JP2016088939A - タンポポ抽出物を含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物とその利用 - Google Patents
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Abstract
【課題】タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を提供すること。
【解決手段】タンポポ抽出物又はその分画物は、ヒアルロン酸の生成及びヒアルロン酸合成酵素の発現を効果的に促進させるため、関節保護、関節炎の予防若しくは治療、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療、及び皮膚の保湿に有利に用いることができる。
【選択図】なし
【解決手段】タンポポ抽出物又はその分画物は、ヒアルロン酸の生成及びヒアルロン酸合成酵素の発現を効果的に促進させるため、関節保護、関節炎の予防若しくは治療、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療、及び皮膚の保湿に有利に用いることができる。
【選択図】なし
Description
本発明は、タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物に関する。
また、本発明は、前記組成物を有効成分として含む関節保護又は関節炎の予防若しくは治療のための薬学的組成物、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善のための医薬部外品組成物、又は食品組成物に関する。
また、本発明は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止又はシワの予防若しくは改善のための化粧料組成物又は食品組成物、又はシワの予防若しくは治療のための薬学的組成物に関する。
また、本発明は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用化粧料組成物、食品組成物又は医薬部外品組成物に関する。
ヒアルロン酸（hyaluronic acid）は、グリコサミノグリカン（glycosaminoglycans）の一種であり、グルクロン酸とN-アセチルグルコサミン残基が繰り返して連結されている鎖状の高分子多糖類の物質である。多量の水と結合してゲルを作る性質があり、高い粘性と弾性を有する。ヒアルロン酸は、細胞外基質の主要な成分であり、水分保持、細胞間の間隔維持、細胞成長因子及び栄養成分の貯蔵と拡散に関与するだけでなく、細胞の分裂と分化、移動などにも関与することが報告されている。
関節においてヒアルロン酸は、関節を保護する滑液の主要な構成成分として線維芽細胞様滑膜細胞（fibrolast-like synoviocytes）から分泌される。ヒアルロン酸は、関節を潤滑させる作用があるが、ヒアルロン酸成分の減少は、骨関節炎発生の原因の一つであり、これにより、関節の衝撃吸収力が低下し、関節が硬くなって歩行が不自由になる。関節内のヒアルロン酸が減少するにつれて関節で外部からの衝撃を吸収したり分散させることができず、関節の損傷がひどくなる場合がある。
滑液内のヒアルロン酸濃度は、ヒアルロン酸合成酵素（hyaluronic acid synthase、HAS）によるヒアルロン酸の生成とヒアルロン酸分解酵素（Hyaluronidase、HYAL）によるヒアルロン酸の分解により決定される。退行性関節炎患者とリウマチ性関節炎患者において滑膜内のHAS-1とHAS-2の発現が減少し、HYAL-2の発現は増加する（非特許文献１）。
一方、皮膚においては、哺乳類の体内に存在するヒアルロン酸の50％以上が、皮膚、特に表皮の細胞間の間隔と真皮の結体組織に分布することが報告されており、このようなヒアルロン酸は、主に角質形成細胞と繊維芽細胞により合成されることが知られている。ヒトの皮膚においてヒアルロン酸の量は、老化と共に減少することが報告されており、皮膚内のヒアルロン酸の減少は、老化に伴う皮膚の弾力低下及び水分含有量の減少の直接の原因の一つとされている（非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。また、ヒアルロン酸は、角質層構造の維持と皮膚のバリア機能の維持にも関与することが知られている（非特許文献５）。
しかし、前記のような効果を有するヒアルロン酸は、食品からは摂取が困難であり、よく吸収されない。また、ヒアルロン酸を関節に注入して関節炎を緩和させる方法が1997年に米国FDAで認定され、現在施術が行われているが、最終的に関節炎を解決するためには、体内のヒアルロン酸の合成を増加させる方法が一層効果的である。したがって、人体内のヒアルロン酸の生成を増加させる方法に関する研究が活発に進められているが、注目すべき研究結果はまだ報告されていないのが現状である。
このような背景の下で、本発明者らは、身体内のヒアルロン酸合成を増加させる物質を開発するために努力を重ねた結果、タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を含む組成物がヒアルロン酸の生成を促進し、ヒアルロン酸合成酵素（HAS）の発現を増加させるため、関節保護、関節炎の予防又は治療、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療、及び皮膚の保湿効果があることを確認し、本発明を完成した。
Arthritis Res Ther, 2004, 6, R514-R520
Biochem Biophys Acta 279, 265-275
Carbohydr Res 159, 127-136
Int J Dermatol 33, 119-122
J Cosmet Dermatol. 2007 Jun, 6（2）, 75-82
Methods, 2001, 25, 402-408
本発明の一つの目的は、タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記組成物を有効成分として含む、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療のための組成物を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止、又はシワの予防若しくは改善のための組成物を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用組成物を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は、前記組成物が化粧料組成物、食品組成物、薬学的組成物及び医薬部外品組成物からなる群から選択されるいずれか一つとして用いられる組成物を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は、前記組成物がタンポポ抽出物又はその分画物を組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含まれる組成物を提供することにある。
本発明の一つの目的は、タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記組成物を有効成分として含む、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療のための薬学的組成物、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善のための医薬部外品組成物、又は食品組成物を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止又はシワの予防若しくは改善のための化粧料組成物又は食品組成物、又はシワの予防若しくは治療のための薬学的組成物を提供することにある。
本発明のもう一つの目的は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用化粧料組成物、食品組成物又は医薬部外品組成物を提供することにある。
