JP2014525458A - アレルギー患者を有効かつ迅速に脱感作するための方法 - Google Patents

Abstract

抗原への将来的な曝露に対して患者を脱感作する用量において、リンパ系へ抗原を送達するための方法および組成物が、開発された。迅速な脱感作は、リンパ系への少量の抗原の導入によって達成される。好ましい実施形態において、上記組成物は、リンパ内で治療上有効なレベルの抗原を得るために投与され、ここでマクロファージは、例えば、マイクロニードルもしくは微粒子を使用した皮内投与、例えば、腸溶性コーティングされたカプセル剤もしくは錠剤を使用した経口投与、または自己輸血によって、最大濃度において存在する。いくつかの実施形態において、抗原を経口送達するための方法および組成物は、小腸のパイエル板による取り込みを達成する。

Description

（関連出願の引用）
本願は、２０１１年８月３１日に米国特許商標庁に出願した米国仮出願第６１／５２９，４７９号に対する優先権を主張する。米国仮出願第６１／５２９，４７９号の開示は、本明細書に参考として援用される。

（発明の分野）
本発明は、一般に、アレルゲンへの耐性を誘導する組成物の分野にある。

（発明の背景）
米国における人々のうちの５５％は、１種以上のアレルゲンに対して試験陽性である。喘息アレルギー財団によれば、アレルギーは、米国における慢性疾患の最も一般的な原因の第５位であり、小児では第３位である。約１０００万人の米国人が、ネコの鱗屑に対してアレルギーがある。２００７年当時、アレルギー患者のうちの約７％は、皮膚アレルギーを有し、６％は、食物アレルギーを有し、そして４％は、昆虫アレルギーを有する。

アレルゲン免疫療法（アレルギーショットとしても公知）は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、結膜炎（眼のアレルギー）もしくは刺咬昆虫アレルギー（ｓｔｉｎｇｉｎｇ ｉｎｓｅｃｔ ａｌｌｅｒｇｙ）を有する多くの人々の症状を低下させる長期処置の一形態である。アレルギーショットは、アレルゲンへの感受性を低下させ、しばしば、処置を停止した後ですらアレルギー症状軽減の持続をもたらす。このことは、アレルギーショットを多くの人々にとってコスト効率的で有益な処置アプローチにする。

アレルギーショットは、ワクチンのように作用する。身体は、免疫グロブリンＧ（「ＩｇＧ」）をＩｇＥの代わりに生成することによって、上記アレルゲンに対する免疫もしくは耐性を発生させることによって、徐々に増大する用量において与えられる特定のアレルゲンの注射された量に応答する。アレルギーショットは、食物アレルギーを処置するためには使用されない。食物アレルギーを有する人々にとっての最良の選択肢は、その食物を厳密に避けることである。

２つの相がある：
増量相（Ｂｕｉｌｄ−ｕｐ ｐｈａｓｅ）。 これは、１週間につき１回〜２回、上記アレルゲンの漸増量の注射を受けることを包含する。この相の長さは、上記注射をどの程度の頻度で受けるかに依存するが、一般には、３〜６ヶ月の範囲に及ぶ。

維持相。 これは、一旦有効用量に達した後に始まる。上記有効な維持用量は、アレルゲン感受性のレベルおよび上記増量相に対する応答に依存する。上記維持相の間には、処置間に、２〜４週間の範囲に及ぶ、より長い期間が存在する。症状は、上記増量相の間に低下し得るが、改善に気づくには、上記維持用量に際して１２ヶ月程度の長期かかり得る。アレルギーショットが成功裏であれば、維持処置は、一般に、３〜５年間継続される。アレルギーショットは、多くのアレルギーの症状を低下させることが示された。それは、新たなアレルギーの発生を防止し得、小児においては、アレルギー性鼻炎から喘息までアレルギー性疾患の進行を防止し得る。アレルギーショットの有効性は、処置プログラムの長さ、および上記アレルゲンの用量に関連するようである。ある人々は、アレルギー症状の持続した軽減を経験する一方で、他の人々は、アレルギーショットを止めた後に再発し得る。

アレルギーは、Ｔｈ２に重きを置いた不均衡と考えられ、Ｔｈ２リンパ球によって生成されるサイトカイン（インターロイキン４、５、および１３が挙げられる）は、ＩｇＥの助長およびアトピーにおける好酸球応答と関連付けられた。非特許文献１（Ｂｅｒｇｅｒ， ＢＭＪ， ３２１：４２４．１ （２０００））。アレルギー性Ｔｈ２応答をＴｈ１応答に好都合にさせる方法は、アレルギー反応の発生率を低下させるにあたって有益なはずである。

