JP2017505428A - 診断及び治療の方法 - Google Patents

Abstract

本発明は一般に、慢性疲労症候群の発症又は進行を診断及び／又はモニターする方法に関する。詳細には、本発明は、対象哺乳動物又は、前記哺乳動物に由来する生体試料のアクチビンβＢ発現レベルの分析によって、慢性疲労症候群の発症又は進行の診断及び／又はモニターする方法に関する。これは単量体型又は二量体型のどちらかにおけるアクチビンβＢをスクリーニングすることにより達成できる。さらに、フォリスタチン及びアクチビンＡレベルに対するアクチビンβＢの二量体型の比率が有用な診断指標をも提供する。関連する態様では、アクチビンＢの機能レベルを下方制御することによって、慢性疲労症候群の治療方法を提供する。

Description

本発明は一般に、慢性疲労症候群の発症又は進行を診断及び／又はモニターリングする方法に関する。より詳細には、本発明は、哺乳動物被検体又は前記哺乳動物に由来する生体試料のアクチビンβ_Ｂ発現レベルの分析によって、慢性疲労症候群の発症又は進行の診断及び／又はモニターリングする方法に関する。これは単量体型又は二量体型のどちらかのアクチビンβ_Ｂをスクリーニングすることによって達成できる。さらに、フォリスタチン及びアクチビンＡレベルに対するアクチビンβ_Ｂの二量体の比率は、有用な診断指標をも提供する。関連する態様では、アクチビンＢの機能レベルを下方制御することによって、慢性疲労症候群の治療方法を提供する。

本明細書における著者によって引用される刊行物の文献目録の詳細は、本明細書の末尾にアルファベット順に集められる。

本明細書におけるいかなる先行文献（若しくはそれに由来する情報）の参照、又はいかなる周知事項の参照は、いかなる先行文献（若しくはそれに由来する情報）、又は周知事項が、当該努力傾注分野において、本明細書に関連する一般的な共通の知見の一部を形成することを示唆する同意又は承認又はいかなる形式ではなく、かつそのように受け取られるべきではない。

慢性疲労症候群は、成人において最低６ヵ月間（及び小児又は青年において３ヵ月間）持続する持続的な疲労及び他の特定症状により特徴づけられる、健康状態を著しく衰弱させる群の一般名である。その疲労は休息によって著しく軽減されず、そして他の健康状態が原因で発生しない。

慢性疲労症候群の症状は、労作後の倦怠感；睡眠障害、広範囲にわたる筋肉痛及び関節痛、咽頭痛、以前に経験したことのないタイプの頭痛、認知障害、慢性及び重度の精神的及び肉体的疲労、並びに以前健常で活発であったヒトにおける他の特徴的症状を含む。筋力低下、光、音及び臭いに対する感度の上昇、起立性調節障害、消化器障害、うつ状態、リンパ節の痛み及び腫張、心臓及び呼吸障害を含む、さらなる症状も報告され得る。これらの症状が併存症状態を表すかどうか、又はこれらの症状が慢性疲労症候群の基礎にある病因によって提供されるかどうかは不明である。慢性疲労症候群の症状は、ヒトそれぞれの数、タイプ及び重症度により変化する。慢性疲労症候群の患者の生活の質は極めて妥協を有する可能性がある。

疲労は多くの疾病の一般的な症状であるが、慢性疲労症候群は比較的まれである。罹患率の推定値は、成人１００，０００人ごとに慢性疲労症候群の症例は７〜３，０００で変化する；国民健康機関は、１００万人を超えるアメリカ人、及びイギリスで約２５万人の人々が、慢性疲労症候群に罹患していると推定している。慢性疲労症候群は、男性よりもしばしば女性に生じ、小児及び青年の間ではより普及していない。

慢性疲労症候群の主要な特徴は、労作後倦怠感（「クラッシュ」又は「ペイバック」）として周知の疲労タイプである。調査では、慢性疲労症候群に罹患する人々は、他の人とは活動又は運動に対して異なる生理反応を有することが明らかとなっている。これは、いかなる形の労作後の異常な疲労、及び他の症状の悪化を含む。その反応は約２４時間後に遅れる可能性がある。労作の量とタイプにより、労作後倦怠感が数日続く、又は重篤な再発が数週間、数カ月又は数年でさえも続く結果になる可能性がある。

慢性疲労症候群に罹患している人々は、以前は当然のことと考えていた活動が、彼らの健康を莫大に損なうことを見出す。例えば、短い散歩、友人とのコーヒー、子供を学校へ支度させること又は仕事へ行くために電車に乗ることなど、以前は疲労を生じさせなかったことの後に、異常な疲れが続き、無くなるのに通常よりも長い時間がかかる。

慢性疲労症候群は非常に複雑であり、多系統な慢性疾患であるため、多くの他の症状が発生し、それらは診断のために必要である。
これらは、下記リスト：
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）
・睡眠障害
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛
・血圧低下、めまい感又は蒼白
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化
・泌尿器系の問題
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚
・著しい体重変化−極端な減少又は増加
・温度変化に対処できないこと
を含む。

慢性疲労症候群が健康、幸福及び生産性を真の脅威にさらしているという合意があるにも関わらず、様々な医師団体、研究者及び患者擁護団体は、異なる命名法、診断基準、病因学的仮説及び治療を促進し、結果的に障害の多くの態様をめぐる論争をもたらす。

したがって、慢性疲労症候群を特徴づける広範囲の非特定症状が主因で、決定的な病因がない場合、慢性疲労症候群の確定的な診断は困難であり時間がかかる。人間が６ヵ月間連続的に症状を有した後に、医師は他の全ての疾患を除外することによって診断を行うため、この事実自体は、慢性疲労症候群を患う個人へ著しいストレスを与える。定期的な健康診断の個人の結果はしばしば正常であるが、追加の診断は異常性を示す。同様に、慢性疲労症候群の治療は非特定的で中程度の有効性である。通常、患者は、エネルギー管理戦略と同様に、１つ又はそれ以上の心理療法及び理学療法によって治療される。慢性疲労症候群の他の治療は提案されているが、それらの有効性は確認されていない。症状の緩和が見込まれる薬剤は、抗うつ剤及び免疫調節剤を含む。抗うつ剤の証拠は混同され、それらの使用は未だに議論の余地がある。多くの慢性疲労症候群患者は薬剤、特に鎮静剤に敏感であり、何人かの患者は、化学物質及び食物過敏症を報告する。慢性疲労症候群患者は、特に心理学的−精神医学的な介入に、低いプラセボ反応を示し、それは恐らく患者の予想のためである。

したがって、単一で正確な診断試験、及びさらにより有効な治療体制を発達させることが極めて必要である。本発明に至るまでの研究で、慢性疲労症候群を罹患した患者におけるアクチビンβ_Ｂ（別名インヒビンβ_Ｂ）レベルの増加が認定された。同様のことは、アクチビンβ_Ａ（別名インヒビンβ_Ａ）では生じなかった。したがって、このことは、特にいくつかの状態の特徴になり得る全身症状を示す患者において、慢性疲労症候群をより速く診断するために、信頼性が高く、特異的な手段を提供する。この目的で、アクチビンβ_Ｂのレベルは、単量体型又は二量体形型（アクチビンＢ）において、又はアクチビンＡ又はフォリスタチンの比率の状況において、簡便にスクリーニングできる。さらに、アクチビンβ_Ｂの連続的な増加に特徴づけられる慢性疲労症候群の重症度の増加と共に、アクチビンβ_Ｂの増加のレベルは状態の重症度をも示す。

関連する態様で、慢性疲労症候群患者のアクチビンＢレベルの減少が、代替治療体制を提供することも認定された。したがって、このことは、慢性疲労症候群を診断及び／又はモニターするためのより正確なツール、及び、使用又は既存の診断方法の代わり又はそれと共に使用する追加のツールの両方を提供する点において、慢性疲労症候群の症状を示す患者をより効率的に処置する手段を今、提供する。さらに、既存の治療体制を、単独で、又は、１つ若しくはそれ以上との併用で使用するために、追加的な慢性疲労症候群治療体制は開発されている。

本明細書及び下記に続く請求項を通じて、文脈上別段の解釈を要する場合を除き、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、そして「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのバリエーション、は指定された整数若しくはステップの包含、又は整数ら若しくはステップらの群を意味し、他のいかなる整数若しくはステップ、又は整数ら若しくはステップらの群の除外を意味しないことが理解されるであろう。

本明細書において、用語「に由来する」は、特定の整数又は整数の群が、特定の種に起源を有することを示すが、必ずしも特定の源から直接的に得られたわけではない。さらに本明細書において、文脈上、明らかな指示のない限り、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、複数対象を含む。

別段の定義のない限り、本願明細書で使用される全ての専門用語及び科学用語は、本発明に属する当業者によって一般的に理解される用語と同様の意味を有する。

本発明の一態様は、哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法に指向し、前記方法が、哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料のアクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルをスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルが正常レベルに対しての増加が、慢性疲労症候群であることを示す。

他の態様では、哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法が提供され、前記方法が、哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料のアクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルをスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルの正常レベルに対する増加が、慢性疲労症候群であることを示す。

さらなる態様では、哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法が提供され、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルをスクリーニングすることを含み、前記比率のレベルの、正常レベルに対しての増加が、慢性疲労症候群であることを示す。

他のさらなる態様では、哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法が提供され、哺乳動物が、下記リスト：
・労作後倦怠感；
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
・睡眠障害；
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
・血圧低下、めまい感又は蒼白；
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症；
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
・泌尿器系の問題；
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
・著しい体重変化−極端な減少又は増加；
・温度変化に対処できないこと；
・頭にかかったもや；
・直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
・食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギー又は過敏症；
・腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
・悪寒及び寝汗
・視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
・うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
から選択される１つ又はそれ以上の症状を示し、
前記方法が前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルをスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率の、正常レベルに対する増加が、慢性疲労症候群であることを示す。

本発明のさらなる他の態様は、哺乳動物において慢性疲労症候群の進行をモニターする方法に関し、前記方法が前記哺乳動物における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルの調節をスクリーニングすることを含む。

本発明のまた他の態様は、哺乳動物において慢性疲労症候群の進行をモニターする方法を提供し、前記方法が前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルの調節をスクリーニングすることを含み、以前得られたレベルと比較して、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率が増加していることが前記状態の悪化を示し、前記レベルの減少が前記状態の好転を示し、そして前記レベルに対して変化のないことが前記状態の重症度に著しい変化がないことを示す。

本発明のまた他のさらなる態様では、哺乳動物において慢性疲労症候群の重症度を評価する方法が提供され、前記方法が前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルを特定することを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率が高ければ高いほど、慢性疲労症候群がより重症である。

これらの態様によると、ある特定の実施形態において、前記方法が、
（ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上の調節をスクリーニングすることを含む。

関連する態様では、哺乳動物における慢性疲労症候群の治療方法が提供され、前記方法が前記哺乳動物のアクチビンＢを下方制御することを含む。

またさらなる態様では、哺乳動物における慢性疲労症候群の治療方法が提供され、哺乳動物が、
・労作後倦怠感；
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
・睡眠障害；
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
・血圧低下、めまい感又は蒼白；
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症；
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
・泌尿器系の問題；
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
・著しい体重変化−極端な減少又は増加；
・温度変化に対処できないこと；
・頭にかかったもや；
・直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
・食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギー又は過敏症；
・腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
・悪寒及び寝汗
・視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
・うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
から選択される１つ又はそれ以上の症状を示し、前記方法が前記哺乳動物におけるアクチビンＢの機能レベルを下方制御することを含む。

慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者において、アクチビンＡではなく、アクチビンＢのレベルが増加していることを示すグラフ表示である。慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者におけるアクチビンＡ（ＡｃｔＡ、Ａ）及びアクチビンＢ（ＡｃｔＢ、Ｂ）の血しょう濃度を、制御されたグループ（ＮＲグループ）と比較した。データは患者の性別によっても表され、女性におけるアクチビンＡ及びアクチビンＢはＣ及びＤで示され、男性はＥ及びＦで表される。データは平均±ＳＥＭとして提示される。

慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者において、フォリスタチンレベルが減少していることを示すグラフ表示である。（Ａ）慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者におけるフォリスタチンの血しょう濃度を、制御されたグループ（ＮＲグループ）と比較した。女性（Ｂ）及び男性（Ｃ）のＣＦＳ患者の血しょうフォリスタチン濃度を、同様の性別制御と比較した。データは平均±ＳＥＭとして提示される。

慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者において、アクチビンのフォリスタチンに対する比率、及びアクチビンＢのアクチビンＡに対する比率が増加していることを示すグラフ表示である。慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者におけるアクチビンＡ：フォリスタチン（ＡｃｔＡ：Ｆｓｔ、Ａ）；アクチビンＢ：フォリスタチン（ＡｃｔＢ：Ｆｓｔ、Ｂ）比率及びアクチビンＢ：アクチビンＡ（ＡｃｔＢ／ＡｃｔＡ）比率を、制御されたグループ（ＮＲグループ）と比較した。データは平均±ＳＥＭとして提示される。

アクチビンＢレベルを、慢性疲労症候群の重症度（ｂ）と比較して示すグラフ表示である。図の加重起立時間（ＷＳＴ）は患者のＣＦＳ重症度の優れた評価を提供し、彼らの疲労状態（ａ）によって、ＣＦＳ患者を３つのグループに分類するために用いられる。分類０：最も小さい重症度（ｎ＝２）＋健常対照群（ｎ＝１７）；障害０〜２において全員が２０分間起立した。分類１：中程度の重症度（ｎ＝３０）；障害３〜９において全員が２０分間起立した。分類２：最も大きい重症度（ｎ＝１５）；障害１０〜１４において全員が２０分間を超えて起立した。データは平均±ＳＥＭとして提示される。

