JP2003533181A - ムチン−１誘導抗原および免疫療法におけるその使用 - Google Patents
ムチン−１誘導抗原および免疫療法におけるその使用Info
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Abstract
(57)【要約】
免疫応答を誘導することができるペプチドまたはポリペプチドであって、ここで当該ペプチドまたはポリペプチドは、ムチンの非ＶＮＴＲ、非リーダー領域のエピトープのアミノ酸配列に実質的に対応するアミノ酸配列を含む、ペプチドまたはポリペプチド、または、当該ペプチドまたはポリペプチドと適切なキャリアータンパクとを含む融合タンパクを提供する。また、これらと、任意に、アジュバントおよび／または薬学的に許容できるキャリアーとを組み合わせて、患者に投与することを含む、ムチンに対する細胞介在性免疫応答を誘導する方法を提供する。
Description
【０００１】
本発明は、癌腫の免疫療法のような、疾患の免疫療法に関する。
【０００２】
癌は、現代社会における主要な死因であり深刻な外傷である。癌は一つのグル
ープに限定されない；若い、老いた、男性の、女性の、そしてあらゆる種族の人
が癌を患い得るが、おそらくは小児期の白血病を除いて子供の癌は比較的稀であ
る。西側社会では、結腸癌および肺癌が主な疾患である。女性では、乳癌が最も
一般的な癌の形態である。
ープに限定されない；若い、老いた、男性の、女性の、そしてあらゆる種族の人
が癌を患い得るが、おそらくは小児期の白血病を除いて子供の癌は比較的稀であ
る。西側社会では、結腸癌および肺癌が主な疾患である。女性では、乳癌が最も
一般的な癌の形態である。
【０００３】
多くの癌が、ヒトのムチンの過剰産生を伴う。ムチンは、多くの上皮細胞およ
び腫瘍により産生される、高度にグリコシル化されたタンパク（約１００Ｋｄよ
り高い）である（１）。癌細胞に見出されるムチンは、正常上皮細胞に見出され
るものとは異なり、一部のムチンは、その炭水化物被覆が欠如し、タンパクのコ
アを露わにしたままとする（２）。公知のヒトムチンにはＭＵＣ１からＭＵＣ１
２と呼ばれる１２形態が存在する（例えば、３、４、２６、２７参照）。ＭＵＣ
１は最も広範に存在する。種々のムチンの全てが、非常に類似した特性を有し、
すなわち、それらは膜貫通糖タンパクであり、全てが種々の数の繰り返しアミノ
酸配列を有し、高い含量のセリン、トレオニンおよびプロリンを有する。異常グ
リコシル化ムチン（非グリコシル化またはグリコシル化欠如）の過剰産生は、乳
、卵巣、膵臓、結腸、肺、前立腺の腫瘍および他の分泌組織の腫瘍の特徴である
。ヒトムチンＭＵＣ１からＭＵＣ７の各タンパクコアのｃＤＮＡ配列がクローン
化され、特徴決定されて、特定のアミノ酸モチーフの種々の数の繰り返しからな
る高度に反復性の中心部分を含むことが見出された（ＶＮＴＲ'ｓとして知られ
ている）。
び腫瘍により産生される、高度にグリコシル化されたタンパク（約１００Ｋｄよ
り高い）である（１）。癌細胞に見出されるムチンは、正常上皮細胞に見出され
るものとは異なり、一部のムチンは、その炭水化物被覆が欠如し、タンパクのコ
アを露わにしたままとする（２）。公知のヒトムチンにはＭＵＣ１からＭＵＣ１
２と呼ばれる１２形態が存在する（例えば、３、４、２６、２７参照）。ＭＵＣ
１は最も広範に存在する。種々のムチンの全てが、非常に類似した特性を有し、
すなわち、それらは膜貫通糖タンパクであり、全てが種々の数の繰り返しアミノ
酸配列を有し、高い含量のセリン、トレオニンおよびプロリンを有する。異常グ
リコシル化ムチン（非グリコシル化またはグリコシル化欠如）の過剰産生は、乳
、卵巣、膵臓、結腸、肺、前立腺の腫瘍および他の分泌組織の腫瘍の特徴である
。ヒトムチンＭＵＣ１からＭＵＣ７の各タンパクコアのｃＤＮＡ配列がクローン
化され、特徴決定されて、特定のアミノ酸モチーフの種々の数の繰り返しからな
る高度に反復性の中心部分を含むことが見出された（ＶＮＴＲ'ｓとして知られ
ている）。
【０００４】
腫瘍除去に関する手術は、患者にとっては外傷性であり、しばしば外観を損じ
、高価でもある。外科的処理の代わりにまたはそれと組み合わせて実施される、
腫瘍治療のための確立された化学療法および照射処理は、しばしば患者を衰弱さ
せ、深刻な副作用を伴う。従って、腫瘍の予防／治療のための治療的化合物およ
び方法が緊急的に必要とされている。
、高価でもある。外科的処理の代わりにまたはそれと組み合わせて実施される、
腫瘍治療のための確立された化学療法および照射処理は、しばしば患者を衰弱さ
せ、深刻な副作用を伴う。従って、腫瘍の予防／治療のための治療的化合物およ
び方法が緊急的に必要とされている。
【０００５】
ムチンに関する従来の技術は、主に、癌に対し可能性のある治療または予防と
してのＶＮＴＲの使用に関する。あるケースでは、in vitroで細胞傷害性Ｔ細胞
を誘導するためにＭＵＣ１のリーダー配列を用いるという報告がされている（７
１）。しかしながら、このペプチドLLLLTVLTV（配列番号：１）に関する研究は
、in vitroで行われたものであり、in vivoでこのペプチドが如何に挙動するか
を必ずしも示唆するものではない。さらに、このエピトープは、必ずしもＭＵＣ
１の優性のＴ細胞エピトープではなく、かかる優勢の欠如は、LLLLTVLTV（配列
番号：１）ではない他のエピトープに対する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を
生じうる。
してのＶＮＴＲの使用に関する。あるケースでは、in vitroで細胞傷害性Ｔ細胞
を誘導するためにＭＵＣ１のリーダー配列を用いるという報告がされている（７
１）。しかしながら、このペプチドLLLLTVLTV（配列番号：１）に関する研究は
、in vitroで行われたものであり、in vivoでこのペプチドが如何に挙動するか
を必ずしも示唆するものではない。さらに、このエピトープは、必ずしもＭＵＣ
１の優性のＴ細胞エピトープではなく、かかる優勢の欠如は、LLLLTVLTV（配列
番号：１）ではない他のエピトープに対する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を
生じうる。
【０００６】
本発明に至る研究で、本発明者らは、驚くべきことに、ＨＭＦＧ（全ＭＵＣ１
）のマンナン接合体を免疫化に用いた場合に、ＭＵＣ１の非-ＶＮＴＲ、非リー
ダー領域が選択的に抗原性であり得ることを見出した。これは、ＭＵＣ１の非-
ＶＮＴＲ領域に対する細胞傷害性Ｔ細胞が、全ＭＵＣ１で免疫されたマウスにお
いて立証された最初のケースである。これは、非-ＶＮＴＲペプチドが主要組織
適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラス１に高い親和性を有しうることを意味する。
これは、ＶＮＴＲペプチドがＭＨＣクラス１に低い親和性を示すという観点から
驚くべきことである。本発明者等の研究は、in vivoで行われた。
）のマンナン接合体を免疫化に用いた場合に、ＭＵＣ１の非-ＶＮＴＲ、非リー
ダー領域が選択的に抗原性であり得ることを見出した。これは、ＭＵＣ１の非-
ＶＮＴＲ領域に対する細胞傷害性Ｔ細胞が、全ＭＵＣ１で免疫されたマウスにお
いて立証された最初のケースである。これは、非-ＶＮＴＲペプチドが主要組織
適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラス１に高い親和性を有しうることを意味する。
これは、ＶＮＴＲペプチドがＭＨＣクラス１に低い親和性を示すという観点から
驚くべきことである。本発明者等の研究は、in vivoで行われた。
【０００７】
従って、第一の態様では、本発明は、免疫応答を引き出すことができるペプチ
ドまたはポリペプチドを提供し、ここで前記ペプチドまたはポリペプチドは、ム
チンの非-ＶＮＴＲ、非リーダー領域のエピトープに実質的に対応するアミノ酸
配列を含む。
ドまたはポリペプチドを提供し、ここで前記ペプチドまたはポリペプチドは、ム
チンの非-ＶＮＴＲ、非リーダー領域のエピトープに実質的に対応するアミノ酸
配列を含む。
【０００８】
また、上記および下記に用いられる用語“ポリペプチド”は、全長のムチンタ
ンパクを含まないと理解すべきである。
ンパクを含まないと理解すべきである。
【０００９】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドは、完全に、ムチンの非-ＶＮＴＲ
、非リーダー領域から誘導されるアミノ酸配列からなる（そしてこれはあるエピ
トープを含む）。しかしながら、このペプチドまたはポリペプチドは、ムチンの
他の領域（ＶＮＴＲおよび／またはリーダー領域を含む）から誘導されたさらな
るアミノ酸配列を含むことができる。このペプチドまたはポリペプチドは、ＶＮ
ＴＲおよび／またはリーダー領域のエピトープも含むことができる。さらに、こ
のペプチドまたはポリペプチドは、他の天然または人工的ソースから誘導された
さらなるアミノ酸配列を含んでもよい（例えば、このペプチドまたはポリペプチ
ドは、異種のリーダーおよび／またはシグナル配列を含むことができ、もしくは
あらゆる腫瘍形態またはＭＵＣ１を発現する他のソースの抗原に由来するエピト
ープに実質的に対応するアミノ酸配列を含むことができる）。特定の腫瘍抗原の
例は、結腸および他の癌の癌胎児抗原（ＣＥＡ）、またはＭＵＣ１を発現するあ
らゆる腫瘍から抽出された抗原である。
、非リーダー領域から誘導されるアミノ酸配列からなる（そしてこれはあるエピ
トープを含む）。しかしながら、このペプチドまたはポリペプチドは、ムチンの
他の領域（ＶＮＴＲおよび／またはリーダー領域を含む）から誘導されたさらな
るアミノ酸配列を含むことができる。このペプチドまたはポリペプチドは、ＶＮ
ＴＲおよび／またはリーダー領域のエピトープも含むことができる。さらに、こ
のペプチドまたはポリペプチドは、他の天然または人工的ソースから誘導された
さらなるアミノ酸配列を含んでもよい（例えば、このペプチドまたはポリペプチ
ドは、異種のリーダーおよび／またはシグナル配列を含むことができ、もしくは
あらゆる腫瘍形態またはＭＵＣ１を発現する他のソースの抗原に由来するエピト
ープに実質的に対応するアミノ酸配列を含むことができる）。特定の腫瘍抗原の
例は、結腸および他の癌の癌胎児抗原（ＣＥＡ）、またはＭＵＣ１を発現するあ
らゆる腫瘍から抽出された抗原である。
【００１０】
好ましくは、このペプチドまたはポリペプチドにより引き出される免疫応答は
、細胞介在性免疫応答であり、特に異常グリコシル化ムチンを発現する細胞に対
する細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を含むものである（例えば、乳、卵巣、膵臓、結
腸、肺および前立腺腫瘍性細胞の特徴）。
、細胞介在性免疫応答であり、特に異常グリコシル化ムチンを発現する細胞に対
する細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を含むものである（例えば、乳、卵巣、膵臓、結
腸、肺および前立腺腫瘍性細胞の特徴）。
【００１１】
アミノ酸配列に関してここで用いられている用語“実質的に対応”とは、特定
のアミノ酸配列の生物学的活性を実質的に変更しないような、特定のアミノ酸配
列における小さい変化を含むと考える。例えば、ムチンの非-ＶＮＴＲ、非リー
ダー領域のエピトープのアミノ酸配列に関して、用語“実質的に対応”とは、エ
ピトープ活性が実質的に変更されない、すなわちエピトープバリアントが依然と
して実質的に等価の免疫応答を引き出すことができるような、配列の変異を含む
（この変異は、天然に生じるバリアント配列またはそれ以外に見出すこともでき
る）。かかる変異は、保存的アミノ酸置換を含むことができる。考えられる保存
的アミノ酸置換は： G、A、V、I、L、M；D、E；N、Q；S、T；K、R、H；F、Y、W、H；およびP、Nα-ア
ルキルアミノ酸である。
のアミノ酸配列の生物学的活性を実質的に変更しないような、特定のアミノ酸配
列における小さい変化を含むと考える。例えば、ムチンの非-ＶＮＴＲ、非リー
ダー領域のエピトープのアミノ酸配列に関して、用語“実質的に対応”とは、エ
ピトープ活性が実質的に変更されない、すなわちエピトープバリアントが依然と
して実質的に等価の免疫応答を引き出すことができるような、配列の変異を含む
（この変異は、天然に生じるバリアント配列またはそれ以外に見出すこともでき
る）。かかる変異は、保存的アミノ酸置換を含むことができる。考えられる保存
的アミノ酸置換は： G、A、V、I、L、M；D、E；N、Q；S、T；K、R、H；F、Y、W、H；およびP、Nα-ア
ルキルアミノ酸である。
【００１２】
本発明にかかるペプチドまたはポリペプチドは、天然ソースから誘導、標準的
な技術により合成、または組み換えにより産生されうる。ペプチド合成は、約１
００アミノ酸までを含むポリペプチドについて用いられる。一般的に、約２０以
上のアミノ酸を含むポリペプチドについては、好ましい産生手段は、宿主細胞に
おける組み換え発現である。原核および真核宿主細胞における組み換えタンパク
の発現方法は、十分に確立されており、例えばSambrookら（７）を参照。
な技術により合成、または組み換えにより産生されうる。ペプチド合成は、約１
００アミノ酸までを含むポリペプチドについて用いられる。一般的に、約２０以
上のアミノ酸を含むポリペプチドについては、好ましい産生手段は、宿主細胞に
おける組み換え発現である。原核および真核宿主細胞における組み換えタンパク
の発現方法は、十分に確立されており、例えばSambrookら（７）を参照。
【００１３】
このペプチドまたはポリペプチドは、融合タンパクの一部であってもよい。原
核および真核宿主細胞における融合タンパクの発現方法は、十分に確立されてお
り、例えばSambrookら（７）を参照のこと。融合タンパクは、このペプチドまた
はポリペプチドを、グルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼ、β-ガラクトシダー
ゼ、またはあらゆる他のタンパクまたはその部分、特に結合もしくは結果的な融
合タンパクを精製するための他の親和的特徴を利用した親和的精製を可能にする
ものから選択されたキャリアータンパクに融合することを含んでもよい。この融
合タンパクは、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチドの、キャリアータン
パクのＣ末端またはＮ末端への融合を含んでもよい。融合タンパクの正確な性質
は、融合タンパクが産生されるベクターシステムに依存する。細菌性発現ベクタ
ーの例は、問題のペプチド、ポリペプチドまたはタンパクとグルタチオン-Ｓ-ト
ランスフェラーゼからなる融合タンパクを産生するために用いることができるｐ
ＧＥＸである。キャリアータンパクは、発現後に、本発明のペプチドまたはポリ
ペプチドから切断されてもされなくてもよい。この融合タンパクは、弱い過ヨウ
素酸酸化で処理されてもよい。
核および真核宿主細胞における融合タンパクの発現方法は、十分に確立されてお
り、例えばSambrookら（７）を参照のこと。融合タンパクは、このペプチドまた
はポリペプチドを、グルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼ、β-ガラクトシダー
ゼ、またはあらゆる他のタンパクまたはその部分、特に結合もしくは結果的な融
合タンパクを精製するための他の親和的特徴を利用した親和的精製を可能にする
ものから選択されたキャリアータンパクに融合することを含んでもよい。この融
合タンパクは、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチドの、キャリアータン
パクのＣ末端またはＮ末端への融合を含んでもよい。融合タンパクの正確な性質
は、融合タンパクが産生されるベクターシステムに依存する。細菌性発現ベクタ
ーの例は、問題のペプチド、ポリペプチドまたはタンパクとグルタチオン-Ｓ-ト
ランスフェラーゼからなる融合タンパクを産生するために用いることができるｐ
ＧＥＸである。キャリアータンパクは、発現後に、本発明のペプチドまたはポリ
ペプチドから切断されてもされなくてもよい。この融合タンパクは、弱い過ヨウ
素酸酸化で処理されてもよい。
【００１４】
上述したように、ペプチドまたはポリペプチド、またはペプチドまたはポリペ
プチドを含む融合タンパクの発現は、宿主細胞、例えば原核（例えばE.coliまた
はB.subtilis）または真核（バキュロウイルス、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞または
酵母）宿主細胞発現系を用いて達成することができる。これらの系の一部、例え
ばバキュロウイルスまたは酵母では、ペプチド、ポリペプチドまたは融合タンパ
クのグリコシレーションは、公知のグリコシレーションモチーフを導入すること
により達成することができる。
プチドを含む融合タンパクの発現は、宿主細胞、例えば原核（例えばE.coliまた
はB.subtilis）または真核（バキュロウイルス、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞または
酵母）宿主細胞発現系を用いて達成することができる。これらの系の一部、例え
ばバキュロウイルスまたは酵母では、ペプチド、ポリペプチドまたは融合タンパ
クのグリコシレーションは、公知のグリコシレーションモチーフを導入すること
により達成することができる。
【００１５】
同様に、ペプチドまたはポリペプチドは、当該技術分野で確立されたあらゆる
方法（例えば、グルタルアルデヒド処理）を用いて、適当なキャリアータンパク
（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン）に単に結合されてもよい。
方法（例えば、グルタルアルデヒド処理）を用いて、適当なキャリアータンパク
（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン）に単に結合されてもよい。
【００１６】
好ましくは、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチドは、ヒトムチン１か
ら誘導されたアミノ酸配列を含む。さらに好ましくは、ペプチドまたはポリペプ
チドは、ヒト乳脂肪球皮膜抗原（ＨＭＦＧ）から誘導されたアミノ酸配列を含む
。さらに好ましくは、このペプチドまたはポリペプチドは、ヒトＭＵＣ１の非リ
ーダー、非-ＶＮＴＲ領域の細胞外領域または細胞内領域から誘導されたアミノ
酸配列（例えば、NCBIデータベースNo.M61170のヒトＭＵＣ１のアミノ酸２２か
ら１３１またはアミノ酸４０２から４７３（図１も参照））を含むが、ヒトＭＵ
Ｃ１の非リーダー、非-ＶＮＴＲ領域の膜貫通領域のアミノ酸配列も適切であろ
う。さらに好ましくは、このペプチドまたはポリペプチドは、以下のアミノ酸配
列またはその免疫原性フラグメントの一つに実質的に対応するアミノ酸配列を含
む。 TGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVP（配列番号：２） RSSVPSSTEKNAVSMTSSVL（配列番号：３） SGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTLAPATEPASGSAATW
（配列番号：４） SAPDNRPAL（配列番号：６） NSSLEDPSTDYYQELQRDISE（配列番号：７） TQFNQYKTEAASRVNL（配列番号：８） AVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYH（配列番号：９） YVPPSSTDRSPYEKVSAGNG（配列番号：１０）
ら誘導されたアミノ酸配列を含む。さらに好ましくは、ペプチドまたはポリペプ
チドは、ヒト乳脂肪球皮膜抗原（ＨＭＦＧ）から誘導されたアミノ酸配列を含む
