JP2003519175A - インターロイキン−２の肺送達のための方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体を肺吸入を介して投与するための方法が提供される。この方法は、ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物を、その後の送達のために、水性もしくは非水性の溶液もしくは懸濁物または乾燥粉末形態として調製する工程を包含する。これらの組成物は、この組成物の肺吸入後のこの組成物の吸収を増強するに十分な量の界面活性剤をさらに含み得る。本発明の送達方法において用いられる場合、これらの高度吸収性組成物は、ＩＬ−２の増強された生物学的利用能をもたらす。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、哺乳動物へのタンパク質の送達方法に関する。より詳細には、本発
明は、肺吸入を介したインターロイキン−２タンパク質の送達、および本発明の
方法において有用な組成物に関する。

【０００２】 （発明の背景） 肺吸入は、胃腸上皮を横切る輸送が不十分であることまたは初回通過の肝クリ
アランスが高レベルであることに起因して貧弱な経口的生物学的利用能を有する
ペプチドおよびタンパク質の有望な吸収経路を提供する。ペプチド含有薬物また
はタンパク質含有薬物についてのこの送達経路の潜在的利点としては、約１４０
ｍ^２の吸収表面積に起因する高い程度の吸収および肺を通して流動する高い血液
量（ヒト肺において５０００ｍｌ／分）が挙げられる（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（１
９８５）Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｏｘ
ｉｃｏｌｏｇｙ（Ｓａｕｎｄｅｒｓ，ＰＡ）第１〜２０頁）。胃腸管と比較した
場合のペプチダーゼ／プロテアーゼ活性のいくつかの形態の欠如および吸収され
た化合物の初回通過の肝臓代謝の欠如は、肺吸入を介したタンパク質薬物投与の
潜在的利点を付加する。この送達経路における関心は、多くの潜在的なペプチド
含有薬物またはタンパク質含有薬物が、胃腸管からよりも肺から、より効率的に
吸収されることが理由で近年高まりつつある（ＰａｔｔｏｎおよびＰｌａｔｚ（
１９９２）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．８：１７９−１９６；Ｎｉｖｅ
ｎ（１９９３）Ｐｈａｒｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１７：７２−８２）。

【０００３】 肺吸入を介したペプチド含有薬学的処方物および／またはタンパク質含有処方
物の送達は公知であるが、定量的には少数の例が実証されているにすぎない。例
えば、Ｈｕｂｂａｒｄら（１９８９）Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄ．３（
３）：２０６−２１２（血漿α−１抗トリプシン）；Ｓｍｉｔｈら（１９８９）
Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４．１１４５−１１５４（α−１プロテイナー
ゼインヒビター）を参照のこと。試験動物を用いた実験によって、組換えヒト成
長ホルモンが、エアゾールによって送達された場合に肺から迅速に吸収され、そ
して皮下注射で見られるのと匹敵する早い成長を生じさせることが示された（Ｏ
ｓｗｅｉｎら（１９９０），「Ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ」Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｒｅｓ
ｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ＩＩ（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｃ
ｏｌｏｒａｄｏ，Ｍａｒｃｈ，１９９０）。サイトカインγインターフェロン（
ＩＦＮ−γ）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の組換えバージョンもまた、
肺へのエアゾール投与後の血流中において観察された（Ｄｅｂｓら（１９８８）
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３４８２−３４８８）。哺乳動物への顆粒球−コ
ロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）およびエリトロポイエチン（ＥＰＯ）の肺送達の
可能性もまた実証された。それぞれ、米国特許第５，２８４，６５６号および同
第５，３５４，９３４号を参照のこと。また米国特許第５，９９７，８４８号（
ここでは、哺乳動物宿主へのインスリンの全身送達が、インスリンを含有する乾
燥粉末エアゾールの吸入を介して達成されている）を参照のこと。

【０００４】 肺経路を介したタンパク質送達のこれらの例にも関わらず、特定のポリペプチ
ドが、このような様式で全身作用のために送達され得るか否かは、依然として予
測不可能である。さらに、肺経路を介して送達されたポリペプチドの生物学的利
用能は通常、非常に低い。例えば、内皮細胞によって産生される２１アミノ酸の
血管収縮薬ペプチドであるエンドセリン−１（ＥＴ−１）の肺投与は、静脈内投
与ほど効率的ではない（Ｂｒａｑｕｅｔら（１９８９）Ｊ Ｃａｒｄｉｏ．Ｐｈ
ａｒｍ．１３，補遺５：１４３−１４６）。動物（ヒトを含む）中において静脈
内に与えられた場合に気管支拡張を引き起こす、３，４５０ダルトン（Ｄ）の分
子量を有する低分子ペプチドである血管作用性腸ポリペプチドは、吸入によって
投与された場合に効力を欠損する（Ｂａｒｒｏｗｃｌｉｆｆｅら（１９８６）Ｔ
ｈｏｒａｘ．４１／４２：８８−９３）。

【０００５】 ペプチドまたはタンパク質の深部肺組織への首尾良い送達は、多くの因子に依
存する。肺組織における吸収の程度は、ポリペプチドのサイズおよび構造、なら
びに使用される送達デバイスに応じて、投与される用量の０〜９５％の範囲で変
動する。このような送達デバイスとしては、ネブライザ、計量吸入器（ｍｅｔｅ
ｒｅｄ−ｄｏｓｅ ｉｎｈａｌｅｒ）、および粉末吸入器が挙げられる。これら
の個々の送達デバイスを使用する、肺投与のための水溶液エアゾール、非水性懸
濁エアゾール、または乾燥粉末エアゾールのような、タンパク質含有薬学的組成
物またはペプチド含有薬学的組成物の調製は、ポリペプチドの安定性に影響を及
ぼし得、従って、送達後の生物学的利用能および生物学的活性に影響を及ぼし得
る。Ｗａｌｌ（１９９５）Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ２：１−２０；Ｋｒｉ
ｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ（Ｍａｒｃｈ １９９９）ＢｉｏＰｈａｒｍ．，ｐｐ．３
４−３８）を参照のこと。従って、全身作用を引き起こすための特定の治療的タ
ンパク質の首尾良い肺送達は、動物モデル試験に先立って予測され得ない。１つ
のこのようなモデルが、気管内（ＩＴ）技術である（Ｎｉｖｅｎら（１９９４）
Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：１１４２−１１４９；Ｎｉｖｅｎら（１９９５）Ｐ
ｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：１８８９−１８９５）。このモデルは、治療的タンパ
ク質の肺吸収に関して予測的である（例えば、Ｐａｔｔｏｎら（１９９４）Ｊ．
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ２８：７９−８５を参照のこと）。

【０００６】 インターロイキン−２は通常、静脈内注射または皮下注射を介して投与される
。このタンパク質の肺投与は、これらの投与経路に対して魅力的な非侵襲性の選
択肢を与える。インターロイキン−２の肺吸入が、ＩＬ−２を含む水溶液処方物
を送達するためのネブライザを使用して実証された（米国特許第５，３９９，３
４１号および同第５，７８０，０１２号）。しかし、ネブライザシステムを使用
する、エアゾールとしてのポリペプチドの肺投与は、いくつかのポリペプチドを
変性させることが示された（Ｉｐら（１９９５）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８４
：１２１０−１２−１４（インターフェロン）；Ｎｉｖｅｎら（１９９４）Ｉｎ
ｔ．Ｊ Ｐｈａｒｍ．１０９：１７−２６（組換え顆粒球−コロニー刺激因子）
；およびＮｉｖｅｎら（１９９５）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：５３−５９を参
照のこと）。噴霧化プロセスの間に、ポリペプチドは、生物学的活性の損失を悪
化させ得る剪断ストレスにさらされる。

【０００７】 上記に照らして、高い生物学的利用能でのタンパク質の送達は、依然として難
題を残している。全身応答のためにＩＬ−２を投与するためのさらなる非侵襲性
の方法が必要とされている。

【０００８】 （発明の要旨） 肺吸入を介したインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体の投与方
法を提供する。この方法は、その後の送達のために、ＩＬ−２またはその改変体
を含む薬学的組成物を、水性もしくは非水性の溶液もしくは懸濁物、または乾燥
粉末の形態として調製する工程を包含する。この方法において使用するための組
成物としては、安定化された単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、多
量体ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、および凍結乾燥または噴霧乾燥さ
れた安定化されたＩＬ−２またはその改変体を含む組成物が挙げられる。これら
の各組成物はさらに、組成物の肺吸入後の組成物の吸収を増強するに十分な量の
界面活性剤を含み得る。このような組成物は、高度吸収性組成物（ｈｉｇｈｌｙ
ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）と言及される。

【０００９】 本発明はさらに、肺吸入を介して被験体に投与されたＩＬ−２の生物学的利用
能を増強するための方法を提供する。この方法は、本明細書中に開示された高度
吸収性組成物のエアゾールまたは他の適切な調製物を調製する工程、および肺吸
入を介して、このエアゾールまたは他の適切な調製物を被験体に投与する工程を
包含する。

【００１０】 （発明の詳細な説明） 本発明は、肺吸入を介した、被験体へのインターロイキン（より詳細には、イ
ンターロイキン−２（ＩＬ−２））またはその改変体の投与方法に関する。イン
ターロイキン−２は、正常な末梢血リンパ球によって産生されるリンホカインで
あり、そして身体内において低濃度で存在する。インターロイキン−２は、植物
レクチン、抗原または他の刺激物への曝露後に、抗原またはマイトジェン刺激性
のＴ細胞の増殖を誘導する。ＩＬ−２は、最初に、Ｍｏｒｇａｎら（１９７６）
Ｓｃｉｅｎｃｅ １９３：１００７−１００８によって記載され、そして刺激性
Ｔリンパ球の増殖を誘導するその能力が理由で、元々はＴ細胞増殖因子と呼ばれ
た。これは、１３，０００〜１７，０００の範囲の報告された分子量を有するタ
ンパク質であり（ＧｉｌｌｉｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ １５９：１７０９）、そして６〜８．５の範囲の等電点を有する。現在で
は、その成長因子特性に加えて、これは、インビトロおよびインビボでの種々の
免疫系の機能を調節することが認められている。ＩＬ−２は、細胞の相互作用お
よび機能を媒介する、いくつかのリンパ球によって産生されるメッセンジャー調
節分子の１つである。本明細書中に記載される方法は、ＩＬ−２またはその改変
体の肺吸入を包含する。本発明によって包含されるＩＬ−２タンパク質およびそ
の改変体は、本発明の方法および組成物の開示に続き、以下においてより詳細に
開示される。