発明の詳細な説明

本発明は、アクチビンβ_Ｂの増加レベルが、慢性疲労症候群の存在及び重症度の正確で高感度な指標であるという認定に、部分的に基づく。最も驚くべきことに、アクチビンＡのレベル及びいくつかの炎症性のマーカーのレベルが変わらない場合、アクチビンβ_Ｂのレベルが慢性疲労症候群患者において、増加することが見いだされている。したがって、本発明は、アクチビンβ_Ｂの相対的なレベルに基づいて慢性疲労症候群を高感度に及び正確に評価する手段を提供する。例えばアクチビンＢホモ二量体などの状況で、アクチビンβ_Ｂのレベルは、その単量体型又は二量体型においてアクチビンβ_Ｂに関して評価することができる。またさらに、アクチビンβ_Ｂのレベルが選択的に増加するため、特にアクチビンＡに関連して、１つは、アクチンＢ_Ｂに関連する比率、例えば、アクチビンＢ：フォリスタチン比率、及びアクチビンＢ：アクチビンＡ比率の変化のためにスクリー二ングすることもできる。したがって、この発見は、慢性疲労症候群の重症度を検出すること、モニターすること及び認定することに関連する、高感度な及び有益な分析の発展を推進する。関連する態様では、慢性疲労症候群患者におけるアクチビンＢの機能レベルの減少は、単独でも又は他の治療様式と併用しての使用のための追加の治療体制を提供することを特定する。

したがって、本発明の一態様は、哺乳動物における慢性疲労症候群の検出方法に関し、前記方法が前記方法前記哺乳動物又前記哺乳動物に由来する生体試料の、アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現をスクリーニングすることを含む。

「アクチビンβ_Ｂ」への言及は、アクチビンβ_Ｂの全ての型、及びその断片、誘導体、変異体又は多様体への言及として理解されるべきである。「アクチビンβ_Ｂ」は、「アクチビンβ_Ｂサブユニット」としても互換的に言及される。アクチビンβ_ＢｍＲＮＡの選択的スプライシング又はアクチビンβ_Ｂの変異体若しくは多形体から生じることができる、いかなるアイソフォームの言及も含まれることが理解されるべきである。「アクチビンβ_Ｂ」への言及は、制限することを目的とせず、アクチビンβ_Ｂサブユニット遺伝子によってコード化されるいかなるタンパク質、例えば発生可能な前駆体型のようないかなるサブユニットポリペプチドをも含むアクチビンβ_Ｂの全ての型の言及も含むものとして読むべきである。本発明は、いかなる理論又は作用様式にも制限されず、アクチビンβ_Ｂ単量体は、他のアクチビン関連の単量体と結合し、二量体を形成する。例えば、周知のアクチビンβ_Ｂの二量体型は、ホモ二量体アクチビンＢ（β_Ｂ−β_Ｂ）及びヘテロ二量体アクチビンＡＢ（β_Ａ−β_Ｂ）、アクチビンＢＣ（β_Ｂ−β_Ｃ）、アクチビンＢＤ（β_Ｂ−β_Ｄ）又はアクチビンＢＥ（β_Ｂ−β_Ｅ）タンパク質を含む。

ある実施形態において、前記アクチビンβ_Ｂは、単量体型でスクリーニングされる。

他の実施形態において、前記アクチビンβ_Ｂは、ホモ二量体型でスクリーニングされ、アクチビンＢとする。

この実施形態によると、哺乳動物における慢性疲労症候群の検出方法が提供され、前記方法が前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルをスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルの、正常レベルに対しての増加が、慢性疲労症候群であることを示す。

上記に詳述されるように、アクチビンβ_Ｂ単量体又はホモ二量体のレベルを測定することに加えて、１つはアクチビンＡ（レベルは基本的に不変のままである）及びフォリスタチンに対する、アクチビンＢ又はアクチビンβ_Ｂの比率の変化をスクリーニングすることもできる。

したがって、さらなる実施形態において、哺乳動物における慢性疲労症候群を検出する方法が提供され、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又は両方のレベルをスクリーニングすることを含み、前記比率のレベルの正常レベルに対しての増加が、慢性疲労症候群であることを示す。

本発明は、いかなる理論又は作用様式にも制限されず、慢性疲労症候群（ＣＦＳ）は、成人において最低６ヵ月間（及び小児又は青年において３ヵ月間）持続する持続的な疲労及び他の特定症状により特徴づけられる、健康状態の一般名である。その疲労は休息によって著しく軽減されず、そして他の健康状態が原因で発生しない。慢性疲労症候群の症状は、下記リスト：
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）
・睡眠障害
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛
・血圧低下、めまい感又は蒼白
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化
・泌尿器系の問題
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚
・著しい体重変化−極端な減少又は増加
・温度変化に対処できないこと
を含むが、これに限定されない。

他の一般的な症状は下記リスト：
・頭にかかったもや（精神的なもやのような感覚）；
・直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
・食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギー又は過敏症；
・腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
・悪寒及び寝汗；
・視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；
・うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
を含む。

したがって「慢性疲労症候群」への言及は、労作後倦怠感によって特徴づけられる病状への言及として理解させるべきである。この状態は１つ又はそれ以上の上記で詳述した追加の症状とも共に現れる。しかし、それらの症状は、さらに時間ごとの短い期間でさえ変動すると理解されるべきである。さらに、患者はいくつかの、しかし全てではないこれらの症状を示す。したがって、患者の群によって示される症状は患者によってかなり可変的である。１つの特定の実施形態において、前記慢性疲労症候群は、下記の３つの基準：
１．労作とは無関係の、休息によって著しく軽減されず、そして他の健康状態が原因ではない、６カ月間連続した又はそれより長い期間の重度の疲労の新規発症。
２．以前の活性レベルの著しい減少を引き起こす疲労。
３．６カ月又はそれ以上長く続く下記のリスト：
・記憶障害又は集中力の低下
・肉体的又は精神的労作が「極度で遷延性の疲労及び不調」をもたらす、労作後倦怠感；
・睡眠障害；
・筋痛（筋肉痛）
・多関節の疼痛（関節痛）
・新しい種類又はより大きい重症度の頭痛
・高頻度の又は再発の咽喉痛
・圧痛のあるリンパ節（頸部又は腋窩）
によって特徴づけられる。

他の態様では、哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法が提供され、哺乳動物が、下記リスト：
・労作後倦怠感；
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
・睡眠障害；
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
・血圧低下、めまい感又は蒼白；
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症；
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
・泌尿器系の問題；
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
・著しい体重変化−極端な減少又は増加；
・温度変化に対処できないこと；
・頭にかかったもや；
・直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
・食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギー又は過敏症；
・腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
・悪寒及び寝汗
・視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
・うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
から選択される１つ又はそれ以上の症状を示し、
前記方法が前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルをスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率の正常レベルに対しての増加が慢性疲労症候群であることを示す。

いかなる場合でも、本発明の制限をせず、慢性疲労症候群は最も一般的に使用される表記であるが、この病状は、アクレリ病、筋痛性脳脊髄炎、慢性疲労免疫性機能障害症候群、アイスランド病、慢性伝染性単核球症、流行性筋痛性脳脊髄炎、筋痛性脳脊髄炎、ウイルス感染後疲労症候群、縫線核脳症、ロイヤルフリー病、線維筋痛症、タパヌイインフルエンザを含む他の名前でも周知である。しかしこれらに限定されない。

本明細書で用いられる用語「哺乳動物」として、ヒト、霊長類、家畜動物（例えばウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ロバ）、実験試験用動物（例えばマウス、ネズミ、モルモット）、伴侶動物（例えばイヌ、ネコ）、及び捕獲性の野生動物（例えばカンガルー、シカ、キツネ）が挙げられる。好ましくは、哺乳動物は、ヒト又は実験試験用動物である。さらに好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。

本発明の方法は、患者のアクチビンβ_Ｂ単量体又は二量体のレベルと、その分子の正常レベルとの相関性に基づく。「正常レベル」は、慢性疲労症候群を呈しない被検体に相当する生体試料のアクチビンβ_Ｂのレベルである。いかなる場合でも本発明を制限せずに、ある標準的な個人の全身レベルのホモ二量体をスクリーニングする限り、正常な個人におけるアクチビンＢの全身レベルは低いと通常考えられる（Ｌｕｄｌｏｗ他、２００９）。

関連した態様では、慢性疲労症候群の患者において、アクチビンＡではなく、アクチビンＢが選択的に増加し、アクチビンＢ：アクチビンＡの比率が増加したと特定されている。またさらに、慢性疲労症候群を呈する患者において、アクチビンＢのレベルが選択的に増加していることに加え、これらの患者のフォリスタチンのレベルが減少することも特定されている。したがって、アクチビンＢ：フォリスタチンのレベルの比率は、これらの患者において著しく増加する。本発明をいかなる理論又は作用様式にも制限せず、これらの比率は、ｍＲＮＡレベルを用いて又はタンパク質レベルを用いて算出できる。このため、慢性疲労症候群患者において、アクチビンＢレベルは増加し、フォリスタチンレベルは減少するため、フォリスタチンに対するアクチビンＢの比率は特に著しく増加する。

正常レベルは、分析されている試料に相当する生体試料を用いて特定することができる。しかしその試料は慢性疲労症候群を呈さない個人から分離されている。しかし、健常人から得られる個人の又は集団の結果を反映する標準結果に対する試験結果を分析することが、最も簡便であることが理解されることになる。対象試験試料である、単一の生体試料の採取及び分析を必要とするキットの設計を可能にするので、後者の分析の形が、実際には好ましい分析方法である。正常レベルを提供する標準結果は、当業者に周知である任意の適切な手段により算出できる。例えば、アクチビンβ_Ｂ（単量体型又は二量体型のどちらか）のレベルに関して、正常生体試料の人口が評価でき、それにより、標準値又は全ての将来分析される試験試料に対する値の範囲を提供する。正常レベルは、特定のコホート及びそのコホートに由来する試験試料に関して、使用の被検体から特定できることも理解されるべきである。したがって、例えば年齢、性、民族性又は健康の状態などの特徴に関して異なるコホートに、相当する多くの標準値又は範囲を決定できる。前記「正常レベル」は、分散したレベル又はレベルの範囲である。

用語「調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）」は、正常基準レベル（又は正常基準レベル範囲）、又は非検体から認定される初期のアクチビンβ_Ｂのレベル結果に対するアクチビンβ_Ｂの単量体又は二量体レベルの増加及び減少を表す。正常基準レベルは、慢性疲労症候群を経験しない被検体の生体試料又は被検体のグループに対するアクチビンβ_Ｂ単量体又は二量体レベルである。好ましい実施形態において、前記正常基準レベルは、本発明の方法によってスクリーニングされる被検体に関連するコホートの１つ又はそれ以上の被検体から認定されるレベルである。「関連するコホート」によってとは、スクリーニングの対象である被検体の特徴でもある１つ又はそれ以上の特徴によって特徴づけられるコホートを意味する。これらの特徴として、年齢、性、民族性又は健康の状態が挙げられるが、これに限定されるものではない。

好ましい方法は、上記で詳述のように慢性疲労症候群を診断するためにアクチビンβ_Ｂ単量体又は二量体のレベル又は比率の増加を検出することだが、これらのレベルの減少の検出は一定の状況の下で望まれる場合がある。例えば、治療処置の過程で、慢性疲労症候群患者の状態を改善するためにモニターすることにより、臨床医は治療体制の有効性を評価できる。本発明の本態様も、慢性疲労症候群の進行をモニターすることを可能にする。「進行」によってとは、慢性疲労症候群の進行中の性質（例えば慢性疲労症候群の重症度レベルの改善、維持、悪化又は変化）を意味する。この目的のために、慢性疲労症候群の重症度が増加するにつれて、アクチビンβ_Ｂのレベルが連続的に増加することも認定された。したがって、このことは、例えば診断又は治療中などの任意の時点で患者により経験される慢性疲労症候群の重症度に関連してされる評価を可能にする。

したがって、本発明の他の態様は、哺乳動物の慢性疲労症候群の進行をモニターする方法に関し、前記方法が前記哺乳動物における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルの調節を、スクリーニングすることを含む。

本発明の本態様に従い、アクチビンβ_Ｂの単量体又は二量体のレベル又は比率が、モニターされている患者から以前得られた、１つ又はそれ以上のレベルに対して評価されるであろうと理解されるべきである。アクチビンβ_Ｂのレベル又は比率が初期に得られたレベルに対して減少する際、哺乳動物の状態は改善されている。しかし、アクチビンβ_Ｂのレベル又は比率が同じ又はより増加している場合、慢性疲労症候群患者の状態は改善されていない。

したがって、本発明のある実施形態は、哺乳動物において慢性疲労症候群の進行をモニターする方法を提供し、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルの調節をスクリーニングすることを含み、以前得られたレベルに対して前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率の増加が、前記状態の悪化を示し、前記レベルの減少が前記状態の改善を示し、そして前記レベルに対して変化のないことが、前記状態の重症度に著しい変化がないことを示す。

さらなる他の態様において、哺乳動物の慢性疲労症候群の重症度を評価する方法が提供され、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
（ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
（ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現
（ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
（ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は
（ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
の１つ又はそれ以上のレベルを決定することを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率が正常レベルに対して高ければ高いほど、慢性疲労症候群がより重症であると評価する。

本発明は、いかなる理論または作用様式にも制限されず、患者の慢性疲労症候群の重症度における変化は、患者のために初期に得られた結果、又は標準値の範囲に対してアクチビンβ_Ｂの単量体又は二量体のレベル又は比率の測定を比較することにより簡便に認定することができる。

他の実施形態において、分析の対象である哺乳動物は、下記リスト：
・労作後倦怠感；
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
・睡眠障害；
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
・血圧低下、めまい感又は蒼白；
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症；
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
・泌尿器系の問題；
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
・著しい体重変化−極端な減少又は増加；
・温度変化に対処できないこと；
・頭にかかったもや；
・直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
・食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギー又は過敏症；
・腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
・悪寒及び寝汗
・視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
・うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
から選択される１つ又はそれ以上の症状を示す。

