【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、フロースルー型リガンド検出装置及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、特殊な設備，器具や技術を用いることなく目標のリガンドを簡便かつ正確に検出するために、免疫測定法が利用されている。免疫測定法という用語は免疫反応の特異性を利用して試料中の分析対象物を免疫学的手法により検出または定量する分析方法の総称として用いられ、具体的には免疫拡散法，酵素免疫測定法などの種々の方法が実用化されている。このような免疫測定法の中で、フロースルー式アッセイ法はラテラルフロー式などと並ぶメンブランを使用したイムノクロマトグラフィー法の一種であり、操作が簡便であるため一般的な検査の場に普及している。
【０００３】
フロースルー式アッセイ法による免疫測定法についての詳細は、例えば“Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｒａｐｉｄ Ｔｅｓｔ Ｄｅｖｉｃｅ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ”， ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ ｃｏｍｐａｎｙ， Ｊａｎｕａｒｙ ２０００， Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｌｉｓａ Ｖｉｃｋｅｒｓ， ｐ６−８，特公平７−３４０１６号などに記載されている。
【０００４】
このフロースルー式アッセイ法に用いられるフルースルー型リガンド検出装置の例としては、特開平３−１１８４７３号公報に開示されているものが知られている。この装置は、底部と蓋とから構成される包囲体の内側に膜部材としての多孔性親水膜，スペーサーとしての多孔性疎水膜，吸収部材としてのパッドからなるフィルタースタックを配置したものであり、目標のリガンドを含むと思われる検体を蓋に設けられた開口部を経てフィルタースタックに導入し、リガンドを結合剤へ結合させ発色させるなどの処理を行うことによって目標のリガンドを検出するものである。
【０００５】
ところで、上記のようなフィルタースタックを配置したフルースルー型リガンド検出装置を製造する場合においては、フィルタースタックを構成する膜部材，スペーサー，吸収部材をそれぞれ所定の大きさに切断して、包囲体の内側に吸収部材を設置し、その吸収部材の上にスペーサーを設置し、さらに膜部材を設置するといった、吸収部材，スペーサー，膜部材を別々に設置する煩雑な作業が必要であり、製造効率が非常に悪いものであった。
【０００６】
【非特許文献１】
Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｒａｐｉｄ Ｔｅｓｔ Ｄｅｖｉｃｅ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ”， ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ ｃｏｍｐａｎｙ， Ｊａｎｕａｒｙ ２０００， Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｌｉｓａ Ｖｉｃｋｅｒｓ， ｐ６−８
【特許文献１】
特公平７−３４０１６号公報
【特許文献２】
特開平３−１１８４７３号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明かかる課題に鑑みてなされたものであり、効率よく製造することのできるフルースルー型リガンド検出装置及びその製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明の請求項１記載のフロースルー型リガンド検出装置は、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部からなるフィルター部材と、このフィルター部材を支持する下部デバイスと、この下部デバイスの上部に設けられ開口部を備えた上部デバイスとからなるフロースルー型リガンド検出装置において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材は一体に接合されたことを特徴とする。
【０００９】
この構成によれば、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材は一体に接合されたので、フィルター部材を一回の設置作業で下部デバイスに設置でき、フロースルー型リガンド検出装置を効率よく製造することができる。
【００１０】
本発明の請求項２記載のフロースルー型リガンド検出装置は、請求項１において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材は金具又は糸により一体に接合されたことを特徴とする。
【００１１】
この構成によれば、金具又は糸を用いることにより、簡単かつ確実に膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材を一体に接合することができる。
【００１２】
本発明の請求項３記載のフロースルー型リガンド検出装置の製造方法は、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部からなるフィルター部材と、このフィルター部材を支持する下部デバイスと、この下部デバイスの上部に設けられ開口部を備えた上部デバイスとからなるフロースルー型リガンド検出装置の製造方法において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材を一体に接合して切断した後、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材が一体に接合された前記フィルター部材を形成することを特徴とする。
【００１３】
この構成によれば、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材を一体に接合して切断することによって、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材が一体に接合された複数のフィルター部材を一度に得ることができるとともに、フィルター部材を一回の設置作業で下部デバイスに設置でき、フロースルー型リガンド検出装置を効率よく製造することができる。
