JP2002536409A

JP2002536409A - フェルバメートから誘導される化合物

Info

Publication number: JP2002536409A
Application number: JP2000598154A
Authority: JP
Inventors: エル．マクドナルド，ティモシー; エー．ミラー，トーマス; ディー．トンプソン，チャールズ
Original assignee: ユニバーシティオブバージニアパテントファウンデーション
Priority date: 1999-02-09
Filing date: 2000-02-08
Publication date: 2002-10-29
Also published as: US6538024B1; US6759402B2; EP1156798A4; AU2873400A; ATE244564T1; NZ513319A; AU771936B2; CA2360258A1; MXPA01007968A; US6599935B2; PT1156798E; DE60003791D1; US20020156070A1; EP1156798A1; EP1156798B1; DK1156798T3; US20030229086A1; DE60003791T2; ES2197078T3; WO2000047202A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、新規なフェルバメートの誘導体と、それを癲癇などの神経疾患を治療するために、また虚血性発作に起因する組織の損傷を治療するために使用することに関する。フェルバメートの誘導体はフェルバメート治療に付随する毒性の原因と考えられる代謝産物の形成を妨げるために変性される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野本発明は、2-フェニル-1,3-プロパンジオールジカルバメート（フェルバメー
ト(felbanate)）の新規な誘導体およびそのような誘導体の治療薬としての使用
法に関する。より具体的にはこのフェルバメートの誘導体を含む組成物は、癲癇
性発作の頻度と重症度を低減するために、また虚血性発作に起因する酸素欠乏性
損傷を予防し治療するために投与することができる。

【０００２】発明の背景フェルバメート(2-フェニル-1,3-プロパンジオールジカルバメート）は、米国
特許第2,884,444号および第4,868,327号に記載されている周知の医薬用化合物で
あり、それらに開示されていることは本明細書に特別に組み込まれる。フェルバ
メートは、NMDA(N-メチル-D-アスパラギン酸）受容体機能の活性調節因子および
グリシン部位の拮抗物質であるが、また別の作用機構も報告されている。

【０００３】フェルバメートはまた、AMPA／キナ酸受容体において相互作用し、GABA受容体
の機能を助け、Na.sup.＋チャンネルコンダクタンスを調節することが報告され
ている。フェルバメートはまた、動物においてキナ酸(kinic acid)が誘発する癲
癇状態の後の遅発性神経細胞死を低減させることを示している。グリシンまたは
d-セリンは、フェルバメートの抗痙攣性および虚血防御の効果を機能的に逆転さ
せる可能性があった。

【０００４】癲癇性発作の制御を含むさまざまな神経疾患の治療にフェルバメートを使用す
ることが提案された。例えば、米国特許第4,978,680号には癲癇性発作の予防お
よび制御にフェルバメートを使用することが開示されており、米国特許第5,082,
861号は複合部分発作と関連した癲癇性発作の予防および制御に関するものであ
り、また米国特許第5,292,772号はレンノックス・ガストー(Lennox-Gastaut)症
候群に関連した癲癇性発作の予防および制御にフェルバメートを使用することに
関するものである。米国特許第4,978,680号、第5,082,861号および第5,292,772
号に開示されていることは本明細書に特別に組み込まれる。

【０００５】フェルバメートはまた、血管の再潅流に起因する細胞の損傷を低減し（米国特
許第5,462,966号）、虚血性発作に起因する組織の損傷を予防し治療する（米国
特許第5,055,489号）効能を有することが報告されている。例えば、卒中性の発
作およびその他の脳の虚血発作に起因する酸素欠乏性損傷を制御または予防する
ためにフェルバメートを含む組成物を投与することができる。米国特許第5,462,
966号および第5,055,489号に開示されていることもまた本明細書に特別に組み込
まれる。

【０００６】フェルバメートは1993年７月、幾つかの形態の癲癇の治療用に認可された。フ
ェルバメートは前臨床試験および臨床試験を通してすぐれた治療指数を示し、比
較的穏やかな副作用が観察および／または報告されたのみであった。米国では認
可の初年度に100,000から125,000人の患者がフェルバメート治療を受けた。しか
しながらフェルバメートが広く使用された最初の年のうちに有害効果副作用、特
に再生不良性貧血および肝毒性が報告された(Pennell等の論文、Neurology,45,4
56〜460(1995)、およびO‘Neil等の論文、Neurology,46,1457〜1459(1996)参照
）。これら副作用の重症度と発生頻度の結果、1994年８月FDAに、発作制御のメ
リットが報告された毒性のリスクより大きくない場合には患者のフェルバメート
治療を取りやめるべきであるという勧告を促すことになった。

【０００７】本発明は、フェルバメートを投与した場合に観察された有害効果副作用のない
フェルバメートと類似の治療効果を示すフェルバメートの誘導体およびそれらの
代謝産物に関する。本発明によればこれらフェルバメートの誘導体は、神経疾患
の治療、ならびに酸素欠乏性状態に起因する組織の損傷の予防および／または制
御に使用される。より詳細には本発明の新規な化合物は、癲癇性発作の治療、な
らびに心筋または脳の虚血性発作により引き起こされる細胞の損傷の予防または
軽減に役立つと考えられる。

【０００８】本明細書に開示されたフェルバメートの誘導体は神経保護剤としての活性を有
することを示しており、親のフェルバメート化合物と類似の生物学的活性を有す
ると考えられる。しかしながら本発明の化合物は、フェルバメートの使用に付随
する有害効果副作用を引き起こすと考えられる代謝産物の形成を妨げるように変
性されている。したがって本発明のフェルバメートの誘導体は、フェルバメート
に対して提案されている全ての治療用途のフェルバメートを置き換えることがで
きると期待される。加えてその誘導体の多くは、より少量の治療有効用量の形態
の投与を可能にする高度な活性を有する。

【０００９】発明の概要本発明は、下記の一般式：

【化１３】（式中、Ｘは、

【化１４】からなる群から選択され、R₁、R₇、R₈、R₉およびR₁₀は独立にＨ、ハロゲン、ア
ルキル、ハロアルキル、-NR₅R₆、ヒドロキシ、およびアルコキシからなる群から
選択され；R₂はハロゲンであり；R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり；R₄はヒ
ドロキシまたはカルボニルであり；R₅およびR₆は独立にC₁〜C₄アルキルである。
）をもつ新規な化合物に関する。

【００１０】これらの新規な化合物はフェルバメートの誘導体であり、特に元のフェルバメ
ート構造が温血脊椎動物に投与したとき代謝産物2-フェニルプロペニル（アトロ
パアルデヒド）(atropaldehyde)の形成を妨げるように変性されている。アトロ
パアルデヒドの形成は、フェルバメート投与に付随する有害効果副作用の原因と
考えられる。これらのフェルバメートの誘導体は、フェルバメート投与に付随す
る毒性のリスクなしにフェルバメートと類似の活性を示す。本発明によればフェ
ルバメートの誘導体を含む組成物は、全身性および神経性の疾患において神経保
護を提供するために、また虚血性の発作に起因する組織の損傷を治療するために
患者に投与される。この化合物は、静脈内、経口、または直腸の経路を介して予
防的に、急性、亜急性、または慢性的症状に対して投与することができる。

【００１１】発明の詳細な説明本発明の説明および特許請求においては下記の用語法が下記に示す定義に従っ
て用いられる。本明細書中で用いられる用語「薬剤として許容される担体」は、リン酸緩衝生
理食塩水、油／水または水／油エマルジョンなどの水およびエマルジョン、なら
びにさまざまな種類の湿潤剤など任意の標準的な薬剤用担体を包含する。

