JP2015516971A - ざ瘡の処置方法 - Google Patents

Abstract

ざ瘡の処置のための改善された方法を記載している。該方法は、約４０ｍｇのドキシサイクリンを、即時放出部分に約３０ｍｇのドキシサイクリンおよび遅延放出部分に約１０ｍｇのドキシサイクリンを含む医薬組成物で１６週間にわたって１日１回経口投与することを伴う。驚くべきことに、この約４０ｍｇのドキシサイクリンの１６週間の１日１回の経口投与により、１００ｍｇのドキシサイクリンと同じかまたはそれより優れた有効性が得られるが、有害事象は有意に低減されることがわかった。

Description

先の出願の引用
本願は、２０１２年４月１９日に出願された米国仮出願第６１／６３５，６０６号の利益を主張する。米国仮出願第６１／６３５，６０６号は、その全体が参考として明確に援用される。

発明の背景
ざ瘡は脂漏（鱗屑性の赤い皮膚）、面皰（黒色面皰および白色面皰）、丘疹（小尖面皰（ｐｉｎｈｅａｄ））、膿疱（吹き出物）、小結節（大きな丘疹）ならびに場合により瘢痕化を伴う皮膚領域を特徴とする一般的な皮膚疾患である。Ａｄｉｔｙａｎら，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｖｅｎｅｒｅｏｌ Ｌｅｐｒｏｌ ７５（３）：３２３−６（２００９）。多元的要素、例えば、異常に粘着性の落屑細胞による毛包の詰まり、細菌（例えば、ざ瘡プロピオンバクテリウム）の増殖およびコロニー形成、局所炎症ならびに毛包角質化および皮脂生成の異常がざ瘡の発生に寄与している。ざ瘡の処置には、重度の症例では多くの場合、表面（ｔｏｐｉｃａｌ）投与または経口投与によってエリスロマイシン、クリンダマイシンおよびテトラサイクリンなどの抗生物質が使用されている。

ドキシサイクリンは、さまざまな感染症および病状、例えば、前立腺炎、静脈洞炎、梅毒、クラミジアおよび骨盤内炎症性疾患の処置に使用されるテトラサイクリン系広域抗生物質の一類型である。ドキシサイクリンは、マラリアおよび炭疽に対する予防的抗生物質として、ならびにライム病などの疾患の処置のために使用される。テトラサイクリンは、アミノアシル−ｔＲＮＡがリボソームに結合するのを妨げることによりグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌のタンパク質の合成を阻害する。その作用は、殺傷性（殺菌性）ではなく静菌性（細菌増殖抑制性）である。抗生物質の効果を得るために一般的に使用されるドキシサイクリンの用量は１００ｍｇおよび５０ｍｇである。比較的高用量では、ドキシサイクリンは抗炎症効果と抗菌効果の両方を有する。

また、ドキシサイクリンならびに他のテトラサイクリンもその抗生物質の特性に加えて他の治療的用途を有する。例えば、ドキシサイクリンは、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼおよびエラスターゼなどのコラーゲン分解酵素の活性を阻害することが知られている。そのコラゲナーゼ阻害活性は歯周疾患の処置に使用されている。別の例では、ドキシサイクリンにより、細菌Ｐ．ａｃｎｅｓによるリパーゼ生成が抑止され得、したがって炎症に関与する遊離脂肪酸の利用可能性が低減される。また、ドキシサイクリンによりサイトカインレベルが低下し、それにより毛包壁の完全性が保存されることによって炎症が低減され得る。したがって、より低い用量では、ドキシサイクリンは、抗炎症効果を利用することにより皮膚の病状、例えば、酒さおよび慢性ざ瘡の処置にも使用される。

遅延放出または徐放の技術は、錠剤およびカプセル剤において、これらをゆっくり溶解させて経時的に薬物が放出されるように多くの場合で使用される。この技術は、かかる徐放性の錠剤またはカプセル剤の方が即時放出調製物よりも摂取頻度が少なくてよく、血流中に定常レベルの薬物が維持されるため好都合である。遅延放出性の錠剤またはカプセル剤では、医薬品有効成分（Ａｃｔｉｖｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ（ＡＰＩ））が不溶性物質のマトリックス中に、溶存薬物がマトリックス中の貫通孔を通って抜け出る道を必ず見つけるように包埋され得る。他の薬物では、一方側にレーザードリル孔および他方側に多孔質膜を有するポリマー系錠剤内に入れられる。胃酸が多孔質膜中に入り込み、それにより薬物がレーザードリル孔から押し出される。時間がたつと、全用量の薬物が系内に放出されるが、該ポリマー容器はそのままであり、その後、通常の消化によって排出される。一部の徐放性製剤では、薬物がマトリックス中に溶解し、マトリックスが物理的に膨潤してゲルを形成し、薬物がゲルの外表面から逸出するようにする。

ざ瘡と関連している炎症性病変の低減には、５０〜１００ミリグラムの投薬量で１日１回または２回のドキシサイクリンの経口投与が使用されている。しかしながら、この抗菌投薬量は、多くの場合、耐性菌の出現ならびに有害効果（例えば、悪心、頭痛、嘔吐など）の頻度および重症度の増大を伴う。

抗菌投薬量以下（ＳＤ）（２０ミリグラム）のドキシサイクリンを１日２回、６ヶ月間経口投与すると、中等度の顔面ざ瘡を有する患者において、皮膚の微生物叢に対する検出可能な抗菌効果および耐性生物体の数または重症度の増大が引き起こされることなく炎症性病変および非炎症性病変の数が有意に低減されることが報告された。しかしながら、この有効性は６ヶ月未満の処置では顕著ではなかった。例えば、処置の４ヶ月間目では、全炎症性病変の臨床関連平均低減数はドキシサイクリン群で３６％であり、一方、プラセボの平均低減数は２９％であった。Ｓｋｉｄｍｏｒｅら，Ａｒｃｈ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３９：４５９−４６４（２００３）。

ざ瘡処置レジメンのコンプライアンスは、特に青年期の患者集団において概ね低い。処置レジメンの設計、例えば、処置の頻度および持続期間、処置の有効性、ならびに有害効果の頻度および重症度はすべて、患者のコンプライアンスに影響する。安全で有効で易遵守性のざ瘡の改善された処置のまだ対処されていない必要性が存在している。

Ａｄｉｔｙａｎら，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｖｅｎｅｒｅｏｌ Ｌｅｐｒｏｌ ７５（３）：３２３−６（２００９） Ｓｋｉｄｍｏｒｅら，Ａｒｃｈ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３９：４５９−４６４（２００３）

発明の簡単な概要
約４０ｍｇのドキシサイクリンを、即時放出部分に約３０ｍｇのドキシサイクリンおよび遅延放出部分に約１０ｍｇのドキシサイクリンを含む医薬組成物で１６週間、１日１回経口投与することがざ瘡の処置に有効であることがわかった。驚くべきことに、この約４０ｍｇのドキシサイクリンの１６週間の１日１回の経口投与により、有害事象の有意な低減を伴って１００ｍｇのドキシサイクリンと同じかまたはそれより優れた有効性が得られた。

一般的な一態様において、本発明の実施形態は、処置を必要とする被験体のざ瘡の処置方法であって、該方法は、約４０ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物を該被験体に１日１回経口投与することを含み、該被験体は約１６週間処置され；該医薬組成物は、即時放出部分に約３０ｍｇのドキシサイクリンおよび遅延放出部分に約１０ｍｇのドキシサイクリンを含む、方法に関するものである。

本発明の他の態様、特長および利点は、発明の詳細な説明およびその好ましい実施形態および添付の特許請求の範囲を含む以下の開示から自明となろう。

前述の概要ならびに以下の発明の詳細な説明は、添付の図面と合わせて読むと、よりよく理解されよう。しかしながら、本発明は、示した図面に限定されないことを理解されたい。

図１は、臨床試験での非炎症性病変の計測数（ＩＴＴ母集団）の変化の平均を示す。

発明の詳細な説明
他に定義していない限り、本明細書で用いる科学技術用語はすべて、本発明が関する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。それ以外の場合では、本明細書で用いている一部の特定の用語は、本明細書に示した意味を有する。本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明示していない限り、複数の指示対象物を包含していることに留意しなければならない。

本発明の実施形態は、ざ瘡の処置を必要とする被験体のざ瘡の処置方法であって、該方法は、約４０ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩を該被験体に１日１回経口投与することを含み、該被験体は約１６週間処置され；該４０ｍｇのドキシサイクリンは約３０ｍｇの即時放出部分と約１０ｍｇの遅延放出部分とからなる、方法に関するものである。

