JP2003245069A - Ｄｎａの保存方法 - Google Patents
Ｄｎａの保存方法Info
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- JP2003245069A JP2003245069A JP2002097383A JP2002097383A JP2003245069A JP 2003245069 A JP2003245069 A JP 2003245069A JP 2002097383 A JP2002097383 A JP 2002097383A JP 2002097383 A JP2002097383 A JP 2002097383A JP 2003245069 A JP2003245069 A JP 2003245069A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＤＮＡを固体上に化学結合させたもの
を乾燥保存する技術を提供する。 【解決手段】 ＤＮＡを固体上に化学結合させたもの
を減圧加温乾燥、減圧凍結乾燥により急速乾燥し保存に
供する技術を特徴とする。 イ）減圧加温乾燥条件は、４０℃〜９５℃迄で減圧は４
Ｐａ（４＊１０−６Ｎ／ｍｍ２）以下であれば乾燥でき
る。 ロ）凍結乾燥条件は、０℃以下であれば水と氷の状態図
に従い減圧限度を決定できる。
を乾燥保存する技術を提供する。 【解決手段】 ＤＮＡを固体上に化学結合させたもの
を減圧加温乾燥、減圧凍結乾燥により急速乾燥し保存に
供する技術を特徴とする。 イ）減圧加温乾燥条件は、４０℃〜９５℃迄で減圧は４
Ｐａ（４＊１０−６Ｎ／ｍｍ２）以下であれば乾燥でき
る。 ロ）凍結乾燥条件は、０℃以下であれば水と氷の状態図
に従い減圧限度を決定できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、人造ダイヤモン
ド、ガラス、シリコン、グラファイト、各種プラスチッ
クなどの固体上にＤＮＡを化学結合させたものを、減圧
加温乾燥、減圧凍結乾燥により急速乾燥しＤＮＡを保存
する技術に関するものである。減圧加温乾燥条件は、４
０℃〜９５℃迄で減圧は４Ｐａ（４＊１０−６Ｎ／ｍｍ
２）以下であれば乾燥でき、減圧凍結乾燥条件は、０℃
以下であれば水と氷の状態図に従い減圧限度を決定でき
る。
ド、ガラス、シリコン、グラファイト、各種プラスチッ
クなどの固体上にＤＮＡを化学結合させたものを、減圧
加温乾燥、減圧凍結乾燥により急速乾燥しＤＮＡを保存
する技術に関するものである。減圧加温乾燥条件は、４
０℃〜９５℃迄で減圧は４Ｐａ（４＊１０−６Ｎ／ｍｍ
２）以下であれば乾燥でき、減圧凍結乾燥条件は、０℃
以下であれば水と氷の状態図に従い減圧限度を決定でき
る。
【０００２】
【従来の技術】従来のＤＮＡ保存方法は次のようなもの
である。 イ）ＤＮＡ単体状態保存については滅菌水（高温高圧に
より滅菌）、ＤＩＭＳＯ（ジメチルスルホキシド水溶
液）、アルコール等の溶媒に溶かした状態でマイナス３
０℃以下の環境中にて保存する。 ロ）ＤＮＡを各種ベクターに組み込み、マイナス３０℃
以下の環境中にて保存する。 ハ）ＤＮＡを固体上に化学結合させ（以下ＤＮＡ固定化
チップ：特願平１１−３２０９４５）、マイナス３０℃
以下の環境中にて保存する。 ニ）ＤＮＡ固定化チップとは、ＤＮＡを固体上に化学結
合させたものである。固体としては人造ダイヤモンド、
ガラス、シリコン、グラファイト、各種プラスチックが
在る。その一例として図１に人造ダイヤモンド上にＤＮ
Ａを固定化した構造式を示す。
である。 イ）ＤＮＡ単体状態保存については滅菌水（高温高圧に
より滅菌）、ＤＩＭＳＯ（ジメチルスルホキシド水溶
液）、アルコール等の溶媒に溶かした状態でマイナス３
０℃以下の環境中にて保存する。 ロ）ＤＮＡを各種ベクターに組み込み、マイナス３０℃
以下の環境中にて保存する。 ハ）ＤＮＡを固体上に化学結合させ（以下ＤＮＡ固定化
チップ：特願平１１−３２０９４５）、マイナス３０℃
以下の環境中にて保存する。 ニ）ＤＮＡ固定化チップとは、ＤＮＡを固体上に化学結
合させたものである。固体としては人造ダイヤモンド、
ガラス、シリコン、グラファイト、各種プラスチックが
在る。その一例として図１に人造ダイヤモンド上にＤＮ
Ａを固定化した構造式を示す。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】イ）マイナス３０℃以
下の環境中にて保存する事により雑菌の繁殖を防ぐ目的
は達成できるが、保存環境維持に多くの費用を要する。 ロ）マイナス３０℃以下の環境中にて保存する事により
保存装置、保存容器など、多くのスペースを必要とす
る。 ハ）マイナス３０℃以下の環境中にて保存する事により
整理整頓が困難である。本発明は、以上のような欠点を
失くすためになされたものである。 イ）ｃＤＮＡ固定化ダイヤモンドチップの保存技術 １）ｃＤＮＡ固定化ダイヤモンドチップの作成。 ウサギのβ−グロビン由来のＲＮＡを使用してダイヤモ
ンドチップ表面上にｃＤＮＡを固定した。（以下ｃＤＮ
Ａ固定化チップ） ２）ｃＤＮＡ固定化チップを滅菌水、エタノール中に浸
漬したものを試料とした。 ３）滅菌水中またはアルコール中のｃＤＮＡ固定化チッ
