JP2013525491A - 心血管障害を治療または予防し心血管保護を提供する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、治療、予防および／または寛解を必要とするヒトにおける少なくとも１つの心血管障害を治療、予防および／または寛解する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法を提供する。

Description

関連出願の参照

本国際出願は、２０１０年５月４日に出願された米国特許仮出願第６１／３３１，０１０号明細書、２０１０年６月１日に出願された同第６１／３５０，１４４号明細書、および２０１０年１２月１４日に出願された同第６１／４２２，７０１号明細書の優先権を主張し、該仮出願のすべては参照によりそれら全体が本明細書に取り込まれる。

本発明は、ＧＬＰ‐１活性を有する化合物および／またはＧＬＰ‐１アゴニストを使用して、心血管障害を治療または予防し、および／または心血管保護を提供する方法および医薬組成物に関する。

血中グルコース濃度を下げるために、血糖降下薬が１型および２型糖尿病の両方の治療に使用されうる。インスリン分泌促進ペプチドは、糖尿病治療の可能性のある治療薬とされてきた。インスリン分泌促進ペプチドとしては、例えば胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴン様ペプチド‐１（ＧＬＰ‐１）といったインクレチンホルモン、ならびにその断片、変異体、および／または抱合体が挙げられるが、これらに限定されない。また、インスリン分泌促進ペプチドとして、例えばエキセンディン３およびエキセンディン４が挙げられる。ＧＬＰ‐１は、食品の摂取に応えてＬ細胞によって腸内に分泌される天然の３６アミノ酸長インクレチンホルモンである。ＧＬＰ‐１は、生理的およびグルコース依存的にインスリン分泌を刺激し、グルカゴン分泌を減少し、胃内容排出を阻害し、食欲を減少し、β細胞の増殖を刺激することが示されている。非臨床的な実験において、ＧＬＰ‐１は、グルコース依存インスリン分泌に重要な遺伝子の転写を刺激すること、およびベータ細胞新生を促進することによって、継続したベータ細胞応答能を促進する（Meier, et al. Biodrugs. 2003; 17 (2): 93-102）。

健常な人において、ＧＬＰ‐１は、膵臓によるグルコース依存インスリン分泌を刺激することによって食後の血液グルコースレベルを調整する重要な役割を果たし、結果として末梢でのグルコース吸収の増加をもたらす。また、ＧＬＰ‐１は、グルカゴン分泌を抑制し、肝臓のグルコース生産の減少につながる。くわえて、ＧＬＰ‐１は、胃内容排出を遅延させ、小腸運動性を遅くして、食品吸収を遅延させる。

ＧＬＰ‐１の主要な生理作用は、血糖管理と関連するが、ＧＬＰ‐１が心血管生理においても重要な役割を果たしうることを示す証拠が増えてきている。また、ＧＬＰ‐１受容体は、心血管組織にも発現され、アゴニストによるＧＬＰ‐１受容体の活性化は、広範囲の心血管系作用をもたらす（Grieve, et al., British Journal of Pharmacology. 2009;157(8):1340）。最近になって、ＧＬＰ‐１が、生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）（Ban, et al., Circulation. 2008;117:2340）および生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）（Bose, et al., Diabetes. 2005;54:146.）の両方において、心筋虚血再かん流傷害に対して心臓を保護することが示された。さらに重要なことには、７２時間のＧＬＰ‐１の短期間注入は、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）をもつ患者における心機能を著しく改善することが報告されており、ＧＬＰ‐１および模倣剤が、心不全に対する新規の治療方法として使用されうることを示唆している（Sokos, et al., J Card Fail. 12:694 (2006)）。

自然のＧＬＰ‐１は、極めて短い血清半減期（＜５分）を有する。したがって、現在のところ、自然のＧＬＰ‐１を体外から投与することは、糖尿病に対する治療的な処置として実現可能ではない。エクセナチド（バイエッタ（Ｂｙｅｔｔａ）（商標））のような市販のインクレチン模倣剤は、Ｔ２ＤＭをもつ患者に皮下投与（５μｇまたは１０μｇ、ＢＩＤ）したとき、絶食中および食後のグルコース濃度を減じることによって、血糖管理を改善する。

アルビグルタイドは、二量体としてＤＰＰ‐ＩＶ抵抗型のペプチドのヒトアルブミンへの遺伝子融合を通して合成される新規のＧＬＰ‐１類似体であり、約５〜７日の半減期で長く続くＧＬＰ‐１活性を提供する。

よって、治療を提供することができ、および／また心筋虚血または他の心血管障害からの心血管保護を提供することができる長く続くインクレチン模倣剤およびＧＬＰ‐１アゴニストが必要である。

ＳＤラットにおける１５ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイド単回皮下注射投薬後の薬物動態プロファイル。虚血再かん流傷害試験投与量は、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇ投与量パラダイムのモデリングに基づいて選択された。 心筋虚血再かん流（Ｉ／Ｒ）傷害プロトコール。動物は、Ｉ／Ｒ傷害の４８、２４、および２時間前に投薬された。左冠動脈前下行枝は、３０分間閉塞され、その後、２４時間再かん流された。血液および心臓は、試験終了時に採取された。 リスクのある領域および梗塞染色の領域を描写する心臓の横断面を示す。心筋梗塞領域は、白に染色され（ＴＴＣ陰性）、虚血性の領域は、赤に染色され、および非虚血性の領域は、紺青色に染色された。５つの薄片すべての梗塞サイズの合計が、全体的なリスク領域および虚血性の領域を、リスクのある左室領域の％割合として決めるのに使用された。 アルビグルタイド（１、３および１０ｍｇ／ｋｇ）の左室梗塞サイズへの効果。３０分間虚血および２４時間再かん流後の左室リスク領域は、群の間で類似しており、動物は、類似した虚血性傷害に供されたことを示す。３０分間虚血および２４時間再かん流後の左室リスク領域の％割合として示された心筋梗塞サイズ。データは、平均値±ＳＥＭとして表わされる。＊ｐ＜０．０５ 対ビヒクル；＊＊ｐ＜０．０１ 対ビヒクル。 アルビグルタイドに対するさらなる対照として、組み換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）が、心虚血再かん流傷害モデルにおいて検討された。使用投与量は、２．７ｍｇ／ｋｇ（３ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイドに相当する投与量）であり、図２に概説したように投与した。３０分間虚血および２４時間再かん流後、心筋梗塞サイズは、左室リスク領域の％割合として示された。データは、平均値±ＳＥＭとして表わされる。 心筋虚血‐再かん流傷害前、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇにてのアルビグルタイド投薬の２日間にわたる体重変化および摂餌量測定。データは、平均値±ＳＥＭとして表わされる。＊＊ｐ＜０．０１ 対ビヒクル。 図７（Ａ〜Ｇ）は、心機能および高エネルギー代謝産物を示す。 生体内２‐デオキシグルコース実験概略プロトコール。 実験プロトコール中の日々の体重変化が示される。データは、平均値±ＳＥＭとして表わされる。＊＊＊Ｐ＜０．００１ ビヒクルおよびアルビグルタイド治療ラットの心臓における、生体内での心臓の２‐デオキシグルコース取り込み。データは、平均値±ＳＥＭとして表わされる。＊Ｐ＜０．０３ 生体外心臓のグルコース代謝実験概略プロトコール。 摘出されたかん流心臓の調製の概略図（再循環モード）。グルコースおよび乳酸は、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ６４０分析器を使用して測定された。グルコース取り込み＝（グルコース_初期−グルコース_終期）×かん流容量／心湿重量（ｇ）／時間（ｈ）。乳酸流出＝（乳酸_初期−乳酸_終期）×かん流容量／心湿重量（ｇ）／時間（ｈ） ランゲンドルフ（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ）かん流された心臓セットアップにおける、６０分かん流時間中の心臓によるグルコース取り込みおよび乳酸生産（流出）。データは、平均値±ＳＥＭとして表わされる。＊Ｐ＜０．０５ 正常ラット心臓における生体内での中間グルコース代謝。 生体外乳酸処理。 配列番号１；アルビグルタイドの一次配列。

本発明の１つの実施形態では、ヒトにおける少なくとも１つの心血管障害を治療、予防および／または寛解する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。１つの実施形態では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

別の実施形態では、ヒトにおける心臓組織でのグルコース代謝を制御する方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を、それを必要とする前記ヒトに投与することを含んでなる方法が、提供される。１つの実施形態では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

別の実施形態では、それを必要とするヒトにおける心機能を増加する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。１つの実施形態では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

別の実施形態では、ヒトにおける梗塞サイズを減少する方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。１つの実施形態では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

別の実施形態では、ヒトに心血管保護を提供する方法であって、前記ヒトに、アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。ある例では、ヒトは２型糖尿病を有する。

定義
本明細書において使用される「ＧＬＰ‐１アゴニスト」とは、インクレチンホルモンならびに／またはその断片、変異体および／もしくは抱合体、ならびにインクレチン模倣剤ならびに／またはその断片、変異体および／もしくは抱合体を含むが、これらに限定されない、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を刺激すること、ならびに／または有することができる任意の化合物または組成物を意味する。

本明細書において使用される「インクレチンホルモン」とは、インスリン分泌を高めるか、またはそうでなければインスリンのレベルを上げる任意のホルモンを意味する。インクレチンホルモン一例が、ＧＬＰ‐１である。ＧＬＰ‐１は、食品の摂取に応えて腸Ｌ細胞によって分泌されるインクレチンである。健常な人において、ＧＬＰ‐１は、膵臓によるグルコース依存インスリン分泌を刺激することによって食後の血液グルコースレベルを調整する重要な役割を果たし、結果として末梢でのグルコース吸収の増加をもたらす。また、ＧＬＰ‐１は、グルカゴン分泌を抑制し、肝臓のグルコース生産の減少につながる。くわえて、ＧＬＰ‐１は、胃内容排出時間を遅延させ、小腸運動性を遅くして、食品吸収を遅延させる。ＧＬＰ‐１は、グルコース依存インスリン分泌にかかわる遺伝子の転写を刺激すること、およびベータ細胞新生を促進することによって、継続したベータ細胞応答能を促進する（Meier, et al. Biodrugs. 2003; 17 (2): 93-102）。

本明細書において使用される「ＧＬＰ‐１活性」とは、血中および／または血漿グルコースを減少させること、グルコース依存インスリン分泌を刺激するか、またはそうでなければインスリンのレベルを上げること、グルカゴン分泌を抑制すること、フルクトサミンを減少させること、脳へのグルコース送達および代謝を増加すること、胃内容排出を遅延すること、ならびにベータ細胞応答能および／または新生を促進することを含むが、これらに限定されない１つ以上の天然のヒトＧＬＰ‐１の活性を意味する。これらの活性およびのＧＬＰ‐１活性に関連する他の活性のいずれも、ＧＬＰ‐１活性を有する組成物またはＧＬＰ‐１アゴニストによって直接的または間接的に引き起こされうる。例として、ＧＬＰ‐１活性を有する組成物は、グルコース依存インスリン分泌を直接的または間接的に刺激しうる一方、インスリン生産の刺激は、哺乳類における血漿グルコースレベルを間接的に減少しうる。

本明細書において使用される「インクレチン模倣剤」は、インスリン分泌を高めるか、またはそうでなければインスリンのレベルを上げることができる化合物である。インクレチン模倣剤は、インスリン分泌を刺激すること、ベータ細胞新生を増加すること、ベータ細胞アポトーシスを阻害すること、グルカゴン分泌を阻害すること、胃内容排出を遅延すること、および哺乳類における満腹を誘導することができうる。インクレチン模倣剤としては、限定されないがその任意の断片および／または変異体および／または抱合体を含むエキセンディン３およびエキセンディン４を含む、ＧＬＰ‐１活性を有する任意のポリペプチドが挙げられうるが、これらに限定されない。

本明細書において使用される「血糖降下薬」とは、血中グルコースを減少することができる化合物を含んでなる任意の化合物または組成物を意味する。血糖降下薬としては、インクレチンホルモンまたはインクレチン模倣剤、ＧＬＰ‐１ならびに／またはその断片、変異体および／もしくは抱合体を含む任意のＧＬＰ‐１アゴニストが挙げられうるが、これらに限定されない。他の血糖降下薬としては、インスリン分泌を増加する薬（例えば、グリピジドグリピジド、クロルプロパミド、グリメピリドを含むスルホニル尿素（ＳＵ）およびメグリチニド）、ＧＬＰ‐１分解を阻害する薬（例えば、ＤＰＰ‐ＩＶ阻害剤）、グルコース利用を増加する薬（例えば、グリタゾン、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）および／またはｐＰＡＲアゴニスト）、肝グルコース生産を減少する薬（例えば、メトホルミン）、ならびにグルコース吸収を遅延する薬（例えば、α‐グルコシダーゼ阻害剤）が挙げられるが、これらに限定されない。スルホニル尿素としては、例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、トラザミド、グリピジド、グリクラジド、グリベンクラミド（グリブリド）、グリキドン、およびグリメピリドが挙げられるが、これらに限定されない。グリタゾンおよび／またはチアゾリジンジオンとしては、例えば、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンが挙げられるが、これらに限定されない。他の血糖降下薬としては、アルファ‐グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール）；ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤（例えば、シタグリプチン、サクサグリプチン）；麦角アルカロイド（例えば、プリモクリプチン）；およびビグアナイド（ｂｉｑｕａｎｉｄｅｓ）（例えば、メトホルミン）；メグリチニド（例えば、ナテグリニド、レパグリニド）；ならびに上記の組合せ薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。

「ポリヌクレオチド」とは、一般に、改変されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または改変されたＲＮＡもしくはＤＮＡでありうる任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域または一本鎖、二本鎖および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ１本鎖、またはより典型的に二本鎖もしくは三本鎖領域、または一本鎖および二本鎖領域の混合物でありうるＤＮＡおよびＲＮＡを含んでなる混成分子が挙げられるが、これらに限定されない。くわえて、本明細書において使用される「ポリヌクレオチド」とは、ＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮＡおよびＤＮＡ両方を含んでなる三本鎖領域を指す。そのような領域中の鎖は、同一分子からまたは異なる分子からでありうる。また、本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、１つ以上の修飾された塩基を含んでなる上記のＤＮＡまたはＲＮＡを含みうる。三重らせん領域の分子の１つは、しばしばオリゴヌクレオチドである。また、本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、１つ以上の修飾された塩基を含んでなる上記のＤＮＡまたはＲＮＡを含む。よって、安定性または他の理由で修飾された骨格をもつＤＮＡまたはＲＮＡは、その用語が本明細書において意図されたように、「ポリヌクレオチド」である。そのうえ、ほんの２例を挙げると、イノシンのようなまれな塩基、またはトリチル化塩基のような修飾された塩基を含んでなるＤＮＡまたはＲＮＡは、その用語が本明細書において使用されるように、ポリヌクレオチドである。当業者に公知の多くの有用な目的を果たす、非常にさまざまな修飾がＤＮＡおよびＲＮＡになされていることが理解されよう。本明細書において用いられているように「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリヌクレオチドのそのような化学的、酵素的、または代謝的に修飾された形態、ならびに例えば、単純および複雑型細胞を含むウイルスおよび細胞の特徴を示すＤＮＡおよびＲＮＡの化学形態を包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる短いポリヌクレオチドを包含する。

「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すなわち、ペプチドイソスターによって互いにつながれた２つ以上のアミノ酸を含んでなる任意のペプチドまたはタンパク質を指す。「ポリペプチド」は、通常、ペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと呼ばれる短い鎖、および一般に、タンパク質と呼ばれるより長い鎖の両方を指す。ポリペプチドは、遺伝子によりコードされる２０のアミノ酸以外のアミノ酸を含みうる。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセシングのような自然のプロセス、または当該技術分野において周知である化学修飾技術のいずれかによって修飾されたアミノ酸配列を含む。そのような修飾は、基本的な教科書、より詳細なモノグラフ、および膨大な研究文献に十分に記載されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端を含む、ポリペプチドのどこにでも起こることができる。あるポリペプチドにおいて、同一タイプの修飾が、同じまたはさまざまな度合いで数個の部位に存在しうることが理解されよう。また、あるポリペプチドは多くのタイプの修飾を含有しうる。ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分岐されることがあり、それらは分岐をもつまたはもたない環状でありうる。環状、分岐および分岐環状ポリペプチドは、翻訳後の自然プロセスに起因しうるか、または合成法によって作られうる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合構造、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ‐カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化のような転移ＲＮＡにより媒介されるアミノ酸のタンパク質への添加、およびユビキチン化が挙げられる。例えば、PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd Ed., T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, New York, 1993 and Wold, F., Posttranslational Protein Modifications: Perspectives and Prospects, pgs. 1-12 in POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEINS, B. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York, 1983; Seifter, et al., "Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors", Meth. Enzymol. (1990) 182:626-646 and Rattan, et al., “Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging", Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照されたい。