本発明の一実施形態によれば、前記処置により前記被験体の炎症性病変の計測数の低減がもたらされた。

本発明の別の実施形態によれば、前記処置により前記被験体の非炎症性病変の計測数の低減がもたらされた。

本発明のまた別の実施形態によれば、前記処置により前記被験体の成功率（ｓｕｃｃｅｓｓ ｒａｔｅ）の増大がもたらされた。

本明細書で用いる場合、「成功率」は、以下の研究者による包括的評価（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＩＧＡ））（炎症）によって「消失」または「ほぼ消失」のスコアが得られた被験体のパーセンテージを意味する：

本発明の一実施形態によれば、本発明に有用な医薬組成物は、約３０ｍｇの即時放出用量のドキシサイクリンと約１０ｍｇの遅延放出用量のドキシサイクリンとを単位投薬量中に含む。該医薬組成物は錠剤またはカプセル剤の形態であり得る。

該組成物の即時放出部分は粉末、顆粒、ビードレット（ｂｅａｄｌｅｔ）または錠剤の形態であり得；遅延放出部分は、コーティング顆粒、コーティングビードレット、コーティング錠、または非コーティングマトリックス錠であり得る。このような属性を有する製品を得るために、いくつかの投薬形態のバリエーションが使用され得る。例えば、即時放出粉末ブレンドを遅延放出錠剤または遅延放出ペレット剤で封入してもよい。さらなる一例は、別々に調製されて適切なサイズのカプセル殻内に封入された、即時放出錠剤および遅延放出錠剤である。または、例えば、遅延放出錠剤をコアとして使用し、即時放出部分を外側層として、プレスコーターを用いて圧縮するか、または薬物積層手法を用いてオーバーコートしてもよく、どちらの手法も、ＧｕｎｓｅｌおよびＤｕｓｅｌ，第５章，“Ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ−ｃｏａｔｅｄ ａｎｄ ｌａｙｅｒ ｔａｂｌｅｔｓ”，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，第２版，第１巻，Ｈ．Ａ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｌ．ＬａｃｈｍａｎおよびＪ．Ｂ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ Ｂａｓｅｌ（１９９０）において知得され得る。

本発明により、活性成分の遅延放出（ＤＲ）部分と、４つのコーティング層：内側サブコーティング層、腸溶性コーティング層、活性成分の即時放出（ＩＲ）部分を含む活性層および外側コーティング層とを含むコア錠剤（ｃｏｒｅ ｔａｂｌｅｔ）を含む徐放性錠剤の作製方法を提供する。かかる製剤により活性成分の即時放出と遅延放出の両方が可能となる。一実施形態において、コア錠剤には約１０ｍｇの化学修飾テトラサイクリン（ＣＭＴ）、例えばドキシサイクリンがＡＰＩとして含有されており、活性層には約３０ｍｇのＡＰＩが含有されている。このようにして、得られる徐放性錠剤は、ＩＲ：ＤＲが約３：１の比率で約４０ｍｇのＡＰＩを供給する。

本発明によるかかる徐放性錠剤の調製方法は：
（ａ）第１部分の活性成分と少なくとも１種類の不活性成分を湿式造粒して湿性造粒物を作製すること；
（ｂ）該湿性造粒物を乾燥させること；
（ｃ）乾燥させた該造粒物をミリングすること；
（ｄ）ミリングした該造粒物を少なくとも１種類の外側相とブレンドすること；
（ｅ）該ブレンドを圧縮してコア錠剤を形成すること；
（ｆ）該コア錠剤を、少なくとも第１のポリマーおよび第１の可塑剤を含む少なくとも１つの内側コーティング層でコーティングすること；
（ｇ）該内側層コーティング錠を、少なくとも１種類の腸溶性材料を含む少なくとも１つの腸溶性コーティング層でコーティングすること；
（ｈ）該腸溶性層コーティング錠を、第２部分の該少なくとも１種類の活性成分、第２のポリマーおよび第２の可塑剤を含む少なくとも１つの活性層でコーティングすること；ならびに
（ｉ）該活性層コーティング錠を、少なくとも第３のポリマーおよび第３の可塑剤を含む少なくとも１つの外側コーティング層でコーティングすること
を含む。

方法の各工程を以下に、より詳細に説明する。長期保存安定性および内容物の均一性を有する徐放性錠剤を提供するための極めて重要な工程は工程（ｈ）であり、ここでは錠剤をＡＰＩ含有活性層でコーティングする。この工程は、活性材料、ポリマーおよび可塑剤（不活性成分）の均質な懸濁液を調製すること、ならびに該懸濁液を工程（ｇ）の腸溶性層コーティング錠上に、低速で長時間の噴霧常套操作を用いて、例えば約２０時間噴霧することを伴う。工程（ｈ）を行なう場合、適用パラメータ、例えば、混合物の均質性、混合時間およびコーティング時間を密にモニタリングし、最終徐放性錠剤の安定性および均一性が確保されるように制御することが極めて重要である。さらに、噴霧常套操作中は該均質な懸濁液を連続的に混合することが必要である。

造粒
該方法の第１工程は、活性成分と少なくとも１種類の不活性成分とを湿式造粒して湿性造粒物を作製することを伴う。好ましくは、造粒は高剪断湿式造粒機で、例えば、Ｆｉｅｌｄｅｒ ＰＭＡ １００ Ｇｒａｎｕｌａｔｏｒまたは同様の機器を用いて行なう。高剪断湿式造粒では、液体、例えば精製水を粉末床上に、高剪断混合を行うとともに噴霧する。混合は、所定の速度に設定したインペラーブレードおよびチョッパーブレードによって行なう。造粒用の液体の量およびこれを噴霧する速度は最終湿潤物の全般的な品質に重要な役割を果たし、最適なパラメータは常套的な実験法によって決定され得る。毎分約５〜７リットルの噴霧速度および約２０ｋｇの粉末部分に対して約８〜１０リットルの液体、好ましくは約９リットルの液体を使用することが有効であることがわかっている。

造粒物中に含める活性成分は、好ましくはＡＰＩ、例えば、化学修飾テトラサイクリンである。好ましい一実施形態では、活性成分はドキシサイクリンである。典型的には、一水和物の形態のドキシサイクリン（これは、該塩基分子に１分子の水が水和したものである）が造粒物の形成に使用される。また、１種類より多くの活性成分を使用することも本発明の範囲内である。例えば、ドキシサイクリンまたは他の化学修飾テトラサイクリンを、例えば別の治療用物質と併用してもよい。

コア錠剤に含めるための適切な不活性成分は当該技術分野でよく知られており、微晶質セルロース、例えば、ＡＶＩＣＥＬ（登録商標）（ＦＭＣ Ｃｏｒｐ．）またはＥＭＣＯＣＥＬ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ Ｉｎｃ．）；リン酸二カルシウム、例えば、ＥＭＣＯＭＰＲＥＳＳ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ Ｉｎｃ．）；硫酸カルシウム、例えば、ＣＯＭＰＡＣＴＲＯＬ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ Ｉｎｃ．）；およびデンプン、例えば、ＳＴＡＲＣＨ １５００などの増量剤が挙げられ得る。さらに、崩壊剤、例えば、微晶質セルロース、デンプン、クロスポビドン、例えば、ＰＯＬＹＰＬＡＳＤＯＮＥ ＸＬ（登録商標）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）；デンプングリコール酸ナトリウム、例えば、ＥＸＰＬＯＴＡＢ（登録商標）（Ｍｅｎｄｅｌｌ Ｉｎｃ．）；ならびにクロスカルメロースナトリウム（カルボキシメチルセルロースナトリウム）、例えば、ＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ（登録商標）（ＦＭＣ Ｃｏｒｐ．）が不活性成分として使用され得る。

好ましい一実施形態において、コア錠剤中の不活性成分としては、アルファー化デンプン、微晶質セルロースおよびクロスカルメロースナトリウムが挙げられる。現在好ましい一実施形態では、約１０ｍｇの純粋なＡＰＩを約５３ｍｇの微晶質セルロース、約２０ｍｇのデンプンおよび約２ｍｇのクロスカルメロースナトリウムと合わせる。ＡＰＩの純度が１００％より低い場合、所望の量の活性成分を得るために、好ましくはより多量のＡＰＩがコア錠剤中に含められる。かかる場合では、湿性造粒物において同じ総重量が維持されるように、好ましくは微晶質セルロースの量が低減される。本明細書に記載の活性成分および不活性成分の量は好ましい量であるが、例えば常套的な実験法によって決定されるより多い、またはより少ない量のこれらの成分を使用することも本発明の範囲内である。例えば、約８〜１２ｍｇのＡＰＩが約４２〜６４ｍｇの微晶質セルロース、約１６〜２４ｍｇのデンプンおよび約１〜３ｍｇのクロスカルメロースナトリウムと合わされ得る。