「生体試料」の言及は、例えば、これに限定されないが、細胞材料、組織生検標本又は体液（例えば脳脊髄液（例えば全血、血しょう又は血清）又は尿）のような、哺乳動物に由来する生物学的材料のいかなる試料の言及として、理解されるべきである。本発明の方法にしたがって試験される生体試料は、直接試験されてもよいし、又は試験の前にいくつかの治療の形を必要としてもよい。例えば、分析の前に、全血試料から血清又は血しょうを分離することである。生体試料が液状の形態ではない程度まで（例えば頬スワッブ）、（このような形状が試験に必要とされる場合）試料を結集させるために、例えば緩衝剤のような試薬を追加することを必要としてもよい。

生体試料は直接試験するか、又は、生体試料に存在する核酸成分の全部若しくは一部又はタンパク質は試験よりも前に分離することができる。さらなる他の実施例において、試料は分析の前に部分的に浄化又は濃縮することができる。もし、ｍＲＮＡが分析の対象である場合、例えば、生体試料が非常に多様な細胞集団を含む程度まで、特定の対象の亜集団を選び抜くことが望ましい場合がある。例えば生ウイルスの不活性化又はゲルの中で続けることなど、試験の前に標的核酸酸又はタンパク質性分子を前処理することは、本発明の範囲内である。生体試料が採ったばかりであること、又は冷凍などにより貯蔵することができること、若しくはそれとは反対に、試験の前に例えば培養することにより処理することができることは理解されるべきである。

本願明細書で開示される方法による、試験に最も適している試料のタイプの選択が、状況の性質に左右されるであろう。

上記で詳述されるように、「発現」の言及は核酸分子の転写及び／又は翻訳の言及として理解されるべきである。「ＲＮＡ」の言及は、例えば一次ＲＮＡ又はｍＲＮＡなどの、いかなる形のＲＮＡを含む言及であることは理解されるべきである。本発明は、いかなる理論または作用様式にも制限されず、増加又は減少したＲＮＡ合成を引き起こす遺伝子転写の修飾は、タンパク質産物へのこれらのなどのＲＮＡ転写（例えばｍＲＮＡ）の翻訳とも相関する。したがって、本発明は慢性疲労症候群の指標として調節されたアクチビンβ_Ｂのレベル又はパターンのスクリーニングに関連する検出方法論の範囲にも及ぶ。１つの方法がｍＲＮＡ転写及び／又は対応するタンパク質産物のスクリーニングであるが、本発明はこの点に関して制限されず、例えば一次ＲＮＡ転写物などの他のいかなる形の発現産物のスクリーニングにまで及ぶことは理解されるべきである。

用語「タンパク質」は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質（タンパク質断片を含む）を含むことが理解されるべきである。タンパク質は、グリコシル化又は非グリコシル化が可能であり、及び／又はアミノ酸、脂質、炭水化物、又は他のペプチド、ポリペプチド又はタンパク質のようなタンパク質に溶解、結び付ける、結合する又は関連する他の分子の範囲を含むことができる。本願明細書における「タンパク質」の言及は、アミノ酸配列を含むタンパク質、及びアミノ酸、脂質、炭水化物又は他のペプチド、ポリペプチド又はタンパク質などのような他の分子と関連するタンパク質を含む。

「断片」の言及は、被検体核酸分子又はタンパク質の一部の言及として理解されるべきである。これらが本質的に不安定分子であり、高いレベルの酵素を発現する試料において、スクリーニング可能なため、これは調節されたＲＮＡレベルのスクリーニングに特に関連する。この場合、被検体ＲＮＡは、分解又は、断片化される可能性が高い。したがって、被検体ＲＮＡ分子の断片を実際に検出することができ、その断片は、最適な特定のプローブの使用により確認される。

当業者に周知のいかなる適切な方法によっても、アクチビンβ_Ｂ単量体又は二量体のレベル、アクチビンβ_Ａ単量体又は二量体、若しくはフォリスタチンのスクリーニング方法は達成できる。この点に関して、「哺乳動物における」タンパク質及び／又は遺伝子のレベルのスクリーニングの言及は、哺乳動物の関連する組織におけるアクチビンβ_Ｂ単量体又は二量体の発現レベルに関連する情報を提供すると考えられるいかなる適切な技術の使用の言及を意図することが理解されるべきである。後述するように、これらのスクリーニング技術は、生体内スクリーニング技術、前記哺乳動物から抽出される生体試料に適用される生体外技術の両方を含む。このような生体外技術は、著しくより単純化された及び単調な性質のため、好まれる可能性が高い。

β_Ｂ単量体又は二量体のレベル又は比率、若しくはアクチビンＢ：フォリスタチンの比率の変化をスクリーニングすることに基づくため、このような変化は、タンパク質レベル又は核酸レベルで、例えば関連するｍＲＮＡ転写レベルの増加のスクリーニングなどにより、実際にはスクリーニングできる。当業者は、いかなる与えられた状況を分析するための最適な手段を特定する。しかし、利用される可能性の高い技術の相対的な単純性のため、タンパク質性分子の状況においてスクリーニングを施行することが好まれる。それでもなお、特定の状況及び特定の生体試料の状況において、直接的に遺伝子転写を分析することは望ましい、又は有用であり得る。

上記で詳述のように、アクチビンβ_Ｂ単量体又は二量体（本明細書において「マーカー」と言及される）又はそこから由来する生体試料のレベル又は比率の変化を個々にスクリーニングする手段は、以下のような当業者にとって周知であるいかなる適切な方法により達成できるが、これらに限定されない：
（ｉ）生体内におけるマーカーの検出。組織におけるマーカーｍＲＮＡ又はタンパク質発現生成物の変化した発現レベルを開示することができる画像プローブ又は試薬の投与後に、分子画像を使用できる。分子画像（Ｍｏｏｒｅ，Ａ．，Ｂａｓｉｌｉｏｎ，Ｊ．，Ｃｈｉｏｃｃａ、Ｅ．及びＷｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒ．，ＢＢＡ，１４０２：２３９−２４９，１９８８；Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒ．，Ｍｏｏｒｅ，Ａ．，Ｐｈ．Ｄ．，Ｍａｈｍｏｏｄ−Ｂｈｏｒａｄｅ，Ｕ．，Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｅ，Ｈ．，Ｃｈｉｏｃｃａ，Ｅ．Ａ．，Ｂａｓｉｌｉｏｎ，Ｊ．Ｐ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，６：３５１−３５５，２０００）は、例えばＸ線、コンピューテッドトモグラフィ（ＣＴ）、ＭＲＩ、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）又は内視鏡検査などの「古典的な」画像診断法を現在使用し、視覚化されるマクロ特性と相関する分子発現の生体内画像である。
（ｉｉ）蛍光その場ハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ）による細胞内における、又は、例えば定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ｑＰＣＲ）、又は競合ＲＴ−ＰＣＲ製品のフローサイトメトリー測定（Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ，Ｎ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｔ．，Ｗｅｔｚｌｉｃｈ，Ｓ．及びＧｏｈｄｅ，Ｗ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４８：９ １３９８−１４０５，２００２）、配列技術又は等温技術を含む非ＰＣＲ増幅技術などの技術による細胞からの抽出物内における、ｍＲＮＡ発現の上方制御の検出。
例えば、マーカーをコード化するラベル化したポリヌクレオチドは、ＲＮＡ抽出物のノーザンブロットのプローブとして利用できる。好ましくは、動物からの核酸抽出物が、例えばＲＴ ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ又はＳＡＧＥなどの核酸増幅反応において、マーカーをコード化するポリヌクレオチドのセンス及びアンチセンス配列、またはそのフランキング配列に対応するオリゴヌクレオチドプライマーと共同で利用される。様々なオートメーション化した固相検出技術も適切である。例えば、非常に大規模の固定化プライマー配列（ＶＬＳＩＰＳ（商標））が、例えばＦｏｄｏｒ他，１９９１及びＫａｚａｌ他，１９９６などで記載されるように、核酸の検出に用いられる。上記の遺伝子技術は、当業者に周知である。
例えば、ＲＮＡ転写をコード化するマーカーを検出するために、ＲＮＡは、マーカーＲＮＡを含むと考えられる細胞試料から分離される。例えばＴＲＩＺＯＬ（商標）試薬（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ．）の使用などの、当該技術で周知の方法によって、ＲＮＡを分離できる。分離されたＲＮＡから第１鎖ｃＤＮＡを調製するために、逆転写酵素反応におけるプライマーとして、オリゴ−ｄＴ、又はランダム配列オリゴヌクレオチド、並びに特定配列オリゴヌクレオチドが使用できる。そして結果として生じる第１鎖ｃＤＮＡは、増幅された産物を産生するために、ＰＣＲ反応の特定配列オリゴヌクレオチドを用いて増幅される。
「ポリメラーゼ連鎖反応」又は「ＰＣＲ」は、米国特許第４,６８３,１９５号で記載されるように、核酸（ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ）の事前に選択された断片の量を増幅する手順又は技術に関する。通常、対象領域又はそれを超えた領域の端からの配列情報を利用し、オリゴヌクレオチドプライマーを設計する。これらのプライマーは、増幅するために、テンプレートと反対側の鎖に対して、配列において同一又は類似するであろう。ＰＣＲを使用し、全細胞ＲＮＡから転写される特定のＲＮＡ配列及びｃＤＮＡを増幅できる。一般にＭｕｌｌｉｓ他，１９８７；Ｅｒｌｉｃｈ，１９８９参照。
増幅された産物を検出するために、反応混合物はアガロースゲル電気泳動又は他の簡便な分離技術に供され、そしてマーカー特定増幅ＤＮＡの相対的な存在が検出される。例えば、マーカー増幅ＤＮＡは、特定のオリゴヌクレオチドプローブを有するサザンハイブリダイゼーションを用いて、又は、比較は周知の分子量のＤＮＡ標準を用いた電気泳動移動度の比較により検出することができる。増幅したマーカーＤＮＡの分離、浄化及び特徴づけは、ゲルから断片を削除する又は溶出させることによって（例えばＬａｗｎ他，１９８１；Ｇｏｅｄｄｅｌ他，１９８０参照）、増幅した産物を例えばｐＣＲＩＩベクター（インビトロゲン）などの適切なベクターのクローニングサイトにクローニングすること、クローン化された挿入断片を配列決定すること、及びＤＮＡ配列をマーカーの周知の配列と比較すること、により達成できる。そして、マーカーｍＲＮＡ及びｃＤＮＡの相対量を決定できる。量的又はリアルタイムＰＣＲに関して、増幅された産物はＳＹＢＲグリーンテクノロジーを使用して検出することもできる。
（ｉｉｉ）例えば、モノクローナル抗体などの免疫的に相互作用し得る分子を利用するイムノアッセイなどによる、細胞抽出物中又は血中、並びに他の適切な生体試料のマーカータンパク質レベルの質的又は量的な測定
ある実施例において、マーカー免疫的に相互作用し得る分子複合体形成の検出を求めることができる。例えば、それに結びついた、リポーター分子を有する抗体又は断片は、イムノアッセイにおいて利用できる。そのようなイムノアッセイは、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡｓ）、酵素結合抗体免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）及び免疫クロマトグラフィー技術（ＩＣＴｓ）、当業者に周知であるウエスタンブロット法が挙げられるが、これに限定されない。例えば、本発明に従って使用できる様々なイムノアッセイを開示する「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、１９９４を参照することができる。イムノアッセイは、競合アッセイを含むことができる。本発明が質的及び量的イムノアッセイを含むことが理解されるであろう。
適切なイムノアッセイ技術は、例えば米国特許第４，０１６，０４３号、４，４２４，２７９号及び４，０１８，６５３号に記載される。これらは、（従来の競合結合分析と同様に）単一サイトのアッセイ及び非競合タイプの二サイトの試料の両方を含む。これらのアッセイも、標的抗原へのマーカー抗原結合分子の直接結合を含む。この場合の抗原は、マーカー又はそれらの断片である。
１つ又はそれ以上の異なる抗原（例えばアクチビンβ_Ｂ、アクチビンＢ、アクチビンＡ及び／又はフォリスタチン）を検出するように設計されるアッセイは、特に本発明における使用について好ましい。これらのアッセイには多くのバリエーションが存在し、その全ては本発明により含まれることが意図される。簡潔には、典型的なサンドイッチアッセイにおいて、例えば未ラベルの抗体のような未ラベルの抗原結合分子は、固形基質及び試料に固定化され、結合分子と接触して試験される。適切な潜伏期間の後、抗体抗原複合体の形成を許容するのに十分な時間、それから、検出可能な信号をつくることができるリポーター分子でラベル化した他の抗原結合分子、適切には抗原に特有の第二抗体が加えられ、及び潜伏され、抗体抗原ラベル化抗体の他の複合体の形成に十分な時間を維持させる。いかなる反応しない材料も洗浄され、そして、リポーター分子によって生産される信号の観察により抗原の存在は特定される。結果は、可視信号の単純な観察によって質的に、又は抗原の既知量を含むコントロール試料と比較によって数量化されることができる。サンドイッチアッセイの多様性は、同時アッセイを含み、ここで試料及び標識抗体の両方は、競合アッセイフォーマットにおける結合抗体に同時に加えられる。これらの技術は当業者に周知であり、そして容易に明らかであるように少しの変化を含む。
典型的な先のアッセイにおいて、抗原又はその抗原性部分の特異性を有する第一抗体は、共有結合的又は受動的に固体の表面に結合する。この固体表面は典型的にはガラス又はポリマーであり、最も一般的に用いられるポリマーはセルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリビニル塩化物又はポリプロピレンである。固体支持体は、管、ビーズ、マイクロプレートのディスク、又はイムノアッセイの実施に適する他のいかなる表面の形でもよい。結合プロセスは当技術分野で周知であり、一般に、共有結合的に結合する又は物理的に吸着する架橋結合から成る。ポリマー抗体複合体は試験試料の調製において洗浄される。そして、試験される試料のアリコートは、固相複合体に加えられ、抗体に存在するいかなる抗原においても結合を可能にするための十分な時間及び適切な条件で潜伏する。潜伏期間の後、抗原抗体複合体は、一部の抗原に特有の第二抗体を用いて、洗浄され、乾燥され、潜伏する。第二抗体は、第二抗体を抗原に結合することを示すために用いられることに関連するリポーター分子を一般に有する。関連するリポーター分子によって特定されるように、結合するラベル化した抗体の量は、固定化された第一抗体に密接に結びつく抗原の量に比例する。
代わりの方法は、生体試料の抗原を固定化すること、そして固定化された抗原を、リポーター分子でラベル化している、又はラベル化されない特定の抗体に曝すことを含む。標的の量及びリポーター分子信号の強さに応じて、結合抗原は、抗体に直接ラベル化することによって、検出可能となり得る。代わりに、第一抗体に特有の第二ラベル化抗体は、標的第一抗体複合体に曝され、標的第一抗体−第二抗体三級複合体を形成する。複合体は、リポーター分子により発せられる信号によって検出される。
リポーター分子は色素原、触媒、酵素、蛍光色素、化学発光分子、常磁性イオン、Ｅｕｒｏｐｉｕｍ（Ｅｕ^３４）のようなランタニドイオン、他の核タグを含むラジオアイソトープ及び直接可視ラベルを含む群から選択されることができる。直接可視ラベルの場合、使用は、コロイド性金属的又は非金属粒子、染料粒子、酵素又は基質、有機ポリマー、ラテックス粒子、リポソーム又は物質などを生ずる信号を含む他のベシクルであってもよい。リポーター分子としての使用に適する多数の酵素は、米国特許番号アメリカ４，３６６，２４１号、米国特許番号４，８４３，０００号及び米国特許番号４，８４９，３３８号で開示される。
本発明で有用である適切な酵素は、アルカリ性ホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、リゾチーム、リンゴ酸塩デヒドロゲナーゼなどを含む。酵素は、単独で又は溶液における第二酵素と組み合わせて使用することが可能である。
適切な蛍光色素は、フルオレッセンイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）及びテキサスレッドを含むが、これに限定されない。他の典型的な蛍光色素は、Ｄｏｗｅｒ他，国際公開番号ＷＯ ９３／０６１２１号によって、検討されるそれらを含む。参照は米国特許第５，５７３，９０９号（Ｓｉｎｇｅｒ他）、５，３２６，６９２（Ｂｒｉｎｋｌｅｙ他）で記載される蛍光色素とすることができる。あるいは参照は、米国特許第５，２２７，４８７号、５，２７４，１１３号、５，４０５，９７５号、５，４３３，８９６号、５，４４２，０４５号、５，４５１，６６３号、５，４５３，５１７号、５，４５９，２７６号、５，５１６，８６４号、５，６４８，２７０号及び５，７２３，２１８号に記載される蛍光色素とすることができる。
酵素イムノアッセイの場合、通常、酵素はグルタルアルデヒド又は過ヨウ素酸塩によって二抗体に接合される。しかし、後に容易に認識されるように、当業者が容易に利用できる異なる接合技術が存在する。特定の酵素に用いられる基質は、対応する酵素による加水分解によって検出可能な色変化の生産のために通常選択される。適切な酵素の例として、上記に記載されるそれらが挙げられる。上記で記述される発色基質よりも蛍光産物をもたらす蛍光原基質を使用することもできる。全ての場合において、酵素ラベル化抗体は、結合可能な第一抗体抗原複合体に加えられ、過剰な試薬は洗浄される。そして、適切な基質を含む溶液は、抗体抗原−抗体の複合体に加えられる。基質は、通常分光光度的にさらに定量化し試料中に存在した抗原の量の効能を提供することが可能な定性的な可視信号を与える第二抗体に結合される酵素と反応する。
代替的には、例えばフルオレセイン、ローダミン又はランタニドキレート（例えばユウロピウム）のような蛍光化合物は、それらの結合能を変えることなく、抗体に化学的に結合させてもよい。特定波長の光の照明によって活性化される場合、蛍光色素ラベル化抗体は、分子を励起状態に誘導する光エネルギーを吸収し、その後、光学顕微鏡を用いて視覚的に検出可能である特性色の光が放出される。蛍光性ラベル化抗体は、第一抗体抗原複合体と結合できる。結合していない試薬を洗い落とした後、残留する三級複合体は、適切な波長の光に曝される。観察される蛍光は、対象の抗原の存在を示す。免疫蛍光分析（ＩＦＭＡ）は、当技術分野で確立されており、特に本方法に有用である。しかし、例えばラジオアイソトープ、化学発光又は生物発光分子のような他のリポーター分子を使用することもできる。
（ｉｖ）核酸分子又はタンパク質発現産物のためのスクリーニングにおけるアプタマーの使用。
（ｖ）上記で詳述した試験に加え、任意の適切な機能的試験、酵素試験又は免疫学的試験に基づく変化したタンパク質発現の確定。

