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JP2002518460A - プレターゲッティング診断およびプレターゲッティング治療のための二重特異性抗体の使用 - Google Patents

プレターゲッティング診断およびプレターゲッティング治療のための二重特異性抗体の使用

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JP2002518460A
JP2002518460A JP2000555637A JP2000555637A JP2002518460A JP 2002518460 A JP2002518460 A JP 2002518460A JP 2000555637 A JP2000555637 A JP 2000555637A JP 2000555637 A JP2000555637 A JP 2000555637A JP 2002518460 A JP2002518460 A JP 2002518460A
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JP
Japan
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fragment
host cell
antibody
regulatory region
bispecific
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JP4113670B2 (ja
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ハンセン，ハンス・ジェイ
グリフィス，ゲイリー・エル
リュン，シュイ‐オン
マクブライド，ウィリアム・ジェイ
クー，ツェンシン
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イムノメディクス， インコーポレイテッド
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する二重特異性抗体または抗体フラグメントに関する。ターゲッティング可能な複合体は、少なくとも１つの前記二重特性抗体または抗体フラグメントによって認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むか保有するキャリア部分を含む。ターゲッティング可能な複合体は、１つ以上の治療薬、診断薬または酵素をさらに含む。本発明は、二重特性抗体または抗体フラグメントを作製するための構築物および方法ならびにその使用法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、例えば、放射免疫治療（ＲＡＩＴ）において使用される免疫学的試
薬、および例えば放射免疫診断（ＲＡＩＤ）および核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）
における診断的用途に関する。特に、本発明は、標的組織に特異的に結合する少
なくとも１つのアームとターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少な
くとも１つの他のアームとを有する二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）および二重特異
性抗体フラグメント（ｂｓＦａｂ）に関する。さらに、本発明は、特定の免疫原
に対して惹起されたモノクローナル抗体、標的組織に特異的に結合する少なくと
も１つのアームとターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも
１つの他のアームとを有するヒト化およびキメラ二重特異性抗体および抗体フラ
グメント、このような抗体および抗体フラグメントをコードするＤＮＡ、ならび
にＤＮＡ発現用のベクターに関する。米国特許仮出願番号第６０／０９０，１４
２号および米国特許出願番号第６０／１０４，１５６号は本発明中で包含されて
いるものの一部が開示されており、これらはその全体が参照することによって本
明細書にそのまま組み込まれるものとする。
【０００２】 （関連技術） 癌治療および癌診断のアプローチは、抗体または抗体フラグメントの罹患組織
への指向に関し、これらの抗体または抗体フラグメントにより、診断薬または治
療薬が罹患部位を標的とすることができる。調査中のこの方法論に対する１つの
アプローチには、標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームおよび低
分子量のハプテンに特異的に結合する少なくとも１つの他のアームを有する二重
特異性モノクローナル抗体（ｂｓＡｂ）の使用に関する。この方法では、ｂｓＡ
ｂを投与して標的に局在化させ、正常な組織をクリアリングする。しばらくの間
、ｂｓＡｂの第２の特異性によって認識され、元の標的にも局在する、放射性標
識された低分子量のハプテンが得られる。
【０００３】 ｂｓＡｂと組み合わせて使用した低分子量ハプテンは、多数の特定の画像化お
よび治療用途があるにもかかわらず、可能な各適用のための各ｂｓＡｂの調製は
実用的ではない。さらに、ｂｓＡｂ／低分子量ハプテン系はいくつかの他の問題
を克服しなければならない。第１に、低分子量のハプテンに結合するｂｓＡｂの
アームは、ｂｓＡｂと結合した場合、低分子量のハプテンが生きている系を迅速
にクリアリングするように設計されているので、高い親和性で結合されなければ
ならない。第２に、非ｂｓＡｂ結合低分子ハプテンは、非標的組織の取り込みお
よび保持を回避するために、生きている系を実際にクリアリングする必要がある
。第３に、検出薬および／または治療薬は、使用されたｂｓＡｂプロトコール内
でのその使用にわたり低分子ハプテンと会合したままでなければならない。
【０００４】 このアプローチで目的とされるのは、適切な二重特異性のＡｂを用いたキレー
ト剤および金属−キレート複合体を癌へ指向するｂｓＡｂである。使用されたキ
レート剤および金属−キレート複合体は、しばしば放射性であり、放射免疫イメ
ージング用に放射性核種（57Ｃｏ（Ｇｏｏｄｗｉｎらに付与された米国特許第４
，８６３，７１３号）、111Ｉｎ（Ｂａｒｂｅｔらに付与された米国特許第５，
２５６，３９５号および同第５，２７４，０７６号、Ｇｏｏｄｗｉｎら、Ｊ．Ｎ
ｕｃｌ．Ｍｅｄ．、３３、１３６６〜１３７２、１９９２、Ｋｒａｎｅｎｂｏｒ
ｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（増補版）、５５、５８６４ｓ〜５８６７ｓ、１
９９５、およびＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（増補版）、８０、２３９０〜２３９７
、１９９７）、68Ｇａ（Ｂｏｄｅｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．
、６、３７３〜３７９、１９９５およびＳｃｈｕｈｍａｃｈｅｒら、Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓ．、５５、１１５〜１２３、１９９５）など）が用いられる。キレー
ト剤および金属−キレート複合体に対してＡｂは惹起されたので、それらが本来
惹起された複合体に顕著に特異性を有する。実際、Ｂｏｄｅｎらに記載のｂｓＡ
ｂは、キレート剤および金属−キレート複合体の鏡像異性混合物のうちの１つの
鏡像異性体に特異性を有する。この顕著な特異性は、放射免疫治療（ＲＡＩＴ）
に有用な90Ｙおよび213ＢｉならびにＭＲＩに有用なＧｄなどの他の核種が別の
用途で利用可能な試薬と容易に交換できないという１つの点で不利であることが
証明されている。結果として非金属の131Ｉは、第２の標的ステップにおいて131 Ｉ標識インジウム−金属−キレート複合体の使用によるＲＡＩＴ用に採用されて
いる。本方法の第２の不都合は、抗体が診断用および治療用に設計された全ての
薬剤に対して惹起することが必要なことである。
【０００５】 従って、罹患組織に指向し、その後、投与されたターゲッティング可能な診断
または治療複合体に特異的にに結合することができる免疫学的薬物が必要とされ
ている。
【０００６】 （発明の目的） 本発明の１つの目的は、広範な種々の診断用および治療用に改変することがで
きる標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、ターゲッティング
可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する二重特
異性抗体および抗体フラグメントを提供することである。
【０００７】 本発明の他の目的は、二重特異性抗体とターゲッティング可能な複合体との組
み合わせを用いた診断および治療のプレターゲッティング法、二重特異性の作製
法、ならびにこのような方法に使用するキットを提供することである。
【０００８】 上記の目的を達成するために、本発明により１つまたは複数の診断薬または治
療薬を送達することができるターゲッティング可能な複合体に対してｂｓＡｂを
惹起するのに有利であることを発見した。本技術の利用により、キレート剤、金
属−キレート複合体、治療薬または診断薬の性質を、新規の各適用のために新規
にｂｓＡｂが惹起することなく異なる適用に適応するように変化させることがで
きる。さらに、本アプローチの使用により、２つまたはそれ以上の異なるキレー
ト剤、金属−キレート複合体または治療薬を、本発明のｂｓＡｂと使用すること
ができる。
【０００９】 （発明の要旨） 本発明は、標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームおよびターゲ
ッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームを有す
る二重特異性抗体または抗体フラグメントに関する。
【００１０】 １つの実施形態では、本発明は、患者の罹患組織の治療方法または同定方法で
あって、 （Ａ）標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、ターゲッティ
ング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する二
重特異性抗体または抗体フラグメントを前記患者に投与するステップと、 （Ｂ）任意選択的に、クリアリング組成物を前記患者に投与し、前記組成物に
局在していない抗体または抗体フラグメントを循環からクリアリングするステッ
プと、 （Ｃ）前記少なくとも１つの二重特異性抗体または抗体フラグメントの他のア
ームによって認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むか担持するキャリア
部分と、１以上の結合した治療薬、診断薬または酵素とを含む第１のターゲッテ
ィング可能な複合体を前記患者に投与するステップと、 （Ｄ）前記ターゲッティング可能な複合体が酵素を含む場合には、 １）前記酵素がプロドラッグを標的部位で薬物に変換することができる場合、
プロドラッグ、または、 ２）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果、標的部位で前
記薬物の毒性が増加し得る場合、前記患者中で解毒されて毒性の低い中間体を形
成することができる薬物、または、 ３）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果標的部位で前記
薬物の毒性が増加し得る場合、天然の過程によって前記患者中で活性化され、毒
性の低い中間体に変換されることによって解毒に供されるプロドラッグ、または
、 ４）前記酵素が標的部位で前記プロドラッグを薬物に変換することができる場
合、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つの他のア
ームによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを含むかまたは
担持するキャリア部分とプロドラッグとを含む、第２のターゲッティング可能な
複合体を前記患者に投与するステップと をさらに包含する方法を提供する。
【００１１】 別の実施形態では、本発明は、患者の罹患組織の治療または同定に有用なキッ
トであって、 （Ａ）標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームとターゲッティン
グ可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する二重
特異性抗体または抗体フラグメントと、 （Ｂ）前記少なくとも１つの二重特異性抗体または抗体フラグメントによって
認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むかまたは担持するキャリア部分と
、１以上の結合した治療薬、診断薬または酵素を含む第１のターゲッティング可
能な複合体と、 （Ｃ）任意選択的に、局在していない抗体および抗体フラグメントのクリアリン
グに有用なクリアリング組成物と、 （Ｄ）任意選択的に、前記第１のターゲッティング可能な複合体が酵素を含む場
合、 １）前記酵素がプロドラッグを標的部位で薬物に変換することができる場合、
プロドラッグ、または、 ２）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果標的部位で前記
薬物の毒性が増加し得る場合、前記患者中で解毒されて毒性の低い中間体を形成
することができる薬物、または、 ３）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果標的部位で前記
薬物の毒性が増加し得る場合、天然の過程によって前記患者中で活性化され、毒
性に低い中間体に変換されることによって解毒に供されるプロドラッグ、または
、 ４）前記酵素が標的部位で前記プロドラッグを薬物に変換することができる場
合、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つの他のア
ームによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを含むかまたは
担持するキャリア部分およびプロドラッグを含む、第２のターゲッティング可能
な複合体 を含むキットを提供する。
【００１２】 本発明の別の実施形態は、このような抗体または抗体フラグメントをコードす
るＤＮＡ構築物を提供することである。特に、ターゲッティング可能な複合体へ
の反応性および罹患組織に関する反応性の有利な性質を提供する可変部を産生す
るＤＮＡ構築物を提供する。本発明のこの態様によれば、標的組織に特異的に結
合する少なくとも１つのアームと、ターゲッティング可能な複合体に特異的に結
合する少なくとも１つの他のアームとを有する二重特異性抗体または抗体フラグ
メントを宿主中で産生することができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物
であって、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記宿主細胞中で機能的
な転写開始調節領域、前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、前記二重特
異性抗体または抗体フラグメントをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記宿主細
胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記二重特異性抗体または
抗体フラグメントは前記調節領域の調節下である、組換えＤＮＡ構築物が提供さ
れる。
【００１３】 本発明の別の実施形態は、組換え技術による抗体または抗体フラグメントの調
製法を提供する。本発明のこの態様によれば、標的組織に特異的に結合する少な
くとも１つのアームと、ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少な
くとも１つの他のアームとを有する二重特異性抗体または抗体フラグメントの調
製方法であって、 （Ａ）宿主細胞に上記の組換えＤＮＡ構築物を移入するステップと、 （Ｂ）前記細胞を増殖させ、前記抗体または抗体フラグメントを単離するステ
ップと を含む調製方法が提供される。
【００１４】 本発明の別の実施形態では、標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのア
ームとターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他の
アームとを有する二重特異性融合タンパク質の調製方法であって、 （１）（Ａ）前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントを宿主中で産生さ
せることができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記構築物
は、５’から３’の転写方向で、前記宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域、
前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、軽鎖抗体フラグメントに連結した
ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記宿主細胞中で機能的な転写およ
び翻訳終止調節領域を含み、前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントは前
記調節領域の調節下である組換えＤＮＡ構築物を前記宿主細胞に移入するステッ
プと、 （Ｂ）（Ａ）における前記軽鎖抗体フラグメントに相補的で、前記軽鎖抗体フ
ラグメントに会合する場合、結合部位が前記標的組織に特異的なＦａｂフラグメ
ントを形成するＦｄフラグメントを前記宿主細胞中に産生することができる発現
カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記構築物は、５’から３’の転
写方向で、前記宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域、前記宿主細胞中で機能
的な翻訳開始調節領域、ＦｄフラグメントをコードするＤＮＡ配列、ならびに前
記宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記Ｆｄフラグメ
ントは前記調節領域の調節下である組換えＤＮＡ構築物を前記宿主細胞に同時移
入するステップと、 （Ｃ）前記細胞を増殖させ、前記二重特異性融合タンパク質を単離するステッ
プと、 （２）（Ａ）前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントを前記第１の宿主中
で産生させることができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前
記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記第１の宿主細胞中で機能的な転写
開始調節領域、前記第１の宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、軽鎖抗体フ
ラグメントに連結したｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記第１の宿
主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記二重特異性融合タ
ンパク質のフラグメントは前記調節領域の調節下である組換えＤＮＡ構築物を前
記第１の宿主細胞に移入するステップと、 （Ｂ）（２）（Ａ）における前記軽鎖抗体フラグメントに相補的で、前記軽鎖
抗体フラグメントに会合する場合、結合部位が前記標的組織に特異的なＦａｂフ
ラグメントを形成する軽鎖抗体フラグメントを前記第２の宿主細胞中に産生する
ことができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記構築物は、
５’から３’の転写方向で、前記第２の宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域
、前記第２の宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、Ｆｄフラグメントをコー
ドするＤＮＡ配列、ならびに前記第２の宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終
止調節領域を含み、前記Ｆｄフラグメントは前記調節領域の調節下である組換え
ＤＮＡ構築物を前記第２の宿主細胞に移入するステップと、 （Ｃ）前記第１の宿主細胞および前記第２の宿主細胞を増殖させるステップと
、 （Ｄ）任意選択的に、前記二重特異性融合タンパク質フラグメントおよび前記
Ｆｄフラグメントを単離するステップと、 （Ｅ）前記フラグメントを組み合わせて二重特異性融合タンパク質を産生し、
前記二重特異性融合タンパク質を単離するステップと を含む調製方法が提供される。
【００１５】 種々の宿主細胞を使用して二重特異性抗体または抗体フラグメントを調製する
ことができ、宿主細胞には、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、および細菌細
胞が含まれるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、本方法では哺乳
動物の接合体を利用し、組換えＤＮＡ構築物の移入により、二重特異性抗体また
は抗体フラグメントを産生することができるトランスジェニック動物を産生する
。
【００１６】 本発明の更なる実施形態は、光力学的治療における本発明の抗体または抗体フ
ラグメントの使用に関する。
【００１７】 本発明の更なる実施形態は、ポジトロン放出断層撮影（positron-emission to
mography; ＰＥＴ）用の放射免疫イメージングにおける本発明の抗体または抗体
フラグメントの使用に関する。
【００１８】 本発明の更なる実施形態は、単一光子放出用の放射免疫イメージングにおける
本発明の抗体または抗体フラグメントの使用に関する。
【００１９】 本発明の更なる実施形態は、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）における本発明の抗
体または抗体フラグメントの使用に関する。
【００２０】 本発明の更なる実施形態は、ホウ素中性子捕獲療法（boron neutron capture
therapy; ＢＮＣＴ）における本発明の抗体または抗体フラグメントの使用に関
する。
【００２１】 本発明の更なる態様、特徴、および利点を以下に記載し、その一部が本明細書
から自明であるか、本発明の実施によって確認されるであろう。本発明の実施形
態および利点は、上述の特許請求の範囲に特に指摘の手段および組み合わせによ
って実施して得ることができる。
【００２２】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 本発明は、標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、ターゲッ
ティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有す
る二重特異性抗体または抗体フラグメントを提供する。ターゲッティング可能な
複合体は、少なくとも１つの前記二重特性抗体または抗体フラグメントによって
認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むかまたは担持するキャリア部分を
含む。好ましい実施形態では、エピトープはハプテンである。別の実施形態では
、エピトープは、キャリアの一部である。例として、認識可能なハプテンには、
キレート剤（ＤＴＰＡなど）、フルオレセインイソチオシアネート、ビタミンＢ
１２、および特定の抗体を惹起することができる他の部分が含まれるが、これら
に限定されない。キャリア部分はまた、罹患組織の治療または同定に有用な種々
の薬剤に結合させることができる。例として、結合剤には、金属−キレート複合
体、薬物、毒素および他の効果分子（サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン
、免疫調節物質、放射線増感剤、アスパラギナーゼ、カルボラン、および放射性
ハロゲンなど）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、プロドラッグの
活性化または薬物の標的特異的毒性の増大に有用な酵素を、キャリアに結合させ
ることができる。従って、ターゲッティング可能な複合体を特異的に結合する少
なくとも１つのアームを有するｂｓＡｂの使用により、各適用について新規のｂ
ｓＡｂの惹起なしに治療および診断を行うことができる。
【００２３】 本発明は、抗体および抗体フラグメントを含む。抗体フラグメントは、抗体の
抗原結合部分であり、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆ（ａｂ）2、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどであ
る。抗体フラグメントは、無傷の抗体によって認識される抗原と同一の抗原と結
合する。例えば、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体フラグメントは、ＣＤ２２のエ
ピトープと結合する。本発明のｂｓＡｂには、ＩｇＧ×ＩｇＧ、ＩｇＧ×Ｆ（ａ
ｂ’）2、ＩｇＧ×Ｆａｂ’、ＩｇＧ×ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）2×Ｆ（ａｂ’） 2 、Ｆａｂ’×Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’×Ｆａｂ’、Ｆａｂ’×ｓｃＦｖ、およ
びｓｃＦｖ×ｓｃＦｖ ｂｓｍａｂが含まれるが、これらに限定されない。また
