JP2002510646A - 関節軟骨障害を処置するためのｉｇｆｉの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳動物の関節軟骨障害、より詳細には変形性関節症、および外傷に関連する軟骨損傷を、インスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）を用いて処置するための方法が提供される。この方法は、疾病した関節部位または損傷した関節部位でＩＧＦ−Ｉの量を、軟骨の維持および／または再生が可能な治療的に有効なレベルまで増加させる工程を包含し、このことは、変形性関節症および軟骨組織に対する外傷関連損傷の長期間の処置に有益である。本発明の１つの実施態様において、薬学的に有効なＩＧＦ−Ｉの少なくとも０．０１ｍｇの単回用量が断続的に投与され、その結果、治療休みの持続時間が、治療中の時間より長く、より好ましくは、１週間に約１回以下の投与の頻度である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、哺乳動物の関節軟骨障害の長期処置のための方法に関する。これら
の方法は、その軟骨障害または損傷の変性効果を和らげるために、既存の軟骨組
織を保存するか、または軟骨の再生を刺激する治療剤を使用する。

【０００２】 （発明の背景） 関節軟骨は、哺乳動物の関節の動きにおいて必須の役割を果たす。関節腔中の
滑液は潤滑剤として作用するが、関節軟骨は、隣接する骨の間に優れた平滑な表
面を提供し、関節のほとんど摩擦のない動きを可能にする。関節の関節板表面に
圧縮応力をかけ、重さに耐える骨を粉砕から保護するのは、関節軟骨である。

【０００３】 関節軟骨は、プロテオグリカン、コラーゲン、および低分子量の糖タンパク質
の細胞外マトリクス中に埋め込まれた軟骨細胞から構成される。プロテオグリカ
ンは、軟骨組織の強度を維持する際に必須であり、その結果軟骨組織は、圧縮に
耐え得る。コラーゲンは、この組織に、張力および剪断に対する耐性を提供する
。健常な関節において、この細胞外マトリクスは、軟骨細胞によるこれらの高分
子の合成および分泌と、その後のタンパク質分解酵素（例えば、プロテオグリカ
ナーゼおよびメタロプロテイナーゼ；これらもまた、軟骨細胞によって合成およ
び分泌される）によるこれらの高分子の分解との間の均衡によって維持される。
関節表面への損傷は、この平衡を破壊し得、その結果分解は、軟骨組織の修復に
必要な高分子を合成する軟骨の能力を上回る。この非平衡は、軟骨組織の細胞外
マトリクスの損失または重要な特性の変更を生じる。さらに、外傷関連損傷に関
して、軟骨細胞は、再生せず、そして焦点欠陥または軟骨断裂を修復し得ない。
そのような損傷を維持する関節の動きの範囲は非常に影響され得る。

【０００４】 軟骨マトリクス高分子の合成と分解との間の平衡の慢性的な崩壊は、ヒトにお
ける関節炎損傷の最も一般的なものである変形性関節症の発症と関連する。変形
性関節症が進行する場合、罹患した関節のクッション状の表面は、軟骨が軟らか
くなるにつれて薄くなる。垂直の裂が発生し、そして表面の完全性が崩壊される
。軟骨潰瘍、付加骨成長、および骨増殖体が出現し、動きを制限し得る。処置さ
れないままである場合、プロテアーゼによるプロテオグリカンおよびコラーゲン
の持続性の過度な分解は、最終的に軟骨の全損失および骨のぞうげ質形成を導く
。

【０００５】 歴史的に、変形性関節症および関節軟骨損傷の処置は、痛みの軽減、関節負荷
の低減、理学療法、および整形外科手術に限定されてきており、それらすべては
、基本的な病理学的障害の処置ではなく症状の軽減を意図されている。より最近
では、変形性関節症の研究は、「関節保護」方法の開発に集中している。そのよ
うな方法は、軟骨形成を保存または刺激することを意図されている長期の治療処
置を含む（Ｒｏｇａｃｈｅｆｓｋｙら（１９９３）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉ
ｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ １：１０５−１１４；Ｉｓｓｅｂｅｌｃｈｅ
ｒら（編）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（第１３版；ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｉｎｃ．、１９
９４）１６９２〜１６９７頁を参照のこと）。

【０００６】 多くの研究は、軟骨細胞に対するインスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）の生
理学的役割、および正常な関節軟骨の細胞外マトリクスの再生に集中している。
ＩＧＦ−Ｉは、インビトロで軟骨細胞増殖を刺激することが示されており（例え
ば、Ｏｓｂｏｒｎｅら（１９８９）Ｊ．Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｓ．（７：３５−４
２；およびＴｒｉｐｐｅｌら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．２５：７６
−８２を参照のこと）、そしてそれは、インビトロおよびエキソビボでの外植片
研究の両方において、正常な関節軟骨の軟骨細胞によるプロテオグリカンおよび
コラーゲンの合成を刺激する（例えば、Ｇｕｅｎｔｈｅｒら（１９８２）Ｅｘｐ
ｅｒｉｅｎｔｉａ ３８：９７９−９８１；ＷｉｌｌｉｓおよびＬｉｂｅｒｔｉ
（１９８５）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ８４４：７２−８０
；ＭｃＱｕｉｌｌａｎら（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２４０：４２３−４
３０；ならびにＴｅｓｃｈら（１９９２）Ｊ．Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｓ．１０：１
４−２２を参照のこと）。これらの刺激作用は、軟骨細胞におけるＩＧＦ−１レ
セプターを通じて媒介される（Ｔａｙｌｏｒら（１９８８）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ
．２３６：３３−３８を参照のこと）。

【０００７】 最近の研究は、変形性関節症の原因病理におけるＩＧＦ−Ｉの生理学的機能を
試験している。ＩＧＦ−Ｉの発現レベルは、明らかに、変形性関節症病理の進行
とともに増加する（ＭｉｄｄｌｅｔｏｎおよびＴｙｌｅｒ（１９９２）Ａｎｎ．
Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．５１：４０−４４７）；Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎら（１９９６
）Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．４４：１３３−１４１；ならび
にＫｅｙｓｚｅｒら（１９９５）Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２２：２７５
−２８１を参照のこと）。しかし、ＩＧＦ−Ｉに対する関節軟骨の敏感性は、実
験関節炎モデルにおいて減少することが示されている（Ｊｏｏｓｔｅｎら（１９
８９）Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ ２６：１９３−１９５を参照のこと）。
この敏感性の欠如は、細胞外タンパク質分解酵素によって、または軟骨細胞表面
でのＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質の存在によって、または軟骨マトリクスへのＩＧ
Ｆ−Ｉの非特異的結合によりＩＧＦ−Ｉのそのレセプター部位への接近がブロッ
クされ、そしてＩＧＦ−Ｉおよび／もしくはそのレセプターの合成の増加という
任意の潜在的な利益が無効にされることによる、ＩＧＦ−Ｉレセプターの合成の
減少（Ｊｏｏｓｔｅｎら（１９８９）を参照のこと）、ＩＧＦ−Ｉおよび／また
はそのレセプターの分解の増加（Ｓｃｈａｌｋｗｉｊｋら（１９８９）Ａｒｔｈ
ｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．８２：６６−７１）と関連し得る（Ｄｏｒｅら（１９
９４）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ ３７：２５３−２
６３）。

【０００８】 ＩＧＦ−Ｉの非経口投与は、変形性関節症のような疾患または外傷関連損傷に
起因して機能を減少された関節中の萎縮性骨格筋の筋肉質量を増強するための方
法といわれている（米国特許第５，４４４，０４７号を参照のこと）。

【０００９】 近年、ＩＧＦ−Ｉは、変形性関節症の処置におけるその治療的効果についてイ
ンビボで評価されている（Ｒｏｇａｃｈｅｆｓｋｙら（１９９３）Ｏｓｔｅｏａ
ｒｔｈｉｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ １：１０５−１１４）。こ
の研究において、前十字靱帯離断に供されたイヌが、その後、変形性関節症の症
状について試験された。離断の３週間後、１．０μｇのヒト組換えＩＧＦ−Ｉが
、３週間、１週間あたり３回、関節内投与された。この研究の結果は、処置され
た動物における軟骨が、処置されていない動物における軟骨と異ならなかったの
で、ＩＧＦ−Ｉ単独の関節内投与は変形性関節症を処置することにおいて効果が
ないということを示した。

【００１０】 軟骨の障害または損傷を処置するために明らかにより良好な方法が必要とされ
ている。

【００１１】 （発明の要旨） 治療剤としてインスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）を使用する、哺乳動物の
関節軟骨障害、より詳細には変形性関節症、および外傷関連軟骨損傷を処置する
ための方法を提供する。本発明の方法は、関節障害または損傷の部位に存在する
ＩＧＦ−Ｉの総量を、軟骨の維持および／または再生を可能にする治療的に有効
なレベルにまで増加させることを含む。罹患した関節部位でのＩＧＦ−Ｉの量に
おける増加は、治療的に有効な量のＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物の投与を通じ
て入手され得る。あるいは、またはさらに、天然に生成されるＩＧＦ−Ｉのレベ
ルは、遺伝子治療によって、またはＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質へのＩＧＦ−Ｉ結
合（このＩＧＦ−Ｉへの結合は、遊離のＩＧＦ−Ｉの利用可能性を低減する）の
崩壊によって調節され得る。本発明は、軟骨の維持および／または再生を促進す
ることによって、関節の軟骨が損傷を受けている変形性関節症および外傷関連軟
骨損傷を処置する際に使用され得る。

【００１２】 （発明の詳細な説明） 本発明は、哺乳動物の関節軟骨障害、より詳細には変形性関節症および外傷関
連軟骨損傷を処置するための方法に関する。この方法は、疾患のあるまたは損傷
を受けた関節部位に存在するＩＧＦ−Ｉの総量を、軟骨に対して所望の正の効果
を達成し得るレベルにまで増加することを含む。「所望の正の効果」によって、
軟骨の維持および／または再生が意図される。「維持」によって、軟骨（これは
、処置の開始に存在する軟骨、および任意の移植された軟骨細胞または幹細胞を
含む処置の開始後に新しく形成された任意の軟骨を含む）の保存が意図される。
「再生」によって、新しい軟骨の形成が意図される。この新しい軟骨は、処置の
開始時の既存の軟骨に付加し、そして処置の開始前に失われた軟骨を置換するよ
うに作用し得る。軟骨の維持および再生は、軟骨成分（軟骨細胞および細胞外マ
トリクス分子を含むがこれらに限定されない）の維持および／または再生を含む
。軟骨の維持および／または再生は、軟骨組織に対する変形性関節症および外傷
関連損傷の長期処置にとって有益である。

【００１３】 本発明の方法は、動作可能な滑膜被覆関節（ｓｙｎｏｖｉａｌ−ｌｉｎｅｄ
ｊｏｉｎｔ）が最終的に非機能性にされている変性関節疾患である変形性関節症
の長期処置のために有効である。本発明は、限局性および全身性（ｇｅｎｅｒａ
ｌｉｚｅｄ）の特発性変形性関節症、ならびに二次的な変形性関節症の処置のた
めに使用され得る。限局性の特発性変形性関節症の例には、以下が挙げられるが
それらに限定されない：手の罹患（例えば、ヘーバーデン結節およびブシャール
結節、びらん性指節間関節炎、ならびに手首の第一中手骨）、足の罹患（例えば
、外反母趾、強直母趾、凹足指（ｃｏｎｔｒａｃｔｅｄ ｔｏｅｓ）、および距
舟）、膝、股関節部、肩、および脊椎の罹患（例えば、アポフィーゼ関節、肋椎
関節、椎間関節、正中環軸関節、移行性（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ）腰仙骨関
節、および仙腸関節を含む、脊柱の滑膜被覆関節；骨化過剰症；フォレスティー
ル病；および汎発性特発性骨増殖症）。