「変異体」とは、その用語が本明細書において使用されるように、それぞれ、基準ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、本質的な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。ポリヌクレオチドの典型的な変異体は、ヌクレオチド配列の点でもう一方の基準ポリヌクレオチドと異なる。その変異体のヌクレオチド配列中の変更は、基準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を改変することもしないこともありうる。以下に述べるように、ヌクレオチドの変更は、基準配列によってコードされるポリペプチド中のアミノ酸の置換、付加、削除、融合および切断をもたらしうる。ポリペプチドの典型的な変異体は、アミノ酸配列の点でもう一方の基準ポリペプチドと異なる。一般には、基準ポリペプチドおよび変異体の配列は、全体的に極めて類似し、多くの領域では同一であるように、差異が制限される。変異体および基準ポリペプチドは、１つ以上の置換、付加、削除の任意の組み合わせによって、アミノ酸配列の点で異なりうる。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコード化されたものであることもないこともありうる。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体は、対立遺伝子変異体のような天然のものでありうるか、または天然に起こることが知られていない変異体でありうる。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非天然の変異体は、突然変異生成技術または直接合成によって作られうる。また、変異体としては、１つ以上のそのアミノ酸側基の化学修飾を有するポリペプチドまたはその断片が挙げられるが、これらに限定されない。化学修飾としては、化学部分を付加すること、新しい結合を創り出すこと、および化学部分を取り除くことが挙げられるが、これらに限定されない。アミノ酸側基においての修飾としては、リジン‐ε‐アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジン、またはリジンのＮ‐アルキル化、グルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボン酸基のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミノ化が挙げられるが、これらに限定されない。末端アミノ基の修飾としては、ｄｅｓ‐アミノ、Ｎ‐低級アルキル、Ｎ‐ジ‐低級アルキル、およびＮ‐アシル修飾が挙げられるが、これらに限定されない。末端カルボキシ基の修飾としては、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド、および低級アルキルエステル修飾が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、１つ以上の側基、または末端基は、タンパク質化学分野技術者に公知の保護基によって保護されうる。

本明細書において使用される場合、「断片」は、ポリペプチドに関して使用されるとき、全天然のポリペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるがすべてとは同一ではないアミノ酸配列を有するポリペプチドである。断片は、「独立」でありうるか、または単一のより大きいポリペプチド中の単一の連続した領域として部分または領域を形成する、より大きいポリペプチド内に含まれてなりうる。例として、天然のＧＬＰ‐１の断片は、天然のアミノ酸１〜３６のアミノ酸７〜３６を含むことになる。さらに、ポリペプチドの断片はまた、天然の部分的な配列の変異体でもありうる。例えば、天然のＧＬＰ‐１のアミノ酸７〜３０を含んでなるＧＬＰ‐１の断片はまた、その部分的な配列内にアミノ酸置換を有する変異体でありうる。

本明細書において使用する場合、「抱合体」または「抱合された」とは、互いに結合された２分子を指す。例えば、第一のポリペプチドが、共有結合的または非共有結合的に、第二のポリペプチドに結合される。その第一のポリペプチドは、化学リンカーによって共有結合的に結合されうるか、または遺伝学的に第二ポリペプチドに融合され、そこにおいて第一および第二ポリペプチドは、共通のポリペプチド骨格を共有する。

本明細書において使用する場合、「直列に配向された（ｔａｎｄｅｍｌｙ ｏｒｉｅｎｔｅｄ）」とは、同一分子の一部として、互いに隣接する２つ以上のポリペプチドを指す。それらは、共有結合的または非共有結合的のいずれかで連結されうる。直列に配向された２つ以上のポリペプチドは、同一のポリペプチド骨格の一部を形成しうる。直列に配向されたポリペプチドは、順もしくは逆方向を有し、および／または他のアミノ酸配列によって隔てられうる。

本明細書で使用される場合、血中または血漿グルコースを「減少する」または「減少すること」とは、血糖降下薬を投与した後に対象の血液において観察される血中グルコースの量の減少を指す。血中または血漿グルコースの減少は、個人毎に、または対象群の平均変化として測定および評価されることができる。くわえて、血液または血漿グルコース平均減少は、基準値からの平均変化として、および／またはプラシーボを投与された対象の血中または血漿グルコースの平均変化と比較された平均変化として、治療された対象群について測定および評価されることができる。

本明細書において使用される場合、「心血管保護」、「心保護」およびその文法的派生語は、既存の心血管疾患もしくは障害の治療および／または管理、ならびに将来の心血管疾患もしくは障害の予防および／または既存の疾患もしくは障害の心血管症状の悪化の予防を指す。心血管保護は、例えば、既存の心血管疾患もしくは障害の症状の緩和、ならびに／または心臓組織でのグルコース代謝の調節、心機能の増加、運動能力の改善、ならびに／または心事故の頻度および／もしくは重症度の減少によって観察されうる。

本明細書において使用する場合、「梗塞サイズを減少する」とは、冠動脈閉塞より遠位の領域における左室に心筋細胞アポトーシスおよび／または壊死を減少することを含むが、これらに限定されない局所虚血に起因する心血管組織における凝固および／または壊死の領域の減少を指す。

本明細書において使用される場合、「強心剤」とは、任意の心血管疾患または障害の治療、寛解または予防に対して投与されうるあらゆる薬剤を指す。強心剤としては、単独または互いに組み合せて投与されうる１つ以上の以下の薬剤：ベータアドレナリン受容体拮抗剤（アテノロール、ビソプロロール、カルベジロール、エスモロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ピンドロール、プロプラノロールを含む）；ベータアドレナリン受容体アゴニスト（ドブタミン、ドーパミン、エピネフリン、ノルエピネフリン、フェニレフリンを含む）；ホスホジエステラーゼ‐３阻害剤（アムリノン、ミルリノンを含む）；ホスホジエステラーゼ‐５阻害剤（シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィルを含む）；アンジオテンシン変換酵素阻害剤（ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、ホシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、トランドラプリルを含む）；アンジオテンシン受容体遮断薬（カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、バルサルタンを含む）；レニン拮抗剤；ヒドララジン；ニトロプルシド；ネシリチド；ラノラジン；シロスタゾール；カルシウムチャネル遮断薬（ジルチアゼム、ベラパミル、アムロジピン、ニフェジピン、ニカルジピン、フェロジピン、ニソルジピン（ｎｉｓｌｏｄｉｐｉｎｅ）を含む）；ジゴキシン；クマジン；ヘパリン；抗血小板薬（アスピリン、ジピリダモール、クロピドグレル、プラスグレル、チクロピジンを含む）；グリコプロテインＩＩｂ／ＩＩＩａ拮抗剤（アブシキシマブ、チロフィバン、エプチフィバチドを含む）；血栓溶解薬（アルテプラーゼ、レテプラーゼ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、テネクテプラーゼを含む）；スピロノラクトン；利尿剤（フロセミド、ブメタニド、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、アセタゾラミド、エタクリン酸を含む）；硝酸薬（二硝酸イソソルビド、一硝酸イソソルビド、ニトログリセリンを含む）；スタチン（アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンを含む）；エゼチミブ；フィブラート（ベザフィブラート（ｂｅｚｆｉｂｒａｔｅ）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジルを含む）；および抗不整脈薬（アミオダロン、ジソピラミド、ドロネダロン、フレカイニド、プロカインアミド、プロパフェノン、キニジン、ソタロールを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書において使用する場合、「ＧＬＰ‐１活性を増強する」とは、いくらかのおよび／またはすべての自然のＧＬＰ‐１に関連する活性の増加を指す。例として、ＧＬＰ‐１活性を増強することは、ＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドの対象への投与後に測定され、同じ対象におけるＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドの投与前のＧＬＰ‐１活性と比較、またはプラシーボを投与された第二の対象と比較されることができる。

本明細書において使用される場合、「高血中グルコースに関連した疾患」は、１型および２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、代謝障害、およびアルツハイマー病が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書において使用される場合、「同時投与」または「同時投与すること」とは、本明細書において使用されるように、同じ患者への２つ以上の化合物の投与を指す。そのような化合物の同時投与は、同時もしくはほとんど同時（例えば、１時間内）でありうるか、または互いに数時間もしくは数日以内でありうる。例えば、第一の化合物は、週に１回投与されうる一方で、第二の化合物は、毎日同時投与される。

本明細書において使用される場合、「最大血漿濃度」または「Ｃｍａｘ」とは、哺乳類への物質の投与後、その哺乳類血漿における物質（例えば、ＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドまたはＧＬＰ‐１アゴニスト）の最も高い観察濃度を意味する。

本明細書において使用される場合、「濃度曲線下面積」または「ＡＵＣ」は、血漿中の物質の濃度の時間に対するプロットの曲線の下の面積である。ＡＵＣは、時間区間中の瞬間濃度の積分の尺度であることができ、単位、質量×時間／容積を有し、ｎＭ×日のようなモル濃度×時間として表わされることもできる。ＡＵＣは、典型的には、台形法（例えば、線形、線形対数）によって算出される。ＡＵＣは、通常、ゼロから無限大の時間区間について与えられ、他の時間区間（例えば、ＡＵＣ（ｔ１，ｔ２）、ここでｔ１およびｔ２は、区間の開始および終了時間である）が示される。よって、本明細書において使用されるように、「ＡＵＣ_０‐_２４ｈ」とは、２４時間にわたるＡＵＣを指し、「ＡＵＣ_０‐_４ｈ」は、４時間にわたるＡＵＣを指す。

本明細書において使用される場合、「加重平均ＡＵＣ」は、ＡＵＣが計算される時間にわたる時間区間で除されたＡＵＣである。例えば、加重平均ＡＵＣ_０‐_２４ｈは、２４時間で除されたＡＵＣ_０‐_２４ｈを表わすことになる。

本明細書において使用される場合、「信頼区間」または「ＣＩ」は、ある確率、ｐに対応して、測定または試行が収まる区間であり、ここでｐは９０％または９５％ＣＩを指し、算術平均、幾何平均、または最小二乗平均のいずれかの前後に算出される。本明細書で使用される場合、幾何平均は、累乗法を通じて逆変換された自然対数変換値の平均であり、最小二乗平均はまた、幾何平均である場合もない場合もあるが、固定効果を使用する分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルに由来する。

本明細書において使用される場合、「変動係数（ＣＶ）」は、ばらつきの測定値であり、平均値に対する標準偏差の比率として定義される。上記計算を１００で乗じることによって割合（％）として表示される（％ＣＶ）。

本明細書において使用される場合、「Ｔｍａｘ」は、哺乳類への物質の投与後、その哺乳類の血漿中の物質の最大濃度に達する観察時間を指す。

本明細書において使用する場合、「血清または血漿半減期」とは、哺乳類に投与された物質の量の半分が、正常な生物学的プロセスによって代謝または哺乳類の血清または血漿から排せつされるのに必要な時間を指す。

本明細書において使用される場合、「心血管障害」としては、動脈動脈瘻、動静脈瘻孔、脳動静脈奇形、先天性心欠損症、肺動脈閉鎖症、およびシミター症候群のような心血管異常が挙げられるが、これらに限定されない。先天性心欠損症としては、大動脈縮窄症、三心房心、冠血管異常、右胸心、動脈管開存症、エプスタイン奇形、アイゼメンガー複合、左心低形成症候群、右胸心、ファロー四徴症、大血管転位症、両大血管右室起始症、三尖弁閉鎖症、総動脈幹遺残、ならびに大動脈肺動脈中隔欠損症、心内膜床欠損症、リュタンバッシェ症候群、卵円孔開存、および心房または心室中隔欠損症のような心中隔欠損症が挙げられるが、これらに限定されない。

また、心血管障害としては、慢性心不全、不整脈、カルチノイド心疾患、高心拍出量、低心拍出量、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性のものを含む）、心臓動脈瘤、心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、肺水腫、心肥大、うっ血性心筋症、左室肥大、右室肥大、梗塞後心臓破裂、心室中隔破裂、心臓弁疾患、心筋疾患、心筋虚血、心嚢液貯留、心膜炎（収縮性および結核性のものを含む）、心膜気腫、心膜切開術後症候群、肺性心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、心血管系妊娠合併症、シミター症候群、心血管感染症のような心疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

不整脈としては、洞不整脈、心房細動、心房粗動、徐脈、期外収縮、アダムス・ストークス症候群、脚ブロック、洞房ブロック、ＱＴ延長症候群、副収縮、ラウン・ギャノン・レバイン症候群、早期興奮症候群、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、洞不全症候群、心房および心室頻拍、および心室細動が挙げられるが、これらに限定されない。頻拍としては、発作性頻拍、上室頻拍、促進心室固有調律、房室結節性リエントリー性頻拍、異所性心房頻拍、異所性接合部頻拍、洞房結節リエントリー性頻拍、洞性頻拍、トルサードドポアント、および心室頻拍が挙げられる。

心臓弁疾患としては、大動脈弁閉鎖不全症、大動脈弁狭窄症、心雑音（ｈｅａｒ ｍｕｒｍｕｒｓ）、大動脈弁逸脱症、僧帽弁逸脱症、三尖弁逸脱、僧帽弁閉鎖不全症、僧帽弁狭窄症、肺動脈閉鎖症、肺動脈弁閉鎖不全症、肺動脈弁狭窄症、三尖弁閉鎖症、三尖弁閉鎖不全症、および三尖弁狭窄症が挙げられるが、これらに限定されない。

心筋疾患としては、アルコール性心筋症、糖尿病性心筋症、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、大動脈弁下狭窄、肺動脈弁下部狭窄症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、カーンズ症候群、心筋再潅流傷害、および心筋炎が挙げられるが、これらに限定されない。

心筋虚血としては、冠動脈疾患、狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈血管れん縮、心筋梗塞、気絶心筋、不安定狭心症、および急性冠症候群が挙げられるが、これらに限定されない。

また、心血管疾患としては、血管病（例えば動脈瘤）、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫症、フォンヒッペル・リンダウ病、クリッペル・トレノネー・ウェーバー症候群、スタージ・ウェーバー症候群、血管神経性浮腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、レリシュ症候群、動脈閉鎖性疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先端紅痛症（ｅｒｙｔｈｒｏｍｅｌａｉｇｉａ）、痔核、肝臓静脈閉鎖的な疾患、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管疾患、静脈炎、肺静脈閉塞症、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞症、シミター症候群、上大静脈症候群、末梢血管拡張症、末梢血管拡張性運動失調症（ａｔａｃｉａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性末梢血管拡張症、精索静脈瘤、静脈瘤、静脈瘤性潰瘍、血管炎、および静脈還流不全が挙げられる。

ＧＬＰ‐１アゴニストによって治療、予防または寛解されうる疾患および障害としては、左室または右室機能不全；左または右心不全；低または高心拍出量；急性非代償性心不全；慢性うっ血性心不全；限定されないが遺伝的要因、冠動脈疾患、心筋梗塞、人工弁（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｖａｌｖｅ）疾患、感染症、先天性心疾患、高血圧、アルコール消費、糖尿病、左室肥大、心筋炎、アミロイドーシス、ヘモクロマトーシス、糖原病、代謝障害、グルコースまたは脂質代謝の障害、炎症性疾患に起因する心筋症を含む、あらゆる原因の心筋症；冠動脈疾患；心筋虚血；急性心筋梗塞；急性冠症候群または不安定狭心症；肺水腫；左または右室肥大；心停止；心筋炎；限定されないが遺伝的要因、末梢血管疾患、悪液質、がん、慢性心不全、慢性肺疾患、炎症性疾患に起因する骨格筋機能障害または骨格筋症；運動能力障害；および／または末梢血管疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の具体的説明

本発明の１つの実施形態では、ヒトにおける少なくとも１つの心血管障害を治療、予防および／または寛解する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。別の実施形態では、ヒトにおける心臓組織におけるグルコース代謝を制御する方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を、それを必要とする前記ヒトに投与することを含んでなる方法が、提供される。別の実施形態では、それを必要とするヒトにおける心機能を増加する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。別の実施形態では、ヒトにおける梗塞サイズを減少する方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。１つの実施形態では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

当該技術分野で理解されるように、「心不全」は、多くの異なる病因または疾患兆候をもつ臨床症状を定義する。典型的には、うっ血性心不全は、心臓がその内容物を正常に放出することができないことに起因し、肺および全身のうっ血をもたらす肺静脈圧の増加を指す。この状態は、遺伝的要因、冠動脈疾患、心筋梗塞、人工弁（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｖａｌｖｅ）疾患、感染症、先天性心疾患、高血圧、アルコール消費、糖尿病、左室肥大、心筋炎、アミロイドーシス、ヘモクロマトーシス、糖原病、代謝障害、グルコースまたは脂質代謝の障害、および／または炎症性疾患を含むが限定されない心機能の障害につながることができる多くの異なる病理過程によって引き起こされることができる。本発明は、グルコース効率および心室収縮性を増加することによって、低下した心筋機能に対処する方法を記載する。よって、本発明の方法は、本明細書において記載されている多くの心血管疾患の治療、予防および／または寛解に使用されることができる。

本発明の１つの態様では、ＧＬＰ‐１アゴニストは、配列番号１を含んでなる。本明細書において使用されるとき、配列番号１は、アルビグルタイドの主要なポリペプチド配列である（図１６を参照されたい）。

発明の実施形態は、ＧＬＰ‐１またはその断片、変異体、および／もしくは抱合体であるが、これらに限定されないＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる。本発明のＧＬＰ‐１断片および／または変異体および／または抱合体は、典型的に、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する。ＧＬＰ‐１またはその断片、変異体、および／もしくは抱合体は、ヒト血清アルブミンを含んでなりうる。ヒト血清アルブミンは、ＧＬＰ‐１またはその断片および／もしくは変異体抱合されうる。ヒト血清アルブミンは、注入前に（ＧＬＰ‐１のような）インクレチンホルモンならびに／または（エキセンディン３およびエキセンディン４のような）インクレチン模倣剤ならびに／またはその断片および／もしくは変異体に、化学リンカーを通して抱合されうるか、または生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で自然のヒト血清アルブミンに化学的に連結されうる（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，５９３，２９５号明細書および米国特許第６，３２９，３３６号明細書を参照されたい）。あるいは、ヒト血清アルブミンは、ＧＬＰ‐１ならびに／またはその断片および／もしくは変異体、またはエキセンディン−３またはエキセンディン−４のような他のＧＬＰ‐１アゴニストならびに／またはその断片および／もしくは変異体に、遺伝学的に融合されうる。遺伝学的にヒト血清アルブミンと融合されたＧＬＰ‐１ならびにその断片および／または変異体は、次のＰＣＴ出願に提供されている：国際公開第２００３／０６００７１号、国際公開第２００３／５９９３４号、国際公開第２００５／００３２９６号、国際公開第２００５／０７７０４２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドまたはＧＬＰ‐１アゴニストは、少なくとも１つのヒトＧＬＰ‐１の断片および／または変異体を含んでなりうる。２つのヒトＧＬＰ‐１の天然の断片を配列番号２に示す。