上記で詳述したように、いかなる適切な技術も、マーカー又はこれらのコード化核酸分子を検出するために利用できる。使用に際して選択される技術の性質は、分析に必要とされる生体試料のタイプを大きく認定する。このような認定は、当業者の範囲内で十分である。分析を試みることが可能な典型的な試料は、血液試料である。

関連した態様において、本発明は哺乳動物におけるアクチビンＢの機能レベルを下方制御することにより慢性疲労症候群を治療する方法をも提供する。

したがって、関連した態様において、哺乳動物における慢性疲労症候群の治療方法が提供され、前記方法が前記哺乳動物におけるアクチビンＢの機能レベルを下方制御することを含む。

哺乳動物における慢性疲労症候群の治療に用いるアクチビンＢ拮抗剤も提供される。

「慢性疲労症候群」及び「アクチビンＢ」の言及は、上記で定義されるものと同じ意味を有すことが理解されるべきである。

ある実施形態において、哺乳動物における慢性疲労症候群を治療する方法が提供され、哺乳動物が、下記リスト：
・労作後倦怠感；
・神経認知障害（思考、集中、記憶喪失、視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
・睡眠障害；
・筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
・血圧低下、めまい感又は蒼白；
・労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
・光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬剤療法に対するアレルギー又は過敏症；
・嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
・泌尿器系の問題；
・咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
・著しい体重変化−極端な減少又は増加；
・温度変化に対処できないこと；
・頭にかかったもや；
・直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
・食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギー又は過敏症；
・腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
・悪寒及び寝汗
・視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
・うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
の１つ又はそれ以上の症状を示し、前記方法が前記哺乳動物におけるアクチビンＢの機能レベルを下方制御することを含む。

アクチビンＢの「機能レベル」を下方制御する点において、これは、機能的であるアクチビンＢのレベルを意味することが理解されるべきである。アクチビンβ_Ｂ単量体及びホモ二量体の絶対レベルを減少させること、又は、アクチビンＢの機能活性を、例えばその効果を低減させるように、拮抗することによって、アクチビンＢの機能レベルを下方制御できることが当業者によって認められる。アクチビンＢの部分的な拮抗でさえ、アクチビンＢの機能効果を減少させるため働くが、必ずしも除去するというわけではない。

アクチビンＢの下方制御を達成する点において、この目的を達成するための手段は、当業者に周知であり、以下を含むがこれに限定されない：
（ｉ）遺伝子の転写及び／又は翻訳の制御を下方制御するタンパク質性又は非タンパク質性分子を細胞に導入することであり、ここでこの遺伝子は、アクチビンβ_Ｂ遺伝子又はそれらの機能的な部分、若しくはアクチビンβ_Ｂ遺伝子の発現を直接又は間接的に制御するいくつか他の遺伝子又は遺伝子領域（例えばプロモーター領域など）でもよい；又は、
（ｉｉ）アクチビンＢ発現産物に対して拮抗剤として機能する、タンパク質性又は非タンパク質性分子の導入。

上記のタンパク質性分子は、例えば自然の、組替え型の、又は合成の原料などのいかなる適切な原料からも由来にすることができ、例えば天然産物スクリーニングが後に続く確認された融合タンパク質、多様体又は分子を含む。他の例において、例えば、アクチビンＢ拮抗剤を製造するためにプロドメインが修飾された修飾アクチビンＢ分子などの、遺伝子組替え変性多様体を利用できる。例えば、非タンパク質性分子の言及は、核酸分子への言及でもよく、又は、例えば自然産物スクリーニングのような自然の原料に由来する分子でもよく、又は化学的に合成された分子でもよい。本発明は、拮抗剤として作用可能な小分子を熟慮する。拮抗剤は、アクチビンＢが通常の生物学的機能を実施することをブロッキング、阻害又は防止できるいかなる化合物でもよい。拮抗剤は、哺乳動物細胞のアクチビンβ_Ｂ遺伝子又はｍＲＮＡの転写又は翻訳を防止するモノクローナル抗体及びアンチセンス核酸を含む。発現の調節は、コサプレッションの使用に適する、抗原、ＲＮＡ、リボソーム、ＤＮＡザイム、アプタマー、抗体又は分子を利用して達成できる。アクチビンＢの適切なアンチセンスオリゴヌクレオチド配列（１本鎖のＤＮＡ断片）は、アクチビンβ_Ｂの発現を抑制する能力によって、つくられる、又は確認できる。タンパク質が与えられるためのアンチセンスオリゴヌクレオチドの製造は、例えばＳｔｅｉｎ及びＣｏｂｅｎ，１９８８（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４８：２６５９−２６６８）、及びｖａｎ ｄｅｒ Ｋｒｏｌ他，１９８８（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６：９５８−９７６）に記載される。拮抗剤は、その受容体と相互作用するアクチビンＢを防止するいかなる分子も含む。

抗体の状況において、本発明は、前記抗体の触媒抗体又は誘導体、相同体、類似体又は擬晶を含む抗体のいかなる適切な形の使用も想定する。これらの抗体は、モノクローナル若しくはポリクローナルでもよく、そして天然に存在するアクチビンＢ若しくはそのサブユニットから選択できる、又は、アクチビンＢ二量体又はその単量体（本願明細書において「抗原」を意味する）に特に高められることが可能である。後者の場合、抗原はキャリア分子と関連させることが最初に必要とされ得る。あるいは、抗体の断片が、例えばＦａｂフラグメント又はＦａｂ´_２断片のように使用できる。さらにまた、本発明はリコンビナント及び合成抗体に、並びに抗体ハイブリッドに拡張する。本願明細書において、「合成抗体」は、抗体の断片及び複合型を含むと見なされる。抗原は、天然に存在する抗体のスクリーニングに用いることもできる。

ポリクローナル及びモノクローナル抗体の両方は、抗原又は前記抗体の誘導体、相同体、類似体、変異体、又は擬態によって得られうる。そして、いずれのタイプも治療的に利用できる。血清の両方のタイプを得る方法は、当技術分野で周知である。ポリクローナル血清は、好ましくなく、しかし適切な実験動物に抗原の有効量、又はその抗原性の部分を注射すること、動物から血清を採取すること、及び周知の免疫吸着剤技術を用いて特定の血清を分離することによって、比較的容易に調製される。この方法によって生産される抗体が利用できるにもかかわらず、製品の潜在的異質性のため、通常より好まれない。

モノクローナル抗体の使用は、多量にそれらを生産する能力及び生成物の均一性により、特に好まれる。不滅の細胞系の融着により誘導されるモノクローナル抗体のハイブリドーマ細胞系の調製、及び免疫原性調製に対して感作されたリンパ球の調製は、当業者に周知の技術によって実施できる（例えばＤｏｕｉｌｌａｒｄ及びＨｏｆｆｍａｎ １９８１，Ｂａｓｉｃ Ｆａｃｔｓ ａｂｏｕｔ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，ｉｎ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ ＩＩ，ｅｄ． ｂｙ Ｓｃｈｗａｒｔｓ；Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ １９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９９；Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ １９７６，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎ ６：５１１−５１９参照）。

好ましくは、本発明の抗体は、具体的に抗原と結合する。「特定の結合」とは、特定抗原に対する抗体の高い親和性及び／又は高親和性結合を意味する。この特定の抗原上のエピトープに対する抗体結合は、他のいかなるエピトープ（特に、対象の特定の抗原として、同一試料に関連の又は同一の試料中の分子中に存在できるエピトープ）に対する同一抗体の結合より強い。対象のポリペプチドと特定的に結合する抗体は、他のポリペプチドを弱いレベルで（なお検出可能な）結合することが可能である（例えば、対象のポリペプチドに示される結合の１０％又はそれ以下）。このような弱い結合、又はバックグラウンド結合は、例えば適切な制御を用いることによって、対象のポリペプチドと結合する特定の抗体と容易に識別可能である。

