬＬ株）、ヒト繊維肉腫細胞株（ＨＴ-１０８０株）、ヒト大腸癌細胞株(ＤＬＤ−１株)を３００μＬ、下部チャンバーにＤＭＥＭ（含１０％ＦＣＳ）を５００μＬ入れ、上部・下部チャンバー内の培養液双方にＤＭＳＯに溶解させた各種ピリジノン化合物またはＣＰＹＰＰを所定の濃度で添加した。なお、コントロールとしてＤＭＳＯを単独で培養液内に添加したものを準備し、全ての実験におけるＤＭＳＯの最終濃度は０．２％になるように調整した。

これを３７℃、５％のＣＯ_２下で２２時間培養した後、チャンバーを外して培養液を除いた後、綿棒を用いて上部チャンバー面に残った浸潤しなかった細胞を除去し、チャンバー下部面に残った細胞（マトリゲルに浸潤した細胞）をＤｉｆｆ−ｑｕｉｃｋ（Ｓｙｓｍｅｘ）を用いて染色した。染色後、メスを用いてインサートを切り取り、プレパラートに封入し、光学顕微鏡下で計数した。

結果は、ＤＭＳＯを単独で添加したコントロールでの浸潤細胞数を１００％として、各条件下での浸潤細胞数を％換算した値を細胞浸潤率（％：Ｉｎｖａｓｉｏｎ）、それを１００から引いた値を阻害率（％：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）として評価した。

薬理試験３〔細胞の足場非依存的な増殖の阻害〕
足場非依存的ながん細胞の増殖に対する化合物の抑制効果を、ソフトアガーアッセイを用いて行った。１ｘ１０^５個の３ＬＬ株をＤＭＳＯに溶解させた各種ピリジノン化合物またはＣＰＹＰＰを所定の濃度で添加した０．３％のアガロースを含むＤＭＥＭ（含１０％ＦＣＳ）に懸濁し、０．７％寒天を含むＤＭＥＭ（含１０％ＦＣＳ）により６ウエルプレート中に形成させたベースアガー上に重層した。

これを３７℃、５％ＣＯ_２環境下で７日間培養した後、０．００５％クリスタルバイオレットで室温１時間の反応により細胞を染色し、形成されたコロニーの数を計数した。

結果は、コントロール条件下（ＤＭＳＯ添加）でのコロニー形成数を１００％として、各条件下でのコロニー形成数を％換算した値をコロニー形成率（％：Ｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎ）、それを１００から引いた値を阻害率（％：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）として評価した。

薬理試験４〔マウス初代培養繊維芽細胞のラッフル形成阻害実験〕
非特許文献２に示すように、マウス初代培養繊維芽細胞（ＭＥＦ）をＰＤＧＦなどの増殖因子で刺激すると、アクチン細胞骨格の再編成が惹起され、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌラッフルとｄｏｒｓａｌラッフルと呼ばれる２種類の特徴的な細胞膜構造が形成される。

ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌラッフルとｄｏｒｓａｌラッフルの形成はＲａｃ活性化に依存しており、ＤＯＣＫ１およびＤＯＣＫ５の機能が必須である。重要な知見として、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌラッフルの形成にはＤＯＣＫ１とＤＯＣＫ５の両者の機能が必要であるが、ｄｏｒｓａｌラッフルの形成にはＤＯＣＫ１の機能が必須であることが判っている。

したがって、このアッセイ系に各種ピリジノン化合物を用いて、細胞レベルでのＤＯＣＫ１選択性を検証することが可能である。

野生型ＭＥＦもしくはＤＯＣＫ１ノックアウト（Ｄ１ＫＯ）マウス由来（非特許文献２に記載の方法にて入手）のＭＥＦを２ｘ１０^４個／ｍＬの濃度となるようにＤＭＥＭ（含１０％ＦＢＳ）に懸濁し、フィブロネクチンでプレコートされたガラスボトム培養ディッシュのガラス部分の上に、これを１５０μＬ播いた。