ここで、３７位のＸａａは、Ｇｌｙ（以降「ＧＬＰ‐１（７‐３７）」とする）か、または‐ＮＨ_２（以降「ＧＬＰ‐１（７‐３６）」とする）である。ＧＬＰ‐１断片は、ヒトＧＬＰ‐１のアミノ酸７〜３６（ＧＬＰ‐１（７‐３６））を含んでなるか、または代替的にヒトＧＬＰ‐１のアミノ酸７〜３６（ＧＬＰ‐１（７‐３６））からなるＧＬＰ‐１の分子が挙げられるが、これらに限定されない。ＧＬＰ‐１の変異体またはその断片は、限定されないが、１、２、３、４、５以上のアミノ酸置換を、野生型ＧＬＰ‐１または配列番号２に示されるＧＬＰ‐１天然の断片に含みうる。変異体ＧＬＰ‐１またはＧＬＰ‐１の断片は、限定されないが、アラニンがグリシンに変異されるように、野生型ＧＬＰ‐１のアラニン８にアラニン残基類似体の置換を含みうる（以降「Ａ８Ｇ」とする）（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，５４５，６１８号明細書に開示された変異体を参照されたい）。

幾つかの態様では、ＧＬＰ‐１の少なくとも１つの断片および変異体は、ＧＬＰ‐１（７‐３６（Ａ８Ｇ））を含んでなり、遺伝学的にヒト血清アルブミンに融合される。さらなる実施形態では、発明のポリペプチドは、ヒト血清アルブミンまたはその変異体のＮまたはＣ末端に融合された、１、２、３、４、５以上の、ＧＬＰ‐１ならびに／またはその断片および／もしくは変異体の直列に配向された分子を含んでなる。他の実施形態は、アルブミンまたはその変異体のＮまたはＣ末端に融合されたそのようなＡ８Ｇポリペプチドを有する。ヒト血清アルブミンのＮ末端に融合された２つの直列に配向されたＧＬＰ‐１（７‐３６）（Ａ８Ｇ）断片および／または変異体の例は、配列番号１を含んでなり、図１６に示される。別の態様では、ＧＬＰ‐１の少なくとも１つの断片および変異体は、少なくとも２つのＧＬＰ‐１（７‐３６（Ａ８Ｇ））を直列に含んでなり、遺伝学的にヒト血清アルブミンに融合される。少なくとも２つのＧＬＰ‐１（７‐３６（Ａ８Ｇ））は、遺伝学的にヒト血清アルブミンのＮ末端に融合されうる。少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、配列番号１を含んでなりうる。幾つかの態様では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

ＧＬＰ‐１（７‐３７）の変異体は、例えば、ＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨの２２位に通常見出されるグリシンがグルタミン酸で置換されているＧＬＰ‐１変異体であるＧｌｕ^２２‐ＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨ、ＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨの８位に通常見出されるアラニン、および２２位に通常見出されるグリシンが、それぞれバリンおよびグルタミン酸で置換されているＧＬＰ‐１化合物であるＶａｌ^８‐Ｇｌｕ^２２‐ＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨが示される。ＧＬＰ‐１の変異体としては、例えば、以下が挙げられるが、これらに限定されない。

また、ＧＬＰ‐１の変異体としては、１つ以上のそのアミノ酸側基の化学修飾を有するＧＬＰ‐１またはそのＧＬＰ‐１断片が挙げられるが、これらに限定されない。化学修飾としては、化学部分を付加すること、新しい結合を創り出すこと、および化学部分を取り除くことが挙げられるが、これらに限定されない。アミノ酸側基においての修飾としては、リジン‐ε‐アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジン、またはリジンのＮ‐アルキル化、グルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボン酸基のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミノ化が挙げられるが、これらに限定されない。末端アミノ基の修飾としては、ｄｅｓ‐アミノ、Ｎ‐低級アルキル、Ｎ‐ジ‐低級アルキル、およびＮ‐アシル修飾が挙げられるが、これらに限定されない。末端カルボキシ基の修飾としては、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド、および低級アルキルエステル修飾が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、１つ以上の側基、または末端基は、タンパク質化学分野技術者に公知の保護基によって保護されうる。

また、ＧＬＰ‐１断片または変異体は、１つ以上のアミノ酸が、前記断片または変異体のＧＬＰ‐１（７−３７）ＯＨのＮ末端および／またはＣ末端に付加されているポリペプチドを含みうる。アミノ酸がＮ末端および／またはＣ末端に付加されているＧＬＰ‐１のアミノ酸は、ＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨの対応するアミノ酸と同じ番号により示される。例えば、２つのアミノ酸をＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨのＮ末端に付加することによって得られたＧＬＰ‐１化合物のＮ末端アミノ酸は、５位であり、１つのアミノ酸をＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨのＣ末端に付加することによって得られたＧＬＰ‐１化合物のＣ末端アミノ酸は、３８位である。よって、これらのＧＬＰ‐１化合物の両方において、ＧＬＰ‐１（７‐３７）ＯＨのように、１２位がフェニルアラニンで占められ、２２位がグリシンで占められる。アミノ酸がＮ末端に付加されているＧＬＰ‐１のアミノ酸１〜６は、ＧＬＰ‐１（７−３７）ＯＨの対応する位置にあるアミノ酸と同一か、またはその保存的置換でありうる。アミノ酸がＣ末端に付加されているＧＬＰ‐１のアミノ酸３８〜４５は、グルカゴンまたはエキセンディン‐４の対応する位置にあるアミノ酸と同一か、またはその保存的置換でありうる。

本明細書において記載される薬物動態（例えば、限定されないが、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ、Ｔｍａｘ、血中半減期）および薬物力学（例えば、限定されないが、血清、血漿および血中グルコースレベル）パラメーターを測定および計算するさまざまな方法を、当業者であれば理解するであろう。さらに、統計的比較（例えば、限定されないが、ベースラインから処理後の変化の比較および／もしくは治療群の間での比較）、ならびに／または本明細書において記載される薬物動態および薬物力学パラメーターの分析を行うさまざまな方法を、さらに、薬物動態、薬物力学および他の臨床データを収集および分析するさまざまな他の方法を、当業者であれば理解し、用いることができるであろう。

当該技術分野で理解されるように、本発明の医薬組成物は、皮下に投与されることができる。皮下注射は、例えば、限定されないが、１回注射当たり約０．０１ｍＬ〜約５．０ｍＬのボリュームで、単回注射として投与されることができる。あるいは、皮下注射は、連続的に投与されることができる。くわえて、皮下注射は、単回および連続的中注入の組合せとして、ならびに皮下および他の投与の経路の組合せとして投与されることができる。本発明の医薬組成物は、全身投与および局所投与両方を含む任意の好適な投与経路によって投与しうる。全身投与としては、経口投与、非経口投与、経皮投与、直腸投与、および吸入による投与が挙げられる。非経口投与とは、腸内、経皮、または吸入による投与以外の投与の経路、典型的には、注射または注入をさす。非経口投与としては、静脈内、筋肉内、および皮下注射または注入が挙げられる。吸入とは、口を通してまたは鼻腔を通して吸入されるであろうとなかろうと患者の肺への投与をさす。局所投与としては、皮膚への適用、ならびに眼内投与、耳投与、膣内投与、および経鼻投与が挙げられる。幾つかの態様では、前記医薬組成物は、限定されないが３．７５ｍｇ／ｍｌを含む、投与量当たり約４．０ｍｇ未満の配列番号１を含んでなる。別の態様では、前記医薬組成物は、限定されないが１．８８ｍｇ／ｍｌを含む、投与量当たり約２．０ｍｇ未満の配列番号１を含んでなる。医薬組成物は、低い投与量にて毎週１回投与されることができる。例えば、アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物は、週に１回、注射により、約０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１．５ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．８８ｍｇ、２．０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４．０ｍｇ、１５ｍｇ、または３０ｍｇの量で投与されうる。本発明の医薬組成物は、例えば、６ヶ月未満の期間にわたって毎週投与されうる。あるいは、それは、例えば、より長い期間または長期間にわたって毎週投与されうる。幾つかの態様では、医薬組成物は、少なくとも１つのボーラス注入として投与されうる。

別の態様では、医薬組成物は、前記ヒトにおける心乳酸流出の量を減少する。本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの第二の強心剤と同時投与されることができる。当該技術分野で理解されるように、強心剤としては、硝酸薬、ベータ遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿剤、血管拡張薬、ベータアドレナリン受容体拮抗剤、ベータアドレナリン受容体アゴニスト、ホスホジエステラーゼ‐３阻害剤、ホスホジエステラーゼ‐５阻害剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、レニン拮抗剤のような抗狭心症薬；ヒドララジン；ニトロプルシド；ネシリチド；ラノラジン；シロスタゾール；カルシウムチャネル遮断薬、ジゴキシン；クマジン；ヘパリン；抗血小板薬、グリコプロテインＩＩｂ／ＩＩＩａ拮抗剤、血栓溶解薬、スピロノラクトン；利尿剤、硝酸薬、スタチン、エゼチミブ；フィブラートおよび／または抗不整脈薬が挙げられるが、これらに限定されない。

別の態様では、医薬組成物が、前記ヒトにおける心機能を改善する方法が提供される。他の態様では、医薬組成物は、前記ヒトにおける血管拡張を増加し、および／またはＮＯ生産または利用可能性を増加する。

１つの実施形態では、ヒトは慢性の心臓の状態を有する。別の態様では、ヒトは急性の心臓の状態を有する。また、本発明の方法は、慢性および急性の心臓の状態を有するか、またはどちらか一方もしくは両方のリスクがあるヒトの治療を提供する。ある例では、ヒトは、虚血性のうっ血性心不全を有する。別の例では、ヒトは、非虚血性のうっ血性心不全を有する。幾つかの実施形態では、ヒトは、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を有する。

また、本発明は、ヒトが、慢性心不全、心疾患、不整脈、カルチノイド心疾患、高心拍出量、低心拍出量、心タンポナーデ、心内膜炎（細菌性のものを含む）、心臓動脈瘤、心停止、うっ血性心不全、うっ血性心筋症、発作性呼吸困難、肺水腫、心肥大、うっ血性心筋症、左室肥大、右室肥大、梗塞後心臓破裂、心室中隔破裂、心臓弁疾患、心筋疾患、心筋虚血、心嚢液貯留、心膜炎、心膜気腫、心膜切開術後症候群、肺性心疾患、リウマチ性心疾患、心室機能不全、充血、心血管系妊娠合併症、シミター症候群、心血管梅毒、心血管結核、アルコール性心筋症、糖尿病性心筋症、うっ血性心筋症、肥大型心筋症、大動脈弁下狭窄、肺動脈弁下部狭窄症、拘束型心筋症、シャーガス心筋症、心内膜線維弾性症、心内膜心筋線維症、カーンズ症候群、心筋再潅流傷害、心筋炎；狭心症、冠動脈瘤、冠動脈硬化、冠動脈血栓症、冠動脈血管れん縮、のような冠動脈疾患、心筋梗塞、気絶心筋、血管病（例えば動脈瘤）、血管形成異常、血管腫症、細菌性血管腫症、フォンヒッペル・リンダウ病、クリッペル・トレノネー・ウェーバー症候群、スタージ・ウェーバー症候群、血管神経性浮腫、大動脈疾患、高安動脈炎、大動脈炎、レリシュ症候群、動脈閉鎖性疾患、動脈炎、動脈内膜炎（ｅｎａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、結節性多発動脈炎、脳血管障害、糖尿病性血管障害、糖尿病性網膜症、塞栓症、血栓症、先端紅痛症（ｅｒｙｔｈｒｏｍｅｌａｉｇｉａ）、痔核、肝臓静脈閉鎖的な疾患、高血圧、低血圧、虚血、末梢血管疾患、静脈炎、肺静脈閉塞症、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、網膜静脈閉塞症、シミター症候群、上大静脈症候群、末梢血管拡張症、末梢血管拡張性運動失調症（ａｔａｃｉａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性末梢血管拡張症、精索静脈瘤、静脈瘤、静脈瘤性潰瘍、血管炎、および静脈還流不全の群からから選択される少なくとも１つの疾患を有する方法を提供する。

１つの実施形態では、ヒトは、少なくとも１つの次に疾患または障害を有する：左もしくは右心室機能不全；左もしくは右心不全；低もしくは高心拍出量；急性非代償性心不全；慢性うっ血性心不全；限定されないが遺伝的要因、冠動脈疾患、心筋梗塞、人工弁（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｖａｌｖｅ）疾患、感染症、先天性心疾患、高血圧症、アルコール消費、糖尿病、左室肥大、心筋炎、アミロイドーシス、ヘモクロマトーシス、糖原病、代謝障害、グルコースもしくは脂質代謝障害、炎症性疾患に起因する心筋症を含む、いかなる原因の心筋症；冠動脈疾患；心筋虚血；急性心筋梗塞；急性冠症候群もしくは不安定狭心症；肺水腫；左もしくは右室肥大；心停止；心筋炎；限定されないが遺伝的要因、末梢血管疾患、悪液質、がん、慢性心不全、慢性肺疾患、炎症性疾患に起因する骨格筋機能障害もしくは骨格筋症；運動能力障害；末梢血管疾患。

他の実施形態では、ヒトは、２型糖尿病を有する。ヒトは、高血糖症を有しうるか、または前糖尿病性もしくは糖尿病を発症するリスクがあると診断されうる。また、本発明の医薬組成物は、前記ヒトにおける少なくとも１つの次の機能を改善する：心筋グルコース利用、心筋効率、左室機能、および／または運動耐容能。

また、本発明は、本明細書において記載された少なくとも１つの心血管疾患または障害を治療する薬剤の製造における、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストの使用を提供する。また、本発明は、左もしくは右心室機能不全；左もしくは右心不全；低もしくは高心拍出量；急性非代償性心不全；慢性うっ血性心不全；限定されないが遺伝的要因、冠動脈疾患、心筋梗塞、人工弁（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｖａｌｖｅ）疾患、感染症、先天性心疾患、高血圧症、アルコール消費、糖尿病、左室肥大、心筋炎、アミロイドーシス、ヘモクロマトーシス、糖原病、代謝障害、グルコースもしくは脂質代謝障害、炎症性疾患に起因する心筋症を含む、いかなる原因の心筋症；冠動脈疾患；心筋虚血；急性心筋梗塞；急性冠症候群もしくは不安定狭心症；肺水腫；左もしくは右室肥大；心停止；心筋炎；限定されないが遺伝的要因、末梢血管疾患、悪液質、がん、慢性心不全、慢性肺疾患、炎症性疾患に起因する骨格筋機能障害もしくは骨格筋症；運動能力障害；および／または末梢血管疾患を治療、予防および／または寛解するＧＬＰ‐１アゴニストの使用を含むが、これに限定されない本明細書において記載された少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチド、および／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストの任意の使用を提供する。１つの実施形態では、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドは、アルビグルタイドである。

１つの実施形態では、ヒトに心血管保護を提供する方法であって、前記ヒトに、アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法が、提供される。幾つかの態様では、医薬組成物は、約３．７５ｍｇ、１５ｍｇまたは３０ｍｇのアルビグルタイドを含んでなる。他の態様では、医薬組成物は、約４ｍｇ未満のアルビグルタイドを含んでなる。医薬組成物は、アルビグルタイドを、投与量当たり、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１．５ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．８８ｍｇ、２．０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４．０ｍｇ、１５ｍｇ、３０ｍｇから選択される量で含んでなりうる。アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物は、週１回投与されうる皮下注射によって送達されうる。

本発明は、アルビグルタイドを、単回投与量中に、１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１．５ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．８８ｍｇ、２．０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４．０ｍｇ、１５ｍｇ、３０ｍｇから選択される量で含んでなる医薬組成物の、心血管保護を提供するための使用を提供する。ある例では、心血管保護は、ヒトに提供される。

また、ＡＬＤＯＣ、ＣＰＴ１Ｂ、ＩＧＦ１Ｒ、ＰＤＨＡ１、ＧＳＫ３Ｂ、ＧＹＳ１、ＳＬＣ２Ａ１を含むが、これらに限定されない解糖およびグリコーゲン生成に関連する少なくとも１つの遺伝子の遺伝子発現を増加する方法が、本明細書において提供される。ある例では、遺伝子発現が、アルビグルタイドでの治療後のＩ／Ｒ心臓で、非虚血性の領域で増加される。ある例では、次の遺伝子：ＡＣＳＬ１、ＣＰＴ１Ｂ、ＧＡＰＤＨ、ＩＧＦ１Ｒ、ＳＬＣ２Ａ４、ＨＫ２、ＧＹＳ１、ＥＳＳＲＡ、ＨＩＦ１Ａ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＤＨＡ１、ＡＬＤＯＣ、ＧＳＫ３Ｂ、およびＡＫＴ１の少なくとも１つの遺伝子発現が、アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物の投与後に増加される。