上記で言及されるタンパク質性及び非タンパク質性分子は、本願明細書において集合的に「修飾剤」として言及される。アクチビンＢ活性の減少が求められるという点で、前記修飾剤は好ましくは下記の通りである：
（ｉ）フォリスタチン。
これは、タンパク質として投与される。Ｔａｋａｂｅ他，２００３（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ３８：１１０７−１１１５）で記載されるアデノウイルス媒介システムを介して、その過剰発現は、生体内で誘発される可能性がある。
（ｉｉ）インヒビンのαサブユニットの発現又は機能を上方制御するいかなる薬剤。
αサブユニットはアクチビンＢのβサブユニットを用いて二量体化し、インヒビンを形成でき、それによりアクチビンＢレベルを効果的に上下方制御する。
（ｉｉｉ）インヒビン。
この分子は、β−グリカンと結合し、その受容体を介してアクチビンＢの作用を阻害できる。例えばＸｕ他，１９９５（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：６３０８−６３１３）に記載のメカニズム、又はＳｍａｄ７拮抗剤の使用（Ｂｅｒｎａｒｄその他，２００４，Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １８：６０６−６２３）を参照。
（ｉｖ）抗体を中和するアクチビンＢ。
例えば、Ｐｏｕｌａｋｉ他，２００４．（Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １６４：１２９３−１３０２である）に記載される。
（ｖ）天然アクチビンＢがその受容体と結合することを阻害するアクチビンＢ変異体。
例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ他，２００４（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９：２８０３６−２８０４４）で記述される、又はアクチビンＢプロペプチドのプロドメインの修飾（Ｍａｋａｎｊｉ Ｙ他，２０１１ アクチビンＢプロペプチドの修飾による特定のアクチビンＢ拮抗剤．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １５２：３７５８−３７６８参照）。
（ｖｉ）通常のアクチビンＢが信号を送ることを妨げる変異体アクチビンＢ受容体、又は競合的阻害剤として作用する可溶性のアクチビンＢ受容体を用いた遺伝子導入又は治療。
例えば、Ｍａｅｓｈｉｍａ他，２００４（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４５：３７３９−３７４５）により記述されるシステム参照。
（ｖｉｉ）アクチビンＢアンチセンスオリゴヌクレオチド。
（ｖｉｉｉ）例えばレピルジンなどのトロンビン拮抗剤。
（ｉｘ）Ｃｒｉｐｔｏタンパク質。
このタンパク質はＮｏｄａｌシグナルのために必要とされる。しかし具体的には、それはアクチビンＢと結合して、シグナルを阻害する（Ａｄｋｉｎｓ他，２００３）。
（ｘ）それを介してアクチビンＢが信号を送ることができる，ＡＬＫ７又はＡＬＫ３受容体のいかなる阻害剤。

この点に関して、例えば、「フォリスタチン」への言及は、例えば代わりのスプライシングｍＲＮＡ ＦＳ３１５及びＦＳ２８８から生じるとして確認される３つのタンパク質核及び６つの分子量の形を含む、全ての形のフォリスタチンへの言及を含めて読まれるべきである。したがって、フォリスタチンｍＲＮＡの代替的スプライシング又はフォリスタチンの変異体若しくは多形体から生じるアイソフォームの言及も含むことも、理解されるべきである。フォリスタチン遺伝子によってコード化したタンパク質、生産可能な前駆体型のようなサブユニットポリペプチド、そして、例えば単量体、多量体又は融合タンパク質として存在する又はしないフォリスタチンタンパク質まで及ぶこともさらに理解されるべきである。類似の定義は、「インヒビン」に適応される。

本発明の使用に適するフォリスタチンの他の形は、以下を含む：
（ｉ）ＦＳＤ１（アミノ酸配列位置７２−８６）に位置するヘパリン結合性配列を有する３つのフォリスタチンドメイン（ＦＳＤ１、ＦＳＤ２及びＦＳＤ３）が続くＮ−末端ドメイン（ＮＤ）、及びそれらの周知の全てのアイソフォームを含む、野生型フォリスタチン（ＦＳ）。
（ｉｉ）２つのフォリスタチン様の３つのドメイン（ＦＳ３Ｄ１及びＦＳ３Ｄ２）が続くＮ−末端ドメイン（Ｎ３Ｄ）及びそれらの全ての周知のアイソフォームを含む、フォリスタチン関連の遺伝子産物（ＦＬＲＧ）及びフォリスタチン関連のタンパク質（ＦＳＲＰ）としても周知である、野生型フォリスタチン様の３つのタンパク質（ＦＳＴＬ３）。
（ｉｉｉ）構造ＮＤ−ＦＳＤ１−ＦＳＤ２を有するフォリスタチン類似体（すなわち野生型マイナスＦＳＤ３）。
（ｉｖ）ＦＳＤ１´によって置換されるＦＳＤ１を有する上記（ｉ）及び（ｉｉｉ）の類似体であって、ＦＳＤ１´は、ヘパリン結合部位が除去されたＦＳＤ１を表す、類似体。
（ｖ）ＦＳＤ１^＊によって置換されるＦＳＤ１を有する上記（ｉ）及び（ｉｉｉ）の類似体であって、ＦＳＤ１^＊は、除去されたヘパリン結合性配列の前の、及びそれを含む配列を有するＦＳＤ１を表す、類似体。
（ｖｉ）ドメインの１つ又はそれ以上が、対応するＦＳＴＬ３ドメインＮ３Ｄ、ＦＳ３Ｄ１及びＦＳ３Ｄ２によって置換される、上記（ｉ）及び（ｉｉｉ）の複合型
（ｖｉｉ）１つ又はそれ以上のドメインが、対応するＦＳドメインＮＤ、ＦＳＤ１、ＦＳＤ１´、ＦＳＤ１^＊及びＦＳＤ２により置換される、上記（ｉｉ）の複合型。
（ｖｉｉｉ）アクチビンＢ拮抗剤としての修飾タンパク質機能を提供するＮＤ、Ｎ３Ｄ、ＦＳＤ１、ＦＳＤ１´、ＦＳＤ１^＊、ＦＳ３Ｄ１、ＦＳＤ２、ＦＳ３Ｄ２及びＦＳＤ３の１つ又はそれ以上の欠失、挿入及び／又は変異により修飾される上記のいかなるタンパク質。
（ｉｘ）優先して他のアクチビン又はフォリスタチン標的の上のアクチビンＢのために修飾されたフォリスタチンの遺伝子組替え型。
（Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｎ．Ｃａｓｈ，Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ｂ．Ａｎｇｅｒｍａｎ，Ｈｅｎｒｙ Ｔ．Ｋｅｕｔｍａｎｎ，及びＴｈｏｍａｓ Ｂ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ２０１２ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｏｎ−Ｔｙｐｅ Ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ ａｎｄ アクチビン Ａ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２６（７）：１１６７−１１７８；Ｈｅｎｒｙ Ｔ．Ｋｅｕｔｍａｎｎ，Ａｌａｎ Ｌ．Ｓｃｈｎｅｙｅｒ及びＹｉｓｒａｅｌ Ｓｉｄｉｓ ２００４ Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ Ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｏｎ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１８（１）：２２８−２４０）。

本明細書の上記で定義される修飾剤のスクリーニングは、アクチビンβ_Ｂ遺伝子又は機能的な等価物又はそれらの誘導体を含む細胞に、薬剤を接触させること、及びアクチビンＢタンパク質産生若しくは機能活性の下方制御、アクチビンβ_Ｂをコード化する核酸分子の発現の下方制御、又は下流アクチビンＢ細胞標的の活性若しくは発現の下方制御をスクリーニングすること、を含むいかなるいくつかの適切な方法の１つにより達成することができるが、これに限定されない。このような下方制御での検出は、ウエスタンブロット法、アクチビンＢ活性（例えばルシフェラーゼ、ＣＡＴなど）のレポーターの電気泳動移動度シフト解析及び／又は読み取りのような技術を利用して達成することができる。

アクチビンβ_Ｂ遺伝子又は機能的な等価物又はそれらの誘導体が、試験の対象である細胞において天然に生じ得ること又は、それは試験の目的で宿主細胞に遺伝子導入することが可能であると理解されるべきである。さらに、天然に生じる、又は遺伝子導入される遺伝子は構成的に発現されることが可能である−それにより、核酸若しくは発現産物レベルのどちらかにおいて、とりわけ、アクチビンＢの機能レベルを下方制御する薬剤のスクリーニングに有用なモデルを提供する、又は遺伝子は活性化を必要とすることができる−それにより、とりわけ、アクチビンβ_Ｂ単量体又はホモ二量体の発現を上方制御する薬剤のスクリーニングに有用なモデルを提供する。さらに、アクチビンβ_Ｂ核酸分子が細胞に導入する程度まで、その分子は全てのアクチビンβ_Ｂ遺伝子を含むことができるか、又はそれは単に例えばアクチビンＢ生成物の発現を調整する部分のような遺伝子部分を含むことができる。例えば、アクチビンβ_Ｂプロモーター領域を、試験の対象である細胞に遺伝子導入することができる。この点に関しては、プロモーターのみ利用され、例えば、リポーター遺伝子にプロモーターを連結することによって、プロモーターの活性の検出調節が達成することが可能である。例えば、プロモーターは、ルシフェラーゼ又はＣＡＴリポーター（遺伝子が、蛍光強度又はＣＡＴリポーター活性のそれぞれの調節を介して検出されることができる発現の下方制御）に、それぞれ連結させることができる。他の例では、検出対象は、アクチビンＢ自体よりもむしろ下流のアクチビンＢ制御標的であり得る。さらなる他の例として、最小のリポーターに連結するアクチビンＢ結合部位が挙げられる。

これらの方法は、例えば合成の、組合せの、化学の及び天然のライブラリを含むタンパク質性又は非タンパク質性剤などの推定される修飾剤のハイスループットスクリーニングを実行するためにメカニズムを提供する。これらの方法はアクチビンβ_Ｂ核酸分子若しくは発現産物自体のどちらかを結合する、又は上流分子の発現を調節する薬剤の発見をも推進し、その後、上流分子はアクチビンβ_Ｂ単量体又はホモ二量体発現又は発現産物活性を下方制御する。したがって、これらの方法は、アクチビンβ_Ｂ単量体及び／又はホモ二量体の発現又は活性を直接又は間接的に調節する剤を検出するメカニズムを提供する。

本発明の方法に従って利用される剤は、いかなる適切な形であってもよい。例えば、タンパク質性剤は、グリコシル化又は非グリコシル化してもよく、様々な程度にリン酸化又は脱リン酸化してもよく、及び／又は使用、連鎖、結合、又はアミノ酸、脂質、炭水化物又は他のペプチド（ポリペプチド又はタンパク質）のようなタンパク質と結合される他の分子の範囲を含むことができる。同様に、被検体の非タンパク質性分子は、いかなる適切な形であってもよい。本願明細書に記載されるタンパク質性剤及び非タンパク質性剤の両方は連鎖、結合可能であり、さもなければ、他のいかなるタンパク質性又は非タンパク質性分子とも関連する。例えば、本発明のある実施形態において、前記剤は、局所化された領域に標的にすることを可能にする分子に関連する。

被検体タンパク質性又は非タンパク質性分子は、アクチビンβ_Ｂ単量体又はホモ二量体の発現又はアクチビンβ_Ｂ単量体又はホモ二量体発現産物の活性の下方制御を直接的又は間接的に行うことができる。前記分子がアクチビンＢ核酸分子又は発現産物に関連する場合、前記分子は発現又は活性の調節をそれぞれ直接行う。前記分子がアクチビンβ_Ｂ核酸分子以外の分子又はアクチビンＢ発現産物に関係する場合、前記分子はそれぞれ間接的に行う。ここで他の分子は、アクチビンβ_Ｂ核酸分子又はアクチビンＢ発現産物の発現又は活性を、それぞれ直接的に又は間接的に下方制御する。したがって、本発明の方法は、制御ステップのカスケードの誘導を介するアクチビンβ_Ｂ核酸分子発現又はアクチビンＢ発現産物活性の調節を含む。

用語「発現」は、核酸分子の転写及び翻訳を意味する。「発現産物」への言及は、核酸分子の転写及び翻訳によって生じる産物への言及である。

「多様体」又は「変異体」は、多様体又は変異体である分子の形（例えばアクチビンＢ又はフォリスタチン）の機能的な活性の少なくとも一部を呈する分子を意味することが理解されるべきである。多様性又は変異は、いかなる形であってもよく、天然又は非天然に生じ得る。

「相同体」は、分子が、本発明の方法にしたがって処置される種以外の種に由来することを意味する。例えば、治療されている種以外の種が、例えば、対象継続中治療により当然に生成されるフォリスタチンのそれと同様の又は適切な機能的特徴を呈する、フォリスタチンの型を生成することを認定する。

化学的及び機能的な等価物は、対象分子の１つ又はそれ以上のいかなる機能活性をも呈する分子として、理解されるべきである。その機能等価物は、例えば天然物スクリーニングのようなスクリーニングプロセスを介して化学的に合成される又は確認される原料を由来にできることが確認される。例えば、化学的又は機能的等価物は、例えばリコンビナントライブラリ又はリコンビナートライブラリのハイスループットスクリーニング又は以下の天然産物のスクリーニングのような周知の方法を利用して設定及び／又は確認可能である。拮抗剤は、このような方法を利用するために、スクリーニングされてもよい。

例えば、有機小分子を含むライブラリはスクリーニングすることが可能であり、ここでは、多数の特定のペアレント基の置換を有する有機分子が用いられる。一般の合成スキームは、公表された方法に従うことができる（例えばＢｕｎｉｎ他，１９９４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１：４７０８−４７１２；ＤｅＷｉｔｔ他，１９９３ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：６９０９−６９１３）。簡潔には、例えばライブラリの製造に利用される異なる置換基の可能性のある全ての組み合わせを生成するために存在する管サブセットの選択と共に、それぞれの連続した合成ステップで、例えば、複数の異なる選択された置換基の１つは、配列中の選択済のサブセットに加えられる。ある適切な組み合わせ操作は、米国特許第５，７６３，２６３号に概説される。

現在、生物活性化合物を調査するためのランダムな有機分子の組合せライブラリを使用することへの広範囲にわたる関心がある（例えば米国特許第５，７６３，２６３号参照）。このタイプのライブラリをスクリーニングすることにより発見されるリガンドは、模倣に有用である又は天然リガンドをブロックできる又は生物学的標的の天然に生じるリガンドを妨げることができる。例えば米国特許第５，７５３，１８７号で開示されるような技術を用いて、何百万もの新規な化学的及び／又は生物学的化合物は、２、３週間よりも少ない期間で日常的にスクリーニングすることができる。確認される多数の化合物のうち、適切な生物活性を呈する化合物のみ、さらに分析される。