【００１２】本明細書中で用いられる用語「有効量」とは、指定された効果をもたらすのに
十分な量を意味する。例えば有効量の神経保護用フェルバメートの誘導体とは、
癲癇性発作の頻度および重症度を顕著に低減するのに十分な活性物質の量である
。有効量の低酸素症回復用フェルバメートの誘導体とは、冠動脈閉塞／再潅流ま
たはその他の低酸素症が誘発する発作に起因する細胞の損傷を予防または顕著に
低減するのに十分な活性物質の量である。

【００１３】本発明の化合物を記述するために用いられる一般的化学用語は、それらの通常
の意味を有する。例えば、単独または別の置換基の一部としての用語「アルキル
」は、指定された数の炭素原子を有する直鎖状または分枝状脂肪族鎖を意味する
。用語「ハロ」には臭素、塩素、フッ素、およびヨウ素が含まれる。用語「非経口的」とは消化管を通じてではなく、皮下、筋肉内、脊髄内、また
は静脈内などの幾つかの別の経路によることを意味する。

【００１４】本明細書中で用いられる用語「治療」には、特定の病または状態に付随する症
候群を軽減すること、および／またはそれら症候群を予防または除去することが
含まれる。反応性代謝産物3-カルバモイル-2-フェニルプロピオンアルデヒド(3)に至る下
記のフェルバメート(1)の代謝経路（スキームＩ）が提案されている。

【００１５】

【化１５】

【００１６】 3-カルバモイル-2-フェニルプロピオンアルデヒド(3)は、2-フェニル-1,3-プ
ロパンジオールカルバメート(2)が主要なヒトの代謝物である3-カルバモイル-2-
フェニルプロピオン酸(4)に酸化されるときの反応性中間体と考えられる。加え
て、カルバミン酸アルデヒド(3)は自然脱離を受けて、一般にアトロパアルデヒ
ドとして知られるα，β不飽和アルデヒドである2-フェニルプロペナール(5)を
形成することが分かった。アトロパアルデヒドはフェルバメート療法中に毒性を
発生させる役割を演じるということが提唱されている。

【００１７】インビボでアトロパアルデヒドが形成される証拠は、フェルバメートの投与後
のヒトとラットの両者の尿中でアトロパアルデヒドが変性されたN-アセチル−シ
ステイン抱合体７および８が同定されたことに伴って報告された。フェルバメー
トの投与後の尿中においてアトロパアルデヒドから誘導されたメルカプツール酸
が同定されたことは、アトロパアルデヒドがインビボで形成され、それがチオー
ル求核基と反応するという仮説と一致している。

【００１８】フェルバメートの投与に付随する毒性が、形成されたアトロパアルデヒドの量
と直接相関しているという仮設に基づいて本発明は、アトロパアルデヒドへ代謝
することができない、フェルバメートと構造的に同族の新しい種類の物質の開発
に向けられている。本発明によればフェルバメート(1)のベンジル型水素は、下記の代謝体系（ス
キームII）に示すように置換基「R₂」で置換される。R₂はハロゲンであり、好ま
しい一実施形態において置換基はフッ素原子である。

【００１９】

【化１６】

【００２０】フルオロフェルバメート(12)およびフルオロモノカルバミン酸フェルバメート
(13)は、周知の抗癲癇物質の誘導体である。これら物質はフェルバメートと構造
的類似性を持つが、フェルバメートの代謝プロフィルを示すことがなく、かつフ
ェルバメートの使用に付随する副作用など有害効果副作用を誘発することのない
新しい種類の抗癲癇剤を代表する。

【００２１】本発明の一実施形態によれば、別の毒性化する可能性のある種がシトクロムP-
450経路を介して形成されるのを防ぐために、これらの化合物をさらに変性して
フェルバメートの誘導体のベンゼン環のパラ位に置換基を入れることができる。
この潜在的なシトクロムP-450が仲介する毒性は、19などの求電子性の種の形成
によって本発明の2-置換2-フェニル-1,3-プロパンジオールジカルバメート誘導
体と関連している可能性があり、これはまたフェルバメートの周知の代謝産物で
あるジヒドロキシフェルバメートから形成される可能性もある。

【００２２】パラ位で置換されているフェルバメートの誘導体化合物は、シトクロムP-450
代謝系のある種のメンバーにより代謝されるのを阻止される。例えば、好ましい
２つの化合物はジフルオロフェルバメート(23)およびジフルオロモノカルバミン
酸フェルバメート(24)である。これらのフェルバメートの誘導体は代謝されてア
トロパアルデヒドになることができず、またシトクロムP-450代謝系のある種の
メンバーにより代謝されるのを阻止される。

【００２３】

【化１７】

【００２４】本発明はまた、フェルバメートの潜在的に活性な代謝産物の誘導体を包含する
。具体的には、フェルバメートの代謝物オキサジナン−ジオン９の誘導体である
フルオロオキサジナン−ジオン16およびジフルオロオキサジナン−ジオンが含ま
れる。オキサジナン−ジオン９の構造は、下記に例示するフェノバルビタール、
フェニトイン、オキサジナン−ジオン、メタルビタール、およびエトトインを含
む幾つかの既成の抗癲癇薬と興味をそそる類似性を持っている。

【００２５】

【化１８】

【００２６】したがってオキサジナン−ジオン９は、フェルバメートのインビボの薬効の幾
つかの局面を担っていることが予想される。発作の制御のためにフェルバメート
治療を受ける患者は多量のフェルバメート（１日当たり数グラム）を摂取するの
で、薬理学的に活性な代謝産物への転換がたとえ1〜2%であったとしてもかなり
の効果を有する可能性がある。特に代謝産物（すなわちオキサジナン−ジオン）
がより効き目の強い化合物である場合、これはフェルバメートで見られた発作の
制御において重要な役割を演ずる可能性がある。

【００２７】オキサジナン−ジオン９が主要なヒトの代謝産物である酸性カルバミン酸４の
代謝前駆物質である可能性に照らせば、それはかなりの量（酸性カルバミン酸は
用量の〜12%に相当することが報告された）が形成されるかも知れない。親のオ
キサジナン−ジオン９は妥当なpHにおいて不安定なことが分かっているので、オ
キサジナン−ジオン類16は効き目の強い抗癲癇物質としての開発候補と考えられ
る。またこの種類にはフェルバメートの誘導体から形成することができる環状の
同種物質21および22（体系II参照）も含まれる。またフェルバメート１の未知の
代謝産物の可能性があり、フェルバメートの誘導体12からシトクロムP-450の代
謝により生成する可能性のある20も含まれる。本発明の一実施形態によれば、神経疾患または局在性の虚血発作（心筋または
脳の虚血）は下記の一般構造を有する化合物の投与により治療される。

【００２８】

【化１９】式中、Ｘは

【化２０】からなる群から選択され、R₁およびR₇は独立にＨ、ハロゲン、アルキル、ハロア
ルキル、-NR₅R₆、ヒドロキシ、およびアルコキシからなる群から選択され；R₂は
ClまたはＦであり；R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり、R₄はヒドロキシまた
はカルボニルであり；そしてR₅およびR₆は独立にC₁〜C₄アルキルである。別の実施形態において、神経疾患または局在性の虚血発作（心筋または脳の虚
血）は下記の一般構造を有する化合物の投与により治療される。