。さらに好ましくは、このペプチドまたはポリペプチドは、ヒトＭＵＣ１の非リ
ーダー、非-ＶＮＴＲ領域の細胞外領域または細胞内領域から誘導されたアミノ
酸配列（例えば、NCBIデータベースNo.M61170のヒトＭＵＣ１のアミノ酸２２か
ら１３１またはアミノ酸４０２から４７３（図１も参照））を含むが、ヒトＭＵ
Ｃ１の非リーダー、非-ＶＮＴＲ領域の膜貫通領域のアミノ酸配列も適切であろ
う。さらに好ましくは、このペプチドまたはポリペプチドは、以下のアミノ酸配
列またはその免疫原性フラグメントの一つに実質的に対応するアミノ酸配列を含
む。 TGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVP（配列番号：２） RSSVPSSTEKNAVSMTSSVL（配列番号：３） SGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTLAPATEPASGSAATW
（配列番号：４） SAPDNRPAL（配列番号：６） NSSLEDPSTDYYQELQRDISE（配列番号：７） TQFNQYKTEAASRVNL（配列番号：８） AVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYH（配列番号：９） YVPPSSTDRSPYEKVSAGNG（配列番号：１０）
【００１７】
第二の態様では、本発明は、第一の態様のペプチドまたはポリペプチドと、炭
水化物ポリマーとの接合物を含む化合物を提供する。
水化物ポリマーとの接合物を含む化合物を提供する。
【００１８】
好ましくは、炭水化物ポリマーは、グルコース、ガラクトース、マンノース、
キシロース、アラビノース、フコース、グルコサミン、ガラクトサミン、ラムノ
ース、６-ｏ-メチル１-Ｄ-ガラクトース、２-ｏ-アセチル-β-Ｄ-キシロース、
Ｎ-アセチル-グルコサミン、イズロナート(iduronate)、グルロナート(gulurona
te)、マヌロナート(mannuronate)、メチルガラクツロナート、α-Ｄ-ガラクトピ
ラノース６-スルファート、フルクトースおよびαアベクオース(abequose)、こ
れらの配座異性体および配置異性体、または二つ以上の異なるモノマー単位から
形成された炭水化物からなる群から選択される炭水化物のポリマーである。ポリ
マーにおける繰り返しモノマー単位の数は重要ではないが、一般的に炭水化物ポ
リマーは、少なくとも２０のモノマー単位を含み、好ましくは、１００のモノマ
ー単位を越え、さらに好ましくは１０００のモノマー単位を越え、そしてさらに
好ましくは１００００のモノマー単位を越える。炭水化物ポリマーは、種々の分
子量の多糖鎖の混合物であってもよい。より好ましくは、炭水化物ポリマーは、
マンノースのポリマーであるか、マンノース単位を含む炭水化物ポリマーである
。最も好ましくは、炭水化物ポリマーは酸化マンノースのポリマーである。
キシロース、アラビノース、フコース、グルコサミン、ガラクトサミン、ラムノ
ース、６-ｏ-メチル１-Ｄ-ガラクトース、２-ｏ-アセチル-β-Ｄ-キシロース、
Ｎ-アセチル-グルコサミン、イズロナート(iduronate)、グルロナート(gulurona
te)、マヌロナート(mannuronate)、メチルガラクツロナート、α-Ｄ-ガラクトピ
ラノース６-スルファート、フルクトースおよびαアベクオース(abequose)、こ
れらの配座異性体および配置異性体、または二つ以上の異なるモノマー単位から
形成された炭水化物からなる群から選択される炭水化物のポリマーである。ポリ
マーにおける繰り返しモノマー単位の数は重要ではないが、一般的に炭水化物ポ
リマーは、少なくとも２０のモノマー単位を含み、好ましくは、１００のモノマ
ー単位を越え、さらに好ましくは１０００のモノマー単位を越え、そしてさらに
好ましくは１００００のモノマー単位を越える。炭水化物ポリマーは、種々の分
子量の多糖鎖の混合物であってもよい。より好ましくは、炭水化物ポリマーは、
マンノースのポリマーであるか、マンノース単位を含む炭水化物ポリマーである
。最も好ましくは、炭水化物ポリマーは酸化マンノースのポリマーである。
【００１９】
第一の態様にかかるペプチドまたはポリペプチドは、多糖と単糖の反応および
誘導化(derivatization)の炭水化物化学の分野で周知の標準的な技術に従って、
炭水化物ポリマーに接合されてもよい。炭水化物を、過ヨウ素酸ナトリウムのよ
うな通常の酸化試薬を用いて酸化してポリアルデヒドを生じてもよく、次いでこ
のポリアルデヒドをペプチドまたはポリペプチドと直接的に反応させて、ペプチ
ド鎖のアミノ官能基（例えば、リシンのεアミノ基）をアルデヒド基と反応させ
、さらに還元してシッフ塩基を形成してもよい。多糖鎖を、臭化シアンで最初に
活性化してもよく、次いでこの活性化多糖をジアミンと反応させ、次いでペプチ
ドまたはポリペプチドに接合させて、後で任意に酸化されてもよい接合体を形成
してもよい。炭水化物と多糖を、炭水化物と多糖を架橋させるために二官能性試
薬を用いて誘導してもよい。一般に用いられる架橋剤は、１,１-ビス（ジアゾア
セチル）-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシスクシンイ
ミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸とのエステル、３,３'-ジチオビス(
スクシンイミジル-プロピオナート)のようなジスクシンイミジルエステルを含む
ホモ二官能性イミドエステル、およびビス-Ｎ-マレイミド-１,８-オクタンのよ
うな二官能性マレイミドを含む。メチル-３-[(ｐ-アジドフェニル)ジチオ]プロ
ピオイミダートのような誘導剤は、光の存在下で架橋形成可能な光活性可能中間
体を生じる。酸化された炭水化物を、抗原のヒドラジン誘導体と反応させて接合
物を得てもよい。あるいは、炭水化物を、カルボニルジイミダゾールのような試
薬と反応させた後に、抗原と反応させてもよく、これは酸化後に所望の接合体を
与える。
誘導化(derivatization)の炭水化物化学の分野で周知の標準的な技術に従って、
炭水化物ポリマーに接合されてもよい。炭水化物を、過ヨウ素酸ナトリウムのよ
うな通常の酸化試薬を用いて酸化してポリアルデヒドを生じてもよく、次いでこ
のポリアルデヒドをペプチドまたはポリペプチドと直接的に反応させて、ペプチ
ド鎖のアミノ官能基（例えば、リシンのεアミノ基）をアルデヒド基と反応させ
、さらに還元してシッフ塩基を形成してもよい。多糖鎖を、臭化シアンで最初に
活性化してもよく、次いでこの活性化多糖をジアミンと反応させ、次いでペプチ
ドまたはポリペプチドに接合させて、後で任意に酸化されてもよい接合体を形成
してもよい。炭水化物と多糖を、炭水化物と多糖を架橋させるために二官能性試
薬を用いて誘導してもよい。一般に用いられる架橋剤は、１,１-ビス（ジアゾア
セチル）-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシスクシンイ
ミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸とのエステル、３,３'-ジチオビス(
スクシンイミジル-プロピオナート)のようなジスクシンイミジルエステルを含む
ホモ二官能性イミドエステル、およびビス-Ｎ-マレイミド-１,８-オクタンのよ
うな二官能性マレイミドを含む。メチル-３-[(ｐ-アジドフェニル)ジチオ]プロ
ピオイミダートのような誘導剤は、光の存在下で架橋形成可能な光活性可能中間
体を生じる。酸化された炭水化物を、抗原のヒドラジン誘導体と反応させて接合
物を得てもよい。あるいは、炭水化物を、カルボニルジイミダゾールのような試
薬と反応させた後に、抗原と反応させてもよく、これは酸化後に所望の接合体を
与える。
【００２０】
ペプチドまたはポリペプチドを炭水化物に結合させることは、炭水化物のいず
れかまたは全ての官能基を反応性の基に変換し、その後に炭水化物の反応性の基
をポリペプチドの反応性の基と反応させることを含む。炭水化物ポリマーは、ヒ
ドロキシド基、ある場合には、カルボキシル基（例えばイドルイオナート(idrui
onate)）、エステル基（例えばメチルガラクツロナート）などを十分に有してい
る。これらの基は、標準的な化学的方法に従って活性化されてもよい。例えば、
ヒドロキシル基を、ハロゲン化水素、例えば、ヨウ化水素、臭化水素および塩化
水素と反応させて、反応性のハロゲン化多糖を生じてもよい。ヒドロキシル基を
、三ハロゲン化リン、活性金属（例えば、ナトリウムエトキシド、アルミニウム
イソプロポキシドおよびカリウムtert-ブトキシド）で活性化してもよく、また
、エステル化（トシルクロリドまたは酢酸のような基を用いて）して反応基を形
成してもよく、次いでこれをポリペプチドの反応基と反応させて一以上の結合を
形成することができる。ヒドロキシル基とは別に、炭水化物上の他の官能基を、
標準的な技術に従って、反応基を得るべく活性化してもよい。
れかまたは全ての官能基を反応性の基に変換し、その後に炭水化物の反応性の基
をポリペプチドの反応性の基と反応させることを含む。炭水化物ポリマーは、ヒ
ドロキシド基、ある場合には、カルボキシル基（例えばイドルイオナート(idrui
onate)）、エステル基（例えばメチルガラクツロナート）などを十分に有してい
る。これらの基は、標準的な化学的方法に従って活性化されてもよい。例えば、
ヒドロキシル基を、ハロゲン化水素、例えば、ヨウ化水素、臭化水素および塩化
水素と反応させて、反応性のハロゲン化多糖を生じてもよい。ヒドロキシル基を
、三ハロゲン化リン、活性金属（例えば、ナトリウムエトキシド、アルミニウム
イソプロポキシドおよびカリウムtert-ブトキシド）で活性化してもよく、また
、エステル化（トシルクロリドまたは酢酸のような基を用いて）して反応基を形
成してもよく、次いでこれをポリペプチドの反応基と反応させて一以上の結合を
形成することができる。ヒドロキシル基とは別に、炭水化物上の他の官能基を、
標準的な技術に従って、反応基を得るべく活性化してもよい。
【００２１】
炭水化物ポリマーを、天然ソースから精製してもよく、また、標準的な技術に
従って合成してもよい。炭水化物は、多くの供給元から商業的に入手可能である
。
従って合成してもよい。炭水化物は、多くの供給元から商業的に入手可能である
。
【００２２】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドがヒトまたは他の動物において細胞
介在性免疫応答を引き出すことが可能なあらゆる量で、炭水化物ポリマーが、ペ
プチドまたはポリペプチドに接合される。かかる量は、例えば、ペプチドまたは
ポリペプチドのｍｇ当たり約０．１−１０ｍｇの範囲内とすることができる。
介在性免疫応答を引き出すことが可能なあらゆる量で、炭水化物ポリマーが、ペ
プチドまたはポリペプチドに接合される。かかる量は、例えば、ペプチドまたは
ポリペプチドのｍｇ当たり約０．１−１０ｍｇの範囲内とすることができる。
【００２３】
上記融合タンパクおよび上記の適切なキャリアータンパクに結合したペプチド
またはポリペプチドを、炭水化物ポリマー（特に酸化マンノース）に結合させて
もよい。同様に、好ましくは、融合タンパクがヒトまたは他の動物において細胞
介在性免疫応答を引き出すことができる量で、炭水化物ポリマーを融合タンパク
に接合させる。この場合、しかしながら、量は、例えば融合タンパクのｍｇ当た
り約１−１０ｍｇ、より好ましくは融合タンパクのｍｇ当たり約５−８ｍｇの範
囲内とすることができる。
またはポリペプチドを、炭水化物ポリマー（特に酸化マンノース）に結合させて
もよい。同様に、好ましくは、融合タンパクがヒトまたは他の動物において細胞
介在性免疫応答を引き出すことができる量で、炭水化物ポリマーを融合タンパク
に接合させる。この場合、しかしながら、量は、例えば融合タンパクのｍｇ当た
り約１−１０ｍｇ、より好ましくは融合タンパクのｍｇ当たり約５−８ｍｇの範
囲内とすることができる。
【００２４】
第三の態様では、本発明は、疾患、特にムチンまたはそのサブユニットを発現
する腫瘍細胞により特徴付けられるヒトの疾患に対するワクチンであって、本発
明の第一の態様のペプチドまたはポリペプチド、または本発明の第一の態様のペ
プチドまたはポリペプチドを含む融合タンパク、そして任意にアジュバントおよ
び／または薬学的に許容できるキャリアーを含むワクチンを提供する。
する腫瘍細胞により特徴付けられるヒトの疾患に対するワクチンであって、本発
明の第一の態様のペプチドまたはポリペプチド、または本発明の第一の態様のペ
プチドまたはポリペプチドを含む融合タンパク、そして任意にアジュバントおよ
び／または薬学的に許容できるキャリアーを含むワクチンを提供する。
【００２５】
第四の態様では、本発明は、疾患、特にムチンまたはそのサブユニットを発現
する腫瘍細胞により特徴付けられるヒトの疾患に対するワクチンであって、本発
明の第二の態様の接合化合物、および任意にアジュバントおよび／または薬学的
に許容できるキャリアーを含むワクチンを提供する。
する腫瘍細胞により特徴付けられるヒトの疾患に対するワクチンであって、本発
明の第二の態様の接合化合物、および任意にアジュバントおよび／または薬学的
に許容できるキャリアーを含むワクチンを提供する。
【００２６】
第三または第四の態様のワクチンに使用するための適切なアジュバントは、Qu
il A. QS-21 Iscoms, リポソーム、ミョウバン、塩、油、エマルションなどのよ
うな、当該技術分野で周知のあらゆるものを含む。
il A. QS-21 Iscoms, リポソーム、ミョウバン、塩、油、エマルションなどのよ
うな、当該技術分野で周知のあらゆるものを含む。
【００２７】
第三または第四の態様のワクチンは、癌細胞増殖を含む種々の疾患状態、特に
分泌組織の腫瘍、例えば乳、結腸、肺、膵臓、前立腺などの腫瘍の増殖から保護
するために、ヒト患者に投与することができる。患者を、分泌組織の腫瘍形成か
ら保護するために、前記ワクチンで免疫してもよい。あるいは、腫瘍患者は、腫
瘍処置の治療的養生法の一部としてワクチンを用いて免疫することができる。例
えば、女性を乳癌から保護するために、女性を思春期前または後にワクチンで免
疫することができ、最初の免疫化後、一以上の注射、好ましくは数ヶ月から数年
の間隔を開けて、一以上のブースター注射をしてもよい。免疫化の経路は、通常
のヒトワクチン投与と変わらない。従って、第三または第四の態様のワクチンは
、皮下、筋肉内、経口、静脈内などで投与することができる。
分泌組織の腫瘍、例えば乳、結腸、肺、膵臓、前立腺などの腫瘍の増殖から保護
するために、ヒト患者に投与することができる。患者を、分泌組織の腫瘍形成か
ら保護するために、前記ワクチンで免疫してもよい。あるいは、腫瘍患者は、腫
瘍処置の治療的養生法の一部としてワクチンを用いて免疫することができる。例
えば、女性を乳癌から保護するために、女性を思春期前または後にワクチンで免
疫することができ、最初の免疫化後、一以上の注射、好ましくは数ヶ月から数年
の間隔を開けて、一以上のブースター注射をしてもよい。免疫化の経路は、通常
のヒトワクチン投与と変わらない。従って、第三または第四の態様のワクチンは
、皮下、筋肉内、経口、静脈内などで投与することができる。
【００２８】
患者に投与される本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリ
アータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物の量は、
決定的または制限的ではない。しかしながら、本発明にかかるペプチドまたはポ
リペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、
または接合化合物の有効量は、免疫応答を刺激するものである。これに関して、
有効量は、患者の免疫状態に従って（すなわち、患者が免疫抑制されているかま
たは免疫刺激されているかに依存）、そのワクチンが疾患状態を予防または処置
するのにあるいは腫瘍形成を妨げるのに使用できるかどうか、あるいは、そのワ
クチンが存在する腫瘍の処理に使用できるかどうかという主治医または獣医の診
断に従って、変化しうる。例として、患者は、本発明にかかるペプチドまたはポ
リペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、
または接合化合物の１μｇから１００００μｇ、さらに好ましくは５０μｇから
５０００μｇ、さらに好ましくは１００μｇから１０００μｇ、そしてさらに好
ましくは１００μｇから５００μｇを投与されてもよい。アジュバントは、一般
的には必要でない。しかしながら、アジュバントは、免疫化に使用することがで
きる。
アータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物の量は、
決定的または制限的ではない。しかしながら、本発明にかかるペプチドまたはポ
リペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、
または接合化合物の有効量は、免疫応答を刺激するものである。これに関して、
有効量は、患者の免疫状態に従って（すなわち、患者が免疫抑制されているかま
たは免疫刺激されているかに依存）、そのワクチンが疾患状態を予防または処置
するのにあるいは腫瘍形成を妨げるのに使用できるかどうか、あるいは、そのワ
クチンが存在する腫瘍の処理に使用できるかどうかという主治医または獣医の診
断に従って、変化しうる。例として、患者は、本発明にかかるペプチドまたはポ
リペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、
または接合化合物の１μｇから１００００μｇ、さらに好ましくは５０μｇから
５０００μｇ、さらに好ましくは１００μｇから１０００μｇ、そしてさらに好
ましくは１００μｇから５００μｇを投与されてもよい。アジュバントは、一般
的には必要でない。しかしながら、アジュバントは、免疫化に使用することがで
きる。
【００２９】
本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結
合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物を、サイトカインまたは他
の免疫調節因子（例えば、一以上のＧＭ-ＣＳＦ、Ｇ-ＣＳＦ、Ｍ-ＣＳＦ、ＴＮ
Ｆαまたはβ、インターフェロンαまたはγ、ＩＬ１からＩＬ１３のいずれか、
または他のサイトカインのいずれか）と共に患者に投与することができる。免疫
調節因子は、任意に多成分投与形態の一部として、本発明にかかるペプチドまた
はポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパ
ク、または接合化合物と同時または異なる時に投与されてもよい。
合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物を、サイトカインまたは他
の免疫調節因子（例えば、一以上のＧＭ-ＣＳＦ、Ｇ-ＣＳＦ、Ｍ-ＣＳＦ、ＴＮ
Ｆαまたはβ、インターフェロンαまたはγ、ＩＬ１からＩＬ１３のいずれか、
または他のサイトカインのいずれか）と共に患者に投与することができる。免疫
調節因子は、任意に多成分投与形態の一部として、本発明にかかるペプチドまた
はポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパ
ク、または接合化合物と同時または異なる時に投与されてもよい。
【００３０】
第五の態様では、本発明は、ムチンに対する細胞介在性免疫応答を誘導する方
法であって、患者に、有効量の、第一の態様のペプチドまたはポリペプチド（適
切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、または第一の態様のペプチドま