タンポポ抽出物又はその分画物は、ヒアルロン酸の生成及びヒアルロン酸合成酵素の発現を効果的に促進させるため、関節保護、関節炎の予防又は治療、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防又は治療、及び皮膚の保湿に有利に用いることができる。
前記目的を達成するために、本発明の一つの態様は、タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸生成促進のための組成物を提供する。
本発明の用語「タンポポ（蒲公英）」は、キク科のタンポポ属（Taraxacum spp.）植物の全草を意味するものであり、具体的には、モウコタンポポ（Taraxacum mongolicum）、シナタンポポ（Taraxacum sinicum）、ケイリンシロタンポポ（Taraxacum coreanum）、シロバナタンポポ （Taraxacum albidum）、アプロゲネースタンポポ（Taraxacum aphrogenes）、ブレビコルニクラトゥムタンポポ（Taraxacum brevicorniculatum）、カリフォルニアタンポポ（Taraxacum californicum）、セントラジアチクムタンポポ（Taraxacum centrasiaticum）、ホルムボエイタンポポ (Taraxacum holmboei)、カントウタンポポ（Taraxacum platycarpum）、カンサイタンポポ（Taraxacum japonicum）、セイヨウタンポポ（Taraxacum officinale）、ロシアタンポポ（Taraxacum kok-saghyz）、アカミタンポポ（Taraxacum laevigatum）、キレハアカミタンポポ（Taraxacum erythrospermum）であってもよいが、これに限定されるものではない。前記タンポポは、商業的に販売されているものを購入したり、自然界で栽培又は採取したものを使用することができる。
本発明の用語「抽出物」は、前記タンポポの抽出処理により得られる抽出液、前記抽出液の希釈液や濃縮液、前記抽出液を乾燥して得られる乾燥物、前記抽出液の調整剤や精製物、又はこれらの混合物など、抽出液自体及び抽出液を利用して形成可能なすべての剤形の抽出物を含む。具体的には、本発明の前記抽出物は、抽出後の乾燥粉末の形態で製造されて使用することができる。
前記抽出物は、前記植物の天然、雑種又は変種植物から抽出することができ、植物組織培養物からも抽出が可能である。
前記タンポポ抽出物の製造方法は、特に制限されず、当該技術分野において通常使用される方法に応じて抽出することができる。前記抽出方法の非限定的な例としては、熱水抽出法、超音波抽出法、ろ過法、還流抽出法などが挙げられ、これらは単独で実行したり、2種以上の方法を併用して行うことができる。また、高純度の抽出物を得るためには、抽出液を同様の方法で1回以上ずつさらに抽出することもできる。
タンポポ抽出物の製造のために使用される抽出溶媒の種類は特に制限されず、本発明の目的効果を有する抽出物が得られるものであれば、当該技術分野において公知となっている任意の溶媒を使用することができる。たとえば、水、炭素数1〜4のアルコール、酢酸エチル、アセトン又はクロロホルムからなる群から選択された一つ以上の溶媒を使用することができる。より具体的には、エタノールを溶媒として使用することができる。
本発明の用語「分画物」とは、さまざまな構成成分を含む混合物から特定成分又は特定成分のグループを分離するために分画を行って得られた結果物を意味する。
前記分画物を得る分画方法は、本発明の目的効果を有する分画物が得られるものであれば特に制限されず、当該技術分野において通常使用される方法によって行うことができる。前記分画方法の非限定的な例としては、タンポポに溶媒を加えて得たタンポポ抽出物に所定の画分溶媒を処理して前記抽出物から分画物を得る方法を挙げることができる。
前記分画溶媒の種類は、本発明の目的効果を有する分画物が得られるものであれば特に制限されず、当該技術分野において公知となっている任意の溶媒を使用することができる。前記分画溶媒の非限定的な例としては、水、アルコール、酢酸エチル、アセトン又はクロロホルムなどの有機溶媒などを挙げることができる。これらは単独で使用したり、2種以上混合して使用することができる。具体的には、前記分画溶媒は、水、炭素数1〜4のアルコール、酢酸エチル、アセトン、及びクロロホルムからなる群から選択された一つ以上であってもよいが、これらに限定されるものではない。
本発明の用語「ヒアルロン酸」とは、グリコサミノグリカン（glycosaminoglycans）の一種であり、グルクロン酸とN-アセチルグルコサミン残基が繰り返して連結されている鎖状の高分子多糖類の物質を意味する。
本発明の一実施例では、退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞様滑膜細胞からタンポポ抽出物が濃度依存的にヒアルロン酸の生成を増加させ、グルコサミン（陽性対照群）よりも200倍少ない量であっても、より高いヒアルロン酸合成効率を示すことを確認した（表2）。
また、退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞様滑膜細胞において、タンポポ抽出物はヒアルロン酸合成酵素、特にHAS-2とHAS-3の発現を増加させ、グルコサミンよりも200倍少ない量でも、類似したHAS-2とHAS-3の発現量を示すことを確認した（表3）。
また、ヒト由来の正常の線維芽細胞様滑膜細胞において、タンポポ抽出物はヒアルロン酸の生成を増加させ、グルコサミンよりも100倍少ない量でも類似したヒアルロン酸濃度を示すことを確認した（表4）。
また、ラットの関節腔内でもタンポポ抽出物はヒアルロン酸の生成を増加させた（表5）。これにより、タンポポ抽出物は滑膜細胞だけでなく、in vivoであるラットの関節腔内で優れたヒアルロン酸生成促進効果を示すことが分かった。
本発明の他の一つの態様は、前記組成物を有効成分として含む、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療のための薬学的組成物を提供する。前記薬学的組成物は、ヒアルロン酸合成酵素（HAS）の発現を増加させることができる。
本発明の用語「関節保護」とは、様々な原因により関節が損傷するのを防止することを意味し、ヒアルロン酸は、関節を保護する滑液の主要な構成成分であるため、ヒアルロン酸が減少すると、関節で外部からの衝撃を吸収したり、分散させることができず、関節の損傷が発生したり、骨関節炎が発生することがある。
本発明の用語「関節炎」とは、様々な原因により関節に炎症が生じていることを意味し、ヒアルロン酸が減少すると、関節炎が発生することがある。具体的には、前記関節炎は、骨関節炎、退行性関節炎、リウマチ性関節炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、痛風、細菌性関節炎、 若年性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、硬皮症、多発性硬化症、線維筋痛症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ベーチェット病、ライター症候群、ライム関節炎、癒着性関節包炎、五十肩、腱滑膜炎、肘頭部滑液包炎、ドケルバン腱滑膜炎、再発性リウマチ、リウマチ性多発筋痛症又は成人スティル病であり、さらに具体的には、退行性関節炎又はリウマチ性関節炎であるが、これに限定されるものではない。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞様滑膜細胞でヒアルロン酸濃度及びヒアルロン酸合成酵素（HAS）遺伝子のmRNA発現量を増加させることができ、正常滑膜細胞及びラットの関節腔内でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認された（表2、3、4、及び5）。ヒアルロン酸は関節を潤滑させ、ヒアルロン酸の減少時に骨関節炎が発生し得ることが知られているため、ヒアルロン酸の生成を促進する効果が優れたタンポポ抽出物又はその分画物は、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療のために効果的に用いることができる。