３７℃で３６時間培養後、０．１％のＢＳＡを含有するＤＭＥＭ（無血清）に培地交換して１２時間培養し、細胞を血清飢餓状態とした。次いで、培養液を、ＤＭＳＯに溶解させた各種ピリジノン化合物またはＣＰＹＰＰを所定の濃度で添加した１００μＬのＤＭＥＭ（無血清）に交換し、１時間の前処理を行った。なお、コントロールとしてＤＭＳＯを単独で培養液内に添加したものを準備し、全ての実験においてＤＭＳＯの最終濃度が０．２％になるように調整した。

次いで、あらかじめ３７℃に温めた１００μＬのＤＭＥＭ（無血清：含６０ｎｇ／ｍＬのＰＤＧＦ）を上記前処理された細胞に添加して細胞に刺激を加え、７分間３７℃でインキュベーションし、さらに１５０μＬの４％パラフォルムアルデヒド溶液を添加して室温で１０分間インキュベーションして細胞を固定した。ＰＢＳ（含０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）を固定後の細胞に添加し、室温５分間インキュベーションして細胞膜を透過化し、次いでＢＳＡにて細胞をブロッキングし、その後ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４６標識したｐｈａｌｌｏｉｄｉｎでアクチン細胞骨格を染色した。ＺｅｉｓｓＬＳＭ５１０ｍｅｔａ共焦点レーザー顕微鏡で観察を行い、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅおよびｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅを形成している細胞数を計測した。

結果は、ＤＭＳＯのみを添加した野生型マウス由来のＭＥＦ（コントロール細胞）におけるｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅおよびｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅの形成率（これらの各々のラッフル構造を形成した細胞の全体の細胞数に対する割合）をそれぞれ１として、各条件下における細胞のそれぞれの構造の形成率を相対的に評価した。

薬理試験５〔がん細胞のマクロピノサイトーシスの抑制実験〕
マクロピノサイトーシスは、細胞が、細胞膜を伸展して、細胞外液とともに様々な物質を取り囲み、細胞内に取り込む現象であり、Ｒａｃ活性を介したアクチン細胞骨格の再編成が重要であることが知られている。近年、癌性に変異したＲａｓによるマクロピノサイトーシスの亢進が、細胞外からの高分子タンパク質の取り込みを促進し、それをグルタミンの供給源として利用して、低栄養条件下での癌細胞の生存・増殖に必須の機能を果たしていることが明らかにされ、マクロピノサイトーシスは、癌治療の新たな標的として非常に注目を集めている（非特許文献３）。

４ｘ１０^４個の３ＬＬ細胞、もしくはＨＴ-１０８０細胞をあらかじめフィブロネクチンでコートしたガラスボトム培養ディッシュのガラス部分の上に１５０μＬ播いた。これを３７℃で１６時間培養後、ＤＭＥＭ（無血清）に培地交換して２４時間培養した血清飢餓状態とした。次いで、培養液をＤＭＳＯ単独または各種ピリジノン化合物を溶解させたＤＭＳＯを添加した２ｍＬの無血清培地に交換して１時間の前処理を行った。なお、ＤＭＳＯは終濃度が０．２％となるように調製した。

ＴＭＲ−ｄｅｘｔｒａｎ（最終濃度５００μｇ／ｍＬ）入りのＤＭＥＭ（含１０％ＦＢＳ）に、それぞれ上記と同様にＤＭＳＯ単独または所定の濃度で各種ピリジノン化合物を溶解させたＤＭＳＯを含む１８０μＬの培地を細胞に添加し、３７℃で１時間インキュベーションした。その後、細胞を４％パラフォルムアルデヒド溶液にて室温で６０分間インキュベーションして固定した。次いでＰＢＳで３回洗浄後、ＤＡＰＩ（１／３０００希釈）で室温５分間インキュベーションして核を染色し、ＰＢＳで４回洗浄後、ＺｅｉｓｓＬＳＭ５１０ｍｅｔａ共焦点レーザー顕微鏡で観察を行った。細胞に取り込まれたＴＭＲ−ｄｅｘｔｒａｎは細胞質にドット状に観察される。マクロピノサイトーシス活性は、一細胞あたりのＴＭＲ−ｄｅｘｔｒａｎのドットの数として計測した。