【００１１】 本発明の方法は、肺送達のために適切な形態にあるＩＬ−２またはその改変体
を含む薬学的組成物を調製する工程、および肺吸入を介して、この調製物を被験
体に投与する工程を包含する。「肺吸入」とは、口腔を通した被験体の吸入とし
て、送達デバイスから被験体の口腔内へとエアゾールまたは他の適切な調製物で
ある組成物を送達することによって、薬学的組成物を、肺へと直接的に投与する
ことを意図する。「エアゾール」とは、気流または他の生理的に受容可能なガス
流中にある固体または液体の粒子の懸濁物を意図する。他の適切な調製物として
は、そのタンパク質組成物を含む粒子が、以下に規定されるような薬学的組成物
の乾燥粉末形態についての記載と一致するサイズの範囲で送達される限りにおい
て、ミスト、蒸気、または噴霧調製物が挙げられるが、これらに限定されない。
肺吸入はまた、当業者に公知の他の適切な方法によって達成され得る。これらと
しては、適切なデバイスを使用する液体点滴注入法または他のこのような方法が
挙げられ得る。肺吸入は、被験体の肺の肺胞において、吸入されたタンパク質組
成物の沈着を生じさせる。一旦沈着されると、タンパク質は、その後の全身分配
のために血流中へと肺胞上皮および毛細管上皮層を横切って、受動的または能動
的に吸収され得る。

【００１２】 ＩＬ−２のようなポリペプチドまたはタンパク質の肺投与は、吸入の間に、送
達デバイスから被験体の口腔内へと生物学的に活性な物質を投薬することを必要
とする。本発明の目的のために、ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物は、使
用される送達デバイスに応じて、水性もしくは非水性の溶液もしくは懸濁物の形
態、または固体もしくは乾燥粉末形態の薬学的組成物から得られるエアゾールま
たは他の適切な調製物の吸入を介して、投与される。このような送達デバイスは
、当該分野において周知である。このような送達デバイスとしては、水性もしく
は非水性の溶液もしくは懸濁物、または固体もしくは乾燥粉末形態としての薬学
的組成物の投薬を可能にする、ネブライザ、計量吸入器、および乾燥粉末吸入器
、または任意の他の適切な送達機器が挙げられるが、これらに限定されない。「
水性」とは、水（混合物を含む）で調製されるか、水（混合物を含む）を含有す
るか、または水（混合物を含む）に溶解された組成物を意図し、ここで水は、混
合物中における優勢な物質である。優勢な物質は、その混合物中の別の成分より
も多い量で存在する。「非水性」とは、水でも混合物でもない物質で調製される
か、水でも混合物でもない物質を含有するか、または水でも混合物でもない物質
に溶解された組成物を意図し、ここで水は、混合物中における優勢な物質ではな
い。「溶液」とは、２以上の物質（これは、固体、液体、気体、またはそれらの
組み合わせ（ｉｎｔｅｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）であり得る）の均質な調製物
を意図する。「懸濁物」とは、１以上の不溶性物質が、別の優勢な物質中に均質
に分散されているような物質の混合物を意図する。

【００１３】 本発明の目的のために、用語「固体」および「乾燥粉末」は、交換可能に使用
される。「固体」または「乾燥粉末」形態の薬学的組成物は、その組成物が、約
１０重量％未満、通常、約５重量％未満、そして好ましくは、約３重量％未満の
含水量を有する微細に分割された粉末へと乾燥されていることを意図する。この
乾燥粉末形態の組成物は、ＩＬ−２またはその改変体を含む粒子からなる。好ま
しい粒子サイズは、約１０．０μｍ未満の平均直径、より好ましくは、約７．０
μｍ未満、さらにより好ましくは、約６．０μｍ未満、さらにより好ましくは、
０．１〜５．０μｍの範囲、最も好ましくは、約１．０〜約５．０μｍの範囲の
平均直径である。

【００１４】 従って、本発明の方法における使用に意図されるＩＬ−２またはその改変体を
含む液体薬学的組成物は、送達デバイス中の液体溶液または懸濁液として使用さ
れ得るか、あるいは、最初に、当該分野で周知の凍結乾燥技術または噴霧乾燥技
術を使用して乾燥粉末形態に処理され得る。液体溶液または懸濁液を、送達デバ
イスにおいて使用する場合、ネブライザ、計量（ｍｅｔｅｒｅｄ ｄｏｓｅ）吸
入器、または他の適切な送達デバイスは、乾燥粉末形態について上記に示した同
じ粒子サイズ範囲を有する小滴として、被験体の肺へのその組成物の薬学的有効
量の肺吸入によって、単回用量または複数回の部分用量にて送達する。「薬学的
有効量」によって、疾患または状態の処置、予防または診断に有用な量が意図さ
れる。この組成物の液体溶液または懸濁液は、以下に議論するような、生理学的
に適切な安定剤、賦形剤、増量剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、界面活性剤
、またはこれらの組み合わせと共に使用され得る。適切な賦形剤としては、緩衝
剤、粘性改変剤、または他の治療的に不活性であるが機能的な添加剤が挙げられ
るが、これらに限定されない。

【００１５】 液体薬学的組成物が、本発明の送達方法における使用前に凍結乾燥されている
場合、この凍結乾燥組成物を粉砕して、上記の所望のサイズ範囲内の粒子からな
る微細に分離された乾燥粉末を得る。噴霧乾燥を使用して、この液体薬学的組成
物の乾燥粉末形態を得る場合、このプロセスは、上記の所望のサイズ範囲内の粒
子からなる、実質的に無定形の微細に分離された乾燥粉末を生じる条件下で行う
。同様に、この開始の薬学的組成物が、既に凍結乾燥形態である場合、この組成
物を粉砕して、エアゾールまたは肺吸入に適切な他の調製物としてのその後の調
製のための、乾燥粉末形態が得られ得る。この開始の薬学的組成物が、噴霧乾燥
形態にある場合、この組成物は、好ましくは、それが、既に、水性または非水性
の溶液または懸濁液として調剤するのに適切な粒子サイズを有する乾燥粉末形態
にあるか、あるいは本発明の肺投与方法に従う乾燥粉末形態にあるように、調製
されている。薬学的組成物の乾燥粉末形態を調製する方法については、例えば、
ＷＯ９６／３２１４９、ＷＯ９７／４１８３３、ＷＯ９８／２９０９６および米
国特許第５，９７６，５７４号、同第５，９８５，２４８号、および同第６，０
０１，３３６号（これらは、参考として本明細書中に援用される）を参照のこと
。

【００１６】 次いで、この組成物のその得られた乾燥粉末形態は、エアゾールまたは肺吸入
を介して被験体に送達される他の適切な調製物としてのその後の調製のための、
適切な送達デバイス内に配置される。この薬学的組成物の乾燥粉末形態が、水性
または非水性の溶液または懸濁液として調製および調剤される場合、計量吸入器
または他の適切な送達デバイスが使用される。この組成物の乾燥粉末形態の薬学
的有効量は、エアゾールまたは肺吸入に適切な他の調製物で投与される。送達デ
バイス内に配置される組成物の乾燥粉末形態の量は、吸入による被験体へのその
組成物の薬学的有効量の送達を可能にするのに十分である。従って、送達デバイ
スに配置される乾燥粉末形態の量は、その組成物の乾燥粉末形態の貯蔵および送
達中のそのデバイスへの可能性のある損失を補う。送達デバイス内の乾燥粉末形
態の配置後、上記に示したような適切にサイズ化された粒子は、エアゾール噴霧
体中に懸濁される。次いで、この加圧された非水性懸濁液は、吸入中にその送達
デバイスから被験体の気道内へ放出される。この送達デバイスは、単回用量また
は複数回の部分用量で、その被験体の肺へのこの組成物の薬学的有効量の肺吸入
によって送達する。エアゾール噴霧体は、この目的に使用される任意の従来の材
料（例えば、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロ
フルオロカーボンまたは炭化水素（トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフル
オロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジク
ロロテトラフルオロエタン、および１，１，１，２−テトラ−フルオロエタンを
含む）、あるいはそれらの組み合わせ）であり得る。界面活性剤を、この薬学的
組成物に添加して、このエアゾールが調剤される送達デバイスの壁に対するこの
タンパク質含有乾燥粉末の接着を減少し得る。この意図される使用のための適切
な界面活性剤としては、ソルビタントリオレート、ダイズレシチン、およびオレ
イン酸が挙げられるが、これらに限定されない。非水性懸濁液としてのタンパク
質組成物の乾燥粉末形態の肺送達に適切なデバイスは、市販されている。このよ
うなデバイスの例としては、ｔｈｅ Ｖｅｎｔｏｌｉｎ計量吸入器（Ｇｌａｘｏ
Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣ）およびｔ
ｈｅ Ｉｎｔａｌ Ｉｎｈａｌｅｒ（Ｆｉｓｏｎｓ，Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒ
ｄ，ＭＡ）が挙げられる。米国特許第５，５２２，３７８号、同第５，７７５，
３２０号、同第５，９３４，２７２号および同第５，９６０，７９２号（本明細
書中で参考として援用される）に記載されるエアゾール送達デバイスもまた参照
のこと。

【００１７】 薬学的組成物の固体形態または乾燥粉末形態が、乾燥粉末形態として送達され
る場合、好ましくは、乾燥粉末吸入器または他の適切な送達デバイスが使用され
る。この薬学的組成物の乾燥粉末形態は、好ましくは、従来の様式での空気流ま
たは他の生理学的に受容可能なガス流における分散によって、乾燥粉末エアゾー
ルとして調製される。本明細書中の方法に従う使用に適切な市販の乾燥粉末吸入
器の例としては、Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ Ｃｏｒｐ．，
Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）およびｔｈｅ Ｖｅｎｔｏｌｉｎ Ｒｏｔａｈａｌｅｒ
（Ｇｌａｘｏ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，Ｎ
Ｃ）が挙げられる。ＷＯ９３／００９５１、ＷＯ９６／０９０８５、ＷＯ９６／
３２１５２および米国特許第５，４５８，１３５号、同第５，７８５，０４９号
および同第５，９９３，７８３号（本明細書中に参考として援用される）に記載
される乾燥粉末送達デバイスもまた参照のこと。