たはポリペプチドを含む融合タンパクを、任意にアジュバントおよび／または薬
学的に許容できるキャリアーと組み合わせて投与することを含む方法を提供する
。
法であって、患者に、有効量の、第一の態様のペプチドまたはポリペプチド（適
切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、または第一の態様のペプチドま
たはポリペプチドを含む融合タンパクを、任意にアジュバントおよび／または薬
学的に許容できるキャリアーと組み合わせて投与することを含む方法を提供する
。
【００３１】
第六の態様では、本発明は、ムチンに対する細胞介在性免疫応答を誘導する方
法であって、患者に、有効量の、第二の態様に係る接合化合物を、任意にアジュ
バントおよび／または薬学的に許容できるキャリアーと組み合わせて投与するこ
とを含む方法を提供する。
法であって、患者に、有効量の、第二の態様に係る接合化合物を、任意にアジュ
バントおよび／または薬学的に許容できるキャリアーと組み合わせて投与するこ
とを含む方法を提供する。
【００３２】
本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結
合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物の、ヒトおよび動物患者へ
の投与は、ムチンを発現する細胞に対して細胞傷害性の活性化Ｔリンパ球の強化
された細胞応答を引き起こしうる。本発明の潜在的な利点は、本発明にかかるペ
プチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、
融合タンパク、または接合化合物が、ムチンを発現する腫瘍細胞を殺す細胞傷害
性Ｔ細胞に対して細胞性免疫応答を引き起こすので、ヒトおよび動物が、腫瘍増
殖の前に癌から保護され得るということから得られる。本発明は、分泌組織の腫
瘍、例えば腺癌、特に乳、卵巣、膵臓、結腸、肺、前立腺などの腫瘍に対する免
疫に適用可能である。
合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物の、ヒトおよび動物患者へ
の投与は、ムチンを発現する細胞に対して細胞傷害性の活性化Ｔリンパ球の強化
された細胞応答を引き起こしうる。本発明の潜在的な利点は、本発明にかかるペ
プチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、
融合タンパク、または接合化合物が、ムチンを発現する腫瘍細胞を殺す細胞傷害
性Ｔ細胞に対して細胞性免疫応答を引き起こすので、ヒトおよび動物が、腫瘍増
殖の前に癌から保護され得るということから得られる。本発明は、分泌組織の腫
瘍、例えば腺癌、特に乳、卵巣、膵臓、結腸、肺、前立腺などの腫瘍に対する免
疫に適用可能である。
【００３３】
また、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパ
クに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物は、ガンの根絶また
は低減のための総合的な治療の一部として、癌患者の治療のための治療剤として
、またはその成分として用いることもできる。かくして、本発明にかかるペプチ
ドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合
タンパク、または接合化合物は、腫瘍を除去する手術の前または後に、癌患者に
投与されてもよい。好ましくは、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（
適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化
合物は、腫瘍摘出後の化学療法の一部として投与される。係る状況では、本発明
にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されて
もよい）、融合タンパク、または接合化合物は、腫瘍処置に使用される細胞毒性
化合物の投与に関する標準的な化学療法にふさわしい量で投与される。
クに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物は、ガンの根絶また
は低減のための総合的な治療の一部として、癌患者の治療のための治療剤として
、またはその成分として用いることもできる。かくして、本発明にかかるペプチ
ドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合
タンパク、または接合化合物は、腫瘍を除去する手術の前または後に、癌患者に
投与されてもよい。好ましくは、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（
適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化
合物は、腫瘍摘出後の化学療法の一部として投与される。係る状況では、本発明
にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結合されて
もよい）、融合タンパク、または接合化合物は、腫瘍処置に使用される細胞毒性
化合物の投与に関する標準的な化学療法にふさわしい量で投与される。
【００３４】
本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（適切なキャリアータンパクに結
合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物は、ヒトまたは動物への投
与で実質的に無害であるという利点を備え、その結果として、よく寛容されると
思われる。
合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合物は、ヒトまたは動物への投
与で実質的に無害であるという利点を備え、その結果として、よく寛容されると
思われる。
【００３５】
第五の態様では、本発明は、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（適
切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合
物の、腺癌、特に乳癌の治療における使用に関する。
切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化合
物の、腺癌、特に乳癌の治療における使用に関する。
【００３６】
さらなる態様では、本発明は、本発明にかかるペプチドまたはポリペプチド（
適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化
合物の、in vivo導入のために樹状細胞をパルスし、ワクチンとしての用いるた
めの使用に関する。
適切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、融合タンパク、または接合化
合物の、in vivo導入のために樹状細胞をパルスし、ワクチンとしての用いるた
めの使用に関する。
【００３７】
さらなる態様では、本発明は、第一の態様のペプチドまたはポリペプチド（適
切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、または第一の態様のペプチドま
たはポリペプチドを含む融合タンパクをコードするヌクレオチド配列を含む単離
された核酸分子を提供する。
切なキャリアータンパクに結合されてもよい）、または第一の態様のペプチドま
たはポリペプチドを含む融合タンパクをコードするヌクレオチド配列を含む単離
された核酸分子を提供する。
【００３８】
この核酸分子は、トランスファーまたは発現ベクターに取り込まれても、ＤＮ
Ａワクチンに用いられてもよい。かかる核酸分子は、例えば、Sambrookら（７）
に記載されているクローニングまたは合成による標準的な技術に従って産生され
てもよい。
Ａワクチンに用いられてもよい。かかる核酸分子は、例えば、Sambrookら（７）
に記載されているクローニングまたは合成による標準的な技術に従って産生され
てもよい。
【００３９】
さらに別の態様では、本発明は、接合体がヒトまたは他の動物において細胞介
在性免疫応答を誘導することができるような、上述のような炭水化物ポリマーと
ＭＵＣ１との接合体を含む化合物を提供するものである。好ましくは、ＭＵＣ１
はヒトＭＵＣ１（例えばＨＭＦＧ）であり、炭水化物ポリマーはマンノース、特
に酸化マンノースのポリマーであるか、または酸化マンナンである。この炭水化
物ポリマーは、例えば、ＭＵＣ１のｍｇ当たり約１−１０ｍｇ、好ましくはＭＵ
Ｃ１のｍｇ当たり約５−８ｍｇ、さらに好ましくはＭＵＣ１のｍｇ当たり約７ｍ
ｇの範囲内の量でＭＵＣ１に接合されてもよい。この接合化合物は、ワクチンに
用いられても、または上記と同様の治療剤として用いられてもよい。
在性免疫応答を誘導することができるような、上述のような炭水化物ポリマーと
ＭＵＣ１との接合体を含む化合物を提供するものである。好ましくは、ＭＵＣ１
はヒトＭＵＣ１（例えばＨＭＦＧ）であり、炭水化物ポリマーはマンノース、特
に酸化マンノースのポリマーであるか、または酸化マンナンである。この炭水化
物ポリマーは、例えば、ＭＵＣ１のｍｇ当たり約１−１０ｍｇ、好ましくはＭＵ
Ｃ１のｍｇ当たり約５−８ｍｇ、さらに好ましくはＭＵＣ１のｍｇ当たり約７ｍ
ｇの範囲内の量でＭＵＣ１に接合されてもよい。この接合化合物は、ワクチンに
用いられても、または上記と同様の治療剤として用いられてもよい。
【００４０】
本明細書を通して、用語“含む”またはその変形は、記載された成分、全体ま
たは工程、または成分、全体または工程の群を含むことを意味するが、他の成分
、全体または工程、または成分、全体または工程の群のいずれも排除しないと解
される。
たは工程、または成分、全体または工程の群を含むことを意味するが、他の成分
、全体または工程、または成分、全体または工程の群のいずれも排除しないと解
される。
【００４１】
本願明細書中に含まれる刊行物、作用、物質、装置、物品などのあらゆる議論
は、単に、本発明の内容を提示するためのものである。これらのいずれかまたは
全てが、先行技術の一部を形成する、あるいは本願の優先日以前のオーストラリ
アにおける本発明に関連する技術分野の一般的な技術常識である、と考えるべき
ではない。
は、単に、本発明の内容を提示するためのものである。これらのいずれかまたは
全てが、先行技術の一部を形成する、あるいは本願の優先日以前のオーストラリ
アにおける本発明に関連する技術分野の一般的な技術常識である、と考えるべき
ではない。
【００４２】
本発明を、以下の非限定的な実施例と添付の図面を参照しながら記載する。
【００４３】
略号：
以下の略号を実施例で用いる。
ＥＬＩＳＡ：酵素免疫検定法
ＤＴＨ：遅延型過敏症
ＦＰ：融合タンパク
ＧＳＴ：グルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼ
ＨＭＦＧ：ヒト乳脂肪球
Ｋｄ：キロダルトン
ＫＬＨ：キーホールリンペットヘモシアニン
ＰＡＧＥ：ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウム
Ｔｃ：細胞傷害性Ｔリンパ球
【００４４】
実施例１
１．導入
乳癌治療の免疫療法アプローチは、モノクローナル抗体の使用と、細胞傷害性
リンパ球（ＣＴＬ）の生成を含むものであった（２９−３４）。標的抗原の同定
、組み換えタンパクおよびサイトカインの利用可能性は、免疫療法にはずみを付
けた。かくして、乳および他の組織のＭＵＣ１発現性癌腫に対して有効な細胞傷
害性Ｔ細胞反応を生じる新たな手段が存在する（３５）。ＭＵＣ１は、ＣＴＬの
生成に特に魅力的なターゲットである：これは、抗体の産生に関してマウスで免
疫原性であり、最近では、本発明者らはＣＤ８+ ＣＴＬを記載し、ＭＨＣクラス
I Ｈ-２およびＨＬＡ-Ａ*０２０１結合ペプチドをＶＮＴＲにマップした（３６
−３９）。さらに、癌細胞では、ムチンの量に１００倍の増加があり（４０）、
クラスI分子により結合される顕著な量のＭＵＣ１ペプチドが存在する。ＶＮＴ
Ｒペプチドに注目する理由は、明らかである：これは、腫瘍細胞全体またはムチ
ン抽出物（ＨＭＦＧ）を抗体産生のためにマウスを免疫すべく使用した場合に、
ＭＵＣ１の最も免疫原性の領域だからである（４０）。
リンパ球（ＣＴＬ）の生成を含むものであった（２９−３４）。標的抗原の同定
、組み換えタンパクおよびサイトカインの利用可能性は、免疫療法にはずみを付
けた。かくして、乳および他の組織のＭＵＣ１発現性癌腫に対して有効な細胞傷
害性Ｔ細胞反応を生じる新たな手段が存在する（３５）。ＭＵＣ１は、ＣＴＬの
生成に特に魅力的なターゲットである：これは、抗体の産生に関してマウスで免
疫原性であり、最近では、本発明者らはＣＤ８+ ＣＴＬを記載し、ＭＨＣクラス
I Ｈ-２およびＨＬＡ-Ａ*０２０１結合ペプチドをＶＮＴＲにマップした（３６
−３９）。さらに、癌細胞では、ムチンの量に１００倍の増加があり（４０）、
クラスI分子により結合される顕著な量のＭＵＣ１ペプチドが存在する。ＶＮＴ
Ｒペプチドに注目する理由は、明らかである：これは、腫瘍細胞全体またはムチ
ン抽出物（ＨＭＦＧ）を抗体産生のためにマウスを免疫すべく使用した場合に、
ＭＵＣ１の最も免疫原性の領域だからである（４０）。
【００４５】
この点および非ＨＬＡ制限ＣＴＬもＶＮＴＲに向けられるという知見により、
ＣＴＬ誘導に関するＭＵＣ１の殆ど全ての関心が、ＶＮＴＲペプチドに集中した
（３７、４１、４２）。対照的に、本実施例は、ヒトの乳から得られた天然ムチ
ン（ＨＭＦＧ）でマウスを免疫すること、またはここに記載したペプチドで免疫
することにより同定された、ＭＵＣ１の細胞外および細胞内部分の非ＶＮＴＲエ
ピトープに対するＣＴＬの誘導に関する。
ＣＴＬ誘導に関するＭＵＣ１の殆ど全ての関心が、ＶＮＴＲペプチドに集中した
（３７、４１、４２）。対照的に、本実施例は、ヒトの乳から得られた天然ムチ
ン（ＨＭＦＧ）でマウスを免疫すること、またはここに記載したペプチドで免疫
することにより同定された、ＭＵＣ１の細胞外および細胞内部分の非ＶＮＴＲエ
ピトープに対するＣＴＬの誘導に関する。
【００４６】
２．物質と方法
マウスと腫瘍細胞
ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ-２d）、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ-２ｂ）、ヒトＭＵＣ１トラン
スジェニックマウス（B.Acres(Transgene, Strasbourg, France)から入手）、ト
ランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋbマウス（Ｈ-２b）（The Scripps Cli
nic and Research Foundation, La Jolla, CA.から入手）、およびダブルトラン
スジェニックマウス（Ａ２ＫbＭＵＣ１）をThe Austin Research Institute(ARI
)にて飼育した。ＭＵＣ１トランスジェニックマウス（ＤＢＡ／２にもどし交配
）のヒトＭＵＣ１は、ヒトＭＵＣ１プロモーターの制御下にある；ＭＵＣ１は、
肺細気管支、膵臓のβ島、腎臓細管および胃に発現される（４３）。ＨＬＡ-Ａ* ０２０１／Ｋbマウスは、ＨＬＡ-Ａ*０２０１のα１およびα２ドメインからな
るトランスジーンを発現し、α３は、Ｈ-２Ｋbの膜貫通および細胞質ドメインを
含む（４４）。ダブルトランスジェニックマウスを、ＨＬＡ-Ａ*０２０１および
ＭＵＣ１に対する抗体を用いたフローサイトメトリーにより、ＨＬＡ-Ａ*０２０
１／ＫbおよびヒトＭＵＣ１トランスジーンの発現に関してスクリーニングした
。ＲＭＡ-ＭＵＣ１は、ＭＵＣ１でトランスフェクトした（Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ
２b））リンパ腫細胞系統である（４５）。Ｔｍ２１１は、B.Acres(Transgene,
Strasbourg, France)から入手したＭＵＣ１トランスフェクトしたＰ８１５肥満
細胞腫（ＤＢＡ／２起源；Ｈ-２d）である。全てのマウス細胞系統を、１００Ｉ
Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および１０％
の胎児性ウシ血清（これら全てCommonwealth Serum Laboratories (CSL), Melbo
urneから入手）を含むダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）に、そして、ヒ
ト細胞系統を、同じ添加剤を含むＲＰＭＩに、７％の湿度のＣＯ2インキュベー
ターで３７℃で維持した。ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６およびダブルトランス
ジェニックＡ２ＫbＭＵＣ１マウスを、０、１０、１７日目に、５μｇのマンナ
ン-ＨＭＦＧまたはＨＭＦＧを腹腔内に３回の注射して免疫し、一方、ＨＬＡ-Ａ* ０２０１／Ｋbマウスを１回注射した。
スジェニックマウス（B.Acres(Transgene, Strasbourg, France)から入手）、ト
ランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋbマウス（Ｈ-２b）（The Scripps Cli
nic and Research Foundation, La Jolla, CA.から入手）、およびダブルトラン
スジェニックマウス（Ａ２ＫbＭＵＣ１）をThe Austin Research Institute(ARI
)にて飼育した。ＭＵＣ１トランスジェニックマウス（ＤＢＡ／２にもどし交配
）のヒトＭＵＣ１は、ヒトＭＵＣ１プロモーターの制御下にある；ＭＵＣ１は、
肺細気管支、膵臓のβ島、腎臓細管および胃に発現される（４３）。ＨＬＡ-Ａ* ０２０１／Ｋbマウスは、ＨＬＡ-Ａ*０２０１のα１およびα２ドメインからな
るトランスジーンを発現し、α３は、Ｈ-２Ｋbの膜貫通および細胞質ドメインを
含む（４４）。ダブルトランスジェニックマウスを、ＨＬＡ-Ａ*０２０１および
ＭＵＣ１に対する抗体を用いたフローサイトメトリーにより、ＨＬＡ-Ａ*０２０
１／ＫbおよびヒトＭＵＣ１トランスジーンの発現に関してスクリーニングした
。ＲＭＡ-ＭＵＣ１は、ＭＵＣ１でトランスフェクトした（Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ
２b））リンパ腫細胞系統である（４５）。Ｔｍ２１１は、B.Acres(Transgene,
Strasbourg, France)から入手したＭＵＣ１トランスフェクトしたＰ８１５肥満
細胞腫（ＤＢＡ／２起源；Ｈ-２d）である。全てのマウス細胞系統を、１００Ｉ
Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および１０％
の胎児性ウシ血清（これら全てCommonwealth Serum Laboratories (CSL), Melbo
urneから入手）を含むダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）に、そして、ヒ
ト細胞系統を、同じ添加剤を含むＲＰＭＩに、７％の湿度のＣＯ2インキュベー
ターで３７℃で維持した。ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６およびダブルトランス
ジェニックＡ２ＫbＭＵＣ１マウスを、０、１０、１７日目に、５μｇのマンナ
ン-ＨＭＦＧまたはＨＭＦＧを腹腔内に３回の注射して免疫し、一方、ＨＬＡ-Ａ* ０２０１／Ｋbマウスを１回注射した。
【００４７】
２．２ 合成ペプチド
ペプチド（表１）をＡＲＩで合成した；このペプチドの純度（＞９５％）を、
