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JP2015145397A - 抗α２インテグリン抗体を使用する処置 - Google Patents

抗α２インテグリン抗体を使用する処置 Download PDF

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JP2015145397A
JP2015145397A JP2015062978A JP2015062978A JP2015145397A JP 2015145397 A JP2015145397 A JP 2015145397A JP 2015062978 A JP2015062978 A JP 2015062978A JP 2015062978 A JP2015062978 A JP 2015062978A JP 2015145397 A JP2015145397 A JP 2015145397A
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cancer
seq
nhl
carcinoma
amino acid
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JP2015062978A
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English (en)
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ハラルド モットル，
Mottl Harald
ハラルド モットル，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ichnos Sciences SA
Original Assignee
Glenmark Pharmaceuticals SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41528529&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP2015145397(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Glenmark Pharmaceuticals SA filed Critical Glenmark Pharmaceuticals SA
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Abstract

【課題】癌を処置するための方法。
【解決手段】抗α２β１インテグリン抗体を投与する、扁平上皮細胞癌、肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（消化器癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫又は子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌又は腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫及び様々なタイプの頭頸部癌、並びにＢ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）から選択される癌を処置する方法の提供。ＨＣＲＤ２、ＨＣＲＤ１、及びＨＣＤＲ３等の重鎖可変可能領域、及び／又は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３の軽鎖可変領域を含むヒト化抗α２インテグリングリン抗体。
【選択図】なし

Description

技術分野
本発明は、癌の処置に関する。より詳細には、本発明は、α２β１インテグリンに対す
る抗体を投与することによって癌を処置する方法に関する。
発明の背景
インテグリンα２β１（最晩期抗原２；ＶＬＡ−２）は、血小板、血管内皮細胞、上皮
細胞、活性化単球／マクロファージ、線維芽細胞、白血球、リンパ球、活性化好中球およ
びマスト細胞をはじめとした種々の細胞型上で発現する（Ｈｅｍｌｅｒ，Ａｎｎｕ Ｒｅ
ｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：３６５：３６５−４００（１９９９）；Ｗｕ ａｎｄ Ｓａｎ
ｔｏｒｏ，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２０６：１６９−１７１（１９９４）；Ｅｄｅｌｓｏｎら、
Ｂｌｏｏｄ．１０３（６）：２２１４−２０（２００４）；Ｄｉｃｋｅｓｏｎら、Ｃｅｌ
ｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ．５：２７３−２８１（１
９９８））。α２β１に対する最も代表的なリガンドとしては、コラーゲンおよびラミニ
ンが挙げられ、この両方ともが、細胞外マトリックスに見られる。代表的には、α２イン
テグリンのＩドメインは、二価カチオン依存的様式でコラーゲンに結合する一方、その同
じドメインは、二価カチオン依存的機構と二価カチオン非依存的機構の両方でラミニンに
結合する（Ｄｉｃｋｅｓｏｎら、Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉ
ｃａｔｉｏｎ．５：２７３−２８１（１９９８））。α２β１インテグリンの特異性は、
細胞型によって異なり、特定の細胞型についてコラーゲンレセプターおよび／またはラミ
ニンレセプターとして働き、例えば、α２β１インテグリンは、血小板の場合はコラーゲ
ンレセプターとして、そして内皮細胞の場合はラミニンレセプターとして知られている（
Ｄｉｃｋｅｓｏｎら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：７６６１−７６６８（１９９７
））。エコーウイルス−１、デコリン、Ｅ−カドヘリン、マトリックスメタロプロテアー
ゼＩ（ＭＭＰ−Ｉ）、エンドレペリン（ｅｎｄｏｒｅｐｅｌｌｉｎ）および複数のコレク
チンならびにＣ１ｑ補体タンパク質もまた、α２β１インテグリンに対するリガンドであ
る（Ｅｄｅｌｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ １０７（１）：１４３−５０（２００６））。α２
β１インテグリンは、サイトカイン発現の増加および増殖をもたらす、コラーゲン誘発血
小板凝集、コラーゲン上の細胞遊走、コラーゲン線維の細胞依存的再編成ならびにコラー
ゲン依存的細胞応答（Ｇｅｎｄｒｏｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４８６３３−
４８６４３（２００３）；Ａｎｄｒｅａｓｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：２８０
４−２８１１（２００３）；Ｒａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（９）：４９３５−
４０（２０００））、Ｔ細胞、マスト細胞および好中球の機能の局面（Ｃｈａｎら、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３９８−４０４（１９９１）；Ｄｕｓｔｉｎ ａｎｄ ｄｅ
Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：２８６−２９０
（２００１），Ｅｄｅｌｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ．１０３（６）：２２１４−２０（２００
４），Ｗｅｒｒら、Ｂｌｏｏｄ ９５：１８０４−１８０９（２０００）、遅延型過敏（
ｄｅｌａｙｅｄ ｔｙｐｅ ｈｙｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）接触過敏症およびコラー
ゲン誘導関節炎の局面（ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ
．１０５：７２１−７２０（２０００）；Ｋｒｉｅｇｅｌｓｔｅｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．
Ｉｎｖｅｓｔ．１１０（１２）：１７７３−８２（２００２））、乳腺管形態形成（Ｋｅ
ｅｌｙら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１０８：５９５−６０７（１９９５）；Ｚｕｔｔｅｒ
ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５５（３）：９２７−９４０（１９９５））、上皮の創
傷治癒（Ｐｉｌｃｈｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１８１４５７−５４（１
９９７））、ならびにＶＥＧＦ誘導血管新生に関連するプロセス（Ｓｅｎｇｅｒら、Ａｍ
．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６０（１）：１９５−２０４（２００２））をはじめとしたいく
つかの生物学的および病理学的プロセスに関わっている。
インテグリン／リガンド相互作用は、炎症組織への白血球の血管外遊出を促進し得（Ｊ
ａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：３３５９−３３６８（１９９７）；Ｇａ
ｄｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５（５５５７）：１０８６−９（２００２），Ｓｉｒｃ
ａｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１０：２０５１−２０６６（２００２））、
炎症部位における炎症促進性細胞の遊走、動員および活性化をはじめとした、炎症性刺激
に応答して循環から組織に初めて白血球が血管外遊出した後の下流の事象に関与し得る（
Ｅｂｌｅ Ｊ．Ａ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒ．Ｄｅｓ．１１（７）：８６７−８８０（２０
０５））。α２β１インテグリンを阻止するいくつかの抗体が、遅延過敏症応答に対して
影響を示し、ならびに関節リウマチのマウスモデルおよび炎症性腸疾患のモデルにおいて
有効性を示すと報告され（Ｋｒｉｅｇｅｌｓｔｅｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．
１１０（１２）：１７７３−８２（２００２）；ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓら、Ｊ．
Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０５：７２１−７２０（２０００）、また、インビトロにお
いて内皮細胞の増殖および遊走を弱めると報告された（Ｓｅｎｇｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａ
ｔｈｏｌ．１６０（１）：１９５−２０４（２００２）ことから、α２β１インテグリン
を阻止することにより、様々な癌に認められるような異常な血管新生または正常より多い
血管新生が予防／阻害され得ると示唆される。
α２β１インテグリンは、血小板上で発現する唯一のコラーゲン結合インテグリンであ
り、コラーゲンへの血小板の接着および止血にいくらか関与するとみられている（Ｇｒｕ
ｎｅｒら、Ｂｌｏｏｄ １０２：４０２１−４０２７（２００３）；Ｎｉｅｓｗａｎｄｔ
ａｎｄ Ｗａｔｓｏｎ，Ｂｌｏｏｄ １０２（２）：４４９−４６１（２００３）；Ｓ
ａｎｔｏｒｏら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７４：８１３−８２１（１９９５）；
Ｓｉｌｊａｎｄｅｒら、Ｂｌｏｏｄ １５：１３３３−１３４１（２００４）；非特許文
献１）。さらに、血小板α２β１は、血小板凝集物のサイズの制御に関与し得る（Ｓｉｌ
ｊａｎｄｅｒら、Ｂｌｏｏｄ １０３（４）：１３３３−１３４１（２００４））。
α２β１インテグリンは、内皮細胞上に発現するラミニン結合インテグリンとしても示
されている（Ｌａｎｇｕｉｎｏら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．１０９：２４５５−２４６２
（１９８９））。内皮細胞は、インテグリン媒介性のメカニズムによってラミニンに付着
すると考えられているが、しかしながら、α２のＩドメインが、内皮細胞との相互作用の
媒介に関わるリガンド特異的配列として機能し得ると示唆されている（Ｂａｈｏｕら、Ｂ
ｌｏｏｄ．８４（１１）：３７３４−３７４１（１９９４））。
血小板上のα２β１インテグリンを含むα２β１インテグリンに結合する治療用抗体は
、出血性合併症をもたらし得ると予想される。例えば、ＧＰＩｂ（非特許文献１）または
ＧＰ ＩＩｂ／ＩＩＩａ（非特許文献２、Ｎｉｅｓｗａｎｄｔ ａｎｄ Ｗａｔｓｏｎ，
Ｂｌｏｏｄ １０２（２）：４４９−４６１（２００３），Ｍｅｒｌｉｎｉら、Ｃｉｒｃ
ｕｌａｔｉｏｎ １０９：２２０３−２２０６（２００４））などの他の血小板レセプタ
ーを標的化する抗体は、血小板減少症に関連するが、この背景にあるメカニズムは、十分
に理解されていない。血小板レセプターに抗体が結合することによって、その３次元構造
が変化し、通常は露出していないエピトープが露出し、そして血小板が排除され得るとい
う仮説が立てられている（Ｍｅｒｌｉｎｉら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０９：２２０
３−２２０６（２００４）。実際に、経口投与のＧＰ ＩＩａ／ＩＩＩｂアンタゴニスト
に関連する出血性合併症が、このクラスの化合物の「影の側面」として報告されている（
Ｂｈａｔｔ ａｎｄ Ｔｏｐｏｌ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２（１）
：１５−２８（２００３））。
抗ヒトα２β１インテグリン阻止抗体ＢＨＡ２．１が、Ｈａｎｇａｎらによって初めて
報告された（非特許文献３）。他の抗α２β１インテグリン抗体（例えば、商業的に入手
可能な抗体ＡＫ７（Ｍａｚｕｒｏｖら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６６（４）：４
９４−９（１９９１）、Ｐ１Ｅ６（Ｗａｙｎｅｒら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０７（
５）：１８８１−９１（１９８８））、１０Ｇ１１（Ｇｉｌｔａｙら、Ｂｌｏｏｄ ７３
（５）：１２３５−４１（１９８９）およびＡ２−１１Ｅ１０（Ｂｅｒｇｅｌｓｏｎら、
Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２（５）：４５５−６４（１９９４））も知られ
ており、インビトロにおいて使用されている。Ｈａｎｇａｎら（非特許文献３）は、ＢＨ
Ａ２．１抗体をインビボにおいて使用して、肝臓におけるヒト腫瘍細胞の血管外遊出に対
するα２β１インテグリンの機能を阻止する効果およびこれらの腫瘍細胞が抗体処置下に
おいて転移巣を発生する能力を研究した。ラットおよびマウスのα２β１インテグリンに
特異的なＨａ１／２９抗体（Ｍｅｎｄｒｉｃｋ ａｎｄ Ｋｅｌｌｙ，Ｌａｂ Ｉｎｖｅ
ｓｔ．６９（６）：６９０−７０２（１９９３））は、ＬＣＭＶウイルス活性化後のＴ細
胞上のα２β１インテグリンのアップレギュレーションを研究するため（Ａｎｄｒｅａｓ
ｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：２８０４−２８１１（２００３））、ＳＲＢＣ誘
発遅延型過敏応答およびＦＩＴＣ誘導接触型過敏症応答ならびにコラーゲン誘導関節炎を
研究するため（ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０５
：７２１−７２０（２０００））、ＶＥＧＦによって制御される血管新生におけるα２β
１インテグリンの役割を研究するため（Ｓｅｎｇｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６
０（１）：１９５−２０４（２００２）；Ｓｅｎｇｅｒら、ＰＮＡＳ ９４（２５）：１
３６１２−７（１９９７））、および血小板活性化因子（ＰＡＦ）に応答したＰＭＮ移動
におけるα２β１インテグリンの役割を研究するために（Ｗｅｒｒら、Ｂｌｏｏｄ ９５
：１８０４−１８０９（２０００））インビボにおいて使用された。
上に記載したようなマウスモノクローナル抗体をヒト治療薬として非免疫不全患者にお
いて使用することは、投与されるマウス抗体に対する強い免疫応答（特に反復投与におい
て）を理由に制限される。この応答は、循環中のマウス抗体の有効な半減期を短縮し得る
だけでなく、深刻な注射部位反応および／またはアナフィラキシー反応をもたらし得る（
Ｓｈａｗｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５（２）：１５３０（１９８５））。さら
に、定常領域（Ｆｃ）に関連するげっ歯類のエフェクター機能は、ヒトに投与されたとき
、ヒト対応物よりもかなり効果が弱く、潜在的に望ましい補体活性化および抗体依存性の
細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が失われる。
Ｖａｎｈｏｏｒｅｌｂｅｋｅら、Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．（２００３）３（２）：１２５−４０ Ｓｃｈｅｌｌら、Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．（２００２）８１：７６−７９ Ｈａｎｇａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９６）５６：３１４２−３１４９
発明の要旨
本発明は、癌を処置するためにヒト化抗アルファ２（α２）インテグリン抗体を使用す
る方法に関する。特に、本発明は、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、
肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む）、
腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃ
ｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌（ｃｅｒｖｉｃａ
ｌ ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌
、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外
陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（
低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性
度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リン
パ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ（ｈｉｇｈ ｇｒａｄｅ ｓｍ
ａｌｌ ｎｏｎ−ｃｌｅａｖｅｄ ｃｅｌｌ ＮＨＬ）；巨大病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓ
ｅａｓｅ）ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュ
トレームマクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽
球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リン
パ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連す
るような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫
および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置するために有効なアプローチを提供
する。本発明は、α２β１インテグリンに特異的に結合する抗アルファ２（α２）インテ
グリン抗体が、抗ＶＥＧＦ抗体に匹敵する程度に腫瘍成長を阻害するという予想外の結果
に基づく。ＶＥＧＦ因子は、インテグリン（例えば、血管上のα１β１、α２β１、α４
β１、α５β１およびαｖβ３ならびにリンパ管上のα４β１、α９β１、α２β１およ
びα１β１）の発現を活性化するかまたはアップレギュレートする（Ａｖｒａａｍｉｄｅ
ｓら、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ．２００８ Ａｕｇ；８（８）：６０４−１７）。
ゆえに、α２β１の拮抗作用だけが、ＶＥＧＦ抗体による処置と同様の結果をもたらすこ
とは、驚くべきことである。
したがって、１つの局面において、本発明は、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非
小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇ
ａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌
を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、
結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝
臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならび
にＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（Ｓ
Ｌ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性Ｎ
ＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変
ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマ
クログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病
（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障
害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮
腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表
皮癌腫からなる群より選択される癌を処置する方法を提供し、その方法は、（ａ）ＨＣＤ
Ｒ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬ
ＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番
号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは（ｃ）配列番
号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ
（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択されるＬＣＤ
Ｒ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱ
ＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む治療有効量のヒ
ト化抗α２インテグリン抗体を被験体に投与する工程を包含する。
別の局面において、本発明は、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺
の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ
ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含む）、膵癌
、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直
腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌
、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ
腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中
悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度
リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マント
ル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン
血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘ
アリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）
、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症
候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる
群より選択される癌を処置する方法を提供し、その方法は、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、
配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨ
ＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ
酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）
もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）Ｌ
ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ
、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む治療有効量のヒト化抗α２イン
テグリン抗体、および薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物を被験体に投与する工
程を包含する。治療的に使用するための組成物は、滅菌され得、凍結乾燥され得る。
別の局面において、本発明は、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺
の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ
ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含む）、膵癌
、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直
腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌
、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ
腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中
悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度
リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マント
ル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン
血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘ
アリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）
、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症
候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる
群より選択される癌を処置する方法を提供し、その方法は、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、
配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨ
ＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ
酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）
もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）Ｌ
ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ
、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む治療有効量のヒト化抗α２イン
テグリン抗体、および薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物を被験体に投与する工
程を包含し、その投与レジメンは、２週間ごとに１回である。
なおもさらなる局面において、本発明は、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細
胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓ
ｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含
む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸
癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌
、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ
細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）
ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ
；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨ
Ｌ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクロ
グロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（Ａ
ＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（
ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、
メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌
腫からなる群より選択される癌を処置するための方法において使用するための、（ａ）Ｈ
ＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦ
ＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配
列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは（ｃ）配
列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹ
ＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択されるＬ
ＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（
ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗α
２インテグリン抗体、または前記ヒト化抗α２インテグリン抗体および薬学的に許容され
得るキャリアを含む組成物を提供する。
さらなる局面において、本発明は、ヒト患者における扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺
癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃
癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消
化器癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、
乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎
癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、
ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球
性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽
球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨
大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレ
ームマクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性
白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球
増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するよ
うな浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫およ
び類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置するためのキットを提供し、そのキット
は、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣ
ＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳ
ＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もし
くは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡ
ＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から
選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）
ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含
むヒト化抗α２インテグリン抗体を含むヒト化抗α２インテグリン抗体組成物、および前
記処置のために前記ヒト化抗α２インテグリン抗体を使用するための指示書を含むパッケ
ージを備える。
さらなる局面において、本発明は、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬ
ＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤ
Ｒ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶ
ＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変
領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶ
ＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬ
ＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗α２インテグリン抗体、容器、ならびに扁平
上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む
）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍ
ａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝
臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、
唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫およ
び様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリン
パ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びま
ん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非
切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ
腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（
ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白
血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血
管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨
髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置するための
前記ヒト化抗α２インテグリン抗体の使用を示しているラベルを備える製品を提供する。
ある特定の実施形態において、上記抗α２インテグリン抗体は、１つ以上のヒト定常領
域（例えば、ＣＬおよび／またはＣＨ）、ならびに配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽
鎖可変領域および／もしくは配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域またはそれ
らのアミノ酸配列バリアントを含む。その抗体の様々な形態が、本明細書中で企図される
。例えば、その抗α２インテグリン抗体は、完全長抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン定