プを表１に示す温度下で減圧（６Ｐａ＝６＊１０−６Ｎ
／ｍｍ２）乾燥し保存に供した。 ４）保存１２０日経過後の活性確認をした ３）で作製した試料ｃＤＮＡの活性の確認をした。 ａ．ｃＤＮＡ固定化チップを滅菌水に浸漬して試料とし
た。 ｂ．上記ｃＤＮＡ固定化チップを使用しＰＣＲ（酵素的
核酸増幅）法により増幅したｃＤＮＡ試料を得た。
下の環境中にて保存する事により雑菌の繁殖を防ぐ目的
は達成できるが、保存環境維持に多くの費用を要する。 ロ）マイナス３０℃以下の環境中にて保存する事により
保存装置、保存容器など、多くのスペースを必要とす
る。 ハ）マイナス３０℃以下の環境中にて保存する事により
整理整頓が困難である。本発明は、以上のような欠点を
失くすためになされたものである。 イ）ｃＤＮＡ固定化ダイヤモンドチップの保存技術 １）ｃＤＮＡ固定化ダイヤモンドチップの作成。 ウサギのβ−グロビン由来のＲＮＡを使用してダイヤモ
ンドチップ表面上にｃＤＮＡを固定した。（以下ｃＤＮ
Ａ固定化チップ） ２）ｃＤＮＡ固定化チップを滅菌水、エタノール中に浸
漬したものを試料とした。 ３）滅菌水中またはアルコール中のｃＤＮＡ固定化チッ
プを表１に示す温度下で減圧（６Ｐａ＝６＊１０−６Ｎ
／ｍｍ２）乾燥し保存に供した。 ４）保存１２０日経過後の活性確認をした ３）で作製した試料ｃＤＮＡの活性の確認をした。 ａ．ｃＤＮＡ固定化チップを滅菌水に浸漬して試料とし
た。 ｂ．上記ｃＤＮＡ固定化チップを使用しＰＣＲ（酵素的
核酸増幅）法により増幅したｃＤＮＡ試料を得た。
【０００４】
【課題を解決するための手段】ＤＮＡを固体上に化学結
合させ、それを急速乾燥する。本発明は、以上の構成よ
りなるＤＮＡの保存方法である
合させ、それを急速乾燥する。本発明は、以上の構成よ
りなるＤＮＡの保存方法である
【０００５】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。ＤＮＡを人造ダイヤモンド、ガラス、シリ
コン、グラファイト、各種プラスティックに化学結合さ
せ固定し（以下、ＤＮＡ固定化チップ）、滅菌水、エタ
ノール等の液中に同ＤＮＡ固定化チップを浸漬し、急速
乾燥する。本発明は、以上のような構成でＤＮＡを処理
し保存する技術である。
て説明する。ＤＮＡを人造ダイヤモンド、ガラス、シリ
コン、グラファイト、各種プラスティックに化学結合さ
せ固定し（以下、ＤＮＡ固定化チップ）、滅菌水、エタ
ノール等の液中に同ＤＮＡ固定化チップを浸漬し、急速
乾燥する。本発明は、以上のような構成でＤＮＡを処理
し保存する技術である。
【０００６】
【発明の効果】イ）乾燥状態にて保存できるので雑菌の
繁殖を防ぐことができる。 ロ）常温にて保存する事により保存装置（低温冷蔵庫）
が不要である。 ハ）机の引き出しなどの環境下（冷暗所）で保存可能な
ので整理整頓が容易である。
繁殖を防ぐことができる。 ロ）常温にて保存する事により保存装置（低温冷蔵庫）
が不要である。 ハ）机の引き出しなどの環境下（冷暗所）で保存可能な
ので整理整頓が容易である。
【発明の立証実験】本発明の立証のために行なった実験
とその結果である。実験の温度と圧力は水と氷の相関図
（図２）より導き出した。 ｃ．使用した酵素はＭ−ＭＬＶ（ＲＮａｓｅＨ−）であ
る。 ｄ．使用したプライマーは５’ＲＡＣＥとＯＧＳ７０で
ある。 ｅ．上記条件のもとにＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法３０
サイクルを行って電気泳動の試料とした。結果は図３の
通りである。 試料番号Ｍは１００ｂｐラダーマーカー ５）ＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法により得たｃＤＮＡの
電気泳動結果 （図２）から番号１の自然乾燥を除き、いずれの試料も
活性が有った。 ロ）λＤＮＡ（ラムダファージにより作成された２本鎖
ＤＮＡ）固定化チップの保存技術 １） λＤＮＡをＥｃｏＲ１（制限酵素）で処理して得
られる２１ｋｂｐフラグメント（ＤＮＡ断片）を使用し
λＤＮＡ固定化チップを作成した。 ２） 滅菌水中のλＤＮＡ固定化チップ６個を−２℃で
凍結減圧（６Ｐａ＝６＊１０−６Ｎ／ｍｍ２）乾燥し保
存に供した。 ３）保存１２０日経過後の活性確認 ａ．λＤＮＡ固定化チップを滅菌水に浸漬して試料とし
た。 ｂ．５００ｂｐ部を増幅するプライマー対を用いたＰＣ
Ｒ（酵素的核酸増幅）法により増幅した試料を得た。 ｃ．上記条件のもとにＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法３０
サイクルを行って電気泳動の試料とした。結果は図４の
通りである。 試料番号Ｍは１００ｂｐラダーマーカー 試料番号０は従来法による結果 ４）ＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法により得たλＤＮＡの
電気泳動結果 （図３）から従来法による０番の試料と、本技術（保存
試料作成方法）による試料１〜６と有意差は認められな
い。番号１の自然乾燥を除き、いずれの試料も活性が有
った。
とその結果である。実験の温度と圧力は水と氷の相関図