まとめると、アレルゲンへの耐性を誘導するためのよりよくかつ侵襲性の少ない手段が必要である。アレルゲンに対する迅速で有効な脱感作は、慢性患者が被っている甚だしい負担を緩和する、重要な、未だ対処されていない医療的な必要性である。

従って、本発明の目的は、アレルゲンへの耐性を誘導するための方法および組成物を提供することである。

Ｂｅｒｇｅｒ， ＢＭＪ， ３２１：４２４．１ （２０００）

（発明の要旨）
抗原への将来的な曝露に対して患者を脱感作する用量においてリンパ系に抗原を送達するための方法および組成物が、開発された。迅速な脱感作は、リンパ系へ少量の抗原を導入することによって達成される。好ましい実施形態において、上記組成物は、マクロファージが最高濃度において存在するリンパ内に、治療上有効なレベルの抗原を提供する。上記組成物は、皮内に、例えば、マイクロニードルもしくは微粒子を介して、経口的に、例えば、腸溶性コーティングされたカプセル剤もしくは錠剤を介して、または自己輸血によって、投与され得る。

いくつかの実施形態において、抗原を経口的に送達するための方法および組成物は、小腸のパイエル板による取り込みを達成する。いくつかの実施形態において、抗原に曝されるマクロファージの集団は、患者への自己輸血のために全血もしくは分画した血液において単離される。

いくつかの実施形態において、組成物は、好ましくは、上記アレルゲンに特異的な免疫グロブリンＥレベルを顕著に増大させることなく、上記アレルゲンに特異的な免疫グロブリンＧレベルを増大させる。他の実施形態において、上記組成物は、Ｔｈ２応答（例えば、Ｔｈ２タイプサイトカイン）の低下および／もしくはＴｈ１応答（例えば、Ｔｈ１タイプサイトカイン）の増大によって測定される場合、アレルギー脱感作を改善する。

図１は、アレルゲン脱感作のためのオボアルブミン−キトサン微粒子のコールター粒子サイジングデータを示す。

（発明の詳細な説明）
Ｉ．定義

本明細書で使用される場合、「迅速な脱感作」とは、処置の非存在下より迅速にアレルゲンのうちの１つもしくは群への耐性を増大させることをいう。

本明細書で使用される場合、用語「耐性」とは、特定の量のアレルゲンへのアレルギー応答のレベルをいう。

本明細書で使用される場合、用語「抗原」とは、リンパ系に導入される場合に、一部の分子もしくは複数の分子に結合する抗体の生成を誘導する、単独の物質もしくは組み合わせの物質をいう。

本明細書で使用される場合、用語「アレルゲン」とは、患者においてアレルギー反応を引き起こし得る物質をいう。

本明細書で使用される場合、用語「アレルギー反応」とは、アレルゲンに対する任意の都合の悪い応答をいう。

本明細書で使用される場合、「リンパ系」とは、脈管を含むリンパのネットワークをいう。

本明細書で使用される場合、用語「皮内」とは、皮膚の皮層内に、または表皮層と真皮層との間に存在することをいう。

本明細書で使用される場合、用語「マイクロニードル」とは、その最大軸が長さ３ｍｍより短い、ヒト表皮に貫通し得る突出物をいう。

本明細書で使用される場合、「鋭いマイクロニードル」とは、ヒト表皮に貫通し得る任意のマイクロニードルをいう。

本明細書で使用される場合、用語「微粒子」とは、少なくとも一つの寸法がサイズ１ｍｍより小さい任意の形状の粒子をいう。

本明細書で使用される場合、「自己輸血」とは、注射もしくは静脈内注入によって、それを採取した患者に戻される全血サンプルもしくは分画血液サンプルをいう。

本明細書で使用される場合、「円相当径」とは、測定される対象と同じ断面積を有する円の直径をいう。

本明細書で使用される場合、「レザバタイプ送達システム」とは、送達システムの各別個のエレメント内に１種もしくは複数の抗原が豊富な領域および抗原が不十分な領域を含む製剤をいう。

本明細書で使用される場合、「マトリクスタイプ送達システム」とは、上記送達システムの各別個のエレメント内に抗原の無作為な分布を含む製剤をいう。

本明細書で使用される場合、用語「生分解性」とは、細胞含有環境へと導入した際に分子量の低下を受ける材料のクラスをいう。

本明細書で使用される場合、用語「生体接着性」とは、１種以上の生物学的基材へ接着する材料のクラスをいう。

本明細書で使用される場合、用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫学的応答を増大させる任意の薬剤をいう。