【００２９】

【化２１】

【００３０】式中、Ｘは

【化２２】からなる群から選択され、R₁およびR₈は独立にＨ、ハロゲン、アルキル、ハロア
ルキル、-NR₅R₆、ヒドロキシ、およびアルコキシからなる群から選択され、R₂は
ClまたはＦであり、R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり、R₄はヒドロキシまた
はカルボニルであり、R₅およびR₆は独立にC₁〜C₄アルキルである。

【００３１】一実施形態によれば、

【化２３】

【００３２】からなる群から選択され、式中、R₁がＨ、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、-NR₅R₆、ヒドロキシ、お
よびアルコキシからなる群から選択され；R₃がヒドロキシまたは-OCONH₂であり
；R₄がヒドロキシまたはカルボニルであり；そしてR₅およびR₆が独立にC₁〜C₄ア
ルキルである化合物を、神経疾患あるいは心筋または脳の虚血の治療のために患
者に投与する。

【００３３】別の実施形態によれば、化合物は

【化２４】

【００３４】からなる群から選択され、式中、R₁はＨまたはハロからなる群から選択され；R₃はヒドロキシまたは-OCO
NH₂であり；そしてR₄はヒドロキシまたはカルボニルであり、また好ましい一実
施形態において化合物は

【００３５】

【化２５】

【００３６】からなる群から選択され、式中、R₁はＨ、Ｆ、Cl、CF₃、およびヒドロキシからなる群から選択され；そ
してR₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である。好ましい一実施形態においてR₁はＨ
またはＦであり、そしてR₃は-OCONH₂である。

【００３７】本発明のフェルバメートの誘導体を含む組成物は、癲癇性発作などの神経疾患
に罹っている患者の治療に使用することができ、あるいは卒中性の発作、心筋梗
塞、および脊髄潅流型の傷害に起因する再潅流傷害の予防または治療に使用する
ことができる。本発明のフェルバメートの誘導体はまた、反応性酸素の種(ROS)
の存在を特徴とする状態の処理に有用であると考えられる。本発明のフェルバメートの誘導体は、患者に投与するために当業者に周知の薬
剤として許容される担体、安定剤、可溶化剤、および充填剤と組み合わせること
ができる。組成物は、経口的、非経口的、または経皮的に送達するための標準の
送達用ビヒクルおよび標準の処方を用いて処方することができる。

【００３８】一実施形態によれば、神経疾患または再潅流傷害に罹っている患者を、その疾
患または傷害に付随した症候群を軽減するためにフェルバメートの誘導体および
／またはフェルバメートの誘導体の代謝産物により治療することができる。本発
明によれば、癲癇性発作などの神経疾患に罹っている患者の治療、または再潅流
傷害の治療の方法は、

【００３９】

【化２６】

【００４０】からなる群から選択され、式中、R₁がＨ、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、およびヒドロキシからな
る群から選択され；R₃がヒドロキシまたは-OCONH₂であり；そしてR₄がヒドロキ
シまたはカルボニルである化合物を含む組成物を、薬剤として許容される担体と
組み合わせて患者に投与するステップを含む。好ましい一実施形態において組成
物は、

【００４１】

【化２７】

【００４２】からなる群から選択され、上式でR₁がＨ、Ｆ、Cl、CF₃、およびヒドロキシからなる群から選択され、そ
してR₃がヒドロキシまたは-OCONH₂である化合物を、薬剤として許容される担体
と組み合わせて含む。

【００４３】経口投与の場合、化合物は溶液、粉末、錠剤、カプセル、またはトローチ剤と
して投与することができる。化合物は、錠剤、カプセル、トローチ剤、およびそ
の他の経口投与可能な形態の調製に使用される１または複数種の通常の薬剤添加
物または賦形剤と組み合わせて用いられる。静脈用液として投与する場合、本発
明の誘導体は通常の水薬IVに混ぜることができる。本発明の化合物は、疾患に付随する症候群を軽減するのに有効な範囲の用量が
投与される。一実施形態によれば、フェルバメートの誘導体（活性物質）は約0.
1mg/kgから約5.0g/kg、より具体的には約0.25mg/kgから約1g/kgの用量で投与さ
れる。用量は投与経路および治療すべき状態／疾患により変わることになる。

【００４４】実施例実施例１．フェルバメートで治療された患者個体群におけるアトロパアルデヒドから誘導される２種類のメルカプツール酸７および８の定量化のためのLC/MS法の使用 FDAは他の治療が役に立たなかった場合にのみ患者にフェルバメートの治療を
施すことを勧告しているが、米国においては8,000〜12,000人の患者が依然とし
てフェルバメートの治療に留まっているものと推定されている(12)。

【００４５】グルタチオンに添加されることによりメルカプツール酸が生成する一方で、幾
つかの類似の求核基（すなわちタンパク質の求核アミノ酸またはDNA塩基）がア
トロパアルデヒドと接合することが予想される。インビボで生成するアトロパア
ルデヒドが多いほど、毒性につながる肝心な標的がアルキル化される可能性も高
くなる。したがって、毒性の可能性は形成されるアトロパアルデヒドの量と相関
関係があると考えるのが妥当である。さらに尿中に排出される、アトロパアルデ
ヒドから誘導されたメルカプツール酸の量は、形成されたアトロパアルデヒドの
量の関数であるはずである。

【００４６】本発明の一実施態様によれば、フェルバメート治療に付随する患者の毒性の影
響の受けやすさの尺度として、患者の尿中に排出された関連の代謝産物を定量す
るための分析法が記述される。患者のフェルバメート投与による有害な副作用の
影響の受けやすさを決定するこの方法は、患者から生物学的試料、好ましくは尿
の試料を得るステップと、試料中に存在するメルカプツール酸代謝産物を定量す
るステップと、形成されたアトロパアルデヒドの量を推定するステップとを含む
。一実施形態によれば、標準の液体クロマトグラフィおよび質量分析(LC/MS)が
患者の尿中に排出された関連の代謝産物を定量するために用いられる。

【００４７】材料および方法化学薬品および機器。試薬は全てAldrich Chemical Co.またはSigma Chemical
Co.のいずれかから購入され、入手しうる最高品質のものであった。HPLCは、Wa
ters Symmetry C₁₈(2.1mm×150mm)カラムを用いて、Waters484同調吸光度検出器
(214nm)を備えたWaters2690 Separations Module上で行なった。マススペクトル
はこのLCシステムを、エレクトロスプレー式イオン化発生源を装備したFinnigan
MAT LCQイオントラップ質量分析計に連結することにより得られた。NMRスペク
トルは、General Electric QE300スペクトロメーター上に300MHzで記録され、化
学シフトはppmの単位で記録される。融点はThomas-Hoover UNI-MELT装置で決定
され、補正していない。

【００４８】 2-フェニル-(1,1,3,3-テトラ−ジュウテリオ)-1,3-プロパンジオールの合成 2-フェニル-(1,1,3,3-テトラ−ジュウテリオ)-1,3-プロパンジオールは、2-フ
ェニル-1,3-プロパンジオールの生成のためにさきに記載した方法を用いてLiAlD ₄ でフェニルマロン酸ジエチルを還元することにより得られた(1)。生成物の同位
体純度は、¹H NMRおよびGC/MSにより判定して≧98%と確定された。(mp=48〜50℃
)¹H NMR(CDCl₃):δ2.6(s,2H),3.0(s,1H),7.3(m,5H)。¹³C NMR(CDCl₃):δ49.8,12
7.7,128.5,129.3,139.9。GC/MS(CI-メタン)MH⁺=157フラグメントイオン:139,121
,106,93。元素分析:理論値C69.20;H7.74、実測値C68.98;H7.68。分子質量は4²H
原子により計算されるが、元素分析に用いた機器は各重水素をあたかも水素であ
るかのように観測する。したがって、水素の元素分析に対する理論値は、12¹Hの
存在に基づいて決められる(すなわち、12×1.008=12.096/156.21=7.74%)。