【００１４】 二次的な変形性関節症の例には、以下の基本的な問題によって生じるか、また
はその問題と関連する変形性関節症を含むがそれらに限定されない：関節軟骨に
対する急性または慢性の外傷関連損傷（これは、職業活動または娯楽活動の間に
受けられ得る）；先天性障害または発生障害（例えば、骨端すべり症（ｓｌｉｐ
ｐｅｄ ｅｐｉｐｈｙｓｉｓ）、過剰運動性症候群、および骨形成異常）；代謝
障害（例えば、組織褐変症、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、およびゴシェ
病）；内分泌障害（例えば、先端巨大症、上皮小体機能亢進症、真性糖尿病、肥
満、および甲状腺機能低下不全症）；カルシウム沈着疾患（例えば、カルシウム
ピロリン酸沈着症およびアパタイト関節症）；ならびに骨および関節疾患（例え
ば、骨折、虚血壊死、感染、痛風、慢性関節リウマチ、パジェット病、大理石骨
病、および骨軟骨炎）。

【００１５】 本発明は、一般に、上記の障害のすべてによって引き起こされるか、またはそ
れらと関連する変形性関節症に適用可能であるべきである。この開示された方法
はまた、変性椎間板疾患（それによって、椎骨間椎間板中の軟骨組織が崩壊する
）の処置のために有効である。変形性関節症および変性椎間板疾患は、持続性の
背の痛みの一般的な原因であり、従って、本発明の方法は、基本的な原因の処置
によってこの症状を緩和するための手段を提供する。

【００１６】 本発明の方法がまた、変形性関節症と同じ機構を通じて、すなわち軟骨の維持
および／または再生を促進することによる外傷関連関節軟骨損傷の処置において
使用され得ることが当業者に明らかである。「外傷関連関節軟骨損傷」によって
、正常な関節の動きが損なわれるか、または悪影響を及ぼされる危険性にあるよ
うな、外傷性事象の結果として軟骨細胞、細胞外マトリクス、または関節軟骨の
他の成分に対して引き起こされるダメージが意図される。そのような損傷は、急
性または慢性のいずれかであり得、そして職業関連損傷、事故関連損傷、スポー
ツ関連損傷、または暴力関連損傷を含む。処置されないままである場合、深刻な
関節軟骨損傷が、最終的に変形性関節症の発症を導き得る。

【００１７】 「処置」によって、既存の関節軟骨損傷、より詳細には変形性関節症、または
外傷関連軟骨損傷の治療処置、およびその障害または損傷の発生前に行われる予
防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）手順または予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）手順
の両方が意図される。従って、処置されるべき哺乳動物は、すでにその障害もし
くは損傷を有し得るか、またはその障害もしくは損傷を有する傾向があり得る。
個体を変形性関節症に罹患しやすくすることが知られる危険因子は、予防処置が
所望されるか否かを決定する際に考慮され得る。例えば、一般に、変形性関節症
の危険性は、年齢および反復性ストレス（例えば、職業上のストレス）とともに
増加することが知られている。主要な関節外傷、肥満、先天性欠陥または発生欠
陥、代謝障害または内分泌障害、および前炎症関節疾患に罹患している個体は、
より変形性関節症の傾向にあることが観察されている。従って、これらの症例に
おける予防目的のために本発明の方法を適用することは望ましくあり得る。

【００１８】 本発明の方法は、任意の哺乳動物に関して使用され得る。例示的な哺乳動物に
は、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、およびより好ましくはヒトが挙げ
られるがこれらに限定されない。

【００１９】 疾患のあるまたは損傷を受けた関節部位でのＩＧＦ−Ｉの量における治療的に
有効なレベルまでの増加は、治療的に有効な用量のＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成
物の投与を通じて得られ得る。「治療的に有効な用量」によって、その関節部位
でのＩＧＦ−Ｉの量を、軟骨の維持および／または再生を可能にする治療的に有
効なレベルにまで増加させるという所望の目的を達成する、ＩＧＦ−Ｉの用量が
意図される。そのような投与は、その部位で直接的に（例えば、関節内注射を用
いる）、または送達系（例えば、疾患のあるまたは損傷を受けた関節の付近に移
植された生分解性マトリクスからの持続的な放出を用いる）で達成され得る。あ
るいは、投与の他の様式（例えば、全身性注射）は、それらが、その疾患のある
または損傷を受けた関節部位でのＩＧＦ−Ｉの量を、その疾患のあるまたは損傷
を受けた関節部位に治療的に有効な用量のＩＧＦ−Ｉを直接的に送達する投与様
式のレベルと匹敵する治療的に有効なレベルにまで増加させる限り、使用され得
る。

【００２０】 本明細書において使用される用語「ＩＧＦ−Ｉ」とは、インスリン様増殖因子
Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）（これは、７０アミノ酸および約７，６００ダルトンの分子量
を有する単鎖ペプチドである）をいう。インスリン様増殖因子Ｉは、細胞発生に
伴う有糸分裂および増殖プロセスをを刺激する。

【００２１】 本発明の一つの実施態様において、ＩＧＦ−Ｉの量を治療有効レベルにまで増
加することは、治療有効用量を含む薬学的組成物の投与によって達成される。投
与されるべきＩＧＦ−Ｉは、任意の動物種（これは、鳥類、イヌ、ウシ、ブタ、
ウマおよびヒトを含むがこれらに限定されない）由来であり得る。好ましくは、
ＩＧＦ−Ｉは、哺乳動物種由来であり、そしてより好ましくは、処置を受ける哺
乳動物と同一種の哺乳動物由来である。

【００２２】 ＩＧＦ−Ｉの生物学的に活性な改変体もまた、本発明の方法によって包含され
る。そのような改変体は、ＩＧＦ−Ｉ活性、特にＩＧＦ−Ｉレセプター部位に結
合する能力を維持すべきである。ＩＧＦ−Ｉ活性は、標準的なＩＧＦ−Ｉバイオ
アッセイを用いて測定され得る。代表的なアッセイとしては、公知の胎盤膜を使
用する放射性レセプターアッセイ（例えば、米国特許第５，３２４，６３９号；
Ｈａｌｌら（１９７４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ａｎｄ Ｍｅｔ
ａｂ．３９：９７３−９７６；ならびにＭａｒｓｈａｌｌら、（１９７４）Ｊ．
Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．ａｎｄ Ｍｅｔａｂ．３９：２８３−２９２
を参照のこと）、その分子がトリチウム化チミジンの用量依存様式でのＢＡＬＢ
／ｃ ３Ｔ３線維芽細胞のＤＮＡへの取り込みを増強する能力を測定するバイオ
アッセイ（例えば、Ｔａｍｕｒａら（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
２：５６１６−５６２１を参照のこと）など（これらは、本明細書において参考
として援用される）が挙げられる。好ましくは、この改変体は、少なくともネイ
ティブ分子と同一の活性を有する。

【００２３】 適切な生物学的に活性な改変体は、ＩＧＦ−Ｉフラグメント、アナログ、およ
び誘導体であり得る。「ＩＧＦ−Ｉフラグメント」とは、インタクトなＩＧＦ−
Ｉ配列および構造の一部のみからなるタンパク質を意図し、そしてＩＧＦ−Ｉの
Ｃ末端欠失またはＮ末端欠失であり得る。「アナログ」とは、１以上のアミノ酸
の置換、挿入、または欠失を有するネイティブＩＧＦ−Ｉの配列および構造を含
むＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−Ｉフラグメントのいずれかのアナログを意図する。
１以上のペプトイド（ペプチド模倣体）を有するペプチドもまた、用語アナログ
に包含される（国際公開ＷＯ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」とは
、ＩＧＦ−Ｉ活性が維持される限り、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−Ｉフラグメント、ま
たはそれらのそれぞれのアナログの任意の適切な改変を意図する（例えば、グリ
コシル化、リン酸化、または他の外来部分の付加）。ＩＧＦ−Ｉのフラグメント
、アナログ、および誘導体を作製する方法は、当該分野で利用可能である。一般
的には、米国特許第４，７３８，９２１号、同第５，１５８，８７５号、および
同第５，０７７，２７６号；国際公開ＷＯ８５／００８３１、ＷＯ９２／０４３
６３、ＷＯ８７／０１０３８、およびＷＯ８９／０５８２２；ならびに欧州特許
ＥＰ１３５０９４、ＥＰ１２３２２８およびＥＰ１２８７３３を参照のこと；こ
れらは参考として本明細書中に援用される。

【００２４】 ＩＧＦ−Ｉ改変体は、一般的に、参照ＩＧＦ−Ｉ分子のアミノ酸配列に対して
と、少なくとも７０％、好ましくは８０％、より好ましくは８５％、さらにより
好ましくは９０％〜９５％以上、そして最も好ましくは９８％以上のアミノ酸配
列同一性を有する。改変体は、例えば、１〜１０アミノ酸残基ほど異なり得る（
例えば、６〜１０、５ほど、４ほど、３、２、または１アミノ酸残基のみでさえ
あり得る）。

【００２５】 「配列同一性」とは、改変体のアミノ酸配列の特定された連続するセグメント
が、参照配列のアミノ酸配列に対して整列され、そして比較される場合に、改変
体配列と参照配列との間に見出される同じアミノ酸残基を意図する。配列整列お
よび配列間の同一性を決定するための方法は、当該分野で周知である。例えば、
Ａｕｓｕｂｅｌら、編（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第１９章（Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ）ｌおよびＡＬＩＧＮプログラム（Ｄａｙｈｏｆｆ（１９７８）、Ａｔｌａｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：補遺３（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．）を参照のこと。多くの
アルゴリズムが、配列を整列し、そして配列同一性を決定するために利用可能で
ある。そして、これらには、例えば、以下が含まれる：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（
１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性整列アルゴリズム；Ｓ
ｍｉｔｈら（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の局所的相同
性アルゴリズム；Ｐｅａｒｓｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．８５：２４４４の類似性検索方法；Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎア
ルゴリズム（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７０：１７３−１８７（１９９７）
）；ならびにＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＸアルゴリズム（Ａ
ｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０
を参照のこと）。これらのアルゴリズムを用いるコンピュータ化されたプログラ
ムもまた利用可能である。そして、これには、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）パッケージ、バージョン８、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗ
ｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡで利用可能なＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、
ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ；ならびにＩｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｍ
ｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａによるＰＣ／Ｇｅｎｅプログ
ラムにおけるＣＬＵＳＴＡＬが含まれるが、それらに限定されない。好ましくは
、配列同一性は、そのプログラムによって決定されるデフォルトパラメータを用
いて決定される。

【００２６】 ２つのアミノ酸配列の最適な整列に関して、その改変アミノ酸配列の連続する
セグメントは、参照アミノ酸配列に関してさらなるアミノ酸残基を有し得るか、
またはアミノ酸残基を欠失してい得る。参照アミノ酸配列との比較のために使用
される連続するセグメントは、少なくとも２０の連続するアミノ酸残基を含み、
そしてこれは、３０、４０、５０またはそれを超えるアミノ酸残基であり得る。
改変体のアミノ酸配列におけるギャップの包含に関連する配列同一性の増加のた
めの補正は，ギャップペナルティを割り当てることによってなされ得る。