本明細書で使用される場合、用語「先端半径（ｔｉｐ ｒａｄｉｕｓ）」とは、微細構造体の最小面と断面積が等価な円の半径をいう。

本明細書で使用される場合、用語「微小柱状物（ｍｉｃｒｏｐｉｌｌａｒ）」とは、その幅より長く、別の微細構造を機械的に支持する任意の微細構造体をいう。

本明細書で使用される場合、「腸溶性コーティング」とは、概して、上記抗原のうちの少なくとも１０％が、小腸へと活性形態において送達されるように、十分に長期間にわたって、ヒトの胃内での酸分解から抗原を保護し得る任意の材料をいう。本明細書で使用される場合、「腸溶性保護ポリマー」とは、概して、上記抗原のうちの少なくとも１０％が、小腸へと活性形態において送達されるように、十分に長期間にわたって、ヒトの胃内での酸分解から抗原を保護する任意のポリマーをいう。

本明細書で使用される場合、用語「カプセル材料（ｅｎｃａｐｓｕｌａｎｔ）」とは、別の物質をカプセル化する任意の材料をいう。

本明細書で使用される場合、「水溶性ポリマー」とは、ポリマーの量のうちの１０％より多くが、ある体積の水もしくは水性流体中の溶液に入るポリマーのクラスをいう。

本明細書で使用される場合、「ｐＨ感受性ポリマー」とは、ｐＨ依存性溶解性プロフィールを示すポリマーのクラスをいう。

本明細書で使用される場合、「酵素分解性ポリマー」とは、１種以上の酵素の存在下で化学的に変更される領域を含むポリマーのクラスをいう。

本明細書で使用される場合、「酵素切断性ポリマー」とは、分子量の低下を生じるように酵素分解されるポリマーのクラスをいう。

本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」とは、ペプチド結合によって連結される少なくとも２つ任意のアミノ酸もしくはアミノ酸誘導体をいう。

本明細書で使用される場合、用語「瀉血（ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｙ）」とは、患者から血液サンプルを得る任意の手段をいう。

本明細書で使用される場合、用語「正味電荷変更剤」とは、溶液もしくは懸濁物の正味電荷を一時的もしくは永久的に変える任意の化合物をいう。

ＩＩ．組成物
Ａ．アレルゲン
耐性を誘導するための臨床的に利用可能なアレルゲンが、利用され得る。例としては、以下が挙げられる：落花生アレルゲン（落花生粉、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ １ （Ａｒａ ｈ １）、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ １（Ａｒａ ｈ２）が挙げられるが、これらに限定されない）；ネコのアレルゲン（Ｆｅｌｉｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓアレルゲン１〜４（Ｆｅｌ Ｄ１、Ｆｅｌ Ｄ２、Ｆｅｌ Ｄ３、Ｆｅｌ Ｄ４）、およびネコＩｇＡが挙げられるが、これらに限定されない）；チリダニ（ｈｏｕｓｅ ｄｕｓｔ ｍｉｔｅ）アレルゲン（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓグループ１および２アレルゲン（ＤＥＲ ｐ１およびＤＥＲ ｐ２）が挙げられるが、これらに限定されない）；他のハウスダストアレルゲン（例えば、ハウスダストエンドトキシン）；花粉アレルギー（ｐｏｌｌｅｎ ａｌｌｅｒｇｉｅｓ）（Ｂｅｔ ｖおよびＢｅｔ ｖ２が挙げられるが、これらに限定されない）；ハチ刺傷アレルゲン（例えば、主要なハチ毒アレルゲンのうちの１つであるホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２））、スズメバチアレルゲン；ゴキブリキノコ体傘部（ｃｏｃｋｒｏａｃｈ ｃａｌｙｘ）、ペニシリン、スルホンアミド、サリチレート、卵白、花粉、またはこれらの誘導体。米国特許第８，１８２，８０５号（Ｖｉｓｋａｒｉ， ｅｔ ａｌ．）は、調節性Ｔ細胞および／もしくはＴｈ１／Ｔｈ２バランスおよび／もしくはＩＬ−１０のような免疫調節性サイトカインの生成に対するそれらの効果によって同定される、アレルギー感作を低下させるために有用なエンテロウイルスを開示する。

Ｂ．製剤
特定の実施形態において、上記抗原は、溶液状態で送達される。他の実施形態において、上記抗原は、懸濁状態で送達される。

微粒子
上記抗原が懸濁状態で送達される実施形態において、上記抗原は、微粒子の集団のうちの少なくとも７０％、より好ましくは、上記集団のうちの少なくとも８０％、および最も好ましくは、上記マイクロスフェアの集団のうちの少なくとも９０％が、マクロファージもしくは樹状細胞によってファゴサイトーシスされるために十分小さく、かつ他の細胞タイプによる都合の悪いアレルギー応答を引き起こすために十分な量においてエンドサイトーシスされるには大きすぎるように、製剤化される。具体的実施形態において、上記抗原の微粒子は、マクロファージ飲み込みのための適切なサイズ範囲にある。すなわち、上記微粒子は、１〜１０ミクロンの間、より好ましくは２〜９ミクロンの間、および最も好ましくは３〜６ミクロンの間の平均円相当径を有する。