【００１８】 ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物の乾燥粉末形態は、ネブライザ
、計量吸入器または他の適切な送達デバイスを使用する水溶液エアゾールとして
のその後の送達のために、水溶液に再構成され得る。ネブライザの場合、流体レ
ザバ内に保持されるその水溶液が、水性スプレーに変換され、そのほんの小さい
部分が、任意の所定の時点での被験体への送達ためにネブライザから放出される
。残りのスプレーは、ネブライザ内の流体レザバに引き戻され、これは、再度水
性スプレーにエアゾール化される。このプロセスは、この流体レザバが、完全に
分配されるまでか、またはこのエアゾール化スプレーの投与が終了するまで、繰
り返される。このようなネブライザは、市販されており、これらには、例えば、
ｔｈｅ Ｕｌｔｒａｖｅｎｔネブライザ（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｉｎｃ．
，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）およびｔｈｅ ＡｃｏｒｎＩＩネブライザ（Ｍａｒ
ｑｕｅｓｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ，ＣＯ）
が挙げられる。ＷＯ９３／００９５１に記載のネブライザ、および米国特許第５
，５４４，６４６号（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載のエ
アゾール化水性処方物を送達するためのデバイスもまた参照のこと。

【００１９】 任意のＩＬ−２薬学的組成物が、本発明の方法において使用され得る。このよ
うな薬学的組成物は、当該分野で公知であり、そしてこれらには、米国特許第４
，７４５，１８０号；同第４，７６６，１０６号；同第４，８１６，４４０号；
同第４，８９４，２２６号；同第４，９３１，５４４号；および同第５，０７８
，９９７号（これら全ては、本明細書中に参考として援用される）に開示される
組成物が挙げられるが、これらに限定されない。従って、ＩＬ−２またはその改
変体を含みかつ当該分野で公知である液体組成物、凍結乾燥組成物または噴霧乾
燥組成物は、水性または非水性の溶液または懸濁液として、あるいは肺吸入を介
する被験体へのその後の投与のための乾燥粉末形態として調製され得る。これら
の組成物の各々は、治療的または予防的に活性な成分として、ＩＬ−２またはそ
の改変体を含む。「治療的または予防的に活性な成分」によって、ＩＬ−２また
はその改変体が、その薬学的組成物が被験体に投与された場合にその被験体内の
疾患または状態の処置、予防または診断に関する所望の治療的応答または予防的
応答を引き起こすように、その組成物中に特異的に含まれることが意図される。
好ましくは、これらの薬学的組成物は、適切な安定剤、増量剤またはその両方を
含み、本発明の肺投与方法に含まれる凍結乾燥プロセス、噴霧乾燥プロセスおよ
びエアゾール化プロセスの間の、タンパク質の安定性および生物学的活性の損失
に関連する問題を最小化する。

【００２０】 本発明の好ましい実施形態において、本発明の方法において有用な薬学的組成
物は、安定化された単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む組成物、多量体のＩ
Ｌ−２またはその改変体を含む組成物、安定化された凍結乾燥または噴霧乾燥Ｉ
Ｌ−２またはその改変体を含む組成物、および本明細書中に示されるようなこれ
らの組成物の高度吸収性の形態である。

【００２１】 安定化された単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物は、１９９
９年１０月４日に出願された「Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｌｉｑｕｉｄ Ｐｏｌｙ
ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ
ｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」との表題の、米国特許仮出願番号６０／１５７６９６を
与えられた同時係属仮出願（この開示は、本明細書中に参考として援用される）
に開示される。「単量体」ＩＬ−２によって、このタンパク質分子が、本明細書
中に記載される薬学的組成物中に、凝集形態ではなく、実質的にそれらの単量体
形態で存在することが意図される。それ故、ＩＬ−２の共有結合性または疎水性
のオリゴマーまたは凝集体は存在しない。手短に言うと、これらの液体処方物中
のＩＬ−２またはその改変体は、貯蔵中にＩＬ−２またはその改変体の凝集体処
方物を減少するのに十分な量のアミノ酸塩基と共に処方される。このアミノ酸塩
基は、アミノ酸またはアミノ酸の組み合わせであり、ここで、任意の所定のアミ
ノ酸が、その遊離塩基形態またはその塩形態のいずれかで存在する。好ましいア
ミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群
より選択される。これらの組成物はさらに緩衝剤を含み、ＩＬ−２またはその改
変体の安定性に受容可能な範囲内で、この液体組成物のｐＨを維持し、ここで、
この緩衝剤は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態にある酸、または
酸およびその塩形態の混合物である。好ましくは、この酸は、コハク酸、クエン
酸、リン酸およびグルタミン酸からなる群より選択される。

【００２２】 これらの組成物中のアミノ酸塩基は、この液体薬学的組成物の貯蔵中の凝集体
形成に対して、ＩＬ−２またはその改変体を安定化するように作用し、ここで、
緩衝剤としてのその塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態にある酸、または
酸およびその塩形態の混合物の使用は、ほぼ等張の浸透圧を有する液体組成物を
生じる。この液体薬学的組成物は、他の安定剤（より詳細には、メチオニン）、
非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）およびＥＤＴＡをさらに
含み、このポリペプチドの安定性をさらに増加し得る。その塩形態を実質的に含
まない酸、その塩形態の酸、または酸とその塩形態の混合物と組み合わせたアミ
ノ酸塩基の添加が、これら２つの成分の組み合わせの非存在下で処方された液体
の薬学的組成物と比較して、増加した貯蔵安定性を有する組成物を生じる場合に
、このような液体薬学的組成物は、安定化されていると言われる。

【００２３】 安定化された単量体ＩＬ−２またはその改変体を含むこれらの液体薬学的組成
物は、上記のように、液体形態で使用され得るかまたは本発明の方法における使
用のために固体形態または乾燥粉末形態として調製され得る。

【００２４】 多量体のヒトＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物の例は、共有に係
る米国特許第４，６０４，３７７号（本開示は、参考として本明細書中に援用さ
れる）に開示される。「多量体」によって、これらのタンパク質分子が、１０〜
５０分子の平均分子会合を有する微小凝集形態で、その薬学的組成物中に存在す
ることが意図される。これらの多量体は、緩く結合した、物理的に会合したＩＬ
−２分子として存在する。これらの組成物の凍結乾燥形態は、登録商標Ｐｒｏｌ
ｅｕｋｉｎ（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の下で市販されている。
この文献に開示される凍結乾燥処方物は、選択的に酸化された、微生物産生組換
えヒトＩＬ−２（「ｒｈＩＬ−２」）を含み、ここで、この組換えＩＬ−２は、
水溶性キャリア（例えば、マンニトール）（これは、かさを提供する）および十
分量のドデシル硫酸ナトリウム（水中の組換えＩＬ−２の可溶性を保証するため
）と混合される。これらの組成物は、非経口投与のための水性注射剤における再
構成に適切であり、そしてヒト患者において安定かつ十分許容される。再構成さ
れた場合、これらのＩＬ−２またはその改変体は、その多量体状態を保持する。
多量体ＩＬ−２またはその改変体を含むこのような凍結乾燥組成物または液体組
成物は、本発明の方法に含まれる。

【００２５】 ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物が、エアゾールとしてのその後
の送達のために、固体形態または乾燥粉末形態に処理される場合、増量剤または
安定剤として作用するキャリア材料を存在させることが望ましくあり得る。この
様式において、本発明は、本発明の方法における使用のための、ＩＬ−２または
その改変体を含む、安定化された凍結乾燥または噴霧乾燥薬学的組成物を開示す
る。これらの組成物は、少なくとも１つの増量剤、乾燥化プロセス中にタンパク
質を安定化するに十分な量の少なくとも１つの薬剤、またはその両方をさらに含
み得る。「安定化」によって、ＩＬ−２タンパク質またはその改変体が、この組
成物の固体形態または乾燥粉末形態を得るために、凍結乾燥または噴霧乾燥後に
その単量体形態または多量体形態ならびに質、純度および効力のその他の重要な
特性を保持することが意図される。

【００２６】 増量剤としての使用のための好ましいキャリア材料としては、グリシン、マン
ニトール、アラニン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられ、最
も好ましくは、グリシンである。増量剤は、使用されるその薬剤に依存して、０
％〜約１０％の範囲で処方物中に存在する。増量剤がグリシンである場合、それ
は、約０％〜約４％、好ましくは、約０．２５％〜約３．５％、より好ましくは
、約０．５％〜約３％、さらにより好ましくは、約１．０％〜約２．５％、最も
好ましくは、約２％の範囲内にある。増量剤がマンニトールである場合、それは
、約０％〜約５．０％、好ましくは、約１．０％〜約４．５％、より好ましくは
、約２．０％〜約４．０％、最も好ましくは、約４．０％の範囲内にある。増量
剤がアラニンまたはバリンである場合、それは、約０％〜約５．０％、好ましく
は、約１．０％〜約４．０％、より好ましくは、約１．５％〜約３．０％、最も
好ましくは、約２．０％の範囲内にある。

【００２７】 安定剤としての使用のための好ましいキャリア材料としては、任意の糖または
糖アルコールあるいは任意のアミノ酸が挙げられる。好ましい糖としては、スク
ロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコー
ス、ラクトース、デキストロースまたはそれらの任意の組み合わせが挙げられ、
好ましくは、スクロースである。安定剤が糖である場合、それは、約０％〜約９
．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは、約０．５％〜約５．０％、より好ましくは、約
１．０％〜約３．０％、最も好ましくは、約１．０％の範囲内にある。安定剤が
アミノ酸である場合、それは、約０％〜約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは、約
０．３％〜約０．７％、最も好ましくは、約０．５％の範囲内にある。

