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JP2002508321A - 抗腫瘍薬としての使用のための多触媒性プロテアーゼ阻害剤 - Google Patents

抗腫瘍薬としての使用のための多触媒性プロテアーゼ阻害剤

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Publication number
JP2002508321A
JP2002508321A JP2000538690A JP2000538690A JP2002508321A JP 2002508321 A JP2002508321 A JP 2002508321A JP 2000538690 A JP2000538690 A JP 2000538690A JP 2000538690 A JP2000538690 A JP 2000538690A JP 2002508321 A JP2002508321 A JP 2002508321A
Authority
JP
Japan
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group
cancer cells
compound
cells
och
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2000538690A
Other languages
English (en)
Inventor
シマン，ロバート
ジヤニ，ジテシユ・ピー
ゴールドフアーブ，ロナルド・エイチ
ドウ，キング・ピング
Original Assignee
セフアロン・インコーポレーテツド
ユニバーシテイ・オブ・ピツツバーグ−オブ・ザ・コモンウエルス・システム・オブ・ハイアー・エデユケーシヨン
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by セフアロン・インコーポレーテツド, ユニバーシテイ・オブ・ピツツバーグ−オブ・ザ・コモンウエルス・システム・オブ・ハイアー・エデユケーシヨン filed Critical セフアロン・インコーポレーテツド
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、腫瘍細胞でのプログラムされた細胞死（すなわちアポトーシス）の誘発物質、そしてより具体的には抗腫瘍薬としての使用のための多触媒性プロテアーゼ（ＭＣＰ）の特定の阻害剤の使用方法に関する。本発明は、形質転換された細胞でのアポトーシスの誘発方法、形質転換された細胞の増殖の阻害方法、およびＭＣＰ阻害剤を使用する腫瘍の成長の阻害方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願との関係） 本出願は、１９９７年１２月１６日に出願された米国仮出願番号第６０／０６
９，８０４号、および１９９８年１２月１５日に出願された、「抗腫瘍薬として
の使用のための多触媒性プロテアーゼ阻害剤（Ｍｕｌｔｉｃａｔａｌｙｔｉｃ
Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｆｏｒ ｕｓｅ ａｓ Ａｎｔｉ−
ｔｕｍｏｒ Ａｇｅｎｔｓ）」と題された米国特許出願の優先権の利益を主張す
る。前述の特許出願のそれぞれの内容はそっくりそのまま引用により本明細書に
組み込まれる。
【０００２】 （発明の分野） 本発明は、腫瘍細胞におけるプログラムされた細胞死（すなわちアポトーシス
）の誘発物質、そしてより具体的には抗腫瘍薬としての使用のための米国特許第
５，６１４，６４９および５，５５０，２６２号に開示されるような多触媒性プ
ロテアーゼ（ＭＣＰ）の特定の阻害剤に関する。
【０００３】 （発明の背景） Ｉ．癌状態におけるアポトーシス アポトーシスは、例えば、蠕虫からヒトまでの進化を通じて保存されるプログ
ラムされた細胞死の能動的過程である（ジェイコブソン（Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｍ
．Ｊ．）ら Ｃｅｌｌ ８８、３４７−３５４、１９９７）。アポトーシスは、
２個の生理学的段階すなわち拘束(commitment)および遂行(execution)で起こる 。アポトーシスの遂行はカスパーゼファミリーの特定のプロテアーゼの活性化に
より開始され、これは異常な基質特異性、すなわちアスパラギン酸（「Ａｓｐ」
）残基の後での切断を表わす（マーチン（Ｍａｒｔｉｎ，Ｓ．Ｊ．）とグリーン
（Ｇｒｅｅｎ，Ｄ．Ｒ．）、Ｃｅｌｌ、８２：３４９−３５２、１９９５）。今
日まで、カスパーゼの少なくとも１０種の相同物が同定かつクローン化されてい
る（アルネムリ（Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｅ．Ｓ．）ら Ｃｅｌｌ ８７、１７１、１
９９６）。カスパーゼの活性化は、最もありそうには重要な細胞性タンパク質の
タンパク質分解性切断を介してアポトーシスにつながる。ポリ（ＡＤＰ）−リボ
ースポリメラーゼ（「ＰＡＲＰ」、ラゼブニク（Ｌａｚｅｂｎｉｋ，Ｙ．Ａ．）
ら Ｎａｔｕｒｅ、３７１：３４６−３４７、１９９４）、アクチン（カヤラー
（Ｋａｙａｌａｒ，Ｃ．）ら ＰＮＡＳ ＵＳＡ、９３：２２３４−２２３８、
１９９６）、ステロール調節結合タンパク質（ワン（Ｗａｎｇ，Ｘ．）ら ＥＭ
ＢＯ Ｊ．、１５：１０１２−１０２０、１９９６）およびＤＮＡ依存性タンパ
ク質キナーゼ（ソン（Ｓｏｎｇ，Ｑ．）ら ＥＭＢＯ Ｊ．、１５：３２３８−
３２４６、１９９６）を包含する多数のタンパク質がアポトーシスの間にＡｓｐ
残基の後で切断されることが報告され、カスパーゼが切断酵素であることを示す
。ＨＬ−６０もしくはＵ９３７細胞が抗癌剤で処理された場合に、重要な細胞周
期調節物質および腫瘍抑制剤、網膜芽腫（ＲＢ）タンパク質（ヴァインベルク（
Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｒ．Ａ．） Ｃｅｌｌ、８１：３２３−３３０、１９９５）
は、「ｐ６８」および「ｐ４８」と称される２種の主要なフラグメントにタンパ
ク質分解的に切断されることが報告された（アン（Ａｎ，Ｂ．）とドウ（Ｄｏｕ
，Ｑ．Ｐ．）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：４３８−４４２、１９９６）。Ｒ
Ｂの内部切断(interior cleavage)およびアポトーシスの双方が、ＹＶＡＤ−Ｃ ＭＫ（アン（Ａｎ，Ｂ．）とドウ（Ｄｏｕ，Ｑ．Ｐ．）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
．、上記）、Ｂｃｌ−２癌タンパク質もしくは牛痘ウイルスＣｒｍＡタンパク質
（ドウ（Ｄｏｕ，Ｑ．Ｐ．）ら Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６４：５８
６−５９４、１９９７）のような多様なカスパーゼ阻害剤により阻害可能である
ことが報告された。その後、他のグループが、アポトーシスの間に、ＲＢがカス
パーゼ３様プロテアーゼによりそのＣ末端からもまた切断されたことを報告した
（ヤニケ（Ｊａｎｉｃｋｅ，Ｒ．Ｕ．）ら ＥＭＢＯ Ｊ．１５、６９６９−６
９７８、１９９６；チェン（Ｃｈｅｎ，Ｗ．）ら Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４、１
２４３−１２４８、１９９７；タン（Ｔａｎ，Ｘ．）ら Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２７２、９６１３−９６１６、１９９７）。ＲＢがＤＮＡのエンドヌクレオ
ソームの断片化に先立ち脱ホスホリル化されたようになったこともまた報告され
た（ドウ（Ｄｏｕ，Ｑ．Ｐ．）ら ＰＮＡＳ ＵＳＡ、９２：９０１９−９０２
３、１９９５；ワン（Ｗａｎｇ，Ｈ．）ら Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１３：３７３−
３７９、１９９６；およびモラナ（Ｍｏｒａｎａ）ら Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２７１：１８２６３−１８２７１、１９９６）。
【０００４】 細胞のアポトーシスのプログラムの活性化はヒト癌の治療のための現在の一戦
略である。Ｘ照射および標準的化学療法剤がアポトーシスの誘発によりいくつか
の腫瘍細胞を殺すことが立証された（フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｄ．Ｅ．）
Ｃｅｌｌ ７８、５３９−５４２、１９９４）。不幸なことに、ヒト癌の大多
数は現在これらの療法に抵抗性である（ハリソン（Ｈａｒｒｉｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．
） Ｊ．Ｐａｔｈｏ．１７５、７−１２、１９９５）。ヒト癌でのこうした多剤
耐性の発生についての分子機構は不確かであるとは言え、Ｂｃｌ−２の過剰発現
（リード（Ｒｅｅｄ，Ｊ．Ｃ．） Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．１２４、１−６、１
９９４）、腫瘍抑制タンパク質「ｐ５３」の不活性化（ミルナー（Ｍｉｌｎｅｒ
，Ｊ．） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １、７８９−８８０、１９９５）
、もしくは転写調節物質ＮＦ−κＢによる生存プログラムの活性化（ベグ（Ｂｅ
ｇ，Ａ．Ａ．）とボルティモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｄ，）、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２７４：７８２−７８４、１９９６；ワン（Ｗａｎｇ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２７４：７８４−７８７、１９９６）がこの過程に関与することが示唆されてい
る。 ＩＩ．多触媒性プロテアーゼ（ＭＣＰ） 真核生物細胞は細胞性タンパク質を定常的に分解しそして置き換える。これは
、細胞が異常なコンホメーションを有するタンパク質およびペプチドを選択的に
かつ迅速に除去すること、調節ペプチドのレベルを調節することにより代謝経路
にわたる制御を発揮すること、そして飢餓におけるような必要な場合にアミノ酸
をエネルギーに提供することを可能にする（ゴールドベルグ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ
，Ａ．Ｌ．）とセントジョン（Ｓｔ．Ｊｏｈｎ，Ａ．Ｃ．） Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４５：７４７−８０３、１９７６）。哺乳動物の細胞の機構
はタンパク質分解のための複数の経路を見込む。これらの経路のいくつかはアデ
ノシン三リン酸（「ＡＴＰ」）の形態でのエネルギー入力を必要とするようであ
る（ゴールドベルグ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ．）とセントジョン（Ｓｔ．Ｊ
ｏｈｎ，Ａ．Ｃ．） 上記）。
【０００５】 多触媒性プロテアーゼ（ＭＣＰ、「多触媒性プロテイナーゼ」、「プロテアソ
ーム」、「多触媒性プロテイナーゼ複合体」、「多触媒性エンドペプチダーゼ複
合体」、「２０Ｓプロテアソーム」および「インゲンシン(ingensin)」ともまた
典型的に称される）は、ペプチドおよびアミノ酸へのタンパク質の分解のための
最低２種の細胞性経路においてある役割を演じる、大きな分子量（７００ｋＤ）
の真核生物の非リソソーム性のプロテイナーゼ複合体である（オルロウスキ（Ｏ
ｒｌｏｗｓｋｉ，Ｍ．） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９（４５） １０２８
９−１０２９７、１９９０）。この複合体は、少なくとも５種の異なる型の加水
分解活性、すなわち（１）ペプチド結合が塩基性アミノ酸のカルボキシル側で切
断されるトリプシン様活性；（２）ペプチド結合が疎水性アミノ酸のカルボキシ
ル側で切断されるキモトリプシン様活性；（３）ぺプチド結合がグルタミン酸の
カルボキシル側で切断される活性；（４）分枝状鎖のアミノ酸を好む活性；およ
び（５）小さな中性アミノ酸を好む活性を有する（リヴェ（Ｒｉｖｅｔｔ，Ａ．
Ｊ．） Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２１ １２２１５−１２２１９、１
９８９；およびオルロウスキ（Ｏｒｌｏｗｓｋｉ）、上記）。
【０００６】 ＭＣＰを必要とするタンパク質加水分解の一経路はポリペプチド「ユビキチン
」もまた必要とする（ヘルシュコ（Ｈｅｒｓｈｋｏ，Ａ．）とシエカノヴァー（
Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．） Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５１：
３３５−３６４、１９８２）。ＭＣＰ、ＡＴＰおよびユビキチンを必要とするこ
の経路は、高度に異常なタンパク質、ある短命の正常タンパク質、ならびに線維
芽細胞の成長および網状赤血球の成熟におけるタンパク質の大部分の分解の原因
であるようである（ドリスコル（Ｄｒｉｓｃｏｌｌ，Ｊ．）とゴールドベルグ（
Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ．） ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８６：７８７−７９１、１
９８９）。この経路により分解されるはずであるタンパク質は、ＡＴＰ依存性の
様式でそれらのリシンのアミノ基を介してユビキチンに共有結合される。ユビキ
チンに結合されたタンパク質がその後、そのタンパク質分解性のコア(core)とし
てＭＣＰを含有するＡＴＰ依存性のプロテアーゼ複合体２６Ｓプロテアソームに
より小さなペプチドに分解される（ゴールドベルグ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ
．）とロック（Ｒｏｃｋ，Ｋ．Ｌ．） Ｎａｔｕｒｅ ３５７：３７５−３７９
、１９９２）。
【０００７】 ＭＣＰおよびＡＴＰを必要とするがしかしユビキチンを必要としないタンパク
質分解の第二の経路もまた記述された（ドリスコル（Ｄｒｉｓｃｏｌｌ，Ｊ．）
とゴールドベルグ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ．）、上記）。この過程ではＭＣ
ＰがＡＴＰ依存性の様式でタンパク質を加水分解する（ゴールドベルグ（Ｇｏｌ
ｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ．）とロック（Ｒｏｃｋ，Ｋ．Ｌ．）、上記）。この過程は
骨格筋で観察された（ドリスコル（Ｄｒｉｓｃｏｌｌ）とゴールドベルグ（Ｇｏ
ｌｄｂｅｒｇ）、上記）。しかしながら、筋においては、ＭＣＰは別のプロテア
ーゼ、マルチパインと相乗的に機能して従って筋タンパク質の加速された分解を
もたらすことが示唆されている（ゴールドベルグ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ）とロック
（Ｒｏｃｋ）、上記）。
【０００８】 ＭＣＰが、活性部位の求核体がＮ末端のトレオニン残基のヒドロキシル基であ
るタンパク質分解性の機構により機能することが報告されている。従って、ＭＣ
Ｐはトレオニンプロテアーゼの最初の既知の例である（ゼームラー（Ｓｅｅｍｕ