常領域を含む）または抗体フラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２またはＦ
ａｂ’またはＦｖまたはｓｃＦｖフラグメント）であり得る。さらに、その抗体は、検出
可能な標識で標識され得、固相上に固定化され得、そして／または異種化合物（例えば、
細胞傷害性薬剤）と結合体化され得る。
ある実施形態において、上述の重鎖可変領域は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む
。
さらなる実施形態において、上述の重鎖可変領域は、配列番号１８５のアミノ酸配列を
含み、その配列中の３０位は、Ｔｈｒであり、そして／または３１位は、Ａｓｎである。
さらなる実施形態において、上述の重鎖可変領域は、配列番号１８５のアミノ酸配列を
含み、その配列中の（ａ）７１位は、Ｌｙｓであるか、（ｂ）７３位は、Ａｓｎであるか
、（ｃ）７８位は、Ｖａｌであるか、または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせで
ある。
さらなる実施形態において、上述の重鎖可変領域は、配列番号７０〜７９および配列番
号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含む。
さらなる実施形態において、上述の重鎖可変領域は、配列番号７０〜７５、配列番号７
７〜７９および配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、上述の重鎖可変領域はさらに、アミノ酸配列ＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳ（配列番号１３）を含むＦＷ４領域を含む。
ある実施形態において、上述の重鎖可変領域は、ＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＨＣＤＲ
２（配列番号２）およびＨＣＤＲ３（配列番号３）のアミノ酸配列を含む。
さらなる実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は、配列番号１８７
を含む重鎖を含む。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む
。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み
、その配列中のアミノ酸２６位のアスパラギン（Ｎ）は、グルタミン（Ｑ）によって置き
換えられている。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み
、その配列中の（ａ）２位は、Ｐｈｅであるか、（ｂ）４５位は、Ｌｙｓであるか、（ｃ
）４８位は、Ｔｙｒであるか、または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせである。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、配列番号４１、配列番号８０〜９２お
よび配列番号１０８から選択されるアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、配列番号９０〜９２から選択されるア
ミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域はさらに、アミノ酸配列ＦＧＱＧＴＫＶＥ
ＩＫ（配列番号３８）を含むＦＷ４領域を含む。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＬＣＤＲ
２（配列番号５）およびＬＣＤＲ３（配列番号６）のアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、上述の軽鎖可変領域は、ＬＣＤＲ１（配列番号１１２）、ＬＣ
ＤＲ２（配列番号５）およびＬＣＤＲ３（配列番号６）のアミノ酸配列を含む。
さらなる実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は、配列番号１８８
を含む軽鎖を含む。
さらなる実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は：
（ｉ）（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）Ｈ
ＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮ
ＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）ま
たは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）またはＳＡＱＳＳＷＮＹＩＨ（配列
番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
軽鎖可変領域
を含む。
さらなる実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は：
（ｉ）（ａ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、
配列番号３）または（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）またはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
軽鎖可変領域
を含む。
さらなる実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は：
（ｉ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦ
ＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番
号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１（ＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ、配列番号１１２）、ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫ
ＬＡＳ；配列番号５）およびＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸
配列を含む軽鎖可変領域
を含む。
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）軽鎖可変領域
が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方である
、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法もまた提供される。
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、その配列中の３０位は
、Ｔｈｒであり、そして／または３１位は、Ａｓｎであるか；（ｂ）軽鎖可変領域が、配
列番号１８６のアミノ酸配列を含み、その配列中のアミノ酸２６位のアスパラギン（Ｎ）
は、グルタミン（Ｑ）によって置き換えられているか；または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両
方である、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法もまた提供される。
（ｉ）重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、その配列中の（ａ）７
１位は、Ｌｙｓであるか、（ｂ）７３位は、Ａｓｎであるか、（ｃ）７８位は、Ｖａｌで
あるか、または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせであるか；（ｉｉ）軽鎖可変領
域が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、その配列中の（ａ）２位は、Ｐｈｅである
か、（ｂ）４５位は、Ｌｙｓであるか、（ｃ）４８位は、Ｔｙｒであるか、または（ｄ）
（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせであるか；または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の両方
である、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法もまた提供される。
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号７０〜７９および配列番号１０９〜１１１から選択さ
れるアミノ酸配列を含むか；（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号４１、配列番号８０〜９２
および配列番号１０８から選択されるアミノ酸配列を含むか；または（ｃ）（ａ）と（ｂ
）の両方である、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法もまた提供される。
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号７０〜７５、配列番号７７〜７９および配列番号１０
９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含むか；（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号９０
〜９２から選択されるアミノ酸配列を含むか；または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方である
、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法もまた提供される。
ヒト化抗α２インテグリン抗体が、配列番号１８７を含む重鎖および配列番号１８８を
含む軽鎖を含む、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法もまた提供される。
ヒト化抗α２インテグリン抗体が、配列番号１７４または配列番号１７６を含む重鎖お
よび配列番号１７８を含む軽鎖を含む、ヒト化抗α２インテグリン抗体を含む上述の方法
もまた提供される。
ある実施形態において、上述の抗α２インテグリン抗体は、ヒトα２インテグリンのＩ
ドメインを認識する。
ある実施形態において、上述の抗α２インテグリン抗体は、α２β１インテグリンに結
合する。
ある実施形態において、上述の抗α２インテグリン抗体は、α２インテグリンのエピト
ープに結合し、そのエピトープは：
（ａ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の１９２位または配列
番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の４０位に対応する
Ｌｙｓ残基；
（ｂ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の２２５位または配列
番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の７３位に対応する
Ａｓｎ残基；
（ｃ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の２４１位または配列
番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の８９位に対応する
Ｇｌｎ残基；
（ｄ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の２４５位または配列
番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の９３位に対応する
Ｔｙｒ残基；
（ｅ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の３１７位または配列
番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の１６５位に対応す
るＡｒｇ残基；
（ｆ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の３１８位または配列
番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の１６６位に対応す
るＡｓｎ残基；または
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）の任意の組み合わせ
を含む。
ある実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は、完全長抗体である。
ある実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は、抗原結合フラグメン
トである。
ある実施形態において、上述のヒト化抗α２インテグリン抗体は、α２β１インテグリ
ンリガンドへのα２またはα２β１インテグリンの結合を阻害する。
ある実施形態において、上述のα２β１インテグリンリガンドは、コラーゲン、ラミニ
ン、エコーウイルス−１、デコリン、Ｅ−カドヘリン、マトリックスメタロプロテアーゼ
Ｉ（ＭＭＰ−Ｉ）、エンドレペリン、コレクチンおよびＣ１ｑ補体タンパク質から選択さ
れる。
実施形態において、上述の方法は、（ａ）血小板活性化、（ｂ）血小板凝集、（ｃ）循
環血小板数の減少、（ｄ）出血性合併症、または（ｅ）（ａ）〜（ｄ）の任意の組み合わ
せを伴わない。
ある実施形態において、上述の抗α２インテグリン抗体は、ヒトα２β１インテグリン
またはそのＩドメインへの、配列番号１９のＵＬ領域および配列番号２１のＶＨ領域を含
む抗体の結合を競合的に（ｃｏｍｐｅｔｉｖｅｌｙ）阻害する。
好ましい抗体は、ヒトα２β１インテグリンのＩドメインに結合する。特に、好ましい
抗体は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）、特に、コラーゲンおよびラミニンの少なくとも
一方または両方への、細胞のα２依存性接着を阻止することができる。本明細書中でＴＭ
Ｃ−２２０６と呼ばれる抗体に基づく抗体を含むヒト化抗体が提供される。ヒトα２β１
インテグリンに高度に特異的である抗α２インテグリン抗体が提供され、その抗体の投与
は、出血性合併症または細胞の活性化に起因する合併症などの望まれない作用を伴わない
。これらの抗体の結合特異性（例えば、エピトープ特異性）は、予想外の非出血性プロフ
ァイルに関連する。
本発明において使用されるヒト化抗α２β１インテグリン抗体は、ＨＣＤＲ１（ＧＦＳ
ＬＴＮＹＧＩＨ；配列番号１）および／またはＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡ
ＬＭＳ；配列番号２）および／またはＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ；配列番号３
）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有し得る。このヒト化抗α２β１インテグリン抗
体は、ＬＣＤＲ１（ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ；配列番号４またはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ；配
列番号１１２）および／またはＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および／また
はＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ；配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を
有し得る。ある特定の実施形態において、ヒト化抗α２β１インテグリン抗体は、ＨＣＤ
Ｒ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ；配列番号１）および／またはＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦ
ＴＮＹＮＳＡＬＭＳ；配列番号２）および／またはＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ
；配列番号３）を含む重鎖、ならびにＬＣＤＲ１（ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ；配列番号４ま
たはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ；配列番号１１２）および／またはＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡ
Ｓ；配列番号５）および／またはＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ；配列番号６）のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。他の実施形態において、上記抗体は、そのような
ＣＤＲの１つ以上のアミノ酸配列バリアントを含み、そのバリアントは、ＣＤＲ残基内の
もしくはＣＤＲ残基に近接する１つ以上のアミノ酸挿入、および／またはＣＤＲ残基内の
もしくはＣＤＲ残基に近接する欠失、および／またはＣＤＲ残基の置換（置換は、そのよ
うなバリアントを生成するために好ましいタイプのアミノ酸変更を含む）を含む。
図１：免疫不全雌ＢＡＬＢ／ｃヌード（ｎｕ／ｎｕ）無胸腺マウスにおけるＡｓＰＣ−１ヒト膵癌異種移植片の成長に対するＧＢＲ５００の作用。 図２：ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウスにおけるＨＴ２９ヒト結腸癌腫異種移植片に対するＧＢＲ５００の作用。 図３：ヒト細胞株におけるＣＤ４９ｂおよびＧＡＰＤＨの発現のウエスタンブロット解析。 図４：染色されたＨＴ１０８０細胞株の共焦点顕微鏡像。 図５：染色されたＢｘＰＣ−３細胞株の共焦点顕微鏡像。 図６：染色されたＭＩＡ ＰａＣａ２細胞株の共焦点顕微鏡像。 図７：染色されたＨＴ−２９細胞株の共焦点顕微鏡像。 図８：染色されたＳＷ４８０細胞株の共焦点顕微鏡像。 図９：ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウスにおけるＡ５４９非小細胞肺癌異種移植片に対するＧＢＲ５００の作用。 図１０Ａおよび１０Ｂ：雄および雌サルに対するＧＢＲ５００ １００ｍｇ用量群の濃度曲線。
発明の詳細な説明
本発明は、ヒト化抗体を含む、ヒトアルファ２（α２）インテグリンと特異的に反応性
である抗体を用いて、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌およ
び肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅ
ｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含む）、膵癌、神経膠芽
腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮
内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の
癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性
度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾
胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球
性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リン
パ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む
）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル
白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに
母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラ
ノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択
される癌を処置する方法を提供する。そのヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域（ＦＷ
）、および非ヒト抗体由来、代表的には、ヒトα２インテグリンと特異的に反応性である
マウス抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有し得る。好ましい実施形態において、Ｃ
ＤＲ領域の１つ以上は、ＢＨＡ２．１ハイブリドーマ（Ｈａｎｇａｎら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ．，５６（１３）：３１４２−９（１９９６））によって分泌されたマウス抗体に
由来するか、または基づく。この抗体は、ヒトおよびラットα２β１インテグリンに結合
するが、マウスの対応物には結合しない。ＢＨＡ２．１ハイブリドーマによってそのよう
に産生された抗体は、本明細書中でＴＭＣ−２２０６と呼ばれ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ（現在
はＭｉｌｌｉｐｏｒｅの一部、カタログ番号ＭＡＢ１９９８）から商業的に入手可能であ
る。本明細書中に開示される抗体と類似の結合特性を有する抗体および類似の機能性を有
する抗体（または他のアンタゴニスト）を用いて、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、
非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（
ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器
癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌
、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、
肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、なら
びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（
ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性
ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病
変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレーム
マクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血
病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖
障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような
浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類
表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置する方法がさらに提供される。好ましい抗α
２インテグリン抗体としては、（ａ）α２インテグリンのＩドメインに結合する抗体、（
ｂ）α２インテグリンの機能（例えば、コラーゲンまたはラミニンへの結合）を阻害する
抗体、（ｃ）血小板活性化を誘導せずに休止（ｒｅｓｔｉｎｇ）血小板上のα２インテグ
リンに結合する抗体、および（ｄ）ＴＭＣ−２２０６の結合エピトープを認識する抗体（
例えば、α２インテグリンへの結合についてＴＭＣ−２２０６と競合する抗体）が挙げら
れる。そのような抗体は、リガンド結合部位に対して競合せずに、標的α２インテグリン
分子の不活性な立体配座または閉じた立体配座に優先的に結合し得る。α２β１インテグ
リンの閉じた立体配座に優先的に結合するおよび／またはリガンド結合部位に対して競合
せずにα２β１インテグリンに結合する（例えば、リガンド模倣物でない）本明細書中に
記載されるような抗α２インテグリン抗体の長所としては、処置される被験体において、
潜在的な血小板活性化、血小板凝集、循環血小板数の減少および／または出血性合併症を
予防することが挙げられる。
「出血性合併症」は、本明細書中で使用されるとき、抗α２インテグリン抗体の治療的
な使用を制限する、血小板血栓応答（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｒｅｓ
ｐｏｎｓｅｓ）、血小板減少症、凝固までの長い時間、長い出血時間および血液損失を含
む、血中濃度および生理学に対する任意の有害作用のことを指す。
α２β１インテグリンは、アルファインテグリンのファミリー由来のα２インテグリン
サブユニット（例えば、ヒトα２のＤＮＡ配列については配列番号７およびタンパク質配
列については配列番号８を参照のこと）、およびベータインテグリンのファミリー由来の
β１インテグリンサブユニット（例えば、ヒトβ１のＤＮＡ配列については配列番号９お
よびタンパク質配列については配列番号１０を参照のこと）から構成される分子であり、
哺乳動物を含む任意の被験体由来のものであり得るが、好ましくは、ヒト由来である。α
２β１インテグリンは、任意の天然の起源から精製され得るか、または合成的に生成され
得る（例えば、組換えＤＮＡ技術を使用することによって）。α２インテグリンおよびβ
１インテグリンに対する核酸コード配列は、それぞれ、Ｔａｋａｄａ ａｎｄ Ｈｅｍｌ
ｅｒ Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１０９（１）：３９７−４０７（１９８９；ＧｅｎＢａ
ｎｋ寄託Ｘ１７０３３；その後、エントリーＮＭ００２２０３に更新）およびＡｒｇｒａ
ｖｅｓ，Ｗ．Ｓ，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．Ｓｅｐ １０５（３）：１１８３−９０（１
９８７；Ｇｅｎｂａｎｋ寄託Ｘ０７９７９．１および選択的スプライスされたバリアント
である関連配列）に記載されている。
α２β１インテグリン分子の「Ｉ」ドメインとは、α２サブユニット内のα２β１イン
テグリン分子の領域のことを指し、例えば、Ｋａｍａｔａら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６９：９６５９−９６６３（１９９４）；Ｅｍｓｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２７２：２８５１２（１９９７）およびＣｅｌｌ １０１：４７（２０００）に記載され
ている。α２インテグリンのヒトＩドメインのアミノ酸配列は、配列番号１１として記載
されている（例えば、配列番号１０７もまた参照のこと）。α２インテグリンのＩドメイ
ンは、リガンド結合を支持する所与の二価カチオンについての必要条件および特異性を有
する、ＭＩＤＡＳタイプのリガンド結合部位（金属イオン依存性接着部位）を含む。ラッ
トにおけるα２インテグリンのＩドメインに対するアミノ酸配列は、配列番号９３（例え
ば、配列番号１１３もまた参照のこと）として示されており、マウスにおけるアミノ酸配
列は、配列番号９４（例えば、配列番号１１４もまた参照のこと）として示されている。
カニクイザルおよびアカゲザルのＩドメイン配列は、全血由来の白血球画分からクローン
化され、それぞれ、カニクイザルに対しては配列番号１０３（ＤＮＡ）、配列番号１７１
（アミノ酸）およびアカゲザルに対しては配列番号１０４（ＤＮＡ）、配列番号１７２（
アミノ酸）に提供されている。
ＴＭＣ−２２０６（ＢＨＡ２．１）エピトープとは、ＴＭＣ−２２０６抗体が結合する
ヒトα２インテグリンのＩドメインの領域のことを指す。このエピトープは、結合性に寄
与するアミノ酸残基Ｋ４０、Ｎ７３、Ｑ８９、Ｙ９３、Ｒ１６５およびＮ１６６、ならび
に必要に応じて、ＷＯ２００７／０５６８５８に記載されているようなα２インテグリン
Ｉドメインの他のアミノ酸残基を含む１２７アミノ酸の領域に及ぶ。
用語「癌」とは、代表的には、制御されていない細胞成長を特徴とする、哺乳動物にお
ける生理学的状態のことを指すか、または記載する。良性および悪性の癌、転移性の（ｍ
ｅｔａｔｓｔａｔｉｃ）癌ならびにアデノーマまたは腺癌は、この定義に含まれる。「腫
瘍」とは、悪性であるか良性であるかを問わずすべての新生物の細胞成長および増殖、な
らびにすべての前癌性および癌性の細胞および組織のことを指す。「良性の腫瘍」または
「良性の癌」とは、発生部位に局在したままであり、かつ浸潤する能力、侵入する能力、
または遠位の部位に転移する能力を有しない、腫瘍のことを指す。「悪性腫瘍」とは、そ
の周囲の他の組織に侵入し、損傷する腫瘍のことを指す。癌の処置とは、本明細書中に記
載される抗α２インテグリン抗体の治療的な使用と、予防的または防止的な使用の両方の
ことを指す。処置の必要な者としては、すでに癌と診断された者ならびにその障害の発生
が予防されるべきかまたは遅延されるべき者が挙げられる。
癌は、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上
皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃
癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌
、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫また
は子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌
、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非
ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；
中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高
悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤ
Ｓ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；慢性リン
パ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性
骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連
する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮
腫および多発性骨髄腫からなる群より選択され得る。好ましくは本明細書中に記載される
抗α２インテグリン抗体を用いて処置される癌は、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞
肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉
腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、頭頸
部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫および多発性骨髄腫からなる群より選択される。本発
明の処置によって改められる（ａｍｅｎｄｉｂｌｅ）癌性状態には、転移性癌が含まれる
。したがって、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ
）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫
、頭頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、多発性骨髄腫、転移性結腸直腸癌および転移
性乳癌からなる群より選択される癌が、なおもさらに好ましい。非小細胞肺癌、膵癌、神
経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、
中皮腫、線維肉腫、骨肉腫、類表皮癌腫、転移性結腸直腸癌、転移性前立腺癌および転移
性乳癌からなる群より選択される癌が、特に好ましい。非小細胞肺癌、膵癌、神経膠芽腫
、肝臓癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、中皮腫、線維肉腫、転移性結
腸直腸癌、転移性前立腺癌および転移性乳癌からなる群より選択される癌が、より特に好
ましい。膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、線維肉腫、転移性結腸直腸癌
および転移性乳癌からなる群より選択される癌が、なおもより特に好ましい。膵癌、乳癌
、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および線維肉腫からなる群より選択される癌が、最
も特に好ましい。膵癌、乳癌または転移性乳癌が、最も好ましく、膵癌が特に好ましい。
本明細書中で言及されるような「乳癌」には、乳腺腺癌が含まれる。本発明の方法は、血
管新生が起きた腫瘍の処置に特に適している。
被験体（処置の目的のものを含む）とは、ヒト、家庭内の動物および家畜、ならびに動
物園の動物、競技用動物またはペット動物（例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなど）を含
む哺乳動物として分類される任意の動物のことを指す。好ましくは、被験体は、ヒトであ
る。
抗体または免疫グロブリンという用語は、最も広い意味において使用され、所望の生物
学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリク
ローナル抗体、多重特異性抗体、および抗体フラグメントを包含する。抗体フラグメント
は、完全長抗体の一部、一般に、その抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメ
ントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント、ダイア
ボディ、鎖状抗体、一本鎖抗体分子、単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ科由来のもの）
、サメＮＡＲ単一ドメイン抗体、ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗
体が挙げられる。抗体フラグメントは、ＣＤＲまたは抗原結合ドメイン（ＶＨ領域（ＶＨ
、ＶＨ−ＶＨ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ）、ＰｅｐＢｏｄｉｅｓＴＭ、抗
体−Ｔ細胞エピトープ融合物（Ｔｒｏｙｂｏｄｉｅｓ）またはペプチボディ（Ｐｅｐｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ）を含むがこれらに限定されない）を含む結合部分のことも指し得る。「抗
体フラグメント」と「抗原結合フラグメント」とは、同じ意味を有し、本明細書中で等し
く使用される。
モノクローナル抗体とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体のことを指し、
例えば、その集団を構成する個別の抗体は、微量存在し得る天然に存在するあり得る変異
を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対
して産生されたものである。さらに、代表的には抗原上の様々な決定基（例えば、エピト
ープ）に対して産生された様々な抗体を含む従来の（例えば、ポリクローナル）抗体調製
物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の少なくとも単一の決定基に対して産
生される。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な集団の抗体から得られていると
いう抗体の特徴を指し、その抗体が任意の特定の方法によって産生される必要があると解
釈されるべきでない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５（１９７５）によった初めて報告されたハイブリドーマ法によって作製さ
れてもよいし、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと
）によって作製されてもよい。モノクローナル抗体は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎ
ａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載されているような手法を用いて、フ
ァージ抗体ライブラリーからも単離され得る。モノクローナル抗体は、米国特許第６，０
２５，１５５号および同第６，０７７，６７７号、ならびに米国特許出願公開番号２００
２／０１６０９７０および同２００３／００８３２９３に記載されている手法を用いても
単離され得る（例えば、Ｌｉｎｄｅｎｂａｕｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ ３２（２１）：０１７７（２００４）もまた参照のこと）。
モノクローナル抗体は、所望の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一
部が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体
における対応する配列と同一であるかまたは相同であり、残りの鎖が、別の種に由来する
抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一
であるかまたは相同である、キメラ抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントを含み
得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびマウス−ヒトキメラ抗体につい
ては、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６
８５１−６８５５（１９８４）を参照のこと）。
超可変領域とは、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基のことを指す。超可変領域は
、相補性決定領域由来またはＣＤＲ由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインにお
ける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）ならびに重
鎖可変ドメインにおける３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（
Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ
Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅ
ｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、および／または超可変ループ由来の残基（例えば
、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜
９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２
）および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。フレームワーク残基またはＦＲ残
基は、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。本明細書中に記載される抗体につ
いて、ＣＤＲ領域およびフレームワーク領域は、重鎖のＣＤＲ１が、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭの定義によって残基２６〜３５に及ぶと定義されることを除いて
、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに基づいて同定される。Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｐｅｏｐｌｅ．ｃｒｙｓｔ
．ｃｃｋ．ａｃ．ｕｋ／〜ｕｂｃ０７ｓ／）（Ｍａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，９２６８−９２７２（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３，１２１−１５３（１９９１）；Ｐｅｄｅｒｓ
ｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，１，１２６（１９９２）；およびＲｅｅｓら、Ｓ
ｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐ
ｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ
，１４１−１７２．（１９９６））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲナンバリングシステムとＣｈ
ｏｔｈｉａ超可変領域ナンバリングシステムとを組み合わせて、ＣＤＲを定義している。
非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配
列を含むキメラ抗体であり得る。ヒト化抗体は、ほとんどの部分について、ヒト免疫グロ
ブリン（レシピエント抗体またはアクセプター抗体）であり、その中で、レシピエントの
超可変領域残基は、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（
例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）由来の超可変領域残基によって置
き換えられている。さらに、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基
の個別の残基または群は、対応する非ヒト残基によって置き換えられてもよい。さらに、
ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見られない残基を含み得る。これら
の改変が行われることにより、抗体の性能がさらに洗練される。一般に、ヒト化抗体は、
少なくとも１つ、代表的には２つの可変領域またはドメインの実質的にすべてを含み、こ
こで、超可変ループのすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ル
ープに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリン配列のＦ
Ｒ領域である。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（例えば、Ｆ
ｃ）、代表的には、ヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部も含
む（例えば、Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１
００２９（１９８９）およびＦｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．２２４：４８７（１９９２）を参照のこと）。
一本鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ抗体フラグメントは、抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域または
ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み得、ここで、これらのドメインは、単一のポリペ
プチド鎖に存在する。通常、Ｆｖポリペプチドはさらに、ｓｃＦｖが抗原結合のために所
望の構造を形成することができるポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインと
の間に含む（概説として、例えば、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏ
ｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ
Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６
９−３１５（１９９４）中のＰｌｕｃｋｔｈｕｎを参照のこと）。
ダイアボディとは、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体フラグメントのことを指し
、そのフラグメントは、同じポリペプチド鎖において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続
された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖の上のそれらの２つのド
メイン間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、それら
のドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対形成をせざるを得ず、２つの抗原結合部位
を形成する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；お
よびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６
４４４−６４４８（１９９３）により十分に記載されている。
鎖状抗体とは、Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１
０６２（１９９５）に記載されているような抗体などの抗体のことを指す。簡潔には、こ
れらの抗体は、抗原結合領域の対を形成するタンデム型のＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１
−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む。鎖状抗体は、二重特異的または単一特異的であり得る。
単離された抗体とは、同定された抗体、ならびにその天然の環境の成分から分離された
および／または回収された抗体のことを指す。その天然の環境の夾雑物成分は、その抗体
に対する診断的または治療的な使用を干渉し得る材料であり、それらとしては、酵素、ホ
ルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が挙げられ得る。好ましい実
施形態において、その抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって測定されるとき、９５重量％
超、最も好ましくは、９９重量％超の抗体にまで、（２）スピニングカップ配列決定装置
を使用することによってＮ末端または内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るの
に十分な程度にまで、または（３）クマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いて、還
元条件下または非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一なまで、精製される。単離
された抗体は、その抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないことを理由に
、組換え細胞内の原位置における抗体を含む。しかしながら、通常、単離された抗体は、
少なくとも１つの精製工程によって調製される。
エピトープタグ化抗体とは、本発明の抗体がエピトープタグに融合されている抗体のこ
とを指す。そのエピトープタグポリペプチドは、抗体を生成し得るエピトープを提供する
のに十分な残基を有するが、抗α２β１インテグリン抗体の活性を干渉しないように十分
短い残基を有する。エピトープタグは、好ましくは、それに対する抗体が他のエピトープ
と実質的に交差反応しない、十分に独特のものである。適当なタグポリペプチドは、一般
に、少なくとも６アミノ酸残基、通常、約８〜５０アミノ酸残基（好ましくは、約９〜３
０残基）を有する。例としては、ｆｌｕ ＨＡタグポリペプチドおよびその抗体１２ＣＡ
５（Ｆｉｅｌｄら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２１５９−２１６５（１９８８）
）；ｃ−ｍｙｃタグならびにそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７および
９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５（１２）：３６１０−３６
１６（１９８５））；ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよび
その抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ３（６）：
５４７−５５３（１９９０））が挙げられる。ある特定の実施形態において、エピトープ
タグは、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のインビ
ボ血清半減期の延長に関与するそのＩｇＧ分子のＦｃ領域のエピトープであるサルベージ
レセプター（ｓａｌｖａｇｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）結合エピトープである。
細胞傷害性薬剤とは、細胞の機能を阻害するかもしくは妨げる、および／または細胞の
破壊を引き起こす、物質のことを指す。これは、放射性同位体（例えば、１３１Ｉ、１２
５Ｉ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅ）、化学療法剤およびトキシン（例えば、細菌、真菌、植
物または動物起源の酵素的に活性なトキシンまたはそのフラグメント）を含み得る。非細
胞傷害性薬剤とは、細胞の機能を阻害しないかもしくは妨げない、および／または細胞の
破壊を引き起こさない、物質のことを指す。非細胞傷害性薬剤は、細胞傷害性になるよう
に活性化され得る薬剤を含み得る。非細胞傷害性薬剤としては、ビーズ、リポソーム、マ
トリックスまたは粒子が挙げられ得る（例えば、本明細書中で参考として援用される、米
国特許公報２００３／００２８０７１および同２００３／００３２９９５を参照のこと）
。そのような薬剤は、本明細書中に記載されるような抗α２β１インテグリン抗体と結合
体化され得るか、結合され得るか、連結され得るか、または会合され得る。
化学療法剤とは、癌の処置において有用な化合物のことを指す。化学療法剤の例として
は、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド
（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、
ブスルファン、サイトキシン（Ｃｙｔｏｘｉｎ）、タキソール、メトトレキサート、シス
プラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミ
ド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン（Ｖｉｎｃｒｅｉｓｔｉｎｅ
）、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン（
Ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エ
スペラミシン（Ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎｓ）（米国特許第４，６７５，１８７号を参照の
こと）、メルファランおよび他の関連するナイトロジェンマスタードが挙げられるがこれ
らに限定されない。
プロドラッグとは、腫瘍細胞に対して親薬物よりも細胞傷害性でない薬学的に活性な物
質の前駆体または誘導体の形態のことを指し、酵素的に活性化されるかまたはより活性な
親の形態に変換されることができる（例えば、Ｗｉｌｍａｎ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｉｎ
Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ
Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ Ｍｅｅｔｉｎ
ｇ Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａら、“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ，”Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（ｅｄ．
），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照のこと。プロ
ドラッグとしては、より活性な細胞傷害性の遊離薬物に変換され得る、ホスフェート含有
プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート含有プロドラッグ、ペ
プチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸改変プロドラッグ、グリコシル化されたプロドラ
ッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、必要に応じて置換されるフェノキシアセトアミド
含有プロドラッグまたは必要に応じて置換されるフェニルアセトアミド含有プロドラッグ
、５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるが、
これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｅ、ｂｕｔ ａｒｅ ｍｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔ
ｏ）。プロドラッグ型に誘導体化され得る細胞傷害性薬物の例は、上に記載された化学療
法剤であり得る。
標識とは、抗体に直接または間接的に結合体化されるまたは結合される検出可能な化合
物または組成物のことを指す。標識は、それ自体によって検出可能であり得るか（例えば
、放射性同位体標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合、検出可能な基質化合物ま
たは組成物の化学変化を触媒し得る。
固相とは、本発明の抗体が接着し得る非水性マトリックスのことを指す。本明細書中で
包含される固相の例としては、ガラス（例えば、コントロールドポアガラス（ｃｏｎｔｒ
ｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ））、多糖類（例えば、アガロース）、ポリアクリル
アミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコールおよびシリコーンから部分的または全体的
に形成されるものが挙げられる。ある特定の実施形態において、固相は、文脈に応じて、
アッセイプレートのウェルを含み得る；他では、固相は、精製カラム（例えば、アフィニ
ティークロマトグラフィカラム）である。この用語は、米国特許第４，２７５，１４９号
に記載されているものなどの、別々の粒子の不連続な固相も含む。
用語「２週間ごとに１回の用量（ｄｏｓｉｓ）レジメン」、「２週間ごとに１回の投薬
」および「２週間ごとに１回の投与」は、本明細書中で使用されるとき、治療的な目的（
例えば、癌の処置）を達成するために物質（例えば、抗α２インテグリン抗体）を被験体
に投与する時間経過のことを指す。２週間ごとに１回の投薬レジメンは、毎週の投薬レジ
メンを含むと意図されない。好ましくは、その物質は、９〜１９日ごと、より好ましくは
、１１〜１７日ごと、なおもより好ましくは、１３〜１５日ごと、最も好ましくは、１４
日ごとに投与される。
リポソームとは、哺乳動物への薬物（例えば、本発明の抗体、および必要に応じて、化
学療法剤）の送達のために有用な、様々なタイプの脂質、リン脂質および／または界面活
性物質から構成される小さいベシクルのことを指す。リポソームの構成要素は、通常、生
物学的膜の脂質配置と類似の二重層を形成するように配置されている。
単離された核酸分子とは、同定され、抗体核酸の天然の起源において通常関連する少な
くとも１つの夾雑核酸分子から分離された核酸分子のことを指す。単離された核酸分子は
、天然に見られる形態または境遇以外のものである。ゆえに、単離された核酸分子は、天
然の細胞に存在するときの核酸分子と区別される。しかしながら、単離された核酸分子は
、例えば、その核酸分子が、天然の細胞の染色体位置と異なる染色体位置に存在する場合
、その抗体を通常発現する細胞に含まれる核酸分子を含む。
ウイルスベクターとは、ウイルスの感染または形質導入を介して核酸（例えば、ＤＮＡ
またはＲＮＡ）を細胞に移動させるためのビヒクルのことを指す。ウイルスベクターの例
としては、レトロウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルスおよびバキュロウイルス
が挙げられる。
非ウイルスベクターとは、非ウイルス的な方法（例えば、エレクトロポレーション、注
入およびカチオン試薬媒介性のトランスフェクション）によって細胞に送達される核酸ビ
ヒクル（例えば、ＣＡＮ、プラスミドまたは染色体）のことを指す。
発現調節配列とは、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に
必要なＤＮＡ配列のことを指す。原核生物に適した調節配列としては、例えば、プロモー
ター、必要に応じてオペレーター配列およびリボソーム結合部位が挙げられる。真核細胞
は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用すると知られてい
る。
核酸は、それが、別の核酸配列と機能的な関係性に置かれるとき、作動可能に連結され
る。例えば、プレ配列または分泌リーダーに対するＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌
に関与するプレタンパク質として発現される場合、そのポリペプチドに対するＤＮＡに作
動可能に連結されるか；プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に
影響する場合、そのコード配列に作動可能に連結されるか；またはリボソーム結合部位は
、それが、翻訳を促進するように位置している場合、コード配列に作動可能に連結される
。一般に、作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、連続的であり、分泌リーダーの場合、連
続的であり、かつ、読み枠（ｒｅａｄｉｎｇ ｐｈａｓｅ）内である。しかしながら、エ
ンハンサーは、連続的でなくてもよい。連結は、好都合な制限酵素認識部位におけるライ
ゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオ
チドアダプターまたはリンカーが、従来の慣例に従って使用される。
細胞と細胞株と細胞培養物とは、交換可能に使用されることが多く、そのように指摘さ
れるもののすべてが、子孫を含む。形質転換体および形質転換された細胞（例えば、核酸
、ベクター、ウイルスなどのトランスフェクション、形質転換または形質導入によって得
られるもの）には、対象の初代細胞（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｕｂｊｅｃｔ ｃｅｌｌ）およ
び継代数を問わずそれから得られる培養物が含まれる。また、すべての子孫が、故意また
は偶然の変異に起因して、正確に同じＤＮＡ含有量ではないかもしれないことが理解され
る。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングされるとき、同じ機能または生物
学的活性を有する変異体の子孫が、含められる。異なる名称が意図される場合、それは、
文脈から明らかになる。
本明細書中に記載されるようなヒト化抗体は、ヒトアクセプター抗体分子に由来する可
変領域フレームワーク、ドナーマウス抗体由来の超可変配列またはＣＤＲ配列、および存
在する場合、ヒト配列に由来する定常領域を有する抗体を含む。
マウスモノクローナル抗体クローンＢＨＡ２．１（Ｈａｎｇａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．５６：３１４２−３１４９（１９９６））の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の両方に
由来するＣＤＲを含む、本発明において使用されるヒト化抗体が、構築された。抗体を構
築するための好ましい出発物質は、ヒトα２インテグリンに対する機能阻止抗体であり、
結合および活性が、標的化されたα２インテグリン内のインタクトなＩドメインの存在に
依存する、ＢＨＡ２．１ハイブリドーマによって分泌される抗体などの抗α２インテグリ
ン抗体（例えば、ＴＭＣ−２２０６）である。α２インテグリン分子の不活性な立体配座
に結合し、そして／またはリガンド模倣物として作用しない抗体を含むＴＭＣ−２２０６
（またはＢＨＡ２．１）のエピトープ特異性を有するヒト化抗体が、好ましい。ＴＭＣ−
２２０６（またはＢＨＡ２．１）のエピトープ特異性を有するヒト化抗体が好ましいが、
それらは、インビボにおける治療用量を含む投与濃度で、白血球上と血小板上の両方に存
在するα２β１インテグリンと相互作用し、血小板活性化を引き起こさず、コラーゲン上
での活性化血小板の凝集を損ない、出血に対する最小の作用を有するかもしくは出血に対
する作用を有さず、そして／または出血性合併症を伴わない。
潜在的なアクセプター分子可変領域とマウス抗体の軽鎖可変領域との間の相同性の考慮
すべき点に基づいて軽鎖可変領域に対するヒトアクセプター分子が選択された、抗体が構
築され得る。生殖系列の候補のヒトアクセプター分子は、潜在的な抗原性を低下させるた
めに好ましい。生殖系列データベースは、重鎖ＦＷ３領域の末端を通じて読まれ、部分的
にＣＤＲ３配列に読まれる抗体配列で構成されている。ＦＷ４領域を選択する場合、選択
された生殖系列分子が由来している成熟抗体配列のデータベースを検索することが好まし
く、また、組換え抗体分子において使用するために適度に相同のＦＷ４領域を選択するこ
とが好ましい。ヒトアクセプター分子は、好ましくは、マウスドナー分子と同じ軽鎖クラ
スおよびマウスドナー分子の可変領域と同じ基準の構造クラスから選択される。軽鎖可変
領域についてヒトアクセプター分子を選択するために二次的に考慮することは、マウスド
ナー分子とヒトアクセプター分子とのＣＤＲの長さの相同性を含む。ヒトアクセプター抗
体分子は、好ましくは、Ｖ−ＢＡＳＥデータベースに対する相同性検索によって選択され
、Ｋａｂａｔデータベースおよび公的なＮＣＢＩデータベースなどの他のデータベースも
同様に使用してよい。ＴＭＣ−２２０６と同じまたは類似のエピトープ特異性および／ま
たは機能特性を有するヒト化抗α２インテグリン抗体について、好ましい軽鎖ヒトアクセ
プター分子は、ＦＷ１〜３領域に対する生殖系列抗体配列Ａ１４を含む配列番号３７、お
よび成熟カッパー１軽鎖の通常のＦＷ−４（例えば、軽鎖配列ＡＡＢ２４１３２（ＮＣＢ
Ｉエントリーｇｉ／２５９５９６／ｇｂ／ＡＡＢ２４１３２）であるＦＷ４に対する配列
ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３８）である。
潜在的なアクセプター分子可変領域とマウス抗体の重鎖可変領域との間の相同性の考慮
すべき点に基づいて重鎖可変領域に対するヒトアクセプター分子が選択された、抗体が構
築され得る。生殖系列の候補ヒトアクセプター分子は、潜在的な抗原性を低下させるため
に好ましい。生殖系列データベースは、重鎖ＦＷ３領域の末端を通じて読まれ、部分的に
ＣＤＲ３配列に読まれる抗体配列で構成されている。ＦＷ４領域を選択する場合、選択さ
れた生殖系列分子が由来している成熟抗体配列のデータベースを検索することが好ましく
、また、組換え抗体分子において使用するために適度に相同のＦＷ４領域を選択すること
が好ましい。ヒトアクセプター分子は、好ましくは、マウスドナー分子と同じ重鎖クラス
およびマウスドナー分子の可変領域と同じ基準の構造クラスから選択される。重鎖可変領
域についてヒトアクセプター分子を選択するために二次的に考慮することは、マウスドナ
ー分子とヒトアクセプター分子とのＣＤＲの長さの相同性を含む。ヒトアクセプター抗体
分子は、好ましくは、Ｖ−ＢＡＳＥデータベースに対する相同性検索によって選択される
が、Ｋａｂａｔデータベースおよび公的なＮＣＢＩデータベースなどの他のデータベース
も同様に使用してよい。ＴＭＣ−２２０６と同じまたは類似のエピトープ特異性および／
または機能特性を有する抗α２インテグリン抗体の場合、好ましい重鎖アクセプター分子
は、ＦＷ１〜３領域（配列番号１２）に対する生殖系列抗体配列４−５９を有する配列番
号３９、およびＦＷ４領域についての４−５９生殖系列配列に由来する成熟抗体である抗
体ＣＡＡ４８１０４．１（ＮＣＢＩエントリー，ｇｉ／３３５８３／ｅｍｂ／ＣＡＡ４８
１０４．１）（配列番号１３）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇ
ｏｖ）である。
非ヒトα２インテグリン抗体をヒト化するための方法は、当業者に公知であり、例えば
、ＷＯ２００７／０５６８５８に記載されている。抗α２インテグリン抗体をヒト化する
ために、免疫化からの調製によることまたは商業的に入手可能な抗体を購入することなど
によって、非ヒト抗体出発物質を得る。本発明において使用される抗体を作製するための
例示的な手法は、ＷＯ２００７／０５６８５８に記載されている。
抗体を作製するために使用されるα２β１インテグリン抗原は、例えば、可溶型のα２
β１インテグリン、またはα２β１インテグリンの他のフラグメント（例えば、ヒトα２
インテグリンＩドメイン（配列番号１１）を含むα２β１インテグリンフラグメント；例
えば、配列番号１０７もまた参照のこと）であり得る。抗体を作製するために有用な、α
２インテグリン配列（例えば、配列番号８におけるようなヒトα２インテグリン）に基づ
くα２インテグリンの他の形態が、当業者に明らかである。
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連性のある抗原の、アジュバントありまたはな
しでの複数の皮下（ｓｃ）、静脈内（ｉｖ）または腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物に
おいて産生される。二官能性の薬剤または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルス
ルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスク
シンイミド（リシン残基を介するとき）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ
２またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ１は、異なるアルキル基である）を用いて、免疫
される種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニ
ン、血清アルブミン、ウシチログロブリンまたはダイズトリプシンインヒビター）に、関
連性のある抗原を結合体化することが有用であり得る。
抗原または免疫原性の結合体（例えば、ウサギの場合１００μｇまたはマウスの場合５
μｇ）を３体積のフロイント完全アジュバントと混合し、その溶液を複数の部位の皮内に
注射することによって、その抗原、免疫原性の結合体または誘導体に対して動物が免疫さ
れ得る。１ヶ月後、フロイント完全アジュバント中のその抗原または結合体（例えば、免
疫するために使用した最初の量の１／５〜１／１０）を、複数の部位における皮下注射に
よってその動物に追加免疫する。７〜１４日後、その動物から採血し、抗体価について血
清をアッセイする。力価がプラトーに達するまで、動物に追加免疫する。好ましくは、結
合体の免疫の場合、同じ抗原であるが、異なるタンパク質に結合体化され、そして／また
は異なる架橋試薬を介して結合体化された結合体を用いて動物に追加免疫する。結合体は
、タンパク質融合物として組換え細胞培養物においても作製され得る。また、ミョウバン
などの凝集剤も、免疫応答を高めるために適切に使用される。
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）
によって初めて報告されたハイブリドーマ法を用いて作製されてもよいし、組換えＤＮＡ
法（例えば、米国特許第６，２０４，０２３号）によって作製されてもよい。モノクロー
ナル抗体は、米国特許第６，０２５，１５５号および同第６，０７７，６７７号ならびに
米国特許出願公開番号２００２／０１６０９７０および同２００３／００８３２９３に記
載されている手法を用いても作製され得る（例えば、Ｌｉｎｄｅｎｂａｕｍら、Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（２１）：０１７７（２００４）もまた参
照のこと）。
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物（例えば、ラット、ハムスタ
ーまたはサル）を免疫する（例えば、本明細書の上に記載したように）ことにより、免疫
するために使用された抗原に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することがで
きるリンパ球が誘発される。あるいは、インビトロにおいてリンパ球を免疫してもよい。
次いで、ポリエチレングリコールなどの適当な融合剤を用いて、リンパ球をミエローマ細
胞と融合することにより、ハイブリドーマ細胞を形成する（例えば、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）を参照のこと
）。
このように調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは、融合していない親ミエロー
マ細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含む適当な培養液中に播種し、生育
する。例えば、親ミエローマ細胞が、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフ
ェラーゼ酵素（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、そのハイブリドーマに対
する培養液は、代表的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる物質である、ヒポキサン
チン、アミノプテリンおよびチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。
好ましいミエローマ細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した
高レベルの抗体産生を支持する細胞であり、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である。これ
らのうち、好ましいミエローマ細胞株は、マウスのミエローマ系統（例えば、Ｓａｌｋ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能なＭＯＰ−２１およびＭ．Ｃ．−１１マウス
腫瘍に由来するもの、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２またはＸ６３
−Ａｇ８−６５３細胞）である。ヒトミエローマ細胞株およびマウス−ヒトヘテロミエロ
ーマ細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体を作製するために報告されている（例えば、
Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ
ら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋ
ｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。
ハイブリドーマ細胞を生育している培養液を、その抗原に対するモノクローナル抗体の
産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノク
ローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオ
イムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ））によって測定
される。
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって測定され得る。
所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定
された後、そのクローンは、限界希釈法によってサブクローン化され得、標準的な方法に
よって生育され得る（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐ
ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的に適した培養液としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭ
またはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、そのハイブリドーマ細胞は、腹水
腫瘍として動物においてインビボで生育されてもよい。
そのサブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精
製法（例えば、プロテインＡクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、ヒド
ロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析および／またはアフィニティ
ークロマトグラフィを含む）によって培養液、腹水または血清から適切に分離される。
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、そのモノク
ローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリ
ゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。ハ
イブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として働く。そのＤＮＡは、い
ったん単離されると、発現ベクターの中に入れられ得、次いで、それを、免疫グロブリン
タンパク質を別途産生しない細胞を含む宿主細胞（例えば、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞
、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはミエローマ細胞）にトランスフェク
トすることにより、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体が合成される。抗体の組
換え作製は、以下でさらに詳細に記載される。
ある特定の実施形態において、特にヒト化抗体の結合親和性または他の生物学的特性を
改善する場合、ヒト化抗体のアミノ酸配列バリアントを作製することが望ましい場合があ
る。
ヒト化抗α２β１インテグリン抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切なヌクレオチド
の変更をヒト化抗α２β１インテグリン抗体ＤＮＡに導入することまたはペプチド合成に
よって調製される。そのようなバリアントとしては、例えば、抗α２インテグリン抗体Ｔ
ＭＣ−２２０６について示されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１９および２１に示さ
れるような可変領域配列に由来するかまたはその可変領域配列に基づくアミノ酸配列）内
の残基からの欠失および／またはその残基への挿入および／またはその残基の置換が挙げ
られる。最終的な構築物が所望の特性を有するという条件で、その最終的な構築物に達す
るようにアミノ酸の欠失、挿入および置換の任意の組み合わせが行われる。このアミノ酸
の変更は、ヒト化抗α２インテグリン抗体の翻訳後プロセスも変更し得る（例えば、グリ
コシル化部位の数または位置の変更）。
ヒトまたはヒト様（例えば、「ヒト化」）の抗体を作製するために使用される方法がい
くつか存在する。抗体をヒト化するアプローチは、長年にわたって変化してきた。１つの
アプローチは、ヒト定常領域に融合されたマウス可変領域、いわゆる、マウス−ヒトＦｃ
キメラを作製することだった（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５（１９８４）；米国特許第５，８０７
，７１５号を参照のこと）。別のアプローチは、ＣＤＲが超可変の性質（Ｋａｂａｔら、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）），Ｋａｂａｔ，Ａ