【００４９】 2-フェニル-(1,1,3,3-テトラ−ジュウテリオ)-1,3-プロパンジオールモノカルバメートの合成 d₄-モノカルバミン酸アルコールを、さきに記載した方法を用いてd₄-ジオール
から調製した(1)。生成物の同位体純度は、¹H NMRおよびGC/MSにより判定して≧
98%と確定された。(mp=71〜72℃)¹H NMR((CD₃)₂CO):δ3.1(s,1H),4.8(bs,2H),7.
3(m,5H)。LC/ESI-MS:MH⁺=200.0。

【００５０】 3-カルバモイル-(3,3-ジ−ジュウテリオ)-2-フェニルプロピオン酸の合成出発原料としてd₄-モノカルバミン酸アルコールを用いたことを除いて基本的
にAdusumalli等の記述に従ってd₂-酸性カルバミン酸が得られた(10)。生成物の
同位体純度は、¹H NMRおよびLC/MSにより判定して≧98%と確定された。(mp=99〜
102℃)¹H NMR((CD₃)₂SO):δ3.9(s,1H),5.8(bs,2H),7.3(m,5H),12.4(bs,1H)。¹³C
NMR((CD₃)₂CO):δ54.1,127.3,128.7,128.7,139.3,155.6,201.7。LC/ESI-MS:MH⁺ =211.9。元素分析:理論値C56.87;H5.25;N6.63、実測値C56.74;H5.31;N6.57。

【００５１】 2-フェニル-(1,1,3,3-テトラ−ジュウテリオ)-1,3-プロパンジオールジカルバメートの合成出発原料としてd₄-モノカルバミン酸アルコールを用いたことを除いてさきに
記載の方法を用いてd₄-フェルバメートが作成された(2)。生成物の同位体純度は
、¹H NMRおよびLC/MSにより判定して≧98%と確定された。この化合物に対して得
られたスペクトルデータは出版物に掲載されている値と一致する(11)。(mp=148
〜150℃)¹H NMR((CD₃)₂SO):δ3.1(s,1H),6.4(bs,4H),7.2(m,5H)。LC/ESI-MS:MH⁺ =243.1。元素分析:理論値C54.53;H5.83;N11.56、実測値C54.63;H5.84;N11.64。

【００５２】 N-d₃-アセチル-L-システインの合成無水酢酸(d₆)(0.29g、2.7mモル）を、DMF20mlおよびピリジン1mlに溶かしたCy
s(trt)-OHの溶液に加え、夜通し撹拌した。反応混合物をエーテル50mlで希釈し
、飽和臭化リチウム水で抽出した(2×50ml)。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し
、溶剤を減圧下で除去した。この中間体を、メタノールとクロロホルム1:1を用
いたフラッシュクロマトグラフィにより精製し、白色の固体：¹H NMR(CDCl₃)δ7
.37〜7.12(m,15H),4.13(m,1H),2.60(m,2H)を得た。この硫化物を、ジクロロメタ
ンに溶かしたTFA溶液(1:1)を用いて２時間脱保護を行なった。溶剤を減圧下で除
去し、粗生成物を次の反応に使用した。

【００５３】 N-d₃-アセチル-S-(2-フェニルプロパン-3-オール)-L-システインの合成 N-d₃-アセチル−システインを中間体d₃-Nac-アトロパアルデヒドの形成に用い
たことを除いて、さきに記載した方法を用いてd₃-Nac-アルコールを形成した(2)
。この生成物の同位体純度は、¹H NMRおよびLC/MSにより判定して≧95%と確定さ
れた。¹H NMR(D₂O):δ2.66〜3.0(m,6H),3.74(t,1H,J=5.4Hz),4.4(m,1H),7.3(m,5
H)。LC/MS:MH⁺=301.3。

【００５４】 N-d₃-アセチル-S-(2-フェニルプロパン酸)-L-システインの合成 N-d₃-アセチル−システインを2-フェニルアクリル酸との反応に用いたことを
除いて、さきに記載の方法を用いてd₃-Nac-酸を形成した(2)。この生成物の同位
体純度は、¹H NMRおよびLC/MSにより判定して≧95%と確定された。¹H NMR(D₂O):
δ2.75〜3.23(m,4H),3.82(t,1H,J=5.5Hz),4.4(m,1H),7.32(m,5H)。LC/ESI-MS:MH ⁺ =315.2。

【００５５】患者の尿試料の調製尿試料は、癲癇の制御のためフェルバメート治療を受ける患者の有志からthe
University of Virginia(Charlottesville,Virginia)またはthe EpiCare Center
(Memphis,Tenessee)のいずれかで医師の管理下で得られた。尿試料は蒸留水で４
倍に希釈（これは輸送を必要とする試料発送の一晩前に行なわれた）し、軌道を
描いて回る振とう式ウォーターバス中に37℃で〜20分間置いて全ての被検体が溶
液状態になることを保証した。

【００５６】この希釈試料500μlを取りだし、4種類の重水素化した内標準の混合物100μl
に加えた。混合物中の内標準の濃度は、結果として希釈した尿試料各500μlにd₄ -フェルバメート563nモル、d₂-酸性カルバミン酸140nモル、d₃-Nac-アルコール5
4.0nモル、およびd₃-Nac-酸27.5nモルを加えたことになる。混合の後、200μlを
取りだし、20%HOAc20μlに加えた。次いでこの酸性化した試料を、予備コンディ
ショニングしたWatersの「Oasis」固相抽出カートリッジ(Waters Corp.,Woburn,
MA)に塗布した。カートリッジを0.1%HOAc2ml、続いて10%CH₃CN/90%水(0.1%HOAc)
3mlで洗浄した。次いで被検体および内標準を、30%CH₃CN:70%(0.1%)HOAc3mlで希
釈した。次いでこのフラクションを、さらに操作することなくLC/MSにより分析
した。

【００５７】代謝産物の定量化のための尿試料のLC/MS分析。自動試料採取器およびWaters4
86同調吸光度検出器を装備したWaters2690型HPLCを用いてLC/MS分析を行なった
。このLCシステムは、Finnigan MAT LCQイオントラップ質量分析計と連係して機
能する。固相抽出から得られたフラクションの注入液10μlをWaters Symmetryの
C₈逆相カラム(33%CH₃CN:67%(0.1%)HOAc、2.1mm×150mm、0.2ml/分）に注入した
。定量用ではなく試料の定性評価用に使用されるポストカラムの流れは、Waters
486同調吸光度検出器(フローセル10μl、λ=214nm)を通って振り向けられた。次
いで流れはLCQのエレクトロスプレー式イオン化発生源に向けられた。