（図２）より導き出した。 ｃ．使用した酵素はＭ−ＭＬＶ（ＲＮａｓｅＨ−）であ
る。 ｄ．使用したプライマーは５’ＲＡＣＥとＯＧＳ７０で
ある。 ｅ．上記条件のもとにＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法３０
サイクルを行って電気泳動の試料とした。結果は図３の
通りである。 試料番号Ｍは１００ｂｐラダーマーカー ５）ＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法により得たｃＤＮＡの
電気泳動結果 （図２）から番号１の自然乾燥を除き、いずれの試料も
活性が有った。 ロ）λＤＮＡ（ラムダファージにより作成された２本鎖
ＤＮＡ）固定化チップの保存技術 １） λＤＮＡをＥｃｏＲ１（制限酵素）で処理して得
られる２１ｋｂｐフラグメント（ＤＮＡ断片）を使用し
λＤＮＡ固定化チップを作成した。 ２） 滅菌水中のλＤＮＡ固定化チップ６個を−２℃で
凍結減圧（６Ｐａ＝６＊１０−６Ｎ／ｍｍ２）乾燥し保
存に供した。 ３）保存１２０日経過後の活性確認 ａ．λＤＮＡ固定化チップを滅菌水に浸漬して試料とし
た。 ｂ．５００ｂｐ部を増幅するプライマー対を用いたＰＣ
Ｒ（酵素的核酸増幅）法により増幅した試料を得た。 ｃ．上記条件のもとにＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法３０
サイクルを行って電気泳動の試料とした。結果は図４の
通りである。 試料番号Ｍは１００ｂｐラダーマーカー 試料番号０は従来法による結果 ４）ＰＣＲ（酵素的核酸増幅）法により得たλＤＮＡの
電気泳動結果 （図３）から従来法による０番の試料と、本技術（保存
試料作成方法）による試料１〜６と有意差は認められな
い。番号１の自然乾燥を除き、いずれの試料も活性が有
った。
Claims (3)
- 【請求項１】ＤＮＡを固体上に化学結合させたものを減
圧加温乾燥、減圧凍結乾により急速乾燥し保存に供する
技術。 - 【請求項２】請求項目１記載の減圧加温乾燥条件は、４
０℃〜９５℃迄で減圧は４Ｐａ（４＊ １０−６Ｎ／ｍｍ
２）以下であれば乾燥できる。 - 【請求項３】請求項目１の凍結乾燥条件は、０℃以下で
あれば氷の状態図に従い減圧限度を決定できる。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002097383A JP2003245069A (ja) | 2002-02-22 | 2002-02-22 | Ｄｎａの保存方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002097383A JP2003245069A (ja) | 2002-02-22 | 2002-02-22 | Ｄｎａの保存方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003245069A true JP2003245069A (ja) | 2003-09-02 |
Family
ID=28671905
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002097383A Pending JP2003245069A (ja) | 2002-02-22 | 2002-02-22 | Ｄｎａの保存方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003245069A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112626268A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-04-09 | 上海捷诺圣华生物科技有限公司 | 一种检测新冠病毒冻干粉剂的制备工艺 |
-
2002
- 2002-02-22 JP JP2002097383A patent/JP2003245069A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112626268A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-04-09 | 上海捷诺圣华生物科技有限公司 | 一种检测新冠病毒冻干粉剂的制备工艺 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050607 |
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| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20050706 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20050706 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050808 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060301 |