【００２７】 アミノ酸配列同一性のパーセンテージを考慮する場合、いくつかのアミノ酸残
基位置は、保存的アミノ酸置換の結果、異なり得る。この置換は、タンパク質機
能の特性には影響しない。これらの場合、配列同一性パーセントは、保存的に置
換されたアミノ酸における類似性を説明するために上向きに調整され得る。この
ような調整は、当該分野において周知である。例えば、ＭｅｙｅｒｓおよびＭｉ
ｌｌｅｒ（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４
：１１−１７を参照のこと。

【００２８】 当該分野においては、以下にさらに説明するように、このようなＩＧＦ−Ｉ改
変体の調製および使用に関する実質的な指針が提供されている。ＩＧＦ−Ｉのフ
ラグメントは、一般に、全長分子の少なくとも約１０の連続するアミノ酸残基、
好ましくは、全長分子の約１５〜２５の連続するアミノ酸残基、および最も好ま
しくは、全長ＩＧＦ−Ｉの約２０〜５０またはそれを超える連続するアミノ酸残
基を含む。

【００２９】 いくつかのＩＧＦ−Ｉアナログおよびフラグメントは、当該分野において公知
であり、そして例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３
（１９８６）４９０４−４９０７；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．１４９（１９８７）３９８−４０４；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６３（１９８８）６２３３−６２３９；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６５（１９８９）７６６−７７１；Ｆｏｒｓｂｅｒｔら
（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７１：３５７−３６３；米国特許第４，８
７６，２４２号および同第５，０７７，２７６号；ならびに国際公開ＷＯ８７／
０１０３８および同ＷＯ８９／０５８２２において記載されるものを含む。代表
的なアナログとしては、成熟分子のＧｌｕ−３の欠失を含むもの、Ｎ末端から５
アミノ酸まで短縮されているアナログ、Ｎ末端の最初の３アミノ酸の短縮を有す
るアナログ（ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ、ｄｅｓ−ＩＧＦ−Ｉ、ｔＩＧＦ−
Ｉまたは脳ＩＧＦと呼ばれる）、およびヒトＩＧＦ−Ｉの最初の１６アミノ酸の
代わりにヒトインスリンのＢ鎖の最初の１７アミノ酸を含むアナログが挙げられ
る。

【００３０】 本発明において使用されるＩＧＦ−Ｉは、実質的に精製された、ネイティブの
、組換え産生された、または化学合成された形態であり得る。ＩＧＦ−Ｉは、血
清または血漿から、単離されそして精製され得る（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ（１９８０
）Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０２：３７１−３８０および欧州特許第ＥＰ
１２３，２２８を参照のこと）。ＩＧＦ−Ｉはまた、固相方法（Ｌｉら（１９８
３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２２１６−２２２
０を参照のこと）によって化学合成され得る。これらの参考文献は、本明細書に
おいて参考として援用される。

【００３１】 組換えＤＮＡ技術による遺伝子操作は、ＩＧＦ−Ｉを産生する最も効率よい方
法であり得る。ＩＧＦ−ＩをコードするヒトＤＮＡ配列は公知であり、そして発
現のために宿主細胞へ導入され得る。ＩＧＦ−Ｉは、組換えＤＮＡ技術によって
、Ｅ．ｃｏｌｉ、酵母、昆虫、および哺乳動物の細胞において産生され得る。分
泌されるＩＧＦ−Ｉは、ＩＧＦ−ＩをコードするＤＮＡ配列にシグナル配列を付
加することによって作製され得る。さらに、ＩＧＦ−ＩをコードするＤＮＡ配列
は、ＩＧＦ−Ｉフラグメント、アナログ、または誘導体を作製するように操作さ
れ得る。そのような組換えＤＮＡ技術は、一般的に当該分野において利用可能で
ある。例えば、国際公開ＷＯ９６／０７４２４を参照のこと。ここでは、組換え
ヒトＩＧＦ−Ｉタンパク質が酵母において産生される。

【００３２】 ＩＧＦ−Ｉの治療有効用量を含む薬学的組成物は、ＩＧＦ−Ｉの治療的処置を
増強する他の成分を含み得る。そのような組成物は、ＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質
、ＩＧＦ−Ｉレセプター、およびＩＧＦ結合複合体の酸不安定性サブユニットを
含む。一般的に、軟骨におけるＩＧＦ−Ｉの作用は、ＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質
によって調節されることが公知であり、このうち少なくとも６つ（ＩＧＦＢＰ−
１〜ＩＧＦＢＰ−６）が単離されている（Ｂａｘｅｒら（１９８９）Ｐｒｏｇ．
Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｒｅｓ．１：４９−６８；およびＲｅｃｈｌｅ
ｒら、（１９９２）Ｇｒｏｗｔｈ Ｒｅｇｕｌ．２：５５−６８を参照のこと）
。これらのうち、ＩＧＦＢＰ−３が、ＩＧＦ−Ｉについての主要な結合タンパク
質である。その存在は、ＩＧＦ−Ｉのプロテオグリカン合成に対する刺激効果を
増強し得る（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒら（１９９６）Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｒｈｅｕ
ｍａｔ．３５：５１５−５２２を参照のこと）。さらに、酸不安定性糖タンパク
質もまた、ＩＧＦ−Ｉによって形成されるタンパク質複合体およびその結合タン
パク質と会合することが示されている。従って、治療的に有効な薬学的組成物は
、軟骨の維持および／または再生に対するＩＧＦ−Ｉの所望の効果を容易にする
ことが示されている場合、このような酸不安定性糖タンパク質およびＩＧＦ−Ｉ
結合タンパク質を含み得る。ＩＧＦ−Ｉとともに投与されるＩＧＦＢＰの量は、
ＩＧＦ−ＩとＩＧＦＢＰとの間のモル比に従って、決定され得る。このモル比は
、約０．５：１〜約３：１、好ましくは約１：１の範囲であり得る（米国特許第
５，１８７，１５１号を参照のこと）。

【００３３】 あるいは、ＩＧＦＢＰに対するＩＧＦ−Ｉの結合を破壊する薬剤は、罹患した
関節部位または損傷した関節部位に存在するＩＧＦ−Ｉの量を、治療的に有効な
レベルに増加させるに有効であり得る。従って、ＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物
は、ＩＧＦ−Ｉ−ＩＧＦＢＰ結合複合体の形成を有効に破壊する薬剤をさらに含
み得る。

【００３４】 この組成物はまた、ヒアルロン酸のような粘性増強剤；抗酸化剤；および滑膜
細胞の刺激剤のような他の成分を含み得る。ＩＧＦ−Ｉによって促進される、軟
骨の維持および／または再生を容易にする成分に対するすべてのそのような参照
は、本明細書において参考として援用される。

【００３５】 これらの成分に加えて、ＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物は、１つ以上のプロテ
アーゼインヒビターを含み得る。例示的なプロテアーゼインヒビターは、ペント
サンポリ硫酸ナトリウム（ＰＰＳ）、ポリ硫酸ポリサッカリドである。このプロ
テアーゼインヒビターは、低用量のＩＧＦ−Ｉ（１μｇのＩＧＦ−Ｉ関節内を１
週間に５回）との組合せで骨関節炎を処置するにおける効力を有する（Ｒｏｇａ
ｃｈｅｆｓｋｙら（１９９３）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒ
ｔｉｌａｇｅ １：１０５−１１４）。このようなプロテアーゼインヒビターは
、有効なＩＧＦ−Ｉ用量の投与の間に、他の経路（例えば、筋肉内）によって投
与され得る。

【００３６】 本発明に従う薬学的組成物は、さらに、個体における他の障害を処置するに有
効である他の１つ以上の治療剤を、そのさらなる治療剤の生化学的作用がＩＧＦ
−Ｉ処置の意図された作用の効力を阻害しない限り、含み得る。このような薬剤
の例としては、抗生物質、抗炎症剤などが挙げられるが、それらに限定されない
。

【００３７】 薬学的に受容可能なキャリアが、その薬学的組成物においてＩＧＦ−Ｉおよび
他の成分と混合されるべきである。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、当該
分野において慣用され、治療的成分の保存、投与および／または治癒の効果を促
進するキャリアを意図する。キャリアはまた、ＩＧＦ−Ｉの任意の所望されない
副作用を減じ得る。適切なキャリアは，安定であるべきである（すなわち、その
処方物における他の成分とは反応し得ない）。このキャリアは、処置のために使
用される投薬量および濃度にてレシピエントにおける有意な局所的有害作用また
は全身有害作用をもたらさないべきである。このようなキャリアは、当該分野に
おいて一般的に公知である。本発明について適切なキャリアは、アルブミン、ゼ
ラチン、コラーゲン、ポリサッカリド、モノサッカリド、ポリビニルピロリドン
、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、不揮発油、オレイン酸エ
チル、リポソーム、グルコース、スクロース、ラクトース、マンノース、デキス
トロース、デキストラン、セルロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチ
レングリコール（ＰＥＧ）などのような、慣用される大きく安定な高分子である
。持続放出性キャリア（例えば、ヒアルロン酸）もまた、適切であり得る。特に
、Ｐｒｉｓｅｌｌら（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕ．８５：５１
−５６および米国特許第５，１６６，３３１号を参照のこと。ヒアルロン酸およ
び他のポリマーの包含は、骨関節に対するさらなる利益的効果を有し得る。特に
、Ｂｒａｇａｎｔｉｎｉ（１９８７）Ｃｌｉｎ．Ｔｒｉａｌｓ Ｊ．２４（４）
：３３３−３４０；Ｄｏｕｇａｄｏｓら、（１９９３）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉ
ｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ １：９７−１０３；およびＬｕｓｓｉｅ
ｒら（１９９６）Ｊ．Ｒｈｅｕｍ．２３：１５７９−１５８５を参照のこと（こ
れらは、本明細書において参考として援用される）。組成物における他の受容可
能な成分としては、等張性を増強する緩衝剤（例えば、水、生理食塩水、リン酸
、クエン酸、コハク酸、酢酸、および他の有機酸およびそれらの塩）が含まれる
がそれらに限定されない。

【００３８】 好ましい薬学的組成物は、ＩＧＦ−Ｉ組成物の注射から生じる局所的疼痛およ
び刺激が減少している緩衝剤を取り込み得る。そのような緩衝剤としては、以下
が含まれるがそれらに限定されない：低リン酸緩衝剤およびコハク酸緩衝剤。例
えば、国際公開ＷＯ９４／１５５８４は、５０ｍｍｏｌ／Ｌ未満の量で存在する
リン酸緩衝剤を含む、ｐＨ５．５〜６．５での等張性ＩＧＦ−Ｉ溶液を記載する
。これは、注射の際の疼痛の減少をもたらしたことが報告されている。別の例と
しては、薬学的組成物は、同時係属中の出願（発明の名称「Ｉｎｊｅｃｔｉｂｌ
ｅ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ」米
国特許出願第６０／０８０，００８号（１９９８年４月３日出願））において開
示される処方物におけるように、ｐＨ範囲が約４．０〜約７．５の範囲であり、
そして０．５ｍＭ〜約１００ｍＭまでの範囲のコハク酸塩、好ましくは約５０ｍ
Ｍ未満の範囲のコハク酸緩衝剤を含み得る。１つの実施態様において、ＩＧＦ−
Ｉ薬学的組成物は、１０ｍＭコハク酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ６．０、塩化ナト
リウム溶液中に処方され得る。