ｌｌｅｒ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８ ５７９−５８２、１９９５；ゴールド
ベルグ（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ａ．Ｌ．）、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８ ５２２−５
２３、１９９５）。
【０００９】 最近の研究は、ＭＣＰ系がアポトーシスの調節に関与することを示唆している
が、とは言えこの仮定された役割は論争上のままである。トリペプチドアルデヒ
ド（例えばＬＬｎＬもしくはＬＬｎＶ）またはラクタシスチン（微生物の代謝物
）のようないくつかのＭＣＰ阻害剤が、胸腺細胞（グリム（Ｇｒｉｍｍ，Ｌ．Ｍ
．）ら ＥＭＢＯ Ｊ．１５、３８３５−３８４４、１９９６）およびニューロ
ン（サドウル（Ｓａｄｏｕｌ，Ｒ．）ら ＥＭＢＯ Ｊ．１５，３８４５−３８
５２、１９９６）におけるプログラムされた細胞死の過程を封鎖することが見出
された。対照的に、同一のもしくは類似のＭＣＰ阻害剤は、ヒト白血病（イマジ
ョー・オーミ（Ｉｍａｊｏｈ−Ｏｈｍｉ）ら Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ．２１７、１０７０−１０７７、１９９５；シノハラ（Ｓｈ
ｉｎｏｈａｒａ，Ｋ．）ら Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１７、３８５−３８８、１
９９６；およびドレクスラー（Ｄｒｅｘｌｅｒ，Ｈ．Ｃ．Ａ．） ＰＮＡＳ Ｕ
ＳＡ ９４、８５５−８６０、１９９７）ならびに他の増殖する細胞系（ロープ
ス（Ｌｏｐｅｓ，Ｕ．Ｇ．）ら Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２、１２８９３
−１８９６、１９９７）でアポトーシスを誘発することが見出された。 ＩＩＩ．ＭＣＰ阻害剤 本発明の主題であるＭＣＰの特定の阻害剤は米国特許第５，６１４，６４９お
よび５，５５０，２６２号に開示され、その双方はセファロン インク（Ｃｅｐ
ｈａｌｏｎ，Ｉｎｃ．）に譲渡される。これらの特許明細書はそっくりそのまま
引用により本明細書に組み込まれる。
【００１０】 （発明の要約） 本発明は、プログラムされた細胞死（すなわちアポトーシス）の誘発物質およ
び抗腫瘍薬としてのＭＣＰ阻害剤の使用に向けられる。
【００１１】 いくつかの好ましい態様において、本発明は、形質転換された細胞を本発明の
化合物と接触させることを含んで成る、前記細胞の死を引き起こす方法を提供す
る。
【００１２】 さらなる好ましい態様において、本発明は、形質転換された細胞を本発明の化
合物と接触させることを含んで成る、ある疾患を有する患者の治療方法を提供し
、前記疾患は前記細胞の存在を特徴とする。
【００１３】 なおさらなる好ましい態様において、細胞を本発明の化合物と接触させること
を含んで成る、前記細胞におけるアポトーシスの誘発方法が提供される。
【００１４】 形質転換された細胞を本発明の化合物と接触させることを含んで成る前記細胞
の増殖の阻害方法、およびある腫瘍を本発明の化合物と接触させることを含んで
成る前記腫瘍の成長の阻害方法もまた本発明に従って提供される。いくつかの好
ましい態様において、腫瘍は充実性腫瘍である。
【００１５】 本発明の方法のいくつかの好ましい態様において、化合物は哺乳動物、好まし
くはヒトに投与される。
【００１６】 本発明の方法のいくつかの好ましい態様において、形質転換された細胞は、乳
癌細胞、前立腺癌細胞、舌癌細胞、脳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細
胞もしくは皮膚癌細胞である。
【００１７】 いくつかのさらに好ましい態様において、形質転換された細胞はＢｃｌ２タン
パク質を過剰産生し、そして／もしくはｐ５３タンパク質を欠く。
【００１８】 本発明のＭＣＰ阻害剤は米国特許第５，５５０，２６２および５，６１４，６
４９号に開示され、そのそれぞれの開示はそっくりそのまま引用により本明細書
に組み込まれる。これらの化合物は、式：
【００１９】
【化１６】
【００２０】 により表わされる。
【００２１】 構成メンバー、ならびに好ましい抗腫瘍薬についての好ましい構成メンバーが
下に定義される。これらの化合物は、多様な腫瘍細胞型、およびとりわけ現在承
認されている化学療法剤での治療に対し抵抗性の充実性腫瘍で応用できるアポト
ーシスの有用な誘発物質である。
【００２２】 本発明のこれらおよび他の特徴は開示が続く際に拡大された形態で示されるで
あろう。
【００２３】 （詳細な記述） 本発明に従った抗腫瘍薬としての使用のためのアポトーシスの誘発において有
用なＭＣＰ阻害剤は、式：
【００２４】
【化１７】
【００２５】 により表わされ、 上式中： Ｒ1は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、フタルイミド、−ＮＨ−ＳＯ2Ｒ9および
−ＮＨ−Ｊより成る群から選択され； Ｒ2は、Ｈ、ヒドロキシル、１から１０個までの炭素を有するアルキル、および ３から７個までの炭素を有するシクロアルキルより成る群から選択され； Ｒ3は、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−
Ｊおよび−Ｒ6−Ｃ≡Ｎより成る群から選択され； Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2−Ｒ7）−Ｑであり； Ｑは、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｃｌ、−Ｃ（＝Ｏ ）ＣＨ2Ｂｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＦ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ3 、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ
）ＣＯ2−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＯ2Ｈ、−Ｂ（ＯＨ）2、
【００２６】
【化１８】
【００２７】 （ここで、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり； Ｗはシクロアルキルである） より成る群から選択され； Ｒ5は、−ＮＯ2、−Ｃ＝Ｎおよび−Ｊより成る群から選択され； Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり； Ｒ7は、フェニル、および１から８個までの炭素を有するアルキルより成る群か ら選択され、前記アルキル基は１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
もしくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｒ8は、＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣＨ3、＝ Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2および＝Ｎ−ＮＨ−Ｊよ
り成る群から選択され； Ｒ9は、水素、および１から６個までの炭素を有するアルキルより成る群から選 択され、前記アルキル基は、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリールも
しくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｊは保護基であり； ｎは３から１０までの整数であり；そして ｍは２から５までの整数である。
【００２８】 いくつかの好ましい態様においては、Ｒ1が、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3 、フタルイミドもしくは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3であり、そして他の好ましい態様に
おいては、Ｒ2がＨもしくはシクロペンチルである。
【００２９】 Ｒ3は、好ましくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2である。
【００３０】 Ｑは、好ましくは−ＣＨ−Ｒ8、−Ｂ（ＯＨ）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ
−Ｒ7であるか、または構造：
【００３１】
【化１９】
【００３２】 ここで、Ｗはピナンである、 を有する。
【００３３】 Ｒ5は、好ましくは−ＮＯ2、−Ｃ≡Ｎ、−ＰＭＣ、−ＭＴＲ、−ＭＴＳもしく
はＴｏｓである。
【００３４】 Ｒ7は、好ましくは−ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ3 もしくは−Ｃ6Ｈ5である。
【００３５】 Ｒ8は、好ましくは＝Ｏ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−
Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2もしくは＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2である。
【００３６】 いくつかの好ましい態様において、Ｒ1は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミド
もしくは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3であり；Ｒ2はシクロペンチルであり；Ｒ3は−（Ｃ
Ｈ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2であり；Ｒ7は−ＣＨ（ＣＨ3）2であ り；そしてＲ8は＝Ｏである。
【００３７】 他の好ましい態様においては、Ｒ1は−Ｃ≡Ｎであり；Ｒ2はシクロペンチルで
あり；Ｒ3は−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2 ）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7は−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そ してＲ8は＝Ｏである。
【００３８】 さらなる好ましい態様においては、Ｒ1はＣ≡Ｎであり；Ｒ2はシクロペンチル
であり；Ｒ3は−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（Ｃ Ｈ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7は−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；
Ｑは−ＣＨ−Ｒ8であり；そしてＲ8は＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−Ｏ Ｈ、＝Ｎ−ＯＣＨ3もしくは＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5である。
【００３９】 いくつかのとりわけ好ましい態様において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は表１中
の化合物について示される置換基の群から選択される。いくつかのとりわけ好ま
しい態様において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は下の表１に示される化合物Ａ−Ｊ
を形成するように選択される。
【００４０】 本明細書で使用されるところの「アルキル」という用語は、エチル、イソプロ
ピルおよびシクロペンチル基のような直鎖、分枝状および環状の炭化水素を包含
することを意味される。置換アルキル基は、それについて１個もしくはそれ以上
の水素原子が、ハロゲン、他の炭化水素基（例えばフェニル基）、ヘテロアリー
ル基、またはその中で１個もしくはそれ以上の炭素原子が酸素原子により中断さ
れる基により置換されているアルキル基である。好ましいアルキル基は１ないし
約８個の炭素原子を有する。本明細書で使用されるところの「ハロゲン」という
用語はその通常の意味を有し、そしてフッ素、塩素、臭素およびヨウ素を包含し
、フッ素が好ましいハロゲンである。本発明で使用されるところの「Ａｒｇ」と
いう用語はアミノ酸「アルギニン」についての略語としてのその通常の意味を有
する。
【００４１】 本明細書に記述される構造式のそれぞれが、下に示されるようなそれらの対応
する互変異性体を包含することを意図されることが真価を認められるであろう：
【００４２】
【化２０】
【００４３】 ＭＣＰ阻害剤の態様は保護基を含有しうる。本明細書で使用されるところの「
保護基」という句は幅広い解釈を認容されるべきである。保護基は、ヒドロキシ
ル基、アミノ基およびカルボキシル基のような官能性に選択的に付属かつそれら
から除去され得る化学官能基としてそれ自体既知である。これらの基は、こうし
た官能性を、その化合物が曝露される化学反応条件に対し不活性にするために化
合物中に存在する。多様な保護基のいずれかが本発明とともに使用されうる。１
個のこうした保護基はフタルイミド基である。本発明の他の好ましい保護基は以
下の式、すなわち
【００４４】
【化２１】
【００４５】 を有する。本発明での実務に適するさらなる代表的な保護基は、グリーン（Ｇｒ
ｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．）とヴッツ（Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．）、“Ｐｒｏｔｅｃｔ
ｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”第２版、
ワイリー アンド サンズ（Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）、１９９１に見出され
うる。
【００４６】 既に示されたとおり、ＭＣＰ阻害剤は細胞型に依存してアポトーシスを誘発す
るかもしくは封鎖するかのいずれかでありうる。本明細書に開示されるＭＣＰ阻
害剤は、化学療法剤に抵抗性の腫瘍系についてさえアポトーシスにより腫瘍細胞
を殺す。こうした化合物の有用性は研究および治療の双方の設定に適用され得る
。ＭＣＰを本発明の化合物と接触させることによるＭＣＰの活性を阻害するため
の方法論は、当該化合物を医薬もしくは製薬学的作用物質としてヒトを包含する
哺乳動物に提供することを包含する。
【００４７】 本明細書で使用されるところの「接触すること」という用語は、その部分が相
互と物理的接触に至るように接触されるべき部分の一緒の配置を直接もしくは間
接的に引き起こすことを意味する。従って、接触することは、部分を一緒に一容
器中に置くこと、もしくは部分を患者に投与することのような物理的動作を包含
する。従って、例えば、異常な細胞増殖を伴うかもしくは形質転換された細胞の
存在を伴う疾患もしくは障害を明示するヒト患者に本発明の化合物を投与するこ
とは「接触すること」という用語の定義の範囲内にある。
【００４８】 好ましい態様において、本発明の製薬学的組成物は、障害、すなわちＭＣＰの
正常な、異常な(abnormal)および／もしくは異常な(aberrant)活性、例えばアポ