特定の実施形態において、上記微粒子の集団の平均直径（不規則な形状をした微粒子の場合、直径とは、等価な断面積の円の直径をいう）は、２〜９ミクロンの間、より好ましくは３〜８ミクロンの間、および最も好ましくは３〜６ミクロンの間である。特定の実施形態において、投与される抗原マイクロスフェアの集団内の上記直径（もしくは円相当径）の分布のうちの少なくとも７０％、より好ましくは８０％、および最も好ましくは９０％は、１〜１０ミクロン、より好ましくは２〜９ミクロン、および最も好ましくは３〜６ミクロンの範囲内にある。

いくつかの実施形態において、ポリマー中にカプセル化された抗原の微粒子は、レザバタイプもしくはマトリクスタイプの送達システムとして経口投与される。上記微粒子は、以下の技術のうちの１つもしくは組み合わせによって製作される（エマルジョン溶媒エバポレーション（ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）、ダブルエマルジョン溶媒エバポレーション（ｄｏｕｂｌｅ ｅｍｕｌｓｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）、イオン性ゲル化（ｉｏｎｉｃ ｇｅｌａｔｉｏｎ）、コアセルベーション、膜乳化、臨界流体マイクロカプセル化（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）、スプレー乾燥、およびホットメルトマイクロカプセル化（ｈｏｔ ｍｅｌｔ ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）が挙げられるが、これらに限定されない）。

いくつかの実施形態において、上記抗原は、水溶性ポリマー、もしくはその組み合わせ（例えば、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デンプン、デキストラン、アルブミン、およびアルギン酸ナトリウム）内にマイクロカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、あるｐＨにおいて保存され、皮内環境に入った後に溶解するｐＨ感受性ポリマー（例えば、アクリル酸およびメタクリル酸のポリマーブレンド、改変コラーゲン、ならびに改変された架橋および非架橋ポリアクリル酸のようなもののうちのいずれか、もしくはその組み合わせ）中にマイクロカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、生分解性ポリマー、もしくはその組み合わせ（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、もしくはポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸のようなポリヒドロキシ酸、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリホスフェートエステル、ポリカプロラクトン、およびポリグリセロールセバシン酸）中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、生体接着性ポリマー、もしくはその組み合わせ（例えば、ポリフマル酸−ｃｏ−セバシン酸無水物、キトサン、ポリエチレンマレイン酸無水物、カテコール官能性ポリマー（ｃａｔｅｃｈｏｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｏｌｙｍｅｒ）、およびレクチン）中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、マクロファージリソソーム酵素による分解に感受性の酵素切断性ポリマー中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記酵素切断性ポリマーは、リソソーム中に見いだされる酵素（例えば、酸ヒドロラーゼおよびセリンプロテアーゼ）によって切断されるペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗原は、ヒドロゲルポリマー（例えば、アルギン酸カルシウム、キトサンおよびキトサン誘導体複合体（例えば、アルギネート−キトサン）、ポリエチレングリコール、ならびにポリ−２−ヒドロキシエチルメタクリレート）中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、ポリアミノ酸もしくはその組み合わせ（例えば、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸、およびポリグルタミン酸）中にマイクロカプセル化される。

いくつかの実施形態において、上記抗原を含むポリマー微粒子は、腸溶性コーティングされたカプセル剤もしくは錠剤内において投与される。いくつかの実施形態において、上記ポリマーカプセル材料は、腸溶性保護ポリマー（例えば、以下のうちの１つもしくは組み合わせ（Ｅｕｄｒａｇｉｔ^{（登録商標）}Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ^{（登録商標）}Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ^{（登録商標）}Ｓ１００、および改変コラーゲンが挙げられるが、これらに限定されない））である。いくつかの実施形態において、上記抗原は、水溶性ポリマー内にマイクロカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、あるｐＨにおいて保存され、皮内環境に入った後に溶解するｐＨ感受性ポリマー（例えば、以下のうちの組み合わせ（アクリル酸およびメタクリル酸のポリマーブレンド、改変コラーゲン、ならびに改変された架橋および非架橋ポリアクリル酸が挙げられるが、これらに限定されない））中にマイクロカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、生分解性ポリマー（例えば、以下の任意の組み合わせ（ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリホスフェートエステル、ポリカプロラクトン、およびポリグリセロールセバシン酸を含むが、これらに限定されない）中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、生体接着性ポリマー（例えば、以下の任意の組み合わせ（ポルフマル酸−ｃｏ−セバシン酸無水物、キトサン、ポリエチレンマレイン酸無水物、カテコール官能性ポリマー、およびレクチンを含むが、これらに限定されない））中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、マクロファージリソソーム酵素による分解に感受性である酵素切断性ポリマー中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記酵素切断性ポリマーは、リソソーム中に見いだされる酵素（例えば、以下の任意の組み合わせ（酸ヒドロラーゼおよびセリンプロテアーゼを含むが、これらに限定されない））によって切断されるペプチド配列を含む。