【００３９】 この薬学的組成物は、さらに、可溶化化合物を含み得る。この可溶化化合物と
は、本発明の目的について、グアニジニウム基を含み、そしてＩＧＦ−Ｉまたは
ＩＧＦ−Ｉアナログの可溶性を増強し得る化合物をいう。そのような可溶化化合
物の例としては、アミノ酸アルギニンおよびＩＧＦ−Ｉの可溶性をｐＨ５．５以
上において増強する能力を維持するアルギニンのアミノ酸アナログが挙げられる
。そのようなアナログとしては、限定することなく、アルギニンを含むジペプチ
ドおよびトリペプチドが挙げられる。ＩＧＦ−Ｉの「可溶性を増強する」とは、
同じ成分であるがグアニジニウム含有化合物を欠く溶液中においてｐＨ５．５以
上で溶解され得るＩＧＦ−Ｉの量に比して、グアニジニウム含有化合物の存在下
でｐＨ５．５以上にて溶液中に溶解し得るＩＧＦ−Ｉの量を増大させることを意
図する。グアニジニウム含有化合物が、ＩＧＦ−Ｉの溶解度を増強する能力は、
当該分野で周知の方法を用いて決定され得る。一般に、その組成物に存在する可
溶化化合物の濃度は、約１０ｍＭ〜約１Ｍであり、そして例えば、化合物アルギ
ニンの場合、同時係属中の出願（発明の名称「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｐｒ
ｏｖｉｄｉｎｇ ｆｏｒ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＩＧＦ−Ｉ Ｓｏｌｕｂｉｌｉ
ｔｙ」米国特許出願第０９／１８８，０５１号、１９９８年１１月６日出願）に
おいて開示されるように、約２０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度範囲である。

【００４０】 本発明の目的について、ＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物は、単位投薬量で、お
よび、液剤、懸濁剤または乳剤のような注射可能もしくは注入可能な形態におい
て処方されるべきである。この薬学的組成物はまた、凍結乾燥した散剤の形態で
あり得、この散剤は、投与前に、液剤、懸濁剤または乳剤へと変換され得る。Ｉ
ＧＦ−Ｉを有する薬学的組成物は、好ましくは、メンブレン濾過により滅菌され
、そして単位用量の容器または複数回用量の容器（例えば、封入バイアルまたは
アンプル）中に保存される。

【００４１】 薬学的組成物を処方するための方法は、一般に当該分野において公知である。
薬学的に受容可能なキャリア、安定化剤、および等モル化剤の処方および選択の
完全な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ（１９９０）（第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）（これは、本明細書にお
いて参考として援用される）に見出され得る。

【００４２】 本発明のＩＧＦ−Ｉはまた、徐放形態に処方されて、処置される哺乳動物にお
ける薬学的に活性なＩＧＦ−Ｉの存在を延長し得る（一般的に、１日より長い間
）。多くの徐放処方物の調製方法が当該分野において公知であり、そしてＲｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９
０）（第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｔｏ
ｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）（これは、本明細書において参考として援用さ
れる）に開示されている。一般に、ＩＧＦ−Ｉが、固体の疎水性ポリマーの半透
性のマトリクスに捕捉され得る。このマトリクスは、フィルムまたはマイクロカ
プセルへと成型され得る。そのようなマトリクスの例は、以下を含むがそれらに
限定されない：ポリエステル、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタメ
ートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら、（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２
２：５４７−５５６）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号および
ＥＰ５８，４８１）、ポリラクチドコグリコリドのようなポリ乳酸ポリグリコレ
ート（ＰＬＧＡ）（例えば、米国特許第４，７６７，６２８号および同第５，６
５４，００８号を参照のこと）、ヒドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒら、（１９
８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７；Ｌａｎ
ｇｅｒ（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５；および米国特許
を参照のこと）、非分解性エチレン−酢酸ビニルコポリマー、分解性乳酸−グリ
コール酸コポリマー（例えば、Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ^TM）、ポリ−Ｄ−（−
）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）ならびにヒアルロン酸ゲル（例
えば、米国特許第４，６３６，５２４号を参照のこと）。適切なマイクロカプセ
ルはまた、ヒドロキシメチルセルロースまたはコアセルベーション技術によるか
、または界面重合化によって調製されるゼラチンマイクロカプセルおよびポリメ
チルメタクリレートマイクロカプセルを含み得る。さらに、マイクロ乳剤または
コロイド薬剤送達系（例えば、リポソームおよびアルブミンミクロスフェア）も
また使用され得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）（第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｏ．，Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）を参照のこ
と。

【００４３】 １つのこのような持続放出性処方物は、Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ（Ｄｅｐｏｆｏ
ａｍ）である、ここで、「Ｈｉｇｈ ａｎｄ Ｌｏｗ Ｌｏａｄ Ｆｏｒｍｕｌ
ａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＧＦ−Ｉ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ｌｉ
ｐｏｓｏｍｅｓ」とのタイトルの同時係属出願（米国特許出願第０８／９２５，
５３１号、１９９７年９月８日出願、本明細書中に参考として援用される）に開
示されるように、組換えヒトＩＧＦ−Ｉは多小胞リポソーム中にカプセル化され
る。関節中のＩＧＦ−Ｉの平均滞留時間は、Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉでの方が、遊
離ＩＧＦ−Ｉよりも約２倍長い（それぞれ、８．４時間および４．１時間）。「
滞留時間」とは、ＩＧＦ−Ｉの濃度が、治療的に有効であるようにベースライン
を十分に上回って高いままである間の時間量が意図される。「Ｍｅｔｈｏｄ ｆ
ｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ Ｆｏｒｍｕ
ｌａｔｉｏｎｓ」とのタイトルの同時係属出願（米国特許出願第０９／１８７，
７８０号、１９９８年１１月６日出願、ここでは、ＩＧＦ−Ｉは、ＰＬＧＡマイ
クロスフェア中にカプセル化される、本明細書中に参考として援用される）もま
た参照のこと。

【００４４】 関節軟骨障害を処置するための方法であって、治療有効用量のＩＧＦ−Ｉを含
有する薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法は、十分に高い用量のＩＧ
Ｆ−Ｉ単独がインビボでの軟骨維持および／または再生の促進において効果的で
あるとの予期されない発見に基づく。従って、本発明に従って投与される用量で
のＩＧＦ−Ｉの濃度は、関節軟骨障害、特に、変形性関節症、および外傷関連軟
骨損傷の処置において有効である。

【００４５】 本発明の実施態様に従って、１関節当たり１用量で投与される薬学的に有効な
ＩＧＦ−Ｉの総量は、１関節内注射当たり、少なくとも約０．００２ｍｇ〜約５
０．０ｍｇ、約０．００３ｍｇ〜約４５．０ｍｇ、約０．００４ｍｇ〜約４０．
０ｍｇ、約０．００５ｍｇ〜約３５．０ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約３０．０ｍｇ
、好ましくは、約０．１０ｍｇ〜約２０．０ｍｇ、より好ましくは、約０．５０
ｍｇ〜約１０．０ｍｇ、さらにより好ましくは、約１．０ｍｇ〜約１０．０ｍｇ
、なおより好ましくは、約２．０ｍｇ〜約１０．０ｍｇ、さらにより好ましくは
、約１．０ｍｇ〜約５．０ｍｇ、最も好ましくは、約２．０ｍｇ〜約５．０ｍｇ
の範囲内であるべきである。いくつかのレジメでは、治療有効用量を達成するた
めに関節に投与されるＩＧＦ−Ｉの総量は、約０．０１ｍｇ〜約１０．０ｍｇ（
約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、
０．０９．０．１０ｍｇまたはそれ以上を含む）である。他のレジメでは、１関
節当たり１用量当たりで投与されるＩＧＦ−Ｉの総量は、１関節内注の１用量当
たり、約０．１０ｍｇ〜約１０．０ｍｇ（約０．１５、０．２０、０．２５、０
．３０、０．３５、０．４０、０．４５、０．５０、０．５５、０．６０、０．
６５、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９５、１．０
、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５
、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５ｍｇまた
はそれ以上を含む）、好ましくは約０．１０ｍｇ〜約５．０ｍｇの範囲、より好
ましくは約０．２０ｍｇ〜約４．０ｍｇの範囲、なおより好ましくは約０．３０
ｍｇ〜約３．０ｍｇの範囲である。ＩＧＦ−Ｉの単位用量を有する薬学的組成物
は、溶液、懸濁液、または乳濁液の形態であり得る。１関節についての薬学的組
成物の１用量の総容量は、約１０μｌ〜約１０ｍｌ、好ましくは約１００μｌ〜
約５ｍｌ、より好ましくは約０．５ｍｌ〜約２ｍｌの範囲であり得る。適切な容
量は、処置される関節の大きさおよび組成物中の成分の溶解度のような要因と共
に変化し得ることが明らかである。

【００４６】 特定の関節に単位用量として投与されるＩＧＦ−Ｉの総量は、投与される薬学
的組成物のタイプ、すなわち、組成物が、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、また
は持続放出性処方物の形態であるかに依存することが認められる。例えば、治療
有効量のＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物が持続放出性処方物である場合、ＩＧＦ
−Ｉは、より高い濃度で投与される。従って、持続放出性処方物を用いて、１関
節当たり１用量当たりで投与されるＩＧＦ−Ｉの量は、約０．１０ｍｇ〜約５０
．０ｍｇ、約０．２０ｍｇ〜約４５．０ｍｇ、約０．３０ｍｇ〜約４０．０ｍｇ
、約０．４０ｍｇ〜約３５．０ｍｇ、約０．５０ｍｇ〜約３０．０ｍｇ、約０．
６０ｍｇ〜約２５．０ｍｇ、約０．７０ｍｇ〜約２０．０ｍｇ、約０．８０ｍｇ
〜約１９．０ｍｇ、約０．９０ｍｇ〜約１８．０ｍｇ、約１．０ｍｇ〜約１７．
０ｍｇ（約１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０
、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５
、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、
１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、１５．５、１６．０、１６．５ｍｇ
またはそれ以上を含む）の範囲内である。

【００４７】 ＩＧＦ−Ｉの治療有効用量の投与は、以下に記載のように、関節内注射を用い
て、または持続放出性デバイスまたは送達システム（例えば、治療有効用量を含
む生分解性マトリックス）を用いてのように、部位に直接的に到達され得る。あ
るいは、他の投与様式（例えば、全身注射）は、それらが、関節部位のＩＧＦ−
Ｉの量を、疾患もしくは損傷関節部位に直接的に治療有効用量のＩＧＦ−Ｉを送
達する投与様式のレベルに匹敵する治療有効レベルに増加させる限り、使用され
得る。