トーシスの調節の妨害を伴う異常な肉体的状態、疾患もしくは病理生理学的状態
に苦しむ患者に投与される。それに対して本発明の組成物が投与される障害は、
好ましくは、アポトーシスを直接もしくは間接的に阻害するもしくは異常に妨害
するもの、そしてとりわけこうした阻害もしくは異常な妨害が癌状態につながる
もしくはそれをもたらす状況である。
【００４９】 アポトーシスの誘発による細胞の分離が望ましいいくつかの疾患は、例えば黒
色腫、前立腺、膵、卵巣、乳房、舌および肺の癌を包含する多様な癌を包含する
。本発明の方法で治療可能な腫瘍は、黒色腫、前立腺、膵、卵巣、乳房、舌、肺
および平滑筋の腫瘍；ならびに、膠芽腫、骨髄幹細胞、造血幹細胞、骨芽細胞、
上皮細胞および線維芽細胞からの細胞を包含しそしてこれらに制限されない。当
業者は、標準的診断技術を使用して、こうした疾患、状態および障害に苦しむと
疑われる個体を容易に同定し得る。
【００５０】 細胞は、本発明の方法に従ってインビボもしくはエクスビボで治療され得る。
インビボ治療のためには、動物、好ましくは哺乳動物そして最も好ましくはヒト
の細胞が、当該技術分野で既知であるような多様な投与様式のいずれかにより本
発明の化合物と接触される。従って、本発明の方法に従い、本発明の化合物が、
有効成分が哺乳動物の身体中のその成分の作用部位に達することを可能にするい
ずれかの手段により投与されうる。
【００５１】 本発明の情況において、「投与すること」は、患者への当該製薬学的組成物の 導入を意味する。好ましい投与方法は、静脈内、皮下および筋肉内投与を包含す
る。好ましくは、ＭＣＰ阻害剤は、生理学的生理的食塩水のような製薬学的に許
容できる担体とともにＭＣＰ阻害剤を含んで成る製薬学的組成物として投与され
ることができる。他の適する担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（マック パブリッシング カンパニー（Ｍ
ａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．）、フィラデルフィア州イーストン、１９８０）に見出
され得る。
【００５２】 製薬学的組成物中の本明細書に記述される化合物の濃度は、投与されるべき薬
物の投薬量、使用される化合物の化学的特徴（例えば疎水性）および投与経路を
包含する多数の要因に依存して変動することができる。一般的用語において、本
発明の化合物は、非経口投与のために約０．１ないし１０ｗ／ｖ％のＭＣＰ阻害
剤を含有する水性の生理学的緩衝溶液中で提供されうる。典型的な用量範囲は１
日あたり約１μｇ／ｋｇから約１ｇ／ｋｇ体重までであり；好ましい用量範囲は
１日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ体重までである。投与さ
れるべき薬物の好ましい投薬量は、疾患もしくは障害の進行の型および程度、特
定の患者の全体的な健康状態、選択された化合物の相対的生物学的有効性、なら
びにＭＣＰ阻害剤の賦形剤の処方、ならびにその投与経路のような変数に依存す
るようである。本明細書で使用されるところの「患者」という用語はいずれかの
型の脊椎動物を示す。好ましくは、患者はヒトである。
【００５３】 以下の実施例により立証されるとおり、本明細書に開示されるようなＭＣＰ阻
害剤は多様な腫瘍細胞におけるアポトーシスの強力な誘発物質であり、従って抗
腫瘍薬のような化合物に有用性を提供する。重要には、本明細書に開示されるデ
ータは、好ましい化合物Ａが、２種の現在承認されている化学療法剤、エトポシ
ド（ＶＰ−１６）もしくはシスプラチンのいずれかより優れたアポトーシス誘発
能力を有するという結論を支持する。
【００５４】 本発明は以下の実施例によってさらに具体的に説明される。これらの実施例は
本発明を解明することを意図される。当該実施例はそれに付属として付けられる
いずれかの請求の範囲の範囲を制限することを意図されない。本明細書に例示さ
れる特定の化合物の構造が下の表１に示される。
【００５５】
【表１】
【００５６】
【表２】
【００５７】
【表３】
【００５８】
【表４】
【００５９】 実施例 １．インビトロの材料および方法 ａ．材料。ＭＣＰ阻害剤はセファロン インク（Ｃｅｐｈａｌｏｎ，Ｉｎｃ．）
（米国フィラデルフィア州ウェストチェスター）により生成された。これらの化
合物は米国特許第５，６１４，６４９および５，５５０，２６２号に示される手
順に従って合成した。
【００６０】 （１）ヒトＲＢ（Ｇ３−２４５）およびｐ２１に対する精製されたマウスモノ
クローナル抗体はファーミンゲン（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）（カリフォルニア州
サンディエゴ）から；（２）ＣＰＰ３２に対する精製されたマウスモノクローナ
ル抗体はトランスダクション ラボラトリーズ（Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（ケンタッキー州レキシントン）から、そして（３）
ヒトＰＡＲＰ（Ｃ−２−１０）に対する精製されたマウスモノクローナル抗体は
ユニテ ド サンテ アタヴィロンマ（Ｕｎｉｔe ｄｅ Ｓａｎｔe ａｔ Ｅ
ｎｖｉｒｏｎｎｍｅｎｔ）（カナダケベック州）から購入した。ｐ２７に対する
精製されたウサギポリクローナル抗体はアップステート バイオテクノロジー
インク（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．）（ニューヨ
ーク州レイクプラシッド）から購入した。ヒトＲＢ（ＸＺ５５）に対するマウス
モノクローナル培養上清はダイソン（Ｎ．Ｄｙｓｏｎ）およびハーロウ（Ｅ．Ｈ
ａｒｌｏｗ）両博士（マサチューセッツ総合病院癌センター（Ｍａｓｓａｃｈｕ
ｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ
）、マサチューセッツ州チャールズタウン）により提供された。エトポシド、シ
スプラチン、ヨウ化プロピジウム、ヘキスト（Ｈｏｅｃｈｓｔ）３３２５８およ
び他の化学物質はシグマ（Ｓｉｇｍａ）（ミズーリ州セントルイス）から得た。
アセチル−ＹＶＡＤ−クロロメチルケトン（ＹＶＡＤ−ＣＭＫ）はベイケム バ
イオサイエンス インク（Ｂａｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．）（
フィラデルフィア州キングオブプルシャ）から得た。 ｂ．細胞培養物。ヒトＪｕｒｋａｔ ＴおよびＨＬ−６０細胞は、１０％ウシ胎
児血清（シグマ（Ｓｉｇｍａ））、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ
／ｍｌのストレプトマイシンおよび２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＲＰＭ
Ｉ １６４０（ライフ テクノロジーズ インク（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中で成長させた（成長培地）。Ｂｃｌ−２癌タンパク質も
しくはベクター単独を過剰発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（フィラデルフィア州
ピッツバーグ大学ジョンソン（Ｄ．Ｊｏｈｎｓｏｎ）博士より提供された）を０
．４μｇ／ｍｌのＧ４１８を含む同一の成長培地中で成長させた。アメリカン
タイプ カルチャー コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕ
ｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ．メリーランド州ロックビル）から得
られた乳房（ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）、前立腺（ＤＵ１４５、ＰＣ
３）および骨肉腫（Ｕ２−ＯＳ）のヒト癌細胞系もまたＲＰＭＩ成長培地中で成
長させた。ヒト口腔（ＳＣＣ−２５；ＡＴＣＣから）および脳（ＳＮＢ−１９；
ウェルチ（Ｗｅｌｃｈ，Ｗ．Ｃ．）ら Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．
Ｂｉｏｌ．、３１：６１０−６１６、１９９５）癌細胞系、ならびに正常（ＷＩ
−３８）、およびＳＶ−４０で形質転換されたヒト線維芽細胞（ＷＩ−３８ Ｖ
Ａ−１３；ＡＴＣＣから）は、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマ
イシンおよびＬ−グルタミンを含有するＤＭＥＭ培地中で成長させた。 ｃ．ＭＣＰ阻害剤での細胞の処理。細胞を、特定のＭＣＰ阻害剤、標準的抗癌剤
（エトポシドもしくはシスプラチン）またはＤＭＳＯ（ベヒクル）で処理した。
この過程の間、形態学的変化および細胞の分離（付着細胞系について）をモニタ
ーした。各時間点で細胞を収穫し、そしてアポトーシスおよび他の生化学的事象
の測定に使用した。ＹＶＡＤ−ＣＭＫを必要とする下の実施例１においては、化
合物Ａを最初にＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞に添加した。これは、細胞を複数の組織培
養フラスコに分割することにより直ちに後に続かれた。ＹＶＡＤ−ＣＭＫをその
後示された濃度まで添加した。 ｄ．フローサイトメトリー、核染色およびＤＮＡ断片化アッセイ。フローサイト
メトリーを使用するＤＮＡ含量分析は既に記述されたとおり（ニコレッティ（Ｎ
ｉｃｏｌｅｔｔｉ，Ｉ．）ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １３９：
２７１−２７９、１９９２）実施した。核の形態をアッセイするため、細胞をＰ
ＢＳで洗浄し、７０％エタノールで１時間固定し、そしてヘキスト（Ｈｏｅｃｈ
ｓｔ）３３２５８（１ｍＭ）で３０分間染色した。細胞の核の形態を蛍光顕微鏡
（オリンパス（ＯＬＹＭＰＵＳ）ＢＨ２）により可視化した。ＤＮＡ断片化は既
に記述されたとおり（グラント（Ｇｒａｎｔ，Ｓ．）ら Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
．５２：６２７０−６２７８、１９９２）にアッセイした。 ｅ．全細胞抽出物およびウェスタンブロットアッセイ。全細胞抽出物を調製する
ために、細胞をＰＢＳで洗浄し、そして溶解緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ８．
０、５ｍＭＥＤＴＡ、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．５％ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅ
ｔ）Ｐ−４０、０．５ｍＭＰＭＳＦおよび０．５ｍＭジチオスレイトール）中で
ホモジェナイズした。４℃で３０分の動揺(rocking)の後、ライセートを遠心分 離し、そして上清を全細胞抽出物として収集した。タンパク質サンプルをその後
、ドデシル硫酸ナトリウム−６％ポリアクリルアミドゲル電気泳動（レーンあた
り２０〜６０μｇのタンパク質）により分析し、ＣＰＰ３２、ＰＡＲＰ、ｐ２１
、ｐ２７もしくはＲＢに対する特異的抗体を使用する強化化学発光ウェスタンブ
ロットアッセイにより後に続かれた。 ｆ．細胞生存率アッセイ。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＭＣＰ阻害剤もしくはベヒクル
で３７℃で３０分間処理した。次に、イオノマイシン（１μＭ）およびホルボー
ルエステルＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を０．２％エタノールと一緒に添加した。
２４時間後、細胞生存率をＸＴＴ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、Ｘ４２５１）の還元
により評価した。各ウェルに、５０μｌのＸＴＴ（１ｍｇ／ｍｌ）および２５μ
ｌのＰＭＳ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）９６２５、５ｍＭ）を添加した。３７℃で３
時間後、各ウェルのＯＤをプレート読取り器により４５０ｎｍ／６９０ｎｍで読
み取った。
【００６１】 ２．実施例１：ヒト白血病細胞における開示されるＭＣＰ阻害剤によるアポト
ーシスの誘発およびカスパーゼの活性化 実施例１は、ＭＣＰが生存シグナル伝達経路（１個もしくは複数）に関与する
かどうか、および、ＭＣＰ活性の阻害がアポトーシスを誘発するかどうかを決定
するよう設計した。ヒトＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を３０μＭの化合物Ａで４時間処
理した。こうした条件下で、（ａ）サブＧ1のＤＮＡの含有を伴うアポトーシス 集団の出現（図１、パネルｂ対ａ）；（ｂ）核の凝縮(condensation)および断片
化（図３、ｂ対ａに匹敵する）；ならびに（ｃ）ＤＮＡのヌクレオソーム間の断
片化（図１Ａ、パネルｇ）により立証されるようなアポトーシスが起こった。化
合物Ａでの処理はカスパーゼ−３のプロセシングもまた誘発し、これはアポトー
シスの活性化に必要とされる。こうした処理はＰＡＲＰのｐ８５断片への切断お
よびＲＢのｐ６８断片への切断もまた誘発した（図１Ａ、ｄ−ｆ、レーン２対１
）。同一の処理は、ＲＢのＣ末端が短縮された（ｐ１１２）およびハイポホスホ
リル化された(hypophosphorylated)（ｐ１１５）形態の産生により明示されると
おり（図１Ａ、ｆ、レーン２対１）、ＲＢのＣ末端の切断および脱ホスホリル化
の過程もまた誘発した。ｐ１１２−１１５／ＲＢとしてＲＢのｐ１１２およびｐ
１１５双方の形態を組み合わせ、そしてアポトーシスマーカーとして使用した。
示されたアポトーシス事象の全部が、ヒト白血病ＨＬ−６０細胞を化合物Ｂで処
理した場合にもまた観察された。例えば、ＨＬ−６０細胞の化合物Ｂへの曝露は
ＤＮＡのヌクレオソーム間の断片化を誘発した（図１Ａ、パネルｇ）。
【００６２】 ヒトＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞（イワモト（Ｉｗａｍｏｔｏ，Ｋ．Ｓ．）ら Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：３８６２−３８６５、１９９６）およびＨＬ−６０細
胞（ダノヴァ（Ｄａｎｏｖａ，Ｍ．）ら Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｒｅｓ．１４、４
１７−４２２、１９９０）双方が突然変異体のｐ５３遺伝子を含有するため、前
述のデータは、開示されるＭＣＰ阻害剤により誘発されるアポトーシスがｐ５３
非依存性であるという立場を支持する。
【００６３】 Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞のアポトーシスがＭＣＰのキモトリプシン様活性の阻害
から生じたというさらなる証拠を得るため、細胞を、変動する濃度の７種の異な
る化合物で２４時間処理し、それらの生存率をその後ＸＴＴの還元により評価し
、そして細胞殺傷能力およびＭＣＰ阻害能力を順位の順序に並べた(rank-ordere
d)。Ｊｕｒｋａｔ細胞の殺傷についての順位の順序に並べられた能力はＭＣＰ阻
害についての順序に正確に合致した（表２、下）。
【００６４】
【表５】
【００６５】 開示されるＭＣＰ阻害剤により誘発されるアポトーシスにおけるカスパーゼの
活性化の関与についての付加的な証拠を提供するため、発明者は、いくつかのカ