【００１４】
本発明の請求項４記載のフロースルー型リガンド検出装置の製造方法は、請求項３において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材を金具又は糸により一体に接合することを特徴とする。
【００１５】
この構成によれば、金具又は糸を用いることにより、簡単かつ確実に膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材を一体に接合することができる。
【００１６】
【発明の実施形態】
以下、本発明のフロースルー型リガンド検出装置及びリガンド検出方法の一実施例について添付した図１〜２を参照しながら説明する。１は装置の下部外郭をなす下部デバイスであり、２は装置の上部外郭をなす上部デバイスである。下部デバイス１は、略長方形の底面１ａとこの底面１ａの周縁部から略垂直に上方へ延設された側壁１ｂとを有する容器状に形成されている。この下部デバイス１の中には、フィルター部材３が収容，支持されている。このフィルター部材３は、ニトロセルロースを含有するメンブランフィルターからなる膜部材３ａと、この膜部材３ａの下部に配置されガラス孔フィルターからなるスペーサー３ｂと、このスペーサー３ｂの下部に配置され液体吸収能力に優れた吸収部材３ｃとから構成されている。なお、スペーサー３ｂは、吸収体３ｃからの色戻りをなくし膜部材３ａの着色による判定を正確に行うために設けられるものであって、省略してもよい。
【００１７】
膜部材３ａ，スペーサー３ｂ，吸収部材３ｃは、糸により一端側が縫製され、一体に接合されている。また、糸の代わりにステープラーの針などの金具を用いて膜部材３ａ，スペーサー３ｂ，吸収部材３ｃを一体に接合してもよい。なお、これらを接合する手段は上記に限定されない。ただし、有機溶剤を含む接着剤を使用するとニトロセルロースを含有する膜部材３ａが溶解してしまうので好ましくない。
【００１８】
本発明において使用可能な膜部材３ａとしては、Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓｃｈｕｅｌｌ社製ニトロセルローストランスファーメンブラン（孔径０．１〜０．４５μｍ），アドバンテック社製セルロース混合エステルタイプメンブランフィルター（孔径０．１０〜５．００μｍ），ミリポア社製セルロース混合エステル（孔径０．０２５〜８．０μｍ），ワットマン社製ニトロセルロースメンブラン（孔径０．２〜１．２μｍ）等が挙げられるがこれらに限定されない。この中でＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓｃｈｕｅｌｌ社製ニトロセルローストランスファーメンブランが他の物に比べ丈夫なため糸による縫製やステープラーの金具によって破れることがなく、好適に用いられる。また、吸収体３ｃからの色戻りを防ぐ効果を有するスペーサー３ｂとしては、ワットマン社製Ｆ０７５−１４，ミリポア社製ＧＦＣＰ２０３０００，Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓｃｈｕｅｌｌ社製３３ＧＬＡＳＳ等が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、吸収体３ｃとしては、ワットマン社製（ＷＦ１．５，ＣＤ４２７−０５，ＣＤ４２７−０７），日本ポール社製Ｓ７０００９等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１９】
一方、上部デバイス２は、下部デバイス１の形状に対応して上面２ａとこの上面２ａから略垂直に下方へ延設された側壁２ｂとを有する蓋状に形成されている。そして、上部デバイス２には水平方向の断面が略円形の開口部４が設けられており、この開口部４には検体を導入するためのアダプター開口部５と孔部６を有するアダプター７が載置されている。また、開口部４には内壁８が上部デバイス２と一体に形成されており、アダプター７はこの開口部４の形状に対応した形状に形成され、開口部４に取り外し自在に設けられている。また、アダプター７の底部９には、孔部６が設けられている。
【００２０】
そして、下部デバイス１の側壁１ｂの上端と上部デバイス２の側壁２ｂの下端とを嵌合させることで、下部デバイス１と上部デバイス２とで装置の外郭をなすように構成されている。また、下部デバイス１と上部デバイス２とを組み合わせたときに開口部４がフィルター部材３のほぼ中央部に位置するように構成され、開口部４の内壁８の下端はフィルター部材３の上面を下方に向かって押さえ込むようになっており、アダプター７の下端はフィルター部材３の上面に接している。
【００２１】
次に、図３〜５を参照しながら、製造方法について説明する。まず、フィルター部材３を製造する。例えば、吸収体３ｃとして大きさが１２ｃｍ四方程度のＷｈａｔｔｍａｎ社製ＣＤ４２７−０７、スペーサー３ｂとして大きさが１２ｃｍ四方程度のＷｈａｔｔｍａｎ社製Ｆ０７５−１４、膜部材３ａとして大きさが１２ｃｍ四方程度のＳｃｈｌｅｉｈｅｒ＆Ｓｈｕｌｅ社製ニトロセルロースメンブランＢＡ８５−０．４５μｍを準備する。つぎに、吸収体３ｃの上に、スペーサー３ｂと膜部材３ａを順に重ね合わせ、例えば、図３に示すように、一辺から１ｃｍ，４ｃｍ，７ｃｍ，１０ｃｍと３ｃｍの一定間隔の直線上をミシンを用いて糸で縫製して一体に接合する。或いは、ステープラーの針で固定し、一体に接合してもよい。その後、図４に示すように上記一辺から３ｃｍの間隔で横方向に切断する。さらに、図５に示すように４ｃｍの間隔で縦方向に切断する。この場合、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ，吸収体３ｃが一体に接合された１２個のフィルター部材３が得られる。なお、スペーサー３ｂは、吸収体３ｃからの色戻りをなくし膜部材３ａの着色による判定を正確に行うために設けられるものであって、省略してもよく、この場合、フィルター部材３は膜部材３ａと吸収部材３ｃから製造する。
【００２２】