【００４８】 本発明の１つの実施態様では、治療有効用量のＩＧＦ−Ｉの投与手段が、ＩＧ
Ｆ−Ｉの罹患関節の領域への局在化された送達を生じる。この実施態様では、治
療有効用量のＩＧＦ−Ｉが、処置を必要とする哺乳動物に関節内投与される。「
関節内」とは、変形性関節症または他の軟骨損傷を有する可動性の連結を囲む腔
内に直接投与することであり、これによって、投与されたＩＧＦ−Ｉと関節軟骨
との間の実質的な直接的接触が達成されることが意図される。これは、注射また
は注入によってなされ得る。ＩＧＩ−Ｉの治療有効用量の単回短期投与は、罹患
関節へのＩＧＦ−Ｉの各送達と共に使用される。「短期投与」とは、約３時間内
で、好ましくは約１．５時間内で、その用量の投与を完了することが意図される
。本発明のこの実施態様についてより好ましくは、用量の投与は、罹患関節への
直接注射により迅速である。

【００４９】 本発明の別の実施態様では、治療有効用量のＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物は
、断続的に関節内投与される。「断続的な投与」とは、治療有効用量のＩＧＦ−
Ｉの投与、続いて中断期間、次いで治療有効用量の別の投与などが意図される。
治療有効用量の投与は、継続した様式で（例えば、持続放出性処方物を用いるよ
うに）達成され得るか、またはそれは、所望の一日投与量レジメ（例えば、1日 当たり１回、２回、３回またはそれより多くの注射）に従って達成され得る。「
中断期間」とは、ＩＧＦ−Ｉの継続した持続放出性投与または毎日の投与を中断
することが意図される。中断期間は、継続した持続放出性投与または毎日の投与
の期間より長くても短くてもよい。中断期間の間、滑液中のＩＧＦ−Ｉレベルは
、処置の間に得られた最大レベルをかなり下回る。中断期間の好ましい長さは、
用いたＩＧＦ−Ｉの有効用量の濃度および形態に依存する。投与が関節内注射を
含む場合、中断期間は、少なくとも２日であり、好ましくは少なくとも４日であ
り、より好ましくは少なくとも１週間であり、そして一般的には、４週間を超え
ない。例えば、有効用量が約１．０ｍｇである場合、以下の実施例に議論するよ
うに、好ましくは、ＩＧＦ−Ｉが１週間に約１回投与される。持続放出性処方が
使用される場合、中断期間は、損傷部位にＩＧＦ−Ｉのより大きな滞留時間を引
き起こすように延長されなければならない。あるいは、持続放出性処方物の有効
用量の投与頻度が、従って減少される。疾患もしくは損傷関節へのＩＧＦ−Ｉの
断続投与スケジュールは、軟骨の維持および／または再生の所望の治療効果、お
よび障害もしくは損傷の最終的な処置が達成されるまで、続き得る。

【００５０】 なお別の実施態様では、治療有効用量のＩＧＦ−Ｉの断続的な関節内投与は、
周期的である。「周期的」とは、投与中に中断を伴う断続的な投与が意図され、
周期は、約１ヶ月から約２、３、４、５または６ヶ月の範囲であり、より好まし
くは、約３ヶ月から約６ヶ月の範囲である。例えば、投与スケジュールは、関節
内注射によるＩＧＦ−Ｉの有効用量の断続的投与であり得る。ここで単回短期用
量が、４週間の間、週に１回与えられ、続いて３ヶ月の間、断続的投与において
中断し、続いて４週間、週に１回与えられる単回短期用量の関節内投与による断
続的投与をし、続いて３ヶ月の間、断続的投与において中断するなどである。別
の例として、単回短期用量は、２週間、週に１回与えられ得、続いて１ヶ月、断
続的投与において中断し、続いて２週間、週に１回、単回短期用量が与えられ、
続いて１ヶ月の間、断続的投与において中断するなどである。ＩＧＦ−Ｉの疾患
もしくは損傷関節への関節内投与の周期的な断続スケジュールは、軟骨の維持お
よび／または再生の所望の治療効果、ならびに障害もしくは損傷の最終的な処置
が達成されるまで、続き得る。

【００５１】 あるいは、ＩＧＦ−Ｉの治療有効用量の投与は、持続放出性デバイスまたは送
達システムを使用してその部位に直接的に達成され得る。このようなデバイスは
、当該分野で周知である（例えば、米国特許第５，２０６，０２３号を参照のこ
と）。例えば、持続放出性形態で治療有効用量のＩＧＦ−Ｉを含む生分解性マト
リックスが、疾患もしくは損傷関節内に移植され得る。このようなデバイスは、
疾患もしくは損傷関節部位のＩＧＦ−Ｉのレベルが治療有効レベルで維持される
ような、ＩＧＦ−Ｉの持続放出を可能にする。マトリックスが分解するにつれて
、治療有効レベルのＩＧＦ−Ｉが、罹患関節内の軟骨の維持および／または再生
を促進する。

【００５２】 本発明のこの実施態様において、ＩＧＦ−Ｉの投与の治療有効用量および頻度
に関して変化が受容可能であり得ることが、当業者に明らかであるべきであろう
。投与されたＩＧＦ−Ｉの量は投与の頻度と逆相関している。従って、単回投与
用量におけるＩＧＦ−Ｉの濃度における増加、またはＩＧＦ−Ｉの持続放出性形
態の場合の平均滞留時間における増加は、一般に、投与頻度の減少と連関される
。

【００５３】 本発明の実施において、ＩＧＦ−Ｉの治療有効用量およびその投与の頻度を決
定する際に、さらなる要因が考慮されるべきである。このような要因としては、
例えば、関節の大きさ、罹患した軟骨の表面面積、関節損傷もしくは変形性関節
症の重篤度、ならびに処置されるべき個体の年齢、身長、体重、健康および身体
状態が挙げられる。一般に、関節がより大きい場合または障害もしくは損傷がよ
り重篤な場合、より高い投薬量が好ましい。

【００５４】 いくらか微量な程度の実験が、最も有効な用量および用量投与頻度を決定する
ために必要とされ得る。このことは、本開示を知れば、当業者の能力の十分に範
囲内である。

【００５５】 従って、関節障害もしくは損傷の部位に存在するＩＧＦ−Ｉの量は、治療有効
用量のＩＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物の投与によって、治療有効レベルにまで操
作され得る。さらに、天然に生産されるＩＧＦ−Ｉのレベルを操作するための方
法もまた、本発明によって包含される。従って、天然に生産されるＩＧＦ−Ｉの
レベルは、遺伝子治療によって制御され得、それにより、疾患関節部位もしくは
損傷関節部位におけるＩＧＦ−Ｉの生産が、治療有効レベルに増強される。ある
いは、天然に生産されるＩＧＦ−Ｉの治療有効レベルは、ＩＧＦ−Ｉ結合タンパ
ク質へのＩＧＦ−Ｉ結合の破壊によって達成され得る。ＩＧＦ−Ｉ結合タンパク
質のＩＧＦ−Ｉへの結合は、遊離ＩＧＦ−Ｉの利用能を低下させ、それにより、
軟骨維持および再生におけるＩＧＦ−Ｉの正常な生理学的役割に影響する。

【００５６】 先天性または後天性の疾患の処置の手段としての遺伝子治療における関心は、
遺伝情報を転移させるための方法、より特定すると、ウイルス媒介遺伝子移入シ
ステムを用いてヒト遺伝子をコードするヌクレオチド配列を送達する方法の開発
に至った。このようなウイルス媒介遺伝子移入システムは、所望の遺伝情報（こ
の場合、ＩＧＦ−Ｉをコードするヌクレオチド配列）の選択された細胞もしくは
組織への送達、およびウイルスプロモーターの指示下での遺伝子のその後の発現
を可能にする。ウイルス媒介遺伝子移入システムは、当該分野で公知である。例
えば、米国特許第５，７０７，６１８号；第５，７１４，３５３号；および第５
，６７２，３４４号を参照のこと。このようにして、治療有効レベルへのＩＧＦ
−Ｉの量の増大は、ＩＧＦ−Ｉの生産を増大させることによりインビボで達成さ
れ得る。

【００５７】 任意の特定の投与手段（関節内注射、持続放出性デバイスもしくは送達システ
ムからのその部位での放出、および全身注射を含む）について、または天然に生
産されるＩＧＦ−Ｉのレベルを操作することを目標とした方法（例えば、遺伝子
治療およびＩＧＦ−Ｉ結合タンパク質へのＩＧＦ−Ｉ結合の破壊）について特定
のＩＧＦ−Ｉ用量の効力は、疾患もしくは損傷関節内での軟骨の維持および／ま
たは再生の所望のポジティブな効果、および最終的には関節軟骨障害もしくは外
傷関連損傷の処置を促進する能力に従って測定され得る。例えば、変形性関節症
のような疾患の処置についての特定の投薬量および投与スケジュールまたはレジ
メの効力は、いくつかの可変要因に基づいて測定され得る。これらの可変要因に
は、疾患関節内の疼痛および／または機能を改善する能力、疾患関節内の構造的
変敗を遅延させる能力、および／または疾患関節の外科的置換までの時間を遅延
させる能力が含まれるが、これらに限定されない。疼痛を改善するための効力は
、任意の確証された疼痛尺度（例えば、リカート尺度）を用いて測定され得、よ
り好ましくは、１０ｃｍ ＶＡＳ測定である。罹患関節における改善は、任意の
確証された膝もしくは股関節部変形性関節症機能測定を用いて測定され得、例え
ば、Ｌｅｑｕｅｓｎｅ膝および股関節部器具で、およびＷＯＭＡＣで得られたも
のである0。構造的改善は、関節隙狭小化（ＪＳＮ）（例えば、変形性関節症の 膝または股関節部のＪＳＮ）についてベースラインおよび最終のＸ線写真スコア
の比較を行って検査され得る。

【００５８】 本発明はまた、関節部位におけるプロテオグリカンレベルおよびコラーゲンレ
ベルをモニタリングするための方法を包含する。滑液のサンプルを被験体から、
好ましくは、１８ゲージまたは２１ゲージの針を用いて、採取する。サンプルの
別個のアリコートを遠心分離して、沈降ペレットを得、次いでこれを、さらなる
分析のためにパラフィン細胞塊として調製する。このような細胞塊を調製するた
めの方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｂｒａｔｔｈａｕｅｒ（１９９４
）Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４：８１−８７を参照のこと。１つの実施態
様では、ペレットは、ＬｅｕｎｇおよびＢｅｄａｒｄ（１９９３）Ｍｏｄ．Ｐａ
ｔｈｏｌ．６（５）：６３０−６３２に記載のように、ミニ細胞塊として調製さ
れる。次いで、細胞塊を切片化し、そして調製したスライドを、サフラニンＯで
染色してプロテオグリカンを可視化し、そして、プロテオグリカンを除去するた
めの、パパイン消化後にピクロシリアスレッド（Ｐｉｃｒｏｓｉｒｉｕｓ Ｒｅ
ｄ）で染色して、そしてコラーゲン骨組みをアンマスキングし、染色する。次い
で、スライドを評価し得、そして粒状細胞外マトリックスの、および同定されれ
ば軟骨断片のサフラニンＯ染色の程度について、およびパパイン消化後の細胞外
マトリックスのピクロシリアスレッド染色の程度についてスコア付けし得る。次
いで、染色の程度を、参照滑液サンプルから得られた同様に染色したスライドに
対して比較する。