質量分析により測定した。
質量分析により測定した。
【００４８】
２．３ マンナンに対するＨＭＦＧの接合
ＨＭＦＧを、ヒト乳から単離し（４９）、マンナンに結合させた。リン酸バッ
ファー（０．１Ｍ、ｐＨ６．０）中のマンナン（１ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ）を過
ヨウ素酸ナトリウム（１００μｌ、０．１Ｍ）で処理し、４℃で３０分間インキ
ュベートした（４８）。エタンジオール（１０μｌ）を４゜で３０分間添加して
反応を止め、この混合物を、重炭酸塩バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）に平
衡化したＰＤ１０カラム（Pharmacia Biotech, Sweden）に通して、酸化マンナ
ン画分を１ｍｇのＨＭＦＧと室温で一晩混合し、マンナン-ＨＭＦＧを生じた。
ファー（０．１Ｍ、ｐＨ６．０）中のマンナン（１ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ）を過
ヨウ素酸ナトリウム（１００μｌ、０．１Ｍ）で処理し、４℃で３０分間インキ
ュベートした（４８）。エタンジオール（１０μｌ）を４゜で３０分間添加して
反応を止め、この混合物を、重炭酸塩バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）に平
衡化したＰＤ１０カラム（Pharmacia Biotech, Sweden）に通して、酸化マンナ
ン画分を１ｍｇのＨＭＦＧと室温で一晩混合し、マンナン-ＨＭＦＧを生じた。
【００４９】
２．４ Ｔ細胞エピトープ予測
利用可能ないくつかのＣＴＬエピトープ予測アルゴリズムが存在し、この研究
では、インターネット上で利用可能なKenneth Parker博士により開発されたプロ
グラム（bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/）を用いて、潜在的なＴ細胞エ
ピトープを同定した。このプログラムは、報告されたデータベースと比較するこ
とにより、インプット配列から１−９の各部位のアミノ酸に与えられたスコアに
基づいている（４９、５０）。９マーに対するより高い数値から、Ｔ細胞エピト
ープであるという高い可能性が予測される。例えば、オバルブミンに対するＴ細
胞エピトープ（Ｋb、ＳＩＩＮＦＥＫＬ、配列番号：１１）およびパピローマウ
イルス-１６ Ｅ７タンパク（Ｄb、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ；配列番号：１２）は、
それぞれ１７および６のスコアを与える。
では、インターネット上で利用可能なKenneth Parker博士により開発されたプロ
グラム（bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/）を用いて、潜在的なＴ細胞エ
ピトープを同定した。このプログラムは、報告されたデータベースと比較するこ
とにより、インプット配列から１−９の各部位のアミノ酸に与えられたスコアに
基づいている（４９、５０）。９マーに対するより高い数値から、Ｔ細胞エピト
ープであるという高い可能性が予測される。例えば、オバルブミンに対するＴ細
胞エピトープ（Ｋb、ＳＩＩＮＦＥＫＬ、配列番号：１１）およびパピローマウ
イルス-１６ Ｅ７タンパク（Ｄb、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ；配列番号：１２）は、
それぞれ１７および６のスコアを与える。
【００５０】
２．５ 細胞傷害性Ｔ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞前駆体（ＣＴＬｐ）頻度アッ
セイ(frequency assay) ＣＴＬアッセイを、記載されているように実施した（３７、３９、４８）。簡
単に説明すると、最終的な免疫化から７から１０日後に、脾臓細胞を回収し、洗
浄し、増殖培地に再懸濁して、９６ウェルミクロタイタープレートに連続的に希
釈した。標準的な３ｈｒ51Ｃｒ放出アッセイを、ターゲットとして１ｘ１０4の
ペプチドパルス化または未処理のＰ８１５またはＲＭＡ細胞を用いて、種々のエ
フェクター：ターゲット比で行った。ペプチドパルス化Ｐ８１５またはＲＭＡタ
ーゲット細胞を、９マーのペプチド（２５μｇ／ｍｌ）で一晩インキュベートす
ることにより調製した（３７）。Ａ２ＫbＭＵＣ１ダブルトランスジェニックエ
フェクターを用いたＣＴＬアッセイでは、ＭＣＦ７（ＭＵＣ１+ＨＬＡ-Ａ*０２
０１+）およびＢＴ２０（ＭＵＣ１+ＨＬＡ-Ａ*０２０１-）乳癌細胞系統または
ＭＥ２７２（ＭＵＣ１-ＨＬＡ-Ａ*０２０１+）メラノーマ細胞系統を、ターゲッ
トとして用いた。これらのヒト腫瘍細胞系統の全てが、細胞介在性溶解を受けや
すい（３９、５１、５２）。ＣＴＬｐ頻度を、少なくとも６のエフェクター細胞
数について、最少で３２の反復から調べた（１ｘ１０3−１．２８ｘ１０5）。Ｕ
字形ミクロタイタートレイで、１０％胎児性ウシ血清、５μＭの種々のＭＵＣ１
ペプチド（表１）またはＨＭＦＧ、および１０Ｕ／ｍｌのｒｈＩＬ-２を添加し
たＤＭＥＭ中で、５ｘ１０5マイトマイシンＣ処理ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ-２d）、Ｃ
５７ＢＬ／６（Ｈ-２b）またはＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋb脾臓細胞を用いて、細
胞を培養した。数日後に、１００μｌの培養培地を、１０4 51Ｃｒ-ラベル化Ｔ
ｍ２１１（Ｈ-２d）、ＲＭＡ-ＭＵＣ１（Ｈ-２b）腫瘍またはＥＢＶ形質転換ヒ
トＢ細胞（ＨＬＡ-Ａ*０２０１）またはＭＣＦ７をターゲットとして含む１００
μｌのターゲット細胞懸濁液で置換することにより、各ミクロ培養物を細胞傷害
性についてアッセイした。特異性コントロールとして、非ＭＵＣ１発現Ｐ８１５
（Ｈ-２d）またはＲＭＡ（Ｈ-２b）細胞を用いた。各ウェルにおいて、51Ｃｒ放
出が、刺激因子のみで培養した１０4エフェクターから、またはペプチドのみま
たはｒｈＩＬ２のみで刺激した刺激細胞からの、平均アイソトープ放出の３標準
偏差高い場合に、細胞傷害性活性が存在すると考えられた。直線的関係（０．９
８７≦ｒ2≦１）が、線形スケールで表したレスポンダー細胞の数と、対数尺で
表したネガティブウェルの頻度との間に存在した。ＣＴＬｐ頻度は、３７％のネ
ガティブウェルを生じるのに必要なレスポンダー細胞の投与量の逆数として調べ
られた（５３−５５）。ＣＴＬｐ頻度アッセイを３回行ったところ、個々の頻度
は平均値から２０％も異ならなかった。しかしながら、免疫されたマウスにおけ
るＣＴＬｐ頻度は、腫瘍保護と直接的に関連することに注意すべきである（２８
）。
セイ(frequency assay) ＣＴＬアッセイを、記載されているように実施した（３７、３９、４８）。簡
単に説明すると、最終的な免疫化から７から１０日後に、脾臓細胞を回収し、洗
浄し、増殖培地に再懸濁して、９６ウェルミクロタイタープレートに連続的に希
釈した。標準的な３ｈｒ51Ｃｒ放出アッセイを、ターゲットとして１ｘ１０4の
ペプチドパルス化または未処理のＰ８１５またはＲＭＡ細胞を用いて、種々のエ
フェクター：ターゲット比で行った。ペプチドパルス化Ｐ８１５またはＲＭＡタ
ーゲット細胞を、９マーのペプチド（２５μｇ／ｍｌ）で一晩インキュベートす
ることにより調製した（３７）。Ａ２ＫbＭＵＣ１ダブルトランスジェニックエ
フェクターを用いたＣＴＬアッセイでは、ＭＣＦ７（ＭＵＣ１+ＨＬＡ-Ａ*０２
０１+）およびＢＴ２０（ＭＵＣ１+ＨＬＡ-Ａ*０２０１-）乳癌細胞系統または
ＭＥ２７２（ＭＵＣ１-ＨＬＡ-Ａ*０２０１+）メラノーマ細胞系統を、ターゲッ
トとして用いた。これらのヒト腫瘍細胞系統の全てが、細胞介在性溶解を受けや
すい（３９、５１、５２）。ＣＴＬｐ頻度を、少なくとも６のエフェクター細胞
数について、最少で３２の反復から調べた（１ｘ１０3−１．２８ｘ１０5）。Ｕ
字形ミクロタイタートレイで、１０％胎児性ウシ血清、５μＭの種々のＭＵＣ１
ペプチド（表１）またはＨＭＦＧ、および１０Ｕ／ｍｌのｒｈＩＬ-２を添加し
たＤＭＥＭ中で、５ｘ１０5マイトマイシンＣ処理ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ-２d）、Ｃ
５７ＢＬ／６（Ｈ-２b）またはＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋb脾臓細胞を用いて、細
胞を培養した。数日後に、１００μｌの培養培地を、１０4 51Ｃｒ-ラベル化Ｔ
ｍ２１１（Ｈ-２d）、ＲＭＡ-ＭＵＣ１（Ｈ-２b）腫瘍またはＥＢＶ形質転換ヒ
トＢ細胞（ＨＬＡ-Ａ*０２０１）またはＭＣＦ７をターゲットとして含む１００
μｌのターゲット細胞懸濁液で置換することにより、各ミクロ培養物を細胞傷害
性についてアッセイした。特異性コントロールとして、非ＭＵＣ１発現Ｐ８１５
（Ｈ-２d）またはＲＭＡ（Ｈ-２b）細胞を用いた。各ウェルにおいて、51Ｃｒ放
出が、刺激因子のみで培養した１０4エフェクターから、またはペプチドのみま
たはｒｈＩＬ２のみで刺激した刺激細胞からの、平均アイソトープ放出の３標準
偏差高い場合に、細胞傷害性活性が存在すると考えられた。直線的関係（０．９
８７≦ｒ2≦１）が、線形スケールで表したレスポンダー細胞の数と、対数尺で
表したネガティブウェルの頻度との間に存在した。ＣＴＬｐ頻度は、３７％のネ
ガティブウェルを生じるのに必要なレスポンダー細胞の投与量の逆数として調べ
られた（５３−５５）。ＣＴＬｐ頻度アッセイを３回行ったところ、個々の頻度
は平均値から２０％も異ならなかった。しかしながら、免疫されたマウスにおけ
るＣＴＬｐ頻度は、腫瘍保護と直接的に関連することに注意すべきである（２８
）。
【００５１】
２．６ 阻害ＥＬＩＳＡ
抗体阻害ＥＬＩＳＡを行って、マンナンとの接合の前後におけるＨＭＦＧの活
性を比較した。ポリビニルクロリドプレートを、４℃で一晩または３７℃で１時
間、重炭酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）中の１０μｇ／ｍｌのＨＭＦＧ
の７０μｌで被覆し、非特異的結合を、２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を
用いてブロックした。種々の濃度のＨＭＦＧまたはマンナン-ＨＭＦＧを抗ＭＵ
Ｃ１抗体（ＶＡ２（５７）、１／２００上清）を用いて３時間インキュベートし
、１００μｌをＨＭＦＧで被覆したＰＶＣミクロタイターウェルプレートに加え
た。０．０５％のTween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後
、５０μｌのホースラディッシュペルオキシダーゼに接合させたヒツジ抗マウス
イムノグロブリン（Amersham, UK）を加え、ＲＴでさらに１時間インキュベート
した。ＰＢＳ／Tween20で洗浄した後に、プレートを発色物質２,２''-アジノ-ジ
(３-エチルベンズチアゾリン)スルホナート（ＡＢＴＳ）(Amersham, UK)で発色
させ、４０５ｎｍにおける吸収を記録した。
性を比較した。ポリビニルクロリドプレートを、４℃で一晩または３７℃で１時
間、重炭酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）中の１０μｇ／ｍｌのＨＭＦＧ
の７０μｌで被覆し、非特異的結合を、２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を
用いてブロックした。種々の濃度のＨＭＦＧまたはマンナン-ＨＭＦＧを抗ＭＵ
Ｃ１抗体（ＶＡ２（５７）、１／２００上清）を用いて３時間インキュベートし
、１００μｌをＨＭＦＧで被覆したＰＶＣミクロタイターウェルプレートに加え
た。０．０５％のTween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後
、５０μｌのホースラディッシュペルオキシダーゼに接合させたヒツジ抗マウス
イムノグロブリン（Amersham, UK）を加え、ＲＴでさらに１時間インキュベート
した。ＰＢＳ／Tween20で洗浄した後に、プレートを発色物質２,２''-アジノ-ジ
(３-エチルベンズチアゾリン)スルホナート（ＡＢＴＳ）(Amersham, UK)で発色
させ、４０５ｎｍにおける吸収を記録した。
【００５２】
２．７ ラジオイムノアッセイ
マンナンがＨＭＦＧに共有結合していることを確かめるべく、サンドウィッチ
ラジオイムノアッセイを行った。ミクロタイタープレートを、重炭酸バッファー
中の抗ＭＵＣ１抗体（ＢＣ２（５８））の連続希釈物を用いて一晩被覆し、非特
異的結合を上述したようにブロックした。ＨＭＦＧまたはマンナン-ＨＭＦＧを
ウェルに添加し、ＲＴで１時間インキュベートし、０．０５％のTween20を含む
ＰＢＳで強く洗浄した。次いで、５０μｌのラジオラベル化コンカナバリンＡ（
マンナンに特異的に結合するが、ＨＭＦＧには結合しない）を添加し、このプレ
ートをさらに１時間インキュベートし、ＰＢＳ／Tween 20で洗浄した。Microsci
nt-O（１２０μｌ）をウェルに添加し、プレートをβ-シンチレーションカウン
ターで計測した。
ラジオイムノアッセイを行った。ミクロタイタープレートを、重炭酸バッファー
中の抗ＭＵＣ１抗体（ＢＣ２（５８））の連続希釈物を用いて一晩被覆し、非特
異的結合を上述したようにブロックした。ＨＭＦＧまたはマンナン-ＨＭＦＧを
ウェルに添加し、ＲＴで１時間インキュベートし、０．０５％のTween20を含む
ＰＢＳで強く洗浄した。次いで、５０μｌのラジオラベル化コンカナバリンＡ（
マンナンに特異的に結合するが、ＨＭＦＧには結合しない）を添加し、このプレ
ートをさらに１時間インキュベートし、ＰＢＳ／Tween 20で洗浄した。Microsci
nt-O（１２０μｌ）をウェルに添加し、プレートをβ-シンチレーションカウン
ターで計測した。
【００５３】
３．結果
３．１ マンナン-ＨＭＦＧの調製および特徴決定
マンナンに接合した後のＨＭＦＧの活性を、阻害ＥＬＩＳＡにより測定した；
ＨＭＦＧの５０％阻害濃度は、２２μｇ／ｍｌであったが、一方、マンナン-Ｈ
ＭＦＧに対しては２０μｇ／ｍｌであった（図１ａ）。すなわち、ＨＭＦＧはマ
ンナンへの接合後も全ての反応性を維持した。マンナン-ＨＭＦＧ複合体の完全
性は、読み取りのために、プレートに結合した抗ＭＵＣ１抗体および125Ｉラベ
ル化Ｃｏｎ-Ａを用いたサンドウィッチラジオイムノアッセイにより証明された
（図１ｂ）。非接合ＨＭＦＧは125Ｉ-Ｃｏｎ-Ａに結合しないが、マンナン-ＨＭ
ＦＧは結合し、マンナンがＨＭＦＧに結合されていることを示している。
ＨＭＦＧの５０％阻害濃度は、２２μｇ／ｍｌであったが、一方、マンナン-Ｈ
ＭＦＧに対しては２０μｇ／ｍｌであった（図１ａ）。すなわち、ＨＭＦＧはマ
ンナンへの接合後も全ての反応性を維持した。マンナン-ＨＭＦＧ複合体の完全
性は、読み取りのために、プレートに結合した抗ＭＵＣ１抗体および125Ｉラベ
ル化Ｃｏｎ-Ａを用いたサンドウィッチラジオイムノアッセイにより証明された
（図１ｂ）。非接合ＨＭＦＧは125Ｉ-Ｃｏｎ-Ａに結合しないが、マンナン-ＨＭ
ＦＧは結合し、マンナンがＨＭＦＧに結合されていることを示している。
【００５４】
３．２ ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるマンナン-ＨＭＦＧに対するＣＴＬ応答
マンナン-ＨＭＦＧで免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞を、種々のペ
プチド（ＶＮＴＲおよび非ＶＮＴＲ領域の両方に由来、表１）を用いてin vitro
で刺激し、天然のＭＵＣ１を発現するターゲット細胞上で試験してＣＴＬｐを調
べた（表２）。マンナン-ＨＭＦＧを用いた免疫化が、ＭＵＣ１の全体、すなわ
ち、ＶＮＴＲおよび非ＶＮＴＲ領域の両方に由来するエピトープと反応するＣＴ
Ｌを誘導することは明らかであった。 この反応は、 ａ）ＨＭＦＧ。全ＭＵＣ１（ＨＭＦＧ）タンパクを刺激ペプチドのソースとして
用いた場合に、１／９７００のＣＴＬｐ頻度が得られた。明らかに、ＨＭＦＧは
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＣＴＬ産生に関して免疫原性であり、クラスＩ分子
により提示されるペプチドを生じるように処理されうる。 ｂ）ＶＮＴＲ。ＶＮＴＲペプチドＣｐ１３−３２およびｐ１−３０を用いて刺激
した場合に、１／７０００（Ｃｐ１３−３２）および１／１３２００（ｐ１−３
０）のＣＴＬｐ頻度が得られ、これはすなわち、ＨＭＦＧを用いて免疫すること
により、抗ＶＮＴＲ ＣＴＬが産生され、マンナン接合ＶＮＴＲペプチドを用い
て免疫することによって以前に見出された結果と類似している（４７）。これは
、グリコシル化されている天然ムチンで免疫することにより得られたＣＴＬに関
する最初の記載である。 ｃ）細胞外領域。in vitro刺激が、アミノ酸３１−５５、５１−７０、３３−１
０３、３４４−３６４を含むペプチドを用いた場合には、ＣＴＬは１／１９５０
０（３１−５５）；１／１００００（５１−７０）；１／２０１５０（３３−１
０３）および１／３６８００（３４４−３６４）の頻度で検出できた。かくして
、ＣＴＬは細胞外領域の非ＶＮＴＲ領域に対して産生されうる；これは係るＣＴ
Ｌに関する最初の記載である。 ｄ）細胞内領域。アミノ酸４０８−４２３、４７１−４９３、５０７−５２６を
含む三つの異なる非重複細胞内ペプチドを、上記アプローチを用いて調べた。１
／３００００（４０８−４２３）、１／１２５００（４７１−４９３）および１
／２２５００（５０７−５２６）のＣＴＬｐ頻度を得た。アミノ酸４７１−４９
３は、細胞溶解性細胞を再刺激するのに最も効果的であった。
プチド（ＶＮＴＲおよび非ＶＮＴＲ領域の両方に由来、表１）を用いてin vitro
で刺激し、天然のＭＵＣ１を発現するターゲット細胞上で試験してＣＴＬｐを調
べた（表２）。マンナン-ＨＭＦＧを用いた免疫化が、ＭＵＣ１の全体、すなわ
ち、ＶＮＴＲおよび非ＶＮＴＲ領域の両方に由来するエピトープと反応するＣＴ
Ｌを誘導することは明らかであった。 この反応は、 ａ）ＨＭＦＧ。全ＭＵＣ１（ＨＭＦＧ）タンパクを刺激ペプチドのソースとして
用いた場合に、１／９７００のＣＴＬｐ頻度が得られた。明らかに、ＨＭＦＧは
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＣＴＬ産生に関して免疫原性であり、クラスＩ分子
により提示されるペプチドを生じるように処理されうる。 ｂ）ＶＮＴＲ。ＶＮＴＲペプチドＣｐ１３−３２およびｐ１−３０を用いて刺激
した場合に、１／７０００（Ｃｐ１３−３２）および１／１３２００（ｐ１−３
０）のＣＴＬｐ頻度が得られ、これはすなわち、ＨＭＦＧを用いて免疫すること
により、抗ＶＮＴＲ ＣＴＬが産生され、マンナン接合ＶＮＴＲペプチドを用い
て免疫することによって以前に見出された結果と類似している（４７）。これは
、グリコシル化されている天然ムチンで免疫することにより得られたＣＴＬに関
する最初の記載である。 ｃ）細胞外領域。in vitro刺激が、アミノ酸３１−５５、５１−７０、３３−１
０３、３４４−３６４を含むペプチドを用いた場合には、ＣＴＬは１／１９５０
０（３１−５５）；１／１００００（５１−７０）；１／２０１５０（３３−１
０３）および１／３６８００（３４４−３６４）の頻度で検出できた。かくして
、ＣＴＬは細胞外領域の非ＶＮＴＲ領域に対して産生されうる；これは係るＣＴ
Ｌに関する最初の記載である。 ｄ）細胞内領域。アミノ酸４０８−４２３、４７１−４９３、５０７−５２６を
含む三つの異なる非重複細胞内ペプチドを、上記アプローチを用いて調べた。１
／３００００（４０８−４２３）、１／１２５００（４７１−４９３）および１