以下の例により、本発明のさまざまな非限定的な態様を説明する。

例１ 心筋虚血モデルにおけるアルビグルタイドの心機能への前臨床評価
本研究において、本発明者らは、アルビグルタイドが心筋虚血再かん流傷害のげっ歯類モデルにおいて心保護的な効果があるという仮説を立てた。ラット心筋虚血再かん流傷害モデルは、臨床的に関連のある、翻訳可能な動物モデルである。また、そのモデルは潜在的な心不全治療の化合物の初期テストに広く使用されているモデルである。ＧＬＰ‐１（７〜３６および９〜３６）ならびに同模倣剤（エキセンディン‐４およびリラグルチド）はすべて、虚血再かん流傷害のげっ歯類モデルにおいて心保護性であることが示されている。

雄スプラーグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙ）ラット（〜３００ｇ体重）を本研究に使用した。以下の５つの試験群を研究に含めた：
群１：ビヒクル（ビヒクルで処置した虚血／再かん流傷害ラット）；ｎ＝８〜１０
群２：ｒＨＳＡ（ｒＨＳＡで処置した虚血／再かん流傷害ラット）；ｎ＝８〜１０
群３：アルビグルタイド（アルビグルタイド、１ｍｇ／ｋｇで処置した虚血／再かん流傷害ラット）；ｎ＝８〜１０
群４：アルビグルタイド（アルビグルタイド、３ｍｇ／ｋｇで処置した虚血／再かん流傷害ラット）；ｎ＝８〜１０
群５：アルビグルタイド（アルビグルタイド、１０ｍｇ／ｋｇで処置した虚血／再かん流傷害ラット）；ｎ＝８〜１０

実験プロトコール
心筋虚血‐再かん流（Ｉ／Ｒ）傷害を、麻酔（ネンブタール、６０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）下で行った。絶食していないラットを、開胸手術に供し、心筋Ｉ／Ｒ傷害を、左前下行（ＬＡＤ）動脈を３０分間閉塞し、続いて２４時間再かん流することによって誘発した。図２に示すように、ラットをビヒクル、組み換えヒトアルブミン（ｒＨＳＡ）またはアルビグルタイドで３日間、前処置した。ラットに、虚血の４８時間、２４時間および２時間前に、皮下注射で２．７ｍｇ／ｋｇの投与量にてｒＨＳＡを投与し、次に３０分間の虚血および２４時間の再かん流に供した。他のラットに、虚血の４８時間、２４時間および２時間前に、皮下注射で１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの投与量にてアルビグルタイドを投与し、次に３０分間の虚血および２４時間の再かん流に供した。血液試料を、虚血の直前および再かん流の２４時間後に採集した（図２）。

右頸動脈を経て左室に挿入した１．８Ｆ Ｍｉｌｌａｒ Ｍｉｋｒｏ‐Ｔｉｐ圧カテーテルトランスデューサーを使用して、３０分間の虚血および２４時間の再かん流障害後に心機能を評価した。

研究終了時に、ラットの心臓を摘出し、１％の塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）リン酸緩衝溶液でかん流し、壊死および生存心筋の境界を明示した。続いて、ＬＡＤ動脈を前の閉塞箇所で再び結び、心臓にエバンスブルー染料をかん流し、リスク領域および非虚血性の領域の境界を明示した。心臓を、横に５つの切片に切り、それら切片をデジタルカメラ使用して写真に撮った。梗塞サイズおよびリスク領域を、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓを使用して測定した。

インスリンは、ＭＤＳラットインスリンキットを使用して測定した。血中グルコースおよび乳酸は、オリンパス（Ｏｌｙｍｐｕｓ）ＡＵ６４０臨床化学分析器を使用して測定した。

血行動態測定および死後分析
Ｉ／Ｒ研究終了時（再かん流後２４時間）に、動物をイソフルレン（酸素中２％）で麻酔し、２Ｆ Ｍｉｌｌａｒ Ｍｉｋｒｏ‐ｔｉｐカテーテルトランスデューサーを右頸動脈を経て左室に挿入し、以前に報告（１８，１９）されているように、左室内圧、生じたピーク圧上昇および下降の変化（それぞれ、＋ｄＰ／ｄｔ_ｍａｘおよび−ｄＰ／ｄｔ_ｍｉｎ）を測定した。血行動態測定後、心臓を摘出し、生理食塩水でかん流し、残存血液を大動脈カニューレ（１８ゲージ針）を通して洗い流した。生存心筋から梗塞した組織の境界を明示するために、次に心臓を、リン酸バッファー中の２，３，５‐塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）の１％溶液（ｐＨ７．４、３７℃）でかん流した。生存心筋が赤に染色され、梗塞した心筋が白に染色された。リスク領域（虚血性の領域）の境界を明示するために、次に冠動脈を前の閉塞箇所で結び、大動脈起始部を、通常の生理食塩水中の１％Ｅｖａｎｓブルー染料（シグマ社）でかん流した。この手順の結果として、先に閉塞した冠動脈（リスク領域）によって供給されたＬＶの部分が特定された一方で、残りのＬＶが紺青色に染色された。両心房および右室組織を切除した後、心臓を凍結した。ＬＶを、横薄片に切り、それらをデジタルカメラ使用して写真に撮った。心臓画像の梗塞、虚血性、非虚血性の領域の境界を明らかにし、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓを使用して測定し、これら測定値から梗塞サイズを虚血性の領域の％割合として計算した。虚血性の領域を、ＬＶ領域の％割合として計算した。

生体内心臓エネルギー評価
心Ｉ／Ｒ傷害後の心臓エネルギープロフィール（例えば、ＡＴＰ、ＰＣｒ、ＡＴＰ／ＰＣｒ）への、アルビグルタイドの効果を検討するために、上記のように、ラットを、ビヒクルまたはアルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ／日、３日間）で処置した（各群ｎ＝１０）。ラットを、３０分間の虚血、続いて２４時間の再かん流に供し、疑似手術したラットを対照としてこの試験に含めた（ｎ＝５）。再かん流の２４時間後、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）／スペクトロスコピー（ＭＲＳ）実験のために、ラットを２．０％のイソフルレン（アボット・ラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、シカゴ、イリノイ州）で麻酔した。生体内ＭＲＩ／Ｓ実験のすべては、９．４Ｔ／３０ｃｍ Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｅｃシステム（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、マサチューセッツ州）上で、複調（ｄｏｕｂｌｅ ｔｕｎｅ）（^１Ｈ、^３１Ｐ）コンセントリック表面高周波（ＲＦ）コイル設定を使用して行った。コンセントリック表面ＲＦコイル（Ｍ２Ｍ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｏｒｐ、オハイオ州）デザインは、外側の４００．４４ＭＨｚに合わせられる^１Ｈちょう形コイル（３５ｍｍ）、および内側の１６２．１０ＭＨｚに合わせられる^３１Ｐ円形コイル（２５ｍｍ）からなる。トリパイロット（ｔｒｉｐｉｌｏｔ）グラディエントエコー画像の後、短軸心臓画像を、後ろ向き心電同期（ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｃａｒｄｉａｃ ｇａｔｅｄ）ｆａｓｔ ｌｏｗ ａｎｇｌｅ ｓｈｏｔ（ＦＬＡＳＨ）シーケンスを使用して得た。シネループが、心周期をカバーするのに十分な数の遅延をもってして、心室を通して各イメージング薄片に対して生成された。イメージングパラメーターは、次の通りであった：マトリックス寸法、１２８×１２８；ＴＲ／ＴＥ、７／１．５ｍｓ；薄片の厚さ、２．０ｍｍ；ＦＯＶ、５．０ｃｍ；繰り返し数、２５０；シネループ、１０画像。左室（ＬＶ）機能パラメーターを分析した（Ａｎａｌｙｚｅ ＡＶＷ ソフトウェア、ＡｎａｌｙｚｅＤｉｒｅｃｔ、Ｌｅｎｅｘａ、カンザス州）。イメージング直後に、^３１Ｐ ＭＲＳを、同一のＲＦハードウェアを使用して行い、心臓の空間的に局在したスペクトロスコピーを、外体積抑制（ＴＲ ＝４ｓ、ＮＳ＝５１２、ＳＷ＝１０ｋＨｚ、１ｋデータ）をもつ３次元イメージ選択生体内スペクトロスコピー（３−Ｄ Ｉｍａｇｅ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＩＳＩＳ）シーケンスを使用して行った。目的サイズのスペクトロスコピーのボクセルは、１５．８×１１×１７ｍｍであり、全３直交方向に斜面でＬＶをカバーするように位置を合わせた。^３１Ｐ ＮＭＲスペクトルを、指数フィルターおよびベースライン平低化を使用して処理した。ホスホクレアチン（ＰＣｒ）ピークを０ｐｐｍに設定し、〜４．９〜５．３ｐｐｍの無機リン酸（Ｐ_ｉ）ピーク（細胞内および細胞外両方のＰ_ｉを含む）および−１６ｐｐｍのβ‐アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）ピークを、それぞれ、ＰＣｒ／Ｐ_ｉおよびＰＣｒ／ＡＴＰ比を計算するために取り込んだ（Ｎｕｔｓ ＮＭＲ処理ソフトウェア、Ａｃｏｒｎ ＮＭＲ Ｉｎｃ．、Ｆｒｅｍｏｎｔ、カリフォルニア州）。細胞内のｐＨを、以前に記載されているように、細胞内のＰｉおよびＰＣｒ間の化学シフト差を使用して計算した（Taylor, et al., Magn Reson Med 1986 February;3(1):44-54）。

心代謝関連遺伝子発現分析
定量ＴａｑＭａｎ逆転写（ＲＴ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析を、上記のようにビヒクルまたはアルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ／日、３日間）で処置されたＳＤラットの亜群（ｓｕｂｇｒｏｕｐ）（各群ｎ＝８）におけるＬＶから抽出した全ＲＮＡで行った。２４の鍵となる代謝、ミトコンドリア、およびストレス関連遺伝子を、正常ＬＶならびにＩ／Ｒ実験からの虚血性および非虚血性のＬＶにおいて評価した。これらの遺伝子は、ＡＣＳＬ１、ＣＰＴ１Ｂ、ＧＡＰＤＨ、ＩＧＦ１Ｒ、ＳＬＣ２Ａ４、ＨＫ２、ＧＹＳ１、ＥＳＳＲＡ、ＨＩＦ１Ａ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＤＨＡ１、ＡＬＤＯＣ、ＧＳＫ３Ｂ、ＡＫＴ１、ＳＬＣ２Ａ１、ＰＹＧＬ、ＰＲＫＡＡ２、ＰＰＡＲＧ、ＨＫ１、ＰＤＫ１、ＵＣＰ２、ＡＣＴＢ、ＬＤＨＡ、ＵＣＰ３からなる。遺伝子発現データを、Ｏｍｉｃｓ Ｓｔｕｄｉｏ（商標）ソフトウェアを使用して正規化した。その後、一元配置分散分析（ｏｎｅ‐ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）およびＰＣＡを行った。

統計的分析
データは、平均値±ＳＥＭとして示す。群間の差を、対応のある、および対応のないスチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ）ｔ検定、または一元配置分散分析（ｏｎｅ‐ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）によって比較し、続いてボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）テストで多重比較した。＜０．０５のｐ値を、統計的に有意とみなした。

試料採集：
血液試料を、ベースライン時（虚血前）および再かん流の２４時間後に、ＥＤＴＡチューブを使用して集めた。

動物飼料：通常のげっ歯類飼料

以下の薬物物質を、研究に使用した：
１）アルビグルタイド
２）ｒＨＳＡ（組み換えヒト血清アルブミン）
３）ビヒクル（１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５３ｍＭマンニトール、１１７ｍＭトレハロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ７．２）
ラットに、虚血の４８時間、２４時間および２時間前に、皮下注射で１ｍＬ／ｋｇの投与量にてｒＨＳＡを投与し、次に３０分間の虚血および２４時間の再かん流に供した。

調製ビヒクル／薬／試薬：
約９００ｍＬのＨＰＬＣグレード水を、ビーカーに加えた。無菌の撹拌子を加え、次のものをマグネチック撹拌プレート上で混ぜた：０．４１±０．０１ｇのリン酸二水素ナトリウム・一水和物、０．９９±０．０１ｇの無水リン酸水素二ナトリウム、４４．２６±０．１ｇのＤ‐トレハロース（無水）、２７．８７±０．１ｇのマンニトール、および１０ｍＬの１％ポリソルベート８０ストック溶液。ｐＨを測定し、必要に応じて、１Ｎ水酸化ナトリウムまたはリン酸を使用して、ｐＨを７．２に調整した。溶液を、１０００ｍＬ容メスフラスコに移し、ＨＰＬＣグレード水を１０００ｍＬの最終容積に達するまで加えた後、２０分間撹拌した。緩衝液を、０．２ミクロンフィルターユニット組立体を通してろ過した。フラスコを、アルミホイルで包むことによって光から保護して、４℃に保存した。−２０℃の冷凍庫に保存したｒＨＳＡ粉末を、ビヒクルに溶かし、２．７ｍｇ／ｍＬの濃度の投与溶液（ｄｏｓｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）とした。−８０℃の冷凍庫に保存したストック溶液（１３１ｍｇ／ｍＬ）を、ビヒクルで希釈し、３ｍｇ／ｍＬまたは３０ｍｇ／ｍＬのアルビグルタイドの作業溶液にした。

ＳＤラットにおけるアルビグルタイ薬物動態分析
試料採集：
ＳＤラットの別の群（ｎ＝４）において、アルビグルタイド（１５ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）のＣｍａｘ、ＡＵＣ、ｔ１／２などを得るために、ＰＫ試験を行った。処置の０、０．５、１、３、６、８、および２４時間後に、血液試料を、ＥＤＴＡチューブ（２５０μＬ／チューブ）を使用して集めた。

分析方法：
ラット血漿試料を、試料希釈に基づいた分析方法を使用して、アルビグルタイドについて分析し、続いて免疫アッセイ分析をした。ラット血漿の１００μＬ分注を使用して、アルビグルタイドの定量下限（ＬＬＱ）は、１００ｎｇ／ｍＬであり、定量上限（ＨＬＱ）は、２５００ｎｇ／ｍＬであった。この試験においてデータの取得および定量に使用したコンピューターシステムは、Ｗａｌｌａｃ１４２０ワークステーションバージョン３．０改訂（Ｒｅｖｉｓｉｏｎ）５およびＳＭＳ２０００バージョン２．１を含んだ。適用分析実行は、所定の実行受け入れ基準を満たした。

データ分析
データは、平均値±ＳＥＭとして示す。群間の差を、対応のある、および対応のないスチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ）ｔ検定、または一元配置分散分析（ｏｎｅ‐ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）によって比較し、続いてボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）テストで多重比較した。＜０．０５のｐ値を、統計的に有意とみなした。

結果
初めに、１５ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイドの単回皮下投薬後の血液薬物動態を評価した。１、３および１０ｍｇ／ｋｇ投与量のモデリングに基づき、心保護試験の投与量を、アルビグルタイドで達成される臨床的な投与量と比較して選択した。図１は、ｐｋ試験で評価した実際の血液濃度、ならびに１５ｍｇ／ｋｇ投与量のモデリングを、図解している。

心保護試験に関しては、Ｉ／Ｒ傷害の４８時間、２４時間、および２時間前に、動物に投薬した（図２）。Ｔ左冠動脈前下行枝を、３０分間閉塞した後、２４時間再かん流した。試験の終了時に、リスク領域および梗塞サイズ決定のために心臓を摘出した。心臓の５つのＴＴＣ染色された心臓切片の代表的な写真を、図３に示す。心筋梗塞は白に染色され（ＴＴＣ陰性）、虚血性の領域は赤に染色され、非虚血性の領域は紺青色に染色された。また、代表的な薄片中の梗塞領域を手作業で分けたトレース（ｍａｎｕａｌｌｙ ｓｅｇｍｅｎｔｅｄ ｔｒａｃｅ）を示す。５つの薄片すべての梗塞サイズの合計を使用して、全体的なリスク領域および虚血性の領域を左室リスク領域の％割合として求めた。３０分間の虚血および２４時間の再かん流障害後のリスク領域は、群の間で類似しており、動物は類似した虚血性傷害に供された（図４、表１）。心筋梗塞サイズを、３０分間の虚血および２４時間の再かん流後の左室リスク領域の％として表わした（図４、表１）。３０分間虚血‐２４時間再かん流プロトコール後のビヒクルと比較したとき、低い投与量（１ｍｇ／ｋｇ）では、アルビグルタイドは、梗塞サイズに僅か〜１４％（ＮＳ）の減少をもたらした一方で、３および１０ｍｇ／ｋｇの投与量は、リスク領域に対して正規化された梗塞サイズに２６％の減少（Ｐ＜０．０１）をもたらした。組み換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）を、アルビグルタイドに対するさらなる対照として検討した。使用した投与量は、２．７ｍｇ／ｋｇ（３ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイドに相当する投与量）であり、図２に概略を示したように投与した。このヒト血清アルブミン相当投与量は、いかなる観察される心保護をもたらさなかった（図５）。くわえて、心拍数は、アルビグルタイドによって影響を受けなかった一方で、左室収縮性（＋ｄＰ／ｄｔ）は、３ｍｇ／ｋｇの投与量のアルビグルタイドで顕著に増加し、１０ｍｇ／ｋｇの投与量では、＋ｄＰ／ｄｔ、−ｄＰ／ｄｔ、およびＥＤＰのすべてが改善した（表１）。