結果は、コントロール条件下（ＤＭＳＯのみを添加）でのマクロピノサイトーシス活性（一細胞あたりのＴＭＲ−ｄｅｘｔｒａｎ取り込み数）を１として、各条件下におけるマクロピノサイトーシス活性を割合で示した。

薬理試験６〔Ｔリンパ球の遊走性への評価〕
リンパ球の遊走は免疫応答において重要な役割を果たしている。Ｔ細胞をＣＣＬ２１などのケモカインで刺激すると、Ｒａｃ活性化を介してアクチン細胞骨格の再編成が惹起され、これを駆動力として、細胞はケモカインのソースに向かって遊走する。リンパ球におけるＲａｃ活性化には、ＤＯＣＫ２の機能が必須で、ＤＯＣＫ２をノックアウトしたＴ細胞では遊走が著しく障害される（非特許文献４）。一方、ＤＯＣＫ１はＴ細胞には発現しておらず、リンパ球の遊走はＤＯＣＫ１の機能に依存しない。

１×１０^７／ｍＬの細胞濃度のマウス脾細胞を、ＤＭＳＯに溶解させた所定濃度の各種ピリジノン化合物またはＤＭＳＯ単独で配合した０．５％のＢＳＡを含有するＲＰＭＩ−１６４０（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ培地）中で３７℃で１時間前培養した。

次いで、２４−ウエルプレートに、３００ｎｇ／ｍＬのＣＣＬ２１とＤＭＳＯに溶解させた所定濃度の各種ピリジノン化合物を添加した５００μＬのＴｒａｎｓｗｅｌｌ培地を加えた後、ウエルにＴｒａｎｓｗｅｌｌ（コーニング、５μｍ孔径）をセットし、ここに前培養した細胞を１×１０^６／１００μＬとなるようにロードした。

これを３７℃で２時間インキュベートした後、下層のチャンバーに移動した細胞を集め、ＰＥ標識−抗Ｔｈｙ１．２抗体（５３−２−１、ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、およびＡＰＣ標識−抗Ｂ２２０抗体（ＲＡ−６Ｂ２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。移動した細胞の割合（％）は、下層チャンバー中のＴｈｙ１．２^＋細胞（Ｔ細胞）の数を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌに入れたＴｈｙ１．２^＋細胞（Ｔ細胞）の数で割ることで算出した。

なお、コントロールとして、非特許文献４に示す方法によって得られたＤＯＣＫ２のノックアウトマウスから得た脾臓細胞に対して、上述のようにＣＣＬ２１で刺激したものを準備した。

薬理試験７〔リンパ球の生存性への影響〕
１ｘ１０^６個のマウス脾細胞を０．５％のＢＳＡを含む１００μＬのＲＰＭＩ−１６４０培地に懸濁し、ＤＭＳＯに溶解させた所定の濃度の各種ピリジノン化合物またはＤＭＳＯ単独をＤＭＳＯの最終濃度がそれぞれ０．２％となるように添加し、３７℃で１時間培養した後に、２μＬのＰｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅｓｔａｉｎｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を加えて氷上３０分間インキュベーション後にＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ解析を行った。陰性細胞を生細胞として、各条件下での生細胞の割合（％）を求めた。

薬理試験８〔マウスメラノーマ細胞の肺転移阻害実験〕
マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０細胞をＣ５７ＢＬ／６マウス（６週令メス）の尾静脈から、１匹当たり、２．５もしくは５ｘ１０^５個を２００μＬのＰＢＳ（−）に懸濁して移入した。ＴＳ４５はＰＢＳ／ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ/エタノールの６：１：１混合液に３ｍｇ／３００μＬで調製し、マウス1匹あたり２００μＬを尾静脈に注射した。コントロール群には、等溶量の溶媒（ＰＢＳ／ＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅＥＬ／エタノールの６：１：１混合液）のみを投与した。投与は、細胞の移植直前と、移植後１日目、３日目、および５日目の計４回おこなった。初回投与から１４日後に各個体から肺を摘出し、肺表面の腫瘍転移巣の数を計測した。