乾燥
造粒後、湿性造粒物を、例えば、好ましい一実施形態では流動床乾燥機を用いて、乾燥させる。Ｏ’Ｈａｒａ Ｆｌｕｉｄ Ｂｅｄ Ｄｒｙｅｒまたは同様の機器が好適であり得る。流動床乾燥は、粉末が噴水のような挙動を示すような速度で熱い空気を湿潤物に通す方法である。これにより、「乾燥減量」機器を用いて定量的に測定され得る湿潤物に対して乾燥効果が付与される。調整され得るパラメータとしては、吸入空気温度および吸入空気体積が挙げられる。該温度が低すぎると粉末が乾燥するのにより長時間かかり、これは効率にマイナスの影響を及ぼす。他方で、該温度が高すぎると表面硬化が起こり得、この場合、顆粒の外側層が硬くなり、顆粒の内側層が適正に乾燥されない。また、吸入空気体積も重要なパラメータである。該空気体積が少なすぎると、粉末は適正には流動化せず、不均一な乾燥が生じる。該空気体積が多すぎると、生成物がフィルター内に飛ばされ、バッチ収率が悪くなる。空気体積は、実行持続期間中、一定であることは稀なパラメータであることに注意されたい。それどころか、空気体積は、処理中は密にモニタリングしなければならず、調整が必要な場合があり得る。実行開始時、該体積は典型的には、より重い湿潤物を流動化させるために、より高レベルに設定される。粉末が乾燥するにつれて、空気体積を減らし、粉末がフィルター内に減損するのを防御する。好ましい乾燥温度は約６０〜６５℃である。

ミリング
乾燥後、乾燥させた該造粒物（粉末）を、例えば、好ましい一実施形態ではＦｉｔｚｍｉｌｌを使用することにより、ミリングする。ミリングは、大型顆粒をブレンドおよび錠剤圧縮のためにより良好に適合させるためにサイズ変更する高エネルギー操作である。また、ミリングにより粒径分布が狭くなり、均一性が向上し、粉末の分離が緩和される。粒径は粉末の流動特性および圧縮可能性に重要な役割を果たす。多数回、流動性と圧縮可能性とは互いに逆に比例するため、最適なバランスを見出すことが肝要である。

生成物のミリングは２通りの様式：「ナイフフォワード方式（ｋｎｉｖｅｓ ｆｏｒｗａｒｄ）」および「インパクトフォワード方式（ｉｍｐａｃｔｓ ｆｏｒｗａｒｄ）」で行なわれ得る。ナイフフォワード方式は大型の硬い顆粒を砕く機能を果たすものであり、一方、インパクトフォワード方式は活性成分などのより小さな粒径の成分の粉砕によい。本発明の方法では、顆粒を砕くために高エネルギー切断動作が必要とされるため、ミリングは好ましくはナイフフォワード方式を用いて行なう。

最良の結果をもたらす篩サイズは常套的な実験法によって決定されるに違いない。ドキシサイクリンをＡＰＩとして、アルファー化デンプン、微晶質セルロースおよびクロスカルメロースナトリウムと合わせて使用する場合、好ましい篩サイズは約０．０３３インチである。

ブレンド
ミリング後、造粒物を外側相、例えば流動促進剤（ｇｌｉｄｅｎｔ）および滑沢剤とブレンドし、均質な混合物を形成し、均一性を向上させる。ブレンドは、例えば、低剪断キュービック（ｃｕｂｉｃ）タンブルブレンダーを用いて行なわれ得る。ブレンドは１回以上の段階で行なってもよい。例えば、３段階ブレンド法では、まず内部造粒（intragranular）材料を混合し、続いて流動促進剤などの二次成分を添加した後、滑沢剤（１種類または複数種）を添加する。良好なブレンド均一性は、内容物の均一性と直接的に相関し得るため非常に重要である。一段階または多段階ブレンド法において、各段階でのブレンドは、均質なブレンドがもたらされる充分な時間、行なわなければならない。適切なブレンド時間は常套的な実験法によって容易に決定され得る。

好ましい一実施形態では、ＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ（登録商標）（クロスカルメロースナトリウム）およびＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ ２００（微晶質セルロース）が流動促進剤として使用され、ステアリン酸マグネシウムを滑沢剤として含める。３段階ブレンドプロセスが現在好ましい。具体的には、現在好ましい一実施形態において、内部造粒部分（約１０ｍｇのドキシサイクリン、約５３ｍｇの微晶質セルロース、約２０ｍｇのデンプンおよび約２ｍｇのクロスカルメロースナトリウムを含む）を約１０分間混合し、約１２．５ｍｇの微晶質セルロースおよび２ｍｇのクロスカルメロースナトリウムと約３０分間ブレンドし、次いで約０．５ｍｇのステアリン酸マグネシウムと約６〜８分間、好ましくは約７分間ブレンドする。例えば常套的な実験法によって決定され得るよりも多いかまたはより少ない量の滑沢剤および流動促進剤を使用することも本発明の範囲内である。

圧縮
最後に、混合物を圧縮して錠剤にする。例えば、典型的な圧縮（打錠）工程では、ブレンド物を、プレス型の台の上部に位置する供給フレーム内に供給する。供給フレームにより該ブレンド物が型の内部に回し入れられ、次いで、これはプレスへと回って移動し、下側パンチと上側パンチとが一体になると圧縮される。次いで下側パンチが上昇し、錠剤を排出シュートから排出する。Ｍａｎｅｓｔｙユニプレスまたは同様の機器が圧縮工程に適切である。

錠剤の物理的特性、例えば、錠剤硬度、崩壊時間およびゲージ厚ならびに錠剤の重量および摩損度の許容され得る上限および下限を決定することが必要である。さらに、錠剤の欠陥は望ましくない。供給フレーム速度および圧縮力などの可変量は、所望の錠剤特性を得るために変更され得る。好ましい一実施形態では、錠剤プレス速度は約２０００〜２６００錠剤／分であり、供給フレーム速度は約８〜１２ｒｐｍである。

得られた錠剤は、ここで、ＡＰＩの遅延放出部分を含有している「コア錠剤」とみなされ得る。好ましい一実施形態では、１００ｍｇのコアに、約１０％のＡＰＩ、約６５．５％の微晶質セルロース、約２０％のアルファー化デンプン、約４％のクロスカルメロースナトリウムおよび約０．５％のステアリン酸マグネシウムが含有されている。

コーティング層
圧縮後、得られたコア錠剤を複数のコーティング層でコーティングする。好ましくは、この錠剤を４つのコーティング層：内側（サブコーティング）層、腸溶性コーティング層、ＡＰＩの即時放出部分を含有している活性層、および外側（オーバーコーティング）層で逐次コーティングする。したがって、得られた徐放性コート錠ではＡＰＩの即時放出と遅延放出との両方が可能である。好ましい一実施形態では、１００ｍｇのコア錠剤の該４つのコーティング層は約８２ｍｇの総重量を有し、約１８２ｍｇの総重量を有する徐放性錠剤が得られる。したがって、コア錠剤は徐放性錠剤の重量の約５５ｗｔ％を構成し、コーティング層は約４５ｗｔ％を構成する。

内側コーティング層
内側コーティング層は少なくとも第１のポリマーおよび第１の可塑剤を含む。好ましい一実施形態では、内側コーティング層あるいはサブコーティングにはポリマー、可塑剤および顔料が含有される（例えば、水中に１０％のＯＰＡＤＲＹ（登録商標）（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を含むサブコーティング）。例えば、該コーティングは、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）を精製水に１０％固形分まで溶解させ、完全に溶解するまで（例えば少なくとも約４５分間）混合することにより調製され得る。混合後に気泡が存在する場合は、混合物を例えば少なくとも１時間静置してもよい。内側層の目的は、この後に適用する酸性の腸溶性コーティングからコア錠剤を保護することである。サブコーティングの適切な量は、錠剤あたりの重量増加によって評価または査定され得、常套的な実験法によって決定され得る。例えば、１００ｍｇのコア錠剤では、約３〜５ｍｇ、好ましくは約４ｍｇのＯＰＡＤＲＹ（登録商標）が有効であることがわかった（１８２ｍｇの徐放性錠剤の総重量の約２％にあたる）。特に好ましい内側層はＯＰＡＤＲＹ（登録商標）０３ Ｋ １９２２９（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｉｎｃ．）を含み、これは、ヒプロメロース６ｃＰ、トリアセチンおよびタルクを含有している。しかしながら、当該技術分野で知られた、または将来開発される他の同様のコーティング組成物もまた本発明の範囲内であり得る。