スパーゼ活性を阻害し（トーンベリー（Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｎ．Ａ．）ら
Ｍ．Ｊ．Ｎａｔｕｒｅ、３５６：７６８−７７４、１９９２；およびラゼブニク
（Ｌａｚｅｂｎｉｋ，Ｙ．Ａ．）、上記）かつまたいくつかの細胞系においてア
ポトーシスを予防する（エナリ（Ｅｎａｒｉ，Ｍ．）ら Ｎａｔｕｒｅ、３７５
：７８−８１、１９９５；およびアン（Ａｎ，Ｂ．）とドウ（Ｄｏｕ，Ｑ．Ｐ．
）上記）テトラペプチド阻害剤アセチル−ＹＶＡＤ−クロロメチルケトン（ＹＶ
ＡＤ−ＣＭＫ）を利用した。化合物Ａで処理されたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞へのＹ
ＶＡＤ−ＣＭＫの添加は、（ａ）アポトーシスのピークの産生（図１、パネルｃ
対ｂ）；（ｂ）カスパーゼ−３のプロセシング；（ｃ）ＰＡＲＰの切断；ならび
に（ｄ）ＲＢの脱ホスホリル化および切断を完全に封鎖した（図１Ａ、ｄ−ｆ、
レーン３対２）。これらのデータは、カスパーゼがこれらの事象の上流に活性に
配置されるという立場を支持する。
【００６６】 ３．実施例２：ＭＣＰ阻害剤のアポトーシス誘発能力はＭＣＰのキモトリプシ
ン様活性に対するそれらの阻害活性に比例する 開示されるＭＣＰ阻害剤によるＭＣＰのキモトリプシン様活性の阻害が報告さ
れたが、しかし、これらのＭＣＰ阻害剤は、ＭＣＰのトリプシン様活性および液
胞のシステインプロテアーゼ、カテプシンＢに対する相対的にわずかの阻害を生
じさせた（イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．３８：２
２７６−２２７７、１９９５；イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｂｉｏｏｒｇ
．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．６：２８７−２９０、１９９６；およびハーデ
ィング（Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｃ．Ｖ．）ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１５５：１７６７
−１７７５、１９９５）。さらに、キモトリプシン様の活性の阻害についての能
力の順序は、単離されたＭＣＰおよび無傷のマウスＢ細胞の双方を使用すること
により化合物Ａ＞化合物Ｂ＞化合物Ｃであることが報告された（イクバル（Ｉｑ
ｂａｌ，Ｍ．）ら Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．３８：２２７６−２２７７、１９９
５；イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅ
ｔｔ．６：２８７−２９０、１９９６；およびハーディング（Ｈａｒｄｉｎｇ，
Ｃ．Ｖ．）ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１５５：１７６７−１７７５、１９９５）。
【００６７】 開示されるＭＣＰ阻害剤により誘発されるアポトーシスが、生存の利点を与え
るプロテアソームの酵素活性の阻害によりかつ単にＭＣＰ阻害剤により引き起こ
される毒性によらないことを立証するために、アポトーシスを誘発する化合物Ａ
、化合物Ｂおよび化合物Ｃの能力を検討した。ヒトＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を１５
μＭの化合物Ａで８時間処理した場合、サブＧ1のＤＮＡの含有を伴うアポトー シス集団の２３％増大が存在した（図２、パネルｂ対ａ）。比較により、化合物
Ｂを使用した場合、サブＧ1集団の８％増大のみが検出された（図２、パネルｃ 対ａ）。同一条件下での化合物Ｃ（ＣＭＰＤ ８）での処理は、これらの条件下
でアポトーシスを誘発しなかった（図２、パネルｄ）。
【００６８】 平行する実験でのこれらの３種のＭＣＰ阻害剤のＰＡＲＰおよびＲＢタンパク
質の変化を誘発する能力もまた検討した。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を１５μＭの化
合物Ａで処理した場合、ｐ８５／ＰＡＲＰおよびｐ１１２−１１５／ＲＢの産生
が２時間後に観察された（図２Ａ、ｅおよびｆ、レーン２〜５対１）。しかしな
がら、これらの細胞を同一濃度の化合物Ｂに曝露した場合、ずっとより少ないｐ
８５／ＰＡＲＰおよびｐ１１２−１１５／ＲＢが８時間の処理前に見出された（
図２Ａ、レーン６〜９対レーン２〜５）が、しかし１２時間もしくはより長い処
理の後に有意に増大した（図２Ａ、レーン１４、１６）。化合物ＡもしくはＢの
いずれかより少なく強力に、化合物Ｃ（ＣＭＰＤ ８）は２４時間後にわずかな
ｐ８５／ＰＡＲＰおよびｐ１１２−１１５／ＲＢを誘導したのみであった（図２
Ａ、レーン１７）。従って、これらのデータを基礎とすれば、これらのＭＣＰ阻
害剤についてのアポトーシス誘発能力の順序は、サブＧ1集団の誘導ならびにＰ ＡＲＰおよびＲＢタンパク質の変化により判断されるとおり、化合物Ａ＞化合物
Ｂ＞化合物Ｃであった（図２および２Ａ）。この順位は、単離されたプロテアソ
ーム（イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．３８：２２７
６−２２７７、１９９５；イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍ
ｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．６：２８７−２９０、１９９６）および無傷のマウ
スＢ細胞（ハーディング（Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｃ．Ｖ．）ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．
１５５：１７６７−１７７５、１９９５）でのキモトリプシン様活性の阻害につ
いての３種の化合物のものに正確に対応した。
【００６９】 ここで提示された結果は、開示されるＭＣＰ阻害剤によるアポトーシスの誘発
がＭＣＰのキモトリプシン様活性の阻害によるという立場を支持する。
【００７０】 ４．実施例３：化合物Ａはアポトーシス誘発能力を有し、かつ、アポトーシス
からのＢｃｌ−２媒介性の保護を克服することが可能である 化合物Ａのアポトーシス誘発能力を、２種の標準的化学療法的抗癌剤エトポシ
ドおよびシスプラチンと比較した。３０μＭの化合物Ａでの３．５時間の処理の
後、ほぼ１００％のＪｕｒｋａｔ細胞（データは示されない）もしくは対照ベク
ターでトランスフェクションされたＪｕｒｋａｔ細胞（下のＢｃｌ−２の研究に
ついて；図３、パネルｂ対ａ）はアポトーシス性の核の変化を表わした。比較に
より、５０μＭのエトポシドでの８時間の処理はこれらの細胞の約４７％のみが
アポトーシスを受けることを誘発した（図３、パネルｃ対ａ）。１０μＭの化合
物Ａ（しかしエトポシドもしくはシスプラチンでない）の処理は、ヒト前立腺、
乳房、舌および脳癌細胞、ならびにまたＳＶ４０ ＤＮＡウイルスで形質転換さ
れたヒト線維芽細胞でもアポトーシスを誘発した（図５〜７を参照）。
【００７１】 Ｂｃｌ−２癌タンパク質の過剰発現が多くの細胞系でのアポトーシスを阻害す
ることが示された（ミウラ（Ｍｉｕｒａ，Ｍ．）ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ ７５：６５
３−６６０、１９９３）。化合物Ａで誘発されるアポトーシスの阻害のためのヒ
トＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞でのＢｃｌ−２発現を検討した。３０μＭの化合物Ａへ
の３．５時間の曝露の後、約１００％のＢｃｌ−２過剰発現Ｊｕｒｋａｔ細胞（
図３、パネルｅ対ｄ）は、ベクターでトランスフェクションされた細胞に類似に
（図３、パネルｂ対ａ）、アポトーシスに特異的な核の形態を表わした。対照的
に、Ｂｃｌ−２タンパク質の発現は、発明者ら（アン（Ａｎ Ｂ．）ら、Ｉｎｔ
．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，印刷中）および他者（ミヤシタ（Ｍｉｙａｓｈｉｔａ
，Ｔ．）とリード（Ｒｅｅｄ，Ｊ．Ｃ．） Ｂｌｏｏｄ、８１：１５１−１５７
、１９９３）により既に決定されたとおり、エトポシドにより誘発されたアポト
ーシス性の核の変化を封鎖した（図３、パネルｆ対ｃ）。
【００７２】 化合物ＡがアポトーシスからのＢｃｌ−２による保護を克服することをさらに
確認するため、対照ベクター細胞を、アポトーシス性の核の形態を表わす細胞の
パーセンテージにより決定されるとおり（それぞれ３０％対４７％）、５０μＭ
のエトポシド８時間より少なく有効であった一処理、すなわち１５μＭの化合物
Ａに８時間曝露した。Ｂｃｌ−２の発現はより低濃度の化合物Ａにより誘発され
たアポトーシス性の核の変化を阻害しなかった（データは示されない）。これと
一致して、Ｂｃｌ−２の過剰発現もまた、１５μＭの化合物Ａにより誘発された
ＰＡＲＰの切断およびｐ１１２−１１５／ＲＢの産生を封鎖することに失敗した
（図４、ａおよびｂ、レーン８〜１０対３〜５）。対照的に、Ｂｃｌ−２の発現
は、５０μＭのエトポシドにより誘発されたこれらのＰＡＲＰおよびＲＢの変化
を阻害した（図４、ｃおよびｄ、レーン６〜１０対レーン１〜５）。これらのデ
ータを基礎とすれば、開示されるＭＣＰ阻害剤はＢｃｌ−２非依存性の経路を通
じてアポトーシス性の死のプログラムを開始する。
【００７３】 ５．実施例４：化合物Ａは複数のヒト腫瘍細胞系においてアポトーシスを誘発
する 大部分のヒト充実性腫瘍は現在使用されている化学療法剤での治療に抵抗性で
ある。Ｂｃｌ−２癌タンパク質の過剰発現が少なくともヒトの前立腺および乳房
の癌において多剤耐性の発生に寄与することが示唆されている（ハリソン（Ｈａ
ｒｒｉｓｏｎ）ら、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７５：７−１２、１９９５；デゾワズ
（Ｄｅｓｏｉｚｅ）ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４：２２９１−２２
９４、１９９４；ケレン（Ｋｅｌｌｅｎ）ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
１４：４３３−４３６、１９９４）。化合物ＡはヒトＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞でア
ポトーシスのＢｃｌ−２媒介性の阻害を克服することが可能であった（図３、４
）ため、化合物Ａを、ヒト前立腺（ＰＣ−３、ＤＵ１４５）および乳房（ＭＤＡ
−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ−７）癌細胞系におけるアポトーシスを誘発するその能
力について検討した。これらの実験において、化合物Ａの有効性をエトポシドの
有効性と比較した。
【００７４】 ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞を、１０μＭの化合物Ａ、エトポシド、もしくは等
パーセントのベヒクル（ＤＭＳＯ）で処理し、次いで付着(attatched)および脱 離(detached)細胞集団の分離を行った。付着および脱離双方の細胞集団をその後
アポトーシス性の核の変化の検出に使用した。化合物Ａでの３６時間処理の後に
約５０％のＰＣ−３細胞が脱離されたようになった。全部の脱離されたＰＣ−３
細胞は典型的なアポトーシス性の核の凝縮および断片化を表わした（図５、パネ
ルａ）。いずれかの特定の理論により束縛されることを願わない一方、こうした
細胞の脱離はおそらくアポトーシスの誘発により引き起こされる。なぜなら残存
する付着細胞もまたアポトーシス性の核の形態を示したからである（図５、パネ
ルｂ）。ほとんどないかもしくは全くない脱離が、エトポシドもしくはＤＭＳＯ
のいずれかで処理されたＰＣ−３細胞で観察され；それと一致して、全部の残存
する付着細胞は正常の丸い核を含有した（図５、それぞれパネルｃおよびｄ）。
【００７５】 ＰＣ−３に類似に、ヒト前立腺癌ＤＵ１４５細胞の約半分が化合物Ａへの１６
時間の曝露後に脱離されたようになった。ほとんど全部の脱離された、および付
着されたＤＵ１４５細胞さえアポトーシス特異的な核の形態を表わした（図５、
パネルｅ、ｆ対ｈ）。これらの細胞のエトポシド処理は非常に少ない脱離を誘発
したのみであり、そして残存する付着細胞はなお正常な核を含有した（図５、パ
ネルｇ）。
【００７６】 分離はまた、化合物Ａへの２４時間の曝露後にヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１
およびＭＣＦ−７細胞の少なくとも半分でも見出された。核染色アッセイは、脱
離細胞の全部および付着細胞の大部分でアポトーシス性の形態を立証した（図５
、パネルｌ、ｊ、ｍおよびｎ）。同一条件下でのエトポシドでのこれら２種の細
胞系の処理はアポトーシスを誘発しなかった（図５、パネルｋ、ｏ）。ＭＤＡ−
ＭＢ−２３１細胞は突然変異体のｐ５３遺伝子を含有し（ケイジー（Ｃａｓｅｙ
，Ｇ．）ら Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、６：１７９１−１７９７、１９９１）そしてＭ
ＣＦ−７細胞は野生型のｐ５３を発現する（バルテク（Ｂａｒｔｅｋ，Ｊ．）ら
Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、５：８９３−８９９、１９９０）ため、これらのデータは
、化合物Ａによるアポトーシスの誘発がｐ５３非依存性であるという立場を支持
する。
【００７７】 化合物Ａ（しかしエトポシドもしくはシスプラチンでなく）での処理は、口腔
扁平上皮癌細胞系ＳＣＣ−２５（図５、パネルｑ−ｔ）、膠芽腫細胞系ＳＮＢ−
１９（パネルｕ−ｘ）および骨肉腫細胞系Ｕ２ＯＳ（データは示されない）を包
含するいくつかの他のヒト腫瘍系で細胞の脱離およびアポトーシスを誘発した。
一緒にされれば、これらのデータは、化合物Ａがエトポシドおよびシスプラチン
より大きなアポトーシス誘発能力を有するという立場を支持し、また、このＭＣ
Ｐ阻害剤が多様なヒト癌細胞系における薬剤耐性を克服することが可能であるこ
とを立証する。
【００７８】 ６．実施例５：化合物ＡはＳＶ−４０で形質転換された（しかし親の正常ので
なく）ヒト線維芽細胞で選択的にアポトーシスを誘発する 化合物Ａが形質転換された細胞と正常細胞との間でのアポトーシスの誘発に何
らかの選択性を有するかどうかを検討した。正常ヒト線維芽細胞系（ＷＩ−３８
）およびそのＳＶ−４０で形質転換された誘導体（ＷＩ−３８ ＶＡ１３）を利
用した。細胞系のこの対を、１０μＭの化合物Ａ、エトポシドもしくはＤＭＳＯ
のいずれかで２２時間まで処理し、次いで付着および脱離細胞集団の脱離を行っ
た。化合物Ａ処理はＳＶ−４０で形質転換された細胞の大多数で脱離を誘発し；
脱離された形質転換された細胞の全部および付着された形質転換された細胞の大
部分がアポトーシス性の核の変化を表わした（図６、パネルａ、ｂ対ｄ）。対照
的に、化合物Ａへの正常ＷＩ−３８細胞の曝露は分離もしくはアポトーシス性の
核の形態のいずれかを誘導しなかったが、とは言えこの処理は正常ＷＩ−３８細
胞の体積を増大させ（パネルｅ対ｇ）、それは、いずれかの特定の論理により束
縛されることを願わない一方、おそらくＧ1での成長停止によった（ヒンズ（Ｈ ｉｎｄｓ，Ｐ．Ｗ．）ら Ｃｅｌｌ ７０：９９３−１００６、１９９２）。エ