【００２８】 これらの安定化された凍結乾燥または噴霧乾燥組成物は、必要に応じて、メチ
オニン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその塩の１つ（例えば、Ｅ
ＤＴＡ二ナトリウム）あるいは他のキレート剤を含み得、これらは、メチオニン
酸化に対してＩＬ−２またはその改変体を保護する。この様式におけるこれらの
薬剤の使用は、同時係属米国特許仮出願番号６０／１５７６９６（本明細書中で
参考として援用される）に記載される。メチオニンは、約０〜約１０．０ｍＭ、
好ましくは、約１．０〜約９．０ｍＭ、より好ましくは、約２．０〜約８．０ｍ
Ｍ、さらにより好ましくは、約３．０〜約７．０ｍＭ、なおより好ましくは、約
４．０〜約６．０ｍＭ、最も好ましくは、約５．０ｍＭの濃度で、この安定化さ
れた凍結乾燥または噴霧乾燥組成物中に存在する。ＥＤＴＡは、約０〜約１０．
０ｍＭ、好ましくは、約０．２ｍＭ〜約８．０ｍＭ、より好ましくは、約０．５
ｍＭ〜約６．０ｍＭ、さらにより好ましくは、約０．７ｍＭ〜約４．０ｍＭ、な
おより好ましくは、約０．８ｍＭ〜約３．０ｍＭ、さらにより好ましくは、約０
．９ｍＭ〜約２．０ｍＭ、最も好ましくは、約１．０ｍＭの濃度で存在する。

【００２９】 安定化された凍結乾燥または噴霧乾燥組成物は、緩衝剤を使用して処方され得
、これは、液体相にある場合（例えば、その組成物の乾燥化形態の処方プロセス
中または再構成後）に受容可能な範囲内にその薬学的組成物のｐＨを維持する。
好ましくは、ｐＨは、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ８．５、より好ましくは、約ｐＨ４
．５〜約ｐＨ７．５、さらにより好ましくは、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．５、な
おより好ましくは、約ｐＨ５．６〜約ｐＨ６．３、そして最も好ましくは、約ｐ
Ｈ５．７〜約ｐＨ６．２の範囲にある。適切なｐＨとしては、約４．０、約４．
５、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６
、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、
約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約
７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、最大約８．５までが含まれ
る。最も好ましくは、ｐＨは、約５．８である。

【００３０】 適切な緩衝剤としては、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、よ
り詳細には、クエン酸ナトリウム／クエン酸が挙げられるが、これらに限定され
ない。代替的には、イミダゾールまたはヒスチジンあるいは約４．０〜約８．５
の範囲にｐＨを維持する他の塩基／酸が、使用され得る。緩衝液は、それらが、
乾燥化プロセスと適合性であり、そしてプロセス中および貯蔵時にタンパク質の
質、純度、効力および安定性に影響しないように、選択される。

【００３１】 本発明の１つの実施形態において、安定化された凍結乾燥または噴霧乾燥薬学
的組成物は、ＩＬ−２またはその改変体、約０％〜約２．０％の範囲のグリシン
、約０％〜約９．０％の範囲のスクロース、約０ｍＭ〜約１０．０ｍＭの濃度の
メチオニン、および約０ｍＭ〜約１０ｍＭのＥＤＴＡを含み、１０．０ｍＭのク
エン酸ナトリウム／クエン酸緩衝液で約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８．０のｐＨに緩衝
化される。好ましい実施形態において、ＩＬ−２またはその改変体を含む安定化
された凍結乾燥または噴霧乾燥組成物は、２．０％のグリシン、１．０％のスク
ロース、５．０ｍＭのメチオニン、１．０ｍＭのＥＤＴＡ、および０％より高く
１．０％までのポリソルベート８０をさらに含み、１０．０ｍＭのクエン酸ナト
リウム／クエン酸緩衝液で約ｐＨ６．０〜約ｐＨ７．０のｐＨに緩衝化される。
これらの組成物中のＩＬ−２またはその改変体の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ
〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約０．８ｍｇ／ｍｌ
、より好ましくは、約０．３ｍｇ／ｍｌ〜約０．６ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは
、約０．３ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌである。

【００３２】 本発明の方法における使用に意図されるＩＬ−２またはその改変体を含む任意
の薬学的組成物は、ＩＬ−２またはその改変体を含む吸入される粒子の吸収を増
強するのに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤と共に処方され、本明細書中
に記載の方法に従う肺吸入における使用のための高度吸収性の組成物が得られ得
る。「高度吸収性」によって、このＩＬ−２またはその改変体および少なくとも
１つの界面活性剤を含む薬学的組成物が、本発明の肺投与方法において使用され
る場合に、その界面活性剤の非存在下でＩＬ−２またはその改変体を含む適合性
の処方物よりも、約１．５倍〜約２０倍、好ましくは、約１．６倍〜約１７倍、
より好ましくは、約１．７倍〜約１５倍、さらに好ましくは、約１．８倍〜約１
３倍、なおより好ましくは、約１．９倍〜約１１倍、最も好ましくは、約２．０
倍〜約１０倍高い生物学的利用能を有することが意図される。この様式で使用さ
れる界面活性剤は、以下に議論するようにその吸入されたＩＬ−２またはその改
変体の増強された生物学的利用能を生じる。

【００３３】 本明細書中に開示される様式でＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物
の吸収を増強する任意の界面活性剤を用いて、これらの高度吸収性タンパク質含
有薬学的組成物が入手され得る。吸入されたＩＬ−２またはその改変体の吸収を
増強する際に使用するために適切な界面活性剤としては、以下が挙げられるがこ
れらに限定されない：ポリオキシエチレンソルビトールエステル（例えば、ポリ
ソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）およびポリソ
ルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０））；ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチ
レンエステル（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ １８８）；ポリオキシエチレンア
ルコール（例えば、Ｂｒｉｊ ３５）；ポリソルベート界面活性剤とリン脂質（
例えば、ホスファチジルコリンおよび誘導体（ジパルミトイル、ジオレオイル、
ジミリスチルまたは混合された誘導体（例えば、１−パルミトイル、２−オレオ
イルなど））、ジミリストルグリセロール（ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｌｇｌｙｃｅｒ
ｏｌ）およびリン脂質グリセロールシリーズの他のメンバー）との混合物；リゾ
ホスファチジルコリンおよびその誘導体；ポリソルベートとリゾレシチンまたは
コレステロールとの混合物；ポリソルベート界面活性剤とソルビタン界面活性剤
（例えば、モノオレイン酸ソルビタン（ｓｏｒｂｉｔａｎ ｍｏｎｏｌｅａｔｅ
）、ジオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタンまたはこのクラスの他
のもの）との混合物；ｐｏｌｏｘａｍｅｒ界面活性剤；胆汁酸塩およびその誘導
体（例えば、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、グリコデオキ
シコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウムなど）；ＩＬ−２と胆汁酸塩
およびリン脂質との混合ミセル；Ｂｒｉｊ界面活性剤（例えば、Ｂｒｉｊ ３５
−ＰＥＧ９２３）ラウリルアルコールなど）。添加されるべき界面活性剤の量は
、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約１．０％（ｗ／ｖ）、好ましくは約０．００５
％〜約０．５％、より好ましくは約０．０１％〜約０．４％、さらにより好まし
くは約０．０３％〜約０．３％、最も好ましくは約０．０５％〜約０．２％の範
囲である。

【００３４】 １つの実施形態では、高度吸収性薬学的組成物は、吸入されたＩＬ−２の吸収
を増強するために十分な量の上記の通りの少なくとも１つの界面活性剤と共に単
量体ＩＬ−２を含む。この組成物は、安定化された単量体ＩＬ−２またはその改
変体を含む高度吸収性薬学的組成物と類似するが、アミノ酸塩基が存在しない。

【００３５】 上記の任意の安定剤または増量剤および界面活性剤は、組成物を固体または乾
燥粉末形態として調製する前に薬学的組成物に添加され得る。この場合、これら
の薬剤は、ＩＬ−２またはその改変体を含む粒子と同時に、そしてこの粒子の一
部として形成される。この様式で調製される場合、ＩＬ−２またはその改変体は
、各々の粒子において、約０．０１％〜約１００％、好ましくは約０．１％〜約
１０％の範囲の重量パーセントで存在する。この粒子の残りは、主に安定剤であ
るが、緩衝剤および上記の通りの他の成分もまた含む。あるいは、薬学的組成物
中に予め存在しないこれらの薬剤のいずれかは、乾燥粉末形態で別々に調製され
得、次いで乾燥粉末形態の薬学的組成物と合わされた後に最終的な乾燥粉末形態
の組成物をエアゾールとして調製し得る。

【００３６】 本発明の方法に従って、ＩＬ−２またはその改変体を含む、水性もしくは非水
性の溶液もしくは懸濁物または固体もしく乾燥粉末形態の組成物は、エアゾール
または肺吸入に適切な他の調製物の形態で被験体に投与される。「被験体」によ
って、任意の動物が意図される。好ましくは、被験体は哺乳動物であり、最も好
ましくは被験体はヒトである。ヒト以外の特に重要な哺乳動物としては、イヌ、
ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジおよびブタが挙げられるがこれらに限定されない。

【００３７】 投与が処置の目的のためである場合、投与は、予防目的または治療目的のいず
れかのためであり得る。予防的に提供される場合、この物質は、何らかの症状の
前に提供される。この物質の予防的投与は、何らかのその後の症状を予防または
減衰させるのに役立つ。治療的に提供される場合、この物質は、症状の発症時に
（またはすぐ後に）提供される。この物質の治療的投与は、何らかの実際の症状
を減衰させるのに役立つ。

【００３８】 本発明はまた、肺吸入によって投与されたＩＬ−２またはその改変体の生物学
的利用能を増強するための方法を提供する。本発明は、本明細書中に記載される
高度吸収性組成物をエアゾールまたは他の適切な調製物として調製する工程、お
よびエアゾールまたは他の適切な調製物を肺吸入を介して被験体に投与する工程
を包含する。「生物学的利用能」によって、静脈内注射（絶対的生物学的利用能
）または皮下注射（相対的生物学的利用能）後の血流中のＩＬ−２またはその改
変体の量と比較した場合の、ＩＬ−２またはその改変体の肺投与後の、ＩＬ−２
またはその改変体の肺組織による血流への吸収尺度が意図される。吸入されたＩ
Ｌ−２またはその改変体の生物学的利用能は、被験体へのその投与の前に、ＩＬ
−２またはその改変体を含む薬学的組成物への界面活性剤の添加によって増強さ
れ得る。