ハイスループットライブラリスクリーニング方法に関しては、例えば生体分子、高分子複合体又は細胞のような選択された生物学的薬剤と特に相互作用可能なオリゴマ又は小分子ライブラリ化合物は、例えば上記で詳述される周知の方法の範囲から当業者によって、容易に選ばれる組合せのライブラリ装置を利用して、スクリーニングされる。このような方法において、ライブラリのそれぞれの部分は、特に選択された剤と相互作用可能のために、スクリーニングされる。当該方法の実行においては、生物学的薬剤は、化合物を含む管に引き込まれ、それぞれの管の個々のライブラリ化合物と相互作用させる。相互作用は、所望の相互作用の存在をモニターするために使用できる、検出可能な信号を生産するように設計される。好ましくは、生物学的薬剤は水溶液に存在し、さらなる条件は所望の相互作用に応じて適合される。検出は、例えば物質の検出のためのいかなる周知の機能的又は非機能的ベースの方法によっても実施できる。

本発明は有用なアプタマーにも関する。ある実施形態において、アプタマーは優先的に他の化合物（ここでの場合、確認されたタンパク質）と生体外で結合するように選択される化合物であり、ある態様において、アプタマーは核酸又はペプチドである。ランダムな配列は多数のヌクレオチド又はアミノ酸（天然に生じる及び／又は合成的に製造された）から容易に産出できる。しかし当然ながらこれらに限定される必要はない。他の態様において、核酸アプタマーは、例えばオリゴヌクレオチドアプタマーなどのタンパク質標的を結合するＤＮＡの短い鎖である。オリゴヌクレオチドアプタマーは、対象の特定のタンパク質配列と結合できるオリゴヌクレオチドである。アプタマーを確認する一般的な方法は、部分的に変性オリゴヌクレオチドから始め、そして同時に所望のタンパク質と結合する能力のための数千のオリゴヌクレオチドをスクリーニングする方法である。結合オリゴヌクレオチドは、タンパク質から溶出でき、特定の認識配列を確認するために配列を決定することができる。大量の化学的に安定化アプタマーを細胞へ転送することは、結果として対象のポリペプチドの特定の結合になり得、それによってその機能をブロックする。（例えば、アプタマーの生体外選択を記載する以下の刊行物参照：Ｋｌｕｇ他，１９９４， Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｐ ２０：９７−１０７；Ｗａｌｌｉｓ他，１９９５，Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ２：５４３−５５２；Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ．１９９４，Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ ４：４２７−４２９；Ｌａｔｏ他，１９９５，Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ２：２９１−３０３；Ｃｏｎｒａｄ他，１９９５，Ｍｏｌ Ｄｉｖｅｒｓ １：６９−７８；及び、Ｕｐｈｏｆｆ他，１９９６，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ ６：２８１−２８）

確実なＲＮＡ阻害剤を利用し、対象の表現型を伴うメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）の発現又は翻訳を阻害できる。本願明細書において、使用に適するこれらの剤の例として、短干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）、リボザイム、アプタマー及びアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられるが、これに限定されない。

ある場合では、１８〜２５の範囲のヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡｓの最も好ましいサイズである。ｓｉＲＮＡｓは、ｓｉＲＮＡ二本鎖の両方の鎖が、単一ＲＮＡ分子内に含まれる短ヘアピンＲＮＡｓを、含むことも可能である。１つ又はそれ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換及び／又は変化によって、天然に存在するＲＮＡと異なるＲＮＡを変えることと同様に、ｓｉＲＮＡは、いかなる形のｄｓＲＮＡ（より大きいｄｓＲＮＡのタンパク分解的に切断された産物、部分的に精製されたＲＮＡ、基本的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組み替え生成されたＲＮＡ）を含む。このような変化は、例えばＲＮＡの端に、又は内部的に、非ヌクレオチド材料の付加を含むことが可能である（ＲＮＡの１つ又はそれ以上のヌクレオチドにおいて）。

ある実施形態において、ＲＮＡ分子は３’ヒドロキシル基を含む。本発明のＲＮＡ分子のヌクレオチドは、非天然に生じるヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む非標準ヌクレオチドを含むことも可能である。集合的に、全てのこれらの代わりのＲＮＡは、ＲＮＡの類似体を意味する。本発明のｓｉＲＮＡｓは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介する能力を有する天然ＲＮＡに単に十分に類似する必要がある。

標的細胞の遺伝子発現を阻害するための二重鎖ＲＮＡを設計する方法は周知である（例えば米国特許第６，５０６，５５９号；Ｅｌｂａｓｈｉｒ他，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６：１９９−２１３；Ｃｈａｌｋ他，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ３１９：２６４−２７４；Ｃｕｉ他，２００４，Ｃｏｍｐｕｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ ７５：６７−７３；Ｗａｎｇ他，２００４，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２０：１８１８−１８２０参照）。例えば、ｓｉＲＮＡｓ（ヘアピンを含む）の設計は、周知の熱力学的規則に典型的に従う（例えば、Ｓｃｈｗａｒｚ他，２００３，Ｃｅｌｌ １１５：１９９−２０８；Ｒｅｙｎｏｌｄｓ他，２００４，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：３２６−３３０；Ｋｈｖｏｒｏｖａ他，２００３，Ｃｅｌｌ １１５：２０９−２１６参照）。多くのコンピュータプログラムは、適切な標的部位である配列の領域を選択することに、利用可能である。これらは、例えばＥＭＢＯＳＳ、Ｔｈｅ Ｗｉｓｔａｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｔｅ及びその他などの非商業的な原料と同様に、例えばＡｍｂｉｏｎ、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｚｉａｇｅｎ及びＧｅｎＳｃｒｉｐｔなどの商業的供給源によって、利用可能なプログラムを含む。

例えば、設計は、以下の考察に基づくことができる。約３０のヌクレオチド未満の、より短い配列が一般に選択される。通常、ｍＲＮＡのコード領域が標的とされる。適切な標的配列の検索は、翻訳されていない領域結合タンパク質として、開始コドンの５０〜１００のヌクレオチド下流を任意に開始する及び／又は翻訳開始複合体がｓｉＲＮＡエンドヌクレアーゼ複合体の結合を妨げることができる。例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒ他 ２０００（方法２６：１９９−２１３）などの研究に基づく、いくつかのアルゴリズムは約５０％のＧ／Ｃ−量（３０％〜７０％も作用する）を用いて、選択された配列モチーフを検索し、ヒットするものを選択する。適切な配列が見つからない場合、検索は延長される。

例えば、リボザイム、アンチセンスなどの他の核酸は、周知の原則に基づいて設計されることもできる。例えばＳｆｏｌｄ（例えば、Ｄｉｎｇ他，Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３２ Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ，Ｗ１３５−Ｗ１４１；Ｄｉｎｇ ＆ Ｌａｗｒｅｎｃｅ ２００３，Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３１：７２８０−７３０１；及びＤｉｎｇ ＆ Ｌａｗｒｅｎｃｅ ２００１，Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２０：１０３４−１０４６参照）は、ｓｉＲＮＡｓと同様に、リボザイム及びアンチセンスの設計に関するプログラムを提供する。

ある実施形態において、アクチビンＢの機能レベルの下方制御は、フォリスタチン、インヒビン、アクチビンＢに関連する抗体、アクチビンβ_Ｂアンチセンスオリゴヌクレオチド、アクチビンＢ受容体若しくは変異体の結合を競合的に阻害する非機能性アクチビンＢ分子、又は信号を送る通常のアクチビンＢを阻害する可溶性アクチビンＢ受容体の投与によって達成できる。

「有効量」は少なくとも部分的に所望の反応を達成する、又は開始を遅延させる又は進行を阻害する又は完全に停止する、特定の状態の開始又は進行が処理されることに必要な量を意味する。治療される個人の健康及び肉体的状態、治療される個人の分類上のグループ、所望の保護度、組成物の配合、医学状況の評価及び他の関連した要因により量は変化する。日常的な試みを通して特定できる比較的幅広い範囲において量が減少することが予測される。

本願明細書における「治療上」及び「予防上」処置への言及は、その最も幅広い状況において考慮される。用語「治療上」が、状態が完全な回復までの処置を必ずしも意味するわけではない。同様に、「予防上」は、患者が慢性疲労症候群の若干のレベルを発生しないことを、必ずしも意味するわけではない。したがって、治療は慢性疲労症候群の症状の改善を含む。

本発明の医薬品組成物は、投与方法次第で、様々な単位投与形態で投与されることができる。典型的な調節性医薬品組成物の投与量は、当業者に周知である。これらの投与量は、事実上は概して助言的であり、特定の治療状況、患者又は臓器寛容性などに応じて適合される。これを達成するのに適切な剤の量は、「治療上有効量」として定義される。これを使用するために有効な投与計画及び量（すなわち、「投与レジメン」）は様々な要因に左右されるであろう。そして、心臓、損傷開始の有無、又は、医薬製剤及び活性剤の濃度などの状態を含む。臓器の投与レジメンの算出において、投与方法も考慮に入れられる。投与レジメンは、薬剤動態（すなわち医薬品組成物の、吸収率、生物学的利用率、代謝率、排出率など）も考慮に入れなければならない。（最新のＲｅｍｉｎｇｔｏｎの；Ｅｇｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ １９９７ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １８：１４３１−１４３９；Ｌａｎｇｅｒ １９９０ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３参照）。

本明細書の上記で詳述される修飾剤を含む医薬品組成物は、特定の場合に依拠する量で投与される場合、いかなる簡便な手段によっても投与されることが可能であり、治療上の活性を呈するように熟慮される。多様性は、例えば選択されるヒト又は動物、及び修飾剤に左右される。用量は幅広い範囲で適用可能である。例えば、約０．１ｍｇ〜約１ｍｇの修飾剤から患者を考慮すると、１日当たり、体重１キログラム当たり投与されることが可能である。投与レジメンは、最適な治療上の反応を提供するように適合できる。例えば、いくつかの分割用量は毎日、毎週、毎月、又は他の適切な時間的間隔で投与でき、又は、用量は、状況の緊急性により示されるように比例して減らすことができる。

組成物は、経口、静脈内（水溶性の）、腹腔内、筋肉内、皮下、皮内、若しくは坐薬経路又は移植（例えば、分子の持続放出の使用）などによって、簡便な方法で投与できる。拮抗剤は、経鼻若しくは経口スプレーとして、又は、例えば酸付加塩又は金属複合体（例えば、この適用を目的とした塩類と見なされる亜鉛、鉄などと共に）のような薬剤的に許容される無毒性塩類の型で投与できる。塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸エステル、リン酸塩、マレアート、酢酸塩、クエン酸塩、ベンゾアート、スクシナート、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、タータラートなどが、これらの酸付加塩を図示する。活性成分が錠剤の形で投与される場合、錠剤は、例えばトラガカントゴム、コーンスターチ又はゼラチンのような結合剤、例えばアルギン酸のような崩壊剤、及び例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑油を含むことができる。

投与の経路として、呼吸器内、気管内、経鼻、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、皮内、筋肉内、眼球内、髄腔内、脳内、鼻腔内、注入、経口、直腸、ＩＶ点滴パッチを介して、および移植が挙げられるが、これらに限定されない。

これらの方法によると、本発明によって定義される組成物は、１つ又はそれ以上の他の化合物又は分子と共に、同時投与することができる。「同時投与する」は、同じ又は異なる経路を介する、同じ製剤又は異なる２つの製剤、若しくは同じ又は異なる経路による経時的な投与を意味する。例えば対象組成物が、剤と共に投与し、その効果を強化することができる。「経時的な」投与によっては、２つのタイプの分子の投与間の秒、分、時間又は日の差を意味する。これらの分子は、いかなる順番によっても投与されることができる。

注射可能な使用に適する剤型は、即時の無菌注射液又は分散の調製のための無菌水溶液（水溶性の）又は分散の及び無菌の粉末を含む、又は局所適用に適切なクリーム又は他の型であってもよい。それは、製造及び貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして例えばバクテリア及び菌類などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物及び植物油などを含む溶剤又は分散媒であってもよい。好ましい流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングを用いて、分散の場合に必要な粒径のメンテナンスによって、及び界面活性剤を用いて維持可能である。微生物の作用の阻止は、様々な抗菌及び抗真菌性拮抗剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらすことができる。多くの場合、例えば糖又は塩化ナトリウムなどの等張性拮抗剤を含むことが好ましい。注射可能な組成物の遷延性の吸収は、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの、吸収を遅延させる拮抗剤の組成物の使用によってもたらすことができる。

注射可能な無菌液は、上記で列挙される他の様々な成分を有する適切な溶媒の必要な量の活性化合物を組み込むことによって調製され、その後必要に応じてフィルター処理殺菌を実施する。通常、分散は、基本的な分散媒、及び上記で列挙される成分から必要な他の成分を含む無菌溶媒へ様々な無菌の活性成分を組み込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、あらかじめろ過滅菌した溶液から、活性成分の粉末といかなる追加の所望の成分を得る真空乾燥法及び凍結乾燥法である。

活性成分が適切に保護されている場合、それらは例えば不活性希釈剤又は吸収可能の可食担体などを用いた経口投与であってもよく、若しくは、硬性又は軟性のシェルゼラチンカプセルに封入することが可能であり、若しくは、錠剤に圧縮することができ、若しくは、食事の食物を用いて直接組み込むことができる。経口治療的に投与する場合、活性化合物は賦形剤に組み込むことが可能であり、そして経口摂取可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの形態で使用される。これらの組成物及び調製は、少なくとも１重量％の活性化合物を含まなければならない。組成物及び調製のパーセンテージは、当然ながら変化可能であり、便宜上ユニット重量の約５〜約８０％の間であってもよい。このような適切な投与量において、このような治療上有用な組成物における活性化合物の量を得られるであろう。本発明による好ましい組成物又は調製は経口投与ユニット形態が０．１μｇと２０００ｍｇとの間の活性化合物を含むように調製される。