そして、このフィルター部材３下部デバイス１に設置し、上部デバイス２で閉じる。その後アダプター７を上部デバイス２に取りつけることによって、フロースルー型リガンド検出装置が完成する。このフィルター部材３の設置作業は、従来のように、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ，吸収部材３ｃをそれぞれ所定の大きさに切断して、下部デバイス１に吸収部材３ｃ、その吸収部材３ｃの上にスペーサー３ｂを設置し、さらに膜部材３ａを設置するといった、吸収部材３ｃ，スペーサー３ｂ，膜部材３ａを別々に設置する煩雑な作業を行う必要がなく、予め膜部材３ａ，スペーサー３ｂ，吸収体３ｃを一体に接合して所定の大きさに切断して形成されたフィルター部材３を１回の作業で設置すればよいので、極めて効率がよいものとなる。
【００２３】
次に、上記フロースルー型リガンド検出装置を用いたリガンド検出方法について、免疫測定法を用いたインフルエンザウイルスの検出を例に取り説明する。
【００２４】
（１）金コロイド標識用抗Ａ型インンフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体（マウス）の作製及び精製
精製Ａ型インフルエンザウイルス抗原を免疫し、一定期間維持したＢＡＬＢ／ｃマウスから脾臓を摘出し、ケラーらの方法（Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ｖｏｌ．２５６， ｐ４９５−４９７（１９７５））によりマウスミエローマ細胞（Ｐ３×６３）と融合する。得られた融合細胞（ハイブリドーマ）を、Ａ型インフルエンザウイルスＮＰ抗原固相プレートを用いてインキュベーター中で３７℃に維持する。その後、ＥＬＩＳＡにより上清の抗体活性を確認しながら細胞の純化（単クローン化）を行う。取得した該細胞株をプリスタン処理したＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔投与し、約２週間後、抗体含有腹水を採取する。得られた腹水からアフィニティクロマトグラフィー法によってＩｇＧを精製する（クローン名８Ｄ２）。
【００２５】
（２）固相用Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体（マウス）の作製及び精製
上記（１）の方法と同様にして作製する（クローン名Ｂ４０）。
【００２６】
（３）金コロイド標識抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体の作製
９ｍＬの金コロイド溶液（ＢＢＩ社、濃度０．０１（Ｗ／Ｖ）％の水溶液、ｐＨ７．１）に対して、５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．５）を１ｍＬ加えｐＨを８．５に合わせる。上記（１）で精製した抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体（クローン名８Ｄ２）を２ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ９．１）で透析後、蒸留水で希釈し５０μｇ／ｍＬに調製する。この抗体１ｍＬを上記金コロイド溶液に撹拌しながら滴下し５分間静置し結合させる。その後１０％ＢＳＡを１ｍＬ加え１０時間穏やかに攪拌する。つぎに遠心管へ全量移し５０００ｇで３０分間遠心し上清を吸引廃棄する。沈渣を５％のシュークロースを含む２ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．７）０．９ｍＬで浮遊させる。
【００２７】
（４）フィルター部材３の作製
膜部材３ａとしてＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓｃｈｕｅｌｌ社製ニトロセルローストランスファーメンブラン（孔径０．４５μｍ）、スペーサー３ｂとしてミリポア社製ＧＦＣＰ２０３０００、吸収体３ｃとしてワットマン社製ＣＤ４２７−０７を重ね合わせ、ステープラーの針にて適当な間隔に固定し一体化する。その後、切断機又ははさみにて切断する。
【００２８】
（５）フロースルー型リガンド検出装置の組み立て
下部デバイス１に上記（４）で作製した膜部材３ａ，スペーサー３ｂ，吸収体３ｃが一体化されたフィルター部材３を設置し、上部デバイス２で閉じる。その後アダプター７を上部デバイス２に取りつける。
【００２９】
（６）膜部材３ａへの抗体の塗布
上記（５）で組み立てたフロースルー型リガンド検出装置のアダプター７の孔部６ａを通して（２）で作製・精製した抗Ａ型インフルエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体（クローン名Ｂ４０）をクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．７）で希釈した液１２μＬを膜部材３ａに塗布し、４５℃の乾燥室で４０分間乾燥を行なう。
【００３０】
（７）検出方法
Ａ型インフルエンザウイルスを含むと思われるサンプル（検体）を１％ＢＳＡ，５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００，１５０ｍＭＮａＣｌを含む２０ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）緩衝液１．０ｍＬに浮遊させる。さらに、上記（３）で作製した抗Ａ型インフエンザウイルスＮＰモノクローナル抗体結合金コロイド液をＰＢＳ（−）で×１０倍希釈した液１２５μＬを加えた後、攪拌して０．２２μｍのフィルターで濾過し、フロースルー型リガンド検出装置のアダプター開口部５へ全量滴下する。液が吸収部材３ｃに全量吸収されたらアダプター７を上部デバイス２から外し、膜部材３ａへの着色の有無を判定する。膜部材３ａが金コロイドの色（赤色）に着色していたら、サンプル中にＡ型インフルエンザウイルスが含まれていた事になる。膜部材３ａの色が白色のままであれば、サンプル中にＡ型及びＢ型インフルエンザウイルスが含まれていなかった事になる。
【００３１】
以上のように、本実施例のフロースルー型リガンド検出装置によれば、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ及び吸収部材３ｃからなるフィルター部材３と、このフィルター部材３を支持する下部デバイス１と、この下部デバイス１の上部に設けられ開口部４を備えた上部デバイス２とからなるフロースルー型リガンド検出装置において、前記膜部材３ａ，前記スペーサー３ｂ及び前記吸収部材３ｃは一体に接合されている。