表１ アルビグルタイドの梗塞サイズおよび左室血行動態への効果。データは、各群ｎ＝８〜１０であり、平均値±ＳＥＭとして示す。ｔ検定を用いて、＊ｐ＜０．０５ 対ビヒクル； ＊＊ｐ＜０．０１ 対ビヒクル

血漿グルコース、乳酸、およびインスリンの臨床化学測定値を、虚血前（虚血手術時）および再かん流の２４時間後（試験の終了）の両方に測定した。虚血性傷害前に測定したとき、アルビグルタイドは、すべての投与量にて血漿グルコースの減少、およびインスリンの増加を、投与量に関係なくもたらした（表２）。また、乳酸は、３および１０ｍｇ／ｋｇの投与量で増加した。しかしながら、再かん流の２４時間後、アルビグルタイドのグルコースおよびインスリンへの効果は失われ、一方で乳酸レベルは、変わらず増加した（表２）。

表２ アルビグルタイドの体重、臨床化学、および最終ｐｋへの効果。データは、各群ｎ＝８〜１０であり、平均値±ＳＥＭとして示す。ｔ検定を用いて＊ｐ＜０．０５ 対ビヒクル； ＊＊ｐ＜０．０１ 対ビヒクル

アルビグルタイド投薬の２日後、ラットは、ビヒクル群（表２、図６）と比較して摂餌量および体重増加の減少の点で投与量線形応答を有した。試験終了時のアルビグルタイドの最終血漿濃度は、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇの投与量に対して、それぞれ、５７４ｎｇ／ｍＬ、１２３８ｎｇ／ｍＬ、および８６３６ｎｇ／ｍＬであった（表２）。

心臓の虚血性のおよび非虚血性の領域におけるｃＡＭＰレベルを、動物の別の群で測定した。非虚血性のＬＶでは、ｃＡＭＰ濃度はアルビグルタイド処置（１０ｍｇ／ｋｇ）後に上昇していなかった一方で、虚血性の領域では、ｃＡＭＰレベルは、正常化されていた。

代謝関連遺伝子転写
１０ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイドでの処置の３日後、グルコースおよび脂肪代謝の調節に関与する２４の遺伝子の精密なパネルを使用して、自然のおよびＩ／Ｒ心臓組織の両方において、Ｔａｑｍａｎ（商標）ＲＴ−ＰＣＲ分析を行った。ＡＣＳＬ１、ＣＰＴ１Ｂ、ＧＡＰＤＨ、ＩＧＦ１Ｒ、ＳＬＣ２Ａ４、ＨＫ２、ＧＹＳ１、ＥＳＳＲＡ、ＨＩＦ１Ａ、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＤＨＡ１、ＡＬＤＯＣ、ＧＳＫ３Ｂ、ＡＫＴ１が、アルビグルタイドでの処置後の心臓において顕著に増加していた（表３）。数少ない遺伝子（ＧＹＳ１、ＳＬＣ２Ａ４）が、Ｉ／Ｒ心臓の虚血性の領域において著しく上方制御されていたが、解糖およびグリコーゲン生成に関連する幾つかの遺伝子（ＡＬＤＯＣ、ＣＰＴ１Ｂ、ＩＧＦ１Ｒ、ＰＤＨＡ１、ＧＳＫ３Ｂ、ＧＹＳ１、ＳＬＣ２Ａ１）が、アルビグルタイドでの処置後のＩ／Ｒ心臓の非虚血性の領域において著しく増加していた。３つの心臓組織試料のすべてから集めた遺伝子発現データの主成分分析（ＰＣＡ）は、アルビグルタイドでの処置後の正常および非虚血性のデータの両方のクラスター形成を示唆し、それは、心臓の自然および非虚血性の領域におけるグルコースおよび脂肪代謝遺伝子の調節での明確な変化と一致する。

表３：心臓におけるアルビグルタイドの代謝性遺伝子転写変化への効果

心臓のエネルギー
心ＭＲＩを使用して、Ｉ／Ｒ傷害の２４時間後にＬＶ機能を評価した。疑似と比較して、ビヒクルで処置したラットでは、顕著にＬＶ駆出分画率が減少し、ＬＶ収縮期末の容積が増加していたが、アルビグルタイド処置は、有害な心臓リモデリングおよび機能低下を防いだ（図７Ａ、Ｂ）。^３１Ｐ ＭＲＳスペクトロスコピーを行い、心臓での高エネルギーリン酸ピーク（ＰＣｒ、ＡＴＰ、Ｐｉ）を測定した。ＰＣｒ／ＡＴＰ比率はさまざまであり、ビヒクル群ではより低いように見えたが、その傾向は、有意ではなかった（図７Ｃ）。しかしながら、疑似に対してビヒクル群ではＰＣｒ／Ｐ_ｉ比率および細胞内ｐＨが減少（ｐ＜０．０５）していた一方、アルビグルタイドは、これらのパラメーターの変化を防いだ（それぞれ、図７Ｄ、Ｅ）。くわえて、疑似およびアルビグルタイドで処置した心臓と比較して、ビヒクルで処置した心臓では、絶対総心臓ＡＴＰおよびＰＣｒ濃度が、著しく低かった（図７Ｆ、Ｇ）。

考察
アルビグルタイドは、投与量依存的に心筋虚血再かん流傷害後の心筋梗塞サイズを顕著に減少した。また、アルビグルタイドは、虚血後の左室心機能を改善した。アルビグルタイドが観察された心保護を提供する厳密な機序を、本研究では検討していないが、この保護は、少なくとも部分的に、虚血後のインスリン分泌の増加およびグルコース代謝に関連しうる。アルビグルタイドで観察された体重の減少は、飼料摂取の減少、および満腹を増すことに関するＧＬＰ‐１アゴニストの予想された薬理と一致した。これらのデータは、アルビグルタイドが、冠動脈疾患をもつ患者に安全であると思われることだけではなく、アルビグルタイドが、急性ＭＩまたは慢性心不全をもつ患者に有益な効果を有しうることを示唆する。

例２ アルビグルタイドは、インスリン非依存的に心臓のグルコース取り込みおよび代謝を増加する。
方法
生体内２‐デオキシグルコース実験
留置頸動脈および頸静脈カテーテルをもつ、チャールス・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）社から購入した雄Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラット（体重、〜２５０〜３５０ｇ）を、研究に使用した。次の試験群を研究に含めた：
群１：ビヒクル；ｎ＝１５
群２：アルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｎ＝１６

生体外ランゲンドルフ心臓かん流実験
チャールス・リバー社から購入した雄Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラット（体重、〜２５０〜３００ｇ）を、研究に使用した。次の試験群を研究に含めた：
群１：ビヒクル；ｎ＝１３
群２：アルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｎ＝１３

実験プロトコール
生体内２‐デオキシグルコース実験
目的：［３ｈ］‐２‐デオキシグルコースのトレーサー量（体重１００ｇ当たり１０μｃｉ）を使用して、心臓組織によるグルコース取り込みの量を推定すること。

動物プロトコール：
１． 頸静脈および頸動脈カニューレを所定の位置にもつ、チャールス・リバー社から購入したラット。２‐デオキシグルコース（２‐ＤＧ）実験の４８時間、２４時間および２時間前に、ラットに、１ｍＬ／ｋｇの容積にて、ビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイドを皮下注射で投与した。ラットを一晩絶食させ、その後２‐ＤＧ投与を開始した（図８）。
２． ２‐［^３Ｈ］ＤＧ、（〜３０μＣｉ、体重１ｋｇ当たり１００μＣｉ）を、頸静脈カテーテルを通して、頸静脈にボーラスとして注入した。
３． トレーサー注入の直前、ならびにその５、１０および２０分後に、血液（〜２００μＬ）を、同じカテーテルからサンプリングした。
４． 最終血液（１ｍＬ）を、トレーサー注入の３０分後に採った。
５． 血液を、抗凝固剤を含有する注射器に集め、マイクロ遠心分離チューブに移し、遠心分離して血漿を分離した。試料を−８０℃冷凍庫に保存した。
６． 研究完了後、全心臓を、迅速にバラバラに切断し、液体窒素で瞬間凍結した。
７． 後日、これら試料の放射能を評価した。

組織抽出プロトコール：
血漿グルコース濃度の決定：血漿（６０μＬ）を、水（５４０μＬ）で希釈し、０．３ＮのＢａ（ＯＨ）_２および０．３ＮのＺｎＳＯ_４を各３００μＬ加えることによってタンパク質を除去し、１０，０００ｇで（４℃にて１０分間）遠心分離した。

血漿２‐［^３Ｈ］ＤＧおよび組織２‐［^３Ｈ］ＤＧ‐６‐Ｐの決定：脱タンパクされた血漿（２００μＬ）中の^３Ｈ含有量を、１ｍＬのＯｐｔｉｐｈａｓｅ ｓｕｐｅｒｍｉｘ中でのシンチレーション測定によって決定し、２００μＬのこの放射性混合物を、Ｍｉｃｏｒｂｅｔａ ｕｎｉｔでカウントした。生のカウント（ｒａｗ ｃｏｕｎｔｓ）が示された。

組織の一部（２００〜３００ｍｇ）を計量し、組織溶解器（ｌｙｚｅｒ）上で、６ｍｍセラミックビーズを使用して、５００μＬの０．５Ｍ氷冷過塩素酸中でホモジナイゼーションした。ホモジナイゼーションしたものを、遠心分離し（１０，０００で１０分間）、結果として得られた上澄みを、ｐＨ試験紙を用いて、５ＭＫＯＨと０．５Ｍ塩酸トリエタノールアミンで中和（ｐＨ〜７．４）し、遠心分離した（１０，０００ｇで１０分間）。論文で示されていたのとは異なって、手順のほとんどを室温にて行った。中和した抽出物の一部（２００μＬ）を、１ｍＬのＯｐｔｉｐｈａｓｅ ｓｕｐｅｒｍｉｘに再溶解し、２００μＬのこの放射性混合物を、Ｍｉｃｏｒｂｅｔａ ｕｎｉｔでカウントし、全放射能（２‐［^３Ｈ］ＤＧと２‐［^３Ｈ］ＤＧ‐６‐Ｐ）にアクセスした。別の分注（２００μＬ）を、２００μＬの０．３ＮのＢａ（ＯＨ）_２および０．３ＮのＺｎＳＯ_４と混ぜた。この混合物を、遠心分離し、上澄みを使用して、非リン酸化２‐［^３Ｈ］ＤＧのレベルを決定し、中和した抽出物の一部（２００μＬ）を、１ｍＬのＯｐｔｉｐｈａｓｅ ｓｕｐｅｒｍｉｘに再溶解し、２００μＬのこの放射性混合物を、Ｍｉｃｏｒｂｅｔａ ｕｎｉｔでカウントした。この時点では、クエンチ補正をしなかった。組織２‐［^３Ｈ］ＤＧ‐６‐Ｐを、合計と２‐［^３Ｈ］ＤＧ値との間の差として計算した。

抽出物のｐＨの調整：ほとんどの抽出物を、４０μＬ（４滴、２００μＬピペットチップ）の５ＮＫＯＨ、および２００μＬ（＋５０または１００μＬ）の０．５Ｎ塩酸トリエタノールアミンで中和した。

グルコース処理流量の決定：グルコース処理流量の決定は、以下の方程式、ならびにその主要な成分（すなわち平均血漿グルコース濃度（ＰＧＣ_平均）、心臓組織放射能（ＨＲ_終期）、および血漿グルコース糖放射能ＡＵＣ（ＰＲ_合計__{グルコース}濃度曲線下面積）に基づいた。

生体外ランゲンドルフ心臓かん流実験
目的：この研究の目的は、アルビグルタイドが心臓において直接的にグルコース代謝を促進することができるかどうかを決めることである。

生体内心グルコース取り込み測定
生体内における心臓のグルコース処理に関するアルビグルタイドの役割を検討するために、上記のように、ラットにビヒクルまたはアルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ／日、３日間）を投与した（各群ｎ＝１４〜１５）。次に、ラットに、２‐［^３Ｈ］デオキシグルコース（２‐［^３Ｈ］ＤＧ）を静注した。血漿試料を、３０分まで５分毎に集めて、血漿の放射能クリアランスを決定した。心臓をフリーズクランプし、過塩素酸で抽出した。タンパク質を取り除いた血漿（２００μＬ）を、１ｍＬのＯｐｔｉｐｈａｓｅ ｓｕｐｅｒｍｉｘに加え、^３Ｈ含有量を、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｔｒｉｌｕｘ Ｕｎｉｔ（パーキン・エルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）社、モデル１４５０‐０２）を使用するシンチレーション測定によって決定した。生のカウント（ｒａｗ ｃｏｕｎｔｓ）が示された。組織２‐［^３Ｈ］ＤＧ‐６‐Ｐを、全放射能と２‐［^３Ｈ］ＤＧ値との間の差として計算した。グルコース処理流量を、平均血漿グルコース濃度、最終的な心臓組織放射能、および血漿グルコース糖放射能ＡＵＣ（濃度曲線下面積）を使用して、以前に記載されているように決定した（Kraegen、et al. Am J Physiol 1985 March;248(3 Pt 1):E353-E362）。

ランゲンドルフかん流心臓における直接心グルコース取り込み測定
心臓のグルコース処理に関するアルビグルタイドの直接的な役割を検討するために、かん流心臓における生体外測定の前に、ラットにビヒクルまたはアルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ／日、３日間）を、上記のように投与した（各群ｎ＝１３）。ランゲンドルフかん流心臓調製は、以前に記載されている（Willette, et al., J Pharmacol Exp Ther 2008 August;326(2):443-52）。安定化期間（１５分）の後、ベースライン溶液を集め、心臓を、定圧（７５ｍｍＨｇ）下にて、ビヒクルまたはアルビグルタイド（０．１２μＭ）を含有する再循環溶液（〜６０ｍＬ）を用いてかん流する前のベースライングルコースおよび乳酸濃度を決定した。かん流時間（３０分）終了時に、かん流溶液を集め、容積ならびにグルコースおよび乳酸濃度を測定した。グルコースおよび乳酸は、オリンパスＡＵ６４０分析器（米国オリンパス社（Ｏｌｙｍｐｕｓ Ａｍｅｒｉｃａ Ｉｎｃ．）、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ニューヨーク州）を使用して測定した。グルコース流量は、（グルコースの濃度（初期）−濃度（最終））×（かん流容積／心臓湿重量（ｇ）／時間（時））として決定し、乳酸流量は、（乳酸の濃度（最終）−濃度（初期））×（かん流容積／心臓湿重量（ｇ）／時間（時））として決定した。

心代謝流量評価
心中間代謝を検討するために２つの別々の実験を行った。１）遊離脂肪酸酸化に対する相対的な炭水化物酸化を、生体内グルコースクランプ実験後に評価し、ならびに２）乳酸流量および酸化をランゲンドルフかん流心臓において評価した。両実験では、ラットを、上記のように、ビヒクルまたはアルビグルタイド（１０ｍｇ／ｋｇ／日、３日間）で処置した。

グルコースクランプ実験に関しては、ラット（各群ｎ＝５）を、１２０分間継続する正常インスリン‐高血糖クランプ（頸静脈を経た連続［１−^１３Ｃ］グルコース（８ｍｇ／ｋｇ／分）／ソマトスタチン（１．５μｇ／分）注入）に供した。この時間は、解糖およびトリカルボン酸回路中間体に十分であり、定常状態の濃縮を達成した。クランプ実験終了時に、心臓を迅速に摘出し、液体Ｎ_２中に置いた。過塩素酸抽出物を、凍結した心臓組織から調製し、ＫＯＨで中和し、凍結乾燥し、続いて５００μＬのＤ_２Ｏに溶かした。組織抽出物中の代謝産物^１３Ｃ濃縮のＰＯＣＥ（Ｐｒｏｔｏｎ Ｏｂｓｅｒｖｅ Ｃａｒｂｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｄ）^１Ｈ ＭＲＳ測定を、９．４Ｔ分光計で、以前に報告されているように行った（Yue, et al., J Pharmacol Exp Ther 2008 May; 325(2):466-74; Jucker, et al. Am J Physiol 1997 July; 273 (1 Pt 1):E139-E148; Jucker, et al. . J Biol Chem 1997 April 18;272(16):10464-73; and Yue, et al. Circulation 2003 November 11;108(19):2393-9）。アセチルＣｏＡ酸化への相対的な基質寄与の点から、相対的な心臓の炭水化物（グルコース、グリコーゲン、ピルビン酸、および乳酸を含む）酸化ならびに遊離脂肪酸（ＦＦＡ）／ケトン酸化を、代謝産物プール濃縮から次のように評価した：相対的な炭水化物酸化率は、（４‐^１３Ｃグルタミン酸濃縮）／（３‐^１３Ｃアラニン濃縮）として計算し、相対的な脂肪酸化は、１‐（４‐^１３Ｃグルタミン酸濃縮）／（３‐^１３Ｃアラニン濃縮）として計算した。