腸溶性コーティング層
少なくとも１種類の腸溶性材料を含む腸溶性コーティングが内側層コーティング錠に、錠剤からのＡＰＩの放出を遅延させるために適用される。腸溶性材料は、胃内の酸性環境に実質的に不溶性であるが、特定のｐＨの腸液には主に可溶性であるポリマーである。したがって、腸溶性コーティングによりコア錠剤からのＡＰＩの放出が遅延され、錠剤が胃をインタクトなまま通過すること、およびＡＰＩが腸内で放出されることが可能になる。

適切な腸溶性材料は、無毒性で薬学的に許容され得るポリマーであり、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）、セルロースアセテートトリメリテート、ヒドロキシプロピルメチルセルローススクシネート、セルロースアセテートスクシネート、セルロースアセテートヘキサヒドロフタレート、セルロースプロピオネートフタレート、メチルメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマー、アクリル酸メチルとメタクリル酸メチルとメタクリル酸とのコポリマー、メチルビニルエーテルと無水マレイン酸とのコポリマー（Ｇａｎｔｒｅｚ ＥＳシリーズ）、メタクリル酸エチル−メタクリル酸メチル−クロロトリメチルアンモニウムエチルアクリレートコポリマー、天然樹脂、例えば、ゼイン、シェラックおよびコーパルコロフォリウム（ｃｏｐａｌ ｃｏｌｌｏｐｈｏｒｉｕｍ）、ならびに市販の腸溶性分散系が挙げられるがこれらに限定されない。

好ましい一実施形態では、腸溶性コーティングは、Ｃ型メタクリル酸コポリマーを含む水性でアクリル系の腸溶性の系であるＡＣＲＹＬ−ＥＺＥ（登録商標）（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を含む。腸溶性コーティングを形成するためには、例えば、固形のＡＣＲＹＬ−ＥＺＥ（登録商標）を精製水中に１０％固形分まで、均質な分散が達成されるまで混合することにより分散させ得る。好ましくは、該固形物は、大型ポリマーの形成（これは噴霧ノズルを詰まらせ得る）の量を最小限にするために混合しながら、徐々に水に添加する（例えば、少なくとも約４５分間かけて）。錠剤にコーティングを噴霧する前に、（例えば３０メッシュの篩に通す）ふるい分けが必要な場合があり得る。特に好ましい腸溶性材料はＡＣＲＹＬ−ＥＺＥ（登録商標）９３ Ｆ １９２５５（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｉｎｃ．）であり、これは、Ｃ型メタクリル酸コポリマーに加えて、タルク、Ｍａｃｒｏｇｏｌ（ＰＥＧ ８０００）、コロイド状無水シリカ、重炭酸ナトリウムおよびラウリル硫酸ナトリウムを含有する。

コア錠剤を酸性媒体から保護するために必要な腸溶性コーティングの適切な量は、錠剤あたりの重量増加によって評価または査定され得、常套的な実験法によって決定され得る。１００ｍｇのコア錠剤では、約１０〜約１５ｍｇ、好ましくは約１２．５ｍｇの腸溶性コーティングの層が特に有効であることがわかった。これは徐放性錠剤の総重量（１８２ｍｇ）の約７ｗｔ％にあたる。

活性層
第３のコーティング層は活性層である。この層には、ＡＰＩの即時放出部分と少なくともポリマーおよび可塑剤を含む不活性成分とが含有され、必要な安定性（例えば、内容物の均一性）を有する徐放性錠剤を得るのに極めて重要である。一実施形態において、活性層に含められるポリマーおよび可塑剤は、内側コーティング層に含められるものと同じである。

適切な活性層は、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、ＡＰＩおよび水を含有しており、約１５％の固形分を有する。不活性成分に対するＡＰＩの比が約１：１（５０ｗｔ％の活性成分）、例えば、約５８ｍｇの重量の活性層を得るには約２８．５ｍｇのＯＰＡＤＲＹ（登録商標）および約３０ｍｇのＡＰＩを使用することが有効であることがわかっている。ＡＰＩの量は、その純度から補正率に応じて異なり得る。好ましい一実施形態では、１０ｍｇのＡＰＩを含有している１００ｍｇのコア錠剤を、３０ｍｇのＡＰＩを含有している活性層でコーティングし、ＩＲとＤＲとの比が３：１の４０ｍｇ（１８２ｍｇの徐放性錠剤の約２２ｗｔ％）のＡＰＩを含有している徐放性錠剤を得る。

活性層は、好ましくは、活性成分および不活性成分を水中に分散させ、少なくとも４５分間、好ましくは少なくとも約６０分間混合し、均質な懸濁液を得ることにより調製される。あるいはまた、不活性成分および活性成分を水に逐次添加し、各添加後に少なくとも１時間にわたって混合してもよい。ＡＰＩおよび不活性成分の完全な分散が達成されるまで懸濁液を混合することが非常に重要である。また、懸濁液は、均一性（これは、このコーティング層には活性成分が含有されているため、特に、極めて重要である）が得られるように、コーティング中は連続的に混合しなければならない。また、コーティング時間も重要であり、好ましくは、この層のコーティングでは約２０時間である。

外側層
外側コーティング層あるいはオーバーコーティングは徐放性錠剤に対して保護をもたらし、ポリマーおよび可塑剤を含有している。該ポリマーおよび可塑剤は、内側コーティング層および活性コーティング層に含有されているものと同じであっても異なっていてもよい。例えば、オーバーコーティング層は内側コーティング層と同一、例えば、水中に１０％のＯＰＡＤＲＹ（登録商標）を含有している層であってもよい。徐放性錠剤の総重量の約３〜５重量％、好ましくは約４重量％にあたる外側コーティング層、例えば、１００ｍｇのコア錠剤では約７ｍｇのコーティングを使用することが有効であることがわかった。

コーティング層の適用
該４つのコーティング層の各々は、例えば、蠕動ポンプを有するＯ’Ｈａｒａ ｆａｓｔｃｏａｔデバイスを用いて噴霧することにより適用される。適切なコーティング溶液または懸濁液の調製後、錠剤をコーティングパン内に置き、（例えば約１０分間）加熱した後、コーティングの噴霧を開始する。コーティング中は錠剤の断続的な重量チェックを行ない、重量増加を追跡するのがよい。各コーティングについて目標の重量増加が得られたら、錠剤を室温まで冷却する。次いで、該錠剤はパッケージングの用意ができている。

コーティングにおける可変量としては、スプレーガンの数、スプレーガン間の距離、錠剤床からガンまでの距離、および噴霧ノズルサイズが挙げられる。スプレーガン間の距離は、錠剤床全体への均一な噴霧を確実にするために重要である。さらに、スプレーガンと錠剤床との間の距離は、良好な噴霧パターンと結果を確実にするために比較的一定に維持する必要がある。コーティングを継続し、錠剤のサイズが大きくなるにつれて、適切な距離を維持するためにスプレーガンのマニホールドを後方に移動させる必要がある。ノズルの適切なサイズは、具体的なコーティング懸濁液の懸濁液中の粒径に基づいて決定され得る。内側コーティング、活性コーティングおよび外側コーティングの適用には０．０２８５インチの直径の噴霧ノズルを、腸溶性コーティングの適用には０．０６０インチの直径の噴霧ノズルを使用することが有効であることがわかった。

該４つのコーティング層を適用するための噴霧速度、パン速度および空気温度は、所望の安定性プロフィールを有する徐放性錠剤を作製するために極めて重要である。好ましいパラメータとしては、約３５０〜４００ｍｌ／分の噴霧速度、約５〜８ｒｐｍのパン速度、および約５０〜６０℃の空気温度が挙げられる。内側層、腸溶性層および外側層のコーティングには約４〜６時間のコーティング時間を使用することが有効であることがわかった。しかしながら、活性層のコーティングでは約３７５〜４００ｍｌ／分の速度で、パン速度を約７〜９ｒｐｍとし、約２０時間の総噴霧時間で噴霧することが、所望のＡＰＩ層の安定性を得るために重要である。

本発明による徐放性錠剤の安定性は、自然なＡＰＩの安定性ならびに４つのコーティング層（内側層、腸溶性層、活性層および外側保護層）の存在によるものであると考えられる。さらに、観察された内容物の均一性は、コア錠剤内容物とＡＰＩ層内容物との組合せによるものである。したがって、ＡＰＩ層の均一性を注意深く制御することが極めて重要である。

本発明の方法に従って調製される徐放性錠剤は、３ヶ月間の保存後の外観および溶解について評価した場合、先行技術の錠剤と比べて改善された特性を示すことがわかった。同様の結果が、より長期の保存期間でも予測される。