／２２５００（５０７−５２６）のＣＴＬｐ頻度を得た。アミノ酸４７１−４９
３は、細胞溶解性細胞を再刺激するのに最も効果的であった。
【００５５】
ＣＴＬがＭＵＣ１配列に特異的であること、そして、ＮＫ細胞またはその他の
細胞による非特異的殺傷によるものではないことを示すために、Ｐ８１５ターゲ
ット細胞を、パルス化抗原として非ＭＵＣ１ペプチド、Ｔ４Ｎ１と共に用いたと
ころ、ＣＴＬｐは検出されないか、あるいは頻度が≦１／２０００００であり、
ネガティブであると考えられた（示さず）。異なる領域の、３つが等価の免疫原
性であった（測定にＣＴＬｐ頻度を使用）：細胞外（５１−７０）＝ＶＮＴＲ（
Ｃｐ１３−３２）＝細胞内（４７１−４９３）、これらの全てが、〜１／１００
００という高い頻度を示した。
細胞による非特異的殺傷によるものではないことを示すために、Ｐ８１５ターゲ
ット細胞を、パルス化抗原として非ＭＵＣ１ペプチド、Ｔ４Ｎ１と共に用いたと
ころ、ＣＴＬｐは検出されないか、あるいは頻度が≦１／２０００００であり、
ネガティブであると考えられた（示さず）。異なる領域の、３つが等価の免疫原
性であった（測定にＣＴＬｐ頻度を使用）：細胞外（５１−７０）＝ＶＮＴＲ（
Ｃｐ１３−３２）＝細胞内（４７１−４９３）、これらの全てが、〜１／１００
００という高い頻度を示した。
【００５６】
対照的に、非接合ＨＭＦＧを用いてＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫化し、かつ、Ｖ
ＮＴＲペプチドＣｐ１３−３２を用いて刺激すると、ＣＴＬｐ頻度は１／８０５
００であった。この頻度は、ＭＵＣ１ ＶＮＴＲの５つの繰り返しを含む組み換
え細菌融合タンパクに接合されたマンナンを用いて得られた１／９５０００のＣ
ＴＬｐ頻度に似ており（４７）、かくして、ＨＭＦＧのマンナンに対する接合は
、マウスに強いＣＴＬｐ頻度を生じるのに必要である。
ＮＴＲペプチドＣｐ１３−３２を用いて刺激すると、ＣＴＬｐ頻度は１／８０５
００であった。この頻度は、ＭＵＣ１ ＶＮＴＲの５つの繰り返しを含む組み換
え細菌融合タンパクに接合されたマンナンを用いて得られた１／９５０００のＣ
ＴＬｐ頻度に似ており（４７）、かくして、ＨＭＦＧのマンナンに対する接合は
、マウスに強いＣＴＬｐ頻度を生じるのに必要である。
【００５７】
３．３ Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるマンナン-ＨＭＦＧに対するＣＴＬ応答
Ｃ５７ＢＬ／６をマンナン-ＨＭＦＧを用いて免疫し、ＢＡＬＢ／ｃマウスに
関して用いたものと同じ抗原でin vitroで刺激した（表２）。全ＨＭＦＧに関し
て１／１３５００、そしてＶＮＴＲ領域ペプチドｐ１−３０に関して１／１２５
００のＣＴＬｐ頻度があった（表２）。非ＶＮＴＲ細胞外ペプチドについては、
ＣＴＬは、１／２４５００の頻度で一つの細胞外ペプチド（３４４−３６４）に
対してのみ検出された。ＣＴＬは細胞内ペプチドのいずれに対しても検出されな
かった。また、ＣＴＬの特異性を、刺激に関して非ＭＵＣ１ペプチド、Ｔ４Ｎ１
を用い、かつ、ターゲットとして非ＭＵＣ１トランスフェクト親ＲＭＡ細胞系統
を用いて確認した。かくして、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＶＮＴＲと非ＶＮＴＲ
ペプチドの両方に反応することができるが、ＢＡＬＢ／ｃマウスが反応した一部
のペプチドには反応しなかった。
関して用いたものと同じ抗原でin vitroで刺激した（表２）。全ＨＭＦＧに関し
て１／１３５００、そしてＶＮＴＲ領域ペプチドｐ１−３０に関して１／１２５
００のＣＴＬｐ頻度があった（表２）。非ＶＮＴＲ細胞外ペプチドについては、
ＣＴＬは、１／２４５００の頻度で一つの細胞外ペプチド（３４４−３６４）に
対してのみ検出された。ＣＴＬは細胞内ペプチドのいずれに対しても検出されな
かった。また、ＣＴＬの特異性を、刺激に関して非ＭＵＣ１ペプチド、Ｔ４Ｎ１
を用い、かつ、ターゲットとして非ＭＵＣ１トランスフェクト親ＲＭＡ細胞系統
を用いて確認した。かくして、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＶＮＴＲと非ＶＮＴＲ
ペプチドの両方に反応することができるが、ＢＡＬＢ／ｃマウスが反応した一部
のペプチドには反応しなかった。
【００５８】
３．４ トランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋbマウスにおけるマンナン-
ＨＭＦＧに対する細胞性免疫応答 トランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋbマウスを、マンナン-ＨＭＦＧで
１回免疫し（上述したようなｘ３ではない）、ＨＭＦＧ、ＶＮＴＲペプチド（ｐ
１−３０）または細胞外ペプチドの一つ（３１−５５）のいずれかを用いてin v
itroで刺激した。ＣＴＬｐをヒトＥＢＶ ＨＬＡ-Ａ*０２０１+細胞で測定し（以
下参照）、頻度は１／３９０００（ＨＭＦＧ）および１／３３０００（ＶＮＴＲ
ｐ１−３０）であり、これはマンナン-ＶＮＴＲペプチドを用いた免疫化（１／
４８０００）と都合よく匹敵するものであり、すなわち、全ＨＭＦＧはＶＮＴＲ
と同じくらい免疫原性である（表２）。さらに、細胞外ペプチド（３１−５５）
を用いた場合には、ＣＴＬｐ頻度は１／４００００であり、すなわち、ＶＮＴＲ
に観察されるものと同じであった。かくして、ＨＬＡ-Ａ*０２０１は、細胞外お
よびＶＮＴＲペプチドを示すことができる。標的細胞が、ＨＬＡ-Ａ*０２０１を
発現するが、Ｈ-２bクラスＩ分子を発現しない（免疫されたマウスによって発現
される）ＥＢＶトランスフォームＢ細胞である場合、検出されたＣＴＬは、ＭＵ
Ｃ１ペプチドを示すＨＬＡ-Ａ*０２０１に制限されることに注意すべきである。
ＨＭＦＧに対する細胞性免疫応答 トランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１／Ｋbマウスを、マンナン-ＨＭＦＧで
１回免疫し（上述したようなｘ３ではない）、ＨＭＦＧ、ＶＮＴＲペプチド（ｐ
１−３０）または細胞外ペプチドの一つ（３１−５５）のいずれかを用いてin v
itroで刺激した。ＣＴＬｐをヒトＥＢＶ ＨＬＡ-Ａ*０２０１+細胞で測定し（以
下参照）、頻度は１／３９０００（ＨＭＦＧ）および１／３３０００（ＶＮＴＲ
ｐ１−３０）であり、これはマンナン-ＶＮＴＲペプチドを用いた免疫化（１／
４８０００）と都合よく匹敵するものであり、すなわち、全ＨＭＦＧはＶＮＴＲ
と同じくらい免疫原性である（表２）。さらに、細胞外ペプチド（３１−５５）
を用いた場合には、ＣＴＬｐ頻度は１／４００００であり、すなわち、ＶＮＴＲ
に観察されるものと同じであった。かくして、ＨＬＡ-Ａ*０２０１は、細胞外お
よびＶＮＴＲペプチドを示すことができる。標的細胞が、ＨＬＡ-Ａ*０２０１を
発現するが、Ｈ-２bクラスＩ分子を発現しない（免疫されたマウスによって発現
される）ＥＢＶトランスフォームＢ細胞である場合、検出されたＣＴＬは、ＭＵ
Ｃ１ペプチドを示すＨＬＡ-Ａ*０２０１に制限されることに注意すべきである。
【００５９】
３．５ Ａ２ＫbＭＵＣ１ダブルトランスジェニックマウスにおけるマンナン-Ｈ
ＭＦＧに対する細胞性免疫応答 ＭＵＣ１ ＣＴＬがＭＵＣ１陽性乳癌細胞を溶解する能力を確かめるために、
マンナンＨＭＦＧを３回注射したＡ２ＫbＭＵＣ１ダブルトランスジェニックマ
ウスを、ＨＭＦＧ、ＶＮＴＲペプチド（ｐ１−３０）、細胞外ペプチド（３１−
５５、３４４−３６４）、または細胞内ペプチド（４０８−４２３、４７１−４
９３、５０７−５２６）のいずれかを用いてin vitroで刺激した（表２）。全Ｈ
ＭＦＧでは１／２０００、ＶＮＴＲ領域ペプチドｐ１−３０では１／８０００の
ＣＴＬｐ頻度があった。ＣＴＬを、それぞれ１／２０００および１／１１０００
の頻度で、細胞外ペプチド３１−５５および３４４−３６４に対して検出した。
細胞内ペプチドでは、ＣＴＬは、１／２００００の頻度でペプチド４０８−４２
３に対してのみ検出された。
ＭＦＧに対する細胞性免疫応答 ＭＵＣ１ ＣＴＬがＭＵＣ１陽性乳癌細胞を溶解する能力を確かめるために、
マンナンＨＭＦＧを３回注射したＡ２ＫbＭＵＣ１ダブルトランスジェニックマ
ウスを、ＨＭＦＧ、ＶＮＴＲペプチド（ｐ１−３０）、細胞外ペプチド（３１−
５５、３４４−３６４）、または細胞内ペプチド（４０８−４２３、４７１−４
９３、５０７−５２６）のいずれかを用いてin vitroで刺激した（表２）。全Ｈ
ＭＦＧでは１／２０００、ＶＮＴＲ領域ペプチドｐ１−３０では１／８０００の
ＣＴＬｐ頻度があった。ＣＴＬを、それぞれ１／２０００および１／１１０００
の頻度で、細胞外ペプチド３１−５５および３４４−３６４に対して検出した。
細胞内ペプチドでは、ＣＴＬは、１／２００００の頻度でペプチド４０８−４２
３に対してのみ検出された。
【００６０】
免疫したマウスの脾臓を、直接的ＣＴＬアッセイに用いて、抗ＭＵＣ１ ＣＴ
Ｌの特異性を確かめた。図２に記載されているように、ＭＵＣ１ ＣＴＬは、Ｅ
：Ｔ比が１２：１で、５５％のＭＵＣ１＋ ＭＣＦ７（ＨＬＡ-Ａ*０２０１）乳
癌細胞を溶解し、コールドのＫ５６２ターゲットの存在下でインキュベートした
場合に１７％まで低減した。ＭＵＣ１ ＣＴＬは、ＭＵＣ１+ＢＴ２０（ＨＬＡ-
Ａ１）乳癌細胞系統を用いた場合に、全く溶解が検出されないように制限された
ＨＬＡであった。このＭＵＣ１ ＣＴＬは、ＭＵＣ１-veメラノーマ細胞系統ＭＥ
２７２を溶解しなかった。
Ｌの特異性を確かめた。図２に記載されているように、ＭＵＣ１ ＣＴＬは、Ｅ
：Ｔ比が１２：１で、５５％のＭＵＣ１＋ ＭＣＦ７（ＨＬＡ-Ａ*０２０１）乳
癌細胞を溶解し、コールドのＫ５６２ターゲットの存在下でインキュベートした
場合に１７％まで低減した。ＭＵＣ１ ＣＴＬは、ＭＵＣ１+ＢＴ２０（ＨＬＡ-
Ａ１）乳癌細胞系統を用いた場合に、全く溶解が検出されないように制限された
ＨＬＡであった。このＭＵＣ１ ＣＴＬは、ＭＵＣ１-veメラノーマ細胞系統ＭＥ
２７２を溶解しなかった。
【００６１】
かくして、マンナン-ＨＭＦＧを用いたＡ２ＫbＭＵＣ１マウスの免疫化は、天
然のＭＵＣ１を発現する腫瘍細胞を溶解することができる、特定のクラスI制限
化ＣＴＬを生じ、さらに、抗ＭＵＣ１ ＣＴＬは、細胞外に発現されたヒトＭＵ
Ｃ１の存在下でマウスにおいて生成されうる。
然のＭＵＣ１を発現する腫瘍細胞を溶解することができる、特定のクラスI制限
化ＣＴＬを生じ、さらに、抗ＭＵＣ１ ＣＴＬは、細胞外に発現されたヒトＭＵ
Ｃ１の存在下でマウスにおいて生成されうる。
【００６２】
３．６ Ｔ細胞エピトープ予測およびマッピング
ＣＴＬｐ生成に関与するＴ細胞エピトープを正確にマップするために、多数の
重複する９マーのペプチドを合成し、ＣＴＬアッセイに用いる必要がある。確か
に、ＣＴＬエピトープ予測プログラムは、推定される免疫原性ペプチドを選択す
るために用いられ、かつ、これらはその抗原性を調べるために合成された。
重複する９マーのペプチドを合成し、ＣＴＬアッセイに用いる必要がある。確か
に、ＣＴＬエピトープ予測プログラムは、推定される免疫原性ペプチドを選択す
るために用いられ、かつ、これらはその抗原性を調べるために合成された。
【００６３】
推定されたＨ-２d制限ペプチド（細胞内領域ＭＵＣ１）
いくつかのペプチド（NYGQLDIFP (Kd) 配列番号：１３；YGQLDIFPA (Dd)配列
番号：１４；KNYGQLDIF (Ld)配列番号：１５）は、４７１−４９３に含まれ（Ｃ
ＴＬｐ頻度＝１／１２５００）、それぞれ６、６および１０と予測された（表３
）。この予測された９マーがクラスＩ分子により提示されるかどうかを確かめる
ために、細胞傷害性Ｔ細胞アッセイを、エフェクターとしてマンナン-ＨＭＦＧ
免疫マウスの脾臓細胞を用い、Ｐ８１５ターゲット細胞を合成ペプチドを用いて
パルスした。これらは、NYGQLDIFP (Kd) （配列番号：１３）；YGQLDIFPA (Dd)
（配列番号：１４）；KNYGQLDIF (Ld)（配列番号：１５）であった。このパルス
化細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウスのマンナン-ＨＭＦＧ誘導ＣＴＬにより溶解され
なかった（図３ａ）。すなわち、ＣＴＬエピトープは、アルゴリズムで正確に予
測されなかった。ＶＮＴＲ領域のＣＴＬエピトープとして以前に同定された（３
８）ＭＵＣ１ ＶＮＴＲペプチドSAPDTRPAP (Dd)（配列番号：１６）およびAPDTR
PAPG (Ld)（配列番号：１７）をポジティブコントロールとして用い、５０：１
のＥ：Ｔ比で６２％および５０％の溶解率を得た。ネガティブコントロールとし
て用いたリステリオリシンＫdペプチド（GYKDGNEYI；配列番号：１８）およびＨ
ＩＶ Ｄｄペプチド（RKSIRIQRGPGRAFVTIGKGKGKGY；配列番号：１９）は、溶解を
与えなかった（図３ａ）。
番号：１４；KNYGQLDIF (Ld)配列番号：１５）は、４７１−４９３に含まれ（Ｃ
ＴＬｐ頻度＝１／１２５００）、それぞれ６、６および１０と予測された（表３
）。この予測された９マーがクラスＩ分子により提示されるかどうかを確かめる
ために、細胞傷害性Ｔ細胞アッセイを、エフェクターとしてマンナン-ＨＭＦＧ
免疫マウスの脾臓細胞を用い、Ｐ８１５ターゲット細胞を合成ペプチドを用いて
パルスした。これらは、NYGQLDIFP (Kd) （配列番号：１３）；YGQLDIFPA (Dd)
（配列番号：１４）；KNYGQLDIF (Ld)（配列番号：１５）であった。このパルス
化細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウスのマンナン-ＨＭＦＧ誘導ＣＴＬにより溶解され
なかった（図３ａ）。すなわち、ＣＴＬエピトープは、アルゴリズムで正確に予
測されなかった。ＶＮＴＲ領域のＣＴＬエピトープとして以前に同定された（３
８）ＭＵＣ１ ＶＮＴＲペプチドSAPDTRPAP (Dd)（配列番号：１６）およびAPDTR
PAPG (Ld)（配列番号：１７）をポジティブコントロールとして用い、５０：１
のＥ：Ｔ比で６２％および５０％の溶解率を得た。ネガティブコントロールとし
て用いたリステリオリシンＫdペプチド（GYKDGNEYI；配列番号：１８）およびＨ
ＩＶ Ｄｄペプチド（RKSIRIQRGPGRAFVTIGKGKGKGY；配列番号：１９）は、溶解を
与えなかった（図３ａ）。
【００６４】
予測されるＨ-２d制限ペプチド（細胞外領域ＭＵＣ１）
細胞外領域の多数の９マーペプチドは、ＣＴＬエピトープであると予測され［
(AVSMTSSVL (Kd)、配列番号：２０；TTQGQDVTL (Kd)、配列番号：２１；NAVSMTSSV
(Kd)、配列番号：２２；TSATQRSSV (Kd)、配列番号：２３；SSTTQGQDV (Kd)、配列
番号：２４；SVPSSTEKN (Dd)、配列番号：２５；EPASGSAAT (Ld)、配列番号：２６
；SPGSGSSTT (Ld)、配列番号：２７；VPSSTEKNA (Ld)、配列番号：２８；TPGGEKET
S (Ld)、配列番号：２９；TSATQRSSV (Ld)、配列番号：３０；SSTTQGQDV (Ld)、配
列番号：２４］、ペプチド３３−１０３（ＣＴＬｐ頻度＝１／２０１５０）に含
まれ、これらはそれぞれ、５８、４０、２９、１０、１０、２．９、３９、３９
、３６、３０、１０および１０のスコアであった。これらのペプチドのサブセッ
トは、５１−７０ペプチド（ＣＴＬｐ頻度＝１／１００００）にも含まれていた
（表３）。これらの内の四つを作製し（AVSMTSSVL (Kd)、配列番号：２０、NAVSM
TSSV (Kd)、配列番号：２２、VPSSTEKNA (Ld)、配列番号：２８；SVPSSTEKN (Dd)、
配列番号：２５）、試験した。これら四つのペプチドの内の３つは確かに示され
たが、一つは示されなかった。合成ペプチドAVSMTSSVL (Kd)、配列番号：２０、N
AVSMTSSV (Kd)、配列番号：２２、VPSSTEKNA (Ld)、配列番号：２８は、それぞれ
５０：１のＥ：Ｔ比で、７７％、８０％および７８％でＰ８１５ターゲット細胞
を感作したが、SVPSSTEKN（最も低い予測値）は不活性であった（図３ｂ）。そ
れゆえ、AVSMTSSVL、配列番号：２０；VPSSTEKNA、配列番号：２８、およびNAVSMT
SSV、配列番号：２２は、ペプチド３３−１０３および５１−７０におけるＣＴＬ
エピトープである。
(AVSMTSSVL (Kd)、配列番号：２０；TTQGQDVTL (Kd)、配列番号：２１；NAVSMTSSV
(Kd)、配列番号：２２；TSATQRSSV (Kd)、配列番号：２３；SSTTQGQDV (Kd)、配列
番号：２４；SVPSSTEKN (Dd)、配列番号：２５；EPASGSAAT (Ld)、配列番号：２６
；SPGSGSSTT (Ld)、配列番号：２７；VPSSTEKNA (Ld)、配列番号：２８；TPGGEKET
S (Ld)、配列番号：２９；TSATQRSSV (Ld)、配列番号：３０；SSTTQGQDV (Ld)、配
列番号：２４］、ペプチド３３−１０３（ＣＴＬｐ頻度＝１／２０１５０）に含
まれ、これらはそれぞれ、５８、４０、２９、１０、１０、２．９、３９、３９
、３６、３０、１０および１０のスコアであった。これらのペプチドのサブセッ
トは、５１−７０ペプチド（ＣＴＬｐ頻度＝１／１００００）にも含まれていた
（表３）。これらの内の四つを作製し（AVSMTSSVL (Kd)、配列番号：２０、NAVSM
TSSV (Kd)、配列番号：２２、VPSSTEKNA (Ld)、配列番号：２８；SVPSSTEKN (Dd)、
配列番号：２５）、試験した。これら四つのペプチドの内の３つは確かに示され
たが、一つは示されなかった。合成ペプチドAVSMTSSVL (Kd)、配列番号：２０、N
AVSMTSSV (Kd)、配列番号：２２、VPSSTEKNA (Ld)、配列番号：２８は、それぞれ
５０：１のＥ：Ｔ比で、７７％、８０％および７８％でＰ８１５ターゲット細胞
を感作したが、SVPSSTEKN（最も低い予測値）は不活性であった（図３ｂ）。そ
れゆえ、AVSMTSSVL、配列番号：２０；VPSSTEKNA、配列番号：２８、およびNAVSMT
SSV、配列番号：２２は、ペプチド３３−１０３および５１−７０におけるＣＴＬ
エピトープである。
【００６５】
予測されるＨ-２b制限ペプチド
Ｃ５７ＢＬ／６マウスには少数の同定されたペプチドエピトープが存在するが
、低いスコアではあるが、ペプチドに多数の潜在的なＣＴＬエピトープが存在す
る（表３）。９マーのCRRKNYGQL(Db、Kb)、配列番号：３２は４７１−４９３（Ｃ
ＴＬｐ検出せず）に含まれ、１０および１．４のスコアを有していた。それは弱
くＲＭＡターゲットを感作し、マンナン-ＨＭＦＧ ＣＴＬにより溶解し、５０：
１のＥ：Ｔで２０％溶解、１００：１のＥ：Ｔで４２％溶解した（図３ｃ）。Ｍ
ＵＣ１ ＶＮＴＲペプチドAPGSTAPPA（Ｄb）、配列番号：３３およびSAPDTRPAP（
Ｋb）、配列番号：１６をポジティブな特異性コントロールとして用い、ここで７
０％および８０％の溶解を得たが、オバルブミンＫb９マーSIINFEKL、配列番号：
１１およびアデノウイルスＤb９マーについては全く溶解が検出されなかった（
ネガティブな特異性コントロールとして使用）。９マーペプチドSTEKNAVSM (Db)
、配列番号：３４；AVSMTSSVL (Db)、配列番号：２０およびAVSMTSSVL(Kb)、配列番
号：２０は、ペプチド３３−１０３および５１−７０に含まれ、１５、１０およ
び１．２のスコアを有していた。これら三つのペプチドの全てが、弱くＲＭＡタ
ーゲットを感作し、溶解した（５０：１で〜２０％、１００：１のＥ：Ｔで〜４
０％の溶解）（図３ｄ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのペプチド３１−５５および５