【００５９】 この滑液組織学方法は、関節軟骨に対する薬物療法の効果をモニタリングする
ための手段、より特定すると、疾患もしくは損傷関節部位に対する薬物療法の効
果をモニタリングするための手段として有用である。本方法は、任意の関節部位
に投与される任意の薬物の治療をモニタリングするために使用され得ることが認
識される。従って、本発明の１つの実施態様では、この組織学方法は、本発明に
従って投与されるＩＧＦ−Ｉ療法の効果、すなわち、治療有効量のＩＧＦ−Ｉが
関節部位に投与される場合、その部位の軟骨に対してポジティブな効果を生じる
ことをモニタリングするために使用され得る。このように、開示された投与方法
に従ってＩＧＦ−Ｉを投与した後、滑液のサンプルが、処置した関節部位から採
取され得、そして本発明の滑液組織学方法を使用して、プロテオグリカンおよび
コラーゲン構造について分析され得る。

【００６０】 関節部位に対する薬物療法のさらなる効果は、滑液サンプルのさらなる分析か
ら決定され得る。このように、滑液サンプルの遠心分離したアリコートから得ら
れる上清が、ムチン凝塊試験を用いて粘度について分析され得る。滑液サンプル
の別のアリコートが、無染色標本技術を用いて結晶について、および染色標本技
術を用いて細胞評価および示差計数について分析され得る。このような細胞学技
術は、当該分野で周知である。従って、ＩＧＦ−Ｉ療法の場合、粘度、結晶、細
胞評価、および示差計数の値は、正常関節部位から採集された滑液と、本発明の
投与レジメに従って治療有効用量のＩＧＦ−Ｉの投与を受けた罹患関節部位から
採集された滑液との間で類似する。

【００６１】 以下の実験は、例示のためによってのみ提供され、限定のためにではない。

【００６２】 （実験） （実施例１：イヌ変形性関節症モデルにおけるＩＧＦ−Ｉの使用） イヌの研究を、イヌ変形性関節症（ＯＡ）モデルにおいて、組換えヒトインス
リン様増殖因子Ｉ（ｒｈＩＧＦ−Ｉ）およびｒｈＩＧＦ−Ｉの持続放出性処方物
（Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉという）の関節内投与の効力および安全性を評価するた
めに行った。

【００６３】 ５６匹のイヌに、右前十字靱帯の外科的離断を、ＰｏｎｄおよびＮｕｋｉの方
法（Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．３２（１９７３）：８８７〜８８８）によっ
て行った。そのような離断は、関節の不安定性を誘導し、ヒト変形性関節症で見
られる侵食と類似の関節軟骨における侵食の生成をもたらす。これらの動物を、
麻酔の導入前に、アトロピン（０．０２ｍｇ／ｋｇ、筋肉内（ＩＭ））およびア
セチルプロマジン（０．２ｍｇ／ｋｇ、ＩＭ）で準備投薬した。動物をメトヘキ
シタール（７〜１２ｍｇ／ｋｇ、静脈内（ＩＶ））で麻酔し、次に、挿管し、そ
して用量調節レスピレータを介して送達されるイソフルラン吸入剤麻酔を用いて
麻酔を維持した。ＥＴＣＯ₂を、個体の生理学的範囲に維持した。静脈内カテー テルを乳酸加リンガー液（１０ｍｇ／ｋｇ／時間）の投与のために、抹消血管中
に配置した。プロカイン／ベンザミン ペニシリンＧ（３００，０００ＩＵ／４
．５ｋｇ、ＩＭ）およびフルニキシン（ｆｌｕｎｉｘｉｎｅ）メグルミン（１ｍ
ｇ／ｋｇ、ＩＶ）を手術前に投与した。

【００６４】 これらの動物を、側横臥に配置し、そして無菌手術のために、調製して滅菌し
た布でおおった。眼軟膏剤を各眼に投与した。右後脚の毛を正中まで、腸骨稜に
対してちょうど頭側まで、全て刈った。この動物を、左側横臥に配置し、そして
右後脚を、ＩＶポールまでテープで巻き、無菌手術のための準備をさせた。手術
の領域を、ポビドンヨード洗浄液と７０％イソプロピルアルコールとの３回の交
互の洗浄を用いて清浄化し、最後のポビドンヨード洗浄液の適用を乾燥させた。
その脚を、無菌手術のために、滅菌した布でおおった。

【００６５】 関節を外側筋間中隔中の切開を介して曝露し、外側広筋の前方収縮および大腿
二頭筋の後方収縮によって大腿を曝露した。長指の起点の腱が大腿骨外側顆から
開始するので、長指の起点の腱を破壊しないように、注意した。外側膝状血管は
、この手順の間に、焼灼され得る。関節包を開き、膝蓋骨を内側に脱臼させ、そ
してその関節を十分に屈曲させた。外側半月および内側半月の内側上方靱帯を同
定するために、前十字靱帯（ＡＣＬ）の周囲の脂肪パッドおよび滑膜を除去し、
そして後の関節穿刺を容易にした。これらの靭帯を破壊しないように注意した。
次に、このＡＣＬを内側半月靭帯の下部から、脛骨プラトー（ｔｉｂｉａｌ ｐ
ｌａｔｅａｕ）に沿って切開し、次に外側半月靭帯から切開した。次にその起点
を、外側大腿顆の内側から切開した。創傷を層において閉鎖し、そして皮膚を吸
収性縫合材料を用いて、皮内パターンにおいて閉鎖した。次にこのイヌを挿管を
取り除き、そのＵＳＤＡ認可された飼育ユニットに戻し、そこで十分な標準研究
室固形飼料および水を提供された。イヌは、個別に、オリの中または簡易床ケー
ジ中のいずれかで飼育された。比較するつもりの群の中における飼育の型は、で
きる限り類似していた。群６〜８中の全てのイヌは、オリの中で飼育され（例外
として、１匹の群１の雌イヌ第１１０１番）、群１〜５の全てのイヌは、簡易床
ケース中で飼育された。大型犬に特に設計された簡易床ケージは、オリと等しい
平方フィート数を提供し、そしてケージおよびオリの中のイヌの移動性および活
動性は、類似しているようであった。ケージおよびオリは、一日中自由な活動を
許容するのに十分な大きさであった。

【００６６】 外科手術後、フルニキシンメグルミン（１ｍｇ／ｋｇ）を、皮下注射によって
、１日１回、３日間、術後の不快感を開放するために投与した。手術後の日に開
始し、少なくとも１日１回、イヌをオリまたはケージから出して、研究室内で運
動することを奨励した。

【００６７】 手術後約４週間、イヌを無作為に、１群あたり４匹の雄および３匹の雌の８つ
の群に割り当て、表１に示すように１３週間、ｒｈＩＧＦ−Ｉ、ｒｈＩＧＦ−Ｉ
プラシーボ、Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ、またはＤｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉプラシーボの
、毎週または２週間に１回の関節内投与を与えた。これらの実験に使用するため
のＩＧＦ−Ｉを、実質的に米国特許第５，３２４，６３９号、同第５，３２４，
６６０号、および同第５，６５０，４９６号ならびに国際公開ＷＯ９６／４０７
７６号に記載されるように酵母株Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓにおいて組換
え的に産生し、精製した。単離の後、ＩＧＦ−Ｉを以下のように、透析またはダ
イアフィルトレーションを用いて、アルギニンとともに処方した。

【００６８】 透析の間に、バルクのｒｈＩＧＦ−Ｉを、１，０００〜３，０００ダルトンの
分子量カットオフを有する透析チューブ中に配置し、５０ｍＭの濃度のアルギニ
ン、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および９０ｍＭの塩化ナトリウム（ｐＨ６
．０）を含有する処方緩衝液の２０倍容量の３回の交換に対して透析した。各２
０倍容量の交換は、３時間以上透析し、そして好ましくは、１２時間を超えて透
析した。透析は、４℃または室温において行った。

【００６９】 ダイアフィルトレーションの間に、バルクのＩＧＦ−Ｉを、１，０００〜３，
０００ダルトンの分子量カットオフを有する膜を使用して、アルギニンを含有す
る処方緩衝液の１０容量に対してダイアフィルトレートし、そして５０ｍＭの濃
度のアルギニン、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および９０ｍＭの塩化ナトリ
ウムを含有する処方緩衝液の２０倍容量の３回の交換に対してダイアフィルトレ
ートした。ダイアフィルトレーションは、４℃または室温において行った。

【００７０】 透析またはダイアフィルトレーションのいずれかによって得られる、生じる組
成物は、約１２ｍｇ／ｍｌの濃度のＩＧＦ−Ｉを含有した。

【００７１】 持続放出性処方物Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉを、同時係属出願である、発明の名称
「Ｈｉｇｈ ａｎｄ Ｌｏｗ Ｌｏａｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＧ
Ｆ−Ｉ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ」、米国特
許出願番号第０８／９２５５３１号、１９９７年９月８日出願（本明細書に参考
として援用される）に詳細に概要が述べられている方法に従って、作製した。

【００７２】

【表１】 第１７週において、これらのイヌを安楽死させた。関節を切開し、そして軟骨
、関節板、および滑膜の観察および組織学的研究によって、試験した。さらに、
関節軟骨および肋軟骨下骨のサンプルをさらなる研究のために取り出した。パラ
フィン切片標本を作製し、そしてＨ＆Ｅ、サフラニンＯおよびシリアスレッドを
用いて染色した。マンキンスコアは、伝統的なマンキン（Ｍａｎｋｉｎ）スコア
判定基準に基づき（スケジュールＩ）、そして軟骨についての骨増殖体の値を、
関節構造の破壊の指標としておき替える改変マンキンスコアを記録した。滑膜ス
コアもまた、スケジュールＩＩに従い記録した。これらのスコア付けスケジュー
ルの詳細についてＭａｎｋｉｎら（１９７１）Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｊｏｉｎｔ
Ｓｕｒｇｅｒｙ ５３Ａ：５２３〜５３７およびＧａｈｕｎｉａら（１９９５）
Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ ３：１６９〜１
８０を、参照のこと。

【００７３】 解剖学的特徴のスコア付けにおいて、このスコアは、この特徴が病巣的な存在
のみであったとしても、観察されたもっとも進行した解剖学的特徴に基づいた。
この方法論によって任意の偏りが導入された場合、それは、疾患の進行について
の増加したスコアについての偏りであり、そして治療的効力に対する偏りである
。

【００７４】 軟骨における変化を、体型測定を使用してさらに研究し、群６、７および８に
おける軟骨の構造的特徴および軟骨内の病変を評価した。軟骨のコラーゲン間質
を、パパイン消化の後、ピクロシリアスレッド（Ｐｉｃｒｏｓｉｒｉｕｓ Ｒｅ
ｄ）染色を使用して評価した。パパインの前処理は、プロテオグリカンの消失を
促進し、それによって、コラーゲン間質を、曝露する。

【００７５】 関節のコラーゲンを、表層、上部の軟骨膜層、深部の軟骨膜層、および基準点
に隣接する石灰化軟骨で、Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｐｒｉｔｚｋｅｒ博士によって考案
された半定量スケール（スケジュールＩＩＩ）を使用して、評価した。より高い
スコアは、コラーゲンについての増加した染色を反映する。このことは、減少し
たプロテオグリカン量または質および／あるいは新生物形成におけるコラーゲン
凝縮に向けたマトリクス変化の指標である。これらの特徴は、変形性関節症の変
化として認識される。