【００５８】質量分析計は、限度一杯の190〜320m/zの走査モードのデータを収集するよう
にプログラムされ、HPLCの条件下で被検体からのシグナルを最大限に活用するよ
うに調整した。エレクトロスプレーのパラメータの値は下記のとおりである。加
熱されたキャピラリー温度=180℃、スプレー電圧=5.6kV、キャピラリー電圧=20V
、シースガス（窒素）の流量=70、補助ガス（ヘリウム）の流量=20。自動ゲイン
制御(AGC)は、標的イオンの計数値7×10⁷イオン、最大イオン噴射時間150msでス
イッチが入る。走査時間は〜0.5sである。線形の応答曲線が各被検体と内標準の
ペアに対して観測され、試料に加えられた各内標準の絶対量を中心とするほぼ２
桁の範囲にわたっていた。患者の尿試料中の被検体の量は、これら線形の応答範
囲内に入った。

【００５９】定量化は、LCQと共に提供されたソフトウェア(Navigator 1.1)を用いて各被検
体に対するマスクロマトグラムのピークを積分することにより達成された。各代
謝産物に対するピークの面積（計数値×秒数として表される）を、その対応する
重水素化された内標準に対する面積と比較した。尿1ml当たりに加えられた内標
準の絶対量が知られているので、尿1ml当たりの被検体の絶対量を決定すること
ができる。

【００６０】結果癲癇の制御のためにフェルバメート治療を受けている患者31人から得た尿試料
34個について分析を行なった。癲癇にはよくあることだが、これら患者の多く(n
=19)は癲癇の制御のために多元治療を受けており、残り(n=12)がフェルバメート
の単一治療を受けていた。この患者のプール（男性14人、女性17人）の年令は10
〜57歳にまたがっており、平均年令は37歳であった。分析された尿の試料は全て
両メルカプツール酸を含有していることが分かり、これはインビボのアトロパア
ルデヒドの形成がこの患者個体群の中で起こっており、普遍的であるらしいこと
を示している。患者全てに対してNac-酸８よりもNac-アルコール７が多く排出さ
れた。Nac-アルコールとNac-酸の比の平均は6.4であったが、値は大幅に異なっ
ていた（比＝2〜14)。

【００６１】尿1ml当たりに排出される被検体の絶対量は、患者の間でかなり異なっていた
。例えば排出されたフェルバメートの量は、819±8.5nモル/ml（この患者のフェ
ルバメートの全１日量は3.6グラムであった）から10,064±515nモル/ml（この患
者のフェルバメートの全１日量は6.0グラムであった）の範囲にあった。これは
、この方法で得られた結果に及ぼす尿の量の効果を例示している。用量の差は２
倍未満であったが、1ml当たりの排出されたフェルバメートの量の差は10倍を超
えた。したがって、ある患者の結果を別の患者のものと比較するために代謝産物
の値がフェルバメートの量に対して正規化された。

【００６２】議論本発明者らは、フェルバメート１、酸カルバメート４ならびに患者の尿に排出
される２種のメルカプツール酸７および８の定量のために、同位体希釈に基づく
LC/MS法を開発した。FDAは、他の治療が失敗したときに患者にフェルバメート治
療を行うことを推奨したが、合衆国において8,000〜12,000人の患者がフェルバ
メート治療を続けていると見積られる(12)。

【００６３】スキームIは、アトロパアルデヒド(atropaldehyde)形成へ至る代謝経路および
その配置(disposition)を説明する。このアルデヒドカルバメートは、「委任」
段階を示す。分子が、アトロパアルデヒド５の毒性経路かまたは酸カルバメート
４の解毒経路へ託されるのは、この点においてである。尿に排出されるメルカプ
ツール酸７および８の量は「毒性」経路を経る流れを反映する。すなわち、高濃
度のアトロパアルデヒドを生成する個体は、相応じて高濃度のメルカプツール酸
を有することが予期される。

【００６４】したがって、合計したメルカプツール酸に対する排出された酸カルバメートの
比は、与えられた患者について、アルデヒドカルバメートの配置を説明する。２
種のメルカプツール酸についての値は、両方が、アルデヒドカルバメート配置の
同じ経路を示すので、合わせることができる。もちろん、これら２つの経路を経
る配置を調節し得る他の要因（すなわち、酵素活性またはグルタチオン濃度のモ
ジュレーターの同時投与(co-administration)）があるが、このことは、患者個
体群における毒性経路および非毒性経路間の代謝配分の評価への有望なアプロー
チであると思われる。

【００６５】本発明者らは、このLC/MS法を、癲癇発作の抑制のためにフェルバメート治療
を受けている31人の患者からの34個の尿試料の分析に適用した。これらの患者の
すべてが、いかなるひどい副作用もなく、数年間フェルバメート治療を受けてい
た。フェルバメートに関連するひどい毒性は、６ヶ月の平均襲来時間を証明する
ので、これらの患者はおそらく、フェルバメートの「正常」または「安全」な代
謝者の個体集団を構成する。

【００６６】尿試料から得られたデータは、酸カルバメートと（メルカプツール酸によって
示される）アトロパアルデヒドとの間にアルデヒドカルバメートの分配について
の「正常」範囲があることを説明する。性別または治療タイプと形成された代謝
産物の相対量との間に有意の相関関係があるとは思われない。高エステラーゼ活
性を有する個体は、フェルバメートから比較的多いモノカルバメートアルコール
を生成し、すべての次の代謝産物の生成増加へ至る。しかしながら、代謝産物の
比はなお非常に類似し得る。

【００６７】本発明者らの仮説により、アトロパアルデヒドによるタンパク質のアルキル化
は、他の剤についての免疫仲介毒性のメカニズムと同様のやり方で免疫応答させ
る抗原の生成をもたらし得る。アトロパアルデヒドによる毒性が免疫仲介される
なら、この毒性への感受性は、アトロパアルデヒド−タンパク質結合体の形成の
関数であるだけでなく患者の免疫系表現型の関数である。幾人かの患者は、アト
ロパアルデヒド−タンパク質結合体に対してこの患者をアレルギーにするが、一
方他の人はこの応答を示さない、特定の表現型を有し得る。

【００６８】あるいは、誰もが免疫応答に対する可能性を有し得るが、生成されたアトロパ
アルデヒド−タンパク質結合体の量は、免疫応答が生じる前に臨界濃度に達しな
ければならない。すなわち、患者のすべてが低濃度の抗原を生成していることが
できるが、その濃度は、普通は免疫応答を誘発するのに十分高くはない。二次的
な結果、例えば酸カルバメート形成の阻害またはグルタチオン涸渇まで、抗原の
生成が臨界濃度を超え、毒性が明らかにされることは、起こらない。

【００６９】本発明者らの仮説によるフェルバメート毒性についての免疫仲介成分の可能性
の故に、完全なスクリーニング法を開発するために、個体レベルのアトロパアル
デヒド形成およびそれらの表現型の両方を理解することが重要であり得る。上記
した方法は、「アルトライアー」の同定について十分な精度を証明した。かつ、
この方法は、フェルバメート治療をうけている患者の監視の可能性を保持すると
思われる。

【００７０】実施例２．フェルバメートの誘導体の合成材料および方法化学薬品および機器。すべての試薬は、アルドリッチケミカル社(Aldrich C
hemical Co.)から購入し、入手可能な最高品質のものであった。Waters Symmetr
y C₁₈ （2.1mm x 150mm）カラムを用いて、Waters 484整調可能吸光度検出器（2
14nm）を備えたWaters 2690 Separations ModuleにてHPLCを行った。このLC系を
、エレクトロスプレー(electrospray)イオン化源を備えたFinnigan MAT LCQイオ
ントラップマススペクトロメーターに結合させることによって、マススペクトル
を得た。NMRスペクトルは、General Electric QE300 スペクトロメーターにて、
300MHzで記録し、化学シフトはppmで報告した。融点はThomas-Hoover UNI-MELT
装置で測定し、補正していない。