先に説明したように、本発明による徐放性錠剤に含めるのに好ましいＡＰＩはドキシサイクリンである。本発明の一実施形態による徐放性ドキシサイクリン錠剤の作製方法は：
（ａ）約１０〜１２％ｗｔ％のドキシサイクリンと約８８〜９０％の少なくとも１種類の増量剤または結合剤を湿式造粒して湿性造粒物を作製すること；
（ｂ）該湿性造粒物を乾燥させること；
（ｃ）乾燥させた該造粒物をミリングすること；
（ｄ）ミリングした該造粒物を少なくとも１種類の流動促進剤および少なくとも１種類の滑沢剤とブレンドし、ブレンドを形成すること、
（ｅ）該ブレンドを圧縮し、徐放性錠剤の重量の約５５ｗｔ％を構成するコア錠剤を形成すること；
（ｆ）該コア錠剤を、第１のポリマーおよび第１の可塑剤を含む少なくとも１つの内側コーティング層でコーティングすること、ここで、該内側層は徐放性錠剤の重量の約２ｗｔ％を構成する；
（ｇ）該内側層コーティング錠を、少なくとも１種類の腸溶性材料を含む腸溶性コーティング層でコーティングすること、ここで、腸溶性コーティング層は徐放性錠剤の重量の約７ｗｔ％を構成する；
（ｈ）該腸溶性層コーティング錠を、ドキシサイクリンと第２のポリマーおよび第２の可塑剤を含むコーティング材料とを含む少なくとも１つの活性層でコーティングすること、ここで、ドキシサイクリンとコーティング材料との比は約１：１であり、ドキシサイクリンは徐放性錠剤の重量の約２２％を構成する；ならびに
（ｉ）該活性層コーティング錠を、少なくとも第３のポリマーおよび第３の可塑剤を含む少なくとも１つの外側コーティング層でコーティングすること、ここで該外側層は徐放性錠剤の約４ｗｔ％を構成する、
を含む。

工程（ｈ）は、ドキシサイクリン、第２のポリマーおよび第２の可塑剤を含む均質な懸濁液を約１時間混合することにより調製すること、ならびにこの均質な懸濁液を腸溶性層コーティング錠上に約２０時間にわたって噴霧することを伴う。重要なことは、この均質な懸濁液を、噴霧中、連続的に混合する。本発明による徐放性ドキシサイクリン錠剤の作製方法の各工程は先に詳細に説明している。

マルチパーティクル状（ｍｕｌｔｉｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）カプセル剤
好ましい一実施形態として、ドキシサイクリンのＩＲ／ＤＲ組成物は、ビードレットを含有しているカプセル剤の形態である。現在、２つの異なる型のユニットを単一形態のマルチユニット投薬形態内に有することが好ましい。

第１ユニットは、（好ましくはペレットの形態の）即時放出投薬形態である。また、この成分は所望により、または必要であれば粉末であってもよい。いずれの場合も、投薬形態は、表面活性薬剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、モノグリセリン酸ナトリウム、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、グリセリルモノステアレート、グリセリルモノオレエート、グリセリルモノブチレート、Ｐｌｕｒｏｎｉｃラインのいずれか１つの表面活性ポリマー、もしくは表面活性特性を有する任意の他の適切な材料または上記のものの任意の組合せを有し得る。好ましくは、表面活性薬剤はモノグリセリン酸ナトリウムとラウリル硫酸ナトリウムとの組合せである。この成分中のこのような材料の濃度は約０．０５〜約１０．０％（Ｗ／Ｗ）の範囲に及び得る。

薬物含有ペレットの作製に使用され得る他の賦形剤材料は、医薬品に一般的に使用されている任意のものであり、活性薬物との適合性およびペレットの物理化学的特性に基づいて選択されるべきである。このようなものとしては、例えば：バインダー、例えば、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマーなど；崩壊剤、例えば、コーンスターチ、アルファー化デンプン、架橋カルボキシメチルセルロース（ＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ（登録商標））、デンプングリコール酸ナトリウム（ＥＸＰＬＯＴＡＢ（登録商標））、架橋ポリビニルピロリドン（ＰＬＡＳＤＯＮＥ（登録商標）ＸＬ）、および錠剤調製物に使用される任意の崩壊剤（これは、本発明のものなどの即時放出投薬形態に一般的に使用される）；充填剤、例えば、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、微晶質セルロース、デキストラン、デンプン、スクロース、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコールなど；界面活性剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、胆汁塩、グリセリルモノステアレート、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ライン（ＢＡＳＦ）など；可溶化剤、例えば、クエン酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、グルタル酸 重炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリウムなどが挙げられ；安定剤、例えば、任意の抗酸化剤、バッファー、酸などもまた使用され得る。

ペレットは、例えば、単純な造粒、続いて分級；押出しおよび丸め処理（ｍａｒｕｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）；回転式造粒；または妥当なサイズおよび堅牢性のペレットが得られる任意のアグロメレーションプロセスによって作製され得る。押出しおよび丸め処理では、薬物および他の添加剤をバインダー液の添加によって造粒する。一定のサイズの篩を備えた押出機内にこの湿潤物を通し、押出成形物を丸め処理機（ｍａｒｕｍｅｒｉｚｅｒ）で球形化する。得られたペレットを乾燥させ、さらなる適用のために分級する。また、高剪断造粒を使用してもよく、その場合は、薬物および他の添加剤を乾式混合し、次いで、混合物を高剪断造粒／混合機内でバインダー液の添加によって湿潤させる。混合およびミリングの複合作用により、湿潤後、顆粒を混練する。得られた顆粒またはペレットを乾燥させ、さらなる適用のために分級する。

先に記載のように、この即時放出成分を粉末として有することも可能であるが、混合および脱混合の考慮事項のため、好ましい形態はペレットである。

あるいはまた、流動床処理装置または他の適当な機器内で薬物の溶液または分散液をバインダーとともにまたはなしでコアまたは出発シード材（調製したもの、または市販品のいずれか）上に噴霧する、溶液または懸濁液の層化によって該組成物の即時放出ビードレットまたはペレットを調製してもよい。コアまたは出発シード材は、例えば、糖の球または微晶質セルロース製の球体であり得る。かくして、薬物が出発シード材の表面上にコーティングされる。薬物入りペレット（drug-loaded pellet）は、さらなる適用のために乾燥される。

第２ユニットは、遅延放出（ＤＲ）プロフィールを有するべきであり、胃腸管の変化するｐＨおよびドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンの吸収に対するその効果に対処できる必要がある。このペレットは、第１ユニットのペレットについて記載したすべての成分、ならびに場合によって、ペレットの微小環境のｐＨを低下させ、したがって溶解を助長するのに有用である何らかの有機酸を有するべきである。このような材料は、クエン酸、乳酸、酒石酸または他の適切な有機酸であるが、これらに限定されない。このような材料は約０〜約１５．０％（ｗ／ｗ）の濃度で存在するべきである；好ましくは、このような材料は、約５．０〜約１０．０パーセント（ｗ／ｗ）の濃度で存在させる。このペレットの製造プロセスは、第１ユニットのペレットについて上記したプロセスと一致する。

第１ユニットのペレットとは異なり、第２ユニットの遅延放出成分はペレットの表面に、ペレットからの薬物の放出が遅延されるように適用された制御性コートを有する。これは、腸溶性材料のコーティングを適用することにより行なわれる。「腸溶性材料」は、胃内の酸性環境に実質的に不溶性であるが、特定のｐＨの腸液には主に可溶性であるポリマーである。腸溶性材料は無毒性で薬学的に許容され得るポリマーであり、例えば、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）、セルロースアセテートトリメリテート、ヒドロキシプロピルメチルセルローススクシネート、セルロースアセテートスクシネート、セルロースアセテートヘキサヒドロフタレート、セルロースプロピオネートフタレート、メチルメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマー、アクリル酸メチルとメタクリル酸メチルとメタクリル酸とのコポリマー、メチルビニルエーテルと無水マレイン酸とのコポリマー（Ｇａｎｔｒｅｚ ＥＳシリーズ）、メタクリル酸エチル−メタクリル酸メチル−クロロトリメチルアンモニウムエチルアクリレートコポリマー、天然樹脂、例えば、ゼイン、シェラックおよびコーパルコロフォリウム、ならびにいくつかの市販の腸溶性分散系（例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３０Ｄ５５、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）ＦＳ３０Ｄ、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ１００、ＫＯＬＬＩＣＯＡＴ（登録商標）ＥＭＭ３０Ｄ、ＥＳＴＡＣＲＹＬ（登録商標）３０Ｄ、ＣＯＡＴＥＲＩＣ（登録商標）およびＡＱＵＡＴＥＲＩＣ（登録商標））が挙げられる。前述のものは考えられ得る材料の一覧であるが、当業者であれば、この一覧が包括的なものではないこと、および遅延放出プロフィールをもたらすという本発明の目的を満たし得る他の腸溶性材料もあることが認識されよう。このようなコーティング材料は、表面のコーティングにおいて、ペレット組成物の約１．０％（ｗ／ｗ）〜約５０％（ｗ／ｗ）の範囲で使用され得る。好ましくは、このようなコーティング材料は、約２０〜約４０パーセント（ｗ／ｗ）の範囲にあるべきである。ペレットは、例えば、流動床装置またはパンコーティングでコーティングされ得る。