ｄｖ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ．３２：１−７５（１９７８））および基準の構造（Ｃ
ｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（４）：９０１−１７
（１９８７）；Ｌａｚａｋａｎｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７２：９２９（１９９７
）に基づいて容易に同定され得るという事実、および例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒ
ｅ ３２１（６０６９）：５２２−５（１９８６）によって示されているように単にヒト
フレームワーク（アクセプターフレームワークと呼ばれる）に非ヒトＣＤＲ領域（ドナー
ＣＤＲと呼ばれる）を移植することによってＣＤＲがヒト化され得るという事実を利用し
た；（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；米国特許第６，５４８，６４０号を参
照のこと）。６つのＣＤＲループは、群れを成して提供され、結晶学的解析に基づくと、
ＣＤＲに近接するかまたは重鎖と軽鎖との界面におけるいわゆる「Ｖｅｒｎｉｅｒ」ゾー
ン内の重要なフレームワーク残基は、容易に同定され得る（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａ
ｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（４）：９０１−１７（１９８７）；Ｃ
ｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６（３）：６５１−６３（１９８５）；Ｃ
ｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２（６２５２）：８７７−８３（１９８９）を参照
のこと）。これらの残基は、マウス残基に復帰変異することにより、その６つのＣＤＲの
正しい相対的な向きを回復し得る（例えば、Ｖｅｒｈｏｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３
９（４８４７）：１５３４−６（１９８８）；Ｒｅｉｃｈｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３
２（６１６２）：３２３−７（１９８８）；Ｔｅｍｐｅｓｔら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ（ＮＹ）９（３）：２６６−７１（１９９１）を参照のこと）。可変領域は、マウス
とヒトとの間に比較的高い相同性を有するファミリーに分類され得るので（例えば、Ｐａ
ｓｃｕａｌ ａｎｄ Ｃａｐｒａ Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４９：１−７４（１９９１
）に概説されている）、これらの初期の研究は、ヒトアクセプター分子として使用するた
めの、目的のマウス抗体と最も高い相同性を有するヒト生殖系列配列を選択することによ
って、移植された抗体では親和性が失われる可能性が最小になり得ることも示唆した（例
えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｖｅｒｈｏｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９
（４８４７）：１５３４−６（１９８８）を参照のこと）。
所与のタイプのＣＤＲの基準の構造の正しい提示に影響するフレームワーク間のファミ
リー相同性および構造的関係性が報告されている（例えば、Ａｌ−Ｌａｚａｋａｎｉら、
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３（４）：９２７−４８（１９９７）およびこの中の参考文
献を参照のこと）。好ましくは、最も適合するヒトまたは生殖系列の配列が、選択される
。抗体生殖系列配列の利用可能なデータベースを用いることにより、所与のマウスの重鎖
および軽鎖のファミリーサブタイプが判定され得、そのヒトサブファミリー内のヒトアク
セプターフレームワークとして有用な最も適合する配列が同定され得る。好ましくは、ド
ナーフレームワークとアクセプターフレームワークとの線状のアミノ酸相同性と、ＣＤＲ
の基準の構造との両方が、考慮される。
ヒト化抗α２インテグリン抗体において置換され得る例示的な重鎖残基としては、以下
のフレームワーク残基番号：Ｈ３７、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ７８およびＨ
９１（Ｋａｂａｔナンバリングシステム）の任意の１つ以上が挙げられる。好ましくは、
これらのフレームワーク残基のうちの少なくとも４つが、置換される。本明細書中で例示
されるようなヒト化抗α２インテグリン抗体における重鎖に対して特に好ましい置換のセ
ットは、Ｈ３７、Ｈ７１、Ｈ７３およびＨ７８である。同様に、軽鎖における残基もまた
、置換され得る。置換に対する例示的な軽鎖残基としては、以下の残基番号：Ｌ１、Ｌ２
、Ｌ４、Ｌ６、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４９およびＬ７１の任意の１つ以上が挙げられる。好
ましくは、これらのフレームワーク残基のうちの少なくとも３つが、置換される。本明細
書中で例示されるようなヒト化抗α２インテグリン抗体における軽鎖に対して特に好まし
い置換のセットは、Ｌ２、Ｌ４６およびＬ４９である。
突然変異誘発にとって好ましい位置である、ヒト化抗α２インテグリン抗体のある特定
の残基または領域を同定するために有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異誘発
」と呼ばれる（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２４４：１０８１−１０８５（１９８９）を参照のこと）。ここで、ある残基または標的
残基の群が、特定され（例えば、荷電残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓお
よびｇｌｕ））、中性のアミノ酸または負に帯電したアミノ酸（好ましくは、アラニンま
たはポリアラニン）によって置き換えられることにより、それらのアミノ酸とα２β１イ
ンテグリン抗原との相互作用が影響される。次いで、置換部位にさらなるまたは他のバリ
アントを導入することによって、置換に対する機能感受性を示すアミノ酸の位置が洗練さ
れる。したがって、アミノ酸配列バリエーションを導入するための部位は予め決定してい
るが、変異の性質自体は、予め決定している必要はない。例えば、所与の部位における変
異の性能を解析するために、アラニンスキャニングまたはランダム突然変異誘発が、標的
コドンまたは標的領域において行われ、発現されるヒト化抗α２インテグリン抗体バリア
ントが、所望の活性についてスクリーニングされる。
アミノ酸配列の挿入には、１残基から１００またはそれ以上の残基を含むポリペプチド
までの長さに及ぶアミノ末端および／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一また
は複数のアミノ酸残基の配列内の挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端のメチ
オニル残基を有するヒト化抗α２インテグリン抗体またはエピトープタグに融合された抗
体が挙げられる。ヒト化抗α２インテグリン抗体分子の他の挿入バリアントは、ヒト化抗
α２インテグリン抗体のＮ末端またはＣ末端への、抗体の血清半減期を延長する酵素また
はポリペプチドの融合を含む（下記を参照のこと）。
別のタイプのバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、
ヒト化抗α２インテグリン抗体分子内に、除去されてその位置に異なる残基が挿入された
、少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換の突然変異誘発に対して最も興味深い部
位は、超可変ループを含むが、フレームワークの変更も企図される。抗原結合に関わる超
可変領域残基またはフレームワーク残基は、一般に、比較的保存的な様式で置換される。
そのような保存的置換は、下記の「好ましい置換」という見出しの下に示されている。そ
のような置換が、生物学的活性を変化させる場合、「例示的な置換」と称されるかまたは
アミノ酸クラスに関して下記でさらに記載されるような、より実質的な変更が導入され、
その生成物がスクリーニングされる。
本抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）例えば、シートまたはらせん状の立体
配座のような、置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分
子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の大きさを維持することに対してその改変の
影響が著しく異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共
通の側鎖特性に基づいて群に分けられる：（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ
、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；（２）中性の親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（３）酸性
：ａｓｐ、ｇｌｕ；（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；（５）鎖
配向に影響する残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換すること
を伴う。また、ヒト化抗α２インテグリン抗体の適切な立体配座（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉ
ｏｎ）の維持に関わらない任意のシステイン残基は、通常、セリンと置換されることによ
り、その分子の酸化的な安定性を改善し得、異所の架橋を妨げ得る。逆に、システイン結
合が、その抗体に付加されることにより、その安定性が改善され得る（特に、その抗体が
、Ｆｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）。
本抗体の別のタイプのアミノ酸バリアントは、本抗体のもとのグリコシル化パターンを
変更するものである。変更とは、本抗体に見られる１つ以上の炭水化物部分を欠失するこ
と、および／または本抗体に存在しない１つ以上のグリコシル化部位を付加することを意
味する。
抗体のグリコシル化は、代表的には、Ｎ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型とは、
アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付着のことを指す。トリペプチド配列のアス
パラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（Ｘは、プロリン以外の任意
のアミノ酸である）が、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付着のための認識配
列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在す
ることにより、潜在的なグリコシル化部位がもたらされる。Ｏ結合型グリコシル化とは、
ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの、糖であるＮ−アセチ
ルガラクトサミン（ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトースまたはキシ
ロースのうちの１つの付着のことを指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキ
シリジンも使用してもよい。
本抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、アミノ酸配列が、上に記載したトリ
ペプチド配列の１つ以上を含むかまたは欠くように、そのアミノ酸配列を変更することに
よって便利良く達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。この変更は、もとの抗
体の配列への、１つ以上のセリンまたはトレオニン残基の付加、それらによる置換、また
はそれらの欠失によっても行われ得る（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。ヒト化抗α
２インテグリン抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該分野で公知
の種々の方法によって調製される。これらの方法としては、天然の起源からの単離（天然
に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）、またはヒト化抗α２インテグリン抗体の以
前に調製されたバリアントまたは非バリアントバージョンの、オリゴヌクレオチド媒介性
の（または部位特異的な）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発もしくはカセット突然変異
誘発による調製が挙げられるが、これらに限定されない。
通常、ヒト化抗α２インテグリン抗体のアミノ酸配列バリアントは、重鎖または軽鎖（
例えば、それぞれ配列番号２１または配列番号１９におけるような可変領域配列）のもと
のヒト化抗体アミノ酸配列と、少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、
より好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましく
は、少なくとも９５％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８
６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％、９８％、９９％および１００％を含む）のアミノ酸配列同一性を有するア
ミノ酸配列を有する。この配列に関する同一性または相同性は、本明細書中では、配列を
アラインメントし、必要であれば、最大パーセント配列同一性を達成するためにギャップ
を導入した後、配列同一性の一部としていかなる保存的置換（上に記載したような）も考
慮せずに、ヒト化抗α２インテグリン残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基のパー
センテージとして定義される。本抗体の配列に対するＮ末端、Ｃ末端または内部の伸長、
欠失または挿入は、配列同一性または相同性に影響すると解釈されないものとする。した
がって、配列同一性は、２つのポリペプチドのアミノ酸の位置における類似度を比較する
ために通常使用される標準的な方法によって測定され得る。ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡ
などのコンピュータプログラムを使用して、２つのポリペプチドが、それぞれのアミノ酸
の最適なマッチングについてアラインメントされる（一方または両方の配列の完全長にわ
たって、または一方または両方の配列の所定の部分にわたって）。これらのプログラムは
、デフォルトのオープニングペナルティ（ｏｐｅｎｉｎｇ ｐｅｎａｌｔｙ）およびデフ
ォルトのギャップペナルティ（ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ）を提供し、ＰＡＭ２５０（標準
的なスコア行列；Ｄａｙｈｏｆｆら、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎ
ｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｏｌ ５，ｓｕｐｐ．３（１９７８）を参照のこ
と）などのスコア行列が、このコンピュータプログラムとともに使用され得る。例えば、
同一性パーセントは：完全一致の総数に１００を掛けて、一致した範囲内のより長い配列
の長さと、２つの配列をアラインメントするためにより長い配列に導入されたギャップの
数との合計で割ることとして計算され得る。
ヒト化抗α２インテグリン抗体において望ましいと本明細書中で特定される特徴を有す
る抗体は、本明細書中に記載されるような方法によってスクリーニングされる。例えば、
好ましい特徴および機能性について候補抗α２インテグリン抗体をスクリーニングするた
めの方法が提供され、その方法は、目的の抗体によって結合されるα２β１インテグリン
上のエピトープに結合する抗体（例えば、α２β１インテグリンへのＴＭＣ−２２０６抗
体の結合と競合するか、その結合を阻害するか、またはその結合を阻止する抗体）につい
てスクリーニングすることを包含する。クロスブロッキングアッセイが、行われ得、それ
は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ
Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されている。さらにまたはあるいは、例えば
、Ｃｈａｍｐｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４（１９９５）
に記載されているようなエピトープマッピングが、その抗体が目的のエピトープに結合す
るか否かを判定するために行われ得る。
同様に、固定化されたα２β１インテグリンを使用して、競合アッセイにおいてＫｉ値
を測定することによって相対的な結合能が測定され得る。例えば、蛍光標識されたＥｕ−
ＴＭＣ−２２０６が、例えば、上に記載されたアッセイ系と同様のアッセイ系を用いて、
様々な濃度の標識されていない候補抗体の存在下において使用される。特定のインキュベ
ーション時間の後、結合したＥｕ−ＴＭＣ−２２０６の量が測定される。Ｐｒｉｓｍソフ
トウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｉｎｃ．ＣＡ）を用いて、阻害曲線を「１部位競合」モデ
ルに当てはめることにより、ＩＣ５０値が得られ、ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆの式
（Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９−１０８（１９７３）
）を用いてＫｉが計算される。
例えば、ＷＯ２００７／０５６８５８の実施例２（候補抗体が、ＴＭＣ−２２０６およ
びＴＭＣ−２２０６に由来するマウス−ヒトキメラ抗体と比較して、α２β１インテグリ
ン媒介性の細胞接着を阻止する能力について試験されている）に記載されているような条
件下で有益な結合特性を有するヒト化抗α２インテグリン抗体を調製し、同定し、そして
／または選択することが望ましい。例えば、ヒトα２インテグリンおよび内因性ハムスタ
ーβ１を発現しているＣＨＯ細胞（Ｓｙｍｉｎｇｔｏｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１
２０（２）：５２３−３５（１９９３））を調製し、ＣＦＳＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｐｒ
ｏｂｅｓ，ＯＲ）で標識する。標識された細胞を調製し、細胞濃度を調整し；細胞を、使
用するまで暗黒下に維持する。コラーゲンコートされたプレート（ラット尾コラーゲンＩ
型；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を調製し、段階希釈された抗体溶液の各々をそのコ
ラーゲンプレートに加える。次いで、標識された細胞をそのウェルに加え、そのプレート
をインキュベートする。洗浄後、細胞を溶解し、蛍光強度（励起，４８５ｎｍ；発光，５
３５ｎｍ）を読み出す。各抗体の抑制活性を計算する。
さらに、固定化されたα２β１インテグリンリガンドに対する候補抗体の結合定数が、
ＷＯ２００７／０５６８５８の実施例２に記載されているように計算され得る。９６ウェ
ルマイクロタイタープレート内のウェルが、血小板α２β１インテグリンでコートされ（
ＧＴＩ Ｉｎｃ．，ＷＩによってヒト血小板α２β１でカスタムコートされ）、次いで、
ブロッキングされる。例えば、α２インテグリン抗原に対するＴＭＣ−２２０６の親和性
を測定するために、蛍光標識されたＴＭＣ−２２０６またはアイソタイプコントロールＩ
ｇＧ抗体が使用される。Ｅｕ−ＴＭＣ−２２０６またはＥｕ−アイソタイプコントロール
ＩｇＧを含む蛍光標識された抗体が、ブロッキングされたα２β１インテグリンマイクロ
タイタープレートに適用される。密閉されたプレートをインキュベートすることにより、
抗体抗原相互作用が平衡に達した後、各ウェルから、遊離（未結合）標識の測定用の増強
溶液が入った新しいウェルにサンプルを移す。その増強溶液は、結合した標識を測定する
ために空にされたウェルにも加えられる。抗α２インテグリン抗体のＫｄ値をＳｃａｔｃ
ｈａｒｄ解析によって計算する。ＴＭＣ−２２０６誘導体（ＴＭＣ−２２０６に由来する
かまたはそれに基づくヒト化抗体を含む）の相対的な親和性は、競合アッセイにおいてＫ
ｉ値を測定することによって測定され得る。例えば、競合アッセイのために、様々な濃度
の、ＴＭＣ−２２０６に由来するかまたはそれに基づく未標識抗α２インテグリン抗体（
ＴＭＣ−２２０６またはキメラ（ヒト化を含む）抗体を含む）またはアイソタイプコント
ロールＩｇＧ抗体の存在下において、Ｅｕ標識されたＴＭＣ−２２０６が、α２β１でコ
ートされたウェルに加えられる。平衡に達するインキュベート時間の後、ウェルを洗浄し
、結合した標識抗体のレベルを、各ウェル内の保持されているＥｕ標識として測定する。
Ｋｉ値は、上に記載されたような直接的な結合実験によってＥｕ−ＴＭＣ−２２０６抗体
について得られたＫｄ値を用いてＥＣ５０値から得ることができる。
ある特定の実施形態において、ヒト化抗α２インテグリン抗体は、抗体フラグメントで
ある。抗体フラグメントを生成するための様々な手法が開発されている。伝統的には、こ
れらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク分解性消化を介して得られた（例え
ば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂ
ｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒ
ｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかしなが
ら、これらのフラグメントは、細菌などの組換え宿主細胞によって直接生成され得る（例
えば、Ｂｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０（４８５５）：１０４１−１０４３（１
９８８）；米国特許第６，２０４，０２３号を参照のこと。例えば、Ｆａｂ’−ＳＨフラ
グメントは、大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合されることにより、Ｆ（
ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ
’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体フラグメント
を生成するための他の手法が、当業者に明らかである。
いくつかの実施形態において、少なくとも２つの異なるエピトープに対して結合特異性
を有する多重特異性（例えば、二重特異性）ヒト化抗α２インテグリン抗体を生成するこ
とが望ましい場合がある。例示的な二重特異性抗体（例えば、２つの異なる結合アームを
有する抗体）は、α２β１インテグリンタンパク質の異なる２つのエピトープに結合し得
る。あるいは、抗α２インテグリンアームは、表面にα２β１インテグリンが結合した細
胞に、細胞の防御メカニズムの焦点を当てるために、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、Ｃ
Ｄ２またはＣＤ３）などの白血球上の引き金分子またはＩｇＧに対するＦｃレセプター（
ＦｃγＲ）（例えば、ＦｃγＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγ
ＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体は、表面
にα２β１インテグリンが結合している細胞に細胞傷害性薬剤を局在化させるために使用
され得る。これらの抗体は、α２β１インテグリン結合アーム、および細胞傷害性薬剤（
例えば、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、サポリン、抗インターフェロンアルファ、ビンカ
アルカロイド、リシンＡ鎖または放射性同位体ハプテン）に結合するアームを有する。二
重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異
性抗体）として調製され得る。
二重特異性抗体を作製するための別のアプローチによれば、組換え細胞培養物から回収
されるヘテロ二量体のパーセンテージを最大にするように抗体分子対の間の界面が操作さ
れ得る。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。
この方法では、１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きい側鎖（例えば、チロシンま
たはトリプトファン）で置き換えられる。大きなアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖
（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置き換えることによって、大きい側鎖と同一サ
イズまたはそれより小さいサイズの代償的な空洞が、第２の抗体の界面上に作られる。こ
れにより、ホモ二量体などの不必要な他の最終生成物に対してヘテロ二量体の収量を増加
させるためのメカニズムがもたらされる（例えば、ＷＯ９６／２７０１１を参照のこと）
。
二重特異性抗体には、相互に連結された抗体またはヘテロ結合体抗体が含まれる。例え
ば、ヘテロ結合体における抗体の一方が、アビジンに結合され得、他方が、ビオチンに結
合され得る。ヘテロ結合体抗体は、任意の都合のよい架橋法を用いて作製され得る。適当
な架橋剤は、当該分野で周知であり、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号にいくつ
かの架橋法とともに開示されている。
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製するための手法もまた、その文献に記載さ
れている。二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製され得る。例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ
ら（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５））には、インタクトな抗体がタンパク分
解性に切断されることによりＦ（ａｂ’）２フラグメントが生成される手順が記載されて
いる。近接の（ｖｉｎｃａｌ）ジチオールを安定化させ、分子間のジスルフィド形成を妨
げるために、これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤の亜ヒ酸ナトリウムの存在下に
おいて還元される。次いで、生成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエー
ト（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つが、メルカプ
トエチルアミンによる還元によってＦａｂ’−チオールに再度変換され、等モル量の他の
Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されることにより、二重特異性抗体が形成される。生成さ
れた二重特異性抗体は、酵素の選択的な固定化のための薬剤として使用され得る。
大腸菌から回収されたＦａｂ’−ＳＨフラグメントが、化学的に結合されることにより
、二重特異性抗体が形成され得る。例えば、Ｓｈａｌａｂｙら（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１
７５：２１７−２２５（１９９２））には、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ
’）２分子の作製が記載されている。各Ｆａｂ’フラグメントが、大腸菌から別々に分泌
される場合、それらがインビトロにおいて定方向の化学結合に供されることにより、二重
特異性抗体が形成された。このように形成された二重特異性抗体は、ＨＥＲ２レセプター
を過剰発現している細胞および正常ヒトＴ細胞に結合することができ、ならびにヒト乳腺
腫瘍の標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を引き起こすことができた。
組換え細胞培養物から直接、二重特異性抗体フラグメントを作製し、単離するための様
々な手法もまた報告されている。例えば、ロイシンジッパーを用いて二重特異性抗体が作
製されている（例えば、Ｋｏｓｔｇｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１
５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロ
イシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって、異なる２つの抗体のＦａｂ’部分に連
結された。この抗体のホモ二量体は、ヒンジ領域で還元されることによりモノマーが形成
され、次いで、再度酸化されることにより、抗体のヘテロ二量体が形成された。この方法
は、抗体のヘテロ二量体を生成するためにも利用され得る。ダイアボディ技術（例えば、
Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４
４−６４４８（１９９３）を参照のこと）は、二重特異性抗体フラグメントを作製するた
めの代替メカニズムを提供した。このフラグメントは、同じ鎖の上の２つのドメイン間で
の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変領域（ＶＬ）に接続された
重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメイ
ンは、別のフラグメントの相補的なＶＬおよびＶＨドメインと対形成せざるを得ず、それ
によって２つの抗原結合部位が形成される。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）二量体
を使用することによる二重特異性抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーも
また報告されている（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８
（１９９４）を参照のこと）。あるいは、二重特異性抗体は、例えば、Ｚａｐａｔａら、
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）に記載されてい
るように生成された鎖状抗体であり得る。
２より高い結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が、調製され得
る（例えば、Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照のこと
）。
ヒト化抗α２インテグリン抗体の他の改変が企図される。例えば、癌を処置する際の抗
体の有効性を増強するためまたは低下させるために、例えば、エフェクター機能に関して
抗体を改変することが望ましい場合がある。Ｆｃ領域にシステイン残基が導入されること
により、その領域において鎖間のジスルフィド結合の形成が可能になり得る。このように
生成されたホモ二量体抗体は、改善された内部移行能ならびに／または高い補体媒介性細
胞殺滅（ＣＭＣ）および／もしくは抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し得る（例え
ば、Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およ
びＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を
参照のこと）。抗腫瘍活性が高いホモ二量体抗体はまた、ヘテロ二官能性架橋剤（例えば
、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：２５６０−２５６５（１９９
３）に記載されているものを参照のこと）を用いて調製され得る。あるいは、二重のＦｃ
領域を有し、それにより高いＣＭＣ能および／またはＡＤＣＣ能を有し得る抗体が、操作
され得る（例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ
ｉｇｎ ３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと）。
ある部分、例えば、分子、組成物、複合体または薬剤、例えば、細胞傷害性薬剤（例え
ば、化学療法剤、トキシン（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性
なトキシンまたはそのフラグメント）または放射性同位体（例えば、放射性結合体））に
結合体化された、抗α２インテグリンを発現している細胞、組織または器官にその薬剤を
標的化するためのヒト化抗α２インテグリン抗体を含む免疫結合体。そのような免疫複合
体は、その部分または薬剤を、α２またはα２β１インテグリンの存在を特徴とする特定
の作用部位に標的化する方法において使用され得る。
そのような免疫結合体の生成において有用な化学療法剤は、上に記載された。使用され
得る酵素的に活性なトキシンおよびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテ
リア毒素の非結合性活性（ｎｏｎｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｅ）フラグメント、外毒素
Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ
鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏ
ｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ
ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏ
ｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（
ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニ
ン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒ
ｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（
ｅｎｏｍｙｃｉｎ）またはトリコテシン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）が挙げられる。
種々の放射性核種が、放射性結合体化された抗アルファ２インテグリン抗体を生成するた
めに利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙまたは１８６Ｒｅが
挙げられる。
本抗体と細胞傷害性薬剤との結合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤（例
えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤ
Ｐ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミ
ド酸ジメチルＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アル
デヒド類（例えば、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ））、ビス−ア
ジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾ
ニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、
ジイソシアナート（例えば、トリレン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアナート）ま
たはビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）
）を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように調製され得る。炭素−１４で標
識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ
−ＤＴＰＡ）は、本抗体に対する放射性核種の結合体化のための例示的なキレート剤であ
る（例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと）。
別の実施形態において、本抗体は、α２インテグリンを発現している細胞、組織または
器官を予め標的化する際に利用するために、レセプター（例えば、ストレプトアビジン）
に結合体化され得、ここで、その抗体レセプター結合体は、患者に投与された後、清澄化
剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を用いて循環から未結合の結合体が除去され、次い
で、ある薬剤、例えば、細胞傷害性薬剤（例えば、放射性核種）に結合体化されたリガン
ド（例えば、アビジン）が投与される。
本明細書中に開示される抗α２インテグリン抗体は、免疫リポソームとしても製剤化さ
れ得る。その抗体を含むリポソームは、当該分野で公知の方法（例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８（１９８５）；Ｈ
ｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０（１９８
０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載
されている方法）によって調製される。循環時間が延長されたリポソームは、米国特許第
５，０１３，５５６号に開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体