【００７１】合成 2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパンジオール 2-フェニル-1,3-プロパンジオールの形成について先に記載したのと同様の方
法を用いて、水素化リチウムアルミニウム還元によって、2-フルオロ-2-フェニ
ルマロン酸ジエチルから2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパンジオールを得た（
トンプソン(Thompson)ら、Chem. Res. Toxicol. 9. 1225-1229 (1996)）。しか
しながら、還元を−40℃で開始し、１時間かけて室温に暖めた後、さらに１〜２
時間撹拌し、そのときに、TLCによって反応を終了した。¹H NMR (CDCl₃): δ7.4
3-7.3(m,5H)、4.01(dq,4H,J=22.7,12.3Hz)、2.82(bs,2H)、¹³C NMR (CDCl₃):138
.2, 129.1, 129.1, 128.9, 125.3, 125.2, 100.4, 98.0, 67.0, 66.7。 2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパンジオールモノカルバメート(13, x=フル
オロ）先に記載した方法を用いて、2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパンジオールか
ら、標記化合物を製造した（トンプソン(Thompson)ら、Chem. Res. Toxicol. 9.
1225-1229 (1996)）。かくして得られた生成物を、エチルエーテルから再結晶
し、生成物の純度は、¹H NMRおよびLC/MSによって査定して98％であると決定さ
れた（72％収率、R_f(エチルエーテル)=0.25、融点＝67-69℃）。¹H NMR (CDCl₃)
: δ7.4-7.2(m,5H)、5.05(bs,2H)、4.52(ddd,2H,J=20.2,12.5,6.5Hz)、3.9(dd,2
H,J=12.5,6.5Hz)。LC/ESI-MS:MH⁺=214。

【００７２】 3-カルバモイル-2-フルオロ-2-フェニルプロピオン酸(17, x=フルオロ） 3-カルバモイル-2-フェニルプロピオン酸の製造を記載するアダスマリ(Adusum
alli)らの方法に従って、2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパンジオールモノカ
ルバメート13から、3-カルバモイル-2-フルオロ-2-フェニルプロピオン酸17を製
造した（85％収率、R_f(エチルエーテル)=0.05）。¹H NMR (CDCl₃): δ9.1(bs,1H
)、7.6-7.2(m,5H)、5.4(bs,2H)、4.8(dd,1H,J=10.7Hz)、4.72(t,1H,J=7Hz)。

【００７３】 2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパンジオールジカルバメート(12, x=フルオ
ロ）フェルバメートの製造を記載するアダスマリ(Adusumalli)らの方法、Drug. Me
tab. Disp. 21, 710-716 (1993)によって、2-フルオロ-2-フェニル-1,3-プロパ
ンジオールから、標記化合物、フルオロフェルバメート12を製造した（82％収率
、R_f(エチルエーテル)=0.20、融点＝69-72℃）。¹H NMR (CDCl₃): δ7.4-7.3(m,
5H)、5.2(bs,4H)、4.48(dq,4H,J=20.8,14.2Hz)。C,56.33；H,5.67；N,6.57、測
定値C,56.24；H,5.55；N,6.52。

【００７４】 5-フルオロ-5-フェニル-1,3-オキサジナン-2,4-ジオン(16, x=フルオロ） 3-カルバモイル-2-フルオロ-2-フェニルプロピオン酸(17、0.1ミリモル）およ
び1,1'-カルボニルジイミジゾール（0.25ミリモル）をジクロロメタン（5mL）に
溶解し、得られた溶液を、密閉容器中で12時間磁気的に撹拌した¹²。粗反応混合
物を、フリットの漏斗中のシリカゲル(10g）のパッドを通し、エチルエーテルで
溶出することによって、混合物を精製し、エチルエーテルから再結晶した後、標
記化合物を、白色粉末として、収率42％にて得た（R_f(エチルエーテル)=0.70、
融点＝115-117℃）。¹H NMR (CDCl₃): δ7.48-7.43(m,3H)、7.42-7.37(m,2H)、4
.93(dd,2H,J=24.6,12.7Hz)、4.68(t,2H,J=13Hz)。LC/ESI-MS:MH⁺=210。C,57.42
；H,3.85；N,6.70、測定値C,57.23；H,3.88；N,6.67。

【００７５】実施例３．神経保護(neuroprotection)および毒性アッセイ合成したフルオロ誘導体を、アッセイの標準パネルでの評価のために、ナショ
ナルインスティテュートオブニューロロジカルディスオーダーズアン
ドストーク(National Institute of Neurological Disorders and Stoke)(NIN
DS)に寄託した。神経保護剤としての化合物の活性を評価するために、２つの痙
攣試験（MESおよびscMET）および毒性スクリーン（マウスにおけるロトロッド(r
otorod)、ラットにおける位置感覚および歩行）を使用した。

【００７６】これらの試験方法は、抗-癲癇薬のための分子および細胞標的(Molecular and
Cellular Targets for Anti-epileptic Drugs)、G.アバンツィーニ(Avanzini)、
G.レジェスタ(Regesta)、P.タンガネリ(Tanganelli)、M.アボリ(Avoli)編、1997
、ジョンリベイ＆カンパニー(John Libbey & Company)社、pp191-198に詳
細に記載されている。フェルバメートの誘導体は、マウスにおける腹腔内(i.p.)
投与およびラットにおける経口投与によって、抗-痙攣活性について評価された
。

【００７７】最大電気ショック発作(MES) MES試験は、普及した強直‐間代発作のためのモデルであり、発作の広がりを
防ぐ化合物を同定するために使用される。このモデルにおいて生じた行動的およ
び電気記録的発作は、ヒトの疾患と一致する。MES試験においては、0.2秒持続す
る電気刺激（60Hzにて、マウスにおいて50mAおよびラットにおいて150mA）を、
麻酔剤を含む電解液溶液を満たした角膜電極によって送り込んだ。マウスは、30
、100および300mg/kgの試験化合物の投与後30分および４時間にて試験した。ラ
ットは、30 mg/kgの標準経口投与後0.25時間〜４時間の時間間隔で試験した。後
部肢強直伸筋成分(hindlimb tonic extensor component)の破壊(abolition)は、
MES誘発発作の広がりを阻止する試験化合物の能力を示す。

【００７８】皮下（メトラゾール）発作試験（scMET）これは、発作閾値を上げる化合物を主に同定するモデルである。少数の例外は
あるが、scMET発作モデルの薬理学的プロファイルは、ヒトの状態と一致する。s
cMET試験は、試験した動物の97％（CD97）に少なくとも５秒間持続する間代発作
を誘発するペンチレンテトラゾールの投与量（Carworth Farms No. 1 マウスに
おいては85mg/kgおよびSprague-Dawley ラットにおいては70mg/kg）を使用する
。予想した試験時間に、痙攣薬を皮下に投与する。試験化合物は、マウスにおい
ては腹腔内に、ラットにおいては経口で投与される。動物は、30分間にわたって
観察される。観察された時間中の痙攣の間代発作の不在は、発作の閾値へのペン
チレンテトラゾールの作用を破壊する(abolish)化合物の能力を示す。すべての
臨床的に活性な抗痙攣薬は、これら２つの試験のうちの少なくとも１つにおいて
保護的であるとわかった。