【００３２】
この構成によれば、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ及び吸収部材３ｃは一体に接合されたので、フィルター部材３を一回の設置作業で下部デバイス１に設置でき、フロースルー型リガンド検出装置を効率よく製造することができる。
【００３３】
また、前記膜部材３ａ，前記スペーサー３ｂ及び前記吸収部材３ｃは金具又は糸により一体に接合されているので、金具又は糸を用いることにより、簡単かつ確実に膜部材３ａ，スペーサー３ｂ及び吸収部材３ｃを一体に接合することができる。
【００３４】
また、本実施例のフロースルー型リガンド検出装置の製造方法は、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ及び吸収部材３ｃからなるフィルター部材３と、このフィルター部材３を支持する下部デバイス１と、この下部デバイス１の上部に設けられ開口部４を備えた上部デバイス２とからなるフロースルー型リガンド検出装置の製造方法において、前記膜部材３ａ，前記スペーサー３ｂ及び前記吸収部材３ｃを一体に接合して切断した後、前記膜部材３ａ，前記スペーサー３ｂ及び前記吸収部材３ｃが一体に接合された前記フィルター部材３を形成するものである。
【００３５】
この構成によれば、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ及び吸収部材３ｃを一体に接合して切断することによって、膜部材３ａ，スペーサー３ｂ及び吸収部材３ｃが一体に接合された複数のフィルター部材３を一度に得ることができるとともに、フィルター部材３を一回の設置作業で下部デバイス１に設置でき、フロースルー型リガンド検出装置を効率よく製造することができる。
【００３６】
さらに、前記膜部材３ａ，前記スペーサー３ｂ及び前記吸収部材３ｃを金具又は糸により一体に接合するものであるので、金具又は糸を用いることにより、簡単かつ確実に膜部材３ａ，スペーサー３及び吸収部材３ｃを一体に接合することができる。
【００３７】
なお、本発明は上記実施例に限定されるものではなく、本発明の要旨の範囲内において種々の変形実施が可能である。例えば、開口部４を複数設け、複数のリガンドを検出できるように構成してもよい。さらに、検出対象となるリガンドはインフルエンザウイルスに限らず、それ以外のリガンドの検出に用いてもよいなど種々の変形が可能である。
【００３８】
【発明の効果】
本発明の請求項１記載のフロースルー型リガンド検出装置は、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材からなるフィルター部材と、このフィルター部材を支持する下部デバイスと、この下部デバイスの上部に設けられ開口部を備えた上部デバイスとからなるフロースルー型リガンド検出装置において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材は一体に接合されたので、フィルター部材を一回の設置作業で下部デバイスに設置でき、フロースルー型リガンド検出装置を効率よく製造することができる。
【００３９】
本発明の請求項２記載のフロースルー型リガンド検出装置は、請求項１において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材は金具又は糸により一体に接合されたので、金具又は糸を用いることにより、簡単かつ確実に膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材を一体に接合することができる。
【００４０】
本発明の請求項３記載のフロースルー型リガンド検出装置の製造方法は、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材からなるフィルター部材と、このフィルター部材を支持する下部デバイスと、この下部デバイスの上部に設けられ開口部を備えた上部デバイスとからなるフロースルー型リガンド検出装置の製造方法において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材を一体に接合して切断した後、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材が一体に接合された前記フィルター部材を形成するので、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材を一体に接合して切断することによって、膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材が一体に接合された複数のフィルター部材を一度に得ることができるとともに、フィルター部材を一回の設置作業で下部デバイスに設置でき、フロースルー型リガンド検出装置を効率よく製造することができる。
【００４１】
本発明の請求項４記載のフロースルー型リガンド検出装置の製造方法は、請求項３において、前記膜部材，前記スペーサー又は／及び前記吸収部材を金具又は糸により一体に接合するので、金具又は糸を用いることにより、簡単かつ確実に膜部材，スペーサー又は／及び吸収部材を一体に接合することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のフロースルー型リガンド検出装置の一実施例を示す上面図である。
【図２】同上側面図である。
【図３】縫製したフィルター部材を示す上面図と断面図である。
【図４】縫製し横方向に切断したフィルター部材を示す上面図である。
【図５】縫製し横方向と縦方向に切断したフィルター部材を示す上面図と断面図である。
【符号の説明】
１ 下部デバイス
２ 上部デバイス
３ フィルター部材
３ａ 膜部材
３ｂ スペーサー
３ｃ 吸収部材
４ 開口部[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a flow-through type ligand detection device and a method for manufacturing the same.