１−７０に反応性のＣＴＬはなかった。
、低いスコアではあるが、ペプチドに多数の潜在的なＣＴＬエピトープが存在す
る（表３）。９マーのCRRKNYGQL(Db、Kb)、配列番号：３２は４７１−４９３（Ｃ
ＴＬｐ検出せず）に含まれ、１０および１．４のスコアを有していた。それは弱
くＲＭＡターゲットを感作し、マンナン-ＨＭＦＧ ＣＴＬにより溶解し、５０：
１のＥ：Ｔで２０％溶解、１００：１のＥ：Ｔで４２％溶解した（図３ｃ）。Ｍ
ＵＣ１ ＶＮＴＲペプチドAPGSTAPPA（Ｄb）、配列番号：３３およびSAPDTRPAP（
Ｋb）、配列番号：１６をポジティブな特異性コントロールとして用い、ここで７
０％および８０％の溶解を得たが、オバルブミンＫb９マーSIINFEKL、配列番号：
１１およびアデノウイルスＤb９マーについては全く溶解が検出されなかった（
ネガティブな特異性コントロールとして使用）。９マーペプチドSTEKNAVSM (Db)
、配列番号：３４；AVSMTSSVL (Db)、配列番号：２０およびAVSMTSSVL(Kb)、配列番
号：２０は、ペプチド３３−１０３および５１−７０に含まれ、１５、１０およ
び１．２のスコアを有していた。これら三つのペプチドの全てが、弱くＲＭＡタ
ーゲットを感作し、溶解した（５０：１で〜２０％、１００：１のＥ：Ｔで〜４
０％の溶解）（図３ｄ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのペプチド３１−５５および５
１−７０に反応性のＣＴＬはなかった。
【００６６】
全ＭＵＣ１分子から推測される二つのハイスコアＣＴＬエピトープ、細胞内領
域（YYQELQRDI(Kd),配列番号：３５ スコア２８８０）および細胞外領域Ｎ末端
からＶＮＴＲ（SAPDNRPAL(Db),配列番号：３６ スコア４７２３）は、２８８０
および４７２３のスコアを有し、ＲＭＡおよびＰ８１５ターゲット細胞を感作し
、５０：１のＥ：Ｔで５０％溶解した（図３ｅ）。それゆえ、いくつかのＴ細胞
エピトープは、ＭＵＣ１分子の非ＶＮＴＲ領域に存在し、９マーペプチドが標的
細胞によりマンナン-ＨＭＦＧ免疫により生成したＣＴＬに提示され得る。
域（YYQELQRDI(Kd),配列番号：３５ スコア２８８０）および細胞外領域Ｎ末端
からＶＮＴＲ（SAPDNRPAL(Db),配列番号：３６ スコア４７２３）は、２８８０
および４７２３のスコアを有し、ＲＭＡおよびＰ８１５ターゲット細胞を感作し
、５０：１のＥ：Ｔで５０％溶解した（図３ｅ）。それゆえ、いくつかのＴ細胞
エピトープは、ＭＵＣ１分子の非ＶＮＴＲ領域に存在し、９マーペプチドが標的
細胞によりマンナン-ＨＭＦＧ免疫により生成したＣＴＬに提示され得る。
【００６７】
４．論考
本発明者等による以前の免疫研究は、マンナンに結合したＶＮＴＲの５つの繰
り返しを含むＭＵＣ１融合タンパク（ＭＦＰ）を用い、これは、ＩＦＮ-γ、Ｉ
Ｌ-１２、非常に僅かなＩｇＧ2a抗体の産生および腫瘍増殖からの保護により特
徴付けられるＭＵＣ１に対する強い細胞応答を生じた（３６、４８）。また、ヒ
トにおける免疫応答は、ＭＦＰを用いたフェーズＩ臨床試験ではＭＵＣ１抗原の
治療的使用に見込みを示し、１５人中４人の患者が増殖反応を生じ、２５人中１
３人が高レベルのＭＵＣ１特異的血清抗体を示し、１０人中２人がＭＵＣ１に対
するＣＴＬを生じた（５９）。しかしながら、in vitroでのペプチド結合研究お
よびin vivoでのトランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１マウスを用いた研究は
、ＶＮＴＲ配列はＨＬＡ-Ａ*０２０１およびＨＬＡ-Ａ*１１０１により提示され
るだけであることを示し（３９、６０）、かくして、研究はＭＵＣ１ ＶＮＴＲ
に集中した。それは、少なくとも抗体に関して、マウスにおけるその優先的免疫
原性と、ＶＮＴＲを免疫応答に関係させるヒトからの証拠のためである。ＭＵＣ
１の別のタンパク配列は、その細胞免疫に関して調べられたことはなかった。過
去において、本発明者らは、ＭＵＣ１で免疫したマウスにおいて非ＶＮＴＲ領域
に対するモノクローナル抗体を求めたが、結果を得られず、また、国際的な研究
でも何も見つからなかった。可能性のあるＴ細胞エピトープに関してＭＵＣ１配
列の全体をスキャンすることにより、以前に試験してない多くのペプチドが推定
された。本発明者らは、それゆえ、マンナン接合ＨＭＦＧを用いてマウスを免疫
して、その提示に関する自然な抗原処理に依存するものの全ての可能性のあるＭ
ＵＣ１エピトープを提供し、ＭＵＣ１の非ＶＮＴＲ領域に対する細胞性免疫応答
が生じうることを示した。これは、ＶＮＴＲに対して生成されたものと同じくら
い効果的であり、さらにＨＬＡ-Ａ*０２０１およびＡ２ＫbＭＵＣ１トランスジ
ェニックマウスの両方が免疫化され、ヒトも免疫化されうることを示唆している
。
り返しを含むＭＵＣ１融合タンパク（ＭＦＰ）を用い、これは、ＩＦＮ-γ、Ｉ
Ｌ-１２、非常に僅かなＩｇＧ2a抗体の産生および腫瘍増殖からの保護により特
徴付けられるＭＵＣ１に対する強い細胞応答を生じた（３６、４８）。また、ヒ
トにおける免疫応答は、ＭＦＰを用いたフェーズＩ臨床試験ではＭＵＣ１抗原の
治療的使用に見込みを示し、１５人中４人の患者が増殖反応を生じ、２５人中１
３人が高レベルのＭＵＣ１特異的血清抗体を示し、１０人中２人がＭＵＣ１に対
するＣＴＬを生じた（５９）。しかしながら、in vitroでのペプチド結合研究お
よびin vivoでのトランスジェニックＨＬＡ-Ａ*０２０１マウスを用いた研究は
、ＶＮＴＲ配列はＨＬＡ-Ａ*０２０１およびＨＬＡ-Ａ*１１０１により提示され
るだけであることを示し（３９、６０）、かくして、研究はＭＵＣ１ ＶＮＴＲ
に集中した。それは、少なくとも抗体に関して、マウスにおけるその優先的免疫
原性と、ＶＮＴＲを免疫応答に関係させるヒトからの証拠のためである。ＭＵＣ
１の別のタンパク配列は、その細胞免疫に関して調べられたことはなかった。過
去において、本発明者らは、ＭＵＣ１で免疫したマウスにおいて非ＶＮＴＲ領域
に対するモノクローナル抗体を求めたが、結果を得られず、また、国際的な研究
でも何も見つからなかった。可能性のあるＴ細胞エピトープに関してＭＵＣ１配
列の全体をスキャンすることにより、以前に試験してない多くのペプチドが推定
された。本発明者らは、それゆえ、マンナン接合ＨＭＦＧを用いてマウスを免疫
して、その提示に関する自然な抗原処理に依存するものの全ての可能性のあるＭ
ＵＣ１エピトープを提供し、ＭＵＣ１の非ＶＮＴＲ領域に対する細胞性免疫応答
が生じうることを示した。これは、ＶＮＴＲに対して生成されたものと同じくら
い効果的であり、さらにＨＬＡ-Ａ*０２０１およびＡ２ＫbＭＵＣ１トランスジ
ェニックマウスの両方が免疫化され、ヒトも免疫化されうることを示唆している
。
【００６８】
細胞性反応を、マンナン-ＨＭＦＧ免疫化ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｈ
ＬＡ-Ａ*０２０１／ＫbおよびダブルトランスジェニックＡ２ＫbＭＵＣ１マウス
の、ＭＵＣ１の細胞外領域、ＶＮＴＲ、および細胞内ペプチドにも検出すること
ができた。免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスよりも非ＶＮ
ＴＲ ＣＴＬエピトープに対してより反応しうるＣＴＬを生じた。これでは、３
４４−３６４ペプチドおよびSAPDNRPAL（配列番号：３６）がＣＴＬにより認識
された（表２、図３ｅ）。
ＬＡ-Ａ*０２０１／ＫbおよびダブルトランスジェニックＡ２ＫbＭＵＣ１マウス
の、ＭＵＣ１の細胞外領域、ＶＮＴＲ、および細胞内ペプチドにも検出すること
ができた。免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスよりも非ＶＮ
ＴＲ ＣＴＬエピトープに対してより反応しうるＣＴＬを生じた。これでは、３
４４−３６４ペプチドおよびSAPDNRPAL（配列番号：３６）がＣＴＬにより認識
された（表２、図３ｅ）。
【００６９】
再刺激に用いられた種々のペプチドの内、いくつかの可能性のある候補の９マ
ーのエピトープを、ペプチドモチーフサーチプログラムを用いて推定することが
できた（表３）。ＢＡＬＢ／ｃマウスでは、４７１−４９３ペプチドに関する前
駆体頻度は１／１２５００であったが、推定されたエピトープペプチドNYGQLDIF
P（配列番号：１３）、YGQLDIFPA（配列番号：１４）およびKNYGQLDIF（配列番
号：１５）は、マンナン-ＨＭＦＧ ＣＴＬによる溶解に関してＰ８１５ターゲ
ットを感作し得なかった（図３ａ）。それゆえ、刺激ＣＴＬエピトープはアルゴ
リズムにより正確に同定されず、また、これらの合成ペプチドはターゲット細胞
により適切に処理および提示されない。対照的に、３３−１０３および５１−７
０配列に存在するいくつかの９マー（AVSMTSSVL 配列番号：２０；NAVSMTSSV 配
列番号：２２およびVPSSTEKNA 配列番号：２８）は、溶解アッセイで機能的ＣＴ
Ｌエピトープであると同定された（図３ｂ）。
ーのエピトープを、ペプチドモチーフサーチプログラムを用いて推定することが
できた（表３）。ＢＡＬＢ／ｃマウスでは、４７１−４９３ペプチドに関する前
駆体頻度は１／１２５００であったが、推定されたエピトープペプチドNYGQLDIF
P（配列番号：１３）、YGQLDIFPA（配列番号：１４）およびKNYGQLDIF（配列番
号：１５）は、マンナン-ＨＭＦＧ ＣＴＬによる溶解に関してＰ８１５ターゲ
ットを感作し得なかった（図３ａ）。それゆえ、刺激ＣＴＬエピトープはアルゴ
リズムにより正確に同定されず、また、これらの合成ペプチドはターゲット細胞
により適切に処理および提示されない。対照的に、３３−１０３および５１−７
０配列に存在するいくつかの９マー（AVSMTSSVL 配列番号：２０；NAVSMTSSV 配
列番号：２２およびVPSSTEKNA 配列番号：２８）は、溶解アッセイで機能的ＣＴ
Ｌエピトープであると同定された（図３ｂ）。
【００７０】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスでは、５１−７０および４７１−４９３配列のCRRKNYGQ
L（配列番号：３２）、STEKNAVSM（配列番号：３４）およびAVSMTSSVL（配列番
号：２０）ペプチドが溶解に関してＲＭＡ細胞を感作したが、ＣＴＬｐはより大
きなペプチドを用いた再刺激により同定されなかった。係る観察は、ＭＵＣ１+
細胞により処理および提示されない係る３つの９マーから得ることができた。
L（配列番号：３２）、STEKNAVSM（配列番号：３４）およびAVSMTSSVL（配列番
号：２０）ペプチドが溶解に関してＲＭＡ細胞を感作したが、ＣＴＬｐはより大
きなペプチドを用いた再刺激により同定されなかった。係る観察は、ＭＵＣ１+
細胞により処理および提示されない係る３つの９マーから得ることができた。
【００７１】
マウスＫd、Ｄd、Ｌd、Ｋb、Ｄb、ＫkおよびヒトＨＬＡ-Ａ１、ＨＬＡ-Ａ*０
２０１、ＨＬＡ-Ａ３およびＨＬＡ-Ａ２４エピトープに関するＴ細胞エピトープ
アルゴリズムを用いた全ＭＵＣ１配列のさらなる解析は、マウスまたはヒトの細
胞による提示に関していくつかの候補の９マーを示す。これらの９マーペプチド
のうち、SAPDNRPAL(Db)、（配列番号：３６）およびYYQELRDI(Kd)（配列番号：
３５）を合成したところ、両方ともマンナン-ＨＭＦＧ ＣＴＬによる溶解に関し
てＰ８１５またはＲＭＡ細胞を刺激することに非常に効率的であった（図３ｅ）
。この研究およびその他の研究から、ＣＴＬエピトープの推定が常に正確という
わけではないことが明らかである。ＶＮＴＲ領域に関する推定されかつ実験的に
調べられたＴ細胞エピトープの比較は、より低いスコアが必ずしも提示または抗
原性の欠如を予測するわけではないことを示している（表４）。例えば、SAPDTR
PAP(配列番号：１６)ペプチドは、ＴＡＰ欠如ＲＭＡ-Ｓ細胞とインキュベートし
た場合にクラスＩ安定化により、また、ペプチドパルス化ＲＭＡ細胞の溶解によ
りＫb-制限エピトープであることが確認されたが（図３ｃ）、推定されたスコア
は僅かに０．００４である（３８）。同様に、Ｋk、ＬdおよびＤdは、正確に推
定されなかった（３８）。エピトープマッピング（３９）により独立に同定され
たＨＬＡ-Ａ*０２０１ Ｔ細胞エピトープ、STAPPAHGV（配列番号：３７）は、低
いスコアを有するものの予測された。予測アルゴリズムは、抗原提示の可能性に
対するガイドとして機能するものの、in vivo応答は、抗原処理、免疫優性、Ｔ
細胞レパートリー、グリコシル化および他の未知のファクターによって決定され
る［６１、６２］。
２０１、ＨＬＡ-Ａ３およびＨＬＡ-Ａ２４エピトープに関するＴ細胞エピトープ
アルゴリズムを用いた全ＭＵＣ１配列のさらなる解析は、マウスまたはヒトの細
胞による提示に関していくつかの候補の９マーを示す。これらの９マーペプチド
のうち、SAPDNRPAL(Db)、（配列番号：３６）およびYYQELRDI(Kd)（配列番号：
３５）を合成したところ、両方ともマンナン-ＨＭＦＧ ＣＴＬによる溶解に関し
てＰ８１５またはＲＭＡ細胞を刺激することに非常に効率的であった（図３ｅ）
。この研究およびその他の研究から、ＣＴＬエピトープの推定が常に正確という
わけではないことが明らかである。ＶＮＴＲ領域に関する推定されかつ実験的に
調べられたＴ細胞エピトープの比較は、より低いスコアが必ずしも提示または抗
原性の欠如を予測するわけではないことを示している（表４）。例えば、SAPDTR
PAP(配列番号：１６)ペプチドは、ＴＡＰ欠如ＲＭＡ-Ｓ細胞とインキュベートし
た場合にクラスＩ安定化により、また、ペプチドパルス化ＲＭＡ細胞の溶解によ
りＫb-制限エピトープであることが確認されたが（図３ｃ）、推定されたスコア
は僅かに０．００４である（３８）。同様に、Ｋk、ＬdおよびＤdは、正確に推
定されなかった（３８）。エピトープマッピング（３９）により独立に同定され
たＨＬＡ-Ａ*０２０１ Ｔ細胞エピトープ、STAPPAHGV（配列番号：３７）は、低
いスコアを有するものの予測された。予測アルゴリズムは、抗原提示の可能性に
対するガイドとして機能するものの、in vivo応答は、抗原処理、免疫優性、Ｔ
細胞レパートリー、グリコシル化および他の未知のファクターによって決定され
る［６１、６２］。
【００７２】
精製された形態のＭＵＣ１タンパク全体は、細胞性免疫を生成すべくマウスを
免疫するために用いられたことなはいが、いくつかの他の免疫方法が用いられて
きた。ＭＵＣ１タンパク全体は、ワクシニア構成物［４６、６３］に、ＤＮＡ免
疫の構成物として［６４］、トランスフェクトされた樹状細胞［６５］およびト
ランスフェクトされたＥＢＶ-Ｂ細胞［６６］に保持されていた。これらの研究
では、ＣＴＬの特異性は確かめられなかった。しかしながら、グリコシル化ＭＵ
Ｃ１（ＨＭＦＧ）を用いることの重要性は、強調されるべきである。マウスおよ
びヒトにおける別の研究は、ＭＵＣ１トランスジェニックマウス［６７］とヒト
［５９、６８、６９］の両方に抗体産生を導いた非グリコシル化ペプチドを用い
た；これらの研究では、Ｂ細胞および時にＴ細胞寛容が克服されたが、しかし抗
体に関してであって、非グリコシル化ペプチドは新たな抗原を提示し、その反応
は驚くべきことではないと考えられた。しかしながら、ここに記載されている研
究では、マンナンに結合した天然のグリコシル化ムチン（ＨＭＦＧ）は、Ａ２Ｋb ＭＵＣ１トランスジェニックマウスを含むマウスのいくつかの株にＣＴＬを首
尾よく誘導した。マンナン-ＨＭＦＧは、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７Ｂｌ／６マ
ウスと比較してＡ２ＫbＭＵＣ１マウス（１／２０００）により高いＣＴＬｐ頻
度を与え、これは、異なる株のマウスまたはより高い親和性のＨＬＡ-Ａ*０２０
１ＣＴＬエピトープの存在によるものである。ＢＡＬＢ／ｃマウスでは、ＨＭＧ
Ｆは１／８０５００のＣＴＬｐ頻度を与えた。これは、非グリコシル化形態のＭ
ＵＣ１ ＶＮＴＲ［４７］を用いて免疫したマウスにおけるＣＴＬｐ頻度に匹敵
した。すなわち、グリコシル化および非グリコシル化形態のＶＮＴＲの両方が、
酸化マンナンと共に提示された場合に、同等に免疫原性であった。明らかに、炭
水化物被覆は、下のペプチドを覆い隠してしまうことはなかった。かくして、マ
ンナン-ＨＭＦＧは、ＭＵＣ１におけるＶＮＴＲ、細胞外領域および細胞内領域
のペプチドに対してＣＴＬを産生することによって、Ａ２ＫbＭＵＣ１トランス
ジェニックマウスの寛容を破壊することができる。これらの結果は、ＭＵＣ１が
治療において有益なターゲットであるという概念を補強する。
免疫するために用いられたことなはいが、いくつかの他の免疫方法が用いられて
きた。ＭＵＣ１タンパク全体は、ワクシニア構成物［４６、６３］に、ＤＮＡ免
疫の構成物として［６４］、トランスフェクトされた樹状細胞［６５］およびト
ランスフェクトされたＥＢＶ-Ｂ細胞［６６］に保持されていた。これらの研究
では、ＣＴＬの特異性は確かめられなかった。しかしながら、グリコシル化ＭＵ
Ｃ１（ＨＭＦＧ）を用いることの重要性は、強調されるべきである。マウスおよ
びヒトにおける別の研究は、ＭＵＣ１トランスジェニックマウス［６７］とヒト
［５９、６８、６９］の両方に抗体産生を導いた非グリコシル化ペプチドを用い
た；これらの研究では、Ｂ細胞および時にＴ細胞寛容が克服されたが、しかし抗
体に関してであって、非グリコシル化ペプチドは新たな抗原を提示し、その反応
は驚くべきことではないと考えられた。しかしながら、ここに記載されている研
究では、マンナンに結合した天然のグリコシル化ムチン（ＨＭＦＧ）は、Ａ２Ｋb ＭＵＣ１トランスジェニックマウスを含むマウスのいくつかの株にＣＴＬを首
尾よく誘導した。マンナン-ＨＭＦＧは、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７Ｂｌ／６マ
ウスと比較してＡ２ＫbＭＵＣ１マウス（１／２０００）により高いＣＴＬｐ頻
度を与え、これは、異なる株のマウスまたはより高い親和性のＨＬＡ-Ａ*０２０
１ＣＴＬエピトープの存在によるものである。ＢＡＬＢ／ｃマウスでは、ＨＭＧ
Ｆは１／８０５００のＣＴＬｐ頻度を与えた。これは、非グリコシル化形態のＭ
ＵＣ１ ＶＮＴＲ［４７］を用いて免疫したマウスにおけるＣＴＬｐ頻度に匹敵
した。すなわち、グリコシル化および非グリコシル化形態のＶＮＴＲの両方が、
酸化マンナンと共に提示された場合に、同等に免疫原性であった。明らかに、炭
水化物被覆は、下のペプチドを覆い隠してしまうことはなかった。かくして、マ
ンナン-ＨＭＦＧは、ＭＵＣ１におけるＶＮＴＲ、細胞外領域および細胞内領域
のペプチドに対してＣＴＬを産生することによって、Ａ２ＫbＭＵＣ１トランス
ジェニックマウスの寛容を破壊することができる。これらの結果は、ＭＵＣ１が
治療において有益なターゲットであるという概念を補強する。
【００７３】
ヒトにおけるマンナン-ＨＭＦＧの使用は、ＭＵＣ１が膵臓、腎臓のような一
部の正常な細胞に存在するという一部の議論を保証する。よって、免疫応答がこ
れらの組織に生成されて、自己免疫を生じる可能性がある。かくして、マンナン
に接合したＭＵＣ１ ＶＮＴＲを用いた我々の臨床試験では、自己免疫は全く検
出されなかったが、拡大研究を慎重に行い、モニタリングが必要である［５９］
。ドナーから直接的に得られたＨＭＦＧは、使用にあまり好ましくなさそうであ
り、組み換え物質がより適切であろう。しかしながら、組み換え物質を用いるに
、ＨＭＦＧの高レベルのグリコシレーションを心がけるべきである。おそらく、
真核生物系ベクターが必要であろう。第三に、我々は最近、ＶＮＴＲペプチドが
、存在する天然ヒト抗体との交差反応により、抗体に対する免疫応答を逸脱させ
得ることを示した［７０］。かかる逸脱は、ＭＵＣ１全体を用いた場合に生じう
る。
部の正常な細胞に存在するという一部の議論を保証する。よって、免疫応答がこ