【００７９】最小神経毒性化合物によって誘発される毒性は、ダンハム(Dunham)＆ミヤ(Miya)（1957）に
より記載された、標準化されたロトロッド(rotorod)試験を用いて、マウスにお
いて検出される。処置されていない対照マウスは、６r.p.m.の回転棒(rotation
rod)に置かれたときに、長時間平衡を維持することができる。マウスが、３回連
続試験のそれぞれにおいて１分間平衡を維持できないことによって、神経学的欠
陥を証明することができる。

【００８０】位置感覚試験ならびに歩行および姿勢試験によって、行動毒性についてラット
が試験される。位置感覚試験においては、１方の後ろ脚がテーブルの端を越えて
優しく下げられ、その結果、神経を障害しているラットは、その脚を直ちに正常
位な位置に持ち上げて戻すのに失敗する。歩行および姿勢試験においては、神経
毒性は、円形またはジグザグ歩行、運動失調、脚の異常な広がり、異常姿勢、震
え機能亢進(tremor hyperactivity)、診査行動の欠如、嗜眠、昏迷またはカタレ
プシーにより示される。

【００８１】結果これらの評価（MES、scMETおよび毒性(TOX)）の結果を表１〜６にまとめる。M
ESおよびscMET試験については、データは、投与した化合物により保護された動
物の数／試験した動物の総数の形で示されている。毒性試験については、データ
は、毒性効果を示している動物の数／試験した動物の総数の形で示されている。
定性的データは、フルオロフェルバメート12（表１および2A）、フルオロモノカ
ルバメートフェルバメート13（表１および2B）ならびにフルオロジオキソ16（表
１および2C）について、かつ環状フェルバメート21（表５および6B）ならびに環
状モノカルバメート22（表５および6A）について得られた。より広範囲の定量的
データがまた、フルオロフェルバメート12についてマウス（表３）およびラット
（表４）で得られた。

【００８２】ここで提案した剤の多くは、フェルバメート１またはその代謝産物から誘導さ
れ、これらは、対応する親剤より大きい代謝安定性を有さなければならない。フ
ルオロフェルバメート12およびフルオロモノカルバメートフェルバメート13はそ
れぞれ、抗発作活性を示し、高レベルの毒性を示さないと思われる。驚くべきこ
とに、フルオロフェルバメート12は、フェルバメートより約５〜10倍活性が高い
とわかった。

【００８３】フルオロフェルバメート12は、30分間および４時間の両方で、30mg/kgにてMES
保護効果を示した（表１参照）。その投与量で、30分間の時点で幾らかの毒性効
果が観察されるが、４時間では観察されない。毒性横断時間(across time)は、3
00mg/kgの投与量まで生じない。表2Aに示されているように、フルオロフェルバ
メート12は、幾つかの時点にわたって30mg/kgにて最大限の保護を提供した。マ
ウスにおいてフルオロフェルバメート12について得られた定量的結果は、少なく
とも５の安全性比で、約20mg/kgのMES ED50を示した（表３参照）。ラットへの
フルオロフェルバメート12の経口投与について得られた結果は、500mg/kgまでの
投与量で毒性なしで、約３mg/kgのMES ED50を示した。最後に、フルオロフェル
バメート12のマウスへの経口投与は、218 mg/kgまでの投与量で毒性なしで、約2
7mg/kgのMES ED50を示した。

【００８４】フルオロモノカルバメートフェルバメート13は、マウスにおいて100mg/kgの投
与量で穏やかなMES保護を示した（表１参照）。経口による保護は、30mg/kgの投
与量レベルで、幾つかの異なる時点でみられる（表2B参照）。興味あることに、フルオロオキサジナン-ジオン16は、マウスにおいて不活性
であることがわかったが、ラットにおいて強い抗-発作活性を有する（表１およ
び2C）。環状MCF 22および環状フェルバメート21の仮の評価を表５、6Aおよび6B
にまとめる。これらの剤はまた、ラットモデルにおいて有効活性を示した。

【００８５】

【表１】

【００８６】

【表２】

【００８７】

【表３】

【００８８】

【表４】

【００８９】

【表５】

【００９０】

【表６】

【００９１】

【表７】

【００９２】

【表８】

【００９３】

【表９】

【００９４】議論提案された剤（スキームII）（そのうちの幾つかはフェルバメート１およびそ
の代謝産物の変異体である）のパネルは、フェルバメート１の使用に関連した特
有の有害反応の発生に注意を向けようとする。これらの剤のうちの５つの評価か
ら得られた結果は、これらの剤が抗発作活性を有することを証明し、かつこれら
の剤は今のところ、治療に関連する投与量では毒性を示さなかった。神経疾患を
標的にする剤について正常であるので、これらの剤は、高投与量でわずかなレベ
ルの神経毒性を誘発したが、妥当な治療指針を示すものと思われる。

【００９５】さらには、これらの剤、特にフルオロフェルバメート12およびフルオロモノカ
ルバメートフェルバメート13の活性は、フッ素化されていない親剤であるフェル
バメート１およびモノカルバメートフェルバメート２それぞれの活性とよく相関
する。環状-MCF 22および環状フェルバメート21の評価はまた、これらの剤が発
作の弱化に有効であることを証明した。

【００９６】結論フルオロフェルバメート12、フルオロモノカルバメートフェルバメート13、フ
ルオロオキサジナン-ジオン16、環状-MCF 22および環状フェルバメート21の評価
が成功したので、剤のこのパネルは、フェルバメートの使用で観察された有害反
応の発生と関連し得る推定の毒性種の形成を除外するように設計された新しい種
類の神経-活性存在を示す。全体としてとらえると、剤のこの提案されたパネル
は、推定された関連する代謝プロセス、すなわちアトロパアルデヒドへの代謝お
よびチトクロームP450代謝ファミリーのあるメンバーによる代謝に注意を向ける
。

【００９７】実施例４．海馬キンドリングモデル(Hippocampal Kindling Model) 海馬キンドリングモデルは、焦点の発作の発現および獲得の両方に影響を与え
る化合物の能力を評価するために使用することができる。ロスマン(Lothman)お
よびウィリアムソン(Williamson)（ロスマン(Lothman)、1994）によって記載さ
れた海馬キンドリングパラダイム(hippocampal kindling paradigm)は、薬剤の
一時の効果を１種類の動物で評価させる。

【００９８】この方法は、大人のオスSprague-Dawleyラットの腹部の海馬における双極電極
の手術による配置を必要とする。一日おきに30分ごとに６時間（１日当たり12刺
激）で、全部で60刺激（５日間刺激）にて送られた、50Hzの、10秒連続の1msの
２相200μAパルスからなる刺激を用いることによって、段階５の行動的発作が生
じる。候補の抗痙攣活性を評価する前に、最大より上の(supramaximal)刺激から
なる、薬剤を用いない対照期間を記録して、段階５の一般化された発作の安定性
を検証する。

【００９９】次に、候補化合物の単一投与量を、最後の対照刺激の15分後に腹腔内投与する
。薬剤の抗痙攣活性を、試験物質の投与の15分後に開始して、30分毎に３〜４時
間評価する。各刺激後に、個々のラシーヌ(Racine)発作スコアおよび後放出(aft
erdischarge)持続時間を記録する。４〜５日間の薬剤なし-および刺激-の日の後
の薬剤試験においてまた、ラットが使用される。

【０１００】キンドリング獲得の研究においては、薬剤が、電極を移植されたラットにおい
てキンドリングされた状態の展開を阻止するそれらの能力について試験される。
キンドリングの進行中および電気的刺激の前の所定の時間に、候補化合物が投与
される。投与間隔および薬剤の投与量は、急性の発作発現の研究において観察さ
れた化合物の活性に基づく。薬剤で処置した動物からの結果は、塩水処置したラ
ットと比較される。