[0002]
[Prior art]
2. Description of the Related Art Conventionally, immunoassays have been used for simply and accurately detecting a target ligand without using special equipment, equipment, or technology. The term "immunoassay" is used as a general term for an analysis method for detecting or quantifying an analyte in a sample by using an immunological technique by utilizing the specificity of an immune reaction. Various methods such as the method have been put to practical use. Among such immunoassays, the flow-through type assay is a type of immunochromatography using a membrane that is similar to the lateral flow type.Since the operation is simple, it is widely used in general testing places. I have.
[0003]
For more information about the immunoassay method of using a flow-through assay, for example, "Guide to Diagnostic Rapid Test Device Components ", 2 nd edition, published by Schleicher & Schuell company, January 2000, Edited by Lisa Vickers, p6-8, KOKOKU No. 7-34016.
[0004]
As an example of a flow-through type ligand detector used in this flow-through type assay method, one disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-118473 is known. In this device, a filter stack composed of a porous hydrophilic film as a membrane member, a porous hydrophobic film as a spacer, and a pad as an absorbing member is disposed inside an enclosure composed of a bottom and a lid. The target ligand is detected by introducing a sample suspected of containing the target ligand into the filter stack through an opening provided in the lid, and performing processing such as binding the ligand to a binding agent to form a color. .
[0005]
By the way, in the case of manufacturing a flow-through type ligand detecting device in which the filter stack is arranged as described above, the membrane member, the spacer, and the absorbing member constituting the filter stack are cut into predetermined sizes, respectively. It is necessary to perform a complicated work of separately installing the absorbing member, the spacer, and the membrane member, such as installing the absorbing member on the inside, installing the spacer on the absorbing member, and further installing the membrane member, thereby increasing the manufacturing efficiency. It was very bad.
[0006]
[Non-patent document 1]
Guide to Diagnostic Rapid Test Device Components " , 2 nd edition, published by Schleicher & Schuell company, January 2000, Edited by Lisa Vickers, p6-8
[Patent Document 1]
Japanese Patent Publication No. 7-34016 [Patent Document 2]
JP-A-3-118473
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made in view of the above problems, and has as its object to provide a flow-through type ligand detection device which can be efficiently manufactured, and a method for manufacturing the same.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
According to a first aspect of the present invention, there is provided a flow-through type ligand detection device, comprising: a filter member comprising a membrane member, a spacer and / or an absorption portion; a lower device supporting the filter member; and an opening provided on the lower device. In a flow-through type ligand detecting device comprising an upper device having a portion, the membrane member, the spacer and / or the absorbing member are integrally joined.
[0009]
According to this configuration, since the membrane member, the spacer, and / or the absorption member are integrally joined, the filter member can be installed in the lower device by one installation operation, and the flow-through type ligand detection device can be efficiently manufactured. Can be.
[0010]
According to a second aspect of the present invention, in the flow-through type ligand detecting apparatus according to the first aspect, the membrane member, the spacer and / or the absorbing member are integrally joined by a metal fitting or a thread.
[0011]
According to this configuration, by using the metal fittings or the thread, the membrane member, the spacer, and / or the absorbing member can be integrally and simply joined together.
[0012]
According to a third aspect of the present invention, there is provided a method of manufacturing a flow-through type ligand detecting device, comprising: a filter member comprising a membrane member, a spacer and / or an absorbing portion; a lower device supporting the filter member; In the method for manufacturing a flow-through type ligand detection device comprising an upper device provided with an opening, the membrane member, the spacer and / or the absorption member are integrally joined and cut, and then the membrane member, The filter member is formed by integrally joining a spacer and / or the absorbing member.
[0013]
According to this configuration, a plurality of filter members in which the membrane member, the spacer and / or the absorbing member are integrally joined can be obtained at a time by integrally joining and cutting the membrane member, the spacer and / or the absorbing member. In addition, the filter member can be installed in the lower device by one installation operation, and the flow-through type ligand detector can be manufactured efficiently.