いくつかの実施形態において、微小カプセルからの上記抗原の放出は、マクロファージのファゴサイトーシス小胞（例えば、ファゴソームおよびファゴリソソーム）内に存在する酵素もしくは酵素群によって特異的に分解されるカプセル化材料を使用して、達成され得る。いくつかの実施形態において、上記抗原含有微粒子は、上記マクロファージが、注射後に概して全身循環を出てリンパに戻ってきた後に、抗原を放出するように合わせて作られた分解速度論を示し、いくつかの実施形態においては、微粒子は、注射後２日以内に上記抗原のうちの２５％未満、より好ましくは注射後２日以内に上記抗原のうちの１５％未満、および最も好ましくは注射後２日以内に上記抗原のうちの１０％未満を放出する。

具体的実施形態において、上記カプセル化材料は、キトサンもしくはキトサン誘導体（例えば、アルギネート−キトサン）を含み得る。キトサンおよびキトサン誘導体は、マクロファージ細胞体内のリゾチームによる分解の基質である。リゾチームは、ファゴリソソーム（ここで上記抗原は、微小カプセルのファゴサイトーシスの後に、上記キトサンもしくはキトサン誘導体ポリサッカリドの骨格に沿ってβ１，４−β−結合の分解によって経時的に微小カプセルから放出される）内に最高濃度で存在する。これらマクロファージは、その後、リンパ内に遊離抗原のいくらかを放出する。

ヒドロゲル
いくつかの実施形態において、上記抗原は、ヒドロゲルポリマー（例えば、以下の任意の組み合わせ（アルギン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、およびポリ−２−ヒドロキシエチルメタクリレートが挙げられるが、これらに限定されない））中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、ポリアミノ酸中にマイクロカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、各微粒子全体に物理的に混合されるか、またはコア−殻形態を形成するかいずれかの、１つもしくは複数の群から、上記ポリマーのうちの１種より多くの中にカプセル化される。いくつかの実施形態において、上記抗原は、アジュバント賦形剤とともに送達される。いくつかの実施形態において、上記アジュバントは、正味電荷変更剤（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタメート、およびアスパルテートを含む荷電したアミノ酸のうちの１つもしくは組み合わせであるが、これらに限定されない）である。

Ｃ．アジュバント
マクロファージによる取り込みは、上記微小カプセルの表面を、アポトーシス細胞のファゴサイトーシスを誘発することに関与する「スカベンジャーレセプター」（ＳＲ−ＡＩおよびＳＲ−ＡＩＩもしくはＣＤ３６が挙げられるがこれらに限定されない）で修飾することによって促進され得る。別の実施形態において、上記微小カプセル表面を、マクロファージ表面タンパク質（例えば、Ｆ４／８０、マクロシアリン（Ｍａｃｒｏｓｉａｌｉｎ）（ＦＡ−１１）、シアロアドヘシン（Ｓｉａｌｏａｄｈｅｓｉｎ）（ＳＥＲ−４，３Ｄ６）、マンノースレセプター、もしくはデクチン−１）に対する抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、もしくはアプタマーで機能化することは、微小カプセルのファゴサイトーシス取り込みを増強するために使用され得る。

いくつかの実施形態において、上記抗原は、アジュバントとともに送達される。アジュバントとしては、高度に荷電したポリマー（例えば、キトサンおよびポリリジン）が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、正味電荷変更剤（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタメート、およびアスパルテートを含む荷電したアミノ酸のうちの１種もしくは組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）は、マクロファージ飲み込みを促進するために、上記アレルゲン懸濁物もしくは溶液に組み込まれる。

ＩＩＩ．投与方法およびその使用のためのデバイス
Ａ．処置される個体および処置レジメン
処置される患者

処置される個体は、アレルゲンに対する感受性を被る任意の患者を含む。具体的実施形態において、患者は、食物アレルギー、環境アレルギー、チリダニアレルギー、昆虫刺咬アレルギー、およびペットアレルギーのうちのいずれかもしくはその組み合わせを被り得る。