、ｓｃＦｖ×ＩｇＧ×ｓｃＦｖおよびＦａｂ’×ＩｇＧ×Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ×
Ｆ（ａｂ’）2×ｓｃＦｖおよびＦａｂ’×Ｆ（ａｂ’）2×Ｆａｂ’などの種も
含まれる。最も好ましくは、一方または両方のｍａｂのＩｇＧまたはＦ（ａｂ’
）2上の部位特異的付着部位（操作された炭水化物または操作されたもしくは遊
離チオール基など）を利用することができる。これらのｍａｂが二量体であるの
で、これらを第２のｍａｂの２つの分子と結合させることができる。例えば、操
作された軽鎖炭水化物を有する抗ＣＥＡ Ｆ（ａｂ’）2ｍＡｂを酸化し、ヒド
ラジド−マレイミド架橋剤を用いて各軽鎖あたり少なくとも１つのペンダントマ
レイミド基を有する誘導化抗ＣＥＡ Ｆ（ａｂ’）2に変換することができる。
この種を少なくとも１：２のモル比で抗キレートＦａｂ’−ＳＨと結合して、キ
レート−Ｆａｂ’×抗ＣＥＡ−Ｆ（ａｂ’）２−抗キレートＦａｂ’複合体を産
生させる。得られたｂｓＡｂは、標的組織およびターゲッティング可能な複合体
に関して二価である。本開示における用語「ｂｓＡｂ」の使用には、二重特異的
モノクローナル抗体および抗体フラグメントが含まれることがさらに理解される
。
【００２４】 用語「抗体フラグメント」には、特定の抗原との結合によって複合体を形成す
る抗体のように作用する任意の合成または遺伝子操作されたタンパク質も含まれ
る。例えば、抗体フラグメントには、重鎖および軽鎖の可変部からなる単離フラ
グメントの「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖および重鎖可変部がペプチドリンカー（
「ｓＦｖタンパク質」）によって連結されている組換え一本鎖ポリペプチド分子
、および超可変部を模倣するアミノ酸残基からなる最小の認識単位が含まれる。
【００２５】 ターゲッティング可能な複合体は多様な構造であり得るが、十分な免疫応答を
惹起するためだけでなくｂｓＡｂターゲッティング方法の範囲内で使用する場合
はin vivoで迅速にクリアリングされるように選択される。強い免疫応答の惹起
には疎水性の薬剤が最良であるのに対し、親水性の薬剤は迅速なin vivoでのク
リアリング用に好ましい。従って、疎水性および親水性との間のバランスを確立
する必要がある。これは、多くの有機部分の固有な疎水性を相殺する親水性キレ
ート剤の使用に一部依存して、好ましいアプローチを確立することができる。ま
た、溶液の反対の性質を有するターゲッティング可能な複合体のサブユニット（
例えば、ペプチド）を選択することができ、あるものは疎水性であり、またある
ものは親水性であるアミノ酸を含む。ペプチド以外に、炭水化物を使用すること
ができる。さらに、ターゲッティング可能な複合体は、患者の循環時間を増加さ
せるためにＰＥＧ誘導体を含むことができる。
【００２６】 キレート剤などの他の部分とも結合する場合、１つのアミン残基、好ましくは
２〜１０アミノ酸残基を含むキャリアを使用することができる。例として、ビス
−ＤＴＰＡ−リジンおよびビス−ＤＴＰＡ−ジアミンなどの改変アミノ酸が含ま
れる。これらの薬剤は、標的化される分子に共有結合することができる。キャリ
ア部分のハプテン部分は、好ましくは、キレート中の金属イオンを含めて１００
，０００ダルトン以下、遊離には約２０，０００ダルトン未満、１０，０００ダ
ルトン、または５，０００ダルトンの分子量を有する低分子量の結合体であるべ
きである。例えば、公知のペプチドジインジウム−ＤＴＰＡ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（
ＤＴＰＡ）−ＯＨを使用して分子のインジウム−ＤＴＰＡ部分に対する抗体を作
製している。しかし、非インジウム含有分子の使用および適切なスクリーニング
ステップにより、チロシル−リジンジペプチドに対する新規のＡｂを作製するこ
とができる。通常、抗原ペプチドは、４つまたはそれ以上の残基（ペプチドＡｃ
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2など）を
有する。さらに、非金属含有ペプチドを免疫原として使用し、得られたＡｂをＰ
ｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓバックボーンに対する反応性についてスクリーニ
ングした。 １つの実施形態では、通常のアミノ酸（例えば、Ｄ−アミノ酸）を、最終的な
ｂｓＡｂ／ターゲッティング可能な複合体システムに使用した場合、ターゲッテ
ィング可能な複合体を認識するｂｓＡｂのアームが完全に特異的であることを確
証するためにバックボーンに組込む。
【００２７】 好ましい実施形態では、使用した免疫原は、最終的なｂｓＡｂ／ターゲッティ
ング可能な複合体系で使用される場合、二価を維持する反復単位を有する。この
ような免疫原は、式Ｘ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓ
（Ｘ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨのペプチドであり、Ｘは後にキ
レートと置換することができる遊離アミノ基である。Ｘはまた、アミノ酸基、キ
レート剤、および金属−キレート複合体からなる群から選択される部分を示す。
チオール基もまた、アミノ基の代りに免疫原性ペプチド（例えば、Ａｃ−Ｃｙｓ
（Ｙ）−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｃｙｓ（Ｙ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔ
ｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨであり、Ｙは遊離のチオール基である）にシステイニル
残基を組込むことによるその後のキレートカップリングに使用することができる
。Ｙもまた、保護チオール基、チオール結合キレート剤、および金属−キレート
剤からなる群から選択される部分を示し得る。メチル誘導化チオール基を含む切
断ペプチドは、抗体産生用である。その後、ペプチドを、キレート置換反応のた
めにトリチルまたはアセトアミドメチルなどの保護基を取り除いて調製すること
ができる。
【００２８】 免疫原として使用されるペプチドは、固相支持体および標準的な連続的脱保護
およびカップリングを用いた自動ペプチド合成機によって便利に合成される。ペ
プチド中の遊離のアミノ基（これは、後にキレート複合体として使用される）を
、小さな有機部分で（例えば、アセチル化）都合よくブロックする。その後、例
えば、その集合樹脂から切断されたＡｃ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇ
ｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨを、活性エ
ステル／無水物法を用いて１つのカルボキシル部分によって活性化し、複数の単
位中でＫＬＨとカップリングさせる。免疫原として使用するために、ジシステイ
ニル含有ペプチドＡｃ−Ｃｙｓ（Ｙ）−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−
Ｃｙｓ（Ｙ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨを、メチル化によって保
護されたチオール基を有する樹脂から除去し、Ａｃ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｄ−Ｔｙ
ｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒ
ｐ−ＯＨを生成する。これにより、同一の標準的な方法を用いてＫＬＨカップリ
ングを活性化することができる。ペプチドをｂｓＡｂ系内での後の使用のために
調製される場合、これらは、in vivoでのカルボキシペプチド活性の阻害のため
に樹脂から都合よく切断されて対応するＣ末端アミドを生成する。
【００２９】 本発明の１つの実施形態によれば、ターゲッティング可能な複合体は、炭水化
物を含み得る。適切なこのような炭水化物は、６つの糖単位長中に２つの炭水化
物鎖を含む。ターゲッティング可能な複合体はまた、重合炭水化物（デキストラ
ンなど）を含み得る。
【００３０】 本発明の別の実施形態では、ターゲッティング可能な複合体のハプテンは、公
知の免疫原性部分（例えば、公知のハプテン）を含む。公知のハプテン（例えば
、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ））の使用により、抗体のター
ゲッティング可能な複合体への親和性がより高くなる。これは、抗体がハプテン
に対して惹起されて起こることが公知であるので、本発明の抗体に組込むことが
できる。従って、ターゲッティング可能な複合体と付着キレート剤または金属−
キレート複合体との結合により、本発明の抗体または抗体フラグメントに対して
親和性が高くなるであろう。ターゲッティング可能な複合体において置換される
ハプテンの別の例には、ビタミンＢ１２が含まれる。ビタミンＢ１２の使用は、
抗Ｂ１２Ｍａｂが公知であり、遊離の血清Ｂ１２が存在せず、抗体への非常に高
い親和性が示され得るので、都合が良い。ハプテンを含むターゲッティング可能
な複合体の例として、Ａｃ−Ｃｙｓ−（Ｓ−Ｂｚ−ＤＴＰＡ）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
−（Ｎ−ＦＩＴＣ）−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−（Ｓ−Ｂｚ−ＤＴＰＡ）ＮＨ2が含まれ
る。キレート剤または金属陽イオンとのキレートはまた、抗体を惹起するハプテ
ンとして機能し得る。ターゲッティング可能な複合体に結合するハプテンの別の
例としてビオチンが含まれる。
【００３１】 さらに好ましい実施形態では、画像化および／または治療に使用される放射性
核種を、元の免疫原の設計物に組込むことができる。例えば、Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｄ
−ｉｏｄｏ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｇｌｙ−Ｄ−
ｉｏｄｏ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨを、ヨウ素含有ペプチドと反応するが同一
のペプチドの非ヨウ素化形態（すなわち、Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒ
ｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ）で
は反応しない抗体の惹起を目的とする免疫原として使用する。前者が後者のＡｂ
に対する特異性を超えることは、標準的なスクリーニング技術を用いて示すこと
ができる。この実施形態で特に重要なのは、Ａｂを作製するための抗原としての
アスタチン置換ペプチドの使用およびそれによるＲＡＩＴ用のα粒子放出アスタ
チン核種で置換されたペプチドを認識するｂｓＡｂである。他の実施形態では、
任意のハロゲンを元の免疫原（例えば、18Ｆ、臭素を含む）およびヨウ素の核種
（例えば、124Ｉおよび123Ｉ）の設計物に組込むことができる。同様に、他の非
金属（例えば、32Ｐ、33Ｐ、および35Ｓ）も使用することができる。
【００３２】 ペプチドバックボーンに対する新規のＡｂを、Ａｂ産生用の周知の方法によっ
て作製する。例えば、フロイントの完全アジュバント中に（ペプチド）n−ＫＬ
Ｈ（ｎ＝１〜３０）などの免疫原を注入し、その後フロイントの完全アジュバン
ト中に懸濁したその免疫原２回注入し、抗原のｉ．ｖ．追加免疫の３日後に脾臓
細胞を回収することによって作製した。次いで、回収した脾臓細胞を、Ｓｐ２／
０−Ａｇ１４骨髄腫細胞と融合し、得られたクローンの培養上清を、直接結合Ｅ
ＬＩＳＡを用いて抗ペプチド反応性について分析する。作製したＡｂの詳細な特
異性を、元の免疫原のペプチドフラグメントを用いて分析することができる。こ
れらのフラグメントを、自動化ペプチド合成機によって容易に調製することがで
きる。Ａｂ産生では、酵素不全ハイブリドーマを単離して融合細胞株を選択する
ことができる。この技術を使用してターゲッティング可能な複合体を含む１以上
のキレート（例えば、Ｉｎ（ＩＩＩ）−ＤＴＰＡキレート）に対する抗体を惹起
することもできる。Ｉｎ（ＩＩＩ）−ジ−ＤＴＰＡに対するマウスモノクローナ
ル抗体が公知である（Ｂａｒｂｅｔ‘３９５、前出）。
【００３３】 免疫原に対する抗体の最初の惹起後、抗体を配列決定し、その後組換え技術に
よって調製することができる。マウス抗体および抗体フラグメントのヒト化およ
びキメラ化は当業者に周知である。例えば、ヒト化モノクローナル抗体を、マウ
ス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の可変鎖由来のマウス相補性決定領域をヒト
可変ドメインに導入し、マウス対応物のフレームワーク領域中にヒト残基と置換
することによって産生する。ヒト化モノクローナル抗体由来の抗体成分の使用は
、マウス定常部の免疫原性に関する潜在的な問題を排除する。マウス免疫グロブ
リン可変ドメインの一般的なクローニング法は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６、３８３３、１９８９（
その全体が参照することによって本明細書に組み込まれるものとする）の出版物
に記載されている。ヒト化Ｍａｂの産生技術は、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔ
ｕｒｅ、３２１、５２２、１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３
３２、３２３、１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９、１
５３４、１９８８、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ、８９、４２８５、１９９２、Ｓａｎｄｈｕ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ．、１２、４３７、１９９２、およびＳｉｎｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎ．、１５０、２８４４、１９９３（それぞれ、参照することによって本明細書
に組み込まれるものとする）に記載されている。
【００３４】 あるいは、完全なヒトの抗体を、トランスジェニック非ヒト動物から得ること
ができる。例えば、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５、
１４６〜１５６、１９９７、米国特許第５，６３３，４２５号を参照のこと。例
えば、ヒト抗体を、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックマ
ウスから回収することができる。マウスヒト免疫系を、内在性免疫グロブリン遺
伝子の不活化およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の移入によってヒト化する。ヒ
ト免疫グロブリン遺伝子座は、非常に複雑で、ヒトゲノムのほぼ０．２％を占め
る多数の不連続なセグメントを含む。トランスジェニックマウスが抗体の適切な
レパートリーを産生することができることを証明するために、ヒト重鎖および軽
鎖の遺伝子座の大部分をマウスゲノムに移入しなければならない。これは、生殖
系列配置中にヒト重鎖または軽鎖免疫グロブリン遺伝子座のいずれかを含む酵母
人工染色体（ＹＡＣ）の形成によって開始される段階的処理によって達成される
。各挿入断片が約１Ｍｂのサイズであるので、ＹＡＣ構築には、免疫グロブリン
遺伝子座の重複フラグメントの相同組換えが必要である。２つのＹＡＣ（一方は
重鎖遺伝子座を含み、他方は軽鎖遺伝子座を含む）を、ＹＡＣ含有酵母スフェロ
ブラストとマウス胚幹細胞との融合を介してマウスに個別に移入する。次いで、
胚幹細胞クローンをマウス胚盤胞に微量注入する。得られた雄キメラを、その生
殖系列によってＹＡＣを伝達する能力についてスクリーニングし、マウス抗体産
生欠損マウスと交配させる。２つのトランスジェニック系統（一方は重鎖遺伝子
座を含み、他方は軽鎖遺伝子座を含む）の交配により、免疫化に応答するヒト抗
体を産生する子孫を作製する。
【００３５】 非再配列ヒト免疫グロブリン遺伝子を、微小細胞媒介染色体導入（ＭＭＣＴ）
を介してマウス胚幹細胞に移入することもできる。例えば、Ｔｏｍｉｚｕｋａら
、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１６、１３３、１９９７を参照のこと。こ
の方法では、ヒト染色体を含む微小細胞を、マウス胚幹細胞と融合する。導入さ
れた染色体は安定に維持され、成体キメラは、適切な組織特異性発現を示す。
【００３６】 あるいは、本発明の抗体または抗体フラグメントは、組み合わせ免疫グロブリ
ンライブリーから単離されたヒト抗体フラグメントから誘導することができる。
例えば、Ｂａｒｂａｓら、ＭＥＴＨＯＤＳ：Ａ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｚｙ ２、１１９、１９９１およびＷｉ
ｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２、４３３、１９９４（本
明細書中で参考として援用される）を参照のこと。Ｂ細胞不死化によるモノクロ
ーナル抗体の作製に関連する多くの相違は、ファージディスプレーを用いてＥ．
ｃｏｌｉ中の抗体フラグメントの操作および発現によって克服することができる
。高親和性の回収を確認するために、組み合わせ免疫グロブリンライブラリー中
のモノクローナル抗体は巨大なレパートリーサイズを含むべきである。典型的な
ストラテジーは、逆転写を用いてｃＤＮＡを合成するために免疫化マウスのリン
パ球または脾臓細胞から得たｍＲＮＡを利用する。重鎖および軽鎖遺伝子を、Ｐ
ＣＲで個別に増幅し、ファージクローニングベクターにライゲートする。２つの
異なるライブラリー（一方は重鎖遺伝子を含み、他方は軽鎖遺伝子を含む）を産
生する。ファージＤＮＡを、各ライブラリーから単離し、重鎖および軽鎖配列を
共にライゲートし、パッケージングして組み合わせライブラリーを形成させる。
各ファージは、重鎖ｃＤＮＡと軽鎖ｃＤＮＡとの無作為のペアを含み、Ｅ．ｃｏ
ｌｉの感染の際に感染細胞中に抗体鎖の発現を指向する。目的の抗原を認識する
抗体を同定するために、ファージライブラリーをプレートし、プラーク中に存在
する抗体分子を濾紙に移す。濾紙を、放射性標識抗原とインキュベートし、洗浄
して余剰な非結合リガンドを取り除く。オートラジオグラムによる放射性スポッ
トにより、抗原に結合している抗体を含むプラークを同定する。ヒト免疫グロブ
リンファージライブラリーの産生に有用なクローニングベクターおよび発現ベク
ターを、例えば、ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥクローニングシステム（Ｌａ Ｊｏｌｌ
ａ、ＣＡ）から得ることができる。
【００３７】 類似のストラテジーを用いて高親和性のｓｃＦｖを得ることができる。例えば
、Ｖａｕｇｈｎら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１４、３０９〜３１４、
１９９６を参照のこと。巨大なレパートリーを有するｓｃＦｖライブラリーを、
全ての公知のＶH、Ｖκ、およびＶλ遺伝子ファミリーに相当するＰＣＲプライ
マーを用いて非ヒト免疫化ヒトドナーからのＶ遺伝子の単離によって構築するこ
とができる。増幅後、ＶκおよびＶλプールを合わせて１つのプールを形成する
。これらのフラグメントを、ファージミドベクターにライゲートする。ｓｃＦｖ
リンカー（Ｇｌｙ4、Ｓｅｒ）3を、ＶLフラグメントのファージミドの上流にラ
イゲートする。ＶHおよびリンカー−ＶLフラグメントを増幅し、ＪH領域に組み
合わせる。得られたＶH−リンカー−ＶLフラグメントを、ファージミドベクター
にライゲートする。ファージミドライブラリーを上記のように濾紙を用いるか免
疫チューブ（Ｎｕｎｃ、Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を用いて選択する。免疫化ウサギの
リンパ球または脾臓細胞由来の組み合わせ免疫グロブリンライブラリーの構築お
よびＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓ中でのｓｃＦｖの発現によって類似の結果を達成する
ことができる。例えば、Ｒｉｄｄｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１３、
２５５〜２６０、１９９５を参照のこと。さらに、適切なｓｃＦｖの単離後、高
結合親和性および遅延な解離速度の抗体フラグメントを、ＣＤＲ３変異誘発およ
び鎖の混合などの親和性成熟処理によって得ることができる。例えば、Ｊａｃｋ
ｓｏｎら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７８、１８１〜１８８、１９９８、Ｏｓｂ
ｏｕｒｎら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２、１８１〜１９６、１９９
６を参照のこと。
【００３８】 ｂｓＡｂを、当分野で公知の技術（抗ＣＥＡ腫瘍Ａｂおよび抗ペプチドＡｂを
個別にペプシンで消化して、それぞれＦ（ａｂ’）2を得る）によって調製する
ことができる。抗ＣＥＡ−Ａｂ−Ｆ（ａｂ’）2をシステインで還元してＦａｂ
’単量体単位を作製し、架橋剤ビス（マレイミド）ヘキサンとさらに反応させて
Ｆａｂ’−マレイミド部分を作製する。抗ペプチドＡｂ−Ｆ（ａｂ’）2をシス
テインで還元して精製し、回収したペプチドＦａｂ’−ＳＨを抗ＣＥＡ−Ｆａｂ
’−マレイミドと反応させてＦａｂ’×Ｆａｂ’二重特異性Ａｂを作製する。あ
るいは、抗ペプチドＦａｂ’−ＳＨフラグメントを、抗ＣＥＡ Ｆ（ａｂ’）2
とカップリングしてＦ（ａｂ’）2×Ｆａｂ’構築物を作製するか、抗ＣＥＡ
ＩｇＧとカップリングしてＩｇＧ×Ｆａｂ’二重特異性構築物を作製する。別の
実施形態では、ＩｇＧ×Ｆａｂ’構築物を、過ヨウ素酸塩で酸化された抗ＣＥＡ
ＩｇＧ重鎖炭水化物への抗ペプチドＦａｂ’チオール基の付着による部位特異
的に調製し、その後、市販のヒドラジン−マレイミド架橋剤との反応によって活
性化することができる。使用した成分Ａｂを、公知の技術によってキメラ化また
はヒト化することができる。キメラ抗体は、齧歯動物由来の可変ドメインおよび
相補性決定領域領域を含む組換えタンパク質である一方で、抗体分子の残りの部
分は、ヒト抗体由来である。ヒト化抗体は、モノクローナル抗体の相補性決定領
域がマウス免疫グロブリンの可変重鎖および軽鎖からヒト可変ドメインに導入さ
れた組換えタンパク質である。
【００３９】 種々の組換え法を使用して二重特異性抗体および抗体フラグメントを産生する
ことができる。例えば、二重特異性抗体および抗体フラグメントをトランスジェ
ニック家畜のミルク中に産生させることができる。例えば、Ｃｏｌｍａｎ，Ａ．
、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｓｙｍｐ．、６３、１４１〜１４７、米国特許第５
，８２７，６９０号を参照のこと。それぞれ対の免疫グロブリンの重鎖および軽
鎖をコードするＤＮＡセグメントを含む２つのＤＮＡ構築物を調製する。フラグ
メントを、哺乳動物の上皮細胞において優先的に発現するプロモーター配列を含
む発現ベクターにクローニングする。例として、ウシおよびヒツジのカゼイン遺
伝子、ウシα−ラクトグロブリン遺伝子、ヒツジβ−ラクトグロブリン遺伝子、
ならびにマウスホエイ酸タンパク質遺伝子由来のプロモーターが含まれるが、こ
れらに限定されない。好ましくは、挿入したフラグメントは、哺乳動物特異的遺
伝子由来の同起源のゲノム配列のその３’側に隣接している。これにより、ポリ
アデニル化部位および転写安定配列が得られる。発現カセットを、受精した哺乳
動物の卵の前核に同時注入し、その後、レシピエントの雌の子宮に移植して妊娠
させる。誕生後、子孫を、サザン分析によって両導入遺伝子の存在についてスク
リーニングする。存在する抗体に関して、重鎖および軽鎖遺伝子は共に、同一の
細胞中に同時に発現しなければならない。トランスジェニック雌由来のミルクを
、当分野で公知の標準的な免疫学的方法を用いて抗体または抗体フラグメントの
存在および機能について分析する。抗体を、当分野で公知の標準的な方法を用い
てミルクから精製することができる。
【００４０】 キメラＡｂを、マウス軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインをコードする
ｃＤＮＡフラグメントのヒト抗体由来のＣドメインをコードするフラグメントへ
のライゲーションによって構築する。Ｃドメインが抗原結合に寄与しないので、
キメラ抗体は、元のマウスＡｂと同一の抗原特異性を維持するが、配列はヒト交
代により近い。キメラＡｂは、いくつかのマウス配列を依然含んでいるが、免疫
原性である。ヒト化Ａｂは、抗原を認識するのに必要なマウスアミノ酸のみを含
む。この産物を、ヒト抗体フレームワークにマウス相補性決定領域由来のアミノ
酸を確立することによって構築する。
【００４１】 最近の他のｂｓＡｂの産生法には、より一般的な免疫グロブリンイソ型よりも
強力に架橋するように、更なるシステイン残基を有する人工組換えＡｂが含まれ
る。例えば、ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、１０（１０
）、１２２１〜１２２５、１９９７を参照のこと。別のアプローチは、必要な二
重特異性を有する２つまたはそれ以上の異なる一本鎖抗体または抗体フラグメン
トに連結した組換え融合タンパク質を操作することである。例えば、Ｃｏｌｏｍ
ａら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１５、１５９〜１６３、１９９７を参
照のこと。分子操作を用いて種々の二重特異性融合タンパク質を産生することが