本発明の薬学的組成物は、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療効果を示し得るものであれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を薬学的組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％で含むことができる。
本発明の用語「予防」とは、前記組成物の投与により関節炎の発症を抑制又は遅延させる全ての行為を意味する。
本発明の用語「治療」とは、前記組成物の投与により既に発症した関節炎の症状が好転したり、有利になるすべての行為を意味する。
また、本発明の薬学的組成物は、常法による適切な担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むことができる。本発明の組成物に含めることができる担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明に係る薬学的組成物は、常法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、外用剤、坐剤又は滅菌注射溶液の形態で剤形化して使用することができる。詳しくは、剤形化する場合、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を使用して調製することができる。経口投与用固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、前記化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調剤することができる。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用することができる。 経口投与用液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、通常使用される単純希釈剤である水、液体パラフィン以外に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれる。非経口投与用製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤及び坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどを使用することができる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール、マクロゴール、ツイン61、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを使用することができる。
本発明の組成物は、薬学的に有効な量で投与する。前記薬学的に有効な量とは、医学的治療に適用可能な合理的な恩恵/リスク比で疾患を治療するのに十分であり、副作用を起こさない程度の量を意味し、有効容量の水準は、患者の健康状態、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与方法、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、配合又は同時に使用される薬物を含む要素及びその他の医学分野においてよく知られている要素に応じて決定することができる。具体的には、投与個体の体重1kg当たり、一般的に1日に0.01mg〜5000mgであり、医師又は薬剤師の判断により一定の投与間隔で1日1回〜数回に分けて投与することもできるが、これらに限定されない。
本発明の一実施例では、タンポポ抽出物を生理食塩水で希釈し、体重200g前後の雄のSDラット（サムタコ、韓国）に、各ラットの体重1kg当たり100又は500mgを1日1回15日間経口投与した結果、本発明に係るタンポポ抽出物は、正常ラットの関節腔内でヒアルロン酸の生成を増加させることを確認した（実施例5）。
また、本発明の薬学的組成物は単独で使用したり、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療効果を示すその他の薬理学的活性化合物と結合して使用したり、又は適切な集合をなして使用することができる。
また、本発明の薬学的組成物は、活性物質が標的細胞に移動することができる任意の本発明の医薬組成物は、ラット、マウス、家畜、ヒトなどの哺乳動物に多様な経路で投与することができる。前記投与は、任意の適切な方法で患者に所定の物質を提供することを意味し、本発明の組成物の投与経路は、目的組織に到達できるものであれば、制限されない。たとえば、関節内投与、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与があるが、これに限定されない。また、本発明の薬学的組成物は、活性物質が標的細胞に移動することができる任意の装置により投与することもできる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を個体に投与する段階を含む関節炎の予防又は治療方法を提供する。
本発明の用語「ヒアルロン酸」、「関節炎」、「予防」、「治療」及び「投与」は、前記で説明した通りである。
前記投与のための投与量、投与頻度、及び投与経路は、前述した通りである。
本発明の用語「個体」とは、前記の関節炎が発症したか又は発症する可能性のあるヒトを含むサル、牛、馬、羊、豚、鶏、七面鳥、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、又はモルモットを含むあらゆる動物を意味し、本発明の組成物を個体に投与することにより、前記疾患を効果的に予防又は治療することができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善のための医薬部外品組成物を提供する。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞様滑膜細胞でヒアルロン酸濃度及びヒアルロン酸合成酵素（HAS）遺伝子のmRNA発現量を増加させることができ、正常滑膜細胞及びラットの関節腔内でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認されたため（表2、3、4、及び5）、タンポポ抽出物又は分画物を含む組成物は、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善のために効果的に用いることができる。
本発明の用語「ヒアルロン酸」、「関節炎」及び「予防」は、前記で説明した通りであり、「改善」とは、本発明組成物の投与により関節炎の症状が好転又は有利に変更されるすべての行為を意味する。
本発明の用語「医薬部外品」とは、ヒトや動物の疾病を治療、軽減、処置又は予防の目的で使用される繊維、ゴム製品、又はそれと類似したもの、人体に対する作用が弱いか、人体に直接作用せず、機具又は機械ではないものとそれと類似したもの、感染予防のために殺菌、殺虫及びこれと類似する用途で使用される製剤のいずれか一つに該当する物品であり、ヒトや動物の疾病を診断、治療、軽減、処置又は予防の目的で使用する物品のうち、器具、機械、又は装置ではないもの及び、ヒトや動物の構造と機能に薬理学的影響を与える目的で使用する物品のうち、器具、機械、又は装置ではないものを除いた物品を意味し、具体的には、皮膚外用剤又は個人衛生用品であるが、これに限定されない。
タンポポ抽出物又は分画物を、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善を目的として、医薬部外品組成物に添加する場合、前記タンポポ抽出物又は分画物をそのまま添加したり他の医薬部外品の成分と共に使用することができ、常法により使用することができる。有効成分の混合量は、使用目的に応じて適切に決定することができる。
前記皮膚外用剤は、特にこれに限定されないが、例えば、軟膏剤、ローション剤、スプレー剤、パッチ剤、クリーム剤、散剤、懸濁剤、ゲル剤又はゲルの形態で製造されて使用することができる。前記個人衛生用品は、特にこれらに限定されないが、具体的には、石鹸、化粧品、ウェットティッシュ、トイレットペーパー、シャンプー、スキンクリーム、顔クリーム、歯磨き粉、口紅、香水、メイクアップ、ファンデーション、チーク、マスカラ、アイシャドウ、日焼け止めローション、ヘアケア製品、ゲルエアフレッシュナー又は洗浄ゲルである。また、本発明の医薬部外品組成物のまた他の例として、消毒清潔剤、シャワーフォーム、ウェットティッシュ、洗剤、石鹸、ハンドウォッシュ、マスク又は外用がある。