トポシドでの処理は形質転換されたもしくは正常のいずれかのＷＩ−３８細胞で
アポトーシスを誘発しなかったが、とは言えこの処理もまた双方の系統で細胞の
体積を増大させた（図６、パネルｃ対ｄおよびｆ対ｇ）。
【００７９】 平行した比較実験において、全細胞集団（分離および付着双方の細胞の混合物
）を、化合物Ａ、エトポシドもしくはＤＭＳＯでの処理後に収集した。全細胞抽
出物をその後これらの細胞から調製し、そしてＰＡＲＰ切断の測定に使用した。
核染色アッセイからの結果（図６）と矛盾せず、化合物Ａで誘発されたＰＡＲＰ
切断が形質転換されたものでのみ観察された（図７、レーン６対４）が、しかし
正常のものではされなかった（図７、レーン３対１；注：ＷＩ−３８細胞からの
４倍より多いタンパク質をこの実験で使用した）。一緒にされれば、このデータ
は、化合物ＡがＳＶ−４０で形質転換されたヒト線維芽細胞でのアポトーシス性
の死の過程を選択的に誘発するという立場を支持する。
【００８０】 ７．実施例６：化合物Ａでの細胞の処理はサイクリン依存性キナーゼ阻害剤ｐ
２１およびｐ２７の蓄積を誘発する。
【００８１】 ユビキチン−プロテアソーム経路が、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤ｐ２１
（ブラゴスクロニー（Ｂｌａｇｏｓｋｌｏｎｎｙ，Ｍ．Ｖ．）ら、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２２７：５６４−５６９（１９９６）
）およびｐ２７（パガノ（Ｐａｇａｎｏ，Ｍ．）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：
６８２−６８５ １９９５）を包含するいくつかの細胞周期調節タンパク質のレ
ベルの制御で不可欠な役割を演じることが報告された。ｐ２１およびｐ２７のレ
ベルに対する化合物Ａの影響を、ウェスタンブロットによりヒト乳癌ＭＤＡ−Ｍ
Ｂ−２３１細胞で検査した。１５μＭの化合物Ａへの６時間の曝露の後、ｐ２１
のレベルは４５倍増大した。ｐ２７のレベルは６時間後にわずかに増大し、そし
て１２もしくは２４時間後に３ないし４倍上昇した。加えて、ユビキチン化され
た(ubiquinated)ｐ７０を表わしうる７０ｋＤａのバンドもまた観察された。対 照的に、エトポシドは、１００μＭまでの濃度で使用された場合に、１７時間に
ｐ２１（≦４倍）およびｐ２７（≦２倍）の制限された蓄積のみを引き起こした
。
【００８２】 化合物Ａでの処理後のｐ２１およびｐ２７の蓄積を、ＳＶ−４０で形質転換さ
れたおよび正常のＷＩ−３８線維芽細胞でもまた評価した。正常のもしくは形質
転換されたのいずれかのＷＩ−３８細胞の１０μＭの化合物Ａとともにの２２時
間のインキュベーションは、ｐ２１レベルの９ないし１０倍の増強をもたらした
。正常細胞でのｐ２７のレベルはこれらの条件下でわずかにのみ増大したが、し
かしＳＶ−４０で形質転換された細胞でのｐ２７のレベルは８倍上昇した。
【００８３】 ８．インビトロの結果の分析 前述のデータは、化合物Ａが、サブＧ1のＤＮＡの含量、核の凝縮および断片 化、ヌクレオソーム間のＤＮＡの断片化、カスパーゼ−３のプロセシングおよび
活性化、ＰＡＲＰの切断、ならびにＲＢの脱ホスホリル化および切断を伴うアポ
トーシス性集団の出現により明示されるとおり（図１）、ｐ５３が突然変異体の
ヒトＪｕｒｋａｔ ＴおよびＨＬ−６０細胞でのアポトーシスを迅速に誘発した
という立場を支持する。ＹＶＡＤ−ＣＭＫの添加は上のアポトーシス事象の全部
を封鎖し（図１Ａ）、ＭＣＰ阻害剤で誘発されたｐ５３非依存性のアポトーシス
でのカスパーゼの活性化の要件を確認する。これらのデータは、その中でアポト
ーシス性の死がトリペプチドアルデヒド（ＬＬＬ、ＬＬｎＶ）もしくはラクタシ
スチン（イマジョー（Ｉｍａｊｏｈ，Ｏｈｍｉ）ら Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ．２１７：１０７０−１０７７、１９９５；シノハラ
（Ｓｈｉｎｏｈａｒａ，Ｋ．）ら Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１７：３８５−３８
８、１９９６；ドレクスラー（Ｄｒｅｘｌｅｒ，Ｈ．Ｃ．Ａ．） ＰＮＡＳ Ｕ
ＳＡ．９４：８５５−８６０、１９９７；およびロープス（Ｌｏｐｅｓ，Ｕ．Ｇ
．）ら Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１２８９３−１８９６、１９９７）
を包含する他のＭＣＰ阻害剤により誘発された、他者からの大部分の最近の報告
と矛盾せず、そしてそれらをさらに拡大した。化合物Ａ、ＢおよびＣのアポトー
シス誘発能力（図２）は、ＭＣＰのキモトリプシン様活性に対するそれらの阻害
能力に比例する（イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．３
８：２２７６−２２７７、１９９５；イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｂｉｏ
ｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．６：２８７−２９０、１９９６）。化合
物Ａは２種の標準的化学療法剤エトポシドおよびシスプラチンより大きなアポト
ーシス誘発能力を有する。化合物Ａ（しかしエトポシドもしくはシスプラチンで
なく）がＢｃｌ−２を過剰発現するＪｕｒｋａｔ細胞もしくは前立腺、乳房、舌
および脳の複数のヒト癌細胞系でアポトーシスを誘発することが可能であったと
いう知見（図３−５）はこれと矛盾しなかった。化合物Ａは、ＳＶ−４０で形質
転換された（しかし親の正常のでなく）ヒト線維芽細胞で選択的にアポトーシス
を誘発した（図６、７）。
【００８４】 加えて、化合物Ａはヒト乳房細胞の腫瘍系でサイクリン依存性キナーゼ阻害剤
ｐ２１およびｐ２７のレベルを増大させた。ｐ２７のレベルはＳＶ−４０で形質
転換された線維芽細胞で選択的に高められたが、しかし形質転換されない親の系
統ではされなかった。 ａ．プロテアソームのキモトリプシン様活性の阻害はアポトーシスの誘発を伴う 前述のデータは細胞の生存に対するプロテアソームのキモトリプシン成分（そ
してトリプシン様成分でなく）の要件を支持するとは言え、分枝状鎖のアミノ酸
を好む活性についての役割は排除され得ない。このデータは、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ
細胞における化合物Ａ、ＢおよびＣによるアポトーシスを誘発する能力の順位（
図２）が、プロテアソームのキモトリプシン活性の阻害に対する能力のそれらの
順位に正確に対応した（イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．３８：２２７６−２２７７、１９９５；イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら
Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．６：２８７−２９０、１９９６；
およびハーディング（Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｃ．Ｖ．）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１５
５：１７６７−１７７５、１９９５）ことを示す。加えて、当該データは、化合
物Ａ（Ｋi＝＜２ｎＭ；イクバル（Ｉｑｂａｌ，Ｍ．）ら 上記）は、プロテア ソームのキモトリプシン様活性に対するトリペプチドアルデヒド（Ｋi＝２０ｎ Ｍ：ロック（Ｒｏｃｋ，Ｋ．Ｌ．）ら Ｃｅｌｌ．７８：７６１−７７１、１９
９４）より強力な阻害剤であるという立場を支持する。これと一致して、化合物
Ａはトリペプチドアルデヒドより大きなアポトーシス誘発能力を有する。例えば
、３〜４時間の３０μＭの化合物Ａでの処理はＨＬ−６０細胞のヒトＪｕｒｋａ
ｔ細胞でのＰＡＲＰの完全な切断を誘発するのに十分であった（図１Ａ）。対照
的に、５０μＭのＬＬｎＶでの６時間のＨＬ−６０細胞の処理は約５０％のＰＡ
ＲＰ切断を誘発したことが報告された（ドレクスラー（Ｄｒｅｘｌｅｒ，Ｈ．Ｃ
．Ａ．） ＰＮＡＳ ＵＳＡ．９４：８５５−８６０、１９９７）。これらの結
果は、プロテアソームのキモトリプシン様活性が細胞の生存経路に関与する、ま
た、この活性の阻害がアポトーシスの誘発につながるという立場を支持する。 ｂ．化合物Ａはヒト癌細胞の薬剤耐性を克服する 本明細書に提示されるデータを基礎とすれば、化合物Ａは強力なアポトーシス
誘発物質であり、そして、ヒト癌細胞の薬剤耐性を克服することが可能であるよ
うである。化合物Ａ（しかしエトポシドでなく）は、Ｂｃｌ−２を過剰発現する
Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞でアポトーシスを誘発することが可能であった（図３）。
これは、エトポシドのより高濃度に比較してより低濃度の化合物Ａを使用した場
合でさえもまた真実であった（図４）。これらのデータは、化合物Ａが新規のＢ
ｃｌ−２非依存性の経路を通じてアポトーシスを誘発するという立場を支持する
。ヒト癌細胞の大部分はエトポシドもしくはシスプラチンのような標準的抗癌剤
での治療に抵抗性である（ハリソン（Ｈａｒｒｉｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．） Ｊ．Ｐａ
ｔｈｏ．１７５：７−１２、１９９５；図５）。しかしながら、低濃度の化合物
Ａは、前立腺、乳房、舌および脳の全部の試験されたヒト癌細胞系でアポトーシ
ス経路を迅速に活性化した（図５）。Ｂｃｌ−２の非依存性に加え、ＭＣＰ阻害
剤で誘発されるアポトーシスもまたｐ５３非依存性であり、これは最も最近報告
されたプロテアソーム媒介性のｐ５３依存性のアポトーシス（ロープス（Ｌｏｐ
ｅｓ，Ｕ．Ｇ．）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１２８９３−１８９６、
１９９７）と異なる。これらの特性は、開示されるＭＣＰ阻害剤がヒト癌、とり
わけＢｃｌ−２を過剰発現しそして／もしくはｐ５３を欠くものの治療のための
新規抗癌剤であるという立場を支持する。 ｃ．化合物ＡはＳＶ−４０で形質転換された（しかし正常のでない）ヒト線維芽
細胞でアポトーシスを選択的に誘発する 化合物Ａの能力を、正常なＷＩ−３８とそのＳＶ−４０で形質転換された誘導
体（ＷＩ−３８ ＶＡ−１３）細胞系との間で比較した。化合物Ａ処理は、好ま
しくはＳＶ−４０で形質転換された細胞で分離およびアポトーシスを誘発するこ
とが見出された（図６）。これと一致して、化合物Ａ処理は形質転換された（し
かし正常なでない）ＷＩ−３８細胞でのみＰＡＲＰの切断を誘発した（図７）。
これらのデータは、化合物Ａ媒介性の殺傷は細胞傷害性の効果でないという立場
を支持し、そして、化合物Ａは腫瘍選択的殺傷活性を有しうることをさらに示唆
する。正常および形質転換された細胞における化合物Ａの他と異なる活性は増殖
速度の差異により説明され得ない。なぜならこれらはＷＩ−３８およびＷＩ−３
６ ＶＡ−１３細胞の双方について類似であったからである。 ｄ．化合物Ａでの細胞の処理はサイクリン依存性キナーゼ阻害剤ｐ２１およびｐ
２７の蓄積を誘発する ｐ２１およびｐ２７レベルを調節する化合物Ａの能力は、サイクリン依存性キ
ナーゼ阻害剤の制御におけるプロテアソームの報告された役割（ブラゴスクロニ
ー（Ｂｌａｇｏｓｋｌｏｎｎｙ，Ｍ．Ｖ．）ら、上記；パガノ（Ｐａｇａｎｏ，
Ｍ．）ら、上記）と矛盾しない。処理化合物Ａ後のＳＶ−４０で形質転換された
ＷＩ−３８線維芽細胞（しかし親の細胞系でない）におけるｐ２７の選択的蓄積
は、形質転換された細胞でアポトーシスを選択的に誘発した。この観察結果は、
決定的な閾値濃度より上のｐ２７の蓄積がアポトーシスをもたらすという仮説と
矛盾しない。
【００８５】 ９．実施例７：インビボの検討 ａ．材料：インビボ試験に使用されるＭＣＰ阻害剤（化合物ＤおよびＥ）をそれ
ぞれ２５％ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）中で処方した。 ｂ．細胞系：マウス黒色腫細胞系Ｂ１６−Ｆ０を、１０％ウシ胎児血清（ハイク
ローン ラブス（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｓ）、ユタ州ローガン）、２ｍＭのグ
ルタミン（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ、ニューヨーク州ロングアイランド）、
ペニシリン（１００Ｉ．Ｕ．／ｍＬ）（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ）およびス
トレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ）を含有
する４．５ｇ／ｌのグルコース（セルグロ／メディアテック（Ｃｅｌｌｇｒｏ／
Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）、ワシントンＤ．Ｃ．）を含むダルベッコ改変イーグル培
地中で９５％空気／５％ＣＯ2雰囲気で加湿されたインキュベーター中で３７℃ で成長させた。細胞は、マイコプラズマおよびげっ歯類ウイルスを含まないこと
を決定した（ＭＡＰ試験）。指数的に成長する細胞を５ｍＬの温トリプシン／Ｅ
ＤＴＡ（０．０５％、０．５ｍＭ）（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ）を使用して
収穫した。全体積を、トリプシンを中和するために完全培地で１０ｍＬまでにも
たらし、そして細胞を血球計算板で計数した。細胞をその後、簡潔な遠心分離に
より収集し、そして細胞ペレットをリン酸緩衝生理的食塩水（ギブコ（Ｇｉｂｃ
ｏ）ＢＲＬ）に再懸濁して１×１０7の生存細胞／ｍｌの最終濃度を達成した。 ｃ．動物：ハルラン シュプラグ ドーレイ（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ
Ｄａｗｌｅｙ）、インジアナ州インジアナポリスから得られた雌性Ｃ５７ＢＬマ
ウス（２０〜２５ｇ）をケージあたりマウス５匹で維持し、そして商業的食餌お
よび水を随意に与えた。動物を、湿度および温度制御された条件下で収容し、そ
して明／暗周期を１２時間間隔に設定した。マウスを実験操作前１週間隔離した
(quarantined)。 ｄ．腫瘍細胞の体内移植および成長：上述されたように培養された指数的に成長
するＢ１６−Ｆ０細胞を収穫し、そしてマウスの右側腹部に注入（マウスあたり
１×１０6個の細胞）した。０．０１〜０．３ｃｍ3の大きさの腫瘍を担持する５
０匹の動物を各１０匹の動物の５群に分割した。化合物を１０ｍｇ／ｋｇ／日、
ｉｐで投与し；ベヒクル（２５％ソルトール）を１ｍｇ／ｋｇ／日、ｉｐで投与
した。 ｅ．腫瘍の測定：腫瘍を２ないし３日おきにノギスを使用して測定した。腫瘍体
積を、式： Ｖ（ｃｍ）3＝０．５２３６×長さ（ｃｍ）×幅（ｃｍ）［（長さ（ｃｍ）＋幅 （ｃｍ））／２］ を使用して算出した。
【００８６】 インビボ研究からの結果を図８に提示する。
【００８７】 結果は、化合物ＤおよびＥが黒色腫の腫瘍の成長を阻害することを示す。
【００８８】 １０．実施例８：無胸腺ヌードマウスでのＬｅｗｉｓ肺癌異種移植片の成長に
対する化合物Ｉおよび化合物Ｊのインビボ抗腫瘍有効性 雌性無胸腺ヌードマウスに、右後側腹部に１×１０6個のＬｅｗｉｓ肺癌細胞 をｓ．ｃ．注入した。体積で１５０ないし２００ｍｍ3を達成する腫瘍に際して マウスを各１０匹の動物の群に無作為化し、そして、投与を、全体で１２日間、