できる。別の形態では、二重特性融合タンパク質は一価であり、例えば、１つの
抗原に対して１つの結合部位を有するｓｃＦｖおよび第２の抗原に対して１つの
結合部位を有するＦａｂフラグメントからなる。別の形態では、二重特異性融合
タンパク質は二価であり、例えば、１つの抗原に対して２つの結合部位を有する
ＩｇＧおよび第２の抗原に対して２つの結合部位を有するｓｃＦｖからなる。
【００４２】 ダイアボディー(diabody)とも呼ばれる機能的二重特異性一本鎖抗体（ｂｓｃ
Ａｂ）を、組換え法を用いて哺乳動物細胞中に産生することができる。例えば、
Ｍａｃｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９２、７０２１〜７０
２５、１９９５を参照のこと。例えば、組換え法を用いたグリシン−セリンリン
カーを介する２つの一本鎖Ｆｖフラグメントの連結によってｂｓｃＡｂを産生す
る。目的の２つの抗体のＶ軽鎖（ＶL）およびＶ重鎖（ＶH）ドメインを、標準的
なＰＣＲ法を用いて単離する。次いで、各ハイブリドーマから得たＶLおよびＶH ｃＤＮＡを連結して２ステップ融合ＰＣＲにおける一本鎖フラグメントを形成す
る。第１のＰＣＲステップは、（Ｇｌｙ4−Ｓｅｒ1）3リンカーを導入し、第２
のステップは、ＶLおよびＶHアンプリコンを連結する。次いで、各一本鎖分子を
、細菌発現ベクターにクローニングする。増幅後、一本鎖分子の１つを切り出し
、目的の第２の一本鎖分子を含む他のベクターにサブクローニングする。得られ
たｂｓｃＡｂフラグメントを、真核生物の発現ベクターにサブクローニングする
。機能的タンパク質発現を、チャイニーズハムスターの卵巣細胞へのベクターの
トランスフェクションによって得ることができる。二重特異性融合タンパク質を
、類似の様式で調製する。二重特異性一本鎖抗体および二重特異性融合タンパク
質は、本発明の範囲内に含まれる。
【００４３】 ２つまたはそれ以上の異なる一本鎖抗体または抗体フラグメントに結合した二
重特異性融合タンパク質を、類似の様式で産生する。組換え法を使用して種々の
融合タンパク質を産生することができる。例えば、ヒト化モノクローナル抗体抗
ＣＥＡ抗体由来のＦａｂフラグメントを含む融合タンパク質およびマウス抗ジＤ
ＴＰＡ由来のｓｃＦｖを産生することができる。可動性リンカー（ＧＧＧＳなど
）によりｓｃＦｖを抗ＣＥＡ抗体の重鎖の定常部に連結する。あるいは、ｓｃＦ
ｖを、ｈＭＮ−１４の軽鎖の定常部に連結することができる。ｓｃＦｖへの重鎖
Ｆｄのインフレームでの連結に必要な適切なリンカー配列を、ＰＣＲ反応によっ
てＶＬおよびＶＫドメインに移入する。ｓｃＦｖをコードするＤＮＡフラグメン
トを、ＣＨ１ドメインをコードするＤＮＡ配列を含む輸送ベクターにライゲート
する。得られたｓｃＦｖ−ＣＨ１構築物を切り出し、抗ＣＥＡ抗体のＶＨ領域を
コードするＤＮＡ配列を含むベクターにライゲートする。得られたベクターを使
用して二重特異性タンパク質発現用の哺乳動物細胞にトランスフェクトすること
ができる。
【００４４】 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ発現系を用いて大量のｂｓｃＡｂおよび融
合タンパク質を産生することができる。例えば、Ｚｈｅｎｐｉｎｇら、Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４、１９２〜１９６、１９９６を参照のこと。機能的な
ｂｓｃＡｂを、２つのフラグメントのＶLおよびＶHドメインが異なるポリペプチ
ド鎖上に存在する２つの「交差」ｓｃＦｖフラグメントのＥ．ｃｏｌｉにおける
同時発現によって産生することができる。目的の２つの抗体のＶ軽鎖（ＶL）お
よびＶ重鎖（ＶH）ドメインを、標準的なＰＣＲ法を用いて単離する。次いで、
ｃＤＮＡを細菌発現ベクターにライゲートして目的の第１の抗体のＶLドメイン
のＣ末端を第２の抗体のＶHドメインのＮ末端にリンカーを介してライゲートす
る。同様に、目的の第２の抗体のＶLドメインのＣ末端を第１の抗体のＶHドメイ
ンのＮ末端にリンカーを介してライゲートする。得られたジシストロンオペロン
を、強力プロモーター（例えば、リン酸塩欠乏によって誘導されるＥ．ｃｏｌｉ
アルカリホスファターゼプロモーター）の転写調節下に置く。あるいは、一本鎖
融合構築物が、ｌａｃプロモーターおよび２％グリシンおよび１％Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００からなる培地を用いてＥ．ｃｏｌｉに首尾よく発現されている。例
えば、Ｙａｎｇら、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、６４、
２８６９〜２８７４、１９９８を参照のこと。Ｅ．ｃｏｌｉの熱安定性エンテロ
トキシンＩＩシグナル配列を使用して、ペプチドを周辺質に指向させる。分泌後
、２つのペプチド鎖を会合させて両方の抗原結合特性を有する非共有結合ヘテロ
ダイマーを形成させる。ｂｓｃＡｂを、当分野で公知の標準的手順（例えば、Ｓ
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌのｐｒｏｔｅｉｎ Ａクロマトグラフィー）を用い
て精製する。
【００４５】 機能的ｂｓｃＡｂおよび融合タンパク質をトランスジェニック家畜のミルク中
に産生させることもできる。例えば、Ｃｏｌｍａｎ，Ａ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．Ｓｙｍｐ．、６３、１４１〜１４７、１９９８、米国特許第５，８２７，
６９０号を参照のこと。上記のように得たｂｓｃＡｂフラグメントを、哺乳動物
の上皮細胞において優先的に発現するプロモーター配列を含む発現ベクターにク
ローニングする。例として、ウサギ、ウシ、およびヒツジのカゼイン遺伝子、ウ
シα−ラクトグロブリン遺伝子、ヒツジβ−ラクトグロブリン遺伝子、ならびに
マウスホエイ酸タンパク質遺伝子由来のプロモーターが含まれるが、これらに限
定されない。好ましくは、挿入したｂｓｃＡｂは、哺乳動物特異的遺伝子由来の
同起源のゲノム配列のその３’側に隣接している。これにより、ポリアデニル化
部位および転写安定配列が得られる。次いで、発現カセットを、受精した哺乳動
物の卵の前核に同時注入し、その後、レシピエントの雌の子宮に移植して妊娠さ
せる。誕生後、子孫を、サザン分析によって移入ＤＮＡの存在についてスクリー
ニングする。トランスジェニック雌由来のミルクを、当分野で公知の標準的な免
疫学的方法を用いてｂｓｃＡｂの存在および機能について分析する。ｂｓｃＡｂ
を、当分野で公知の標準的な方法を用いてミルクから精製することができる。ミ
ルク中のｓｂｃＡｂのトランスジェニック産生により、大量のｂｓｃＡｂの効率
的な獲得法が得られる。
【００４６】 機能的ｂｓｃＡｂおよび融合タンパク質を、トランスジェニック植物中で産生
させることもできる。例えば、Ｆｉｅｄｌｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１３、１
０９０〜１０９３、１９９５、Ｆｉｅｄｌｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ、３、２０５〜２１６、１９９７を参照のこと。このような産生により、
いくつかの利点（低価格、大量生産、および長期間安定な保存を含む）が付与さ
れる。タンパク質を小胞体に指向させるために、上記のように得られたｂｓｃＡ
ｂフラグメントを、プロモーター配列を含み、シグナルペプチド配列をコードす
る発現ベクターにクローニングする。種々のプロモーターを利用して、発現産物
を植物内の特定の位置に指向させることができる。例えば、タバコ植物における
遍在的な発現を、カリフラワーモザイクウイルスの強力３５Ｓプロモーターを用
いて達成することができる一方で、器官特異的発現を種子特異的レグミンＢ４プ
ロモーターを介して達成する。発現カセットを、当分野で公知の標準的な方法に
よって形質転換する。形質転換を、サザン法によって評価する。トランスジェニ
ック植物を、当分野で公知の標準的な免疫学的方法を用いてｂｓｃＡｂの存在お
よび機能について分析する。ｂｓｃＡｂを、当分野で公知の標準的な方法を用い
て植物組織から精製することができる。
【００４７】 さらに、トランスジェニック植物は、ｂｓｃＡｂおよび融合タンパク質の長期
保存を促進する。機能的に活性なｓｃＦｖタンパク質を、室温で１週間保存後の
タバコの葉から抽出した。同様に、室温で１年間保存後のトランスジェニックタ
バコ種子には、ｓｃＦｖタンパク質またはその抗原結合活性の損失が認められな
い。
【００４８】 機能的ｂｓｃＡｂおよび融合タンパク質を、昆虫細胞中に産生させることもで
きる。例えば、Ｍａｈｉｏｕｚら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１
２、１４９〜１６０、１９９８を参照のこと。昆虫ベースの発現系により、大量
の均質で適切に折りたたまれたｂｓｃＡｂの産生手段が得られる。バキュロウイ
ルスは広く一般に使用されている昆虫細胞の発現ベクターであり、組換え抗体分
子に首尾よく適用されている。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｌ．Ｋ．、Ａｎｎ．Ｒｅ
ｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、４２、１７７、１９８８、Ｂｅｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８６、２４５、１９９５を参照のこと。あるいは、
誘導プロモーターの転写調節下でのｂｓｃＡｂ構築物を含む安定な昆虫細胞株の
作製による誘導発現系を利用することができる。例えば、Ｍａｈｉｏｕｚら、Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１２、１４９〜１６０、１９９８を参照
のこと。上記のように得たｂｓｃＡｂフラグメントを、Ｄｒｏｓｐｈｉｌａメタ
トチオネインプロモーターおよびヒトＨＬＡ−Ａ２リーダー配列を含む発現ベク
ターにクローニングする。ついで、構築物をＤ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ Ｓ
Ｃ−２細胞にトランスフェクトする。細胞を、増量した銅、亜鉛、またはカドミ
ウムに暴露することによって発現を誘導する。ｂｓｃＡｂの存在および機能性を
、当分野で公知の標準的な免疫学的方法を用いて同定する。当分野で公知の標準
的な方法を用いて、精製ｂｓｃＡｂを得る。
【００４９】 ターゲッティング可能な複合体における親水性キレート部分の存在は、in viv
oでの迅速なクリアリングの確保の一助となる。親水性に加えて、キレートをそ
の金属結合特性について選択し、金属−キレート複合物の認識がもはや問題では
ないので、少なくともｂｓｃＡｂエピトープがペプチドの一部であるか非キレー
ト化ハプテンであるターゲッティング可能な複合体に任意に変更する。特に有用
な金属−キレートの組み合わせには、放射画像化およびＲＡＩＴ用の47Ｓｃ、52 Ｆｅ、55Ｃｏ、67Ｇａ、68Ｇａ、111Ｉｎ、89Ｚｒ、90Ｙ、161Ｔｂ、177Ｌｕ、2 12 Ｂｉ、213Ｂｉ、および255Ａｃと使用する２−ベンジル−ＤＴＰＡおよびその
モノメチルおよびシクロヘキシルアナログが含まれる。本発明のｂｓＡｂを用い
て非放射性金属（マンガン、鉄、およびガドリニウムなど）と複合体化される場
合、同一のキレート剤をＭＲＩ用に使用することができる。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ
、およびＴＥＴＡなどの大環状キレート剤は、種々の金属および放射性金属（特
に、ガリウム、イットリウム、および銅の放射性核種）との使用が有用である。
ＤＴＰＡおよびＤＯＴＡキレート剤は、リガンドがカルボン酸基またはアミン基
などの硬い塩基のキレート官能基を含む場合、硬い酸の陽イオン（特に、第ＩＩ
ａ群および第ＩＩＩａ群の金属陽イオン）のキレート化に最も有効である。この
ような金属−キレート複合体を、目的の金属に対する環サイズの変更によって非
常に安定にすることができる。ＲＡＩＴ用の223Ｒａなどの核種の安定な結合を
目的とする大環状ポリエーテルなどの他の環型キレート剤は、本発明の範囲内で
ある。ポルフィリンキレート剤を、多数の放射性金属と使用することができ、ｂ
ｓＡｂ指向性免疫光線療法用の所定の非放射性金属複合体としても有用である。
１種を超えるキレート剤により、複数の金属イオン（例えば、非放射性イオン、
診断用放射性核種、および／または治療用放射性核種）をキャリアに結合させる
ことができる。１つの例は、ＤＯＴＡ−90Ｙキレートも保有するビス−111Ｉｎ
−ＤＴＰＡである。
【００５０】 米国特許第５，７５３，２０６号に開示のキレート剤（特に、チオセミカルバ
ゾニルグリオキシルシステイン（ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ）およびチオセミカルバジニ
ルアセチルシステイン（ＴｓｃＡ−Ｃｙｓ）キレート剤）を有利に使用して、（
Ｔｃ、Ｒｅ、Ｂｉ、ならびに軟らかい塩基リガンド（硫黄またはリン含有リガン
ド）に強く結合する他の遷移金属、ランタニドおよびアクチニドの軟らかい酸の
陽イオンを結合させる。ペプチドへの１より多い型のキレート剤（例えば、ＤＴ
ＰＡ）または例えばＩｎ（ＩＩＩ）陽イオンの類似のキレート剤およびＴｃ陽イ
オンのチオール含有キレート剤（例えば、ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ）の結合に有用であ
り得る。ジＤＴＰＡハプテンに対する抗体が公知（Ｂａｒｂｅｔ‘３９５、前出
）であり、標的抗体と容易に結合してｂｓＡｂを形成するので、プレターゲッテ
ィングプロトコールにおける放射性同位元素標的用の、非放射性ジＤＴＰＡキレ
ートおよび放射性同位元素結合用の他のキレートを有するペプチドハプテンを使
用することができる。このようなペプチドの１つの例は、Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰ
Ａ）−ＴｙｒＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｌｙｓ（ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ−）−ＮＨ2であ
る。このペプチドをＩｎ（ＩＩＩ）で予めロードして９９−ｍ−Ｔｃ陽イオンで
標識することができ、Ｉｎ（ＩＩＩ）イオンはＤＴＰＡによって優先的にキレー
ト化され、Ｔｃ陽イオンはチオール含有ＴｓｃＧ−ＣｙｓＣに優先的に結合する
。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡなどの他の硬い酸のキレート剤を、ＤＴＰＡ基
と置換することができ、それらに特異的なＭａｂを、類似の技術を用いて産生す
ることができ、これを使用して抗ジＤＴＰＡ Ｍａｂを作製することができる。
【００５１】 ２つの異なる硬い酸または軟らかい酸のキレート剤を、異なるサイズの陽イオ
ン、キレート環の幾何学、および陽イオンの好ましい複合体イオン構造によって
、２つの異なる硬い酸または軟らかい酸の陽イオンに優先的に結合するように、
ターゲッティング可能な複合体に（例えば、異なるキレート環のサイズで）組込
むことができることが認識される。これにより、２つの異なる金属（その１つま
たは両方が放射性であるか、ＭＲＩ増強に有用であるものでよい）を、前標識ｂ
ｓＡｂによる最終的な捕獲用のターゲッティング可能な複合体に組込ませる。
【００５２】 キレート剤を、標準的な化学的作用を用いてターゲッティング可能な複合体の
キャリアの一部にカップリングする。例えば、ペプチドがターゲッティング可能
な複合体である場合、過剰な２−（ｐ−イソチオシアナト）ベンジル−ＤＴＰＡ
を、ペプチドのＮＨ2基と反応させてキレート剤のｐ−イソチオシアナトとペプ
チドの遊離の１−αおよび６−ε−アミノ基との間にチオ尿素結合を形成させる
。あるいは、ＤＴＰＡのビス−無水物をペプチドの遊離のアミン基に直接カップ
リングすることができる。所望のキレート剤−ペプチドを、クロマトグラフィー
で精製し、金属結合剤としての使用に備える。同様に、ＤＯＴＡを、カルボジイ
ミドを用いて１つのカルボキシル基で一活性化し、２つのＤＯＴＡ単位をペプチ
ドの遊離のアミノ基にカップリングする。チオールと特異的に反応する基を保有
するキレート剤を、Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｃｙ
ｓ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＮＨ2などのペプチドとの反応に使用す
る。このようなキレート剤の例として、２−（ｐ−ブロモアセタトアミド）ベン
ジル−ＤＴＰＡが挙げられるが、これを穏やかな中性の条件下で使用してペプチ
ドの遊離のチオール基をアルキル化することができる。
【００５３】 キレート剤−ペプチド複合体を、固体として長期保存することができる。これ
らを、金属結合反応用の単位用量に定量し、固体、液体、または半液体溶液、凍
結溶液または凍結乾燥調製物のいずれかとして単位用量で保存した。複合体を、
周知の手順によって標識することができる。典型的には、硬い酸の陽イオンを、
都合の良い塩の溶液として導入し、硬い酸のキレート剤または可能ならば軟らか
い酸のキレート剤によって取り上げる。しかし、その後の軟らかい酸の陽イオン
の添加によって、軟らかい酸のキレート剤によるその結合が誘導されて、キレー
ト化することができる任意の硬い酸の陽イオンが表示される。例えば、過剰な非
放射性111ＩｎＣｌ3の存在下でさえ、in situで塩化スズおよびＮａ９９ｍ−Ｔ
ｃＯ4で作製された９９ｍ−Ｔｃ（Ｖ）グルコヘプトネートまたはＴｃ陽イオン
での標識は、軟らかい酸のキレート剤に対して定量的に促進する。他の軟らかい
酸の陽イオン（186Ｒｅ、188Ｒｅ、213Ｂｉなど）およびＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｐ
ｂ、Ｃｕ、Ｃｄ、Ａｕ、Ｆｅ、Ａｇ（一価）、Ｚｎ、およびＨｇの二価または三
価の陽イオン（特に、64Ｃｕおよび67Ｃｕ）（これらのいくつかは放射免疫診断
または放射免疫治療に有用である）を、類似の方法によってキャリアペプチドに
負荷することができる。Ｒｅ陽イオンを、過レニウム酸塩およびスズイオンから
in situで作製するか、前還元グルコヘプトン酸レニウムまたは他のトランスキ
レート剤を使用することができる。過レニウム酸塩の還元にはテクネチウムの還
元より多量のスズイオン（典型的には、２００μｇ／ｍＬを超える最終濃度）を
必要とするので、高レベルのスズイオンがジスルフィド環化ペプチドに存在する
ジスルフィド結合のような感受性ジスルフィド結合を還元させないように、さら
なるケアが必要である。ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ−リガンドのＲｅＯ金属複合体の都合
の良い調製法は、ペプチドのＲｅＯＣｌ3（Ｐ（Ｐｈ3）2との反応であるが、Ｒ
ｅＯ（エチレンジアミン）2などの他の還元種の使用も可能である。
【００５４】 本発明の１つの実施形態では、ターゲッティング可能な複合体と会合した治療
剤の投与前にｂｓＡｂを投与する。試薬の用量およびタイミングは、当業者によ
って容易に得ることができ、これは、使用した試薬の特定の性質に依存する。ｂ
ｓＡｂ−Ｆ（ａｂ’）2誘導体を最初に投与する場合、ターゲッティング可能な
複合体の投与前に１〜６日間待機するのが適切である。ＩｇＧ−Ｆａｂ’ｂｓＡ
ｂ複合体が第１の標的ベクターである場合、ターゲッティング可能な複合体への
投与前の待機時間はより長く、おそらく３〜１５日間の範囲である。二重特異性
融合タンパク質（例えば、抗ＣＥＡ Ｆａｂ×抗ペプチドｓｃＦｖ）が第１の標
的ベクターである場合、ターゲッティング可能な複合体の投与前の待機時間はよ
り短く、おそらく１〜５日間の範囲である。
【００５５】 別の実施形態では、本発明は、ホウ素中性子捕獲療法（Bron Neutron Capture
Therapy; ＢＮＣＴ）プロトコールにおいて使用することができる。ＢＮＣＴは
、腫瘍に局在している10Ｂ原子の中性子照射によって腫瘍細胞に電離放射線を送
達させるように設計された二成分系である。ＢＮＣＴは、安定な同位元素（同位
元素が富化された10Ｂ（１９．８％の天然存在度で存在））を熱中性子で照射し
てα粒子および7Ｌｉ原子核を産生する場合に生じる核反応に基づく。これらの
粒子は、約１細胞の直径の路程を有し、それにより高い線エネルギー付与が得ら
れる。この核反応で生成した少数の短距離の１．７ＭｅＶのα粒子のみで、細胞
核の標的およびその破壊に十分である。ＢＮＣＴを癌で成功させるには、腫瘍部
位で高濃度の10Ｂを局所化させる一方で非標的器官を本質的にホウ素の無いまま
の状態にする必要がある。ＢＮＣＴ用のプレターッゲッティングｂｓＡｂを用い
た患者の腫瘍治療用の組成物および方法は、米国特許出願第０９／２０５，２４
３号に記載されており、これは本発明により容易に改変することができる。さら
に、他の元素が中性子捕獲反応に適切である。１つの例としては、ウランである
。大量のウランをフェリチンなどの天然に存在するキレート剤によって結合させ
ることができる。このようなストラテジーは、米国特許出願第＊＊号に記載され
ており、これは本発明に容易に適用することができ、かつその全体が参照するこ
とによって本明細書に組み込まれるものとする。
【００５６】 本発明の実施の別の実施形態では、ターゲッティング可能な複合体に会合した
診断薬の投与前に、ｂｓＡｂを投与する。ｂｓＡｂの罹患組織への標的のための
十分な時間の経過後、診断薬と投与する。診断薬の投与後、画像化を行うことが
できる。光を放射して回収した種々の構造を直接的または間接的に見ることによ
って体腔中の腫瘍を検出することができる。非電離放射線を放射してこれらの構
造から捕獲する事ができる限り、任意の身体部位での病変を視覚化することがで
きる。例えば、高分解能で非侵襲性の画像化技術であるポジトロン放出断層撮影
（ＰＥＴ）を、ヒト疾患の視覚化用の本発明の抗体と使用することができる。Ｐ
ＥＴでは、陽電子消滅崩壊の検出の間に５１１ｋｅＶのγ光子を産生した。18Ｆ
および68Ｇａを用いたＰＥＴ用の類似のプレターゲッティングストラテジーが米
国特許出願番号第０９／１４６，３１８号および（第２の出願番号は係属中であ
る）にそれぞれ記載されている。これらの出願に記載の方法は、本発明に容易に
適用可能であり、その全体が参照することにより本明細書中に組み込まれる。
【００５７】 別の例として、本発明の抗体または抗体フラグメントは、光力学的診断法また
は治療法に使用することができる。診断法では、診断薬を、例えば全身注射し、
レーザー誘起蛍光法を使用して光活性剤が結合した癌部位を内視鏡によって検出
することができる。例えば、初期肺腫瘍の蛍光気管支鏡検査に適用されている（
Ｄｏｉｒｏｎら、Ｃｈｅｓｔ、７６、３２、１９７９（上記の引例であり、この
引例は本明細書中に参照することにより組み込まれる）。別の例では、本発明の
抗体および抗体フラグメントを、短光子放出に使用することができる。例えば、
本発明の抗体または抗体フラグメントの患者への投与後に、Ｔｃ−９９ｍ標識診
断薬を投与することができる。次いで、患者をγ線カメラでスキャンして短光子
放出コンピュータ断層撮影での画像を得て病変または腫瘍部位を決定する。
【００５８】 本発明はまた、光力学的治療法に使用することができる。本方法では、光線感
作物質（例えば、ジヘマトポルフィリンエーテルなどのヘマトポルフィリン誘導
体）を患者に投与する。強い赤色の光（例えば、６３０ｎｍの波長）の使用によ
り抗腫瘍活性を開始する。皮膚が太陽光線による光増感未満である場合、別の光
線感作物質（より長い波長で有用な物質を含む）を使用することができる。例と
して、このような光線感作物質には、ベンゾポルフィリン一酸環Ａ（ＢＰＤ−Ｍ
Ａ）、スズエチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホン化アルミニウムフタロシ
アニン（ＡｌＳＰｃ）、およびルテチウムテキサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）が含ま
れるが、これらに限定されない。
【００５９】 本発明の他の実施形態では、標識可能な複合体のキャリア部分を、標的部位で
プロドラッグを活性化することができるか、身体の解毒経路の調節によって通常
の治療効果を改良することができる酵素に結合させることができる。ｂｓＡｂの
投与後、キャリアに結合させた酵素を投与する。酵素を標的部位にプレターゲッ
ティングした後、標的部位で作用することが公知の細胞傷害性薬物またはプレタ
ーゲッティング酵素によってin situで薬物に変換されるそのプロドラッグ形態
を注射する。薬物は、哺乳動物の通常の解毒処理によって解毒されて毒性の低い
中間体（最も一般的にはグルクロニド）を形成する。解毒中間体（例えば、グル
クロニド）を、プレターゲッティング酵素によってより有毒な形態に再変換する
ことによって、標的部位での毒性を増大させる。これにより、薬物が再循環され
る。同様に、投与したプロドラッグを、通常の生物学的処理によって活性薬物に
変換することができる。プレターゲッティング酵素は、解毒薬物の再循環によっ
て処理の効率を改良する。このアプローチを、任意の酵素−薬物対での使用に適
用することができる。類似のプレターゲッティングストラテジーは、米国特許出
願第６０／１０１，０３９号に記載されている。これらの方法を、本発明に容易
に適用することができ、その全体が本明細書中に参照することによって組み込ま
れるものとする。
【００６０】 別の実施形態では、酵素−キャリア複合体を、患者への投与前に標的ｂｓＡｂ
と混合することができる。酵素−キャリア−ｂｓＡｂ複合体を標的部位に局在さ
せ、非結合複合体を循環からクリアリングするのに十分な時間の経過後、プロド
ラッグを投与する。次いで、上記のように、プロドラッグをプレターゲッティン
グ酵素によってin situで薬物に変換させる。
【００６１】 抗癌治療に有用な一定の細胞傷害性薬物は、血清に比較的不溶である。非結合
形態では非常に有毒なものもあるが、その毒性はプロドラッグの変換によって顕
著に減少される。溶解性の低い薬物のより溶解性の高い複合体（例えば、グルク
ロニド、親水性の酸のエステル、または親水性アミンのアミド）への変換により