本発明の医薬部外品組成物は、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善効果を示すことができれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を医薬部外品組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善のための食品組成物を提供する。前記タンポポは天然物質として長い間使用されて安定性が実証されたため、常食できながらも、関節保護、又は関節炎の予防若しくは改善を図ることができる食品の形態で製造されて摂取することができる。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞様滑膜細胞でヒアルロン酸濃度及びヒアルロン酸合成酵素（HAS）遺伝子のmRNA発現量を増加させることができ、正常滑膜細胞及びラットの関節腔内でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認されたため（表2、3、4、及び5）、タンポポ抽出物又は分画物を含む組成物は、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善のために効果的に用いることができる。
本発明の用語「ヒアルロン酸」、「関節炎」、「予防」及び「改善」は、前記で説明した通りである。
本発明の用語「食品」は、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料、ビタミン複合剤、機能性食品及び健康食品などがあり、通常の意味での食品をすべて含む。
前記機能性食品（functional food）とは、特定保健用食品（food for special health use、FoSHU）と同一な用語であり、栄養補給以外にも、生体調節機能が効率的に示されるように加工された医学、医療効果の高い食品を意味する。ここで「機能性」とは、人体の構造及び機能に対して栄養素を調整したり、生理学的作用などのような健康用途に有用な効果を得ることを意味する。 本発明の機能性食品は、当業界において通常使用される方法により製造可能であり、前記製造時には、当業界において通常添加する原料及び成分を添加して製造することができる。また、前記機能性食品の剤形も、機能性食品として認められる剤形であれば制限なく製造することができる。本発明の食品用組成物は、様々な形態の剤形に製造することができ、一般の医薬品とは異なり、食品を原料にして薬品の長期服用時に発生し得る副作用などがないという長所があり、携帯性に優れ、本発明の機能性食品は、関節炎の予防又は改善の効果を増進させるための補助剤として摂取が可能である。
前記健康食品（health food）は、一般の食品に比べて積極的な健康維持や増進効果を有する食品を意味し、健康補助食品（health supplement food）は、健康補助を目的とする食品を意味する。場合によっては、機能性食品、健康食品、健康補助食品の用語は混用される。
具体的には、前記健康食品は、タンポポ抽出物又はその分画物を飲料、お茶類、香辛料、ガム、菓子類などの食品素材に添加したり、カプセル化、粉末化、懸濁液などで製造した食品であり、これを摂取した場合の健康上の特定の効果をもたらすことを意味するが、一般の医薬品とは異なり、食品を原料として薬品の長期服用時に発生し得る副作用がないという長所がある。
本発明の食品組成物は、日常的に摂取することが可能であるため、高い関節保護効果を期待することができ、非常に有用である。
また、前記組成物は、食品組成物に通常使用され、臭い、味、視覚などを向上させる追加の成分を含むことができる。例えば、ビタミンA、C、D、E、B1、B2、B6、B12、ナイアシン、ビオチン、葉酸、パントテン酸などを含むことができる。また、亜鉛（Zn）、鉄（Fe）、カルシウム（Ca）、クロム（Cr）、マグネシウム（Mg）、マンガン（Mn）、銅（Cu）などのミネラルを含むことができる。また、リジン、トリプトファン、システイン、バリンなどのアミノ酸を含むことができる。
また、前記組成物は、防腐剤（ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、サリチル酸、デヒドロ酢酸ナトリウムなど）、殺菌剤（さらし粉と高度さらし粉、次亜塩素酸ナトリウムなど）、酸化防止剤（ブチルヒドロキシアニソール（BHA）、ブチルヒドロキシトルエン（BHT）など）、着色剤（タール色素など）、発色剤（亜硝酸ナトリウム、亜酢酸ナトリウムなど）、漂白剤（亜硫酸ナトリウム）、調味料（MSGグルタミン酸ナトリウムなど）、甘味料（ズルチン、シクラミン酸塩、サッカリン、ナトリウムなど）、香料（バニリン、ラクトン類など）、膨張剤（ミョウバン、D-酒石酸水素カリウムなど）、強化剤、乳化剤、増粘剤（糊料）、皮膜剤、ガム基礎剤、泡抑制剤、溶剤、改良剤などの食品添加物を含むことができる。前記添加物は、食品の種類に応じて選別され、適切な量で使用することができる。
タンポポ抽出物又はその分画物を食品添加物として使用する場合は、タンポポ抽出物又はその分画物をそのまま添加したり他の食品又は食品成分と共に使用することができ、常法により適切に使用することができる。有効成分の混合量は、その使用目的（予防、健康又は治療的処置）に応じて適切に決定することができる。一般に、食品又は飲料の製造時に、本発明の食品組成物は、原料に対して15重量%以下、好ましくは10重量%以下の量で添加される。しかし、健康及び衛生を目的に長期間摂取した場合には、前記の範囲以下の含量を含むことができ、安全性の面で何の問題もないため、有効成分は、前記範囲を超える量でも使用することができる。
本発明の食品組成物の一例として、健康飲料組成物に使用することができ、その場合、通常の飲料のように様々な香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖のような単糖類；マルトース、スクロースのような二糖類；デキストリン、シクロデキストリンのような多糖類；キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールであってもよい。甘味剤は、ソーマチン、ステビア抽出物のような天然甘味料；サッカリン、アスパルテームのような合成甘味剤などを使用することができる。前記天然炭水化物の割合は、本発明の組成物100mL当たり、一般に約0.01〜0.04g、好ましくは約0.02〜0.03gである。
前記以外に、健康飲料組成物は、種々の栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸、ペクチン酸の塩、アルギン酸、アルギン酸の塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、pH調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール又は炭酸化剤などを含有することができる。それ以外に、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、又は野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、独立して、又は混合して使用することができる。これらの添加剤の割合は、それほど重要ではないが、本発明の組成物100重量%当り0.01〜0.1重量%の範囲で選択されるのが一般的である。
本発明の食品組成物は、関節保護又は関節炎の予防若しくは改善効果を示すことができれば、多様な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を食品組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止、又はシワの予防若しくは改善のための化粧料組成物を提供する。