錠剤、トローチ、ピル、カプセルなどは以降にリストされる成分を含むことも可能である：例えばゴム、アカシア、コーンスターチ又はゼラチンなどの結合剤；例えばリン酸二カルシウムなどの賦形剤；例えばコーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸などの分解する拮抗剤；例えばステアリン酸マグネシウムなどの潤滑油；及び例えば蔗糖、ラクトース又はサッカリンなどの甘味拮抗剤は、加えられることが可能であり、又はハッカ、ウィンターグリーン油又はサクランボの香味のような香味拮抗剤であってもよい。単位投与形態がカプセル剤である場合は、前記で詳述の物質に加えて、液体担体を含むことができる。様々な他の物質がコーティングとして、又はそうではなく投与単位の形を変えるために存在し得る。例えば、錠剤、丸薬、カプセル等は、シェラック、糖又はそれらの両方でコーティング可能である。シロップ又はエリキシルは、活性化合物、甘味拮抗剤として蔗糖、防腐剤としてメチル及びプロピルパラベン、例えばサクランボ又はオレンジの香味のような染料及び香味を含むことができる。当然のことながら、いかなる単位投与形態の調製に使用されるいかなる物質も、使用量において、薬剤的に純粋及び実質的に無毒性である必要がある。加えて、活性化合物は、徐放性製剤及び製剤に組み込まれることが可能である。

医薬品組成物は、ベクターが、例えばアンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ又はペプチド拮抗剤などの前記拮抗剤又はフォリスタチンをコード化する核酸分子を担持する標的細胞を遺伝子導入することができる媒体動物などの遺伝子の分子を含むことも可能である。例えばベクターはウイルスベクターであってもよい。

遺伝子産物タンパク質の発現の細胞にＤＮＡを導入又は送達する様々な方法（あるいはｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙとして言及される）は、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ，Ｎ．Ｙａｎｇ，Ｃｒｉｔ，Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２（４）：３３５−３５６の（１９９２）で開示され、本願明細書に参照として組み込まれる。

遺伝子治療のための遺伝子導入方法は、３つの幅広いカテゴリに分類される：身体検査（例えば、エレクトロポレーション、遺伝子直接導入及び粒子衝撃）、化学薬品（脂質ベースのキャリア又は他の非ウイルスベクター）及び生物製剤（ウイルスから派生したベクター及び受容体取り込み）である。例えばＤＮＡで被覆されるリポソームを含む非ウイルスベクターを用いることができる。これらのリポソーム／ＤＮＡ複合体は、静脈内で患者に直接注射することができる。加えて、ベクター又は遺伝子の「裸の」ＤＮＡは、治療上のＤＮＡの標的の送達のため、所望の臓器、組織又は腫瘍に直接注射することができる。

遺伝子治療方法論は、配信サイトにより記載することも可能である。遺伝子を送達する基本的な方法は、生体外の遺伝子導入、生体内の遺伝子導入、及び試験管内の遺伝子導入を含む。

遺伝子治療の化学的方法は、細胞膜を渡ってＤＮＡを運ぶために、必ずしもリポソームではなく、脂質ベース化合物を含むことが可能である。リポフェクチン又はサイトフェクチン（負に荷電するＤＮＡと結合する脂質ベースの正イオン）を用いて、細胞膜を通過し、細胞の内部にＤＮＡを形成することができる。他の化学的方法は受容体ベースのエンドサイトーシスを含むことができる。そしてそれは特定のリガンドを細胞表面受容体に結合すること及び細胞膜全体を通過して輸送することを含む。

多くの遺伝子治療方法論は、例えば遺伝子を細胞に嵌入するレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターを使用する。ウイルスベクターは、例えばカテーテルによって生体内サイトに直接送達されることができ、そして特定の領域だけがベクターによって感染することが可能であり、長期の特定遺伝子の領域を提供する。レトロウイルスベクターを用いた生体内の遺伝子導入は、乳腺組織及び肝臓組織において代わりのウイルスを臓器へ通じる血管へ、変えられたベクターを注射することによって示された。

ウイルスベクターは、レトロウイルス、他のＲＮＡウイルス（例えばポリオウイルス又はＳｉｎｄｂｉｓウイルス）、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ＳＶ ４０、痘疹及び他のＤＮＡウイルスを含む群から選択できるが、これに限定されない。
複製欠損のあるマウスのレトロウイルスベクターは、最も広範囲に利用される遺伝子導入ベクターであり、好ましい。アデノウイルスベクターは、コラーゲンで被覆したステントに次々に密接に結びつく抗体に密接に結びついて、送達され得る。

ＤＮＡの送達の機械的方法は、使用されることができ、例えばリポソーム又は他の膜融合のための小胞のような膜融合性脂質小胞、例えばリポフェクチンのようなＤＮＡを組み込むカチオン性脂質の脂質粒子、ＤＮＡのポリリジンの媒介による遺伝子導入、例えば細菌又は体細胞へのＤＮＡの微量注射のようなＤＮＡの直接注射、例えば「遺伝子銃」において、使用する金粒子のような空気圧により送達されたＤＮＡコーティング粒子、例えば第三リン酸カルシウム遺伝子導入のような無機化学アプローチ、及びステントでコーティングされたポリマーに組み込まれるプラスミドＤＮＡ、が挙げられるが、これらに限定されない。リガンド媒介遺伝子治療は、ＤＮＡと特定のリガンドとを複合化し、リガンド−ＤＮＡコンジュゲートを形成し、特定の細胞又は組織にＤＮＡを方向付けることを含み、これは利用可能である。

プラスミドのＤＮＡは、細胞のゲノムに組み込まれてもよいし又は組み込まれなくてもよい。遺伝子導入されたＤＮＡの非統合は、細胞の若しくはミトコンドリアにおいて、変異性の挿入、欠失、又は変更の恐れなしで、長期にわたる期間、末端分化した非増殖性組織において、遺伝性産物タンパク質の導入及び発現を許容するであろう。永久である必要はないが、長期間にわたる特定細胞への治療遺伝子の遺伝子導入は、遺伝子性疾患における治療又は予防的使用を提供できる。受容細胞のゲノムに変異が生じることなく、遺伝子産物レベルを一定に維持するためにＤＮＡを定期的に再注入できる。外因性ＤＮＡｓの非統合は、様々な遺伝子産物を発現する構造の全てを有する１つの細胞中に、いくつかの異なる外因性ＤＮＡ構築の存在を許容できる。

本明細書において用いられる用語「ベクター」は、細胞に特定の核酸配列を輸送するように機能する特定の核酸配列を含む、又は関連づけられている担体を意味する。ベクターの例として、プラスミド及びベクターなどの感染性微生物、又はリガンド−ＤＮＡコンジュゲート、リポソーム、脂質−ＤＮＡ複合体などの非ウイルス性ベクターが挙げられる。ＤＮＡ配列は効果的に発現制御配列とつながり、遺伝子調節ができる発現ベクターを形成する。遺伝子導入された細胞は、患者の正常な組織、例えば病気に罹患した維管束組織などの病気に罹患した患者の組織、又は非患者に由来する細胞であってもよい。例えば、患者から離れた血管細胞は、本発明の調節性の分子を発現可能な媒体動物によって、遺伝子導入することができ、患者に再導入されることができる。患者はヒト又はヒト以外の動物であってもよい。細胞は、非ベクター、又は例えば電気穿孔法のような当該技術分野で周知の物理的又は化学的方法、取り込み、又は「遺伝子銃」を介して遺伝子導入することもできる。加えて、ＤＮＡは、担体を用いずに、患者に直接注入することができる。

患者に分子を遺伝子導入するための遺伝子治療プロトコルは、細胞中のゲノム、ミニ染色体への分子のＤＮＡの統合によるものでも、又は細胞中の細胞質若しくは核細胞質の別々の複製的又は非複製的なＤＮＡ構築物としてでもよい、遺伝子発現及び／又は活性の調節は、一時的な期間継続してもよいし、又は組織又は臓器における遺伝子発現及び／又は細胞の機能の望ましいレベルを維持するために、定期的に再注射してもよい。

本発明は、以下の例の参照によりさらに記載されるが、これに限定されない。

実施例１
慢性疲労症候群（ＣＦＳ）と診断された患者におけるアクチビンＡ、アクチビンＢ及びフォリスタチンのレベルの測定
参加者
この研究の参加者は、オーストラリアのメルボルンにあるＣＦＳ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃｌｉｎｉｃで慢性疲労症候群と診断された４７人の患者（４２人の女性及び５人の男性）を含む。患者がカナダ診断ＣＦＳ基準（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＣＦＳ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）（Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ他「Ｍｙａｌｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ／ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｉｇｕｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｃｌｉｎｉｃａｌ ｗｏｒｋｉｎｇ ｃａｓｅ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ，ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ａ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｄｏｃｕｍｎｅｔ．」Ｊ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｆａｔｉｇｕｅ Ｓｙｎｄｒ ２００３；１１：７−１１５）を満たす場合、ＣＦＳと診断された。カナダ診断ＣＦＳ基準が、他の基準と比較して、より同時発生的な精神的障害が少ない状態で、より症候性の患者を同定することを見出された（Ｊａｓｏｎ他「Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．ｃｒｉｔｅｒｉａ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ ｃａｓｅ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｉｇｕｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．」Ｊ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｆａｔｉｇｕｅ Ｓｙｎｄｒ ２００４；１２：３７−５２）。

タスク手順
２０分間起立しながら試験を行った。タスクは、患者が５分間仰臥位の状態で始まり、その後、２０分間の上限の中で、支えなしで可能な限り長く直立するように指示された。患者が疲労してきた場合、続けるように鼓舞した。患者がタスクを中断した場合、起立していた合計時間を記録した。患者に自分たちの疲労を説明するように依頼した。２０分の起立試験を、訓練された看護師の監督下で行った。この試験が、機能疲労レベルと、強い予測関係があることを見出した。１〜１０の尺度（１＝問題点なし、１０＝起立の支えを必要とする、失神寸前の状態）で疲労レベルを説明するように患者に依頼した。この研究の目的上、起立試験が２０分未満に終了された位置の起立障害を表す被検体のスコア１２、及び起立が４〜５分間又はそれ以下のみ可能であった、最も極度の障害を表すスコア１４により、この起立問題点尺度は０〜１４まで広げられた。
障害があるにも関わらず、ＣＦＳ／ＭＥコホートの大多数が２０分の起立時間に達したため、ＣＦＳ／ＭＥと健常対照群コホートとの起立反応の直接比較は有益ではなかった。被検体の起立障害に関連する起立時間を標準化するため、及び単一の疲労反応変数を提供するために、起立時間（最大２０分、２分間隔で測定される）及び起立障害を、「加重起立時間」（ＷＳＴ）と呼ばれる１つの測定を提供するために、組み合わせた。ＷＳＴを以下の方程式；
加重起立時間（ＷＳＴ）＝起立時間×（１−（障害）／１４）、
により算出した。
起立耐性失調試験の間に起立時間及び被検体の起立障害によって評価するようにＣＦＳ／ＭＥ症状の欠如から重度のＣＦＴ／ＭＥ症状までを表した反応（従属変数）尺度を提供するために、ＣＦＳ／ＭＥの場合（ｎ＝４２）及び健常対照者参加者（ｎ＝１７）の両方は、ＷＳＴ算出に含まれた。そしてＷＳＴをＣＦＳ機能的な重症度のマーカーとして使用した。

試料
２０分間の起立試験後、及び血しょうが単離した後、患者から採血した。血しょう試料を、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びフォリスタチンの濃度のために分析した。アクチビンＡの濃度を、以前に公開されるように、ｔｗｏ−ｓｉｔｅ ＥＬＩＳＡ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｂｉｏ−ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ，Ｃｈｅｒｗｅｌｌ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用し、特定した（Ｋｎｉｇｈｔ他，１９９６，Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １４８：２６７−２７９）。この分析は、自由及びフォリスタチン結合アクチビンＡ二量体を測定し、例えばアクチビンＢのような他のアクチビンアイソフォームとの重要な交差反応を有さない。アクチビンＢは、上記で詳述のようにＥＬＩＳＡによって測定された（Ｌｕｄｌｏｗ他 ２００９，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ７１：８６７−８７３）。フォリスタチン濃度を、広範囲に渡り有効なラジオイムノアッセイを用いて決定した（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ他 １９９９，Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ １４：８２７−８３２）。

統計的分析
アクチビンＡ、アクチビンＢ及びフォリスタチンに関して、アクチビン生物学的利用率の指標は、アクチビンＡ／フォリスタチン、及びアクチビンＢ／フォリスタチンの比率の算出によって由来している。さらに、慢性疲労症候群（ＣＦＳ）患者のアクチビンＡ、アクチビンＢ及びフォリスタチン濃度を、１４１人の健常な成人ボランティアを使用し、発生するタンパク質の正常範囲（ＮＲグループ）と比較した（Ｄ．Ｊ．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＆ Ｄ．Ｍ．ｄｅ Ｋｒｅｔｓｅｒ，ｕｎｐｕｂｌｉｅｄ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ）。ＣＦＳ患者及び正常範囲値における、アクチビン濃度とフォリスタチン濃度の比較を、ノンパラメトリック分布に対して、マンホイットニー試験を用いて行った。データは平均±ＳＥＭとして提示される。
複数の直線回帰を用いて、加重起立時間（ＷＳＴ）に関連するアクチビンＢの予測を特定した。ダネット事後検定を用いた分散分析を用いて、ＷＳＴの算出により、疲労重症度と関連するアクチビンＢレベルの違いを評価した。

結果
正常範囲（ＮＲ）グループと比較して、ＣＦＳと診断される患者における、アクチビンＡでなくアクチビンＢのレベルが、著しくより高かった（図１）。この評価は、男性及び女性両方の患者に見られた。正常範囲グループと比較して、ＣＦＳグループにおいて、フォリスタチンレベルは、著しくより低かった（図２）。別々の男性及び女性試料も、フォリスタチンレベルが女性のＣＦＳ患者において、著しくより低いことを示した。しかし、恐らくこの研究において男性のＣＦＳ試料の数が少なかったため、男性の正常対照と比較して、男性のＣＦＳ患者のフォリスタチンレベルにおける著しい違いは見られなかった。