、血清の水相での溶解性および静脈、動脈、または毛細血管の細胞壁への通過能
力および組織液に浸漬した腫瘍への到達能力が改良される。プロドラッグの切断
により、標的部位でより溶解性の低い薬物が蓄積する。このようなプロドラッグ
から薬物への変換についての多くの例が、Ｈａｎｓｅｎの米国特許出願第０８／
４４５，１１０号に開示されている。
【００６２】 芳香族または脂環式アルコール、チオール、フェノール、およびアミンなどの
一定の有毒物質の肝臓内でのグルクロニドへの変換は、有毒物質を解毒して容易
に尿中に排泄させる身体の方法である。このような物質に変換することができる
抗腫瘍薬物の１つは、アントラサイクリングリコシドであり、ヒトβ−Ｄ−グル
クロニダーゼの基質であることが認められているエピルビシン（ドキソルビシン
の４−エピマー（アドリアマイシン））である。例えば、Ａｒｃａｍｏｎｅ、Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４５、５９９５、１９８５を参照のこと。より少ない極
性基を有する他のアナログは、より親油性が高く、このようなアプローチにより
有望であると考えられる。芳香族または脂環式アルコール、チオール、またはア
ミン基を有する他の薬物または毒素は、このような複合体形成の候補である。こ
れらの薬物またはその他のプロドラッグ形態は、本発明の部位特異的増強法の適
切な候補である。
【００６３】 プロドラッグＣＰＴ−１１（イリノテカン）をカルボキシエストラーゼによっ
て活性な代謝産物ＳＮ−３８に変換する。ＳＮ−３８は、非常に有効な抗癌薬で
あるが、その毒性のために治療量を患者に投与することができない。従って、本
発明の１つの適用は、腫瘍関連抗原およびハプテン（例えば、ジＤＴＰＡ）に特
異的なｂｓＡｂを用いて腫瘍部位にこのような治療薬を標的し、その後、ジＤＴ
ＰＡ−カルボキシルエステラーゼ複合体を注射する。一旦適切な腫瘍対バックグ
ラウンド局在化比が達成すると、ＣＰＴ−１１を投与し、腫瘍に局在しているカ
ルボキシルエステラーゼは、腫瘍でのＣＰＴ−１１からＳＮ−３８への変換に作
用する。溶解性が低いので、活性ＳＮ−３８は腫瘍の近傍に残存して、結果的に
抗原の標的化にネガティブな隣接腫瘍細胞に対して効果を発揮する。これは、本
方法の更なる利点である。カルボキシルエステラーゼの改変形態が記載されてお
り、本発明の範囲内である。例えば、Ｐｏｔｔｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
、５８、２６４６〜２６５１および３６２７〜３６３２、１９９８を参照のこと
。
【００６４】 エトポシドは、そのグルクロニド形成によって腫瘍範囲を解毒する広く一般に
使用されている制癌剤であり、これは本発明の範囲内である。例えば、Ｈａｎｄ
ｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４８、１８２９〜１８３４、１９８８を参照の
こと。グルクロニド複合体を、細胞傷害性薬物から調製し、ｍＡｂ−グルクロニ
ダーゼ複合体でプレターゲッティングした腫瘍に対する治療薬として注射するこ
とができる。例えば、Ｗａｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５２、４４８４〜
４４９１、１９９２を参照のこと。従って、このような複合体を、本明細書中に
記載のプレターゲッティングアプローチで使用することもできる。同様に、ダウ
ノマイシンおよびドキソルビシンの誘導体に基づいて設計されたプロドラッグの
カルボキシルエステラーゼおよびグルクロニダーゼとの使用について記載されて
いる。例えば、Ｂａｋｉｎａら、Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．、４０、４０１３〜４
０１８、１９９７を参照のこと。本発明の範囲内で使用することができるプロド
ラッグ／酵素対の他の例には、フェノールマスタードのヒドロキシ誘導体のグル
クロニドプロドラッグおよびβ−グルクロニダーゼ、フェノールマスタードまた
はＣＰＴ−１１およびカルボキシペプチダーゼ、メトトレキセート置換α−アミ
ノ酸およびカルボキシペプチダーゼＡ、薬物のペニシリンまたはセファロスポリ
ン複合体（６−メルカプトプリンおよびドキソルビシンとβ−ラクタマーゼとの
複合体）、エトポシドホスフェートおよびアルカリホスファターゼが含まれるが
、これらに限定されない。
【００６５】 本発明の他の実施形態では、標的部位でプロドラッグを活性化し、身体の解毒
経路の調節によって通常の治療薬の効果を改善することができる酵素を、ハプテ
ンに結合する。酵素−ハプテン複合体を、プレターゲッティングｂｓＡｂの投与
後に患者に投与し、標的部位に指向させる。酵素を標的部位に局在させた後、標
的部位で作用することが公知の細胞傷害性薬物またはプレターゲッティング酵素
によってin situで薬物に変換するプロドラッグを注射する。上記のように、薬
物は、哺乳動物の通常の解毒経路によって解毒されて毒性の低い中間体を形成す
るもので、最も一般的にはグルクロニドである。解毒中間体（例えば、グルクロ
ニド）はプレターゲッティング酵素によってより有毒な形態に再変換されること
により、標的部位での細胞傷害性が増大する。これにより薬物が再循環する。同
様に、投与されたプロドラッグを、通常の生物学的経路によって活性薬物に変換
することができる。プレターゲッティング酵素は、解毒薬物の再循環によって治
療効率が改良される。このアプローチを、任意の酵素−薬物対との使用に適用す
ることができる。別の実施形態では、酵素−ハプテン複合体を、患者への投与前
に標的ｂｓＡｂと混合することができる。酵素−ハプテン−ｂｓＡｂ複合体を標
的部位に局在させ、非結合複合体を循環からクリアリングするのに十分な時間の
経過後、プロドラッグを投与する。次いで、上記のように、プロドラッグはプレ
ターゲッティング酵素によってin situで薬物に変換される。
【００６６】 本発明の別の実施形態では、ターゲッティング可能な複合体のキャリア部分を
プロドラッグに結合する。プレターゲッティングｂｓＡｂを患者に投与し、標的
に局在させて循環を実質的にクリアリングする。適切な時間後、プロドラッグを
含むターゲッティング可能な複合体（例えば、ポリグルタミン酸（ＳＮ−３８−
エステル）10）を投与することによって腫瘍標的で特異的に薬物が局在する。腫
瘍内および腫瘍周囲での高速の細胞溶解によって、腫瘍は細胞内供給源から放出
された酵素の量を増加させることが公知である。実施者は、これらの酵素によっ
て活性化することができるプロドラッグの適切な選択によってこの事実を利用す
ることができる。例えば、カルボキシルエステラーゼは、ポリグルタミン酸（Ｓ
Ｎ−３８−エステル）10のエステル結合の切断によってプロドラッグポリグルタ
ミン酸（ＳＮ−３８−エステル）10を活性化し、腫瘍で遊離のＳＮ−３８の濃縮
物を大量に放出する。あるいは、適切な酵素を、腫瘍部位に標的化することもで
きる。
【００６７】 ターゲッティング可能な複合体からの切断後、薬物を腫瘍細胞によって内在化
する。あるいは、薬物を、標的での架橋によるインタクトな複合体の一部として
内在化することができる。ターゲッティング可能な複合体は、腫瘍結合ｂｓＡｂ
の内在化を誘導し、よれによって内在化されるべき薬物のレベルが高まり治療効
率を改良することができる。
【００６８】 種々のキャリアがプロドラッグとの結合に十分に適切であり、そのキャリアに
は、ポリアミノ酸（ポリリジン、ポリグルタミン酸（Ｅ）およびアスパラギン酸
（Ｄ）（そのＤ−アミノ酸アナログを含む）など）、コポリマー（ポリ（Ｌｙｓ
−Ｇｌｕ）｛ポリ［ＫＥ］｝など）が含まれ、その比は１：１０〜１０：１が有
利である。アミノ酸混合物に基づくコポリマー（ポリ（Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ
−Ｔｙｒ）（ＫＡＥＹ，５：６：２：１）など）も使用することができる。規定
の分子量のより小さな重合キャリアを、固相ペプチド合成技術によって産生する
ことができ、２〜５０鎖長のポリペプチドを容易に産生することができる。正確
な構造以外のこの型の試薬の第２の利点は、鎖中の一定のポイントで１つまたは
所望の任意の数の結合手を置く能力である。これを、その後各部分の選択された
レベルでの認識および治療ハプテンの結合に使用することができる。
【００６９】 ポリ（エチレン）グリコール［ＰＥＧ］は、in vivoで二重特異性抗体プロド
ラッグアプローチに対する望ましい性質を有する。ＳＮ−３８と標準的なジヒド
ロキシルＰＥＧの両端との間のエステル結合を、ＳＮ−３８とＰＥＧの水酸基と
の間へのコハク酸などの二価酸の挿入によって導入して、ＳＮ−３８−Ｏ−ＣＯ
−（ＣＨ2）2ＣＯ−Ｏ−ＰＥＧ−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ2）2ＣＯ−ＯＳＮ−３８などの
種を産生する。産生されたジＳＮ−３８−ＰＥＧは、ＳＮ−３８−ポリマープロ
ドラッグのクラスの最も短いメンバーと考えることができる。ＰＥＧ誘導体のin
vivoでの所望の性質およびその二量体の機能による限られた負荷能力により、
Ｐｏｉａｎｉらに記載のようなより大量のハプテン保有能力を有するＰＥＧコポ
リマーが調製される。例えば、Ｐｏｉａｎｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃ
ｈｅｍ．、５、６２１〜６３０、１９９４を参照のこと。ＰＥＧ誘導体を、その
ビス（スクシニミジル）カーボネート誘導体として両端で活性化させ、リジンな
どの多機能性ジアミンと共重合する。リシルカルボキシル基が重合プロセスに関
与しない（−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−）n
反復単位を含むこのような共重合産物を、ＳＮ−３８残基の結合に使用すること
ができる。ＳＮ−３８残基を、遊離のカルボキシル基と反応させて、（−Ｌｙｓ
（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−）n鎖のＳＮ−３８エス
テルを産生させる。
【００７０】 ハプテンおよびプロドラッグの保有に使用することができる他の合成ポリマー
には、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＭＰＡ）コポリマ
ー、ポリ（スチレン−コ−マレイン酸／無水物）（ＳＭＡ）、ポリ（ジビニルエ
ーテルマレイン酸無水物）（ＤＩＶＥＭＡ）、ポリエチレンイミン、エトシキル
化ポリエチレンイミン、スターバーストデンドリマーおよびポリ（Ｎ−ビニルピ
ロリドン）（ＰＶＰ）が含まれる。例として、複数の無水物単位からなるＤＩＶ
ＥＭＡポリマーを、限定量のＳＮ−３８と反応させて、ポリマーバックボーンに
所望の置換率の薬物を産生する。残存した無水物基を水性条件下で切断して遊離
のカルボン酸基を産生する。限定数の遊離のカルボン酸基を標準的な水溶性ペプ
チドカップリング剤（例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル
）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）を用いて活性化し、遊離のアミノ基
を保有する認識部分にカップリングする。後者の例は、ヒスタミンであり、これ
は過去に抗体を惹起している。
【００７１】 種々のプロドラッグをターゲッティング可能な混合物のキャリア部分に結合さ
せることができる。ポリマー用途の上記の例は、プロドラッグＣＰＴ−１１（イ
リノテカン）の活性代謝物ＳＮ−３８と考えられる。ＳＮ−３８は、エステラー
ゼ型酵素に感受性を有するアリールエステルを産生するために上記で使用した芳
香族水酸基を有する。同様に、化学療法で広く一般に使用されるカンプトセシン
アナログのトポテカンは、ＳＮ−３８で記載の類似の様式でエステラーゼ感受性
ポリマー−プロドラッグを産生するのに使用することができる利用可能な芳香族
水酸残基を有する。
【００７２】 ドキソルビシンはまた、カンプトセシンファミリーでの記載に類似の酸−触媒
反応を用いてカルボン酸含有重合キャリアにカップリングすることができる芳香
族水酸基を含む。同様に、ダウノマイシン、エピルビシン、およびイダルビシン
のようなドキソルビシンアナログを、同一の様式でカップリングすることができ
る。重合キャリアへの化学カップリングに十分に活性なアミノ「化学結合手」を
有するドキソルビシンおよび他の薬物を、多数の方法においてこれらの遊離アミ
ノ基を介してキャリア分子に有効にカップリングすることができる。遊離のカル
ボン酸基を保有するポリマーを、in situで活性化し（ＥＤＣ）、活性化ポリマ
ーをドキソルビシンと混合してアミド結合を介したポリマーの側鎖に薬物を直接
結合させることができる。ビス（スクシニミジル）エステル基との反応後に２つ
のアミドとして２つのアミンを架橋するために、アミノ含有薬物を市販または切
断可能な架橋剤（エチレングリコビス（スクシニミジルスクシネート）（ＥＧＳ
、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）または
ビス−［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（Ｂ
ＳＯＣＯＥＳ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｕｎｔｓｖｉ
ｌｌｅ、ＡＬ）など）の混合によってアミノペンダントポリマーにカップリング
することもできる。これは、基が酵素による切断に感受性を有するままであるの
で有利である。例えば、（ドキソルビシン−ＥＧＳ）n−ポリリジンは、エステ
ラーゼなどの酵素によるＥＧＳ結合鎖中のジエステル基の酵素切断に感受性を有
するままである。ドキソルビシンはまた、確立された手順（ＨｙＢｎ＝ｐ−Ｈ2
ＮＮＨＣ6Ｈ4ＣＯ2Ｈ）を用いて種々のペプチド（例えば、ＨｙＢｎＫ（ＤＴＰ
Ａ）ＹＫ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ2）に結合することができる。Ｋａｎｅｋｏら、Ｊ
．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２、１３３〜１４１、１９９１を参
照のこと。
【００７３】 メトトレキセートはまた、ドキソルビシンに対して記載されたものと類似の様
式で活性化カルボン酸含有ポリマーへのカップリング用の利用可能なアミノ基を
有する。これは、アミノ基含有ポリマーへのカップリングのために活性化するこ
とができる２つのグルタミルカルボキシル基（αおよびγ）も有する。メトトレ
キセートの遊離のカルボン酸基を、in situ（ＥＤＣ）で活性化し、活性化した
薬物をアミノ含有ポリマーと混合してアミド結合を介してポリマーの側鎖に薬物
を直接結合することができる。過剰な未反応または交差反応薬物は、サイズ排除
またはイオン交換クロマトグラフィーを用いてポリマー−薬物複合体から容易に
分離される。
【００７４】 メイタンシノイドおよびカリケアミシン（エスペラマイシンなど）は、切断さ
れて化学操作に有用な単一のチオールを有する種を産生することができる混合ジ
およびトリスルフィド結合を含む。チオメイタンシノイドまたはチオエスペラマ
イシンを、ペプチダーゼによる切断に感受性を有するマレイミド−ペプチドなど
の架橋剤と最初に反応させる。次いで、ペプチドのＣ末端を活性化してポリリジ
ンなどのアミノ含有ポリマーにカップリングする。
【００７５】 さらに別の実施形態では、in vivoでの標的のための治療薬またはプロドラッ
グポリマーの二重特異性抗体指向送達を、放射性核種の二重特異性抗体送達と組
み合わせて、化学療法と放射治療を組み合わせることができる。各治療薬をター
ゲッティング可能な複合体に結合して同時投与することができるか、核種を第１
のターゲッティング可能な複合体の一部および第２のターゲッティング可能な複
合体の一部として後のステップで投与される薬物として投与することができる。
１つの簡単な実施形態では、単一のプロドラッグを含むペプチドおよび単一の核
種を構築する。例えば、トリペプチドＡｃ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2を
、ターゲッティング可能な複合体のキャリア部分として使用し、ＳＮ−３８をア
リールエステルとしてγグルタミルカルボキシル基に結合させ、キレートＤＯＴ
Ａをアミドとしてε−アミノ基に結合させて、複合体Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８
）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）−ＮＨ2を産生することができる。次いで、Ｄ
ＯＴＡキレートを、画像化および治療目的で種々の金属（111Ｉｎ、90Ｙ、153Ｓ
ｍ、177Ｌｕ、および89Ｚｒを含む）で放射性標識することができる。金属−Ｄ
ＯＴＡ複合体はターゲッティング可能な複合体における認識可能なハプテンを提
示し得るので、使用した金属はＤＯＴＡ複合体の一部としてのみ必要であること
は、第２の認識抗体もまた十分に高い親和性で特定の金属−ＤＯＴＡ複合体を認
識するということである。一般に、この親和性（ｌｏｇＫa）は、６〜１１の間
である。ポリ［Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）10−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）２］な
どの重合ペプチドは、より化学的に規定された上記の実際に好ましい試薬と同様
な容易さで投与することができる。また、認識薬剤が放射免疫薬と独立するよう
に三置換されたポリマー（ポリ［Ｇｌｕ（Ｓｎ−３８）10−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−
ＤＯＴＡ）n（ヒスタミン−スクシネート）m］、ここで、ｎおよびｍは整数であ
るなど）を使用することができる。プロドラッグを、腫瘍部位に存在するカルボ
キシエステラーゼまたは第２のターゲッティング可能な複合体を使用してその部
位に標的化したカルボキシルエステラーゼで活性化する。
【００７６】 あるいは、別のステップで化学療法薬および放射免疫薬の投与によって併用療
法を行うことができる。例えば、ＣＥＡ−腫瘍を発現した患者を、ＣＥＡと特異
的に結合する少なくとも１つのアームおよびハプテンがイットリウム−ＤＯＴＡ
の複合体であるターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１
つの他のアームを有するｂｓＡｂを最初に投与する。その後、患者を、イットリ
ウム−ＤＯＴＡ−β−グルクロニダーゼの複合体を含むターゲッティング可能な
複合体で治療する。ｂｓＡｂおよび酵素の局在化およびクリアリングするための
十分な時間の後、第２のターゲッティング可能な複合体（Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−
３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）−ＮＨ2を含む）を投与する。
第２のターゲッティング可能な複合体は、第１のターゲッティング可能な複合体
に未だ結合していない腫瘍でのｂｓＡｂによる腫瘍に局在する。標的部位に局在
された第１のターゲッティング可能な複合体は、Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−
Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）−ＮＨ2に作用してＳＮ−３８薬物を遊
離する。プロドラッグおよびその各酵素の標的部位への局在化は、酵素が限定さ
れた基質ではないことを確認することによって活性薬物の産生を促進する。本実
施形態は、当分野で現在実施されている現在のプロドラッグ法の顕著に改良して
いる。
【００７７】 核種を先で投与したターゲッティング可能な複合体の一部として投与した後、
後のステップでのプロドラッグ−ポリマー投与の別の利点は、照射と薬物治療と
の相乗効果を操作して最大にすることができることである。ＰＡＩＴ後の照射損
傷により腫瘍がより「漏出性」になると推定される。これにより、ポリマーを腫
瘍により完全でかつ深く侵入させることができる。これにより、化学治療が改良
される。
【００７８】 あるいは、ＲＡＩＴ治療薬を、ターゲッティング可能な複合体よりもｂｓＡｂ
に付結合させることができる。例えば、90Ｙ−ＤＯＴＡに結合した抗ＣＥＡ×抗
ＤＴＰＡを、ＣＥＡ発現腫瘍患者に最初に投与する。この例では、抗インジウム
−ＤＴＰＡ抗体がイットリウム−ＤＯＴＡキレートに結合しないという点で一定
の抗キレートの選択性が得られるという利点がある。90Ｙ−ＤＯＴＡ−抗ＣＥＡ
×抗インジウム−ＤＴＰＡを腫瘍で最大にして実質的に非標的組織をクリアリン
グし、インジウム−ＤＴＰＡ−グルクロニダーゼの複合体を注射してＣＥＡ腫瘍
部位に特異的に局在する。次いで、患者に、ポリ（Ｇｌｕ）（ＳＮ−３８）10な
どのポリマー−プロドラッグを注射する。後者を腫瘍で活性な単量体ＳＮ−３８
に選択的に切断し、化学治療薬と先で投与したＲＡＩＴとを首尾よく組み合わせ
る。
【００７９】 標的部位に特異的な少なくとも１つの結合部位および酵素に特異的な少なくと
も１つの他の結合部位を有する二重特異性抗体または抗体フラグメントを本方法
で使用することができることもまた特記すべきである。このような抗体は、注射
前に酵素と結合することにより酵素と抗体との共有結合を未然に回避することが
できるか、非標的抗体が哺乳動物の循環系から実質的にクリアリングされた後に
注射して標的部位に局在させることができ、酵素を、十分な量の酵素がプレター
ゲッティングｂｓＡｂに到達して結合し、in situで抗体−酵素複合体を形成す
ることができる量および経路で注射することができる。
【００８０】 本発明の１つの実施形態では、ｂｓＡｂとターゲッティング可能な複合体との
間の用量で投与されるクリアリング剤を使用することができる。本発明者らは、
新規の力学的作用を有するクリアリング剤（すなわち、ｂｓＡｂの罹患標的アー
ムに対して標的されるグリコシル化抗イディオタイプＦａｂ’フラグメント）を
本発明で使用することができることを発見した。この実施形態では、抗ＣＥＡ（
ＭＮ１４Ａｂ）×抗ペプチドｂｓＡｂを投与して罹患標的中で最大範囲に促進す
ることができる。残渣ｂｓＡｂをクリアリングするために、ＷＩ２と呼ばれるＭ
Ｎ−１４に対する抗イディオタイプＡｂを、グリコシル化Ｆａｂ’フラグメント
として投与する。クリアリング剤は、一価でｂｓＡｂに結合する一方でその付加
したグリコシル残渣は全ての複合体を肺に指向し、迅速に代謝する。次いで、タ
ーゲッティング可能な複合体に会合させた治療薬を、患者に投与する。ｂｓＡｂ
のＭＮ−１４アームに対するＷＩ２Ａｂは、ＷＩ２−Ｆａｂ’が一価の部分で架
橋に関与しないために、高い親和性および他の開示された機構（Ｇｏｏｄｗｉｎ
ら、前出を参照のこと）と異なるクリアリング機構を有する。
【００８１】 本発明のさらに別の態様によれば、本発明は、標的組織に特異的に結合する少
なくとも１つのアームおよびターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する
少なくとも１つの他のアームを有する二重特異性抗体または抗体フラグメント、
二重特異性抗体または抗体フラグメントの少なくとも１つの他のアームによって
認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むか保有するキャリア部分を含む第
１のターゲッティング可能な複合体、１つまたは複数の結合した治療薬もしくは
診断薬または酵素、ならびに、任意選択的に、局在していない抗体および抗体フ
ラグメントのクリアリングに有用なクリアリング組成物を含む患者の罹患組織の
治療または同定に適切なキットを提供する。第１のターゲッティング可能な複合
体が酵素を含む場合、キットは、酵素がプロドラッグを標的部位で薬物に変換す
ることができる場合の、プロドラッグ、または酵素が解毒中間体を有毒な形態に
再変換し、その結果標的部位で薬物の毒性が増加し得る場合、患者中で解毒され
て毒性の低い中間体を形成することができる薬物、または酵素が解毒中間体を有
毒な形態に再変換し、その結果標的部位で薬物の毒性が増加し得る場合、天然の
処理によって患者中で活性化され、毒性の低い中間体に変換されることによって
解毒に供されるプロドラッグ、または酵素が標的部位でプロドラッグを薬物に変
換することができる場合、二重特異性抗体または抗体フラグメントの少なくとも
１つの他のアームによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを
含むか保有するキャリア部分含む第２のターゲッティング可能な複合体を任意選
択的に含むことができる。罹患組織の同定または治療を促進する機器もキットに
含むことができる。例として、シリンジなどの適用デバイスが含まれるが、これ
に限定されない。罹患組織の同定または治療用の本発明の開示物の利用に必要な
溶液もキットに含むことができる。
【００８２】 実施例 例１）ペプチド抗原の合成： ペプチドのＡｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨを
、固相合成用レジンを使用し、最初の残基（リジン）を、区別を付けて保護した
誘導体のα−Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨとしてレジンに付着させて構
築する。α−Ｆｍｏｃ保護基を選択的に除去し、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）
、α−Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨを
、カップリングとα−アミノ基脱保護の交互のサイクルで加える。次いで、Ａｌ
ｏｃ−およびＯＢｕｔ−側鎖保護基を、ＴＦＡと反応させて除去し、遊離α−お
よびε−アミノ基を無水酢酸との反応によりキャップすると、Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌ
ｙｓ（Ａｃ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨが得られる。