本発明の用語「皮膚弾力性」は、真皮層に存在するエラスチン（elastin）で構成された弾力繊維により示されるが、このような弾力性繊維は、ゴムのように非常に低い弾性係数を有しており、小さな力によっても容易に変形し、またその力が除去されると、容易に円形に戻る。前記エラスチンとコラーゲンをつなぐヒアルロン酸が減少すると、皮膚の弾力性が低下する。
本発明の用語「皮膚の老化」とは、皮膚にハリの減少、ツヤの減少、シワの生成、再生力の低化又は重度の乾燥などの症状が現れることであり、時間の経過又は外部環境などにより誘発されることがあり、ヒアルロン酸が減少すると、皮膚弾力性が低下したり、シワが生成されるため、ヒアルロン酸の減少により誘発されうる。
本発明の用語「シワ」は、皮膚が衰えて生じた細い筋を意味するが、遺伝子による原因、皮膚真皮に存在するコラーゲンの減少、外部環境などにより誘発されることがあり、エラスチンとコラーゲンをつなぐヒアルロン酸が減少すると、シワが生成される。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸濃度を増加させうることを確認し（表6）、皮膚水分量の増加効果及び水分保持能が非常に優れていることを確認し（表7）、皮膚弾力性の改善効果が非常に優れていることが確認されたため（表8）、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防又は改善のために効果的に用いることができる。
本発明の用語「予防」とは、前記組成物の投与により老化又はシワを抑制又は遅延させる全ての行為を意味する。
本発明の用語「改善」とは、本発明組成物の投与により皮膚弾力性又はシワが好転又は有利に変更されるすべての行為を意味する。
本発明の化粧料組成物が皮膚弾力性の改善、老化防止、又はシワの予防若しくは改善効果を示すことができれば、多様な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を化粧料組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％で含むことができる。
前記化粧料組成物の剤形は、溶液、外用軟膏、クリーム、フォーム、栄養化粧水、柔軟化粧水、香水、パック、柔軟水、乳液、メイクアップベース、エッセンス、石鹸、液体洗浄料、入浴剤、日焼け止めクリーム、サンオイル、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、ローション、パウダー、石鹸、界面活性剤-含有クレンジング、オイル、粉末ファンデーション、乳濁液ファンデーション、ワックスファンデーション、パッチ又はスプレーであってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記化粧料組成物は、一般の皮膚化粧料に配合される化粧品学的に許容可能な担体を1種以上さらに含むことができ、通常の成分として、例えば、油分、水、界面活性剤、保湿剤、低級アルコール、増粘剤、キレート剤、無機塩類、色素、酸化防止剤、殺菌剤、防腐剤、香料などを適切に配合することができるが、これらに限定されるものではない。
前記化粧品学的に許容可能な担体は、前記化粧料組成物の剤形に応じて多様である。
前記製剤が軟膏、ペースト、クリーム又はゲルである場合には、担体成分として動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク又は酸化亜鉛などを用いることができるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で使用したり、2種以上混合して使用することができる。
前記剤形が、パウダー又はスプレーである場合には、担体成分としてラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、ケイ酸カルシウム、ポリアミドパウダーなどを用いることができ、特にスプレーの場合には、さらにクロロフルオロ炭化水素、プロパン/ブタン又はジメチルエーテルのような推進剤を含むことができるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で使用したり、2種以上混合して使用することができる。
前記剤形が、溶液又は乳濁液である場合には、担体成分として、溶媒、溶解化剤又は乳濁化剤などを用いることができ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1,3-ブチルグリコールオイルなどを用いることができ、特に、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブオイル、ヒマシ油及びごま油、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール又はソルビタン脂肪酸エステルが用いられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で使用したり、2種以上混合して使用することができる。
前記製剤が懸濁液である場合には、担体成分として、水、エタノール又はプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天又はトラカントなどが用いられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で使用したり、2種以上混合して使用することができる。
本発明の剤形が石鹸である場合には、担体成分として脂肪酸のアルカリ金属塩、脂肪酸ヘミエステル塩、脂肪酸タンパク質加水分解物、イセチオン酸塩、ラノリン誘導体、脂肪族アルコール、植物油、グリセロール、糖などが用いられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で使用したり、2種以上混合して使用することができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止、又はシワの予防若しくは改善のための食品組成物を提供する。
本発明の用語「ヒアルロン酸」、「皮膚弾力性 」、「老化」、「シワ」、「予防」、「改善」及び「食品」は、前記で説明した通りである。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認され（表6）、皮膚水分量の増加効果及び水分保持能に非常に優れていることが確認され（表7）、皮膚弾力性の改善効果が非常に優れていることが確認されたため（表8）、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは改善のために効果的に用いることができる。
本発明の食品組成物は、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防又は改善効果を示しうるものであれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を食品組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含むシワの予防又は治療のための薬学的組成物を提供する。
本発明の用語「ヒアルロン酸」、「シワ」及び「予防」は、前記で説明した通りである。
本発明の用語「治療」とは、前記組成物の投与により既に発生したシワが好転したり、有利になるすべての行為を意味する。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認され（表6）、皮膚水分量の増加効果及び水分保持能が非常に優れることが確認され（表7） 、皮膚弾力性の改善効果が非常に優れていることが確認されたため（表8）、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療のために効果的に用いることができる。
本発明の薬学的組成物は、シワの予防又は治療効果を示すことができるものであれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を薬学的組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用化粧料組成物を提供する。
本発明のヒアルロン酸、化粧料組成物の剤形及び担体は、前記で説明した通りである。