治療レジメン
上記処置モダリティーのうちのいずれか１つもしくは組み合わせは、３ヶ月間にわたって１ヶ月に１回、より好ましくは３〜６ヶ月間にわたって１ヶ月に２回、および最も好ましくは４２日間の期間にわたって１４日ごとに、患者に投与される。いくつかの実施形態において、上記治療レジメンは、アレルゲン耐性を誘導するために、免疫グロブリンＥレベルを顕著に増大させることなく、上記患者内の免疫グロブリンＧレベルを増大させる。他の実施形態において、上記組成物は、低下したＴｈ２応答（例えば、Ｔｈ２タイプサイトカイン）および／もしくは増大したＴｈ１応答（例えば、Ｔｈ１タイプサイトカイン）によって測定される場合、アレルギー脱感作を改善する。例えば、上記治療レジメンは、Ｔｈ２応答を低下させ得、そして／またはＴｈ１応答を増大させ得る。これら実施形態において、上記処置レジメンは、Ｔｈ１応答を、例えば、インターフェロンγならびに／またはインターロイキン１０および／もしくは１２の生成を増大させることによって、増大させる。Ｇｅｒａｄａ， ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ， １３：３５５（９２１６）：１６８０−３（２０００）。上記処置レジメンは、アトピーにおけるＩｇＥ応答および好酸球応答の促進と関連付けられたＴｈ２タイプサイトカイン（例えば、インターロイキン４、５、および１３）を低下させ得る。Ｂｅｒｇｅｒ， ＢＭＪ， ３２１：４２４．１ （２０００）。

Ｂ．投与経路
薬学的に受容可能な賦形剤は、特定の投与経路に適切に利用される。例えば、注射には、上記製剤は、滅菌食塩水、水もしくはリン酸緩衝化食塩水中で製剤化され得る。あるいは、ヒドロゲルもしくは乾燥粒子が注射されてもよいし、移植されてもよいし、マイクロニードルで挿入されてもよい。

マイクロニードルを使用する皮内送達
好ましい実施形態において、抗原は、中空マイクロニードルを通して、高圧の皮内注射によって送達される。上記高圧は、皮膚の中に小空間（ｐｏｃｋｅｔ）を作るために必要である。高圧の皮内薬物送達は、当該分野で公知であり、例えば、Ｇｕｐｔａ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｍａｔｅｉａｌｓ， ３２：６８２３−６８３１ （２０１１）および米国特許出願公開第２００９/０１５７０４１号（これらの内容は、本明細書に参考として援用される）に記載される。いくつかの実施形態において、１本もしくは複数本の中実マイクロニードルは、上記抗原を皮内に送達するために使用される。これら実施形態において、上記抗原は、マトリクスタイプもしくはレザバタイプの送達システムとして、生分解性もしくは非分解性の裏打ち支持層によって支持される場合に表皮を貫通し得る生分解性ポリマー微細構造内体に製剤化される。最小限の力で表皮貫通を達成するために、上記微細構造体の先端半径は、２５ミクロン未満かもしくはこれにほぼ等しく、より好ましくは１０ミクロン未満かもしくはこれにほぼ等しく、そして最も好ましくは５ミクロン未満かもしくはこれにほぼ等しい。

これら実施形態において、上記抗原は、マトリクスタイプもしくはレザバタイプの送達システムとして、生分解性もしくは非分解性の裏打ち支持層によって支持される場合に表皮を貫通し得る生分解性ポリマー微細構造体内に製剤化される。最小限の力で表皮貫通を達成するために、上記微細構造の先端半径は、２５ミクロン未満かもしくはこれにほぼ等しく、より好ましくは１０ミクロン未満かもしくはこれにほぼ等しく、そして最も好ましくは５ミクロン未満かもしくはこれにほぼ等しい。

具体的実施形態において、以下の技術（例えば、微小成形、湿式エッチング、乾式エッチング、およびレーザー切断）のうちの１つもしくは組み合わせは、上記抗原を、鋭い微細構造の分解性もしくは水溶性のポリマーへと製作するために使用される。上記鋭い生分解性ポリマー微細構造体は、同じもしくは類似の材料、または金属製微小柱状支持体のアレイのような非分解性支持体のいずれかによって、支持される。上記デバイスが皮膚内へと配置される場合、それは表皮を貫通し、真皮に接触するかもしくは真皮に入る。各個々のマイクロニードルは、長さが約２．５ｍｍ、より好ましくは１．５ｍｍ未満、および最も好ましくは１ｍｍ未満である。特定の実施形態において、上記抗原を含む上記マイクロニードルアレイの生分解性もしくは水溶性の成分のうちの一部もしくは全体は、上記裏打ちの除去後に、真皮内に残る。

マクロファージおよび樹状細胞によるファゴサイトーシスを促進するために、上記真皮に残っている生分解性もしくは水溶性の部分は、１〜１０ミクロンの間、より好ましくは２〜９ミクロンの間、および最も好ましくは３〜６ミクロンの間の平均円相当径（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｃｉｒｃｌｅ ｍｅａｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有する。