【００８３】 例２）Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨのＫＬＨ
へのカップリング： 水に溶かし、１ＮのＨＣｌで４．０にｐＨを調整した、ペプチドのＡｃ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨを、１モル等量の１−エチ
ル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドで処理し、１時間４℃で
反応させる。ｐＨ８．５に緩衝化したキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬ
Ｈ）を１００倍モル過剰の活性化ペプチドで処理し、複合体反応を１時間４℃で
進行させる。ペプチド−ＫＬＨ複合体をサイズ排除クロマトグラフィーにより非
反応ペプチドから精製し、抗体産生に使用する。
【００８４】 例３）抗ペプチドＡｂの作成： 免疫適合性マウスに、完全フロイントアジュバント中のペプチド抗原混合物を
注入する。不完全フロイントアジュバントと混合したペプチドの２回のブースタ
ー注射を、次の数週間におよび投与する。脾臓細胞を動物から収集し、Ｓｐ２／
０−Ａｇ１４骨髄腫細胞と融合させる。得られたクローンの培養上清を、ＥＬＩ
ＳＡにより、元来のペプチド免疫原で覆膜したプレートを使用して、抗ペプチド
反応性について分析する。酵素欠損ハイブリドーマを単離すると、融合細胞系の
選択が可能となり、選択したクローンを培養培地で増殖して抗ペプチドＡｂを産
生する。
【００８５】 例４）抗ペプチドＡｂの精製： 抗ペプチドＡｂは、プロテインＡカラムを使用してＩｇＧ画分を単離し、次い
で、イオン交換カラムにより所望の産物を清浄してクロマトグラフィーにより精
製される。目的のＡｂは、目的のペプチドを活性化ビーズまたはレジンに化学的
にカップリングさせることにより調製した、固相支持体に結合した該ペプチドか
らなるアフィニティーカラムの使用により最終的に精製される。
【００８６】 例５）抗ペプチドＡｂのＦ（ａｂ'）2への消化： 抗ペプチドＡｂを、１時間ｐＨ４で２００μｇ／μＬのペプシンと共にインキ
ュベートし、プロテインＡのタンデムカラムにより非消化ＩｇＧを除去し、次い
で、Ｇ−５０−セファデックスにより低分子量混入物を除去することにより精製
する。
【００８７】 例６）抗ペプチド−ＡｂのＦａｂ'−ＳＨへの還元 抗ペプチド−Ｆ（ａｂ'）2を、１０ｍＭ ＥＤＴＡを含む新しく調製した０．
１Ｍ ＰＢＳ中システイン溶液との反応によりＦａｂ'フラグメントに還元する
。反応の進行は、ＨＰＬＣにより追跡し、約１時間で完了すると、Ｆａｂ'−Ｓ
Ｈをスピンカラムクロマトグラフィーにより精製し、１０ｍＭ ＥＤＴＡを含む
ｐＨ＜５の脱酸素緩衝液中に貯蔵する。
【００８８】 例７）抗ＣＥＡ−ＩｇＧのマレイミド部分への酸化的カップリング： 抗ＣＥＡ Ａｂ ＩｇＧを、暗闇中、９０分間４℃で、１０ｍＭ過ヨウ素酸ナ
トリウムと反応させて酸化する。酸化Ａｂをスピンカラムクロマトグラフィーに
より精製し、過剰の架橋剤４−（４−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（Ｍ
ＰＢＨ）と混合する。反応を２時間進行させ、ＩｇＧ−ヒドラゾン−マレイミド
をスピンカラムクロマトグラフィーにより精製する。ヒドラゾン結合を、１０ｍ
Ｍシアノ水素化ホウ素ナトリウムでの反応により還元し、再精製する。
【００８９】 例８）抗ＣＥＡ−ＩｇＧ×抗ペプチド−Ｆａｂ'二重特異的Ａｂの調製： 例７）のＩｇＧ−ヒドラジド−マレイミドを、例６で調製した等モル量の抗ペ
プチドＦａｂ'−ＳＨを用いて、ｐＨ６．０で３０分間室温で処理する。残りの
遊離チオール基はヨードアセトアミドで３０分間反応させて遮断する。二重特異
的Ａｂ抗ＣＥＡ−ＩｇＧ×抗ペプチド−Ｆａｂ'をサイズ排除クロマトグラフィ
ーにより精製して、非反応Ｆａｂ'を除去し、次いで、固相に結合したペプチド
を使用してアフィニティークロマトグラフィーによりＩｇＧ×Ｆａｂ'を非反応
ＩｇＧから分離する。
【００９０】 例９）Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｚ−ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ｂｚ−ＤＴ
ＰＡ）−ＮＨ2の合成： ペプチドのＡｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）
−ＮＨ2を、固相合成用レジンを使用し、最初の残基（リジン）を、区別をつけ
て保護した誘導体のα−Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨとして該レジンに
付着させて構築する。α−Ｆｍｏｃ保護基を選択的に除去し、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ
（ＯＢｕｔ）、α−Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｐ
ｈｅ−ＯＨを、カップリングとα−アミノ基脱保護の交互サイクルで加える。Ａ
ｌｏｃ側鎖をパラジウム（０）触媒との反応により除去する。別法として、ＴＦ
Ａとの反応により除去され得るＢｏｃ保護基を使用してもよく、遊離アミノ基を
過剰のＩＴＣ−Ｂｚ−ＤＴＰＡと反応させる。過剰のＢｚ−ＤＴＰＡを除去した
後、α−アミノ基を無水酢酸との反応によりキャップし、全体のペプチドを、Ｔ
ＦＡを用いてレジンから取り外すと（同時にチロシル残基を脱保護する）、Ａｃ
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｚ−ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ｂｚ−ＤＴＰＡ）−Ｎ
Ｈ2が得られる。
【００９１】 例１０）Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｚ−ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ｂｚ−Ｄ
ＴＰＡ）−ＮＨ2のＹ−９０による放射標識： １００倍モル過剰の標題ペプチドを、ｐＨ５．５の酢酸緩衝液中のイットリウ
ム−９０放射性核種と混合する。放射標識は３０分後に完了し定量的である。
【００９２】 例１１）カルボキシルエステラーゼのジ−ＤＴＰＡ−ペプチドへの複合体： ｐＨ８．０の０．２Ｍリン酸緩衝液中カルボキシルエステラーゼ（５ｍｇ）を
、５倍モル過剰の架橋剤スルホ−スクシニミジル−［４−マレイミドメチル］−
シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）で処理する。２時
間室温で撹拌した後、活性化酵素を、Ｇ−２５セファデックスのスピンカラムを
使用して低分子量混入物質から分離し、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むｐＨ７の０．１
Ｍリン酸緩衝液中で平衡化させる。テトラペプチドＮ−アセチル−Ｃｙｓ．Ｌｙ
ｓ（ＤＴＰＡ）．Ｔｙｒ．Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）．ＮＨ2（１０倍モル過剰）を活
性化酵素に加え、スピンカラムに使用したのと同じ緩衝液に溶かす。１時間室温
で撹拌した後、カルボキシルエステラーゼ−Ｃｙｓ．Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）．Ｔｙ
ｒ．Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）．ＮＨ2ペプチド複合体を、ｐＨ６．０の０．２５Ｍ酢
酸緩衝液中Ｇ−２５セファデックススピンカラムクロマトグラフィーにより非反
応ペプチドから精製する。成功裡の複合体が、複合体のアリコートのインジウム
−１１１標識およびサイズ排除ＨＰＬＣによる分析により実証される。
【００９３】 例１２）ＲＡＩＴのための抗ＣＥＡ−ＩｇＧ×抗ペプチド−Ｆａｂ'二重特異的
Ａｂの使用： ＣＥＡを発現している腫瘍を有する患者に、抗ＣＥＡ−ＩｇＧ×抗ペプチド−
Ｆａｂ'二重特異的Ａｂを投与する。数日後、患者にＹ−９０−ジ−Ｂｚ−ＤＴ
ＰＡ−ペプチド（例１０由来）を投与する。Ｙ−９０標識ペプチドは、非標的組
織から迅速にクリアリングされるが、抗ＣＥＡ−ＩｇＧ×抗ペプチド−Ｆａｂ'
二重特異的Ａｂでプレターゲッティングした部位に集中して局在し、腫瘍を破壊
する。
【００９４】 例１３）ガラクトース−ＷＩ２−Ｆａｂ'クリアリング剤の調製： ＷＩ２と称される、ＭＮ−１４に対する抗イディオタイプＡｂを、例４に概略
を示したように、ペプシンを使用してＦ（ａｂ'）2フラグメントに消化する。Ｆ
（ａｂ'）2を、例６に概略を示したように、低分子量チオールを使用してＦａｂ
'フラグメントに還元する。還元の終了時に、Ｆａｂ'−ＳＨをスピンカラムクロ
マトグラフィーにより精製し、過剰のヨードアセトアミドと反応させ、ヒンジ領
域チオール基を遮断し、再結合を防止する。過剰のヨードアセトアミドからの再
精製後、Ｆａｂ'を４００倍モル過剰のガラクトシル化剤のシアノメチル−２，
３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの
チオ−イミデート（Ｋａｒａｃａｙら参照）と反応させる。ガラクトシル化タン
パク質を２つのスピンカラムにより精製し、ガラクトース：Ｆａｂ'比をＭＡＬ
ＤＩ−ＭＳにより決定する。
【００９５】 例１４）ｂｓＡｂクリアリングステップでの、ＲＡＩＴのための抗ＣＥＡ−Ｉｇ
Ｇ×抗ペプチドＦａｂ'二重特異的Ａｂの使用： ＣＥＡを発現している腫瘍を有する患者に、抗ＣＥＡ−ＩｇＧ（ＭＮ−１４）
×抗ペプチド−Ｆａｂ'二重特異的Ａｂを投与する。３日後、患者にクリアリン
グ用量のガラクトース−ＷＩ２−Ｆａｂ'を投与する。クリアリング用量のガラ
クトース−ＷＩ２−Ｆａｂ'の投与から２４時間後、患者に、Ｙ−９０−ジ−Ｂ
ｚ−ＤＴＰＡ−ペプチドを投与する。Ｙ−９０標識ペプチドは、非標的組織から
迅速にクリアリングされるが、抗ＣＥＡ−ＩｇＧ×抗ペプチド−Ｆａｂ'二重特
異的Ａｂでプレターゲッティングした部位に集中して局在し、腫瘍を破壊する。
【００９６】 例１５）Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＴｙｒＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｌｙｓ（Ｔｓ
ｃＧ−Ｃｙｓ−）−ＮＨ２（ＩＭＰ１９２）の合成： 最初のアミノ酸のＡｌｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨを、ペプチド合成機で
０．２１ｍｍｏｌのリンクアミドレジンに付着させ、次いで、標準的なＦｍｏｃ
自動合成プロトコルを使用してリジンの側鎖にＴｃ−９９ｍリガンド結合残基Ｆ
ｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＴｓｃＧを加えて、ペプチドＡｌｏｃ−
Ｌｙｓ（ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−リンクレジンを形成する。次いで、Ａｌ
ｏｃ基を、レジンを、１０ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2、０．７５ｍＬの氷酢酸および２．
５ｍＬのジイソプロピルエチルアミンに溶かした、１００ｍｇのＰｄ［Ｐ（Ｐｈ
）3］4を含む溶液８ｍＬで処理して除去する。次いで、レジン混合物を０．８ｍ
Ｌの水素化トリブチルスズで処置し、６０分間ボルテックスをかけて混合した。
次いで、ペプチド合成を合成機で続けて、ペプチドＬｙｓ（Ａｌｏｃ）−Ｔｙｒ
−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−Ｌｙｓ（ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ−）−リンクレジンを製造し
た。Ｎ末端を、１０ｍＬのＤＭＦ、３ｍＬの無水酢酸および６ｍＬのジイソプロ
ピルエチルアミンを含む溶液８ｍＬとレジンを、６０分間ボルテックスで混合す
ることによりアセチル化した。次いで、側鎖Ａｌｏｃ保護基を上記の通りに除去
し、レジンを、標準的なＦｍｏｃ脱保護プロトコルを使用してピペリジンで処理
して、レジンに残った全ての酢酸を除去した。活性化ＤＴＰＡおよびＤＴＰＡ付
加：ＤＴＰＡ５ｇを、４０ｍＬの１．０Ｍ水酸化テトラブチルアンモニウムのメ
タノール溶液に溶かした。メタノールを高真空下で除去すると粘性油状物が得ら
れた。油状物を５０ｍＬ ＤＭＦに溶かし、揮発性溶媒を回転蒸発器で高真空下
で除去した。ＤＭＦ処理を２回以上繰返した。次いで、粘性油状物を５０ｍＬ
ＤＭＦに溶かし、５ｇＨＢＴＵと混合した。次いで、８ｍｌアリコートの活性化
ＤＴＰＡ溶液をレジンに加え、これを１４時間ボルテックスをかけて混合した。
ＤＴＰＡ処理は、レジンが、Ｋａｉｓｅｒ試験を使用してアミンについて陰性試
験を与えるようになるまで繰返した。切断および精製：次いで、ペプチドを、３
０ｍｌ ＴＦＡ、１ｍｌトリイソプロピルシラン、および１ｍｌエタンジチオー
ルから作成した溶液８ｍｌで６０分間処理することによりレジンから切断した。
粗切断ペプチドを、３０ｍｌのエーテルに注ぐことにより沈殿させ、遠心分離に
より回収した。次いで、ペプチドを、４×３０ｃｍＷａｔｅｒｓ分取Ｃ−１８Ｄ
ｅｌｔａ−Ｐａｋカラム（１５μｍ、１００Å）を使用して逆相ＨＰＬＣにより
精製した。ＨＰＬＣ画分を回収し、凍結乾燥すると、ＥＳＭＳ（ＭＨ±１５９０
）により所望の産物を含む画分が得られた。キット調合：ペプチドを、７８μｇ
のペプチド、０．９２ｍｇの非放射性ＩｎＣｌ3、１００μｇの塩化第一スズ、
３ｍｇのゲンチジン酸、およびＨＰＣＤ（再構成時に１０％）を含む凍結乾燥キ
ットに調合した。
【００９７】 例１６）Ｔｃ−９９ｍ標識および安定性： ＩＭＰ１９２キットは、２５ｍＣｉ Ｎａ99mＴｃＯ4を含む１．５ｍＬ食塩水
でバイアルの内容物を再構成することにより標識した。該キットを、室温で１０
分間インキュベートし、次いで、沸騰水浴中で１５分間加熱した。次いで、標識
ペプチド溶液を室温まで冷却した。アリコートを安定性試験のために取り出した
。アリコートを、食塩水、０．０５ＭホスフェートｐＨ７．５中１ｍＭシステイ
ン、および新鮮なヒト血清で１：１０に希釈した。元来のキット溶液、食塩水希
釈液およびシステイン攻撃液は室温でインキュベートし、一方、血清サンプルは
３７℃でインキュベートした。該サンプルはＨＰＬＣおよびＩＴＬＣによりモニ
タリングした。標識ペプチドはin vitroでの試験で安定であった。血清中の標識
ペプチドの保持時間は６．３ｍｍから７．３ｍｍに移動した。この移動は、いく
つかの血清成分のペプチドとのイオン対形成に起因し得る。
【００９８】
【表１】
【００９９】 例１７）ｈＭＮ−１４×７３４（Ｆａｂ×Ｆａｂ）の調製： このｂｓＭＡｂは、例８と同じように、ｈＭＮ−１４Ｆａｂ'SH（ヒト化モノ
クローナル抗ＣＥＡ抗体）および７３４Ｆａｂ'mal（ネズミ抗ジＤＴＰＡ）フラ
グメントを架橋することにより調製した。ｈＭＮ−１４および７３４のＦａｂ'S H フラグメントを、１０ｍＭ ＥＤＴＡの存在下、ｐＨ７．３で６０分間３７℃
で１０ｍＭの２−メルカプトエチルアミンを用いてＦ（ａｂ'）2フラグメントを
還元することにより調製した。Ｆａｂ'SHを、スピンカラム（Ｐｅｎｅｆｓｋｙ
）精製（セファデックスＧ−５０−８０、５０ｍＭ ＮａＯＡｃ、０．５ｍＭ
ＥＤＴＡ、ｐＨ５．３）後に回収した。マレイミド基（群）を、４ｍＭ Ｎ，Ｎ
'−ｏ−フェニレンジマレイミドを使用して室温で６０分間で７３４Ｆａｂ'SHフ
ラグメントに導入した。スピンカラム精製を使用して、Ｆａｂ'malを単離した。
７３４Ｆａｂ'malおよびｈＭＮ−１４Ｆａｂ'SHの架橋を１：１のモル比で、１
６時間、４℃で進行させた。この時に形成され得るジスルフィド結合を分解する
ために、反応混合物を１０ｍＭ ２−メルカプトエチルアミンで１時間ｐＨ５．
３で２３℃で処理した。ＳＨ基を、ｐＨ６．４でＮ−エチルマレイミドを用いて
遮断した。反応混合物をスピンカラムに適用し、過剰の小分子量化合物を除去し
た。次いで、ｂｓＡｂを、分析用サイズ排除ＨＰＬＣカラムのＢｉｏ−Ｓｉｌ
ＳＥＣ−２５０で精製した後に単離した。精製ｂｓＡｂのＨＰＬＣ保持時間は１
０．２３分であった。
【０１００】 例１８）ＨＰＬＣ結合試験： ｂｓＭＡｂを、クロラミンＴ（ＧｒｅｅｎｗｏｏｄおよびＨｕｎｔｅｒ）を使
用して放射ヨウ素化した。放射ヨウ素化ｂｓＭＡｂのＣＥＡ、ＷＩ２（ラット抗
ＭＮ−１４イディオタイプ抗体）および放射標識ペプチジルＤＴＰＡキレートへ
の結合を、分析用サイズ排除ＨＰＬＣで調べた。約９０％の放射ヨウ素化ｂｓＭ
Ａｂが、１０〜２０倍モル過剰のＣＥＡで処理した場合にＣＥＡに結合した。ｂ
ｓＭＡｂは、放射標識インジウム−ＤＴＰＡキレート（ＩＭＰ−１５６またはＩ
ＭＰ−１９２）と複合体を形成した。 ＩＭＰ １５６ Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰ
Ａ）−ＮＨ2
【０１０１】 例１９）血清安定性： 放射ヨウ素化ｂｓＭＡｂを、加湿５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で新鮮なヒト血
清中で安定性について試験した。アリコートをＳＥ−ＨＰＬＣで調べた。血清タ
ンパク質と会合した放射ヨウ素を検出するために、アリコートをＷＩ２と混合し
て、ｂｓＭＡｂピークを早期の保持時間に移動させた。ｂｓＭＡｂは、血清中で
４８時間インキュベートした後に、ＷＩ２に対する結合能の３〜５％の減少が示
された。７２時間血清中でｂｓＭＡｂをインキュベートすると、僅かな凝集物の
形成（４〜７％）が観察された。
【０１０２】 例２０）９９ｍ−Ｔｃ−ＩＭＰ−１９２： このペプチジルキレートのＴｃ−９９ｍ複合体のin vitroでの安定性は、食塩
水、新鮮なヒト血清および１０ｍＭシステイン中で２０時間までインキュベート
することにより確立した。in vivoでの安定性は、プレターゲッティング実験で
９９ｍ−Ｔｃ−ＩＭＰ−１９２を注入したマウスから集めた尿の分析により調べ
た。尿に分泌された活性は、活性が依然としてＳＥ−ＨＰＬＣにより示されたよ
うに抗体に結合するので、無傷ペプチドのようである。正常なＢＡＬＢ／ｃマウ
スでの９９ｍ−Ｔｃ−ＩＭＰ−１９２の生体分布試験により、迅速な血液クリア
ランス、表２が示された。in vitroおよびin vivoでの試験により、９９ｍ−Ｔ
ｃ−ＩＭＰ−１９２の安定性が明瞭に実証される。
【０１０３】
【表２】
【０１０４】 例２１）ｈＭＮ１４Ｆａｂ−７３４ｓｃＦｖの作成および発現： 組換え法を使用して、ヒト化モノクローナル抗ＣＥＡ抗体由来のＦａｂフラグ
メントおよびネズミ抗ジＤＴＰＡ由来のｓｃＦｖを含む一価の二重特異的融合タ
ンパク質を産生した。図３参照。単鎖７３４（７３４ｓｃＦｖ）の構造は、ＧＧ
ＧＳ−ＶＬ−（ＧＧＧＧＳ）３−ＶＨとして設計され、先端のＧＧＧＳは、ｓｃ
ＦｖがｈＭＮ−１４の重鎖の定常領域に連結するための可動連鎖を提供する（図
１）。別法として、ｓｃＦｖは、ｈＭＮ−１４の軽鎖の定常領域に連結できる。
ｈＭＮ１４重鎖Ｆｄの７３４ｓｃＦｖへのインフレーム連結に必要な適切なリン
カー配列を、特異的プライマーセットを使用してＰＣＲ反応により７３４のＶＬ
およびＶＫドメインに導入した。７３４ＶＬのＰＣＲ増幅を、プライマーセット
７３４ＶＬｓｃＦｖ５'（Ｃｙｓ）および７３４ＶＬｓｃＦｖ３'（それぞれ配列
番号１＆２）を使用して実施した。プライマー７３４ＶＬｓｃＦｖ５'（Ｃｙｓ
）は、短い可動性リンカーＧＧＧＳを介して７３４ＶＬの最初の６つの残基（Ｑ
ＬＶＶＴＱ）にインフレーム連結した、ヒトＩｇＧ１ヒンジの最初の４つの残基
（ＰＫＳＣ）をコードしているセンス鎖配列を示す。ヒトヒンジの１つのシステ
インが含まれた。これはｈＭＮ１４重鎖Ｆｄ−７３４ｓｃＦｖ融合物とｈＭＮ１
４軽鎖の間の鎖間ジスルフィド連鎖に必要であるからである。ＰｓｔＩ部位は、
ＣＨ１ドメインとヒンジを連結しているイントロン配列でのライゲートを容易に
するために取込まれた（下線）。プライマー７３４ＶＬｓｃＦｖ３'は、７３４
ＶＬドメインの最後の６つの残基（ＴＫＬＫＩＬ）をコードしているアンチセン
ス配列およびＶＬドメインの下流にインフレーム融合された可動性リンカー配列
の一部（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ）を示す。ＰＣＲ増幅後、増幅産物（-４００ｂｐ
）を最初に、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼで処理して、ＰＣＲ増幅中に末端に付加し
た外部「Ａ」残基を除去し、続いてＰｓｔＩで消化した。得られた産物は、Ｐｓ
ｔＩオーバーハングおよび平滑末端をもつ二本鎖ＤＮＡフラグメントであった。
７３４ＶＨのＰＣＲ増幅は、プライマーセット７３４ＶＨｓｃＦｖ５'および７
３４ＶＨｓｃＦｖ３'（ＳａｃＩ）を使用して実施した。プライマー７３４ＶＨ
ｓｃＦｖ５'（配列番号３）は、ＶＬおよびＶＨ配列を連結している可動性リン
カー配列（ＳＧＧＧＧＳ）の残りの部分をコードしているセンス鎖配列、および
７３４ＶＨドメインの最初の６つの残基（ＥＶＫＬＱＥ）を示す。プライマー７
３４ＶＨｓｃＦｖ３'（ＳａｃＩ）（配列番号４）は、７３４ＶＨの最後の６つ
の残基（ＴＶＴＶＳＳ）をコードしているアンチセンス配列を示す。また、翻訳
終止コドン（＊）も含まれる。制限部位ＥａｇＩ（太文字）およびＳａｃＩ（下
線）が、サブクローニングを容易にするために終止コドンの下流に取込まれた。
同様に、-４００ｂｐのＰＣＲ増幅ＶＨ産物を最初にＴ４ＤＮＡポリメラーゼで
処理して、ＰＣＲ産物末端での外部「Ａ」残基を除去し、次いで、ＳａｃＩで消
化し、平滑末端−付着末端立体配置をもつＶＨ ＤＮＡフラグメントが得られる
。ヒトＩｇＧ１ゲノム配列のＳａｃＩＩフラグメントを含むｐＢｌｕｅＳｃｒｉ
ｐｔ（ストラタジーン、ラ・ホーヤ）をベースとしたステージングベクター（Ｈ
Ｃ１ｋｂｐＳＫ）を作成した。ゲノムＳａｃＩＩフラグメントは、部分的５'イ
ントロン、ヒトＩｇＧ１ＣＨ１ドメイン、ＣＨ１をヒンジに連結しているイント
ロン配列、ヒンジ配列、ヒンジをＣＨ２ドメインに連結しているイントロン配列
、およびＣＨ２ドメインの一部を含む。ＨＣ１ｋｂｐＳＫにヒンジおよびＣＨ２
ドメインの一部を含むセグメントを、ＰｓｔＩ／ＳａｃＩ消化により取り出し、
作成したクローニング部位を使用して、上記で調製したＶＬ（ＰｓｔＩ／平滑）
およびＶＨ（平滑／ＳａｃＩ）ＰＣＲ産物を共にライゲートした。得られた作成
物（ＣＨ１−７３４ｐＳＫ）のＣＨ１ドメインをイントロンを介して７３４ｓｃ
Ｆｖ遺伝子配列に連結する（図４）。ＩｇＧ１のゲノムＳａｃＩＩフラグメント
はＣＨ１ドメインをフランキングしている５'イントロン配列の一部を含むのみ
であるので、全イントロン配列は、ＢａｍＨ１／ＳａｃＩＩセグメントとしての
残りのイントロン配列は、ＣＨ１−７３４ｐＳＫの対応する部位に挿入すること
により回復させた。次いで、全５'イントロン、ＣＨ１ドメイン、連結イントロ
ン、５ヒンジ残基、短いＧＧＧＳリンカー、および７３４ｓｃＦｖ配列を含むＢ
ａｍＨＩ／ＥａｇＩフラグメントを単離し、使用して、ｈＭＮ１４ｐｄＨＬ２ベ
クターのヒトゲノムＩｇＧ１定常配列を含むＨｉｎｄＩＩＩ／ＥａｇＩセグメン
トと置換した。一端にＢａｍＨＩオーバーハング、他端にＨｉｎｄＩＩＩオーバ
ーハングを有するＨＮＢリンカー（配列番号５）を使用して、ｈＭＮ１４ｐｄＨ
Ｌ２ベクターのＨｉｎｄＩＩＩ／ＥａｇＩ部位へのＢａｍＨＩ／ＥａｇＩフラグ
メントライゲートを容易にした。得られたベクターはｈＭＮ１４−７３４ｐｄＨ
Ｌ２と称され、二重特異的タンパク質の発現のために哺乳動物細胞をトランスフ
ェクトするのに使用できる。ｈＭＮ１４ｐｄＨＬ２ベクターは、以前に記載され
たベクターのｐｄＨＬ２から誘導した。Ｌｏｓｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐ
ｐｌｅｍｅｎｔ、８０：２６６０、１９９７参照。ｈＭＮ１４ｐｄＨＬ２の作成
は、標準的な分子生物学技法を使用して、ｈＬＬ２ｐｄＨＬ２のＶＨおよびＶＫ
ドメインを、ｈＭＮ１４のそれと置換することにより実施した（図５）。ｈＭＮ
１４−７３４ｐｄＨＬ２ベクターは、電気穿孔法によりＳＰ２／０細胞にトラン
スフェクトし、ｂｓＡｂを分泌している細胞クローンを同定した。タンパク質Ｌ
カラム（ピアス、ロックフォード、イリノイ）で細胞培養上清から精製したｂｓ
Ａｂ（クローン３４１．１Ｇ６）は、７５ｋＤタンパク質（アミノ酸配列計算に
基づく）であり、おそらく二次構造のために非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥで６６ｋＤ
マーカーと同時に移動する。還元条件下では、重鎖（５０ｋＤ）および軽鎖（２
５ｋＤ）に対応するバンドが観察された（図２、レーン４）。トランスフェクト
ーマにより分泌されたκ鎖モノマー（２５ｋＤ）およびダイマー（５０ｋＤ）も
同時精製された（図２、レーン２）。なぜなら、タンパク質Ｌは、ヒト、マウス
およびラットのκ軽鎖に結合するからである。κモノマーおよびダイマーからの
ｂｓＡｂのさらなる分離は、イオン交換クロマトグラフィーにより達成される。
精製ｈＭＮ１４Ｆａｂ−７３４ｓｃＦｖは、ＣＥＡおよびＩｎ−ＤＴＰＡ−ＢＳ
Ａの両方への用量依存的な特異的結合を示す。
【０１０５】 例２２）乳汁でのｂｓｃＡｂのトランスジェニック産生 ｂｓｃＡｂフラグメントを、挿入部位にフランキングする５'カゼインプロモ
ーター配列および３'非翻訳ゲノム配列を含む発現ベクターにクローニングする
。次いで、発現カセットを受精マウス卵子の前核に、当分野で標準的な手順を使
用して注入する。次いで、卵子をレシピエント雌の子宮に植込み、妊娠させる。
誕生後、子孫をサザン解析により導入ＤＮＡの存在についてスクリーニングする
。トランスジェニック雌由来の乳汁を、当分野で既知の標準的な免疫学的方法を
使用してｂｓｃＡｂの存在および機能性について解析する。ｂｓｃＡｂは、固定
抗原への相補的結合、カラムクロマトグラフィーまたは当分野で既知の他の方法
により、乳汁から精製できる。