アクチビン対フォリスタチン比率の比較は、正常範囲グループよりＣＦＳ患者においてアクチビンＡ／フォリスタチン及びアクチビンＢ／フォリスタチン比率が著しくより高いことを示し、アクチビンＢ／フォリスタチンの比率は、大きな違いであった（図３）。一致して、アクチビンＡレベルに対するアクチビンＢレベル（アクチビンＢ：アクチビンＡ比率）は、正常範囲グループと比較したＣＦＳ患者において著しく上昇した（図３）。

このデータは、アクチビンＢレベル及びアクチビン対フォリスタチン比率は、慢性疲労症候群に罹患する患者において、上昇することを示す。

例２
ＣＦＳ重症度に関連するアクチビンＢレベル
線形重回帰分析により、アクチビンＢは、それぞれのＣＦＳ患者（ｐ＝０．０１３）において算出される加重起立時間（ＷＳＴ）の重要な前兆であることを確認した。したがって、ＷＳＴと関連するアクチビンＢをさらに評価した。加重起立時間（ＷＳＴ）を３つのカテゴリに分類した：カテゴリ０は、ＷＳＴ値が１７．１４〜２０．００である、重症度が最も少ないＣＦＳ患者（ｎ＝２）及び健常対照者（ｎ＝１７）を示した（全ての患者が障害０〜２で２０分間起立した）；カテゴリ１は、ＷＳＴ値が７．１４〜１５．７である、重症度が適度なＣＦＳ患者（ｎ＝３０）を示した（全ての患者が障害３〜９で２０分間起立した）；及び、カテゴリ２は、ＷＳＴ値が５．１４以下である、最も重症度の高いＣＦＳ患者を示した（全ての患者は障害が１０〜１４で、２０分間未満起立した）。このデータは図４に示される。最も短いＷＳＴが「最も重症度の高い」クラスと見られる、３つのクラス（ｐ＜０．００１）間で、ＷＳＴ及び起立障害は著しく異なった（図４ａ）。したがって、ＷＳＴはＣＦＳ重症度を測る優れた指標であった。
ＷＳＴ反応クラスを介して決定したように、血清アクチビンＢレベルはＣＦＳ重症度（ｐ＝０．０１１）の増加と共に著しく上昇した（図４ｂ）。反対に、ＡＮＯＶＡ又は相関性／回帰調査を通じてアクチビンＡ及びフォリスタチンが、ＷＳＴ関係に対し重要であることは見出されなかった。
したがって、データは、アクチビンＡでなく、アクチビンＢがＣＦＳの診断用マーカーである可能性があり、さらにＣＦＳの治療の良好な治療上の標的を提示することを示す。

当業者は、本願明細書で記載される本発明が、特に記載される他の多様性及び修飾に、影響されやすいことを理解するであろう。本発明が全てのこれらの多様性及び修飾を含むことが、理解されるべきである。本発明も、全てのステップ、特徴、個別に又は集合的に本明細書に参照される又は示される組成物及び化合物、及び前記ステップ又は特徴のいかなる及び全ての２つ又はそれ以上の組み合わせを含む。
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Claims (25)

1. 哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法であって、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料におけるアクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルをスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベルの正常レベルに対しての増加が、慢性疲労症候群であることを示す、方法。
2. 前記アクチビンβ_Ｂが単量体型である、請求項１に記載の方法。
3. 前記アクチビンβ_Ｂがホモ二量体型である、請求項１に記載の方法。
4. 哺乳動物において慢性疲労症候群を検出する方法であって、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
   （ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｉｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｉｖ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は
   （ｖ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   の１つ又はそれ以上のレベルをスクリーニングすることを含み、前記比率のレベルの正常レベルに対しての増加が、慢性疲労症候群であることを示す、方法。
5. 前記方法が、
   （ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は
   （ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   をスクリーニングすることを含む、請求項４に記載の方法。
6. 哺乳動物において慢性疲労症候群の進行をモニターする方法であって、前記方法が、前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
   （ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
   （ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
   （ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
   （ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   の１つ又はそれ以上のレベルの調節をスクリーニングすることを含み、以前得られたレベルに対して前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率の増加が、前記状態の悪化を示し、前記レベルの減少が前記状態の改善を示し、そして前記レベルに対して変化のないことが、前記状態の重症度に著しい変化がないことを示す、方法。
7. 前記方法が、
   （ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
   （ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
   の１つ又はそれ以上の調節をスクリーニングすることを含む、請求項６に記載の方法。
8. 前記方法が、
   （ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
   （ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   の１つ又はそれ以上の調節をスクリーニングすることを含む、請求項６に記載の方法。
9. 哺乳動物において慢性疲労症候群の重症度を評価する方法であって、前記方法が前記哺乳動物又は前記哺乳動物に由来する生体試料における、
   （ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
   （ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
   （ｉｉｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｉｖ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｖ）アクチビンβ_Ｂ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   （ｖｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
   （ｖｉｉ）アクチビンβ_Ｂ：アクチビンβ_Ａタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
   の１つ又はそれ以上のレベルの調節をスクリーニングすることを含み、前記タンパク質及び／又は遺伝子発現のレベル又は比率が高ければ高いほど、慢性疲労症候群がより重症である、方法。
10. 前記方法が、
    （ｉ）アクチビンβ_Ｂタンパク質及び／又は遺伝子発現；
    （ｉｉ）アクチビンＢタンパク質及び／又は遺伝子発現；
    の１つ又はそれ以上の調節をスクリーニングすることを含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記方法が、
    （ｉ）アクチビンＢ：フォリスタチンタンパク質及び／又は遺伝子発現率；又は、
    （ｉｉ）アクチビンＢ：アクチビンＡタンパク質及び／又は遺伝子発現率；
    の１つ又はそれ以上の調節をスクリーニングすることを含む、請求項９に記載の方法。
12. β_Ｂサブユニットを含む前記タンパク質がアクチビンＢである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記方法がアクチビンＢ、アクチビンＡ又はフォリスタチンタンパク質をスクリーニングすることに関する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記方法がアクチビンＢ、アクチビンＡ又はフォリスタチンｍＲＮＡをスクリーニングすることに関する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
15. スクリーニングされる哺乳動物が、下記リスト：
    （ｉ）労作後倦怠感；
    （ｉｉ）神経認知障害（思考、集中、記憶喪失；
    （ｉｉｉ）視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
    （ｉｖ）睡眠障害；
    （ｖ）筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
    （ｖｉ）血圧低下、めまい感又は蒼白；
    （ｖｉｉ）労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
    （ｖｉｉｉ）光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬物療法に対するアレルギーまたは過敏症；
    （ｉｘ）嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
    （ｘ）泌尿器系の問題；
    （ｘｉ）咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
    （ｘｉｉ）著しい体重変化−極端な減少又は増加；
    （ｘｉｉｉ）温度変化に対処できないこと；
    （ｘｉｖ）頭にかかったもや；
    （ｘｖ）直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
    （ｘｖｉ）食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギーまたは過敏症；
    （ｘｖｉｉ）腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
    （ｘｖｉｉｉ）悪寒及び寝汗
    （ｘｉｘ）視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
    （ｘｘ）うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
    から選択される１つ又はそれ以上の症状を示す哺乳動物である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 哺乳動物における慢性疲労症候群の治療方法であって、前記方法が、前記哺乳動物の機能活性を下方制御することを含む方法。
17. 慢性疲労症候群の治療のための薬物製造における、アクチビンＢ拮抗剤の使用。
18. 治療の対象である哺乳動物が、下記リスト：
    （ｉ）労作後倦怠感；
    （ｉｉ）神経認知障害（思考、集中、記憶喪失；
    （ｉｉｉ）視力、不器用、筋肉の痙攣又はうずきの新しい障害）；
    （ｉｖ）睡眠障害；
    （ｖ）筋肉、関節又は頭部における痛み又は疼痛；
    （ｖｉ）血圧低下、めまい感又は蒼白；
    （ｖｉｉ）労作又は起立に伴う動悸、心拍数増加又は息切れ；
    （ｖｉｉｉ）光、臭い、触覚、音、食物、化学物質及び薬物療法に対するアレルギーまたは過敏症；
    （ｉｘ）嘔気、腹部膨満、便秘症、下痢などの胃腸の変化；
    （ｘ）泌尿器系の問題；
    （ｘｉ）咽喉痛、圧痛のあるリンパ節及びインフルエンザのような感覚；
    （ｘｉｉ）著しい体重変化−極端な減少又は増加；
    （ｘｉｉｉ）温度変化に対処できないこと；
    （ｘｉｖ）頭にかかったもや；
    （ｘｖ）直立体位の維持が困難であること、めまい、バランス障害又は失神；
    （ｘｖｉ）食物、臭い、化学物質、又は騒音に対するアレルギーまたは過敏症；
    （ｘｖｉｉ）腹部膨満、胃痛、便秘症、下痢及び嘔気などの過敏性腸症候群；
    （ｘｖｉｉｉ）悪寒及び寝汗
    （ｘｉｘ）視覚障害（光への過敏症、ぼやけ、眼痛）；及び
    （ｘｘ）うつ状態又は気分障害（易刺激性、気分変動、心配、パニック発作）；
    から選択される１つ又はそれ以上の症状を示す、請求項１６又は１７に記載の方法又は使用。
19. 前記アクチビンＢが、アクチビンＢ拮抗剤を投与することによって下降制御される、請求項１６又は１８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
20. 前記アクチビンＢ拮抗剤が、
    （ｉ）フォリスタチン；
    （ｉｉ）インヒビンのαサブユニット；
    （ｉｉｉ）インヒビン；
    （ｉｖ）アクチビンＢに関する抗体又はアクチビンβサブユニット
    （ｖ）非官能性アクチビン変異体；
    （ｖｉ）非官能性アクチビンＢ受容体変異体；
    （ｖｉｉ）可溶性アクチビンＢ受容体；
    （ｖｉｉｉ）アクチビンＢアンチセンスオリゴヌクレオチド；
    （ｉｘ）トロンビン拮抗剤；
    （ｘ）Ｃｒｉｐｔｏタンパク質；
    （ｘｉ）ＡＬＫ７又はＡＬＫ３受容体の阻害剤；
    （ｘｉｉ）アクチビンβ_Ｂアンチセンスオリゴヌクレオチド；
    （ｘｉｉｉ）ＤＮＡザイム；
    （ｘｉｖ）アプタマー；及び、
    （ｘｖ）アクチビン発現のコサプレッションにおける使用に適切な分子；
    から選択される、請求項１９に記載の方法又は使用。
21. 前記フォリスタチンがＦＳ３１５又はＦＳ２８８である、請求項２０に記載の方法又は使用。
22. 前記フォリスタチンが、
    （ｉ）ＦＳＤ１（アミノ酸配列位置７２−８６）に位置するヘパリン結合配列を有する、後に３個のフォリスタチンドメイン（ＦＳＤ１、ＦＳＤ２及びＦＳＤ３）が続くＮ−末端ドメイン（ＮＤ）を含む野生型フォリスタチン（ＦＳ）、及びそれらの全ての周知のアイソフォーム；
    （ｉｉ）フォリスタチン関連遺伝子産物（ＦＬＲＧ）及びフォリスタチン関連タンパク質（ＦＳＲＰ）として周知であり、２個のフォリスタチン様３ドメイン（ＦＳ３Ｄ１及びＦＳ３Ｄ２）が後に続くＮ−末端ドメイン（Ｎ３Ｄ）を含む、野生型フォリスタチン様３タンパク質（ＦＳＴＬ３）、及びそれらの全ての周知のアイソフォーム；
    （ｉｉｉ）構造ＮＤ−ＦＳＤ１−ＦＳＤ２（すなわち野生型マイナスＦＳＤ３）を有するフォリスタチン類似体；
    （ｉｖ）ＦＳＤ１がＦＳＤ１’によって置換される上記（ｉ）及び（ｉｉｉ）の類似体であって、ＦＳＤ１’は、ヘパリン結合部位が除去されたＦＳＤ１を表す、類似体。
    （ｖ）、ＦＳＤ１^＊によって置換されるＦＳＤ１の上記（ｉ）及び（ｉｉｉ）の類似体であって、ＦＳＤ１^＊が、ヘパリン結合配列より前の配列を有し、かつ前記除去されたヘパリン結合配列を含むＦＳＤ１を表す、類似体；
    （ｖｉ）前記（ｉ）及び（ｉｉｉ）の複合体であって、ドメインの１つ又はそれ以上が、対応するＦＳＴＬ３ドメインＮ３Ｄ、ＦＳ３Ｄ１及びＦＳ３Ｄ２によって置換される、複合体；
    （ｖｉｉ）前記（ｉｉ）の複合体であって、１つ又はそれ以上のドメインが、対応するＦＳドメインＮＤ、ＦＳＤ１、ＦＳＤ１’、ＦＳＤ１^＊及びＦＳＤ２によって置換される、複合体；
    （ｖｉｉｉ）ＮＤ、Ｎ３Ｄ、ＦＳＤ１、ＦＳＤ１’、ＦＳＤ１^＊、ＦＳ３Ｄ１、ＦＳＤ２、ＦＳ３Ｄ２及びＦＳＤ３における、１つ又はそれ以上の除去、挿入及び／又は変異によって修飾される、前記タンパク質のいずれか（ただし、修飾タンパク質は、アクチビンＢ拮抗剤として機能する。）；
    （ｉｘ）他のアクチビン又はフォリスタチン標的に対して、類似アクチビンＢに優先的に修飾された、遺伝的に修飾されたフォリスタチンの遺伝子改変型；
    から選択される、請求項２０に記載の方法又は使用。
23. 前記治療が治療学的である、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の方法又は使用。
24. 前記治療が予防的である、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の方法又は使用。
25. 前記哺乳動物がヒトである、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法又は使用。