薬理試験結果１
上記の薬理試験２〔細胞浸潤の阻害アッセイ〕に記載する方法によって、製造したピリジノン化合物のスクリーニングを行った。使用したピリジノン化合物の濃度は図中に記載の通りである。結果を図８に示す。表中のグラフにおいて、縦軸は阻害率（％：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）を表し、数値が高いほど、より高い阻害活性を有することを示している。

この実験結果から、本発明のピリジノン化合物は癌細胞の浸潤を抑制することが明らかとなった。癌細胞の浸潤は癌細胞の転移メカニズムの1つとして考えられている。したがって、本発明のピリジノン化合物は転移性癌の治療および／または予防に有効であることが明らかとなった。

薬理試験結果２
上記の薬理試験３〔細胞の足場非依存的な増殖の阻害〕に記載する方法によって、上述のピリジノン化合物のスクリーニングを行った。使用したピリジノン化合物の濃度は図中に記載の通りである。結果を図９に示す。表中のグラフにおいて、縦軸は阻害率（％：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）を表し、数値が高いほど、より高い阻害活性を有することを示している。

細胞が足場依存性を喪失することは、細胞が癌化したことの指標の一つとして考えられる。したがって、本発明のピリジノン化合物は転移性癌のみならず癌細胞の治療および／または予防にも有効である。

薬理試験結果３
上記の薬理試験１〔インビトロＧＥＦアッセイ〕に記載する方法によって、上述のピリジノン化合物のスクリーニングを行った。結果を図１０に示す。表中のグラフの縦軸はＩＣ５０値の比の値を示す。黒バーはＤＯＣＫ２へのＩＣ５０値に対するＤＯＣＫ１へのＩＣ５０値を示し、白バーはＤＯＣＫ５へのＩＣ５０値に対するＤＯＣＫ１へのＩＣ５０値を示している。なお、表中にてＮＤとあるのはいずれかのＩＣ５０値が３００μＭ以上となったものである。

本発明のピリジノン化合物は、ＤＯＣＫ阻害剤（ＧＥＦ阻害剤）として知られるＣＰＹＰＰと同等か、それ以上のＤＯＣＫ１選択性をもってＧＥＦ阻害活性を示すことが明らかとなった。

以上の実験結果を基に、上記製造のピリジノン化合物の中から幾つかのターゲットに絞り、更なる実験を行った。

薬理試験結果４
Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−０９、ＴＳ−２８、およびＴＳ−４５の４個のピリジノン化合物を、ＣＰＹＰＰと共に再度薬理試験１〔インビトロＧＥＦアッセイ〕に供した。結果を図１１に示す。

上記４個のピリジノン化合物は、ＤＯＣＫ２およびＤＯＣＫ５に対する阻害活性よりもＤＯＣＫ１に対する阻害活性が高いことが明らかとなった。これらの化合物の中でもＴＳ−４５およびＴＳ−２８では特に高いＤＯＣＫ１選択性を有する事が明らかとなった。一方で、ＣＰＹＰＰはＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５の何れに対しても作用し、ＧＥＦ阻害に関して選択性を示さなかった。

すなわち、上記４個のピリジノン化合物はＤＯＣＫ１に対して優れた選択性を有することが明らかとなった。

薬理試験結果５
Ｔ−０７０４４４、ＴＳ−０９、ＴＳ−１６、ＴＳー２７、ＴＳ−２８、ＴＳ−４４、ＴＳ−４５、ＴＳ−４７、ＴＳ−４９、およびＴＳ−５０の１０個のピリジノン化合物を再度、薬理試験２〔細胞浸潤の阻害アッセイ〕に供した。使用したピリジノン化合物の濃度は図中に記載の通りである。結果を図１２（Ａ）に示す。

図１２では縦軸に細胞浸潤率（Ｉｎｖａｓｉｏｎ、％）を設定しているので、この数値が低ければ低いほど、優れた阻害活性を示す。上記の１０個のピリジノン化合物は、全てコントロールとして用いたＤＭＳＯと比較して顕著に癌細胞（３ＬＬ細胞）の浸潤を阻害することが明らかとなった。特に、ＴＳ−１６、ＴＳ−２８、およびＴＳ−４５は顕著に優れた阻害効果を発揮することが明らかである。