[0014]
According to a fourth aspect of the present invention, there is provided a method for manufacturing a flow-through type ligand detecting apparatus according to the third aspect, wherein the membrane member, the spacer and / or the absorbing member are integrally joined by a metal fitting or a thread. .
[0015]
According to this configuration, by using the metal fittings or the thread, the membrane member, the spacer, and / or the absorbing member can be integrally and simply joined together.
[0016]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, an embodiment of a flow-through type ligand detection device and a ligand detection method according to the present invention will be described with reference to FIGS. Reference numeral 1 denotes a lower device that forms a lower outer shell of the apparatus, and 2 denotes an upper device that forms an upper outer shell of the apparatus. The lower device 1 is formed in a container shape having a substantially rectangular bottom surface 1a and a side wall 1b extending substantially vertically upward from a peripheral portion of the bottom surface 1a. A filter member 3 is accommodated and supported in the lower device 1. The filter member 3 includes a membrane member 3a formed of a membrane filter containing nitrocellulose, a spacer 3b arranged below the membrane member 3a and formed of a glass-hole filter, and a spacer 3b arranged below the spacer 3b and having a liquid absorbing capacity. And an excellent absorbing member 3c. The spacer 3b is provided to eliminate the color return from the absorber 3c and to accurately perform the determination based on the coloring of the film member 3a, and may be omitted.
[0017]
One end side of the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c are sewn with a thread and are integrally joined. Alternatively, the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c may be integrally joined using a metal fitting such as a stapler needle instead of the thread. The means for joining them is not limited to the above. However, it is not preferable to use an adhesive containing an organic solvent, since the membrane member 3a containing nitrocellulose is dissolved.
[0018]
Examples of the membrane member 3a usable in the present invention include a nitrocellulose transfer membrane (pore size: 0.1 to 0.45 μm) manufactured by Schleicher & Schuell, a cellulose mixed ester type membrane filter (pore size: 0.10 to 5.00 μm) manufactured by Advantech, Examples include, but are not limited to, cellulose mixed esters manufactured by Millipore (pore size: 0.025 to 8.0 μm), nitrocellulose membranes manufactured by Whatman (pore size: 0.2 to 1.2 μm), and the like. Among them, a nitrocellulose transfer membrane manufactured by Schleicher & Schuell is more durable than other products, and is preferably used without being broken by sewing with a thread or a metal fitting of a stapler. In addition, examples of the spacer 3b having an effect of preventing color return from the absorber 3c include, but are not limited to, F075-14 manufactured by Whatman, GFCP203000 manufactured by Millipore, and 33GLASS manufactured by Schleicher & Schuell. Furthermore, examples of the absorber 3c include, but are not limited to, Whatman (WF1.5, CD427-05, CD427-07) and Nippon Pall S70009.
[0019]
On the other hand, the upper device 2 is formed in a lid shape having an upper surface 2a corresponding to the shape of the lower device 1 and a side wall 2b extending substantially vertically downward from the upper surface 2a. The upper device 2 is provided with an opening 4 having a substantially circular cross section in the horizontal direction, and an adapter 7 having an adapter opening 5 and a hole 6 for introducing a sample is placed in the opening 4. Is placed. An inner wall 8 is formed integrally with the upper device 2 in the opening 4, and the adapter 7 is formed in a shape corresponding to the shape of the opening 4, and is provided in the opening 4 so as to be detachable. A hole 6 is provided in the bottom 9 of the adapter 7.
[0020]
By fitting the upper end of the side wall 1b of the lower device 1 and the lower end of the side wall 2b of the upper device 2, the lower device 1 and the upper device 2 form an outer shell of the apparatus. Further, when the lower device 1 and the upper device 2 are combined, the opening 4 is located substantially at the center of the filter member 3, and the lower end of the inner wall 8 of the opening 4 faces the upper surface of the filter member 3 downward. , And the lower end of the adapter 7 is in contact with the upper surface of the filter member 3.
[0021]
Next, a manufacturing method will be described with reference to FIGS. First, the filter member 3 is manufactured. For example, a CD427-07 made by Whatman having a size of about 12 cm square as the absorber 3c, a F075-14 made by Whattman having a size of about 12 cm square as the spacer 3b, and a Schleiher & Shule company having a size of about 12 cm square as the membrane member 3a. A nitrocellulose membrane BA85-0.45 μm manufactured by Co., Ltd. is prepared. Next, the spacer 3b and the membrane member 3a are sequentially superimposed on the absorber 3c. For example, as shown in FIG. 3, a sewing machine is formed on a straight line at a constant interval of 1 cm, 4 cm, 7 cm, 10 cm and 3 cm from one side. Sewn with thread and joined together. Alternatively, they may be fixed with a stapler needle and joined together. Thereafter, as shown in FIG. 4, the wafer is cut laterally at an interval of 3 cm from one side. Furthermore, as shown in FIG. 5, it cuts in the vertical direction at intervals of 4 cm. In this case, 12 filter members 3 in which the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorber 3c are integrally joined are obtained. The spacer 3b is provided to eliminate the color return from the absorber 3c and to accurately perform the determination based on the coloring of the membrane member 3a, and may be omitted. In this case, the filter member 3 is 3a and the absorbing member 3c.