乳酸酸化および流量を評価することに関しては、かん流心臓実験を、その実験では、３−^１３Ｃ乳酸を乳酸酸化測定のための前駆体として使用した。パラダイムに続いて、ラット（各群ｎ＝１０）を、ネンブタール（６０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）で麻酔し、ヘパリンナトリウム（２００Ｕ／ｋｇ、腹腔内注射）で凝血防止した。心臓を、迅速に切除し、１１８．５ｍＭ ＮａＣｌ、４．７ｍＭ ＫＣｌ、１．２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ_４、２５ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、１．２ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４、１１ｍＭグルコースからなる、ｐＨ７．４の氷冷緩衝クレブス・ヘンゼライト（ＫＨ）溶液に移した。スチール大動脈カニューレを使用して、大動脈にカニューレを挿入した後、ランゲンドルフ装置（Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｈｅａｒｔ Ｓｉｚｅ １（ＩＨ‐１）；ハーバードアパレイタス社（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓｓ Ｉｎｃ．）、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、マサチューセッツ州）に接続し、７０ｍｍＨｇの定圧にて、ＫＨ溶液（３７℃）を用い、ガラスフリットを通して９５％Ｏ_２、５％ＣＯ_２のガスを供給してかん流した。安定化時間の後、アルビグルタイド（１２０ｎＭ）またはビヒクルを、１１８．５ｍＭ ＮａＣｌ、４．７ｍＭ ＫＣｌ、１．２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ_４、２５ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、１．２ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４、１１ｍＭ グルコース、３％ ＢＳＡ（本質的に脂肪酸を含まない）、１ｍＭ ３‐^１３Ｃ乳酸ナトリウム、０．１ｍＭ ピルビン酸ナトリウムおよび０．４ パルミチン酸ナトリウムからなる、ｐＨ７．４の改変ＫＨ溶液に加えた。心臓を６０分間かん流し、その間、流入および流出試料を集め、乳酸濃度をオリンパスＡＵ６４０分析器を使用して分析した。流入および流出３−^１３Ｃ乳酸濃縮および心臓組織３−^１３Ｃ乳酸に加えて、３−^１３Ｃアラニンおよび４−^１３Ｃグルタミン酸濃縮を、ＮＭＲスペクトロスコピーによって測定し、アセチルＣｏＡへの基質寄与としての相対的乳酸酸化を、（４−^１３Ｃグルタミン酸濃縮）／（３−^１３Ｃアラニン濃縮）として計算した。

動物プロトコール：心臓を摘出し、再循環緩衝溶液でかん流する４８時間、２４時間および２時間前に、ラットに、１ｍＬ／ｋｇの容積にて、ビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇのアルビグルタイドを皮下注射で投与した（図１１）。心臓の摘出時のアルビグルタイドの予想される血漿濃度に従って、アルビグルタイド（０．１２μＭ）をかん流溶液に加えた。ラットを、ネンブタール（６０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）で麻酔し、ヘパリンナトリウム（２００Ｕ／ｋｇ、腹腔内注射）で凝血防止した。心臓を、迅速に切除し、１１８．５ｍＭ ＮａＣｌ、４．７ｍＭ ＫＣｌ、１．２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ_４、２５ｍＭ ＮａＨＣＯ_３、１．２ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４、１１ｍＭ グルコースからなる、ｐＨ７．４の氷冷緩衝クレブス・ヘンゼライト（ＫＨ）溶液に移した。スチール大動脈カニューレを使用して、大動脈にカニューレを挿入した。大動脈にカニューレを挿入した後、ランゲンドルフ装置（Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｈｅａｒｔ Ｓｉｚｅ １（ＩＨ‐１）；ハーバードアパレイタス社（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓｓ Ｉｎｃ．）、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、マサチューセッツ州）に接続し、７０ｍｍＨｇの定圧にて、ＫＨ溶液（３７℃）を用い、ガラスフリットを通して９５％Ｏ_２、５％ＣＯ_２のガスを供給してかん流した。安定化時間の後、ベースライン緩衝溶液を集め、ベースライングルコースおよび乳酸濃度を決定し、次に心臓を、再循環緩衝溶液（〜６０ｍＬ）で１時間、定圧（７５ｍｍＨｇ）でかん流した。かん流終了時に、かん流緩衝溶液を集め、その容積ならびにグルコースおよび乳酸濃度を測定した。心臓湿重量も測定した。グルコースおよび乳酸は、オリンパスＡＵ６４０分析器を使用して、臨床化学研究室で測定した。グルコース流量は、（グルコースの濃度（初期）−濃度（最終））×（かん流容積／心臓湿重量（ｇ）／時間（時））として決定し、乳酸流量は、（乳酸の濃度（最終）−濃度（初期））×（かん流容積／心臓湿重量（ｇ）／時間（時））として決定した。

飼料：通常のげっ歯類飼料

分析測定：インスリンは、ＭＤＳラットインスリンキットを使用して測定した。血中グルコースおよび乳酸は、オリンパスＡＵ６４０臨床化学分析器を使用して決定した。血漿グルコースは、グルコースアッセイキット（１９２ウェル：Ｃａｔ Ｎｏ：１０００９５８２、Ｌｏｔ Ｎｏ：０４１４５７３）を使用して測定した。生体内実験の間、血中グルコースを、ＡＣＣＵ ＣＨＥＣＫ Ａｄｖａｎｔａｇｅ（Ｃａｔ／Ｔｙｐｅ：３２８８６５０）：Ａｃｃｕ−ｃｈｅｃｋ ｃｏｍｆｏｒｔ ｃｕｒｖｅ（１００テストストリップ、ロシュ社（Ｒｏｃｈｅ）、Ｌｏｔ Ｎｏ：５５１０１７）を使用して測定した。

薬および材料
次の薬物質を、本試験で使用した：
１）アルビグルタイド
２）ビヒクル（１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５３ｍＭマンニトール、１１７ｍＭトレハロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ７．２

ビヒクル／薬／試薬調製：
約９００ｍＬのＨＰＬＣグレード水を、ビーカーに加えた。無菌の撹拌子を加え、次のものを、マグネチック撹拌プレート上で混ぜた：０．４１±０．０１ｇのリン酸二水素ナトリウム・一水和物、０．９９±０．０１ｇの無水リン酸水素二ナトリウム、４４．２６±０．１ｇのＤ‐トレハロース（無水）、２７．８７±０．１ｇのマンニトール、および１０ｍＬの１％ポリソルベート８０ストック溶液。ｐＨを測定し、必要ならば、１Ｎ水酸化ナトリウムまたはリン酸を使用して、ｐＨを７．２に調整した。溶液を、１０００ｍＬ容メスフラスコに移し、ＨＰＬＣグレード水を１０００ｍＬの最終容積に達するまで加えた後、２０分間撹拌した。緩衝液を、０．２ミクロンフィルターユニット組立体を通してろ過した。フラスコを、アルミホイルで包むことによって光から保護して、４℃に保存した。−８０℃の冷凍庫に保存したストック溶液（１３１ｍｇ／ｍＬ）を、ビヒクルで希釈し、３ｍｇ／ｍＬまたは３０ｍｇ／ｍＬのアルビグルタイドの作業溶液にした。

データ分析
データは、平均値±ＳＥＭとして示す。群間の差を、対応のある、および対応のないスチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ）ｔ検定によって比較した。Ｐ＜０．０５のｐ値を、統計的に有意とみなした。グラブス外れ値検定を、生体内２‐ＤＧ取り込み実験の主要成分（すなわち、平均グルコース濃度、心臓組織放射能、およびＡＵＣ血漿放射能）について使用した。（ｚ（外れ値）＞ｚ＿棄却（ｃｒｉｔｉｃａｌ）（２．６））のとき、明らかな外れ値があると決定した。

結果
処置群では、体重が顕著に減少した（図９）。また、ビヒクル群は、実験前一晩絶食の結果として、多少の体重減少を示した。

心グルコース取り込み測定における観察されたばらつきを最小限にするために、平均血漿グルコース、心臓組織放射能、および血漿グルコース放射能（ＡＵＣ）を含む生体内２‐ＤＧ実験のすべての主成分を、本研究における統計的外れ値について注意深く検討した。グラブス検定を使用して、グルコース流量測定の主要な成分を外れ値について検討したとき、１頭のビヒクル動物で、心臓組織放射能に明らかな外れ値（ｚ（３．２）＞ｚ＿棄却（ｃｒｉｔｉｃａｌ）（２．６））があると決定された。くわえて、１頭のアルビグルタイドで処置した動物の平均血漿グルコースが、高いことが判明した（ｚ（２．７）＞ｚ＿棄却（ｃｒｉｔｉｃａｌ）（２．６））。１頭のビヒクル動物および１頭のアルビグルタイドで処置した動物を除いて、ビヒクル処理（Ｎ＝１４）と比較して、アルビグルタイド（Ｎ＝１５）での処置後に、心臓での２−ＤＧ取り込みが顕著に増加した（７０％、Ｐ＝０．０２２）（図１０）。

アルビグルタイド投薬後の２日、血漿グルコース、乳酸、非エステル化脂肪酸、またはインスリンに関して、群の間に有意差はなかった。

生体外グルコース処理（グルコース取り込みおよび乳酸流出）を、ランゲンドルフ心臓かん流設定で、生体内２‐ＤＧ試験に使用されたものと同じ生体内投薬プロトコールを使用して評価し、続いて１２０ｎＭ（生体内試験終了時の到達血漿濃度）でのアルビグルタイドの連続かん流した（図１０）。ランゲンドルフ逆行性かん流調製における再循環槽の概略図を、図１２に示す。生体内２‐ＤＧ実験の場合もそうであったように、アルビグルタイドで処置したラットでは、投薬パラダイムの間、重量が減少した。ビヒクルで処置した心臓と比較して、グルコース処理は、アルビグルタイドで処置した心臓において５９％（Ｐ＜０．０５）増加した（図１３）一方で、乳酸流出は、アルビグルタイドで処置した心臓において減少した（↓５５％、Ｐ＜０．０５）（図１３）。

心グルコース中間代謝
アルビグルタイドの心臓の中間グルコース代謝への効果を決定するために、代謝基質利用を、１‐^１３Ｃグルコース正常インスリン‐高血糖クランプを使用して評価した。ビヒクル‐およびアルビグルタイド‐処置心臓の間のアラニンおよび乳酸濃縮には、差がなかった（図１４Ａ）。しかしながら、ＴＣＡ回路の中間体である４‐^１３Ｃグルタミン酸の濃縮は、ビヒクル‐処置心臓と比較してアルビグルタイド‐処置心臓で顕著に高く、ＴＣＡ回路への解糖流量の増加を示している（図１４Ａ）。さらに、アラニンのアイソトポマー分析およびグルタミン酸濃縮（図１４Ｂ）によって計算されるように、アルビグルタイドでの処置は、脂肪酸化に対する炭水化物酸化の相対的な比率の顕著な増加をもたらした（↑１１２％、ｐ＜０．０５対ビヒクル）。心グリコーゲン濃度は、アルビグルタイドおよびビヒクルで処置した心臓の両方で類似していた（それぞれ、１２．２±１．７対１１．４±３．５μｍｏｌ／ｇ）。しかしながら、アルビグルタイドは、虚血性の心臓における代謝プロフィールを変えなかった。

アルビグルタイド処置の心臓の乳酸代謝への効果をさらに調べるために、３‐^１３Ｃ乳酸心臓流量および酸化を、生理的状態の基質供給可能性（すなわち、生理的レベルでのグルコース、乳酸、ピルビン酸、ＦＦＡの包含）の下でランゲンドルフかん流心臓において評価した。アルビグルタイドは、３０分間にわたって、かん流心臓への乳酸流入を一時的に増加したが（図１５Ａ）（負の流出）、この実験での心臓の乳酸濃度に影響はなかった（図１５Ｂ）。しかしながら、アイソトポマー分析によって評価すると、標識されたグルコースを前駆体として使用した前の生体内知見と一致して、ビヒクルと比較してアルビグルタイド処置は、相対的乳酸酸化の増加をもたらした（↑６３％、ｐ＜０．０５、図１５Ｃ）。

考察
アルビグルタイドは、正常心臓における心臓のグルコース取り込みの顕著な増加を、２つの異なる測定方法（生体内２‐デオキシグルコース取り込み、および生体外ランゲンドルフかん流心臓）を使用して確かめた。データは、心臓によるグルコース取り込みにおけるこの増加は、ＧＬＰ‐１注入を用いて以前に示されているように、インスリン非依存的機序に媒介されることを示唆している(Ban, et al. Circulation. 2008;117:2340) (Zhao, et al. J Pharmacol Exp Ther. 2006;317(3):1106)。くわえて、かん流心臓設定における乳酸流出の減少によって示されたように、正常な心臓において、非酸化（例えば、グリコーゲン合成）または酸化（好気的解糖）グルコース処理のいずれかがアルビグルタイドで刺激された。アルビグルタイドで観察された体重の減少は、飼料摂取の減少、および満腹を増すことに関するＧＬＰ‐１アゴニストの予想された薬理と一致した。これらのデータは、アルビグルタイドで処置した、虚血再かん流傷害を受けたラットにおいて観察された心保護が、部分的には、心臓によるグルコース処理および代謝の増加よって説明されうることを示唆する。

例３ 非虚血性心筋症およびＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩうっ血性心不全をもつ患者におけるアルビグルタイドの安全性、ならびにその心筋代謝、心筋機能および運動耐容能への効果を評価するための多施設、プラシーボ対照試験
正常なヒト心筋では、心機能のためのエネルギーの大部分（６０〜９０％）が、脂肪酸酸化（ＦＡＯ）に由来し、残り（１０〜４０％）がグルコース酸化（ＧＯ）に由来する。正常な心臓は、基質利用可能性に応えて心筋のＦＡＯとＧＯの割合を、動的に調節することができ、次いで心臓は、高エネルギーリン酸、特にＡＴＰおよびホスホクレアチンの形態でエネルギーを保存することができる。これにより、心臓は基本的な機能を維持することおよび需要の増加に応えて収縮性を増加することの両方のために、十分なエネルギー貯蔵の維持を確かにする。しかしながら、拡張型心筋症をもつ患者では、約２０％のエネルギーしかＦＡＯにより供給されず、残りはＧＯにより供給される(Davila-Roman VG, et al. JACC 2002)。グルコース優先のこの代謝基質シフトは、部分的には、脂肪と比べてグルコースがエネルギー的により高い効率（より低い酸素使用）であるという結果でありうる。しかしながら、グルコースへの相対的により高い依存にもかかわらず、グルコース取り込みおよび利用が損なわれること、心筋のインスリン耐性がこれら患者において持続することの両方の証拠がある。脂肪酸およびグルコースを代謝する能力のこの減少は、心筋のＡＴＰ含有量の減少および全体的な高エネルギーリン酸利用可能性の減少に関連し、この損なわれたエネルギー状態が、疾患を特徴付ける心筋機能障害に寄与する可能性が高い。総合して、これらの観察は、拡張型心筋症およびＣＨＦをもつ患者において、心筋のグルコース代謝の活性化またはグルコースの心筋への利用可能性の増加が、心筋のエネルギーの改善および心機能の改善をもたらしうるという仮説を示唆している。よって、ＧＬＰ‐１アゴニストのような治療は、心筋のインスリン作用を増加し、グルコース酸化の改善、最終的には心室の効率および運動耐容能の改善をもたらしうる。

グルカゴン（Ｇｌｕｃｏｇａｎ）様ペプチド‐１（ＧＬＰ‐１）は、栄養摂取に応答して腸Ｌ細胞によって分泌されるインクレチンホルモンである。ＧＬＰ‐１は、インスリン分泌を刺激すること、グルカゴン分泌を阻害すること、胃内容排出を遅延すること、満腹を増進ずることによって、グルコースホメオスタシスを制御する。ＧＬＰ‐１の主要な生理作用は、血糖管理と関連するが、ＧＬＰ‐１が心血管生理においても重要な役割を果たしうること示す証拠が増えてきている。また、ＧＬＰ‐１受容体は、心血管組織にも発現され、アゴニストによるＧＬＰ‐１受容体の活性化は、広範囲の心血管系作用をもたらす(Grieve, et al.)。ＧＬＰ‐１は、心臓においてインスリン模倣剤として機能することが示されており、心臓でのグルコース代謝を直接的に調節することができる（Ban, et al. Circulation. 2008;117:2340）。ＧＬＰ‐１が、生体外（Ban, et al., Circulation. 2008;117:2340）および生体内（Bose, et al. Circulation. 2008;117:2340）の両方において、心筋虚血再かん流傷害に対して心臓を保護することが示された。最も大切なこととして、７２時間のＧＬＰ‐１の短期注入が、心不全患者における心機能を顕著に改善することが報告されており、ＧＬＰ‐１および模倣剤が心不全の新規の治療方法として使用されうることを示唆している（Nikolaidis, et al. Circulation. 2004;109:962-5）。

この試験では、本発明者らは、ＦＤＧ‐ＰＥＴを使用して、心筋のインスリン作用およびグルコース酸化の代わりの尺度として、心筋のグルコース取り込みを測定するであろう。グルコース取り込みは、左心効率および運動耐容能の変化と相関付けられるであろう。

末期の心不全が、心臓の２つの主要な代謝基質である脂肪酸およびグルコースを代謝する能力の障害により特徴付けられることを示す証拠が増加している。低下した心筋のＡＴＰおよびホスホクレアチン含有量の形での、結果として生じる心筋のエネルギー枯渇は、心室機能障害および心拍出量の減少に寄与する有力なものであると考えられている。特に、心筋のインスリン耐性は、糖尿病に関連する心不全の発症において重要な役割をすると見られている。