腸溶性コーティングペレットでは、およそｐＨ４．５未満の酸性の胃内環境において、ドキシサイクリンの実質的な放出はみられない。ドキシサイクリンは、ｐＨ感受性層が小腸内のより高いｐＨで溶解したとき；一定の遅延時間後；またはユニットが胃を通過した後に、利用可能となる。好ましい遅延時間は２〜６時間の範囲内である。

この実施形態の変化形として、ＤＲペレットは、保護層で隔てられたドキシサイクリンの層、および腸溶性コーティングを含み、最終的に「反復作用」投薬量送達をもたらす。かかる投薬形態では、すべての層内のドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンの放出が該薬物の吸収枠内でなされる場合、本発明の放出プロフィールの血中レベル要件が満たされ得る。

オーバーコーティング層は、本発明のＩＲ／ＤＲペレットに任意選択でさらに適用され得る。ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、ＯＰＡＤＲＹ ＩＩ（登録商標）（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）ならびにＣｏｌｏｒｃｏｎ製のカラーおよび無色の等級の相当物が、ペレットがべたつくのを防ぐため、および生成物を着色するために使用され得る。保護コーティングまたはカラーコーティングの提案レベルは１〜６％、好ましくは２〜３％（ｗ／ｗ）である。

多くの成分、例えば、可塑剤：クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、セバシン酸ジブチル、トリアセチン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど；滑沢剤：タルク、コロイド状二酸化ケイ素（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｉｌｉｃａ ｄｉｏｘｉｄｅ）、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、二酸化チタン、ケイ酸マグネシウムなどがオーバーコーティング配合物に、例えば、コーティングプロセスおよび製品の属性を改善するために組み込まれ得る。

遅延放出ユニットと即時放出ユニットを、１日１回だけの投薬で所望の定常状態の血清レベルが得られる所定の比率で、好ましくは約７０：３０〜約８０：２０、最も好ましくは７５：２５（ＩＲ／ＤＲ）で投薬形態内で組み合わせる（この場合、これらの異なるペレットをカプセル内に入れる）。

（好ましくはビードレットの形態の）該組成物は硬質ゼラチンカプセル内に、さらなる賦形剤とともに、または単独のいずれかで組み込まれ得る。カプセル製剤に添加される典型的な賦形剤としては、充填剤、例えば、微晶質セルロース、ダイズ多糖類、リン酸カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、ラクトース、スクロース、ソルビトール、または任意の他の不活性な充填剤が挙げられるがこれらに限定されない。また、ヒュームド二酸化ケイ素、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなどの流動助剤または粉末に流動性を付与する任意の他の材料を存在させてもよい。滑沢剤は、必要な場合、ポリエチレングリコール、ロイシン、ベヘン酸グリセリル、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウムを使用することにより、さらに添加され得る。

また、該組成物を錠剤に組み込んでもよく、特に、錠剤マトリックス中に組み込むことにより、摂取後、粒子が速やかに分散される。このような粒子をかかる錠剤中に組み込むためには、該粒子を受け入れ得るが打錠プロセス中はそれらの崩壊を許容しない充填剤／バインダーを錠剤（ｔａｂｌｅ）に添加しなければならない。この目的に適した材料としては、微晶質セルロース（ＡＶＩＣＥＬ（登録商標））、ダイズ多糖類（ＥＭＣＯＳＯＹ（登録商標））、アルファー化デンプン（ＳＴＡＲＣＨ（登録商標）１５００、ＮＡＴＩＯＮＡＬ（登録商標）１５５１）およびポリエチレングリコール（ＣＡＲＢＯＷＡＸ（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない。該材料は５〜７５％（ｗ／ｗ）の範囲で存在させるべきであり、好ましい範囲は２５〜５０％（ｗ／ｗ）である。

また、錠剤が摂取されたら該ビーズが分散されるように崩壊剤を添加する。好適な崩壊剤としては、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ（登録商標））、デンプングリコール酸ナトリウム（ＥＸＰＬＯＴＡＢ（登録商標）、ＰＲＩＭＯＪＥＬ（登録商標））、および架橋ポリビニルポリピロリドン（Ｐｌａｓｏｎｅ−ＸＬ）が挙げられるがこれらに限定されない。このような材料は３〜１５％（ｗ／ｗ）の割合で存在させるべきであり、好ましい範囲は５〜１０％（ｗ／ｗ）である。

また、滑沢剤は適正な打錠を確保するために添加され、このようなものとしては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、ロイシン、ベヘン酸グリセリルおよび水添植物油が挙げられ得るが、これらに限定されない。このような滑沢剤は０．１〜１０％（ｗ／ｗ）の量で存在させるべきであり、好ましい範囲は０．３〜３．０％（ｗ／ｗ）である。

錠剤は、例えば以下のようにして形成される。粒子をブレンダー内にＡＶＩＣＥＬ（登録商標）、崩壊剤および滑沢剤とともに導入し、設定した分にわたって混合して均質なブレンドを得、次いで、これを、錠剤を圧縮する錠剤プレスのホッパー内に入れる。使用する圧縮力は、錠剤が形成されるのに適切であるがビーズまたはコーティングを破砕するには充分ではない。

本発明の複数投薬形態により、医薬活性なドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンの投薬量が、レシピエントにおいて所望の薬物レベルが得られるように約２４時間にわたって定常状態で、１日１回の経口投与で送達され得ることが認識される。

また、本発明は、ドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンでの哺乳動物の処置方法を提供する。該方法は、本発明によるドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンの組成物を、ドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンの抗コラゲナーゼ活性または抗炎症性活性を必要とする哺乳動物（好ましくは、ヒト）に、実質的に抗生物質活性が付随することなく投与することを伴う。全身投与が好ましく、経口投与が最も好ましい。

本発明の組成物を使用すると、最低で約０．１μｇ／ｍｌ、好ましくは約０．３μｇ／ｍｌおよび最大で約１．０μｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．８μｇ／ｍｌである定常状態の血中ドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリンレベルを得ることができ、コラゲナーゼの生成が増大している疾患、例えば、歯周疾患、皮膚疾患など、ならびに炎症性状態が処置され得る。実際、毎日の複数投薬で投与される抗菌作用量未満（ｓｕｂ−ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ）の血中レベルのテトラサイクリンで処置可能な任意の疾患状態も、対応する本発明の１日１回製剤を用いて処置され得る。

本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することにより、よりよく理解される。しかしながら、当業者には、本実施例が、後続の特許請求の範囲にさらに充分に示されている本発明の例示にすぎないことは容易に認識されよう。

実施例１：錠剤組成物の調製
湿式造粒
ドキシサイクリンＨ_２Ｏ（１０ｍｇ）、微晶質セルロース（ＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ １０２，５３ｍｇ）、アルファー化デンプン（２０ｍｇ）およびクロスカルメロースナトリウム（ＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ（登録商標），２ｍｇ）を高剪断重量（ｗｅｉｇｈｔ）造粒機（Ｆｉｅｌｄｅｒ ＰＭＡ １００）内で合わせ、湿性造粒物に対する水噴霧パラメータの影響を評価した。可変量にはブレード速度（低速または高速）、噴霧体積、噴霧速度（低速、中速および高速）、または総噴霧量を含めた。これらの可変量の効果を目視観察、乾燥減量および収量によって評価した。スケールアップすると、２５ｋｇの固形部分に対して約９リットルの噴霧体積および約５〜７リットル／分の噴霧速度が最適であろうと結論付けた。

乾燥
乾燥造粒物に対する乾燥パラメータの影響を評価するため、実施例１の湿性造粒物をＯ’Ｈａｒａ流動床乾燥機内に入れ、この湿潤物に熱い空気を噴き付けた。パラメータには温度、空気体積およびＬＯＤ（乾燥減量）課題を含め、これらを目視観察、ＬＯＤおよび収量によって評価した。最適な供給温度は約６０℃であると結論付けた。