【００７６】 被験物質の安全性を、全動物について、身体的および眼の試験および臨床観察
を行うこと、血圧およびＥＧＧ読み取りを記録すること、体重および食餌消費を
測定すること、臨床病理学的（血液学、凝固、血清および尿化学、ならびに尿検
査）パラメーターをモニターすること、総合的な肉眼検死を行うこと、器官の重
量を測定すること、および総合的な組織病理学により、評価した。血中グルコー
スを、投薬前および後にモニターした。滑液分析（細胞計数、差示的、タンパク
質濃度）もまた、行った。

【００７７】 （スケジュールＩ） （変形性関節症：関節軟骨組織病理学的特徴のスコア付け方法） マンキンスコア Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ＋ＩＶ Ｉ．構造 正常（インタクトな表面） ０ 表面の不規則性 １ パンヌスおよび表面の不規則性 ２ 移行層までの裂溝 ３ 橈骨層までの裂溝／軟骨の変化した領域が 厚くなるか、または薄くなる ４ 石灰化層までの裂溝 ５ 完全な組織崩壊 ６ ＩＩ．細胞 正常（１／２細胞／裂孔） ０ 拡散／わずかな過剰細胞充実性 １ 過剰細胞充実性およびクローン生物形成の領域 ２ 低細胞充実性 ３ ＩＩＩ．サフラニンＯ染色 正常（不均一に染色されたマトリクス） ０ 特定の浅層のわずかな減少 １ 中央層までの中程度の減少の伸展 ２ 全体的な軟骨の厚さの重篤な減少 ３ 認められる染色なし ４ ＩＶ．基準点の完全性 インタクト／単一のインタクトな基準点 ０ 脈管による横断／基準点の再複製 １ ５未満の累積スコアは、正常の軟骨であると考えられる。 ５以上の累積スコアは、変形性関節症軟骨であると考えられる。

【００７８】 （スケジュールＩＩ） （変形性関節症：滑膜病理組織学反応） スコア 滑膜管壁 ０ 正常 １ 滑膜管壁細胞 １〜２ ２ 滑膜管壁細胞 ＞２ ３ 絨毛過形成 水腫 ０ なし １ 病巣 ２ 病巣、絨毛性および平坦な表面 ３ 汎発性 リンパ球 ０ 見出されず １ 散乱 ２ 凝集 ３ 小胞（Ｆｏｌｌｉｃｕｌｅｓ） 形質細胞 ０ 見出されず １ 散乱 ２ 凝集 ３ 小胞（Ｆｏｌｌｉｃｕｌｅｓ） ヘモジデリン ０ 不在 １ わずか ２ 中程度 ３ 大量 線維症 ０ なし １ 病巣、絨毛性 ２ 病巣、絨毛性および平坦な表面 ３ 汎発性。

【００７９】 （スケジュールＩＩＩ） （関節軟骨のコラーゲンの評価−スコア付け方法） Ｉ．構造的な「インタクトな軟骨」 Ｉ．１ 浅層 ０−正常 １−厚さのわずかな増加 ２−厚さの顕著な増加 Ｉ．２ 上層の軟骨膜コラーゲン ０−正常 １−わずかな増加 ２−顕著な増加 ３−軟骨膜コラーゲンの交会 Ｉ．３ 下層の軟骨膜コラーゲン ０−正常 １−わずかな増加 ２−顕著な増加 ３−軟骨膜コラーゲンの交会 Ｉ．４ 基準点に隣接するコラーゲン ０−正常 １−わずかな増加 ２−顕著な増加 ３−軟骨膜コラーゲンの交会 ＩＩ．変形性関節症病巣 ＩＩ．１ 変形性関節症の裂溝に隣接するコラーゲン（ＯＡ病巣のみ） ０−正常 １−わずかな増加 ２−顕著な増加 ３−軟骨膜コラーゲンの交会 ４−軟骨膜コラーゲンの交会および凝集。

【００８０】 （安全性の結果） 食餌消費、体重、身体試験知見、眼の試験の知見、心電図、間接血圧および心
拍数、または血液学、血清化学（血糖値を除く）、凝固プロフィール、尿検査、
尿化学、および滑液パラメーター値に対して、被験物質関連効果はなかった。有
害な被験物質関連の巨視的または微視的変化は存在しなかった。

【００８１】 毎週の５ｍｇのｒｈＩＧＦ−Ｉ、毎週の１０ｍｇのＤｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ、ま
たは２週間毎の２０ｍｇのＤｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉの関節内投与は、ほとんど毎週
の処置において、投薬３時間後の有意な低血糖値と関連した。この被験物質関連
低血糖症は、５（当初は１０）ｍｇのｒｈＩＧＦ−Ｉを受容したイヌにおいて最
も顕著（最も低い血糖値）であり、麻酔および嗜眠からの遅延した回復と関連し
た。低血糖値は、缶入りの食餌の給餌、および必要に応じて静脈内へのデキスト
ロース溶液の投与によって、管理された。

【００８２】 解剖での病理学的データに基づいて、関節内注入後の全身毒性についての観察
可能な効果レベルは、毎週の＞１０ｍｇ Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ、２週間毎の＞
２０ｍｇ Ｄｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ、および毎週の＞５ｍｇ ｒｈＩＧＦ−Ｉでは
測定されなかった。しかし、血糖値に基づいて、低血糖についての観察可能な効
果レベルは、毎週の＞１ｍｇのＤｅｐｏ ＩＧＦ−ＩおよびｒｈＩＧＦ−Ｉの両
方では測定されなかった。低血糖は、ｒｈＩＧＦ−Ｉ治療の予測された薬理学的
効果である。

【００８３】 （結果） この研究に使用した前十字靱帯離断モデルは、本研究の時間枠内において、動
物の変形性関節症を生じた。未処置コントロール群（群６）において、観察され
た病変は、脛骨プラトーにおいて、最も頻度が高く、そして最も重篤であり、よ
り少ない変化が、下大腿骨内側顆、大腿骨顆、および大腿滑車切痕領域において
見出された。

【００８４】 研究した４つの切片についての伝統的なマンキンスコアを、表２に示す。表３
は、軟骨および関節板の組織学的特徴を要約する。表４は、滑膜スコア判定基準
による滑膜の組織学的特徴を要約する。減少したマンキンスコアは、１．０およ
び５．０ｍｇのｒｈＩＧＦ−Ｉ（群７および８）を受容したイヌにおける脛骨プ
ラトーおよび下大腿骨内側顆部位において観察された。定量的および半定量的証
拠は、ＩＧＦ−Ｉが原則的にプロテオグリカンの豊富なマトリクスの割合を増加
するように作用することを示唆した。ＩＧＦ−Ｉ処置群において注目された他の
効果としては、軟骨の拡大および軟骨のグループ化の変化が挙げられる。これら
は、マトリクス同化を示唆する。

【００８５】

【表２】

【００８６】

【表３】

【００８７】

【表４】 予備的な軟骨構造形態計測は、軟骨の深さ（厚さ）を実証した：脛骨＞大腿顆
、大腿顆、下方、滑車切痕（表５〜８）。脛骨プラトー（ｔｉｂｉａｌ ｐｌａ
ｔｅａｕ）、大腿顆、および滑車切痕において、プロテオグリカン枯渇軟骨面積
のパーセントは、コントロールと比較して、処置した動物（群７および８）にお
いて顕著に減少した。このことはさらに、群６と比較して、群７および８におい
て観察された、表面からプロテオグリカンに富むマトリックスへの距離の減少に
反映される。変形性関節症の変化は、脛骨プラトーにおいて最も明らかであった
。これらの知見はさらに、変形性関節症病変内の変化の評価まで及び、ここで原
線維性または原線維性および侵食は存在しなかった。両方の場合において、群６
と比較して、群７および群８においてこれらの病変によって占められる表面およ
び面積の部分における減少が存在した。さらに、この病変内の表面からプロテオ
グリカンに富む領域までの距離もまた、群６と比較して、群７および８において
減少した。さらに、群６と比較して、群７および８における軟骨病変において軟
骨侵食はより少なかった。

【００８８】 測定されるほかのパラメーター（未石灰化軟骨面積および石灰化軟骨面積を含
む）は、３つの群で類似していたことに注目すべきである。さらに、関節プレー
トの破壊の指標、すなわち、石灰化軟骨貫入の長さの百分率は、３つの群全てに
おいて類似していた。この後者のデータは、助軟骨下プレートの骨吸収の活性化
における増加が実証され得なかったことを示す。

【００８９】 予備的なコラーゲンの評価（表９および１０）は、群６（コントロール）が、
群７または８よりも高いスコアを有することを実証した。サフラニンＯ評価およ
び軟骨形態形成評価と同様に、脛骨プラトーのコラーゲンは、下大腿骨内側顆＞
遠位大腿顆＞遠位滑車切痕よりも重度に影響を受けた。重要な観察は、群７およ
び８と比較して、群６の上層におけるより多い軟骨膜コラーゲンの暴露を含んで
いた。

【００９０】

【表５】

【００９１】

【表６】

【００９２】

【表７】

【００９３】

【表８】

【００９４】

【表９】 コラーゲン変化について、特定の変形性関節症病変を、全体として、軟骨から
別々に評価した。群６における変形性関節症は、群７または群８における病変に
おいて行われるよりも、さらに多いコラーゲン濃縮（およびおそらくコラーゲン
新生）を示した。さらに、このモデルの公知の特徴であるパンヌスの下に有る軟
骨において、コラーゲンの暴露は、群７および８におけるよりも群６におけるほ
うがより大きかった。

【００９５】 滑膜反応は、比較的穏やかであり、内側滑膜サンプルにおいてスコアが高い傾
向にある。非常に軽度の滑膜細胞過形成が存在した。リンパ球およびマクロファ
ージからなる炎症性細胞浸潤物を混合した（表１１および４）。

【００９６】

【表１０】

【００９７】

【表１１】 （考察） ＡＣＬＴモデルは、十分区別可能な変形性関節症病変を産生して、コントロー
ルと試験動物との間の治療効果の区別を可能にする。これらの効果は、脛骨プラ
トーにおいて最も容易に見られた。マンキンスコア付けによるサフラニンＯで染
色した半定性的評価ならびに軟骨構造形態形成は、コントロールである群６と比
較して、ｒｈＩＧＦ−Ｉで処置した群（群７および８）が、重篤度の低い病変お
よびプロテオグリカンのさらなる保持を実証したことを示した。プロテオグリカ
ンの保持は、インタクトな軟骨の面積および変形性関節症病変の面積（これらは
、原線維性および侵食を示した）の両方において明らかであった。

【００９８】 コラーゲン間質の評価に関して、さらなるコラーゲンは、処置した群（群７お
よび８）と比較して、コントロール群６において暴露された。コラーゲンはパパ
イン染色の作用によるプロテオグリカン枯渇によって露出されるので、コラーゲ
ンの露出の欠如は、プロテオグリカンの保持を反映する。プロテオグリカンの保
持は、軟骨内のプロテオグリカン組成の変更またはプロテオグリカン濃度の増加
のいずれかから生じ得る。

【００９９】 非常に興味深いのは、変形性関節症病変におけるコラーゲンの変化であった。
未処置のコントロール群６において、変形性関節症病変は、コラーゲン新生につ
いてのいくつかの証拠とともに、コラーゲンの濃縮を不変的に実証した。対照的
に、処置した動物（群７および８）は、より浅い病変、ならびにコラーゲンのさ
らに多くの可変性およびより少ない露出を有した。コラーゲン間質の暴露のこの
欠如および病変の程度の減少は、群６における軟骨マトリックスと比較して、軟
骨内のプロテオグリカンの保持および軟骨プロテオグリカンのパパインによる分
解に対する相対耐性に関連するようである。