化合物Ｉ（２ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ＱＤ、週５日）、化合物Ｊ（３ｍｇ／ｋｇ
、ｓ．ｃ．、ＱＤ、週５日）もしくはベヒクル単独（３０％ソルトール）で開始
した。腫瘍の測定（体積）を、２ないし３日ごとにノギスを用いて二次元で測定
した。ベヒクルで処理された対照に関する薬物に関連した抗腫瘍有効性の統計学
的分析を、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）順位総和検定（Ｒ
ａｎｋ ｓｕｍ ｔｅｓｔ）を使用して実施した。
【００８９】 結果を図９に提示する。
【００９０】 結果は、化合物ＩおよびＪが肺癌の腫瘍の成長を阻害することを示す。
【００９１】 １１．実施例９：無胸腺ヌードマウスにおけるＡＴ−２ラット前立腺癌異種移
植片の成長に対する化合物Ｉのインビボ抗腫瘍有効性 雌性無胸腺ヌードマウスを、右後側腹部に１×１０6個のＡＴ−２ラット前立 腺癌細胞をｓ．ｃ．注入した。マウスを各１０匹の動物の群に無作為化し、そし
て、投与を、全体で１５日間、化合物Ｉ（２ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．、ＱＤ、週５
日）もしくはベヒクル単独（３０％ソルトール）で開始した。腫瘍の測定（体積
）を、２ないし３日ごとにノギスを用いて二次元で測定した。ベヒクルで処理さ
れた対照に関する薬物に関連した抗腫瘍有効性の統計学的分析を、マン・ホイッ
トニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）順位総和検定（Ｒａｎｋ ｓｕｍ ｔｅｓ
ｔ）を使用して実施した。結果を図１０に提示する。
【００９２】 １２．実施例１０：ヒトおよびげっ歯類の腫瘍細胞系のインビトロ生存率に対
する化合物Ｉおよび化合物Ｊの効果 細胞を、変動する密度で９６穴プレートに最初に植え付け、その後、２４時間
後にカルセイン（Ｃａｌｃｅｉｎ）−ＡＭ生存率アッセイを使用してアッセイし
て各細胞型について至適の最終密度を決定した。細胞をその後、以下のような１
００μＬの適正な細胞培地中でこの密度で９６穴プレートに植え付けた。すなわ
ち
【００９３】
【表６】
【００９４】 化合物の連続的希釈物を、濃度が評価されるべき所望の濃度の２倍であったよ
うに作成した。１００μＬの希釈物をその後１００μＬの培地中でプレート培養
された細胞に添加した場合に、０、１１．７、４６．９、１８７．５、３７５お
よび７５０ｎＭの最終濃度を得た。化合物を、細胞を植え付けた後に３ないし４
時間プレートに添加し、その後プレートを所望の時間点の間３７℃でインキュベ
ーションした（一般に１、２もしくは３日のインキュベーション）。
【００９５】 カルセイン−ＡＭ生存率アッセイを以下のとおり所望の時間点で実施した。培
地をマニホールドおよび金属板を使用してウェルあたりおよそ５０μＬを残すよ
う吸引した。ウェルをその後、２００μＬのＤＰＢＳ（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ））
で３回洗浄し、ウェルあたり５０μＬを残すように各回マニホールドを用いて吸
引した。ＤＰＢＳ中のカルセイン−ＡＭ（モレキュラー プローブス（Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ））の８μＭ溶液を調製し、そして１５０μＬを各ウ
ェルに添加した。プレートをその後３７℃で３０分間インキュベーションした。
インキュベーション後、カルセインをマニホールドを用いて吸引し、そして細胞
を前のように２００μＬのＤＰＢＳで洗浄した。最後の吸引後、蛍光を、サイト
フルオル（Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ）２３００蛍光プレート読取り器を使用して測定
した。陰性対照は培地を含有したがしかし細胞を含有しなかった。全部の研究を
、２回の独立の実験で３重で(in triplicate)実施した。
【００９６】 結果を下の表３に提示する：
【００９７】
【表７】
【００９８】 本特許文書で挙げられる特許、出願および印刷された刊行物のそれぞれがこれ
によりそっくりそのまま引用により組み込まれることが意図されている。
【００９９】 当業者は、多数の変更および改変が本発明の好ましい態様に対しなされうるこ
と、ならびに、こうした変更および改変が本発明の技術思想から離れることなく
なされうることを真価をみとめるであろう。従って、いずれの付属として付けら
れた請求の範囲も、本発明の真の技術思想および範囲内にあるような全部の同等
の変形物に及ぶことが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【図１および１Ａ】 発明にかかる、ヒト白血病細胞におけるアポトーシス誘発物質としての開示され
るＭＣＰ阻害剤の効果を示す。
【図２および２Ａ】 発明にかかる、開示されるＭＣＰ阻害剤のアポトーシス誘発能力を比較する。
【図３】 発明にかかる、Ｂｃｌ−２癌タンパク質の過剰発現が化合物Ａにより誘発された
アポトーシス性の核の変化を阻害することに失敗することを示す写真の複写であ
る。
【図４】 発明にかかる、Ｂｃｌ−２癌タンパク質の過剰発現が、化合物Ａにより誘発され
るＰＡＲＰの切断およびｐ１１２−１１５／ＲＢの産生を阻害することに失敗す
ることを示す写真の複写である。
【図５】 発明にかかる、いくつかのヒト癌細胞系における化合物Ａによる（しかしエトポ
シドもしくはシスプラチンのいずれかによらない）脱離およびアポトーシスの誘
発を示す写真の複写である。
【図６】 発明にかかる、化合物ＡがＳＶ−４０で形質転換された（しかし親の正常のでな
く）ヒト線維芽細胞でアポトーシス性の核の変化を選択的に誘発することを示す
写真の複写である。
【図７】 発明にかかる、化合物ＡがＳＶ−４０で形質転換された（しかし親の正常のでな
く）ヒト線維芽細胞でＰＡＲＰ切断を選択的に誘発することを示す。
【図８】 発明にかかる、化合物ＤおよびＥのインビボの抗腫瘍活性を示すグラフ表示であ
る。
【図９】 発明にかかる、化合物ＩおよびＪによる肺癌組織の成長のインビボの阻害を示す
グラフ表示である。
【図１０】 発明にかかる、化合物Ｉによるラット前立腺癌のインビボ阻害を示すグラフ表示
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4035 Ａ６１Ｋ 31/4035 31/69 31/69 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 209/48 Ｃ０７Ｄ 311/70 311/70 209/48 Ｚ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ Ｔ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ， ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ジヤニ，ジテシユ・ピー アメリカ合衆国コネチカツト州06385ウオ ーターフオード・ストーン−ハイツドライ ブ67 (72)発明者 ゴールドフアーブ，ロナルド・エイチ アメリカ合衆国テキサス州76017アーリン トン・エツジクリークレイン4532 (72)発明者 ドウ，キング・ピング アメリカ合衆国フロリダ州33624タンパ・ オークマナードライブ16122 Ｆターム(参考） 4C062 FF13 4C086 AA01 AA02 BA08 BC11 DA43 MA10 NA14 ZA81 ZB26 ZC20 4C204 BB01 CB04 DB16 EB03 FB24 GB01 4C206 AA01 AA02 HA31 KA01 NA14 ZA81 ZB26 ZC20

Claims (85)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式： 【化１】 上式中： Ｒ1は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、フタルイミド、−ＮＨ−ＳＯ2Ｒ9および
    −ＮＨ−Ｊより成る群から選択され； Ｒ2は、Ｈ、ヒドロキシル、１から１０個までの炭素を有するアルキル、および ３から７個までの炭素を有するシクロアルキルより成る群から選択され； Ｒ3は、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−
    Ｊおよび−Ｒ6−Ｃ≡Ｎより成る群から選択され； Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2−Ｒ7）−Ｑであり； Ｑは、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｃｌ、−Ｃ（＝Ｏ ）ＣＨ2Ｂｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＦ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ3 、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ
    ）ＣＯ2−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＯ2Ｈ、−Ｂ（ＯＨ）2、 【化２】 （ここで、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキルである） より成る群から選択され； Ｒ5は、−ＮＯ2、−Ｃ≡Ｎおよび−Ｊより成る群から選択され； Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり； Ｒ7は、フェニル、および１から８個までの炭素を有するアルキルより成る群か ら選択され、前記アルキル基は１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
    もしくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｒ8は、＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣＨ3、＝ Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2および＝Ｎ−ＮＨ−Ｊよ
    り成る群から選択され； Ｒ9は、水素、および１から６個までの炭素を有するアルキルより成る群から選 択され、前記アルキル基は、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリールも
    しくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｊは保護基であり； ｎは３から１０までの整数であり；そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物と形質転換された細胞を接触させることを含んで成る、前記細胞の死を
    引き起こす方法。
  2. 【請求項２】 Ｒ1が、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドもし
    くは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3である、請求項１の方法。
  3. 【請求項３】 Ｒ2がＨもしくはシクロペンチルである、請求項１の方法。
  4. 【請求項４】 Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2である 、請求項１の方法。
  5. 【請求項５】 Ｑが、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｂ（ＯＨ）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ
    ）ＮＨ−Ｒ7であるか、または構造： 【化３】 ここで、Ｗはピナンである、 を有する、請求項１の方法。
  6. 【請求項６】 Ｒ5が、−ＮＯ2、−Ｃ≡Ｎ、−ＰＭＣ、−ＭＴＲ、−ＭＴＳ
    もしくはＴｏｓである、請求項１の方法。
  7. 【請求項７】 Ｒ7が、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）2−ＣＨ3、−ＣＨ2 −ＣＨ3もしくは−Ｃ6Ｈ5である、請求項１の方法。
  8. 【請求項８】 Ｒ8が、＝Ｏ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝Ｎ
    ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2もしくは＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2である、請求項
    １の方法。
  9. 【請求項９】 Ｒ1が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドもしくは−ＮＨ
    −ＳＯ2ＣＦ3であり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−
    Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8が
    ＝Ｏである、請求項１の方法。
  10. 【請求項１０】 Ｒ1が−Ｃ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3 が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8が ＝Ｏである、請求項１の方法。
  11. 【請求項１１】 Ｒ1がＣ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が −（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−
    Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；Ｑが−ＣＨ−Ｒ 8 であり；そしてＲ8が＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣ Ｈ3もしくは＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5である、請求項１の方法。
  12. 【請求項１２】 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が、表１中の化合物について示さ
    れる置換基の群から選択される、請求項１の方法。
  13. 【請求項１３】 前記化合物が、表１に示される化合物Ａ−Ｊより成る群か
    ら選択される、請求項１の方法。
  14. 【請求項１４】 前記化合物が哺乳動物に投与される、請求項１−１３のい
    ずれか一の方法。
  15. 【請求項１５】 前記哺乳動物がヒトである、請求項１４の方法。
  16. 【請求項１６】 前記形質転換された細胞が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、舌
    癌細胞、脳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細胞もしくは皮膚癌細胞であ
    る、請求項１５の方法。
  17. 【請求項１７】 前記形質転換された細胞がＢｃｌ２タンパク質を過剰産生