本発明の用語「保湿」とは、水分の損失（水分の蒸発）などを適切に調節し、生体の恒常性を維持することを意味することであり、皮膚内のヒアルロン酸が減少すると水分が失われ、ヒアルロン酸が増加すると水分が増加する。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認され（表6）、皮膚の水分量の増加効果及び水分保持能が非常に優れていることが確認されたため（表7）、皮膚の保湿に効果的に用いることができる。
本発明の化粧料組成物は、皮膚の保湿効果を示しうるものであれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を化粧料組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用食品組成物を提供する。
本発明の「ヒアルロン酸」、「保湿」及び「食品」は、前記で説明した通りである。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は人体由来の角質形成細胞においてヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認され（表6）、皮膚水分量の増加効果及び水分保持能が非常に優れていることが確認されたため（表7）、皮膚の保湿に効果的に用いることができる。
本発明の食品組成物は、皮膚の保湿効果を示しうるものであれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を食品組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
本発明の他の一つの態様は、前記ヒアルロン酸の生成を促進するための組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用医薬部外品組成物を提供する。
本発明の「ヒアルロン酸」、「保湿」及び「医薬部外品」は、前記で説明した通りである。
本発明の一実施例において、タンポポ抽出物は、人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸濃度を増加させうることが確認され（表6）、皮膚水分量の増加効果及び水分保持能が非常に優れていることが確認されたため（表7）、皮膚の保湿に効果的に用いることができる。
本発明の医薬部外品組成物は、皮膚の保湿効果を示しうるものであれば、様々な重量％で含むことができるが、具体的には、タンポポ抽出物又はその分画物を医薬部外品組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含むことができる。
以下、本発明をより具体的に説明するために、下記の実施例等を挙げて説明する。しかし、本発明に係る実施例は、様々な他の形態に変形することができ、本発明の範囲が以下で詳述する実施例に限定されるものと解釈されてはならない。本発明の実施例は、本発明の具体的な理解を助けるために例示的に提供されるものである。
製造例1．タンポポ抽出物の製造
下記の実施例で使用したタンポポ抽出物はエタノール抽出物であり、OBM RAP CO.,LTDから購入して使用した。
下記の実施例で使用したタンポポ抽出物はエタノール抽出物であり、OBM RAP CO.,LTDから購入して使用した。
実施例1．タンポポ抽出物の細胞毒性の評価
タンポポ抽出物の細胞毒性を評価するために、退行性関節炎患者から採取したヒト線維芽細胞様滑膜細胞（Human Fibroblast-like Synoviocyte、HFLS-OA、Cell Applications）の細胞分裂の変化をCell Counting Kit-8（Dojindo Lab、米国）を使用して測定した。
タンポポ抽出物の細胞毒性を評価するために、退行性関節炎患者から採取したヒト線維芽細胞様滑膜細胞（Human Fibroblast-like Synoviocyte、HFLS-OA、Cell Applications）の細胞分裂の変化をCell Counting Kit-8（Dojindo Lab、米国）を使用して測定した。
まず、均一数の細胞を96-ウェルプレートに敷き詰めた後、安定化させてから、タンポポ抽出物を5又は10ppmとなるように処理して24時間さらに培養した。その後、CCK-8を処理して2時間後に450nmで吸光度を測定した。無処理群（対照群）に比べてタンポポ抽出物を処理した細胞の相対的な細胞生存率を以下のように分析し、その結果を下記表1に示した。
前記表1で示されるように、タンポポ抽出物の処理により細胞の数に大きな変化はないことが分かった。これは、タンポポ抽出物が細胞毒性を起こさないことを示唆するものである。
実施例2．退行性関節炎患者の滑膜細胞におけるタンポポ抽出物によるヒアルロン酸濃度の増加
退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞量滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地（Synoviocyte Growth Medium、Cell Applications）で培養し、96-ウェルプレートにウェル当たり2.0×103個の細胞を分注した。3日間培養した後、滑膜細胞増殖培地 200μｌに交換し、タンポポ抽出物を濃度別（5及び10ppm）に添加した。陰性対照群として同量のエタノールを処理し、陽性対照群としてヒアルロン酸の生成を促進することが知られているグルコサミン塩酸塩（Glucosamine hydrochloride、Sigma-aldrich）を1000ppmで処理した。24時間培養した後、細胞培養液を回収し、ヒアルロン酸ELISAキット（R＆D Systems）を用いてヒアルロン酸濃度を測定して表2に示した。
退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞量滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地（Synoviocyte Growth Medium、Cell Applications）で培養し、96-ウェルプレートにウェル当たり2.0×103個の細胞を分注した。3日間培養した後、滑膜細胞増殖培地 200μｌに交換し、タンポポ抽出物を濃度別（5及び10ppm）に添加した。陰性対照群として同量のエタノールを処理し、陽性対照群としてヒアルロン酸の生成を促進することが知られているグルコサミン塩酸塩（Glucosamine hydrochloride、Sigma-aldrich）を1000ppmで処理した。24時間培養した後、細胞培養液を回収し、ヒアルロン酸ELISAキット（R＆D Systems）を用いてヒアルロン酸濃度を測定して表2に示した。
その結果、タンポポ抽出物は、濃度依存的に退行性関節炎患者の滑膜細胞でヒアルロン酸の生成を増加させた。また、タンポポ抽出物は、陽性対照群より200倍も少ない量でもさらに高いヒアルロン酸濃度を示した。
これにより、タンポポ抽出物は退行性関節炎患者の滑膜細胞でヒアルロン酸生成促進効果が非常に優れていることが確認されたため、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療に有利に用いることができる。
実施例3．退行性関節炎患者の滑膜細胞でタンポポ抽出物によるヒアルロン酸合成酵素（HAS）遺伝子発現の増加
退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞量滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地で6-ウェルプレートに分注し、3日間培養した後、培地を交換し、10ppmの濃度のタンポポ抽出物を24時間処理した。細胞を回収し、RNeasy mini kit（Qiagen）で全体RNAを抽出した後、定量して1μｇのRNAをGeneAmp（登録商標）RNA PCR kit（Applied Biosystems）を用いて逆転写した。逆転写の反応はMycycler（登録商標）PCR機器（Biorad）を用いて行った。