次いで、図１２（Ｂ）にＴＳ−２８およびＴＳ−４５を各種濃度で用いた場合の癌細胞の浸潤阻害活性の結果をまとめた。これによると、両ピリジノン化合物共に濃度依存的に癌細胞の浸潤を阻害する事が明らかとなった。また、図中に示すように、この阻害実験から算出したＴＳ−４５のＩＣ_５０値は３．０μＭであり、ＴＳ−２８のＩＣ_５０値は５．６μＭと、上述するＧＥＦ阻害活性を基に算出したＩＣ_５０値と同様に優れた阻害活性を示すことが明らかとなった。

更に、上述の癌細胞を３ＬＬ細胞からヒト線維肉腫由来細胞株であるＨＴ−１０８０細胞に代えて同様の実験を行った。使用したピリジノン化合物の濃度は図中に記載の通りである。結果を図１２（Ｃ）に示す。これによると、ＴＳ−４５およびＴＳ−２８は共にＨＴ−１０８０細胞の浸潤も阻害することが明らかとなった。

更に、上述の癌細胞を３ＬＬ細胞からヒト大腸癌細胞株であるＤＬＤ−１細胞株に代えて同様の実験を行った。使用したピリジノン化合物の濃度は図中に記載の通りである。結果を図１２（Ｄ）に示す。これによると、ＴＳ−４５は細胞の浸潤も阻害することが明らかとなった。

薬理試験結果６
ＴＳ−２８およびＴＳ−４５の２個のピリジノン化合物を、再度、薬理試験３〔細胞の足場非依存的な増殖の阻害実験〕に供した。結果を図１３に示す。

両ピリジノン化合物共に、濃度依存的に３ＬＬ細胞の足場依存的な増殖を阻害することが明らかとなった。

薬理試験結果７
Ｔ−０７０４４４およびＴＳ−４５の２個のピリジノン化合物を、薬理試験４〔ラッフル形成阻害実験〕に供した。結果を図１４に示す。

既に非特許文献２にて報告されているように、ＤＯＣＫ１ノックアウトマウス由来のＭＥＦ（Ｄ１ＫＯＭＥＦ）では、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅは形成されるのに対してｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅ形成には障害がある。

ＤＯＣＫ１、ＤＯＣＫ２、およびＤＯＣＫ５をメンバーとするＤＯＣＫ−Ａサブファミリー間を非選択的に阻害するＣＰＹＰＰは、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅおよびｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅの形成を共に抑制した。一方で、Ｔ−０７０４４４を初めとした本発明のピリジノン化合物では、ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｒｕｆｆｌｅの形成はコントロールと同程度に起こるのに対して、ｄｏｒｓａｌｒｕｆｆｌｅの形成が著しく抑制された。これは上記のＤ１ＫＯＭＥＦと同じ傾向の結果である。

したがって、本発明のピリジノン化合物が、ＤＯＣＫ１とＤＯＣＫ５を識別しながらそのＧＥＦ活性を抑制している事が細胞レベル（インビボレベル）で明らかとなった。

薬理試験結果８
ＴＳ−２８およびＴＳ−４５の２個のピリジノン化合物を、薬理試験５〔マクロピノサイトーシスの阻害実験〕に供した。結果を図１５に示す。

ＴＳ−２８、およびＴＳ−４５は濃度依存的に、３ＬＬ細胞、およびＨＴ-１０８０細胞のマクロピノサイトーシスを阻害することが明らかとなった。上述のように癌細胞はマクロピノサイトーシスによって細胞外から代謝成分となるアミノ酸などを積極的に取り込んで、細胞そのものの維持および／または増殖を行っていると考えられるため、これを抑制する効果を発揮する本発明のピリジノン化合物は、癌の治療および／または予防に有用である。