ミリング
粉末の流動性に対する篩サイズの影響を評価するため、実施例２の乾燥造粒物をＦｉｔｚｍｉｌｌ型番Ｍで、ナイフフォワード様式を用いてミリングした。３つの篩サイズ（０．０２２インチ、０．０３３インチおよび０．０６５インチ）を試験した。これらの可変量の効果を目視観察、粒径、嵩およびタップ密度ならびに収量によって評価した。最適な篩サイズは０．０３３インチであると結論付けた。

ブレンド
実施例３のミリングした造粒物を、３段階ブレンドプロセスにて、１５立方フィートのトート（ｔｏｔｅ）ブレンダーおよびＶｏｒｔｉｖ−Ｓｉｖシフターを用いてブレンドした。内部造粒部分（８７ｍｇ）を第１工程でブレンドし、続いて流動促進剤（２．５ｍｇのＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬ（登録商標）（クロスカルメロースナトリウム）および１２．５ｍｇのＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＰＨ ２００（微晶質セルロース）、次いで滑沢剤（０．５ｍｇのステアリン酸マグネシウム）をブレンドした。流動促進剤と滑沢剤の導入後の造粒粉末の均質性を評価するため、以下のパラメータ：造粒粉末の最初の仕込み後のブレンド時間、流動促進剤の添加後のブレンド時間、および滑沢剤の添加後のブレンド時間を変動させた。ブレンド時間の効果を目視観察および均一性によって評価した。内部造粒部分の最適なブレンド時間は約１０分間、流動促進剤の添加後は約３０分間、および滑沢剤の添加後は約７分間であると結論付けた。

圧縮
この実施例は本発明の圧縮（打錠）工程の実例を示す。

錠剤の均一性に対する圧縮パラメータの効果を評価するため、実施例４の造粒粉末を、回転式錠剤プレス（Ｍａｎｅｓｔｙ Ｕｎｉｐｒｅｓｓ）を用いて錠剤に成形した。可変量には打錠速度、圧縮力（１９、１３および７．５ｋＮならびに供給フレーム速度）を含めた。これらの可変量の効果を目視観察、硬度、摩損度、崩壊、厚さ、重量および収量によって評価した。２０００〜２６００錠の錠剤／分の錠剤プレス速度および８〜１２ｒｐｍの供給フレーム速度が特に有効であると結論付けた。

コーティング
４つのコーティング層を逐次適用した。第１の（内側）層は、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）を水に１０％固形分まで溶解させ、少なくとも４５分間混合し、気泡が存在する場合は少なくとも１時間静置することにより調製した。このコーティングを実施例５のコア錠剤に、蠕動ポンプと０．０２８５インチ直径のノズルを有する３つのスプレーガンを備えたＯ’Ｈａｒａ ｆａｓｔｃｏａｔ（４８インチパン）を用いて適用した。６０℃の供給温度、７．０ｒｐｍのパン速度、および２７５〜３２５ｍＬ／分の噴霧速度が特に有効であることがわかった。総噴霧時間は約４時間であった。

腸溶性コーティング層は、ＡＣＲＹＬ−ＥＺＥ（登録商標）を水に、該固形物を水に３００グラム／分の速度で添加することによって約２０％の固形分まで溶解させ、少なくとも４５分間混合することにより調製し、そして３０メッシュの篩に通すふるい分けによって制御した。このコーティングを内側層コーティング錠に、蠕動ポンプと０．０６０インチ直径のノズルを有する３つのスプレーガンを備えたＯ’Ｈａｒａ ｆａｓｔｃｏａｔ（４８インチパン）を用いて適用した。５０〜５５℃の供給温度、７．０ｒｐｍのパン速度、および２５０〜３００ｍＬ／分の噴霧速度が特に有効であることがわかった。総噴霧時間は約５．５時間であった。

活性コーティング層は、まずＯＰＡＤＲＹ（登録商標）を水に溶解させて少なくとも１時間混合し、次いで、ドキシサイクリンを添加してさらに１時間混合することにより調製した。これは、得られる懸濁液の均一性を確実にするために極めて重要であった。このコーティングを腸溶性層コーティング錠に、蠕動ポンプと０．０２８５インチ直径のノズルを有する３つのスプレーガンを備えたＯ’Ｈａｒａ ｆａｓｔｃｏａｔ（４８インチパン）を用いて適用した。６０℃の供給温度、７．０〜９．０ｒｐｍのパン速度、および３７５〜４００ｍＬ／分の噴霧速度が特に有効であることがわかった。噴霧は長時間にわたって（約１８．５時間）行ない、噴霧操作中は懸濁液を連続的に混合した。

最後に、外側コーティング層を、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）を水に１０％固形分まで溶解させ、少なくとも４５分間混合し、気泡が存在する場合は少なくとも１時間静置することにより調製した。このコーティングを実施例５の錠剤に、蠕動ポンプと０．０２８５インチ直径のノズルを有する３つのスプレーガンを備えたＯ’Ｈａｒａ ｆａｓｔｃｏａｔ（４８インチパン）を用いて適用した。６０℃の供給温度、７．０ｒｐｍのパン速度、および２７５〜３２５ｍＬ／分の噴霧速度が特に有効であることがわかった。総噴霧時間は約４時間であった。

実施例２：錠剤組成物の安定性試験
上記のようにして調製した徐放性ドキシサイクリン錠剤の安定性を、錠剤を種々の温度および相対湿度条件下で３ヶ月間保存し、外観、溶解プロフィール、安定性、不純物プロフィールおよび水分含量に関する錠剤の定期的評価を行なうことにより評価した。１０００錠の錠剤の第１のボトル（ボトルＡ）を２５℃および６０％ＲＨで３ヶ月間保存し、１０００錠の錠剤の第２のボトル（ボトルＢ）を４０℃および７５％ＲＨで３ヶ月間保存した。

１、２および３ヶ月間後、錠剤を解析のためにボトルから取り出した。錠剤は、初期では丸く、ベージュ色で黒い点を１つ有していた。１、２または３ヶ月後、それぞれ、２５℃／６０％ＲＨおよび４０℃／７５％ＲＨのボトルＡの錠剤でもボトルＢの錠剤でも外観の変化は観察されなかった。さらに、安定性、含水量および不純物測定の結果に有意な変化はみられなかった。したがって、これらの安定性の結果により、本発明のプロセスによって調製した錠剤は物理的にも化学的にも安定であることが示された。

さらに、これらの錠剤の内容物の均一性試験では、錠剤が均一であり、最初ならびにそれぞれ２５℃／６０％ＲＨおよび４０℃／７５％ＲＨでの３ヶ月間の保存後のどちらにおいてもドキシサイクリン含有量が一貫していることが示された。

ボトルＡおよびＢの錠剤の溶解を標準的な溶解手順に従って測定した。簡単には、溶解試験は、まず、約ｐＨ１．１の７５０ｍＬの０．１Ｎ ＨＣｌ溶液で１２０分間行ない、次いで、残りの溶解液に２００ｍＬの０．１Ｎ ＮａＯＨ／２００ｍＭリン酸カリウム溶液を添加し、そしてＮａＯＨ溶液またはＨＣｌ溶液でｐＨを約６に調整することにより、約ｐＨ６のリン酸カリウムバッファー溶液で行なった。表１および２に示した所定の各時点で４ｍＬ体積の試料を採取した。溶解試験はすべて３７℃で行なった。ボトルＡおよびＢでの溶解データを以下の表１および２に表にして示す。

この溶解データにより、本発明のプロセスによって調製した錠剤では、２５℃／６０％ＲＨおよび４０℃／７５％ＲＨでの３ヶ月間の保存後、最初の試料と比べて同等の溶解プロフィールが得られることが示された。これらの結果により、本発明のプロセスによって調製した錠剤は物理的にも化学的にも安定であることがさらに確認された。

実施例３ カプセル剤組成物の調製
ドキシサイクリン一水和物含有層化ＩＲペレットの調製
ドキシサイクリン一水和物の分散液を以下のようにして調製した：５．７２５キログラムの脱イオン水に、０．１１３キログラムのヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび１．５キログラムのドキシサイクリン一水和物を添加した後、撹拌パドルを用いて穏やかに３０分間混合した。この薬物分散液を、ＧＰＣＧ−１５流動床処理装置の９”Ｗｕｒｓｔｅｒ Ｃｏｌｕｍｎ内で糖シード材（３０／３５メッシュ）上に噴霧した。分散液全体が適用されるまで、ペレットをカラム内で５分間乾燥させた。薬物入りペレットをＷｕｒｓｔｅｒ Ｃｏｌｕｍｎから排出し、２０メッシュの篩に通した。また、着色または物理的保護をもたらすためにＩＲビーズ上に保護コート（例えば、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）ベージュ）を適用してもよい。