退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞量滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地で6-ウェルプレートに分注し、3日間培養した後、培地を交換し、10ppmの濃度のタンポポ抽出物を24時間処理した。細胞を回収し、RNeasy mini kit（Qiagen）で全体RNAを抽出した後、定量して1μｇのRNAをGeneAmp（登録商標）RNA PCR kit（Applied Biosystems）を用いて逆転写した。逆転写の反応はMycycler（登録商標）PCR機器（Biorad）を用いて行った。
その後、逆転写反応溶液2μｌとHAS-2、HAS-3、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）のTaqman（登録商標）probe（Invitrogen社、米国、Hs00193435_m1,Hs00193436_m1）を利用して定量的リアルタイムPCRを行ったリアルタイムPCRは、CFX96 Touch（登録商標）リアルタイムPCR 検出システム機器（Bio-Rad）を用いて行った。 リアルタイムPCRによって得られた実験結果は、ハウスキーピング遺伝子であるGAPDHを基準としてLivak K.J.ほか（非特許文献６）に記載の方法で計算して示した。
また、陰性対照群のmRNA発現量を基準（100％）としてタンポポ抽出物処理実験群のmRNA発現量を数値化して表3に示した。
その結果、タンポポ抽出物の処理により退行性関節炎患者の滑膜細胞でヒアルロン酸合成酵素、特にHAS-2とHAS-3の発現が増加した。また、タンポポ抽出物は、陽性対照群より200倍も少ない量でも陽性対照群と類似したHAS-2とHAS-3の発現量を示した。
これにより、タンポポ抽出物は退行性関節炎患者の滑膜細胞でヒアルロン酸合成酵素の発現を増加させる効果が非常に優れていることが確認されたため、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療に有利に用いることができる。
実施例4．正常滑膜細胞でタンポポ抽出物によるヒアルロン酸濃度の増加
ヒトの線維芽細胞様滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地で培養し、96-ウェルプレートにウェル当たり2.0×103個の細胞を分注した。3日間培養した後、滑膜細胞増殖培地200μｌに交換し、タンポポ抽出物を10ppmで添加した。陰性対照群として同量の溶媒を処理し、陽性対照群としては、グルコサミン塩酸塩1000ppmで処理した。24時間培養後、細胞培養液を回収し、ヒアルロン酸ELISAキット（R＆D Systems）を用いてヒアルロン酸濃度を測定して表4に示した。
ヒトの線維芽細胞様滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地で培養し、96-ウェルプレートにウェル当たり2.0×103個の細胞を分注した。3日間培養した後、滑膜細胞増殖培地200μｌに交換し、タンポポ抽出物を10ppmで添加した。陰性対照群として同量の溶媒を処理し、陽性対照群としては、グルコサミン塩酸塩1000ppmで処理した。24時間培養後、細胞培養液を回収し、ヒアルロン酸ELISAキット（R＆D Systems）を用いてヒアルロン酸濃度を測定して表4に示した。
その結果、タンポポ抽出物は、正常滑膜細胞でヒアルロン酸の生成を増加させた。また、タンポポ抽出物は陽性対照群より100倍も少ない量でも陽性対照群と類似したヒアルロン酸濃度を示した。
これにより、タンポポ抽出物は正常滑膜細胞でヒアルロン酸生成促進効果が非常に優れていることが確認されたため、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療に有利に用いることができる。
実施例5．ラットの関節腔内におけるタンポポ抽出物によるヒアルロン酸濃度の増加
体重200g前後の雄性SDラット（サムタコ、韓国）を購入し、温度23±1℃、湿度55±5％に調整された恒温恒湿飼育装置（デジョン機器商社、韓国）内で1週間適応させた後、実験に使用した。試料処置群（n=8）にタンポポ抽出物を生理食塩水で希釈し、それぞれラットの体重1kg当たり100又は500mgを1日1回15日間経口投与し、対照群（n=8）の場合、溶媒のみ同様の方法で投与した。その後、ヒアルロン酸濃度を測定するために大腿骨及び脛骨を共に摘出した後、左膝関節腔内に生理食塩水0.5ｍｌを注射して洗浄し、洗浄された滑膜を100μｌ以上採取して検査前まで-70℃で凍結保管した。滑液内のヒアルロン酸濃度をヒアルロン酸ELISAキット（R＆D Systems）により測定して表5に示した。
体重200g前後の雄性SDラット（サムタコ、韓国）を購入し、温度23±1℃、湿度55±5％に調整された恒温恒湿飼育装置（デジョン機器商社、韓国）内で1週間適応させた後、実験に使用した。試料処置群（n=8）にタンポポ抽出物を生理食塩水で希釈し、それぞれラットの体重1kg当たり100又は500mgを1日1回15日間経口投与し、対照群（n=8）の場合、溶媒のみ同様の方法で投与した。その後、ヒアルロン酸濃度を測定するために大腿骨及び脛骨を共に摘出した後、左膝関節腔内に生理食塩水0.5ｍｌを注射して洗浄し、洗浄された滑膜を100μｌ以上採取して検査前まで-70℃で凍結保管した。滑液内のヒアルロン酸濃度をヒアルロン酸ELISAキット（R＆D Systems）により測定して表5に示した。
その結果、タンポポ抽出物は、正常ラットの関節腔内でヒアルロン酸の生成を増加させた。
これにより、タンポポ抽出物はin vivoであるラットの関節腔内でヒアルロン酸生成促進効果が非常に優れていることが確認されたため、関節保護又は関節炎の予防若しくは治療に有利に用いることができる。
実施例6. HaCaT細胞におけるタンポポ抽出物によるヒアルロン酸濃度の増加
人体由来の角質形成細胞であるHaCaT細胞を、10％のFBSを含むDMEM培地に2×104 cells/mlで製造し、24-ウェルプレートに1mlずつ分注した。24時間培養した後、牛血清を含まないDMEM培地1mlに交換し、タンポポ抽出物を30ppmで添加した。陰性対照群として同量のエタノールを処理し、陽性対照群としてヒアルロン酸の生成を促進することで知られているグルコサミン塩酸塩（Sigma-aldrich）を100ppmで処理した。48時間培養後、細胞培養液を回収してヒアルロンサンELISAキット（R＆D Systems）を用い、ヒアルロン酸濃度を測定して表6に示した。
人体由来の角質形成細胞であるHaCaT細胞を、10％のFBSを含むDMEM培地に2×104 cells/mlで製造し、24-ウェルプレートに1mlずつ分注した。24時間培養した後、牛血清を含まないDMEM培地1mlに交換し、タンポポ抽出物を30ppmで添加した。陰性対照群として同量のエタノールを処理し、陽性対照群としてヒアルロン酸の生成を促進することで知られているグルコサミン塩酸塩（Sigma-aldrich）を100ppmで処理した。48時間培養後、細胞培養液を回収してヒアルロンサンELISAキット（R＆D Systems）を用い、ヒアルロン酸濃度を測定して表6に示した。
その結果、タンポポ抽出物は、人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸の生成を増加させた。
これにより、タンポポ抽出物は人体由来の角質形成細胞でヒアルロン酸生成促進効果が非常に優れていることが確認されたため、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療、及び皮膚の保湿に有利に用いることができる。
実施例7．タンポポ抽出物による皮膚水分量の増加
タンポポ抽出物を含有する化粧料に対する皮膚水分量の増加効果をヒトの皮膚に適用させるために、下記製剤例2の栄養クリームの組成に応じて製造し、22℃及び相対湿度50％の恒温恒湿室で健康な成人30人の下膊内側に一定量（2mg/cm2）を塗布し、塗布前、塗布1時間後及び塗布2時間後の皮膚の水分含有量を測定した。対照群の場合タンポポ抽出物の代わりに同量のエタノールを含有した栄養クリームを同様の方法で製造して塗布し、如何なる処理もされていない正常な皮膚を無処理群として使用した。水分保持能の測定はコルネオメーター(Corneometer)（Courage + Khazaka、GmbH、Germany）を使用し、皮膚表面の電気伝導度を測定した。その結果は、次の表7に示した。