【０１０１】この処置は、刺激の日２日、３日、４日および５日に繰り返される。１週間の
刺激なしの間隔後に、キンドリング獲得への前薬剤処置の効果が、キンドリング
刺激プロトコールを用いて動物を試すことによって査定される。次に、標準化さ
れたキンドリングプロトコールが、３日の「再試験日」中に各ラットについて記
録された行動発作スコアおよび後放出持続時間を用いて行われる。塩水処置した
ラットは、１週間の刺激なしの期間後の最初の刺激で完全にキンドリングされる
。活性化合物は、塩水対照ラットと比べて行動スコアおよび後放出持続時間を下
げることが予想される。キンドリングされた応答の獲得における遅延の抑制また
は延長は、候補化合物が発作の展開を阻止するのに効力があり得ることを示すこ
とができる。そのような化合物は、「抗癲癇誘発」と呼ぶことができる。

【０１０２】結果フルオロフェルバメート12についてのキンドリングされた結果を表７に示す。
100mg/kgの投与量では、対応する後放出持続時間の減少と共に、発作スコアに有
意の低下が観察された。

【０１０３】

【表１０】

【０１０４】

【表１１】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｐ 9/10 25/08 25/08 Ｃ０７Ｄ 263/20 Ｃ０７Ｄ 263/20 265/10 265/10 (31)優先権主張番号６０／１３７，２０４ (32)優先日平成11年６月２日(1999．6．2) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ミラー，トーマスエー．アメリカ合衆国，ニューヨーク 10027，ニューヨーク，クレアモントアベニュ 150 ＃５−ジー (72)発明者トンプソン，チャールズディー．アメリカ合衆国，マサチューセッツ 02478，ベルモント，ビーチストリート 83 ＃２Ｆターム(参考） 4C056 AA01 AA02 AB01 AC02 AD01 AE02 BA03 BB04 BC01 DA03 DB04 DC01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC69 BC72 MA01 MA04 MA52 MA55 MA65 NA14 ZA06 ZA39 ZA40 ZC41 4C206 AA01 AA02 AA03 HA23 MA01 MA04 MA72 MA75 MA85 NA14 ZA06 ZA39 ZA40 ZC41 4H006 AA01 AA03 AB21 RA08 RA10 RA54

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の式：【化１】（ここで、R₁、R₇およびR₈は独立して、H、ハロゲン、アルキル、ハロアルキ
ルおよびヒドロキシからなる群より選択され； R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり；そして R₄はヒドロキシまたはカルボニルである）からなる群より選択される化合物。
【請求項２】一般構造：【化２】（ここで、R₁、R₇およびR₈は独立して、H、ハロゲン、アルキル、ハロアルキ
ルおよびヒドロキシからなる群より選択され； R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり；そして R₄はヒドロキシまたはカルボニルである）を有する請求項１記載の化合物。
【請求項３】 R₇およびR₈がHであり；R₁がHまたはFであり；そしてR₄がヒ
ドロキシまたはカルボニルである請求項２記載の化合物。
【請求項４】一般構造：【化３】（ここで、R₁はハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキシからなる群より選択
され； R₇およびR₈は独立して、H、ハロゲン、アルキル、ハロアルキルおよびヒドロ
キシからなる群より選択され；そして R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である）を有する請求項１記載の化合物。
【請求項５】 R₇およびR₈がHであり；R₁がFであり；そしてR₃がヒドロキシ
または-OCONH₂である請求項４記載の化合物。
【請求項６】一般構造：【化４】（ここで、R₁はH、ハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキシからなる群より
選択され；そして R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である）を有する請求項１記載の化合物。
【請求項７】 R₁がHであり；そしてR₃が-OCONH₂である請求項６記載の化合
物。
【請求項８】一般構造：【化５】（ここで、R₁およびR₇は独立して、H、ハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロ
キシからなる群より選択され；そして R₄はヒドロキシまたはカルボニルである）を有する請求項１記載の化合物。
【請求項９】 R₇がHである請求項８記載の化合物。
【請求項１０】 R₁がHまたはFである請求項６または９記載の化合物。
【請求項１１】神経疾患にかかっている患者の治療方法であって、次の式
：【化６】（ここで、R₁、R₇およびR₈は独立して、H、ハロゲン、アルキル、ハロアルキ
ルおよびヒドロキシからなる群より選択され； R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり；そして R₄はヒドロキシまたはカルボニルである）からなる群より選択される化合物を含む組成物を投与する段階を含む該方法。
【請求項１２】組成物が経口投与される請求項１１記載の方法。
【請求項１３】組成物の単位投与量形態が、約0.1mg/kg〜約１g/kgの該化
合物を含む請求項１２記載の方法。
【請求項１４】該化合物が、一般構造：【化７】（ここで、R₁はH、ハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキシからなる群より
選択され；そして R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である）を有する請求項１３記載の方法。
【請求項１５】 R₁がHであり；そしてR₃が-OCONH₂である請求項１４記載の
方法。
【請求項１６】局所性低酸素症状態から生じた組織損傷にかかっている患
者を治療する方法であって、【化８】（ここで、R₁、R₇およびR₈は独立して、H、ハロゲン、アルキル、ハロアルキ
ルおよびヒドロキシからなる群より選択され； R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり；そして R₄はヒドロキシまたはカルボニルである）からなる群より選択される化合物を含む組成物を投与する段階を含む該方法。
【請求項１７】該化合物が、一般構造：【化９】（ここで、R₁はH、ハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキシからなる群より
選択され；そして R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である）を有する請求項１６記載の方法。
【請求項１８】 R₁がHであり；そしてR₃が-OCONH₂である請求項１７記載の
方法。
【請求項１９】局所性低酸素症状態が、大脳虚血により引き起こされる請
求項１６記載の方法。
【請求項２０】局所性低酸素症状態が、心筋虚血により引き起こされる請
求項１６記載の方法。
【請求項２１】組成物が経口投与される請求項１６記載の方法。
【請求項２２】組成物が非経口投与される請求項１６記載の方法。
【請求項２３】組成物の単位投与量形態が、約1.0mg/kg〜約１g/kgの該化
合物を含み、組成物は静脈内投与される請求項２２記載の方法。
【請求項２４】次の式：【化１０】（ここで、R₁、R₇およびR₈は独立して、H、ハロゲン、アルキル、ハロアルキ
ルおよびヒドロキシからなる群より選択され； R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂であり；そして R₄はヒドロキシまたはカルボニルである）からなる群より選択される化合物ならびに製薬上許容される担体を含む薬剤組成
物。
【請求項２５】該化合物が、一般構造：【化１１】（ここで、R₁はH、ハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキシからなる群より
選択され；そして R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である）を有する請求項２４記載の組成物。
【請求項２６】 R₁がハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキシからなる群
より選択される請求項２５記載の組成物。
【請求項２７】 R₁がHであり；そしてR₃が-OCONH₂である請求項２５記載の
組成物。
【請求項２８】該化合物が、一般構造：【化１２】（ここで、R₁およびR₇は独立してH、ハロゲン、ハロアルキルおよびヒドロキ
シからなる群より選択され；そして R₃はヒドロキシまたは-OCONH₂である）を有する請求項２４記載の組成物。
【請求項２９】 R₇がHである請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】 R₁がHまたはFである請求項２５、２８または２９のいずれ
か１項記載の組成物。