【００３９】 本発明の目的のために、ＩＬ−２を含有する薬学的組成物の生物学的利用能は
、気管内（ＩＴ）技術（Ｎｉｖｅｎら（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：
１１４２−１１４９；Ｎｉｖｅｎら（１９９５）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：１
８８９−１８９５）を用いて決定される。このようにして、ＩＬ−２処方物を含
有する溶液は、気管へと直接（ＩＴ）、静脈へと直接（ＩＶ）または皮下（ＳＣ
）のいずれかで注射器から哺乳動物へと注射される。次いで、血液は、時折収集
され、そしてＩＬ−２の存在について分析される。次いで、生物学的利用能は、
ＩＶ投与に対するＩＴ（またはＳＣ）後の用量正規化曲線下面積（ＡＵＣ）比（
絶対的生物学的利用能）またはＳＣ投与に対するＩＴ後の用量正規化曲線下面積
（ＡＵＣ）比（相対的生物学的利用能）として見積もられる。その詳細は、以下
の実施例に記載される。

【００４０】 本発明の方法において使用するための本明細書中に記載される薬学的組成物中
に存在するＩＬ−２は、ネイティブであり得るか、または組換え技術によって入
手され得、そして哺乳動物供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、
ブタおよびヒトなど）を含めた任意の供給源由来であり得る。好ましくは、この
ようなポリペプチドは、ヒト供給源から誘導され、そしてより好ましくは、微生
物宿主由来の組換えヒトタンパク質である。

【００４１】 本発明の方法において有用な薬学的組成物は、ＩＬ−２の生物学的に活性な改
変体を含み得る。このような改変体は、被験体に投与された場合に、この改変体
ポリペプチドを含有する薬学的組成物が、ネイティブなポリペプチドを含有する
薬学的組成物と同じ治療効果を有するように、ネイティブなポリペプチドの所望
の生物学的活性を保持すべきである。すなわち、この改変体ポリペプチドは、ネ
イティブなポリペプチドについて観察されるのと類似した様式で薬学的組成物に
おいて治療的に活性な成分として役立つ。改変体ポリペプチドが所望の生物学的
活性を保持するか、それゆえ、薬学的組成物において治療的に活性な成分として
役立つか否かを決定するための方法が当該分野で利用可能である。生物学的活性
は、ネイティブなポリペプチドまたはタンパク質の活性を測定するために特異的
に設計されたアッセイ（本発明に記載されるアッセイを含む）を用いて測定され
得る。さらに、生物学的に活性なネイティブなポリペプチドに対して惹起された
抗体は、改変体ポリペプチドに結合する能力について試験され得、ここで、有効
な結合は、ネイティブなポリペプチドのコンホメーションと類似したコンホメー
ションを有するポリペプチドを示す。

【００４２】 ネイティブなまたは天然に存在するＩＬ−２の適切な生物学的に活性な改変体
は、そのポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体であり得る。「フ
ラグメント」によって、インタクトなポリペプチド配列および構造の一部のみか
らなるポリペプチドが意図され、そしてネイティブなポリペプチドのＣ末端欠失
物またはＮ末端欠失物であり得る。「アナログ」によって、ネイティブなポリペ
プチドまたはネイティブなポリペプチドのフラグメントのいずれかのアナログが
意図され、ここで、このアナログは、１以上のアミノ酸の置換、欠失または欠失
を有する、ネイティブなポリペプチド配列および構造を含む。「ムテイン」（例
えば、本明細書中に記載されるムテイン）および１以上のペプトイドを有するペ
プチド（ペプチド模倣物）もまた、用語アナログによって包含される（国際公開
番号ＷＯ ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」によって、ネイティブ
なポリペプチドの所望の生物学的活性が保持される限り、目的のネイティブなポ
リペプチドまたはネイティブなポリペプチドのフラグメントまたはそれらのそれ
ぞれのアナログの任意の適切な改変物（例えば、グリコシル化、リン酸化、（例
えば、ポリエチレングリコールとの）ポリマー結合体化、または外来部分の他の
付加）が意図される。ポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体を作
製するための方法は一般に当該分野で利用可能である。

【００４３】 例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列改変体は、目的のネイティブなポリペプ
チドをコードするクローン化されたＤＮＡ配列における変異によって調製され得
る。変異誘発およびヌクレオチド配列改変のための方法は当該分野で周知である
。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ，編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１
９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４８８−４９
２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３
６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；ならび
にこれらに引用される参考文献を参照のこと（本明細書中に参考として援用され
る）。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換
についてのガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂ
ｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．）（
本明細書中に参考として援用される）のモデルに見出され得る。保存的置換（例
えば、１つのアミノ酸の、類似の性質を有する別のアミノ酸での交換）が好適で
あり得る。保存的置換の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない
：Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ
、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒ。

【００４４】 目的のＩＬ−２ポリペプチドの改変体を構築する際に、改変体が所望の活性を
保有し続けるように改変が行われる。明らかに、改変体ポリペプチドをコードす
るＤＮＡ中で行われた任意の変異は、配列をリーディングフレームから外しては
ならず、そして好ましくは、二次ｍＲＮＡ構造を生じ得る相補領域を生じない。
ＥＰ特許出願公開第７５，４４４号を参照のこと。

【００４５】 ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体は一般に、比較の基礎として役立つ参照ポ
リペプチド分子のアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なく
とも８０％、より好ましくは約９０％〜９５％以上、そして最も好ましくは約９
８％以上のアミノ酸配列同一性を有する。目的のネイティブなポリペプチドの生
物学的に活性な改変体は、１〜１５アミノ酸程度の少ない残基によって、１〜１
０程度のわずかな（例えば、６〜１０）残基によって、５程度のわずかな残基に
よって、４、３、２程度のわずかな残基によって、またはさらには１アミノ酸残
基によって、ネイティブなポリペプチドとは異なり得る。「配列同一性」によっ
て、改変体のアミノ酸配列の指定された連続セグメントを参照分子のアミノ酸配
列に対して整列および比較した場合に、改変体ポリペプチドと、参照として役立
つポリペプチド分子との間に同じアミノ酸残基が見い出されることが意図される
。２つのアミノ酸配列の間の配列同一性％は、両方の配列において同一アミノ酸
残基が生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を得て、一致した位置の数
を、参照分子に対して比較したセグメント中の位置の総数によって除算し、そし
てこの結果に１００を乗算して配列同一性％を得ることによって算出される。

【００４６】 ２つの配列の最適な整列の目的のために、この改変体のアミノ酸配列の連続セ
グメントは、参照分子のアミノ酸配列に対して、さらなるアミノ酸残基を有して
もよく、アミノ酸残基が欠失していてもよい。参照アミノ酸配列に対する比較の
ために用いられる連続セグメントは、少なくとも２０個連続したアミノ酸残基を
含み、そして３０、４０、５０、１００またはより多くの残基であり得る。改変
体のアミノ酸配列にギャップを含むことに関連して増加した配列同一性について
の補正は、ギャップペナルティを割り当てることによって行われ得る。配列整列
方法は、アミノ酸配列およびアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の両方
について周知である。

【００４７】 従って、任意の２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズ
ムを使用して達成され得る。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズム
の１つの好ましい非限定的な例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９９８）
ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズム
は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）において利用され、これは、Ｇ
ＣＧ配列整列ソフトウェアパッケージの一部である。アミノ酸配列を比較する場
合、ＰＡＭ１２０重み残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、
ギャップ長ペナルティ １２、およびギャップペナルティ ４が、ＡＬＩＧＮプ
ログラムと共に使用され得る。２つの配列を比較する際に使用するための、数学
的アルゴリズムの別の好ましい、非限定的な例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓ
ｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：
２２６４のアルゴリズムであり、これは、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ
（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３
−５８７７のように改変された。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ
ら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴプログラ
ムおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は
、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、文字長＝１２を用いて実施されて
、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に相同的なヌクレオチド配
列が得られ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコ
ア＝５００、文字長＝３を用いて実施されて、目的のポリペプチドに相同的なア
ミノ酸配列が得られ得る。比較の目的のためのギャップのある整列を得るために
、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｅｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９に記載されるように利用され得る。
あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔが、分子間の距離的関係を検出する反復検索を実
施するために使用され得る。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）（前出）を参考の
こと。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプロ
グラムを使用する場合、各々のプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬ
ＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る。ｈｔｔｐ：／ｗｗｗ．ｎｃｂ
ｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。また、ＡＬＩＧＮプログラム（Ｄａ
ｙｈｏｆｆ（１９７８）、Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：補遺３（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅ
ｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
，Ｄ．Ｃ．））およびＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅ
ｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから入手可能）のプログ
ラム（例えば、ＧＡＰプログラム）（ここで、プログラムのデフォルトパラメー
タが利用される）もまた参照のこと。

【００４８】 アミノ酸配列同一性の割合を考慮する場合、いくつかのアミノ酸残基位置が、
タンパク質機能の特性に影響しない保存的アミノ酸置換の結果として異なり得る
。これらの例において、配列同一性パーセントは、保存的に置換されたアミノ酸
における類似性を計上するために上方調節される。このような調節は、当該分野
で周知である。例えば、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９８８）Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ａｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４：１１−１７を参照のこと。

【００４９】 ポリペプチドの正確な化学構造は、多くの因子に依存する。イオン化可能なア
ミノ基およびカルボキシル基が分子中に存在するために、特定のポリペプチドは
、酸性塩または塩基性塩、あるいは中性の形態として得られ得る。適切な環境条
件に配置された場合にそれらの生物学的活性を保持する全てのこのような調製物
は、本明細書で使用されるようなポリペプチドの定義に含まれる。さらに、この
ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を使用する誘導体化（グリコシル化
）によって、または脂質、ホスフェート、アセチル基などのような他の補足的な
分子によって増強され得る。この配列はまた、糖類との結合によって、増強され
得る。このような増強の特定の局面は、産生宿主の翻訳後プロセシング系を介し
て達成される；他のこのような改変は、インビトロで導入され得る。いずれにし
ても、このような改変は、ポリペプチドの活性が破壊されない限り、本明細書中
で使用されるポリペプチドの定義に含まれる。このような改変は、種々のアッセ
イにおいて、このポリペプチドの活性を増加させるかまたは減少されるかのいず
れかによって、その活性に定量的にかまたは定性的に影響し得ることが予期され
る。さらに、鎖中の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導体化に
よって改変され得、そしてそのポリペプチドは、活性を保持するフラグメントを
得るために切断され得る。活性を破壊しないこのような変更は、本明細書中で使
用されるような目的のポリペプチドの定義からこのポリペプチド配列を排除しな
い。

