JP2005017248A

JP2005017248A - 免疫クロマトグラフィー用分析装置

Info

Publication number: JP2005017248A
Application number: JP2003186435A
Authority: JP
Inventors: Yasushi Okumura; 康奥村
Original assignee: Asahi Breweries Ltd
Current assignee: Asahi Breweries Ltd
Priority date: 2003-06-30
Filing date: 2003-06-30
Publication date: 2005-01-20

Abstract

【課題】良く知られている環境中に存在する気管支喘息、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎の原因となるアレルゲンなどを測定するため、測定対象を広げるために検体採取部分を測定器具から着脱できるように改良する必要があった。
【解決手段】本発明は、測定対象を広げるために検体採取部分を測定器具から着脱できるように改良した分析装置である。具体的には、ケーシングと溶離剤輸送ゾーンと、信号ゾーンを有する反応ゾーンとを備えた分析装置において、ケーシングの溶離剤輸送ゾーン設置部分に開口部を設け、該開口部に被検物質採取部材を着脱可能に設置したことを特徴とする分析装置である。

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は免疫クロマトグラフィーを用いた分析器具に関する。具体的には、環境中のアレルゲンの量を簡便に測定する器具に関する。
【０００２】
【従来技術】
環境中に存在するアレルゲン、中でもヒョウヒダニに由来するアレルゲンは気管支喘息、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎の原因アレルゲンであることは良く知られている（非特許文献１）。アレルギーを発症させないあるいは感作されないためには、アレルゲン暴露を回避することが重要である。しかし、環境中からヒョウヒダニを根絶することやそのアレルゲンをゼロにすることは実質的に不可能である。そこで、環境中のダニアレルゲン量を感作濃度以下にコントロールすることが現実的である。そのためには、環境中のダニアレルゲン量を測定し感作濃度以上にならないよう環境の掃除を徹底する必要がある。従来の方法では、電気掃除機などにフィルターを装着し室内塵を集めその中からダニアレルゲンを抽出しＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−ＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）や免疫クロマトグラフィー（例えば、ＩＮＤＯＯＲＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（１２１６ＨａｒｒｉｓＳｔｒｅｅｔ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ２２９０３，Ｕ．Ｓ．Ａ．）製；ＲａｐｉｄＴｅｓｔｆｏｒＤｕｓｔＭｉｔｅ）などの手法によって定量するものであった。この方法は、一般家庭で実施できるものではなく集めた室内塵を検査機関に送付して測定しなければならない。つまり、実施している掃除の程度が十分かどうかその場で分からないという大きな欠点があった。この点を大きく改良した商品が１９９９年にアサヒフードアンドヘルスケア社から市販されるにいたった（商品名；ダニスキャン）。ダニスキャンの概要を図３に示す。測定したい箇所の一定面積を拭い取りピン１１でこすり室内塵を採取し、そこへ展開液を添加する。被検物質（ダニアレルゲン）は標識抗体含有パッド１８にて標識抗体に結合し、毛細管現象により反応ゾーン１６を移動、検出用捕捉抗体ゾーン１４（Ｔゾーン）と結合することにより発色する。一方、被検物質と結合しなかった余剰の標識抗体はさらに移動して、余剰抗体捕捉抗体ゾーン１５（Ｃゾーン）と結合して発色する。展開液は吸収ゾーン１７に吸収される。検出用捕捉抗体ゾーン１４（Ｔゾーン）と余剰抗体捕捉抗体ゾーン１５（Ｃゾーン）の色を比較することにより、容易に目視により被検物質を半定量できる。この商品の出現によって一般家庭でいかなる技術も必要なく短時間でアレルゲン除去の程度を知ることができるようになり発症予防や感作予防に役立っている。この商品の欠点は、こすり取れる対象の場合は問題ないのであるが、例えば掃除機のごみなどは測定対象にならない。また、フローリングのような個所も測定しにくいという欠点があった。
【０００３】
【非特許文献１】Ｖｏｏｒｈｏｒｓｔ，Ｒ．ら（１９６７）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ，３９，３２５−３３９、Ｋｉｎｇ，Ｔ．Ｐ．ら（１９９４）Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．ＡｌｌｅｒｇｙＩｍｍｕｎｏｌ，１０５，２２４−２３３
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、測定対象を広げるために検体採取部分を測定器具から着脱できるように改良する必要があった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、測定対象を広げるために検体採取部分を測定器具から着脱できるように改良した分析装置である。すなわち、被検物質採取部材が被検物質の分析をする手段に着脱可能に設置されていることを特徴とする分析装置である。具体的には、ケーシングと溶離剤輸送ゾーンと、信号ゾーンを有する反応ゾーンとを備えた分析装置において、ケーシングの溶離剤輸送ゾーン設置部分に開口部を設け、該開口部に被検物質採取部材を着脱可能に設置したことを特徴とする分析装置である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
この分析装置を図１の好適例により説明する。１は被検物質採取部材であるＥＬＩＳＡ用ボールである。被検物質採取部材は、目的とする対象物が吸着する素材でできているものであれば全て使用できるが、好ましくはポリスチレン、ナイロン、ニトロセルロース、ＰＶＤＦ、セルロース、ガラスなどである。また、いかなる形状でも使用できるが取り扱いなどの点から球体が有利である。その大きさであるが、分析部に装着できる大きさであればいかなるものも使用できる。被検物質採取部材は、必要に応じて種々の加工、例えば界面活性剤塗布や撥水処理を施すなどの処理を行った後に用いることができる。２は分析装置のケーシング、３は輸送ゾーン、４は検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）、５は余剰標識抗体捕捉抗体５（Ｃゾーン）、４および５は信号ゾーンである。６は反応ゾーン、７は吸収ゾーン、８は標識抗体含有パッド、９は測定窓である。