れらの組織に生成されて、自己免疫を生じる可能性がある。かくして、マンナン
に接合したＭＵＣ１ ＶＮＴＲを用いた我々の臨床試験では、自己免疫は全く検
出されなかったが、拡大研究を慎重に行い、モニタリングが必要である［５９］
。ドナーから直接的に得られたＨＭＦＧは、使用にあまり好ましくなさそうであ
り、組み換え物質がより適切であろう。しかしながら、組み換え物質を用いるに
、ＨＭＦＧの高レベルのグリコシレーションを心がけるべきである。おそらく、
真核生物系ベクターが必要であろう。第三に、我々は最近、ＶＮＴＲペプチドが
、存在する天然ヒト抗体との交差反応により、抗体に対する免疫応答を逸脱させ
得ることを示した［７０］。かかる逸脱は、ＭＵＣ１全体を用いた場合に生じう
る。
【００７４】
実施例２
非ＶＮＴＲペプチドを、グルタルアルデヒドを用いてキーホールリンペットヘ
モシアニン（ＫＬＨ）に結合させ、次いで、以下のように酸化マンナンと反応さ
せた。 ２ｍｇのペプチド４７１から５０７を、１．７５ｍｌのリン酸バッファーに溶
かし、０．２５ｍｌのＫＬＨ（２ｍｇ／ｍｌ）と混合し、０．２５％のグルタル
アルデヒドを用いて処理し、暗室で、室温で一晩混合した。この混合物をリン酸
バッファーに一晩透析した。透析した混合物を、欧州特許出願第94303817.4号に
記載されているように調製した１ｍｌの酸化マンナンと混合し、一晩放置した。
モシアニン（ＫＬＨ）に結合させ、次いで、以下のように酸化マンナンと反応さ
せた。 ２ｍｇのペプチド４７１から５０７を、１．７５ｍｌのリン酸バッファーに溶
かし、０．２５ｍｌのＫＬＨ（２ｍｇ／ｍｌ）と混合し、０．２５％のグルタル
アルデヒドを用いて処理し、暗室で、室温で一晩混合した。この混合物をリン酸
バッファーに一晩透析した。透析した混合物を、欧州特許出願第94303817.4号に
記載されているように調製した１ｍｌの酸化マンナンと混合し、一晩放置した。
【００７５】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（６−８週）を、０、１０および１７日目に５マイクログ
ラムのマンナン-ペプチドＫＬＨで腹腔内に免疫し、スプレノサイト(splenocyte
)におけるＣＴＬ活性を記載に従って測定した。マンナンに結合した非ＶＮＴＲ
ペプチドは、ポジティブコントロール（マンナンに結合したＶＮＴＲペプチド）
と比較して、ＣＴＬアッセイにおいて陽性の反応を示した（図４および５）。
ラムのマンナン-ペプチドＫＬＨで腹腔内に免疫し、スプレノサイト(splenocyte
)におけるＣＴＬ活性を記載に従って測定した。マンナンに結合した非ＶＮＴＲ
ペプチドは、ポジティブコントロール（マンナンに結合したＶＮＴＲペプチド）
と比較して、ＣＴＬアッセイにおいて陽性の反応を示した（図４および５）。
【００７６】
実施例３
非リーダー、非ＶＮＴＲペプチドおよびポリペプチドも、ＤＮＡワクチンの調
製のために用いられる。これは、ＤＮＡクローニングおよび核酸接種における確
立された手法を用いて行うことができる。例えば、３'および５'末端に必要な制
限酵素部位を有する、一以上の非リーダー、非ＶＮＴＲペプチドおよびポリペプ
チドをコードする核酸配列を、自動化ＤＮＡ合成装置で合成し、ｐｃＤＮＡ３ま
たはｐＳＶ３のような適切なベクターにクローン化することができる［７２］。
このクローンを、制限酵素切断またはタンパク発現により核酸配列の取り込みに
ついてスクリーニングすることができる。このＤＮＡは、ヒトおよび他の動物の
種々の部位に免疫のために注射することができる。
製のために用いられる。これは、ＤＮＡクローニングおよび核酸接種における確
立された手法を用いて行うことができる。例えば、３'および５'末端に必要な制
限酵素部位を有する、一以上の非リーダー、非ＶＮＴＲペプチドおよびポリペプ
チドをコードする核酸配列を、自動化ＤＮＡ合成装置で合成し、ｐｃＤＮＡ３ま
たはｐＳＶ３のような適切なベクターにクローン化することができる［７２］。
このクローンを、制限酵素切断またはタンパク発現により核酸配列の取り込みに
ついてスクリーニングすることができる。このＤＮＡは、ヒトおよび他の動物の
種々の部位に免疫のために注射することができる。
【００７７】
「参考文献」
【００７８】
当業者であれば、広く記載された本発明の精神または範囲から離れることなく
、特定の実施態様に記載された本発明に対して、多数の変更および／または修正
が可能であることを理解できるであろう。それゆえ、本発明の実施態様は、あら
ゆる点で、例示的であって、限定的でないと考えられる。
、特定の実施態様に記載された本発明に対して、多数の変更および／または修正
が可能であることを理解できるであろう。それゆえ、本発明の実施態様は、あら
ゆる点で、例示的であって、限定的でないと考えられる。
【００７９】
【表１】
【００８０】
【表２】
【００８１】
【表３ａ】
【表３ｂ】
【００８２】
【表４】
【図１】 ヒトＭＵＣ１タンパクのアミノ酸配列を示す（NCBIデータベース
No.M61170）。
No.M61170）。
【図２】 ＨＭＦＧとマンナンのアッセイ。（ａ）ＨＭＦＧ（ｍ）とマンナ
ン-ＨＭＦＧ（ｌ）の競合剤調製によるＨＭＦＧに対する抗ＭＵＣ１抗体の結合
阻害。（ｂ）抗ＭＵＣ１抗体に対するマンナン-ＨＭＦＧ（ｌ）およびＨＭＦＧ
（ｍ）の結合およびラジオイムノアッセイにより検出されたＣｏｎＡ。
ン-ＨＭＦＧ（ｌ）の競合剤調製によるＨＭＦＧに対する抗ＭＵＣ１抗体の結合
阻害。（ｂ）抗ＭＵＣ１抗体に対するマンナン-ＨＭＦＧ（ｌ）およびＨＭＦＧ
（ｍ）の結合およびラジオイムノアッセイにより検出されたＣｏｎＡ。
【図３】 Ａ２ＫbＭＵＣ１ダブルトランスジェニックマウスをマンナン-Ｈ
ＭＦＧで免疫化し、脾臓細胞をＣＴＬアッセイに用いた。エフェクター細胞の細
胞傷害活性を、次の成分と共に（ｎ）、またはコールドのＫ５６２なし（ｌ）；
ＢＴ２０なし（ｐ）またはＭＥ２７２なし（ｍ）で、51Ｃｒ-ラベル化ＭＣＦ７
で測定した。
ＭＦＧで免疫化し、脾臓細胞をＣＴＬアッセイに用いた。エフェクター細胞の細
胞傷害活性を、次の成分と共に（ｎ）、またはコールドのＫ５６２なし（ｌ）；
ＢＴ２０なし（ｐ）またはＭＥ２７２なし（ｍ）で、51Ｃｒ-ラベル化ＭＣＦ７
で測定した。
【図４】 Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスを、マンナン-ＨＭＦ
Ｇを用いて免疫化し、脾臓細胞をＣＴＬアッセイで用いた。細胞内ペプチド４７
１−４９３の種々の９マーのペプチドでパルスしたＰ８１５（ａ）またはＲＭＡ
（ｃ）細胞の溶解；細胞外ペプチド３３−１０３および５１−７０の種々の９マ
ーペプチドでパルスしたＰ８１５（ｂ）またはＲＭＡ（ｄ）細胞の溶解、および
（ｅ）YYQELQRDI（配列番号：３５）でパルスしたＰ８１５細胞およびSAPDNRPAL
（配列番号：３６）でパルスしたＲＭＡ-ＭＵＣ１細胞の溶解。ペプチドパルシ
ングおよび抗原特異的細胞溶解のコントロールとして公知のペプチド抗原を用い
た。それぞれのパネルに示し、テキストに記載した。
Ｇを用いて免疫化し、脾臓細胞をＣＴＬアッセイで用いた。細胞内ペプチド４７
１−４９３の種々の９マーのペプチドでパルスしたＰ８１５（ａ）またはＲＭＡ
（ｃ）細胞の溶解；細胞外ペプチド３３−１０３および５１−７０の種々の９マ
ーペプチドでパルスしたＰ８１５（ｂ）またはＲＭＡ（ｄ）細胞の溶解、および
（ｅ）YYQELQRDI（配列番号：３５）でパルスしたＰ８１５細胞およびSAPDNRPAL
（配列番号：３６）でパルスしたＲＭＡ-ＭＵＣ１細胞の溶解。ペプチドパルシ
ングおよび抗原特異的細胞溶解のコントロールとして公知のペプチド抗原を用い
た。それぞれのパネルに示し、テキストに記載した。
【図５】 Balb/cマウスをマンナン-５０７-ＫＬＨで免疫し、脾臓細胞をＣ
ＬＴアッセイに用いた。種々のエフェクター：ターゲット比で、Ｃｐ１３-３２
または５０７ペプチドを用いてパルスしていないまたはパルスした51Ｃｒ-ラベ
ル化Ｐ８１５標的細胞の溶解率％を測定した。
ＬＴアッセイに用いた。種々のエフェクター：ターゲット比で、Ｃｐ１３-３２
または５０７ペプチドを用いてパルスしていないまたはパルスした51Ｃｒ-ラベ
ル化Ｐ８１５標的細胞の溶解率％を測定した。
【図６】 Balb/cマウスをマンナン-４７１-ＫＬＨで免疫し、脾臓細胞をＣ
ＬＴアッセイに用いた。種々のエフェクター：ターゲット比で、Ｃｐ１３-３２
または４７１ペプチドを用いてパルスしていないまたはパルスした51Ｃｒ-ラベ
ル化Ｐ８１５標的細胞の溶解率％を測定した。
ＬＴアッセイに用いた。種々のエフェクター：ターゲット比で、Ｃｐ１３-３２
または４７１ペプチドを用いてパルスしていないまたはパルスした51Ｃｒ-ラベ
ル化Ｐ８１５標的細胞の溶解率％を測定した。
【配列表】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 37/04 Ｃ０７Ｋ 14/705
Ｃ０７Ｋ 14/435 19/00
14/705 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
19/00 Ａ６１Ｋ 37/02
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ
，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，
ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ
Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ
，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，
ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ
Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ
，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，
ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ
Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ
，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，
ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ
Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ
，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，
ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 ジョフ・エー・ピーターズ
オーストラリア・ヴィクトリア・3088・グ
リーンズボロー・ジャンバンナ・ストリー
ト・10
(72)発明者 バッソ・アポストロポロス
オーストラリア・ヴィクトリア・3021・セ
イント・アルバンズ・コブハム・ストリー
ト・14
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA36 BA80 CA02 CA07
DA03 GA11 HA17
4C084 AA02 AA07 BA19 NA14 ZB26
4C085 AA03 BB01 BB11 CC23
4C086 AA01 AA04 EA16 MA01 MA04
NA14 ZB09 ZB26
4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10
BA41 BA50 BA53 CA40 CA50
DA86 EA20 EA50 FA20 FA74
Claims (47)
- 【請求項１】 免疫応答を誘導することができるペプチドまたはポリペプチ
ドであって、ここで当該ペプチドまたはポリペプチドは、ムチンの非ＶＮＴＲ、
非リーダー領域のエピトープのアミノ酸配列に実質的に対応するアミノ酸配列を
含む、ペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２】 ムチンの非ＶＮＴＲ、非リーダー領域から誘導されるアミノ
酸配列からなる、請求項１記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項３】 前記エピトープが、ムチンの非ＶＮＴＲ、非リーダー領域の
細胞外領域に由来する、請求項１記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項４】 前記エピトープが、ムチンの非ＶＮＴＲ、非リーダー領域の
細胞内領域に由来する、請求項１記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項５】 前記エピトープが、ムチンの非ＶＮＴＲ、非リーダー領域の
膜貫通領域に由来する、請求項１記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項６】 前記ムチンがムチン１（ＭＵＣ１）である、請求項１ないし
５のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項７】 前記ムチン１がヒトムチン１である、請求項６記載のペプチ
ドまたはポリペプチド。 - 【請求項８】 前記ヒトムチン１がヒト乳脂肪球皮膜抗原（ＨＭＦＧ）であ
る、請求項７記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項９】 前記エピトープが、AVSMTSSVL（配列番号：２０）、NAVSMTS
SV（配列番号：２２）、VPSSTEKNA（配列番号：２８）およびSAPDNRPAL（配列番
号：３６）から選択されたアミノ酸配列を有する、請求項３記載のペプチドまた
はポリペプチド。 - 【請求項１０】 前記エピトープが、アミノ酸配列：YYQELQRDI（配列番号
：３５）を有する、請求項４記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項１１】 以下のアミノ酸配列： TGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVP（配列番号：２） RSSVPSSTEKNAVSMTSSVL（配列番号：３） SGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNAVSMTSSVLSSHSPGSGSSTTQGQDVTLAPATEPASGSAATW
（配列番号：４） SAPDNRPAL（配列番号：６） NSSLEDPSTDYYQELQRDISE（配列番号：７） TQFNQYKTEAASRVNL（配列番号：８） AVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYH（配列番号：９）および YVPPSSTDRSPYEKVSAGNG（配列番号：１０） またはその免疫原性フラグメントの一つに実質的に対応するアミノ酸配列を含む
、請求項１または２に記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項１２】 請求項１ないし１１のいずれか一項に記載のペプチドまた
はポリペプチドと適切なキャリアータンパクを含む融合タンパク。 - 【請求項１３】 炭水化物ポリマーに接合されている、請求項１２記載の融
合タンパク。 - 【請求項１４】 炭水化物ポリマーが、グルコース、ガラクトース、マンノ
ース、キシロース、アラビノース、フコース、グルコサミン、ガラクトサミン、
ラムノース、６-ｏ-メチル１-Ｄ-ガラクトース、２-ｏ-アセチル-β-Ｄ-キシロ
ース、Ｎ-アセチル-グルコサミン、イズロナート、グルロナート、マヌロナート
、メチルガラクツロナート、α-Ｄ-ガラクトピラノース６-スルファート、フル
クトース、αアベクオース、およびこれらの配座異性体および配置異性体からな
る群から選択された炭水化物モノマー単位のポリマーであるか、あるいは二つ以
上の異なるタイプの前記炭水化物モノマー単位からなる炭水化物のポリマーであ
る、請求項１３記載の融合タンパク。 - 【請求項１５】 前記炭水化物ポリマーが、少なくとも２０のモノマー単位
を含む、請求項１４記載の融合タンパク。 - 【請求項１６】 前記炭水化物ポリマーが、１０００より多いモノマー単位
を含む、請求項１５記載の融合タンパク。 - 【請求項１７】 前記炭水化物ポリマーが、１００００より多いモノマー単
位を含む、請求項１６記載の融合タンパク。 - 【請求項１８】 炭水化物ポリマーが、マンノースのポリマーであるか、マ
ンノースを含む炭水化物ポリマーである、請求項１３ないし１７のいずれか一項
に記載の融合タンパク。 - 【請求項１９】 炭水化物ポリマーが、酸化マンノースのポリマーであるか
、または酸化マンナンである、請求項１３ないし１７のいずれか一項に記載の融
合タンパク。 - 【請求項２０】 適切なキャリアータンパクに結合した、請求項１ないし１
１のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２１】 前記ペプチドまたはポリペプチドおよび／または前記キャ
リアータンパクが、炭水化物ポリマーに接合されている、請求項２０記載のペプ
チドまたはポリペプチド。 - 【請求項２２】 前記炭水化物ポリマーが、グルコース、ガラクトース、マ
ンノース、キシロース、アラビノース、フコース、グルコサミン、ガラクトサミ
ン、ラムノース、６-ｏ-メチル１-Ｄ-ガラクトース、２-ｏ-アセチル-β-Ｄ-キ
シロース、Ｎ-アセチル-グルコサミン、イズロナート、グルロナート、マヌロナ
ート、メチルガラクツロナート、α-Ｄ-ガラクトピラノース６-スルファート、
フルクトース、αアベクオース、およびこれらの配座異性体および配置異性体か
らなる群から選択される炭水化物モノマー単位のポリマーであるか、あるいは二
つ以上の異なるタイプの前記炭水化物モノマー単位からなる炭水化物のポリマー
である、請求項２１記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２３】 前記炭水化物ポリマーが、少なくとも２０のモノマー単位
を含む、請求項２２記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２４】 前記炭水化物ポリマーが、１０００より多いモノマー単位
を含む、請求項２３記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２５】 前記炭水化物ポリマーが、１００００より多いモノマー単
位を含む、請求項２４記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２６】 炭水化物ポリマーが、マンノースのポリマーであるか、マ
ンノースを含む炭水化物ポリマーである、請求項２１ないし２５のいずれか一項
に記載のペプチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２７】 炭水化物ポリマーが、酸化マンノースのポリマーであるか
、または酸化マンナンである、請求項２１ないし２５のいずれか一項に記載のペ
プチドまたはポリペプチド。 - 【請求項２８】 請求項１ないし１１のいずれか一項に記載のペプチドまた
はポリペプチドと炭水化物ポリマーとの接合体を含む化合物。 - 【請求項２９】 ムチン１と炭水化物ポリマーとの接合体を含む化合物であ
って、前記接合体がヒトまたは他の動物において細胞介在性免疫応答を誘導する
ことができるような化合物。 - 【請求項３０】 前記ムチン１がヒトムチン１である、請求項２９記載の化
合物。 - 【請求項３１】 前記ヒトムチン１がヒト乳脂肪球皮膜抗原（ＨＭＦＧ）で