ドキシサイクリン一水和物含有腸溶性コーティングペレットの調製
ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３０Ｄ５５コーティング分散液を、０．１２７キログラムのクエン酸トリエチルを３．５３８キログラムのＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３０Ｄ５５（固形分：１．０６１キログラム）に添加し、少なくとも３０分間撹拌することにより調製した。０．３１５キログラムのタルクを２．９３９キログラムの脱イオン水中に分散させた。可塑化したＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ３０Ｄ５５をこのタルク分散液と合わせ、６０メッシュの篩に通してふるい分けした。得られた合わせた分散液を、実施例１に従って調製した薬物入りペレット（３．５キログラム）上にＧＰＣＧ−１５流動床処理装置の９”Ｗｕｒｓｔｅｒ Ｃｏｌｕｍｎ内で噴霧した。着色または物理的保護をもたらすためにＤＲビーズ上に保護コート（例えば、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）ベージュ）を適用してもよい。

薬物入りペレットと腸溶性コーティングペレットのカプセル封入
カプセル剤は、薬物入りペレットおよび腸溶性コーティングペレットを個々に適切なサイズのカプセル殻内に充填することにより調製され得る。薬物入りペレットと腸溶性コーティングペレットの比率は７５：２５であり、薬物入りペレットの充填重量は、３０ｍｇのドキシサイクリンを送達する薬物入りペレットの実際の効力に基づいて計算され得；腸溶性コーティングペレットの充填重量も、１０ｍｇのドキシサイクリンを送達する腸溶性コーティングペレットの実際の効力に基づいて計算され得る。ペレットを所望のカプセル殻に精密に充填するためにはＲｏｍｏｃｏ ＣＤ５またはＭＧ−２ペレット充填機が使用され得る。

薬物入りＩＲペレットと腸溶性コーティングＤＲペレットを７５：２５の比で含有するサイズ０のカプセル剤を以下のようにして調製した。ＩＲペレットおよびＤＲペレットは上記に示したようにして調製した。ペレットを作製するために使用したドキシサイクリンの測定値から、４１．２６ｍｇのカプセル剤の効力が４０ｍｇのドキシサイクリンの実際の強度に相当すると決定された。ＩＲペレットの効力はペレット１グラムあたりドキシサイクリン１９４ｍｇ（ｍｇ／ｇ）であり、ＤＲペレットについては１３３ｍｇ／ｇであった。したがって、４０ｍｇのカプセル剤がＩＲ：ＤＲで７５：２５であることに対応して、各カプセル剤に対してＩＲビーズの充填重量は１５９．５ｍｇであり、ＤＲビーズについては７７．６ｍｇであると計算された。

実施例４ フェーズＩＩ臨床試験
フェーズ２の多施設無作為二重盲検の並行群間比較プラセボ対照試験を実施した。処置は（１）３０ｍｇ ＩＲおよび１０ｍｇ ＤＲを含有する４０ｍｇのドキシサイクリン錠剤（ＣＤ２５７５／１０１）；（２）ドキシサイクリン１００ｍｇのカプセル剤；ならびに（３）プラセボ（ダブルダミー）であり、これらを１日１回経口投与した。

中等度または重度のざ瘡（顔面（鼻を含む）に２５〜７５ヶ所の炎症性病変）を有する患者を本試験の被験体とした。全部で６６０例の被験体（２２０／群）を該３つの処置に１：１：１で無作為に分けた。処置は１６週間持続した。

以下：炎症性病変の計測数のベースラインから１６週目までの変化（ＬＯＣＦ，ＩＴＴ）（主要エンドポイント）；１６週目の成功率（ＬＯＣＦ，ＩＴＴ）；ベースラインから１６週目までの炎症性病変の計測数の変化のパーセント（ＬＯＣＦ，ＩＴＴ）；ベースラインから１６週目までの病変の総数の変化のパーセント（ＬＯＣＦ，ＩＴＴ）；非炎症性病変の計測数のベースラインから１６週目までの変化（ＬＯＣＦ，ＩＴＴ）；ベースライン、１２週目、および１６週目／ＥＴ来院時における体幹のざ瘡の炎症性病変の包括的評価などを有効性試験で調べた。

被験体のざ瘡は治験来院のたびに治験担当者が、上記に記載のＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ’ｓ Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（炎症）尺度を用いて評価した。この試験では尋常性ざ瘡における試験薬物の作用様式が主に抗炎症であるため、ＩＧＡ尺度は炎症性病変に焦点をあわせた。

有効性の発現は、１６週目より早い時点で解析することにより、炎症性病変の変化および成功率について判定した。

安全性試験には標準的な安全性の報告を含めた。特に重要な有害事象として、光毒症；偽脳腫瘍；および偽膜性大腸炎を含めた。来院時はその都度、治験担当者がバイタルサインを観察した。試験室内試験は０、８および１６週目に実施した。

１６週目および１２週目の主要エンドポイント（ベースラインからの炎症性病変の計測数の絶対変化）において、ＣＤ２５７５／１０１ ４０ｍｇはプラセボよりも有効であり、１６週目ではプラセボよりも優れた成功率であるが、１２週目では（統計的に）そうでないことがわかった。表１参照。この試験は、成功率における差を示すには有力でなかった。

驚くべきことに、ＣＤ２５７５／１０１ ４０ｍｇは、ドキシサイクリン１００ｍｇよりもずっと低い投薬量レベルであるが、例えば、炎症性病変の計測数の変化および成功率において同じであるかまたはさらに大きな有効性をもたらすことがわかった。表１および２参照。

さらに驚くべきことに、ＣＤ２５７５／１０１ ４０ｍｇではドキシサイクリン１００ｍｇによるよりも非炎症性病変の計測数が有意に低減されることがわかった。図１参照。

また、ＣＤ２５７５／１０１ ４０ｍｇではドキシサイクリン１００ｍｇによるよりも病変の総数が有意に低減された。表２参照。

ＣＤ２５７５／１０１ ４０ｍｇは、ドキシサイクリン１００ｍｇと比べて優れた安全性プロフィールを有することがわかった（例えば、薬物関連ＡＥ：（悪心、嘔吐および頭痛）は１１対３８）。表３も参照のこと。

当業者には、上記の実施形態に対して、その広い発明思想から逸脱することなく変更が行なわれ得ることが認識されよう。したがって、本発明は、開示した具体的な実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の精神および範囲内の変形例を包含することを意図していると理解されたい。

本明細書において挙げた、または示した特許、特許出願、刊行物、教本および文献 論文／報告は各々、引用によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。

本発明の他の態様、特長および利点は、発明の詳細な説明およびその好ましい実施形態および添付の特許請求の範囲を含む以下の開示から自明となろう。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
処置を必要とする被験体のざ瘡の処置方法であって、該方法は、約４０ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物を該被験体に１日１回経口投与することを含み、該被験体は約１６週間にわたって処置され；該医薬組成物は、即時放出部分に約３０ｍｇのドキシサイクリンおよび遅延放出部分に約１０ｍｇのドキシサイクリンを含む、方法。
（項目２）
前記医薬組成物が錠剤の形態である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記医薬組成物がカプセル剤の形態にある、項目１に記載の方法。
（項目４）
約４０ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩を含む前記医薬組成物での処置により、１００ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩での処置と同じかまたはそれより良好な有効性が得られる、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記処置により被験体の炎症性病変の計測数が低減される、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記処置により被験体の非炎症性病変の計測数が低減される、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記処置により成功率が増大する、項目１に記載の方法。

Claims (7)

1. 処置を必要とする被験体のざ瘡の処置方法であって、該方法は、約４０ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物を該被験体に１日１回経口投与することを含み、該被験体は約１６週間にわたって処置され；該医薬組成物は、即時放出部分に約３０ｍｇのドキシサイクリンおよび遅延放出部分に約１０ｍｇのドキシサイクリンを含む、方法。
2. 前記医薬組成物が錠剤の形態である、請求項１に記載の方法。
3. 前記医薬組成物がカプセル剤の形態にある、請求項１に記載の方法。
4. 約４０ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩を含む前記医薬組成物での処置により、１００ｍｇのドキシサイクリンまたはその薬学的に許容され得る塩での処置と同じかまたはそれより良好な有効性が得られる、請求項１に記載の方法。
5. 前記処置により被験体の炎症性病変の計測数が低減される、請求項１に記載の方法。
6. 前記処置により被験体の非炎症性病変の計測数が低減される、請求項１に記載の方法。
7. 前記処置により成功率が増大する、請求項１に記載の方法。

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