具体的実施形態において、以下の技術（例えば、微小成形、湿式エッチング、乾式エッチング、およびレーザー切断）のうちの１つもしくは組み合わせは、上記抗原を、鋭い微細構造の生分解性もしくは水溶性のポリマーへと製作するために使用される。上記鋭い生分解性ポリマー微細構造体は、同じもしくは類似の材料、または金属製微小柱状支持体のアレイのような非分解性支持体のいずれかによって、支持される。上記デバイスが皮膚へと配置される場合、それは表皮を貫通し、真皮に接触するかもしくは真皮に入る。各個々のマイクロニードルは、長さが約２．５ｍｍ、より好ましくは１．５ｍｍ未満、および最も好ましくは１ｍｍ未満である。特定の実施形態において、上記抗原を含む上記マイクロニードルアレイの生分解性もしくは水溶性の成分のうちの一部もしくは全体は、上記裏打ちの除去後に、真皮内に残る。

マクロファージおよび樹状細胞によるファゴサイトーシスを促進するために、上記真皮に残っている生分解性もしくは水溶性の部分は、１〜１０ミクロンの間、より好ましくは２〜９ミクロンの間、および最も好ましくは３〜６ミクロンの間の平均円相当径（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｃｉｒｃｌｅ ｍｅａｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有する。いくつかの実施形態において、正味電荷変更剤（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、グルタメート、およびアスパルテートを含む荷電したアミノ酸のうちの１種もしくは組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）は、マクロファージ飲み込みを促進するために、上記アレルゲンの懸濁物もしくは溶液に組み込まれる。

経口送達
いくつかの実施形態において、抗原の微粒子は、腸溶性コーティングされたカプセル剤もしくは錠剤において経口送達される。

自己注入治療
いくつかの実施形態において、抗原もしくはポリマーカプセル化抗原の微粒子は、上記患者の血液から補充されるマクロファージへと送達され、次いで、注射もしくは注入によって、上記患者に戻される。全血が、瀉血によって上記患者から得られる。いくつかの実施形態において、上記マクロファージは、組織培養ポリスチレンもしくはマクロファージが接着される別の材料にプレーティングすることによって、上記全血から分離される。抗原もしくはポリマーカプセル化抗原の微粒子は、ファゴサイトーシスに適切なサイズ範囲で、上記マクロファージへと懸濁状態で導入される。上記マクロファージがアレルギー脱感作レジメンの一部として治療上の量を飲み込むために十分な時間の後、上記自己マクロファージは、注射もしくは静脈内注入によって、上記患者へと再導入される。

提唱される機構は、マクロファージ、皮膚にある樹状細胞、および回腸にあるパイエル板が、リンパへと上記粒子を輸送し、そこでＴ細胞およびＢ細胞が抗体生成をし始め得ることである。

この目的のためのキットは、粒状形態にカプセル化された抗原を含むヘパリン処理済み真空収集チューブ、生理的温度（例えば、３７℃）でのインキュベーションのためのヒートブロック、インキュベーション後に残っている小さな自由に懸濁しているマイクロカプセルを血液から分離するシリンジ連結フィルタ、および上記細胞を上記患者へと注射し戻すための再懸濁緩衝液を含み得る。一実施形態において、上記加熱要素は、ペルチエ加熱および冷却デバイスである；別の実施形態において、上記加熱要素は、抵抗加熱器である。一実施形態において、自由に懸濁した抗原微粒子からのマクロファージの分離は、サイズ排除によって起こる。別の実施形態において、自由に懸濁した抗原微粒子からのマクロファージの分離は、上記微粒子と上記マクロファージとの間の密度差に基づいて起こる。

本発明は、以下の非限定的実施例によってさらに理解される。

実施例１：抗原送達のためのキトサン微粒子

７５％より大きく脱アセチル化された低分子量キトサンを、１％ 氷酢酸水溶液に溶解して、５ｍｇ／ｍＬのキトサン水溶液を作った。１％ オボアルブミン、０．１％ トリポリリン酸ナトリウムの水溶液９ｍＬを、上記５ｍｇ／ｍＬのキトサン水溶液１８ｍＬへとボルテックスしながら滴下した。

得られた微粒子を、図１に示されるように、コールター粒子サイズ分析によってサイズ分けした。見かけの直径が約２ミクロンである微粒子の集団を単離するために、得られた集団を、１ミクロンフィルタを通して濾過して、オボアルブミンに対するアレルギー脱感作に適切な微粒子を生成する。

本発明の改変およびバリエーションは、前述の説明から明らかであり、以下の特許請求の範囲内に入ると意図される。

Claims (22)