化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発
法によって作製され得る。リポソームは、規定のポアサイズのフィルターを通って押し出
されることにより、所望の直径を有するリポソームが得られる。抗α２インテグリン抗体
のＦａｂ’フラグメントは、ジスルフィド交換反応を介して、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されているようなリポソー
ムに結合体化され得る。必要に応じて、化学療法剤（例えば、ドキソルビシン）がリポソ
ーム内に含められる（例えば、Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８１（１９）：１４８４（１９８９）を参照のこと）。
ヒト化抗α２インテグリン抗体は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、例
えば、ＷＯ８１／０１１４５を参照のこと）を活性薬物（例えば、ＷＯ８８／０７３７８
および米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと）に変換するプロドラッグ活性化酵
素にその抗体を結合体化することによって、抗体特異的酵素プロドラッグ療法（Ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｅｎｚｙｍｅ Ｐｒｏｄｒｕｇ Ｔｈｅｒａｐｙ）（ＡＤ
ＥＰＴ）においても使用され得る。ＡＤＥＰＴにとって有用な免疫複合体の酵素の構成要
素には、プロドラッグをより活性な形態に変換するための方法において、そのプロドラッ
グに対して作用することができる任意の酵素が含まれる。有用な酵素としては、ホスフェ
ート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアルカリホスファターゼ；スル
フェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアリールスルファターゼ；
無毒性の５−フルオロシトシンを抗癌薬である５−フルオロウラシルに変換するために有
用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用
なプロテアーゼ（例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボ
キシペプチダーゼおよびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ））；Ｄ−アミノ酸
置換基を含むプロドラッグを変換するために有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ
；グリコシル化されたプロドラッグを遊離薬物に変換するために有用な炭水化物切断酵素
（例えば、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ）；β−ラクタムで誘導体化さ
れた薬物を遊離薬物に変換するために有用なβ−ラクタマーゼ；およびフェノキシアセチ
ル基またはフェニルアセチル基を有するアミン窒素において誘導体化された薬物を遊離薬
物に変換するために有用なそれぞれペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダー
ゼなどのペニシリンアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、アブ
ザイムとしても知られる、酵素活性を有する抗体が、本発明のプロドラッグを活性な遊離
薬物に変換するために使用され得る（例えば、Ｍａｓｓｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ ３２８：４
５７−４５８（１９８７）を参照のこと）。α２インテグリンを発現している細胞、組織
または器官にアブザイムを送達するためのものを含む抗体−アブザイム結合体は、本明細
書中に記載されるように調製され得る。
上で述べられたヘテロ二官能性架橋試薬の使用を含む当該分野で周知の手法によって抗
α２インテグリン抗体に酵素が共有結合され得る。あるいは、酵素の少なくとも機能的に
活性な部分に連結された抗α２インテグリン抗体の少なくとも抗原結合領域を含む融合タ
ンパク質が、当該分野で周知の組換えＤＮＡ法を用いて構築され得る（例えば、Ｎｅｕｂ
ｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照のこと）。
本発明のある特定の実施形態において、例えば、組織または腫瘍への浸透を高めるため
に、インタクトな抗体ではなく抗体フラグメントを使用することが望ましい場合がある。
また、血清半減期を延長するために、抗体フラグメントを改変することも望ましい場合が
ある。これは、例えば、抗体フラグメント内の適切な領域を変異すること、またはエピト
ープをペプチドタグに組み込み、次いでそれを例えばＤＮＡ合成もしくはペプチド合成に
よって抗体フラグメントの末端または中央に融合することによって、サルベージレセプタ
ー結合エピトープを抗体フラグメントに組み込むことによって達成され得る（例えば、Ｗ
Ｏ９６／３２４７８を参照のこと）。
ヒト化抗α２インテグリン抗体の共有結合性の改変は、例えば、化学合成またはその抗
体の酵素的切断もしくは化学的切断によって行われ得る。他のタイプの抗体の共有結合性
の改変は、選択された側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端の残基と反応することができる有
機誘導体化剤と抗体の標的化されたアミノ酸残基を反応させることによって、その分子に
導入される。最も一般的には、例えばシステイニル残基を、クロロ酢酸またはクロロアセ
トアミドなどのα−ハロアセテート（および対応するアミン）と反応させることにより、
カルボキシメチル誘導体またはカルボキシアミドメチル誘導体が得られる。システイニル
残基は、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオ
ン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジ
ルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾエート、
２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノールまたはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキ
サ−１，３−ジアゾールとの反応によっても誘導体化される。例えば、ヒスチジル残基は
、ピロ炭酸ジエチルがヒスチジル側鎖に比較的特異的であるので、ｐＨ５．５〜７．０に
おけるこの薬剤との反応によって誘導体化される。パラ−ブロモフェナシルブロミドもま
た有用である；その反応は、好ましくは、ｐＨ６．０の０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中
で行われる。例えば、リシニル残基およびアミノ末端残基を、コハク酸無水物または他の
カルボン酸無水物と反応させる。これらの薬剤を用いた誘導体化は、リシニル残基の電荷
を逆転させる作用を有する。α−アミノ含有残基を誘導体化するための他の適当な試薬と
しては、イミドエステル、例えば、ピコリンイミド酸メチル、ピリドキサールリン酸、ピ
リドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿
素、２，４−ペンタンジオンおよびグリオキシレートとのトランスアミナーゼ触媒反応が
挙げられる。例えば、アルギニル残基は、１つまたはいくつかの従来の試薬、とりわけ、
フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオンおよび
ニンヒドリンとの反応によって改変される。グアニジン官能基のｐＫａが高いので、アル
ギニン残基の誘導体化には、その反応がアルカリ性条件において行われることが必要であ
る。さらに、これらの試薬は、リジンの基ならびにアルギニンイプシロン−アミノ基と反
応し得る。例えば、チロシル残基は、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタ
ンとの反応によってチロシル残基に分光標識を導入する際に特定の目的でとりわけ改変さ
れる。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミジゾールおよびテトラニトロメタンを使用する
ことにより、それぞれＯ−アセチルチロシル種および３−ニトロ誘導体が形成される。チ
ロシル残基は、１２５Ｉまたは１３１Ｉを用いてヨウ素化されることにより、ラジオイム
ノアッセイにおいて使用するための標識されたタンパク質が調製される。カルボキシル側
基、例えば、アスパルチルまたはグルタミルは、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホ
リニル−４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−
ジメチルペンチル）カルボジイミドなどのカルボジイミド類（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）（
ＲおよびＲ’は、異なるアルキル基である）との反応によって選択的に改変される。さら
に、アスパルチル残基およびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によって、
アスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換される。グルタミニル残基およびアス
パラギニル残基は、それぞれ対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基に脱アミド
化されることが多い。これらの残基は、中性または塩基性条件下において脱アミド化され
る。これらの残基の脱アミド化された形態は、本発明の範囲内に入る。他の改変としては
、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリル残基またはトレオニル残基のヒドロキ
シル基のリン酸化、リジン側鎖、アルギニン側鎖およびヒスチジン側鎖のα−アミノ基の
メチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎ
ｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．
，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６（１９８３））、Ｎ末端アミンのアセ
チル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
別のタイプの共有結合性の改変は、グリコシドを本抗体に化学的または酵素的に結合す
ることを含む。これらの手順は、ＮまたはＯ結合型グリコシル化に対するグリコシル化能
を有する宿主細胞における抗体の生成を必要としない点において有利である。用いられる
結合様式に応じて、糖が、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル
基、（ｃ）遊離スルフヒドリル基（例えば、システインの遊離スルフヒドリル基）、（ｄ
）遊離ヒドロキシル基（例えば、セリン、トレオニンまたはヒドロキシプロリンの遊離ヒ
ドロキシル基）、（ｅ）芳香族の残基（例えば、フェニルアラニン、チロシンまたはトリ
プトファンの芳香族の残基）、または（ｆ）グルタミンのアミド基に付着され得る（例え
ば、ＷＯ８７／０５３３０；Ａｐｌｉｎ ａｎｄ Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）を参照のこと）。
本抗体上に存在する任意の炭水化物部分の除去は、例えば、化学的または酵素的に達成
され得る。化学的脱グリコシル化には、本抗体が、トリフルオロメタンスルホン酸化合物
または等価な化合物に曝露される必要がある。この処理によって、抗体はインタクトなま
まで、連結糖（ｌｉｎｋｉｎｇ ｓｕｇａｒ）（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−ア
セチルガラクトサミン）を除くほとんどまたはすべての糖が切断される（例えば、Ｈａｋ
ｉｍｕｄｄｉｎら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２（１９８
７）；Ｅｄｇｅら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１（１９８１）を参照の
こと）。抗体上の炭水化物部分の酵素的切断は、種々のエンドグリコシダーゼおよびエキ
ソグリコシダーゼを使用することによって達成され得る（例えば、Ｔｈｏｔａｋｕｒａら
、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０（１９８７）を参照のこと）。
本抗体の別のタイプの共有結合性の改変は、本抗体を種々の非タンパク質性ポリマー（
例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレ
ン）のうちの１つに連結することを含む（例えば、米国特許第４，６４０，８３５号；同
第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第
４，７９１，１９２号または同第４，１７９，３３７号を参照のこと）。
本抗体を組換え的に生成するために、本抗体をコードする核酸が、単離され、さらなる
クローニング（そのＤＮＡの増幅）または発現のために、複製可能なベクターに挿入され
る。本抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、本抗体の重鎖および軽
鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使
用することによって）、容易に単離され、配列決定される。多くのベクターが利用可能で
ある。そのベクターの構成要素としては、一般に、以下のもの：シグナル配列、複製起点
、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーターおよび転写終結配
列のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
好ましくは、シグナル配列または成熟タンパク質もしくは成熟ポリペプチドのＮ末端に
特異的な切断部位を有する他のポリペプチドである異種ポリペプチドを有する融合ポリペ
プチドとしての抗体を含む抗α２インテグリン抗体が、組換え的に生成され得る。選択さ
れる異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識され、処理される（例えば
、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。真核生物のシグナル配列（例
えば、免疫グロブリンシグナル配列）を認識せず、処理しない原核生物の宿主細胞の場合
、そのシグナル配列は、例えば、ペクチン酸リアーゼ（ｐｅｃｔａｔｅ ｌｙｓａｓｅ）
（例えば、ｐｅｌＢ）、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐまたは熱安定
性エンテロトキシンＩＩリーダーをはじめとした原核生物のシグナル配列に置換される。
酵母分泌の場合、例えば、酵母インベルターゼリーダー、因子リーダー（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓおよびＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ α−因子リーダーを含む）または酸ホ
スファターゼリーダーを含む酵母シグナル配列、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼ
リーダー、またはＷＯ９０／１３６４６に記載されているシグナルが、利用され得る。哺
乳動物細胞における発現では、哺乳動物のシグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、
例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが、利用可能であり、利用され得る。そのような前駆
体領域（例えば、シグナル配列）に対するＤＮＡは、抗α２インテグリン抗体をコードす
るＤＮＡに読み枠でライゲーションされる。
発現ベクターとクローニングベクターの両方が、１つ以上の選択された宿主細胞におけ
る複製を可能にする核酸配列を含む。一般に、クローニングベクターでは、この配列は、
そのベクターが宿主の染色体ＤＮＡとは無関係に複製することを可能にする配列であり、
複製開始点または自律複製配列を含む。種々の細菌、酵母およびウイルスに対するそのよ
うな配列が周知である。例えば、ほとんどのグラム陰性菌に対しては、プラスミドｐＢＲ
３２２由来の複製起点が適当であり、酵母に対しては、２μプラスミド起点が適当であり
、哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに対しては、様々なウイルスの起点（ＳＶ
４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶまたはＢＰＶ）が有用である。一般に、哺乳
動物発現ベクターに対しては、複製起点の構成要素は必要でない（例えば、ＳＶ４０起点
は、初期プロモーターを含むだけであるので、代表的に使用され得る）。
発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択可能マーカーとも呼ばれる選択遺伝
子を含み得る。代表的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他のトキシン、例えば、ア
ンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートまたはテトラサイクリンに対する抵抗性を
付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するタンパク質、または（ｃ）複合培
地から利用可能でない決定的な栄養分を供給するタンパク質（例えば、Ｂａｃｉｌｌｉに
対するＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子）をコードする。
選択スキームの１つの例は、宿主細胞の成長を停止する薬物を利用する。異種遺伝子に
よる形質転換が成功した細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を生成し、ゆえにその選
択レジメンを生き残る。そのような優性選択の例は、薬物であるメトトレキサート、ネオ
マイシン、ヒスチジノール、ピューロマイシン、ミコフェノール酸およびハイグロマイシ
ンを使用する。
哺乳動物細胞に対して適当な選択可能マーカーの別の例は、抗α２インテグリン抗体の
核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするものであり、例えば、ＤＨＦＲ、チミ
ジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉおよび−ＩＩ、好ましくは、霊長類のメタロチオネ
イン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
例えば、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、まず、ＤＨＦＲの競合的アンタ
ゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含む培養液中ですべての形質転換体を培養
することによって同定される。野生型ＤＨＦＲを使用するとき、適切な宿主細胞は、ＤＨ
ＦＲ活性を欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である。
あるいは、抗α２インテグリン抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、およびアミノグリコ
シド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択マーカーをコードするＤ
ＮＡ配列で形質転換されたまたは同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性のＤＨＦＲ
を含む野生型宿主）が、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、カナマイシン、ネオマイ
シンまたはＧ４１８）を含む選択可能マーカーに対する選択薬剤を含む培地中での細胞の
成長によって選択され得る（例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照のこと）。
酵母において使用するための１つの適当な選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７に存
在するｔｒｐ１遺伝子である（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら、Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（
１９７９））。ｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で生育する能力を欠く酵母の変異体
株、例えば、ＡＴＣＣ Ｎｏ．４４０７６またはＰＥＰ４−１に対して選択マーカーを提
供する（例えば、Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７）を参照のこと
）。次いで、酵母宿主細胞ゲノム内のｔｒｐ１が破壊されていることにより、トリプトフ
ァンの非存在下における成長によって形質転換を検出するために有効な環境がもたらされ
る。同様に、Ｌｅｕ２欠損酵母株（ＡＴＣＣ２０，６２２または３８，６２６）は、Ｌｅ
ｕ２遺伝子を有する公知のプラスミドによって補完される。
さらに、１．６μ環状プラスミドｐＫＤ１から得られるベクターは、Ｋｌｕｙｖｅｒｏ
ｍｙｃｅｓ酵母の形質転換のために使用され得る。あるいは、組換え子ウシキモシンの大
規模生成用の発現系が、Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８
：１３５（１９９０）によってＫ．ｌａｃｔｉｓについて報告された。Ｋｌｕｙｖｅｒｏ
ｍｙｃｅｓの工業用株が成熟組換えヒト血清アルブミンを分泌するための安定な多コピー
発現ベクターもまた、開示されている（例えば、Ｆｌｅｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ，９：９６８−９７５（１９９１）を参照のこと）。
発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識されるプロ
モーターを含み、抗α２インテグリン抗体核酸に作動可能に連結される。原核生物の宿主
とともに使用することに適したプロモーターとしては、アラビノースプロモーター（例え
ば、ａｒａＢ）、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモータ
ー系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにｔ
ａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが挙げられる。しかしながら、他の公
知の細菌のプロモーターも適している。細菌系において使用するためのプロモーターもま
た、抗α２インテグリン抗体をコードするＤＮＡに作動可能に連結されたＳｈｉｎｅ−Ｄ
ａｌｇａｍｏ（Ｓ．Ｄ．）配列を含む。
真核生物に対するプロモーター配列は、公知である。ほとんどの真核生物の遺伝子が、
転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する
。多くの遺伝子の転写開始位置から７０〜８０塩基上流に見られる別の配列は、ＣＮＣＡ
ＡＴ（配列番号１１５）領域（Ｎは任意のヌクレオチドであり得る）である。コード配列
の３’末端へのポリＡテイルの付加に対するシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ（配列番号
１１６）配列は、ほとんどの真核生物の遺伝子の３’末端に位置する。そのような配列は
、真核生物の発現ベクターに適宜挿入される。
酵母宿主とともに使用するために適したプロモーター配列の例としては、３−ホスホグ
リセリン酸キナーゼまたは他の糖分解酵素（例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−
３−リン酸脱水素酵素、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルク
トキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、
ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、グルコースリン酸イソメラーゼお
よびグルコキナーゼ）に対するプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。成長
条件によって調節される転写に関する追加の利点を有する誘導性プロモーターである他の
酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソシトクロムＣ、酸ホスファタ
ーゼ、窒素代謝に関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン
酸脱水素酵素、ならびにマルトースおよびガラクトースの利用に関与する酵素に対するプ
ロモーター領域である。酵母発現における使用に適したベクターおよびプロモーターは、
さらにＥＰ７３，６５７に記載されている。酵母エンハンサーもまた、酵母プロモーター
とともに好都合に使用される。
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの抗α２インテグリン抗体の転写は、例えば、
ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデ
ノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、
レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスまたはサルウイルス４０（ＳＶ４０））のゲノムから
得られるプロモーター、異種哺乳動物のプロモーター、例えば、アクチンプロモーターま
たは免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモーターによって調節されるが、但し
、そのようなプロモーターは、その宿主細胞系と適合している。ＳＶ４０ウイルスの初期
および後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含むＳＶ４０制限フラグメント
として都合よく得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、Ｈｉｎｄ
ＩＩＩ Ｅ制限フラグメントとして都合よく得られる。ベクターとしてウシパピローマウ
イルスを用いて哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現するための系は、米国特許第４，４１
９，４４６号に開示されており、この系の改変は、米国特許第４，６０１，９７８号に記
載されている（単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの支配下にお
けるマウス細胞内でのヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現については、Ｒｅｙｅｓ
ら、Ｎａｔｕｒｅ ２９７：５９８−６０１（１９８２）もまた参照のこと）。あるいは
、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列が、プロモーターとして使用され得る。
高等真核生物による抗α２インテグリン抗体をコードするＤＮＡの転写は、エンハンサ
ー配列をベクターに挿入することによって増加することが多い。現在、哺乳動物の遺伝子
（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテインおよびインスリン）由来
の多くのエンハンサー配列が、知られている。しかしながら、しばしば、真核細胞ウイル
ス由来のエンハンサーが使用される。例としては、複製起点の後の側（ｂｐ１００〜２７
０）におけるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサ
ー、複製起点の後の側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが
挙げられる（例えば、真核生物プロモーターを活性化するためのエレメントの増強につい
ては、Ｙａｎｉｖ，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：１７−１８（１９８２）もまた参照のこと）
。エンハンサーは、そのベクターの、抗α２インテグリン抗体をコードする配列に対して
５’ 位または３’位にスプライスされ得るが、好ましくは、プロモーターに対して５’
部位に位置する。当該分野で周知の他の遺伝子制御系（例えば、テトラサイクリン誘導系
およびＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈＴＭなどの誘導系）が、抗α２インテグリンをコードするＤ
ＮＡの転写を調節するために使用され得る。
真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒトまたは他の多細胞生物由来の
有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必
要な配列も含む。そのような配列は、通常、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤ
ＮＡの５’、および時折３’の非翻訳領域から利用可能である。これらの領域は、抗α２
インテグリン抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分におけるポリアデニル化されたフラ
グメントとして転写されたヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分は
、ウシ成長ホルモンのポリアデニル化領域である（例えば、ＷＯ９４／１１０２６および
その中で開示されている発現ベクターを参照のこと）。
本明細書中のベクター内のＤＮＡのクローニングまたは発現に適した宿主細胞は、上に
記載されたような原核生物、酵母または高等真核生物の細胞である。この目的に適した原
核生物としては、グラム陰性またはグラム陽性生物を含む真正細菌、例えば、Ｅｎｔｅｒ
ｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、大腸菌）、Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａ（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｓｅ
ｒｒａｔｉａ（例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）およびＳｈｉｇｅｌ
ｌａならびにＢａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉ
ｆｏｒｍｉｓ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）および
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが挙げられる。適当な大腸菌クローニング宿主としては、大腸
菌２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ ３１，５
３７）および大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）が挙げられる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核細胞微生物が、抗アルファ２インテグ
リン抗体をコードするベクターに適したクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、すなわち、普通のパン酵母が、下等真核
生物宿主微生物の中で最もよく使用される。しかしながら、いくつかの他の属、種および
株（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ；Ｋｌｕｙｖｅｒｏ
ｍｙｃｅｓ宿主（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ１２，４２４）、
Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴ
ＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈ
ｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓまたはＫ
．ｍａｒｘｉａｎｕｓを含む）；ｙａｒｒｏｗｉａ（ＥＰ４０２，２２６）；Ｐｉｃｈｉ
ａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＥＰ１８３，０７０）；Ｃａｎｄｉｄａ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍ
ａ ｒｅｅｓｉａ（ＥＰ２４４，２３４）；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ；Ｓｃ
ｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓなどのＳｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃ
ｅｓ；およびＮｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉ
ｕｍまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ宿主（例えば、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓまたはＡ．ｎｉ
ｇｅｒ）を含む糸状菌）が、一般に利用可能であり、有用である。
グリコシル化された抗α２インテグリン抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に
由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。数多く
のバキュロウイルス株および変異株、ならびに宿主（例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆ
ｒｕｇｉｐｅｒｄａ（毛虫）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂ
ｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ショウジョ
ウバエ）およびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）由来の対応する許容的な昆虫宿主細胞が、同定
されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、Ａｕｔｏｇｒａ
ｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ−１バリアントおよびＢｏｍｂｙｘ ｍｏ
ｒｉ ＮＰＶのＢｍ−５株が、公的に入手可能であり、そのようなウイルスは、特に、Ｓ
ｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用さ
れ得る。
ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマトおよびタバコの植物細
胞培養物もまた、宿主として利用され得る。
しかしながら、脊椎動物細胞に最も関心が寄せられており、種々の哺乳動物細胞を含む
脊椎動物細胞の増殖は、通例の手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞の例としては
：ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（例えば、ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ
ＣＲＬ１６５１）；ヒト胎児腎臓株２９３または懸濁培養において生育するためにサブク
ローン化された２９３細胞（例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：
５９（１９７７）を参照のこと）；ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣ
Ｃ ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＨＦＲを欠くＣＨＯ
細胞を含む）（例えば、ＤＨＦＲ Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０）を参照のこと）；マウスセルトリ細胞（（例
えば、ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８
０））；サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル
腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌腫細
胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ２）；イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴ
ＣＣ ＣＣＬ３４）；バッファローラット（ｂｕｆｆａｌｏ ｒａｔ）肝臓細胞（例えば
、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴ
ＣＣ ＣＣＬ７５）；ヒト肝臓細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ８０６５）；マウス乳
腺腫瘍（例えば、ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（例えば、
Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９
８２）を参照のこと）；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；またはヒトヘパトーム株（例えば、
Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられる。
宿主細胞は、抗α２インテグリン抗体を生成するために、上に記載した発現ベクターま
たはクローニングベクターで形質転換され、そしてプロモーターを誘導するため、形質転
換体を選択するため、および／または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適
切であるように改変された従来の栄養培地中で培養される。
抗α２インテグリン抗体を生成するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養
され得る。商業的に入手可能な培地（例えば、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最少
必須培地（（ＭＥＭ），（Ｓｉｇｍａ））、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダ
ルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ），Ｓｉｇｍａ））が、宿主細胞を培養するため
に適している。さらに、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９），Ｂａｒ
ｎｅｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７
６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６
０，６５５号；もしくは同第５，１２２，４６９号；ＷＯ９０１０３４３０；ＷＯ８７／
００１９５；または米国再発行特許第３０，９８５号に記載されている任意の培地が、宿
主細胞に対する培養液として使用され得る。これらの任意の培地には、ホルモンおよび／
または他の成長因子（例えば、インスリン、トランスフェリンまたは上皮成長因子）、塩
（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸塩）、緩衝液（例え
ば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（例
えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮＴＭ薬物）、微量元素（マイクロモル濃度の範囲内の最終濃
度で通常存在する無機化合物として定義される）およびグルコースまたは等価なエネルギ
ー源が必要に応じて補充され得る。他の任意の必要な補充物もまた、当業者に公知であり
得る適切な濃度で含められ得る。発現について選択される宿主細胞とともに以前使用され
た培養条件を含む、温度、ｐＨなどのような培養条件は、当業者によって選択される。
抗α２インテグリン抗体は、例えば、プロテインＡクロマトグラフィ、イオン交換クロ
マトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析および／またはア
フィニティークロマトグラフィを用いて、微生物または哺乳動物の細胞を含む細胞から精
製され得る。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、その抗体に存在する任意
の免疫グロブリンＦｃドメインの種類およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、
ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用され得る（例えば、Ｌ
ｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１−１３（１９８３）を参照
のこと）。プロテインＧは、マウスアイソタイプおよびヒトγ３に対して有用である（例
えば、Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５１６−１５１７（１９８６）を参照のこと）
。親和性リガンドが付着されるマトリックスは、ほとんどの場合、アガロースであるが、
他のマトリックスも利用可能である。コントロールドポアガラスまたはポリ（スチレンジ
ビニル）ベンゼンなどの機械的に安定したマトリックスは、アガロースを用いたときに達
成され得るものよりも速い流速および短い処理時間を可能にする。抗体が、ＣＨ３ドメイ
ンを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸＴＭ（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐ
ｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。タンパク質の精製としては、以下の手法
（例えば、イオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカにお
けるクロマトグラフィ、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥＴＭにおけるクロマトグラフィ、陰
イオンもしくは陽イオン交換樹脂におけるクロマトグラフィ（例えば、ポリアスパラギン
酸カラム）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫安塩析および／または疎水
性相互作用クロマトグラフィ）のうちの１つ以上が挙げられ得る。例えば、任意の精製工
程の後、目的の抗体および夾雑物を含む混合物を、好ましくは低塩濃度（例えば、約０〜
０．２５Ｍの塩）で行われ、約２．５〜４．５のｐＨの溶出緩衝液を用いる低ｐＨ疎水性
相互作用クロマトグラフィに供することが、有用であり得る。
治療的に投与するための製剤を含む抗α２インテグリン抗体の製剤は、所望の程度の純
度を有する抗体を任意選択で生理的に許容され得るキャリア、希釈剤、賦形剤または安定
剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６
ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、
凍結乾燥された製剤または水溶液の形態で、貯蔵用として調製される。許容され得るキャ
リア、希釈剤、賦形剤または安定剤は、使用される投薬量および濃度においてレシピエン
トに対して無毒性であり、それらとしては、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸および他
の有機酸）；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（例えば、塩化
オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニ
ウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；
メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシ
ノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（
約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは
免疫グロブリン）；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸（例えば、グ
リシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、
二糖類または他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；ＥＤ
ＴＡなどのキレート剤；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソ
ルビトール）；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質
錯体）；および／または非イオン性界面活性物質（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯ
ＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が挙げられる。治療的に使用す
るために、本発明の抗α２インテグリン抗体は、例えば、０，０３％Ｔｗｅｅｎ−８０Ｔ
Ｍを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中において製剤化され得る。この抗体製剤は、処置
される特定の適応症に対する２つ以上の活性な化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼ
さない補完的な活性を有する化合物も含み得る。対象の障害を予防するためまたは処置す
るために現在使用されている１つ以上の薬剤に加えて、抗α２インテグリン抗体を使用す
ることが望ましい場合がある。さらに、免疫抑制剤をさらに提供することが望ましい場合
がある。そのような分子は、意図される目的のために有効な量で組み合わされて適切に存
在する。
それらの活性成分はまた、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミ
クロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子またはナノカプセル）またはマクロエマ
ルジョンにおける、例えば、コアセルベーション法または界面重合によって調製されたマ
イクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイ
クロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔ
ｅ））マイクロカプセルに封入され得る。そのような手法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ
，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
インビボ投与のために使用される製剤は、好ましくは、滅菌される。これは、例えば、
滅菌された濾過膜での濾過によって容易に達成される。
徐放調製物が、調製され得る。徐放調製物の適当な例としては、本抗体を含む固体疎水
性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、成形された物品の形
、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルである。徐放マトリックスの例としては、ポ
リエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）また
はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グ
ルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル
、分解性乳酸−グリコール酸共重合体（例えば、Ｌｕｐｒｏｎ ＤｅｐｏｔＴＭ（乳酸−
グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア
））およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニル
および乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日を超えて分子を放出することがで
きるが、ある特定のヒドロゲルは、それよりも短い期間しかタンパク質を放出しない。被
包された抗体が、長時間にわたって体内に留まるとき、それらは、３７℃の水分への曝露
の結果として変性し得るかまたは凝集し得、その結果、生物学的活性が失われ、免疫原性
が変化する可能性がある。関わるメカニズムに応じて、安定化のための合理的なストラテ
ジーが、考案され得る。例えば、凝集メカニズムが、チオ−ジスルフィド相互交換による
分子間のＳ−Ｓ結合の形成であると見出される場合、スルフヒドリル残基を改変すること
、酸性溶液から凍結乾燥すること、水分含有量を調節すること、適切な添加剤を使用する
こと、および特定のポリマーマトリックス組成物を開発することによって、安定化が達成
され得る。
抗α２インテグリン抗体は、非経口、皮下、腹腔内、肺内または鼻腔内を含む任意の適
当な手段によって投与される。局所的な免疫抑制処置に対して望まれる場合、本抗体の病
巣内投与（移植前に灌流すること、または別途移植片を本抗体と接触させることを含む）
が行われる。非経口投与としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与が挙
げられる。さらに、抗α２インテグリン抗体は、例えば、本抗体の用量を減少させながら
の、パルス注入によって適切に投与される。好ましくは、投薬は、注射、最も好ましくは
、静脈内注射または皮下注射によって行われる。これは、投与が短時間であるか長時間で
あるかに部分的に依存し得る。より好ましくは、抗α２インテグリン抗体または本明細書
中に記載されるような組成物は、静脈内注入、静脈内ボーラス、皮下投与、皮下点滴また
は皮下ボーラスによる本発明の方法において投与されるが、静脈内注入または静脈内ボー
ラスが、最も好ましい。用語「静脈内注入」とは、およそ５分を超える時間、好ましくは
、およそ３０〜９０分間にわたって動物またはヒト患者の静脈に薬物を導入することを指
すが、本発明によれば、静脈内注入は、１０時間以下にわたって投与される。用語「静脈
内ボーラス」または「静脈内プッシュ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｐｕｓｈ）」とは、薬
物をおよそ１５分以下、好ましくは、５分以下で身体に投与するような、動物またはヒト
の静脈への薬物投与のことを指す。用語「皮下投与」とは、薬物容器から、動物またはヒ
ト患者の皮膚の下に、好ましくは、皮膚とその下にある組織との間のポケットの中に、比
較的緩徐な持続的送達によって薬物を導入することを指す。そのポケットは、下にある組
織から離して皮膚をつまむかまたは引き上げることによって作ってもよい。用語「皮下点
滴」とは、薬物容器から、動物またはヒト患者の皮膚の下に、好ましくは、皮膚とその下
にある組織との間のポケットの中に、比較的緩徐な持続的送達によって、３０分以下また
は９０分以下を含むがこれらに限定されない時間にわたって薬物を導入することを指す。
用語「皮下ボーラス」とは、動物またはヒト患者の皮膚の下への薬物投与のことを指し、
ここで、ボーラス薬物送達は、好ましくは、およそ１５分未満であり、より好ましくは、
５分未満、最も好ましくは、６０秒未満である。投与は、好ましくは、皮膚とその下にあ
る組織との間のポケットの中におけるものであり、ここで、そのポケットは、例えば、下
にある組織から離して皮膚をつまむかまたは引き上げることによって作られる。必要に応
じて、注入は、動物またはヒト患者の皮膚の下に埋め込まれる薬物送達ポンプの皮下への
埋め込みによって行われ得、ここで、そのポンプは、所定の時間（例えば、３０分、９０
分または処置レジメンの長さに及ぶ時間）にわたって所定量の薬物を送達する。間欠投薬
または定期的な投薬は、ある特定の時間にわたって継続される投薬であり、好ましくは、
１日より長い時間を隔てた一定間隔で行われる。
本明細書中で同意語として使用される「治療有効量」または「有効量」とは、症状を回
復させるかもしくは予防するか、または処置される被験体の生存時間を延ばすのに有効な
、本明細書中に記載される抗α２インテグリン抗体の量のことを指す。治療有効量の決定
は、特に本明細書中に提供される詳細な開示に鑑みて、十分に当業者の能力の範囲内であ
る。本明細書中に記載される抗α２インテグリン抗体の「治療有効量」という用語は、具
体的には、腫瘍の成長を遅延させるかまたは阻害するために必要な量のことを指す。
癌を予防するかまたは処置する場合、抗体の適切な投薬量は、上で定義されたような処
置される疾患のタイプ、その疾患の重症度および経過、抗α２インテグリン抗体が予防的
な目的で投与されるか治療的な目的で投与されるか、以前の治療、患者の病歴およびその
抗体への応答、ならびに主治医の判断に左右される。本抗体は、一度に、または一連の処
置にわたって、患者に適切に投与される。
したがって、抗α２インテグリン抗体は、本発明の方法において、被験体、好ましくは
、ヒトに、約０．１．〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲の治療有効量で投与され得る。好まし
くは、約１〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲の治療有効量、より好ましくは、約３〜約１０ｍｇ
／ｋｇの範囲の治療有効量が、被験体、好ましくは、ヒトに投与される。治療有効量のヒ
ト化抗体またはその結合フラグメントは、１回以上の治療的に有効な投薬において被験体
に投与され得る。
疾患のタイプおよび重症度に応じて、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの抗体
が、例えば、１回以上の別個の投与によるか持続注入によるかに関わらず、被験体への投
与に対する最初の投薬量候補である。例えば、ヒトへの代表的な毎日の投薬は、上で述べ
た因子に応じて、０．１ｍｇ／ｋ〜２０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であり得る。数
日またはそれ以上にわたる反復投与の場合、状態に応じて、処置は、疾患症状の所望の抑
制が生じるまで継続される。しかしながら、他の投与レジメンも有用であり得る。この治
療の進行は、当業者によって容易にモニターされる。実施例６に記載されるような毒物動
態学研究によれば、本発明の抗α２インテグリン抗体は、１９９〜３１６時間という半減
期Ｔ１／２が見積もられた。したがって、２週間ごとに１回の投薬レジメンが、好ましい
とみられる。
意外なことに、本発明において使用される抗アルファ２（α２）インテグリン抗体は、
抗ＶＥＧＦ抗体に匹敵する程度に腫瘍の成長を阻害する。具体的には、マウス異種移植片
研究において５０ｍｇ／ｋｇの用量の抗アルファ２（α２）インテグリン抗体を２２日間
にわたって週２回投与したとき、腫瘍のサイズは、２７日目には、アイソタイプコントロ
ールのおよそ６０％だった。したがって、本発明は、治療有効量のヒト化抗α２インテグ
リン抗体を被験体に投与することによって、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細
胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓ
ｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化器癌を含
む）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸
癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌
、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびにＢ
細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）
ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ
；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨ
Ｌ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクロ
グロブリン血症を含む）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（Ａ
ＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（
ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、
メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌
腫からなる群より選択される癌を処置する方法を提供し、ここで（ｗｈｅｒｅａｓ）、そ
のヒト化抗α２インテグリン抗体で処置された腫瘍のサイズは、コントロール抗体で処置
された腫瘍のサイズの９０％以下、好ましくは、８０％以下、より好ましくは、７０％以
下、最も好ましくは、６０％以下、特に、５０％以下、より特に、４０％以下、最も特に
、３０％以下であり、ここで（ｗｈｅｒａｓ）、その腫瘍のサイズは、通常、腫瘍の体積
または腫瘍の重量として測定される。
抗α２インテグリン抗体組成物は、優れた医療行為と調和する様式で、製剤化され、投
薬され、投与される。この文脈において考慮される因子としては、処置される特定の障害
、処置される特定の哺乳動物、個別の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投
与方法、投与のスケジューリング、薬理学的研究および毒性研究の結果、ならびに医療従
事者に公知の他の因子が挙げられる。投与される抗体の治療有効量は、そのような因子を
考慮することによって決定され、α２β１インテグリン関連障害を予防するか、回復させ
るか、または処置するために必要な最小量である。そのような量は、好ましくは、宿主に
とって毒性である量、または宿主を著しく感染症に感受性にさせる量より少ない。抗α２
インテグリン抗体は、対象の障害を予防するためまたは処置するために現在使用されてい
る１つ以上の薬剤ととともに補助療法として製剤化されるか、同時投与される（ｃｏ−ａ
ｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）かまたは使用される必要はないが、必要に応じて、そのように製剤
化されるか、同時投与されるかまたは使用されてもよい。例えば、本抗体は、放射線治療
およびまたは１つもしくはいくつかの癌医薬とともに投与され得る。これらの癌医薬は、
別の抗体、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、抗血管新生薬、免疫抑制剤、プロドラッグ、サ
イトカイン、サイトカインアンタゴニスト、細胞傷害性放射線治療、コルチコステロイド
、制吐作用の癌ワクチン、鎮痛薬、抗血管剤（ａｎｔｉ−ｖａｓｃｕｌａｒ ａｇｅｎｔ
）または成長抑制剤（ｇｒｏｗｔｈ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含み得る。
より具体的な薬剤としては、例えば、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））
、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ
（登録商標））、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））、ＥＦＧレセプター
アンタゴニスト、例えば、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ＶＥＧＦアン
タゴニスト、例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ビンクリスチン（
ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ｍＴｏｒ（セリン／トレオニンタンパク質キナーゼ）の
インヒビター、例えば、ラパマイシンおよびＣＣＩ−７７９ならびに抗ＨＥＲ１、ＨＥＲ
２、ＥｒｂＢおよび／またはＥＧＦＲアンタゴニスト、例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲ
ＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、パーツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（ＯＭＮＩ−ＴＡ
ＲＧＴＭ）またはラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ならびに化学療法剤を含む他の細
胞傷害性薬剤が挙げられる。あるいはまたはさらに、α２β１インテグリンアンタゴニス
トが、α２β１インテグリン関連障害に罹患している哺乳動物に投与され得る。そのよう
な他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗α２インテグリン抗体の量、障害または処置
のタイプ、および上で述べた他の因子に左右される。これらは、一般に、本明細書の上で
使用されたものと同じ投薬量および本明細書の上で使用されたような投与経路で、または
今までに使用された投薬量の約１〜９９％で使用される。
上に記載されたような癌の処置に有用な抗α２インテグリン抗体を含む材料を備えた製
品が、提供される。この製品は、容器およびラベルを備える。適当な容器としては、例え
ば、ビン、バイアル、注射器および試験管が挙げられる。その容器は、ガラスまたはプラ
スチックなどの種々の材料から形成され得る。その容器は、状態を処置するために有効な
組成物を保持しており、滅菌された接続口を有し得る（例えば、その容器は、皮下注射針
で貫通可能な栓を有する静脈内投与用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中
の活性な薬剤は、抗アルファ２インテグリン抗体である。その容器上のラベルまたはその
容器に関連づけられたラベルは、その組成物が、上に記載されたような癌を処置するため
に使用されることを示している。その製品は、薬学的に許容され得る緩衝液（例えば、リ
ン酸緩衝食塩水、リンガー溶液またはデキストロース溶液）を含む第２の容器をさらに備
え得る。その製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、注射器および使用するため
の指示を含む添付文書をはじめとした、商業上の観点およびユーザーの観点から望ましい
他の材料をさらに備え得る。
以下の実施例は、限定の目的ではなく例示の目的で提供される。本明細書中のすべての
引用の開示が、明確に本明細書中で参考として援用される。
実施例１
ヒト癌腫細胞株上で発現されているヒトα２インテグリンとヒトコラーゲンとの相互作
用を阻害する際の抗α２インテグリン抗体の効力のインビトロ評価
様々な抗α２インテグリン抗体がヒト癌腫細胞株上で発現されているヒトＶＬＡ−２（
α２β１）インテグリンとヒトコラーゲンＩ型との相互作用を阻害する効力を評価するた
めの、ヒト細胞株とヒトコラーゲンとのインビトロ結合アッセイが、確立されている。こ
のアッセイでは、天然にＶＬＡ−２を発現する、蛍光標識されたヒト膵癌細胞株を、ヒト
コラーゲンＩ型で予めコートされた９６ウェルプレートに分配した。ＶＬＡ−２を発現し
ない蛍光標識されたヒト膵癌細胞株をネガティブコントロールとして使用した。次いで、
蛍光標識された細胞を、様々な濃度の抗α２インテグリン（ＧＢＲ５００またはＴＭＣ２
２０６）またはアイソタイプマッチコントロール抗体（ＧＢＲ６００）の存在下において
、コラーゲンコートされた９６ウェルプレート内で１時間インキュベートした。プレート
を静かに洗浄し、プレートの各ウェル内の残った蛍光を測定した。個別のウェルにおいて
測定された蛍光シグナルの強さは、コラーゲンに接着した細胞の数に比例する。
材料および方法
本明細書中でＧＢＲ５００と呼ばれるヒト化抗ヒトα２インテグリンは、配列番号１８
７を含む重鎖および配列番号１８８を含む軽鎖を含む。
フローサイトメトリー
Ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｇｉｂｃｏ，ｃａｔ＃１５０４０）とともにインキュベートした後、
ＡｓＰＣ−１細胞、ＨＰＡＦ−ＩＩ細胞およびＭＩＡ ＰａＣａ−２細胞を回収し、１×
１０６細胞／ｍＬの濃度でＰＢＳ−２．５％ＦＢＳに再懸濁した。１００μｌの細胞懸濁
液を、１０μｇ／ｍＬのＧＢＲ５００−ＦＩＴＣまたはコントロールとしてｈＩｇＧ４−
ＦＩＴＣとともに２０分間、氷上でインキュベートした。細胞をＰＢＳ−２．５％ＦＢＳ
で２回洗浄し、フローサイトメトリーで解析した。トリプシン処理されたＳＫ−ＢＲ−３
細胞株を、膵臓細胞株について記載した方法と同じ方法で処理した。ＶＬＡ−２分子の発
現レベルを平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表した。
コラーゲン結合アッセイ
９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（黒色クリニプレート（ｂｌａｃｋ ｃｌｉｎｉｐｌａ
ｔｅ），Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｒｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ｃａｔ ｎｏ９５０２
８６７）を、酢酸０．０２Ｎ中またはＰＢＳ中の５０μｇ／ｍＬの１００μｌのヒトコラ
ーゲンＩ型（ＳＩＧＭＡ，ｃａｔ ｎｏＣ７７７４）でコーティングした。コラーゲンを
、酢酸に希釈して３７℃で１時間インキュベートするか、またはＰＢＳに希釈して４℃で
一晩インキュベートした。プレートを、０．１％ＢＳＡまたは１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，
ｃａｔ ｎｏＡ３０５９）が補充された１５０μｌのＰＢＳでブロッキングした。細胞を
まず、無血清ＤＭＥＭ培地（ＰＡＡ，ｃａｔ ｎｏＥ１５−００５）中のＣＦＳＥ（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ ｃａｔ ｎｏＣ３４５５４）で標識した。３μｌの１５ｍＭ ＣＦＳ
Ｅ溶液を、１×１０６細胞／ｍｌ〜０．６×１０６細胞／ｍｌの濃度の５ｍｌの細胞に加
えた。細胞をＣＦＳＥとともに３７℃で１０分間インキュベートし、その細胞を９００ｒ
ｐｍで３分間遠心分離することによって、過剰なＣＦＳＥを除去した。ＣＦＳＥ標識され
た細胞を、０．６×１０６〜１×１０６細胞／ｍｌの濃度で、０．１％ＢＳＡが補充され
たＤＭＥＭに再懸濁した。ＤＭＥＭ−０．１％ＢＳＡ中の５０μｌの抗体希釈物を、コラ
ーゲンコートされたプレートに分配し、直ちに５０μｌのＣＦＳＥ標識細胞をそのプレー
トに分配した。ＧＢＲ５００に対するアイソタイプコントロール抗体としてＧＢＲ６００
抗体を使用した。プレートを室温で１時間インキュベートし、コラーゲンに結合しなかっ
た細胞を、上清を捨てることによって除去した。プレートを、手動で、またはＢｉｏＴｅ
ｋ洗浄機を用いて、ＰＢＳ緩衝液で４回洗浄した。そのプレート内のウェルをＰＢＳで満
たし、４９８ｎｍで励起し、５２５ｎｍで発光する蛍光を、Ｓｙｎｅｒｇ ＨＴ２蛍光光
度計を用いて測定した。ＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて、データを解析した。抗ＶＬＡ
−２抗体の活性を、ベースラインと最大反応との中間の反応を誘発する抗体の濃度と定義
されるＥＣ５０として表した。
結果：
コラーゲン結合アッセイ
３つの膵癌細胞株および乳癌細胞株を用いるコラーゲン結合アッセイを、２回行った。
表４は、行われた２回の実験において得られたＥＣ−５０値をまとめており、以下に示す
。
ＧＢＲ５００抗体およびＴＭＣ−２２０６抗体は、ヒトコラーゲンへのＶＬＡ−２陽性
の膵癌細胞および乳癌細胞の結合を阻害した。ＶＬＡ−２を発現しないＭＩＡ ＰａＣａ
−２細胞株は、コラーゲンに結合しない。この結果は、ＶＬＡ−２発現がコラーゲンＩ型
への細胞接着に必須であることを証明している。
結論
１）癌腫癌細胞株であるＡｓＰＣ−１、ＨＰＡＦ−ＩＩおよびＳＫＢＲ３細胞上のα２イ
ンテグリン発現は、蛍光標識されたＧＢＲ５００抗体を用いて検出され得る。この膵癌細
胞株は、乳癌細胞株よりも高レベルのα２インテグリンを発現する。
２）ＶＬＡ−２陽性細胞株であるＡｓＰＣ−１、ＨＰＡＦ−ＩＩおよびＳＫ−ＢＲ−３細
胞株は、コラーゲンに接着した一方、ＶＬＡ−２陰性細胞株であるＭｉａＰａＣＡは、接
着しない。
３）試験された様々な細胞株に対するコラーゲン結合の阻害に対する抗体ＥＣ−５０値を
表５に示す：
ＨＰＡＦ−ＩＩ細胞株を用いて得られたＥＣ５０値は、ＡｓＰＣ−１細胞株について測
定されたＥＣ５０値と比べて約４倍（ＧＢＲ５００の場合３．９倍およびＴＭＣ−２２０
６の場合３．６倍）高かった。両方の膵臓細胞株が、同様のＶＬＡ−２レベルを発現して
いたので（ＦＡＣＳ染色データを参照のこと）、この差は、ＶＬＡ−２の発現レベルに帰
することができない。さらに、低レベルのＶＬＡ−２を発現しているＳＫ−ＢＲ−３細胞
株は、ＡｓＰＣ−１（高ＶＬＡ−２発現）に匹敵するＥＣ５０値を示した。しかしながら
、コラーゲンコートの条件が、膵臓細胞株と乳癌細胞株との間で異なっていた（３７℃で
１時間酢酸に希釈されたコラーゲン 対 ４℃で一晩ＰＢＳに希釈されたコラーゲン）の
で、これらの細胞株の間でのＥＣ５０値の比較は、慎重に解釈されるべきである。
４）本研究は、Ｉ型コラーゲンへのα２β１インテグリン媒介性の接着を有望な治療標的
として同定する。さらに、抗ＶＬＡ−２抗体であるＧＢＲ５００およびＴＭＣ２２０６は
、ＶＬＡ−２を発現している細胞株のコラーゲンへの結合を阻害する優れた能力を示した
。ゆえに、ＧＢＲ５００抗体は、膵癌および乳癌の処置における有望な治療薬候補である
。
実施例２
ＢＡＬＢ／ｃヌード（ｎｕ／ｎｕ）無胸腺マウスにおけるヒト膵臓癌腫腫瘍異種移植片
ＡｓＰＣ−１に対するＧＢＲ５００の効果
少なくとも６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃヌード（ｎｕ／ｎｕ）無胸腺マウスを異種移植
片研究において使用した。Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ（
ＡＲＣ）から入手した動物を、研究の−２日目に処置群に割り当て、表６に記載されるレ
ジメンに従って処置を開始した。１日目に、ヒトＡｓＰＣ−１膵臓癌腫腫瘍細胞（ＡＴＣ
Ｃ（登録商標）番号：ＣＲＬ−１６８２）を、インビトロで生育されたサブコンフルエン
トの培養物から回収し、生細胞の数を測定した。細胞を５×１０７細胞／ｍｌの濃度で１
×ＰＢＳに再懸濁し、０．１ｍｌの体積におけるおよそ５×１０６細胞を動物の背面の右
側腹部に皮下注射した。腫瘍の外観について動物を定期的に調べ、−２日目から開始して
２２日間にわたって１週間に２回投薬した（−２、２、６、９、１３、１６、２０日目に
おける合計７回の注射）。抗体を１０ｍｌ／ｋｇの体積で投与した。２０日目に、処置を
停止し、２７日目まで動物をモニターした。
この研究の期間中にわたって、腫瘍の測定を、デジタルカリパスを用いて１週間に２回
行った。腫瘍の寸法を記録し（長さおよび幅）、式Ｗ２×Ｌ×０．５３６（Ｗは、最も広
い幅の腫瘍の寸法であり、Ｌは、最も長い長さである）を用いて、腫瘍の体積を計算した
。この研究の結果を、図１に示す。腫瘍の体積とは、１４匹の動物の群あたりの平均値の
ことを指す。５０ｍｇ／ｋｇのＧＢＲ５００の用量において、腫瘍のサイズは、２７日目
においてアイソタイプコントロールのおよそ６０％だった。
実施例３
ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウスにおけるＨＴ２９ヒト結腸癌腫異種移植片に対するＧＢＲ５０
０の効果
Ｈａｒｌａｎ，ＩｔａｌｙからのＮｕ／Ｎｕ雄マウスを使用した。その動物を、水蒸気
オートクレーブされた（滅菌）寝わらを用いたケージ内に維持し、食餌および水を随意に
与えた。動物を、データシート上に見られる一意に番号付けされた耳タグによって特定し
た。腫瘍を移植した日の体重は：２４〜３１ｇだった。
群の数−処置スケジュール：
群の数は、５つだった。１群あたりの動物の数は、１０匹だった。表７に記載されるレ
ジメンに従って、処置を開始した。
物質：
試験化合物は、使用するまで４℃の温度で保存し、光から保護した。試験化合物を、リ
ン酸緩衝食塩水中の０，０３％Ｔｗｅｅｎ−８０ＴＭに溶解し、正しい濃度に達するため
に使用する直前に希釈した（ＰＢＳ中にＩｇＧ４アイソタイプ、Ｈａ１／２９およびＧＢ
Ｒ５００；食塩水溶液中にＡｖａｓｔｉｎ（登録商標））。１０ｍｌ／ｋｇの体積で腹腔
内に（ＩＰ）処置を行った。
腫瘍：
以前にＨＴ２９細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−３８ＴＭ）を接種されていたマウス由来のＨ
Ｔ２９腫瘍フラグメントを、無胸腺ヌードマウスの左側腹部の皮下に移植した。腫瘍の外
観について動物を定期的に調べた。測定可能な腫瘍が、マウスの大部分に確立されたら、
１群あたり１０匹のマウス（１ケージあたり５匹のマウス）を目標として動物を処置群に
割り当てた。処置を開始したとき、平均腫瘍体積は、１２０ｍｍ３だった。
異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性および毒性の評価：
１週間に少なくとも２回、腫瘍の成長および正味の体重を評価した。腫瘍の成長は、カ
リパスによって評価した。腫瘍の寸法を、カリパスによって実験中に定期的に測定し、腫
瘍の質量を、以下のとおり計算した：
腫瘍組織については、密度ｄ＝１ｍｇ／ｍｍ３と仮定する。
体重の減少に基づいて毒性を評価した。腫瘍がマウスを妨害する体積に達したときに、
マウスを屠殺した。
結果および結論：
単一薬剤として１週間に２回投与されたＨａ１／２９（５ｍｇ／ｋｇ）およびＧＢＲ５
００（５０ｍｇ／ｋｇ）は、２８日目において、腫瘍の重量をそれぞれ１２％および１６
％阻害した。ＧＢＲ５００と併用されたＨａ１／２９は、腫瘍重量の１９％の減少を示し
た（表８）。
抗体で処置された群の最大の抗腫瘍活性は、１６日目に観察され、腫瘍重量の阻害は、
３３、１８、３３％だった（それぞれＨａ１／２９、ＧＢＲ５００および併用群）。４０
ｍｇ／ｋｇで投与されたＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）は、２８日目において５０％の腫瘍
成長阻害を示した。図２では、異なる処置群において観察された平均腫瘍成長の比較が示
されている。処置は、十分に耐容性を示し、実験中死亡したマウスは、処置群中には見ら
れなかった。処置中および処置後に窮迫の徴候は観察されず、著しい体重減少も観察され
なかった。
実施例４
ヒト細胞株におけるＣＤ４９ｂ（インテグリンサブユニットα２）の発現レベルの検出
細胞株および培養条件
細胞溶解産物のパネルをＣＤ４９ｂの発現についてスクリーニングした。このパネルは
、癌化していない４つのヒト細胞株（ＢＪ、Ｉ４０７、初代線維芽細胞、ＷＲＬ−６８）
および様々な組織／器官（結腸直腸、皮膚、乳房、前立腺、膵臓、肺、子宮頸部、腎臓、
卵巣、ＣＮＳ、骨、肝臓、甲状腺および血液を含む）由来の９６個のヒト癌細胞株からの
溶解産物からなるものだった。使用した細胞株を表９Ａおよび９Ｂに示す。
ウエスタンブロット用の溶解産物の調製
１０％ウシ胎児血清の存在下の適切な成長培地中に維持された細胞株のサブコンフルエ
ントの培養物から溶解産物を調製する（詳細については表８を参照のこと）。接着性細胞
株を１５０ｍｍプレートに播種した（細胞をおよそ６０〜７０％集密度で回収した）；懸
濁液細胞株をＴ−１７５フラスコ内で生育した（細胞をおよそ２００，０００細胞／ｍｌ
で回収した）。
接着性細胞株に対するプロトコル：
１）冷ＰＢＳ（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない）でプレートを洗浄する。ＰＢＳを除