    し、そして／もしくはｐ５３タンパク質を欠く、請求項１の方法。
  18. 【請求項１８】 式： 【化４】 上式中： Ｒ1は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、フタルイミド、−ＮＨ−ＳＯ2Ｒ9および
    −ＮＨ−Ｊより成る群から選択され； Ｒ2は、Ｈ、ヒドロキシル、１から１０個までの炭素を有するアルキル、および ３から７個までの炭素を有するシクロアルキルより成る群から選択され； Ｒ3は、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−
    Ｊおよび−Ｒ6−Ｃ≡Ｎより成る群から選択され； Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2−Ｒ7）−Ｑであり； Ｑは、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｃｌ、−Ｃ（＝Ｏ ）ＣＨ2Ｂｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＦ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ3 、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ
    ）ＣＯ2−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＯ2Ｈ、−Ｂ（ＯＨ）2、 【化５】 （ここで、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキルである） より成る群から選択され； Ｒ5は、−ＮＯ2、−Ｃ＝Ｎおよび−Ｊより成る群から選択され； Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり； Ｒ7は、フェニル、および１から８個までの炭素を有するアルキルより成る群か ら選択され、前記アルキル基は１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
    もしくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｒ8は、＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣＨ3、＝ Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2および＝Ｎ−ＮＨ−Ｊよ
    り成る群から選択され； Ｒ9は、水素、および１から６個までの炭素を有するアルキルより成る群から選 択され、前記アルキル基は、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリールも
    しくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｊは保護基であり； ｎは３から１０までの整数であり；そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物を、疾患を有する患者に投与することを含んで成る、前記患者の治療方
    法であって、前記疾患が形質転換された細胞の存在を特徴とする方法。
  19. 【請求項１９】 Ｒ1が、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドも
    しくは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3である、請求項１８の方法。
  20. 【請求項２０】 Ｒ2がＨもしくはシクロペンチルである、請求項１８の方 法。
  21. 【請求項２１】 Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2であ る、請求項１８の方法。
  22. 【請求項２２】 Ｑが、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｂ（ＯＨ）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝
    Ｏ）ＮＨ−Ｒ7であるか、または構造： 【化６】 ここで、Ｗはピナンである、 を有する、請求項１８の方法。
  23. 【請求項２３】 Ｒ5が、−ＮＯ2、−Ｃ≡Ｎ、−ＰＭＣ、−ＭＴＲ、−ＭＴ
    ＳもしくはＴｏｓである、請求項１８の方法。
  24. 【請求項２４】 Ｒ7が、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）2−ＣＨ3、−ＣＨ 2 −ＣＨ3もしくは−Ｃ6Ｈ5である、請求項１８の方法。
  25. 【請求項２５】 Ｒ8が、＝Ｏ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝
    ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2もしくは＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2である、請求
    項１８の方法。
  26. 【請求項２６】 Ｒ1が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドもしくは−Ｎ
    Ｈ−ＳＯ2ＣＦ3であり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8 が＝Ｏである、請求項１８の方法。
  27. 【請求項２７】 Ｒ1が−Ｃ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3 が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8が ＝Ｏである、請求項１８の方法。
  28. 【請求項２８】 Ｒ1がＣ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が −（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−
    Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；Ｑが−ＣＨ−Ｒ 8 であり；そしてＲ8が＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣ Ｈ3もしくは＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5である、請求項１８の方法。
  29. 【請求項２９】 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が、表１中の化合物について示さ
    れる置換基の群から選択される、請求項１８の方法。
  30. 【請求項３０】 前記化合物が、表１に示される化合物Ａ−Ｊより成る群か
    ら選択される、請求項１８の方法。
  31. 【請求項３１】 前記患者がヒトである、請求項１８−３０のいずれか一の
    方法。
  32. 【請求項３２】 前記形質転換された細胞が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、舌
    癌細胞、脳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細胞もしくは皮膚癌細胞であ
    る、請求項３１の方法。
  33. 【請求項３３】 前記形質転換された細胞がＢｃｌ２タンパク質を過剰産生
    し、そして／もしくはｐ５３タンパク質を欠く、請求項１８の方法。
  34. 【請求項３４】 式： 【化７】 上式中： Ｒ1は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、フタルイミド、−ＮＨ−ＳＯ2Ｒ9および
    −ＮＨ−Ｊより成る群から選択され； Ｒ2は、Ｈ、ヒドロキシル、１から１０個までの炭素を有するアルキル、および ３から７個までの炭素を有するシクロアルキルより成る群から選択され； Ｒ3は、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−
    Ｊおよび−Ｒ6−Ｃ＝Ｎより成る群から選択され； Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2−Ｒ7）−Ｑであり； Ｑは、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｃｌ、−Ｃ（＝Ｏ ）ＣＨ2Ｂｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＦ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ3 、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ
    ）ＣＯ2−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＯ2Ｈ、−Ｂ（ＯＨ）2、 【化８】 （ここで、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキルである） より成る群から選択され； Ｒ5は、−ＮＯ2、−Ｃ＝Ｎおよび−Ｊより成る群から選択され； Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり； Ｒ7は、フェニル、および１から８個までの炭素を有するアルキルより成る群か ら選択され、前記アルキル基は１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
    もしくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｒ8は、＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣＨ3、＝ Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2および＝Ｎ−ＮＨ−Ｊよ
    り成る群から選択され； Ｒ9は、水素、および１から６個までの炭素を有するアルキルより成る群から選 択され、前記アルキル基は、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリールも
    しくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｊは保護基であり； ｎは３から１０までの整数であり；そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物と細胞を接触させることを含んで成る、前記細胞でのアポトーシスの誘
    発方法。
  35. 【請求項３５】 Ｒ1が、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドも
    しくは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3である、請求項３４の方法。
  36. 【請求項３６】 Ｒ2がＨもしくはシクロペンチルである、請求項３４の方 法。
  37. 【請求項３７】 Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2であ る、請求項３４の方法。
  38. 【請求項３８】 Ｑが、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｂ（ＯＨ）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝
    Ｏ）ＮＨ−Ｒ7であるか、または構造： 【化９】 ここで、Ｗはピナンである、 を有する、請求項３４の方法。
  39. 【請求項３９】 Ｒ5が、−ＮＯ2、−Ｃ＝Ｎ、−ＰＭＣ、−ＭＴＲ、−ＭＴ
    ＳもしくはＴｏｓである、請求項３４の方法。
  40. 【請求項４０】 Ｒ7が、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）2−ＣＨ3、−ＣＨ 2 −ＣＨ3もしくは−Ｃ6Ｈ5である、請求項３４の方法。
  41. 【請求項４１】 Ｒ8が、＝Ｏ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝
    ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2もしくは＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2である、請求
    項３４の方法。
  42. 【請求項４２】 Ｒ1が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドもしくは−Ｎ
    Ｈ−ＳＯ2ＣＦ3であり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8 が＝Ｏである、請求項３４の方法。
  43. 【請求項４３】 Ｒ1が−Ｃ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3 が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8が ＝Ｏである、請求項３４の方法。
  44. 【請求項４４】 Ｒ1がＣ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が −（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−
    Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；Ｑが−ＣＨ−Ｒ 8 であり；そしてＲ8が＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣ Ｈ3もしくは＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5である、請求項３４の方法。
  45. 【請求項４５】 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が、表１中の化合物について示さ
    れる置換基の群から選択される、請求項３４の方法。
  46. 【請求項４６】 前記化合物が、表１に示される化合物Ａ−Ｊより成る群か
    ら選択される、請求項３４の方法。
  47. 【請求項４７】 前記化合物が哺乳動物に投与される、請求項３４−３６の
    いずれか一の方法。
  48. 【請求項４８】 前記哺乳動物がヒトである、請求項４７の方法。
  49. 【請求項４９】 前記形質転換された細胞が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、舌
    癌細胞、脳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細胞もしくは皮膚癌細胞であ
    る、請求項４８の方法。
  50. 【請求項５０】 前記形質転換された細胞がＢｃｌ２タンパク質を過剰産生
    し、そして／もしくはｐ５３タンパク質を欠く、請求項３４の方法。