【０００７】
ケース２の開口部に被検物質採取部材１を着脱可能に設置し、溶離剤と共に被検物質を滴下し、標識抗体含有パッド８、輸送ゾーン３を経て反応ゾーン６に送る。反応ゾーン６に設けられた検出用捕捉抗体４、余剰標識抗体捕捉抗体５を経た被検物質は測定窓９にて目視され吸収ゾーンに吸収される。
【０００８】
以下に実施例を示してより具体的に本発明の内容を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【０００９】
【実施例１】
電気掃除機の塵芥収集袋（内容量；１Ｌ）にダニアレルゲンＤｅｒｆ２（アサヒビール（株）製；生化学工業（株）カタログ番号２９０４５２）を１０μｇ入れその後に塵芥モデルとして結晶性セルロースパウダー（旭化成（株）製；Ｃｅｏｌｕｓ（登録商標）ＫＧ）を１０ｇ入れ良く混和した。そこへＥＬＩＳＡ用ボール（住友ベークライト（株）製；ＭＳ−７４０１Ａ、６．３５φ）を１個入れ１０分間良く混和した。その後にボールを回収した。次に回収したボールを図１に記載した免疫クロマトグラフィーを用いた分析器具に設置した。分析器具はアサヒフードアンドヘルスケア社製ダニスキャンを一部改良したものを使用した。ボールに０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍＭ）約２５０μＬをゆっくりと滴下し、そのまま１０分間放置すると、検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）と余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）に発色が認められた。アレルゲンの存在を示す検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色は余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）よりもやや薄いレベルであった。ダニスキャン目視スコアとＥＬＩＺＡによるハウスダスト中のダニグループアレルゲンのアレルゲン量の比較を示した図２から、この発色レベルはおよそ１μｇ／ｇ室内塵に相当する。一方、袋の中のダニアレルゲンを含む結晶性セルロースを１ｇ秤量した。同様にダニアレルゲンを含まない結晶性セルロースを１ｇ秤量した。それぞれに先に使用した緩衝液１０ｍＬを加え良く混和した。その後、ろ過し清澄な被検液を調製した。住友ベークライト（株）製；スミロンＭＳ−８５９６Ｆ、アサヒビール（株）製；抗Ｄｅｒｆ２モノクローナル抗体１３Ａ４、１５Ｅ１１を用いて、調製した被検液をＥＬＩＳＡで測定した。標準液としてＤｅｒｆ２を用いて作製した検量線から該溶液中のアレルゲン濃度は、６０ｎｇ／ｍｌであった。これから逆算し室内塵モデルとした結晶性セルロース中のダニアレルゲン濃度は０．６μｇ／ｇ結晶性セルロース（室内塵）であった。
【００１０】
【実施例２】
紐を装着したＥＬＩＳＡ用ボールを用意し約１０ｍ^２の木製フロリーング上を紐を引くことによって半分の面積上を移動させダニアレルゲンを吸着させた。その後にボールを実施例１と同様に分析装置に設置した。実施例１と同様の操作によって発色させ余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）と検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色の濃さを比較した。検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色は認められるものの余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）に比較してかなり薄かった。これは、図２から０．１〜１．０μｇ／ｇ室内塵に相当する量である。一方、電気掃除機で残りの半分の面積から室内塵を吸い取った。室内塵の総量は、約１５０ｍｇであった。この中から１００ｍｇを秤量し１０ｍｌの実施例１で用いた緩衝液でダニアレルゲンを抽出した。実施例１と同様にＥＬＩＳＡ法にてダニアレルゲン量を測定したところ、３ｎｇ／ｍｌであった。この値から０．３μｇ／ｇ室内塵のダニアレルゲン量が存在することが明らかとなり本発明の方法による妥当性が検証された。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例の分析装置の断面図と平面図を示す図である。
【図２】本発明の実施例において、ダニスキャン目視スコアとＥＬＩＳＡによるハウスダスト中のダニグループのアレルゲン量の比較を示す図である。Ｔ＝Ｏは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）に発色がなかった場合を、Ｔ＜Ｃは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色が余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）より薄い場合を、Ｔ＝Ｃは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色が余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）と同程度の場合を、Ｔ＞Ｃは検出用捕捉抗体ゾーン４（Ｔゾーン）の色が余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン５（Ｃゾーン）より薄い場合を示す。
【図３】従来のダニスキャン装置の断面図と平面図を示す図である。
【符号の説明】
１被検物質採取部材２ケーシング
３輸送ゾーン４検出用捕捉抗体ゾーン（Ｔゾーン）
５余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン（Ｃゾーン）６反応ゾーン
７吸収ゾーン８標識抗体含有パッド
９測定窓
１１拭い取りピン１２ケーシング
１３輸送ゾーン１４検出用捕捉抗体ゾーン（Ｔゾーン）
１５余剰標識抗体捕捉抗体ゾーン（Ｃゾーン）１６反応ゾーン
１７吸収ゾーン１８標識抗体含有パッド
１９測定窓

Claims

被検物質採取部材が被検物質の分析をする手段に着脱可能に設置されていることを特徴とする分析装置。
ケーシングと溶離剤輸送ゾーンと、信号ゾーンを有する反応ゾーンとを備えた分析装置において、ケーシングの溶離剤輸送ゾーン設置部分に開口部を設け、該開口部に被検物質採取部材を着脱可能に設置したことを特徴とする分析装置。
被検物質採取部材が球状である請求項１または２記載の分析装置。
免疫クロマトグラフィーに用いることを特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項記載の分析装置。
分析対象がアレルゲンであることを特徴とする請求項４記載の分析装置。