【００５０】 先行技術は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的なガイダン
スを提供する。ＩＬ−２改変体の調製において、当業者は、ネイティブなタンパ
ク質のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対するどの改変が、本発明の方法
において使用される薬学的組成物の治療上活性な成分としての使用に適する改変
体を生じるかを容易に決定し得る。

【００５１】 本発明の方法および組成物における使用のためのＩＬ−２もしくはその改変体
は、任意の供給源に由来し得るが、好ましくは組換えＩＬ−２である。「組換え
ＩＬ−２」は、ネイティブ配列ＩＬ−２に匹敵する生物学的活性を有するインタ
ーロイキン−２を意図し、そしてこれは、例えば、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（１９
８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０２：３０５−３１０およびＤｅｖｏｓ（１９８３）Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１：４３０７−４３２３に記
述されるような組換えＤＮＡ技術によって調製されているか、またはＷａｎｇら
（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：１４３１−１４３３によって記載される
ように、変異的に変化されたＩＬ−２である。一般に、ＩＬ−２をコードする遺
伝子がクローニングされ、次いで、本明細書中に記載されるように、形質転換さ
れた生物、好ましくは形質転換された微生物、および最も好ましくは形質転換さ
れたＥ．Ｃｏｌｉにおいて発現される。宿主生物は、発現条件下でＩＬ−２を生
成するための外来遺伝子を発現する。合成組換えＩＬ−２はまた、真核生物（例
えば、酵母細胞またはヒト細胞など）において作製され得る。細胞からＩＬ−２
を増殖、収集、破壊または抽出するためのプロセスは、例えば、米国特許第４，
６０４，３７７号；同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同
第４，５６９，７９０号；同第４，７４８，２３４号同第；４，５３０，７８７
号；同第４，５７２，２９８号；同第４，７４８，２３４号；および同第４，９
３１，５４３号（これらは、本明細書中で、その全体が参考として援用される）
に実質的に記載される。

【００５２】 改変体ＩＬ−２タンパク質の例として、欧州特許出願第１３６，４８９号；欧
州特許出願第８３１０１０３５．０（１９８３年２月３日出願）（公開番号第９
１５３９号のもとで１９８３年１０月１９日公開）；欧州特許出願第８２３０７
０３６．２号（１９８２年１２月２２日出願）（第８８１９５号のもとで１９８
３年９月１４日公開）；欧州特許出願第８３３０６２２１．９号（１９８３年１
０月１３日出願）（第１０９７４８号のもとで１９８４年５月３０日公開）（ベ
ルギー特許第８９３，０１６号、共有に係る米国特許第４，５１８，５８４号の
等価物）に記載される組換えＩＬ−２ムテイン；米国特許第４，７５２，５８５
号およびＷＯ ９９／６０１２８号に記載のムテイン；ならびに本明細書中の実
施例にて使用されそして米国特許第４，９３１，５４３号に記載されるＩＬ−２
ムテイン（これらすべてが、本明細書において参考として援用される）を参照の
こと。さらに、ＩＬ−２は、増加した可溶性および変化した薬物速度論プロフィ
ールを提供するように、ポリエチレングリコールを用いて改変され得る（本明細
書中にその全体が参考として援用される、米国特許第４，７６６，１０６号を参
照のこと）。

【００５３】 以下の実施例は、例示の目的で提供され、制限する目的で提供するものではな
い。

【００５４】 （実験） ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖を刺激する強力なマイトジェンである。これは、癌転
移の処置として、癌治療のためのアジュバントとして、そして感染性疾患の結合
（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｅ）薬剤としての、広範な治療適用を有する。ＩＬ−２
治療を使用する種々の臨床試験の進行に伴い、代替的な非侵襲投与経路が所望さ
れることが、理解されている。

【００５５】 組換えヒトＩＬ−２（「ｒｈＩＬ−２」）を含むいくつかの薬学的処方物が、
肺投与におけるその潜在的有効性について評価されている。試験された処方物は
、転移性腎細胞癌または転移性黒色腫を有する患者を処置するためにＣｈｉｒｏ
ｎ Ｃｏｒｐ．により現在市販されている凍結乾燥ｒｈＩＬ−２である、Ｐｒｏ
ｌｅｕｋｉｎを含んだ。これはまた、ＨＩＶ感染を有する患者を処置するための
フェーズＩＩＩ試験中である。これは、注射用水（ＷＦＩ）で再構成した後、０
．０５〜２．０ｍｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−２、３〜７％のマンニトール、５．０〜
２０．０ｍＭリン酸ナトリウム、約１３０〜２３０μｇ ＳＤＳ／ｍｌ ｒｈＩ
Ｌ−２（ｐＨ５．５〜８．０）を含む。この処方物中のＩＬ−２は、平均分子会
合が１０〜５０分子である、微小凝集形態で存在する。この凝集は、肺吸収に影
響し得る。

【００５６】 共有に係る米国仮特許出願第６０／１５７６９６号に開示されるような新規に
開発された、安定化された液体ＩＬ−２処方物もまた、試験された。この液体Ｉ
Ｌ−１処方物は、これらの研究において単量体ｒｈＩＬ−２として示された。Ｐ
ｒｏｌｅｕｋｉｎ処方物とは対照的に、この液体処方物中のｒｈＩＬ−２分子は
、安定化された単量体形態で存在する。この処方物は、０．０３〜３．０ｍｇ／
ｍｌ ｒｈＩＬ−２、１５０〜３００ｍＭ Ｌ−アルギニンベース、５０〜１５
０ｍＭコハク酸、０．５〜５．０ｍＭ ＥＤＴＡ二ナトリウム、１．０〜１０．
０ｍＭメチオニンおよび０．０５〜０．２％ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８
０）（ｐＨ５．０〜８．０）を含む。この安定化された単量体ＩＬ−２処方物は
、多量体Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ処方物よりも肺深部表面を通してよく吸収され得る
と、仮定された。さらに、この処方物中で使用されるアミノ酸およびポリソルベ
ート８０は、肺組織を超えるＩＬ−２吸収の増強のような、肺送達に対する他の
利点をもたらし得る。

【００５７】 これらのＩＬ−２処方物は、気管内ラットモデルを使用する皮下注射と比較し
て、その相対的肺生物学的利用能について評価された。Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗ
ｌｅｙラットに、この２つのＩＬ−２処方物を、気管内点滴注入（ＩＴ）または
皮下（ＳＣ）注射のいずれかを介し得投与した。各ＩＴ投与について、この動物
をまず、イソフルランまたはＣＯ_２／Ｏ_２混合物を使用して麻酔し、胸骨を下に
した位置（ｓｔｅｒｎａｌ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）にかまたは直立に保持した。Ｉ
Ｔ投与したＩＬ−２用量すべては、１ｍｌ滅菌ディスポーザルシリンジを使用し
て、カテーテルまたはボールチップ（ｂａｌｌ−ｔｉｐｐｅｄ）針のいずれかを
用いて点滴注入した。ＩＴ投与後、この動物を約２０秒間直立させて、この投与
溶液が肺に落ち着くようにした。これらのラットの血液サンプルを、所定の時間
間隔で収集し、そしてヘパリン処理した。この血液サンプルからの血漿を分離し
、そしてＩＬ−２濃度について免疫アッセイによって分析した。

【００５８】 ラットにおける気管内送達、皮下送達、または静脈内送達後の、Ｐｒｏｌｅｕ
ｋｉｎ処方物および単量体ＩＬ−２処方物の全身生物学的利用能を評価するため
に、４つの研究を行った。単量体処方物は、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ
８０）および／またはアルギニンがその組成物中で提示されるか否かに従って変
化した。この研究からの血漿ＩＬ−２濃度プロフィールを図１〜４に支援す。薬
物速度論パラメーターを、表１〜４においてそれぞれ研究によりまとめる。全身
吸収された用量の画分を、ＳＣ投与に対するＩＴ投与後の用量正規化ＡＵＣ比（
相対的生物学的利用能）またはＩＶ投与に対するＳＣ（もしくはＩＴ）投与後の
用量正規化ＡＵＣ比（絶対的生物学的利用能）として各処方物について計算した
。単量体処方物のうちのいくつかについて対応するＳＣ投与がない研究について
、その相対的生物学的利用能を、これらの単量体処方物のＳＣ ＡＵＣが同様で
あるという以前の実験にもとづく同様の単量体処方物によって、ＳＣ送達のＡＵ
Ｃを使用して計算した。

【００５９】 （表１：８匹のラット（４匹／性）におけるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ処方物のＩＴ
投与もしくはＳＣ投与後のＰＫパラメーター^ａ）

【００６０】

【表１】 ^ａこの表において使用した印：ＩＴは気管内投与を示し、ＳＣは皮下投与を示し
、ＢＷは体重を示し、Ｃｍａｘは検出された最大血漿ＩＬ−２濃度を示し、Ｔｍ
ａｘはＣｍａｘについての時間であり、ｔ_１／２はクリアランスのための半減時
間であり、ＡＵＣは、ＩＬ−２血漿対時間曲線下面積であり、そしてＲ．Ｂ．は
相対的生物学的利用能であり、これはＩＴについてのＡＵＣを、用量正規化後の
ＳＣについてのＡＵＣにより除算し、その後得られた数に１００を乗算すること
により、パーセンテージベースで計算した。

【００６１】 （表２：８匹のラット（４匹／性）における安定化された単量体ｒｈＩＬ−２
処方物（ポリソルベート８０を含む）のＩＴ投与またはＳＣ投与後のＰＫパラメ
ーター^ａ）