[0022]
Then, the filter member 3 is set on the lower device 1 and closed by the upper device 2. Thereafter, the adapter 7 is attached to the upper device 2 to complete the flow-through type ligand detector. The installation work of the filter member 3 is performed by cutting the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c to predetermined sizes, respectively, and attaching the lower member 1 to the absorbing member 3c. There is no need to separately install the absorbing member 3c, the spacer 3b, and the membrane member 3a, such as installing the spacer 3b and further installing the membrane member 3a, and the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorber 3c are previously set. The filter member 3 formed by integrally joining and cutting into a predetermined size may be installed in one operation, so that the efficiency is extremely high.
[0023]
Next, a method for detecting a ligand using the above-described flow-through type ligand detection apparatus will be described by taking detection of an influenza virus using an immunoassay as an example.
[0024]
(1) Preparation and purification of anti-influenza A virus NP monoclonal antibody (mouse) for labeling colloidal gold A spleen was excised from a BALB / c mouse immunized with a purified influenza A virus antigen and maintained for a certain period of time. It is fused with mouse myeloma cells (P3 × 63) by the method (Kohler et al., Nature, vol. 256, p495-497 (1975)). The obtained fusion cells (hybridomas) are maintained at 37 ° C. in an incubator using an influenza A virus NP antigen solid phase plate. Thereafter, the cells are purified (monocloned) while confirming the antibody activity of the supernatant by ELISA. The obtained cell line is intraperitoneally administered to a BALB / c mouse treated with pristane, and about 2 weeks later, antibody-containing ascites is collected. IgG is purified from the obtained ascites by affinity chromatography (clone 8D2).
[0025]
(2) Preparation and purification of influenza A virus NP monoclonal antibody (mouse) for solid phase It is prepared in the same manner as in the above (1) (clone name B40).
[0026]
(3) Preparation of Colloidal Gold-Labeled Anti-Influenza A Virus NP Monoclonal Antibody 50 mM potassium phosphate with respect to 9 mL of colloidal gold solution (BBI, 0.01% (W / V)% aqueous solution, pH 7.1) Add 1 mL of buffer (pH 8.5) and adjust the pH to 8.5. The anti-influenza A virus NP monoclonal antibody (clone 8D2) purified in the above (1) is dialyzed against 2 mM borate buffer (pH 9.1), and then diluted with distilled water to adjust to 50 μg / mL. 1 mL of this antibody is added dropwise to the above colloidal gold solution with stirring, and left standing for 5 minutes to bind. Thereafter, 1 mL of 10% BSA is added and gently stirred for 10 hours. Next, the whole amount is transferred to a centrifuge tube, centrifuged at 5000 g for 30 minutes, and the supernatant is aspirated and discarded. The precipitate is suspended in 0.9 mL of 2 mM borate buffer (pH 8.7) containing 5% sucrose.
[0027]
(4) Preparation of Filter Member 3 A nitrocellulose transfer membrane (pore diameter: 0.45 μm) manufactured by Schleicher & Schuell, a membrane member 3a, a Millipore GFCP203000 as a spacer 3b, and a Whatman CD427-07 as an absorber 3c are overlapped. Fix it at an appropriate interval with a needle and integrate. Then, cut with a cutting machine or scissors.
[0028]
(5) Assembling of the flow-through type ligand detection device The filter member 3 in which the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorber 3c manufactured in the above (4) are integrated is installed in the lower device 1, and closed by the upper device 2. Thereafter, the adapter 7 is attached to the upper device 2.
[0029]
(6) Application of Antibody to Membrane Member 3a The anti-influenza A virus NP monoclonal antibody (clone cloned) prepared and purified in (2) through the hole 6a of the adapter 7 of the flow-through type ligand detector assembled in (5) above 12 μL of a solution prepared by diluting name B40) with a sodium citrate buffer (pH 4.7) is applied to the membrane member 3a, and dried in a drying chamber at 45 ° C. for 40 minutes.
[0030]
(7) Detection method A sample (sample) suspected of containing influenza A virus is suspended in 1.0 mL of a 20 mM borate buffer (pH 8.5) buffer containing 1% BSA, 5% Triton-X100, and 150 mM NaCl. . Further, 125 μL of a solution obtained by diluting the anti-A-type influenza virus NP monoclonal antibody-conjugated gold colloid solution prepared in (3) above with × 10-fold with PBS (−) was added, followed by stirring and filtration with a 0.22 μm filter. Then, the whole amount is dropped into the adapter opening 5 of the flow-through type ligand detector. When the liquid is completely absorbed by the absorbing member 3c, the adapter 7 is removed from the upper device 2, and it is determined whether or not the film member 3a is colored. If the membrane member 3a is colored gold colloid (red), it means that the sample contained influenza A virus. If the color of the membrane member 3a remains white, it means that the samples did not contain the influenza A and B viruses.