薬理試験結果９
ＴＳ−２８およびＴＳ−４５の２個のピリジノン化合物を、薬理試験６〔Ｔリンパ球の遊走性への評価〕および薬理試験７〔リンパ球の生存性への影響〕を確認する実験に供した。結果を図１６に示す。

図中の（Ａ）に示すようにＴＳ−２８およびＴＳ−４５はＣＣＬ２１の刺激を行ったＴ細胞の遊走には何ら影響を与えないことが明らかとなった。このこと本発明のピリジノン化合物がＤＯＣＫ２のＧＥＦ活性に影響を与えるならば、図中の、Ｄ２ＫＯに示すようにＤＯＣＫ２のノックアウトマウス由来のＴ細胞の遊走と同様の挙動を示すはずであるが、そうではないことから、ＤＯＣＫ１選択的にＧＥＦ活性を阻害する事を細胞レベル（インビボレベル）で示している。

よって、本発明のピリジノン化合物は、副作用の少ない抗癌剤の有効成分として用いられることが明らかとなった。

また、図中の（Ｂ）に示すように、Ｔ細胞の生存性にも何ら影響を与えないことが明らかであった。このことからも、本発明のピリジノン化合物は、副作用の少ない抗癌剤の有効成分として用いられる。

薬理試験結果１０
本発明のピリジノン化合物としてＴＳ−４５を薬理試験８〔マウスメラノーマ細胞の肺転移阻害実験〕に供した。結果を図１７に示す。

図１７の（Ｂ）に示す結果から、マウスに投与したメラノーマ細胞が肺に転移する数を、顕著に阻害することが明らかとなった。よって、本発明のピリジノン化合物は、癌細胞の転移抑制効果を発揮することが明らかとなった。また、図１７の（Ｃ）に示す結果から、マウスへの投与量が０．２ｍｇ程度で、肺への転移数を約２０％程度にできることも見いだした。そして、図１７の（Ｄ）に示す結果から、マウスの体重はＴＳ−４５の投与にもその投与量にも影響されないことが明らかとなった。

従って、ＴＳ−４５は副作用の少ない抗癌剤、特に転移性癌の、治療または予防効果を奏する優れた化合物であることが明らかとなった。

Claims

下記の工程１および工程２を含む抗癌剤の有効成分をスクリーニングする方法；
１ＤＯＣＫ１のＤＨＲ−２ドメイン、ＤＯＣＫ２のＤＨＲ−２ドメイン、およびＤＯＣＫ５のＤＨＲ−２ドメインと、被験物質とを接触させる工程１、
２被験物質の中から、ＤＯＣＫ１のＤＨＲ−２ドメインによるＧＥＦ活性を、ＤＯＣＫ２のＤＨＲ−２ドメインによるＧＥＦ活性、およびＤＯＣＫ５のＤＨＲ−２ドメインによるＧＥＦ活性よりも強く阻害する物質を選択する工程２。
下記の工程１および工程２を含む抗癌剤の有効成分をスクリーニングする方法；
１被験物質を細胞に添加する工程１、
２工程１にて添加した被験物質の中から、細胞のＤＯＣＫ１の機能を、ＤＯＣＫ２の機能およびＤＯＣＫ５の機能よりも強く阻害する物質を選択する工程２。
工程２において、ＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、被験物質を添加した細胞におけるＤＯＣＫ１のＧＥＦ活性を、ＤＯＣＫ２のＧＥＦ活性およびＤＯＣＫ５のＧＥＦ活性よりも強く阻害することである、請求項２に記載の方法。
工程１にて添加される細胞が、浸潤性を有する細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞の浸潤性を阻害することである、請求項２に記載の方法。
工程１にて添加される細胞が非免疫系細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のペリフェラルラッフルの形成には影響せず、且つドーサルラッフルの形成を抑制することである、請求項２に記載の方法。
工程１にて添加される細胞が免疫細胞であって、工程２にてＤＯＣＫ１の機能を阻害することが、前記細胞への被験物質の添加後の、当該細胞のＤＯＣＫファミリーに属するＤＯＣＫ１以外のタンパク質による遊走応答には影響しないことである、請求項２に記載の方法。