1. 高圧適用によって中空マイクロニードルを通して１種以上の抗原を送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法。
2. 前記抗原は、落花生粉、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ １（Ａｒａ ｈ１）、Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ ２（Ａｒａ ｈ２）、Ｆｅｌ Ｄ１、Ｆｅｌ Ｄ２、Ｆｅｌ Ｄ３、Ｆｅｌ Ｄ４、ｃａｔ ＩｇＡ、ＤＥＲ ｐ１、ＤＥＲ ｐ２、Ｂｅｔ ｖ１、Ｂｅｔ ｖ２、ＰＬＡ２、ハチ刺傷アレルゲン、スズメバチアレルゲン、ゴキブリキノコ体傘部、ペニシリン、エンテロウイルス、スルホンアミド、サリチレート、卵白、花粉、ハウスダストエンドトキシンもしくはそれらの誘導体のうちの１種もしくは組み合わせである、請求項１に記載の方法。
3. 高圧適用によって懸濁状態もしくは溶液状態の１種以上の抗原を送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法。
4. 前記アレルゲンは、微粒子の集団として送達され、ここで該微粒子のうちの少なくとも７０％、より好ましくは８０％、および最も好ましくは９０％が、円相当径において１〜１０ミクロンである、請求項１に記載の方法。
5. 前記アレルゲンは、１〜１０ミクロン、より好ましくは２〜９ミクロン、最も好ましくは３〜６ミクロンの範囲の平均円相当径を有する微粒子の集団として送達される、請求項１に記載の方法。
6. 前記微粒子は、４８時間以内に前記抗原のうちの２５％未満、より好ましくは１５％未満、および最も好ましくは１０％未満を放出する、請求項１に記載の方法。
7. 高圧適用によって中空マイクロニードルを通して溶液状の１種以上のマイクロカプセル化抗原を皮内に送達する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
8. 高圧適用によって中空マイクロニードルを通して懸濁状態の１種以上のマイクロカプセル化抗原を皮内に送達する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
9. 前記抗原は、ポリマーマトリクスもしくは殻中にマイクロカプセル化され、ここで該ポリマーは、水溶性であるか、ｐＨ感受性であるか、生分解性であるか、生体接着性であるか、またはマクロファージもしくは樹状細胞のリソソーム内で主に見いだされる酵素によって切断される、請求項１に記載の方法。
10. 前記ポリマーは、ポリアミノ酸のうちの１種もしくは組み合わせである、請求項９に記載の方法。
11. 中実マイクロニードルアレイを介して皮内送達される生分解性もしくは水溶性のポリマーのかえしの中で１種以上の抗原を送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法であって、ここで該抗原含有かえしは、裏打ちしかつ支える微細構造体に結合される、方法。
12. 前記抗原含有かえしのうちの少なくとも約７０％、より好ましくは８０％、最も好ましくは９０％は、前記裏打ちしかつ支える微細構造体が除去された後に、皮膚に存在する、請求項１１に記載の方法。
13. 適用後に皮膚中に残っているかえしの集団のうちの少なくとも７０％、より好ましくは８０％、最も好ましくは９０％が１〜１０ミクロンの間、より好ましくは２〜９ミクロンの間、および最も好ましくは３〜６ミクロンの間の円相当径を有する、請求項１１に記載の方法。
14. 腸溶性コーティングされたカプセル剤もしくは錠剤内で、乾燥散剤として、または懸濁物状で、１種以上の抗原を経口的に送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法。
15. 患者から獲得したマクロファージを、全血もしくは分画した血液中で抗原微粒子に曝露し、次いで、注射もしくは静脈内注入によって該患者に再導入することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法。
16. 患者から獲得したマクロファージを、全血もしくは分画した血液中でマイクロカプセル化抗原微粒子に曝露し、次いで、注射もしくは静脈内注入によって該患者に再導入することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法。
17. 正味電荷変更剤は、マクロファージ飲み込みを促進するために添加される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 前記正味電荷変更剤は、荷電したアミノ酸のうちの１つもしくは組み合わせである、請求項１７に記載の方法。
19. 請求項１〜１８のいずれか１項に記載のいずれかの、リンパ系に抗原を送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法であって、該方法は、１６８日間、より好ましくは８４日間、および最も好ましくは４２日間の期間にわたって１４日間ごとに１回、または３〜１２ヶ月間、より好ましくは３〜６ヶ月間、および最も好ましくは３ヶ月間の期間にわたって１ヶ月に１回、該アレルゲンを投与する工程を包含する、方法。
20. 請求項１〜１９のいずれか１項に記載の、リンパ系に抗原を送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法であって、該方法は、単一用量において、または複数用量スキームの治療利益を達成する放出制御製剤を使用して、該アレルゲンを投与する工程を包含する、方法。
21. 請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法によって、リンパ系に抗原を送達することによって、患者をアレルゲンに対して脱感作するための方法であって、ここで免疫グロブリンＥレベルを２倍より高く増大させることなく、免疫グロブリンＧレベルにおける３倍より高い増大が存在する、方法。
22. 請求項１〜２１に記載の方法のいずれかにおいて使用するための組成物。

Images