去する。
２）過剰なＰＢＳを片側に寄せて除去する。
３）１ｍｌの冷溶解緩衝液を加え、プレートを氷上に置く。細胞をこすり落とす。
４）溶解産物を回収し、さらなる２００μｌの溶解緩衝液でプレートを洗浄し、溶解産物
に加え、低温室で１５分間撹拌する。
６）微量遠心管において１５分間遠心する（１５０００ｒｐｍ、４℃）。
７）上清を回収し、一定量に分割して液体窒素中で凍結する。
８）ＢＳＡ基準曲線を用いて、各溶解産物のアリコート中のタンパク質濃度を測定する。
９）完全溶解緩衝液、４×ＬＤＳサンプル緩衝液、２０×還元剤（１Ｍ ＤＴＴ）でサン
プルを１ｍｇ／ｍｌにして、１０分間煮沸する。
懸濁細胞株に対するプロトコル：
１）細胞懸濁液を１５分間遠心し（２０００ｒｐｍ、４℃）、培地を除去する。
２）冷ＰＢＳ（Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まない）で洗浄し、１５分間遠心し（２００
０ｒｐｍ、４℃）、ＰＢＳを除去する。
３）１ｍｌの冷溶解緩衝液を加え、細胞溶解産物を氷中でピペッティングする。
４ 細胞／溶解産物を低温室で１５分間撹拌し続ける。
６）１５分間遠心する（１５０００ｒｐｍ、４℃）。
７）上清を回収し、一定量に分割して液体窒素中で凍結する。
８）同じＢＳＡ基準曲線を用いて、すべての溶解産物中のタンパク質濃度を並行して測定
する。
９）完全溶解緩衝液、４×ＬＤＳサンプル緩衝液、２０×還元剤（１Ｍ ＤＴＴ）でサン
プルを１ｍｇ／ｍｌにして、１０分間煮沸する。
完全溶解緩衝液の組成：
５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．５
１５０ｍＭ ＮａＣｌ
１％ Ｔｒｉｔｏｎｘ−１００
１％ デオキシコレート
０．１％ ＳＤＳ
１０ｍＭ ＥＤＴＡ
必要に応じて、使用の直前にＤＴＴ（最終１ｍＭ）およびプロテアーゼ／ホスファターゼ
インヒビターカクテル（Ｓｉｇｍａ Ｐ−２８５０，Ｐ−５７２６，Ｐ−８３４０）を加
える。ＤＴＴ還元剤（Ｂｉｏｒａｄ，ｃａｔ．＃１６１−０６１０）：５０ｍＭ最終濃度
。
ＬＤＳサンプル緩衝液の組成（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ．＃０２９８２２２０１
）：
１０６ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ８．５
１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ塩基 １％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００
２％ ＬＤＳ
１０％ グリセロール
０．５１ｍＭ ＥＤＴＡ
０．２２ｍＭ Ｓｅｒｖａ Ｂｌｕｅ Ｇ２５０
０．１７５ｍＭ フェノールレッド
ウエスタンブロット
４〜１２％Ｂｉｓ−ＴｒｉｓＭｉｄｉゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示書
に従って使用して、タンパク質抽出物（１０μｇタンパク質／サンプル）をＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥによって分離した。転写後に膜をＰｏｎｃｅａｕ Ｒｅｄで染色した。５％脱脂粉乳
を含むブロッキング緩衝液中に１：１０００および１：２０００で希釈したそれぞれ抗Ｃ
Ｄ４９ｂ抗体および抗ＧＡＰＤＨ抗体を使用した。５％脱脂粉乳を含むブロッキング緩衝
液中のＨＲＰ結合体化２次抗体を１：５０００で使用した。
本研究で使用した抗体
・マウスモノクローナルＩｇＧ２ａ抗ＣＤ４９ｂ（インテグリンα２鎖）抗体（Ｂｅｃｔ
ｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ｃａｔ．＃６１１０１６）；
・ウサギポリクローナルＩｇＧ抗ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲ
ナーゼ）抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｃａｔ．＃ｓｃ−
２５７７８）；
・ＨＲＰ結合体化抗マウスおよび抗ウサギ抗体（Ｐｉｅｒｃｅ）；
・ビオチン−ＧＢＲ５００（ｌｏｔ ＡＴ−２２０２０８Ａ）組換えヒト化モノクローナ
ル抗体；
・ビオチン−ＩｇＧ４（ｌｏｔ ＡＴ−０９０１０８Ａ）組換えヒト化モノクローナル抗
体（Ｇｌｅｎｍａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｓ．Ａ．）；
・ＦｌｕｏｒｏｌｉｎｋＴＭＣｙＴＭ２ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒ
ｅ，ｃａｔ．＃ＰＡ４２００２）；
・ストレプトアビジン−ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，ｃａ．＃５５４０６０
）。
免疫蛍光法のためのサンプルの調製
細胞をＬａｂ−Ｔｅｋチャンバースライド（Ｎｕｎｃ）内で４８時間培養し（７０，０
００細胞／チャンバー）、その後、ホルムアルデヒド３．７％（ｖ／ｖ）で２０分間固定
した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ＰＢＳ中に１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）および０．３％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄ
ｒｉｃｈ）を含むブロッキング溶液で３０分間飽和させた。推奨される希釈で１次抗体を
ブロッキング溶液中に加えた。３７℃で１時間インキュベートした後、溶液を除去し、細
胞をＰＢＳで２回洗浄した。
推奨される希釈で、２次抗体、またはストレプトアビジン−ＦＩＴＣを１ｍｇ／ｍｌ
ＤＲＡＱ５ＴＭ（Ａｌｅｘｉｓ，ｃａｔ．＃ＢＯＳ−８８９−００１−Ｒ２００）ととも
にブロッキング溶液中に加えた。スライドを３７℃で１時間インキュベートし、次いで、
溶液を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。ＰＢＳを除去し、Ｍｏｗｉｏｌ溶液（Ｍｏ
ｗｉｏｌ ４．８８，Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ ｃａｔ．＃４７５９０４）を用いてスライ
ドにカバーガラスを載せた。
レーザー走査型共焦点顕微鏡
Ｒａｄｉａｎｃｅ ２０００レーザー走査システム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，４０×対物レン
ズ，油浸）に連結されたＡｘｉｏｐｌａｎ顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）を用いて、免疫蛍光法の
像を得た。Ｋａｌｍａｎフィルターを用いて像を取得した（１０反復）；レーザー出力は
、異なるサンプルにおいて同じ蛍光チャネルに対して等しかった。
結果および結論
ヒト細胞株におけるＣＤ４９ｂ発現のウエスタンブロット解析
膜のＰｏｎｃｅａｕ Ｒｅｄ染色から、膜への細胞タンパク質の均一な転写が確かめら
れた。
ＣＤ４９ｂおよびＧＡＰＤＨの発現に対するウエスタンブロット解析を図３に示す。全
体的に見て、ＣＤ４９ｂは、接着性細胞株において遍在的に発現しているが、懸濁細胞株
ではそうではない（白血病−ブロック１５およびＳＣＬＣ−ブロック２０）。いくつかの
接着性細胞株が、検出不可能なＣＤ４９ｂレベルを有すること（例えば、ＭＩＡ ＰａＣ
ａ−２およびＵ０３１）、逆に、懸濁液中で生育された細胞株が高いＣＤ４９ｂレベルを
発現すること（ＣＥＭ／ＶＭ１およびＲＳ４−１１）といういくつかの例外がある。すべ
ての細胞株が、一貫したＧＡＰＤＨ発現を示し、これをローディング／ＷＢコントロール
として使用した。
最高レベルのＣＤ４９ｂが、以下の細胞株に見られた：
−ＨＴ−１０８０（線維肉腫）；
−ＢｘＰＣ−３（膵臓腺癌）；
−ＣＡＬ−１２Ｔ（非小細胞肺癌）；
−ＮＣＩ−Ｈ１２９９（非小細胞肺癌）；
−ＴＫ１０（腎臓腺癌）；
−ＳＮＢ１９およびＵ２５１（神経膠芽腫）；
−Ａ４３１（類表皮癌腫）。
結腸直腸癌腫に関して、２２個の試験された株の大部分が、ＣＤ４９ｂの同種の中程度に
高い相対的な発現を示した。試験された２２個の株のうち３つだけが、比較的低い発現レ
ベルだったが、なおも容易にウエスタンブロットによって検出可能だった。
選択された細胞株における、ＧＢＲ５００抗体を用いた共焦点顕微鏡によるＣＤ４９ｂ
の検出
共焦点顕微鏡を使用することにより、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎの抗ＣＤ４９
ｂを用いて得られたウエスタンブロットデータが細胞表面発現と相関したか否かを、ＧＢ
Ｒ５００を用いて試験した。研究されたサンプルでは、ＧＢＲ５００を用いることにより
、ウエスタンブロットによって判断された抗原を高発現する細胞株が、特異的な免疫反応
性を原形質膜で示したことも見出された。原形質膜にＣＤ４９ｂを発現するがゆえにイン
ビボ研究に適し得るヒト腫瘍細胞株としては、ＨＴ−２９結腸直腸癌腫株およびＢＸ−Ｐ
Ｃ３膵臓癌腫株が挙げられるが、多くのさらなる候補が本研究において同定された。
５つの選択された細胞株（ＨＴ−１０８０、ＢｘＰＣ−３、ＭＩＡＰａＣａ２、ＨＴ−
２９およびＳＷ４８０）を、ビオチン−ＧＢＲ５００およびビオチン−ｈＩｇＧ４（無関
係なアイソタイプ）で免疫染色し、レーザー走査型共焦点顕微鏡によって解析した。ＢＤ
抗ＣＤ４９ｂ抗体を用いたウエスタンブロッティングによって得られた結果に基づいて、
これらの腫瘍細胞株を選択した：
ＢｘＰＣ−３：高レベルのＣＤ４９ｂを有する膵臓癌腫
ＭＩＡＰａＣａ２：検出不可能なＣＤ４９ｂを有する膵臓癌腫
ＨＴ−２９：中程度に高レベルのＣＤ４９ｂを有する結腸直腸癌腫
ＳＷ４８０：比較的低いが検出可能なレベルのＣＤ４９ｂを有する結腸直腸癌腫
高レベルのＣＤ４９ｂを発現すると知られている線維肉腫細胞株ＨＴ１０８０をポジテ
ィブコントロールとして使用した：共焦点顕微鏡によって、原形質膜のラメリポディア様
の領域に集中する強い膜の染色が確かめられる（図４）。
図５（ＢｘＰＣ−３）および図６（ＭＩＡ ＰａＣａ２）に報告される像に示されるよ
うに、ＢＤ抗体を用いて得られたウエスタンブロットデータとＧＢＲ５００を用いて得ら
れた免疫細胞化学の結果との間に相関が存在するとみられる：ＢｘＰＣ−３は、強い陽性
であり、ＭＩＡＰａＣａ２は、ＧＢＲ５００で染色されない。特に、共焦点顕微鏡から、
ＢｘＰＣ−３については、細胞と細胞との接触領域内の細胞膜の強いビオチン−ＧＲＢ５
００免疫染色が明らかになったが、ビオチン−ｈＩｇＧ４免疫染色は明らかにならなかっ
た。これは、ＨＴ−１０８０細胞と異なる染色パターンであり、ＧＢＲ５００染色は、お
そらく原形質膜のラメリポディア様領域に限局される。
結腸腺癌細胞株ＨＴ−２９は、ＢＸ−ＰＣ−３細胞において観察された分布と同様の分
布で強いビオチン−ＧＲＢ５００免疫染色を示した（図７）。
ウエスタン（Ｗｅｓｅｔｒｎ）ブロットによって判断されたときにＣＤ４９ｂ発現が低
い別の株であるＳＷ４８０細胞では、ビオチン−ＧＢＲ５００染色は、ビオチン−ＩｇＧ
４染色とほぼ識別不能（ｉｎｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｉｂｌｅ）だったことから（図８）
、ウエスタンブロットによって検出された低いＣＤ４９ｂ発現レベルが確かめられた。
結論として、ＣＤ４９ｂ発現は、結腸癌腫細胞株の大部分、ならびに他のいくつかの固
形腫瘍タイプにおいて検出され、ここで、それは、通常検出されるものである。ＣＤ４９
ｂ発現は、小細胞肺癌腫および白血病／リンパ腫では比較的珍しい。ウエスタンブロット
によって判断されるとき最も多く発現している細胞株は、ＨＴ−１０８０（線維肉腫）、
ＢｘＰＣ−３（膵臓腺癌）、ＣＡＬ−１２Ｔ（非小細胞肺癌）、ＮＣＩ−Ｈ１２９９（非
小細胞肺癌）、ＴＫ１０（腎臓腺癌）、ＳＮＢ１９およびＵ２５１（神経膠芽腫）である
。
実施例５
ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウスにおけるＡ５４９非小細胞肺癌異種移植片に対するＧＢＲ５０
０の効果
Ｈａｒｌａｎ，ＩｔａｌｙからのＮｕ／Ｎｕ雄マウスを使用した。その動物を、水蒸気
オートクレーブされた（滅菌）寝わらを用いたケージ内に維持し、食餌および水を随意に
与えた。動物を、データシート上に見られる一意に番号付けされた耳タグによって特定し
た。腫瘍を移植した日の体重は：２４〜３１ｇだった。
群の数−処置スケジュール：
群の数は、４つだった。１群あたりの動物の数は、１０匹だった。表１０に記載される
レジメンに従って、腫瘍を移植した６日後に処置を開始し、２７日目まで続けた。
物質：
試験化合物は、使用するまで４℃の温度で保存し、光から保護した。試験化合物を、リ
ン酸緩衝食塩水中の０，０３％Ｔｗｅｅｎ−８０ＴＭに溶解し、正しい濃度に達するため
に使用する直前に希釈した（ＰＢＳ中にＩｇＧ４アイソタイプ、Ｈａ１／２９およびＧＢ
Ｒ５００；食塩水溶液中にＡｖａｓｔｉｎ（登録商標））。１０ｍｌ／ｋｇの体積で腹腔
内に（ＩＰ）処置を行った。
腫瘍：
Ａ５４９上皮（ｅｐｉｔｅｌｉａｌ）肺癌腫細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）番号：ＣＣ
Ｌ−１８５）を非小肺細胞癌に対する代表例として使用した。Ａ５４９異種移植片由来の
腫瘍フラグメントを、無胸腺ヌードマウスの左側腹部の皮下に移植した。腫瘍の外観につ
いて動物を定期的に調べた。測定可能な腫瘍が、マウスの大部分に確立されたら、１群あ
たり１０匹のマウス（１ケージあたり５匹のマウス）を目標として動物を処置群に割り当
てた。処置を開始したとき、平均腫瘍体積は、１２０ｍｍ３だった。
異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性および毒性の評価：
１週間に少なくとも２回、腫瘍の成長および正味の体重を評価した。腫瘍の成長は、カ
リパスによって評価した。腫瘍の寸法を、カリパスによって実験中に定期的に測定し、腫
瘍の質量を、以下のとおり計算した：
腫瘍組織については、密度ｄ＝１ｍｇ／ｍｍ３と仮定する。
体重の減少に基づいて毒性を評価した。腫瘍がマウスを妨害する体積に達したときに、
マウスを屠殺した。
結果および結論：
表１１から分かるように、抗体処置群の最大の抗腫瘍活性は、１７日目に観察され、腫
瘍重量阻害は、１８％および１１％だった（それぞれＨａ１／２９＋ＧＢＲ５００併用群
）。４０ｍｇ／ｋｇで投与されたＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）は、２８日目に２０％の腫
瘍成長阻害を示した。図９では、様々な処置群において観察された平均腫瘍成長の比較が
示されている。処置は、十分に耐容性を示し、実験中死亡したマウスは、処置群中には見
られなかった。処置中および処置後に窮迫の徴候は観察されず、著しい体重減少も観察さ
れなかった。
実施例６
カニクイザルにおけるＧＢＲ５００毒物動態学（ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｃｓ）
毒物動態学のエンドポイントを用いた６週間の毒性研究の一部として、およそ６０分間
にわたる緩徐な静脈内注入によってＧＢＲ５００をカニクイザルに投薬した。その動物に
、６週間にわたって１週間に１回投薬した（１、８、１５、２２、２９および３６日目）
。投薬群の割り当ておよび用量レベルを下記の表１２にまとめる：
１日目（投薬前、点滴の１５分後、４、８、２４、４８および１２０時間後、８日目（
投薬前、点滴の１５分後）、１５日目（投薬前、点滴の１５分後）、２２日目（投薬前、
点滴の１５分後）、２９日目（投薬前、点滴の１５分後）、３６日目（投薬前、点滴の１
５分後、４、８、２４、４８および１２０時間後）および５０、５７、６４、７１、７８
、８４、９１および９８日目に、動物から１ｍｌの血液サンプルを採取した。ＧＢＲ５０
０の濃度を、確証されたＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。
各動物の毒物動態学（ＴＫ）プロファイルを、確証されたコンピュータソフトウェア（
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ，バージョン３．２，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｕｎｔ
ａｉｎ Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を用いたＧＢＲ５００血清濃度のノ
ンコンパートメント（ｎｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ）解析によって特徴づけた。
血管投与経路および血清マトリックスに基づいてモデルを選択した。パラメータを推定す
る目的のために、１日目の時間０における濃度を０と仮定した。投薬前の時点において得
られた血清濃度値を、３６日目の時間０における濃度を推定するために使用した。
群４の回復動物について、半減期Ｔ１／２が、１９９〜３１６時間と推定され、分布容
積Ｖｚが、１０．１〜２３．６ｍＬ／ｋｇ、クリアランスＣＬが、０．０３〜０．６０ｍ
Ｌ／時／ｋｇと推定された。ＶｚおよびＣＬの推定値から、ＧＢＲ５００が、血漿を超え
て分布されず、血漿から非常にゆっくりとクリアランスされることが示唆された。図１０
Ａおよび１０Ｂは、雄および雌サルに対する１００ｍｇ用量群の濃度曲線を示している。
実施例７
ヒト線維肉腫細胞株上で発現されているヒトα２インテグリンとヒトコラーゲンとの相
互作用を阻害する際の抗α２インテグリン抗体の力価のインビトロ評価
材料および方法
フローサイトメトリーおよびコラーゲン結合阻害アッセイを、実施例１に記載したよう
に行った。線維肉腫細胞株ＨＴ−１０８０を本実験に使用した（表１３）。ＳＫ−ＢＲ−
３について記載したように、ＨＴ−１０８０をトリプシン処理することによりフローサイ
トメトリー用の細胞を調製した。
結果
ＨＴ−１０８０によるＶＬＡ−２発現は、高かった。
コラーゲン結合アッセイ
ＧＢＲ５００およびＴＭＣ−２２０６は、ヒトコラーゲンＩへのＨＴ−１０８０細胞の
結合を阻害した。
結論
線維肉腫細胞株ＨＴ−１０８０上のα２インテグリン発現を、蛍光標識されたＧＢＲ５
００抗体を用いて検出した。ＶＬＡ−２発現レベルは、高い。ＶＬＡ−２陽性細胞株ＨＴ
−１０８０は、ヒトコラーゲンＩ型に接着した。この結合は、ＶＬＡ−２抗体であるＧＢ
Ｒ５００およびＴＭＣ−２２０６によって阻害された。
実施例８
ｎｕ／ｎｕ無胸腺マウスにおけるＨＴ−１０８０線維肉腫異種移植片に対するＧＢＲ５
００の作用
Ｈａｒｌａｎ，ＩｔａｌｙからのＮｕ／Ｎｕ雄マウスを使用した。その動物を、水蒸気
オートクレーブされた（滅菌）寝わらを用いたケージ内に維持し、食餌および水を随意に
与えた。動物を、データシート上に見られる一意に番号付けされた耳タグによって特定し
た。腫瘍を移植した日の体重は：２４〜３１ｇだった。
群の数−処置スケジュール：
群の数は、４つだった。１群あたりの動物の数は、１０匹だった。表１６に記載される
レジメンに従って、処置を開始した。
物質：
試験化合物は、使用するまで４℃の温度で保存し、光から保護した。試験化合物を、リ
ン酸緩衝食塩水中の０，０３％Ｔｗｅｅｎ−８０ＴＭに溶解し、正しい濃度に達するため
に使用する直前に希釈した（ＰＢＳ中にＩｇＧ４アイソタイプ、Ｈａ１／２９およびＧＢ
Ｒ５００；食塩水溶液中にＡｖａｓｔｉｎ（登録商標））。１０ｍｌ／ｋｇの体積で腹腔
内に（ＩＰ）処置を行った。
腫瘍：
ＨＴ−１０８０線維肉腫細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）番号：ＣＣＬ−１２１）を使用
した。ＨＴ−１０８０異種移植片由来の腫瘍フラグメントを、無胸腺ヌードマウスの左側
腹部の皮下に移植した。腫瘍の外観について動物を定期的に調べた。測定可能な腫瘍が、
マウスの大部分に確立されたら、１群あたり１０匹のマウス（１ケージあたり５匹のマウ
ス）を目標として動物を処置群に割り当てた。処置を開始したとき、平均腫瘍体積は、約
３００ｍｍ３だった。
異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性および毒性の評価：
１週間に少なくとも２回、腫瘍の成長および正味の体重を評価した。腫瘍の成長は、カ
リパスによって評価した。腫瘍の寸法を、カリパスによって実験中に定期的に測定し、腫
瘍の質量を、以下のとおり計算した：
腫瘍組織については、密度ｄ＝１ｍｇ／ｍｍ３と仮定する。
体重の減少に基づいて毒性を評価した。腫瘍がマウスを妨害する体積に達したときに、
マウスを屠殺した。
結果および結論：
抗体を２回投与した後の１１日目において、Ａｖａｓｔｉｎによって、腫瘍の重量がコ
ントロールに対して３１．６％減少した。Ｈａ１／２９ ５ｍｇ／ＧＢＲ５００ ５ｍｇ
の併用によって、腫瘍重量が３．５％減少し、Ｈａ１／２９ ５ｍｇ／ＧＢＲ５００ ５
０ｍｇの併用によって、腫瘍重量が２７．７％減少した（表１７）。
処置は、十分に耐容性を示し、実験中死亡したマウスは、処置群中には見られなかった
。処置中および処置後に窮迫の徴候は観察されず、著しい体重減少も観察されなかった。

Claims (80)

  1. 扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む肺
    癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または
    胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌
    、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液
    腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様
    々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リ
    ンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度
    免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨ
    Ｌ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシ
    ュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）
    ；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；お
    よび移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、
    脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線
    維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置する方法であって、
    （ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ
    １（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬ
    ＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは
    （ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ａ）ＳＡＮ
    ＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選
    択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）Ｌ
    ＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む
    治療有効量のヒト化抗α２インテグリン抗体を被験体に投与する工程を包含する、方法。
  2. 前記重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、その配列中の３０位が、Ｔ
    ｈｒであり、そして／または３１位が、Ａｓｎである、請求項２に記載の方法。
  4. 前記重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、その配列中の（ａ）７１位
    が、Ｌｙｓであるか、（ｂ）７３位が、Ａｓｎであるか、（ｃ）７８位が、Ｖａｌである
    か、または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせである、請求項２に記載の方法。
  5. 前記重鎖可変領域が、配列番号７０〜７９および配列番号１０９〜１１１から選択される
    アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記重鎖可変領域が、配列番号７０〜７５、配列番号７７〜７９および配列番号１０９〜
    １１１から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  7. 前記重鎖可変領域が、アミノ酸配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）を含むＦＷ
    ４領域をさらに含む、請求項１に記載の方法。
  8. 前記重鎖可変領域が、ＨＣＤＲ１（配列番号１）、ＨＣＤＲ２（配列番号２）およびＨＣ
    ＤＲ３（配列番号３）のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  9. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、配列番号１８７を含む重鎖を含む、請求項１に記
    載の方法。
  10. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  11. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、その配列中のアミノ酸２６
    位のアスパラギン（Ｎ）が、グルタミン（Ｑ）によって置き換えられている、請求項１０
    に記載の方法。
  12. 前記軽鎖可変領域が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、その配列中の（ａ）２位が
    、Ｐｈｅであるか、（ｂ）４５位が、Ｌｙｓであるか、（ｃ）４８位が、Ｔｙｒであるか
    、または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせである、請求項１０に記載の方法。
  13. 前記軽鎖可変領域が、配列番号４１、配列番号８０〜９２および配列番号１０８から選択
    されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  14. 前記軽鎖可変領域が、配列番号９０〜９２から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１
    に記載の方法。
  15. 前記軽鎖可変領域が、アミノ酸配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３８）を含むＦＷ４
    領域をさらに含む、請求項１に記載の方法。
  16. 前記軽鎖可変領域が、ＬＣＤＲ１（配列番号４）、ＬＣＤＲ２（配列番号５）およびＬＣ
    ＤＲ３（配列番号６）のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  17. 前記軽鎖可変領域が、ＬＣＤＲ１（配列番号１１２）、ＬＣＤＲ２（配列番号５）および
    ＬＣＤＲ３（配列番号６）のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  18. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、配列番号１８８を含む軽鎖を含む、請求項１に記
    載の方法。
  19. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）Ｈ
    ＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮ
    ＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）ま
    たは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）またはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
    番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
    ５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
    軽鎖可変領域
    を含む、請求項１に記載の方法。
  20. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）（ａ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
    ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、
    配列番号３）または（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）またはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
    番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
    ５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
    軽鎖可変領域
    を含む、請求項１に記載の方法。
  21. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦ
    ＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番
    号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）ＬＣＤＲ１（ＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ、配列番号１１２）、ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫ
    ＬＡＳ；配列番号５）およびＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸
    配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１に記載の方法。
  22. （ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）前記軽鎖可
    変領域が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むか、または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方
    である、請求項１９に記載の方法。
  23. （ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、その配列中の３０位
    が、Ｔｈｒであり、そして／または３１位が、Ａｓｎであるか；（ｂ）前記軽鎖可変領域
    が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、その配列中のアミノ酸２６位のアスパラギン
    （Ｎ）が、グルタミン（Ｑ）によって置き換えられているか；または（ｃ）（ａ）と（ｂ
    ）の両方である、請求項１９に記載の方法。
  24. （ｉ）前記重鎖可変領域が、配列番号１８５のアミノ酸配列を含み、その配列中の（ａ）
    ７１位が、Ｌｙｓであるか、（ｂ）７３位が、Ａｓｎであるか、（ｃ）７８位が、Ｖａｌ
    であるか、または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせであるか；（ｉｉ）前記軽鎖
    可変領域が、配列番号１８６のアミノ酸配列を含み、その配列中の（ａ）２位が、Ｐｈｅ
    であるか、（ｂ）４５位が、Ｌｙｓであるか、（ｃ）４８位が、Ｔｙｒであるか、または
    （ｄ）（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせであるか；あるいは（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ
    ）の両方である、請求項１９に記載の方法。
  25. （ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号７０〜７９および配列番号１０９〜１１１から選択
    されるアミノ酸配列を含むか；（ｂ）前記軽鎖可変領域が、配列番号４１、配列番号８０
    〜９２および配列番号１０８から選択されるアミノ酸配列を含むか；または（ｃ）（ａ）
    と（ｂ）の両方である、請求項１９に記載の方法。
  26. （ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号７０〜７５、配列番号７７〜７９および配列番号１
    ０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含むか；（ｂ）前記軽鎖可変領域が、配列番
    号９０〜９２から選択されるアミノ酸配列を含むか；または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の両方
    である、請求項１９に記載の方法。
  27. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、配列番号１８７を含む重鎖および配列番号１８８
    を含む軽鎖を含む、請求項１９に記載の方法。
  28. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、配列番号１７４または配列番号１７６を含む重鎖
    および配列番号１７８を含む軽鎖を含む、請求項１９に記載の方法。
  29. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、ヒトα２インテグリンのＩドメインを認識する、
    請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、α２β１インテグリンに結合する、請求項１〜２
    ８のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、α２β１インテグリンリガンドへのα２またはα
    ２β１インテグリンの結合を阻害する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記α２β１インテグリンリガンドが、コラーゲン、ラミニン、エコーウイルス−１、デ
    コリン、Ｅ−カドヘリン、マトリックスメタロプロテアーゼＩ（ＭＭＰ−Ｉ）、エンドレ
    ペリン、コレクチンおよびＣ１ｑ補体タンパク質から選択される、請求項３１に記載の方
    法。
  33. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、α２インテグリンのエピトープに結合し、該エピ
    トープが：
    （ａ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の１９２位または配列
    番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の４０位に対応する
    Ｌｙｓ残基；
    （ｂ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の２２５位または配列
    番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の７３位に対応する
    Ａｓｎ残基；
    （ｃ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の２４１位または配列
    番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の８９位に対応する
    Ｇｌｎ残基；
    （ｄ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の２４５位または配列
    番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の９３位に対応する
    Ｔｙｒ残基；
    （ｅ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の３１７位または配列
    番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の１６５位に対応す
    るＡｒｇ残基；
    （ｆ）配列番号８に示されているα２インテグリンのアミノ酸配列の３１８位または配列
    番号１１に示されているα２インテグリンＩドメインのアミノ酸配列の１６６位に対応す
    るＡｓｎ残基；または
    （ｇ）（ａ）から（ｆ）の任意の組み合わせ
    を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、完全長抗体である、請求項１〜３３のいずれか１
    項に記載の方法。
  35. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が、抗原結合フラグメントである、請求項１〜３３の
    いずれか１項に記載の方法。
  36. 扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む肺
    癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または
    胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌
    、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液
    腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様
    々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リ
    ンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度