多数の急性の心筋傷害および慢性心不全の動物モデルの研究は、ＧＬＰ‐１受容体アゴニストの投与が、心筋傷害の減少および心筋機能の改善をもたらすことを示している（Timmers L, et al., J Am Coll Cardiol 2009; 53:501; Noyan-Ashraf M., et al., Diabetes 2009;58:975; Ban K, et al., Circulation 2008;117:2340; Nikolaidis L, Circulation 2004;110:955）。本明細書の実施例１に示すように、ラットの急性心筋虚血／再かん流傷害モデルにおいて、アルビグルタイドは、顕著に梗塞サイズを減少する。また、本明細書の実施例１および２に示すように、梗塞サイズの顕著な減少は、投与量依存的であった。虚血後の左室心機能もまた、改善した。げっ歯類モデルにおいて、アルビグルタイドが心保護可能である厳密な機序は調査されなかったが、増加したインスリン分泌の間接的な効果、または心筋上のＧＬＰ‐１受容体作動の直接的な効果であると仮定されることができる。心筋のグルコース取り込みを検討するための進行中の実験では、予備データは、ＧＬＰ‐１ペプチドおよびアルビグルタイドの両方の、生体内およびインビトロでのグルコース取り込みを増加する能力を示している。

ＧＬＰ‐１受容体作動の心筋機能への効果は、ＧＬＰ‐１ペプチドの連続注入を使用する幾つかの予備的臨床研究で調査されている。これらの研究により、ＧＬＰ‐１ペプチド注入が、慢性心不全をもつ対象における運動耐容能を増加すること(Sokos G, et al., J Cardiac Failure 2006; 12:684)、急性心筋梗塞をもつ患者における左心駆出分画を改善すること(Nikolaidis L, et al., Circulation 2004; 109:962)、および心臓手術後の患者における昇圧薬の静脈内投与の必陽性を減少すること(Sokos G, et al., Am J Cardiol 2007; 100:824)が報告されている。各ケースにおいてＧＬＰ‐１投与が心機能に有益な効果を生み出す主要な機序は、心筋のインスリン耐性の寛解および心筋グルコース利用の改善を通してであると考えられている。ＧＬＰ‐１ペプチドがＧＬＰ‐１アゴニストの心筋機能への有益な効果をサポートするという既存の前臨床データおよび臨床的な証拠に基づいて、本発明者らは、アルビグルタイドの投与が、慢性心不全および心室機能障害をもつ患者における心筋のグルコース取り込みおよび利用／酸化を促進し、心筋のインスリン作用の増加することによって、全体的な心臓エネルギー効率を改善することおよび心機能を増強すると仮定する。

概念研究のこの調査報告は、慢性の非虚血性の拡張型心筋症に伴う、安定なニューヨーク心臓協会（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）（ＮＹＨＡ）クラスＩＩ〜ＩＩＩ心不全をもつ患者で行われるであろう。主要評価項目は、アルビグルタイド投与が、ＦＤＧ‐ＰＥＴによって測定される心筋におけるグルコース取り込みおよび利用を増加し、心筋効率の増加および運動耐容能の増加をもたらすという仮説をテストすることに向けられている。１つ以上の主要評価項目への統計的に有意な効果、または心筋の生理への臨床的に関連する効果を示唆する総合的なシグナルのいずれかとして定義される肯定的な結果は、慢性心不全集団におけるさらなる発症に、進行可能性の証拠を提供することになる。

投与量理論的根拠
この第ＩＩ相概念実証研究は、プラシーボと比較して、アルビグルタイドの投与量の範囲の投与量応答、有効性、安全性、および忍容性を、１２週間の治療期間にわたって、ＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩ心不全をもつ患者において評価するであろう。週１回皮下注射として投与される予定される投与量は、３．７５ｍｇ、１５ｍｇ、および３０ｍｇである。投与量範囲は、以前の研究からのアルビグルタイドに関する安全性および忍容性データ、うっ血性心不全をもつ患者における心機能へのＧＬＰ‐１の効果を評価した既報の臨床研究からのその有効性データ、および前臨床実験におけるアルビグルタイドに関する薬力学データに基づいて選択された。

有効性の標的濃度を確立するために、既報のデータを、慢性心不全をもつ患者（Sokos, et al. J Cardiac Failure; 2006; 12:684）および成功した再かん流後の急性心筋梗塞および左心機能不全をもつ患者（Nikoladis, et al. Circulation, 2004; 109:962-965）におけるＧＬＰ‐１の心機能への効果および臨床転帰を検討した２つの研究から精査した。これらの研究では、〜５０〜１００ｐＭの範囲内のＧＬＰ‐１血漿濃度が、肯定的な結果を生み出した。Ｓｏｋｏｓらは、標準的治療にくわえてＧＬＰ‐１の５週間注入（２．５ｐｍｏｌ／ｋｇ／分）を使用して、ＮＹＨＡクラスＩＩＩ／ＩＶ慢性心不全をもつ患者（ｎ＝１２）において、ＧＬＰ‐１の使用を調べた（Sokos, et al. J Cardiac Failure; 2006; 12:684）。長期のＧＬＰ‐１治療は、左心駆出分画率（２１±３％から２７±３％、ｐ＜０．０１）、最大心筋酸素消費（１０．８±０．９ｍＬ／Ｏ_２／分／ｋｇから１３．９±０．６ｍｇ／Ｏ_２／分／ｋｇ、ｐ＜０．００１）、６分間歩行距離（２３２±１５ｍから２８６±１２ｍ、ｐ＜０．００１）およびミネソタ心不全（Minnesota Living with Heart Failure）クオリティ・オブ・ライフスコア（６４±４から４４±５、ｐ＜０．０１）の顕著な改善をもたらした。対照患者（ｎ＝９）では、顕著な効果は、これらパラメーターのいずれにも見られなかった。２つ目の研究では、ＧＬＰ‐１投与（１．５ｐｍｏｌ／ｋｇ／分、７２時間）は、標準的治療を受けた対照群と比較して、成功した直接的血管形成術後の急性心筋梗塞をもつ１０患者における左心駆出分画率（２９±２％から３９±２％、ｐ＜０．０１）の顕著な改善をもたらした。くわえて、心室全体の壁運動スコアおよび局所的な壁運動スコア指数の改善が、観察された（それぞれ、１．９４±０．１１から１．６３±０．０９、ｐ＜０．０１、および２．５３±０．０８から２．０２±０．１１、ｐ＜０．０１）（Nikoladis, et al. Circulation, 2004; 109:962-965）。この場合も先と同様に、これら肯定的な効果は、対照群（ｎ＝１１）では見られなかった。

インビトロ細胞培養研究により、アルビグルタイドは、ＧＬＰ‐１受容体アゴニストとしての効力がＧＬＰ‐１より約１０倍弱いことが示された。既報の臨床研究で達成されたＧＬＰ‐１濃度から決定した有効性に必要とされるＧＬＰ‐１範囲の上限を使用し、効力および分子量の違いを考慮して、約７７ｎｇ／ｍＬのアルビグルタイドの標的濃度が、左心（ＬＶ）機能への臨床的に重要な効果を生み出すのに必要であると予想された。しかしながら、必要標的濃度のこの推定に不確実な可能性があるため、以前の研究（２型糖尿病対象においてアルビグルタイドをバイエッタ（商標）と比較する、１６週間投与量決定試験）によって開発された薬物動態モデルを使用してシミュレーションを行い、この研究で提案された投与量範囲が、自然のＧＬＰ‐１の潜在的効力と比較して、広い範囲のアルビグルタイドの潜在的効力で与えられた推定標的濃度を満足するかどうかを評価した。ありうる投与量およびありうる効力の差の範囲についての標的達成率を、表４に示す。自然のＧＬＰ‐１に対する想定効力範囲の範囲内で、アルビグルタイドの効力が、自然のＧＬＰ‐１の効力より１０〜１００倍低い場合、この研究の提案した投与量範囲は、効果のある濃度を達成する高い可能性を有する。アルビグルタイドのＣＨＦに対する効力が、これより低い場合、標的濃度に達する確率はかなり低く、３０ｍｇより高い投与量が恐らく必要とされることになる。

週３０ｍｇより高い投与量は、重篤なＧＩ有害事象に関連するので、週３０ｍｇの現行最高開始投与量が選択された。アルビグルタイドが、週１回３０ｍｇとして投与されたとき、吐き気および／または嘔吐の頻度は２９．０％であった（Rosenstock, et al. Diabetes Care 2009; 32:1880-1886）。それに比較して、２週間毎に５０ｍｇまたは毎月１００ｍｇとして投与されたとき、頻度は５４．３％および５５．９％であった。５０ｍｇの投与量に伴う消化管（ＧＩ）事象は、その後の投薬とともに減退したので、必要に応じて、３０ｍｇより高い投与量に漸増することが可能である。

最低投与量は、インビトロ効力データに基づいて予想９０％標的達成率を達成するために３．７５ｍｇとして選択された。１．８８ｍｇおよび７．５ｍｇの投与量は、この研究に選択されなかった。１．８８ｍｇの投与量は、自然のＧＬＰ‐１と比較して１／１０のアルビグルタイド効力で、予想標的達成率９０％を達成しない。７．５ｍｇ投与量は、３．７５ｍｇ投与量と比較して、投与量応答カーブを描くのに役立つさらなる情報を少ししか提供しないことが予想される。

表４ ＧＬＰ‐１ペプチドに相対的なアルビグルタイド想定効力の範囲に基づく、定常状態での平均血漿濃度の標的達成率（Ｃｐ_{ａｖｅｓｓ}）

目的
一次
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、ＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩ心不全をもつ患者における心筋のグルコース取り込みへの治療効果を３ヵ月間にわたって決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、ＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩ心不全をもつ患者における心筋効率への治療効果を３ヵ月間にわたって決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、ＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩ心不全をもつ患者における運動能力への治療効果を３ヵ月間にわたって決定すること。
二次
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、左室機能への治療効果を、心エコー検査を使用して決定すること。
・単施設で行われるサブスタディでは、プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、左および右心室容積、駆出分画率および心筋重量への治療効果を、心磁気共鳴画像法（ＣＭＲ）を使用して決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、６分間歩行距離への治療効果を決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、ＣＨＦの重症度の指標である血清ＢＮＰへの治療効果を決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、グルコース代謝のバイオマーカーへの治療効果を決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、グルコース代謝のバイオマーカーへの治療効果を決定すること。
・プラシーボと比較したアルビグルタイドの投与量の、クオリティ・オブ・ライフ尺度への治療効果を決定すること。
・ＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩ心不全をもつ患者におけるアルビグルタイドの安全性および忍容性を３ヶ月治療期間にわたって評価すること。
・診査薬物動態／薬力学分析も、アルビグルタイドのトラフ血漿濃度を使用して行われうる。

評価項目
一次
・ＦＤＧ−ＰＥＴイメージングによって評価した心筋のグルコース利用
・安静時に評価した心筋の効率（遂行作業／ＭＶＯ_２）：
・心エコーにより計算されるＳＶ
・^１１Ｃ‐アセテートＰＥＴイメージングによって評価されるＭＶＯ_２
・自転車心肺運動負荷試験によって評価したピーク酸素取り込み（ＶＯ_２ｍａｘ）
二次
・全施設での、心エコー図によって評価した左心室機能（ＬＶＥＦ、心収縮期および心拡張期におけるＬＶ容積）
・また、単施設で行われるサブスタディでは、ＬＶおよびＲＶ機能も心磁気共鳴画像法（ＣＭＲ）によって評価されるであろう（ＬＶＥＦ、心収縮期および心拡張期におけるＬＶおよびＲＶ容積、ＬＶ質量）
・６分間歩行試験によって評価される運動耐容能
・血清ＮＴ‐ＢＮＰレベル
・グルコース、インスリン、遊離脂肪酸の血漿レベル；ＨＯＭＡ指標
・ミネソタ心不全質問表（Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｌｉｖｉｎｇ ｗｉｔｈ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ）によって評価されるクオリティ・オブ・ライフ
・ＡＵＣ、ＣＭＡＸおよびＣｔを含む（これらに限定されない）診査のＰＫパラメーターが測定されうる。

安全性評価項目：
・以下を含むがこれらに限定されない安全性評価項目：
ａ．大動脈駆出音（Ａｅｓ）の発生率および重症度
ｂ．全原因死亡率
ｃ．心不全による入院

治験計画
研究デザイン／概略
これは、無作為に選ばれた、約１２０名の慢性の非虚血性の拡張型心筋症に伴う安定ＮＹＨＡクラスＩＩ〜ＩＩＩ心不全をもつ対象を登録する、多施設、無作為化、プラシーボ対照、単盲検の（対象および治験責任医師は内容を知らされないであろう）、並行群間デザインであろう。無作為に選ばれた対象について〜２０％の無作為化後脱落率を仮定し、この数から、各治療群（プラシーボ、３．７５ｍｇ、１５ｍｇおよび３０ｍｇアルビグルタイド）で〜２５名の評価対象となるであろう。

対象は、音声自動応答システム（ＩＶＲＳ）を用いて性別の層別化をする研究に、最適に無作為化され、以下に列挙される治療計画の１つを受けるであろう。
Ａ：アルビグルタイド（３．７５ｍｇ）
Ｂ：アルビグルタイド（１５ｍｇ）
Ｃ：アルビグルタイド（３０ｍｇ）
Ｄ：アルビグルタイドに整合したプラシーボ

アルビグルタイドまたはプラシーボに無作為に選ばれた対象は、病院を訪れ、現場スタッフによる毎週皮下注射を受けるであろう。安全性、ＰＫおよびＰＤ分析用血液試料、ならびにイメージング、運動試験、安全性および忍容性評価（ＡＥ、バイタルサイン、ＥＣＧ、などを含む）は、計画予定表に示された試験のための訪問時に採集／評価されるであろう。この試験の間、第１週と第１３週の２回の一泊の滞在があり、イメージングと運動試験が可能であろう。その一泊の滞在の詳細は、試験手順マニュアル（ＳＰＭ）に概説されるであろう。追跡調査の訪問は、試験薬の最終投薬の２８日（±３日）後に行われるであろう。

対象が時期尚早に中止する場合、治験責任医師と相談して治験依頼者の裁量で追加の対象が登録されうる。追加のデータが、安全性、忍容性の確立、またはＰＫおよびＰＤパラメーターもしくは試験追加投与量レベルのより良い特徴付けに必要であるならば、進行中の安全性、ＰＫおよびＰＤデータに基づいて、追加の対象は所定のレベルにて投薬されうる。

この試験への参加の期間は、審査から追跡調査まで約２０週間であると予想されている。

ＣＭＲサブスタディ
また、単施設に登録される資格のある対象は、ベースライン（第１週）にＣＭＲスキャニングを受けた後、アルビグルタイドまたはアルビグルタイドに整合したプラシーボの最初の投与を受け、第１３週の試験の治療期間の終わりに、ＣＭＲスキャニングを受けるであろう。

治療割り当て
対象は、有効な内部ソフトウェアを使用して、試験の開始前に、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓによって作製された無作為化スケジュールに従って、並行治療群列に割り当てられるであろう。

対象は、音声自動応答システム（ＩＶＲＳ）を用いて、試験に無作為化され、以下に列挙された治療計画の１つを受ける。

投与量調整／中止有効性基準
現行の投与量レベルの効果、および十分な薬力学効果を達成しない投与量レベルへの継続した無作為化の利用を評価するために、中間の分析がこの試験に計画される。

この試験の適格性基準は、以下を含むであろう：
対象は、以下の基準のすべてに当てはまる場合のみ、この試験に含まれる資格があるであろう：
・非虚血性起源の慢性拡張型心筋症
・審査／ベースライン訪問の少なくとも３ヶ月間の最適治療法での臨床的安定
・直近１２ヶ月の任意の測定によって評価された左心室駆出分画率≦３５％
・登録の最短６ヶ月間のＮＹＨＡクラスＩＩ／ＩＩＩ心不全
・同意書にサインする時点で年齢２１歳以上７５歳以下の男性または女性。しかしながら、この試験の最適な年齢範囲は、年齢４０〜６５歳と思われる。
・女性対象は、以下の場合、参加する資格がある：
・文書で記録された卵管結紮もしくは子宮摘出を受けた閉経期前の女性として定義される妊娠可能性がない、または１２月間の自然な無月経として定義される閉経後である（疑わしい症例では、血液試料で、卵巣刺激ホルモン（ＦＳＨ）＞４０ＭｌＵ／ｍＬおよびエストラジオール＜４０ｐｇ／ｍＬ（＜１４０ｐｍｏｌ／Ｌ）を同時に確認）。（ホルモン置換治療（ＨＲＴ）を受けており、閉経に関する状態が不確かな女性は、試験中にＨＲＴを継続したいならば、１つの避妊方法を使用することが求められるであろう。そうでなければ、彼女らは、試験登録前に閉経期後の状態を確認できるようにＨＲＴを中止しなければならない。たいていの形態のＨＲＴについて、治療の休止と採血との間は、少なくとも２〜４週間経るであろう。この間隔は、ＨＲＴのタイプおよび投与量に依存する。彼女らの閉経期後状態の確認に続いて、彼女らは、試験中、避妊方法の使用なしにＨＲＴの使用を再開することができる。）
・妊娠可能性があり、適切な（製品ラベルまたは治験責任医師により決定された）期間の間、その時点での妊娠の恐れを十分に最小限にするための１つの避妊方法の使用に同意する。女性対象は、最終投薬の〜２８日後の追跡調査の訪問まで、避妊薬を使用することに同意しなければならない。
・同意書に列挙される必要および制限事項へのコンプライアンスを含む、書面インフォームドコンセントを付与する能力。
・脚ブロックをもつ対象では、ＱＴｃＢもしくはＱＴｃＦ＜４５０ｍｓｅｃ；またはＱＴｃ＜４８０ｍｓｅｃの確認。
・ＡＳＴおよびＡＬＴ＜２×ＵＬＮ；アルカリホスファターゼおよいビリルビン＞１．５×ＵＬＮ（ビリルビンが分画され、直接ビリルビン＜３５％である場合、単離ビリルビン＞１．５ｘＵＬＮは許容可能）。
・対象は、能力／運動試験を行うことができなければならない。