【００６２】

【表２】 ^ａこの表において使用した印：ＩＴは気管内投与を示し、ＳＣは皮下投与を示し
、ＢＷは体重を示し、Ｃｍａｘは検出された最大血漿ＩＬ−２濃度を示し、Ｔｍ
ａｘはＣｍａｘについての時間であり、ｔ_１／２はクリアランスのための半減時
間であり、ＡＵＣは、ＩＬ−２血漿対時間曲線下面積であり、そしてＲ．Ｂ．は
相対的生物学的利用能であり、これはＩＴについてのＡＵＣを、用量正規化後の
ＳＣについてのＡＵＣにより除算し、その後得られた数に１００を乗算すること
により、パーセンテージベースで計算した。

【００６３】 （表３：８匹のラット（４匹／性）における安定化された単量体ｒｈＩＬ−２
処方物（ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）を含むかまたは含まない）の
ＩＴ投与、ＳＣ投与、またはＩＶ投与後のＰＫパラメーター^ａ）

【００６４】

【表３】 ^ａこの表において使用した印：ＩＴは気管内投与を示し、ＳＣは皮下投与を示し
、ＢＷは体重を示し、Ｃｍａｘは検出された最大血漿ＩＬ−２濃度を示し、Ｔｍ
ａｘはＣｍａｘについての時間であり、ｔ_１／２はクリアランスのための半減時
間であり、ＡＵＣは、ＩＬ−２血漿対時間曲線下面積であり、そしてＲ．Ｂ．は
相対的生物学的利用能であり、これはＩＴについてのＡＵＣを、用量正規化後の
ＳＣについてのＡＵＣにより除算し、そしてＡ．Ｂ．は、絶対的生物学的利用能
であり、これは、ＳＣについてのＡＵＣを、ＩＶについてのＡＵＣにより除算し
、その後得られた数に１００を乗算することにより計算した。^ｂ ポリソルベート８０を含む単量体処方物の相対的生物学的利用能は、ポリソル
ベート８０を含まない単量体処方物のＳＣについてのＡＵＣを使用する。

【００６５】 （表４：４匹の雄性ラットにおける単量体ｒｈＩＬ−２処方物（ポリソルベー
ト８０およびアルギニンを含む）、ポリソルベート８０を含まない単量体処方物
、およびアルギニンを含まない単量体処方物のＩＴ投与、ＳＣ投与、またはＩＶ
投与後のＰＫパラメーター^ａ）

【００６６】

【表４】 ^ａこの表において使用した印：ＩＴは気管内投与を示し、ＳＣは皮下投与を示し
、ＢＷは体重を示し、Ｃｍａｘは検出された最大血漿ＩＬ−２濃度であり、Ｔｍ
ａｘはＣｍａｘについての時間であり、ｔ_１／２はクリアランスのための半減時
間であり、ＡＵＣは、ＩＬ−２血漿対時間曲線下面積であり、そしてＲ．Ｂ．は
相対的生物学的利用能であり、これはＩＴについてのＡＵＣを、用量正規化後の
ＳＣについてのＡＵＣにより除算し、そしてＡ．Ｂ．は、絶対的生物学的利用能
であり、これは、ＳＣについてのＡＵＣを、ＩＶについてのＡＵＣにより除算し
、その後得られた数に１００を乗算することにより計算した。^ｂ 処方物は、０．１％ポリソルベート８０および２３０ｍＭアルギニンを含んだ
。^ｃ 処方物は、２３０ｍＭアルギニンを含んだ。^ｄ ポリソルベート８０を含まずかつアルギニンを含まない、単量体処方物の相対
的生物学的利用能計算は、その単量体処方物のＳＣについてのＡＵＣを使用する
。^ｅ 処方物は、０．１％ポリソルベート８０を含んだ。

【００６７】 これらの投与経路を介する全身吸収に関する上記のデータは、以下のようにま
とめ得る。ＳＣ投与と比較したＩＴ投与後のＰｒｏｌｅｕｋｉｎの相対的生物学
的利用能は、１４％であった（表１）。ポリソルベート８０を含む単量体ＩＬ−
２は、ＩＴ送達後にＰｒｏｌｅｕｋｉｎよりも有意に良好に吸収された。ＩＶに
対するＳＣの絶対的生物学的利用能は１５％であった（表４）が、ＳＣに対する
ＩＴの相対的ＩＴの相対的生物学的利用能は、平均１４０％であった（表２、３
、４）。このことは、ＩＴ投与が、ＳＣ投与と等しく良好にかそれよりも良好に
吸収されたことを示す。ポリソルベート８０を含むがアルギニンを含まない単量
体ＩＬ−２は、ポリソルベート８０およびアルギニンの両方を含む単量体ＩＬ−
２とほぼ同じ程度良好に吸収された（表４）。ポリソルベート８０を含まない単
量体ＩＬ−２は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎよりも良好に吸収されたが、ポリソルベー
ト８０を含む単量体ＩＬ−２と同じ程度良好には吸収されなかった。その絶対的
生物学的利用能は、１０％であり（表３）そしてその相対的生物学的利用能は５
２％であった（表３および４）。

【００６８】 第５の研究を行って、気管内（ＩＴ）投与されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎおよび単
量体ｒｈＩＬ−２の生物学的利用能に対する、より低濃度のポリソルベート８０
（Ｔｗｅｅｎ ８０）および他の界面活性剤（０．１％ Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ
１８８（ＢＡＳＦによりＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８の商標名で販売）およびＰＥ
Ｇ ４６００（平均分子量４６００を有するポリエチレングリコールを、Ａｌｄ
ｒｉｃｈから購入した））の効果をさらに調査した。

【００６９】 この第５の研究において、以前の研究においてと同様に、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ
−Ｄａｗｌｅｙラットを、複数の処置群（４匹のラット／群）に分割した。各ラ
ットに、ｒｈＩＬ−２ ４００μｇの単回投与を与えた。ＩＴ投与を、他の４つ
の研究について上記したのと同じ手順を使用して投与した。すべてのラットの血
液サンプルを、所定の時間間隔で収集し、そしてヘパリン処理した。この血液サ
ンプルからの血漿を分離し、そしてＩＬ−２濃度についての免疫アッセイによっ
て分析した。

【００７０】 単量体処方物は、試験した単量体処方物すべてに存在する２３０ｍＭアルギニ
ンとともに使用した界面活性剤の型もしくは量に従って変化した。Ｐｒｏｌｅｕ
ｋｉｎ処方物は、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）が存在しないかまた
は０．１％で存在するかに関して、異なった。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ処方物ととも
には、いかなるアルギニンも用いなかった。

【００７１】 これらの研究からの血漿ＩＬ−２濃度を図５に示す。各処方物についてのＩＴ
投与についての血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）を表５に示す。Ｐｒｏｌｅ
ｕｋｉｎ処方物および単量体処方物の相対的生物学的利用能を、参照として０．
１％ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）処方物を含む単量体についてのＡ
ＵＣと比較した、特定の処方物についてのＡＵＣを使用して、パーセンテージベ
ースで算出した。

【００７２】 （表５：４００μｇ ｒｈＩＬ−２／動物での、処方物間の気管内生物学的利
用能の比較）

【００７３】

【表５】 *相対的生物学的利用能を算出するための参照処方物。

【００７４】 上記のデータは、ポリソルベート８０の存在が、ＩＴ投与されたＰｒｏｌｅｕ
ｋｉｎの全身吸収において役割を果たし得ることを示す。このデータはまた、生
物学的利用能が、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ １８８、ＰＥＧ ４６００、０．１％ポ
リソルベート８０および０．００１％ポリソルベート８０を用いて処方された単
量体ｒｈＩＬ−２について類似することを示す。０．１％ポリソルベート８０お
よびアルギニンを含む単量体処方物の生物学的利用能は、０．１％ポリソルベー
ト８０を含むＰｒｏｌｅｕｋｉｎ処方物と比較して高かった。

【００７５】 本明細書中に言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する分野
の当業者のレベルの指標である。全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行
物または特許出願が詳細にそして個々に参考として援用されることが示された場
合と同じ程度で本明細書中に参考として援用される。

【００７６】 上記の本発明は、理解の明確化の目的で例示および実施例によっていくらか詳
細に記載してきたが、特定の変化および改変が添付の特許請求の範囲の範囲内で
実行され得ることは、明らかである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ラットにおける気管内（ＩＴ）（７５０μｇ ｒｈＩＬ−２／動物）
および皮下（ＳＣ）（１５０μｇ ｒｈＩＬ−２／動物）投与後のＰｒｏｌｅｕ
ｋｉｎの平均血漿濃度プロフィールを示す。

【図２】 図２は、ラットにおける気管内（ＩＴ）（３７５μｇ／動物）および皮下（Ｓ
Ｃ）（７５μｇ／動物）投与後のポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）を有
する単量体ｒｈＩＬ−２の平均血漿濃度プロフィールを示す。

【図３】 図３は、ラットにおける、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）を有する
かまたは有さない単量体ｒｈＩＬ−２の気管内（ＩＴ）（３７５μｇ／動物）、
皮下（ＳＣ）（１５０μｇ／動物）または静脈内（ＩＶ）（１５０μｇ／動物）
投与後の血漿ＩＬ−２濃度を示す。

【図４】 図４は、ラットにおける、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）またはア
ルギニンを有するかまたは有さない単量体ｒｈＩＬ−２の気管内（ＩＴ）（４０
０μｇ／動物）、皮下（ＳＣ）または静脈内（ＩＶ）（０．５ｍｇ／ｋｇ）投与
後の血漿ＩＬ−２濃度を示す。

【図５】 図５は、種々の界面活性剤（種々のレベルのＰｏｌｏｘａｍｅｒ １８８，Ｐ
ＥＧ ４６００，およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０））を有する単
量体ｒｈＩＬ−２およびＰｒｏｌｅｕｋｉｎの気管内（ＩＴ）（４００μｇ／動
物）投与後の血漿ＩＬ−２濃度を示す。すべての単量体ｒｈＩＬ−２処方物がア
ルギニンを含むが、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ処方物はアルギニンを含まない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/26 Ａ６１Ｋ 47/34 47/34 Ａ６１Ｐ 31/00 Ａ６１Ｐ 31/00 35/00 35/00 43/00 １０５ 43/00 １０５ １１１ １１１ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA11 AA22 AA29 BB01 BB27 CC27 CC29 CC31 EE23A FF16 FF32 4C084 AA02 AA03 BA03 BA44 CA62 DA14 MA01 MA13 MA17 MA23 MA43 MA52 MA56 MA57 NA11 ZB212 ZB262 ZB352 ZC022