    免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨ
    Ｌ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシ
    ュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）
    ；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；お
    よび移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、
    脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線
    維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置する方法であって、
    （ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ
    １（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬ
    ＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは
    （ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳ
    ＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択
    されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣ
    ＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む治
    療有効量のヒト化抗α２インテグリン抗体ならびに薬学的に許容され得るキャリアを含む
    組成物を被験体に投与する工程を包含する、方法。
  37. 前記癌が、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌
    腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅ
    ｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣
    癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮
    癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌
    腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨ
    Ｌ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ
    ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核
    細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；および
    ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病
    （ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性
    白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な
    血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫および多
    発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、
    腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭
    頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、多発性骨髄腫、転移性結腸直腸癌および転移性乳
    癌からなる群より選択される、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記癌が、非小細胞肺癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌
    、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、中皮腫、線維肉腫、骨肉腫、類表皮癌腫、転移性結腸
    直腸癌、転移性前立腺癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項１〜３６の
    いずれか１項に記載の方法。
  40. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、線維肉腫、転移性結腸直腸
    癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の
    方法。
  41. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および線維肉腫からなる群よ
    り選択される、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記癌が、膵癌、乳癌または転移性乳癌である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の
    方法。
  43. 前記抗体または前記組成物が、静脈内注入または静脈内ボーラスによって投与される、請
    求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記治療有効量が、約０．１から約１００ｍｇ／ｋｇに及ぶ、請求項１〜４２のいずれか
    １項に記載の方法。
  45. 前記抗体または前記組成物が、２週間ごとに１回投与される、請求項１〜４２のいずれか
    １項に記載の方法。
  46. 前記方法が、（ａ）血小板活性化、（ｂ）血小板凝集、（ｃ）循環血小板数の減少、（ｄ
    ）出血性合併症、または（ｅ）（ａ）から（ｄ）の任意の組み合わせを伴わない、請求項
    １〜４２のいずれか１項に記載の方法。
  47. 前記抗体または前記組成物が、１つ以上の癌医薬と同時投与される、請求項１〜４６のい
    ずれか１項に記載の方法。
  48. 同時投与される前記１つ以上の癌医薬が、別の抗体、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、抗血
    管新生薬、免疫抑制剤、プロドラッグ、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト、細
    胞傷害性放射線治療、コルチコステロイド、制吐作用の癌ワクチン、鎮痛薬、抗血管剤ま
    たは成長抑制剤を含む、請求項４７に記載の方法。
  49. 扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む肺
    癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または
    胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌
    、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液
    腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様
    々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リ
    ンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度
    免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨ
    Ｌ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシ
    ュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）
    ；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；お
    よび移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、
    脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線
    維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置するための方法にお
    いて使用するための、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号
    ２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
    ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、
    配列番号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／
    または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
    番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
    ５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
    軽鎖可変領域を含むヒト化抗α２インテグリン抗体、あるいは該ヒト化抗α２インテグリ
    ン抗体および薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物。
  50. 前記癌が、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌
    腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅ
    ｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣
    癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮
    癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌
    腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨ
    Ｌ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ
    ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核
    細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；および
    ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病
    （ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性
    白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な
    血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫および多
    発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項４９に記載のヒト化抗α２インテグリン抗
    体または組成物。
  51. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、
    腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭
    頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、多発性骨髄腫、転移性結腸直腸癌および転移性乳
    癌からなる群より選択される、請求項４９に記載のヒト化抗α２インテグリン抗体または
    組成物。
  52. 前記癌が、非小細胞肺癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌
    、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、中皮腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫、転移性
    結腸直腸癌、転移性前立腺癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項４９に
    記載のヒト化抗α２インテグリン抗体または組成物。
  53. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、線維肉腫、転移性結腸直腸
    癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項４９に記載のヒト化抗α２インテ
    グリン抗体または組成物。
  54. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および線維肉腫からなる群よ
    り選択される、請求項４９に記載のヒト化抗α２インテグリン抗体または組成物。
  55. 前記癌が、膵癌、乳癌または転移性乳癌である、請求項４９に記載のヒト化抗α２インテ
    グリン抗体または組成物。
  56. 扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む肺
    癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または
    胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌
    、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液
    腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様
    々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リ
    ンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度
    免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨ
    Ｌ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシ
    ュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）
    ；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；お
    よび移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、
    脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線
    維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置するための医薬を調
    製するための、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）、
    （ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦ
    ＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番
    号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／または
    （ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号１
    １２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号５）お
    よび（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可
    変領域を含むヒト化抗α２インテグリン抗体、あるいは該ヒト化抗α２インテグリン抗体
    および薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物の使用。
  57. 前記癌が、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌
    腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅ
    ｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣
    癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮
    癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌
    腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨ
    Ｌ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ
    ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核
    細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；および
    ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病
    （ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性
    白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な
    血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫および多
    発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項５６に記載のヒト化抗α２インテグリン抗
    体または組成物の使用。
  58. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、
    腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭
    頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、多発性骨髄腫、転移性結腸直腸癌および転移性乳
    癌からなる群より選択される、請求項５６に記載のヒト化抗α２インテグリン抗体または
    組成物の使用。
  59. 前記癌が、非小細胞肺癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌
    、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、中皮腫、線維肉腫、骨肉腫、類表皮癌腫、転移性結腸
    直腸癌、転移性前立腺癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項５６に記載
    のヒト化抗α２インテグリン抗体または組成物の使用。
  60. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、線維肉腫、転移性結腸直
    腸癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項５６に記載のヒト化抗α２イン
    テグリン抗体または組成物の使用。
  61. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および線維肉腫からなる群よ
    り選択される、請求項５６に記載のヒト化抗α２インテグリン抗体または組成物の使用。
  62. 前記癌が、膵癌、乳癌または転移性乳癌である、請求項５６に記載のヒト化抗α２インテ
    グリン抗体または組成物の使用。
  63. ヒト患者における、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁
    平上皮癌腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃ
    ａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸
    癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫ま
    たは子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺
    癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ
    腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん
    性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切
    れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫
    ；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ
    性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨
    髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連す
    る異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫
    、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択される癌を処置
    するためのキットであって、該キットは、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳ
    ＡＬＭＳ、配列番号２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、Ｈ
    ＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤ
    ＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖
    可変領域ならびに／または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳ
    ＳＶＮＹＩＨ（配列番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳ
    ＫＬＡＳ；配列番号５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）の
    アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗α２インテグリン抗体を含むヒト化抗α
    ２インテグリン抗体組成物と、該処置のために該ヒト化抗α２インテグリン抗体を使用す
    るための指示書とを含むパッケージを備える、キット。
  64. 前記癌が、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌
    腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅ
    ｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣
    癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮
    癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌
    腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨ
    Ｌ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ
    ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核
    細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；および
    ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病
    （ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性
    白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な
    血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫および多
    発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項６３に記載のキット。
  65. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、
    腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭
    頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、多発性骨髄腫、転移性結腸直腸癌および転移性乳
    癌からなる群より選択される、請求項６３に記載のキット。
  66. 前記癌が、非小細胞肺癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌
    、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、中皮腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫、転移性
    結腸直腸癌、転移性前立腺癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項６３に
    記載のキット。
  67. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、非小細胞肺癌、線維肉腫、結腸直腸癌、転移性結腸直腸
    癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項６３に記載のキット。
  68. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および線維肉腫からなる群よ
    り選択される、請求項６３に記載のキット。
  69. 前記癌が、膵癌、乳癌または転移性乳癌である、請求項６３に記載のキット。
  70. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）（ａ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
    ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、
    配列番号３）または（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）またはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
    番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
    ５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
    軽鎖可変領域
    を含む、請求項６３に記載のキット。
  71. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦ
    ＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番
    号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）ＬＣＤＲ１（ＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ、配列番号１１２）、ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫ
    ＬＡＳ；配列番号５）およびＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸
    配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項６３に記載のキット。
  72. ヒト化抗α２インテグリン抗体、容器およびラベルを含む製品であって、該ヒト化抗α２
    インテグリン抗体は、（ａ）ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号
    ２）、（ｂ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
    ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、
    配列番号３）もしくは（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ならびに／
    または（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）もしくはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
    番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
    ５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
    軽鎖可変領域を含み、該ラベルは、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺
    癌および肺の扁平上皮癌腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａ
    ｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経
    膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、
    子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰
    部の癌、甲状腺癌、肝癌腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非
    ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；
    中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高
    悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤ
    Ｓ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ
    腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル
    白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに
    母斑症に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラ
    ノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫からなる群より選択
    される癌を処置するために該ヒト化抗α２インテグリン抗体を使用することを示している
    、製品。
  73. 前記癌が、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌
    腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅ
    ｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣
    癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーム、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮
    癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部の癌、甲状腺癌、肝癌
    腫および様々なタイプの頭頸部癌、ならびに低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨ
    Ｌ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ
    ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核
    細胞性ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；および
    ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含むＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病
    （ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性
    白血病；および移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な
    血管増殖、脳腫瘍に関連するような浮腫、メイグス症候群、メラノーマ、中皮腫および多
    発性骨髄腫からなる群より選択される、請求項７２に記載の製品。
  74. 前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、
    腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭
    頸部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、多発性骨髄腫、転移性結腸直腸癌および転移性乳
    癌からなる群より選択される、請求項７２に記載の製品。
  75. 前記癌が、非小細胞肺癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌
    、結腸直腸癌、腎臓癌、前立腺癌、中皮腫、線維肉腫、骨肉腫および類表皮癌腫、転移性
    結腸直腸癌、転移性前立腺癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項７２に
    記載の製品。
  76. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、線維肉腫、転移性結腸直腸
    癌および転移性乳癌からなる群より選択される、請求項７２に記載の製品。
  77. 前記癌が、膵癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および線維肉腫からなる群よ
    り選択される、請求項７２に記載の製品。
  78. 前記癌が、膵癌、乳癌または転移性乳癌である、請求項７２に記載の製品。
  79. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）（ａ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡ
    ＲＧＦＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、
    配列番号３）または（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）（ａ）ＳＡＮＳＳＶＮＹＩＨ（配列番号４）またはＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ（配列
    番号１１２）から選択されるＬＣＤＲ１、（ｂ）ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ；配列番号
    ５）および（ｃ）ＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸配列を含む
    軽鎖可変領域
    を含む、請求項７２に記載の製品。
  80. 前記ヒト化抗α２インテグリン抗体が：
    （ｉ）ＨＣＤＲ１（ＧＦＳＬＴＮＹＧＩＨ、配列番号１）、ＨＣＤＲ２（ＶＩＷＡＲＧＦ
    ＴＮＹＮＳＡＬＭＳ、配列番号２）およびＨＣＤＲ３（ＡＮＤＧＶＹＹＡＭＤＹ、配列番
    号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに
    （ｉｉ）ＬＣＤＲ１（ＳＡＱＳＳＶＮＹＩＨ、配列番号１１２）、ＬＣＤＲ２（ＤＴＳＫ
    ＬＡＳ；配列番号５）およびＬＣＤＲ３（ＱＱＷＴＴＮＰＬＴ、配列番号６）のアミノ酸
    配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項７２に記載の製品。
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