[0031]
As described above, according to the flow-through type ligand detecting device of the present embodiment, the filter member 3 including the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c, the lower device 1 supporting the filter member 3, and the lower portion In the flow-through type ligand detection device including the upper device 2 provided at the upper portion of the device 1 and having the opening 4, the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c are integrally joined.
[0032]
According to this configuration, since the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorption member 3c are integrally joined, the filter member 3 can be installed on the lower device 1 by one installation work, and the flow-through type ligand detection device can be efficiently installed. Can be manufactured.
[0033]
Further, since the film member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c are integrally joined by a metal fitting or a thread, the use of the metal fitting or the thread allows the film member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c to be easily and reliably. Can be joined together.
[0034]
Further, the method of manufacturing the flow-through type ligand detecting device of the present embodiment includes a filter member 3 including a membrane member 3a, a spacer 3b and an absorbing member 3c, a lower device 1 supporting the filter member 3, and a lower device 1 In the method for manufacturing a flow-through type ligand detecting device comprising the upper device 2 provided at the upper part of the device and having the opening 4, the membrane member 3a, the spacer 3b and the absorbing member 3c are integrally joined and cut. The filter member 3 is formed by integrally joining the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c.
[0035]
According to this configuration, by integrally joining and cutting the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c, the plurality of filter members 3 in which the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c are integrally joined are once separated. And the filter member 3 can be installed on the lower device 1 by one installation operation, and the flow-through type ligand detector can be efficiently manufactured.
[0036]
Further, since the membrane member 3a, the spacer 3b, and the absorbing member 3c are integrally joined by a bracket or a thread, the membrane member 3a, the spacer 3, and the absorbing member can be easily and reliably used by using the bracket or the thread. 3c can be integrally joined.
[0037]
It should be noted that the present invention is not limited to the above embodiments, and various modifications can be made within the scope of the present invention. For example, a plurality of openings 4 may be provided so that a plurality of ligands can be detected. Further, the ligand to be detected is not limited to the influenza virus, and various modifications are possible, such as use for detection of other ligands.
[0038]
【The invention's effect】
According to a first aspect of the present invention, there is provided a flow-through type ligand detection apparatus, comprising: a filter member comprising a membrane member, a spacer and / or an absorption member; a lower device supporting the filter member; and an opening provided on the lower device. In the flow-through type ligand detecting device including the upper device having the portion, the membrane member, the spacer or / and the absorbing member are integrally joined, so that the filter member is installed in the lower device by one installation operation. As a result, a flow-through type ligand detector can be manufactured efficiently.
[0039]
In the flow-through type ligand detecting device according to a second aspect of the present invention, since the membrane member, the spacer and / or the absorbing member are integrally joined by a metal part or a thread in the first aspect, a metal part or a thread is used. Thus, the membrane member, the spacer, and / or the absorbing member can be integrally and simply joined.
[0040]
According to a third aspect of the present invention, there is provided a method for manufacturing a flow-through type ligand detection device, comprising: a filter member comprising a membrane member, a spacer and / or an absorption member; a lower device supporting the filter member; In the method for manufacturing a flow-through type ligand detection device comprising an upper device provided with an opening, the membrane member, the spacer and / or the absorption member are integrally joined and cut, and then the membrane member, Since the filter member in which the spacer and / or the absorbing member are integrally joined is formed, the membrane member, the spacer and / or the absorbing member are integrally joined and cut to thereby form the membrane member, the spacer and / or the absorbing member. Can be obtained at once, and a plurality of filter members can be obtained at the same time. Installation work in be installed in the lower device, can be produced efficiently flow through ligand detector.
[0041]
According to a fourth aspect of the present invention, in the method for manufacturing a flow-through type ligand detection device according to the third aspect, the membrane member, the spacer, and / or the absorbing member are integrally joined by a metal fitting or a thread. By using the method, the membrane member, the spacer and / or the absorbing member can be integrally and simply joined together.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a top view showing one embodiment of a flow-through type ligand detection device of the present invention.
FIG. 2 is a side view of the same.
FIG. 3 is a top view and a sectional view showing a sewn filter member.
FIG. 4 is a top view showing the filter member sewn and cut in the lateral direction.
FIG. 5 is a top view and a cross-sectional view showing a filter member sewn and cut in a horizontal direction and a vertical direction.
[Explanation of symbols]
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Lower device 2 Upper device 3 Filter member 3a Membrane member 3b Spacer 3c Absorbing member 4 Opening