Claims (50)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＩＬ−２を投与する必要のある被験体にＩＬ−２を投与する
   ための方法であって、該方法は、以下： ａ）安定化された単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物を得る
   工程； ｂ）該組成物を水性もしくは非水性の溶液、水性もしくは非水性の懸濁物また
   は乾燥粉末形態として調製する工程；および ｃ）該溶液、懸濁物または乾燥粉末形態の該組成物を、肺吸入によって該被験
   体に対して送達する工程 を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記組成物が、その液体形態にある、請求項１に記載の方法
   。
3. 【請求項３】 前記組成物がその乾燥形態にあり、ここで該乾燥形態が、凍
   結乾燥形態および噴霧乾燥形態からなる群より選択される、請求項１に記載の方
   法。
4. 【請求項４】 前記溶液または懸濁物が、ネブライザまたは計量吸入器から
   送達される、請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記乾燥粉末形態が、計量吸入器または乾燥粉末吸入器から
   送達される、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記乾燥粉末形態が、１０μｍ未満の平均直径を有する粒子
   からなる、請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記粒子が、１μｍ〜５μｍの範囲の平均直径を有する、請
   求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記組成物が、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増強
   するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤をさらに含む高度吸収性組成物で
   ある、請求項１に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記界面活性剤が、ポリソルベート２０およびポリソルベー
   ト８０からなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項９
    に記載の方法。
11. 【請求項１１】 ＩＬ−２を投与する必要のある被験体にＩＬ−２を投与す
    るための方法であって、該方法は、以下： ａ）単量体ＩＬ−２またはその改変体を含む高度吸収性薬学的組成物を得る工
    程であって、ここで、該組成物が、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増強
    するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤を含む、工程； ｂ）該組成物を水性もしくは非水性の溶液、水性もしくは非水性の懸濁物また
    は乾燥粉末形態として調製する工程；および ｃ）該溶液、懸濁物または乾燥粉末形態の該組成物を、肺吸入によって該被験
    体に対して送達する工程 を包含する、方法。
12. 【請求項１２】 前記組成物が、その液体形態にある、請求項１１に記載の
    方法。
13. 【請求項１３】 前記組成物がその乾燥形態にあり、ここで該乾燥形態が、
    凍結乾燥形態および噴霧乾燥形態からなる群より選択される、請求項１１に記載
    の方法。
14. 【請求項１４】 前記溶液または懸濁物が、ネブライザまたは計量吸入器か
    ら送達される、請求項１１に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記乾燥粉末形態が、計量吸入器または乾燥粉末吸入器か
    ら送達される、請求項１１に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記乾燥粉末形態が、１０μｍ未満の平均直径を有する粒
    子からなる、請求項１５に記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記粒子が、１μｍ〜５μｍの範囲の平均直径を有する、
    請求項１６に記載の方法。
18. 【請求項１８】 前記界面活性剤が、ポリソルベート２０およびポリソルベ
    ート８０からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
19. 【請求項１９】 前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項１
    ８に記載の方法。
20. 【請求項２０】 ＩＬ−２を投与する必要のある被験体にＩＬ−２を投与す
    るための方法であって、該方法は、以下： ａ）多量体ＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物を得る工程； ｂ）該組成物を水性もしくは非水性の溶液、水性もしくは非水性の懸濁物また
    は乾燥粉末形態として調製する工程；および ｃ）該溶液、懸濁物または乾燥粉末形態の該組成物を、肺吸入によって該被験
    体に対して送達する工程 を包含する、方法。
21. 【請求項２１】 前記組成物が、その液体形態にある、請求項２０に記載の
    方法。
22. 【請求項２２】 前記組成物がその乾燥形態にあり、ここで該乾燥形態が、
    凍結乾燥形態および噴霧乾燥形態からなる群より選択される、請求項２０に記載
    の方法。
23. 【請求項２３】 前記溶液または懸濁物が、計量吸入器から送達される、請
    求項２０に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記乾燥粉末形態が、計量吸入器または乾燥粉末吸入器か
    ら送達される、請求項２０に記載の方法。
25. 【請求項２５】 前記乾燥粉末形態が、１０μｍ未満の平均直径を有する粒
    子からなる、請求項２４に記載の方法。
26. 【請求項２６】 前記粒子が、１μｍ〜５μｍの範囲の平均直径を有する、
    請求項２５に記載の方法。
27. 【請求項２７】 前記組成物が、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増
    強するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤をさらに含む高度吸収性組成物
    である、請求項２０に記載の方法。
28. 【請求項２８】 前記界面活性剤が、ポリソルベート２０およびポリソルベ
    ート８０からなる群より選択される、請求項２７に記載の方法。
29. 【請求項２９】 前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項２
    ８に記載の方法。
30. 【請求項３０】 ＩＬ−２を投与する必要のある被験体にＩＬ−２を投与す
    るための方法であって、該方法は、以下： ａ）凍結乾燥または噴霧乾燥された安定化されたＩＬ−２またはその改変体を
    含む薬学的組成物を得る工程； ｂ）該組成物を水性もしくは非水性の溶液、水性もしくは非水性の懸濁物また
    は乾燥粉末形態として調製する工程；および ｃ）該溶液、懸濁物または乾燥粉末形態の該組成物を、肺吸入によって該被験
    体に対して送達する工程 を包含する、方法。
31. 【請求項３１】 前記溶液または懸濁物が、ネブライザまたは計量吸入器か
    ら送達される、請求項３０に記載の方法。
32. 【請求項３２】 前記乾燥粉末形態が、計量吸入器または乾燥粉末吸入器か
    ら送達される、請求項３０に記載の方法。
33. 【請求項３３】 前記乾燥粉末形態が、１０μｍ未満の平均直径を有する粒
    子からなる、請求項３２に記載の方法。
34. 【請求項３４】 前記粒子が、１μｍ〜５μｍの範囲の平均直径を有する、
    請求項３３に記載の方法。
35. 【請求項３５】 前記組成物が、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増
    強するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤をさらに含む高度吸収性組成物
    である、請求項３０に記載の方法。
36. 【請求項３６】 前記界面活性剤が、ポリソルベート２０およびポリソルベ
    ート８０からなる群より選択される、請求項３５に記載の方法。
37. 【請求項３７】 前記界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項３
    ６に記載の方法。
38. 【請求項３８】 肺吸入を介して被験体に投与されたＩＬ−２の生物学的利
    用能を増強するための方法であって、該方法は、安定化された単量体ＩＬ−２ま
    たはその改変体を含む薬学的組成物を、肺吸入を介して該被験体に投与する工程
    を包含する、方法。
39. 【請求項３９】 前記組成物が、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増
    強するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤をさらに含む、請求項３８に記
    載の方法。
40. 【請求項４０】 肺吸入を介して被験体に投与されたＩＬ−２の生物学的利
    用能を増強するための方法であって、該方法は、単量体ＩＬ−２またはその改変
    体を含む高度吸収性薬学的組成物を、肺吸入を介して該被験体に投与する工程を
    包含し、ここで該組成物は、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増強するに
    十分な量の少なくとも１つの界面活性剤を含む、方法。
41. 【請求項４１】 肺吸入を介して被験体に投与されたＩＬ−２の生物学的利
    用能を増強するための方法であって、該方法は、多量体ＩＬ−２またはその改変
    体を含む薬学的組成物を、肺吸入を介して該被験体に投与する工程を包含し、こ
    こで該組成物は、該組成物の肺吸入後の該組成物の吸収を増強するに十分な量の
    少なくとも１つの界面活性剤を含む、方法。
42. 【請求項４２】 肺吸入を介して被験体に投与されたＩＬ−２の生物学的利
    用能を増強するための方法であって、該方法は、凍結乾燥または噴霧乾燥された
    安定化されたＩＬ−２またはその改変体を含む薬学的組成物を、肺吸入を介して
    該被験体に投与する工程を包含し、ここで該組成物は、該組成物の肺吸入後の該
    組成物の吸収を増強するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤を含む、方法
    。
43. 【請求項４３】 凍結乾燥または噴霧乾燥された安定化された薬学的組成物
    であって、以下： 治療的に活性な成分としてのインターロイキン−２（ＩＬ−２）； 約０％〜約５％で存在する少なくとも１つの増量剤； スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトールから
    なる群より選択される少なくとも１つの糖、またはアルギニンおよびリジンから
    なる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸であって、ここで該糖は約０％
    〜約９％で存在し、そして該アミノ酸は、約０％〜約１％で存在する、糖または
    アミノ酸；ならびに 該組成物を液体として再構成したときに、該組成物を約ｐＨ４．０〜約ｐＨ８
    ．５のｐＨに維持するための緩衝剤 を含む、組成物。
44. 【請求項４４】 治療剤としてインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはそ
    の改変体を含む薬学的組成物であって、ここで該組成物が、該組成物の肺吸入後
    の該組成物の吸収を増強するに十分な量の少なくとも１つの界面活性剤を含む、
    組成物。
45. 【請求項４５】 前記界面活性剤が、ポリソルベート２０およびポリソルベ
    ート８０からなる群より選択される、請求項４４に記載の組成物。
46. 【請求項４６】 インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体を投
    与する必要のある被験体にインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはその改変体
    を投与するための方法であって、該方法は、請求項４４に記載の組成物を肺吸入
    を介して投与する工程を包含する、方法。
47. 【請求項４７】 前記組成物が、ネブライザまたは計量吸入器から投与され
    る、請求項４６に記載の方法。
48. 【請求項４８】 前記組成物が、計量吸入器または乾燥粉末吸入器から投与
    される、請求項４６に記載の方法。
49. 【請求項４９】 前記組成物が、１０μｍ未満の平均直径を有する粒子から
    なる乾燥粉末形態にある、請求項４８に記載の方法。
50. 【請求項５０】 前記粒子が、１μｍ〜５μｍの範囲の平均直径を有する、
    請求項４９に記載の方法。