【０１０６】 例２３）植物でのｂｓｃＡｂのトランスジェニック産生： ｂｓｃＡｂフラグメントを、ソラマメ由来の短縮レグミンＢ４プロモーターと
５４塩基対のＬｅＢ４非翻訳ＲＮＡリーダーを含みＬｅＢ４シグナルペプチドを
コードしている発現ベクターにクローニングし、タンパク質を小胞体に指向させ
る。発現カセットを、Ｚａｍｂｒｙｓｋｉらに記載の方法に従って、アグロバク
テリウム媒介遺伝子移行を使用して、タバコリーフディスクに形質転換する。形
質転換はサザン解析により確認する。トランスジェニック植物を、当分野で標準
的な免疫学的方法を使用してｂｓｃＡｂの存在および機能性について解析する。
ｂｓｃＡｂは当分野で既知の標準的な方法を使用して植物組織から精製できる。
【０１０７】 例２４）プレターゲッティング実験： ＧＷ３９腫瘍異種移植片を有する雌ヌードマウス（タコニックＮＣＲＮＵ、３
〜４週令）を、プレターゲッティング実験に使用した。腫瘍は０．３〜０．８ｇ
であった。
【０１０８】
【表３】
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
【表５】
【０１１１】
【表６】
【０１１２】
【表７】
【０１１３】 ９９ｍ−Ｔｃ−ＩＭＰ−１９２で充填した腫瘍結合ｂｓＡｂ上の有効なＤＴＰ
Ａ結合部位の比率を、１つのペプチドが１つのｂｓＡｂ分子に結合すると仮定し
て上記のデータから計算した。しかし、１つのペプチド分子が２つのｂｓＡｂ分
子に架橋することも可能である。
【０１１４】
【表８】
【０１１５】 前記の実験データにより、ヒト化×ネズミｂｓＡｂは、ＣＥＡおよびインジウ
ム−ＤＴＰＡへの結合能を保持し、ｈＭＮ−１４×７３４（Ｆａｂ×Ｆａｂ）は
効率的に腫瘍を標的化し、二機能性ペプチジルＴｃ−９９ｍキレート剤は安定で
あり；９９ｍ−Ｔｃ−ＩＭＰ−１９２は腫瘍局在ｈＭＮ−１４×７３４と複合体
を形成し、少なくとも２４時間保持され、腫瘍のイメージングは９９ｍ−Ｔｃ−
ＩＭＰ−１９２注入後早期の時点（１〜３時間）で可能であることが示される。
【０１１６】 例２５）ｂｓＡｂクリアリングステップで、ＲＡＩＴのための抗ＣＥＡ Ｆａｂ
×抗ペプチドｓｃＦｖ融合タンパク質の使用： ＣＥＡを発現している腫瘍を有する患者に、抗ＣＥＡ Ｆａｂ×抗ペプチドｓ
ｃＦｖ融合タンパク質を投与する。３日後、患者に、クリアリング用量のガラク
トース−ＷＩ２−Ｆａｂ'を投与する。クリアリング用量のガラクトース−ＷＩ
２−Ｆａｂ'の２４時間後、患者に、Ｙ−９０−ジ−Ｂｚ−ＤＴＰＡ−ペプチド
を投与する。Ｙ−９０標識ペプチドは、非標的組織からは迅速にクリアリングさ
れるが、抗ＣＥＡ Ｆａｂ×抗ペプチド−ｓｃＦｖ融合タンパク質でプレターゲ
ッティングした部位に集中して局在し、腫瘍を破壊する。
【０１１７】 例２６）ｂｓＡｂクリアリングステップでのプロドラッグ療法のための抗ＣＥＡ
−ＩｇＧ×抗ペプチドＦａｂ'二重特異的Ａｂの使用 結腸直腸癌患者に、ＩｇＧ−ｈＭＮ−１４×抗ペプチドＦａｂ'ｂｓＡｂの注
入液を投与する。４８時間後、腫瘍に最大限に癒着させるために、患者にクリア
リング量のガラクトース−ＷＩ２−Ｆａｂ'を投与する。この量は、特定の時間
点で循環中に残る一次ｂｓＡｂの量の５ないし１５倍である。ガラクトース−Ｗ
Ｉ２−Ｆａｂ'を投与した３時間後、例１１の腫瘍飽和量のカルボキシルエステ
ラーゼ−Ｃｙｓ．Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）．Ｔｙｒ．Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）．ＮＨ2複
合体を投与し、循環および正常組織をクリアリングする。さらに３時間後、標準
的な化学療法用量のＣＰＴ−１１を患者に投与する。このプロトコルは、腫瘍標
的部位で特異的に遊離ＳＮ−３８を効果的に産生し、腫瘍細胞の破壊をもたらす
。
【０１１８】 例２７）カルボキシルエステラーゼ−ＤＴＰＡ複合体の調製 ２つのバイアルのウサギ肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＳＩＧＭＡ；タンパ
ク質含量-１７ｍｇ）を、２．２ｍｌの０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７
．７中で再構成し、２５倍モル過剰のＣＡ−ＤＴＰＡと、ＤＭＳＯ中の後者の新
しく調製した貯蔵溶液（-２５ｍｇ／ｍｌ）を使用して混合する。複合体混合物
中のＤＭＳＯの最終濃度は３％（ｖ／ｖ）である。１時間インキュベートした後
、混合物を、２つの５ｍＬスピンカラム（０．１Ｍリン酸ナトリウムｐＨ７．３
中セファデックスＧ５０／８０）でプレ精製し、過剰の試薬およびＤＭＳＯを除
去する。溶出液を、０．２Ｍリン酸ナトリウムｐＨ６．８を使用して４ｍｌ／分
でＴＳＫ３０００ＧＳｕｐｅｌｃｏカラムで精製する。複合体を含む画分をＣｅ
ｎｔｒｉｃｏｎ−１０（商標）濃縮器で濃縮し、０．１Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ６
．５と緩衝液を交換する。回収：０．９ｍｌ、４．１１ｍｇ／ｍｌ（３．７ｍｇ
）。標準的な条件を使用した分析用ＨＰＬＣ解析と直列形ＵＶ検出により、保持
時間９．３分の大きなピークと、１０．８分の小さなピークが９５対５の比で判
明した。酵素的解析により、非修飾カルボキシルエステラーゼに匹敵する、１１
５酵素単位／タンパク質ｍｇが示された。非修飾およびＤＴＰＡ修飾ＣＥの両方
の質量分析（ＭＡＬＤＩモード）が、１．５付近の平均ＤＴＰＡ置換比を示す。
放射性インジウムでスパイクした既知の過剰のインジウムを使用した金属結合ア
ッセイにより、二重の実験で、ＤＴＰＡ：酵素の比が１．２４および１．４１で
あることが確認された。カルボキシルエステラーゼ−ＤＴＰＡを、Ｉｎ−１１１
アセテートで、１２．０ｍＣｉ／ｍｇの比活性で標識し、次いで、過剰の非放射
性インジウムアセテートで処理し、最終的に１０ｍＭ ＥＤＴＡで処理して、過
剰の非放射性インジウムを除去する。ＨＰＬＣおよびＩＴＬＣ分析による取込み
は９７．７％である。ＨＰＬＣサンプルは、２０倍モル過剰の二重特異的抗体ｈ
ＭＮ−１４Ｆａｂ'×７３４Ｆａｂ'と完全に複合体を形成し、得られた産物はさ
らにＷＩ２（抗ＩＤに対するｈＭＮ−１４）と複合体を形成し、後者は二重特異
的抗体に関して８０倍モル過剰である。
【０１１９】 本発明に記載の二重特異的作成物および類似の特異性をもつ他のものの組合せ
は、プレターゲッティングＲＡＩＴに適しており、ここで、ＩＭＰ−１９２ペプ
チドおよびその類似体を、１８８−Ｒｅ、２１３−Ｂｉ、６７−Ｃｕ等の治療放
射性同位体で標識する。治療キレート剤は、上記したように、ｂｓＡｂにより認
識されるキレートエピトープ以外のものを有するペプチドに複合体できる。
【０１２０】 同様に、検出可能な放射性標識は、様々なリンカーと組合せて、本発明のプレ
ターゲッティング法を使用して、切断するか、または別様に術中、内視鏡、血管
内または他の類似の手順で検出および／または処置する、目的の部位、例えば腫
瘍に指向させることができる。プレターゲッティングは、非放射性ｂｓＡｂを用
いて行われ、最終的な低分子量放射標識リンカーの投与および局在化および非結
合リンカーのクリアリングは両方共かなり迅速であり、不必要な遅延を避けるべ
きである手術法に適合し、短い半減期の放射性同位体を使用できる。さらに、開
示された療法は、手術後の放射免疫療法プロトコルに使用でき、残余腫瘍細胞の
根絶を確実にできる。 本明細書に引用した全ての文献は、その全体を参照することによって本明細書
にそのまま組み込まれるものとする。
【０１２１】
【表９】
【０１２２】 SEQUENCE LISTING <110> HANSEN, Hans J. GRIFFITHS, Gary L. LEUNG, Shui-on MCBRIDE, William J. QU, Zhengxing IMMUNOMEDICS, INC. <120> USE OF BI-SPECIFIC ANTIBODIES FOR PRE-TARGETING DIAGNOSIS AND THERAPY <130> 12-622 <140> PCT/US99/13879 <141> 1999-06-22 <150> US 60/104,156 <151> 1998-10-14 <150> US 60/090,142 <151> 1998-06-22 <160> 20 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 56 <212> DNA <213> Murine <400> 1 ttctctctgc agagcccaaa tcttgtggtg gcggttcaca gctggttgtg actcag 56 <210> 2 <211> 49 <212> DNA <213> Murine <400> 2 agcctccgcc tcctgatccg ccacctccta agatcttcag tttggttcc 49 <210> 3 <211> 35 <212> DNA <213> Murine <400> 3 ccggaggcgg tgggagtgag gtgaaactgc aggag 35 <210> 4 <211> 43 <212> DNA <213> Murine <400> 4 aaccttgagc tcggccgtcg cactcatgag gagacggtga ccg 43 <210> 5 <211> 26 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 agcttgcggc cgcacgccgg cgctag 26 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: antigenic peptide <400> 6 Phe Lys Tyr Lys 1 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: targetable conjugate containing a hapten <400> 7 Cys Gly Lys Tyr Cys 1 5 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: peptide linker <400> 8 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: peptide linker <400> 9 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> MOD#RES <222> (5) <223> Xaa is thiosemicarbazonylglyoxylcysteine <220> <223> Description of Artificial Sequence: peptide hapten <400> 10 Lys Tyr Lys Lys Xaa 1 5 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: polypeptide carrier <400> 11 Lys Ala Glu Tyr 1 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: peptide conjugate <400> 12 Cys Lys Tyr Lys 1 <210> 13 <211> 19 <212> PRT <213> Murine <400> 13 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Ser <210> 14 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Pro Lys Ser Cys 1 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Murine <400> 15 Gln Leu Val Val Thr Gln 1 5 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Murine <400> 16 Thr Lys Leu Lys Ile Leu 1 5 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: peptide linker <400> 17 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: peptide linker <400> 18 Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Murine <400> 19 Glu Val Lys Leu Gln Glu 1 5 <210> 20 <211> 6 <212> PRT <213> Murine <400> 20 Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5
【図面の簡単な説明】
【図１】 種々のＡｂおよびｂｓＡｂｓを概略的に示した図である。
【図２】 精製したｈＭＮ１４Ｆａｂ−７３４ｓｃＦｖのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図
である。
【図３】 ２つの二重特異性融合タンパク質を概略的に示した図である。
【図４】 ｈＭＮ１４Ｆａｂ−７３４ｓｃＦｖ二重特異性融合タンパク質の産生に有用な
ＤＮＡ構築物の産生を示した図である。
【図５】 ｈＭＮ１４Ｆａｂ−７３４ｓｃＦｖ二重特異性融合タンパク質の産生に有用な
ＤＮＡ構築物の産生を示した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 49/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 43/00 43/00 Ａ６１Ｋ 43/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 グリフィス，ゲイリー・エル アメリカ合衆国、07960 ニュー・ジャー ジー、モリスタウン、エッジヒル・アヴェ ニュー 36 (72)発明者 リュン，シュイ‐オン アメリカ合衆国、07960 ニュー・ジャー ジー、モリス・タウンシップ、アレクサン ドリア・ロード 31 (72)発明者 マクブライド，ウィリアム・ジェイ アメリカ合衆国、07901 ニュー・ジャー ジー、サミット、スプリングフィールド 767、＃６ (72)発明者 クー，ツェンシン アメリカ合衆国、07059 ニュー・ジャー ジー、ウォレン、シカモア・ウェイ 15 Ｆターム(参考） 4C076 AA12 BB11 CC27 EE59 FF63 4C084 AA12 AA17 MA02 NA14 NA15 ZB262 4C085 AA14 BB24 CC01 CC05 DD22 EE01 EE03 GG01 HH07 JJ01 KA29 KB15 LL18 4C086 AA01 AA02 AA03 HA05 MA01 MA02 MA04 NA14 NA15 ZB26

Claims (50)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 患者の罹患組織の治療方法または同定方法であって、 （Ａ）標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、ターゲッティ
    ング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する二
    重特異性抗体または抗体フラグメントを前記患者に投与するステップと、 （Ｂ）任意選択的に、クリアリング組成物を前記患者に投与して、局在してい
    ない抗体または抗体フラグメントを前記組成物によって循環からクリアリングす
    るステップと、 （Ｃ）前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つの他
    のアームによって認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むか又は担持する
    キャリア部分と、複合した１以上の治療薬、診断薬または酵素とを含む第１のタ
    ーゲッティング可能な複合体を前記患者に投与するステップと、 （Ｄ）前記ターゲッティング可能な複合体が酵素を含む場合には、 １）前記酵素がプロドラッグを標的部位において薬物に変換することができる
    場合、プロドラッグ、または, ２）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果、標的部位にお
    ける前記薬物の毒性が増加し得る場合、前記患者中で解毒されて毒性の低い中間
    体を形成することができる薬物、または、 ３）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果、標的部位にお
    いて前記薬物の毒性が増加し得る場合、天然の過程によって前記患者中で活性化
    され、毒性の低い中間体に変換されることによって解毒されるプロドラッグ、ま
    たは、 ４）前記酵素が標的部位において前記プロドラッグを薬物に変換することがで
    きる場合、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つの
    他のアームによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを含むか
    または担持するキャリア部分とプロドラッグとを含む第２のターゲッティング可
    能な複合体 を前記患者にさらに投与するステップと を含む方法。
  2. 【請求項２】 前記第１のターゲッティング可能な複合体がプロドラッグを
    含む場合、前記少なくとも１つの他の前記二重特異性抗体または抗体フラグメン
    トによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを含むかまたは担
    持するキャリア部分と、前記プロドラッグを薬物に変換することができるか前記
    薬物の解毒中間体を有毒形態に再変換することができる酵素とを含む第２のター
    ゲッティング可能な複合体を投与するステップをさらに含む請求項１に記載の方
    法。
  3. 【請求項３】 前記治療薬が、罹患組織の死滅に有用な１以上の放射性同位
    元素を含む請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記治療薬が、ホウ素原子を含み、前記方法は、前記罹患組
    織に局在する前記ホウ素原子を照射して、それにより前記罹患組織のホウ素中性
    子捕獲療法(ＢＮＣＴ)を達成するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記ホウ素原子が、10Ｂ濃縮されている請求項４に記載の方
    法。
  6. 【請求項６】 前記治療薬が、１以上の毒素を含む請求項１に記載の方法。
  7. 【請求項７】 前記治療薬が、１以上の薬物を含む請求項１に記載の方法。
  8. 【請求項８】 前記治療薬が、１以上のプロドラッグを含む請求項１に記載
    の方法。
  9. 【請求項９】 前記診断薬が、罹患組織の検出に有用な１以上の放射性同位
    元素を含む請求項１に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 前記診断薬が、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）における使用
    のための１以上の画像増強剤を含む請求項１に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 前記放射性同位元素が、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ
    ）を行うために使用される請求項９に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 標的組織に特異的に結合する前記少なくとも１つのアーム
    が、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体のフラグメントである請求項
    １に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する前記少
    なくとも１つの他のアームが、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体の
    フラグメントである請求項１に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 標的組織に特異的に結合する前記少なくとも１つのアーム
    が、ヒト化抗体またはヒト化抗体のフラグメントである請求項１に記載の方法。
  15. 【請求項１５】 ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する前記少
    なくとも１つの他のアームが、ヒト化抗体またはヒト化抗体のフラグメントであ
    る請求項１に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 前記ターゲッティング可能な複合体が、ペプチドを含む請
    求項１に記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記ターゲッティング可能な複合体が、炭水化物を含む請
    求項１に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記ターゲッティング可能な複合体が、１以上のハプテン
    を含む請求項１に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 前記ターゲッティング可能な複合体が、１以上のキレート
    剤または金属−キレート複合体を含む請求項１に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 前記二重特異性抗体または抗体フラグメントが、放射性核
    種をさらに含む請求項１に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 前記ペプチドが、Ｘ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−
    Ｇｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｘ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨであり、Ｘ
    が、遊離のアミノ酸基、保護アミノ酸基、キレート剤、および金属−キレート複
    合体からなる群から選択される部分を示す請求項１６に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 前記ペプチドが、Ａｃ−Ｃｙｓ（Ｙ）−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−
    Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｃｙｓ（Ｙ）−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨで
    あり、Ｙは遊離のチオール基、保護チオール基、キレート剤、および金属−キレ
    ート複合体からなる群から選択される部分を示す請求項１６に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 前記ペプチドが、Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｄ−ｉｏｄｏ−Ｔｙｒ−
    Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｇｌｙ−Ｄ−ｉｏｄｏ−Ｔｙｒ−Ｄ
    −Ｔｒｐ−ＯＨである請求項１６に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 前記ペプチドが、異なる金属イオンと選択的に複合するこ
    とができる２以上のキレート剤を含み、一方または両方の陽イオンが診断に有用
    な放射性同位元素または治療用放射性同位元素である請求項１６に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 少なくとも１つの前記キレート剤が、硬い酸の陽イオン用
    の硬い塩基のキレート剤であり、少なくとも１つの前記キレート剤が、軟らかい
    酸の陽イオン用の軟らかい塩基のキレート剤である請求項１９に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 前記硬い塩基のキレート剤が、炭水化物およびアミン基を
    含む請求項２５に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記硬い塩基のキレート剤が、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、ＤＯ
    ＴＡ、またはＴＥＴＡである請求項２６に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記軟らかい塩基のキレート剤が、少なくとも１つの硫黄
    含有基を含む請求項１９に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 前記軟らかい塩基のキレート剤が、置換または非置換チオ
    セミカルバゾニルグリオキシルシステイン（ＴｓｃＧＣｙｓ）またはチオセミカ
    ルバジニルアセチルシステイン（ＴｓｃＡＣｙｓ）である請求項２８に記載の方
    法。
  30. 【請求項３０】 患者の罹患組織の治療または同定に有用なキットであって
    、 （Ａ）標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームとターゲッティン
    グ可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアームとを有する二重
    特異性抗体または抗体フラグメントと、 （Ｂ）前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つの他
    のアームによって認識可能な少なくとも１つのエピトープを含むかまたは担持す
    るキャリア部分と、複合した１以上の治療薬、診断薬または酵素とを含む第１の
    ターゲッティング可能な複合体と、 （Ｃ）任意選択的に、局在していない抗体および抗体フラグメントのクリアリ
    ングに有用なクリアリング組成物と、 （Ｄ）任意選択的に、前記第１のターゲッティング可能な複合体が酵素を含む
    場合には、 １）前記酵素がプロドラッグを標的部位において薬物に変換することができる
    場合、プロドラッグ、または、 ２）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果、標的部位にお
    いて前記薬物の毒性が増加し得る場合、前記患者中で解毒されて毒性の低い中間
    体を形成することができる薬物、または、 ３）前記酵素が解毒中間体を有毒な形態に再変換し、その結果、標的部位にお
    いて前記薬物の毒性が増加し得る場合、天然の過程によって前記患者中で活性化
    され、毒性に低い中間体に変換されることによって解毒に供されるプロドラッグ
    、または、 ４）前記酵素が標的部位において前記プロドラッグを薬物に変換することがで
    きる場合、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つの
    他のアームによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを含むか
    または担持するキャリア部分と、プロドラッグとを含む第２のターゲッティング
    可能な複合体 を含むキット。
  31. 【請求項３１】 前記第１のターゲッティング可能な複合体がプロドラッグ
    を含む場合、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントの前記少なくとも１つ
    他のアームによって認識することができる少なくとも１つのエピトープを含むか
    または担持するキャリア部分を含む第２のターゲッティング可能な複合体と、前
    記プロドラッグを薬物に変換することができるかまたは前記薬物の解毒中間体を
    有毒形態に再変換することができる酵素をさらに含む請求項３０に記載のキット
    。
  32. 【請求項３２】 標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、
    ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアーム
    とを有する二重特異性抗体または抗体フラグメント。
  33. 【請求項３３】 前記抗体または抗体フラグメントが、ヒト化されている請
    求項３２に記載の二重特異性抗体または抗体フラグメント。
  34. 【請求項３４】 前記抗体または抗体フラグメントが、モノクローナルであ
    る請求項３２に記載の二重特異性抗体または抗体フラグメント。
  35. 【請求項３５】 標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、
    ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアーム
    とを有する二重特異性抗体または抗体フラグメントを宿主中で生成することがで
    きる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記構築物は、５’から
    ３’の転写方向で、前記宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域、前記宿主細胞
    中で機能的な翻訳開始調節領域、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントを
    コードするＤＮＡ配列、および前記宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調
    節領域を含み、前記二重特異性抗体または抗体フラグメントは前記調節領域の調
    節下である組換えＤＮＡ構築物。
  36. 【請求項３６】 標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、
    ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアーム
    とを有する二重特異性抗体または抗体フラグメントを生成することができる発現
    カセットのセットであって、各カセットは、５’から３’の転写方向で、前記宿
    主細胞中で機能的な転写開始調節領域、前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節
    領域、前記二重特異性抗体のフラグメントをコードするＤＮＡ配列、および前記
    宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記フラグメントは
    前記調節領域の調節下である発現カセットのセット。
  37. 【請求項３７】 標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、
    ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアーム
    とを有する二重特異性抗体または抗体フラグメントを調製する方法であって、 （Ａ）宿主細胞に請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物を移入するステップと
    、 （Ｂ）前記細胞を増殖させ、前記抗体または抗体フラグメントを単離するステ
    ップと を含む調製方法。
  38. 【請求項３８】 前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である請求項３７に記載の
    方法。
  39. 【請求項３９】 前記哺乳動物細胞が接合体であり、前記組換えＤＮＡ構築
    物の移入により前記二重特異性抗体または抗体フラグメントを産生することがで
    きるトランスジェニック動物が生成される請求項３８に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 前記宿主細胞が、昆虫細胞である請求項３７に記載の方法
    。
  41. 【請求項４１】 前記宿主細胞が、細菌細胞である請求項３７に記載の方法
    。
  42. 【請求項４２】 １以上の前記二重特異性抗体または抗体フラグメントが、
    そのそれぞれのハプテンについての複数の結合部位を有する請求項３７に記載の
    方法。
  43. 【請求項４３】 標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、
    ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアーム
    とを有する二重特異性融合タンパク質の調製方法であって、 （１）（Ａ）前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントを宿主中で産生す
    ることができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を宿主細胞に移入するス
    テップと、ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記宿主細胞中
    で機能的な転写開始調節領域、前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、Ｆ
    ｄフラグメントに連結したｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記宿主
    細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記二重特異性融合タン
    パク質の前記フラグメントは前記調節領域の調節下であり、 （Ｂ）（Ａ）における前記Ｆｄフラグメントに相補的で、前記Ｆｄフラグメン
    トに会合する場合、結合部位が前記標的組織に特異的なＦａｂフラグメントを形
    成する軽鎖抗体フラグメントを前記宿主細胞中に産生することができる発現カセ
    ットを含む組換えＤＮＡ構築物を前記宿主細胞に同時移入するステップと、ここ
    で、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記宿主細胞中で機能的な転写
    開始調節領域、前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、軽鎖抗体フラグメ
    ントをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記宿主細胞中で機能的な転写および翻
    訳終止調節領域を含み、前記軽鎖抗体フラグメントは前記調節領域の調節下であ
    り、 （Ｃ）前記細胞を増殖させ、前記二重特異性融合タンパク質を単離するステッ
    プと を含むか、または、 （２）（Ａ）前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントを宿主細胞中で産
    生することができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を第１の宿主細胞に
    移入するステップと、ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記
    第１の宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域、前記第１の宿主細胞中で機能的
    な翻訳開始調節領域、Ｆｄフラグメントに連結したｓｃＦｖをコードするＤＮＡ
    配列、ならびに前記第１の宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を
    含み、前記二重特異性融合タンパク質の前記フラグメントは前記調節領域の調節
    下であり、 （Ｂ）（２）（Ａ）における前記Ｆｄフラグメントに相補的で、前記Ｆｄフラ
    グメントに会合する場合、結合部位が前記標的組織に特異的なＦａｂフラグメン
    トを形成する軽鎖抗体フラグメントを第２の宿主細胞中に産生することができる
    発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を第２の宿主細胞に移入するステップと
    、ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記第２の宿主細胞中で
    機能的な転写開始調節領域、前記第２の宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域
    、軽鎖抗体フラグメントをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記第２の宿主細胞
    中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記軽鎖抗体フラグメントは
    前記調節領域の調節下であり （Ｃ）前記第１の宿主細胞および前記第２の宿主細胞を増殖させるステップと
    、 （Ｄ）任意選択的に、前記二重特異性融合タンパク質フラグメントおよび前記
    軽鎖抗体フラグメントを単離するステップと、 （Ｅ）二重特異性融合タンパク質と産生するために前記フラグメントを組み合
    わせて、前記二重特異性融合タンパク質を単離するステップと を含む調製方法。
  44. 【請求項４４】 標的組織に特異的に結合する少なくとも１つのアームと、
    ターゲッティング可能な複合体に特異的に結合する少なくとも１つの他のアーム
    とを有する二重特異性融合タンパク質の調製方法であって、 （１）（Ａ）前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントを宿主細胞中で産
    生することができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を宿主細胞に移入す
    るステップと、ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記宿主細
    胞中で機能的な転写開始調節領域、前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域
    、軽鎖抗体フラグメントに連結したｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列、ならびに
    前記宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記二重特異性
    融合タンパク質の前記フラグメントは前記調節領域の調節下であり、 （Ｂ）（Ａ）における前記軽鎖抗体フラグメントに相補的で、前記軽鎖抗体フ
    ラグメントに会合する場合、結合部位が前記標的組織に特異的なＦａｂフラグメ
    ントを形成するＦｄフラグメントを前記宿主細胞中に産生することができる発現
    カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を前記宿主細胞に同時移入するステップと、
    ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記宿主細胞中で機能的な
    転写開始調節領域、前記宿主細胞中で機能的な翻訳開始調節領域、Ｆｄフラグメ
    ントをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記宿主細胞中で機能的な転写および翻
    訳終止調節領域を含み、前記Ｆｄフラグメントは前記調節領域の調節下であり、 （Ｃ）前記細胞を増殖させ、前記二重特異性融合タンパク質を単離するステッ
    プと を含むか、または、 （２）（Ａ）前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントを第１の宿主細胞
    中で産生することができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を前記第１の
    宿主細胞に移入するステップと、ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方
    向で、前記第１の宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域、前記第１の宿主細胞
    中で機能的な翻訳開始調節領域、前記軽鎖抗体フラグメントに連結したｓｃＦｖ
    をコードするＤＮＡ配列、ならびに前記第１の宿主細胞中で機能的な転写および
    翻訳終止調節領域を含み、前記二重特異性融合タンパク質のフラグメントは前記
    調節領域の調節下であり、 （Ｂ）（２）（Ａ）における前記軽鎖抗体フラグメントに相補的で、前記軽鎖
    抗体フラグメントに会合する場合、結合部位が前記標的組織に特異的なＦａｂフ
    ラグメントを形成する軽鎖抗体フラグメントを第２の宿主細胞中に産生すること
    ができる発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を前記第２の宿主細胞に移入す
    るステップと、ここで、前記構築物は、５’から３’の転写方向で、前記第２の
    宿主細胞中で機能的な転写開始調節領域、前記第２の宿主細胞中で機能的な翻訳
    開始調節領域、ＦｄフラグメントをコードするＤＮＡ配列、ならびに前記第２の
    宿主細胞中で機能的な転写および翻訳終止調節領域を含み、前記Ｆｄフラグメン
    トは前記調節領域の調節下であり、 （Ｃ）前記第１の宿主細胞および前記第２の宿主細胞を増殖させるステップと
    、 （Ｄ）任意選択的に、前記二重特異性融合タンパク質フラグメントおよび前記
    Ｆｄフラグメントを単離するステップと、 （Ｅ）前記フラグメントを組み合わせて二重特異性融合タンパク質を産生し、
    前記二重特異性融合タンパク質を単離するステップと を含む調製方法。
  45. 【請求項４５】 前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である請求項４３に記載の
    方法。
  46. 【請求項４６】 前記宿主細胞が、昆虫細胞である請求項４３に記載の方法
    。
  47. 【請求項４７】 前記宿主細胞が、細菌細胞である請求項４３に記載の方法
    。
  48. 【請求項４８】 前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である請求項４４に記載の
    方法。
  49. 【請求項４９】 前記宿主細胞が、昆虫細胞である請求項４４に記載の方法
    。
  50. 【請求項５０】 前記宿主細胞が、細菌細胞である請求項４４に記載の方法
    。
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CA (2) CA2690395C (ja)
DE (1) DE69942148D1 (ja)
WO (1) WO1999066951A2 (ja)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006514627A (ja) * 2002-11-15 2006-05-11 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 治療薬の標的化送達のための多重特異的非共有結合複合体の使用
JP2006518737A (ja) * 2003-01-31 2006-08-17 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 治療薬および診断薬を投与するための方法および組成物
JP2006521286A (ja) * 2002-10-08 2006-09-21 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 抗体療法
JP2009051784A (ja) * 2007-08-28 2009-03-12 Inst Nuclear Energy Research Rocaec 癌を抑制する放射性物質及びその調整方法
JP2010539921A (ja) * 2007-09-26 2010-12-24 ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム 二重特異性抗体の融合体
JP2012522523A (ja) * 2009-04-07 2012-09-27 ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ＥｒｂＢ−１／抗ｃ−Ｍｅｔ抗体
JP2013512927A (ja) * 2009-12-04 2013-04-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体、抗体アナログ、組成物、及び方法
JP2014148510A (ja) * 2006-08-18 2014-08-21 Armagen Technologies Inc 血液脳関門送達のための物質
WO2017217347A1 (ja) * 2016-06-13 2017-12-21 国立大学法人鹿児島大学 ＩｇＧ結合ペプチドによる部位特異的ＲＩ標識抗体
US10227383B2 (en) 2015-05-20 2019-03-12 Kagoshima University Specific modification of antibody with IgG-binding peptide

Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7833528B2 (en) * 1998-06-22 2010-11-16 Immunomedics, Inc. Use of multispecific, non-covalent complexes for targeted delivery of therapeutics
US7138103B2 (en) * 1998-06-22 2006-11-21 Immunomedics, Inc. Use of bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy
US7052872B1 (en) 1999-06-22 2006-05-30 Immunomedics, Inc. Bi-specific antibodies for pre-targeting diagnosis and therapy
US6962702B2 (en) * 1998-06-22 2005-11-08 Immunomedics Inc. Production and use of novel peptide-based agents for use with bi-specific antibodies
US7405320B2 (en) * 1998-06-22 2008-07-29 Immunomedics, Inc. Therapeutic and diagnostic conjugates for use with multispecific antibodies
US7387772B1 (en) 1999-06-22 2008-06-17 Immunimedics, Inc. Chimeric, human and humanized anti-CSAP monoclonal antibodies
DE69942148D1 (de) 1998-06-22 2010-04-29 Immunomedics Inc Gebrauch von bispezifischen antikörpern in diagnose und therapie
CA2344440A1 (en) * 1998-09-18 2000-03-30 Immunomedics, Inc. Antibody directed enzyme prodrug therapy (edept) with glucoronidase
US6361774B1 (en) * 1999-09-17 2002-03-26 Immunomedics, Inc. Methods and compositions for increasing the target-specific toxicity of a chemotherapy drug
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
DE60136527D1 (de) 2000-03-03 2008-12-24 Cambridge Antibody Tech Antikörper gegen eotaxin und deren verwendung
ATE545703T1 (de) * 2000-07-25 2012-03-15 Immunomedics Inc Multivalentes zielbindendes protein
WO2003011342A2 (en) * 2001-07-31 2003-02-13 Immunomedics, Inc. Targeted polymeric delivery systems
IL161417A0 (en) * 2001-10-15 2004-09-27 Immunomedics Inc Affinity enhancement agents
CA2471868A1 (en) * 2001-12-26 2003-07-17 Immunomedics, Inc. Methods of generating multispecific, multivalent agents from vh and vl domains
CA2478011C (en) * 2002-03-01 2013-05-21 Immunomedics, Inc. Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
DK3483183T3 (da) * 2002-03-01 2021-06-21 Immunomedics Inc Immunokonjugat omfattende humaniserede rs7-antistoffer
JP2005532343A (ja) * 2002-05-29 2005-10-27 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 脳およびｃｎｓ腫瘍の放射免疫治療のための方法および組成物
US20040022726A1 (en) * 2002-06-03 2004-02-05 Goldenberg David M. Methods and compositions for intravesical therapy of bladder cancer
US7601351B1 (en) 2002-06-26 2009-10-13 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against protective antigen
US20060034767A1 (en) * 2002-07-05 2006-02-16 Roger Williams Medical Center Targeting and tracking of cells to specific organs and tissues in vivo
US7528235B2 (en) * 2003-01-23 2009-05-05 The Regents Of The Univarsity Of California Multi-functional antibodies