【０１００】 ｒｈＩＧＦ−Ｉを用いる処置はまた、軟骨の細胞性に衝撃を与えた。これらの
効果は、病変内の軟骨細胞の相対保存（軟骨細胞密度の損失の減少）および病変
内の軟骨（ｃｈｏｎｄｒｏｎ）密度の相対保存（損失の減少）を含み、これらの
効果は、構造的変形性関節症病変の部位で最も明白に見られる。このことは、軟
骨保護効果（ｃｈｏｎｄｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ）（軟骨およ
び軟骨細胞のより少ない損失）として解釈され得る。試験動物におけるインタク
トな軟骨においてさえ、軟骨再生効果（ｃｈｏｎｄｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖ
ｅ ｅｆｆｅｃｔ）（増加した細胞密度、％クラスター化軟骨（ｃｌｕｓｔｅｒ
ｅｄ ｃｈｏｎｄｒｏｎ）についての示唆が存在する。

【０１０１】 滑膜反応は比較的軽度であり、そして反復された関節内注入と一致する。

【０１０２】 （結論） マンキンスケールを用いる変形性関節症の評価、サフラニンＯ染色を用いるプ
ロテオグリカン保持の評価、関節軟骨および変形性関節症病変の形態計測評価、
および変形性関節症におけるコラーゲン間質の半定性的スコア付けからの結果は
全て、変形性関節症病変が、コントロール（群６）と比較して、ｒｈＩＧＦ−Ｉ
処置群（群７および８）において減弱されることを実証する。この効果は、プロ
テオグリカンにおける増加または処置群におけるプロテオグリカン組成物におけ
る有益な変化、あるいはこれらの２つの要因の組み合わせのいずれかに関連する
ようである。さらに、ｒｈＩＧＦ−Ｉ処置は、変形性関節症病変におけるコラー
ゲン濃縮を遅延させるかまたは防ぐようである。少なくとも、これらの効果は軟
骨保護性である。さらに、これらの効果は、この薬剤からの軟骨生成の可能性を
強力に示唆する。

【０１０３】 軟骨の組織学的および組織形態計測的評価はまた、特定の変形性関節症病変に
よって影響されない軟骨領域において、軟骨は、コントロール動物と比較してイ
ンタクトなままであることを実証した。さらに、コントロールと比較して、処置
した動物における関節板において骨吸収の増加は存在しなかった。

【０１０４】 これらの研究は、ＩＧＦ−Ｉが同化因子として作用することによって、そして
おそらくプロテオグリカンのようなマトリックス成分についての抗代謝因子とし
て作用することによって、原則的に、変形性関節症における軟骨保護剤として作
用し得ることを示す。これらのデータはまた、ＩＧＦ−Ｉが軟骨再生剤として作
用し得ることを示唆する。重要なことには、ＩＧＦ−Ｉの有害な効果は、組織学
または組織形態学のいずれによっても実証されなかった。

【０１０５】 要約すると、本明細書中に開示されるデータは明らかに、ＩＧＦ−Ｉが変形性
関節症の重篤度を減少すること、および有意な程度であるが、以前に公知であっ
た用量より高い用量で、軟骨修復を刺激することにおいて効果的であり得ること
を実証する。上記に開示される方法におけるＩＧＦ−Ｉ処置は、群３（１０ｍｇ
／週のＤｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ）、群７（１ｍｇ／週のｒｈＩＧＦ−Ｉ）、および
群８（５ｍｇ／週のｒｈＩＧＦ−Ｉ）が、明確な正の治療効果を示したことを立
証した。さらに、群５（２０ｍｇ／１週間に２回のＤｅｐｏ ＩＧＦ−Ｉ）もま
た、この群における、より低いマンキンスコアを反映して、いくらかの正の治療
効果を示した。安全データ（肉眼および顕微鏡病理学を含む）は、イヌの研究に
おいて記載されるｒｈＩＧＦ−Ｉの用量が十分耐性であることを示した。低血糖
値（ｒｈＩＧＦ−Ｉの公知の薬理学的効果）は、観察される唯一の有害事象であ
り、そしてこの効果は、容易にモニターされそして管理され得る。

【０１０６】 （実施例２：細胞培養におけるプロテオグリカンのＩＧＦ−Ｉ刺激） 軟骨細胞を、変形性関節症を有するヒトから得た。懸濁物（アルギネートビー
ズ）中の細胞を、１００ｎｇ／ｍｌまたは１，０００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＧＦ−
Ｉに１０日間暴露させた。ＩＧＦ−Ｉ応答（プロテオグリカンへの³⁵Ｓの取り込
み）を、３日目、７日目、および１０日目に評価した。次いで、ｒｈＩＧＦ−Ｉ
を培地から取り出し、そしてＩＧＦ−Ｉ応答を、１４日目および２１日目に再度
評価した。プロテオグリカンを、培地、細胞ペレット、およびアルギネートにお
いて測定した。

【０１０７】 被験体の細胞は、コントロール細胞（これは、ｒｈＩＧＦ−Ｉに暴露されてい
ない）と比較して、最初の１０日間、プロテオグリカン合成のＩＧＦ−Ｉ刺激を
示した（図１）。さらに、軟骨細胞は、１０日目から、ＩＧＦ−Ｉの除去の４日
後である１４日目までプロテオグリカン合成の増強を実証するまで続けた。これ
らのデータは、変形性関節症の処置における断続的な投薬の利益についてのさら
なる証拠を提供する。

【０１０８】 前述の発明を、理解の明確さのために例示および実施例によっていくらか詳細
に記載してきたが、特定の変化物および改変物が添付の特許請求の範囲内で実施
され得ることは明らかである。

【０１０９】 本明細書中で言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する分野
の当業者のレベルの指標である。全ての刊行物および特許出願は、各個々の刊行
物または特許出願が具体的かつ個々に参考として援用されると示されたのと同じ
程度まで、本明細書中で参考として援用される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、変形性関節症を有するヒト患者から得られた軟骨細胞における、プロ
テオグリカン合成のＩＧＦ−Ｉ刺激の時間経過を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ウォルフガング， グルシェンカ エイ チ． アイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94622 −8097， エミリービル， ピー．オー． ボックス 8097， インテレクチュアル プロパティ − アール440 (72)発明者 チェン， シャロン エイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94622 −8097， エミリービル， ピー．オー． ボックス 8097， インテレクチュアル プロパティ − アール440 (72)発明者 オーウェン， ラルフ エム． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94622 −8097， エミリービル， ピー．オー． ボックス 8097， インテレクチュアル プロパティ − アール440 (72)発明者 シーリー， リン ビー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94622 −8097， エミリービル， ピー．オー． ボックス 8097， インテレクチュアル プロパティ − アール440 (72)発明者 グラー， ハンス−ピーター アメリカ合衆国 カリフォルニア 94622 −8097， エミリービル， ピー．オー． ボックス 8097， インテレクチュアル プロパティ − アール440 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 BA44 DB58 NA14 ZA961 ZB151

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 哺乳動物における関節部位の軟骨に対する所望の正の効果を
   促進するための方法であって、該関節部位でＩＧＦ−Ｉを、該所望の効果を促進
   し得る治療的に有効なレベルまで増加させる工程を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記方法が、前記関節部位に、少なくとも０．０１ｍｇのＩ
   ＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物の治療的に有効な量を直接投与する工程を包含する
   、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記投与する工程が関節内注射によってなされる、請求項２
   に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記哺乳動物がヒトである、請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記薬学的組成物が断続的に投与され、ここで該断続的投与
   が、該薬学的組成物の単回用量の短期間の投与に続いての中断期間および前記軟
   骨に対する前記正の効果を達成するに必要なだけの長さの、投与に続いての中断
   というパターンの反復、を包含し、ここで該中断期間が、該薬学的組成物の残留
   時間よりも長い、請求項２に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記薬学的組成物が、０．３ｍｇ、１．０ｍｇ、および３．
   ０ｍｇからなる群より選択される量のＩＧＦ−Ｉを含む、請求項５に記載の方法
   。
7. 【請求項７】 前記ＩＧＦ−Ｉが持続放出性ＩＧＦ−Ｉである、請求項５に
   記載の方法。
8. 【請求項８】 哺乳動物における関節部位での軟骨障害を処置するための方
   法であって、該関節部位でＩＧＦ−Ｉを、該関節部位の軟骨に対する所望の正の
   効果を促進し得る治療的に有効なレベルまで増加させる工程を包含する、方法。
9. 【請求項９】 前記方法が、前記関節部位に、少なくとも０．０１ｍｇのＩ
   ＧＦ−Ｉを含む薬学的組成物を直接投与する工程を包含する、請求項８に記載の
   方法。
10. 【請求項１０】 前記投与する工程が、関節内注射によってなされる、請求
    項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記関節軟骨障害が変形性関節症である、請求項１０に記
    載の方法。
12. 【請求項１２】 前記関節軟骨障害が、外傷関連損傷から生じる、請求項１
    ０に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記薬学的組成物が断続的に投与され、ここで該断続的投
    与が、該薬学的組成物の単回用量の短期間の投与に続いての中断期間および前記
    軟骨障害の前記処置を達成するための、投与に続いての中断というパターンの反
    復、を包含し、ここで該中断期間が、前記部位での該薬学的組成物の残留時間よ
    りも長い、請求項９に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記薬学的組成物が、０．３ｍｇ、１．０ｍｇ、および３
    ．０ｍｇからなる群より選択される量のＩＧＦ−Ｉを含む、請求項１３に記載の
    方法。
15. 【請求項１５】 前記ＩＧＦ−Ｉが持続放出性ＩＧＦ−Ｉである、請求項１
    ３に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記薬学的組成物が断続的に投与され、ここで該断続的投
    与が、該薬学的組成物の単回用量の短期間の投与に続いての中断期間および変形
    性関節症の前記処置を達成するに必要なだけの長さの、投与に続いての中断とい
    うパターンの反復、を包含し、ここで該中断期間が、該薬学的組成物の残留時間
    よりも長い、請求項１１に記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記薬学的組成物が、０．３ｍｇ、１．０ｍｇ、および３
    ．０ｍｇからなる群より選択される量のＩＧＦ−Ｉを含む、請求項１６に記載の
    方法。
18. 【請求項１８】 前記ＩＧＦ−Ｉが持続放出性ＩＧＦ−Ｉである、請求項１
    ６に記載の方法。
19. 【請求項１９】 前記薬学的組成物が断続的に投与され、ここで該断続的投
    与が、該薬学的組成物の単回用量の短期間の投与に続いての中断期間および前記
    外傷関連損傷の前記処置を達成するための、投与に続いての中断というパターン
    の反復、を包含し、ここで該中断期間が、前記部位での該薬学的組成物の残留時
    間よりも長い、請求項１２に記載の方法。
20. 【請求項２０】 前記薬学的組成物が、０．３ｍｇ、１．０ｍｇ、および３
    ．０ｍｇからなる群より選択される量のＩＧＦ−Ｉを含む、請求項１９に記載の
    方法。
21. 【請求項２１】 前記ＩＧＦ−Ｉが持続放出性ＩＧＦ−Ｉである、請求項１
    ９に記載の方法。