タンポポ抽出物を含有する化粧料に対する皮膚水分量の増加効果をヒトの皮膚に適用させるために、下記製剤例2の栄養クリームの組成に応じて製造し、22℃及び相対湿度50％の恒温恒湿室で健康な成人30人の下膊内側に一定量（2mg/cm2）を塗布し、塗布前、塗布1時間後及び塗布2時間後の皮膚の水分含有量を測定した。対照群の場合タンポポ抽出物の代わりに同量のエタノールを含有した栄養クリームを同様の方法で製造して塗布し、如何なる処理もされていない正常な皮膚を無処理群として使用した。水分保持能の測定はコルネオメーター(Corneometer)（Courage + Khazaka、GmbH、Germany）を使用し、皮膚表面の電気伝導度を測定した。その結果は、次の表7に示した。
その結果、タンポポ抽出物を含有する栄養クリームは、ヒトの皮膚水分量を増加させ、塗布2時間後でも、優れた水分保持能を示した。
これにより、タンポポ抽出物は皮膚水分量の増加効果及び水分保持能が非常に優れていることが確認されたため、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療、及び皮膚の保湿に有利に用いることができる。
実施例8．タンポポ抽出物による皮膚弾力性の増進
本発明のタンポポ抽出物を含有する化粧料に対する皮膚弾力性の増進効果をヒトの皮膚に適用させるために、下記製剤例2の栄養クリームの組成に応じて製造し、22℃及び相対湿度50％の恒温恒湿室で健康な成人30人の首のまわりに4週間塗布した後、塗布前、塗布後の弾力性を測定し、皮膚弾力性の改善効果を比較評価した。
本発明のタンポポ抽出物を含有する化粧料に対する皮膚弾力性の増進効果をヒトの皮膚に適用させるために、下記製剤例2の栄養クリームの組成に応じて製造し、22℃及び相対湿度50％の恒温恒湿室で健康な成人30人の首のまわりに4週間塗布した後、塗布前、塗布後の弾力性を測定し、皮膚弾力性の改善効果を比較評価した。
被検者の首の左側にはタンポポ抽出物を含有した栄養クリームを、右側にはタンポポ抽出物の代わりに同量のエタノールを含有した栄養クリームを1日2回ずつ朝・夕方に洗顔後4週間使用するようにした。その後、皮膚弾力性測定器（Cutometer、C+ K、Germany）を用いて各部位における弾力性の改善程度を測定した。改善程度はUr/Ufをパラメーターとして使用し、その結果を表8に示した。
その結果、タンポポ抽出物を含有する栄養クリームは、ヒトの皮膚弾力性を向上させ、皮膚内に如何なる副作用も示さなかった。
これにより、タンポポ抽出物は皮膚弾力性の改善効果が非常に優れていることが確認されたため、皮膚弾力性の改善、老化防止、及びシワの予防又は治療に有利に用いることができる。
以上のような効果試験の結果を根拠として本発明に係る組成物の様々な製剤例を具体的に説明する。ただし、これらの製剤例は、本発明組成物の例示に過ぎず、本発明組成物の範囲がこれら剤形のみに限定されないことは、当業界において通常の知識を有する者にとって自明であろう。
製剤例1．健康飲料の製造
タンポポ抽出物 0.1mg
クエン酸 1000mg
オリゴ糖 100g
梅濃縮液 2g
タウリン 1g
精製水を加えて、全900mL
タンポポ抽出物 0.1mg
クエン酸 1000mg
オリゴ糖 100g
梅濃縮液 2g
タウリン 1g
精製水を加えて、全900mL
通常の健康飲料の製造方法により、前記成分を混合した後、85℃で約1時間撹拌加熱した後、製造された溶液を濾過し、滅菌された2L-容器に取得して密封滅菌した後、冷蔵保管し、その後本発明の健康飲料組成物の製造に使用した。
前記組成比は、比較的嗜好飲料に適した成分を好適な実施例で混合組成したが、需要層、需要国、使用用途など地域、民族的嗜好度に応じて、その配合比を任意に変えて実施してもよい。
製剤例2．栄養クリームの製造
下記組成のように、タンポポ抽出物を有効成分として含む栄養クリームを常法に従って製造した。
下記組成のように、タンポポ抽出物を有効成分として含む栄養クリームを常法に従って製造した。
タンポポ抽出物 1.0重量％
ベータ-1,3-グルカン 5.0重量％
ロウ 10.0重量％
ポリソルベート60 1.5重量％
PEG-60 硬化ヒマシ油 2.0重量％
ソルビタンセスキオレエート 0.5重量％
流動パラフィン 10.0重量％
スクアラン 5.0重量％
トリ(カプリル酸/ カプリン酸)グリセリル 5.0重量％
グリセリン 5.0重量％
ブチレングリコール 3.0重量％
プロピレングリコール 3.0重量％
トリエタノールアミン 0.2重量％
防腐剤 0.05重量％
色素 0.05重量％
香料 0.05重量％
精製水 to 100重量％
ベータ-1,3-グルカン 5.0重量％
ロウ 10.0重量％
ポリソルベート60 1.5重量％
PEG-60 硬化ヒマシ油 2.0重量％
ソルビタンセスキオレエート 0.5重量％
流動パラフィン 10.0重量％
スクアラン 5.0重量％
トリ(カプリル酸/ カプリン酸)グリセリル 5.0重量％
グリセリン 5.0重量％
ブチレングリコール 3.0重量％
プロピレングリコール 3.0重量％
トリエタノールアミン 0.2重量％
防腐剤 0.05重量％
色素 0.05重量％
香料 0.05重量％
精製水 to 100重量％
製剤例3：局所投与用薬剤（ゲル軟膏剤）の製造
下記組成のように、タンポポ抽出物を有効成分として含むゲル軟膏剤を常法に従って製造した。
下記組成のように、タンポポ抽出物を有効成分として含むゲル軟膏剤を常法に従って製造した。
タンポポ抽出物 0.5重量％
ベータ-1,3-グルカン 10.0重量％
ポリアクリル酸（Carbopol 940）1.5重量％
イソプロパノール 5.0重量％
ヘキシレングリコール 25.0重量％
トリエタノールアミン 1.7重量％
脱イオン水 〜100重量％
ベータ-1,3-グルカン 10.0重量％
ポリアクリル酸（Carbopol 940）1.5重量％
イソプロパノール 5.0重量％
ヘキシレングリコール 25.0重量％
トリエタノールアミン 1.7重量％
脱イオン水 〜100重量％
製剤例4：顆粒の製造
タンポポ抽出物 2mg
大豆抽出物 50mg
グルコース 200mg
澱粉 600mg
タンポポ抽出物 2mg
大豆抽出物 50mg
グルコース 200mg
澱粉 600mg
前記の成分を混合した後、30％のエタノール100mgを添加し、60℃で乾燥して顆粒を形成した後、布に充填した。
以上の説明から、本発明が属する技術分野の当業者は、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく他の具体的な形態で実施され得ることが理解できるだろう。これに関連し、以上で記述した実施例は、すべての面で例示的なものであり、限定的なものではないものとして理解しなければならない。本発明の範囲は、前記詳細な説明よりは、後述する特許請求の範囲の意味及び範囲そしてその等価概念から導き出されるすべての変更又は変形された形態が本発明の範囲に含まれるものと解釈されるべきである。
Claims (6)
- タンポポ（Taraxacum spp.）抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物。
- 請求項１の組成物を有効成分として含む関節保護、又は関節炎の予防若しくは治療のための組成物。
- 請求項１の組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止、又はシワの予防若しくは改善のための組成物。
- 請求項１の組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用組成物。
- 前記組成物は、化粧料組成物、食品組成物、薬学的組成物及び医薬部外品組成物からなる群から選択されるいずれか一つとして用いられる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物は、タンポポ抽出物又はその分画物を組成物の総重量に対して0.00001〜10重量％含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
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