US7820787B2 (en) * 2003-01-23 2010-10-26 The Regents Of The University Of California Multi-functional antibodies
JP5026072B2 (ja) * 2003-07-01 2012-09-12 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 二重特異性抗体の多価キャリヤー
JP2007524412A (ja) * 2004-01-22 2007-08-30 イムノメディクス， インコーポレイテッド 葉酸コンジュゲートおよびコンプレックス
WO2007046893A2 (en) * 2005-10-19 2007-04-26 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating bioactive assemblies and uses thereof
NZ551335A (en) 2004-06-18 2010-03-26 Ambrx Inc Antibodies and fragments thereof comprising an non naturally encoded amino acid coupled to a linker
WO2006094192A2 (en) 2005-03-03 2006-09-08 Immunomedics, Inc. Humanized l243 antibodies
ES2417065T3 (es) 2005-04-26 2013-08-05 Trion Pharma Gmbh Combinación de anticuerpos con glucocorticoides para el tratamiento del cáncer
US20090035257A1 (en) * 2005-08-25 2009-02-05 Repair Technologies, Inc. Devices, compositions and methods for the protection and repair of cells and tissues
GB2431352B (en) * 2005-09-12 2011-03-16 Essential Nutrition Ltd Device
US8741260B2 (en) 2005-10-07 2014-06-03 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS
CA3149553C (en) * 2006-06-12 2023-11-21 Aptevo Research And Development Llc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
US20100086522A1 (en) * 2006-07-18 2010-04-08 Ottawa Health Research Institute Disparate suicide carrier cells for tumor targeting of promiscuous oncolytic viruses
JP5901877B2 (ja) 2007-07-27 2016-04-13 アーメイゲン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． 中枢神経系のα−Ｌ−イデュロニダーゼ活性を増加させるための方法および組成物
US8450106B2 (en) * 2007-10-17 2013-05-28 The Ohio State University Research Foundation Oncolytic virus
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
SI2334705T1 (sl) * 2008-09-26 2017-05-31 Ucb Biopharma Sprl Biološki produkti
US20160095939A1 (en) 2014-10-07 2016-04-07 Immunomedics, Inc. Neoadjuvant use of antibody-drug conjugates
EP2414391B1 (en) 2009-04-02 2018-11-28 Roche Glycart AG Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments
MX2011010168A (es) 2009-04-07 2011-10-11 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos, trivalentes.
SG176219A1 (en) * 2009-05-27 2011-12-29 Hoffmann La Roche Tri- or tetraspecific antibodies
US9676845B2 (en) * 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
US8703132B2 (en) * 2009-06-18 2014-04-22 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific, tetravalent antigen binding proteins
JP5758888B2 (ja) 2009-07-06 2015-08-05 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 二重特異性ジゴキシゲニン結合抗体
EP2456472B1 (en) 2009-07-22 2024-03-27 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating radioimmunoconjugates
US9493578B2 (en) * 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
CA2774260C (en) 2009-09-16 2018-10-09 Immunomedics, Inc. Class i anti-cea antibodies and uses thereof
KR20120108967A (ko) 2009-09-16 2012-10-05 제넨테크, 인크. 코일드 코일 및/또는 테더 함유 단백질 복합체 및 그의 용도
EP3533467B1 (en) 2009-10-09 2023-07-26 Armagen, Inc. Methods and compositions for increasing iduronate 2-sulfatase activity in the cns
EP2506881B1 (en) 2009-12-02 2024-03-06 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
CN103052649B (zh) 2010-07-29 2015-12-16 Xencor公司 具有修改的等电点的抗体
MX340558B (es) 2010-08-24 2016-07-14 F Hoffmann-La Roche Ag * Anticuerpos biespecificos que comprenden fragmento fv estabilizado con disulfuro.
CA2817015A1 (en) * 2010-11-09 2012-05-18 Altimab Therapeutics, Inc. Protein complexes for antigen binding and methods of use
EP3974453A3 (en) * 2010-11-16 2022-08-03 Amgen Inc. Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
US9133505B2 (en) 2010-11-24 2015-09-15 Litron Laboratories, Ltd. Rapid in vivo gene mutation assay based on the Pig-A gene
WO2012085111A1 (en) 2010-12-23 2012-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
CA2824824A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent antigen binding proteins
BR112013019975A2 (pt) 2011-02-28 2017-08-01 Hoffmann La Roche proteínas de ligação de antígeno, composição farmacêutica, uso de uma proteína de ligação de antígeno, método para o tratamento de um paciente e método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira"
CA2831572C (en) 2011-05-02 2019-11-26 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
ES2983576T3 (es) 2011-12-02 2024-10-23 Armagen Inc Métodos y composiciones para aumentar la actividad arilsulfatasa en el SNC
KR20140127854A (ko) 2012-02-10 2014-11-04 제넨테크, 인크. 단일-쇄 항체 및 다른 이종다량체
BR112014028368A2 (pt) 2012-06-27 2017-11-14 Hoffmann La Roche método de produção de conjugado de região fc de anticorpo, conjugado de região fc de anticorpo e formulação farmacêutica
KR20150023889A (ko) 2012-06-27 2015-03-05 에프. 호프만-라 로슈 아게 2 개 이상의 상이한 결합 단위를 함유하는 맞춤-제작된 고도로 선별적이고 다중-특이적인 표적화 단위의 선별 및 제조 방법 및 이의 용도
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
CA3211863A1 (en) 2013-01-14 2014-07-17 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2945969A1 (en) 2013-01-15 2015-11-25 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
WO2014145907A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Xencor, Inc. Targeting t cells with heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
MX2016003593A (es) 2013-10-11 2016-06-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos de cadena ligera variable comun intercambiada de dominio multiespecifico.
US9139649B2 (en) 2014-02-25 2015-09-22 Immunomedics, Inc. Humanized anti-CD22 antibody
HRP20200164T1 (hr) 2014-03-28 2020-05-01 Xencor, Inc. Bispecifična protutijela koja se vežu na cd38 i cd3
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
PE20171103A1 (es) 2014-11-26 2017-08-07 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen a cd3 y cd38
DK3223845T3 (da) * 2014-11-26 2021-08-16 Xencor Inc Heterodimere antistoffer, der binder cd3 og cd20
JP6721590B2 (ja) 2014-12-03 2020-07-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性抗体
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
US10538589B2 (en) 2015-01-14 2020-01-21 Armagen Inc. Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
EP3286224A4 (en) 2015-04-22 2018-11-14 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
EP3316885B1 (en) 2015-07-01 2021-06-23 Immunomedics, Inc. Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker
WO2017053469A2 (en) 2015-09-21 2017-03-30 Aptevo Research And Development Llc Cd3 binding polypeptides
WO2017100372A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
WO2017218707A2 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
EP3475304B1 (en) 2016-06-28 2022-03-23 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CA3040504A1 (en) 2016-10-14 2018-04-19 Xencor, Inc. Il15/il15ra heterodimeric fc-fusion proteins
CA3067603A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and antigen binding domains
CN112272563A (zh) 2017-11-08 2021-01-26 Xencor股份有限公司 使用新颖抗pd-1序列的双特异性和单特异性抗体
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
MX2020006322A (es) 2017-12-19 2020-09-18 Xencor Inc Proteinas de fusion il-2 fc modificadas.
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
SG11202010163QA (en) 2018-04-18 2020-11-27 Xencor Inc Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
WO2019204655A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
CN113195523A (zh) 2018-10-03 2021-07-30 Xencor股份有限公司 IL-12异源二聚体Fc融合蛋白
CN120230213A (zh) 2019-03-01 2025-07-01 Xencor股份有限公司 结合enpp3和cd3的异二聚抗体
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
MX2023001962A (es) 2020-08-19 2023-04-26 Xencor Inc Composiciones anti-cd28.
EP4305067A1 (en) 2021-03-09 2024-01-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4863713A (en) * 1986-06-23 1989-09-05 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. Univ. Method and system for administering therapeutic and diagnostic agents
FR2604092B1 (fr) 1986-09-19 1990-04-13 Immunotech Sa Immunoreactifs destines a cibler les cellules animales pour leur visualisation ou leur destruction in vivo
US5851527A (en) * 1988-04-18 1998-12-22 Immunomedics, Inc. Method for antibody targeting of therapeutic agents
US5632990A (en) * 1988-04-22 1997-05-27 Cancer Research Campaign Tech. Ltd. Treatment for tumors comprising conjugated antibody A5B7 and a prodrug
DE69031909T2 (de) * 1989-03-14 1998-04-16 Bionebraska, Inc., Lincoln, Nebr. Monoklonale antikörper für metall kationen
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
FR2652004B1 (fr) * 1989-09-21 1994-10-28 Immunotech Partners Nouveaux derives hydrophiles, application au diagnostic et a la therapeutique, kits diagnostiques ou therapeutiques et reactifs immunologiques.
DE69214709T2 (de) * 1991-04-26 1997-02-20 Surface Active Ltd Neue Antikörper und Verfahren zu ihrer Verwendung
WO1993016185A2 (en) * 1992-02-06 1993-08-19 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
US6096289A (en) 1992-05-06 2000-08-01 Immunomedics, Inc. Intraoperative, intravascular, and endoscopic tumor and lesion detection, biopsy and therapy
ZA938243B (en) 1992-11-12 1995-05-04 Hybritech Inc Altered affinity polypeptides of metal chelate binding antibodies
US5502037A (en) * 1993-07-09 1996-03-26 Neuromed Technologies, Inc. Pro-cytotoxic drug conjugates for anticancer therapy
US5686578A (en) * 1994-08-05 1997-11-11 Immunomedics, Inc. Polyspecific immunoconjugates and antibody composites for targeting the multidrug resistant phenotype
WO1998008875A1 (de) * 1996-08-28 1998-03-05 Viva Diagnostika Diagnostische Produkte Gmbh Kombinationspräparationen und ihre verwendung in der immundiagnostik und immuntherapie
ATE353864T1 (de) * 1997-09-03 2007-03-15 Immunomedics Inc Fluorierung von proteinen und peptiden für positronemissionstomographie
DE69942148D1 (de) 1998-06-22 2010-04-29 Immunomedics Inc Gebrauch von bispezifischen antikörpern in diagnose und therapie

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006521286A (ja) * 2002-10-08 2006-09-21 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 抗体療法
JP2006514627A (ja) * 2002-11-15 2006-05-11 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 治療薬の標的化送達のための多重特異的非共有結合複合体の使用
JP2006518737A (ja) * 2003-01-31 2006-08-17 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 治療薬および診断薬を投与するための方法および組成物
JP4874090B2 (ja) * 2003-01-31 2012-02-08 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 治療薬および診断薬を投与するための方法および組成物
JP2014148510A (ja) * 2006-08-18 2014-08-21 Armagen Technologies Inc 血液脳関門送達のための物質
JP2009051784A (ja) * 2007-08-28 2009-03-12 Inst Nuclear Energy Research Rocaec 癌を抑制する放射性物質及びその調整方法
JP2010539921A (ja) * 2007-09-26 2010-12-24 ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム 二重特異性抗体の融合体
JP2012522523A (ja) * 2009-04-07 2012-09-27 ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗ＥｒｂＢ−１／抗ｃ−Ｍｅｔ抗体
JP2013512927A (ja) * 2009-12-04 2013-04-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体、抗体アナログ、組成物、及び方法
US10227383B2 (en) 2015-05-20 2019-03-12 Kagoshima University Specific modification of antibody with IgG-binding peptide
USRE50282E1 (en) 2015-05-20 2025-01-28 Kagoshima University Specific modification of antibody with IgG-binding peptide
WO2017217347A1 (ja) * 2016-06-13 2017-12-21 国立大学法人鹿児島大学 ＩｇＧ結合ペプチドによる部位特異的ＲＩ標識抗体
JPWO2017217347A1 (ja) * 2016-06-13 2019-05-09 国立大学法人 鹿児島大学 ＩｇＧ結合ペプチドによる部位特異的ＲＩ標識抗体
JP2022008678A (ja) * 2016-06-13 2022-01-13 国立大学法人 鹿児島大学 ＩｇＧ結合ペプチドによる部位特異的ＲＩ標識抗体
JP7165366B2 (ja) 2016-06-13 2022-11-04 国立大学法人 鹿児島大学 ＩｇＧ結合ペプチドによる部位特異的ＲＩ標識抗体
KR20230027320A (ko) * 2016-06-13 2023-02-27 가고시마 유니버시티 IgG 결합 펩타이드에 의한 부위 특이적 RI 표지 항체
US12037417B2 (en) 2016-06-13 2024-07-16 Kagoshima University Site-specific radioisotope-labeled antibody using IgG-binding peptide
KR102741325B1 (ko) * 2016-06-13 2024-12-10 가고시마 유니버시티 IgG 결합 펩타이드에 의한 부위 특이적 RI 표지 항체

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