ある、請求項３０記載の化合物。 - 【請求項３２】 前記炭水化物ポリマーが、グルコース、ガラクトース、マ
ンノース、キシロース、アラビノース、フコース、グルコサミン、ガラクトサミ
ン、ラムノース、６-ｏ-メチル１-Ｄ-ガラクトース、２-ｏ-アセチル-β-Ｄ-キ
シロース、Ｎ-アセチル-グルコサミン、イズロナート、グルロナート、マヌロナ
ート、メチルガラクツロナート、α-Ｄ-ガラクトピラノース６-スルファート、
フルクトース、αアベクオース、およびこれらの配座異性体および配置異性体か
らなる群から選択される炭水化物モノマー単位のポリマーであるか、あるいは二
つ以上の異なるタイプの前記炭水化物モノマー単位からなる炭水化物のポリマー
である、請求項２８ないし３１のいずれか一項に記載の化合物。 - 【請求項３３】 前記炭水化物ポリマーが、少なくとも２０のモノマー単位
を含む、請求項３２記載の化合物。 - 【請求項３４】 前記炭水化物ポリマーが、１０００より多いモノマー単位
を含む、請求項３３記載の化合物。 - 【請求項３５】 前記炭水化物ポリマーが、１００００より多いモノマー単
位を含む、請求項３４記載の化合物。 - 【請求項３６】 炭水化物ポリマーが、マンノースのポリマーであるか、マ
ンノースを含む炭水化物ポリマーである、請求項２８ないし３５のいずれか一項
に記載の化合物。 - 【請求項３７】 炭水化物ポリマーが、酸化マンノースのポリマーであるか
、または酸化マンナンである、請求項２８ないし３５のいずれか一項に記載の化
合物。 - 【請求項３８】 請求項１ないし１１または２０ないし２７のいずれか一項
に記載のペプチドまたはポリペプチド、または請求項１２ないし１９のいずれか
一項に記載の融合タンパクと、任意に、アジュバントおよび／または薬学的に許
容できるキャリアーとを含むワクチンまたは治療剤。 - 【請求項３９】 請求項２８ないし３７のいずれか一項に記載の接合化合物
と、任意に、アジュバントおよび／または薬学的に許容できるキャリアーとを含
むワクチンまたは治療剤。 - 【請求項４０】 請求項１ないし１１または２０ないし２７のいずれか一項
に記載のペプチドまたはポリペプチド、または請求項１２ないし１９のいずれか
一項に記載の融合タンパクの有効量を、任意に、アジュバントおよび／または薬
学的に許容できるキャリアーと組み合わせて、患者に投与することを含む、ムチ
ンに対する細胞介在性免疫応答を誘導する方法。 - 【請求項４１】 請求項２８ないし３７のいずれか一項に記載の接合化合物
の有効量を、任意に、アジュバントおよび／または薬学的に許容できるキャリア
ーと組み合わせて、患者に投与することを含む、ムチンに対する細胞介在性免疫
応答を誘導する方法。 - 【請求項４２】 患者の癌腫を予防または治療する方法であって、前記患者
に、請求項３８または３９記載のワクチンまたは治療剤を投与することを含む方
法。 - 【請求項４３】 前記癌腫が腺癌である、請求項４２記載の方法。
- 【請求項４４】 前記腺癌が乳癌である、請求項４３記載の方法。
- 【請求項４５】 請求項１ないし１１または２０ないし２７のいずれか一項
に記載のペプチドまたはポリペプチド、請求項１２ないし１９のいずれか一項に
記載の融合タンパク、または請求項２８ないし３７のいずれか一項に記載の接合
化合物の、in vivo導入のために樹状細胞をパルスし、ワクチンとして用いるた
めの使用。 - 【請求項４６】 請求項１ないし１１のいずれか一項に記載のペプチドまた
はポリペプチドもしくは請求項１２ないし１９のいずれか一項に記載の融合タン
パクをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子。 - 【請求項４７】 請求項４６記載の核酸分子を含むＤＮＡワクチン。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005168437A (ja) * | 2003-12-12 | 2005-06-30 | Takara Bio Inc | 抗体の製造方法 |
| JP2009518002A (ja) * | 2005-09-20 | 2009-05-07 | ラルフ・フス | 癌および皮膚病変の処置のためのグリコシルホスファチジルイノシトール（ｇｐｉ）アンカーに連結されたメタロプロテイナーゼの組織インヒビター |
| JP2015096513A (ja) * | 2008-10-17 | 2015-05-21 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | 癌の阻害剤としてのｍｕｃ−１細胞質ドメインペプチド |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPQ797700A0 (en) | 2000-06-06 | 2000-06-29 | Austin Research Institute, The | Vaccine |
| CA2430060C (en) * | 2000-11-27 | 2015-11-24 | Minerva Biotechnologies Corporation | Identification and use of cell surface receptor-binding ligands for the diagnosis and treatment of cancer |
| EP1288292A1 (en) * | 2001-08-31 | 2003-03-05 | Leids Universitair Medisch Centrum | Long peptides of 22-40 amino acid residues that induce and/or enhance antigen specific immune responses. |
| EP1531842A4 (en) | 2000-12-22 | 2007-03-07 | Dana Farber Cancer Inst Inc | REGULATION OF CELL GROWTH BY MUC1 |
| US20040071671A1 (en) | 2001-02-20 | 2004-04-15 | Leturcq Didier J. | Cell therapy method for the treatment of tumors |
| EP2848255B1 (en) | 2001-02-20 | 2017-08-23 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Artificial Drosophila antigen presenting cell for preparing CD8 cell suspension for use in the treatment of cancer |
| GB0212046D0 (en) * | 2002-05-24 | 2002-07-03 | Glaxo Group Ltd | Vaccines |
| GB0212036D0 (en) * | 2002-05-24 | 2002-07-03 | Glaxo Group Ltd | Vaccines |
| EP1537143A2 (en) * | 2002-09-05 | 2005-06-08 | Cell Center Cologne GmbH | Immunogenic muc1 glycopeptides |
| GB0304634D0 (en) * | 2003-02-28 | 2003-04-02 | Glaxo Group Ltd | Vaccines |
| US7696306B2 (en) | 2003-07-11 | 2010-04-13 | Board of Agents of the University of Nebraska | Compositions and methods for preventing or treating cancer |
| GB0321614D0 (en) * | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Vaccines |
| US8129506B2 (en) | 2003-10-24 | 2012-03-06 | Genzyme Corporation | Modulation of the interaction of MUC1 with MUC1 ligands |
| ATE527285T1 (de) * | 2005-01-28 | 2011-10-15 | Univ Ramot | Anti-muc1-alpha-beta-antikörper |
| US20090317414A1 (en) | 2006-07-25 | 2009-12-24 | 4G Vaccines Pty Ltd | Cancer vaccine comprising a mucin 1 (muc1) t cell epitope-derived peptide |
| US7972870B2 (en) | 2007-02-02 | 2011-07-05 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions relating to the regulation of MUC1 by HSF1 and STAT3 |
| WO2008097844A2 (en) | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Dana -Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions relating to the regulation of apoptosis by muc1 and bh3- containing proapoptotic proteins |
| US8877206B2 (en) | 2007-03-22 | 2014-11-04 | Pds Biotechnology Corporation | Stimulation of an immune response by cationic lipids |
| CA2721366C (en) * | 2008-04-17 | 2017-06-06 | Elizabeth Ann Vasievich | Stimulation of an immune response by enantiomers of cationic lipids |
| CA2763327C (en) | 2009-05-27 | 2019-04-02 | Donald W. Kufe | Inhibition 0f inflammation using antagonists of muc1 |
| US8685928B2 (en) | 2010-02-12 | 2014-04-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antagonists of MUC1 |
| EP2574170A4 (en) | 2010-05-10 | 2013-11-20 | Ascend Biopharmaceuticals Pty Ltd | IMMUNOSTIMULATORY AND VACCINE COMPOSITIONS |
| US9044421B2 (en) | 2012-03-28 | 2015-06-02 | Genus Oncology, Llc | Treating MUC1-expressing cancers with combination therapies |
| ES2777935T3 (es) | 2012-06-15 | 2020-08-06 | Pds Biotechnology Corp | Composiciones de vacunas de lípidos catiónicos y procedimiento de uso |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07206707A (ja) * | 1993-12-24 | 1995-08-08 | Austin Res Inst:The | 抗原炭水化物複合体及びその免疫療法への応用 |
| WO1996003502A2 (en) * | 1994-07-26 | 1996-02-08 | Ramot University Authority For Applied Research And Industrial Development Ltd. | Muc1 derived proteins for the diagnosis, imaging and therapy of human cancer |
| WO1997011963A1 (en) * | 1995-09-27 | 1997-04-03 | The Austin Research Institute | ANTI-GALα(1,3)GAL ANTIBODY BINDING PEPTIDES |
| WO1998037095A2 (en) * | 1997-02-24 | 1998-08-27 | Therion Biologics Corporation | Recombinant pox virus for immunization against muc1 tumor-associated antigen |
| WO2000006723A1 (en) * | 1998-07-30 | 2000-02-10 | Yeda Research And Development Company Ltd At The Weizmann Institute Of Science | Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines |
| JP2002528519A (ja) * | 1998-10-30 | 2002-09-03 | メナリニ・リチェルケ・エッセ・ピ・ア | 抗腫瘍効果を有する、抗原性タンパク質をコードしているｄｎａを含む医薬組成物 |
| JP2003510094A (ja) * | 1999-09-08 | 2003-03-18 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニム | Ｍｕｃ−１由来のペプチド |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8929097D0 (en) * | 1989-12-22 | 1990-02-28 | Imp Cancer Res Tech | Mucin nucleotides |
-
2001
- 2001-02-01 CA CA002399026A patent/CA2399026A1/en not_active Abandoned
- 2001-02-01 JP JP2001557899A patent/JP2003533181A/ja active Pending
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- 2001-02-01 EP EP01902160A patent/EP1257565A4/en not_active Withdrawn
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07206707A (ja) * | 1993-12-24 | 1995-08-08 | Austin Res Inst:The | 抗原炭水化物複合体及びその免疫療法への応用 |
| WO1996003502A2 (en) * | 1994-07-26 | 1996-02-08 | Ramot University Authority For Applied Research And Industrial Development Ltd. | Muc1 derived proteins for the diagnosis, imaging and therapy of human cancer |
| WO1997011963A1 (en) * | 1995-09-27 | 1997-04-03 | The Austin Research Institute | ANTI-GALα(1,3)GAL ANTIBODY BINDING PEPTIDES |
| JP2000506493A (ja) * | 1995-09-27 | 2000-05-30 | ジ オースティン リサーチ インスティテュート | 癌治療における擬似ペプチド |
| WO1998037095A2 (en) * | 1997-02-24 | 1998-08-27 | Therion Biologics Corporation | Recombinant pox virus for immunization against muc1 tumor-associated antigen |
| WO2000006723A1 (en) * | 1998-07-30 | 2000-02-10 | Yeda Research And Development Company Ltd At The Weizmann Institute Of Science | Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines |
| JP2002528519A (ja) * | 1998-10-30 | 2002-09-03 | メナリニ・リチェルケ・エッセ・ピ・ア | 抗腫瘍効果を有する、抗原性タンパク質をコードしているｄｎａを含む医薬組成物 |
| JP2003510094A (ja) * | 1999-09-08 | 2003-03-18 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニム | Ｍｕｃ−１由来のペプチド |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005168437A (ja) * | 2003-12-12 | 2005-06-30 | Takara Bio Inc | 抗体の製造方法 |
| JP4549666B2 (ja) * | 2003-12-12 | 2010-09-22 | タカラバイオ株式会社 | 抗体の製造方法 |
| JP2009518002A (ja) * | 2005-09-20 | 2009-05-07 | ラルフ・フス | 癌および皮膚病変の処置のためのグリコシルホスファチジルイノシトール（ｇｐｉ）アンカーに連結されたメタロプロテイナーゼの組織インヒビター |
| JP2015096513A (ja) * | 2008-10-17 | 2015-05-21 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | 癌の阻害剤としてのｍｕｃ−１細胞質ドメインペプチド |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2001057068A1 (en) | 2001-08-09 |
| EP1257565A4 (en) | 2005-04-06 |
| EP1257565A1 (en) | 2002-11-20 |
| CA2399026A1 (en) | 2001-08-09 |
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|---|---|---|
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| US5989552A (en) | Antigen carbohydrate compounds and their use in immunotherapy | |
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