  51. 【請求項５１】 式： 【化１０】 上式中： Ｒ1は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、フタルイミド、−ＮＨ−ＳＯ2Ｒ9および
    −ＮＨ−Ｊより成る群から選択され； Ｒ2は、Ｈ、ヒドロキシル、１から１０個までの炭素を有するアルキル、および ３から７個までの炭素を有するシクロアルキルより成る群から選択され； Ｒ3は、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−
    Ｊおよび−Ｒ6−Ｃ＝Ｎより成る群から選択され； Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2−Ｒ7）−Ｑであり； Ｑは、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｃｌ、−Ｃ（＝Ｏ ）ＣＨ2Ｂｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＦ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ3 、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ
    ）ＣＯ2−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＯ2Ｈ、−Ｂ（ＯＨ）2、 【化１１】 （ここで、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキルである） より成る群から選択され； Ｒ5は、−ＮＯ2、−Ｃ＝Ｎおよび−Ｊより成る群から選択され； Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり； Ｒ7は、フェニル、および１から８個までの炭素を有するアルキルより成る群か ら選択され、前記アルキル基は１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
    もしくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｒ8は、＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣＨ3、＝ Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2および＝Ｎ−ＮＨ−Ｊよ
    り成る群から選択され； Ｒ9は、水素、および１から６個までの炭素を有するアルキルより成る群から選 択され、前記アルキル基は、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリールも
    しくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｊは保護基であり； ｎは３から１０までの整数であり；そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物と形質転換された細胞を接触させることを含んで成る、前記細胞の増殖
    の阻害方法。
  52. 【請求項５２】 Ｒ1が、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドも
    しくは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3である、請求項５１の方法。
  53. 【請求項５３】 Ｒ2がＨもしくはシクロペンチルである、請求項５１の方 法。
  54. 【請求項５４】 Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2であ る、請求項５１の方法。
  55. 【請求項５５】 Ｑが、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｂ（ＯＨ）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝
    Ｏ）ＮＨ−Ｒ7であるか、または構造： 【化１２】 ここで、Ｗはピナンである、 を有する、請求項５１の方法。
  56. 【請求項５６】 Ｒ5が、−ＮＯ2、−Ｃ≡Ｎ、−ＰＭＣ、−ＭＴＲ、−ＭＴ
    ＳもしくはＴｏｓである、請求項５１の方法。
  57. 【請求項５７】 Ｒ7が、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）2−ＣＨ3、−ＣＨ 2 −ＣＨ3もしくは−Ｃ6Ｈ5である、請求項５１の方法。
  58. 【請求項５８】 Ｒ8が、＝Ｏ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝
    ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2もしくは＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2である、請求
    項５１の方法。
  59. 【請求項５９】 Ｒ1が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドもしくは−Ｎ
    Ｈ−ＳＯ2ＣＦ3であり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8 が＝Ｏである、請求項５１の方法。
  60. 【請求項６０】 Ｒ1が−Ｃ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3 が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8が ＝Ｏである、請求項５１の方法。
  61. 【請求項６１】 Ｒ1がＣ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が −（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−
    Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；Ｑが−ＣＨ−Ｒ 8 であり；そしてＲ8が＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣ Ｈ3もしくは＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5である、請求項５１の方法。
  62. 【請求項６２】 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が、表１中の化合物について示さ
    れる置換基の群から選択される、請求項５１の方法。
  63. 【請求項６３】 前記化合物が、表１に示される化合物Ａ−Ｊより成る群か
    ら選択される、請求項５１の方法。
  64. 【請求項６４】 前記化合物が哺乳動物に投与される、請求項５１−６３の
    いずれか一の方法。
  65. 【請求項６５】 前記哺乳動物がヒトである、請求項６４の方法。
  66. 【請求項６６】 前記形質転換された細胞が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、舌
    癌細胞、脳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細胞もしくは皮膚癌細胞であ
    る、請求項６５の方法。
  67. 【請求項６７】 前記形質転換された細胞がＢｃｌ２タンパク質を過剰産生
    し、そして／もしくはｐ５３タンパク質を欠く、請求項５１の方法。
  68. 【請求項６８】 式： 【化１３】 上式中： Ｒ1は、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ9、フタルイミド、−ＮＨ−ＳＯ2Ｒ9および
    −ＮＨ−Ｊより成る群から選択され； Ｒ2は、Ｈ、ヒドロキシル、１から１０個までの炭素を有するアルキル、および ３から７個までの炭素を有するシクロアルキルより成る群から選択され； Ｒ3は、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−
    Ｊおよび−Ｒ6−Ｃ≡Ｎより成る群から選択され； Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2−Ｒ7）−Ｑであり； Ｑは、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｃｌ、−Ｃ（＝Ｏ ）ＣＨ2Ｂｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ2Ｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＦ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＦ3 、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ
    ）ＣＯ2−Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＯ2Ｈ、−Ｂ（ＯＨ）2、 【化１４】 （ここで、ｐおよびｑは独立に２もしくは３であり、 Ｗはシクロアルキルである） より成る群から選択され； Ｒ5は、−ＮＯ2、−Ｃ≡Ｎおよび−Ｊより成る群から選択され； Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり； Ｒ7は、フェニル、および１から８個までの炭素を有するアルキルより成る群か ら選択され、前記アルキル基は１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリール
    もしくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｒ8は、＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣＨ3、＝ Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2および＝Ｎ−ＮＨ−Ｊよ
    り成る群から選択され； Ｒ9は、水素、および１から６個までの炭素を有するアルキルより成る群から選 択され、前記アルキル基は、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、アリールも
    しくはヘテロアリール基で場合によっては置換され； Ｊは保護基であり； ｎは３から１０までの整数であり；そして ｍは２から５までの整数である、 の化合物と腫瘍を接触させることを含んで成る、前記腫瘍の成長の阻害方法。
  69. 【請求項６９】 Ｒ1が、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドも
    しくは−ＮＨ−ＳＯ2ＣＦ3である、請求項６８の方法。
  70. 【請求項７０】 Ｒ2がＨもしくはシクロペンチルである、請求項６８の方 法。
  71. 【請求項７１】 Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2であ る、請求項６８の方法。
  72. 【請求項７２】 Ｑが、−ＣＨ−Ｒ8、−Ｂ（ＯＨ）2、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝
    Ｏ）ＮＨ−Ｒ7であるか、または構造： 【化１５】 ここで、Ｗがピナンである、 を有する、請求項６８の方法。
  73. 【請求項７３】 Ｒ5が、−ＮＯ2、−Ｃ＝Ｎ、−ＰＭＣ、−ＭＴＲ、−ＭＴ
    ＳもしくはＴｏｓである、請求項６８の方法。
  74. 【請求項７４】 Ｒ7が、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−（ＣＨ2）2−ＣＨ3、−ＣＨ 2 −ＣＨ3もしくは−Ｃ6Ｈ5である、請求項６８の方法。
  75. 【請求項７５】 Ｒ8が、＝Ｏ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、＝
    ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ2もしくは＝ＮＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ2である、請求
    項６８の方法。
  76. 【請求項７６】 Ｒ1が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3、フタルイミドもしくは−Ｎ
    Ｈ−ＳＯ2ＣＦ3であり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8 が＝Ｏである、請求項６８の方法。
  77. 【請求項７７】 Ｒ1が−Ｃ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3 が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ
    −Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；そしてＲ8が ＝Ｏである、請求項６８の方法。
  78. 【請求項７８】 Ｒ1がＣ≡Ｎであり；Ｒ2がシクロペンチルであり；Ｒ3が −（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ−ＮＯ2）−ＮＨ2もしくは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−
    Ｃ（＝Ｎ−Ｊ）−ＮＨ2であり；Ｒ7が−ＣＨ（ＣＨ3）2であり；Ｑが−ＣＨ−Ｒ 8 であり；そしてＲ8が＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ2、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＣ Ｈ3もしくは＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5である、請求項６８の方法。
  79. 【請求項７９】 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が、表１中の化合物について示さ
    れる置換基の群から選択される、請求項６８の方法。
  80. 【請求項８０】 前記化合物が、表１に示される化合物Ａ−Ｊより成る群か
    ら選択される、請求項６８の方法。
  81. 【請求項８１】 前記腫瘍が充実性腫瘍である、請求項６８の方法。
  82. 【請求項８２】 前記化合物が哺乳動物に投与される、請求項６８−８１の
    いずれか一の方法。
  83. 【請求項８３】 前記哺乳動物がヒトである、請求項８２の方法。
  84. 【請求項８４】 前記形質転換された細胞が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、舌
    癌細胞、脳癌細胞、肺癌細胞、膵臓癌細胞、卵巣癌細胞もしくは皮膚癌細胞であ
    る、請求項８３の方法。
  85. 【請求項８５】 前記形質転換された細胞がＢｃｌ２タンパク質を過剰産生
    し、そして／もしくはｐ５３タンパク質を欠く、請求項８４の方法。
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