以下の基準のいずれかが適応される場合、対象は、この試験に含まれる資格がないであろう：
・審査前３ヶ月以内、試験前Ｂ型肝炎表面抗原陽性またはＣ型肝炎抗体結果陽性
・薬物／アルコール依存歴
・ＨＩＶ抗体テスト陽性
・カルシトニン＞１００ｐｇ／ｍＬ
・トリグリセリド＞８５０ｍｇ／ｄＬ
・胃バイパスおよび胃バンディング術、幽門洞切除術、ルーワイ（Ｒｏｕｘ−ｅｎ−Ｙ）バイパス、胃迷走神経切離術、小腸切除術、または上部消化管機能に大きく影響すると考えられる手術を含む重大な消化管手術歴
・以下で定義される試験６ヶ月以内の通常アルコール摂取歴：
・英国用：平均の毎週の摂取、男性、＞２１ユニットまたは、女性、＞１４ユニット。１ユニットは、８ｇのアルコール：半パイント（〜２４０ ｍＬ）のビール、１杯（１２５ｍＬ）のワイン、または１（２５ｍＬ）量り（ｍｅａｓｕｒｅ）のスピリッツに相当する。
・米国用：平均の毎週の摂取、男性、＞１４杯（ｄｒｉｎｋｓ）または女性、＞７杯。１杯（ｄｒｉｎｋ）は、１２ｇのアルコール：１２オンス（３６０ｍＬ）のビール、５オンス（１５０ｍＬ）のワイン、または１．５オンス（４５ｍＬ）の８０プルーフ蒸留スピリッツに相当する。
・対象は、臨床試験に参加し、現試験の最初の投薬日前に以下の期間に治験薬を受け取る：３０日、５半減期、または治験薬の生物学的作用の２倍の期間（どちらか長い方）。
・最初の投薬日前１２ヶ月以内の４つより多い新しい化学物質への暴露
・アルビグルタイド、他のいずれかのＧＬＰ‐１類似体、またはパン酵母に対する、既知のアレルギーまたは感受性の既往歴
・試験に参加した際、５６日の期間内に、血液または血液生成物を、５００ｍＬを超えて提供する結果になる。
・審査時または投薬前に血清または尿ｈＣＧ試験陽性により決定された妊娠女性
・授乳中の女性
・プロトコールに概略された手順に従うことを避けようとすることまたは従うことができないこと（例えば、精神障害に関連して）。
・対象が、精神的または法的無能力である。
・既知の糖尿病の診断、空腹時グルコース＞１４０ｍｇ／ｄＬ、またはＨｂＡ１ｃ＞７％
・異常甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）としての未矯正の甲状腺疾患兆候（審査時、基準範囲外）
・１年未満の平均余命の他の医学的問題
・以下を含む心筋症または左心機能不全他の原因：
ｉ．未矯正の原発性の閉塞性または逆流性弁膜症
ｉｉ．アミロイドーシス、ヘモクロマトーシス、サルコイドーシスまたは他の原因による拘束型心筋症
ｉｉｉ．壁厚＞１．５ｃｍの心肥大
ｉｖ．アルコールにより誘発される心筋症
ｖ．出産後１２ヶ月間に心不全をもつ女性
ｖｉ．複雑心奇形
ｖｉｉ．アントラサイクリンに誘発される心筋症
・骨格筋の遺伝障害（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー）をもつ対象
・臨床的に重大な心膜疾患
・ステータス１Ａまたは１Ｂとして心膜移植待機リストに載る
・深部静脈血栓症または既知の凝固障害の既往歴
・膵炎の既往歴
・甲状腺髄様癌の既往歴または家族歴
・多発性内分泌腫瘍症２型の既往歴または家族歴
・以下のいずれかを含む臨床的に重大なＣＡＤの既往歴：
ｉ．区域壁運動異常につながる前ＳＴＥＭＩ
ｉｉ．前冠動脈造影からの構造に基づいた＞７０％主要血管の障害のあるＣＡＤの存在
ｉｉｉ．過去６ヶ月以内の不安定狭心症による入院
ｉｖ．ＰＩの判断でのＣＡＤをもつ高いリスク
・審査時、推定ＧＦＲ＜６０ｍＬ／分の腎機能障害の既往歴
・安静時収縮期血圧＜８５ｍｍＨｇ、もしくは＞１７０ｍｍＨｇ；または審査時、拡張期血圧＞１１０ｍｇＨｇ
・患者が、イメージング評価の完了に、延べ合計最高４時間、横たわることができない。
・以下を含むがそれらに限定されないＭＲＩスキャニングへの禁忌を有する対象は、ＣＭＲサブスタディを行う単施設に登録されないであろう：
・適切な手術立体構造をもつ頭蓋内動脈瘤クロップ（杉田（Ｓｕｇｉｔａ）クリップの除く）
・眼窩内の金属片の既往歴
・ペースメーカーまたは非ＭＲ適合心臓弁
・内耳埋め込み
・治験責任医師により重大と見なされる閉所恐怖症の既往歴

心筋のグルコース取り込み
［^１８Ｆ］フルオロ‐２‐デオキシ−グルコース陽電子放射断層撮影（ＦＤＧ‐ＰＥＴ）イメージングが、ベースラインおよび治療終了時（第１３週）に行われ、心筋のグルコース取り込みを評価するであろう。対象は、各イメージング／注入試験の前の夕方に、各イメージング施設のそれぞれの研究ユニットまたはそのコンポーネントに収容されるであろう。１８：００時に、対象は、体重１ｋｇ当たり約１２ｋｃａｌを含有する標準的な食事を摂る。炭水化物、脂肪、およびタンパク質は、総エネルギー摂取量のそれぞれ約５５、３０、および１５％に相当するであろう。２０：００時に、対象は、〜２５０ｋｃａｌ、４０ｇの炭水化物、６．１ｇの脂肪、および８．８ｇのタンパク質を含有する規定の液体調合軽食を摂るであろう。この軽食後、対象は全員、翌日の試験の完了まで絶食するであろう。概日リズムの心筋代謝への影響を最小にするために、すべての試験は、〜８：００時に開始されるであろう。

心筋効率
心筋効率の１つの尺度は、Ｌｉｎｄｎｅｒら(J Nucl Med, 47, 378-3832005)で検討されたｗｏｒｋ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｉｎｄｅｘ（ＷＭＩ）である。

^１１ Ｃ−アセテートを使用するＭＶＯ _２ 測定：ＴＣＡ回路を通した総合的な心筋の酸化の流量を表わす心筋の^１１Ｃ‐活性のクリアランスの速度を測定することによって、各試験について、心筋の酸素消費（ＭＶＯ_２）が推定されるであろう（２）。心筋の^１１Ｃ活性のクリアランスに単一指数関数を適合することによって、各心筋の関心領域（ＲＯＩ）について、速度定数Ｋ_ｍ（分−^１）が測定されるであろう。^１１Ｃ‐アセテート曲線の直線部の外側のデータポイントを含むことを防ぐために、直線部の最初および最後のデータポイントは、データを適合する前に作業者によって視覚的に選択されるであろう。所定の試験について、Ｋ_ｍの平均値およびＳＤは、３つの心室中部前外側のＲＯＩから得られるＫ_ｍ値を平均することによって計算されるであろう。このＫｍ値は、前方ＬＶ仕事の心エコー測定と併せて使用されるであろう。

酸素取り込み：
ピーク酸素取り込みは、ベースラインおよび第１３週に測定されるであろう。患者は、自転車エルゴメータで、呼吸困難または疲労が現れない程度の最大運動試験を行うであろう。安静期間の後、作業負荷は、３分毎に２５ワットづつ段階的に増加するであろう。運動中ずっと、呼吸毎のガス交換および心拍数が、測定されるであろう。各３分作業負荷の間、ボルグＲＰＥおよび血圧が得られるであろう。ピークの運動時、心拍数、血圧、およびボルグＲＰＥが記録されるであろう。ガス交換評価項目は、ピークＶＯ_２、Ｖｅ／ＶＣＯ_２スロープ、ＲＥＲ、運動時間、ならびに換気閾値でのＶＯ_２ならびに時間を含む。

左心駆出分画率
診査ＣＭＲサブスタディは、ＬＶ容積、ＲＶ容積、両室ＥＦおよびＬＶ質量のさらなる測定を含むであろう。サブスタディは、正式に動いていておらず、採用は、実現可能性に基づくであろう。しかしながら、ＣＭＲの精度は、心エコー検査法のそれより実質的に高い。Ｂｅｌｌｅｎｇｅｒら（２０００年）は、心エコー検査に対して駆出分画率での同等の変化の測定に関して標本の大きさの８０％もの減少を推定している。

左心駆出分画率（心エコー検査法）
心エコー検査法が、ベースラインおよび第１３週に、脈波、連続波、組織ドップラーを使用して行なわれるであろう。評価項目は、左室構造および機能：左室拡張期末および収縮期末容積（２Ｄ）、左心駆出分画率（２Ｄ）、心拍出量、心指標およびＴＤＩによるＥｍ（拡張機能）の測定からなるであろう。

左心駆出分画率（ＣＭＲＩ）
ベースラインおよび３ヶ月処置段階後に、非コントラストＣＭＲが、運動試験後安静期間に続いて行われるであろう。Ｋｒａｍｅｒら（２００８年）により推奨された順序を含めて３Ｔ ＭＲＩ検査が、ＬＶ構造および機能の評価のために、総検査時間が約９０分を超えないように行われるであろう。測定は、Ｃｅｒｑｕｅｉｒａら（２００２年）の推奨に一致して、定量的容積分析法を使用してなされ、報告されるであろう。

６分間歩行試験（６ＭＷＴ）
６分間歩行試験が、ベースラインおよび試験終了時（第１３週）に行われるであろう。患者全員が標準的な指示を受け、歩行距離が測定されるであろう。

評価項目の組み合わせ
単一の一次評価項目または評価項目の組み合せが、薬力学的機序の証明に導くことができる複数のシナリオがある。例えば、ＬＶＥＦまたは６ＭＷＴの増加と連動した心筋効率における観察された有効性は、１つのそのようなシナリオである。

例４：ＧＬＰ‐１および心血管保護
序論：以前の研究は、グルカゴン様ペプチド‐１（ＧＬＰ‐１）が、その末梢血糖管理における役割に非依存的な心血管有益性を引き起こすことを示している。しかしながら、心保護に関する正確な機序は、未解決のままである。この例は、ＧＬＰ‐１が、ラットにおいて、心筋グルコース利用を増強すること、およびエネルギー的に好ましい代謝基質の切り換えを促進することによって、直接的な心保護の役割を果たすことを示す。

方法：スピローグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）（ＳＤ）ラットを、無作為化し、ビヒクルもしくは４．８ｐｍｏｌ／ｋｇ／分のＧＬＰ−１を、３０分間の心虚血、それに続く２４時間の再かん流（心Ｉ／Ｒ傷害）の間に投与するか、または３００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分のＧＬＰ−１を最高３．５時間（基質切り換え）投与した。正常またはＩ／Ｒ傷害心臓における相対的な炭水化物酸化および脂肪酸酸化を、１‐^１３ＣグルコースクランプおよびＮＭＲをベースにしたアイソトポマー分析の後に測定した。Ｏ_２消費は、成体ラット心室筋細胞（ＡＲＶＭ）で測定した。グルコース利用および乳酸生産は、正常な心臓において、［^３Ｈ］‐２‐デオキシグルコースまたはランゲンドルフかん流を使用して評価した。

結果：ＧＬＰ‐１は、Ｉ／Ｒ傷害心臓において心筋梗塞サイズを減少し（↓２７虚血性の領域の％、ｐ＜０．０５、Ｎ＝６）、収縮性を増加した（↑２０％の＋ｄＰ／ｄｔ、ｐ＜０．０５、Ｎ＝６）。また、ＧＬＰ‐１は、ＬＶ非虚血性境界域における脂肪酸化に対する炭水化物酸化の比率を増加する（↑１４％、ｐ＜０．０１、Ｎ＝６）ことによって、代謝基質の切り換えを誘導した。ｃＡＭＰ（↑１０６％、ｐ＜０．０５、Ｎ＝５）および乳酸（↑１２１％、ｐ＜０．０１、Ｎ＝６）の増加にもかかわらず、ＬＶ虚血性域では、基質の切り換えは起こらなかった。また、ＧＬＰ‐１は、正常な心臓における生体内グルコース取り込み（↑６４％、ｐ＜０．０５、Ｎ＝８）をグリコーゲンレベルに影響を及ぼすことなく増加し、ランゲンドルフかん流心臓におけるグルコース取り込みおよび乳酸生産をそれぞれ１．９倍および２．６倍増加した。ＧＬＰ‐１処置ＡＲＶＭ（↓２３％、ｐ＜０．０５、Ｎ＝４）では、酸素消費の減少が観察され、これは、脂肪酸化から炭水化物酸化への切り換えと一致する。

結論：これらの結果は、観察された心保護が、ＧＬＰ‐１の心筋への直接的な役割に由来しうることを示す。嫌気的解糖は、虚血性の心保護に寄与しうるが、健康な、非虚血性の心筋における、よりエネルギー的に好ましい炭水化物酸化へのシフトは心収縮性の維持に有益な役割を果たしうる。

本出願が優先権を主張するあらゆる特許出願はまた、特定の刊行物および参照文献について上記に記載した方法で、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。

Claims (36)

1. 治療、予防および／または寛解を必要とするヒトにおける少なくとも１つの心血管障害を治療、予防および／または寛解する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
2. ヒトにおける心臓組織におけるグルコース代謝を制御する方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を、前記ヒトに投与することを含んでなる方法。
3. ヒトにおける心機能を増加する方法であって、前記ヒトに、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
4. ヒトにおける心筋梗塞サイズを減少する方法であって、少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
5. 前記少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストが、配列番号１を含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記医薬組成物が、皮下に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける心臓組織からの乳酸流出を減少する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記医薬組成物が、前記ヒトの心筋組織におけるグルコース取り込みを増加する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記医薬組成物が、少なくとも１つの第２の強心剤と、同時投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記医薬組成物が、１投与量当たり約４．０ｍｇ未満の配列番号１を含んでなる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記医薬組成物が、１投与量当たり約２．０ｍｇ未満の配列番号１を含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記医薬組成物が、低い投与量にて、週に１回投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける心臓効率を改善する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける血管拡張を増加し、および／またはＮＯ含有量もしくは供給を増加する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける運動能力または運動耐容能を改善する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける心疾患の症状を減少するか、またはクオリティ・オブ・ライフを改善する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける生存を改善する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記ヒトが、慢性の心臓の状態を有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記ヒトが、急性の心臓の状態を有する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記医薬組成物が、６ヶ月未満の期間にわたって、週に１回投与される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記医薬組成物が、少なくとも１つのボーラス注入として投与される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記ヒトが、虚血性うっ血性心不全を有する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記ヒトが、非虚血性うっ血性心不全を有する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記ヒトが、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を有する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記ヒトが、左室機能不全もしくは右室機能不全；左心不全もしくは右心不全；低心拍出量もしくは高心拍出量；急性非代償性心不全；慢性うっ血性心不全；限定されないが遺伝的要因、冠動脈疾患、心筋梗塞、人工弁疾患、感染症、先天性心疾患、高血圧症、アルコール消費、糖尿病、左室肥大、心筋炎、アミロイドーシス、ヘモクロマトーシス、糖原病、代謝障害、グルコースもしくは脂質代謝障害、炎症性疾患に起因する心筋症を含むいかなる原因の心筋症；冠動脈疾患；心筋虚血；急性心筋梗塞；急性冠症候群もしくは不安定狭心症；肺水腫；左室肥大もしくは右室肥大；心停止；心筋炎；限定されないが遺伝的要因、末梢血管疾患、悪液質、がん、慢性心不全、慢性肺疾患、炎症性疾患に起因する骨格筋機能障害もしくは骨格筋症；運動能力障害；および／または末梢血管疾患を有する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ヒトが、２型糖尿病を有する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記ヒトが、高血糖症を有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記医薬組成物が、前記ヒトにおける以下の機能：心筋グルコース利用、心筋効率、左室機能、および／または運動耐容能の少なくとも１つを改善する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 少なくとも１つのＧＬＰ‐１活性を有するポリペプチドおよび／または少なくとも１つのＧＬＰ‐１アゴニストを含んでなる医薬組成物の、ヒトにおける少なくとも１つの心血管疾患または障害を治療、寛解または予防するための使用。
30. ヒトに心血管保護を提供する方法であって、前記ヒトに、アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
31. 該医薬組成物が、約３．７５ｍｇ、１５ｍｇまたは３０ｍｇのアルビグルタイドを含んでなる、請求項３０の方法。
32. 該医薬組成物が、約４ｍｇ以下のアルビグルタイドを含んでなる、請求項３０の方法。
33. 該医薬組成物が、アルビグルタイドを、１ｍｇ、１．５ｍｇ、１．８８ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇおよび４ｍｇから選択される量で含んでなる、請求項３２の方法。
34. 前記アルビグルタイドを含んでなる医薬組成物が、前記ヒトに皮下注射として、週に１回投与される、請求項３０〜３３のいずれか一項の方法。
35. 前記ヒトが、２型糖尿病を有する、請求項３０〜３４のいずれか一項の方法。
36. アルビグルタイドを、１ｍｇ、１．５ｍｇ、１．８８ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４ｍｇ、１５ｍｇ、および３０ｍｇから選択される量で含んでなる医薬組成物の、心血管保護を提供するための使用。